本発明は、癌幹細胞を標的とする化合物および組成物を同定するための方法に関する。一面において、本発明は、それを必要とする対象において癌幹細胞の増殖および／または生存を阻害するために癌幹細胞を特異的に標的とする化合物および組成物を使用する処置方法に関する。本発明の他の局面は、それを必要とする対象において癌幹細胞の増殖および／または生存を阻害するための処置の選択における、癌幹細胞のバイオマーカーの使用に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物が癌幹細胞の増殖および／または生存を阻害する能力を試験するための方法であって、
（ａ）１または２以上の試験細胞を化合物のサンプルと接触させること、ここで前記１または２以上の試験細胞は上皮間葉移行を経験したものである、および
（ｂ）前記化合物による前記１または２以上の試験細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
上皮間葉移行が１または２以上の試験細胞においてＥ−カドヘリンの活性を阻害することからもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１または２以上の試験細胞においてＥ−カドヘリンの活性を阻害することが、前記１または２以上の試験細胞をＥ−カドヘリンに対する遮断抗体と接触させること、前記１または２以上の試験細胞においてディスアドヘリンの発現を誘導すること、または前記１または２以上の試験細胞において細胞極性遺伝子を干渉することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
１または２以上の試験細胞においてＥ−カドヘリンの活性を阻害することが、前記１または２以上の試験細胞を、Ｅ−カドヘリンのｍＲＮＡに相補的な低分子干渉核酸と接触させることを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
上皮間葉移行が１または２以上の試験細胞において転写因子の活性を誘導することからもたらされ、ここで転写因子が：Snail1、Snail2、グースコイド、FoxC2、TWIST、E2A、SIP-1/Zeb-2、dEF1/ZEb1、LEF1、Myc、HMGA2、TAZ、Klf8、HIF-1、HOXB7、SIM2sおよびFosから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上皮間葉移行がTWISTの活性を誘導することからもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
１または２以上の試験細胞においてTWISTの活性を誘導することが、前記１または２以上の試験細胞をTWISTをコードする発現ベクターと接触させることを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
上皮間葉移行が、１または２以上の試験細胞を、TGF-β／BMPスーパーファミリーのメンバー、Wnt-ファミリーのメンバー、FGFファミリーのメンバー、Notchリガンド、EGFファミリーのメンバー、IGFファミリーのメンバー、PDGFおよびHGFから選択される増殖因子と接触させることからもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
上皮間葉移行が、１または２以上の試験細胞においてシグナル経路の活性を調節することからもたらされ、ここでシグナル経路は、TGF-β、Wnt、BMP、Notch、HGF-Met、EGF、IGF、PDGF、FGF、P38-mapk、Ras、PI3キナーゼ-Akt、SrcおよびNF-kBから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
上皮間葉移行が、１または２以上の試験細胞を、低酸素、放射線照射および慢性化学療法処置から選択されるストレスに供することからもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
上皮間葉移行が、１または２以上の試験細胞を、ニコチン、nAChRアゴニスト、過酸化水素、C3aまたはMFG-E8による処置に供することからもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
１または２以上の試験細胞が非腫瘍原性細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
１または２以上の試験細胞が腫瘍原性細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）１または２以上の試験細胞および１または２以上の対照細胞を、化合物のサンプルと接触させること、ここで、前記１または２以上の試験細胞は上皮間葉移行を経験しており、前記１または２以上の対照細胞はＥＭＴを経験していない、ならびに
（ｂ）前記化合物による前記１または２以上の試験細胞および対照細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出すること；ならびに
（ｃ）前記化合物が前記試験細胞の増殖および／または生存に対して対照細胞よりも高い阻害効果を有する場合、前記化合物をＣＳＣ選択的な化学療法剤の候補として同定すること
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
試験細胞および対照細胞が遺伝子的に一致する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
試験細胞は、Ｅ−カドヘリンの発現を阻害する低分子干渉ＲＮＡを発現するかまたは含み、対照細胞はかかるＲＮＡを発現しない、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
１または２以上の対照細胞を化合物のサンプルと接触させること、ならびに、前記化合物による前記１または２以上の対照細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出することをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
１または２以上の対照細胞が上皮間葉移行を経験していない上皮細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
１または２以上の対照細胞が、対照発現コンストラクトまたは対照低分子干渉核酸と接触させられる、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
対照低分子干渉核酸が１または２以上の対照細胞の内在遺伝子を標的とせず、随意にここで低分子干渉核酸がＧＦＰのｍＲＮＡを標的とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
対照発現コンストラクトがＧＦＰをコードする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
対照発現コンストラクトがレポータータンパク質をコードする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
１または２以上の対照細胞が非腫瘍原性細胞を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
１または２以上の対照細胞が腫瘍原性細胞を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
１または２以上の試験細胞の各々は、少なくとも１つの他の試験細胞とは異なる用量の化合物と、および／もしくは異なる期間、接触させられ；ならびに／または、ここで、１または２以上の対照細胞の各々は、少なくとも１つの他の対照細胞とは異なる用量の化合物と、および／もしくは異なる期間、接触させられる、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
試験および／または対照の用量応答曲線を分析することをさらに含み、ここで試験用量応答曲線は、複数の用量での化合物による１または２以上の試験細胞の阻害のレベルを示し；ここで、対照用量応答曲線は複数の用量での化合物による１または２以上の対照細胞の阻害のレベルを示す、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
分析することが、化合物についての１または２以上の試験細胞および／または１または２以上の対照細胞に対するＥＣ５０値を決定することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
化合物についての１または２以上の対照細胞に対するＥＣ５０値が、該化合物についての１または２以上の試験細胞に対するＥＣ５０値よりも統計学的に有意により低い、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
化合物についての１または２以上の対照細胞に対するＥＣ５０値が、該化合物についての１または２以上の試験細胞に対するＥＣ５０値よりも統計学的に有意により高い、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
化合物が対照化合物であり、随意にこれは、ドキソルビシン、パクリタキセル、アクチノマイシンＤ、カンプトテシンおよびスタウロスポリンから選択される、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
１または２以上の対照細胞と１または２以上の試験細胞とが共培養中にある、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
１または２以上の試験細胞が、検出可能であって１または２以上の対照細胞の識別特徴と区別可能である識別特徴を有し、随意にここで前記識別特徴はＧＦＰタンパク質および／または癌幹細胞バイオマーカーの発現のレベルを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
１または２以上の試験細胞におけるＧＦＰタンパク質の発現のレベルが、１または２以上の対照細胞におけるＧＦＰタンパク質の発現のレベルと比較される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
共培養のサンプル中の各々の細胞の識別特徴を検出することにより１または２以上の試験細胞の１または２以上の対照細胞に対する比をモニタリングすることをさらに含み、随意にここで検出することは蛍光励起細胞ソーティングを含む、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
複数の試験サンプルを試験することをさらに含み、ここで前記試験サンプルの各々は１または２以上の試験細胞の少なくとも１つを含み；および／または、複数の対照サンプルを試験することをさらに含み、ここで前記対照サンプルの各々は１または２以上の対照細胞の少なくとも１つを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
各々の試験サンプルおよび／または各々の対照サンプルが別々の培養チャンバー中にあり、随意にここで各々の培養チャンバーはマルチウェルプレートのウェルである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
マルチウェルプレートが、６、１２、２４、９６、３８４または１５３６から選択される数のウェルを有する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
化合物が複数の化合物からなるライブラリーから得られ、随意にここでライブラリーは、天然生成物ライブラリー、多様性ライブラリー、キナーゼ阻害剤ライブラリー、ＨＤＡＣ阻害剤ライブラリー、公知の生物活性化合物のライブラリー、ペプチドライブラリー、抗体ライブラリー、またはＲＮＡｉライブラリーから選択される、請求項１〜２４および３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
１または２以上の試験細胞を接触させることが、化合物のサンプルをライブラリーから試験サンプルを含む培養チャンバーに移すことを含み；および／またはここで、１または２以上の対照細胞を接触させることが、化合物のサンプルをライブラリーから対照サンプルを含む培養チャンバーに移すことを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
１または２以上の対照細胞よりも１または２以上の試験細胞に対して細胞毒性が実質的により高いリード化合物を、該化合物による前記１または２以上の試験細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを該化合物による前記１または２以上の対照細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルと比較することにより同定することをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
１または２以上の癌細胞をリード化合物のサンプルと接触させること；および前記リード化合物による前記１または２以上の癌細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出することをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
１または２以上の癌細胞が、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、子宮頚癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、または精巣腫瘍から得られる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
１または２以上の癌細胞の少なくとも１つが癌幹細胞であり、これは癌幹細胞のバイオマーカーを有する、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
癌幹細胞のバイオマーカーがCD44^＋およびCD24⁻の細胞表面マーカープロフィールである、請求項３５または４３に記載の方法。
【請求項４５】
癌幹細胞が、MDA-MB-231、SUM159またはT47D乳癌細胞である、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４６】
１または２以上の癌細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出することが、前記１または２以上の癌細胞のうち少なくとも１種の癌幹細胞であるものの割合を決定することを含む、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
１または２以上の癌細胞の増殖よび／または生存の阻害のレベルを検出することが、前記１または２以上の癌細胞が懸濁培養中でコロニーを形成する能力を決定することを含む、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
１または２以上の癌細胞の増殖よび／または生存の阻害のレベルを検出することが、前記１または２以上の癌細胞がin vivoで腫瘍を形成する能力を決定することを含む、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
（ｉ）効力の改善、（ｉｉ）毒性の低減、これは随意に治療インデックスの改善であってもよい；（ｉｉｉ）副作用の低減；（ｉｖ）治療作用の開始および／もしくは効果の持続期間の改変；ならびに／または（ｖ）薬理動態パラメーター、これは随意に吸収、分配、代謝および／もしくは排出であってもよい、の改変を達成するためにリード化合物を改変することにより、精製リード化合物を製造することをさらに含む、請求項４０〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
リード化合物または精製リード化合物の定量的構造活性関係性分析を行うことにより、前記リード化合物または精製リード化合物のin vivoでの毒性学プロフィールを決定することをさらに含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
リード化合物または精製リード化合物を薬学的に受容可能なキャリアとともに製剤化することにより医薬組成物を製造することをさらに含む、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
癌細胞を有する対象に医薬組成物を投与し、前記対象に対する化合物の毒性、ならびに／または前記対象における癌細胞の増殖および／もしくは生存に対する化合物の影響を評価することにより、リード化合物または精製リード化合物をin vivoで試験することをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
対象が、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、非ヒト霊長類およびヒトから選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
試験細胞および／または対照細胞における１または２以上の癌幹細胞マーカーの発現を決定することをさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
１または２以上の癌幹細胞マーカーが、CD20、CD24、CD34、CD38、CD44、CD45、CD105、CD133、CD166、EpCAM、ESA、SCA1、PecamおよびStro1から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
１または２以上の癌幹細胞マーカーがCD24およびCD44である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
化合物による試験細胞および／または対照細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出することが、細胞計数アッセイ、複製標識アッセイ、細胞膜完全性アッセイ、細胞ＡＴＰに基づく生存率アッセイ、ミトコンドリアレダクターゼ活性アッセイ、カスパーゼ活性アッセイ、アネキシンＶ染色アッセイ、ＤＮＡ含有量アッセイ、ＤＮＡ分解アッセイ、および核断片化アッセイから選択されるアッセイを行うことを含む、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
１または２以上の細胞を特徴づけるための方法であって、
（ａ）１または２以上の細胞を、ドキソルビシン、パクリタキセル、アクチノマイシンＤ、カンプトテシンおよびスタウロスポリンから選択される化合物と接触させること、
（ｂ）前記化合物による１または２以上の細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルを検出すること、ならびに
（ｃ）（ｂ）の結果を対照レベルと比較すること、ここで、前記化合物による前記１または２以上の細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルが対照レベルより統計学的に有意により低い場合、前記１または２以上の細胞は癌幹細胞の特徴を有する、
を含む、前記方法。
【請求項５９】
１または２以上の細胞において癌幹細胞バイオマーカーまたは機能的アッセイを評価することをさらに含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
癌幹細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン発現、TWIST発現、およびCD44／CD24細胞表面マーカープロフィールから選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
機能的アッセイが、コロニー形成アッセイまたはin vivo腫瘍播種アッセイである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
対照レベルが、化合物による癌幹細胞ではない１または２以上の癌細胞の増殖および／または生存の阻害のレベルである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
癌を有するかまたは有することが疑われる対象を処置するための方法であって、パクリタキセルの有効量を、エトポシド、サリノマイシン、アバメクチンまたはニゲリシンを含む医薬組成物の有効量と組み合わせて前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項６４】
癌を有するかまたは有することが疑われる対象を処置するための方法であって、エトポシド、サリノマイシン、アバメクチン、ニゲリシンまたは前述のいずれかの誘導体を含む医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項６５】
癌を有する対象のための処置を選択するための方法であって、癌における癌幹細胞バイオマーカーを評価すること、および、前記癌幹細胞バイオマーカーが検出された場合は、サリノマイシン、アバメクチン、エトポシドまたはニゲリシンまたはそれらの誘導体を随意にパクリタキセルまたはその誘導体と組み合わせて含む医薬組成物の有効量を前記対象に投与することにより該対象を処置することを含む、前記方法。
【請求項６６】
癌幹細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン発現；TWIST発現、およびCD44／CD24細胞表面マーカープロフィールから選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
癌幹細胞バイオマーカーを評価することが、対象から癌のサンプルを得ることを含む、請求項６３〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
癌におけるＥ−カドヘリンおよび／またはTWISTの発現が、癌におけるＥ−カドヘリンおよび／またはTWISTのタンパク質および／またはＲＮＡの発現のレベルを測定すること、ならびに随意に前記レベルを参照標準と比較することにより決定される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
参照標準が、癌幹細胞におけるＥ−カドヘリンおよび／またはTWISTのタンパク質および／またはＲＮＡの発現のレベルである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
参照標準が、癌幹細胞ではない癌細胞におけるＥ−カドヘリンおよび／またはTWISTのタンパク質および／またはＲＮＡの発現のレベルである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
癌が、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、子宮頚癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、または精巣腫瘍である、請求項６３〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
癌が乳癌または肺癌である、請求項６３〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
対象が哺乳動物であり、これは随意にヒトである、請求項６３〜７２のいずれか一項に記載の方法
【請求項７４】
医薬組成物が、静脈内で、筋肉内で、皮下で、腹腔内で、経口で、またはエアロゾルとして投与される、請求項６３〜７３のいずれか一項に記載の方法
【請求項７５】
癌を有するかまたは有することが疑われる対象を処置するための方法であって、ＥＭＴを経験していない対照細胞の増殖および／または繁殖の阻害と比較して、ＥＭＴを経験した試験細胞の増殖および／または繁殖を選択的に阻害する化合物を含む医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項７６】
試験細胞と対照細胞とが遺伝子的に一致する、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
試験細胞が非腫瘍原性である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
癌を有するかまたは有することが疑われる対象を処置するための方法であって、非ＣＳＣ癌細胞に対するその効果と比較して癌幹細胞の増殖を選択的に阻害するかまたは癌幹細胞を殺傷する化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項７９】
癌を有するかまたは有することが疑われる対象を処置するための方法であって、非癌性細胞に対するその効果と比較して癌幹細胞の増殖を選択的に阻害するかまたは癌幹細胞を殺傷する化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項８０】
薬物の発見のための標的を同定する方法であって、
（ａ）試験細胞の増殖および／または繁殖を選択的に阻害する化合物を提供すること、ここで、前記試験細胞はＥＭＴを経験した細胞である；ならびに
（ｂ）前記化合物の生物学的標的を同定すること
を含む、前記方法。
【請求項８１】
生物学的標的が、試験細胞により発現されるタンパク質またはＲＮＡである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
化合物が、表１に列記される化合物またはその誘導体である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
生物学的標的と相互作用するかまたはこれに作用する第２の化合物を同定するためのスクリーニングを行うことをさらに含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
薬物の発見のための標的を同定する方法であって、以下の工程：
（ａ）試験細胞または試験細胞溶解物を、前記試験細胞の増殖および／または繁殖を選択的に阻害する化合物と接触させること、ここで接触は前記化合物が細胞の生体分子と物理的に相互作用することができる条件下において行われ、ここで前記試験細胞はＥＭＴを経験した細胞である；
（ｂ）前記化合物と物理的に相互作用する細胞の生体分子を単離すること；ならびに
（ｃ）前記生体分子を同定すること
を含む、前記方法。
【請求項８５】
生体分子と相互作用するかまたはこれに作用する第２の化合物を同定するためのスクリーニングを行うことをさらに含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
化合物が表１に列記される化合物またはその誘導体である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
化合物が支持体に結合してそれによりアフィニティーマトリックスを形成している、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
癌幹細胞を生成する方法であって、ＥＭＴを経験するように癌細胞を誘導することを含む、前記方法。
【請求項８９】
癌細胞が実験的に生成された癌細胞である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
癌細胞が天然に存在する癌に由来する、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
上皮間葉移行が、癌細胞においてＥ−カドヘリンの活性を阻害することからもたらされる、請求項８８に記載の方法。
【請求項９２】
癌細胞においてＥ−カドヘリンの活性を阻害することが、前記癌細胞をＥ−カドヘリンに対する遮断抗体と接触させること、前記癌細胞においてディスアドヘリンの発現を誘導すること、または前記癌細胞において細胞極性遺伝子を干渉することを含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
癌細胞においてＥ−カドヘリンの活性を阻害することが、前記癌細胞をＥ−カドヘリンのｍＲＮＡに相補的な低分子干渉核酸と接触させることを含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
癌細胞が、１または２以上の試験細胞において転写因子を発現させることにより、ＥＭＴを経験するよう誘導され、ここで前記転写因子は、Snail 1、Snail2、グースコイド、FoxC2、TWIST、E2A、SIP-1/Zeb-2、dEF1/ZEb1、LEF1、Myc、HMGA2、TAZ、Klf8、HIF-1、HOXB7、SIM2sおよびFosから選択される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９５】
癌細胞が、転写因子の活性を構成的に誘導することにより、ＥＭＴを経験するよう誘導される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
癌幹細胞が（ｉ）腫瘍を惹起する；（ｉｉ）ソフトアガー懸濁培養中でコロニーを形成する；および／または（ｉｉｉ）腫瘍球を形成する可能性が、ＥＭＴを経験するように誘導されていない癌細胞が有する可能性と比較して増大している、請求項８８に記載の方法。
【請求項９７】
実験的に生成された癌細胞が、癌遺伝子をコードする発現ベクターを含む、請求項８９に記載の方法。
【請求項９８】
癌遺伝子がV12H-RASである、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
試験剤が癌幹細胞の増殖、ソフトアガー懸濁培養中でのコロニー形成、腫瘍球形成および／または腫瘍惹起能力を阻害する能力を評価することをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項１００】
癌幹細胞の増殖、ソフトアガー懸濁培養中でのコロニー形成、腫瘍球形成および／または腫瘍惹起能力が阻害された場合に、試験剤が癌治療のための候補の薬剤として同定される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
癌幹細胞の特性を有する癌細胞を動物宿主中へ導入することをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項１０２】
試験剤が動物宿主における癌幹細胞の増殖または腫瘍惹起能力を阻害する能力を評価することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
癌幹細胞の増殖または腫瘍惹起能力が阻害された場合に、試験剤が癌治療のための候補の薬剤として同定される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
請求項８８〜９８のいずれか一項に記載の方法により生成された癌幹細胞。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載の細胞を含む動物宿主。
【請求項１０６】
請求項１０４に記載の癌幹細胞を有する容器を含むキット。
【請求項１０７】
ＥＭＴを経験するように誘導されていない、癌幹細胞を生成するためにＥＭＴを経験するように誘導された癌細胞と遺伝的に一致する癌細胞を有する第２の容器をさらに含む、請求項１０６に記載のキット。
【請求項１０８】
容器が凍結保存剤をさらに含む、請求項１０６または１０７に記載のキット。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ−１Ｄ】

【図１Ｅ】

【図１Ｆ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ−１】

【図２Ｃ−２】

【図３−１】

【図３−２】

【図３−３】

【図３−４】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図４Ｄ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ−５Ｃ−１】

【図５Ｃ−２】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７Ａ−７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ−８Ｃ】

【図８Ｄ−８Ｅ】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ−１１Ｃ】

【図１１Ｄ】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４】

【図１５】

【図１６−１】

【図１６−２】

【図１６−３】

【公表番号】特表２０１１−５２２５１５（Ｐ２０１１−５２２５１５Ａ）
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０４００９（Ｐ２０１１−５０４００９）
【出願日】平成２１年４月１０日（２００９．４．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００２２５４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２６３１０
【国際公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【出願人】（５００２１９５３７）マサチューセッツ　インスティテュート　オブ　テクノロジー (25)
【氏名又は名称原語表記】ＭＡＳＳＡＣＨＵＳＥＴＴＳ　ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ　ＯＦ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
【住所又は居所原語表記】７７　Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ　Ａｖｅｎｕｅ，　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，　Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｔｓ　０２１３９，Ｕ．Ｓ．Ａ
【出願人】（５００４８２８１０）ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ (7)
【Ｆターム（参考）】