短時間高温処理によって抗炎症性プロファイルを有する微生物調製物が生じる
本発明は一般に、細菌の分野に関する。特に、本発明は、「短時間高温」処理されたプロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物、並びにこれらの細菌の用途に関する。本発明の一実施形態は、「短時間高温」処理されたプロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物、並びに炎症性障害を治療又は予防する組成物を調製するための、「短時間高温」処理されたプロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、微生物の分野に関する。特に、本発明は、高温処理された微生物、例えば、プロバイオティクス及び乳製品スターター（ｄａｉｒｙ ｓｔａｒｔｅｒ）、並びにこれらの細菌の用途に関する。本発明の一実施形態は、高温処理された微生物、例えば、プロバイオティクス及び乳製品スターター、並びに炎症性障害を治療又は予防する組成物を調製するためのそれらの使用に関する。
【０００２】
プロバイオティクスは、「適当量で投与されたときに健康上の利益を宿主に与える生きた微生物」（ＦＡＯ／ＷＨＯガイドライン）として定義されることが多い。したがって、既刊文献の大部分は、生きたプロバイオティクスについて論じている。しかし、いくつかの研究は非複製細菌によって実現される健康上の利益を調査したが、例えば熱処理によるプロバイオティクスの不活性化は、それらの健康上の利益と称されるものの損失をもたらすことをこれらの研究の大部分は示した（Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ，Ｄ．ら、２００４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２６：５２０〜５２８；Ｃａｓｔａｇｌｉｕｏｌｏら、２００５、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３：１９７〜２０４；Ｇｉｌｌ，Ｈ．Ｓ．及びＫ．Ｊ．Ｒｕｔｈｅｒｆｕｒｄ、２００１、Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８６：２８５〜２８９；Ｋａｉｌａ，Ｍ．ら、１９９５、Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ ７２：５１〜５３）。しかしながら、いくつかの研究は、死んだプロバイオティクスがいくらかの健康への影響を保持し得ることを示した（Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ，Ｄ．ら、２００４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２６：５２０〜５２８；Ｇｉｌｌ，Ｈ．Ｓ．及びＫ．Ｊ．Ｒｕｔｈｅｒｆｕｒｄ、２００１、Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８６：２８５〜２８９）。
【０００３】
炎症性腸疾患を治療又は予防する戦略としてのプロバイオティクスの使用は、文献に報告されてきており、最近Ｄｏｔａｎらによって概説された（Ｄｏｔａｎ，Ｉ．及びＤ．Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ、２００５；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２１：４２６〜４３０）。例えば、８種の生きたプロバイオティクス細菌の高濃縮のカクテル（ＶＳＬ＃３）は、ヒトにおける再発性又は難治性の回腸嚢炎の予防（Ｇｉｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．ら、２００３、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２４：１２０２〜１２０９）及び治療において有効であることが示された（Ｇｉｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．ら、２０００、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １１９：３０５〜３０９；Ｍｉｍｕｒａ，Ｔ．ら、２００４、Ｇｕｔ ５３：１０８〜１１４）。興味深いことにＤＳＳが誘発する大腸炎のマウスモデルを使用して、Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚら（Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ，Ｄ．ら、２００４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２６：５２０〜５２８）は、生存しておりγ線照射したＶＳＬ＃３による処理は大腸炎から保護したが、加熱殺菌したＶＳＬ＃３による処理では大腸炎から保護しないことを報告した。同様に加熱殺菌したラクトバチルス・クリスパタス（Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）は、ＤＳＳが誘発する大腸炎から保護することがなかったが、一方その生存している対応物は、体重の減少及び消化管内のＭＰＯ活性を明らかに減少させた（Ｃａｓｔａｇｌｉｕｏｌｏら、２００５、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３：１９７〜２０４）。これらの研究は、プロバイオティクスが、消化管炎症との関連で、非複製の対応物より生きていてより有効であることを示唆する。
【０００４】
不活性化されたラクトバチルス・ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）（加熱殺菌及びγ線照射）は、Ｔ８４細胞によるＴＮＦαが誘発するＩＬ−８産生を減少させることができないことが見出され、一方その生きた対応物は有意に有益な作用を示した（Ｍａ，Ｄ．ら、２００４、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２：５３０８〜５３１４）。
【０００５】
明らかに、不活性化されたプロバイオティクスは、例えば食品産業において、取り扱い、及び／又は保存するのがずっと容易である。したがって、不活性化されたプロバイオティクスも消費者に有利な作用を有し得ることがわかることは有望であり、一方同時に、これらの作用が生存しているプロバイオティクスと比較して減少又は消滅さえすることが通常見出されることがわかるのは不本意である。
【０００６】
プロバイオティクス菌株を非複製にする文献に記載されている技術は通常、熱処理、γ照射、ＵＶ光又は化学試剤（ホルマリン、パラホルムアルデヒド）である。このように得られた非複製細菌の生物学的機能に対する異なる不活性化方法の作用を比較した研究はほとんどない。上記で引用したＲａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚの研究に加えて、１つのこのような研究は、熱処理及びγ照射した細菌が、上皮細胞による異なるレベルのサイトカイン分泌をインビトロで誘発したことを報告した（Ｗｏｎｇ，Ｃ．及びＺ．Ｕｓｔｕｎｏｌ．２００６、Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ．６９：２２８５〜２２８８）。
【０００７】
しかし、プロバイオティクス菌株を非複製にする文献において記載及び試験された技術は一般に、特に食品産業における産業環境において適用されないか、又は実行することが容易でない。
【０００８】
プロバイオティクスを含有する今日市場にある大部分の製品は、生産の間に熱処理される。したがって、プロバイオティクスがそれらの有益な特性を保持若しくは改善し、又は消費者のために新規で有益な特性を得る一方で、生産される製品と一緒に又は少なくとも同様の方法で、プロバイオティクスを熱処理できることは好都合であろう。
【０００９】
しかし、文献において細菌を不活性化するために使用される熱処理は一般に、工業規模で実行することが容易ではない、４０〜１００℃で変化する温度での長期間処理（２０分から１時間以上まで）である。さらに、このような熱処理は一般に当技術分野で、プロバイオティクス活性の少なくとも部分的な喪失をもたらした。
【００１０】
工業規模において、長期間熱処理は使用されないが、一般にＵＨＴ様熱処理などの短期間熱処理が使用される。この種の熱処理は細菌負荷を減少させ、処理時間を減少させ、それによって栄養素が損なわれることを減少させる。
【００１１】
したがって、製品が典型的には製造工程の間に熱処理されるのと同様に熱処理することができ、炎症性障害の予防及び／若しくは治療などの健康上の利益を生じさせ又は改善する、生存している微生物、例えば、プロバイオティクス細菌又は乳製品スターターから得られる微生物細胞調製物を利用可能とすることが望ましい。
【００１２】
工業的に熱処理して生存している細菌細胞を減少させることができ、この熱処理の結果として健康上の利益を生じさせ又は改善する微生物、例えば、プロバイオティクス細菌又は乳製品スターターを含む組成物を当技術分野に提供することは結果的に本発明の１つの目的であった。
【００１３】
独立請求項の主題によって本発明の目的を達成できたことを本発明者らが見出したのは驚きであった。従属請求項は、本発明をさらに発展させる。
【００１４】
短時間高温によって熱処理された微生物、例えば、プロバイオティクス菌株又は乳製品スターターは、当初の特性に関わらず抗炎症性免疫プロファイルを示すことを、本発明者らは初めて示す。特に新規な抗炎症性プロファイルが開発されるか、又は存在する抗炎症性プロファイルがこの熱処理によって増強される。
【００１５】
したがって、たとえ生きた対応物が抗炎症性菌株でなくても、典型的な工業上利用可能な熱処理に相当する特定の熱処理パラメーターを使用することによって、抗炎症性免疫プロファイルを有する非複製微生物を生じさせることは今や可能である。
【００１６】
この作用は、例えば、いくつかの微生物、例えば、ラクトバチルス及びビフィドバクテリウムに代表されるプロバイオティクス、並びにまた乳製品スターター培養物について観察されてきた。
【００１７】
非複製プロバイオティクス微生物は、生きた対応物よりも取り扱うことが非常に簡単であるという利点を有する。さらに、非複製プロバイオティクス微生物は、非常により保存安定性があり、より厳密な包装条件を必要としない。
【００１８】
非複製プロバイオティクス微生物によって、生きたプロバイオティクスを保護するさらなる手段なしでは、本来では生きたプロバイオティクスを加えることが可能とならない、多種多様の製品の開発が可能となる。これは、例えば、シリアルバー、果汁、ＵＨＴ飲料、保存安定性のある飲料などの供給において役割を果たす。
【００１９】
さらに例えば、重症の免疫不全の顧客において、生きたプロバイオティクスの使用は、菌血症が発生する潜在的な危険性によって、例外的な場合に限定されることがある。ここで本発明者らは、当初の免疫プロファイルに関わらず、抗炎症性プロファイルを有する生存していない細菌を生じさせる方法を提示する。
【００２０】
さらに、非複製プロバイオティクス微生物を提供することは、消費者である患者についての健康上の利益を保持する一方で、例えば、粉末状の栄養組成物の高温の再構成を可能にする。
【００２１】
本発明者の知る限り、抗炎症性プロファイルを有する非複製細菌を生じさせるための短時間の高温処理の使用は、まだ報告されてこなかった。
【００２２】
結果的に、本発明の一実施形態は、微生物を含む組成物であり、微生物は、少なくとも７１．５℃の高温処理に少なくとも１秒間供された。
【００２３】
微生物は、好ましくは食物グレードの微生物である。微生物は、ヒト又は動物の消費のために承認されている場合、食物グレードである。
【００２４】
一実施形態において、微生物は、プロバイオティクスでもよい。
【００２５】
プロバイオティクスは、本発明の目的のために、「宿主の健康又は満足な状態に対して有益な作用を有する微生物細胞調製物又は微生物細胞の成分」と定義される（Ｓａｌｍｉｎｅｎ Ｓ、Ｏｕｗｅｈａｎｄ Ａ．、Ｂｅｎｎｏ Ｙ．ら「Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ ｓｈｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｄｅｆｉｎｅｄ」Ｔｒｅｎｄｓ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９：１０ １０７〜１０）。
【００２６】
さらなる実施形態において、微生物は、乳製品スターター培養物でもよい。
【００２７】
好ましくは、微生物は、約７１．５〜１５０℃の高温処理に約１〜１２０秒の短期間供された。
【００２８】
より好ましくは、微生物は、約９０〜１４０℃、例えば、９０°〜１２０℃の高温処理に約１〜３０秒の短期間供された。
【００２９】
本発明の一実施形態において、この高温処理は、微生物を少なくとも部分的に非複製にする。
【００３０】
「非複製」微生物には、熱処理された、例えば、プロバイオティクス細菌及び乳製品スターター培養物といった微生物が含まれる。これには、不活性化された、死んだ、生存していない、並びに／又はフラグメント（ＤＮＡ、代謝物、細胞質化合物、及び／若しくは細胞壁材料など）として存在する微生物が含まれる。
【００３１】
「非複製」とは、古典的なプレーティング法によって生存細胞及び／又はコロニー形成単位を検出することができないことを意味する。このような古典的なプレーティング法は、微生物学の書籍：Ｊａｍｅｓ Ｍｏｎｒｏｅ Ｊａｙ、Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．Ｌｏｅｓｓｎｅｒ、Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｇｏｌｄｅｎ．２００５、Ｍｏｄｅｒｎ ｆｏｏｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第７版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．７９０頁に要約されている。典型的には、生存細胞が存在しないことは、下記のように示すことができる。異なる濃度の細菌調製物（「非複製」試料）の播種、並びに適切な条件（少なくとも２４時間の好気性及び／又は嫌気性雰囲気）下でのインキュベーション後に、寒天プレート上で目に見えるコロニーがない、又は液体増殖培地の混濁度の増加がない。
【００３２】
高温処理は通常の大気圧で行い得るが、また高圧下で行い得る。典型的な圧力範囲は、１〜５０バール、好ましくは１〜１０バール、さらにより好ましくは２〜５バールである。明らかに、熱が加えられるとき、プロバイオティクスは、液体又は固体である培地中で熱処理されることが好ましい。したがって、加えられる理想的な圧力は、微生物がその中に供給される組成物の性質及び使用される温度によって決まる。
【００３３】
高温処理は、約７１．５〜１５０℃、好ましくは約９０〜１２０℃、さらにより好ましくは約１２０〜１４０℃の温度範囲で行い得る。
【００３４】
高温処理は、約１〜１２０秒、好ましくは、約１〜３０秒、さらにより好ましくは約５〜１５秒の短期間で行い得る。
【００３５】
この所与の時間枠は、微生物、例えば、プロバイオティクス及び乳製品スターター培養物が所与の温度に供される時間を意味する。微生物がその中に供給される組成物の性質及び量によって、及び使用する加熱装置の構造によって、熱を加える時間は変化し得ることに留意されたい。
【００３６】
しかし典型的には、本発明の組成物及び／又は微生物を、高温短時間（ＨＴＳＴ）処理、瞬間殺菌又は超高温（ＵＨＴ）処理によって処理する。
【００３７】
ＵＨＴ処理は、組成物を短時間、概ね１〜１０秒間、乳中の細菌胞子を殺すのに必要とされる温度である１３５℃（２７５°Ｆ）を超える温度で加熱することによる組成物の少なくとも部分殺菌を伴う、超高温加工又は超熱処理（両方とも、ＵＨＴと省略）である。例えば、１３５℃を超える温度を使用してこのように乳を加工することは、必要な保持時間（２〜５秒まで）で細菌負荷の減少を可能にし、それによって連続流れ操作が可能となる。
【００３８】
２つの主要なタイプのＵＨＴシステム（直接及び間接システム）がある。直接システムにおいては、製品を水蒸気圧入又は水蒸気注入によって処理し、間接システムにおいては、製品を、プレート熱交換器、チューブ式熱交換器又はかき取り式表面熱交換器を使用して熱処理する。ＵＨＴシステムの組合せは、製品調製の工程において、任意のステップで又は複数のステップで適用し得る。
【００３９】
ＨＴＳＴ処理は、下記のように定義される（高温／短時間）：乳中の生存している微生物の数の９９．９９９９％を殺す、５−logの減少を達成するように設計される低温殺菌（パスチャライゼーション）法。これはほぼ全ての酵母、カビ及び一般の腐敗細菌を破壊するのに適当であると考えられ、一般の耐熱性の病原生物の適当な破壊をまた確実なものとする。ＨＴＳＴ工程において、乳を７１．７℃（１６１°Ｆ）に１５〜２０秒間加熱する。
【００４０】
瞬間殺菌（フラッシュパスチャライゼーション）は、果汁及び野菜汁、ビール及び乳製品などの腐敗しやすい飲料の熱パスチャライゼーションの方法である。腐敗微生物を殺し、製品をより安全なものとし、それらの保存寿命を延ばすために、瞬間殺菌は容器への充填の前に行う。液体は、７１．５℃（１６０°Ｆ）〜７４℃（１６５°Ｆ）の温度に約１５〜３０秒間供される間、制御された連続流れに流入する。
【００４１】
本発明の目的のために、「短時間高温処理」という用語には、例えば、高温短時間（ＨＴＳＴ）処理、ＵＨＴ処理、及び瞬間殺菌が含まれる。
【００４２】
短時間高温処理によって非複製にされると、このように得られた非複製プロバイオティクスは、上記のような改善された又は新規な利点を示す。
【００４３】
任意の量の上記のような非複製微生物は、有効である。しかし、プロバイオティクスの少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てが非複製である場合が、一般に好ましい。
【００４４】
本発明の一実施形態において、全ての微生物は、非複製である。
【００４５】
全ての微生物を、本発明の枠組みにおいて使用し得る。好ましくは、微生物は、食物グレードである。典型的な食物グレードの微生物は、プロバイオティクスである。
【００４６】
好ましくは、プロバイオティクスが使用され、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、又はこれらの混合物からなる群から選択し得る。
【００４７】
例えば、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、及び／又はこれらの混合物からなる群から選択し得る。
【００４８】
乳製品スターター培養物は、プロピオニバクテリウム（Ｐropionibacterium）属、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、ラクトコッカス・ジアセチラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・デルブレッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、及びこれらの混合物からなる群から選択し得る。
【００４９】
例えば、約７１．５〜１５０℃での約１〜１２０秒の短時間の高温処理が行われることが必須である。この処理は、生存している及び／又は生存していないプロバイオティクスに適用し得る。
【００５０】
例えば、約７１．５〜１５０℃での約１〜１２０秒の短時間の、複数の高温処理を行い得る。
【００５１】
本発明の一実施形態において、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属及びエシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）又はこれらの組合せからなる群から選択される。
【００５２】
ビフィドバクテリウム属の典型的な例は、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ又はビフィドバクテリウム・ラクティスである。ラクトバチルス属の典型的な例は、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・アシドフィルス又はラクトバチルス・ラムノサスである。エシェリキア属の典型的な例は、健康上の利益と称されるものを有するエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）菌株である。
【００５３】
本発明の一実施形態において、乳製品スターター培養物は、ストレプトコッカス・サーモフィルス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・デルブレッキー及びラクトコッカス・ラクティスである。
【００５４】
さらに、例えば、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５、ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０、ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ４００６、ラクトバチルス・カゼイＡＣＡ−ＤＣ６００２（ＮＣＣ１８２５）、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７、ラクトバチルス・アシドフィルスＮＣＣ３００９、エシェリキア・コリＮｉｓｓｌｅ１９１７、又はこれらの組合せからなる群から選択し得る。
【００５５】
さらに、例えば、乳製品スターターは、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０１９、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９、ラクトバチルス・デルブレッキー・ブルガリクス亜種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＮＣＣ１５及びラクトコッカス・ラクティスＮＣＣ２２８７からなる群から選択し得る。
【００５６】
全ての菌株を、ブダペスト条約の元で下記のように寄託した。
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１：ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５：ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８
ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０ ＣＮＣＭ Ｉ−３８６５
ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８：ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６
ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１：ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６
ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７：ＣＧＭＣＣ１．３７２４
ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０１９：ＣＮＣＭ Ｉ−１４２２
ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９：ＣＮＣＭ Ｉ−４１５３
ラクトコッカス・ラクティスＮＣＣ２２８７：ＣＮＣＭ Ｉ−４１５４
ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ４００６：ＣＮＣＭ Ｉ−１５１８
ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ１８２５：ＡＣＡ−ＤＣ６００２
ラクトバチルス・アシドフィルスＮＣＣ３００９：ＡＴＣＣ７００３９６
ラクトバチルス・ブルガリカスＮＣＣ１５：ＣＮＣＭ Ｉ−１１９８
エシェリキア・コリＮｉｓｓｌｅ１９１７：ＤＳＭ６６０１
【００５７】
本発明の組成物は、炎症性障害及び／又はそれらの合併症を少なくとも部分的に治療するのに十分な量の、短時間高温処理された微生物を含む。これを達成するのに適当な量は、「治療有効用量」と定義される。この目的のために有効な量は、疾患の重症度並びに消費者の体重及び身体全体の健康状態などの当業者には公知のいくつかの要因、並びに食品マトリックスの作用によって決まる。
【００５８】
予防的用途において、本発明による組成物を、炎症性障害の影響を受けやすい又はそうでなければ炎症性障害の危険性がある消費者に、炎症性障害が発生する危険性を少なくとも部分的に減少させるのに十分な量で投与する。このような量は、「予防有効用量」であると定義される。ここでまた、正確な量は、患者の健康状態及び体重などのいくつかの患者特有の要因、並びに食品マトリックスの作用によって決まる。
【００５９】
当業者であれば、治療有効用量及び／又は予防有効用量を適切に調節することができる。
【００６０】
一般に、本発明の組成物は、「短時間高温」処理された微生物を治療有効用量及び／又は予防有効用量で含有する。
【００６１】
典型的には、治療有効用量及び／又は予防有効用量は、１日用量当たり約０，００５ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲の非複製の「短時間高温」処理された微生物である。
【００６２】
数値量に関して、「短時間高温」処理された非複製微生物は、組成物中に１０４〜１０１２当量ｃｆｕ／ｇ乾燥組成物に相当する量で存在し得る。明らかに、非複製微生物は、コロニーを形成しない。結果的に、この用語は、１０４〜１０１２ｃｆｕ／ｇの複製細菌から得られる非複製微生物の量と理解される。これには、不活性化された、生存していない、又は死んだ、又はフラグメント（ＤＮＡ若しくは細胞壁若しくは細胞質化合物など）として存在する微生物が含まれる。すなわち、組成物が含有する微生物の量は、微生物が実際は不活性化された、又は死んだ、断片化された、又はこれらの状態の任意若しくは全ての混合物などの非複製であろうとなかろうとに関わりなく、全ての微生物が生きているかのように、微生物の量のコロニー形成能（ｃｆｕ）に関して表される。
【００６３】
好ましくは、微生物は、１０４〜１０９ｃｆｕ／ｇ乾燥組成物に相当する量で、よりさらに好ましくは１０５〜１０８ｃｆｕ／ｇ乾燥組成物に相当する量で存在する。
【００６４】
本発明の組成物は、任意の種類の組成物でもよい。組成物は、例えば、経口的、経腸的、非経口的（皮下又は筋肉内）、膣内、直腸内、局所的又は目に投与し得る。例えば、組成物は、医薬組成物、栄養補助食品、食品添加物、化粧用組成物、ペットフード、食品、又は飲料でもよい。
【００６５】
本発明による食料製品には、例えば、乳製品（発酵乳製品、例えば、ヨーグルト、バターミルクなど）；アイスクリーム；濃縮乳；乳；生クリーム；香味付け乳飲料；ホエイをベースとする飲料；トッピング；コーヒークリーマー；チョコレート；チーズをベースとする製品；スープ；ソース；ピューレ；ドレッシング；プディング；カスタード；ベビーフード；例えば、乳幼児、小児、ティーンエイジャー、成人、高齢者又は重症者のための、完全栄養のためのものなどの栄養調製乳；シリアル及びシリアルバーが含まれる。
【００６６】
飲料には、例えば、乳又はヨーグルトをベースとする飲料、発酵乳、タンパク質飲料、コーヒー、茶、エネルギー飲料、大豆飲料、果物及び／又は野菜飲料、果物及び／又は野菜ジュースが含まれる。
【００６７】
化粧用組成物には、例えば、ローション、シャンプー、点眼薬、クリームが含まれてもよい。
【００６８】
食品添加物又は医薬品は、例えば、錠剤；カプセル剤；トローチ；サシェ剤；ゲル剤；又は液剤、例えば、栄養溶液の形態でもよい。
【００６９】
組成物は、保護親水コロイド（ガム、タンパク質、加工デンプンなど）、結合剤、フィルム形成剤、カプセル化剤／材料、壁／殻材料、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、表面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチンなど）、吸着剤、担体、充填剤、共化合物、分散化剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動剤、矯味剤、増量剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、抗酸化剤及び抗菌剤をさらに含有し得る。組成物はまた、これらに限定されないが、水、任意の起源のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホネート、タルク、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、香味剤、保存剤、安定剤、乳化剤、緩衝液、滑沢剤、着色剤、湿潤剤、充填剤などを含めた、通常の医薬品添加物及びアジュバント、賦形剤及び希釈剤を含有し得る。
【００７０】
さらに、組成物は、経口又は経腸投与に適した有機又は無機担体材料、並びにビタミン、ミネラルの微量元素、及びＵＳＲＤＡなどの政府機関省庁の推奨に従った他の微量栄養素を含有し得る。
【００７１】
本発明の組成物は、組成物の使用目的によって他の薬剤をさらに含み得る。例えば、疼痛又は熱軽減剤を使用して、炎症性障害によってもたらされる不快感を最小化するのを助け得る。
【００７２】
安定化剤を加えて、組成物及びその構成要素を安定化し得る。
【００７３】
香味剤及び／又は着色剤を加えて、フレーバーを調節し、同定することが容易で、及び／又は好ましいと受け取られる色を組成物に与え得る。
【００７４】
プレバイオティクスを加えてもよい。プレバイオティクスは、プロバイオティクスを非複製にする前に、プロバイオティクスの増殖をサポートし得る。プレバイオティクスはまた、組成物中に存在し、及び／又は加えられてもよい、生存しているプロバイオティクス細菌と相乗的に作用し得る。
【００７５】
「プレバイオティクス」とは、腸内の健康に有益な微生物及び／又はプロバイオティクスの増殖を促進する、消化できない食品を意味する。プレバイオティクスは、プレバイオティクスを摂取した人の胃及び／若しくは腸上部で分解、又は消化管内で吸収されないが、プレバイオティクスは、胃腸の微生物叢及び／又はプロバイオティクスによって発酵する。プレバイオティクスは、例えば、Ｇｌｅｎｎ Ｒ．Ｇｉｂｓｏｎ及びＭａｒｃｅｌ Ｂ．Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ、Ｄｉｅｔａｒｙ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９５ １２５：１４０１〜１４１２によって定義されている。
【００７６】
本発明によって使用し得るプレバイオティクスは特に限定されず、腸内でプロバイオティクス又は健康に有益な微生物の増殖を促進する全ての食品が含まれる。好ましくは、プレバイオティクスは、フルクトース、ガラクトース、マンノースを任意選択で含有するオリゴ糖；食物繊維、特に、可溶性繊維、大豆繊維；イヌリン；又はこれらの混合物からなる群から選択し得る。好ましいプレバイオティクスは、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、イソマルトオリゴ糖（ＩＭＯ）、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、アラビノキシロオリゴ糖（ＡＸＯＳ）、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）、大豆オリゴ糖、グリコシルスクロース（ＧＳ）、ラクトスクロース（ＬＳ）、ラクツロース（ＬＡ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖、ガム及び／又はその水解物、ペクチン及び／又はその水解物である。
【００７７】
さらなるプロバイオティクスを、組成物に加えてもよい。全てのプロバイオティクス微生物を、さらに加えてもよい。好ましくは、プロバイオティクスは、この目的のために、ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属（Enterococcus）、ストレプトコッカス属、クリベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属、エシェリキア属、特にビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトバチルス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトコッカス・ラクティス、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、エシェリキア・コリ又はこれらの混合物からなる群から選択されるもの、好ましくはビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１（ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５（ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ４９０（ＣＮＣＭ Ｉ−２１７０）、ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８（ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０（ＣＮＣＭ Ｉ−３８６５）、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ ２４６１（ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６）、ラクトバチルス・ジョンソニイＮＣＣ５３３（ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＣＧＭＣＣ１．３７２４）、エンテロコッカス・フェシウムＳＦ６８（ＮＣＣ２７６８；ＮＣＩＭＢ１０４１５）、及びこれらの混合物からなる群から選択されるもの、からなる群から選択し得る。
【００７８】
本発明の組成物は、任意の哺乳動物を対象とし得るが、好ましくはヒト又はペットを対象とする。
【００７９】
組成物はまた、毎日の食事において必須であると理解される全てのビタミン及びミネラルを栄養的に有意な量で含有し得る。必要最小限は、特定のビタミン及びミネラルについて確立されてきた。組成物中に任意選択で存在するミネラル、ビタミン及び他の栄養素の例には、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、葉酸、イノシトール、ナイアシン、ビオチン、パントテン酸、コリン、カルシウム、リン、ヨウ素、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、マンガン、塩化物、カリウム、ナトリウム、セレン、クロム、モリブデン、タウリン、及びＬ−カルニチンが含まれる。ミネラルは通常塩の形態で加えられる。特定のミネラル及び他のビタミンの存在及び量は、意図される消費者によって変化する。
【００８０】
本発明の組成物は、少なくとも１種のタンパク質源、少なくとも１種の炭水化物源及び少なくとも１種の脂質源を含有し得る。
【００８１】
任意の適切な食物タンパク質、例えば、動物性タンパク質（乳タンパク質、肉タンパク質及び卵タンパク質など）；植物性タンパク質（大豆タンパク質、小麦タンパク質、米タンパク質、及びエンドウ豆タンパク質など）；遊離アミノ酸の混合物；又はこれらの組合せを使用し得る。
【００８２】
乳タンパク質（カゼイン及びホエイなど）、並びに大豆タンパク質が特に好ましい。ホエイタンパク質に関する限り、タンパク質源は、酸ホエイ又はスイートホエイ又はこれらの混合物をベースとしてもよく、所望の割合でα−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンが含まれてもよい。
【００８３】
しかし、好ましくは、特に組成物が乳幼児用補給調製乳である場合、タンパク質源は加工スイートホエイをベースとする。スイートホエイは、容易に利用できるチーズ作製の副産物であり、牛乳をベースとする乳幼児用調製乳の製造において使用されることが多い。
【００８４】
タンパク質は、そのままの、又は加水分解された、又はそのままのタンパク質と加水分解されたタンパク質の混合物でもよい。部分的に加水分解されたタンパク質（２〜２０％の加水分解の程度）を供給することが望ましいことがある。
【００８５】
加水分解されたタンパク質が必要な場合、加水分解工程は、所望のように、当技術分野において公知のように行い得る。例えば、ホエイタンパク質加水分解物は、１つ又は複数のステップにおいてホエイ画分を酵素的に加水分解することによって調製し得る。
【００８６】
本発明の組成物がタンパク質源を含有する場合、組成物中のタンパク質又はタンパク質同等物の量は典型的には、１．６〜７．５ｇ／１００ｋｃａｌ組成物の範囲である。
【００８７】
特に栄養調製乳について、必須アミノ酸含量の必要最小限が満たされるタンパク質源を供給すべきである。
【００８８】
組成物が炭水化物源を含有する場合、使用される炭水化物の種類は、特に限定されない。任意の適切な炭水化物、例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形物、マルトデキストリン、デンプン及びこれらの混合物を使用し得る。異なる炭水化物源の組合せを使用し得る。炭水化物は、組成物のエネルギーの３０％〜８０％を好ましくは供給し得る。例えば、組成物は、９〜１８ｇ／１００ｋｃａｌ組成物の量の炭水化物源を含み得る。
【００８９】
組成物が脂質源を含有する場合、使用される脂質の種類は、特に限定されない。組成物が脂質源を含む場合、脂質源は、組成物のエネルギーの５％〜７０％を供給し得る。長鎖ｎ−３及び／又はｎ−６多価不飽和脂肪酸（ＤＨＡ、ＡＲＡ及び／又はＥＰＡなど）を加え得る。適切な脂肪プロファイルは、菜種油、トウモロコシ油、高オレイン酸ヒマワリ油及び中鎖トリグリセリド油のブレンドを使用して得てもよい。組成物は、１．５〜７ｇ／１００ｋｃａｌ組成物の量の脂質源を含み得る。
【００９０】
食物繊維もまた加えてもよい。食物繊維は可溶性又は不溶性でよく、一般に２つのタイプのブレンドが好ましい。食物繊維の適切な源には、大豆、エンドウ豆、オートムギ、ペクチン、グアーガム、アラビアゴム、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シアリル−ラクトース及び動物乳由来のオリゴ糖が含まれる。好ましい繊維ブレンドは、イヌリンとより短鎖のフラクトオリゴ糖との混合物である。
【００９１】
本発明の組成物は、当技術分野において公知の任意の態様によって調製し得る。例えば、組成物が乳幼児用補給調製乳などの栄養調製乳である場合、組成物は、タンパク質源、炭水化物源、及び脂肪源を適切な割合で一緒にブレンドすることによって調製し得る。使用される場合、乳化剤をブレンド中に含み得る。ビタミン及びミネラルはこの時点で加えてもよいが、熱劣化を避けるために通常後で加えられる。任意の親油性ビタミン、乳化剤などを、ブレンドする前に、脂肪源に溶解してもよい。次いで、水、好ましくは逆浸透に供した水を混入し、液体混合物を形成し得る。
【００９２】
次いで、液体混合物を熱処理して、細菌負荷を減少させ得る。例えば、液体混合物は、約１２０℃〜約１４０℃の範囲の温度に約５秒〜約３０秒間急速に加熱し得る。加熱は、蒸気圧入によって、又は熱交換器、例えば、プレート熱交換器によって行い得る。
【００９３】
次いで、液体混合物は、例えば、フラッシュ冷却によって約６０℃〜約８５℃に冷却し得る。次いで、液体混合物は、例えば、２段階（第１の段階で約７ＭＰａ〜約４０ＭＰａ及び第２の段階で約２ＭＰａ〜約１４ＭＰａ）でホモジナイズし得る。次いで、ホモジナイズされた混合物をさらに冷却して、ビタミン及びミネラルなどの任意の熱に弱い成分に加え得る。
【００９４】
ホモジナイズされた混合物のｐＨ及び固形分は、この時点で好都合に標準化される。ホモジナイズされた混合物を、適切な乾燥装置（噴霧乾燥機又は凍結乾燥機など）に移し、粉末に変える。粉末は、約５重量％未満の含水率を有するべきである。
【００９５】
プロバイオティクスを任意の適切な方法によって培養し、栄養組成物に加えるために、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥によって調製し得る。次いで、プロバイオティクスを組成物に加え、その後組成物を熱処理して、細菌負荷を減少させ得る。これによって、プロバイオティクスを自動的に少なくとも部分的に非複製にする。
【００９６】
代わりに、当然ながら、プロバイオティクスはまた、個々に短時間高温処理され、次いで組成物に、例えば、液体又は粉末形態で非複製プロバイオティクスとして加え得る。
【００９７】
選択したプロバイオティクス（複数可）を任意の適切な方法によって培養し、組成物に加えるために、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥によって調製し得る。代わりに、細菌調製物は、食料製品に加えるために適切な形態で既に調製されて、専門の供給業者から購入することができる。
【００９８】
生菌及び「短時間高温」処理されたプロバイオティクス細菌調製物の免疫プロファイルを分析することによって、本発明者らは、ヒト血液細胞から特定のサイトカインの分泌を誘発するプロバイオティクスの能力を評価した。
【００９９】
生存しているプロバイオティクスの免疫プロファイルを、「短時間高温」処理された細胞の免疫プロファイルと比較した。「短時間高温」処理されたプロバイオティクスは、生きた対応物よりも異なるレベルのサイトカイン分泌を誘発することが見出された。
【０１００】
「短時間高温」処理されたプロバイオティクスは、生きた対応物と比較してより多くのＩＬ−１０分泌を維持又は誘発する一方で、炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０）をより誘発しなかった。このように得られたＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、生細胞と比較して、任意の「短時間高温」処理されたプロバイオティクスについてより低かった。対照的に、８５℃で２０分間熱処理された細菌は、生細胞より多くの炎症促進性サイトカイン及びより少ないＩＬ−１０を誘発し、より高いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比をもたらし、その種類の熱処理が本発明に必須であることを示した。
【０１０１】
ＰＢＭＣをプロバイオティクスとインビトロでインキュベートすることによって得たＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、インビボの抗炎症作用を予測する（Ｆｏｌｉｇｎｅ，Ｂ．ら、２００７、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３：２３６〜２４３）。
【０１０２】
本発明はまた、炎症性障害を治療又は予防するための本発明の組成物に関する。
【０１０３】
結果的に、一実施形態は、炎症性障害を治療又は予防する製品の調製のための、本発明の組成物の使用である。
【０１０４】
本発明の使用によって調製される組成物によって治療又は予防することができる抗炎症性障害は、特に限定されない。
【０１０５】
例えば、本発明の組成物によって治療又は予防することができる抗炎症性障害は、急性炎症（敗血症など）；火傷；及び慢性炎症（炎症性腸疾患、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、嚢炎など）；壊死性腸炎；皮膚炎（ＵＶ又は化学物質が誘発する皮膚炎、湿疹、反応性皮膚など）；過敏性腸症候群；眼炎；アレルギー、喘息；肥満が関連する炎症；年齢が関連する軽度の炎症、及びこれらの組合せからなる群から選択し得る。
【０１０６】
本発明はまた、微生物を少なくとも７１．５℃の高温処理に少なくとも１秒間の短時間、例えば、約７１．５〜１５０℃の高温処理に約１〜１２０秒の短期間供するステップを含む、抗炎症作用を有する微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物、特に生存しているプロバイオティクス及び／若しくは生存している乳製品スターター培養物を提供する方法、又は微生物、特に、生存しているプロバイオティクス及び／若しくは生存している乳製品スターター培養物の抗炎症作用を改善する方法に及ぶ。
【０１０７】
生存しているプロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物がこの方法において使用される場合、「短時間高温」処理は、プロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物の少なくとも一部を非複製にすることをもたらす。
【０１０８】
「短時間高温」処理は、プロバイオティクスの少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てを非複製にすることをもたらし得る。
【０１０９】
本発明の好ましい実施形態において、方法は、生存しているプロバイオティクスを組成物に加えるステップと、プロバイオティクス含有組成物を「短時間高温」処理に供するステップとを含む。
【０１１０】
微生物はまた、製品への補充の前に熱処理し得る。
【０１１１】
組成物は任意の組成物でよいが、例えば、プロバイオティクスが補充された食物又は栄養製品又は飲料である。
【０１１２】
これに従って、本発明はまた、微生物を少なくとも７１．５℃の高温処理に少なくとも１秒間、例えば、約７１．５〜１５０℃の高温処理に約１〜１２０秒の短期間供するステップを含む、抗炎症性特性を有する微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物、好ましくは生存しているプロバイオティクス及び／若しくは生存している乳製品スターター培養物を含む組成物を提供する方法、又はその存在する抗炎症性特性を改善する方法に及ぶ。
【０１１３】
「短時間高温」処理ステップは、工業施設において好都合に行うことができるが、例えば、スチーマーを使用して家庭で行うこともまたできる。このように、消費の直前に抗炎症効果を製品に与えることができる。
【０１１４】
本明細書に記載されている本発明の全ての特徴を、開示されているような本発明の範囲から逸脱することなく自由に組み合わせることができることを、当業者であれば理解するであろう。特に、本発明の使用及び方法について記載される特徴は、組成物及び本発明の方法に適用し得る（逆の場合も同じ）。
【０１１５】
本発明のさらなる利点及び特徴は、下記の実施例及び図から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１Ａ】「短時間高温」で処理されたプロバイオティクスの抗炎症性免疫プロファイルの増強を示す。
【図１Ｂ】「短時間高温」で処理されたプロバイオティクスの抗炎症性免疫プロファイルの増強を示す。
【図２】「短時間高温」で処理された後、抗炎症性となる、すなわちインビトロで明白な抗炎症性免疫プロファイルを示す、非抗炎症性プロバイオティクス菌株を示す。
【図３Ａ】「短時間高温」で処理された後、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、市販の製品中で使用されているプロバイオティクス菌株を示す。
【図３Ｂ】「短時間高温」で処理された後、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、市販の製品中で使用されているプロバイオティクス菌株を示す。
【図４Ａ】高温での熱処理によって、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、乳製品スターター菌株（すなわち、Ｌｃ１スターター菌株）を示す。
【図４Ｂ】高温での熱処理によって、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、乳製品スターター菌株（すなわち、Ｌｃ１スターター菌株）を示す。
【図５】ＨＴＳＴ処理で処理された後に、インビトロで抗炎症性免疫プロファイルを示す、非抗炎症性プロバイオティクス菌株を示す。
【図６】生菌及び熱処理された（１４０℃、１５秒間）形態の、プロバイオティクス及び乳製品スターター菌株によって生じた、ＰＢＭＣデータ上の主成分分析（ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０）。各点は、そのＮＣＣ番号又は名称によって同定される、生菌又は熱処理された１つの菌株を表す。
【図７】生菌株及び熱処理された（８５℃、２０分）菌株のＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比を示す。全体的に、８５℃での２０分間の熱処理は、本発明の「短時間高温」処理とは対照的に、ＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比の増加をもたらす（図１、２、３、４及び５）。
【実施例】
【０１１７】
方法
細菌調製物：
生きたプロバイオティクスによってもたらされる宿主の免疫系に対する健康上の利益は一般に、菌株特異的であると考えられる。高レベルのＩＬ−１０及び／又は低レベルの炎症促進性サイトカインをインビトロで誘発するプロバイオティクス（ＰＢＭＣアッセイ）は、インビボで強力な抗炎症性菌株であることが示されてきた（Ｆｏｌｉｇｎｅ，Ｂ．ら、２００７、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３：２３６〜２４３）。
【０１１８】
いくつかのプロバイオティクス菌株を使用して、熱処理されたプロバイオティクスの抗炎症性特性を調査した。これらは、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５、ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０、ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７、ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ４００６、ラクトバチルス・アシドフィルスＮＣＣ３００９、ラクトバチルス・カゼイＡＣＡ−ＤＣ６００２（ＮＣＣ１８２５）、及びエシェリキア・コリＮｉｓｓｌｅであった。Ｎｅｓｔｌｅ Ｌｃ１発酵製品を生産するために商業的に使用されるいくつかの菌株を含めたいくつかのスターター培養菌株（ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０１９、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９、ラクトバチルス・ブルガリカスＮＣＣ１５及びラクトコッカス・ラクティスＮＣＣ２２８７）もまた試験した。
【０１１９】
細菌細胞は、５〜１５Ｌのバイオリアクター中で各菌株について最適化した条件で培養した。全ての典型的な細菌増殖培地が使用可能である。このような培地は、当業者には公知である。ｐＨを５．５に調節したとき、３０％塩基溶液（ＮａＯＨ又はＣａ（ＯＨ）２）を連続的に加えた。適当であるとき、ヘッドスペースをＣＯ２でガス処理することによって嫌気性条件を維持した。Ｅ.コリを、標準的な好気条件下で培養した。
【０１２０】
細菌細胞を、遠心分離（５，０００×ｇ、４℃）によって集め、概ね１０９〜１０１０ｃｆｕ／ｍｌの最終濃度に達するように、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に適当な容量で再懸濁させた。調製物の一部を、−８０℃で１５％グリセロールと共に冷凍した。別の部分の細胞を、以下によって熱処理した。
超高温：１４０℃、１５秒間；間接蒸気圧入による。
高温短時間（ＨＴＳＴ）：７４℃、９０℃及び１２０℃、１５秒間、間接蒸気圧入による。
ウォーターバス中で長時間低温（８５℃、２０分）。
【０１２１】
熱処理した上で、試料を使用するまで−８０℃で冷凍して保持した。
【０１２２】
細菌調製物のインビトロ免疫プロファイリング：
生細菌調製物及び熱処理された細菌調製物の免疫プロファイル（すなわち、インビトロでヒト血液細胞からの特定のサイトカインの分泌を誘発する能力）を評価した。ヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、血液フィルターから単離した。細胞密度勾配による分離の後、単核細胞を集め、ハンクス平衡塩類溶液で２度洗浄した。次いで、細胞を、１０％ウシ胎仔血清（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ、Ｐａｒｉｓ、ｆｒａｎｃｅ）、１％Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）及び０．１％ゲンタマイシン（Ｓｉｇｍａ）を補充したＩｓｃｏｖｅの改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ、Ｓｉｇｍａ）に再懸濁させた。次いで、ＰＢＭＣ（７×１０５細胞／ウェル）を、生細菌及び熱処理された細菌（７×１０６当量ｃｆｕ／ウェル）と共に４８ウェルプレート中で３６時間インキュベートした。生細菌及び熱処理された細菌の効果を、２つの別々の実験に分割した８人の個々のドナーからのＰＢＭＣ上で試験した。３６時間のインキュベーション後、培養プレートを冷凍し、サイトカイン測定まで−２０℃で保持した。サイトカインプロファイリングは、生細菌及びそれらの熱処理された対応物について平行（すなわち、ＰＢＭＣの同じバッチ上の同じ実験で）で行った。
【０１２３】
３６時間のインキュベーション後の細胞培養上清中のサイトカイン（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１０）のレベルは、製造者の指示に従ってＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ＤｕｏＳｅｔ Ｈｕｍａｎ ＩＬ−１０、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｈｕｍａｎ ＩＬ１２ｐ４０、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｈｕｍａｎ ＴＮＦα、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ−γ）によって決定した。ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０及びＴＮＦ−αは、炎症促進性サイトカインであり、一方、ＩＬ−１０は、強力な抗炎症メディエーターである。結果は、４人の個々のドナーの平均（ｐｇ／ｍｌ）＋／−ＳＥＭとして表すが、各々４人のドナーで行う２つの個々の実験の代表である。比ＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０は、各菌株についてインビボの抗炎症効果の予測値として計算する（Ｆｏｌｉｇｎｅ，Ｂ．ら、２００７、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３：２３６〜２４３）。
【０１２４】
各菌株についてのＥＬＩＳＡ（上記を参照されたい）によって決定したサイトカインの数値（ｐｇ／ｍｌ）を、ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ｖ５．１０ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｓ、Ｓｉｎｔ−Ｍａｒｔｅｎｓ−Ｌａｔｅｍ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）に移した。主成分分析（ＰＣＡ、ディメンショニング技術）を、このセットのデータで行った。文字についての平均の引き算、及び文字についての分散値による割り算を、この分析に含めた。
【０１２５】
結果
超高温（ＵＨＴ）／高温短時間（ＨＴＳＴ）様処理によって生じた抗炎症性プロファイル
調査中のプロバイオティクス菌株を、一連の熱処理（超高温（ＵＨＴ）、高温短時間（ＨＴＳＴ）及び８５℃、２０分間）に供し、それらの免疫プロファイルを、インビトロでの生細胞の免疫プロファイルと比較した。生きた微生物（プロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物）は、ヒトＰＢＭＣと共にインキュベートしたとき、異なるレベルのサイトカイン産生を誘発した（図１、２、３、４及び５）。これらの微生物の熱処理は、温度依存的態様でＰＢＭＣによって産生されたサイトカインのレベルを変更させた。「短時間高温」処理（１２０℃又は１４０℃、１５秒間）は、抗炎症性免疫プロファイルを有する非複製細菌を生じさせた（図１、２、３及び４）。実際に、ＵＨＴ様処理した菌株（１４０℃、１５秒間）は、さらなるＩＬ−１０産生を維持又は誘発する一方で、より少ない炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０）を誘発した（生きた対応物と比較して）。このように得られたＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、生細胞と比較して、任意のＵＨＴ様処理した菌株についてより低かった（図１、２、３及び４）。この観察はまた、ＨＴＳＴ様処理によって処理された、すなわち１２０℃に１５秒間（図１、２、３及び４）、又は７４℃及び９０℃に１５秒間（図５）供された細菌について有効であった。熱処理（ＵＨＴ様又はＨＴＳＴ様処理）は、プロバイオティクス菌株（図１、２、３及び５）及び乳製品スターター培養物（図４）のインビトロの免疫プロファイルに対して同様の作用を有した。生きたプロバイオティクス及び熱処理された（１４０℃、１５秒間）プロバイオティクス並びに乳製品スターター菌株によって産生されたＰＢＭＣデータ上の主成分分析によって、生菌株はｘ軸に沿って至る所に分布することが明らかになったが、これは菌株が非常に異なる免疫プロファイルをインビトロで示すことを例示する（低（左側）から高（右側）までの炎症促進性サイトカインの誘発物質）。熱処理された菌株はグラフの左側上に集まり、炎症促進性サイトカインは熱処理された菌株によってより少なく誘発されることが示される（図６）。対照的に、２０分間８５℃で熱処理された細菌は、生細胞よりもより多く炎症促進性サイトカインを、及びより少なくＩＬ−１０を誘発し、その結果、より高いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比がもたらされた（図７）。
【０１２６】
抗炎症性プロファイルは、ＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様処理によって増強又は生じる。
【０１２７】
ＵＨＴ及びＨＴＳＴ処理された菌株は、それらの各々の当初の免疫プロファイル（生細胞）に関わらず、抗炎症性プロファイルを示す。インビボで抗炎症性であることが公知であり、インビトロで抗炎症性プロファイルを示すプロバイオティクス菌株（Ｂ.ロンガムＮＣＣ３００１、Ｂ.ロンガムＮＣＣ２７０５、Ｂ.ブレーベＮＣＣ２９５０、Ｂ.ラクティスＮＣＣ２８１８）は、「短時間高温」処理後に、増強された抗炎症性プロファイルをインビトロで示すことが示された。図１に示すように、ＵＨＴ様処理されたビフィドバクテリウム属菌株のＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、生きた対応物のそれより低く、したがって、ＵＨＴ様処理された試料の改善された抗炎症性プロファイルが示された。より顕著には、ＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様処理によって抗炎症性プロファイルが生じたことは、非抗炎症性の生菌株についても確認された。生菌のＬ．ラムノサスＮＣＣ４００７及びＬ．パラカゼイＮＣＣ２４６１の両方は、高いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比をインビトロで示す（図２及び５）。２つの生菌株は、マウスにおいてＴＮＢＳが誘発する大腸炎に対して保護性でないことが示された。Ｌ．ラムノサスＮＣＣ４００７及びＬ．パラカゼイＮＣＣ２４６１によって誘発されたＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、「短時間高温」処理（ＵＨＴ又はＨＴＳＴ）後に劇的に減少し、ビフィドバクテリウム属菌株で得られたものと同じぐらい低いレベルに達した。これらの低いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、ＩＬ−１０分泌についての変化なし（Ｌ．ラムノサスＮＣＣ４００７）又は劇的な誘発（Ｌ．パラカゼイＮＣＣ２４６１）と合わせて、低レベルのＩＬ−１２ｐ４０産生によるものである（図２）。
【０１２８】
結果として、
生きた微生物の抗炎症性プロファイルは、ＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様熱処理によって増強させることができ（例えば、Ｂ．ロンガムＮＣＣ２７０５、Ｂ．ロンガムＮＣＣ３００１、Ｂ．ブレーベＮＣＣ２９５０、Ｂ．ラクティスＮＣＣ２８１８）、
抗炎症性プロファイルは、非抗炎症性の生きた微生物（例えば、Ｌ．ラムノサスＮＣＣ４００７、Ｌ．パラカゼイＮＣＣ２４６１、乳製品スターターであるＳ．サーモフィルスＮＣＣ２０１９）からＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様熱処理によって生じさせることができ、
抗炎症性プロファイルは、プロバイオティクスのＥ．コリ菌株を含めた市販の製品から単離した菌株についても示された（図３Ａ及びＢ）。
【０１２９】
ＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理の影響は、全ての試験したプロバイオティクス及び乳製品スターター、例えば、ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属及びストレプトコッカス属について同様であった。
【０１３０】
ＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理を、異なるインビトロの免疫プロファイルを示すいくつかのラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属及びストレプトコッカス属に適用した。全ての菌株は、ＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理後に、生きた対応物より低い炎症促進性サイトカインを誘発した（図１、２、３、４、５及び６）が、これはこのように得られた非複製細菌の免疫特性に対するＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理の効果が、全てのプロバイオティクス、特にラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属及び特定のＥ．コリ菌株、及び全ての乳製品スターター培養物、特にストレプトコッカス属、ラクトコッカス属及びラクトバチルス属に一般化することができることを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、微生物の分野に関する。特に、本発明は、高温処理された微生物、例えば、プロバイオティクス及び乳製品スターター（ｄａｉｒｙ ｓｔａｒｔｅｒ）、並びにこれらの細菌の用途に関する。本発明の一実施形態は、高温処理された微生物、例えば、プロバイオティクス及び乳製品スターター、並びに炎症性障害を治療又は予防する組成物を調製するためのそれらの使用に関する。
【０００２】
プロバイオティクスは、「適当量で投与されたときに健康上の利益を宿主に与える生きた微生物」（ＦＡＯ／ＷＨＯガイドライン）として定義されることが多い。したがって、既刊文献の大部分は、生きたプロバイオティクスについて論じている。しかし、いくつかの研究は非複製細菌によって実現される健康上の利益を調査したが、例えば熱処理によるプロバイオティクスの不活性化は、それらの健康上の利益と称されるものの損失をもたらすことをこれらの研究の大部分は示した（Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ，Ｄ．ら、２００４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２６：５２０〜５２８；Ｃａｓｔａｇｌｉｕｏｌｏら、２００５、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３：１９７〜２０４；Ｇｉｌｌ，Ｈ．Ｓ．及びＫ．Ｊ．Ｒｕｔｈｅｒｆｕｒｄ、２００１、Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８６：２８５〜２８９；Ｋａｉｌａ，Ｍ．ら、１９９５、Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ ７２：５１〜５３）。しかしながら、いくつかの研究は、死んだプロバイオティクスがいくらかの健康への影響を保持し得ることを示した（Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ，Ｄ．ら、２００４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２６：５２０〜５２８；Ｇｉｌｌ，Ｈ．Ｓ．及びＫ．Ｊ．Ｒｕｔｈｅｒｆｕｒｄ、２００１、Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８６：２８５〜２８９）。
【０００３】
炎症性腸疾患を治療又は予防する戦略としてのプロバイオティクスの使用は、文献に報告されてきており、最近Ｄｏｔａｎらによって概説された（Ｄｏｔａｎ，Ｉ．及びＤ．Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ、２００５；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２１：４２６〜４３０）。例えば、８種の生きたプロバイオティクス細菌の高濃縮のカクテル（ＶＳＬ＃３）は、ヒトにおける再発性又は難治性の回腸嚢炎の予防（Ｇｉｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．ら、２００３、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２４：１２０２〜１２０９）及び治療において有効であることが示された（Ｇｉｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．ら、２０００、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １１９：３０５〜３０９；Ｍｉｍｕｒａ，Ｔ．ら、２００４、Ｇｕｔ ５３：１０８〜１１４）。興味深いことにＤＳＳが誘発する大腸炎のマウスモデルを使用して、Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚら（Ｒａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚ，Ｄ．ら、２００４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２６：５２０〜５２８）は、生存しておりγ線照射したＶＳＬ＃３による処理は大腸炎から保護したが、加熱殺菌したＶＳＬ＃３による処理では大腸炎から保護しないことを報告した。同様に加熱殺菌したラクトバチルス・クリスパタス（Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）は、ＤＳＳが誘発する大腸炎から保護することがなかったが、一方その生存している対応物は、体重の減少及び消化管内のＭＰＯ活性を明らかに減少させた（Ｃａｓｔａｇｌｉｕｏｌｏら、２００５、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３：１９７〜２０４）。これらの研究は、プロバイオティクスが、消化管炎症との関連で、非複製の対応物より生きていてより有効であることを示唆する。
【０００４】
不活性化されたラクトバチルス・ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）（加熱殺菌及びγ線照射）は、Ｔ８４細胞によるＴＮＦαが誘発するＩＬ−８産生を減少させることができないことが見出され、一方その生きた対応物は有意に有益な作用を示した（Ｍａ，Ｄ．ら、２００４、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２：５３０８〜５３１４）。
【０００５】
明らかに、不活性化されたプロバイオティクスは、例えば食品産業において、取り扱い、及び／又は保存するのがずっと容易である。したがって、不活性化されたプロバイオティクスも消費者に有利な作用を有し得ることがわかることは有望であり、一方同時に、これらの作用が生存しているプロバイオティクスと比較して減少又は消滅さえすることが通常見出されることがわかるのは不本意である。
【０００６】
プロバイオティクス菌株を非複製にする文献に記載されている技術は通常、熱処理、γ照射、ＵＶ光又は化学試剤（ホルマリン、パラホルムアルデヒド）である。このように得られた非複製細菌の生物学的機能に対する異なる不活性化方法の作用を比較した研究はほとんどない。上記で引用したＲａｃｈｍｉｌｅｗｉｔｚの研究に加えて、１つのこのような研究は、熱処理及びγ照射した細菌が、上皮細胞による異なるレベルのサイトカイン分泌をインビトロで誘発したことを報告した（Ｗｏｎｇ，Ｃ．及びＺ．Ｕｓｔｕｎｏｌ．２００６、Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ．６９：２２８５〜２２８８）。
【０００７】
しかし、プロバイオティクス菌株を非複製にする文献において記載及び試験された技術は一般に、特に食品産業における産業環境において適用されないか、又は実行することが容易でない。
【０００８】
プロバイオティクスを含有する今日市場にある大部分の製品は、生産の間に熱処理される。したがって、プロバイオティクスがそれらの有益な特性を保持若しくは改善し、又は消費者のために新規で有益な特性を得る一方で、生産される製品と一緒に又は少なくとも同様の方法で、プロバイオティクスを熱処理できることは好都合であろう。
【０００９】
しかし、文献において細菌を不活性化するために使用される熱処理は一般に、工業規模で実行することが容易ではない、４０〜１００℃で変化する温度での長期間処理（２０分から１時間以上まで）である。さらに、このような熱処理は一般に当技術分野で、プロバイオティクス活性の少なくとも部分的な喪失をもたらした。
【００１０】
工業規模において、長期間熱処理は使用されないが、一般にＵＨＴ様熱処理などの短期間熱処理が使用される。この種の熱処理は細菌負荷を減少させ、処理時間を減少させ、それによって栄養素が損なわれることを減少させる。
【００１１】
したがって、製品が典型的には製造工程の間に熱処理されるのと同様に熱処理することができ、炎症性障害の予防及び／若しくは治療などの健康上の利益を生じさせ又は改善する、生存している微生物、例えば、プロバイオティクス細菌又は乳製品スターターから得られる微生物細胞調製物を利用可能とすることが望ましい。
【００１２】
工業的に熱処理して生存している細菌細胞を減少させることができ、この熱処理の結果として健康上の利益を生じさせ又は改善する微生物、例えば、プロバイオティクス細菌又は乳製品スターターを含む組成物を当技術分野に提供することは結果的に本発明の１つの目的であった。
【００１３】
独立請求項の主題によって本発明の目的を達成できたことを本発明者らが見出したのは驚きであった。従属請求項は、本発明をさらに発展させる。
【００１４】
短時間高温によって熱処理された微生物、例えば、プロバイオティクス菌株又は乳製品スターターは、当初の特性に関わらず抗炎症性免疫プロファイルを示すことを、本発明者らは初めて示す。特に新規な抗炎症性プロファイルが開発されるか、又は存在する抗炎症性プロファイルがこの熱処理によって増強される。
【００１５】
したがって、たとえ生きた対応物が抗炎症性菌株でなくても、典型的な工業上利用可能な熱処理に相当する特定の熱処理パラメーターを使用することによって、抗炎症性免疫プロファイルを有する非複製微生物を生じさせることは今や可能である。
【００１６】
この作用は、例えば、いくつかの微生物、例えば、ラクトバチルス及びビフィドバクテリウムに代表されるプロバイオティクス、並びにまた乳製品スターター培養物について観察されてきた。
【００１７】
非複製プロバイオティクス微生物は、生きた対応物よりも取り扱うことが非常に簡単であるという利点を有する。さらに、非複製プロバイオティクス微生物は、非常により保存安定性があり、より厳密な包装条件を必要としない。
【００１８】
非複製プロバイオティクス微生物によって、生きたプロバイオティクスを保護するさらなる手段なしでは、本来では生きたプロバイオティクスを加えることが可能とならない、多種多様の製品の開発が可能となる。これは、例えば、シリアルバー、果汁、ＵＨＴ飲料、保存安定性のある飲料などの供給において役割を果たす。
【００１９】
さらに例えば、重症の免疫不全の顧客において、生きたプロバイオティクスの使用は、菌血症が発生する潜在的な危険性によって、例外的な場合に限定されることがある。ここで本発明者らは、当初の免疫プロファイルに関わらず、抗炎症性プロファイルを有する生存していない細菌を生じさせる方法を提示する。
【００２０】
さらに、非複製プロバイオティクス微生物を提供することは、消費者である患者についての健康上の利益を保持する一方で、例えば、粉末状の栄養組成物の高温の再構成を可能にする。
【００２１】
本発明者の知る限り、抗炎症性プロファイルを有する非複製細菌を生じさせるための短時間の高温処理の使用は、まだ報告されてこなかった。
【００２２】
結果的に、本発明の一実施形態は、微生物を含む組成物であり、微生物は、少なくとも７１．５℃の高温処理に少なくとも１秒間供された。
【００２３】
微生物は、好ましくは食物グレードの微生物である。微生物は、ヒト又は動物の消費のために承認されている場合、食物グレードである。
【００２４】
一実施形態において、微生物は、プロバイオティクスでもよい。
【００２５】
プロバイオティクスは、本発明の目的のために、「宿主の健康又は満足な状態に対して有益な作用を有する微生物細胞調製物又は微生物細胞の成分」と定義される（Ｓａｌｍｉｎｅｎ Ｓ、Ｏｕｗｅｈａｎｄ Ａ．、Ｂｅｎｎｏ Ｙ．ら「Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ ｓｈｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｄｅｆｉｎｅｄ」Ｔｒｅｎｄｓ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９：１０ １０７〜１０）。
【００２６】
さらなる実施形態において、微生物は、乳製品スターター培養物でもよい。
【００２７】
好ましくは、微生物は、約７１．５〜１５０℃の高温処理に約１〜１２０秒の短期間供された。
【００２８】
より好ましくは、微生物は、約９０〜１４０℃、例えば、９０°〜１２０℃の高温処理に約１〜３０秒の短期間供された。
【００２９】
本発明の一実施形態において、この高温処理は、微生物を少なくとも部分的に非複製にする。
【００３０】
「非複製」微生物には、熱処理された、例えば、プロバイオティクス細菌及び乳製品スターター培養物といった微生物が含まれる。これには、不活性化された、死んだ、生存していない、並びに／又はフラグメント（ＤＮＡ、代謝物、細胞質化合物、及び／若しくは細胞壁材料など）として存在する微生物が含まれる。
【００３１】
「非複製」とは、古典的なプレーティング法によって生存細胞及び／又はコロニー形成単位を検出することができないことを意味する。このような古典的なプレーティング法は、微生物学の書籍：Ｊａｍｅｓ Ｍｏｎｒｏｅ Ｊａｙ、Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．Ｌｏｅｓｓｎｅｒ、Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｇｏｌｄｅｎ．２００５、Ｍｏｄｅｒｎ ｆｏｏｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第７版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．７９０頁に要約されている。典型的には、生存細胞が存在しないことは、下記のように示すことができる。異なる濃度の細菌調製物（「非複製」試料）の播種、並びに適切な条件（少なくとも２４時間の好気性及び／又は嫌気性雰囲気）下でのインキュベーション後に、寒天プレート上で目に見えるコロニーがない、又は液体増殖培地の混濁度の増加がない。
【００３２】
高温処理は通常の大気圧で行い得るが、また高圧下で行い得る。典型的な圧力範囲は、１〜５０バール、好ましくは１〜１０バール、さらにより好ましくは２〜５バールである。明らかに、熱が加えられるとき、プロバイオティクスは、液体又は固体である培地中で熱処理されることが好ましい。したがって、加えられる理想的な圧力は、微生物がその中に供給される組成物の性質及び使用される温度によって決まる。
【００３３】
高温処理は、約７１．５〜１５０℃、好ましくは約９０〜１２０℃、さらにより好ましくは約１２０〜１４０℃の温度範囲で行い得る。
【００３４】
高温処理は、約１〜１２０秒、好ましくは、約１〜３０秒、さらにより好ましくは約５〜１５秒の短期間で行い得る。
【００３５】
この所与の時間枠は、微生物、例えば、プロバイオティクス及び乳製品スターター培養物が所与の温度に供される時間を意味する。微生物がその中に供給される組成物の性質及び量によって、及び使用する加熱装置の構造によって、熱を加える時間は変化し得ることに留意されたい。
【００３６】
しかし典型的には、本発明の組成物及び／又は微生物を、高温短時間（ＨＴＳＴ）処理、瞬間殺菌又は超高温（ＵＨＴ）処理によって処理する。
【００３７】
ＵＨＴ処理は、組成物を短時間、概ね１〜１０秒間、乳中の細菌胞子を殺すのに必要とされる温度である１３５℃（２７５°Ｆ）を超える温度で加熱することによる組成物の少なくとも部分殺菌を伴う、超高温加工又は超熱処理（両方とも、ＵＨＴと省略）である。例えば、１３５℃を超える温度を使用してこのように乳を加工することは、必要な保持時間（２〜５秒まで）で細菌負荷の減少を可能にし、それによって連続流れ操作が可能となる。
【００３８】
２つの主要なタイプのＵＨＴシステム（直接及び間接システム）がある。直接システムにおいては、製品を水蒸気圧入又は水蒸気注入によって処理し、間接システムにおいては、製品を、プレート熱交換器、チューブ式熱交換器又はかき取り式表面熱交換器を使用して熱処理する。ＵＨＴシステムの組合せは、製品調製の工程において、任意のステップで又は複数のステップで適用し得る。
【００３９】
ＨＴＳＴ処理は、下記のように定義される（高温／短時間）：乳中の生存している微生物の数の９９．９９９９％を殺す、５−logの減少を達成するように設計される低温殺菌（パスチャライゼーション）法。これはほぼ全ての酵母、カビ及び一般の腐敗細菌を破壊するのに適当であると考えられ、一般の耐熱性の病原生物の適当な破壊をまた確実なものとする。ＨＴＳＴ工程において、乳を７１．７℃（１６１°Ｆ）に１５〜２０秒間加熱する。
【００４０】
瞬間殺菌（フラッシュパスチャライゼーション）は、果汁及び野菜汁、ビール及び乳製品などの腐敗しやすい飲料の熱パスチャライゼーションの方法である。腐敗微生物を殺し、製品をより安全なものとし、それらの保存寿命を延ばすために、瞬間殺菌は容器への充填の前に行う。液体は、７１．５℃（１６０°Ｆ）〜７４℃（１６５°Ｆ）の温度に約１５〜３０秒間供される間、制御された連続流れに流入する。
【００４１】
本発明の目的のために、「短時間高温処理」という用語には、例えば、高温短時間（ＨＴＳＴ）処理、ＵＨＴ処理、及び瞬間殺菌が含まれる。
【００４２】
短時間高温処理によって非複製にされると、このように得られた非複製プロバイオティクスは、上記のような改善された又は新規な利点を示す。
【００４３】
任意の量の上記のような非複製微生物は、有効である。しかし、プロバイオティクスの少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てが非複製である場合が、一般に好ましい。
【００４４】
本発明の一実施形態において、全ての微生物は、非複製である。
【００４５】
全ての微生物を、本発明の枠組みにおいて使用し得る。好ましくは、微生物は、食物グレードである。典型的な食物グレードの微生物は、プロバイオティクスである。
【００４６】
好ましくは、プロバイオティクスが使用され、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、又はこれらの混合物からなる群から選択し得る。
【００４７】
例えば、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、及び／又はこれらの混合物からなる群から選択し得る。
【００４８】
乳製品スターター培養物は、プロピオニバクテリウム（Ｐropionibacterium）属、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、ラクトコッカス・ジアセチラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・デルブレッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、及びこれらの混合物からなる群から選択し得る。
【００４９】
例えば、約７１．５〜１５０℃での約１〜１２０秒の短時間の高温処理が行われることが必須である。この処理は、生存している及び／又は生存していないプロバイオティクスに適用し得る。
【００５０】
例えば、約７１．５〜１５０℃での約１〜１２０秒の短時間の、複数の高温処理を行い得る。
【００５１】
本発明の一実施形態において、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属及びエシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）又はこれらの組合せからなる群から選択される。
【００５２】
ビフィドバクテリウム属の典型的な例は、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ又はビフィドバクテリウム・ラクティスである。ラクトバチルス属の典型的な例は、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・アシドフィルス又はラクトバチルス・ラムノサスである。エシェリキア属の典型的な例は、健康上の利益と称されるものを有するエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）菌株である。
【００５３】
本発明の一実施形態において、乳製品スターター培養物は、ストレプトコッカス・サーモフィルス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・デルブレッキー及びラクトコッカス・ラクティスである。
【００５４】
さらに、例えば、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５、ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０、ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ４００６、ラクトバチルス・カゼイＡＣＡ−ＤＣ６００２（ＮＣＣ１８２５）、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７、ラクトバチルス・アシドフィルスＮＣＣ３００９、エシェリキア・コリＮｉｓｓｌｅ１９１７、又はこれらの組合せからなる群から選択し得る。
【００５５】
さらに、例えば、乳製品スターターは、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０１９、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９、ラクトバチルス・デルブレッキー・ブルガリクス亜種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＮＣＣ１５及びラクトコッカス・ラクティスＮＣＣ２２８７からなる群から選択し得る。
【００５６】
全ての菌株を、ブダペスト条約の元で下記のように寄託した。
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１：ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５：ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８
ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０ ＣＮＣＭ Ｉ−３８６５
ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８：ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６
ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１：ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６
ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７：ＣＧＭＣＣ１．３７２４
ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０１９：ＣＮＣＭ Ｉ−１４２２
ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９：ＣＮＣＭ Ｉ−４１５３
ラクトコッカス・ラクティスＮＣＣ２２８７：ＣＮＣＭ Ｉ−４１５４
ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ４００６：ＣＮＣＭ Ｉ−１５１８
ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ１８２５：ＡＣＡ−ＤＣ６００２
ラクトバチルス・アシドフィルスＮＣＣ３００９：ＡＴＣＣ７００３９６
ラクトバチルス・ブルガリカスＮＣＣ１５：ＣＮＣＭ Ｉ−１１９８
エシェリキア・コリＮｉｓｓｌｅ１９１７：ＤＳＭ６６０１
【００５７】
本発明の組成物は、炎症性障害及び／又はそれらの合併症を少なくとも部分的に治療するのに十分な量の、短時間高温処理された微生物を含む。これを達成するのに適当な量は、「治療有効用量」と定義される。この目的のために有効な量は、疾患の重症度並びに消費者の体重及び身体全体の健康状態などの当業者には公知のいくつかの要因、並びに食品マトリックスの作用によって決まる。
【００５８】
予防的用途において、本発明による組成物を、炎症性障害の影響を受けやすい又はそうでなければ炎症性障害の危険性がある消費者に、炎症性障害が発生する危険性を少なくとも部分的に減少させるのに十分な量で投与する。このような量は、「予防有効用量」であると定義される。ここでまた、正確な量は、患者の健康状態及び体重などのいくつかの患者特有の要因、並びに食品マトリックスの作用によって決まる。
【００５９】
当業者であれば、治療有効用量及び／又は予防有効用量を適切に調節することができる。
【００６０】
一般に、本発明の組成物は、「短時間高温」処理された微生物を治療有効用量及び／又は予防有効用量で含有する。
【００６１】
典型的には、治療有効用量及び／又は予防有効用量は、１日用量当たり約０，００５ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲の非複製の「短時間高温」処理された微生物である。
【００６２】
数値量に関して、「短時間高温」処理された非複製微生物は、組成物中に１０４〜１０１２当量ｃｆｕ／ｇ乾燥組成物に相当する量で存在し得る。明らかに、非複製微生物は、コロニーを形成しない。結果的に、この用語は、１０４〜１０１２ｃｆｕ／ｇの複製細菌から得られる非複製微生物の量と理解される。これには、不活性化された、生存していない、又は死んだ、又はフラグメント（ＤＮＡ若しくは細胞壁若しくは細胞質化合物など）として存在する微生物が含まれる。すなわち、組成物が含有する微生物の量は、微生物が実際は不活性化された、又は死んだ、断片化された、又はこれらの状態の任意若しくは全ての混合物などの非複製であろうとなかろうとに関わりなく、全ての微生物が生きているかのように、微生物の量のコロニー形成能（ｃｆｕ）に関して表される。
【００６３】
好ましくは、微生物は、１０４〜１０９ｃｆｕ／ｇ乾燥組成物に相当する量で、よりさらに好ましくは１０５〜１０８ｃｆｕ／ｇ乾燥組成物に相当する量で存在する。
【００６４】
本発明の組成物は、任意の種類の組成物でもよい。組成物は、例えば、経口的、経腸的、非経口的（皮下又は筋肉内）、膣内、直腸内、局所的又は目に投与し得る。例えば、組成物は、医薬組成物、栄養補助食品、食品添加物、化粧用組成物、ペットフード、食品、又は飲料でもよい。
【００６５】
本発明による食料製品には、例えば、乳製品（発酵乳製品、例えば、ヨーグルト、バターミルクなど）；アイスクリーム；濃縮乳；乳；生クリーム；香味付け乳飲料；ホエイをベースとする飲料；トッピング；コーヒークリーマー；チョコレート；チーズをベースとする製品；スープ；ソース；ピューレ；ドレッシング；プディング；カスタード；ベビーフード；例えば、乳幼児、小児、ティーンエイジャー、成人、高齢者又は重症者のための、完全栄養のためのものなどの栄養調製乳；シリアル及びシリアルバーが含まれる。
【００６６】
飲料には、例えば、乳又はヨーグルトをベースとする飲料、発酵乳、タンパク質飲料、コーヒー、茶、エネルギー飲料、大豆飲料、果物及び／又は野菜飲料、果物及び／又は野菜ジュースが含まれる。
【００６７】
化粧用組成物には、例えば、ローション、シャンプー、点眼薬、クリームが含まれてもよい。
【００６８】
食品添加物又は医薬品は、例えば、錠剤；カプセル剤；トローチ；サシェ剤；ゲル剤；又は液剤、例えば、栄養溶液の形態でもよい。
【００６９】
組成物は、保護親水コロイド（ガム、タンパク質、加工デンプンなど）、結合剤、フィルム形成剤、カプセル化剤／材料、壁／殻材料、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、表面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチンなど）、吸着剤、担体、充填剤、共化合物、分散化剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動剤、矯味剤、増量剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、抗酸化剤及び抗菌剤をさらに含有し得る。組成物はまた、これらに限定されないが、水、任意の起源のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホネート、タルク、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、香味剤、保存剤、安定剤、乳化剤、緩衝液、滑沢剤、着色剤、湿潤剤、充填剤などを含めた、通常の医薬品添加物及びアジュバント、賦形剤及び希釈剤を含有し得る。
【００７０】
さらに、組成物は、経口又は経腸投与に適した有機又は無機担体材料、並びにビタミン、ミネラルの微量元素、及びＵＳＲＤＡなどの政府機関省庁の推奨に従った他の微量栄養素を含有し得る。
【００７１】
本発明の組成物は、組成物の使用目的によって他の薬剤をさらに含み得る。例えば、疼痛又は熱軽減剤を使用して、炎症性障害によってもたらされる不快感を最小化するのを助け得る。
【００７２】
安定化剤を加えて、組成物及びその構成要素を安定化し得る。
【００７３】
香味剤及び／又は着色剤を加えて、フレーバーを調節し、同定することが容易で、及び／又は好ましいと受け取られる色を組成物に与え得る。
【００７４】
プレバイオティクスを加えてもよい。プレバイオティクスは、プロバイオティクスを非複製にする前に、プロバイオティクスの増殖をサポートし得る。プレバイオティクスはまた、組成物中に存在し、及び／又は加えられてもよい、生存しているプロバイオティクス細菌と相乗的に作用し得る。
【００７５】
「プレバイオティクス」とは、腸内の健康に有益な微生物及び／又はプロバイオティクスの増殖を促進する、消化できない食品を意味する。プレバイオティクスは、プレバイオティクスを摂取した人の胃及び／若しくは腸上部で分解、又は消化管内で吸収されないが、プレバイオティクスは、胃腸の微生物叢及び／又はプロバイオティクスによって発酵する。プレバイオティクスは、例えば、Ｇｌｅｎｎ Ｒ．Ｇｉｂｓｏｎ及びＭａｒｃｅｌ Ｂ．Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ、Ｄｉｅｔａｒｙ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９５ １２５：１４０１〜１４１２によって定義されている。
【００７６】
本発明によって使用し得るプレバイオティクスは特に限定されず、腸内でプロバイオティクス又は健康に有益な微生物の増殖を促進する全ての食品が含まれる。好ましくは、プレバイオティクスは、フルクトース、ガラクトース、マンノースを任意選択で含有するオリゴ糖；食物繊維、特に、可溶性繊維、大豆繊維；イヌリン；又はこれらの混合物からなる群から選択し得る。好ましいプレバイオティクスは、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、イソマルトオリゴ糖（ＩＭＯ）、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、アラビノキシロオリゴ糖（ＡＸＯＳ）、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）、大豆オリゴ糖、グリコシルスクロース（ＧＳ）、ラクトスクロース（ＬＳ）、ラクツロース（ＬＡ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖、ガム及び／又はその水解物、ペクチン及び／又はその水解物である。
【００７７】
さらなるプロバイオティクスを、組成物に加えてもよい。全てのプロバイオティクス微生物を、さらに加えてもよい。好ましくは、プロバイオティクスは、この目的のために、ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属（Enterococcus）、ストレプトコッカス属、クリベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属、エシェリキア属、特にビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトバチルス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトコッカス・ラクティス、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、エシェリキア・コリ又はこれらの混合物からなる群から選択されるもの、好ましくはビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１（ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５（ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ４９０（ＣＮＣＭ Ｉ−２１７０）、ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８（ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０（ＣＮＣＭ Ｉ−３８６５）、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ ２４６１（ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６）、ラクトバチルス・ジョンソニイＮＣＣ５３３（ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＣＧＭＣＣ１．３７２４）、エンテロコッカス・フェシウムＳＦ６８（ＮＣＣ２７６８；ＮＣＩＭＢ１０４１５）、及びこれらの混合物からなる群から選択されるもの、からなる群から選択し得る。
【００７８】
本発明の組成物は、任意の哺乳動物を対象とし得るが、好ましくはヒト又はペットを対象とする。
【００７９】
組成物はまた、毎日の食事において必須であると理解される全てのビタミン及びミネラルを栄養的に有意な量で含有し得る。必要最小限は、特定のビタミン及びミネラルについて確立されてきた。組成物中に任意選択で存在するミネラル、ビタミン及び他の栄養素の例には、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、葉酸、イノシトール、ナイアシン、ビオチン、パントテン酸、コリン、カルシウム、リン、ヨウ素、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、マンガン、塩化物、カリウム、ナトリウム、セレン、クロム、モリブデン、タウリン、及びＬ−カルニチンが含まれる。ミネラルは通常塩の形態で加えられる。特定のミネラル及び他のビタミンの存在及び量は、意図される消費者によって変化する。
【００８０】
本発明の組成物は、少なくとも１種のタンパク質源、少なくとも１種の炭水化物源及び少なくとも１種の脂質源を含有し得る。
【００８１】
任意の適切な食物タンパク質、例えば、動物性タンパク質（乳タンパク質、肉タンパク質及び卵タンパク質など）；植物性タンパク質（大豆タンパク質、小麦タンパク質、米タンパク質、及びエンドウ豆タンパク質など）；遊離アミノ酸の混合物；又はこれらの組合せを使用し得る。
【００８２】
乳タンパク質（カゼイン及びホエイなど）、並びに大豆タンパク質が特に好ましい。ホエイタンパク質に関する限り、タンパク質源は、酸ホエイ又はスイートホエイ又はこれらの混合物をベースとしてもよく、所望の割合でα−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンが含まれてもよい。
【００８３】
しかし、好ましくは、特に組成物が乳幼児用補給調製乳である場合、タンパク質源は加工スイートホエイをベースとする。スイートホエイは、容易に利用できるチーズ作製の副産物であり、牛乳をベースとする乳幼児用調製乳の製造において使用されることが多い。
【００８４】
タンパク質は、そのままの、又は加水分解された、又はそのままのタンパク質と加水分解されたタンパク質の混合物でもよい。部分的に加水分解されたタンパク質（２〜２０％の加水分解の程度）を供給することが望ましいことがある。
【００８５】
加水分解されたタンパク質が必要な場合、加水分解工程は、所望のように、当技術分野において公知のように行い得る。例えば、ホエイタンパク質加水分解物は、１つ又は複数のステップにおいてホエイ画分を酵素的に加水分解することによって調製し得る。
【００８６】
本発明の組成物がタンパク質源を含有する場合、組成物中のタンパク質又はタンパク質同等物の量は典型的には、１．６〜７．５ｇ／１００ｋｃａｌ組成物の範囲である。
【００８７】
特に栄養調製乳について、必須アミノ酸含量の必要最小限が満たされるタンパク質源を供給すべきである。
【００８８】
組成物が炭水化物源を含有する場合、使用される炭水化物の種類は、特に限定されない。任意の適切な炭水化物、例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形物、マルトデキストリン、デンプン及びこれらの混合物を使用し得る。異なる炭水化物源の組合せを使用し得る。炭水化物は、組成物のエネルギーの３０％〜８０％を好ましくは供給し得る。例えば、組成物は、９〜１８ｇ／１００ｋｃａｌ組成物の量の炭水化物源を含み得る。
【００８９】
組成物が脂質源を含有する場合、使用される脂質の種類は、特に限定されない。組成物が脂質源を含む場合、脂質源は、組成物のエネルギーの５％〜７０％を供給し得る。長鎖ｎ−３及び／又はｎ−６多価不飽和脂肪酸（ＤＨＡ、ＡＲＡ及び／又はＥＰＡなど）を加え得る。適切な脂肪プロファイルは、菜種油、トウモロコシ油、高オレイン酸ヒマワリ油及び中鎖トリグリセリド油のブレンドを使用して得てもよい。組成物は、１．５〜７ｇ／１００ｋｃａｌ組成物の量の脂質源を含み得る。
【００９０】
食物繊維もまた加えてもよい。食物繊維は可溶性又は不溶性でよく、一般に２つのタイプのブレンドが好ましい。食物繊維の適切な源には、大豆、エンドウ豆、オートムギ、ペクチン、グアーガム、アラビアゴム、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シアリル−ラクトース及び動物乳由来のオリゴ糖が含まれる。好ましい繊維ブレンドは、イヌリンとより短鎖のフラクトオリゴ糖との混合物である。
【００９１】
本発明の組成物は、当技術分野において公知の任意の態様によって調製し得る。例えば、組成物が乳幼児用補給調製乳などの栄養調製乳である場合、組成物は、タンパク質源、炭水化物源、及び脂肪源を適切な割合で一緒にブレンドすることによって調製し得る。使用される場合、乳化剤をブレンド中に含み得る。ビタミン及びミネラルはこの時点で加えてもよいが、熱劣化を避けるために通常後で加えられる。任意の親油性ビタミン、乳化剤などを、ブレンドする前に、脂肪源に溶解してもよい。次いで、水、好ましくは逆浸透に供した水を混入し、液体混合物を形成し得る。
【００９２】
次いで、液体混合物を熱処理して、細菌負荷を減少させ得る。例えば、液体混合物は、約１２０℃〜約１４０℃の範囲の温度に約５秒〜約３０秒間急速に加熱し得る。加熱は、蒸気圧入によって、又は熱交換器、例えば、プレート熱交換器によって行い得る。
【００９３】
次いで、液体混合物は、例えば、フラッシュ冷却によって約６０℃〜約８５℃に冷却し得る。次いで、液体混合物は、例えば、２段階（第１の段階で約７ＭＰａ〜約４０ＭＰａ及び第２の段階で約２ＭＰａ〜約１４ＭＰａ）でホモジナイズし得る。次いで、ホモジナイズされた混合物をさらに冷却して、ビタミン及びミネラルなどの任意の熱に弱い成分に加え得る。
【００９４】
ホモジナイズされた混合物のｐＨ及び固形分は、この時点で好都合に標準化される。ホモジナイズされた混合物を、適切な乾燥装置（噴霧乾燥機又は凍結乾燥機など）に移し、粉末に変える。粉末は、約５重量％未満の含水率を有するべきである。
【００９５】
プロバイオティクスを任意の適切な方法によって培養し、栄養組成物に加えるために、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥によって調製し得る。次いで、プロバイオティクスを組成物に加え、その後組成物を熱処理して、細菌負荷を減少させ得る。これによって、プロバイオティクスを自動的に少なくとも部分的に非複製にする。
【００９６】
代わりに、当然ながら、プロバイオティクスはまた、個々に短時間高温処理され、次いで組成物に、例えば、液体又は粉末形態で非複製プロバイオティクスとして加え得る。
【００９７】
選択したプロバイオティクス（複数可）を任意の適切な方法によって培養し、組成物に加えるために、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥によって調製し得る。代わりに、細菌調製物は、食料製品に加えるために適切な形態で既に調製されて、専門の供給業者から購入することができる。
【００９８】
生菌及び「短時間高温」処理されたプロバイオティクス細菌調製物の免疫プロファイルを分析することによって、本発明者らは、ヒト血液細胞から特定のサイトカインの分泌を誘発するプロバイオティクスの能力を評価した。
【００９９】
生存しているプロバイオティクスの免疫プロファイルを、「短時間高温」処理された細胞の免疫プロファイルと比較した。「短時間高温」処理されたプロバイオティクスは、生きた対応物よりも異なるレベルのサイトカイン分泌を誘発することが見出された。
【０１００】
「短時間高温」処理されたプロバイオティクスは、生きた対応物と比較してより多くのＩＬ−１０分泌を維持又は誘発する一方で、炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０）をより誘発しなかった。このように得られたＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、生細胞と比較して、任意の「短時間高温」処理されたプロバイオティクスについてより低かった。対照的に、８５℃で２０分間熱処理された細菌は、生細胞より多くの炎症促進性サイトカイン及びより少ないＩＬ−１０を誘発し、より高いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比をもたらし、その種類の熱処理が本発明に必須であることを示した。
【０１０１】
ＰＢＭＣをプロバイオティクスとインビトロでインキュベートすることによって得たＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、インビボの抗炎症作用を予測する（Ｆｏｌｉｇｎｅ，Ｂ．ら、２００７、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３：２３６〜２４３）。
【０１０２】
本発明はまた、炎症性障害を治療又は予防するための本発明の組成物に関する。
【０１０３】
結果的に、一実施形態は、炎症性障害を治療又は予防する製品の調製のための、本発明の組成物の使用である。
【０１０４】
本発明の使用によって調製される組成物によって治療又は予防することができる抗炎症性障害は、特に限定されない。
【０１０５】
例えば、本発明の組成物によって治療又は予防することができる抗炎症性障害は、急性炎症（敗血症など）；火傷；及び慢性炎症（炎症性腸疾患、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、嚢炎など）；壊死性腸炎；皮膚炎（ＵＶ又は化学物質が誘発する皮膚炎、湿疹、反応性皮膚など）；過敏性腸症候群；眼炎；アレルギー、喘息；肥満が関連する炎症；年齢が関連する軽度の炎症、及びこれらの組合せからなる群から選択し得る。
【０１０６】
本発明はまた、微生物を少なくとも７１．５℃の高温処理に少なくとも１秒間の短時間、例えば、約７１．５〜１５０℃の高温処理に約１〜１２０秒の短期間供するステップを含む、抗炎症作用を有する微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物、特に生存しているプロバイオティクス及び／若しくは生存している乳製品スターター培養物を提供する方法、又は微生物、特に、生存しているプロバイオティクス及び／若しくは生存している乳製品スターター培養物の抗炎症作用を改善する方法に及ぶ。
【０１０７】
生存しているプロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物がこの方法において使用される場合、「短時間高温」処理は、プロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物の少なくとも一部を非複製にすることをもたらす。
【０１０８】
「短時間高温」処理は、プロバイオティクスの少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てを非複製にすることをもたらし得る。
【０１０９】
本発明の好ましい実施形態において、方法は、生存しているプロバイオティクスを組成物に加えるステップと、プロバイオティクス含有組成物を「短時間高温」処理に供するステップとを含む。
【０１１０】
微生物はまた、製品への補充の前に熱処理し得る。
【０１１１】
組成物は任意の組成物でよいが、例えば、プロバイオティクスが補充された食物又は栄養製品又は飲料である。
【０１１２】
これに従って、本発明はまた、微生物を少なくとも７１．５℃の高温処理に少なくとも１秒間、例えば、約７１．５〜１５０℃の高温処理に約１〜１２０秒の短期間供するステップを含む、抗炎症性特性を有する微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物、好ましくは生存しているプロバイオティクス及び／若しくは生存している乳製品スターター培養物を含む組成物を提供する方法、又はその存在する抗炎症性特性を改善する方法に及ぶ。
【０１１３】
「短時間高温」処理ステップは、工業施設において好都合に行うことができるが、例えば、スチーマーを使用して家庭で行うこともまたできる。このように、消費の直前に抗炎症効果を製品に与えることができる。
【０１１４】
本明細書に記載されている本発明の全ての特徴を、開示されているような本発明の範囲から逸脱することなく自由に組み合わせることができることを、当業者であれば理解するであろう。特に、本発明の使用及び方法について記載される特徴は、組成物及び本発明の方法に適用し得る（逆の場合も同じ）。
【０１１５】
本発明のさらなる利点及び特徴は、下記の実施例及び図から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１Ａ】「短時間高温」で処理されたプロバイオティクスの抗炎症性免疫プロファイルの増強を示す。
【図１Ｂ】「短時間高温」で処理されたプロバイオティクスの抗炎症性免疫プロファイルの増強を示す。
【図２】「短時間高温」で処理された後、抗炎症性となる、すなわちインビトロで明白な抗炎症性免疫プロファイルを示す、非抗炎症性プロバイオティクス菌株を示す。
【図３Ａ】「短時間高温」で処理された後、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、市販の製品中で使用されているプロバイオティクス菌株を示す。
【図３Ｂ】「短時間高温」で処理された後、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、市販の製品中で使用されているプロバイオティクス菌株を示す。
【図４Ａ】高温での熱処理によって、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、乳製品スターター菌株（すなわち、Ｌｃ１スターター菌株）を示す。
【図４Ｂ】高温での熱処理によって、インビトロで増強した又は新規な抗炎症性免疫プロファイルを示す、乳製品スターター菌株（すなわち、Ｌｃ１スターター菌株）を示す。
【図５】ＨＴＳＴ処理で処理された後に、インビトロで抗炎症性免疫プロファイルを示す、非抗炎症性プロバイオティクス菌株を示す。
【図６】生菌及び熱処理された（１４０℃、１５秒間）形態の、プロバイオティクス及び乳製品スターター菌株によって生じた、ＰＢＭＣデータ上の主成分分析（ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０）。各点は、そのＮＣＣ番号又は名称によって同定される、生菌又は熱処理された１つの菌株を表す。
【図７】生菌株及び熱処理された（８５℃、２０分）菌株のＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比を示す。全体的に、８５℃での２０分間の熱処理は、本発明の「短時間高温」処理とは対照的に、ＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比の増加をもたらす（図１、２、３、４及び５）。
【実施例】
【０１１７】
方法
細菌調製物：
生きたプロバイオティクスによってもたらされる宿主の免疫系に対する健康上の利益は一般に、菌株特異的であると考えられる。高レベルのＩＬ−１０及び／又は低レベルの炎症促進性サイトカインをインビトロで誘発するプロバイオティクス（ＰＢＭＣアッセイ）は、インビボで強力な抗炎症性菌株であることが示されてきた（Ｆｏｌｉｇｎｅ，Ｂ．ら、２００７、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３：２３６〜２４３）。
【０１１８】
いくつかのプロバイオティクス菌株を使用して、熱処理されたプロバイオティクスの抗炎症性特性を調査した。これらは、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ３００１、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５、ビフィドバクテリウム・ブレーベＮＣＣ２９５０、ビフィドバクテリウム・ラクティスＮＣＣ２８１８、ラクトバチルス・パラカゼイＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７、ラクトバチルス・カゼイＮＣＣ４００６、ラクトバチルス・アシドフィルスＮＣＣ３００９、ラクトバチルス・カゼイＡＣＡ−ＤＣ６００２（ＮＣＣ１８２５）、及びエシェリキア・コリＮｉｓｓｌｅであった。Ｎｅｓｔｌｅ Ｌｃ１発酵製品を生産するために商業的に使用されるいくつかの菌株を含めたいくつかのスターター培養菌株（ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０１９、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９、ラクトバチルス・ブルガリカスＮＣＣ１５及びラクトコッカス・ラクティスＮＣＣ２２８７）もまた試験した。
【０１１９】
細菌細胞は、５〜１５Ｌのバイオリアクター中で各菌株について最適化した条件で培養した。全ての典型的な細菌増殖培地が使用可能である。このような培地は、当業者には公知である。ｐＨを５．５に調節したとき、３０％塩基溶液（ＮａＯＨ又はＣａ（ＯＨ）２）を連続的に加えた。適当であるとき、ヘッドスペースをＣＯ２でガス処理することによって嫌気性条件を維持した。Ｅ.コリを、標準的な好気条件下で培養した。
【０１２０】
細菌細胞を、遠心分離（５，０００×ｇ、４℃）によって集め、概ね１０９〜１０１０ｃｆｕ／ｍｌの最終濃度に達するように、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に適当な容量で再懸濁させた。調製物の一部を、−８０℃で１５％グリセロールと共に冷凍した。別の部分の細胞を、以下によって熱処理した。
超高温：１４０℃、１５秒間；間接蒸気圧入による。
高温短時間（ＨＴＳＴ）：７４℃、９０℃及び１２０℃、１５秒間、間接蒸気圧入による。
ウォーターバス中で長時間低温（８５℃、２０分）。
【０１２１】
熱処理した上で、試料を使用するまで−８０℃で冷凍して保持した。
【０１２２】
細菌調製物のインビトロ免疫プロファイリング：
生細菌調製物及び熱処理された細菌調製物の免疫プロファイル（すなわち、インビトロでヒト血液細胞からの特定のサイトカインの分泌を誘発する能力）を評価した。ヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を、血液フィルターから単離した。細胞密度勾配による分離の後、単核細胞を集め、ハンクス平衡塩類溶液で２度洗浄した。次いで、細胞を、１０％ウシ胎仔血清（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ、Ｐａｒｉｓ、ｆｒａｎｃｅ）、１％Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）及び０．１％ゲンタマイシン（Ｓｉｇｍａ）を補充したＩｓｃｏｖｅの改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ、Ｓｉｇｍａ）に再懸濁させた。次いで、ＰＢＭＣ（７×１０５細胞／ウェル）を、生細菌及び熱処理された細菌（７×１０６当量ｃｆｕ／ウェル）と共に４８ウェルプレート中で３６時間インキュベートした。生細菌及び熱処理された細菌の効果を、２つの別々の実験に分割した８人の個々のドナーからのＰＢＭＣ上で試験した。３６時間のインキュベーション後、培養プレートを冷凍し、サイトカイン測定まで−２０℃で保持した。サイトカインプロファイリングは、生細菌及びそれらの熱処理された対応物について平行（すなわち、ＰＢＭＣの同じバッチ上の同じ実験で）で行った。
【０１２３】
３６時間のインキュベーション後の細胞培養上清中のサイトカイン（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１０）のレベルは、製造者の指示に従ってＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ＤｕｏＳｅｔ Ｈｕｍａｎ ＩＬ−１０、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｈｕｍａｎ ＩＬ１２ｐ４０、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｈｕｍａｎ ＴＮＦα、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ−γ）によって決定した。ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０及びＴＮＦ−αは、炎症促進性サイトカインであり、一方、ＩＬ−１０は、強力な抗炎症メディエーターである。結果は、４人の個々のドナーの平均（ｐｇ／ｍｌ）＋／−ＳＥＭとして表すが、各々４人のドナーで行う２つの個々の実験の代表である。比ＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０は、各菌株についてインビボの抗炎症効果の予測値として計算する（Ｆｏｌｉｇｎｅ，Ｂ．ら、２００７、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３：２３６〜２４３）。
【０１２４】
各菌株についてのＥＬＩＳＡ（上記を参照されたい）によって決定したサイトカインの数値（ｐｇ／ｍｌ）を、ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ｖ５．１０ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｓ、Ｓｉｎｔ−Ｍａｒｔｅｎｓ−Ｌａｔｅｍ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）に移した。主成分分析（ＰＣＡ、ディメンショニング技術）を、このセットのデータで行った。文字についての平均の引き算、及び文字についての分散値による割り算を、この分析に含めた。
【０１２５】
結果
超高温（ＵＨＴ）／高温短時間（ＨＴＳＴ）様処理によって生じた抗炎症性プロファイル
調査中のプロバイオティクス菌株を、一連の熱処理（超高温（ＵＨＴ）、高温短時間（ＨＴＳＴ）及び８５℃、２０分間）に供し、それらの免疫プロファイルを、インビトロでの生細胞の免疫プロファイルと比較した。生きた微生物（プロバイオティクス及び／又は乳製品スターター培養物）は、ヒトＰＢＭＣと共にインキュベートしたとき、異なるレベルのサイトカイン産生を誘発した（図１、２、３、４及び５）。これらの微生物の熱処理は、温度依存的態様でＰＢＭＣによって産生されたサイトカインのレベルを変更させた。「短時間高温」処理（１２０℃又は１４０℃、１５秒間）は、抗炎症性免疫プロファイルを有する非複製細菌を生じさせた（図１、２、３及び４）。実際に、ＵＨＴ様処理した菌株（１４０℃、１５秒間）は、さらなるＩＬ−１０産生を維持又は誘発する一方で、より少ない炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０）を誘発した（生きた対応物と比較して）。このように得られたＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、生細胞と比較して、任意のＵＨＴ様処理した菌株についてより低かった（図１、２、３及び４）。この観察はまた、ＨＴＳＴ様処理によって処理された、すなわち１２０℃に１５秒間（図１、２、３及び４）、又は７４℃及び９０℃に１５秒間（図５）供された細菌について有効であった。熱処理（ＵＨＴ様又はＨＴＳＴ様処理）は、プロバイオティクス菌株（図１、２、３及び５）及び乳製品スターター培養物（図４）のインビトロの免疫プロファイルに対して同様の作用を有した。生きたプロバイオティクス及び熱処理された（１４０℃、１５秒間）プロバイオティクス並びに乳製品スターター菌株によって産生されたＰＢＭＣデータ上の主成分分析によって、生菌株はｘ軸に沿って至る所に分布することが明らかになったが、これは菌株が非常に異なる免疫プロファイルをインビトロで示すことを例示する（低（左側）から高（右側）までの炎症促進性サイトカインの誘発物質）。熱処理された菌株はグラフの左側上に集まり、炎症促進性サイトカインは熱処理された菌株によってより少なく誘発されることが示される（図６）。対照的に、２０分間８５℃で熱処理された細菌は、生細胞よりもより多く炎症促進性サイトカインを、及びより少なくＩＬ−１０を誘発し、その結果、より高いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比がもたらされた（図７）。
【０１２６】
抗炎症性プロファイルは、ＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様処理によって増強又は生じる。
【０１２７】
ＵＨＴ及びＨＴＳＴ処理された菌株は、それらの各々の当初の免疫プロファイル（生細胞）に関わらず、抗炎症性プロファイルを示す。インビボで抗炎症性であることが公知であり、インビトロで抗炎症性プロファイルを示すプロバイオティクス菌株（Ｂ.ロンガムＮＣＣ３００１、Ｂ.ロンガムＮＣＣ２７０５、Ｂ.ブレーベＮＣＣ２９５０、Ｂ.ラクティスＮＣＣ２８１８）は、「短時間高温」処理後に、増強された抗炎症性プロファイルをインビトロで示すことが示された。図１に示すように、ＵＨＴ様処理されたビフィドバクテリウム属菌株のＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、生きた対応物のそれより低く、したがって、ＵＨＴ様処理された試料の改善された抗炎症性プロファイルが示された。より顕著には、ＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様処理によって抗炎症性プロファイルが生じたことは、非抗炎症性の生菌株についても確認された。生菌のＬ．ラムノサスＮＣＣ４００７及びＬ．パラカゼイＮＣＣ２４６１の両方は、高いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比をインビトロで示す（図２及び５）。２つの生菌株は、マウスにおいてＴＮＢＳが誘発する大腸炎に対して保護性でないことが示された。Ｌ．ラムノサスＮＣＣ４００７及びＬ．パラカゼイＮＣＣ２４６１によって誘発されたＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、「短時間高温」処理（ＵＨＴ又はＨＴＳＴ）後に劇的に減少し、ビフィドバクテリウム属菌株で得られたものと同じぐらい低いレベルに達した。これらの低いＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−１０比は、ＩＬ−１０分泌についての変化なし（Ｌ．ラムノサスＮＣＣ４００７）又は劇的な誘発（Ｌ．パラカゼイＮＣＣ２４６１）と合わせて、低レベルのＩＬ−１２ｐ４０産生によるものである（図２）。
【０１２８】
結果として、
生きた微生物の抗炎症性プロファイルは、ＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様熱処理によって増強させることができ（例えば、Ｂ．ロンガムＮＣＣ２７０５、Ｂ．ロンガムＮＣＣ３００１、Ｂ．ブレーベＮＣＣ２９５０、Ｂ．ラクティスＮＣＣ２８１８）、
抗炎症性プロファイルは、非抗炎症性の生きた微生物（例えば、Ｌ．ラムノサスＮＣＣ４００７、Ｌ．パラカゼイＮＣＣ２４６１、乳製品スターターであるＳ．サーモフィルスＮＣＣ２０１９）からＵＨＴ様及びＨＴＳＴ様熱処理によって生じさせることができ、
抗炎症性プロファイルは、プロバイオティクスのＥ．コリ菌株を含めた市販の製品から単離した菌株についても示された（図３Ａ及びＢ）。
【０１２９】
ＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理の影響は、全ての試験したプロバイオティクス及び乳製品スターター、例えば、ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属及びストレプトコッカス属について同様であった。
【０１３０】
ＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理を、異なるインビトロの免疫プロファイルを示すいくつかのラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属及びストレプトコッカス属に適用した。全ての菌株は、ＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理後に、生きた対応物より低い炎症促進性サイトカインを誘発した（図１、２、３、４、５及び６）が、これはこのように得られた非複製細菌の免疫特性に対するＵＨＴ／ＨＴＳＴ様処理の効果が、全てのプロバイオティクス、特にラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属及び特定のＥ．コリ菌株、及び全ての乳製品スターター培養物、特にストレプトコッカス属、ラクトコッカス属及びラクトバチルス属に一般化することができることを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物を含む抗炎症性組成物であって、前記微生物が少なくとも７１．５℃で少なくとも１秒間の高温処理に供された、抗炎症性組成物。
【請求項２】
前記微生物が、食物グレードの微生物、例えば、プロバイオティクス、乳製品スターター培養物又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記高温処理が、約１〜１２０秒間の短時間の約７１．５〜１５０℃の高温処理であり、好ましくは高温／短時間（ＨＴＳＴ）処理又は超高温（ＵＨＴ）処理である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記プロバイオティクスの少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てが非複製である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記プロバイオティクス及び／又は前記乳製品スターターが、ビフィドバクテリウム属（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ラクトバチルス属(ｌａｃｒｏｂａｃｉｌｌｉ)、プロピオニバクテリウム属(ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ)、又はこれらの組合せ、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)、ビフィドバクテリウム・ラクティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌａｃｔｉｓ)、ビフィドバクテリウム・アニマリス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ)、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ)、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆａｎｔｉｓ)、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)、ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)、ラクトバチルス・パラカゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉ)、ラクトバチルス・サリバリウス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ)、ラクトバチルス・ロイテリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ)、ラクトバチルス・ラムノサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ)、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・ジアセチラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・デルブレッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、及び／又はこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記プロバイオティクス及び／又は前記乳製品スターターが、ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)ＮＣＣ３００１、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ)ＮＣＣ２９５０、ビフィドバクテリウム・ラクティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ)ＮＣＣ２８１８、ラクトバチルス・パラカゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ)ＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・ラムノサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)ＮＣＣ４００７、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＮＣＣ２０１９、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９、ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)ＮＣＣ４００６、ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)ＮＣＣ３００９、ラクトバチルス・カゼイＡＣＡ−ＤＣ６００２（ＮＣＣ１８２５）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｎｉｓｓｌｅ、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＮＣＣ１５、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）ＮＣＣ２２８７、又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
例えば、経口的、経腸的、非経口的、例えば、皮下又は筋肉内、膣内、直腸内、局所的又は目に投与し得る、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ヒト又はペットを対象とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
１日用量当たり約０．００５ｍｇ〜１０００ｍｇの非複製微生物を含有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
炎症性障害を治療又は予防する製品を調製するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１１】
炎症性障害が、敗血症などの急性炎症；火傷；及び、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、嚢炎といった炎症性腸疾患などの慢性炎症；壊死性腸炎；過敏性腸症候群；ＵＶ又は化学物質が誘発する皮膚炎、湿疹、反応性皮膚、などの皮膚炎；眼炎；アレルギー、喘息；肥満が関連する炎症；年齢が関連する軽度の炎症、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
抗炎症作用を有する、微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物を供給する方法又は微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物の抗炎症作用を改善する方法であって、前記微生物を少なくとも７１．５℃で少なくとも１秒間の高温処理に供するステップを含む、方法。
【請求項１３】
「短時間高温」処理が、前記プロバイオティクス及び／又は前記乳製品スターター培養物の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てを非複製にすることをもたらす、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
生存している微生物を組成物に加えるステップと、微生物を含有する組成物を「短時間高温」処理に供するステップとを含む、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗炎症性特性を有する、微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物を含む組成物を提供する方法又はその存在する抗炎症性特性を改善する方法であって、前記微生物を少なくとも７１．５℃で少なくとも１秒間の短時間の高温処理に供するステップを含む、方法。
【請求項１】
微生物を含む抗炎症性組成物であって、前記微生物が少なくとも７１．５℃で少なくとも１秒間の高温処理に供された、抗炎症性組成物。
【請求項２】
前記微生物が、食物グレードの微生物、例えば、プロバイオティクス、乳製品スターター培養物又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記高温処理が、約１〜１２０秒間の短時間の約７１．５〜１５０℃の高温処理であり、好ましくは高温／短時間（ＨＴＳＴ）処理又は超高温（ＵＨＴ）処理である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記プロバイオティクスの少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てが非複製である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記プロバイオティクス及び／又は前記乳製品スターターが、ビフィドバクテリウム属（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ラクトバチルス属(ｌａｃｒｏｂａｃｉｌｌｉ)、プロピオニバクテリウム属(ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ)、又はこれらの組合せ、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)、ビフィドバクテリウム・ラクティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌａｃｔｉｓ)、ビフィドバクテリウム・アニマリス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ)、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ)、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆａｎｔｉｓ)、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)、ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)、ラクトバチルス・パラカゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉ)、ラクトバチルス・サリバリウス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ)、ラクトバチルス・ロイテリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ)、ラクトバチルス・ラムノサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ)、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・ジアセチラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・デルブレッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、及び／又はこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記プロバイオティクス及び／又は前記乳製品スターターが、ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)ＮＣＣ３００１、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＣ２７０５、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ)ＮＣＣ２９５０、ビフィドバクテリウム・ラクティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ)ＮＣＣ２８１８、ラクトバチルス・パラカゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ)ＮＣＣ２４６１、ラクトバチルス・ラムノサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)ＮＣＣ４００７、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＮＣＣ２０１９、ストレプトコッカス・サーモフィルスＮＣＣ２０５９、ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)ＮＣＣ４００６、ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)ＮＣＣ３００９、ラクトバチルス・カゼイＡＣＡ−ＤＣ６００２（ＮＣＣ１８２５）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｎｉｓｓｌｅ、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＮＣＣ１５、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）ＮＣＣ２２８７、又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
例えば、経口的、経腸的、非経口的、例えば、皮下又は筋肉内、膣内、直腸内、局所的又は目に投与し得る、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ヒト又はペットを対象とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
１日用量当たり約０．００５ｍｇ〜１０００ｍｇの非複製微生物を含有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
炎症性障害を治療又は予防する製品を調製するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１１】
炎症性障害が、敗血症などの急性炎症；火傷；及び、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、嚢炎といった炎症性腸疾患などの慢性炎症；壊死性腸炎；過敏性腸症候群；ＵＶ又は化学物質が誘発する皮膚炎、湿疹、反応性皮膚、などの皮膚炎；眼炎；アレルギー、喘息；肥満が関連する炎症；年齢が関連する軽度の炎症、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
抗炎症作用を有する、微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物を供給する方法又は微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物の抗炎症作用を改善する方法であって、前記微生物を少なくとも７１．５℃で少なくとも１秒間の高温処理に供するステップを含む、方法。
【請求項１３】
「短時間高温」処理が、前記プロバイオティクス及び／又は前記乳製品スターター培養物の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、理想的には少なくとも９９．９％、最も理想的には全てを非複製にすることをもたらす、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
生存している微生物を組成物に加えるステップと、微生物を含有する組成物を「短時間高温」処理に供するステップとを含む、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗炎症性特性を有する、微生物、例えば、プロバイオティクス及び／若しくは乳製品スターター培養物を含む組成物を提供する方法又はその存在する抗炎症性特性を改善する方法であって、前記微生物を少なくとも７１．５℃で少なくとも１秒間の短時間の高温処理に供するステップを含む、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１２−５２６７４８（Ｐ２０１２−５２６７４８Ａ）
【公表日】平成２４年１１月１日（２０１２．１１．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１０２３３（Ｐ２０１２−５１０２３３）
【出願日】平成２２年５月７日（２０１０．５．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５６２８４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３０６５９
【国際公開日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１１月１日（２０１２．１１．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月７日（２０１０．５．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５６２８４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３０６５９
【国際公開日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
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