本発明は概して、最近同定された痛みの感覚に関与するＧタンパク質共役受容体（図６Ｂ）のファミリーの１つであるヒトＭｒｇＤポリペプチドに関する。痛みの感覚を変化させる際にアゴニストおよびアンタゴニストを利用する方法とともに、ヒトＭｒｇＤのアゴニストおよびアンタゴニストを同定する特定の方法が提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３５のヒトＭｒｇＤポリペプチドと少なくとも８０％配列同一性を有する単離ＭｒｇＤポリペプチド。
【請求項２】
配列番号３５の単離ヒトＭｒｇＤポリペプチド。
【請求項３】
請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドを発現する宿主細胞。
【請求項４】
前記宿主細胞は、原核細胞である、請求項３に記載の宿主細胞。
【請求項５】
前記宿主細胞は、エシェリヒア・コリである、請求項４に記載の宿主細胞。
【請求項６】
前記宿主細胞は、真核細胞である、請求項３に記載の宿主細胞。
【請求項７】
前記宿主細胞は、ハムスター胚腎（ＨＥＫ）細胞である、請求項６に記載の宿主細胞。
【請求項８】
異種アミノ酸配列に融合された請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドを含むキメラ分子。
【請求項９】
前記異種アミノ酸配列は、エピトープタグ配列である、請求項８に記載のキメラ分子。
【請求項１０】
前記異種アミノ酸配列は、免疫グロブリン定常ドメイン配列である、請求項８に記載のキメラ分子。
【請求項１１】
請求項１に記載の単離ＭｒｇＤポリペプチド［のｃ末端内のエピトープ］に特異的に結合する単離抗体。
【請求項１２】
前記抗体は、モノクローナル抗体、抗体断片およびヒト化抗体からなる群から選択される抗体である、請求項１１に記載の単離抗体。
【請求項１３】
前記抗体は、アゴニスト抗体および中和抗体からなる群から選択される抗体である、請求項１１に記載の単離抗体。
【請求項１４】
薬学的に許容可能なキャリアと混合した、請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドを含む組成物。
【請求項１５】
薬学的に許容可能なキャリアと混合した、請求項１１に記載の抗ＭｒｇＤ抗体を含む組成物。
【請求項１６】
容器、
薬学的に許容可能なキャリアと混合した請求項１の単離ＭｒｇＤポリペプチド、および
哺乳類において痛みを治療する組成物の使用説明書
を含む製品。
【請求項１７】
哺乳類から得られる組織試料において、請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドの発現を確認する方法であって、前記試料を抗ＭｒｇＤ抗体と接触させること、および前記試料への前記抗体の結合を決定することを含む方法。
【請求項１８】
前記組織試料は、後根神経節から得られる試料である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
哺乳類において痛みの感知を変化させるために使用することができる化合物を同定する方法であって、
ａ）試験化合物を請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドと接触させる工程と、
ｂ）前記ＭｒｇＤポリペプチドと複合体を形成する試験化合物を同定する工程と、
ｃ）痛みを患う動物モデルにおいて、ｂ）で同定された試験化合物の効果を測定する工程と、
ｄ）哺乳類において痛みの感知を変化させるために有用であるとして、動物モデルにおいて痛みの感知を変化させる化合物を同定する工程と
を含む方法。
【請求項２０】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、天然型ヒトＭｒｇＤポリペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物は、痛みの感知を増大させる化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物は、痛みの感知を減少させる化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
工程ａ）において前記試験化合物の少なくとも１つ、または前記ＭｒｇＤポリペプチドが、固体支持体に結合されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記固体支持体は、マイクロタイタープレートである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
工程ａ）において前記ＭｒｇＤポリペプチドは、細胞膜に存在するポリペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、イムノアドヘシンに存在するポリペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
工程ａ）において、前記ＭｒｇＤポリペプチドは、ＭｒｇＤポリペプチドを発現する細胞から調製される細胞膜の画分に存在するポリペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
前記試験化合物は、ペプチド、ペプチド擬似体、抗体、有機低分子および無機低分子からなる群から選択される化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
前記試験化合物は、ペプチドである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
工程ａ）において前記試験化合物は、固定化された抗体に特異的に結合することにより固体支持体に固着される化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、標識されたポリペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
前記試験化合物は、標識された化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３４】
前記試験化合物は、細胞抽出物中に含有された化合物である、請求項１９に記載の方法
。
【請求項３５】
前記細胞抽出物は、ＭｒｇＤポリペプチドを発現することが知られている細胞から調製された抽出物である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞抽出物は、後根神経節細胞から調製された抽出物である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
ＭｒｇＤポリペプチドを結合する化合物を同定する方法であって、
ａ）請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドまたはそれらの断片を、試験化合物およびＲＦアミドペプチドリガンドと、結合が起こり得る条件下で接触させる工程と、
ｂ）前記試験化合物の、前記ＭｒｇＤポリペプチドへの前記ＲＦアミドペプチドの結合を妨害する能力を決定する工程と
を含む方法。
【請求項３８】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、天然型ヒトＭｒｇＤポリペプチドである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＭｒｇＤポリペプチドを、前記試験化合物と接触させる前に、前記ＲＦアミドペプチドと接触させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
ＭｒｇＤアゴニストを同定する方法であって、
ａ）セカンドメッセンジャー応答を生じることが可能な宿主細胞において、請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドを発現させる工程と、
ｂ）前記宿主細胞を、１つまたはそれ以上の試験化合物と接触させる工程と、
ｃ）前記宿主細胞においてセカンドメッセンジャー応答を測定する工程と、
ｄ）哺乳類において感覚認識を変化させる際に有用であるアゴニストとして、前記測定したセカンドメッセンジャー応答を増大させる化合物を同定する工程と
を含む方法。
【請求項４２】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、配列番号３５のヒトＭｒｇＤポリペプチドである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記宿主細胞は、真核細胞である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記宿主細胞は、ハムスター胚腎（ＨＥＫ）細胞である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＨＥＫ細胞は、Ｇα１５を発現する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
セカンドメッセンジャー応答を測定することは、細胞内カルシウム濃度の変化を測定することを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４７】
前記細胞内カルシウム濃度の変化は、ＦＵＲＡ−２カルシウム指示色素を用いて測定される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
セカンドメッセンジャー応答を測定することは、前記細胞の膜を通る電流の流れを測定することを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４９】
前記感覚認識は、痛みの感知である、請求項４１に記載の方法。
【請求項５０】
ＭｒｇＤポリペプチドアンタゴニストを同定する方法であって、
ａ）セカンドメッセンジャー応答を生じることが可能な宿主細胞において、請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドを発現させる工程と、
ｂ）前記宿主細胞を、ＲＦアミドペプチドと接触させる工程と、
ｃ）前記宿主細胞を、１つまたはそれ以上の試験化合物と接触させる工程と、
ｄ）前記宿主細胞においてセカンドメッセンジャー応答を測定する工程と、
ｅ）ＭｒｇＤアンタゴニストとして、前記ＲＦアミドペプチドに対する前記測定したセカンドメッセンジャー応答を変化させる化合物を同定する工程と
を含む方法。
【請求項５１】
前記ＭｒｇＤポリペプチドは、配列番号３５のヒトＭｒｇＤポリペプチドである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
抗ＭｒｇＤアゴニスト抗体を同定する方法であって、
ａ）請求項１に記載のＭｒｇＤポリペプチドに特異的に結合する候補抗体を調製する工程と、
ｂ）セカンドメッセンジャー応答を生じることが可能であることが知られている宿主細胞において、ヒトＭｒｇＤ（配列番号３５）を発現させる工程と、
ｃ）前記宿主細胞を、候補抗体と接触させる工程と、
ｄ）前記宿主細胞においてセカンドメッセンジャー応答を測定する工程と、
ｅ）アゴニスト抗体として、前記測定したセカンドメッセンジャー応答を増大させる抗体を同定する工程と
を含む方法。
【請求項５３】
工程ａ）において、前記候補抗体は、配列番号３５のヒトＭｒｇＤに特異的に結合する抗体である、請求項５２に記載の方法。

【図１】

【図１Ａ−１】

【図１Ａ−２】

【図１Ａ−３】

【図２】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６Ａ−１】

【図６Ａ−２】

【図６Ａ−３】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１２Ｄ】

【図１２Ｅ】

【図１２Ｆ】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【公表番号】特表２００６−５０４６４１（Ｐ２００６−５０４６４１Ａ）
【公表日】平成１８年２月９日（２００６．２．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５１７５５１（Ｐ２００４−５１７５５１）
【出願日】平成１５年５月１３日（２００３．５．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０１５００４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／００３１３３
【国際公開日】平成１６年１月８日（２００４．１．８）
【出願人】（５００２２６３３９）カリフォルニア　インスティチュート　オブ　テクノロジー (4)
【氏名又は名称原語表記】ＣＡＬＩＦＯＲＮＩＡ　ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ　ＯＦ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
【Ｆターム（参考）】