【課題】疾患関連タンパク質特異的結合分子を単離する方法。
【解決手段】天然内因性タンパク質から派生するが、異型において、および／または、それらの正常な生理学的状況から患者の体内に蔓延している、疾病関連タンパク質のネオエピトープを認識する、新規の特異的結合分子、特に、ヒト抗体、ならびに、そのフラグメント、誘導体、および変異体。加えて、このような結合分子、その抗体および模倣体を含む医薬組成物、ならびに、アルツハイマー病等の神経疾患の治療における抗体および標的である場合も、またはそうでない場合もある、新規の結合分子に対するスクリーニングの方法。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患関連タンパク質特異的結合分子を単離する方法であって、
（ａ）症状はないが、疾患に罹患する、または疾患を発症する危険性がある患者、または異常に安定な疾病経過がある患者から得たサンプルを、所定の臨床特性の病理的に変化した細胞もしくは組織の標本に供するステップと、
（ｂ）前記標本に結合するが、健康な対象の対応する細胞または組織に結合しない結合分子を同定し、任意に単離するステップと、を含む、方法。
【請求項２】
前記サンプルは、体液または細胞サンプルを含有し、
好ましくは、
（ａ）前記体液は、脳脊髄液、血漿、または尿であり、及び／又は
（ｂ）前記サンプルは、Ｂ細胞または記憶Ｂ細胞を含む、またはそれらから派生する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記結合分子は、抗体である、請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記患者および対象は、それぞれ、ヒトである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記患者は、代理マーカーの存否により、まだ明確でない疾患に罹患しているかまたは前記疾患を発症する危険性があると判定されており、
好ましくは、前記代理マーカーは、老齢期、脳アミロイド負荷、アポＥ遺伝子型、ＡＰＰ遺伝子型、ＰＳ１遺伝子型、アミロイドβペプチド、イソプラスタン、タウ（Ｔａｕ）、およびホスホタウ（ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｔａｕ）の体液におけるレベルからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記疾患は、神経疾患、自己免疫疾患、および腫瘍からなる群から選択され、
好ましくは、前記疾患は、アルツハイマー病である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記サンプルは、以下の基準：
（ｉ）６５歳以上であること、
（ｉｉ）十分な認知能力および良好な健康状態を有すること、
（ｉｉｉ）認知症の臨床的兆候がないこと、または
（ｉｖ）アルツハイマー病であり得る確立された臨床診断の存在にもかかわらず、疾病の進行が異常に遅いこと、を満たす患者から採取される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
（ｉ）結合分子、例えば、前記標本に結合するが、健康な対象の対応する細胞または組織に結合しない抗体を含むことが確認されているサンプルからＢ細胞またはＢ記憶細胞を精製するステップと、
（ｉｉ）前記Ｂ細胞またはＢ記憶細胞から前記抗体に対する免疫グロブリン遺伝子レパートリーを取得するステップと、
（ｉｉｉ）前記レパートリーを使用して、前記抗体を発現するステップと、
をさらに含み、
好ましくは、ステップ（ｉｉ）は、
（ｉｖ）前記Ｂ細胞または記憶Ｂ細胞からｍＲＮＡを取得するステップと、
（ｖ）ステップ（ｉｖ）の前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを取得するステップと、
（ｖｉ）プライマー伸長反応を使用して、前記ｃＤＮＡから前記抗体の重鎖（ＨＣ）およびκ軽鎖（ＬＣ）に対応するフラグメントを増幅するステップと、
を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
疾患関連タンパク質ネオエピトープを選択的に認識することが可能であり、
好ましくは前記タンパク質をその非疾患関連型において実質的には認識しない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法により取得可能な結合分子。
【請求項１０】
抗体またはその抗原結合フラグメントであり、好ましくはヒト抗体である、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記疾患は、神経疾患であり、好ましくは前記疾患は、脳の疾患である、請求項９又は１０に記載の結合分子。
【請求項１２】
一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、およびＦ（ａｂ’）_２フラグメントからなる群から選択される、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の結合分子。
【請求項１３】
請求項９〜１２のいずれか１項に記載の結合分子をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１４】
任意に、前記抗体の他の免疫グロブリン鎖の可変領域をコードする請求項１３に記載のポリヌクレオチドと組み合わせて、請求項１３に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１５】
請求項１３に記載のポリヌクレオチド、または請求項１４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１６】
疾患関連タンパク質特異的結合分子、抗体、もしくはその結合フラグメント、または免疫グロブリン鎖を調製する方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項１５に記載の細胞を培養するステップと、
（ｂ）前記培養物から、前記結合分子、その抗体、もしくは結合フラグメント、または免疫グロブリン鎖を単離するステップと、を含む、方法。
【請求項１７】
請求項１３に記載のポリヌクレオチドによりコードされる、または請求項１６に記載の方法により取得可能である、結合分子、その抗体、免疫グロブリン鎖、または結合フラグメント。
【請求項１８】
（ａ）検出可能に標識化され、好ましくは、前記検出可能な標識は、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、および重金属からなる群から選択される、及び／又は
（ｂ）薬剤に結合される、
請求項９〜１２、もしくは１７のいずれか１項に記載の結合分子、抗体、または結合フラグメント。
【請求項１９】
請求項９〜１２、または１７若しくは１８のいずれか１項に記載の結合分子、請求項１３に記載のポリヌクレオチド、請求項１４に記載のベクター、または請求項１５に記載の細胞を含み、
（ａ）医薬組成物であり、医薬的に許容可能な担体をさらに含み、任意に、アルツハイマー病を治療するために有用な、有機小分子、抗アミロイドβ抗体、およびその組み合わせからなる群から選択される追加剤をさらに含み、又は
（ｂ）診断組成物であり、免疫または核酸ベースの診断方法に通常使用される、試薬をさらに含む、
組成物。

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【公開番号】特開２０１２−１３９２１９（Ｐ２０１２−１３９２１９Ａ）
【公開日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２７６１（Ｐ２０１２−２７６１）
【出願日】平成２４年１月１１日（２０１２．１．１１）
【分割の表示】特願２００９−５４４３９９（Ｐ２００９−５４４３９９）の分割
【原出願日】平成２０年１月７日（２００８．１．７）
【出願人】（５０７３２４６８１）ユニバーシティ・オブ・チューリッヒ (7)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＺＵＲＩＣＨ
【Ｆターム（参考）】