紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物
【課題】紅茶エキスの新規な中性脂肪吸収阻害作用と共に、摂取のための飲用に際して嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供すること。
【解決手段】紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満を含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調整された紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物からなる。本発明の紅茶ポリフエノールを高含有する紅茶エキスは、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、ポリフェノールを高含有する場合に生じる苦味の増大を抑制して、従来の市販紅茶本来の風味によって摂取できる、嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供する。
【解決手段】紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満を含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調整された紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物からなる。本発明の紅茶ポリフエノールを高含有する紅茶エキスは、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、ポリフェノールを高含有する場合に生じる苦味の増大を抑制して、従来の市販紅茶本来の風味によって摂取できる、嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物、特に、紅茶由来のポリフェノールを高含有量に含有し、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、摂取のための飲用に際して嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は高血圧、高脂血症、高血糖などを併発するメタボリックシンドロームの原因のひとつであり、メタボリックシンドロームは動脈硬化症のリスクを高めることが知られている。日本ではメタボリックシンドロームの罹患者及び予備軍とされる人の増加が以前から認知されており、平成１０年度に開始された「健康日本２１（２１世紀における国民健康づくり運動）」においてその対策の重要性が指摘されている。しかし健康日本２１で推進された「運動や適切な食習慣の推奨」にも関わらず、中高年男性を中心にＢＭＩ（体格指数）の増加が続いており、脂肪からのエネルギー摂取の割合も４０〜５０％という高値になっている（厚生労働省 平成１６年国民健康・栄養調査結果の概要）。
【０００３】
上述のように肥満の予防には適切なエネルギー摂取や運動が重要であるが、医学的に減量治療が必要な「肥満症」の場合には薬物療法が用いられることがある。現在使用されている肥満症の治療薬としては、マジンドールやシブトラミンといった食欲抑制剤や、アカルボースなどの糖質分解酵素阻害剤が知られている。また、脂肪の腸管での吸収を抑える膵リパーゼ阻害剤としてオルリスタットが知られているが、いずれの薬剤にも副作用が報告されており、必ずしも安全とは言えない（肥満・肥満症の指導マニュアル、医歯薬出版、2003年）。肥満を予防するためにはカロリー摂取を制限することが有効な手段であるが、日常生活で実行することは困難な場合が多い。したがって、食事に含まれる栄養成分の体内への吸収を適度に抑制することは、肥満やメタボリックシンドロームの予防に有用な方法であると考えられる。
【０００４】
以上の観点から近年は、糖質や脂質の吸収を抑制することで肥満の予防に有効と期待される、食品に含まれる機能性成分が注目を集めるようになってきた。食後の血中脂質濃度の上昇を抑制する物質として、植物由来の成分が多く報告されており、カワラケツメイから抽出、精製することよりなる当該タンニン類（特開平８−２５９５５７号公報）、レモングラス、オールスパイス、シナモン又はクローブの植物またはその抽出物（特開２００１−１２０２３７号公報）、キチン−キトサン（Int. J. Obes. Relat Metab Disord. 1999; 23: 174-179）、ピーマン、かぼちゃ、しめじ、まいたけ、ひじき、緑茶、紅茶、ウーロン茶の水抽出物（特開平３−２１９８７２号公報）、などが知られている。
【０００５】
茶は、緑茶、烏龍茶、紅茶などの形態で、世界中で広く飲まれている。緑茶には脂質酸化を亢進するカテキンが含まれ、その飲用により肥満の予防的効果が期待できることが知られている（Int J Obes Relat MetabDisord. 2002; 26: 1459-64；特開２００２−３２６９３２号公報）。また緑茶中の主要な成分エピガロカテキンガレートおよびエピカテキンガレートを配合した脂質吸収抑制食品も知られている（特開平３−２２８６６４号公報）。ウーロン茶には製造過程で生成するカテキン類の二量体が含まれており、この化合物は膵リパーゼ阻害活性を持ち、肥満予防に有用であることが報告されている（特開２００５−３３６１１７号公報）。またウーロン茶に特有の重合ポリフェノールを強化した飲料が食後の血清トリグリセリドの抑制に有効なことも示されている（Jpn. Pharmacol. Ther. （薬理と治療） 2004; 32(6): 335-342）。
【０００６】
一方、紅茶の摂取においては、血中ＬＤＬコレステロールの低下作用やＨＤＬコレステロールの増加作用、及び高血糖の改善作用が期待できることが動物実験により示されている（J. Nutr., 129, 1094-1101 (1999)、J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokyo), 44, 337-342 (1998)、J. Ethnopharmcol., 45, 223-226 (1995)）。さらにカフェインを含んだ紅茶葉の摂取により、体重増加抑制作用が期待できることも動物実験により示されている（J. Agric. Food Chem., 53, 480-489 (2005)）。また、紅茶にもウーロン茶と同様にカテキン類の２量体であるテアフラビン類が含まれていることが知られているが、これらが細胞内への糖輸送を抑制することにより肥満や糖尿病の改善に有用であることも知られている（特開２００６−１９２９号公報）。
【０００７】
紅茶には、その製造における発酵工程で産生される、緑茶には含まれない分子量７００から４００００のヘテロな重合ポリフェノール類（テアルビジン類）が含まれている。ウーロン茶は半発酵茶であり、発酵工程で産生するテアフラビン類がわずかしか含まれていないことから（茶の機能、学会出版センター、P29-31、2002年）、紅茶に含まれる複雑な構造のテアルビジン類は紅茶に特徴的な成分であることが推察される。
【０００８】
テアルビジン類には染色体異常抑制作用（Toxicol In Vitro. 2006 Aug;20(5):608-13.）やミトコンドリア活性化作用（Biosci. Biotechnol. Biochem., Vol. 71, 711-719 (2007).）などの作用が知られているが、膵リパーゼ阻害活性や肥満に対する予防作用に関しては開示されていない。
【０００９】
【特許文献１】特開平３−２１９８７２号公報。
【特許文献２】特開平８−２５９５５７号公報。
【特許文献３】特開２００１−１２０２３７号公報。
【特許文献４】特開２００２−３２６９３２号公報。
【特許文献５】特開平３−２２８６６４号公報。
【特許文献６】特開２００５−３３６１１７号公報。
【特許文献７】特開２００６−１９２９号公報。
【非特許文献１】肥満・肥満症の指導マニュアル、医歯薬出版、2003年。
【非特許文献２】Int. J. Obes. RelatMetab Disord. 1999; 23: 174-179。
【非特許文献３】Int. J. Obes. RelatMetab Disord. 2002; 26: 1459-64。
【非特許文献４】Jpn. Pharmacol. Ther. （薬理と治療） 2004; 32(6): 335-342。
【非特許文献５】J. Nutr., 129, 1094-1101 (1999)。
【非特許文献６】J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokyo), 44, 337-342 (1998)。
【非特許文献７】J. Ethnopharmcol., 45, 223-226 (1995)。
【非特許文献８】J. Agric. Food Chem., 53, 480-489 (2005)。
【非特許文献９】茶の機能、学会出版センター、P29-31、2002年。
【非特許文献１０】Toxicol In Vitro. 2006 Aug;20(5):608-13。
【非特許文献１１】Biosci. Biotechnol. Biochem., Vol. 71, 711-719 (2007)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、紅茶エキスの新規な優れた中性脂肪吸収阻害作用と共に、摂取のための飲用に際して嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者は、紅茶エキスの生理活性について鋭意検討する中で、紅茶ポリフェノールを高含有する紅茶エキスが、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有することを見い出した。そして、該紅茶エキスのテアフラビン量、カフェイン量を特定の範囲に調整することで、ポリフェノールを高含有する場合に生じる苦味の増大を抑制して、従来の市販紅茶本来の風味によって摂取できる、嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供することが可能であることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調製された紅茶抽出エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物からなる。本発明の中性脂肪吸収阻害によって、体重増加を抑制することができる。本発明において、テアフラビン量、カフェイン量を調製するには、紅茶抽出液に対して、別途、調製した紅茶エキスを添加することによって、行うことができる。紅茶エキスの総ポリフェノール含有量は、２０〜３０重量％が好ましく、２２〜２８重量％がより好ましい。かかる場合に、添加する紅茶抽出エキスのカフェイン含有量は、０．０１〜１重量％であることが好ましい。より好ましくは、０．０５〜０．５重量％のカフェイン含有量である。また、紅茶エキスの添加量は、総ポリフェノール換算で紅茶抽出液の１０％以上１００％未満であることが好ましい。紅茶エキスのテアフラビン含有量は、０．０５〜１．３重量％が好ましく、０．１〜１．０重量％がより好ましく、０．２５〜０．７５重量％が最も好ましい。
【００１３】
すなわち具体的には本発明は、（１）紅茶エキスを有効成分とし、中性脂肪吸収阻害用組成物中の紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調整された中性脂肪吸収阻害用組成物や、（２）中性脂肪吸収阻害が、体重増加を抑制するものであることを特徴とする上記（１）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物や、（３）中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量が７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満を含有し、テアフラビン量を０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬに、カフェイン量を５〜２０ｍｇ／１００ｍＬとなるように、中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量、テアフラビン量、及びカフェイン量を調整することを特徴とする上記（１）又は（２）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法からなる。
【００１４】
また本発明は、（４）テアフラビン量及びカフェイン量の調整が、紅茶抽出液に対して、別途、調製した紅茶エキスを添加することによって行われることを特徴とする上記（３）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法や、（５）添加する紅茶エキスのカフェイン含有量が、０．０１〜１重量％、テアフラビン含有量が０．０５〜１．３重量％であることを特徴とする上記（４）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法や、（６）紅茶エキスの添加量が、総ポリフェノール換算で紅茶抽出液の１０％以上１００％未満であることを特徴とする上記（４）又は（５）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法からなる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明において提供する中性脂肪吸収阻害用組成物は、高含有されるポリフェノールにより優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、紅茶本来の風味によって摂取できる特性を有し、本発明は嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供する。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物により、体重増加抑制剤としての機能を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調製された、紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物からなる。本発明の実施の形態について、以下に、詳細に説明する。
【００１７】
本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物は、総ポリフェノール量が７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満、好ましくは８０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満の紅茶抽出液である。下限を下回ると、紅茶ポリフェノール由来の生理効果が相対的に小さくなる。また上限を超えると本発明の方法を持ってしても満足出来る香味や外観は実現できない。一般的な市販紅茶飲料の総ポリフェノール量は３０〜５０ｍｇ/１００ｍＬ程度である。なお、ここでいう総ポリフェノール量は、日本食品分析センター編、「五訂 日本食品標準成分分析マニュアルの解説」、中央法規、２００１年７月、ｐ．２５２に記載の公定法（酒石酸鉄試薬法）に従って求めた値を指す。
【００１８】
＜テアフラビン量＞
本発明の紅茶抽出液のテアフラビン量は０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬであり、好ましくは０．３〜３．０ｍｇ／１００ｍＬであり、より好ましくは０.５〜２．５ｍｇ／１００ｍＬである。テアフラビンは、カテキンが酸化重合した２量体であり、具体的にはテアフラビン、テアフラビン３−Ｏ−ガレート、テアフラビン３’−Ｏ−ガレート、テアフラビン３’，３’−Ｏ−ジガレート及びイソテアフラビンのことをいう。これらは、紅茶抽出液の水色の主な由来となる物質群であり、紅茶抽出液の外観の指標となりうる物質群である。テアフラビン量が０．１ｍｇ／１００ｍＬを下回ると紅茶本来の水色が期待できなくなる。
【００１９】
なお、本発明でいうテアフラビン量は、テアフラビン、テアフラビン３−Ｏ−ガレート、テアフラビン３’−Ｏ−ガレート及びテアフラビン３’，３’−Ｏ−ジガレート量の総和を表し、例えば、以下の方法を用いて測定することができる。当該テアフラビン量に調整するためには複数の紅茶茶葉を使用して抽出するか、複数の抽出液を混合する、別途エキスを使用するなどの方法が考えられる。
【００２０】
（テアフラビンの測定法）
試料溶液を０．４５μｍ親水性ＰＴＦＥフィルター（アドバンテック（株）製，ＤＩＳＭＩＣ−１３ＨＰ）で濾過した後、以下の条件にてＨＰＬＣを用いて定量する。
【００２１】
（ＨＰＬＣ分析条件）：
装置：アライアンスＨＰＬＣ／ＰＤＡシステム（日本ウォーターズ株式会社製）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＵＧ１２０（４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１００ｍｍ、
ＳＨＩＳＥＩＤＯ）。
移動相Ａ液：０．０５％リン酸水。
移動相Ｂ液：アセトニトリル：酢酸エチル＝９８５：１５。
グラジエント：注入１３．３分後から２６．６分にかけてＡ液８１％から７７％に達する
リニアグラジエント。
流速：１．５ｍＬ／ｍｉｎ。
検出：ＵＶ２８０ｎｍ。
カラム温度：２５℃。
サンプル量：２０μＬ。
好適な測定濃度範囲：０．２５ｍｇ／１００ｍＬ−１０ｍｇ／１００ｍＬ。
【００２２】
＜カフェイン量＞
本発明の紅茶抽出液のカフェイン量は５〜２０ｍｇ／１００ｍＬである。２０ｍｇ／１００ｍＬを超えると、苦渋味が強くなり飲用には好ましくない。また寒冷混濁の発生にも影響する。一方、５ｍｇ／１００ｍＬを下回ると、紅茶本来の風味が損なわれるため好ましくない。なお、紅茶抽出液のカフェイン量は総ポリフェノール量と相関しており、本発明の総ポリフェノール量の範囲では通常茶葉を用いて通常の抽出をするだけでは２０ｍｇ／１００ｍＬ超になることが知られている。カフェインは、公知の方法を適宜使用して算出すればよい。一例として以下の方法を例示する。
【００２３】
（カフェインの測定法）
試料溶液を０．４５μｍ親水性ＰＴＦＥフィルター（アドバンテック（株）製，ＤＩＳＭＩＣ−１３ＨＰ）で濾過した後、以下の条件にてＨＰＬＣを用いて、カフェインを定量した。
（ＨＰＬＣ分析条件）：
装置：アライアンスＨＰＬＣ／ＰＤＡシステム（日本ウォーターズ株式会社製）。
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ ＧＰ、４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ
（関東化学（株）製）。
移動相Ａ液：アセトニトリル：０．０５％リン酸水＝１０：４００の溶液。
移動相Ｂ液：メタノール：アセトニトリル：０．０５％リン酸水＝２００．１０：４００
の溶液。
グラジエント：注入３分後から２５分後にＡ液１００％からＢ液１００％に達する
リニアグラジエント。
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ。
検出：ＵＶ２７５ｎｍ（カフェイン）。
カラム温度：４０℃。
サンプル量：１０μＬ。
【００２４】
＜紅茶抽出液の製造法＞
本発明の紅茶抽出液は、例えば次のように製造することができる：まず、茶葉の選定および抽出条件の調整によって本発明の紅茶飲料が製造できる。紅茶葉は産地別に、ダージリン、ディンブラ、アッサム、ウバ、ケニア、ヌアラエリアを始め、多数の種類が知られており、その成分は原料の茶樹の種類の違いやその発酵方法の違いによって異なっている。さらには毎年の収穫ごとでも厳密には成分が異なってくる。これらの茶葉の成分分析をおこなって、１種あるいは２種以上の茶葉を原料として使用できる。
【００２５】
複数の紅茶茶葉を使用する場合にはブレンドして通常の方法で熱水抽出してもよいし、または別々の紅茶葉を抽出した複数の紅茶抽出液を適宜混合、調整した抽出液を使用してもよい。特にカフェイン量については、茶葉の選択だけで調整することが困難な場合も考えられる。その場合には公知の方法により脱カフェイン処理する方法が挙げられる。脱カフェイン処理は、抽出前の茶葉に対しておこなってもよく、茶葉、抽出液の一部に対しておこなってカフェイン量の調整をおこなってもよい。
【００２６】
更には、予め調製した紅茶抽出液を殺菌した紅茶エキスを製造しておき、その成分分析値をもとに別に準備した紅茶抽出液に適当量配合して本発明の紅茶抽出液を製造する方法が開示できる。この際、紅茶エキスは必要に応じて脱カフェイン処理をおこなってもよい。その際、紅茶エキスのカフェイン含有量は０.０１〜１重量％であることが望ましい。より好ましくは０．０５〜０．５重量％のカフェイン含有量である。脱カフェインのための具体的手法は、活性炭処理や超臨界ガス抽出処理、合成吸着樹脂処理が候補としてあげられる。紅茶エキスのテアフラビン量は、０．０５〜１．３重量％が好ましい。紅茶エキスの総ポリフェノールの含有量は、２０〜３０重量％が好ましく、２２〜２８重量％がよ
り好ましい。またこの紅茶エキスは濃縮あるいは乾燥しても良い。このような紅茶エキスを使用する方法が成分量の調整が容易である点で、本発明の抽出液を製造するには最も適している。なお、本発明でいう「紅茶抽出液に対して別途調製した紅茶エキスを添加する」とは、具体的な実施形式として「紅茶抽出液に紅茶エキスを添加する」ことにとどまらず、結果的に紅茶飲料中に紅茶抽出液由来の成分と紅茶エキス由来の成分が混在していれば、いずれの実施形式も取りうる。
【００２７】
本発明の紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物は、適宜の剤型に製剤化して、経口的に投与することができる。例えば、液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、乳剤、丸剤等、適宜な製剤形態において、投与することができる。しかしながら、本発明の紅茶エキスは、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、紅茶本来の風味を有していることから、該嗜好性を有利に利用するためには、ドリンク剤のような形態で摂取することが好ましい。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物を製剤化するに当たっては、通常、製剤化に用いられている補助剤を用いることができる。該補助剤としては、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、潤滑剤、分散剤、緩衝材、保存剤、安定化剤等、適宜の補助剤を挙げることができる。また、本発明の紅茶抽出エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物は、適宜、飲料或いは食品に添加して、摂取することができる。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物は、飲食品等に添加して用いる場合には、適宜、濃縮、乾燥等の処理を施すことができる。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物を添加して摂取するのに適した食品の例としては、ＲＴＤ、紅茶、ヨーグルト等を挙げることができる。
【００２８】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００２９】
［紅茶エキス調製例］
＜紅茶エキス比較品の調製＞
市販されている紅茶葉（スリランカ産）９０ｇを９５℃の超純水８１０ｍＬに投入後、８０〜９５℃の温度で時々攪拌しながら４５分間抽出した。この抽出液を濾紙（アドバンテック（株）製、Ｎｏ．２、１１０ｍｍ）で濾過し、１回目の抽出濾過液を得た。上記抽出工程で残った茶葉を回収し、再度９５℃の超純水７２０ｍＬに投入後、８０〜９５℃の温度で時々攪拌しながら４５分間抽出した。この抽出液を濾紙（アドバンテック（株）製、Ｎｏ．２、１１０ｍｍ）で濾過し、２回目の抽出濾過液を得た。上記１回目及び２回目の抽出濾過液を混合し、紅茶抽出液１，２５０ｇを得た。この抽出液５０ｇを濃縮後凍結乾燥して、紅茶エキス比較品１ｇ（カテキン＝４．３８重量％、カフェイン＝６．７０重量％、ポリフェノール＝２７．９重量％、テアフラビン＝０．７２重量％）を得た。
【００３０】
＜紅茶エキス（１）の調製＞
上記方法と同様な方法で得られた紅茶抽出液４００ｇに活性炭（二村化学工業（株）製）５ｇを添加し、７５℃で１時間攪拌後、セライトをプレコートしたろ過板（ＮＡ５００．１１０ｍｍ）により濾過した。この濾液を濃縮後凍結乾燥して、本発明に用いるに適した紅茶エキス（１）６ｇ（総ポリフェノール量＝２３．５重量％、カフェイン量＝０．６３重量％、テアフラビン量＝０．３１重量％）を得た。
【００３１】
＜紅茶エキス（２）の調製＞
活性炭を添加して４５℃で、１時間３０分攪拌すること以外は、紅茶エキス（１）の調製と全く同様に処理して、紅茶エキス（２）６ｇ（総ポリフェノール量＝２４．３重量％、カフェイン量＝０．１重量％、テアフラビン量＝０．５重量％）を得た。
【００３２】
［実施例１−７］
紅茶葉１００ｇを、９０℃の熱水３０００ｇで６分間攪拌しながら抽出した。得られた抽出液と上記調製例で調製した紅茶エキス（１）（本発明に用いるに適する紅茶エキス）とを用いて表１のポリフェノール量になるようにそれぞれ配合量を決定した。紅茶原料（紅茶葉、紅茶エキス）のほか、ビタミンＣを０.０５％配合し、重曹を用いてｐＨ６.０になるように調製して紅茶飲料調合液を得た。得られた調合液を、ＵＨＴ殺菌処理してＰＥＴボトルに充填し、本発明の紅茶飲料を製造した。その時のカフェイン量、テアフラビン量を表２に示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】
［比較例１−６］
紅茶エキスを使用しない、すなわち紅茶抽出液だけを使用して飲料総ポリフェノール量が実施例１、４、５、６、７と同じになるようにした以外は全く同様にして比較例１−５の紅茶飲料を製造した。また、実施例５の紅茶エキスを上記調製例に示す紅茶エキス比較品に替えて比較例６の飲料を製造した。その時のカフェイン量、テアフラビン量を表２に示す。
【００３５】
［評価例］
実施例１−７、比較例１−６の紅茶飲料を熟練したパネリストにより官能評価を行なった。その結果を表２に示す。香味評価の「後ギレのよさ」については、良い（５点）から悪い（１点）の５段階で評価した。また、紅茶の香りやテクスチャーなども含めた総合評価として「飲みやすさ」を５段階で点数評価した。外観評価は飲料を０℃で２週間保存した後、目視にて混濁の程度を３段階で評価した。
【００３６】
【表２】
【００３７】
［実施例８−１４］
紅茶葉１００ｇを、９０℃の熱水３０００ｇで６分間攪拌しながら抽出した。得られた抽出液と上記調製例で調製した紅茶エキス（２）（本発明に用いるに適する紅茶エキス）とを用いて表１のポリフェノール量になるようにそれぞれ配合量を決定した。紅茶原料（紅茶葉、紅茶エキス）のほか、ビタミンＣを０.０５％配合し、重曹を用いてｐＨ６.０になるように調製して紅茶飲料調合液を得た。得られた調合液を、ＵＨＴ殺菌処理してＰＥＴボトルに充填し、本発明の紅茶飲料を製造した。その時のカフェイン量、テアフラビン量を表３に示す。
【００３８】
［評価例］
実施例８−１４の紅茶飲料を熟練したパネリストにより官能評価を行なった。その結果を表３に示す。香味評価の「後ギレのよさ」については、良い（５点）から、悪い（１点）の５段階で評価した。また、紅茶の香りやテクスチャーなども含めた総合評価として「飲みやすさ」を５段階で点数評価した。外観評価は飲料を０℃で２週間保存した後、目視にて混濁の程度を３段階で評価した。
【００３９】
【表３】
【００４０】
［実施例１５］
［紅茶エキスの膵リパーゼ活性阻害作用］
膵リパーゼ活性の測定はすでに報告された方法（J. Agric. Food Chem.,53, 4593-4598, (2005)）に従い、測定試薬には４−methylumbelliferyloleate（シグマアルドリッチ）を使用して行なった。酵素源としてはブタ膵リパーゼ（シグマアルドリッチ）を、１検体当り１０Ｕ使用した。調製例によって調製された紅茶エキス（１）、（２）は１０％エタノールに溶解し、試験に供した。活性は１０％エタノールのみを添加した場合に得られる酵素活性を１００％として表示した。測定の結果、紅茶エキスは膵リパーゼ活性を阻害し、終濃度３０μｇ／ｍｌで添加したときに約５０％までリパーゼ活性が低下した（図１：紅茶エキスの膵リパーゼ阻害活性；平均値±標準誤差）。以上の結果から、紅茶エキスが膵リパーゼ活性の阻害作用を持つことが確認された。
【００４１】
［実施例１６］
［紅茶エキスの脂質エマルジョン単回投与試験における脂質吸収抑制作用］
ラットにおける脂質エマルジョン吸収の測定試験は、すでに報告された方法（Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord. 25, 1459-1464 (2001)）にしたがって以下の通りに実施した。脂質エマルジョンはコーン油（６ｍｌ）、コール酸（８０ｍｇ）、オレイン酸コレステリル（２ｇ）、蒸留水（２ｍｌ）を混合し、超音波処理により調製し、１２時間絶食後の８〜９週齢の雄性Wistarラット（日本チャールズリバー）に１０ｍｌ／ｋｇ体重になるように胃ゾンデを用いて経口投与した。調製例によって調製された紅茶エキス（１）、（２）投与群では投与量が５００又は１０００ｍｇ／ｋｇ体重になるように、脂質エマルジョン調製時に紅茶エキスを混合した。脂質エマルジョン投与前、及び投与後１、２、３、４、５、７、９時間後のそれぞれに尾静脈より採血し、定法に従い血漿を調製し、血漿中の中性脂肪濃度をトリグリセライドＧテストワコー（和光純薬）により測定した。
【００４２】
その結果、対照群では投与後２から４時間の間で血漿中中性脂肪濃度の増加が見られたのに対し、紅茶エキス投与群では血漿中中性脂肪濃度の増加が用量依存的に抑制され、１０００ｍｇ／ｋｇ体重投与群では有意差を確認した（図２、図３：紅茶エキスの脂質吸収阻害作用；紅茶エキスは５００又は１０００ｍｇ／ｋｇ体重で脂質エマルジョンと同時投与。＊：Ｐ＜０．０５（対照群と比較）；投与前後の血中中性脂肪濃度を平均値±標準誤差で表示した。）。以上の結果から、紅茶エキスは脂質の吸収を抑制する作用を持つことが確認された。
【００４３】
［実施例１７］
［高脂肪食混餌並びに標準食混餌試験における紅茶エキスの抗肥満作用］
５週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（日本チャールズリバー）をＡＩＮ９３Ｇ飼料（オリエンタル酵母）により１０日間自由飲水、自由摂餌下で飼育後、試験食の給餌を開始した。試験食は、標準食（ＡＩＮ９３Ｇ）または脂質由来のエネルギー比が６０％の高脂肪食（Metabolism, 45, 1539-1546 (1996)）を用い、紅茶エキス投与群には、それぞれに調製例によって調製された紅茶エキス（１）を１％又は５％（ｗ／ｗ）混合したものを給餌した。高脂肪食対照群はｎ＝１２、その他の群は全てｎ＝１０で８週間の飼育試験を行った。飼育期間中は毎日給餌及び摂餌量の測定を行い、体重測定を１週間に１回行った。飼育最終日に非絶食条件化でエーテル麻酔の後、眼窩静脈叢より採血を行い、定法に従って血漿を調製し、血漿中の中性脂肪濃度をトリグリセライドＧテストワコー（和光純薬）により測定した。採血後、体長測定を行った後に解剖を行い、皮下脂肪組織、腎周囲脂肪組織、子宮周囲脂肪組織をそれぞれ採取し、湿重量を測定した。
【００４４】
飼育期間中、各実験群の摂取エネルギー量及び体長に変化は認められなかった（表４：紅茶エキス混餌投与マウスの体重増加量、脂肪組織重量、体長、摂取エネルギー量；平均値±標準誤差；＊：Ｐ＜０．０５：標準食（ＡＩＮ）又は高脂肪食（ＨＦＤ）対照群ｖｓ紅茶エキス混餌投与群での比較）。体重は標準食飼育、高脂肪食飼育いずれの場合も５％紅茶エキス混餌により有意に低い値で推移し（図５）、８週間の飼育期間中の体重増加量は、５％紅茶エキス混餌群では高脂肪食飼育の場合に有意に低値であった（表４）。この際、標準食飼育５％紅茶エキス混餌群の体重増加量は標準食対照群に対して約２．２ｇ少なく、高脂肪食飼育の場合は対照群に対して５％紅茶エキス混餌群で約４．６ｇ少なかった。
【００４５】
このことから、高脂肪食飼育下の方が紅茶エキスの体重増加抑制効果が高いと考えられ、膵リパーゼ活性阻害による脂質吸収阻害作用に基いた効果であることが推察された。更に、脂肪組織重量は皮下、腎周囲、子宮周囲のいずれにおいても、標準食及び高脂肪食飼育条件下での５％紅茶エキス混餌投与により有意に低下しており、体重増加の抑制作用が脂肪蓄積の抑制によるものであることが示唆された。
【００４６】
解剖時血漿中の中性脂肪濃度は、標準食飼育群において紅茶エキス投与により用量依存的に低下し、５％紅茶エキス混餌投与群では標準食対照群と比較して統計学的に有意な低下を示した。高脂肪食飼育群では、５％紅茶エキス混餌投与群において高脂肪食対照群と比較して統計学的に有意な低下を示した（図４：紅茶エキス混餌投与マウスの解剖時血中中性脂肪濃度；平均値±標準誤差）。以上の結果から、紅茶エキスの混餌投与により血中中性脂肪濃度の低下、体重増加量の抑制、脂肪蓄積量の抑制が示され、紅茶エキスの摂取が肥満の予防に有効であることが示された。
【００４７】
【表４】
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明の実施例の紅茶エキスの膵リパーゼ活性阻害作用についての試験例において、紅茶エキスの膵リパーゼ阻害活性の結果を示す図である。
【図２】本発明の実施例の紅茶エキス（１）の脂質エマルジョン単回投与試験における脂質吸収抑制作用についての試験において、紅茶エキス（１）の脂質吸収阻害作用の結果について示す図である。
【図３】本発明の実施例の紅茶エキス（２）の脂質エマルジョン単回投与試験における脂質吸収抑制作用についての試験において、紅茶エキス（２）の脂質吸収阻害作用の結果について示す図である。
【図４】本発明の実施例の高脂肪食混餌並びに標準食混餌試験における紅茶抽出エキスの抗肥満作用についての試験において、紅茶エキス混餌投与マウスの解剖時血中中性脂肪濃度の結果について示す図である。
【図５】本発明の実施例の高脂肪食混餌並びに標準食混餌試験における紅茶抽出エキスの抗肥満作用についての試験において、標準食飼育、高脂肪食飼育における体重の推移の結果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物、特に、紅茶由来のポリフェノールを高含有量に含有し、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、摂取のための飲用に際して嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は高血圧、高脂血症、高血糖などを併発するメタボリックシンドロームの原因のひとつであり、メタボリックシンドロームは動脈硬化症のリスクを高めることが知られている。日本ではメタボリックシンドロームの罹患者及び予備軍とされる人の増加が以前から認知されており、平成１０年度に開始された「健康日本２１（２１世紀における国民健康づくり運動）」においてその対策の重要性が指摘されている。しかし健康日本２１で推進された「運動や適切な食習慣の推奨」にも関わらず、中高年男性を中心にＢＭＩ（体格指数）の増加が続いており、脂肪からのエネルギー摂取の割合も４０〜５０％という高値になっている（厚生労働省 平成１６年国民健康・栄養調査結果の概要）。
【０００３】
上述のように肥満の予防には適切なエネルギー摂取や運動が重要であるが、医学的に減量治療が必要な「肥満症」の場合には薬物療法が用いられることがある。現在使用されている肥満症の治療薬としては、マジンドールやシブトラミンといった食欲抑制剤や、アカルボースなどの糖質分解酵素阻害剤が知られている。また、脂肪の腸管での吸収を抑える膵リパーゼ阻害剤としてオルリスタットが知られているが、いずれの薬剤にも副作用が報告されており、必ずしも安全とは言えない（肥満・肥満症の指導マニュアル、医歯薬出版、2003年）。肥満を予防するためにはカロリー摂取を制限することが有効な手段であるが、日常生活で実行することは困難な場合が多い。したがって、食事に含まれる栄養成分の体内への吸収を適度に抑制することは、肥満やメタボリックシンドロームの予防に有用な方法であると考えられる。
【０００４】
以上の観点から近年は、糖質や脂質の吸収を抑制することで肥満の予防に有効と期待される、食品に含まれる機能性成分が注目を集めるようになってきた。食後の血中脂質濃度の上昇を抑制する物質として、植物由来の成分が多く報告されており、カワラケツメイから抽出、精製することよりなる当該タンニン類（特開平８−２５９５５７号公報）、レモングラス、オールスパイス、シナモン又はクローブの植物またはその抽出物（特開２００１−１２０２３７号公報）、キチン−キトサン（Int. J. Obes. Relat Metab Disord. 1999; 23: 174-179）、ピーマン、かぼちゃ、しめじ、まいたけ、ひじき、緑茶、紅茶、ウーロン茶の水抽出物（特開平３−２１９８７２号公報）、などが知られている。
【０００５】
茶は、緑茶、烏龍茶、紅茶などの形態で、世界中で広く飲まれている。緑茶には脂質酸化を亢進するカテキンが含まれ、その飲用により肥満の予防的効果が期待できることが知られている（Int J Obes Relat MetabDisord. 2002; 26: 1459-64；特開２００２−３２６９３２号公報）。また緑茶中の主要な成分エピガロカテキンガレートおよびエピカテキンガレートを配合した脂質吸収抑制食品も知られている（特開平３−２２８６６４号公報）。ウーロン茶には製造過程で生成するカテキン類の二量体が含まれており、この化合物は膵リパーゼ阻害活性を持ち、肥満予防に有用であることが報告されている（特開２００５−３３６１１７号公報）。またウーロン茶に特有の重合ポリフェノールを強化した飲料が食後の血清トリグリセリドの抑制に有効なことも示されている（Jpn. Pharmacol. Ther. （薬理と治療） 2004; 32(6): 335-342）。
【０００６】
一方、紅茶の摂取においては、血中ＬＤＬコレステロールの低下作用やＨＤＬコレステロールの増加作用、及び高血糖の改善作用が期待できることが動物実験により示されている（J. Nutr., 129, 1094-1101 (1999)、J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokyo), 44, 337-342 (1998)、J. Ethnopharmcol., 45, 223-226 (1995)）。さらにカフェインを含んだ紅茶葉の摂取により、体重増加抑制作用が期待できることも動物実験により示されている（J. Agric. Food Chem., 53, 480-489 (2005)）。また、紅茶にもウーロン茶と同様にカテキン類の２量体であるテアフラビン類が含まれていることが知られているが、これらが細胞内への糖輸送を抑制することにより肥満や糖尿病の改善に有用であることも知られている（特開２００６−１９２９号公報）。
【０００７】
紅茶には、その製造における発酵工程で産生される、緑茶には含まれない分子量７００から４００００のヘテロな重合ポリフェノール類（テアルビジン類）が含まれている。ウーロン茶は半発酵茶であり、発酵工程で産生するテアフラビン類がわずかしか含まれていないことから（茶の機能、学会出版センター、P29-31、2002年）、紅茶に含まれる複雑な構造のテアルビジン類は紅茶に特徴的な成分であることが推察される。
【０００８】
テアルビジン類には染色体異常抑制作用（Toxicol In Vitro. 2006 Aug;20(5):608-13.）やミトコンドリア活性化作用（Biosci. Biotechnol. Biochem., Vol. 71, 711-719 (2007).）などの作用が知られているが、膵リパーゼ阻害活性や肥満に対する予防作用に関しては開示されていない。
【０００９】
【特許文献１】特開平３−２１９８７２号公報。
【特許文献２】特開平８−２５９５５７号公報。
【特許文献３】特開２００１−１２０２３７号公報。
【特許文献４】特開２００２−３２６９３２号公報。
【特許文献５】特開平３−２２８６６４号公報。
【特許文献６】特開２００５−３３６１１７号公報。
【特許文献７】特開２００６−１９２９号公報。
【非特許文献１】肥満・肥満症の指導マニュアル、医歯薬出版、2003年。
【非特許文献２】Int. J. Obes. RelatMetab Disord. 1999; 23: 174-179。
【非特許文献３】Int. J. Obes. RelatMetab Disord. 2002; 26: 1459-64。
【非特許文献４】Jpn. Pharmacol. Ther. （薬理と治療） 2004; 32(6): 335-342。
【非特許文献５】J. Nutr., 129, 1094-1101 (1999)。
【非特許文献６】J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokyo), 44, 337-342 (1998)。
【非特許文献７】J. Ethnopharmcol., 45, 223-226 (1995)。
【非特許文献８】J. Agric. Food Chem., 53, 480-489 (2005)。
【非特許文献９】茶の機能、学会出版センター、P29-31、2002年。
【非特許文献１０】Toxicol In Vitro. 2006 Aug;20(5):608-13。
【非特許文献１１】Biosci. Biotechnol. Biochem., Vol. 71, 711-719 (2007)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、紅茶エキスの新規な優れた中性脂肪吸収阻害作用と共に、摂取のための飲用に際して嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者は、紅茶エキスの生理活性について鋭意検討する中で、紅茶ポリフェノールを高含有する紅茶エキスが、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有することを見い出した。そして、該紅茶エキスのテアフラビン量、カフェイン量を特定の範囲に調整することで、ポリフェノールを高含有する場合に生じる苦味の増大を抑制して、従来の市販紅茶本来の風味によって摂取できる、嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供することが可能であることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調製された紅茶抽出エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物からなる。本発明の中性脂肪吸収阻害によって、体重増加を抑制することができる。本発明において、テアフラビン量、カフェイン量を調製するには、紅茶抽出液に対して、別途、調製した紅茶エキスを添加することによって、行うことができる。紅茶エキスの総ポリフェノール含有量は、２０〜３０重量％が好ましく、２２〜２８重量％がより好ましい。かかる場合に、添加する紅茶抽出エキスのカフェイン含有量は、０．０１〜１重量％であることが好ましい。より好ましくは、０．０５〜０．５重量％のカフェイン含有量である。また、紅茶エキスの添加量は、総ポリフェノール換算で紅茶抽出液の１０％以上１００％未満であることが好ましい。紅茶エキスのテアフラビン含有量は、０．０５〜１．３重量％が好ましく、０．１〜１．０重量％がより好ましく、０．２５〜０．７５重量％が最も好ましい。
【００１３】
すなわち具体的には本発明は、（１）紅茶エキスを有効成分とし、中性脂肪吸収阻害用組成物中の紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調整された中性脂肪吸収阻害用組成物や、（２）中性脂肪吸収阻害が、体重増加を抑制するものであることを特徴とする上記（１）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物や、（３）中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量が７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満を含有し、テアフラビン量を０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬに、カフェイン量を５〜２０ｍｇ／１００ｍＬとなるように、中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量、テアフラビン量、及びカフェイン量を調整することを特徴とする上記（１）又は（２）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法からなる。
【００１４】
また本発明は、（４）テアフラビン量及びカフェイン量の調整が、紅茶抽出液に対して、別途、調製した紅茶エキスを添加することによって行われることを特徴とする上記（３）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法や、（５）添加する紅茶エキスのカフェイン含有量が、０．０１〜１重量％、テアフラビン含有量が０．０５〜１．３重量％であることを特徴とする上記（４）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法や、（６）紅茶エキスの添加量が、総ポリフェノール換算で紅茶抽出液の１０％以上１００％未満であることを特徴とする上記（４）又は（５）記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法からなる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明において提供する中性脂肪吸収阻害用組成物は、高含有されるポリフェノールにより優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、紅茶本来の風味によって摂取できる特性を有し、本発明は嗜好性に優れた中性脂肪吸収阻害用組成物を提供する。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物により、体重増加抑制剤としての機能を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調製された、紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物からなる。本発明の実施の形態について、以下に、詳細に説明する。
【００１７】
本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物は、総ポリフェノール量が７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満、好ましくは８０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満の紅茶抽出液である。下限を下回ると、紅茶ポリフェノール由来の生理効果が相対的に小さくなる。また上限を超えると本発明の方法を持ってしても満足出来る香味や外観は実現できない。一般的な市販紅茶飲料の総ポリフェノール量は３０〜５０ｍｇ/１００ｍＬ程度である。なお、ここでいう総ポリフェノール量は、日本食品分析センター編、「五訂 日本食品標準成分分析マニュアルの解説」、中央法規、２００１年７月、ｐ．２５２に記載の公定法（酒石酸鉄試薬法）に従って求めた値を指す。
【００１８】
＜テアフラビン量＞
本発明の紅茶抽出液のテアフラビン量は０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬであり、好ましくは０．３〜３．０ｍｇ／１００ｍＬであり、より好ましくは０.５〜２．５ｍｇ／１００ｍＬである。テアフラビンは、カテキンが酸化重合した２量体であり、具体的にはテアフラビン、テアフラビン３−Ｏ−ガレート、テアフラビン３’−Ｏ−ガレート、テアフラビン３’，３’−Ｏ−ジガレート及びイソテアフラビンのことをいう。これらは、紅茶抽出液の水色の主な由来となる物質群であり、紅茶抽出液の外観の指標となりうる物質群である。テアフラビン量が０．１ｍｇ／１００ｍＬを下回ると紅茶本来の水色が期待できなくなる。
【００１９】
なお、本発明でいうテアフラビン量は、テアフラビン、テアフラビン３−Ｏ−ガレート、テアフラビン３’−Ｏ−ガレート及びテアフラビン３’，３’−Ｏ−ジガレート量の総和を表し、例えば、以下の方法を用いて測定することができる。当該テアフラビン量に調整するためには複数の紅茶茶葉を使用して抽出するか、複数の抽出液を混合する、別途エキスを使用するなどの方法が考えられる。
【００２０】
（テアフラビンの測定法）
試料溶液を０．４５μｍ親水性ＰＴＦＥフィルター（アドバンテック（株）製，ＤＩＳＭＩＣ−１３ＨＰ）で濾過した後、以下の条件にてＨＰＬＣを用いて定量する。
【００２１】
（ＨＰＬＣ分析条件）：
装置：アライアンスＨＰＬＣ／ＰＤＡシステム（日本ウォーターズ株式会社製）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＵＧ１２０（４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１００ｍｍ、
ＳＨＩＳＥＩＤＯ）。
移動相Ａ液：０．０５％リン酸水。
移動相Ｂ液：アセトニトリル：酢酸エチル＝９８５：１５。
グラジエント：注入１３．３分後から２６．６分にかけてＡ液８１％から７７％に達する
リニアグラジエント。
流速：１．５ｍＬ／ｍｉｎ。
検出：ＵＶ２８０ｎｍ。
カラム温度：２５℃。
サンプル量：２０μＬ。
好適な測定濃度範囲：０．２５ｍｇ／１００ｍＬ−１０ｍｇ／１００ｍＬ。
【００２２】
＜カフェイン量＞
本発明の紅茶抽出液のカフェイン量は５〜２０ｍｇ／１００ｍＬである。２０ｍｇ／１００ｍＬを超えると、苦渋味が強くなり飲用には好ましくない。また寒冷混濁の発生にも影響する。一方、５ｍｇ／１００ｍＬを下回ると、紅茶本来の風味が損なわれるため好ましくない。なお、紅茶抽出液のカフェイン量は総ポリフェノール量と相関しており、本発明の総ポリフェノール量の範囲では通常茶葉を用いて通常の抽出をするだけでは２０ｍｇ／１００ｍＬ超になることが知られている。カフェインは、公知の方法を適宜使用して算出すればよい。一例として以下の方法を例示する。
【００２３】
（カフェインの測定法）
試料溶液を０．４５μｍ親水性ＰＴＦＥフィルター（アドバンテック（株）製，ＤＩＳＭＩＣ−１３ＨＰ）で濾過した後、以下の条件にてＨＰＬＣを用いて、カフェインを定量した。
（ＨＰＬＣ分析条件）：
装置：アライアンスＨＰＬＣ／ＰＤＡシステム（日本ウォーターズ株式会社製）。
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ ＧＰ、４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ
（関東化学（株）製）。
移動相Ａ液：アセトニトリル：０．０５％リン酸水＝１０：４００の溶液。
移動相Ｂ液：メタノール：アセトニトリル：０．０５％リン酸水＝２００．１０：４００
の溶液。
グラジエント：注入３分後から２５分後にＡ液１００％からＢ液１００％に達する
リニアグラジエント。
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ。
検出：ＵＶ２７５ｎｍ（カフェイン）。
カラム温度：４０℃。
サンプル量：１０μＬ。
【００２４】
＜紅茶抽出液の製造法＞
本発明の紅茶抽出液は、例えば次のように製造することができる：まず、茶葉の選定および抽出条件の調整によって本発明の紅茶飲料が製造できる。紅茶葉は産地別に、ダージリン、ディンブラ、アッサム、ウバ、ケニア、ヌアラエリアを始め、多数の種類が知られており、その成分は原料の茶樹の種類の違いやその発酵方法の違いによって異なっている。さらには毎年の収穫ごとでも厳密には成分が異なってくる。これらの茶葉の成分分析をおこなって、１種あるいは２種以上の茶葉を原料として使用できる。
【００２５】
複数の紅茶茶葉を使用する場合にはブレンドして通常の方法で熱水抽出してもよいし、または別々の紅茶葉を抽出した複数の紅茶抽出液を適宜混合、調整した抽出液を使用してもよい。特にカフェイン量については、茶葉の選択だけで調整することが困難な場合も考えられる。その場合には公知の方法により脱カフェイン処理する方法が挙げられる。脱カフェイン処理は、抽出前の茶葉に対しておこなってもよく、茶葉、抽出液の一部に対しておこなってカフェイン量の調整をおこなってもよい。
【００２６】
更には、予め調製した紅茶抽出液を殺菌した紅茶エキスを製造しておき、その成分分析値をもとに別に準備した紅茶抽出液に適当量配合して本発明の紅茶抽出液を製造する方法が開示できる。この際、紅茶エキスは必要に応じて脱カフェイン処理をおこなってもよい。その際、紅茶エキスのカフェイン含有量は０.０１〜１重量％であることが望ましい。より好ましくは０．０５〜０．５重量％のカフェイン含有量である。脱カフェインのための具体的手法は、活性炭処理や超臨界ガス抽出処理、合成吸着樹脂処理が候補としてあげられる。紅茶エキスのテアフラビン量は、０．０５〜１．３重量％が好ましい。紅茶エキスの総ポリフェノールの含有量は、２０〜３０重量％が好ましく、２２〜２８重量％がよ
り好ましい。またこの紅茶エキスは濃縮あるいは乾燥しても良い。このような紅茶エキスを使用する方法が成分量の調整が容易である点で、本発明の抽出液を製造するには最も適している。なお、本発明でいう「紅茶抽出液に対して別途調製した紅茶エキスを添加する」とは、具体的な実施形式として「紅茶抽出液に紅茶エキスを添加する」ことにとどまらず、結果的に紅茶飲料中に紅茶抽出液由来の成分と紅茶エキス由来の成分が混在していれば、いずれの実施形式も取りうる。
【００２７】
本発明の紅茶エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物は、適宜の剤型に製剤化して、経口的に投与することができる。例えば、液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、乳剤、丸剤等、適宜な製剤形態において、投与することができる。しかしながら、本発明の紅茶エキスは、優れた中性脂肪吸収阻害作用を有すると共に、紅茶本来の風味を有していることから、該嗜好性を有利に利用するためには、ドリンク剤のような形態で摂取することが好ましい。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物を製剤化するに当たっては、通常、製剤化に用いられている補助剤を用いることができる。該補助剤としては、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、潤滑剤、分散剤、緩衝材、保存剤、安定化剤等、適宜の補助剤を挙げることができる。また、本発明の紅茶抽出エキスを有効成分とする中性脂肪吸収阻害用組成物は、適宜、飲料或いは食品に添加して、摂取することができる。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物は、飲食品等に添加して用いる場合には、適宜、濃縮、乾燥等の処理を施すことができる。本発明の中性脂肪吸収阻害用組成物を添加して摂取するのに適した食品の例としては、ＲＴＤ、紅茶、ヨーグルト等を挙げることができる。
【００２８】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００２９】
［紅茶エキス調製例］
＜紅茶エキス比較品の調製＞
市販されている紅茶葉（スリランカ産）９０ｇを９５℃の超純水８１０ｍＬに投入後、８０〜９５℃の温度で時々攪拌しながら４５分間抽出した。この抽出液を濾紙（アドバンテック（株）製、Ｎｏ．２、１１０ｍｍ）で濾過し、１回目の抽出濾過液を得た。上記抽出工程で残った茶葉を回収し、再度９５℃の超純水７２０ｍＬに投入後、８０〜９５℃の温度で時々攪拌しながら４５分間抽出した。この抽出液を濾紙（アドバンテック（株）製、Ｎｏ．２、１１０ｍｍ）で濾過し、２回目の抽出濾過液を得た。上記１回目及び２回目の抽出濾過液を混合し、紅茶抽出液１，２５０ｇを得た。この抽出液５０ｇを濃縮後凍結乾燥して、紅茶エキス比較品１ｇ（カテキン＝４．３８重量％、カフェイン＝６．７０重量％、ポリフェノール＝２７．９重量％、テアフラビン＝０．７２重量％）を得た。
【００３０】
＜紅茶エキス（１）の調製＞
上記方法と同様な方法で得られた紅茶抽出液４００ｇに活性炭（二村化学工業（株）製）５ｇを添加し、７５℃で１時間攪拌後、セライトをプレコートしたろ過板（ＮＡ５００．１１０ｍｍ）により濾過した。この濾液を濃縮後凍結乾燥して、本発明に用いるに適した紅茶エキス（１）６ｇ（総ポリフェノール量＝２３．５重量％、カフェイン量＝０．６３重量％、テアフラビン量＝０．３１重量％）を得た。
【００３１】
＜紅茶エキス（２）の調製＞
活性炭を添加して４５℃で、１時間３０分攪拌すること以外は、紅茶エキス（１）の調製と全く同様に処理して、紅茶エキス（２）６ｇ（総ポリフェノール量＝２４．３重量％、カフェイン量＝０．１重量％、テアフラビン量＝０．５重量％）を得た。
【００３２】
［実施例１−７］
紅茶葉１００ｇを、９０℃の熱水３０００ｇで６分間攪拌しながら抽出した。得られた抽出液と上記調製例で調製した紅茶エキス（１）（本発明に用いるに適する紅茶エキス）とを用いて表１のポリフェノール量になるようにそれぞれ配合量を決定した。紅茶原料（紅茶葉、紅茶エキス）のほか、ビタミンＣを０.０５％配合し、重曹を用いてｐＨ６.０になるように調製して紅茶飲料調合液を得た。得られた調合液を、ＵＨＴ殺菌処理してＰＥＴボトルに充填し、本発明の紅茶飲料を製造した。その時のカフェイン量、テアフラビン量を表２に示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】
［比較例１−６］
紅茶エキスを使用しない、すなわち紅茶抽出液だけを使用して飲料総ポリフェノール量が実施例１、４、５、６、７と同じになるようにした以外は全く同様にして比較例１−５の紅茶飲料を製造した。また、実施例５の紅茶エキスを上記調製例に示す紅茶エキス比較品に替えて比較例６の飲料を製造した。その時のカフェイン量、テアフラビン量を表２に示す。
【００３５】
［評価例］
実施例１−７、比較例１−６の紅茶飲料を熟練したパネリストにより官能評価を行なった。その結果を表２に示す。香味評価の「後ギレのよさ」については、良い（５点）から悪い（１点）の５段階で評価した。また、紅茶の香りやテクスチャーなども含めた総合評価として「飲みやすさ」を５段階で点数評価した。外観評価は飲料を０℃で２週間保存した後、目視にて混濁の程度を３段階で評価した。
【００３６】
【表２】
【００３７】
［実施例８−１４］
紅茶葉１００ｇを、９０℃の熱水３０００ｇで６分間攪拌しながら抽出した。得られた抽出液と上記調製例で調製した紅茶エキス（２）（本発明に用いるに適する紅茶エキス）とを用いて表１のポリフェノール量になるようにそれぞれ配合量を決定した。紅茶原料（紅茶葉、紅茶エキス）のほか、ビタミンＣを０.０５％配合し、重曹を用いてｐＨ６.０になるように調製して紅茶飲料調合液を得た。得られた調合液を、ＵＨＴ殺菌処理してＰＥＴボトルに充填し、本発明の紅茶飲料を製造した。その時のカフェイン量、テアフラビン量を表３に示す。
【００３８】
［評価例］
実施例８−１４の紅茶飲料を熟練したパネリストにより官能評価を行なった。その結果を表３に示す。香味評価の「後ギレのよさ」については、良い（５点）から、悪い（１点）の５段階で評価した。また、紅茶の香りやテクスチャーなども含めた総合評価として「飲みやすさ」を５段階で点数評価した。外観評価は飲料を０℃で２週間保存した後、目視にて混濁の程度を３段階で評価した。
【００３９】
【表３】
【００４０】
［実施例１５］
［紅茶エキスの膵リパーゼ活性阻害作用］
膵リパーゼ活性の測定はすでに報告された方法（J. Agric. Food Chem.,53, 4593-4598, (2005)）に従い、測定試薬には４−methylumbelliferyloleate（シグマアルドリッチ）を使用して行なった。酵素源としてはブタ膵リパーゼ（シグマアルドリッチ）を、１検体当り１０Ｕ使用した。調製例によって調製された紅茶エキス（１）、（２）は１０％エタノールに溶解し、試験に供した。活性は１０％エタノールのみを添加した場合に得られる酵素活性を１００％として表示した。測定の結果、紅茶エキスは膵リパーゼ活性を阻害し、終濃度３０μｇ／ｍｌで添加したときに約５０％までリパーゼ活性が低下した（図１：紅茶エキスの膵リパーゼ阻害活性；平均値±標準誤差）。以上の結果から、紅茶エキスが膵リパーゼ活性の阻害作用を持つことが確認された。
【００４１】
［実施例１６］
［紅茶エキスの脂質エマルジョン単回投与試験における脂質吸収抑制作用］
ラットにおける脂質エマルジョン吸収の測定試験は、すでに報告された方法（Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord. 25, 1459-1464 (2001)）にしたがって以下の通りに実施した。脂質エマルジョンはコーン油（６ｍｌ）、コール酸（８０ｍｇ）、オレイン酸コレステリル（２ｇ）、蒸留水（２ｍｌ）を混合し、超音波処理により調製し、１２時間絶食後の８〜９週齢の雄性Wistarラット（日本チャールズリバー）に１０ｍｌ／ｋｇ体重になるように胃ゾンデを用いて経口投与した。調製例によって調製された紅茶エキス（１）、（２）投与群では投与量が５００又は１０００ｍｇ／ｋｇ体重になるように、脂質エマルジョン調製時に紅茶エキスを混合した。脂質エマルジョン投与前、及び投与後１、２、３、４、５、７、９時間後のそれぞれに尾静脈より採血し、定法に従い血漿を調製し、血漿中の中性脂肪濃度をトリグリセライドＧテストワコー（和光純薬）により測定した。
【００４２】
その結果、対照群では投与後２から４時間の間で血漿中中性脂肪濃度の増加が見られたのに対し、紅茶エキス投与群では血漿中中性脂肪濃度の増加が用量依存的に抑制され、１０００ｍｇ／ｋｇ体重投与群では有意差を確認した（図２、図３：紅茶エキスの脂質吸収阻害作用；紅茶エキスは５００又は１０００ｍｇ／ｋｇ体重で脂質エマルジョンと同時投与。＊：Ｐ＜０．０５（対照群と比較）；投与前後の血中中性脂肪濃度を平均値±標準誤差で表示した。）。以上の結果から、紅茶エキスは脂質の吸収を抑制する作用を持つことが確認された。
【００４３】
［実施例１７］
［高脂肪食混餌並びに標準食混餌試験における紅茶エキスの抗肥満作用］
５週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（日本チャールズリバー）をＡＩＮ９３Ｇ飼料（オリエンタル酵母）により１０日間自由飲水、自由摂餌下で飼育後、試験食の給餌を開始した。試験食は、標準食（ＡＩＮ９３Ｇ）または脂質由来のエネルギー比が６０％の高脂肪食（Metabolism, 45, 1539-1546 (1996)）を用い、紅茶エキス投与群には、それぞれに調製例によって調製された紅茶エキス（１）を１％又は５％（ｗ／ｗ）混合したものを給餌した。高脂肪食対照群はｎ＝１２、その他の群は全てｎ＝１０で８週間の飼育試験を行った。飼育期間中は毎日給餌及び摂餌量の測定を行い、体重測定を１週間に１回行った。飼育最終日に非絶食条件化でエーテル麻酔の後、眼窩静脈叢より採血を行い、定法に従って血漿を調製し、血漿中の中性脂肪濃度をトリグリセライドＧテストワコー（和光純薬）により測定した。採血後、体長測定を行った後に解剖を行い、皮下脂肪組織、腎周囲脂肪組織、子宮周囲脂肪組織をそれぞれ採取し、湿重量を測定した。
【００４４】
飼育期間中、各実験群の摂取エネルギー量及び体長に変化は認められなかった（表４：紅茶エキス混餌投与マウスの体重増加量、脂肪組織重量、体長、摂取エネルギー量；平均値±標準誤差；＊：Ｐ＜０．０５：標準食（ＡＩＮ）又は高脂肪食（ＨＦＤ）対照群ｖｓ紅茶エキス混餌投与群での比較）。体重は標準食飼育、高脂肪食飼育いずれの場合も５％紅茶エキス混餌により有意に低い値で推移し（図５）、８週間の飼育期間中の体重増加量は、５％紅茶エキス混餌群では高脂肪食飼育の場合に有意に低値であった（表４）。この際、標準食飼育５％紅茶エキス混餌群の体重増加量は標準食対照群に対して約２．２ｇ少なく、高脂肪食飼育の場合は対照群に対して５％紅茶エキス混餌群で約４．６ｇ少なかった。
【００４５】
このことから、高脂肪食飼育下の方が紅茶エキスの体重増加抑制効果が高いと考えられ、膵リパーゼ活性阻害による脂質吸収阻害作用に基いた効果であることが推察された。更に、脂肪組織重量は皮下、腎周囲、子宮周囲のいずれにおいても、標準食及び高脂肪食飼育条件下での５％紅茶エキス混餌投与により有意に低下しており、体重増加の抑制作用が脂肪蓄積の抑制によるものであることが示唆された。
【００４６】
解剖時血漿中の中性脂肪濃度は、標準食飼育群において紅茶エキス投与により用量依存的に低下し、５％紅茶エキス混餌投与群では標準食対照群と比較して統計学的に有意な低下を示した。高脂肪食飼育群では、５％紅茶エキス混餌投与群において高脂肪食対照群と比較して統計学的に有意な低下を示した（図４：紅茶エキス混餌投与マウスの解剖時血中中性脂肪濃度；平均値±標準誤差）。以上の結果から、紅茶エキスの混餌投与により血中中性脂肪濃度の低下、体重増加量の抑制、脂肪蓄積量の抑制が示され、紅茶エキスの摂取が肥満の予防に有効であることが示された。
【００４７】
【表４】
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明の実施例の紅茶エキスの膵リパーゼ活性阻害作用についての試験例において、紅茶エキスの膵リパーゼ阻害活性の結果を示す図である。
【図２】本発明の実施例の紅茶エキス（１）の脂質エマルジョン単回投与試験における脂質吸収抑制作用についての試験において、紅茶エキス（１）の脂質吸収阻害作用の結果について示す図である。
【図３】本発明の実施例の紅茶エキス（２）の脂質エマルジョン単回投与試験における脂質吸収抑制作用についての試験において、紅茶エキス（２）の脂質吸収阻害作用の結果について示す図である。
【図４】本発明の実施例の高脂肪食混餌並びに標準食混餌試験における紅茶抽出エキスの抗肥満作用についての試験において、紅茶エキス混餌投与マウスの解剖時血中中性脂肪濃度の結果について示す図である。
【図５】本発明の実施例の高脂肪食混餌並びに標準食混餌試験における紅茶抽出エキスの抗肥満作用についての試験において、標準食飼育、高脂肪食飼育における体重の推移の結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
紅茶エキスを有効成分とし、中性脂肪吸収阻害用組成物中の紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調整された中性脂肪吸収阻害用組成物。
【請求項２】
中性脂肪吸収阻害が、体重増加を抑制するものであることを特徴とする請求項１記載の中性脂肪吸収阻害用組成物。
【請求項３】
中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量が７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満を含有し、テアフラビン量を０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬに、カフェイン量を５〜２０ｍｇ／１００ｍＬとなるように、中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量、テアフラビン量、及びカフェイン量を調整することを特徴とする請求項１又は２記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項４】
テアフラビン量及びカフェイン量の調整が、紅茶抽出液に対して、別途、調製した紅茶エキスを添加することによって行われることを特徴とする請求項３記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項５】
添加する紅茶エキスのカフェイン含有量が、０．０１〜１重量％、テアフラビン含有量が０．０５〜１．３重量％であることを特徴とする請求項４記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項６】
紅茶エキスの添加量が、総ポリフェノール換算で紅茶抽出液の１０％以上１００％未満であることを特徴とする請求項４又は５記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項１】
紅茶エキスを有効成分とし、中性脂肪吸収阻害用組成物中の紅茶由来のポリフェノールを総ポリフェノール量として７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満含有し、テアフラビン量が０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬ、カフェイン量が５〜２０ｍｇ／１００ｍＬに調整された中性脂肪吸収阻害用組成物。
【請求項２】
中性脂肪吸収阻害が、体重増加を抑制するものであることを特徴とする請求項１記載の中性脂肪吸収阻害用組成物。
【請求項３】
中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量が７０ｍｇ／１００ｍＬ以上１００ｍｇ／１００ｍＬ未満を含有し、テアフラビン量を０．１〜３．５ｍｇ／１００ｍＬに、カフェイン量を５〜２０ｍｇ／１００ｍＬとなるように、中性脂肪吸収阻害用組成物中の総ポリフェノール量、テアフラビン量、及びカフェイン量を調整することを特徴とする請求項１又は２記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項４】
テアフラビン量及びカフェイン量の調整が、紅茶抽出液に対して、別途、調製した紅茶エキスを添加することによって行われることを特徴とする請求項３記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項５】
添加する紅茶エキスのカフェイン含有量が、０．０１〜１重量％、テアフラビン含有量が０．０５〜１．３重量％であることを特徴とする請求項４記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【請求項６】
紅茶エキスの添加量が、総ポリフェノール換算で紅茶抽出液の１０％以上１００％未満であることを特徴とする請求項４又は５記載の中性脂肪吸収阻害用組成物の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００９−１７３６５２（Ｐ２００９−１７３６５２Ａ）
【公開日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３３４９３２（Ｐ２００８−３３４９３２）
【出願日】平成２０年１２月２６日（２００８．１２．２６）
【出願人】（０００２５３５０３）キリンホールディングス株式会社 (247)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月２６日（２００８．１２．２６）
【出願人】（０００２５３５０３）キリンホールディングス株式会社 (247)
【Ｆターム（参考）】
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