磁気変換器
本発明は、交番磁界にさらされると大量の熱を発生する、ＳＡＲ値の高い生体適合性磁気ナノ粒子の製造に関する。発生した熱は、数ある利用法の中でも特に治療目的、具体的には、がんを消滅させるために利用可能である。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、交番磁界にさらされると大量の熱を発生する、ＳＡＲ値の高い生体適合性磁気ナノ粒子の製造に関する。発生した熱は、数ある利用法の中でも特に治療目的、具体的には、がんを消滅させるのに利用可能である。
【０００２】
磁気ナノ粒子は、さまざまな方法で磁界のエネルギーを熱に変換できる。いわゆるヒステリシス損失を通じての加熱の他に、ナノ粒子は緩和を通じて熱を発生させることができる（それぞれネール及びブラウン緩和）。発生した熱エネルギーの量は、磁界の強度（振幅）及び交番磁界の周波数に依存する。熱発生の効率性は、磁界の規定の強度及び周波数で、いわゆるＳＡＲ（比吸収率）またはＳＬＰ（比出力損失）値によって測定される。ある物質のＳＡＲ値が、測定に使用される質量（グラム）に標準化され、単位［Ｗ／ｇ］で表現される。しかしながら、磁気物質のＳＡＲ値は、粒子サイズ及び粒子形状などのその他の要因、異方性、物質の金属含有量によっても左右される。ＳＡＲは、１００ｋＨｚの周波数及び１８ｋＡ／Ｍの磁界強度で、Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．［Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｈｅｍｉａ，１９９３，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１，５１−６８］によって開発された方法に従って決定されるのが好ましい。この場合、ＳＡＲ値は、ｍＷ／ｍｇ Ｆｅにおける物質の鉄含有量についての標準化により表示される。
最新技術
生体適合性磁気ナノ粒子は、いわゆる沈殿法によって頻繁に製造される。このことは、文献［例えばＤＥ１９６１４１３６Ａ１］に多くの例を使って記載されている。水溶液中で製造されるため、これらの粒子は問題なく官能化され、良好な生体適合性を通常備えることができる。しかしながら、この方法で製造された粒子は、比較的低いＳＡＲ値を示し、そのために本特許の革新的要件を満たすことができない。
【０００３】
磁気ナノ粒子は、いわゆる走磁性細菌によっても製造可能である［ＷＯ９８／４００４９］。この方法で製造された粒子のＳＡＲはより高い。しかしながら、製造過程が非常に複雑かつ高価である。さらに、粒子が比較的速く堆積するため、適用可能性が非常に制限される。
【０００４】
有機溶媒中における金属錯体の熱分解により、コロイドまたはナノ粒子が形成されることが多年にわたって知られている［例えば、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９８０，８４，１６２１−１６２９］。異なるサイズの単分散粒子が、Ｐｅｎｇ ｅｔ ａｌ．［ＵＳ２００６／０２１１１５２Ａ１］及びＨｙｅｏｎ ｅｔ ａｌ．［ＷＯ２００６／０５７５３３Ａ１］により公開された方法によって製造できる。しかしながら、この方法によって製造された粒子は、有機溶媒のみに分散可能であり、そのために生体適合性がない。さらに、この方法によって製造された粒子のＳＡＲ値は低い。このような（疎水性）粒子の水中における分散は、主にシェルの改良によって達成可能である［例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．，２００３，３（１１），１５５５−１５５９あるいはＤｅ Ｐａｌｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｍａｔｅｒ，２００７，１９，１８２１−１８３１］。これらの方法は、親水性リガンドを通じての疎水性リガンドの直接交換に基づいている。これらのコーティング方法は、薄い（単分子層）コーティングのみを生じ、本発明の安定した生体適合性コーティングの要件に合致しない。さらに、粒子のコロイド安定性が制限されているため、本発明の粒子はこの方法でコーティングされることはできない。さらに、高度希釈した粒子の分散体のみがコーティングされることができる。このため、工業規模で本発明の粒子の分散体について満足できる技術的解決は存在しない。さらに、分散させるために使用される物質または溶媒は、通常毒性が高い。したがって、生体適合性が制限されてしまう。
【０００５】
生体適合性酸化鉄ナノ粒子も、ＤＥ１９６１４１３６Ａ１のシランによるコーティングにより獲得できるが、この方法は、粒子がすでに水に分散されている場合にのみ適用可能である。その一方、疎水性分子は、簡単にシランやシリカでコーティングすることができない。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、交番磁界においてＳＡＲ値が高い生体適合性磁気ナノ粒子を提供することであって、粒子のコーティングが、厚さ０．５〜１０ｎｍの安定したシリコン含有シェルから構成される。ＳＡＲの決定に使用される交番磁界の強度は、好ましくは３〜１８ｋＡ／ｍであり、その周波数は、１ｋＨｚ〜１００ＭＨｚ、好ましくは１０〜１０００ｋＨｚである。
【０００７】
記載の課題は、請求項１の製造方法、請求項２６のナノ粒子、請求項２８の医薬組成物、請求項３１のナノ粒子の使用によって解決される。
さらなる有利な実施例は、従属請求項、実施例、図面及び明細書に起因する。
【０００８】
本発明は、安定した、シリコン含有シェルを備えた生体適応性のあるナノ粒子に関し、その厚みは好ましくは０．５〜１０ｎｍであり、より好ましくは１ｎｍ〜６ｎｍ、さらに好ましくは２ｎｍ〜４ｎｍ、最も好ましくは３ｎｍからであり、交番磁界におけるＳＡＲ値が高く、交番磁界の強度が好ましくは３〜１８ｋＡ／ｍであり、その周波数が好ましくは１０〜１０００ｋＨｚである。
【０００９】
本発明によれば、ＳＡＲ値の高い粒子が以下のステップを含む方法によって製造可能である。
Ａ１）少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ１に、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａの組成物を提供するステップと、
Ｂ１）少なくとも１０分間、ステップＣ１）に従って、該組成物を、５０℃から鉄含有化合物Ａの実際の反応温度より５０℃低い温度までの範囲の温度に加熱するステップと、
Ｃ１）該組成物を、２００℃〜４００℃の温度に加熱するステップと、
Ｄ１）得られた粒子を精製するステップと、
Ｅ１）精製されたナノ粒子を、水または酸の水溶液に懸濁するステップと、
Ｆ１）ステップＥ１）で得られた水溶液に、表面活性化合物を加えるステップと、
Ｇ１）超音波を使って、ステップＦ１）の水溶液を処理するステップと、
Ｈ１）請求項Ｇ１）で得られた粒子の水分散液を精製するステップと、
Ｉ１）水及び水と混ざる溶媒を含む溶媒混合液中で、ステップＨ１）の粒子の分散体を製造するステップと、
Ｊ１）ステップＩ１）の溶媒混合液における粒子の分散体に、アルコキシシランを加えるステップと、
Ｋ１）該粒子を精製するステップ。
【００１０】
ステップＡ１〜Ｋ１は、通常続いて起き、追加のステップＡ２がステップＡ１の後でステップＢ１の前に発生、及び／または追加のステップＢ２がステップＢ１の後でステップＣ１の前に発生することができる。同様に、ステップＣ１、Ｄ１、Ｅ１、Ｆ１、Ｇ１、Ｈ１、Ｉ１、Ｊ１またはＫ１の後に、選択的に酸化ステップＣ２、Ｄ２、Ｅ２、Ｆ２、Ｇ２、Ｈ２、Ｉ２、Ｊ２またはＫ２を続けることも可能である。本願では、ステップＣ２、Ｄ２、Ｅ２、Ｆ２、Ｇ２、Ｈ２、Ｉ２、Ｊ２またはＫ２は、ステップＸ２とも表される。追加のステップＡ２、Ｂ２及び／またはＸ２は選択的であり、本発明の性能にとって重要ではない。
【００１１】
さらに、選択した反応温度または選択された鉄含有化合物Ａまたは選択されたその他の化合物によって、反応パラメータを適応させて最適化することは当業者の平均的な能力の一部である。例えば、各反応の加熱時間Ｂ１の持続時間を、当業者によって最大ＳＡＲを備えた粒子が形成されるように最適化することができる。最小加熱時間の持続時間は、１０分である。加熱時間は温度が上がるにつれて短くなることが当業者には明らかである。同様に、ステップＣ１における加熱率、最終温度、最終温度の持続時間は、最大ＳＡＲを備えた粒子が形成されるように当業者によって適合されることができる。
【００１２】
粒子は、粒子の直径がナノメートル範囲にあるナノ粒子であるのが好ましく、ナノ粒子は、本発明の方法に従って得られてもよい。
使用された複数の鉄含有化合物Ａまたは使用された１つの鉄含有化合物Ａは、鉄錯化合物、鉄カルボニル化合物、鉄塩、特に飽和または不飽和脂肪酸の鉄塩、有機鉄化合物、及び鉄サンドイッチ錯体を含むまたはそれらからなるグループから選択されるのが好ましい。
【００１３】
鉄カルボニル化合物としては、鉄ジカルボニル（Ｆｅ（ＣＯ）2）、鉄テトラカルボニル（Ｆｅ（ＣＯ）4）または鉄ペンタカルボニル（Ｆｅ（ＣＯ）5）が挙げられ、鉄塩の例としては、二塩化鉄、二臭化鉄、二フッ化鉄、二ヨウ化鉄、三塩化鉄、三臭化鉄、三フッ化鉄、三ヨウ化鉄、硫酸鉄（ＩＩ）、硫酸鉄（ＩＩＩ）、酢酸鉄、シュウ酸鉄、硝酸鉄（ＩＩ）、硝酸鉄（ＩＩＩ）、炭酸鉄、水酸化鉄（ＩＩ）、水酸化鉄（ＩＩＩ）、リン酸鉄、二リン酸三鉄がある。フェロセンは、鉄サンドイッチ錯体の例であり、鉄アセチルアセトナートは、鉄複合化合物の例である。有機金属鉄化合物としては、例えば、酢酸鉄（ＩＩ）、アクリル酸鉄（ＩＩＩ）、オレイン酸鉄（ＩＩＩ）、エトキシド鉄（ＩＩＩ）などのアルコキシド鉄、あるいはまた、アセチル−シクロブタジエン−鉄−トリカルボニル、ブタジエン−鉄−トリカルボニル及びオレフィン−鉄−テトラカルボニルなどの鉄カルボニル化合物が考えられる。
【００１４】
有機溶媒ＬＭ１としては、あらゆる高沸点溶媒を用いることができる。好ましいものとしては、高沸点のアミン、アルカン、オレフィン、アルコールまたはエーテルを含むまたはそれらからなるグループの溶媒である。さらに、ジオール（アルカンジオール）のモノエーテル及びジエーテル、トリオール（アルカントリオール）のモノエーテル、ジエーテル、トリエーテル、アルキレン−グリコール−モノエーテル、アルキレン−グリコール−ジエーテル、エチレン−グリコール−モノエーテル、エチレン−グリコール−ジエーテル、プロピレン−グリコール−モノエーテル、プロピレン−グリコール−ジエーテル、グリセリン−モノエーテル、グリセリン−ジエーテル、グリセリン−トリエーテル、及びグリコール−ジエーテル（グリム）が使用できる。溶媒Ｌ２もまた、上記のグループから選択されることができる。
【００１５】
特に好ましい溶媒ＬＭ１及びＬＭ２は、最小沸点が２００℃のグリコール−ジエーテル（“グリム”とも呼ばれる）である。鉄塩（例えば塩化物）からナノ粒子を製造するためには、エチレングリコールも適当である。基本的に、溶媒の沸点は１５０℃を超えるべきで、さらに好ましいのは１７５℃を超え、特に好ましいのは２００℃を超えることである。
【００１６】
少なくとも１つの鉄含有化合物Ａが、溶媒ＬＭ１において分散、溶解または懸濁され、得られた組成物はその後、最低１０分間、ステップＣ１に従って、５０℃から鉄含有化合物Ａの実際の反応温度より５０℃低い温度までの範囲の温度に加熱される。実際の反応温度は、粒子形成のための温度として理解され、２００℃〜４００℃の範囲である。したがって、ステップＢ１の核生成の温度は、５０℃〜最大３５０℃の範囲であるが、ステップＣ１温度より少なくとも５０℃常に下回る。したがって、有機触媒ＬＭ１または有機触媒ＬＭ１の混合物における１つ以上の鉄含有化合物Ａの加熱は、ステップＣ１の化合物Ａの粒子形成のための実際温度より約５０℃低い温度で実施されるのが好ましい。
【００１７】
ステップＢ１）の粒子形成前のこの加熱フェーズは、その後の規定の粒子形成を可能にするいわゆる種の形成のために使用される。加熱フェーズの時間は、ステップＣ１）において生成される、結果として生じる粒子、好ましくはナノ粒子、のＳＡＲに大きな影響を与える。高いＳＡＲを有する粒子またはナノ粒子を製造するため、最低１０分間、好ましくは最低３０分間、特に好ましくは最低４０分間、到達した温度が維持される。したがって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａ及び少なくとも１つの溶媒ＬＭ１の化合物は、好ましくは３０〜５０分間、上記に特定される温度に加熱されるべきである。
【００１８】
使用される鉄含有化合物Ａによって、ステップＣ１）の粒子形成のための実際の反応温度より約１００℃〜３００℃、好ましくは約１３０℃〜２７０℃、よく好ましくは約１５０℃〜２５０℃、さらに好ましくは約１７０℃〜２３０℃、さらに好ましくは約１８０℃〜２２０℃、さらに好ましくは約１９０℃〜２１０℃、そして特に好ましくは約２００℃以下の温度を目標とするのが好ましい一方で、目標とされた温度は、７０℃、好ましくは９０℃、特に好ましくは１００℃を下回らない。第１加熱フェーズの間の温度が、ステップＢ１）に従って、１００℃〜１５０℃で維持されるのが好ましい。
【００１９】
種の形成に影響を与えるあるいはそれを促進するために、ステップＡ２）に従って、添加物または表面活性化合物を加えてもよい。本願で使用される“添加物”または“表面活性化合物”という用語は、大部分の添加物は表面活性化合物でもあるが、必ずしも全ての添加物にそれが当てはまるわけではないという文脈に立つ。従って、どの表面活性化合物も添加物と称されることができるが、どの添加物も表面活性化合物と称されることができるわけではない。これには、テンサイド（tensides）、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、またはポリマーが含まれる。ポリマーの例は、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、デキストラン、ＰＬＧＡ，キチン、フィブリン、ヘパリン、キトサン及びポリエチレンイミンである。
【００２０】
ステップＢ１）の加熱フェーズ後、実際の粒子形成がステップＣ１）で行われる。ステップＢ１）で形成された粒子種を、５００℃まで、好ましくは２００℃〜４００℃の温度に加熱する。
【００２１】
これにより、鉄含有粒子、好ましくは鉄含有ナノ粒子が、粒子種及び余分の鉄含有化合物Ａから形成される。
鉄含有化合物Ａの全量とではなく、Ｂ１）の種形成ステップ後に、ステップＢ２）における有機溶媒Ｌ２中の鉄含有化合物Ｂをさらに加えて、Ｂ１）の加熱フェーズを開始及び実行すると有利であることがわかっている。
【００２２】
少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂは、上述した鉄含有化合物のグループから選択されることができ、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａと同一あるいは異なっていてもよい。
同じことが、上述した溶媒ＬＭ１のグループから選択されることができ、溶媒ＬＭ１と同一あるいは異なっている有機溶媒Ｌ２にも当てはまり、溶媒ＬＭ１とＬＭ２が同一であることが好ましい。
【００２３】
従って、種形成ステップＢ１）の後に、新しい鉄含有化合物Ｂが、好ましくは同じ溶媒（ＬＭ１＝ＬＭ２）に追加され、それにより得られたＣ１）の化合物が、５００℃までの温度、好ましくは２００℃〜４００℃の範囲の温度に加熱されるのが好ましい。ＬＭ１及びＬＭ２の最低沸点が、２００℃であるのが好ましい。
【００２４】
これにより、溶媒ＬＭ２における少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂの追加後に、実際の粒子が製造される。鉄含有化合物Ｂと共に、さらなる添加物が、ステップＢ１後に得られた化合物に追加されてもよい。これらの添加物もまた、溶液にすでに存在するのと同じ添加物から強制的に選択される必要はないが、そうするのが好ましい。
【００２５】
この場合もまた、添加物の、追加された鉄含有化合物Ｂの量と、溶媒Ｌ２の種類及び量とが、ＳＡＲが最大の粒子が形成されるように当業者によって適合される。
前述したように、必要とされる鉄含有化合物の総量を、ステップＡで追加することができるため、ステップＢ）が好ましいが、必須ではない。ステップＢ１）の第１加熱フェーズの後にさらなる鉄含有化合物Ｂが追加されなくても、さらなる添加物をステップＢ２）として追加でき、その添加物は、化合物中にすでに存在する添加物と同じであるべきである。従って、ステップＢ２）として、添加物のみあるいは鉄含有化合物Ｂのみあるいはそれらの両方を同時にあるいは順次、ステップＢ２）として追加できる。
【００２６】
ステップＣ１）の第２加熱フェーズの持続時間は、少なくとも３０分間、好ましくは１−３０時間、より好ましくは１０−２０時間、特に好ましくは１５時間である。
驚くべきことに、ＳＡＲは、加熱フェーズの延長により、あるいは単に加熱フェーズをより長くすることにより、さらに増加することが明らかになった。そのため、長い加熱フェーズ、また特に追加の焼戻しフェーズが好ましい。特にステップＣ１）において、加熱フェーズは、１０時間より長いのが好ましく、１４時間より長いのがより好ましい。
【００２７】
Ｄ１*及び／またはＤ２*としてのステップＤ１の後に選択的に続く焼戻しフェーズは、ＳＡＲをさらに増加でき、そのため１０時間より長い、より好ましくは１４時間より長い、特に好ましくは１８時間より長いのが好ましい。したがって、焼戻しフェーズは、１−３０時間、好ましくは１０−２５時間、より好ましくは１３−２２時間、特に好ましくは１５−２０時間かかる。
【００２８】
結果として生じる粒子のＳＡＲは、加熱フェーズＢ１）の持続時間の変化により、ステップＣ１）における最終温度及び最終温度の維持時間により、及びステップＣ１）において追加した鉄化合物または添加物の量により、改変可能で、その結果、ＳＡＲが最大の粒子が形成される。これらのパラメータは、使用される鉄化合物の種類と溶媒及び添加物の種類に依存する。したがって、加熱フェーズは、どのシステムにも適応していなければならず、その結果、当業者によって容易に自身の特別な知識に基づいて実行されることができる。
【００２９】
製造された発明の粒子のＳＡＲは、１００ｋＨｚの交番磁界の周波数で、４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき１０−４０Ｗ、好ましくは４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき２０−４０Ｗ、より好ましくは４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき２５−４０Ｗ、特に好ましくは４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき３０−４０Ｗである。
【００３０】
以下に発明の粒子の製造のためのシステムのいくつかの例と、製造された粒子のＳＡＲ値とを示す。例（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）は、４ｋＡ／ｍの磁界強度及び１００ｋＨｚの交番磁界の周波数で、Ｆｅ１ｇにつき２０−４０ＷのＳＡＲ値及びの発明の粒子になる。“Ｆｅ”という用語は、Ｆｅ0、Ｆｅ+2、Ｆｅ+3の総鉄量をさす。
【００３１】
【表１】
【００３２】
上記の表１において、“添加物なし”とは、本発明による合成が、各欄に記載の組成物を用いて、ただし添加物を加えずに、実行されたことを意味する。表１に記載の組成物は、実施例１及び３Ａまたは２及び３Ａ（ステップＡ１〜Ｃ２）に従って使用され、その後、全てのシステムが、実施例４−６及び４−７に従ってさらに使用された。追加的な焼戻しフェーズ（実施例７；ステップＤ１*またはＤ２*）の適用によって、ＳＡＲが約５ｋＡ／ｍで約５Ｗ／ｇ Ｆｅ増加できることが明らかになった。表１に示すＳＡＲ値は、４ｋＡ／ｍの磁界強度及び１００ｋＨｚの交番磁界の周波数についてのものである。
【００３３】
【表２】
【００３４】
フェーズＡ）及びＣ）は、大気中での標準圧力下または保護ガス圧力下（アルゴン、窒素）または４００バールまでの圧力下の反応加圧滅菌器において選択的に実行されることができる。
【００３５】
ステップＣ１）の第２加熱フェーズの後には、酸化フェーズＸ２）が続けられる。酸化フェーズＸ２）は選択的であり、ステップＣ１の直後に必ずしも続く必要はないが、ステップＣ１〜Ｋ１）のうちのどれかの後にも起きることができる。粒子は、ここでは、大気中の酸素の伝導により酸化されるのが好ましい。大気中の酸素の伝導は、４〜２４時間、好ましくは８〜１６時間、そしてさらに好ましくは２０℃〜５０℃で行われる。しかしながら、他の揮発性酸化剤あるいは酸素（純）などの蒸留により除去可能な酸化剤、過酸化水素あるいはアミンオキシドなどのその他の有機酸化剤もまた使用可能である。したがって、ステップＣ１）〜Ｋ１）の後に酸化ステップＸ２）が続くのが好ましい。この場合、Ｘは文字Ｃ〜Ｋの変数であり、どのステップの後に酸化が行われるかによって決まる。選択的な酸化がステップＥ１）の後に実行される場合、酸化はステップＥ２）と称され、Ｋ１の後に実行される場合、酸化ステップはＫ２）と称される。さらに、酸化ステップは複数回繰り返されてもよいし、あるいはさらなる酸化ステップＸ２’がさらなる手続きステップの後に続いてもよい。ただし前記は可能であるけれども好ましくない。したがって、本発明の方法は、第１酸化ステップＸ２（例えばＦ２）及び第２酸化ステップＸ２’（例えばＨ２’）を含むことができる。すでに部分的にまたは完全に酸化された状態にある粒子については、もちろん、さらなる酸化は不要である。通常、大気下における酸化は自動で開始するため、追加的な酸化、例えば自動で開始する酸化に対する酸化ステップＸ２の追加は不要である。酸化ステップＸ２は、絶対に必要というわけでなくても実行されてもよい。なぜなら害がないことが明らかになっているためである。
【００３６】
ステップＣ１に従って形成された粒子、好ましくはナノ粒子は、精製される必要がある。このステップは、本発明にとって不可欠で重要である。精製されていない粒子の使用は、水中でよく分散し、ひいてはＳＡＲが高い本発明の粒子を製造しない。この精製は、無極性溶媒における粒子の分散がそれ以上起きなくなるまで、ステップＤ１に従って好ましくはソックスレー抽出によって行われる。驚いたことに、添加物及び特にステップＡ２）及び／またはＢ２）からの表面活性化合物が、可能な限り、粒子から完全に洗い落とされる、すなわち再び大部分除去されることが、水中での後の分散［ステップＦ１）］に不可欠であることがわかった。“可能な限り”及び“大部分”という用語それぞれは、７０−１００％の範囲、好ましくは９０％までの添加物の除去として理解される。したがって、添加物は、７０％を越えて、好ましくは８０％を越えて、より好ましくは９０％を越えて、特に好ましくは９５％を超えて、粒子から除去される。前述した割合は、粒子に付着した添加物についてのものである。自由な添加物、すなわち溶液中を自由に浮遊する添加物であって粒子により吸収されない添加物は、例えば９５％より多く、好ましくは９８％より多く、遠心分離によって大部分除去されることができる。粒子に付着している残りの添加物の量は、例えば元素分析または赤外分光法によって決定できる。その割合は、本願では重さ（重量％）を表す。粒子に付着してない添加物は、遠心分離により除去され、粒子に付着している粒子は、形成された粒子のソックスレー抽出により除去されるのが好ましく、超音波によりサポートされる抽出もまた使用可能である。この使用のために、ナノ粒子は、次の精製ステップが起きる前に、まず遠心分離により分離される。
【００３７】
ソックスレー抽出に使用される溶媒は、アルコール、ケトン、エーテルまたはエステルのような電流極性有機溶媒であってもよい。アセトン、エチルアセテートまたはエタノールが好ましい。
【００３８】
抽出時間は、１〜８時間、好ましくは２〜６時間、特に好ましくは約４時間である。重要なのは、鉄含有粒子、好ましくはナノ粒子が、抽出後に、トルオール、キシロールまたはヘキサンなどの無極性溶媒においてそれ以上分散可能でないという点である。しかしながら、この場合には、抽出時間を調整する必要がある。そのようにして精製されたナノ粒子の粉末は、真空状態下で乾燥される。
【００３９】
粒子の結晶化度を高めるために、いくつかの“焼戻しフェーズ”を、ステップＤ１後に続けることができる。これらの焼戻しフェーズは、数時間、４００℃までの高沸点溶媒において実行可能である。溶媒は、最低沸点が２００℃、好ましくは３００℃であれば高沸点と称される。焼戻し処理は、本願では空気中または保護ガス（例えばアルゴン）下で行うことができる。約２００℃〜２５０℃の温度で、反応が保護ガスなしで行われるのが好ましく、約２００℃〜２５０℃より高い温度で、反応が保護ガス下で行われるのが好ましい。その代わりに、ナノ粒子は、保護ガス下では１０００℃までの温度で（溶媒なしの）粉末として焼戻しされることができる。好ましい保護ガスは、アルゴンまたはＣＯ2／Ｈ2混合物である。この少なくとも１つの焼戻しステップは、ステップＤ１の後にステップＤ１*として、あるいは酸化ステップＤ２の後にＤ２*として続く。
【００４０】
Ｘ＝ＣまたはＤまたはＥまたはＦまたはＧまたはＨまたはＩまたはＪまたはＫのステップＸ２の酸化が、Ｆｅ（ＮＯ3）3の追加及び連続する環流下での沸騰を伴う０．５〜２Ｍ ＨＮＯ3、好ましくは１Ｍ ＨＮＯ3で粒子を懸濁することによって実行されることができるのが好ましい。ＦｅＯxに対するＦｅ（ＮＯ3）3の割合または一般にＦｅＯxに対するＦｅ（ＩＩＩ）の割合は、１：２であるのが好ましい。この酸化処理は、粒子のＳＡＲに有利な効果を有するために好ましい。このステップは、Ｆｅ（ＮＯ3）3に制限されず、例えば、ＦｅＣｌ3、ＦｅＰＯ4などのその他のＦｅ（ＩＩＩ）塩もまた使用されることができることは留意されるべきである。
【００４１】
精製された粒子またはナノ粒子の分散は、ステップＥ１）及びＦ１）の表面活性化合物を使用したリバーシブルコーティングによって水中で行われる。
このステップでは、粒子またはナノ粒子の精製された粉末が、水中で懸濁され、親水性層が、後で容易に除去できるような方法でドッキングされる。最初に、このコーティングの固形分（酸化鉄）を、好ましくは２−２０％、より好ましくは３−１２％、さらに好ましくは５−８％、さらに好ましくは６−７％、特に好ましくは６．５％に設定する。粒子をより細かく分散させるためには、塩酸または硝酸などの酸、好ましくはＦ１）の鉱酸を、表面活性化合物を加える前に加えることができる。それにより、２−６、好ましくは３−５、特に好ましくは約４のｐＨ値が得られる。
【００４２】
酸は、好ましくは、塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ホウ酸または硝酸などの鉱酸から選択可能である。しかしながら、粒子の表面に不可逆的に結合していない酸、好ましくは鉱酸を使用することが重要である。鉱酸が好ましく、アミノ酸とカルボン酸は避けるべきであることが実験で明らかになっている。しかしながら、以下の酸は、基本的に本発明の方法において使用可能である：スルホン酸、硝酸、過塩素酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルオール（toluol）スルホン酸、ナフタレレ(naphtalele)スルホン酸、ナフチル(naphtyl)アミンスルホン酸、スルファニル酸及びカンファースルホン酸。
【００４３】
水溶液のｐＨが酸または鉱酸によって設定される場合、少なくとも１つの表面活性化合物の追加を、ステップＦ１）に従って行う。少なくとも１つの表面活性化合物は、飽和及び特に不飽和脂肪酸の塩を含むまたはそれらから構成されるグループから選択されるのが好ましい。さらに、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、デキストラン、ＰＬＧＡ、キトサン及びポリエチレンイミンなどのテンサイド(tensides)またはポリマーが使用可能である。
【００４４】
飽和脂肪酸の例は：酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸及びリグノセリン酸である。
【００４５】
好ましい不飽和脂肪酸またはその塩の例としては、どんな脂肪酸であってもよく、例えば、シス−９−テトラデセン酸（ミリストレイン酸）、シス−９−ヘキサデセン酸（パルミトレイン酸）、シス−６−オクタデセン酸（ペトロセリン酸）、シス−９−オクタデセン酸（オレイン酸）、シス−１１−オクタデセン酸（バクセン酸）、シス−９−エイコセン酸（ガドレイン酸）、シス−１１−エイコセン酸（ゴンド酸）、シス−１３−ドコセン酸（エルカ酸）、シス−１５−テトラコセン酸（ネルボン酸）、ｔ９−オクタデセン酸（エライジン酸）、ｔ１１−オクタデセン酸（トランス−バクセン酸）、ｔ３−ヘキサデセン酸、９，１２−オクタデカジエン酸、（リノレン酸）、６，９，１２−オクタデセン酸（γ−リノレン酸）、８，１１，１４−エイコサトリエン酸（ジホモ−γ−リノレン酸）、５，８，１１，１４−エイコサトリエン酸（アラキドン酸）、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸（α−リノレン酸）、６，９，１２，１５−オクタデカトリエン酸（ステアリドン酸）、８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、５，８，１１−エイコサトリエン酸（ミード酸）、９ｃ，１１ｔ，１３ｔ−エレオステアリン酸、８ｔ，１０ｔ，１２ｃ−カレンジン酸(calendinoic acid)、９ｃ，１１ｔ，１３ｃ−カタルピン酸(catalpinoic acid)、４，７，９，１１，１３，１６，１９−ドコサヘプタデカン酸（ステラヘプタエン酸）、タキソール酸(taxolic acid)、ピノレン酸、スシアドン酸(sciadonic acid)、６−オクタデシン酸(octadecinoic acid)（タリリン酸(taririnic acid)）、ｔ１１−オクタデセン(octadecinoic)−９−イン酸(inoic acid)（サンタルビン(santalbinic)またはキシメニン(ximeninic)酸）、９−オクタデシン酸(octadecinoic acid)（ステアロリン酸(stearolinoic acid）、６−オクタデセン(octadecen)−９−イン酸(inoic acid)（６，９−オクタデセニン酸(octadeceninoic acid)）、ｔ１０−ヘプタデセン(heptadecen)−８−イン酸(inoic acid)（ピルリン酸(pyrulinic acid)）、９−オクタデセン(octadecen)−１２−イン酸(inoic acid)（クレペニン酸(crepeninic acid)）、ｔ７，ｔ１１−オクタデカジエン(octadecadien)−９−イン酸(inoic （ヘイステリン酸heisterinic acid））、ｔ８，ｔ１０−オクタデカジエン(octadecadien)−１２−イン酸(inoic acid)、５，８，１１，１４−エイコサテトライン酸(eicosatetrainoic acid)（ＥＴＹＡ）及びｔ８，ｔ１０−オクタデカジエン(octadecadien)−１２−イン酸(inoic acid)などである。脂肪酸の塩は、アルカリ及びアルカリ土類イオンで形成されるのが好ましい。
【００４６】
ナノ粒子の表面活性化合物に対する質量比は、好ましくは１：０．０２〜１：１０、より好ましくは１：０．１〜１：２、特に好ましくは１：０．５である。
表面活性化合物の追加後、ステップＧ１）の懸濁液を、最低３０分間、超音波で処理するのが好ましい。
【００４７】
その後、懸濁液を、好ましくは３０℃〜７０℃、より好ましくは５０℃〜６０℃、特に好ましくは４０℃の温度で約２時間攪拌する。その後、ステップＩ１）に従って精製を行う。分散しない粒子は、好ましくは遠心分離（１０００Ｕ／分）によって分離する。
【００４８】
分子の分散体は、コーティング直後の過剰な表面活性物質を除く必要がある。この精製は、透析またはジエチルエーテル抽出によって行うことができる。代わりに、粒子を、超遠心分離機を使用して遠心分離し、水及び水とジエチルエーテルとの混合物で洗浄してもよい。
【００４９】
その後、粒子の脂肪酸ベースのコーティングは、ステップＩ１）及びＪ１）に従って、シリコン含有生体適合性シェルと交換される。
シェルの交換のために、粒子は、水及びステップＩ１）の水と混合可能な少なくとも１つの溶媒との混合物中に分散していなければならない。水と混合可能な溶媒としては、アルコール、ポリオール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチル−アセトアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸、ギ酸、メチル−ギ酸エステル、エチル−ギ酸エステル、メチル−酢酸エステル、エチル−酢酸エステル及びその他が挙げられる。
【００５０】
しかしながら、アルコールが特に好ましい。アルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール及びエチレングリコールを含むまたはそれらから構成されるグループから選択されるのが好ましく、その中でもエタノールが好ましい。
【００５１】
水とアルコール、水とエタノールそれぞれの混合比は、好ましくは１：１〜１：５、特に好ましくは１：３である。これにより、脂肪酸シェルの除去とシリコン含有シェルによる交換とを並行して行うことができる。
【００５２】
さらに、アルコールと水との混合物が、１−５重量％、さらに好ましくは１−３重量％、特に好ましくは１．５重量％のアミン、好ましくは１級アミン、特に好ましくはアンモニアを含むのが好ましい。
【００５３】
溶媒の混合物、特にアルコールと水との混合物、好ましくはステップＩ１）の水とエタノールとの混合物へのナノ粒子の分散体の追加の直後に、適当なアルコキシシランを加えなればならない。アルコキシシランの追加は、超音波処理下で行うべきである。適当なアルコキシシランは、好ましくは、アミノ基、チオール基及び／またはエポキシ基などのＳｉ−Ｃ結合により連結された官能基を有する、テトラメトキシシラン及びテトラエトキシシランなどのあらゆるテトラアルコキシシラン、トリアルコキシシラン、ジアルコキシシラン、及びモノアルコキシシランである。
【００５４】
シェルの交換をスムーズに進めるために、鉄とアルコキシシランとのモル比は、１：１〜１：５、好ましくは１：３にするべきである。
反応物の追加後、分散体は、ステップＪ１）に従って、１−８時間、好ましくは３−５時間、特に好ましくは４時間、超音波で処理される。その後、好ましくは水に対する透析により、粒子の精製が行われる。代わりに、高いＧ値で粒子を遠心分離して、超純水で沈殿物を洗浄することにより、精製を行ってもよい。
【００５５】
さらに、本発明は、本願に開示される方法で得ることが可能な粒子及び好ましくはナノ粒子にも言及する。
本発明の鉄含有粒子はそれ自身、強磁性、フェリ磁性、あるいは超常磁性を有する。このような粒子またはナノ粒子は、交番磁界により温めることができる。これらの粒子またはナノ粒子を含む組織を５０℃より高い温度に温めることが可能である。なぜなら、本発明によると、粒子やナノ粒子は、ＳＡＲ値が高いからである。
【００５６】
本発明に従って製造される鉄含有粒子の最低ＳＡＲ値は、６ｋＡ／ｍの磁界強度で、１８、好ましくは２０、特に好ましくは２２ｍＷ／ｍｇ Ｆｅである。
粒子の直径は、５００ｎｍより小さいのが好ましい。ナノ粒子の平均直径は、好ましくは２０ｎｍであり、または好ましくは１−１００ｎｍのサイズ範囲、特に好ましくは１５−３０ｎｍのサイズ範囲にある。
【００５７】
ナノ粒子の安定したシリコン含有シェルの厚さは、０．５〜１０ｎｍ、好ましくは３ｎｍである。
シリコン含有シェルは、さらなるアルコキシシランによって官能基化されて、粒子の特性を変更することができる。これらは、Ｓｉ−Ｃ結合により連結された官能基を有するトリアルコキシシランであるのが好ましい。その例は、（３−アクリルオキシプロピル）トリメトキシシラン、トリエトキシシリル−ブチルアルデヒド、３−アミノ−プロピルトリエトキシシラン、及び３−イソシアナート−プロピルトリエトキシシランである。トリエトキシシランは、異なる長さのＳｉ−Ｃ結合ポリエチレングリコール側鎖を有していてもよい。この例としては、２−［メトキシ（ポリエチレンオキシ）プロピル］トリメトキシシランが挙げられる。
【００５８】
本発明の鉄含有粒子は、薬の分野で使用されることができ、例えば水溶液の形で注入することができる。本発明の鉄含有粒子は、増殖性疾患、がん、腫瘍、リューマチ、関節炎、関節症、及び細菌感染の処置及び予防に使用できる。
【００５９】
さらに、本発明は、本発明のナノ粒子を含む医薬組成物、及びそのような医薬組成物の調合のための本発明のナノ粒子の使用に言及する。
これらの医薬組成物は、特に点滴または注射のための溶液中に存在する。例えば生理食塩水中の、このようなナノ粒子の溶液は、間質あるいは腫瘍内での応用に適している。さらに、動脈内または静脈内の応用は、非固形及び／または転移形成型の腫瘍のための全身に影響を与える全身治療の選択を可能にする。
【００６０】
さらに好ましい医薬組成物は、本発明の鉄含有粒子を含む粉末、吸入粉末及び凍結乾燥品である。
本発明のナノ粒子及び医薬組成物は、変性細胞種または外因性細胞により特徴付けられる病気の処置及び予防のために使用されるのが好ましく、そのために、外因性または変性細胞と身体自身の健康な細胞とを区別するナノ粒子の特徴を利用できる。変性細胞としては、特にがん細胞または増殖障害及び狭窄または再狭窄組織の細胞が考えられる。外因性細胞の例は、特に細菌である。
【００６１】
したがって、本発明のナノ粒子とナノ粒子を含む医薬組成物とは、腫瘍、癌及びがんの予防及び治療のために使用される。
本発明のナノ粒子を使用可能ながん及び腫瘍の種類の例は、腺癌、脈絡膜黒色腫、急性白血病、聴神経鞘腫、膨大部癌、肛門癌、星細胞腫、基底細胞癌、膵臓がん、結合組織腫瘍、膀胱がん、肺癌、非小細胞気管支癌、乳がん、バーキットリンパ腫、体癌（corpus carcinoma）、ＣＵＰ（原発不明癌）症候群、大腸がん、小腸がん、小腸腫瘍、卵巣がん、子宮内膜癌、上衣腫、上皮がん、ユーイング腫瘍、消化管腫瘍、胆嚢がん、胆道癌(gall carcinomas)、子宮がん、子宮頸がん、膠芽腫、婦人科腫瘍、耳、鼻、喉の腫瘍、血液腫瘍(hematological neoplasias)、有毛細胞白血病、尿道がん、皮膚がん、脳腫瘍（グリオーマ）、脳転移、精巣がん、下垂体腫瘍、カルチノイド、カポジ肉腫、喉頭がん、胚細胞腫瘍、骨がん、結腸直腸癌、頭頸部腫瘍（首、鼻、耳の部位に位置する腫瘍）、結腸癌、頭蓋咽頭腫、口の周辺及び唇のがん、肝臓がん、肝転移、白血病、まぶたの腫瘍、肺がん、悪性リンパ腫（ホジキンリンパ腫/非ホジキンリンパ腫）、リンパ腫、胃がん、悪性黒色腫、悪性腫瘍、胃腸管の悪性腫、乳癌、直腸がん、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、ホジキン病、菌状息肉腫、鼻のがん、神経鞘腫、神経芽腫、腎臓がん、腎細胞癌、非ホジキンリンパ腫、乏突起膠腫、食道癌、骨破壊性腫瘍及び造骨性腫瘍、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、形質細胞腫、頭頸部の扁平上皮癌、前立腺がん、咽頭がん、直腸癌、網膜芽細胞腫、膣がん、甲状腺癌、シュネーベルガー肺がん、食道がん、有棘細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉腫）、胸腺腫、管癌(tube carcinoma)、眼腫瘍、尿道癌、泌尿器系腫瘍、尿路上皮癌、外陰癌、性器疣贅(wart appearance)、軟部組織腫瘍、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌及び舌がんである。
【００６２】
固形腫瘍が特に好ましい。さらに、好ましいのは、前立腺癌、脳腫瘍、肉腫、子宮頚癌、卵巣癌、乳癌、気管支癌、黒色腫、頭頸部腫瘍、食道癌、直腸癌、膵臓癌、膀胱及び腎臓癌、肝臓、脳及びリンパ節における転移である。
【００６３】
特に好ましいのは、本発明のナノ粒子を、従来の温熱療法、放射線療法及び／または従来の化学療法と組み合わせて応用及び使用することである。
さらに、本発明の磁気及び好ましくは超常磁性の粒子は、抗がん剤の活動を活発にし、付加的にその副作用を減少する。
【００６４】
従って、本発明に従って製造された粒子は、抗がん剤、すなわち細胞毒性及び／または細胞増殖抑制化合物、すなわち細胞毒性及び／または細胞増殖抑制作用を備えた化合物、と組み合わせて使用されるのが好ましい。抗がん薬の例には、とりわけ、アルキル化剤、細胞増殖抑制作用のある抗生物質、代謝拮抗剤、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、白金含有化合物及びその他の細胞増殖抑制剤、アスパラギナーゼ、トレチノイン、アルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン及びミルテホシン(miltefosine)（登録商標）、ホルモン、免疫調節剤、モノクローナル抗体、シグナル伝達分子（シグナル伝達のための分子）、キナーゼ阻害剤及びサイトカインが含まれる。
【００６５】
アルキル化剤の例としては、とりわけクロレタミン、シクロホスファミド、トロホスアミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾロマイド、トレオスルファン、エストラムスチン及びニムスチンが含まれる。
【００６６】
細胞増殖抑制作用を持つ抗生物質の例としては、ダウノルビシン及びリポソームダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ダクチノマイシン、マイトマイシン Ｃ、ブレオマイシン、エピルビシン（４−エピ−アドリアマイシン）、イダルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン及びアクチノマイシン Ｄが含まれる。
【００６７】
メトトレキサート、５−フルオロウラシル、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、フルダラビン、クラドリビン、ペントスタチン、ゲムシタビン、シタラビン、アザチオプリン、ラルチトレキセド、カペシタビン、シトシン、アラビノシド、チオグアニン及びメルカプトプリンを、代謝拮抗剤（代謝拮抗薬）の例として挙げることができる。
【００６８】
アルカロイド及びポドフィロトキシンの種類に含まれるのは、とりわけ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エトポシド及びテニポシドである。さらに、白金含有化合物を、本発明に従って使用することができる。シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンが、白金を含有する化合物の例である。微小管阻害剤として数えられるのは、例えば、ヴィンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン）などのアルカロイド及びパクリタキセル（タキソール(Taxol)（登録商標））とパクリタキセルの誘導体である。トポイソメラーゼ阻害剤の例として、エトポシド、テニポシド、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカンが含まれる。
【００６９】
パクリタキセル及びドセタキセルは、タキサン化合物の例で、その他の細胞増殖抑制剤（その他の細胞増殖抑制薬）として数えられるのは、例えば、ヒドロキシカルバミド（ヒドロキシウレア）、イマチニブ、ミルテホシン(Miltefosine)（登録商標）、アムサクリン、トポテカン（トポイソメラーゼ−Ｉ阻害剤）、ペントスタチン、ベキサロテン、トレチノイン及びアスパラギナーゼである。モノクローナル抗体の化合物群の代表としては、とりわけトラスツズマブ（ハーセプチン(Herceptin)（登録商標）としても知られている）、アレムツズマブ（マブキャンパス(MabCampath)（登録商標）としても知られている）及びリツキシマブ（マブテラ(MabThera)（登録商標）としても知られている）が挙げられる。キナーゼ阻害剤の代表としては、ソラフェニブ（ネクサバール(Nexavar)（登録商標））及びスニチニブ（スーテント(Sutent)（登録商標））が挙げられる。ホルモンの例としては、グルココルチコイド（プレドニゾン）、エストロゲン（ホスフェストロール、エストラムスチン）、ＬＨＲＨ（ブセレリン、ゴセレリン、リュープロレリン、トリプトレリン）、フルタミド、酢酸シプロテロン、タモキシフェン、トレミフェン、アミノグルテチミド、フォルメスタン、エキセメスタン、レトロゾール及びアナストロゾールが挙げられる。免疫調節剤、サイトカイン、抗体及びシグナル伝達分子の種類として数えられるのは、インターロイキン−２、インターフェロン−α、エリスロポエチン、Ｇ−ＣＳＦ、トラスツズマブ（ハーセプチン(Herceptin)（登録商標））、リツキシマブ（マブテラ(Mabthera)（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ(Iressa)（登録商標））、イブリツモマブ（ゼヴァリン(Zevalin)（登録商標））、レバミゾール及びレチノイドである。
【００７０】
したがって、本発明はまた、本発明に従って製造された粒子と少なくとも1つの抗がん剤との組み合わせに言及し、少なくとも１つの抗がん剤とは、アクチノマイシン−Ｄ、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、プリン及びピリミジン塩基の拮抗剤、アントラサイクリン、アロマターゼ阻害剤、アスパラギナーゼ、抗エストロゲン剤(anti-estrogenes)、ベキサロテン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カンプトテシン誘導体、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、シトシンアラビノシド、アルキル化細胞増殖抑制剤(alkalyting cytostatics)、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ドセタキセル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ドキソルビシンリポ、エピルビシン、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フルダラビン、フルオロウラシル、葉酸拮抗剤、フォルメスタン、ゲムシタビン、グルココルチコイド、ゴセレリン、ホルモン及びホルモン拮抗剤、ハイカムチン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イリノテカン、レトロゾール、ロイプロリド、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミルテホシン、マイトマイシン、分裂抑制剤、ミトキサントロン、ニムスチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペントスタチン、プロカルバジン、タモキシフェン、テモゾロマイド、テニポシド、テストラクトン、チオテパ、チオグアニン、トポイソメラーゼ阻害剤、トポテカン、トレオスルファン、トレチノイン、トリプトレリン、トロホスファミド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、前記組み合わせを含む細胞増殖抑制効果のある抗生物質及び医薬組成物、などである。
【００７１】
上記の薬は、本発明の粒子との組み合わせとして使用されることができるだけでなく、がん細胞により効率的にインポートされるように、粒子、好ましくはナノ粒子と共有結合されることができる。
【００７２】
本発明のもう一つの側面は、本発明の方法によって得られる粒子に向けられており治療効果のある物質が、粒子またはナノ粒子に共有結合されている。治療効果のある物質は、抗増殖、抗移動(anti-migrative)、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルス及び／または抗真菌薬から選択されることができ、抗増殖、抗移動、抗血管新生、細胞増殖抑制及び／または抗細胞毒性薬及び、抗増殖、抗移動、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルス及び／または抗真菌特性を備えた核酸、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン(glycanes)またはリポタンパク質が好ましい。さらに、これらの物質は、放射線増感剤または増感剤またはそのような増感剤と組み合わされたあるいはそれを含む他の従来のがん治療方法のエンハンサーも含んでいてもよい。
【００７３】
治療活性物質の連結は、それぞれの薬剤によってどの官能基が保持されているかによって、例えば、水酸基、アミノ基、カルボニル基、チオール基またはカルボキシル基を介して行われることが可能である。水酸基は、エステル、アセタールまたはケタールと、チオール基は、チオエステル、チオアセタールまたはチオケタールと、アミノ基は、アミド、そして部分的にイミン（シッフ塩基）と、カルボキシル基は、エステルまたはアミドと、カルボニル基は、ケタールと連結されるのが好ましい。さらに、ナノ粒子の表面の官能基化はよく知られているため、既知の方法を使用して、アミノ基、水酸基、カルボキシル基あるいはカルボニル基が、ナノ粒子の表面に生成される。
【００７４】
ＷＯ９８／５８６７３の特許明細書に記載されているような活性化ナノ粒子の薬物複合体（例えば、ポリマーによる）のさらなるコーティングも可能であり、粒子薬物複合体の生物学的特性を改善するために使用することができる。さらに、標的とする特性を全体的な構成概念に与える分子を連結することもできる（例えば、ポリクロナール抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ハマーナ抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、抗体フラグメント、アプタマー、Ｆａｂ−フラグメント、Ｆｃ−フラグメント、ペプチド、ペプチドミメティクス、ギャップミア、リボザイム、ＣｐＧ−オリゴマー、ＤＮＡ−ザイム、リボスイッチ、または脂質）。すべてのさらなる変更が、標的部位での治療活性物質の活性化可能な放出に支障を来たさないことが重要である。
【００７５】
さらに、治療活性物質が直接ナノ粒子に結合されずに、リンカー分子を使って固定されるのが好ましい。リンカーとしては、リンカーに、熱により、光化学的にまたは酵素的に開裂できる基、酸に不安定な基または他の手段により簡単に分離できる基が含まれていることを条件に、最大５０の炭素原子の分子を持つ多様な分子を使用できる。リンカー分子内部での結合及び／またはリンカーの薬との結合及び／またはリンカーのナノ粒子の表面への結合は、交番磁界の作用によって、直接または間接的に開裂可能でなければならない。例えば、ペプチダーゼ、エステラーゼまたはヒドロラーゼが与えられると、あるいはその活性または発現が、標的部位、例えばがん細胞、の交番磁界によって強化されて、これらの酵素が、その後上述の開裂を行うことができると、間接開裂が発生する。さらに、間接開裂は、磁気ナノ粒子を使用して発生することもできる。磁気ナノ粒子は、交番磁界によって加熱され、それにより熱不安定な結合が開裂する。交番磁界の作用により標的部位のｐＨを増加させて、その後、リンカー分子内部で酸に不安定な結合を開裂することも可能である。
【００７６】
リンカー分子内部あるいはリンカー分子において酵素的に開裂可能な基としては、アミド基を挙げる必要がある。熱または酸によって開裂可能な基は、例えばリン酸基、チオリン酸基、硫酸基、ホスファミド基、カルバメート基またはイミン基を含む。
【００７７】
リンカー分子は、核酸分子、ポリペプチド、ペプチド核酸、アプタマー、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ロイシンジッパー、オリゴヌクレオチド、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン抗体ブリッジまたはビオチン−アビジンブリッジであってもよい。
【００７８】
薬は、必ずしも共有リンカーに結合されなくてもよいが、イオンや水素結合により結合されるか、あるいは挿入または複合化されてもよい。
抗がん剤、モノクローナル抗体、アプタマー、核酸、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン、リポタンパク質、または抗増殖、抗移動、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルスまたは抗真菌薬などの治療効果物質と微粒子及びナノ粒子との結合の様々な可能性が、ＷＯ２００６１０８４０５Ａに記載されている。
【００７９】
したがって、本発明の方法には、ステップＫ１）に従って、抗がん剤、モノクローナル抗体、アプタマー、核酸、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン、リポタンパク質、または抗増殖、抗移住、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルスまたは抗真菌薬を粒子と結合させるステップＬ１）がさらに含まれていてもよい。
【００８０】
さらに、吸着によりナノ粒子の表面に薬を結合して、薬の放出を大部分防止するバリア層が、交番磁界の作用により薬の放出が起きることができるように変形あるいは具体的には劣化するまで、バリア層でカバーすることもできる。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】本発明の酸化鉄ナノ粒子の（透過電子顕微鏡画像による）粒子サイズの分布を示す。
【図２】ＤＥ１９６１４１３６Ａ１の特許明細書に記載の、析出により製造された従来の酸化鉄ナノ粒子のＳＡＲ値と比較された、水中における本発明の酸化鉄ナノ粒子のＳＡＲ値を示す。ＳＡＲ値は、周波数が１００ｋＨｚの交番磁界を参照したものである。
【図３】核及びシェルを備えた本発明の酸化鉄ナノ粒子の略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８２】
本発明の粒子を生成するための一般的な合成法
ステップＡ１）
沸点が約２００℃〜約４００℃の有機溶媒ＬＭ１において、粒子種を製造するために、０．０２モルの鉄含有化合物Ａ及び１００ｍｌの溶媒をガラスフラスコに投入する。
ステップＡ２）
必要に応じて、本願に記載の添加物のうちの１つを、０．００８〜０．０５モル加える。
ステップＢ１）
その後の反応温度より約５０℃低い５０℃〜３５０℃の温度に、最低１０分間、好ましくは１時間、溶液を加熱する。
ステップＢ２）
必要に応じて、さらなる添加物とさらなる鉄含有化合物Ｂとを加える。
ステップＣ１）
得られた混合物を、ステップＢ１）の加熱フェーズの温度より少なくとも５０℃高い各溶媒ＬＭ１またはＬＭ２の沸点に、保護ガス下の環流冷却により三つ口フラスコで加熱し、最低約１時間、この温度を維持する。
ステップＣ２）
必要に応じて、得られた酸化鉄粒子を酸化する。
ステップＤ１）
遠心分離、洗浄、そして好ましくはソックスレー抽出により、粒子の精製を行う。
ステップＤ１* ）
必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子の少なくとも１つの焼戻しフェーズを行う。
ステップＤ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＤ２*）
必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子の少なくとも１つの焼戻しフェーズを行う。
ステップＥ１）
精製粒子の分散または懸濁のために、精製粒子を中性ｐＨの水あるいは好ましくは鉱酸を含む酸性水溶液中で再懸濁する。酸の濃度は、０．００２〜０．１Ｍである。分散または懸濁をサポートするために、超音波処理を行ってもよい。
ステップＥ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＦ１）
３〜８モルの量の表面活性化合物を加える。
ステップＦ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＧ１）
必要に応じて、５０℃〜９００℃で、好ましくは１〜２時間攪拌する。撹拌しながら１〜３時間、超音波処理を行う。
ステップＧ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＨ１）
遠心分離、洗浄、さらに、どの方法またはどの方法の組み合わせがよりよいかによって、抽出及び／または透析により、得られた粒子の精製を行う。
ステップＨ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＩ１）
得られた粒子を、選択的に、アミン及び好ましくはアンモニアを低濃度で含む水及びアルコール混合物（１: １〜５:１）に再懸濁する。
ステップＩ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＪ１）
０．０４〜０．０８モルの量のアルコキシシランを加える。
ステップＪ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＫ１）
遠心分離、透析、洗浄、及び／または、どの方法またはどの方法の組み合わせがよりよいかによって、再分散抽出により、得られた粒子の精製を行う。
ステップＫ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＬ１）
必要に応じて、薬物の酸化鉄ナノ粒子への結合を行う。
実施例
実施例１:
ジエチレングリコールジブチルエーテル中で粒子種を製造するために、０．３グラムの鉄ペンタカルボニルを、ガラスフラスコ中の５０ｍｌのジエチレングリコールジブチルエーテルに溶解した。１．７ｇのオレイン酸を溶液に加えた。その溶液を１時間１５Ｏ℃まで加熱した。
実施例２：
ポリグリコールＤＭＥ５００中での（クラリアント社）粒子種の製造のために、８グラムのオレイン酸鉄（ＩＩＩ）を、ガラスフラスコ中のポリグリコールＤＭＥ５００に溶解した。１．５ｇのオレイン酸を溶液に加え、その溶液を３０分間１２０℃まで加熱した。
実施例３Ａ：
酸化鉄ナノ粒子の製造のために、実施例１−２の溶液を、各溶液の沸点まで、保護ガス（アルゴン）の伝導下の環流凝縮により三つ口フラスコにおいて加熱し、この温度を最低１時間維持した。これにより、溶液は赤く変化した。冷却後、大気酸素の伝導により、一晩、粒子を酸化した。
実施例３Ｂ：
酸化鉄ナノ粒子の製造のために、実施例１−２の溶液を、各溶液の沸点まで、保護ガス（アルゴン）の伝導下の環流冷却により三つ口フラスコにおいて加熱し、この温度を最低１時間維持した。ここでは、溶液は黒く変化した。
実施例４：
実施例３の粒子を、高Ｇ値で遠心分離し、エタノールで洗浄した。５００ｍｇの洗浄製品を円筒ろ紙（６０３ｇ、ワットマン社）で重みをかけ、ソックスレー装置に置いた。２００ｍｌの抽出エタノールをソックスレー装置のナスフラスコに満たし、抽出物をその沸点まで加熱した。連続抽出は、８時間以上実施され、約１６抽出サイクルを含んだ。この結果、エタノール溶液は黄色っぽくなった。抽出完了後、円筒ろ紙を除去し、粉末をシュレンク容器に移動し、真空中で１時間乾燥した。
実施例５：
抽出後の粒子の分散体のために、実施例４のナノ粒子の粉末０．５ｇを２０ｍｌの０．０１Ｍ ＨＣＩで懸濁した。その後、ナノ粒子を３０分超音波で処理した。次に、０．５グラムの固体オレイン酸ナトリウムを加えた。
ステップＧ１：
その後、７０℃で１．５時間攪拌し、さらに２時間攪拌しながら超音波処理を行った。分散が成功裡に行われた後、分散体を低Ｇ値で遠心分離して非分散粒子を分離した。また、残りの分散体を洗浄して、過剰なオレイン酸ナトリウムを除去した。これは、高Ｇ値での遠心分離とジエチルエーテルでの洗浄と水中での再分散により行われる。代わりに、ジエチルエーテルまたは透析で抽出を行ってもよい。再分散を完全にするために、分散体を超音波で処理した。
実施例６：
実施例５の粒子分散体３．３ｍｌ（０．９７ｍｏｌ/ ｌ Ｆｅ）及びテトラエトキシシラン２．１４ｍｌを、水とエタノール（３:１）及びアンモニア１．５重量％の混合物１２０ｍｌに加えた。加えている間、分散体を攪拌し、その後６時間超音波で処理した。分散体を遠心分離及び水中での再分散により精製した。
実施例７（焼戻しフェーズ）：
実施例４で得られた粒子を２００ｍｌのジエチレングリコールジブチルエーテルで懸濁した。次に、８０℃で１２時間、空気で消毒し、その後、環流下で８時間（約２５６℃の沸点）沸騰させた。懸濁液を、その後、徐々に（８時間以内）室温に冷却した。このプロセスを２回繰り返した。
【００８３】
そのようにして得られた（焼戻しされた）粒子を洗浄し、２０ｍｌの１Ｍ ＨＮＯ3で懸濁した。次に、０．３ｍｍｏｌの硝酸鉄（Ｆｅ（ＮＯ3）3＊９Ｈ2Ｏ）を加えて、還流下で１時間（１００℃）沸騰させた。各回、１００ｍｌの水で３回、粒子を洗浄した。
【００８４】
次にこれらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ａ（酸化あり／空気での消毒なし）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のために、０．１モルのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００８５】
次に、溶液を３０分以内に沸点に加熱した。
沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００８６】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、９００ｍｌの１Ｍ ＨＮＯ3で再懸濁した。次に、４５０ｍｌの０．７Ｍ硝酸鉄（Ｆｅ（ＮＯ3）3＊９Ｈ2Ｏ）溶液を加えて、１時間（１００℃）還流下で沸騰させた。各回、５００ｍｌの水で３回、粒子を洗浄した。
【００８７】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ｂ（酸化なし／空気での消毒あり）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のため、０．１ｍｏｌのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００８８】
次に、溶液を３０分以内に沸点まで加熱した。沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００８９】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁し、大気酸素で消毒した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、水で再懸濁した。
【００９０】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ｃ（酸化あり／空気での消毒あり）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のため、０．１ｍｏｌのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００９１】
次に、溶液を３０分以内に沸点まで加熱した。沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００９２】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁し、大気酸素で消毒した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、９００ｍｌの１Ｍ ＨＮＯ3で再懸濁した。その後、４５０ｍｌの０．７Ｍ 鉄硝酸溶液（Ｆｅ（ＮＯ3）3＊９Ｈ2Ｏ）
を加え、１時間（１００℃）還流下で沸騰させた。粒子は、各回、５００ｍｌの水で３回洗浄された。
【００９３】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ｄ（酸化なし／空気での消毒あり）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のため、０．１ｍｏｌのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００９４】
次に、溶液を３０分以内に沸点まで加熱した。沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００９５】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、水で再懸濁した。
【００９６】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例９
酸化鉄ナノ粒子の製造のために、２０００ｍｌのメタノール中に９６ｇの水酸化ナトリウムと６８０ｍｌのオレイン酸を含む溶液を、５００ｍｌのメタノール中の２１６ｇの塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物に加えた。その結果生じた固体をメタノールで洗浄し、ジエチルエーテルに溶解した。その後、数回水で抽出した。固体をアセトンで沈殿させ、洗浄し、真空下で乾燥させた。この固体７５ｇを２５０ｍｌのトリオクチルアミンに溶解させ、１２０℃まで１時間加熱した。
【００９７】
次に、溶液を３０分以内で３８０℃の温度までオートクレーブにて加熱した。この温度を４時間維持した。形成された分散体を、徐々に室温に冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００９８】
その後、粒子を３００ｍｌのジエチレングリコールジブチルエーテルで懸濁し、大気酸素で消毒した。懸濁液をオートクレーブにて３００℃の温度に加熱し、２４時間この温度で維持した。
【００９９】
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、水で再懸濁した。
これらの粒子を、実施例８Ｃのように酸化し、その後、実施例４−６と同様にコーティングした。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、交番磁界にさらされると大量の熱を発生する、ＳＡＲ値の高い生体適合性磁気ナノ粒子の製造に関する。発生した熱は、数ある利用法の中でも特に治療目的、具体的には、がんを消滅させるのに利用可能である。
【０００２】
磁気ナノ粒子は、さまざまな方法で磁界のエネルギーを熱に変換できる。いわゆるヒステリシス損失を通じての加熱の他に、ナノ粒子は緩和を通じて熱を発生させることができる（それぞれネール及びブラウン緩和）。発生した熱エネルギーの量は、磁界の強度（振幅）及び交番磁界の周波数に依存する。熱発生の効率性は、磁界の規定の強度及び周波数で、いわゆるＳＡＲ（比吸収率）またはＳＬＰ（比出力損失）値によって測定される。ある物質のＳＡＲ値が、測定に使用される質量（グラム）に標準化され、単位［Ｗ／ｇ］で表現される。しかしながら、磁気物質のＳＡＲ値は、粒子サイズ及び粒子形状などのその他の要因、異方性、物質の金属含有量によっても左右される。ＳＡＲは、１００ｋＨｚの周波数及び１８ｋＡ／Ｍの磁界強度で、Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．［Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｈｅｍｉａ，１９９３，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１，５１−６８］によって開発された方法に従って決定されるのが好ましい。この場合、ＳＡＲ値は、ｍＷ／ｍｇ Ｆｅにおける物質の鉄含有量についての標準化により表示される。
最新技術
生体適合性磁気ナノ粒子は、いわゆる沈殿法によって頻繁に製造される。このことは、文献［例えばＤＥ１９６１４１３６Ａ１］に多くの例を使って記載されている。水溶液中で製造されるため、これらの粒子は問題なく官能化され、良好な生体適合性を通常備えることができる。しかしながら、この方法で製造された粒子は、比較的低いＳＡＲ値を示し、そのために本特許の革新的要件を満たすことができない。
【０００３】
磁気ナノ粒子は、いわゆる走磁性細菌によっても製造可能である［ＷＯ９８／４００４９］。この方法で製造された粒子のＳＡＲはより高い。しかしながら、製造過程が非常に複雑かつ高価である。さらに、粒子が比較的速く堆積するため、適用可能性が非常に制限される。
【０００４】
有機溶媒中における金属錯体の熱分解により、コロイドまたはナノ粒子が形成されることが多年にわたって知られている［例えば、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９８０，８４，１６２１−１６２９］。異なるサイズの単分散粒子が、Ｐｅｎｇ ｅｔ ａｌ．［ＵＳ２００６／０２１１１５２Ａ１］及びＨｙｅｏｎ ｅｔ ａｌ．［ＷＯ２００６／０５７５３３Ａ１］により公開された方法によって製造できる。しかしながら、この方法によって製造された粒子は、有機溶媒のみに分散可能であり、そのために生体適合性がない。さらに、この方法によって製造された粒子のＳＡＲ値は低い。このような（疎水性）粒子の水中における分散は、主にシェルの改良によって達成可能である［例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．，２００３，３（１１），１５５５−１５５９あるいはＤｅ Ｐａｌｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｍａｔｅｒ，２００７，１９，１８２１−１８３１］。これらの方法は、親水性リガンドを通じての疎水性リガンドの直接交換に基づいている。これらのコーティング方法は、薄い（単分子層）コーティングのみを生じ、本発明の安定した生体適合性コーティングの要件に合致しない。さらに、粒子のコロイド安定性が制限されているため、本発明の粒子はこの方法でコーティングされることはできない。さらに、高度希釈した粒子の分散体のみがコーティングされることができる。このため、工業規模で本発明の粒子の分散体について満足できる技術的解決は存在しない。さらに、分散させるために使用される物質または溶媒は、通常毒性が高い。したがって、生体適合性が制限されてしまう。
【０００５】
生体適合性酸化鉄ナノ粒子も、ＤＥ１９６１４１３６Ａ１のシランによるコーティングにより獲得できるが、この方法は、粒子がすでに水に分散されている場合にのみ適用可能である。その一方、疎水性分子は、簡単にシランやシリカでコーティングすることができない。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、交番磁界においてＳＡＲ値が高い生体適合性磁気ナノ粒子を提供することであって、粒子のコーティングが、厚さ０．５〜１０ｎｍの安定したシリコン含有シェルから構成される。ＳＡＲの決定に使用される交番磁界の強度は、好ましくは３〜１８ｋＡ／ｍであり、その周波数は、１ｋＨｚ〜１００ＭＨｚ、好ましくは１０〜１０００ｋＨｚである。
【０００７】
記載の課題は、請求項１の製造方法、請求項２６のナノ粒子、請求項２８の医薬組成物、請求項３１のナノ粒子の使用によって解決される。
さらなる有利な実施例は、従属請求項、実施例、図面及び明細書に起因する。
【０００８】
本発明は、安定した、シリコン含有シェルを備えた生体適応性のあるナノ粒子に関し、その厚みは好ましくは０．５〜１０ｎｍであり、より好ましくは１ｎｍ〜６ｎｍ、さらに好ましくは２ｎｍ〜４ｎｍ、最も好ましくは３ｎｍからであり、交番磁界におけるＳＡＲ値が高く、交番磁界の強度が好ましくは３〜１８ｋＡ／ｍであり、その周波数が好ましくは１０〜１０００ｋＨｚである。
【０００９】
本発明によれば、ＳＡＲ値の高い粒子が以下のステップを含む方法によって製造可能である。
Ａ１）少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ１に、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａの組成物を提供するステップと、
Ｂ１）少なくとも１０分間、ステップＣ１）に従って、該組成物を、５０℃から鉄含有化合物Ａの実際の反応温度より５０℃低い温度までの範囲の温度に加熱するステップと、
Ｃ１）該組成物を、２００℃〜４００℃の温度に加熱するステップと、
Ｄ１）得られた粒子を精製するステップと、
Ｅ１）精製されたナノ粒子を、水または酸の水溶液に懸濁するステップと、
Ｆ１）ステップＥ１）で得られた水溶液に、表面活性化合物を加えるステップと、
Ｇ１）超音波を使って、ステップＦ１）の水溶液を処理するステップと、
Ｈ１）請求項Ｇ１）で得られた粒子の水分散液を精製するステップと、
Ｉ１）水及び水と混ざる溶媒を含む溶媒混合液中で、ステップＨ１）の粒子の分散体を製造するステップと、
Ｊ１）ステップＩ１）の溶媒混合液における粒子の分散体に、アルコキシシランを加えるステップと、
Ｋ１）該粒子を精製するステップ。
【００１０】
ステップＡ１〜Ｋ１は、通常続いて起き、追加のステップＡ２がステップＡ１の後でステップＢ１の前に発生、及び／または追加のステップＢ２がステップＢ１の後でステップＣ１の前に発生することができる。同様に、ステップＣ１、Ｄ１、Ｅ１、Ｆ１、Ｇ１、Ｈ１、Ｉ１、Ｊ１またはＫ１の後に、選択的に酸化ステップＣ２、Ｄ２、Ｅ２、Ｆ２、Ｇ２、Ｈ２、Ｉ２、Ｊ２またはＫ２を続けることも可能である。本願では、ステップＣ２、Ｄ２、Ｅ２、Ｆ２、Ｇ２、Ｈ２、Ｉ２、Ｊ２またはＫ２は、ステップＸ２とも表される。追加のステップＡ２、Ｂ２及び／またはＸ２は選択的であり、本発明の性能にとって重要ではない。
【００１１】
さらに、選択した反応温度または選択された鉄含有化合物Ａまたは選択されたその他の化合物によって、反応パラメータを適応させて最適化することは当業者の平均的な能力の一部である。例えば、各反応の加熱時間Ｂ１の持続時間を、当業者によって最大ＳＡＲを備えた粒子が形成されるように最適化することができる。最小加熱時間の持続時間は、１０分である。加熱時間は温度が上がるにつれて短くなることが当業者には明らかである。同様に、ステップＣ１における加熱率、最終温度、最終温度の持続時間は、最大ＳＡＲを備えた粒子が形成されるように当業者によって適合されることができる。
【００１２】
粒子は、粒子の直径がナノメートル範囲にあるナノ粒子であるのが好ましく、ナノ粒子は、本発明の方法に従って得られてもよい。
使用された複数の鉄含有化合物Ａまたは使用された１つの鉄含有化合物Ａは、鉄錯化合物、鉄カルボニル化合物、鉄塩、特に飽和または不飽和脂肪酸の鉄塩、有機鉄化合物、及び鉄サンドイッチ錯体を含むまたはそれらからなるグループから選択されるのが好ましい。
【００１３】
鉄カルボニル化合物としては、鉄ジカルボニル（Ｆｅ（ＣＯ）2）、鉄テトラカルボニル（Ｆｅ（ＣＯ）4）または鉄ペンタカルボニル（Ｆｅ（ＣＯ）5）が挙げられ、鉄塩の例としては、二塩化鉄、二臭化鉄、二フッ化鉄、二ヨウ化鉄、三塩化鉄、三臭化鉄、三フッ化鉄、三ヨウ化鉄、硫酸鉄（ＩＩ）、硫酸鉄（ＩＩＩ）、酢酸鉄、シュウ酸鉄、硝酸鉄（ＩＩ）、硝酸鉄（ＩＩＩ）、炭酸鉄、水酸化鉄（ＩＩ）、水酸化鉄（ＩＩＩ）、リン酸鉄、二リン酸三鉄がある。フェロセンは、鉄サンドイッチ錯体の例であり、鉄アセチルアセトナートは、鉄複合化合物の例である。有機金属鉄化合物としては、例えば、酢酸鉄（ＩＩ）、アクリル酸鉄（ＩＩＩ）、オレイン酸鉄（ＩＩＩ）、エトキシド鉄（ＩＩＩ）などのアルコキシド鉄、あるいはまた、アセチル−シクロブタジエン−鉄−トリカルボニル、ブタジエン−鉄−トリカルボニル及びオレフィン−鉄−テトラカルボニルなどの鉄カルボニル化合物が考えられる。
【００１４】
有機溶媒ＬＭ１としては、あらゆる高沸点溶媒を用いることができる。好ましいものとしては、高沸点のアミン、アルカン、オレフィン、アルコールまたはエーテルを含むまたはそれらからなるグループの溶媒である。さらに、ジオール（アルカンジオール）のモノエーテル及びジエーテル、トリオール（アルカントリオール）のモノエーテル、ジエーテル、トリエーテル、アルキレン−グリコール−モノエーテル、アルキレン−グリコール−ジエーテル、エチレン−グリコール−モノエーテル、エチレン−グリコール−ジエーテル、プロピレン−グリコール−モノエーテル、プロピレン−グリコール−ジエーテル、グリセリン−モノエーテル、グリセリン−ジエーテル、グリセリン−トリエーテル、及びグリコール−ジエーテル（グリム）が使用できる。溶媒Ｌ２もまた、上記のグループから選択されることができる。
【００１５】
特に好ましい溶媒ＬＭ１及びＬＭ２は、最小沸点が２００℃のグリコール−ジエーテル（“グリム”とも呼ばれる）である。鉄塩（例えば塩化物）からナノ粒子を製造するためには、エチレングリコールも適当である。基本的に、溶媒の沸点は１５０℃を超えるべきで、さらに好ましいのは１７５℃を超え、特に好ましいのは２００℃を超えることである。
【００１６】
少なくとも１つの鉄含有化合物Ａが、溶媒ＬＭ１において分散、溶解または懸濁され、得られた組成物はその後、最低１０分間、ステップＣ１に従って、５０℃から鉄含有化合物Ａの実際の反応温度より５０℃低い温度までの範囲の温度に加熱される。実際の反応温度は、粒子形成のための温度として理解され、２００℃〜４００℃の範囲である。したがって、ステップＢ１の核生成の温度は、５０℃〜最大３５０℃の範囲であるが、ステップＣ１温度より少なくとも５０℃常に下回る。したがって、有機触媒ＬＭ１または有機触媒ＬＭ１の混合物における１つ以上の鉄含有化合物Ａの加熱は、ステップＣ１の化合物Ａの粒子形成のための実際温度より約５０℃低い温度で実施されるのが好ましい。
【００１７】
ステップＢ１）の粒子形成前のこの加熱フェーズは、その後の規定の粒子形成を可能にするいわゆる種の形成のために使用される。加熱フェーズの時間は、ステップＣ１）において生成される、結果として生じる粒子、好ましくはナノ粒子、のＳＡＲに大きな影響を与える。高いＳＡＲを有する粒子またはナノ粒子を製造するため、最低１０分間、好ましくは最低３０分間、特に好ましくは最低４０分間、到達した温度が維持される。したがって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａ及び少なくとも１つの溶媒ＬＭ１の化合物は、好ましくは３０〜５０分間、上記に特定される温度に加熱されるべきである。
【００１８】
使用される鉄含有化合物Ａによって、ステップＣ１）の粒子形成のための実際の反応温度より約１００℃〜３００℃、好ましくは約１３０℃〜２７０℃、よく好ましくは約１５０℃〜２５０℃、さらに好ましくは約１７０℃〜２３０℃、さらに好ましくは約１８０℃〜２２０℃、さらに好ましくは約１９０℃〜２１０℃、そして特に好ましくは約２００℃以下の温度を目標とするのが好ましい一方で、目標とされた温度は、７０℃、好ましくは９０℃、特に好ましくは１００℃を下回らない。第１加熱フェーズの間の温度が、ステップＢ１）に従って、１００℃〜１５０℃で維持されるのが好ましい。
【００１９】
種の形成に影響を与えるあるいはそれを促進するために、ステップＡ２）に従って、添加物または表面活性化合物を加えてもよい。本願で使用される“添加物”または“表面活性化合物”という用語は、大部分の添加物は表面活性化合物でもあるが、必ずしも全ての添加物にそれが当てはまるわけではないという文脈に立つ。従って、どの表面活性化合物も添加物と称されることができるが、どの添加物も表面活性化合物と称されることができるわけではない。これには、テンサイド（tensides）、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、またはポリマーが含まれる。ポリマーの例は、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、デキストラン、ＰＬＧＡ，キチン、フィブリン、ヘパリン、キトサン及びポリエチレンイミンである。
【００２０】
ステップＢ１）の加熱フェーズ後、実際の粒子形成がステップＣ１）で行われる。ステップＢ１）で形成された粒子種を、５００℃まで、好ましくは２００℃〜４００℃の温度に加熱する。
【００２１】
これにより、鉄含有粒子、好ましくは鉄含有ナノ粒子が、粒子種及び余分の鉄含有化合物Ａから形成される。
鉄含有化合物Ａの全量とではなく、Ｂ１）の種形成ステップ後に、ステップＢ２）における有機溶媒Ｌ２中の鉄含有化合物Ｂをさらに加えて、Ｂ１）の加熱フェーズを開始及び実行すると有利であることがわかっている。
【００２２】
少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂは、上述した鉄含有化合物のグループから選択されることができ、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａと同一あるいは異なっていてもよい。
同じことが、上述した溶媒ＬＭ１のグループから選択されることができ、溶媒ＬＭ１と同一あるいは異なっている有機溶媒Ｌ２にも当てはまり、溶媒ＬＭ１とＬＭ２が同一であることが好ましい。
【００２３】
従って、種形成ステップＢ１）の後に、新しい鉄含有化合物Ｂが、好ましくは同じ溶媒（ＬＭ１＝ＬＭ２）に追加され、それにより得られたＣ１）の化合物が、５００℃までの温度、好ましくは２００℃〜４００℃の範囲の温度に加熱されるのが好ましい。ＬＭ１及びＬＭ２の最低沸点が、２００℃であるのが好ましい。
【００２４】
これにより、溶媒ＬＭ２における少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂの追加後に、実際の粒子が製造される。鉄含有化合物Ｂと共に、さらなる添加物が、ステップＢ１後に得られた化合物に追加されてもよい。これらの添加物もまた、溶液にすでに存在するのと同じ添加物から強制的に選択される必要はないが、そうするのが好ましい。
【００２５】
この場合もまた、添加物の、追加された鉄含有化合物Ｂの量と、溶媒Ｌ２の種類及び量とが、ＳＡＲが最大の粒子が形成されるように当業者によって適合される。
前述したように、必要とされる鉄含有化合物の総量を、ステップＡで追加することができるため、ステップＢ）が好ましいが、必須ではない。ステップＢ１）の第１加熱フェーズの後にさらなる鉄含有化合物Ｂが追加されなくても、さらなる添加物をステップＢ２）として追加でき、その添加物は、化合物中にすでに存在する添加物と同じであるべきである。従って、ステップＢ２）として、添加物のみあるいは鉄含有化合物Ｂのみあるいはそれらの両方を同時にあるいは順次、ステップＢ２）として追加できる。
【００２６】
ステップＣ１）の第２加熱フェーズの持続時間は、少なくとも３０分間、好ましくは１−３０時間、より好ましくは１０−２０時間、特に好ましくは１５時間である。
驚くべきことに、ＳＡＲは、加熱フェーズの延長により、あるいは単に加熱フェーズをより長くすることにより、さらに増加することが明らかになった。そのため、長い加熱フェーズ、また特に追加の焼戻しフェーズが好ましい。特にステップＣ１）において、加熱フェーズは、１０時間より長いのが好ましく、１４時間より長いのがより好ましい。
【００２７】
Ｄ１*及び／またはＤ２*としてのステップＤ１の後に選択的に続く焼戻しフェーズは、ＳＡＲをさらに増加でき、そのため１０時間より長い、より好ましくは１４時間より長い、特に好ましくは１８時間より長いのが好ましい。したがって、焼戻しフェーズは、１−３０時間、好ましくは１０−２５時間、より好ましくは１３−２２時間、特に好ましくは１５−２０時間かかる。
【００２８】
結果として生じる粒子のＳＡＲは、加熱フェーズＢ１）の持続時間の変化により、ステップＣ１）における最終温度及び最終温度の維持時間により、及びステップＣ１）において追加した鉄化合物または添加物の量により、改変可能で、その結果、ＳＡＲが最大の粒子が形成される。これらのパラメータは、使用される鉄化合物の種類と溶媒及び添加物の種類に依存する。したがって、加熱フェーズは、どのシステムにも適応していなければならず、その結果、当業者によって容易に自身の特別な知識に基づいて実行されることができる。
【００２９】
製造された発明の粒子のＳＡＲは、１００ｋＨｚの交番磁界の周波数で、４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき１０−４０Ｗ、好ましくは４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき２０−４０Ｗ、より好ましくは４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき２５−４０Ｗ、特に好ましくは４ｋＡ／ｍの磁界強度で、Ｆｅ１ｇにつき３０−４０Ｗである。
【００３０】
以下に発明の粒子の製造のためのシステムのいくつかの例と、製造された粒子のＳＡＲ値とを示す。例（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）は、４ｋＡ／ｍの磁界強度及び１００ｋＨｚの交番磁界の周波数で、Ｆｅ１ｇにつき２０−４０ＷのＳＡＲ値及びの発明の粒子になる。“Ｆｅ”という用語は、Ｆｅ0、Ｆｅ+2、Ｆｅ+3の総鉄量をさす。
【００３１】
【表１】
【００３２】
上記の表１において、“添加物なし”とは、本発明による合成が、各欄に記載の組成物を用いて、ただし添加物を加えずに、実行されたことを意味する。表１に記載の組成物は、実施例１及び３Ａまたは２及び３Ａ（ステップＡ１〜Ｃ２）に従って使用され、その後、全てのシステムが、実施例４−６及び４−７に従ってさらに使用された。追加的な焼戻しフェーズ（実施例７；ステップＤ１*またはＤ２*）の適用によって、ＳＡＲが約５ｋＡ／ｍで約５Ｗ／ｇ Ｆｅ増加できることが明らかになった。表１に示すＳＡＲ値は、４ｋＡ／ｍの磁界強度及び１００ｋＨｚの交番磁界の周波数についてのものである。
【００３３】
【表２】
【００３４】
フェーズＡ）及びＣ）は、大気中での標準圧力下または保護ガス圧力下（アルゴン、窒素）または４００バールまでの圧力下の反応加圧滅菌器において選択的に実行されることができる。
【００３５】
ステップＣ１）の第２加熱フェーズの後には、酸化フェーズＸ２）が続けられる。酸化フェーズＸ２）は選択的であり、ステップＣ１の直後に必ずしも続く必要はないが、ステップＣ１〜Ｋ１）のうちのどれかの後にも起きることができる。粒子は、ここでは、大気中の酸素の伝導により酸化されるのが好ましい。大気中の酸素の伝導は、４〜２４時間、好ましくは８〜１６時間、そしてさらに好ましくは２０℃〜５０℃で行われる。しかしながら、他の揮発性酸化剤あるいは酸素（純）などの蒸留により除去可能な酸化剤、過酸化水素あるいはアミンオキシドなどのその他の有機酸化剤もまた使用可能である。したがって、ステップＣ１）〜Ｋ１）の後に酸化ステップＸ２）が続くのが好ましい。この場合、Ｘは文字Ｃ〜Ｋの変数であり、どのステップの後に酸化が行われるかによって決まる。選択的な酸化がステップＥ１）の後に実行される場合、酸化はステップＥ２）と称され、Ｋ１の後に実行される場合、酸化ステップはＫ２）と称される。さらに、酸化ステップは複数回繰り返されてもよいし、あるいはさらなる酸化ステップＸ２’がさらなる手続きステップの後に続いてもよい。ただし前記は可能であるけれども好ましくない。したがって、本発明の方法は、第１酸化ステップＸ２（例えばＦ２）及び第２酸化ステップＸ２’（例えばＨ２’）を含むことができる。すでに部分的にまたは完全に酸化された状態にある粒子については、もちろん、さらなる酸化は不要である。通常、大気下における酸化は自動で開始するため、追加的な酸化、例えば自動で開始する酸化に対する酸化ステップＸ２の追加は不要である。酸化ステップＸ２は、絶対に必要というわけでなくても実行されてもよい。なぜなら害がないことが明らかになっているためである。
【００３６】
ステップＣ１に従って形成された粒子、好ましくはナノ粒子は、精製される必要がある。このステップは、本発明にとって不可欠で重要である。精製されていない粒子の使用は、水中でよく分散し、ひいてはＳＡＲが高い本発明の粒子を製造しない。この精製は、無極性溶媒における粒子の分散がそれ以上起きなくなるまで、ステップＤ１に従って好ましくはソックスレー抽出によって行われる。驚いたことに、添加物及び特にステップＡ２）及び／またはＢ２）からの表面活性化合物が、可能な限り、粒子から完全に洗い落とされる、すなわち再び大部分除去されることが、水中での後の分散［ステップＦ１）］に不可欠であることがわかった。“可能な限り”及び“大部分”という用語それぞれは、７０−１００％の範囲、好ましくは９０％までの添加物の除去として理解される。したがって、添加物は、７０％を越えて、好ましくは８０％を越えて、より好ましくは９０％を越えて、特に好ましくは９５％を超えて、粒子から除去される。前述した割合は、粒子に付着した添加物についてのものである。自由な添加物、すなわち溶液中を自由に浮遊する添加物であって粒子により吸収されない添加物は、例えば９５％より多く、好ましくは９８％より多く、遠心分離によって大部分除去されることができる。粒子に付着している残りの添加物の量は、例えば元素分析または赤外分光法によって決定できる。その割合は、本願では重さ（重量％）を表す。粒子に付着してない添加物は、遠心分離により除去され、粒子に付着している粒子は、形成された粒子のソックスレー抽出により除去されるのが好ましく、超音波によりサポートされる抽出もまた使用可能である。この使用のために、ナノ粒子は、次の精製ステップが起きる前に、まず遠心分離により分離される。
【００３７】
ソックスレー抽出に使用される溶媒は、アルコール、ケトン、エーテルまたはエステルのような電流極性有機溶媒であってもよい。アセトン、エチルアセテートまたはエタノールが好ましい。
【００３８】
抽出時間は、１〜８時間、好ましくは２〜６時間、特に好ましくは約４時間である。重要なのは、鉄含有粒子、好ましくはナノ粒子が、抽出後に、トルオール、キシロールまたはヘキサンなどの無極性溶媒においてそれ以上分散可能でないという点である。しかしながら、この場合には、抽出時間を調整する必要がある。そのようにして精製されたナノ粒子の粉末は、真空状態下で乾燥される。
【００３９】
粒子の結晶化度を高めるために、いくつかの“焼戻しフェーズ”を、ステップＤ１後に続けることができる。これらの焼戻しフェーズは、数時間、４００℃までの高沸点溶媒において実行可能である。溶媒は、最低沸点が２００℃、好ましくは３００℃であれば高沸点と称される。焼戻し処理は、本願では空気中または保護ガス（例えばアルゴン）下で行うことができる。約２００℃〜２５０℃の温度で、反応が保護ガスなしで行われるのが好ましく、約２００℃〜２５０℃より高い温度で、反応が保護ガス下で行われるのが好ましい。その代わりに、ナノ粒子は、保護ガス下では１０００℃までの温度で（溶媒なしの）粉末として焼戻しされることができる。好ましい保護ガスは、アルゴンまたはＣＯ2／Ｈ2混合物である。この少なくとも１つの焼戻しステップは、ステップＤ１の後にステップＤ１*として、あるいは酸化ステップＤ２の後にＤ２*として続く。
【００４０】
Ｘ＝ＣまたはＤまたはＥまたはＦまたはＧまたはＨまたはＩまたはＪまたはＫのステップＸ２の酸化が、Ｆｅ（ＮＯ3）3の追加及び連続する環流下での沸騰を伴う０．５〜２Ｍ ＨＮＯ3、好ましくは１Ｍ ＨＮＯ3で粒子を懸濁することによって実行されることができるのが好ましい。ＦｅＯxに対するＦｅ（ＮＯ3）3の割合または一般にＦｅＯxに対するＦｅ（ＩＩＩ）の割合は、１：２であるのが好ましい。この酸化処理は、粒子のＳＡＲに有利な効果を有するために好ましい。このステップは、Ｆｅ（ＮＯ3）3に制限されず、例えば、ＦｅＣｌ3、ＦｅＰＯ4などのその他のＦｅ（ＩＩＩ）塩もまた使用されることができることは留意されるべきである。
【００４１】
精製された粒子またはナノ粒子の分散は、ステップＥ１）及びＦ１）の表面活性化合物を使用したリバーシブルコーティングによって水中で行われる。
このステップでは、粒子またはナノ粒子の精製された粉末が、水中で懸濁され、親水性層が、後で容易に除去できるような方法でドッキングされる。最初に、このコーティングの固形分（酸化鉄）を、好ましくは２−２０％、より好ましくは３−１２％、さらに好ましくは５−８％、さらに好ましくは６−７％、特に好ましくは６．５％に設定する。粒子をより細かく分散させるためには、塩酸または硝酸などの酸、好ましくはＦ１）の鉱酸を、表面活性化合物を加える前に加えることができる。それにより、２−６、好ましくは３−５、特に好ましくは約４のｐＨ値が得られる。
【００４２】
酸は、好ましくは、塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ホウ酸または硝酸などの鉱酸から選択可能である。しかしながら、粒子の表面に不可逆的に結合していない酸、好ましくは鉱酸を使用することが重要である。鉱酸が好ましく、アミノ酸とカルボン酸は避けるべきであることが実験で明らかになっている。しかしながら、以下の酸は、基本的に本発明の方法において使用可能である：スルホン酸、硝酸、過塩素酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルオール（toluol）スルホン酸、ナフタレレ(naphtalele)スルホン酸、ナフチル(naphtyl)アミンスルホン酸、スルファニル酸及びカンファースルホン酸。
【００４３】
水溶液のｐＨが酸または鉱酸によって設定される場合、少なくとも１つの表面活性化合物の追加を、ステップＦ１）に従って行う。少なくとも１つの表面活性化合物は、飽和及び特に不飽和脂肪酸の塩を含むまたはそれらから構成されるグループから選択されるのが好ましい。さらに、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、デキストラン、ＰＬＧＡ、キトサン及びポリエチレンイミンなどのテンサイド(tensides)またはポリマーが使用可能である。
【００４４】
飽和脂肪酸の例は：酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸及びリグノセリン酸である。
【００４５】
好ましい不飽和脂肪酸またはその塩の例としては、どんな脂肪酸であってもよく、例えば、シス−９−テトラデセン酸（ミリストレイン酸）、シス−９−ヘキサデセン酸（パルミトレイン酸）、シス−６−オクタデセン酸（ペトロセリン酸）、シス−９−オクタデセン酸（オレイン酸）、シス−１１−オクタデセン酸（バクセン酸）、シス−９−エイコセン酸（ガドレイン酸）、シス−１１−エイコセン酸（ゴンド酸）、シス−１３−ドコセン酸（エルカ酸）、シス−１５−テトラコセン酸（ネルボン酸）、ｔ９−オクタデセン酸（エライジン酸）、ｔ１１−オクタデセン酸（トランス−バクセン酸）、ｔ３−ヘキサデセン酸、９，１２−オクタデカジエン酸、（リノレン酸）、６，９，１２−オクタデセン酸（γ−リノレン酸）、８，１１，１４−エイコサトリエン酸（ジホモ−γ−リノレン酸）、５，８，１１，１４−エイコサトリエン酸（アラキドン酸）、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸（α−リノレン酸）、６，９，１２，１５−オクタデカトリエン酸（ステアリドン酸）、８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、５，８，１１−エイコサトリエン酸（ミード酸）、９ｃ，１１ｔ，１３ｔ−エレオステアリン酸、８ｔ，１０ｔ，１２ｃ−カレンジン酸(calendinoic acid)、９ｃ，１１ｔ，１３ｃ−カタルピン酸(catalpinoic acid)、４，７，９，１１，１３，１６，１９−ドコサヘプタデカン酸（ステラヘプタエン酸）、タキソール酸(taxolic acid)、ピノレン酸、スシアドン酸(sciadonic acid)、６−オクタデシン酸(octadecinoic acid)（タリリン酸(taririnic acid)）、ｔ１１−オクタデセン(octadecinoic)−９−イン酸(inoic acid)（サンタルビン(santalbinic)またはキシメニン(ximeninic)酸）、９−オクタデシン酸(octadecinoic acid)（ステアロリン酸(stearolinoic acid）、６−オクタデセン(octadecen)−９−イン酸(inoic acid)（６，９−オクタデセニン酸(octadeceninoic acid)）、ｔ１０−ヘプタデセン(heptadecen)−８−イン酸(inoic acid)（ピルリン酸(pyrulinic acid)）、９−オクタデセン(octadecen)−１２−イン酸(inoic acid)（クレペニン酸(crepeninic acid)）、ｔ７，ｔ１１−オクタデカジエン(octadecadien)−９−イン酸(inoic （ヘイステリン酸heisterinic acid））、ｔ８，ｔ１０−オクタデカジエン(octadecadien)−１２−イン酸(inoic acid)、５，８，１１，１４−エイコサテトライン酸(eicosatetrainoic acid)（ＥＴＹＡ）及びｔ８，ｔ１０−オクタデカジエン(octadecadien)−１２−イン酸(inoic acid)などである。脂肪酸の塩は、アルカリ及びアルカリ土類イオンで形成されるのが好ましい。
【００４６】
ナノ粒子の表面活性化合物に対する質量比は、好ましくは１：０．０２〜１：１０、より好ましくは１：０．１〜１：２、特に好ましくは１：０．５である。
表面活性化合物の追加後、ステップＧ１）の懸濁液を、最低３０分間、超音波で処理するのが好ましい。
【００４７】
その後、懸濁液を、好ましくは３０℃〜７０℃、より好ましくは５０℃〜６０℃、特に好ましくは４０℃の温度で約２時間攪拌する。その後、ステップＩ１）に従って精製を行う。分散しない粒子は、好ましくは遠心分離（１０００Ｕ／分）によって分離する。
【００４８】
分子の分散体は、コーティング直後の過剰な表面活性物質を除く必要がある。この精製は、透析またはジエチルエーテル抽出によって行うことができる。代わりに、粒子を、超遠心分離機を使用して遠心分離し、水及び水とジエチルエーテルとの混合物で洗浄してもよい。
【００４９】
その後、粒子の脂肪酸ベースのコーティングは、ステップＩ１）及びＪ１）に従って、シリコン含有生体適合性シェルと交換される。
シェルの交換のために、粒子は、水及びステップＩ１）の水と混合可能な少なくとも１つの溶媒との混合物中に分散していなければならない。水と混合可能な溶媒としては、アルコール、ポリオール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチル−アセトアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸、ギ酸、メチル−ギ酸エステル、エチル−ギ酸エステル、メチル−酢酸エステル、エチル−酢酸エステル及びその他が挙げられる。
【００５０】
しかしながら、アルコールが特に好ましい。アルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール及びエチレングリコールを含むまたはそれらから構成されるグループから選択されるのが好ましく、その中でもエタノールが好ましい。
【００５１】
水とアルコール、水とエタノールそれぞれの混合比は、好ましくは１：１〜１：５、特に好ましくは１：３である。これにより、脂肪酸シェルの除去とシリコン含有シェルによる交換とを並行して行うことができる。
【００５２】
さらに、アルコールと水との混合物が、１−５重量％、さらに好ましくは１−３重量％、特に好ましくは１．５重量％のアミン、好ましくは１級アミン、特に好ましくはアンモニアを含むのが好ましい。
【００５３】
溶媒の混合物、特にアルコールと水との混合物、好ましくはステップＩ１）の水とエタノールとの混合物へのナノ粒子の分散体の追加の直後に、適当なアルコキシシランを加えなればならない。アルコキシシランの追加は、超音波処理下で行うべきである。適当なアルコキシシランは、好ましくは、アミノ基、チオール基及び／またはエポキシ基などのＳｉ−Ｃ結合により連結された官能基を有する、テトラメトキシシラン及びテトラエトキシシランなどのあらゆるテトラアルコキシシラン、トリアルコキシシラン、ジアルコキシシラン、及びモノアルコキシシランである。
【００５４】
シェルの交換をスムーズに進めるために、鉄とアルコキシシランとのモル比は、１：１〜１：５、好ましくは１：３にするべきである。
反応物の追加後、分散体は、ステップＪ１）に従って、１−８時間、好ましくは３−５時間、特に好ましくは４時間、超音波で処理される。その後、好ましくは水に対する透析により、粒子の精製が行われる。代わりに、高いＧ値で粒子を遠心分離して、超純水で沈殿物を洗浄することにより、精製を行ってもよい。
【００５５】
さらに、本発明は、本願に開示される方法で得ることが可能な粒子及び好ましくはナノ粒子にも言及する。
本発明の鉄含有粒子はそれ自身、強磁性、フェリ磁性、あるいは超常磁性を有する。このような粒子またはナノ粒子は、交番磁界により温めることができる。これらの粒子またはナノ粒子を含む組織を５０℃より高い温度に温めることが可能である。なぜなら、本発明によると、粒子やナノ粒子は、ＳＡＲ値が高いからである。
【００５６】
本発明に従って製造される鉄含有粒子の最低ＳＡＲ値は、６ｋＡ／ｍの磁界強度で、１８、好ましくは２０、特に好ましくは２２ｍＷ／ｍｇ Ｆｅである。
粒子の直径は、５００ｎｍより小さいのが好ましい。ナノ粒子の平均直径は、好ましくは２０ｎｍであり、または好ましくは１−１００ｎｍのサイズ範囲、特に好ましくは１５−３０ｎｍのサイズ範囲にある。
【００５７】
ナノ粒子の安定したシリコン含有シェルの厚さは、０．５〜１０ｎｍ、好ましくは３ｎｍである。
シリコン含有シェルは、さらなるアルコキシシランによって官能基化されて、粒子の特性を変更することができる。これらは、Ｓｉ−Ｃ結合により連結された官能基を有するトリアルコキシシランであるのが好ましい。その例は、（３−アクリルオキシプロピル）トリメトキシシラン、トリエトキシシリル−ブチルアルデヒド、３−アミノ−プロピルトリエトキシシラン、及び３−イソシアナート−プロピルトリエトキシシランである。トリエトキシシランは、異なる長さのＳｉ−Ｃ結合ポリエチレングリコール側鎖を有していてもよい。この例としては、２−［メトキシ（ポリエチレンオキシ）プロピル］トリメトキシシランが挙げられる。
【００５８】
本発明の鉄含有粒子は、薬の分野で使用されることができ、例えば水溶液の形で注入することができる。本発明の鉄含有粒子は、増殖性疾患、がん、腫瘍、リューマチ、関節炎、関節症、及び細菌感染の処置及び予防に使用できる。
【００５９】
さらに、本発明は、本発明のナノ粒子を含む医薬組成物、及びそのような医薬組成物の調合のための本発明のナノ粒子の使用に言及する。
これらの医薬組成物は、特に点滴または注射のための溶液中に存在する。例えば生理食塩水中の、このようなナノ粒子の溶液は、間質あるいは腫瘍内での応用に適している。さらに、動脈内または静脈内の応用は、非固形及び／または転移形成型の腫瘍のための全身に影響を与える全身治療の選択を可能にする。
【００６０】
さらに好ましい医薬組成物は、本発明の鉄含有粒子を含む粉末、吸入粉末及び凍結乾燥品である。
本発明のナノ粒子及び医薬組成物は、変性細胞種または外因性細胞により特徴付けられる病気の処置及び予防のために使用されるのが好ましく、そのために、外因性または変性細胞と身体自身の健康な細胞とを区別するナノ粒子の特徴を利用できる。変性細胞としては、特にがん細胞または増殖障害及び狭窄または再狭窄組織の細胞が考えられる。外因性細胞の例は、特に細菌である。
【００６１】
したがって、本発明のナノ粒子とナノ粒子を含む医薬組成物とは、腫瘍、癌及びがんの予防及び治療のために使用される。
本発明のナノ粒子を使用可能ながん及び腫瘍の種類の例は、腺癌、脈絡膜黒色腫、急性白血病、聴神経鞘腫、膨大部癌、肛門癌、星細胞腫、基底細胞癌、膵臓がん、結合組織腫瘍、膀胱がん、肺癌、非小細胞気管支癌、乳がん、バーキットリンパ腫、体癌（corpus carcinoma）、ＣＵＰ（原発不明癌）症候群、大腸がん、小腸がん、小腸腫瘍、卵巣がん、子宮内膜癌、上衣腫、上皮がん、ユーイング腫瘍、消化管腫瘍、胆嚢がん、胆道癌(gall carcinomas)、子宮がん、子宮頸がん、膠芽腫、婦人科腫瘍、耳、鼻、喉の腫瘍、血液腫瘍(hematological neoplasias)、有毛細胞白血病、尿道がん、皮膚がん、脳腫瘍（グリオーマ）、脳転移、精巣がん、下垂体腫瘍、カルチノイド、カポジ肉腫、喉頭がん、胚細胞腫瘍、骨がん、結腸直腸癌、頭頸部腫瘍（首、鼻、耳の部位に位置する腫瘍）、結腸癌、頭蓋咽頭腫、口の周辺及び唇のがん、肝臓がん、肝転移、白血病、まぶたの腫瘍、肺がん、悪性リンパ腫（ホジキンリンパ腫/非ホジキンリンパ腫）、リンパ腫、胃がん、悪性黒色腫、悪性腫瘍、胃腸管の悪性腫、乳癌、直腸がん、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、ホジキン病、菌状息肉腫、鼻のがん、神経鞘腫、神経芽腫、腎臓がん、腎細胞癌、非ホジキンリンパ腫、乏突起膠腫、食道癌、骨破壊性腫瘍及び造骨性腫瘍、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、形質細胞腫、頭頸部の扁平上皮癌、前立腺がん、咽頭がん、直腸癌、網膜芽細胞腫、膣がん、甲状腺癌、シュネーベルガー肺がん、食道がん、有棘細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉腫）、胸腺腫、管癌(tube carcinoma)、眼腫瘍、尿道癌、泌尿器系腫瘍、尿路上皮癌、外陰癌、性器疣贅(wart appearance)、軟部組織腫瘍、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌及び舌がんである。
【００６２】
固形腫瘍が特に好ましい。さらに、好ましいのは、前立腺癌、脳腫瘍、肉腫、子宮頚癌、卵巣癌、乳癌、気管支癌、黒色腫、頭頸部腫瘍、食道癌、直腸癌、膵臓癌、膀胱及び腎臓癌、肝臓、脳及びリンパ節における転移である。
【００６３】
特に好ましいのは、本発明のナノ粒子を、従来の温熱療法、放射線療法及び／または従来の化学療法と組み合わせて応用及び使用することである。
さらに、本発明の磁気及び好ましくは超常磁性の粒子は、抗がん剤の活動を活発にし、付加的にその副作用を減少する。
【００６４】
従って、本発明に従って製造された粒子は、抗がん剤、すなわち細胞毒性及び／または細胞増殖抑制化合物、すなわち細胞毒性及び／または細胞増殖抑制作用を備えた化合物、と組み合わせて使用されるのが好ましい。抗がん薬の例には、とりわけ、アルキル化剤、細胞増殖抑制作用のある抗生物質、代謝拮抗剤、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、白金含有化合物及びその他の細胞増殖抑制剤、アスパラギナーゼ、トレチノイン、アルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン及びミルテホシン(miltefosine)（登録商標）、ホルモン、免疫調節剤、モノクローナル抗体、シグナル伝達分子（シグナル伝達のための分子）、キナーゼ阻害剤及びサイトカインが含まれる。
【００６５】
アルキル化剤の例としては、とりわけクロレタミン、シクロホスファミド、トロホスアミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾロマイド、トレオスルファン、エストラムスチン及びニムスチンが含まれる。
【００６６】
細胞増殖抑制作用を持つ抗生物質の例としては、ダウノルビシン及びリポソームダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ダクチノマイシン、マイトマイシン Ｃ、ブレオマイシン、エピルビシン（４−エピ−アドリアマイシン）、イダルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン及びアクチノマイシン Ｄが含まれる。
【００６７】
メトトレキサート、５−フルオロウラシル、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、フルダラビン、クラドリビン、ペントスタチン、ゲムシタビン、シタラビン、アザチオプリン、ラルチトレキセド、カペシタビン、シトシン、アラビノシド、チオグアニン及びメルカプトプリンを、代謝拮抗剤（代謝拮抗薬）の例として挙げることができる。
【００６８】
アルカロイド及びポドフィロトキシンの種類に含まれるのは、とりわけ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エトポシド及びテニポシドである。さらに、白金含有化合物を、本発明に従って使用することができる。シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンが、白金を含有する化合物の例である。微小管阻害剤として数えられるのは、例えば、ヴィンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン）などのアルカロイド及びパクリタキセル（タキソール(Taxol)（登録商標））とパクリタキセルの誘導体である。トポイソメラーゼ阻害剤の例として、エトポシド、テニポシド、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカンが含まれる。
【００６９】
パクリタキセル及びドセタキセルは、タキサン化合物の例で、その他の細胞増殖抑制剤（その他の細胞増殖抑制薬）として数えられるのは、例えば、ヒドロキシカルバミド（ヒドロキシウレア）、イマチニブ、ミルテホシン(Miltefosine)（登録商標）、アムサクリン、トポテカン（トポイソメラーゼ−Ｉ阻害剤）、ペントスタチン、ベキサロテン、トレチノイン及びアスパラギナーゼである。モノクローナル抗体の化合物群の代表としては、とりわけトラスツズマブ（ハーセプチン(Herceptin)（登録商標）としても知られている）、アレムツズマブ（マブキャンパス(MabCampath)（登録商標）としても知られている）及びリツキシマブ（マブテラ(MabThera)（登録商標）としても知られている）が挙げられる。キナーゼ阻害剤の代表としては、ソラフェニブ（ネクサバール(Nexavar)（登録商標））及びスニチニブ（スーテント(Sutent)（登録商標））が挙げられる。ホルモンの例としては、グルココルチコイド（プレドニゾン）、エストロゲン（ホスフェストロール、エストラムスチン）、ＬＨＲＨ（ブセレリン、ゴセレリン、リュープロレリン、トリプトレリン）、フルタミド、酢酸シプロテロン、タモキシフェン、トレミフェン、アミノグルテチミド、フォルメスタン、エキセメスタン、レトロゾール及びアナストロゾールが挙げられる。免疫調節剤、サイトカイン、抗体及びシグナル伝達分子の種類として数えられるのは、インターロイキン−２、インターフェロン−α、エリスロポエチン、Ｇ−ＣＳＦ、トラスツズマブ（ハーセプチン(Herceptin)（登録商標））、リツキシマブ（マブテラ(Mabthera)（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ(Iressa)（登録商標））、イブリツモマブ（ゼヴァリン(Zevalin)（登録商標））、レバミゾール及びレチノイドである。
【００７０】
したがって、本発明はまた、本発明に従って製造された粒子と少なくとも1つの抗がん剤との組み合わせに言及し、少なくとも１つの抗がん剤とは、アクチノマイシン−Ｄ、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、プリン及びピリミジン塩基の拮抗剤、アントラサイクリン、アロマターゼ阻害剤、アスパラギナーゼ、抗エストロゲン剤(anti-estrogenes)、ベキサロテン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カンプトテシン誘導体、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、シトシンアラビノシド、アルキル化細胞増殖抑制剤(alkalyting cytostatics)、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ドセタキセル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ドキソルビシンリポ、エピルビシン、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フルダラビン、フルオロウラシル、葉酸拮抗剤、フォルメスタン、ゲムシタビン、グルココルチコイド、ゴセレリン、ホルモン及びホルモン拮抗剤、ハイカムチン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イリノテカン、レトロゾール、ロイプロリド、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミルテホシン、マイトマイシン、分裂抑制剤、ミトキサントロン、ニムスチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペントスタチン、プロカルバジン、タモキシフェン、テモゾロマイド、テニポシド、テストラクトン、チオテパ、チオグアニン、トポイソメラーゼ阻害剤、トポテカン、トレオスルファン、トレチノイン、トリプトレリン、トロホスファミド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、前記組み合わせを含む細胞増殖抑制効果のある抗生物質及び医薬組成物、などである。
【００７１】
上記の薬は、本発明の粒子との組み合わせとして使用されることができるだけでなく、がん細胞により効率的にインポートされるように、粒子、好ましくはナノ粒子と共有結合されることができる。
【００７２】
本発明のもう一つの側面は、本発明の方法によって得られる粒子に向けられており治療効果のある物質が、粒子またはナノ粒子に共有結合されている。治療効果のある物質は、抗増殖、抗移動(anti-migrative)、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルス及び／または抗真菌薬から選択されることができ、抗増殖、抗移動、抗血管新生、細胞増殖抑制及び／または抗細胞毒性薬及び、抗増殖、抗移動、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルス及び／または抗真菌特性を備えた核酸、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン(glycanes)またはリポタンパク質が好ましい。さらに、これらの物質は、放射線増感剤または増感剤またはそのような増感剤と組み合わされたあるいはそれを含む他の従来のがん治療方法のエンハンサーも含んでいてもよい。
【００７３】
治療活性物質の連結は、それぞれの薬剤によってどの官能基が保持されているかによって、例えば、水酸基、アミノ基、カルボニル基、チオール基またはカルボキシル基を介して行われることが可能である。水酸基は、エステル、アセタールまたはケタールと、チオール基は、チオエステル、チオアセタールまたはチオケタールと、アミノ基は、アミド、そして部分的にイミン（シッフ塩基）と、カルボキシル基は、エステルまたはアミドと、カルボニル基は、ケタールと連結されるのが好ましい。さらに、ナノ粒子の表面の官能基化はよく知られているため、既知の方法を使用して、アミノ基、水酸基、カルボキシル基あるいはカルボニル基が、ナノ粒子の表面に生成される。
【００７４】
ＷＯ９８／５８６７３の特許明細書に記載されているような活性化ナノ粒子の薬物複合体（例えば、ポリマーによる）のさらなるコーティングも可能であり、粒子薬物複合体の生物学的特性を改善するために使用することができる。さらに、標的とする特性を全体的な構成概念に与える分子を連結することもできる（例えば、ポリクロナール抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ハマーナ抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、抗体フラグメント、アプタマー、Ｆａｂ−フラグメント、Ｆｃ−フラグメント、ペプチド、ペプチドミメティクス、ギャップミア、リボザイム、ＣｐＧ−オリゴマー、ＤＮＡ−ザイム、リボスイッチ、または脂質）。すべてのさらなる変更が、標的部位での治療活性物質の活性化可能な放出に支障を来たさないことが重要である。
【００７５】
さらに、治療活性物質が直接ナノ粒子に結合されずに、リンカー分子を使って固定されるのが好ましい。リンカーとしては、リンカーに、熱により、光化学的にまたは酵素的に開裂できる基、酸に不安定な基または他の手段により簡単に分離できる基が含まれていることを条件に、最大５０の炭素原子の分子を持つ多様な分子を使用できる。リンカー分子内部での結合及び／またはリンカーの薬との結合及び／またはリンカーのナノ粒子の表面への結合は、交番磁界の作用によって、直接または間接的に開裂可能でなければならない。例えば、ペプチダーゼ、エステラーゼまたはヒドロラーゼが与えられると、あるいはその活性または発現が、標的部位、例えばがん細胞、の交番磁界によって強化されて、これらの酵素が、その後上述の開裂を行うことができると、間接開裂が発生する。さらに、間接開裂は、磁気ナノ粒子を使用して発生することもできる。磁気ナノ粒子は、交番磁界によって加熱され、それにより熱不安定な結合が開裂する。交番磁界の作用により標的部位のｐＨを増加させて、その後、リンカー分子内部で酸に不安定な結合を開裂することも可能である。
【００７６】
リンカー分子内部あるいはリンカー分子において酵素的に開裂可能な基としては、アミド基を挙げる必要がある。熱または酸によって開裂可能な基は、例えばリン酸基、チオリン酸基、硫酸基、ホスファミド基、カルバメート基またはイミン基を含む。
【００７７】
リンカー分子は、核酸分子、ポリペプチド、ペプチド核酸、アプタマー、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ロイシンジッパー、オリゴヌクレオチド、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ハプテン抗体ブリッジまたはビオチン−アビジンブリッジであってもよい。
【００７８】
薬は、必ずしも共有リンカーに結合されなくてもよいが、イオンや水素結合により結合されるか、あるいは挿入または複合化されてもよい。
抗がん剤、モノクローナル抗体、アプタマー、核酸、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン、リポタンパク質、または抗増殖、抗移動、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルスまたは抗真菌薬などの治療効果物質と微粒子及びナノ粒子との結合の様々な可能性が、ＷＯ２００６１０８４０５Ａに記載されている。
【００７９】
したがって、本発明の方法には、ステップＫ１）に従って、抗がん剤、モノクローナル抗体、アプタマー、核酸、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン、リポタンパク質、または抗増殖、抗移住、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルスまたは抗真菌薬を粒子と結合させるステップＬ１）がさらに含まれていてもよい。
【００８０】
さらに、吸着によりナノ粒子の表面に薬を結合して、薬の放出を大部分防止するバリア層が、交番磁界の作用により薬の放出が起きることができるように変形あるいは具体的には劣化するまで、バリア層でカバーすることもできる。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】本発明の酸化鉄ナノ粒子の（透過電子顕微鏡画像による）粒子サイズの分布を示す。
【図２】ＤＥ１９６１４１３６Ａ１の特許明細書に記載の、析出により製造された従来の酸化鉄ナノ粒子のＳＡＲ値と比較された、水中における本発明の酸化鉄ナノ粒子のＳＡＲ値を示す。ＳＡＲ値は、周波数が１００ｋＨｚの交番磁界を参照したものである。
【図３】核及びシェルを備えた本発明の酸化鉄ナノ粒子の略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８２】
本発明の粒子を生成するための一般的な合成法
ステップＡ１）
沸点が約２００℃〜約４００℃の有機溶媒ＬＭ１において、粒子種を製造するために、０．０２モルの鉄含有化合物Ａ及び１００ｍｌの溶媒をガラスフラスコに投入する。
ステップＡ２）
必要に応じて、本願に記載の添加物のうちの１つを、０．００８〜０．０５モル加える。
ステップＢ１）
その後の反応温度より約５０℃低い５０℃〜３５０℃の温度に、最低１０分間、好ましくは１時間、溶液を加熱する。
ステップＢ２）
必要に応じて、さらなる添加物とさらなる鉄含有化合物Ｂとを加える。
ステップＣ１）
得られた混合物を、ステップＢ１）の加熱フェーズの温度より少なくとも５０℃高い各溶媒ＬＭ１またはＬＭ２の沸点に、保護ガス下の環流冷却により三つ口フラスコで加熱し、最低約１時間、この温度を維持する。
ステップＣ２）
必要に応じて、得られた酸化鉄粒子を酸化する。
ステップＤ１）
遠心分離、洗浄、そして好ましくはソックスレー抽出により、粒子の精製を行う。
ステップＤ１* ）
必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子の少なくとも１つの焼戻しフェーズを行う。
ステップＤ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＤ２*）
必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子の少なくとも１つの焼戻しフェーズを行う。
ステップＥ１）
精製粒子の分散または懸濁のために、精製粒子を中性ｐＨの水あるいは好ましくは鉱酸を含む酸性水溶液中で再懸濁する。酸の濃度は、０．００２〜０．１Ｍである。分散または懸濁をサポートするために、超音波処理を行ってもよい。
ステップＥ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＦ１）
３〜８モルの量の表面活性化合物を加える。
ステップＦ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＧ１）
必要に応じて、５０℃〜９００℃で、好ましくは１〜２時間攪拌する。撹拌しながら１〜３時間、超音波処理を行う。
ステップＧ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＨ１）
遠心分離、洗浄、さらに、どの方法またはどの方法の組み合わせがよりよいかによって、抽出及び／または透析により、得られた粒子の精製を行う。
ステップＨ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＩ１）
得られた粒子を、選択的に、アミン及び好ましくはアンモニアを低濃度で含む水及びアルコール混合物（１: １〜５:１）に再懸濁する。
ステップＩ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＪ１）
０．０４〜０．０８モルの量のアルコキシシランを加える。
ステップＪ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＫ１）
遠心分離、透析、洗浄、及び／または、どの方法またはどの方法の組み合わせがよりよいかによって、再分散抽出により、得られた粒子の精製を行う。
ステップＫ２）
ここまで行われていない場合は、必要に応じて、酸化鉄ナノ粒子を酸化する。
ステップＬ１）
必要に応じて、薬物の酸化鉄ナノ粒子への結合を行う。
実施例
実施例１:
ジエチレングリコールジブチルエーテル中で粒子種を製造するために、０．３グラムの鉄ペンタカルボニルを、ガラスフラスコ中の５０ｍｌのジエチレングリコールジブチルエーテルに溶解した。１．７ｇのオレイン酸を溶液に加えた。その溶液を１時間１５Ｏ℃まで加熱した。
実施例２：
ポリグリコールＤＭＥ５００中での（クラリアント社）粒子種の製造のために、８グラムのオレイン酸鉄（ＩＩＩ）を、ガラスフラスコ中のポリグリコールＤＭＥ５００に溶解した。１．５ｇのオレイン酸を溶液に加え、その溶液を３０分間１２０℃まで加熱した。
実施例３Ａ：
酸化鉄ナノ粒子の製造のために、実施例１−２の溶液を、各溶液の沸点まで、保護ガス（アルゴン）の伝導下の環流凝縮により三つ口フラスコにおいて加熱し、この温度を最低１時間維持した。これにより、溶液は赤く変化した。冷却後、大気酸素の伝導により、一晩、粒子を酸化した。
実施例３Ｂ：
酸化鉄ナノ粒子の製造のために、実施例１−２の溶液を、各溶液の沸点まで、保護ガス（アルゴン）の伝導下の環流冷却により三つ口フラスコにおいて加熱し、この温度を最低１時間維持した。ここでは、溶液は黒く変化した。
実施例４：
実施例３の粒子を、高Ｇ値で遠心分離し、エタノールで洗浄した。５００ｍｇの洗浄製品を円筒ろ紙（６０３ｇ、ワットマン社）で重みをかけ、ソックスレー装置に置いた。２００ｍｌの抽出エタノールをソックスレー装置のナスフラスコに満たし、抽出物をその沸点まで加熱した。連続抽出は、８時間以上実施され、約１６抽出サイクルを含んだ。この結果、エタノール溶液は黄色っぽくなった。抽出完了後、円筒ろ紙を除去し、粉末をシュレンク容器に移動し、真空中で１時間乾燥した。
実施例５：
抽出後の粒子の分散体のために、実施例４のナノ粒子の粉末０．５ｇを２０ｍｌの０．０１Ｍ ＨＣＩで懸濁した。その後、ナノ粒子を３０分超音波で処理した。次に、０．５グラムの固体オレイン酸ナトリウムを加えた。
ステップＧ１：
その後、７０℃で１．５時間攪拌し、さらに２時間攪拌しながら超音波処理を行った。分散が成功裡に行われた後、分散体を低Ｇ値で遠心分離して非分散粒子を分離した。また、残りの分散体を洗浄して、過剰なオレイン酸ナトリウムを除去した。これは、高Ｇ値での遠心分離とジエチルエーテルでの洗浄と水中での再分散により行われる。代わりに、ジエチルエーテルまたは透析で抽出を行ってもよい。再分散を完全にするために、分散体を超音波で処理した。
実施例６：
実施例５の粒子分散体３．３ｍｌ（０．９７ｍｏｌ/ ｌ Ｆｅ）及びテトラエトキシシラン２．１４ｍｌを、水とエタノール（３:１）及びアンモニア１．５重量％の混合物１２０ｍｌに加えた。加えている間、分散体を攪拌し、その後６時間超音波で処理した。分散体を遠心分離及び水中での再分散により精製した。
実施例７（焼戻しフェーズ）：
実施例４で得られた粒子を２００ｍｌのジエチレングリコールジブチルエーテルで懸濁した。次に、８０℃で１２時間、空気で消毒し、その後、環流下で８時間（約２５６℃の沸点）沸騰させた。懸濁液を、その後、徐々に（８時間以内）室温に冷却した。このプロセスを２回繰り返した。
【００８３】
そのようにして得られた（焼戻しされた）粒子を洗浄し、２０ｍｌの１Ｍ ＨＮＯ3で懸濁した。次に、０．３ｍｍｏｌの硝酸鉄（Ｆｅ（ＮＯ3）3＊９Ｈ2Ｏ）を加えて、還流下で１時間（１００℃）沸騰させた。各回、１００ｍｌの水で３回、粒子を洗浄した。
【００８４】
次にこれらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ａ（酸化あり／空気での消毒なし）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のために、０．１モルのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００８５】
次に、溶液を３０分以内に沸点に加熱した。
沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００８６】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、９００ｍｌの１Ｍ ＨＮＯ3で再懸濁した。次に、４５０ｍｌの０．７Ｍ硝酸鉄（Ｆｅ（ＮＯ3）3＊９Ｈ2Ｏ）溶液を加えて、１時間（１００℃）還流下で沸騰させた。各回、５００ｍｌの水で３回、粒子を洗浄した。
【００８７】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ｂ（酸化なし／空気での消毒あり）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のため、０．１ｍｏｌのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００８８】
次に、溶液を３０分以内に沸点まで加熱した。沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００８９】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁し、大気酸素で消毒した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、水で再懸濁した。
【００９０】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ｃ（酸化あり／空気での消毒あり）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のため、０．１ｍｏｌのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００９１】
次に、溶液を３０分以内に沸点まで加熱した。沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００９２】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁し、大気酸素で消毒した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、９００ｍｌの１Ｍ ＨＮＯ3で再懸濁した。その後、４５０ｍｌの０．７Ｍ 鉄硝酸溶液（Ｆｅ（ＮＯ3）3＊９Ｈ2Ｏ）
を加え、１時間（１００℃）還流下で沸騰させた。粒子は、各回、５００ｍｌの水で３回洗浄された。
【００９３】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例８Ｄ（酸化なし／空気での消毒あり）：
エチレングリコール中での酸化鉄ナノ粒子の製造のため、０．１ｍｏｌのＦｅＣｌ3＊６Ｈ2Ｏと０．２ｍｏｌのＦｅＣｌ3（無水）、５０ｇの酢酸ナトリウムと１９５ｇの
ジアミノヘキサンを、９００ｍｌのエチレングリコールに溶解し、６Ｏ℃まで１時間加熱した。
【００９４】
次に、溶液を３０分以内に沸点まで加熱した。沸騰温度は６時間維持された。形成された分散体を、徐々に室温まで冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００９５】
その後、粒子を９００ｍｌのエチレングリコールで再懸濁した。懸濁液をエチレングリコールの沸点まで加熱し、２４時間この温度で維持した。
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、水で再懸濁した。
【００９６】
これらの粒子を、実施例４−６と同様にコーティングした。
実施例９
酸化鉄ナノ粒子の製造のために、２０００ｍｌのメタノール中に９６ｇの水酸化ナトリウムと６８０ｍｌのオレイン酸を含む溶液を、５００ｍｌのメタノール中の２１６ｇの塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物に加えた。その結果生じた固体をメタノールで洗浄し、ジエチルエーテルに溶解した。その後、数回水で抽出した。固体をアセトンで沈殿させ、洗浄し、真空下で乾燥させた。この固体７５ｇを２５０ｍｌのトリオクチルアミンに溶解させ、１２０℃まで１時間加熱した。
【００９７】
次に、溶液を３０分以内で３８０℃の温度までオートクレーブにて加熱した。この温度を４時間維持した。形成された分散体を、徐々に室温に冷却した。
粒子を、エタノールと水の混合物で３回洗浄した。
【００９８】
その後、粒子を３００ｍｌのジエチレングリコールジブチルエーテルで懸濁し、大気酸素で消毒した。懸濁液をオートクレーブにて３００℃の温度に加熱し、２４時間この温度で維持した。
【００９９】
冷却後、粒子を水とエタノールの混合液で洗浄し、水で再懸濁した。
これらの粒子を、実施例８Ｃのように酸化し、その後、実施例４−６と同様にコーティングした。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒子の製造方法であって、
Ａ１）少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ１に、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａの組成物を提供するステップと、
Ｂ１）少なくとも１０分間、ステップＣ１）に従って、該組成物を、５０℃から鉄含有化合物Ａの実際の反応温度より５０℃低い温度までの範囲の温度に加熱するステップと、
Ｃ１）該組成物を、２００℃〜４００℃の温度に加熱するステップと、
Ｄ１）得られた粒子を精製するステップと、
Ｅ１）精製されたナノ粒子を、水または酸の水溶液に懸濁するステップと、
Ｆ１）ステップＥ１）で得られた水溶液に、表面活性化合物を加えるステップと、
Ｇ１）超音波を使って、ステップＦ１）の水溶液を処理するステップと、
Ｈ１）請求項Ｇ１）で得られた粒子の水分散液を精製するステップと、
Ｉ１）水及び水と混ざる溶媒を含む溶媒混合液中で、ステップＨ１）の粒子の分散体を製造するステップと、
Ｊ１）ステップＩ１）の溶媒混合液における粒子の分散体に、アルコキシシランを加えるステップと、
Ｋ１）該粒子を精製するステップと
を含む方法。
【請求項２】
請求項１の方法であって、ステップＡ１に続いて、
Ａ２） テンサイド、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、ポリマーを含むグループから選択される添加物を加えるステップと
をさらに含む方法。
【請求項３】
請求項１または請求項２の方法であって、ステップＢ１に続いて、
Ｂ２） テンサイド、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、ポリマーを含むグループから選択される添加物を加えるステップ、または
Ｂ２） 少なくとも１つの有機溶媒Ｌ２中の少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂの組成物を加えるステップ、または
Ｂ２） 少なくとも１つの有機溶媒Ｌ２中の少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂの組成物を加えると共に、テンサイド、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、ポリマーを含むグループから選択される添加物を加えるステップ
をさらに含む方法。
【請求項４】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂが、鉄錯化合物、鉄カルボニル化合物、鉄塩、有機鉄化合物、飽和または不飽和脂肪酸の鉄塩、鉄サンドイッチ錯体を含むグループから選択される方法。
【請求項５】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの溶媒Ｌ２の最低沸点が、２００℃である方法。
【請求項６】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの溶媒Ｌ２が、高沸点アミン、アルカン、オレフィン、アルコールまたはエーテル、アルキレングリコールモノエーテル、アルキレングリコールジエーテル、エチレングリコールモノエーテル、エチレングリコールジエーテル、プロピレングリコールモノエーテル、プロピレングリコールジエーテル、グリセリンモノエーテル、グリセリンジエーテル、グリセリントリエーテル、グリコールジエーテル（グリム）を含むグループから選択される方法。
【請求項７】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂが、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａと同一、及び／または、少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ１が、少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ２と同一である方法。
【請求項８】
前記請求項のうちの１つの方法であって、ステップＣ１またはＤ１またはＥ１またはＦ１またはＧ１またはＨ１またはＩ１またはＪ１またはＫ１に続いて、
Ｘ２） 形成された粒子を酸化するステップ
をさらに含む方法。
【請求項９】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＤ１に続いて
Ｄ１*） 得られた粒子を焼戻しするステップ、または
ステップＤ２に続いて、
Ｄ２*） 得られた粒子を焼戻しするステップ
をさらに含む方法。
【請求項１０】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａが、鉄錯化合物、鉄カルボニル化合物、鉄塩、有機鉄化合物、飽和または不飽和脂肪酸の鉄塩、鉄サンドイッチ錯体を含むグループから選択される方法。
【請求項１１】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、少なくとも１つの溶媒の最低沸点が、２００℃である方法。
【請求項１２】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、少なくとも１つの溶媒ＬＭ１が、高沸点アミン、アルカン、オレフィン、アルコール、エーテル、アルキレングリコール−モノエーテル、アルキレングリコール−ジエーテル、エチレングリコール−モノエーテル、エチレングリコール−ジエーテル、プロピレングリコール−モノエーテル、プロピレングリコールジエーテル、グリセリンモノエーテル、グリセリンジエーテル、グリセリントリエーテル、グリコールジエーテル（グリム）を含むグループから選択される方法。
【請求項１３】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＣ１）の加熱が、最低３０分間実行される方法。
【請求項１４】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＤ１）の精製が、ソックスレー抽出によって行われる方法。
【請求項１５】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＤ１）の精製ステップにおいて、潜在的に存在する添加物の大部分が除去される方法。
【請求項１６】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、鉱酸の水溶液のｐＨが、２〜６、好ましくは３〜５である方法。
【請求項１７】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＥ１）の鉱酸が、塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ホウ酸または硝酸を含むグループから選択される方法。
【請求項１８】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＦ１）の表面活性化合物が、脂肪酸、脂肪酸塩、テンサイド、ポリマー、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、デキストラン、ＰＬＧＡ、キトサン及びポリエチレンイミンを含むグループから選択される方法。
【請求項１９】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＩ１）の溶媒混合液が、アルコールと水との混合物であって、アルコールと水との体積比が１：１から１：５である方法。
【請求項２０】
請求項１９の方法であって、前記溶媒混合液が、アミンまたはアンモニアをさらに含む方法。
【請求項２１】
請求項１９の方法であって、前記アルコールが、タノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールを含むグループから選択される方法。
【請求項２２】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＪ１）のアルコキシシランが、テトラアルコキシシラン、トリアルコキシシラン、ジアルコキシシラン及びモノアルコキシシランを含むグループから選択される方法。
【請求項２３】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、粒子とステップＪ１）のアルコキシシランとのモル比が、１：１〜１：５の範囲にある方法。
【請求項２４】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＪ１）のアルコキシシランを、超音波処理下で加える方法。
【請求項２５】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、クレームＪ１）で得られた分散体を、１〜８時間、超音波で処理する方法。
【請求項２６】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、
Ｌ１） ステップＫ１）で得られた粒子に、抗がん剤、モノクローナル抗体、アプタマー、核酸、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン、リポタンパク質、または抗増殖、抗移住、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルス、または抗真菌薬を結合させるステップをさらに含む方法。
【請求項２７】
請求項１〜２６のうちのいずれか１つの方法により得られる鉄含有粒子。
【請求項２８】
請求項１〜２６のうちのいずれか１つの方法により得られる、６ＫＡ／ｍの磁界強度で最低ＳＡＲ値が２０ｍＷ／ｍｇの鉄含有粒子。
【請求項２９】
請求項２５の鉄含有粒子を含む医薬組成物。
【請求項３０】
輸液、注射液、粉末、吸入粉末または凍結乾燥品の形態である請求項２９の医薬組成物。
【請求項３１】
薬品に使用される請求項２７の鉄含有粒子。
【請求項３２】
増殖性疾患、がん、腫瘍、リューマチ、関節炎、関節症、及び細菌感染の処置及び／または予防のための医薬組成物を製造するための請求項２７の鉄含有粒子の使用法。
【請求項３３】
抗がん剤と組み合わせた請求項２７の鉄含有粒子の使用法。
【請求項１】
粒子の製造方法であって、
Ａ１）少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ１に、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａの組成物を提供するステップと、
Ｂ１）少なくとも１０分間、ステップＣ１）に従って、該組成物を、５０℃から鉄含有化合物Ａの実際の反応温度より５０℃低い温度までの範囲の温度に加熱するステップと、
Ｃ１）該組成物を、２００℃〜４００℃の温度に加熱するステップと、
Ｄ１）得られた粒子を精製するステップと、
Ｅ１）精製されたナノ粒子を、水または酸の水溶液に懸濁するステップと、
Ｆ１）ステップＥ１）で得られた水溶液に、表面活性化合物を加えるステップと、
Ｇ１）超音波を使って、ステップＦ１）の水溶液を処理するステップと、
Ｈ１）請求項Ｇ１）で得られた粒子の水分散液を精製するステップと、
Ｉ１）水及び水と混ざる溶媒を含む溶媒混合液中で、ステップＨ１）の粒子の分散体を製造するステップと、
Ｊ１）ステップＩ１）の溶媒混合液における粒子の分散体に、アルコキシシランを加えるステップと、
Ｋ１）該粒子を精製するステップと
を含む方法。
【請求項２】
請求項１の方法であって、ステップＡ１に続いて、
Ａ２） テンサイド、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、ポリマーを含むグループから選択される添加物を加えるステップと
をさらに含む方法。
【請求項３】
請求項１または請求項２の方法であって、ステップＢ１に続いて、
Ｂ２） テンサイド、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、ポリマーを含むグループから選択される添加物を加えるステップ、または
Ｂ２） 少なくとも１つの有機溶媒Ｌ２中の少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂの組成物を加えるステップ、または
Ｂ２） 少なくとも１つの有機溶媒Ｌ２中の少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂの組成物を加えると共に、テンサイド、シラン、Ｓｉ-またはＡｌ-含有有機化合物、ホスフィン、飽和または非飽和脂肪酸、アミン、ジアミン、カルボン酸及びその塩、飽和及び非飽和脂肪酸、ポリマーを含むグループから選択される添加物を加えるステップ
をさらに含む方法。
【請求項４】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂが、鉄錯化合物、鉄カルボニル化合物、鉄塩、有機鉄化合物、飽和または不飽和脂肪酸の鉄塩、鉄サンドイッチ錯体を含むグループから選択される方法。
【請求項５】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの溶媒Ｌ２の最低沸点が、２００℃である方法。
【請求項６】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの溶媒Ｌ２が、高沸点アミン、アルカン、オレフィン、アルコールまたはエーテル、アルキレングリコールモノエーテル、アルキレングリコールジエーテル、エチレングリコールモノエーテル、エチレングリコールジエーテル、プロピレングリコールモノエーテル、プロピレングリコールジエーテル、グリセリンモノエーテル、グリセリンジエーテル、グリセリントリエーテル、グリコールジエーテル（グリム）を含むグループから選択される方法。
【請求項７】
請求項３の方法であって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ｂが、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａと同一、及び／または、少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ１が、少なくとも１つの有機溶媒ＬＭ２と同一である方法。
【請求項８】
前記請求項のうちの１つの方法であって、ステップＣ１またはＤ１またはＥ１またはＦ１またはＧ１またはＨ１またはＩ１またはＪ１またはＫ１に続いて、
Ｘ２） 形成された粒子を酸化するステップ
をさらに含む方法。
【請求項９】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＤ１に続いて
Ｄ１*） 得られた粒子を焼戻しするステップ、または
ステップＤ２に続いて、
Ｄ２*） 得られた粒子を焼戻しするステップ
をさらに含む方法。
【請求項１０】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、少なくとも１つの鉄含有化合物Ａが、鉄錯化合物、鉄カルボニル化合物、鉄塩、有機鉄化合物、飽和または不飽和脂肪酸の鉄塩、鉄サンドイッチ錯体を含むグループから選択される方法。
【請求項１１】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、少なくとも１つの溶媒の最低沸点が、２００℃である方法。
【請求項１２】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、少なくとも１つの溶媒ＬＭ１が、高沸点アミン、アルカン、オレフィン、アルコール、エーテル、アルキレングリコール−モノエーテル、アルキレングリコール−ジエーテル、エチレングリコール−モノエーテル、エチレングリコール−ジエーテル、プロピレングリコール−モノエーテル、プロピレングリコールジエーテル、グリセリンモノエーテル、グリセリンジエーテル、グリセリントリエーテル、グリコールジエーテル（グリム）を含むグループから選択される方法。
【請求項１３】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＣ１）の加熱が、最低３０分間実行される方法。
【請求項１４】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＤ１）の精製が、ソックスレー抽出によって行われる方法。
【請求項１５】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＤ１）の精製ステップにおいて、潜在的に存在する添加物の大部分が除去される方法。
【請求項１６】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、鉱酸の水溶液のｐＨが、２〜６、好ましくは３〜５である方法。
【請求項１７】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＥ１）の鉱酸が、塩酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ホウ酸または硝酸を含むグループから選択される方法。
【請求項１８】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＦ１）の表面活性化合物が、脂肪酸、脂肪酸塩、テンサイド、ポリマー、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、デキストラン、ＰＬＧＡ、キトサン及びポリエチレンイミンを含むグループから選択される方法。
【請求項１９】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＩ１）の溶媒混合液が、アルコールと水との混合物であって、アルコールと水との体積比が１：１から１：５である方法。
【請求項２０】
請求項１９の方法であって、前記溶媒混合液が、アミンまたはアンモニアをさらに含む方法。
【請求項２１】
請求項１９の方法であって、前記アルコールが、タノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールを含むグループから選択される方法。
【請求項２２】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＪ１）のアルコキシシランが、テトラアルコキシシラン、トリアルコキシシラン、ジアルコキシシラン及びモノアルコキシシランを含むグループから選択される方法。
【請求項２３】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、粒子とステップＪ１）のアルコキシシランとのモル比が、１：１〜１：５の範囲にある方法。
【請求項２４】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、ステップＪ１）のアルコキシシランを、超音波処理下で加える方法。
【請求項２５】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、クレームＪ１）で得られた分散体を、１〜８時間、超音波で処理する方法。
【請求項２６】
前記請求項のうちのいずれか１つの方法であって、
Ｌ１） ステップＫ１）で得られた粒子に、抗がん剤、モノクローナル抗体、アプタマー、核酸、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、糖タンパク質、グリカン、リポタンパク質、または抗増殖、抗移住、抗血管形成、抗血栓、抗炎症、消炎、細胞増殖抑制、細胞毒性、抗凝固、抗細菌、抗ウイルス、または抗真菌薬を結合させるステップをさらに含む方法。
【請求項２７】
請求項１〜２６のうちのいずれか１つの方法により得られる鉄含有粒子。
【請求項２８】
請求項１〜２６のうちのいずれか１つの方法により得られる、６ＫＡ／ｍの磁界強度で最低ＳＡＲ値が２０ｍＷ／ｍｇの鉄含有粒子。
【請求項２９】
請求項２５の鉄含有粒子を含む医薬組成物。
【請求項３０】
輸液、注射液、粉末、吸入粉末または凍結乾燥品の形態である請求項２９の医薬組成物。
【請求項３１】
薬品に使用される請求項２７の鉄含有粒子。
【請求項３２】
増殖性疾患、がん、腫瘍、リューマチ、関節炎、関節症、及び細菌感染の処置及び／または予防のための医薬組成物を製造するための請求項２７の鉄含有粒子の使用法。
【請求項３３】
抗がん剤と組み合わせた請求項２７の鉄含有粒子の使用法。
【図２】
【図３】
【図１】
【図３】
【図１】
【公表番号】特表２０１１−５０９２３３（Ｐ２０１１−５０９２３３Ａ）
【公表日】平成２３年３月２４日（２０１１．３．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５４１６９２（Ｐ２０１０−５４１６９２）
【出願日】平成２１年１月９日（２００９．１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００９／００００３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８６８２４
【国際公開日】平成２１年７月１６日（２００９．７．１６）
【出願人】（５１０１６０８９０）マグフォース ナノテクノロジーズ アーゲー (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月２４日（２０１１．３．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１月９日（２００９．１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００９／００００３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８６８２４
【国際公開日】平成２１年７月１６日（２００９．７．１６）
【出願人】（５１０１６０８９０）マグフォース ナノテクノロジーズ アーゲー (2)
【Ｆターム（参考）】
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