本発明は、ネクチン−４の発現レベルを検出することによって、癌を診断するか、または肺癌患者の予後を評価もしくは判定する方法を特徴とする。本発明はまた、ネクチン−４遺伝子に対する二本鎖分子、それらをコードするベクター、それらを含む組成物、およびそれらを対象に投与する段階を含む方法を特徴とし、これらは癌を治療または予防するのに有用である。また、ネクチン−４ポリペプチド、またはネクチン−４遺伝子を発現する細胞を用いて、癌を治療および予防するための候補化合物を同定する方法も開示する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、ネクチン−４過剰発現に関連する癌を診断するための方法：
（ａ） 対象由来の生物学的試料中のネクチン−４のレベルを決定する段階；および
（ｂ） 段階（ａ）で決定したネクチン−４のレベルを正常対照の該レベルと比較する段階であって、正常対照と比較して該生物学的試料中のネクチン−４のレベルが高いことにより、該対象が癌に罹患していることが示される段階。
【請求項２】
前記癌が肺癌、膀胱癌、および子宮頸癌である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記生物学的試料が血液試料である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記血液試料が、全血、血清、および血漿からなる群より選択される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
ネクチン−４の前記レベルが、血清中のネクチン−４タンパク質を検出することによって決定される、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記ネクチン−４タンパク質がイムノアッセイによって検出される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記イムノアッセイがＥＬＩＳＡ法である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記イムノアッセイが、ネクチン−４の細胞外ドメインに対して産生された抗体を用いて行われる、請求項７記載の方法。
【請求項９】
以下の段階をさらに含む、請求項３記載の方法：
（ｃ） 同一対象由来の血液試料中のＣＥＡのレベルを決定する段階；
（ｄ） 段階（ｃ）で決定されたＣＥＡのレベルを正常対照の該レベルと比較する段階；ならびに
（ｅ） ネクチン−４の前記レベルおよび／またはＣＥＡの該レベルが対照レベルよりも高い場合に、該対象が癌に罹患していると判断する段階。
【請求項１０】
以下の段階をさらに含む、請求項３記載の方法：
（ｃ） 同一対象由来の血液試料中のＣＹＦＲＡのレベルを決定する段階；
（ｄ） 段階（ｃ）で決定されたＣＹＦＲＡのレベルを正常対照の該レベルと比較する段階；ならびに
（ｅ） ネクチン−４の前記レベルおよび／またはＣＹＦＲＡの該レベルが対照レベルよりも高い場合に、該対象が癌に罹患していると判断する段階。
【請求項１１】
前記癌が肺癌である、請求項９または１０記載の方法。
【請求項１２】
前記肺癌が腺癌または扁平上皮癌である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
以下の段階を含む、ネクチン−４過剰発現に関連する癌を有する患者の予後を評価または判定するための方法：
（ａ） 患者由来の生物学的試料中のネクチン−４遺伝子の発現レベルを決定する段階；
（ｂ） 段階（ａ）における発現レベルを対照レベルと比較する段階；および
（ｃ） 段階（ｂ）の比較に基づいて該患者の予後を判定する段階。
【請求項１４】
前記癌が、肺癌、膀胱癌、および子宮頸癌からなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記対照レベルが予後良好対照レベルであり、該対照レベルと比較した前記発現レベルの上昇が予後不良と判定される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記患者由来の生物学的試料が血液試料であり、ネクチン−４遺伝子の前記発現レベルが該血液試料中のネクチン−４のレベルとして決定される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記血液試料が、全血、血清、および血漿からなる群より選択される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
ネクチン−４の前記レベルが、血清中のネクチン−４タンパク質を検出することによって決定される、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記ネクチン−４タンパク質がイムノアッセイによって検出される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記イムノアッセイがＥＬＩＳＡ法である、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記イムノアッセイが、ネクチン−４の細胞外ドメインに対して産生された抗体を用いて行われる、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
以下からなる群より選択される試薬を含む、癌を診断するため、または癌を有する患者の予後を評価もしくは判定するためのキットであって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、キット：
（ａ） ネクチン−４ ｍＲＮＡを検出するための試薬；
（ｂ） ネクチン−４遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬；および
（ｃ） ネクチン−４タンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。
【請求項２３】
前記癌が、肺癌、膀胱癌、および子宮頸癌からなる群より選択される、請求項２２記載のキット。
【請求項２４】
予後良好対照試料をさらに含む、予後を評価または判定する場合の請求項２２記載のキット。
【請求項２５】
陽性対象試料をさらに含む、請求項２２記載のキット。
【請求項２６】
前記試薬が、ネクチン−４遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するためのイムノアッセイ試薬である、請求項２２記載のキット。
【請求項２７】
前記イムノアッセイ試薬が、ネクチン−４の細胞外ドメインに対して産生された抗体を含む、請求項２６記載のキット。
【請求項２８】
血液試料中のＣＥＡおよび／またはＣＹＦＲＡのレベルを決定するためのイムノアッセイ試薬をさらに含む、請求項２２記載のキット。
【請求項２９】
ＣＥＡおよび／またはＣＹＦＲＡの陽性対照試料をさらに含む、請求項２８記載のキット。
【請求項３０】
細胞に導入されるとネクチン−４の発現および細胞増殖を阻害する、単離された二本鎖分子であって、該分子がセンス鎖およびそれに相補的なアンチセンス鎖を含み、該鎖が互いにハイブリダイズして該二本鎖分子を形成し、該センス鎖がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ：１に相当するオリゴヌクレオチド配列を含み、該二本鎖分子が約１９〜約２５ヌクレオチドの長さを有する、単離された二本鎖分子。
【請求項３１】
前記センス鎖が、標的配列としてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１のヌクレオチド配列に相当するヌクレオチド配列を含む、請求項３０記載の二本鎖分子。
【請求項３２】
２または３ヌクレオチドからなる少なくとも１つの３’オーバーハングを有する、請求項３０記載の二本鎖分子。
【請求項３３】
介在一本鎖によって連結された前記センス鎖および前記アンチセンス鎖の両方を含む単一ポリヌクレオチドからなる、請求項３０記載の二本鎖分子。
【請求項３４】
一般式
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
を有し、［Ａ］は前記センス鎖であり、［Ｂ］は３〜２３ヌクレオチドからなる前記介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含む前記アンチセンス鎖である、請求項３３記載の二本鎖分子。
【請求項３５】
請求項３０〜３４のいずれか一項記載の二本鎖分子をコードするベクター。
【請求項３６】
請求項３０〜３４のいずれか一項記載の単離された二本鎖分子の少なくとも１つまたはそれらをコードするベクターを含む、癌を治療または予防するための組成物であって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、組成物。
【請求項３７】
前記癌が、肺癌、膀胱癌、および子宮頸癌からなる群より選択される、請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】
請求項３０〜３４のいずれか一項記載の単離された二本鎖分子の少なくとも１つまたはそれらをコードするベクターを投与する段階を含む、癌を治療または予防するための方法であって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、方法。
【請求項３９】
前記癌が、肺癌、膀胱癌、および子宮頸癌からなる群より選択される、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
以下の段階を含む、癌を治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、方法：
（ａ） 試験化合物を、ネクチン−４のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと接触させる段階；
（ｂ） 該ポリペプチドと該試験化合物との間の結合活性を検出する段階；および
（ｃ） 該ポリペプチドに結合する化合物を候補化合物として選択する段階。
【請求項４１】
以下の段階を含む、癌を治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、方法：
（ａ） 試験化合物を、ネクチン−４のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと接触させる段階；
（ｂ） 段階（ａ）のポリペプチドの生物学的活性を検出する段階；および
（ｃ） 試験化合物の非存在下で検出されたネクチン−４の該ポリヌクレオチドによってコードされる該ポリペプチドの生物学的活性と比較して、該ポリペプチドの生物学的活性を抑制する該試験化合物を候補化合物として選択する、段階。
【請求項４２】
以下の段階を含む、癌を治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、方法：
（ａ） 候補化合物を、ネクチン−４遺伝子を発現している細胞と接触させる段階；および
（ｂ） 試験化合物の非存在下で検出されたネクチン−４の発現レベルと比較して、該発現レベルを低下させる候補化合物を候補化合物として選択する段階。
【請求項４３】
以下の段階を含む、癌を治療または予防するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、該癌がネクチン−４過剰発現に関連する、方法：
（ａ） 候補化合物を、ネクチン−４遺伝子の転写調節領域および該転写調節領域の制御下で発現するレポーター遺伝子を含むベクターを導入した細胞と接触させる段階；
（ｂ） 該レポーター遺伝子の発現または活性を測定する段階；ならびに
（ｃ） 対照と比較して、該レポーター遺伝子の発現または活性のレベルを低下させる候補化合物を候補化合物として選択する段階。

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図３Ｅ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図４Ｄ】

【図４Ｅ】

【図４Ｆ】

【公表番号】特表２０１２−５１１３０５（Ｐ２０１２−５１１３０５Ａ）
【公表日】平成２４年５月２４日（２０１２．５．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２５３０７（Ｐ２０１１−５２５３０７）
【出願日】平成２１年８月２１日（２００９．８．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／００４０２６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６７４８７
【国際公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【出願人】（５０２２４０１１３）オンコセラピー・サイエンス株式会社 (142)
【Ｆターム（参考）】