本発明は概して分子生物学とタンパク質工学の分野に関する。より具体的には、本発明は細菌の異種ポリペプチドの分泌のためのシグナル配列に関する。本発明はまた組換えポリペプチドとその使用に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体の製造方法であって、前記方法が、（１）ＴＩＲが共翻訳原生生物分泌シグナル配列を含む、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい第一の翻訳開始領域（ＴＩＲ）；及び、（２）第二のＴＩＲが共翻訳又は翻訳後原生生物分泌シグナル配列を含む、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい第二のＴＩＲを含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞の培養を含み、これによって、宿主細胞中の抗体の発現において、重鎖と軽鎖が生物学的に活性な抗体を形成するように折りたたまれ集合する方法。
【請求項２】
第一のＴＩＲがＳＴＩＩ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項１の方法。
【請求項３】
第一の翻訳開始領域がＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項２の方法。
【請求項４】
第一の翻訳開始領域が配列番号１から１０、３６から３９、４１及び４２の一の配列を含む、請求項２の方法。
【請求項５】
第二の翻訳開始領域がＳＴＩＩ、ＤｓｂＡ、ＭａｌＥ又はＰｈｏＡ変異シグナル配列を含む、請求項１から４の何れか一項の方法。
【請求項６】
第二の翻訳開始領域がＰｈｏＡ又はＭａｌＥ変異シグナル配列をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項５の方法。
【請求項７】
第二の翻訳開始領域が配列番号１から１４、１６から２４、２６から３９、及び４１から４２の一つの配列を含む、請求項５の方法。
【請求項８】
宿主細胞が更に（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい第三の翻訳開始領域を含む、請求項１から７の何れか一項の方法。
【請求項９】
第三の翻訳開始領域がＳＴＩＩ，ＰｈｏＩ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項８の方法。
【請求項１０】
第三の翻訳開始領域がＰｈｏＩ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項８の方法。
【請求項１１】
第三の翻訳開始領域が配列番号２３、２４、２６から３９、４１及び４２の一つを含む、請求項８の方法。
【請求項１２】
第一と第二の翻訳開始領域がほぼ同じ翻訳強度を示す、請求項１から１１の何れか一項の方法。
【請求項１３】
相対翻訳強度が約１又は２である、請求項１２の方法。
【請求項１４】
第一、第二及び第三の翻訳開始領域がほぼ同じ翻訳強度を示す、請求項８から１０の何れか一項の方法。
【請求項１５】
相対翻訳強度が約１又は２である、請求項１４の方法。
【請求項１６】
宿主細胞中のポリヌクレオチドが更にプロモーターを含む、請求項１から１５の何れか一項の方法。
【請求項１７】
プロモーターがｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、及びＴ７プロモーターからなる群から選択される原生生物プロモーターである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
宿主細胞が原生生物細胞である、請求項１から１７の何れか一項の方法。
【請求項１９】
原生生物細胞が大腸菌である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
大腸菌が内在性プロテアーゼ活性の欠損株である、請求項１９の方法。
【請求項２１】
大腸菌の遺伝子型が、ｄｅｇＰ及びｐｒｃ遺伝子を欠損し、変異ｓｐｒ遺伝子を有する、請求項１９又は２０の方法。
【請求項２２】
宿主細胞がＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＧ及びＦｋｐＡからなる群から選択される原生生物ポリヌクレオチドの少なくとも一つをコードするポリヌクレオチドを更に含む、請求項１から２１の何れか一項の方法。
【請求項２３】
ポリヌクレオチドがＤｓｂＡとＤｓｂＣの双方をコードする、請求項２２の方法。
【請求項２４】
宿主細胞が抗体を共同でコードする一又は複数のポリヌクレオチドを含む、請求項１から２３の何れか一項の方法。
【請求項２５】
方法が宿主細胞培養物から抗体を回収することを更に含む、請求項１から２４の何れか一項の方法。
【請求項２６】
抗体を宿主細胞培養培地から回収する、請求項２５の方法。
【請求項２７】
方法が回収した抗体と薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は抗体を含む薬学的製剤を調製するための担体とを混合することを更に含む、請求項２５又は２６の方法。
【請求項２８】
形成するイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも５０％が抗体である、請求項２５又は２６の方法。
【請求項２９】
形成するイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも７０％が抗体である、請求項２８の方法。
【請求項３０】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１から２９の何れか一項の方法。
【請求項３１】
抗体がキメラ抗体、親和性成熟抗体、二重特異的抗体、ヒト化抗体、抗体断片又はヒト抗体である、請求項３０の方法。
【請求項３２】
抗体断片が、一アーム抗体である、請求項３１の方法。
【請求項３３】
抗体がｃ−ｍｅｔに結合する、請求項３２の方法。
【請求項３４】
抗体が二重特異的抗体である、請求項３０の方法。
【請求項３５】
変異翻訳開始領域（ＴＩＲ）を含むポリヌクレオチドであって、該変異ＴＩＲがＰｈｏＡ、ＭａｌＥ、ＤｓｂＡ又はＳＴＩＩ分泌シグナル領域の核酸変異体を含むポリヌクレオチド。
【請求項３６】
変異ＴＩＲが配列番号１から１４、１６から２４、２６から３９、４１から４２の何れか一つの配列を含む、請求項３５のポリヌクレオチド。
【請求項３７】
前記変異翻訳開始領域の翻訳強度が、野生型の翻訳開始領域の翻訳強度よりも小さい、請求項３５のポリヌクレオチド。
【請求項３８】
異種ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい、請求項３５から３７の何れか一項のポリヌクレオチドであって、これによって、宿主細胞中の異種ポリペプチドの発現において、異種ポリペプチドが折りたたまれ、集合して生物学的に活性な異種ポリペプチドを形成するポリヌクレオチド。
【請求項３９】
異種ポリペプチドが抗体重鎖と抗体軽鎖から選択される、請求項３８のポリヌクレオチド。
【請求項４０】
異種ポリペプチドが（ａ）抗体重鎖と（ｂ）抗体軽鎖を含む、請求項３９のポリヌクレオチド。
【請求項４１】
異種ポリペプチドが更に（ｃ）Ｆｃポリペプチドを含む、請求項３０のポリヌクレオチド。
【請求項４２】
異種ポリペプチドが抗体であり、ポリヌクレオチドが、（１）ＴＩＲが共翻訳原生生物分泌シグナル配列を含み、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい第一のＴＩＲ；及び（２）第二のＴＩＲが共翻訳又は翻訳後原生生物分泌シグナル配列を含み、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい第二のＴＩＲを含み、これによって、宿主細胞中の抗体の発現において、重鎖と軽鎖が折りたたまれ、集合して生物学的に活性な抗体を形成する、請求項３５のポリヌクレオチド。
【請求項４３】
Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合していてもよい第三のＴＩＲを更に含む、請求項４２のポリヌクレオチド。
【請求項４４】
プロモーターを更に含む、請求項３５から４３の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項４５】
プロモーターが、ｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌｐｐ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、及びＴ７プロモーターからなる群から選択される原生生物プロモーターである、請求項４４のポリヌクレオチド。
【請求項４６】
異種ポリペプチドがプロテアーゼ、イムノアドヘシン、又はレセプターの細胞外部ドメインである、請求項３５のポリヌクレオチド。
【請求項４７】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項４２から４５の何れか一項のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
抗体がキメラ抗体、親和性成熟抗体、二重特異的抗体、ヒト化抗体、抗体断片又はヒト抗体である、請求項４２から４５の何れか一項のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
抗体断片が一アーム抗体である、請求項４８のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
抗体がｃ−ｍｅｔに結合する、請求項４９のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
抗体が二重特異的抗体である、請求項４８のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
抗体重鎖が一又は複数の変異Ｔ３６６Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及び／又はＴ３６６Ｗを含む、請求項４９又は５１のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
Ｆｃポリペプチドが一又は複数の変異Ｔ３６６Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及び／又はＴ３６６Ｗを含む、請求項４９のポリヌクレオチド。
【請求項５４】
請求項１から３４の何れか一項の方法によって得られる抗体。
【請求項５５】
請求項５４の抗体を含む薬学的組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【公表番号】特表２０１３−５０９８６７（Ｐ２０１３−５０９８６７Ａ）
【公表日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３７２３９（Ｐ２０１２−５３７２３９）
【出願日】平成２２年１１月５日（２０１０．１１．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５５７０２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５７１２０
【国際公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【出願人】（５０９０１２６２５）ジェネンテック，　インコーポレイテッド (357)
【Ｆターム（参考）】