環状ヘミアセタール誘導体およびその用途
【課題】カルパイン阻害活性を有する化合物の提供。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物。特に、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド。この化合物は、カルパインが関与する疾患の予防または治療剤として有用。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物。特に、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド。この化合物は、カルパインが関与する疾患の予防または治療剤として有用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はカルパイン阻害活性を有する新規環状ヘミアセタール誘導体に関する。また、本発明は新規環状ヘミアセタール誘導体を含有する医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
カルパインは生体内に広く分布する細胞質内のタンパク分解酵素の一つであり、カルシウムイオンで活性化される。現在では、このカルパインの異常な活性化が脳卒中、クモ膜下出血、アルツハイマー病、虚血性疾患、筋ジストロフィー、白内障、血小板凝集、関節炎などの種々の疾患に関与していることが明らかとなっている［Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５巻，４１２頁（１９９４年）］。一方、カルパイン阻害剤は水晶体培養による実験的白内障モデルにおいて、水晶体の透明維持に効果があり［Ｃｕｒｒ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ．，１０巻，６５７〜６６６頁（１９９４年）］、白内障治療剤（ＷＯ９３／２３０３２）などとして有用であることが分ってきている。これまで報告されているカルパイン阻害剤としては、ペプチドハロメタン誘導体（特公平６−２９２２９）、ペプチドジアゾメタン誘導体［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２５３巻，７５１〜７５８頁（１９８８年）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５巻，２１６〜２２０頁（１９９２年）］、ペプチジルアルデヒド誘導体（ＥＰ７７１５６５、ＵＳＰ６０５７２９０など）などが挙げられるが、これらの阻害剤は、未だ実用化されていないのが現状である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
カルパイン阻害活性を有する化合物を提供することである。
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、強いカルパイン阻害活性を有する化合物を創製し、さらに研究を進めて本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
すなわち、本発明は、
（１）一般式（Ｉ）
【０００５】
【化１】
【０００６】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物、
（２）Ｒ１が炭素数３または４の低級アルキル基である上記（１）記載の化合物、
（３）Ｒ１がイソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される基である上記（１）または（２）記載の化合物、
（４）Ｒ１がイソブチルであり、Ｒ２が水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基から選択される基である上記（１）記載の化合物、
（５）（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、
（６）一般式（Ｉ）
【０００７】
【化２】
【０００８】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を含有する医薬、
（７）カルパイン阻害剤である上記（６）記載の医薬、
（８）カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である上記（６）記載の医薬、
（９）一般式（Ｉ）
【０００９】
【化３】
【００１０】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物、
（１０）カルパイン阻害剤である上記（９）記載の医薬組成物、
（１１）カルパインが関与する疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳動物に有効量の一般式（Ｉ）
【００１１】
【化４】
【００１２】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を投与することからなる方法、および
（１２）カルパイン阻害剤としての一般式（Ｉ）
【００１３】
【化５】
【００１４】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ラット水晶体培養における化合物１の水晶体白濁防止効果を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す（ｎ＝５）。＊はステューデントのＴ検定（両側）によるコントロール群に対する有意差ｐ＜０．０１を表す。
【図２】図２は、ウサギにおける点眼投与後の化合物１の房水濃度を示すグラフである。各値は平均値±標準偏差を示す（ｎ＝４）。
【図３】図３は、ラット網膜虚血障害モデルにおける化合物１のガングリオン細胞障害に対する抑制効果を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す（ｎ＝６）。＊はステューデントのＴ検定によるコントロール群に対する有意差ｐ＜０．０５を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
上記式（Ｉ）中、Ｒ１で表される低級アルキル基は炭素数１〜４の直鎖状または分枝状アルキル基をいい、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられる。好ましくは炭素数３または４の低級アルキル基であり、より好ましくはイソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルであり、特に好ましくはイソブチルである。上記式（Ｉ）中、Ｒ２で表されるハロゲンとしてはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素が挙げられ、とりわけフッ素が好ましい。上記式（Ｉ）中、Ｒ２で表される低級アルキル基としては前述のＲ１で表される低級アルキル基と同様のものが挙げられ、特に好ましくはメチルである。上記式（Ｉ）中、Ｒ２で表される低級アルコキシ基は炭素数１〜４の直鎖状または分枝状アルコキシ基をいい、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられ、特に好ましくはメトキシである。
【００１７】
さらに、本発明は、一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、本発明化合物と記載することもある。）および本発明化合物の各種の溶媒和や結晶多形の物質ならびにプロドラッグをも包含する。
本発明の化合物は例えば、下記反応式
【００１８】
【化６】
【００１９】
［式中、各記号は前記と同意義を有する。］により製造することができる。一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩ）と記載することもある。）はアミノ基をＲ３で表される保護基で保護されたα−アミノ酸である。Ｒ３として表される保護基としては、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（以下、Ｂｏｃ基と記載することもある。）、ベンジルオキシカルボニル基などの通常ペプチド合成の分野で用いられるものが挙げられる。
【００２０】
一般式（ＩＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩＩ）と記載することもある。）は、化合物（ＩＩ）とＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを通常使用される有機溶媒に溶解し、縮合剤の存在下で攪拌することにより得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはジクロロメタンである。縮合剤としては、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミドなどが好適に使用される。反応温度は、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００２１】
一般式（ＩＶ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＶ）と記載することもある。）は、化合物（ＩＩＩ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、α−アミノ−γ−ブチロラクトンまたはその塩（塩酸塩または臭化水素酸塩）を加え、塩基の存在下または非存在下で攪拌することにより得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである。塩基としては例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，５−ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノン−５−エン、１，４−ジアザビシクロ〔２，２，２〕ノン−５−エン、１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０〕−７−ウンデセンなどが挙げられるが、好ましくはトリエチルアミンである。反応温度は特に限定されないが、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００２２】
一般式（Ｖ）で表される化合物（以下、化合物（Ｖ）と記載することもある。）は、化合物（ＩＶ）の保護基であるＲ３を、アミノ保護基の脱離反応に用いられる慣用的方法を適宜選択することによって得ることができる。例えば保護基にｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を用いた場合は、化合物（ＩＶ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、酸の存在下、攪拌することによりＲ３を脱離することができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくは酢酸エチルである。酸としては塩酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。また、市販されている塩酸の酢酸エチル溶液またはジオキサン溶液などを用いて脱離することもできる。反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。ベンジルオキシカルボニル基を用いた場合は慣用の金属触媒（例えばパラジウム炭素、ラネーニッケル、酸化白金など）の存在下での接触還元により行われる。水素圧は通常約１気圧〜約５０気圧であるが、好ましくは約１気圧〜約５気圧である。溶媒としては、アルコール類（メタノール、エタノールなど）、エーテル類（テトラヒドロフランなど）、有機酸類（酢酸など）およびこれらの混合溶媒を使用できる。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常、冷却下、室温または加温下で反応は行われる。また、化合物（Ｖ）は次の反応に影響がなければ単離精製を行わず次の反応に用いてもよい。
【００２３】
一般式（ＶＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＶＩ）と記載することもある。）は、化合物（Ｖ）に種々のイソチオシアナート試薬を加え、通常使用される有機溶媒中、塩基の存在下または非存在下で攪拌することにより得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくは酢酸エチルである。塩基としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，５−ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノン−５−エン、１，４−ジアザビシクロ〔２，２，２〕ノン−５−エン、１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０〕−７−ウンデセンなどが挙げられるが、好ましくはトリエチルアミンである。反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００２４】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、化合物（ＶＩ）を還元反応に付し、得ることができる。本還元反応はそれ自体公知の方法で行うことができる。例えば金属水素化物による還元、金属水素錯化合物による還元、ジボランおよび置換ボランによる還元、接触水素添加等が用いられる。すなわち、この反応は化合物（ＶＩ）を還元剤で処理することにより行われる。還元剤としては、水素化ホウ素アルカリ金属（例えば水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム等）、水素化アルミニウムリチウムなどの金属水素錯化合物、水素化ナトリウムなどの金属水素化物、有機スズ化合物（水素化トリフェニルスズ等）、ニッケル化合物、亜鉛化合物などの金属および金属塩、パラジウム、白金、ロジウムなどの遷移金属触媒と水素とを用いる接触還元剤およびジボランなどが挙げられるが、とりわけ水素化ジイソブチルアルミニウムを用いることにより有利に行われる。この反応は、反応に影響を及ぼさない有機溶媒中で行われる。例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはジクロロメタンである。反応温度は約−１００℃〜約１５０℃，特に約−８０℃〜約−１０℃が好適であり、反応時間は、約１〜約２４時間程度である。このようにして得られる環状ヘミアセタール誘導体は公知の分離精製手段、例えば濃縮、減圧濃縮、溶媒抽出、晶出、再結晶、転溶、クロマトグラフィーなどにより単離精製することができる。
【００２５】
上記の方法によって製造される一般式（Ｉ）で表される化合物としては、例えば（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ブタナミド、（２Ｓ）−２−（（（ベンジルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（４−フルオロフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（４−メトキシフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（３−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（４−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（２−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（３−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（４−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミドなどが挙げられる。
【００２６】
本発明化合物は文献未載の新規化合物であり、後記試験例に示すように優れたカルパイン阻害活性を有するため、それらを有効成分として、必要により後記の担体等を組み合わせることにより、カルパイン阻害剤としての医薬として有用である。後述の実施例に開示する化合物の構造式を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】
本発明化合物を含有する医薬は、哺乳動物（例えば、ヒト、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）の虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳虚血疾患、白内障、緑内障、網膜（脈絡膜）疾患、光凝固による眼球後眼部合併症（例えば黄斑部浮腫、網膜剥離、視神経炎、視野異常、光覚異常、色覚異常など）などの予防および治療用の医薬用製剤として、または血管新生、網膜剥離などの予防および治療薬として有用である。また、本発明化合物は従来の同種化合物より水溶性に優れているものが多く、従来困難であった水性液剤としての使用が可能となる。さらに、本発明化合物は組織移行性および吸収性に優れ、かつ毒性も非常に低く安全性にも優れている。
【００２９】
本発明化合物を含有する医薬は全身的または局所的に投与される。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射など非経口的にも投与される。局所的には、皮膚、粘膜、鼻内、眼内などに投与される。
【００３０】
本発明化合物を含有する医薬の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤などの液剤などが挙げられる。顆粒および錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など）などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤および錠剤には、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。
【００３１】
カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または、粒状、若しくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するか、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなど加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤［二酸化イオウ、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル）］などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。
【００３２】
坐剤として製造する場合には坐剤基剤（例えばカカオ脂、マクロゴールなど）を適宜選択して使用することができる。
【００３３】
シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜選択して使用することができる。
【００３４】
注射剤、点眼剤または点鼻剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸、イプシロンアミノカプロン酸など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。
【００３５】
なお、本発明化合物中、医薬品として望まれる適度な水溶性を有する化合物は、水溶性液剤として、特に上記したシロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤などの製剤に有利に使用できる。
【００３６】
上記シロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよく、等張化剤は、通常、浸透圧が約２２９〜約３４３ｍＯｓｍとなるよう、約０．５〜約５．０ｗ／ｖ％程度添加する。また、緩衝剤は約０．０１〜約２．０ｗ／ｖ％程度、増粘剤は約０．０１〜約１．０ｗ／ｖ％程度、安定化剤は約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％程度添加する。ｐＨ調整剤は、適宜添加し、通常ｐＨ約３〜約９、好ましくは約４〜約８に調整される。
【００３７】
本発明化合物の投与量は対象となる疾患、症状、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば内服剤として成人に投与する場合は、１日数回、１回量約１〜約１００ｍｇ程度であり、注射剤として成人に投与する場合は、１日１回、約０．１〜約３０ｍｇ程度である。また、局所的に目に投与する場合は、本発明化合物を約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％、好ましくは約０．０１〜約０．５ｗ／ｖ％含有する点眼剤を１回約２０〜約５０μＬ、１日数回点眼するのがよい。
【実施例】
【００３８】
本発明を以下の参考例、実施例、試験例および製剤例に従いさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
【００３９】
なお、実施例で述べる化合物の分析値において、融点はＹａｎａｃｏ社製ＭＰ−５００Ｖ型（補正なし）を用いて測定した。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）はＶａｒｉａｎ社製Ｇｅｍｉｎｉ２０００型を用いて測定した。化合物１から１１のＮＭＲスペクトルはアノメリック炭素の存在により複雑であり、同一プロトンのメジャーピークとマイナーピークが区別できる場合は別々に記載した。マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）はＰｅｒｓｅｐｔｉｖｅ社製Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ ＰＲＯ型を用いて測定した。比旋光度（［α］Ｄ）はＨｏｒｉｂａ社製ＳＥＰＡ−２０００型を用いて測定した。
【００４０】
参考例１ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル−Ｌ−ロイシンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（参考化合物１）
Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシン（２７ｇ，１１０ｍｍｏｌ）とＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１６ｇ，１４０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８０ｍＬ）に溶解し、これに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２７ｇ，１４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１８０ｍＬ）懸濁液を氷冷条件下で加えた。この反応液を室温で１８時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。得られた固体をヘキサンで結晶化し、無色結晶の参考化合物（３３ｇ，９３％）を得た。
mp 74.1-75.5 ℃. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6)δ：0.88 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.39 (s, 9H), 1.54-1.75 (m, 3H), 2.80 (s, 4H), 4.32 (m, 1H), 7.62 (d, 1H, J = 8.4 Hz).
【００４１】
参考例２ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル−Ｌ−イソロイシンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（参考化合物２）
Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシンの代わりにＢｏｃ−Ｌ−イソロイシンを用いて参考例１と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物２を得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.97 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 1.04 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.26 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.60 (m, 1H), 1.98 (m, 1H), 2.83 (s, 4H), 4.62 (dd, 1H, J = 8.7, 5.1 Hz), 5.01 (d, 1H, J = 8.7 Hz).
【００４２】
参考例３ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル−Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（参考化合物３）
Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシンの代わりにＢｏｃ−Ｌ−バリンを用いて参考例１と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物３を得た。
mp 125.7-127.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.99 (d, 6H, J = 6.9 Hz), 1.4 (s, 9H), 2.15 (m, 1H), 2.81 (s, 4H), 4.22 (dd, 1H, J = 8.1, 6.6 Hz), 7.58 (d, 1H, J= 8.4 Hz).
【００４３】
参考例４ （２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物４）
参考化合物１（２０ｇ，６１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）に溶解し、氷冷条件下で（Ｓ）−（−）−α−アミノブチロラクトン臭化水素酸塩（１７ｇ，９１ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１８ｇ，１８０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンで結晶化し、無色結晶の参考化合物４（１９ｇ，９９％）を得た。
mp 92.5-93.3 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.85 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.88 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.28-1.50 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.61 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 6.88 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.30 (d, 1H, J = 8.4 Hz).
【００４４】
参考例５ （２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ）−３−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物５）
参考化合物１の代わりに参考化合物２を用いて参考例４と同様の操作を行い、白色粉末の参考化合物５を得た。
mp 156.4-159.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.90 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 0.95 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.15 (m, 1H), 1.43 (S, 9H), 1.50 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 2.21 (m, 1H), 2.73 (m, 1H),4.01 (m, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.46 (td, 1H, J = 9.0, 1.2 Hz),
4.54 (m, 1H), 5.11 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 6.87 (m, 1H).
【００４５】
参考例６ （２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ）−３−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ブタナミド（参考化合物６）
参考化合物１の代わりに参考化合物３を用いて参考例４と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物６を得た。
mp 113.9-114.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.84 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 0.87 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.38 (s, 9H), 1.93 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 3.78 (dd, 1H, J = 8.9, 7.2 Hz), 4.21 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 6.68 (d, 1H, J = 8.9 Hz), 8.37 (d, 1H, J = 7.8 Hz).
【００４６】
参考例７ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物７）
参考化合物４を（３．４ｇ，１１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、氷冷条件下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（８．０ｍＬ）を加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後（オイルダウンが確認された。）、溶媒を減圧で除去した。これに酢酸エチルを加え、再度、溶媒を減圧で除去した（２回繰り返した。）。残渣を酢酸エチルで懸濁させ、これにフェニルイソチオシアナート（１．５ｇ，１１ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（３．３ｇ，３２ｍｍｏｌ）を加えた。この液を室温で３時間攪拌した。反応液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンで結晶化し、さらにヘキサンで洗浄を行い、無色結晶の参考化合物７（１．８ｇ，４８％）を得た。
mp 77.7-78.8 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.55-1.70 (m, 3H), 2.20 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 7.10 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 2H), 7.51-7.54 (m, 2H), 7.78 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.64 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.70 (s, 1H).
【００４７】
参考例８ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物８）
参考化合物４の代わりに参考化合物５を用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物８を得た。
mp 71.9-72.7 ℃. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.91 (t, 3H, J = 7.4 Hz), 0.96 (d, 3H, J = 6.7 Hz), 1.10-1.22 (m, 1H), 1.48-1.59 (m, 1H), 1.94-2.02 (m, 1H), 2.18-2.33 (m, 1H), 2.63-2.76 (m, 1H), 4.20-4.29 (m, 1H), 4.44 (t, 1H, J = 9.0 Hz), 4.59 (ddd, 1H, J = 7.2, 8.9, 11.3 Hz), 4.92 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 6.77 (brs, 1H), 6.98 (brs, 1H), 7.26-7.44 (m, 5H), 8.17 (brs, 1H).
【００４８】
参考例９ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ブタナミド（参考化合物９）
参考化合物４の代わりに参考化合物６を用いて参考例７と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物９を得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.97 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.00 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.75 (brs, 1H), 2.15-2.33 (m, 2H), 2.63-2.72 (m, 1H), 4.45 (t, 1H, J = 9.0 Hz), 4.61 (ddd, 1H, J = 11.4, 8.8, 7.3 Hz), 4.89 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 6.75 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 7.01 (d, 1H, J = 6.7 Hz), 7.21-7.50 (m, 5H), 8.17 (brs, 1H).
【００４９】
参考例１０ （２Ｓ）−２−（（（ベンジルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１０）
フェニルイソチオシアナートの代わりにベンジルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、無色オイル状の参考化合物１０を得た。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 1.56-1.72 (m, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 5.00 (m, 1H), 7.49-7.98 (m, 8H), 8.60 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.75 (s, 1H).
【００５０】
参考例１１ （２Ｓ）−２−（（（（４−フルオロフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１１）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−フルオロフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、微黄色結晶の参考化合物１１を得た。
mp 47.5-48.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.55-1.72 (m, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.95 (m, 1H), 7.12-7.18 (m, 2H), 7.49-7.55 (m, 2H), 7.78 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 8.62 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 9.65 (s, 1H).
【００５１】
参考例１２ （２Ｓ）−２−（（（（４−メトキシフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１２）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−メトキシフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、微黄色結晶の参考化合物１２を得た。
mp 44.5-46.1 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 6H, J = 6.6 Hz), 1.54-1.67 (m, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 4.20 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 6.84-6.91 (m, 2H), 7.32-7.35 (m, 2H), 7.54 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.50 (s, 1H).
【００５２】
参考例１３ （２Ｓ）−２−（（（（３−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１３）
フェニルイソチオシアナートの代わりに３−シアノフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物１３を得た。
mp 72.0-73.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 0.92 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 1.56-1.72 (m, 3H), 2.11-2.25 (m, 1H), 2.36-2.44 (m, 1H), 4.17-4.26 (m, 1H), 4.35 (dt, 1H, J = 8.8, 1.7 Hz), 4.57-4.66 (m, 1H), 4.93 (dd, 1H, J = 14.2, 7.2 Hz), 7.49-7.53 (m, 2H), 7.71-7.77 (m, 1H), 8.10 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.17 (brs, 1H), 8.64 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.91 (brs, 1H).
【００５３】
参考例１４ （２Ｓ）−２−（（（（４−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１４）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−シアノフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物１４を得た。
mp 71.9-73.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.90 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 1.56-1.69 (m, 3H), 2.14-2.25 (m, 1H), 2.36-2.44 (m, 1H), 4.17-4.25 (m, 1H), 4.35 (dt, 1H, J = 8.0, 1.7Hz), 4.56-4.65 (m, 1H), 4.92 (dd, 1H, J = 14.5, 7.5 Hz), 7.73 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.86 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 8.18 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.66 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 10.08 (brs, 1H).
【００５４】
参考例１５ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（２−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１５）
フェニルイソチオシアナートの代わりに２−メチルフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、微黄色結晶の参考化合物１５を得た。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 6H, J = 6.3 Hz), 1.54-1.71 (m, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.20 (m, 1H), 2.42 (m, 1H), 4.22 (m, 2H), 4.36 (m, 2H), 7.14-7.40 (m, 4H), 7.55 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.58 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.21 (s, 1H).
【００５５】
参考例１６ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（３−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１６）
フェニルイソチオシアナートの代わりに３−メチルフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物１６を得た。
mp 59.1-62.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.86 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.51-1.72 (m, 2H), 2.10-2.25 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.33-2.44 (m, 1H), 4.15-4.25 (m, 1H), 4.30-4.38 (m, 1H), 4.54-4.65 (m, 2H), 4.92-4.99 (m, 1H), 6.91 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 7.18 (t, 1H, J = 7.8 Hz), 7.30 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 7.31 (s, 1H), 7.72 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 8.61 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 9.62 (s, 1H).
【００５６】
参考例１７ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（４−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１７）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−メチルフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物１７を得た。
mp 107.9-111.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.89 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 0.90 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.40-1.51 (m, 2H), 1.52-1.70 (m, 1H), 2.09-2.27 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.32-2.43 (m, 1H), 4.16-4.29 (m, 2H), 4.34 (dd, 1H, J = 8.8, 7.5 Hz), 4.55-4.64 (m, 1H), 6.27 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.01 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 7.24 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 8.44 (s, 1H), 8.57 (d, 1H, J = 8.2 Hz).
【００５７】
実施例１ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物１）
参考化合物７（１．７ｇ，４．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍＬ）で溶解し、−７８℃で１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム／トルエン溶液（１７ｍＬ，１７ｍｍｏｌ）を加えた。この液を−７０℃以下で３時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液（４．０ｍＬ）を加え、室温で３０分間攪拌した。これに無水硫酸マグネシウムと酢酸エチルを加え、無機物をセライトでろ別した。このろ液を減圧下で濃縮後、残渣をＨＰＬＣ（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，溶離液；アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝３０：７０：０．１）を用いて精製した。主画分を集め、酢酸エチルで抽出した。この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンで結晶化し、無色結晶の化合物１（０．４６ｇ，２７％）を得た。
mp 62.0-63.8 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.91 (d, 6H, J = 6.0 Hz), 1.49-1.91 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.64-4.00 (m, 3H), 4.91 (m, 1H), 5.00/5.11 (d/t, 1H, J = 4.5/4.7 Hz), 6.16/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/4.8 Hz), 7.10 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 2H), 7.49-7.53 (m, 2H), 7.72/7.78 (d/d, 1H, J = 8.4/8.7 Hz), 8.26/7.87 (d/d, 1H, J = 6.3/7.5 Hz), 9.69 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.85. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 358.174, Found 358.169. [α]D25 +23.6° (c = 0.211).
【００５８】
実施例２ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物２）
参考化合物７の代わりに参考化合物８を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物２を得た。
mp 51.3-52.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.81-0.87 (m, 6H), 1.03 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.68-1.86 (m, 2H), 2.11 (m, 1H), 3.48/3.86 (m/m, 1H), 3.91-3.96 (m, 2H), 4.88 (m, 1H), 4.99/5.10 (d/t, 1H, J = 4.5/4.5 Hz), 6.13/6.27 (d/d, 1H, J = 4.5/4.2 Hz), 7.07 (m, 1H), 7.27-7.32 (m, 2H), 7.49-7.52 (m, 2H), 7.70/7.71 (d/d, 1H, J = 8.4/8.1 Hz), 7.85/8.21 (d/d, 1H, J = 7.8/6.6 Hz), 9.76 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.77. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 374.151, Found 374.185. [α]D25
+33.6° (c = 0.208).
【００５９】
実施例３ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ブタナミド（化合物３）
参考化合物７の代わりに参考化合物９を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物３を得た。
mp 50.9-51.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.86-0.92 (m, 6H), 1.80 (m, 1H), 2.03-2.26 (m, 2H), 3.69/3.89 (m/m, 1H), 3.93-3.97 (m, 2H), 4.92 (m, 1H), 5.02/5.13 (d/t, 1H, J = 4.5/4.7 Hz), 6.16/6.31 (d/d, 1H, J = 4.5/4.8 Hz), 7.10 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 2H), 7.52-7.55 (m, 2H), 7.71 (m, 1H), 8.24/7.92 (d/d, 1H, J = 6.6/7.5 Hz), 9.82 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.83. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 360.136, Found 360.137. [α]D25 +39.8° (c = 0.201).
【００６０】
実施例４ （２Ｓ）−２−（（（ベンジルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物４）
参考化合物７の代わりに参考化合物１０を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物４を得た。
mp 62.2-64.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.84-0.89 (m, 6H), 1.44-1.82 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.68/4.03 (m/m, 2H), 3.85-3.97 (m, 2H), 4.66 (bs, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.99/5.11 (d/t, 1H, J = 4.5/4.4 Hz), 6.12/6.34 (d/bs, 1H, J = 4.8 Hz), 7.22-7.36 (m, 5H), 7.58 (m, 1H), 7.68/8.13 (bs, 1H), 7.96 (bs, 1H), major:minor= 1.0:0.80. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.162. [α]D25+18.9° (c = 0.211).
【００６１】
実施例５ （２Ｓ）−２−（（（（４−フルオロフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物５）
参考化合物７の代わりに参考化合物１１を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物５を得た。
mp 77.2-78.3 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.90 (d, 6H, J = 6.3 Hz), 1.48-1.91 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.69/3.95 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 5.00/5.12 (d/t, 1H, J = 5.1/4.5 Hz), 6.15/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/3.9 Hz), 7.12-7.18 (m, 2H), 7.46-7.52 (m, 2H), 7.73/7.77 (d/d, 1H, J = 8.1/7.8 Hz), 7.84/8.25 (d/d, 1H, J = 7.8/7.2 Hz), 9.64 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.85. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 392.142, Found 392.141. [α]D25 +20.1° (c = 0.199).
【００６２】
実施例６ （２Ｓ）−２−（（（（４−メトキシフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物６）
参考化合物７の代わりに参考化合物１２を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物６を得た。
mp 67.9-68.8 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.88-0.91 (m, 6H), 1.47-1.87 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.69/3.94 (m/m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.86-3.90 (m, 2H), 4.89 (m, 1H), 4.99/5.11 (d/t, 1H, J = 4.8/4.4 Hz), 6.15/6.35 (d/d, 1H, J = 4.8/4.2 Hz), 6.88-6.91 (m, 2H), 7.28-7.33 (m, 2H), 7.47/7.53 (d/d, 1H, J = 8.1/6.9 Hz), 8.22/7.81 (d/d, 1H, J = 6.6/7.8 Hz), 9.49 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.78. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 404.162, Found 404.166. [α]D25 +19.9° (c = 0.200).
【００６３】
実施例７ （２Ｓ）−２−（（（（３−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物７）
参考化合物７の代わりに参考化合物１３を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物７を得た。
mp 54.1-55.1 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.90-0.92 (m, 6H), 1.45-1.90 (m, 4H), 2.15 (m, 1H), 3.69/3.96 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 5.01/5.12 (d/t, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 6.16/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 7.48-7.54 (m, 2H), 7.75 (m, 1H), 8.06-8.18 (m, 2H), 8.30/7.92 (d/d, 1H, J = 6.9/7.5 Hz), 9.93 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.75. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 399.147, Found 399.167. [α]D25 +23.8° (c = 0.210).
【００６４】
実施例８ （２Ｓ）−２−（（（（４−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物８）
参考化合物７の代わりに参考化合物１４を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物８を得た。
mp 80.0-82.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.89-0.92 (m, 6H), 1.50-1.90 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.69/3.96 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 5.01/5.12 (d/t, 1H, J = 5.1/4.5 Hz), 6.16/6.33 (d/d, 1H, J = 4.5/4.2 Hz), 7.73-7.76 (m, 2H), 7.84-7.88 (m, 2H), 8.18 (m, 1H), 8.31/7.95 (d/d, 1H, J = 6.6/7.8 Hz), 10.10 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.75. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 399.147, Found 399.150. [α]D25 +51.2° (c = 0.195).
【００６５】
実施例９ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（２−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物９）
参考化合物７の代わりに参考化合物１５を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物９を得た。
mp 57.9-58.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.88-0.91 (m, 6H), 1.48-1.86 (m, 4H), 2.16 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 3.69/3.94 (m/m, 1H), 3.86-3.90 (m, 2H), 4.91 (m, 1H), 4.98/5.11 (d/t, 1H, J = 4.5/4.5 Hz), 6.15/6.36 (d/d, 1H, J = 4.8/3.9 Hz), 7.12-7.31 (m, 4H), 7.46/7.52 (d/d, 1H, J = 8.4/9.9 Hz), 7.78/8.19 (d/d, 1H, J = 7.2/6.6 Hz), 9.20 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.89. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.176. [α]D25 +9.8° (c = 0.203).
【００６６】
実施例１０ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（３−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物１０）
参考化合物７の代わりに参考化合物１６を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物１０を得た。
mp 61.4-61.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.91 (d, 6H, J = 6.3 Hz), 1.47-1.88 (m, 4H), 2.12 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 3.69/3.95 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.92 (m, 1H), 5.00/5.11 (d/t, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 6.15/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 6.92 (m, 1H), 7.17-7.30 (m, 3H), 7.68/7.74 (d/d, 1H, J = 8.4/7.8 Hz), 8.24/7.84 (d/d, 1H, J = 6.6/7.5 Hz), 9.63 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.87. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.175. [α]D25 +4.8° (c = 0.208).
【００６７】
実施例１１ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（４−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物１１）
参考化合物７の代わりに参考化合物１７を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物１１を得た。
mp 87.3-88.7 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.89 (d, 6H, J = 6.6 Hz), 1.36-1.85 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 3.68/3.94 (m/m, 1H), 3.85-3.90 (m, 2H), 4.28 (m, 1H), 4.98/5.10 (d/t, 1H, J = 4.8/4.7 Hz), 6.14/6.33 (d/d, 1H, J = 4.5/3.6 Hz), 6.24 (m, 1H), 7.01-7.03 (m, 2H), 7.23-7.26 (m, 2H), 8.19/7.84 (d/d, 1H, J = 7.2/7.8 Hz), 8.46 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.46. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.165. [α]D25 +23.9° (c = 0.209).
【００６８】
試験例１ μ−カルパインおよびｍ−カルパイン阻害活性の測定
μ−カルパインおよびｍ−カルパインの阻害活性は文献［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
ｖｏｌ．２０８，３８７−３９２（１９９３）］に記載された方法に準じて測定した。すなわち、０.５ｍｇ／ｍＬカゼイン、５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７.４）、２０ｍＭジチオスレイトール、０.０３酵素単位μ−カルパイン（ヒト赤血球由来、Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ社製）またはｍ−カルパイン（ブタ腎臓由来、Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ社製）を含む反応液２００μＬ、種々の濃度の被験薬を含むジメチルスルホキシド溶液２.５μＬおよび２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液５０μＬを９６穴プレートに添加した。３０℃、６０分間反応させた後、反応液１００μＬを別の９６穴プレートに移し、精製水５０μＬと５０％クマシーブリリアントブルー溶液１００μＬを加えて室温で１５分間放置した後、５９５ｎｍで吸光度を測定した。被験薬を含まず同様に処理した後測定したものをコントロール値、２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液の代わりに１ｍＭ ＥＤＴＡを添加したものをブランク値とし、以下の式により阻害率を計算し、５０％阻害に必要な量（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率（％）＝｛１−（測定値−ブランク値）／（コントロール値−ブランク値）｝×１００
【００６９】
試験結果１
その結果を表２に示した。
【００７０】
【表２】
【００７１】
その結果、本発明化合物には、優れたカルパイン阻害活性が認められた。
【００７２】
試験例２ ラット水晶体培養における水晶体白濁防止作用
ＳＤ系ラット（５週齢）から得た水晶体を３群に分け、以下のように培養した。
（１）ノーマル群は実験期間中を通じ基本培養液［１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＧＩＢＣＯ社製）を含む無血清イーグル最小必須培地（ＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ社製）］で培養した。
（２）コントロール群は基本培養液で培養した。
（３）薬物群は基本培養液にエタノールで溶解した化合物１を添加した培養液（培養液中の化合物１の濃度１００μＭ、エタノールの濃度０．５％；薬物添加培養液）で培養した。
コントロール群と薬物群には培養２時間後にカルシウムイオノフォア（Ａ２３１８７、Calbiochem-Novabiochem社製）のエタノール溶液（Ａ２３１８７ １ｍｇをエタノール９５５μＬに溶解）をＡ２３１８７の濃度が１０μＭになるように培養液に加えた。２４時間後、薬物群は薬物添加培養液、コントロール群は基本培養液に交換した。４日間培養後、実体顕微鏡下で観察を行い、水晶体の混濁度（ピクセル）をコンピュータを用いた画像解析装置（ＮＩＨ ｉｍａｇｅ １．６２）により測定した。
【００７３】
試験結果２
その結果を図１に示した。ノーマル群の水晶体は透明であった。コントロール群の水晶体は中央部が白く混濁した。化合物１を添加した群（薬物群）はその混濁を有意に抑制した。
以上の結果は、本発明の化合物１が水晶体白濁防止に効果があることを示すものである。
【００７４】
試験例３ 房水移行性試験
日本白色ウサギ（体重約２ｋｇ、福崎養兎組合より購入）の両眼に後述の製剤例４の懸濁液剤を５０μＬずつ点眼した。点眼０．２５、０．５、１および３時間後にペントバルビタールで屠殺し、房水を採取した。カラムスイッチングシステムＨＰＬＣを用いて房水中の化合物１の濃度を測定した。
【００７５】
試験結果３
その結果を図２に示した。房水中の化合物１の濃度は、点眼０．５時間後で最大（Ｃｍａｘ）となり、その濃度は２９０３．６ｎＭであった。点眼後０〜３時間における化合物１の房水移行量の薬物濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、４７８６．２ｎＭ・ｈであった。
【００７６】
試験例４ ラット網膜虚血障害に対する効果
雄性ＳＤ系ラット（体重：１５０〜２００ｇ，日本チャールズリバーより購入）を使用した。麻酔は、虚血の１５分前に５０ｍｇ／ｍＬケタミン注射液と２０ｍｇ／ｍＬキシラジン注射液の等量混合液をラットの大腿部筋肉内に１．０ｍＬ／ｋｇ体重投与した。虚血はスギタ式クリップミニタイプ（Ｎｏ．９８）を用いて網膜中心動脈を含む視神経を結紮し、５５分間血流遮断を行なった。ノーマル群には、網膜中心動脈の露出のみを行ない、虚血しなかった。虚血再潅流７日後に組織標本を作成した。組織標本を作成するために、過剰量のペントバルビタール溶液を腹腔内投与して屠殺し、左眼球を摘出した。摘出眼球は２％パラホルムアルデヒドおよび２．５％グルタルアルデヒド（０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）の固定液にて２４時間固定した。固定後、パラフィン包埋ブロックを作製し、視神経乳頭中央を通る部位で３μｍの厚さで薄切して、ヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）染色を施した。光学顕微鏡下で、視神経乳頭中央より１〜２ｍｍにおける網膜断面０．２５ｍｍ幅あたりの、網膜の神経節細胞（ガングリオン細胞）数を計測した。
コントロール群には、カルボキシセルロースナトリウムを蒸留水に溶かして０．５％の濃度になるように調製した溶液（ＣＭＣ溶液）を、薬物群には化合物１をＣＭＣ溶液に１．０％になるように懸濁させた溶液を化合物１が１００ｍｇ／ｋｇ体重となるよう、それぞれ虚血開始１５分前および虚血解除直後に経口投与した。
【００７７】
試験結果４
その結果を図３に示した。虚血により、ガングリオン細胞数は正常群の約１／４に減少した（コントロール群）。これに対し、化合物１の投与（薬物群）は、虚血によるガングリオン細胞数の減少を有意に抑制した。
以上の結果は、本発明の化合物１が網膜虚血障害を改善する効果があることを示すものである。
【００７８】
試験例５ 細胞毒性試験
マウス神経芽細胞腫由来株化細胞（Ｎ１Ｅ−１１５細胞）を９６穴マイクロプレートに１ウェルあたり１０４個ずつ播種し、１０％ＦＢＳを含有するダルベッコ改変イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ社製）１００μＬ中で、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。培養液を全量除き、種々濃度の被験薬溶液（化合物１を９９．５％エタノールに溶解してＤＭＥＭでエタノールの最終濃度が１％になるように調製した。）１００μＬと交換し、２４時間培養した。培養上清および細胞を別々に回収し、細胞は超音波破砕して可溶性画分を調整し、それぞれに含まれる乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性をＬＤＨ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ社製、ＭＫ４０１）にて測定し、下記の式によりＬＤＨ漏出率を求め、障害を受けた細胞の割合とした。
ＬＤＨ漏出率（％）＝｛培養上清中ＬＤＨ活性／（培養上清中ＬＤＨ活性＋細胞内ＬＤＨ活性）｝×１００
各被験薬濃度のＬＤＨ漏出率からＳＡＳ前臨床パッケージ（Ｖｅｒ．６．１２）のＬＤ５０／ＥＤ５０ｐｒｏｂｉｔ法によりＬＤ５０を求めた。
【００７９】
試験結果５
その結果を表３に示した。
【００８０】
【表３】
【００８１】
表３のＬＤＨ漏出率から求めた化合物１のＬＤ５０は、２．１９１±０．０７９ｍＭであった。
【００８２】
製剤例１ 錠剤
化合物１０ ５ｇ
デンプン １２ｇ
乳糖 ２７．２ｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．４ｇ
化合物１０、乳糖およびデンプンを加えてよく混和し、湿性錠剤調製法に準じて打錠用顆粒とする。ステアリン酸マグネシウムを加えて打錠し、錠剤４００錠とする。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティング剤（メタアクリル酸コポリマー）でコーティングする。
【００８３】
製剤例２ 注射剤
化合物５ １００ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
１Ｎ水酸化ナトリウム 適量
注射用蒸留水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して注射剤とする。
【００８４】
製剤例３ 点眼剤
化合物１ １００ｍｇ
ホウ酸 ７００ｍｇ
ホウ砂 適量
塩化ナトリウム ５００ｍｇ
エデト酸ナトリウム ０．０５ｍｇ
塩化ベンザルコニウム ０．０００５ｍｇ
滅菌精製水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して点眼剤とする。
【００８５】
製剤例４ 点眼剤
化合物１ ５００ｍｇ
ポリソルベート８０ １００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム二水和物 １００ｍｇ
塩化ベンザルコニウム ５ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
ｐＨ ７．０
滅菌精製水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して懸濁点眼剤とした。
【産業上の利用可能性】
【００８６】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、優れたカルパイン阻害活性を有しているため、カルパインが関与する種々の疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳組織障害による疾患、白内障、緑内障、網脈絡膜疾患、光凝固による眼球後眼部合併症、血管新生を伴う疾患などの予防および治療薬として有用である。
【００８７】
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の新規な教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で色々な修正と変更をなし得ることは可能であるので、そのような修正および変更も、全て後記の特許請求の範囲で定義される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
【００８８】
本出願は、日本で出願された特願２００２−０７２７６２号を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明はカルパイン阻害活性を有する新規環状ヘミアセタール誘導体に関する。また、本発明は新規環状ヘミアセタール誘導体を含有する医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
カルパインは生体内に広く分布する細胞質内のタンパク分解酵素の一つであり、カルシウムイオンで活性化される。現在では、このカルパインの異常な活性化が脳卒中、クモ膜下出血、アルツハイマー病、虚血性疾患、筋ジストロフィー、白内障、血小板凝集、関節炎などの種々の疾患に関与していることが明らかとなっている［Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５巻，４１２頁（１９９４年）］。一方、カルパイン阻害剤は水晶体培養による実験的白内障モデルにおいて、水晶体の透明維持に効果があり［Ｃｕｒｒ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ．，１０巻，６５７〜６６６頁（１９９４年）］、白内障治療剤（ＷＯ９３／２３０３２）などとして有用であることが分ってきている。これまで報告されているカルパイン阻害剤としては、ペプチドハロメタン誘導体（特公平６−２９２２９）、ペプチドジアゾメタン誘導体［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２５３巻，７５１〜７５８頁（１９８８年）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５巻，２１６〜２２０頁（１９９２年）］、ペプチジルアルデヒド誘導体（ＥＰ７７１５６５、ＵＳＰ６０５７２９０など）などが挙げられるが、これらの阻害剤は、未だ実用化されていないのが現状である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
カルパイン阻害活性を有する化合物を提供することである。
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、強いカルパイン阻害活性を有する化合物を創製し、さらに研究を進めて本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
すなわち、本発明は、
（１）一般式（Ｉ）
【０００５】
【化１】
【０００６】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物、
（２）Ｒ１が炭素数３または４の低級アルキル基である上記（１）記載の化合物、
（３）Ｒ１がイソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される基である上記（１）または（２）記載の化合物、
（４）Ｒ１がイソブチルであり、Ｒ２が水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基から選択される基である上記（１）記載の化合物、
（５）（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、
（６）一般式（Ｉ）
【０００７】
【化２】
【０００８】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を含有する医薬、
（７）カルパイン阻害剤である上記（６）記載の医薬、
（８）カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である上記（６）記載の医薬、
（９）一般式（Ｉ）
【０００９】
【化３】
【００１０】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物、
（１０）カルパイン阻害剤である上記（９）記載の医薬組成物、
（１１）カルパインが関与する疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳動物に有効量の一般式（Ｉ）
【００１１】
【化４】
【００１２】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を投与することからなる方法、および
（１２）カルパイン阻害剤としての一般式（Ｉ）
【００１３】
【化５】
【００１４】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ラット水晶体培養における化合物１の水晶体白濁防止効果を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す（ｎ＝５）。＊はステューデントのＴ検定（両側）によるコントロール群に対する有意差ｐ＜０．０１を表す。
【図２】図２は、ウサギにおける点眼投与後の化合物１の房水濃度を示すグラフである。各値は平均値±標準偏差を示す（ｎ＝４）。
【図３】図３は、ラット網膜虚血障害モデルにおける化合物１のガングリオン細胞障害に対する抑制効果を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す（ｎ＝６）。＊はステューデントのＴ検定によるコントロール群に対する有意差ｐ＜０．０５を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
上記式（Ｉ）中、Ｒ１で表される低級アルキル基は炭素数１〜４の直鎖状または分枝状アルキル基をいい、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられる。好ましくは炭素数３または４の低級アルキル基であり、より好ましくはイソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルであり、特に好ましくはイソブチルである。上記式（Ｉ）中、Ｒ２で表されるハロゲンとしてはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素が挙げられ、とりわけフッ素が好ましい。上記式（Ｉ）中、Ｒ２で表される低級アルキル基としては前述のＲ１で表される低級アルキル基と同様のものが挙げられ、特に好ましくはメチルである。上記式（Ｉ）中、Ｒ２で表される低級アルコキシ基は炭素数１〜４の直鎖状または分枝状アルコキシ基をいい、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられ、特に好ましくはメトキシである。
【００１７】
さらに、本発明は、一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、本発明化合物と記載することもある。）および本発明化合物の各種の溶媒和や結晶多形の物質ならびにプロドラッグをも包含する。
本発明の化合物は例えば、下記反応式
【００１８】
【化６】
【００１９】
［式中、各記号は前記と同意義を有する。］により製造することができる。一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩ）と記載することもある。）はアミノ基をＲ３で表される保護基で保護されたα−アミノ酸である。Ｒ３として表される保護基としては、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（以下、Ｂｏｃ基と記載することもある。）、ベンジルオキシカルボニル基などの通常ペプチド合成の分野で用いられるものが挙げられる。
【００２０】
一般式（ＩＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩＩ）と記載することもある。）は、化合物（ＩＩ）とＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを通常使用される有機溶媒に溶解し、縮合剤の存在下で攪拌することにより得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはジクロロメタンである。縮合剤としては、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミドなどが好適に使用される。反応温度は、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００２１】
一般式（ＩＶ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＶ）と記載することもある。）は、化合物（ＩＩＩ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、α−アミノ−γ−ブチロラクトンまたはその塩（塩酸塩または臭化水素酸塩）を加え、塩基の存在下または非存在下で攪拌することにより得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである。塩基としては例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，５−ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノン−５−エン、１，４−ジアザビシクロ〔２，２，２〕ノン−５−エン、１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０〕−７−ウンデセンなどが挙げられるが、好ましくはトリエチルアミンである。反応温度は特に限定されないが、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００２２】
一般式（Ｖ）で表される化合物（以下、化合物（Ｖ）と記載することもある。）は、化合物（ＩＶ）の保護基であるＲ３を、アミノ保護基の脱離反応に用いられる慣用的方法を適宜選択することによって得ることができる。例えば保護基にｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を用いた場合は、化合物（ＩＶ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、酸の存在下、攪拌することによりＲ３を脱離することができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくは酢酸エチルである。酸としては塩酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。また、市販されている塩酸の酢酸エチル溶液またはジオキサン溶液などを用いて脱離することもできる。反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。ベンジルオキシカルボニル基を用いた場合は慣用の金属触媒（例えばパラジウム炭素、ラネーニッケル、酸化白金など）の存在下での接触還元により行われる。水素圧は通常約１気圧〜約５０気圧であるが、好ましくは約１気圧〜約５気圧である。溶媒としては、アルコール類（メタノール、エタノールなど）、エーテル類（テトラヒドロフランなど）、有機酸類（酢酸など）およびこれらの混合溶媒を使用できる。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常、冷却下、室温または加温下で反応は行われる。また、化合物（Ｖ）は次の反応に影響がなければ単離精製を行わず次の反応に用いてもよい。
【００２３】
一般式（ＶＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＶＩ）と記載することもある。）は、化合物（Ｖ）に種々のイソチオシアナート試薬を加え、通常使用される有機溶媒中、塩基の存在下または非存在下で攪拌することにより得ることができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくは酢酸エチルである。塩基としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，５−ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノン−５−エン、１，４−ジアザビシクロ〔２，２，２〕ノン−５−エン、１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０〕−７−ウンデセンなどが挙げられるが、好ましくはトリエチルアミンである。反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００２４】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、化合物（ＶＩ）を還元反応に付し、得ることができる。本還元反応はそれ自体公知の方法で行うことができる。例えば金属水素化物による還元、金属水素錯化合物による還元、ジボランおよび置換ボランによる還元、接触水素添加等が用いられる。すなわち、この反応は化合物（ＶＩ）を還元剤で処理することにより行われる。還元剤としては、水素化ホウ素アルカリ金属（例えば水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム等）、水素化アルミニウムリチウムなどの金属水素錯化合物、水素化ナトリウムなどの金属水素化物、有機スズ化合物（水素化トリフェニルスズ等）、ニッケル化合物、亜鉛化合物などの金属および金属塩、パラジウム、白金、ロジウムなどの遷移金属触媒と水素とを用いる接触還元剤およびジボランなどが挙げられるが、とりわけ水素化ジイソブチルアルミニウムを用いることにより有利に行われる。この反応は、反応に影響を及ぼさない有機溶媒中で行われる。例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げられるが、好ましくはジクロロメタンである。反応温度は約−１００℃〜約１５０℃，特に約−８０℃〜約−１０℃が好適であり、反応時間は、約１〜約２４時間程度である。このようにして得られる環状ヘミアセタール誘導体は公知の分離精製手段、例えば濃縮、減圧濃縮、溶媒抽出、晶出、再結晶、転溶、クロマトグラフィーなどにより単離精製することができる。
【００２５】
上記の方法によって製造される一般式（Ｉ）で表される化合物としては、例えば（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ブタナミド、（２Ｓ）−２−（（（ベンジルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（４−フルオロフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（４−メトキシフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（３−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−２−（（（（４−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（２−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（３−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド、（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（４−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミドなどが挙げられる。
【００２６】
本発明化合物は文献未載の新規化合物であり、後記試験例に示すように優れたカルパイン阻害活性を有するため、それらを有効成分として、必要により後記の担体等を組み合わせることにより、カルパイン阻害剤としての医薬として有用である。後述の実施例に開示する化合物の構造式を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】
本発明化合物を含有する医薬は、哺乳動物（例えば、ヒト、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）の虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳虚血疾患、白内障、緑内障、網膜（脈絡膜）疾患、光凝固による眼球後眼部合併症（例えば黄斑部浮腫、網膜剥離、視神経炎、視野異常、光覚異常、色覚異常など）などの予防および治療用の医薬用製剤として、または血管新生、網膜剥離などの予防および治療薬として有用である。また、本発明化合物は従来の同種化合物より水溶性に優れているものが多く、従来困難であった水性液剤としての使用が可能となる。さらに、本発明化合物は組織移行性および吸収性に優れ、かつ毒性も非常に低く安全性にも優れている。
【００２９】
本発明化合物を含有する医薬は全身的または局所的に投与される。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射など非経口的にも投与される。局所的には、皮膚、粘膜、鼻内、眼内などに投与される。
【００３０】
本発明化合物を含有する医薬の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤などの液剤などが挙げられる。顆粒および錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など）などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤および錠剤には、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。
【００３１】
カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または、粒状、若しくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するか、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなど加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤［二酸化イオウ、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル）］などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。
【００３２】
坐剤として製造する場合には坐剤基剤（例えばカカオ脂、マクロゴールなど）を適宜選択して使用することができる。
【００３３】
シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜選択して使用することができる。
【００３４】
注射剤、点眼剤または点鼻剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸、イプシロンアミノカプロン酸など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。
【００３５】
なお、本発明化合物中、医薬品として望まれる適度な水溶性を有する化合物は、水溶性液剤として、特に上記したシロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤などの製剤に有利に使用できる。
【００３６】
上記シロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよく、等張化剤は、通常、浸透圧が約２２９〜約３４３ｍＯｓｍとなるよう、約０．５〜約５．０ｗ／ｖ％程度添加する。また、緩衝剤は約０．０１〜約２．０ｗ／ｖ％程度、増粘剤は約０．０１〜約１．０ｗ／ｖ％程度、安定化剤は約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％程度添加する。ｐＨ調整剤は、適宜添加し、通常ｐＨ約３〜約９、好ましくは約４〜約８に調整される。
【００３７】
本発明化合物の投与量は対象となる疾患、症状、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば内服剤として成人に投与する場合は、１日数回、１回量約１〜約１００ｍｇ程度であり、注射剤として成人に投与する場合は、１日１回、約０．１〜約３０ｍｇ程度である。また、局所的に目に投与する場合は、本発明化合物を約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％、好ましくは約０．０１〜約０．５ｗ／ｖ％含有する点眼剤を１回約２０〜約５０μＬ、１日数回点眼するのがよい。
【実施例】
【００３８】
本発明を以下の参考例、実施例、試験例および製剤例に従いさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
【００３９】
なお、実施例で述べる化合物の分析値において、融点はＹａｎａｃｏ社製ＭＰ−５００Ｖ型（補正なし）を用いて測定した。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）はＶａｒｉａｎ社製Ｇｅｍｉｎｉ２０００型を用いて測定した。化合物１から１１のＮＭＲスペクトルはアノメリック炭素の存在により複雑であり、同一プロトンのメジャーピークとマイナーピークが区別できる場合は別々に記載した。マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）はＰｅｒｓｅｐｔｉｖｅ社製Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ ＰＲＯ型を用いて測定した。比旋光度（［α］Ｄ）はＨｏｒｉｂａ社製ＳＥＰＡ−２０００型を用いて測定した。
【００４０】
参考例１ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル−Ｌ−ロイシンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（参考化合物１）
Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシン（２７ｇ，１１０ｍｍｏｌ）とＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１６ｇ，１４０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８０ｍＬ）に溶解し、これに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２７ｇ，１４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１８０ｍＬ）懸濁液を氷冷条件下で加えた。この反応液を室温で１８時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。得られた固体をヘキサンで結晶化し、無色結晶の参考化合物（３３ｇ，９３％）を得た。
mp 74.1-75.5 ℃. 1H-NMR(300 MHz, DMSO-d6)δ：0.88 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.39 (s, 9H), 1.54-1.75 (m, 3H), 2.80 (s, 4H), 4.32 (m, 1H), 7.62 (d, 1H, J = 8.4 Hz).
【００４１】
参考例２ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル−Ｌ−イソロイシンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（参考化合物２）
Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシンの代わりにＢｏｃ−Ｌ−イソロイシンを用いて参考例１と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物２を得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.97 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 1.04 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.26 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.60 (m, 1H), 1.98 (m, 1H), 2.83 (s, 4H), 4.62 (dd, 1H, J = 8.7, 5.1 Hz), 5.01 (d, 1H, J = 8.7 Hz).
【００４２】
参考例３ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル−Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（参考化合物３）
Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシンの代わりにＢｏｃ−Ｌ−バリンを用いて参考例１と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物３を得た。
mp 125.7-127.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.99 (d, 6H, J = 6.9 Hz), 1.4 (s, 9H), 2.15 (m, 1H), 2.81 (s, 4H), 4.22 (dd, 1H, J = 8.1, 6.6 Hz), 7.58 (d, 1H, J= 8.4 Hz).
【００４３】
参考例４ （２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物４）
参考化合物１（２０ｇ，６１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）に溶解し、氷冷条件下で（Ｓ）−（−）−α−アミノブチロラクトン臭化水素酸塩（１７ｇ，９１ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１８ｇ，１８０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンで結晶化し、無色結晶の参考化合物４（１９ｇ，９９％）を得た。
mp 92.5-93.3 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.85 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.88 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.28-1.50 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.61 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 6.88 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.30 (d, 1H, J = 8.4 Hz).
【００４４】
参考例５ （２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ）−３−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物５）
参考化合物１の代わりに参考化合物２を用いて参考例４と同様の操作を行い、白色粉末の参考化合物５を得た。
mp 156.4-159.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.90 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 0.95 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.15 (m, 1H), 1.43 (S, 9H), 1.50 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 2.21 (m, 1H), 2.73 (m, 1H),4.01 (m, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.46 (td, 1H, J = 9.0, 1.2 Hz),
4.54 (m, 1H), 5.11 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 6.87 (m, 1H).
【００４５】
参考例６ （２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ）−３−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ブタナミド（参考化合物６）
参考化合物１の代わりに参考化合物３を用いて参考例４と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物６を得た。
mp 113.9-114.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.84 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 0.87 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.38 (s, 9H), 1.93 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 3.78 (dd, 1H, J = 8.9, 7.2 Hz), 4.21 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 6.68 (d, 1H, J = 8.9 Hz), 8.37 (d, 1H, J = 7.8 Hz).
【００４６】
参考例７ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物７）
参考化合物４を（３．４ｇ，１１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、氷冷条件下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（８．０ｍＬ）を加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後（オイルダウンが確認された。）、溶媒を減圧で除去した。これに酢酸エチルを加え、再度、溶媒を減圧で除去した（２回繰り返した。）。残渣を酢酸エチルで懸濁させ、これにフェニルイソチオシアナート（１．５ｇ，１１ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（３．３ｇ，３２ｍｍｏｌ）を加えた。この液を室温で３時間攪拌した。反応液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンで結晶化し、さらにヘキサンで洗浄を行い、無色結晶の参考化合物７（１．８ｇ，４８％）を得た。
mp 77.7-78.8 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 1.55-1.70 (m, 3H), 2.20 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 7.10 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 2H), 7.51-7.54 (m, 2H), 7.78 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.64 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.70 (s, 1H).
【００４７】
参考例８ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物８）
参考化合物４の代わりに参考化合物５を用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物８を得た。
mp 71.9-72.7 ℃. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.91 (t, 3H, J = 7.4 Hz), 0.96 (d, 3H, J = 6.7 Hz), 1.10-1.22 (m, 1H), 1.48-1.59 (m, 1H), 1.94-2.02 (m, 1H), 2.18-2.33 (m, 1H), 2.63-2.76 (m, 1H), 4.20-4.29 (m, 1H), 4.44 (t, 1H, J = 9.0 Hz), 4.59 (ddd, 1H, J = 7.2, 8.9, 11.3 Hz), 4.92 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 6.77 (brs, 1H), 6.98 (brs, 1H), 7.26-7.44 (m, 5H), 8.17 (brs, 1H).
【００４８】
参考例９ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ブタナミド（参考化合物９）
参考化合物４の代わりに参考化合物６を用いて参考例７と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物９を得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ：0.97 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.00 (d, 3H, J = 6.9 Hz), 1.75 (brs, 1H), 2.15-2.33 (m, 2H), 2.63-2.72 (m, 1H), 4.45 (t, 1H, J = 9.0 Hz), 4.61 (ddd, 1H, J = 11.4, 8.8, 7.3 Hz), 4.89 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 6.75 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 7.01 (d, 1H, J = 6.7 Hz), 7.21-7.50 (m, 5H), 8.17 (brs, 1H).
【００４９】
参考例１０ （２Ｓ）−２−（（（ベンジルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１０）
フェニルイソチオシアナートの代わりにベンジルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、無色オイル状の参考化合物１０を得た。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 1.56-1.72 (m, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 5.00 (m, 1H), 7.49-7.98 (m, 8H), 8.60 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.75 (s, 1H).
【００５０】
参考例１１ （２Ｓ）−２−（（（（４−フルオロフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１１）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−フルオロフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、微黄色結晶の参考化合物１１を得た。
mp 47.5-48.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.55-1.72 (m, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.95 (m, 1H), 7.12-7.18 (m, 2H), 7.49-7.55 (m, 2H), 7.78 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 8.62 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 9.65 (s, 1H).
【００５１】
参考例１２ （２Ｓ）−２−（（（（４−メトキシフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１２）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−メトキシフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、微黄色結晶の参考化合物１２を得た。
mp 44.5-46.1 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 6H, J = 6.6 Hz), 1.54-1.67 (m, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 4.20 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 6.84-6.91 (m, 2H), 7.32-7.35 (m, 2H), 7.54 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.50 (s, 1H).
【００５２】
参考例１３ （２Ｓ）−２−（（（（３−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１３）
フェニルイソチオシアナートの代わりに３−シアノフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物１３を得た。
mp 72.0-73.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 0.92 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 1.56-1.72 (m, 3H), 2.11-2.25 (m, 1H), 2.36-2.44 (m, 1H), 4.17-4.26 (m, 1H), 4.35 (dt, 1H, J = 8.8, 1.7 Hz), 4.57-4.66 (m, 1H), 4.93 (dd, 1H, J = 14.2, 7.2 Hz), 7.49-7.53 (m, 2H), 7.71-7.77 (m, 1H), 8.10 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.17 (brs, 1H), 8.64 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.91 (brs, 1H).
【００５３】
参考例１４ （２Ｓ）−２−（（（（４−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１４）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−シアノフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物１４を得た。
mp 71.9-73.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.90 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.1 Hz), 1.56-1.69 (m, 3H), 2.14-2.25 (m, 1H), 2.36-2.44 (m, 1H), 4.17-4.25 (m, 1H), 4.35 (dt, 1H, J = 8.0, 1.7Hz), 4.56-4.65 (m, 1H), 4.92 (dd, 1H, J = 14.5, 7.5 Hz), 7.73 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.86 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 8.18 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.66 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 10.08 (brs, 1H).
【００５４】
参考例１５ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（２−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１５）
フェニルイソチオシアナートの代わりに２−メチルフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、微黄色結晶の参考化合物１５を得た。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.92 (d, 6H, J = 6.3 Hz), 1.54-1.71 (m, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.20 (m, 1H), 2.42 (m, 1H), 4.22 (m, 2H), 4.36 (m, 2H), 7.14-7.40 (m, 4H), 7.55 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 8.58 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 9.21 (s, 1H).
【００５５】
参考例１６ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（３−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１６）
フェニルイソチオシアナートの代わりに３−メチルフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、白色固体の参考化合物１６を得た。
mp 59.1-62.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.86 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.51-1.72 (m, 2H), 2.10-2.25 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.33-2.44 (m, 1H), 4.15-4.25 (m, 1H), 4.30-4.38 (m, 1H), 4.54-4.65 (m, 2H), 4.92-4.99 (m, 1H), 6.91 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 7.18 (t, 1H, J = 7.8 Hz), 7.30 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 7.31 (s, 1H), 7.72 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 8.61 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 9.62 (s, 1H).
【００５６】
参考例１７ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（４−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−オキソ−３−フラニル）ペンタナミド（参考化合物１７）
フェニルイソチオシアナートの代わりに４−メチルフェニルイソチオシアナートを用いて参考例７と同様の操作を行い、無色結晶の参考化合物１７を得た。
mp 107.9-111.2 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.89 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 0.90 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.40-1.51 (m, 2H), 1.52-1.70 (m, 1H), 2.09-2.27 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.32-2.43 (m, 1H), 4.16-4.29 (m, 2H), 4.34 (dd, 1H, J = 8.8, 7.5 Hz), 4.55-4.64 (m, 1H), 6.27 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.01 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 7.24 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 8.44 (s, 1H), 8.57 (d, 1H, J = 8.2 Hz).
【００５７】
実施例１ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物１）
参考化合物７（１．７ｇ，４．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍＬ）で溶解し、−７８℃で１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム／トルエン溶液（１７ｍＬ，１７ｍｍｏｌ）を加えた。この液を−７０℃以下で３時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液（４．０ｍＬ）を加え、室温で３０分間攪拌した。これに無水硫酸マグネシウムと酢酸エチルを加え、無機物をセライトでろ別した。このろ液を減圧下で濃縮後、残渣をＨＰＬＣ（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，溶離液；アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝３０：７０：０．１）を用いて精製した。主画分を集め、酢酸エチルで抽出した。この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンで結晶化し、無色結晶の化合物１（０．４６ｇ，２７％）を得た。
mp 62.0-63.8 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.91 (d, 6H, J = 6.0 Hz), 1.49-1.91 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.64-4.00 (m, 3H), 4.91 (m, 1H), 5.00/5.11 (d/t, 1H, J = 4.5/4.7 Hz), 6.16/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/4.8 Hz), 7.10 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 2H), 7.49-7.53 (m, 2H), 7.72/7.78 (d/d, 1H, J = 8.4/8.7 Hz), 8.26/7.87 (d/d, 1H, J = 6.3/7.5 Hz), 9.69 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.85. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 358.174, Found 358.169. [α]D25 +23.6° (c = 0.211).
【００５８】
実施例２ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物２）
参考化合物７の代わりに参考化合物８を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物２を得た。
mp 51.3-52.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.81-0.87 (m, 6H), 1.03 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.68-1.86 (m, 2H), 2.11 (m, 1H), 3.48/3.86 (m/m, 1H), 3.91-3.96 (m, 2H), 4.88 (m, 1H), 4.99/5.10 (d/t, 1H, J = 4.5/4.5 Hz), 6.13/6.27 (d/d, 1H, J = 4.5/4.2 Hz), 7.07 (m, 1H), 7.27-7.32 (m, 2H), 7.49-7.52 (m, 2H), 7.70/7.71 (d/d, 1H, J = 8.4/8.1 Hz), 7.85/8.21 (d/d, 1H, J = 7.8/6.6 Hz), 9.76 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.77. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 374.151, Found 374.185. [α]D25
+33.6° (c = 0.208).
【００５９】
実施例３ （２Ｓ）−３−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ブタナミド（化合物３）
参考化合物７の代わりに参考化合物９を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物３を得た。
mp 50.9-51.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.86-0.92 (m, 6H), 1.80 (m, 1H), 2.03-2.26 (m, 2H), 3.69/3.89 (m/m, 1H), 3.93-3.97 (m, 2H), 4.92 (m, 1H), 5.02/5.13 (d/t, 1H, J = 4.5/4.7 Hz), 6.16/6.31 (d/d, 1H, J = 4.5/4.8 Hz), 7.10 (m, 1H), 7.29-7.34 (m, 2H), 7.52-7.55 (m, 2H), 7.71 (m, 1H), 8.24/7.92 (d/d, 1H, J = 6.6/7.5 Hz), 9.82 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.83. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 360.136, Found 360.137. [α]D25 +39.8° (c = 0.201).
【００６０】
実施例４ （２Ｓ）−２−（（（ベンジルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物４）
参考化合物７の代わりに参考化合物１０を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物４を得た。
mp 62.2-64.4 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.84-0.89 (m, 6H), 1.44-1.82 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.68/4.03 (m/m, 2H), 3.85-3.97 (m, 2H), 4.66 (bs, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.99/5.11 (d/t, 1H, J = 4.5/4.4 Hz), 6.12/6.34 (d/bs, 1H, J = 4.8 Hz), 7.22-7.36 (m, 5H), 7.58 (m, 1H), 7.68/8.13 (bs, 1H), 7.96 (bs, 1H), major:minor= 1.0:0.80. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.162. [α]D25+18.9° (c = 0.211).
【００６１】
実施例５ （２Ｓ）−２−（（（（４−フルオロフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物５）
参考化合物７の代わりに参考化合物１１を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物５を得た。
mp 77.2-78.3 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.90 (d, 6H, J = 6.3 Hz), 1.48-1.91 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.69/3.95 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 5.00/5.12 (d/t, 1H, J = 5.1/4.5 Hz), 6.15/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/3.9 Hz), 7.12-7.18 (m, 2H), 7.46-7.52 (m, 2H), 7.73/7.77 (d/d, 1H, J = 8.1/7.8 Hz), 7.84/8.25 (d/d, 1H, J = 7.8/7.2 Hz), 9.64 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.85. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 392.142, Found 392.141. [α]D25 +20.1° (c = 0.199).
【００６２】
実施例６ （２Ｓ）−２−（（（（４−メトキシフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物６）
参考化合物７の代わりに参考化合物１２を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物６を得た。
mp 67.9-68.8 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.88-0.91 (m, 6H), 1.47-1.87 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.69/3.94 (m/m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.86-3.90 (m, 2H), 4.89 (m, 1H), 4.99/5.11 (d/t, 1H, J = 4.8/4.4 Hz), 6.15/6.35 (d/d, 1H, J = 4.8/4.2 Hz), 6.88-6.91 (m, 2H), 7.28-7.33 (m, 2H), 7.47/7.53 (d/d, 1H, J = 8.1/6.9 Hz), 8.22/7.81 (d/d, 1H, J = 6.6/7.8 Hz), 9.49 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.78. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 404.162, Found 404.166. [α]D25 +19.9° (c = 0.200).
【００６３】
実施例７ （２Ｓ）−２−（（（（３−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物７）
参考化合物７の代わりに参考化合物１３を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物７を得た。
mp 54.1-55.1 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.90-0.92 (m, 6H), 1.45-1.90 (m, 4H), 2.15 (m, 1H), 3.69/3.96 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 5.01/5.12 (d/t, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 6.16/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 7.48-7.54 (m, 2H), 7.75 (m, 1H), 8.06-8.18 (m, 2H), 8.30/7.92 (d/d, 1H, J = 6.9/7.5 Hz), 9.93 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.75. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 399.147, Found 399.167. [α]D25 +23.8° (c = 0.210).
【００６４】
実施例８ （２Ｓ）−２−（（（（４−シアノフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−４−メチル−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物８）
参考化合物７の代わりに参考化合物１４を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物８を得た。
mp 80.0-82.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.89-0.92 (m, 6H), 1.50-1.90 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 3.69/3.96 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.93 (m, 1H), 5.01/5.12 (d/t, 1H, J = 5.1/4.5 Hz), 6.16/6.33 (d/d, 1H, J = 4.5/4.2 Hz), 7.73-7.76 (m, 2H), 7.84-7.88 (m, 2H), 8.18 (m, 1H), 8.31/7.95 (d/d, 1H, J = 6.6/7.8 Hz), 10.10 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.75. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 399.147, Found 399.150. [α]D25 +51.2° (c = 0.195).
【００６５】
実施例９ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（２−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物９）
参考化合物７の代わりに参考化合物１５を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物９を得た。
mp 57.9-58.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.88-0.91 (m, 6H), 1.48-1.86 (m, 4H), 2.16 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 3.69/3.94 (m/m, 1H), 3.86-3.90 (m, 2H), 4.91 (m, 1H), 4.98/5.11 (d/t, 1H, J = 4.5/4.5 Hz), 6.15/6.36 (d/d, 1H, J = 4.8/3.9 Hz), 7.12-7.31 (m, 4H), 7.46/7.52 (d/d, 1H, J = 8.4/9.9 Hz), 7.78/8.19 (d/d, 1H, J = 7.2/6.6 Hz), 9.20 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.89. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.176. [α]D25 +9.8° (c = 0.203).
【００６６】
実施例１０ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（３−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物１０）
参考化合物７の代わりに参考化合物１６を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物１０を得た。
mp 61.4-61.9 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.91 (d, 6H, J = 6.3 Hz), 1.47-1.88 (m, 4H), 2.12 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 3.69/3.95 (m/m, 1H), 3.86-3.91 (m, 2H), 4.92 (m, 1H), 5.00/5.11 (d/t, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 6.15/6.34 (d/d, 1H, J = 4.8/4.5 Hz), 6.92 (m, 1H), 7.17-7.30 (m, 3H), 7.68/7.74 (d/d, 1H, J = 8.4/7.8 Hz), 8.24/7.84 (d/d, 1H, J = 6.6/7.5 Hz), 9.63 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.87. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.175. [α]D25 +4.8° (c = 0.208).
【００６７】
実施例１１ （２Ｓ）−４−メチル−２−（（（（４−メチルフェニル）アミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド（化合物１１）
参考化合物７の代わりに参考化合物１７を用いて実施例１と同様の操作を行い、無色結晶の化合物１１を得た。
mp 87.3-88.7 ℃. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ：0.89 (d, 6H, J = 6.6 Hz), 1.36-1.85 (m, 4H), 2.14 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 3.68/3.94 (m/m, 1H), 3.85-3.90 (m, 2H), 4.28 (m, 1H), 4.98/5.10 (d/t, 1H, J = 4.8/4.7 Hz), 6.14/6.33 (d/d, 1H, J = 4.5/3.6 Hz), 6.24 (m, 1H), 7.01-7.03 (m, 2H), 7.23-7.26 (m, 2H), 8.19/7.84 (d/d, 1H, J = 7.2/7.8 Hz), 8.46 (s, 1H), major:minor = 1.0:0.46. MALDI-TOF MS [M+Na]＋ Calcd 388.167, Found 388.165. [α]D25 +23.9° (c = 0.209).
【００６８】
試験例１ μ−カルパインおよびｍ−カルパイン阻害活性の測定
μ−カルパインおよびｍ−カルパインの阻害活性は文献［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
ｖｏｌ．２０８，３８７−３９２（１９９３）］に記載された方法に準じて測定した。すなわち、０.５ｍｇ／ｍＬカゼイン、５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７.４）、２０ｍＭジチオスレイトール、０.０３酵素単位μ−カルパイン（ヒト赤血球由来、Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ社製）またはｍ−カルパイン（ブタ腎臓由来、Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ社製）を含む反応液２００μＬ、種々の濃度の被験薬を含むジメチルスルホキシド溶液２.５μＬおよび２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液５０μＬを９６穴プレートに添加した。３０℃、６０分間反応させた後、反応液１００μＬを別の９６穴プレートに移し、精製水５０μＬと５０％クマシーブリリアントブルー溶液１００μＬを加えて室温で１５分間放置した後、５９５ｎｍで吸光度を測定した。被験薬を含まず同様に処理した後測定したものをコントロール値、２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液の代わりに１ｍＭ ＥＤＴＡを添加したものをブランク値とし、以下の式により阻害率を計算し、５０％阻害に必要な量（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率（％）＝｛１−（測定値−ブランク値）／（コントロール値−ブランク値）｝×１００
【００６９】
試験結果１
その結果を表２に示した。
【００７０】
【表２】
【００７１】
その結果、本発明化合物には、優れたカルパイン阻害活性が認められた。
【００７２】
試験例２ ラット水晶体培養における水晶体白濁防止作用
ＳＤ系ラット（５週齢）から得た水晶体を３群に分け、以下のように培養した。
（１）ノーマル群は実験期間中を通じ基本培養液［１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＧＩＢＣＯ社製）を含む無血清イーグル最小必須培地（ＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ社製）］で培養した。
（２）コントロール群は基本培養液で培養した。
（３）薬物群は基本培養液にエタノールで溶解した化合物１を添加した培養液（培養液中の化合物１の濃度１００μＭ、エタノールの濃度０．５％；薬物添加培養液）で培養した。
コントロール群と薬物群には培養２時間後にカルシウムイオノフォア（Ａ２３１８７、Calbiochem-Novabiochem社製）のエタノール溶液（Ａ２３１８７ １ｍｇをエタノール９５５μＬに溶解）をＡ２３１８７の濃度が１０μＭになるように培養液に加えた。２４時間後、薬物群は薬物添加培養液、コントロール群は基本培養液に交換した。４日間培養後、実体顕微鏡下で観察を行い、水晶体の混濁度（ピクセル）をコンピュータを用いた画像解析装置（ＮＩＨ ｉｍａｇｅ １．６２）により測定した。
【００７３】
試験結果２
その結果を図１に示した。ノーマル群の水晶体は透明であった。コントロール群の水晶体は中央部が白く混濁した。化合物１を添加した群（薬物群）はその混濁を有意に抑制した。
以上の結果は、本発明の化合物１が水晶体白濁防止に効果があることを示すものである。
【００７４】
試験例３ 房水移行性試験
日本白色ウサギ（体重約２ｋｇ、福崎養兎組合より購入）の両眼に後述の製剤例４の懸濁液剤を５０μＬずつ点眼した。点眼０．２５、０．５、１および３時間後にペントバルビタールで屠殺し、房水を採取した。カラムスイッチングシステムＨＰＬＣを用いて房水中の化合物１の濃度を測定した。
【００７５】
試験結果３
その結果を図２に示した。房水中の化合物１の濃度は、点眼０．５時間後で最大（Ｃｍａｘ）となり、その濃度は２９０３．６ｎＭであった。点眼後０〜３時間における化合物１の房水移行量の薬物濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、４７８６．２ｎＭ・ｈであった。
【００７６】
試験例４ ラット網膜虚血障害に対する効果
雄性ＳＤ系ラット（体重：１５０〜２００ｇ，日本チャールズリバーより購入）を使用した。麻酔は、虚血の１５分前に５０ｍｇ／ｍＬケタミン注射液と２０ｍｇ／ｍＬキシラジン注射液の等量混合液をラットの大腿部筋肉内に１．０ｍＬ／ｋｇ体重投与した。虚血はスギタ式クリップミニタイプ（Ｎｏ．９８）を用いて網膜中心動脈を含む視神経を結紮し、５５分間血流遮断を行なった。ノーマル群には、網膜中心動脈の露出のみを行ない、虚血しなかった。虚血再潅流７日後に組織標本を作成した。組織標本を作成するために、過剰量のペントバルビタール溶液を腹腔内投与して屠殺し、左眼球を摘出した。摘出眼球は２％パラホルムアルデヒドおよび２．５％グルタルアルデヒド（０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）の固定液にて２４時間固定した。固定後、パラフィン包埋ブロックを作製し、視神経乳頭中央を通る部位で３μｍの厚さで薄切して、ヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）染色を施した。光学顕微鏡下で、視神経乳頭中央より１〜２ｍｍにおける網膜断面０．２５ｍｍ幅あたりの、網膜の神経節細胞（ガングリオン細胞）数を計測した。
コントロール群には、カルボキシセルロースナトリウムを蒸留水に溶かして０．５％の濃度になるように調製した溶液（ＣＭＣ溶液）を、薬物群には化合物１をＣＭＣ溶液に１．０％になるように懸濁させた溶液を化合物１が１００ｍｇ／ｋｇ体重となるよう、それぞれ虚血開始１５分前および虚血解除直後に経口投与した。
【００７７】
試験結果４
その結果を図３に示した。虚血により、ガングリオン細胞数は正常群の約１／４に減少した（コントロール群）。これに対し、化合物１の投与（薬物群）は、虚血によるガングリオン細胞数の減少を有意に抑制した。
以上の結果は、本発明の化合物１が網膜虚血障害を改善する効果があることを示すものである。
【００７８】
試験例５ 細胞毒性試験
マウス神経芽細胞腫由来株化細胞（Ｎ１Ｅ−１１５細胞）を９６穴マイクロプレートに１ウェルあたり１０４個ずつ播種し、１０％ＦＢＳを含有するダルベッコ改変イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ社製）１００μＬ中で、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。培養液を全量除き、種々濃度の被験薬溶液（化合物１を９９．５％エタノールに溶解してＤＭＥＭでエタノールの最終濃度が１％になるように調製した。）１００μＬと交換し、２４時間培養した。培養上清および細胞を別々に回収し、細胞は超音波破砕して可溶性画分を調整し、それぞれに含まれる乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性をＬＤＨ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ社製、ＭＫ４０１）にて測定し、下記の式によりＬＤＨ漏出率を求め、障害を受けた細胞の割合とした。
ＬＤＨ漏出率（％）＝｛培養上清中ＬＤＨ活性／（培養上清中ＬＤＨ活性＋細胞内ＬＤＨ活性）｝×１００
各被験薬濃度のＬＤＨ漏出率からＳＡＳ前臨床パッケージ（Ｖｅｒ．６．１２）のＬＤ５０／ＥＤ５０ｐｒｏｂｉｔ法によりＬＤ５０を求めた。
【００７９】
試験結果５
その結果を表３に示した。
【００８０】
【表３】
【００８１】
表３のＬＤＨ漏出率から求めた化合物１のＬＤ５０は、２．１９１±０．０７９ｍＭであった。
【００８２】
製剤例１ 錠剤
化合物１０ ５ｇ
デンプン １２ｇ
乳糖 ２７．２ｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．４ｇ
化合物１０、乳糖およびデンプンを加えてよく混和し、湿性錠剤調製法に準じて打錠用顆粒とする。ステアリン酸マグネシウムを加えて打錠し、錠剤４００錠とする。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティング剤（メタアクリル酸コポリマー）でコーティングする。
【００８３】
製剤例２ 注射剤
化合物５ １００ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
１Ｎ水酸化ナトリウム 適量
注射用蒸留水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して注射剤とする。
【００８４】
製剤例３ 点眼剤
化合物１ １００ｍｇ
ホウ酸 ７００ｍｇ
ホウ砂 適量
塩化ナトリウム ５００ｍｇ
エデト酸ナトリウム ０．０５ｍｇ
塩化ベンザルコニウム ０．０００５ｍｇ
滅菌精製水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して点眼剤とする。
【００８５】
製剤例４ 点眼剤
化合物１ ５００ｍｇ
ポリソルベート８０ １００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム二水和物 １００ｍｇ
塩化ベンザルコニウム ５ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
ｐＨ ７．０
滅菌精製水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和して懸濁点眼剤とした。
【産業上の利用可能性】
【００８６】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、優れたカルパイン阻害活性を有しているため、カルパインが関与する種々の疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳組織障害による疾患、白内障、緑内障、網脈絡膜疾患、光凝固による眼球後眼部合併症、血管新生を伴う疾患などの予防および治療薬として有用である。
【００８７】
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の新規な教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で色々な修正と変更をなし得ることは可能であるので、そのような修正および変更も、全て後記の特許請求の範囲で定義される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
【００８８】
本出願は、日本で出願された特願２００２−０７２７６２号を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ１が炭素数３または４の低級アルキル基である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がイソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される基である請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がイソブチルであり、Ｒ２が水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基から選択される基である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド。
【請求項６】
一般式（Ｉ）
【化２】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を含有する医薬。
【請求項７】
カルパイン阻害剤である請求項６記載の医薬。
【請求項８】
カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である請求項６記載の医薬。
【請求項９】
一般式（Ｉ）
【化３】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項１０】
カルパイン阻害剤である請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
カルパインが関与する疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳動物に有効量の一般式（Ｉ）
【化４】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を投与することからなる方法。
【請求項１２】
カルパイン阻害剤としての一般式（Ｉ）
【化５】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物の使用。
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ１が炭素数３または４の低級アルキル基である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がイソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される基である請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がイソブチルであり、Ｒ２が水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基および低級アルコキシ基から選択される基である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
（２Ｓ）−４−メチル−２−（（（フェニルアミノ）チオキソメチル）アミノ）−Ｎ−（（３Ｓ）−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−３−フラニル）ペンタナミド。
【請求項６】
一般式（Ｉ）
【化２】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を含有する医薬。
【請求項７】
カルパイン阻害剤である請求項６記載の医薬。
【請求項８】
カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である請求項６記載の医薬。
【請求項９】
一般式（Ｉ）
【化３】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物および製薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項１０】
カルパイン阻害剤である請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
カルパインが関与する疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳動物に有効量の一般式（Ｉ）
【化４】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物を投与することからなる方法。
【請求項１２】
カルパイン阻害剤としての一般式（Ｉ）
【化５】
［式中、Ｒ１は低級アルキル基を、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ基、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、ｎは０または１を示す。］で表される化合物の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１０−１８９４２４（Ｐ２０１０−１８９４２４Ａ）
【公開日】平成２２年９月２日（２０１０．９．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−９９１８６（Ｐ２０１０−９９１８６）
【出願日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【分割の表示】特願２００３−５７６４２１（Ｐ２００３−５７６４２１）の分割
【原出願日】平成１５年３月１４日（２００３．３．１４）
【出願人】（０００１９９１７５）千寿製薬株式会社 (46)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月２日（２０１０．９．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【分割の表示】特願２００３−５７６４２１（Ｐ２００３−５７６４２１）の分割
【原出願日】平成１５年３月１４日（２００３．３．１４）
【出願人】（０００１９９１７５）千寿製薬株式会社 (46)
【Ｆターム（参考）】
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