紅茶飲料およびその製造方法
【課題】高い抗肥満作用が得られる紅茶飲料を提供する。
【解決手段】本発明は、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、タンニン量に換算してポリフェノールを６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料である。
【解決手段】本発明は、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、タンニン量に換算してポリフェノールを６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅茶飲料およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、茶抽出物をタンナーゼで処理する技術が知られている（特許文献１〜５）。
【０００３】
特許文献１には、水性茶抽出物にオキシダーゼとタンナーゼとを加えることで、冷蔵貯蔵時の濁りの発生が減じられることが記載されている。また、特許文献２には、タンナーゼとクロロゲン酸エステラーゼとを併用するときに著しく茶抽出液の混濁を分解除去できることが記載されている。
【０００４】
特許文献３には、高濃度のカテキンを含有する状態においてタンナーゼ処理を施すことにより、茶飲料の旨味やコク味を損なわずに渋味を低減することができることが記載されている。
【０００５】
特許文献４には、抗酸化力を高めた茶抽出物からなる抗酸化剤組成物が記載されている。また、特許文献４には、茶葉の抽出時および／または抽出後にタンニン分解酵素タンナーゼを作用させ、ガレート型カテキン類の没食子酸エステルを切断し、非ガレート型カテキン類と没食子酸に分解すること、エピガロカテキンガレートにタンナーゼを作用させ生じるエピガロカテキンと没食子酸はいずれも強い抗酸化力を持っていること等が記載されている。
また、特許文献５には、茶抽出物又はその濃縮物をタンナーゼ処理することにより、ガレート体カテキン率を低下させることが記載されている。特許文献５では、予めガレート体カテキン率が５０質量％未満に調整された茶抽出物を用いて容器詰茶飲料を製造するにあたって、没食子酸の含有量を２１〜１５０ｐｐｍに調整し、非重合体カテキン類中のガレート体カテキン率が０〜５０質量％かつエピ体率を３０〜６０質量％に調整すれば、非重合体カテキン類濃度が高い場合でも、苦味が抑制されるだけでなく、長期保存してもカテキン類の組成変化が起こりにくいとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平７−３０３４５０号公報
【特許文献２】特開平１１−３０８９６５号公報
【特許文献３】特開２００５−１３０８０９号公報
【特許文献４】特開２００６−８３３５２号公報
【特許文献５】特開２００７−３２５５８５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところが、本発明者らは、タンナーゼ処理された紅茶抽出物が脂肪の蓄積を抑制することを新たに知見した。また、このことは、タンナーゼだけでなく、クロロゲン酸エステラーゼのようなエステラーゼで処理された紅茶抽出物に共通した作用であることが予測された。
【０００８】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、抗肥満作用の高い紅茶飲料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によれば、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料が提供される。
【００１０】
また、本発明によれば、上記の紅茶飲料を飲料用容器に充填してなる容器詰飲料が提供される。
【００１１】
また、本発明によれば、上記の紅茶飲料を摂取することにより肥満を抑制する方法が提供される。
【００１２】
さらに、本発明によれば、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する工程と、前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の際および／または前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の後に前記紅茶抽出物をエステラーゼで処理する工程と、を含み、ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料を製造する方法が提供される。
【００１３】
この発明によれば、エステラーゼで処理された紅茶抽出物から製造された紅茶飲料にタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上の高濃度のポリフェノールを含有させる。これにより、食事として摂取することにより、高い脂肪蓄積抑制作用を得ることができる。したがって、高い抗肥満作用が得られる紅茶飲料が実現可能になる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、高い抗肥満作用が得られる紅茶飲料が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】紅茶飲料のポリフェノール組成比を示す図である。
【図２】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図３】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図４】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図５】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図６】マウス長期投与試験におけるマウスの体重の増減の推移を示す図である。
【図７】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウスの体重当たりの内臓（腸間膜）周囲脂肪の割合（％）を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウスの体重当たりの腎臓周囲脂肪の割合（％）を示す図である。
【図８】マウス長期投与試験におけるマウスの体重当たりの精巣周囲脂肪の割合（％）を示す図である。
【図９】マウス長期投与試験におけるマウスの空腹時の血糖値の推移を示す図である。
【図１０】マウス長期投与試験における総ヘモグロビン中のヘモグロビンＡ１ｃ（ヘモグロビンとブドウ糖が結合したもの）の割合を示す図である。
【図１１】（ａ）マウス長期投与試験における飼育終了後のマウスの血清トリグリセリド値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験における飼育終了後のマウス血液中の総コレステロール値を示す図である。
【図１２】マウス長期投与試験におけるマウスの血清ＮＥＦＡ値を示す図である。
【図１３】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中の総脂質量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のトリグリセリド値を示す図である。
【図１４】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中の総コレステロール値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のＮＥＦＡ値を示す図である。
【図１５】マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のリン脂質値を示す図である。
【図１６】（ａ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中の総脂質値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中のトリグリセリド値を示す図である。
【図１７】（ａ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中の総コレステロール値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中の総胆汁酸を示す図である。
【図１８】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中の脂肪酸合成酵素活性を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のカルニチンパルミトイル転移酵素活性を示す図である。
【図１９】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウスの血清レプチン値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウスの血清インスリン値を示す図である。
【図２０】マウス長期投与試験におけるマウスの血清アディポネクチン値を示す図である。
【図２１】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＡＰＯＡ２発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＦＡＢＰ１発現量を示す図である。
【図２２】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＡＰＯＣ３発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＧＣＫ発現量を示す図である。
【図２３】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＰＴＥＮ発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＲＢＰ４発現量を示す図である。
【図２４】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＦＢＰ１発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＮＦＫＢＩＡ発現量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について、説明する。本発明は、上述のとおり、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、タンニン量に換算してポリフェノールを６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有する紅茶飲料である。
【００１７】
＜紅茶葉＞
本発明で用いる紅茶抽出液の原料は、紅茶葉（茶樹Ｃａｍｅｒｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓの茶葉を完全に酸化発酵させて得られる全発酵茶葉）であれば特に品種は限定されず、オーソドックス（伝統的）製法による紅茶葉であってもよいし、ＣＴＣ（非伝統的）製法による紅茶葉であってもよい。紅茶葉は、市販のものをそのまま使用してもよいが、粉砕、摩砕等の処理を施してもよい。
【００１８】
＜紅茶抽出液＞
紅茶葉の抽出液は、例えば、抽出カラムに充填した原料茶類に水または熱水を一定流量で送水し、所定量の抽出液を得る方法や、抽出釜に茶葉を仕込み、所定量の水または熱水で一定時間浸積した後、茶葉と分離して抽出液を得る方法等、通常使用される方法を適宜選択して調製することができる。抽出倍率は、３倍〜５０倍が好ましい。抽出倍率とは、抽出に使用する茶葉重量に対する抽出溶媒の容量の比率のことをいう。抽出条件は、例えば、水または熱水の温度を３５℃以上１００℃以下とすることができる。抽出の際には、抽出助剤を添加してもよい。抽出助剤としては特に限定されず、従来公知の抽出助剤を用いることができる。例えば、抗酸化剤として、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムやＬ−アスコルビン酸を用いることができ、ｐＨ調整剤として、重炭酸ナトリウムや炭酸カリウムを用いることができる。また、これらの抽出助剤を、茶葉の質量に対して０．１〜１０質量％を添加して用いることができる。
【００１９】
本発明では、これらの紅茶葉の抽出の際および／または抽出後にエステラーゼを作用させる。本発明のエステラーゼは、縮合型タンニンを分解できる作用を有するものであればよく、具体的には、ガレート型カテキンを非ガレート型カテキンに分解できる作用、または／及び、ガレート型テアフラビンを非ガレート型テアフラビンに分解できる作用を有するものが好ましい。例えば、ぺクチナーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、タンナーゼが挙げられるが、タンナーゼもしくはクロロゲン酸エステラーゼのいずれかまたは両方を用いると好ましく、タンナーゼが特に好ましい。タンナーゼとしては、タンニンを分解する活性を有するものであれば任意のものを使用することができる。また、クロロゲン酸エステラーゼとしては、クロロゲン酸エステルを分解する活性を有するものであれば任意のものを使用することができる。
【００２０】
紅茶葉から紅茶抽出液を抽出した後にエステラーゼを作用させる場合、紅茶抽出液にそのままエステラーゼを添加してもよいし、たとえば１０倍程度濃縮した紅茶抽出液にエステラーゼを添加してもよい。紅茶抽出液をエステラーゼ処理するとき、温度は、１０℃以上６０℃以下、好ましくは、２０℃以上５５℃以下、より好ましくは、２０℃以上４０℃以下とすることができる。また、ｐＨを２．０以上８．０以下、好ましくは、４．０以上７．０以下に調製しておいてもよい。そして、このような条件下でエステラーゼを１０分以上４８０分以下反応させることができる。
【００２１】
本発明では、紅茶抽出液をエステラーゼ処理することにより、紅茶抽出液中のガレート型カテキンおよびガレート型テアフラビンを非ガレート型にすることができる。ガレート型の含有量を減少させることで、渋みが低減され、非ガレート型のポリフェノールを含有することで、脂肪蓄積抑制作用を得ることができる。本発明の紅茶飲料に含有するガレート型カテキンとガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）に対する非ガレート型カテキンと非ガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）の比率は、２〜１５とすると好ましい。
【００２２】
＜ポリフェノール＞
本発明の「紅茶飲料」は、「単体で混入された場合には苦渋味を感じる程度」のポリフェノールを含有する。ここで「ポリフェノール」とは、紅茶の抽出物から得られる紅茶葉由来ポリフェノールのみならず、これとは別途添加される一般的な植物に含有されるポリフェノール（添加ポリフェノール）をも含む意味である。ここで、「紅茶葉由来ポリフェノール」とは、本発明の紅茶飲料に用いられる主原料の紅茶葉由来のポリフェノールであり、紅茶飲料の製造において、主原料の紅茶葉から水または熱水などにて抽出されるものである。または別途調製した紅茶エキスも含まれる。
【００２３】
「紅茶葉由来ポリフェノール」としては、ガレート型カテキンとしては、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、カテキンガレートが挙げられる。また、非ガレート型カテキンとしては、カテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンが挙げられる。ガレート型テアフラビンとしては、テアフラビン３ガレート、テアフラビン３'ガレート、テアフラビン３，３'ジガレートが挙げられる。非ガレート型テアフラビンとしては、テアフラビンが挙げられる。
【００２４】
「添加ポリフェノール」の種類としては、植物に含有されるポリフェノールであれば特に限定されるものではないが、茶ポリフェノールや果実ポリフェノールが好ましい。
【００２５】
「茶ポリフェノール」は、茶由来であれば特に限定されず、紅茶ポリフェノール、緑茶ポリフェノール、烏龍茶ポリフェノールなどが挙げられる。なかでも、甘味料との相性がよく、環状オリゴ糖を添加する必要がない、紅茶ポリフェノールを添加することが好ましい。添加ポリフェノールの製造方法は特に限定されないが、例えば、従来公知の方法で茶葉からの抽出等によって得られたものを使用できる。また、これらの添加ポリフェノールとして市販されているもの用いてもよい。また、添加ポリフェノールは濃縮物であってもよい。
【００２６】
上記の「茶ポリフェノール」は各種のカテキン類を含んでおり、例えば、カテキン類の非重合体であるエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキンもしくはガロカテキンなどのカテキン類などの他、紅茶ポリフェノールには、テアフラビン類、テアシネンシン類、テアルビジン類、プロアントシアニジン類などが含まれている。
【００２７】
前述の「単体で混入された場合には苦渋味を感じる程度」とは、茶ポリフェノールを紅茶に混入した場合に、渋く、苦くて飲用できないと官能的に感じられる程度である。ポリフェノールによる苦渋味は、一般に水または熱水で抽出した紅茶、緑茶、烏龍茶など茶類を飲用する場合にも、感じられる。しかし、上記の添加茶ポリフェノールを紅茶に混入すると、紅茶の苦渋味は、嗜好品としての飲用が困難な程度になる。苦渋味は飲用する個々人の味覚によって差異があるため、苦渋味の度合いは相対的なものであるが、一例として、タンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上が挙げられる。
【００２８】
「果実ポリフェノール」としては、りんごやぶどうなどのポリフェノールが挙げられる。これらの果実ポリフェノールにも、抗酸化作用、血圧上昇抑制作用などが知られており、ポリフェノールの効果は強化される。なかでも、特に香味の点において紅茶飲料との相性がよい、りんごポリフェノールが好ましい。りんごポリフェノールは少量の添加で効果があり、添加した際に渋苦味が低い。紅茶飲料に緑茶由来のポリフェノールを添加すると、苦渋味を感じやすくなる。
【００２９】
そして、上記のように、主原料となる紅茶葉由来の紅茶葉由来ポリフェノールに、更に上記の添加ポリフェノール、好ましくは、添加紅茶ポリフェノール、及び／又はりんごポリフェノールを添加することにより、ポリフェノールを大量に摂取することができる。すなわち、紅茶葉から、茶葉と熱水のみで抽出する紅茶を飲用する場合と比較して、一度の飲用で、多くのポリフェノールを摂取することができる。
【００３０】
＜ポリフェノールの含有量＞
本発明においては、紅茶飲料の総ポリフェノールにおける上記の紅茶葉由来ポリフェノール及び添加茶ポリフェノールの合計量の割合は、１質量％以上１００質量％以下が好ましい。さらに好ましくは２０質量％以上１００質量％以下である。ここで、「総ポリフェノール」とは、紅茶葉由来ポリフェノールの他に、上記の添加される茶ポリフェノールや果物ポリフェノールを含めたポリフェノール全体の総量を意味する。
【００３１】
また、前記の総ポリフェノールはタンニン量に換算して、６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有することが特に好ましい。このように、エステラーゼ処理された紅茶抽出液に、さらに上記の添加ポリフェノールを添加して、ポリフェノールを６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有させることにより、抗酸化作用、抗菌作用、糖分解酵素の阻害作用によるダイエット効果といった保健機能を有する紅茶飲料とすることができる。また、紅茶飲料中「紅茶葉由来ポリフェノール」の含有量がタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有するとより好ましい。このタンニン量は、酒石酸鉄法により測定することができる。
【００３２】
＜紅茶飲料＞
本発明の紅茶飲料は、紅茶葉由来の紅茶葉ポリフェノールを含有し、かつ、エステラーゼで処理された紅茶抽出物に、茶ポリフェノール及び／またはその他のポリフェノールを添加し、更に、高甘味度甘味料及び／又は糖アルコールを、添加することが好ましい。
【００３３】
ここでいう「高甘味度甘味料」とは、非糖質系の甘味料であり、甘味度が高く、ショ糖と比べてごく微量で甘さを発揮することができる甘味料である。甘味度とは、ショ糖を１．００とした場合の、純ショ糖溶液と比較した甘さの値である。官能検査により測定されるため、正確に規定することは困難であるが、例えばスクラロースは６００倍、アセスルファムカリウムは２００倍、ステビアは２００倍近いと言われている。
【００３４】
また、「糖アルコール」とは、糖分子のアルデヒド基を還元して得られる還元基を有する糖類を、高温高圧下で水素と反応、還元して製造（接触還元）されるものであり、例えば、ソルビトール、マルチトール、キシリトールのような鎖状多価アルコールの総称である。
【００３５】
甘味料とは、食品に甘みをつけるために使われる調味料であり、高甘味度甘味料や糖アルコールは、甘味料に含まれる。本発明における「高甘味度甘味料もしくは糖アルコールのいずれかまたは両方」とは、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、ステビア等の高甘味度甘味料、キシリトール、マルチトール、エリスリトール等の糖アルコールのいずれか又はこれらの群から選ばれる２種以上からなる甘味料であってよい。
【００３６】
高甘味度甘味料及び／または糖アルコールを添加することにより、茶ポリフェノールの苦渋味を緩和することができる。高甘味度甘味料のみではやや苦渋みが目立ち、また、糖アルコールと高甘味度甘味料を組み合わせることにより、砂糖を添加することで甘みを与えるよりも紅茶飲料を低熱量に抑えることができる。
【００３７】
茶ポリフェノールに含まれるエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキンもしくはガロカテキンや、テアフラビン類、テアシネンシン類、テアルビジン類、プロアントシアニジン類などはタンニン成分であり、その性質として渋みを有する。このため、ポリフェノールの量が通常の熱水などにて抽出して飲用している量を超えたポリフェノール含有飲料とすると、飲用に適さない度合いまで苦くなり、環状オリゴ糖を添加して苦味をマスキングすることが必要となる。
【００３８】
一方、上記の本発明の紅茶飲料によれば、エステラーゼ処理をしてガレート型のカテキンを非ガレート型のカテキンとする。そのため、渋みを低減させることができる。また、渋みが残る場合は、高甘味度甘味料と糖アルコールとを添加させればよいため、環状オリゴ糖を添加する必要がない。したがって、紅茶飲料を低熱量に抑えつつ脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料を提供することができる。
【００３９】
ところで、エステラーゼの作用を受けた茶抽出液は、ｐＨの低下が見られることがある。そこで、処理後の茶抽出液にアルカリを添加して、エステラーゼ処理前のｐＨ値に調整することが望ましい。ここに用いられるアルカリとしては、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどが挙げられる。具体的には、紅茶飲料のｐＨは、２．５〜８．０であることが好ましく、３．０〜７．９がより好ましい。
【００４０】
また、本発明の紅茶飲料には、上記の他に果汁、香料、酸味料、栄養強化剤、安定剤などを使用してよい。
【００４１】
また、本発明の紅茶飲料の製造方法においては、上記のエステラーゼ処理の後に７０℃以上１４５℃以下、より好ましくは、９０℃から１４２℃で、０．０２分間から６０分間、より好ましくは、０．０３分間から４０分間加熱する高温加熱工程を実行することができる。こうした加熱工程を実行することで、通常の紅茶飲料の殺菌工程を実行するとともに、同時にエステラーゼを失活させることができる。
【００４２】
このようにして得られた茶抽出液を飲用に適する濃度に濃縮あるいは水で希釈して紅茶飲料を得る。あるいは、上記の紅茶抽出液を粉末化して即席粉末茶として利用してもよい。ここで得られる粉末茶は、冷水に対する溶解性、および溶液の冷却時の透明度に優れる。
【００４３】
＜容器詰飲料＞
本発明の容器詰飲料は、上記の紅茶飲料を従来公知の方法で飲料用容器に充填して得られる。
【００４４】
飲料用容器としては、従来公知のガラス瓶、金属缶、紙、プラスチックなどが用いられ特に限定されない。また、容器とは、金属缶、ＰＥＴボトル、紙容器などが用いられるがこれらに限定されない。また、容器詰飲料は、そのまま充填されていてもよく、必要に応じて殺菌処理が施されていてもよい。上記のうち、携帯が容易であり、栓の開閉が自由で軽量である点から、ＰＥＴボトルが特に好ましい。
【００４５】
容器詰飲料の場合、前述の加熱工程は、缶やＰＥＴボトル等の容器に充填した紅茶飲料に対して行ってもよい。殺菌工程は、加熱温度および加熱時間は、前述のとおりである。
【００４６】
＜脂肪蓄積抑制作用＞
本発明の紅茶飲料における脂肪蓄積抑制作用とは、体内に蓄積する脂肪の量を低減させる作用を意味する。したがって、脂肪蓄積抑制作用は、例えば、体重あたりの内臓脂肪重量（肝臓、腎臓、精巣など）を測定することにより、評価することができる。
【００４７】
＜抗肥満作用＞
本発明の紅茶飲料を摂取することで得られる抗肥満作用とは、肥満を抑制するものであれば特に限定されるものではないが、体重増加抑制及び血清トリグリセリド濃度上昇抑制効果等があげられる。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【００４９】
（実施例１）
まず、紅茶葉４０ｇ（スリランカ産セイロン紅茶、三井農林株式会社製）から紅茶抽出液を抽出倍率２０倍で抽出した。抽出条件は、８５℃、７分とした。次に、この濃縮抽出により得られた紅茶抽出液をタンナーゼ０．２ｇ（タンナーゼＫＴＦＨ、キッコーマン株式会社製）により、温度２５〜３０℃の下で６０分間処理した。このタンナーゼ処理の後に、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム１ｇ、重炭酸ナトリウム０．３ｇでｐＨを調製し、全量を１０００ｍＬとなるよう純水で希釈し、想定飲用濃度の２倍となるよう調製した。さらに、１３５℃で３０秒加熱する超高温殺菌を行い、紅茶飲料を得た。
【００５０】
（実施例２）
タンナーゼ処理の後にキシリトール２０ｇ（ダニスコジャパン社製）及びスクラロース０．０８ｇ（三栄源エフ・エフ・アイ）を加えた以外は、実施例１と同様にした。
【００５１】
（実施例３）
紅茶葉３６ｇ（ケニア産、三井農林株式会社製）を用いた以外は、実施例１と同様にした。
【００５２】
（比較例１）
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例１と同様にした。
【００５３】
（比較例２）
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例２と同様にした。
【００５４】
（比較例３）
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例３と同様にした。
【００５５】
１．紅茶飲料の分析
実施例１〜３、比較例１〜３について、分析を行った。分析項目は、以下のとおり。結果は、表１に示す。なお、表１中、ＴＦ−１は、テアフラビン３−モノガレートであり、ＴＦ−１'は、テアフラビン３'−モノガレートであり、ＴＦ−２は、テアフラビン３，３'−ジガレートである。
（１）ｐＨ
ｐＨ計（製品名：ｐＨメーターＭ−１３、堀場製作所社製）により測定した。
（２）吸光度
褐色度（４２０ｎｍ）及び濁度（７２０ｎｍ）について、紫外・可視分光強度計（製品名：分光光度計Ｕ−１５００、日立ハイテク社製）により測定した。
（３）Ｂｒｉｘ値（糖度）
糖度計（製品名：デジタル示差濃度計ＤＤ−７、アタゴ社製、またはデジタル屈折計ＲＸ−５０００α、アタゴ社製）により測定した。
（４）ポリフェノール
試料の紅茶飲料を酒石酸鉄法によるタンニン値を３５０ｍｇ／１００ｍｌに調製した。その他分析項目については、アサヒ飲料社定法にて測定した。
【００５６】
【表１】
【００５７】
分析の結果、表１及び図１で示すように、実施例１〜３では、ポリフェノール組成において非ガレート型カテキンの占める割合が多くなった。また、実施例１と実施例３とを比較すると、茶葉製法の違いによるポリフェノール組成の差が現れた。
【００５８】
２．マウス単回投与試験
８週齢雄性ＩＣＲマウスを５日間順化させた後３群に分け、１０時間絶食後、採血し（０時間）、直ちにオリーブオイル０．１ｍｌと実施例１〜３、または、比較例１〜３いずれかの紅茶飲料０．２ｍｌ（対照群は脱塩水）を経口投与し、２、３、５時間後の血漿トリグリセリド（ＴＧ）を測定した。血液は３０分放置後遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５℃、２０分）を行い、得られた上清を血漿とし、トリグリセリドの測定に用いた。血漿トリグリセリドは、トリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素法（ＧＰＯ・ＤＡＯＳ法）にて測定した。なお、血漿トリグリセリド濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。また試験結果は、平均値は±標準誤差で示し、各群間の有意差はＦｉｓｈｅｒの最小有意差法（Ｆｉｓｈｅｒ−ＬＤＳ）を用いて検定した（以降すべての試験結果の各群間の有意差についても同様である）。
【００５９】
結果を図２〜５に示す。まず、実施例１と比較例１との結果の比較（図２）、実施例２と比較例２との結果の比較（図３）、実施例３と比較例３との結果の比較（図４）から、実施例１〜３について、血漿トリグリセリド値の上昇を抑制する傾向にあり、図５で示すように、実施例１と比較例１との結果の比較において、２時間後で有意差が見られた。
【００６０】
３．マウス長期投与試験
５週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを５日間予備飼育した後、空腹時血糖値と体重を測定し、対照群５匹（Ｃｏｎ）、高脂肪食群６匹（ＨＦ）、比較例１の紅茶群５匹（ＣＢＴ１）、実施例１の紅茶群６匹（ＣＢＴ２）、イソケルシトリン（Ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ）群５匹（Ｉｓｏ）、テアフラビン（Ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）群６匹（Ｔｈｅａ）の６群に分けた。飼育期間は９４日間とし、期間中体重と食餌摂取量は毎日測定した。また、本飼育１，４，７，９，１２週目（本飼育１日目、２２日目、４４日目、５９日目、８１日目）に血糖値の測定を行い、本飼育１２週目（本飼育８１日目）に血漿トリグリセリド、血漿遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）の測定を行った。また、本飼育１３週目（本飼育８９〜９１日目）にパルマスＩＩＩＮ１４５×１９５ｍｍ（株式会社天然素材探索研究所）をマウスゲージの下に置き糞の採取を７２時間行った。
マウスは９４日間の本飼育の後、１２時間絶食後開腹し、心臓より血液を採取した。次に肝臓、腎臓、腎周囲脂肪、精巣周囲脂肪、内臓（腸間膜）周囲脂肪を摘出した。摘出した臓器は直ちに測定用に調製するもの以外は液体窒素にて凍結し凍結保存（−８４℃）した。血液サンプルはエッペンチューブに入れ１時間放置し、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５℃、３０分）を行い、得られた上清を血清として新たなエッペンチューブに移し、測定まで−８４℃に保存した。
【００６１】
飼料組成は表２に示した。ＣＢＴ１群、ＣＢＴ２群はカゼイン８０ｇに紅茶３０ｍｌの割合で混合し、凍結乾燥したものをカゼインとし、高脂肪食と同じ組成のものを給餌した（紅茶カゼインは水分補正を行い２０％とした）。Ｉｓｏ群にはＩｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ粉末（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ社製）を、Ｔｈｅａ群にはＴｈｅａｆｌａｖｉｎ粉末（三井農林株式会社製）をそれぞれサンプルとして高脂肪食に添加したものを給餌した。
【００６２】
【表２】
【００６３】
空腹時血糖値は１２時間絶食後、メディセーフミニＧＲ−１０２（テルモ株式会社）を用いて測定した。ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）は、解剖時に心臓より採血した血液で、マイクロマットＩＩＨｂＡ１ｃカートリッジ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて測定した。
血漿トリグリセリド，血漿ＮＥＦＡは１２時間絶食後「２．マウス単回投与試験」と同様に処理した。血漿トリグリセリドは「２．マウス単回投与試験」と同様の方法で測定し、血漿ＮＥＦＡはＮＥＦＡ Ｃ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素法（ＡＣＳ・ＡＣＯＤ法）にて測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００６４】
血清トリグリセリド、血清ＮＥＦＡは既述の保存した血清を用いて測定した。血清総コレステロール（ＴＣ）はコレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素法（コレステロールオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法）にて測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００６５】
肝臓脂質、糞中脂質の抽出は、Ｊ．Ｆｏｌｃｈらの方法（Ｊ．Ｆｏｌｃｈ，Ｍ．Ｌｅｓｓ，ａｎｄ Ｈ．Ｓ．Ｓｔａｎｌｙ：Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ ａｎｉｍａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２２６，４９７−５０９（１９５７））にて行い、各脂質の測定は前述の方法にて行った。
【００６６】
肝臓リン脂質（ＰＬ）は、リン脂質Ｃ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、コリンオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法にて測定した。
【００６７】
糞中総胆汁酸は、総胆汁酸−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素比色法にて測定した。
【００６８】
肝臓脂質代謝系酵素活性の測定に用いるサンプルの調製は次のとおり行った。採血後直ちに摘出した肝臓から０．５ｇを切り分け、７倍量の０．２５Ｍショ糖破砕溶液（ｐＨ７．２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、３ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ含有）を加え、氷中でガラス製ホモジナイザーを用いてホモジナイズした。このホモジネート液を遠心分離（１０００ｒｐｍ、４℃、１０分）し、得られた上清をさらに遠心分離（９０００ｒｐｍ、４℃、１０分）し上清と沈殿を分取した。この上清をさらに遠心分離（１０００００×ｇ、４℃、６０分）し、上清と沈殿を分取した。得られた上清はサイトゾル画分として肝臓における脂質代謝系酵素活性の測定に用いた。酵素活性をタンパク質ｍｇで求めるため、Ａ／Ｇ Ｂ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、ビウレット法にてタンパク質を定量した。
【００６９】
脂肪酸合成酵素活性は、セルに０．２Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）０．５ｍｌ、２．５ｍＭ アセチル−ＣｏＡ０．２ｍｌ、１０ｍＭ ＮＡＤＰＨ０．０３ｍｌ、サンプル０．０５ｍｌ、蒸留水０．４１ｍｌを順次入れ、パラフィルムでふたをしてセルを上下にして混合した後、３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着し、経時的に吸光度を測定（３３９ｎｍ、測定時間１２０秒）した。次に１０ｍＭマロニル−ＣｏＡ ０．０２ｍｌを加えて混合した後、３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着し、再び経時的に吸光度を測定（３３９ｎｍ、測定時間１２０秒）した。また、ブランクは０．２Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）０．０５ｍｌを用い、サンプルの吸光度を補正した。分子吸光係数を６６２０Ｍ−１ｃｍ−１として、酵素活性を［式１］で求めた。
【００７０】
［式１］
脂肪酸合成酵素（ｍｍｏｌ／ｍｇ）＝（吸光度の変化量／６６２０）×１０００／サンプル中のタンパク質量（ｍｇ）
【００７１】
カルニチンパルミトイル転移酵素活性の測定は、カルニチン依存的にアシル−ＣｏＡから遊離するＣｏＡをジチオニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）と反応させ、生じる黄色の色素を経時的に測定する逆反応により活性値を求めた。すなわち、セルに１１６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．００５ｍＭ ＤＴＮＢ含有）０．５ｍｌ、サンプル０．０２ｍｌ、蒸留水０．４５ｍｌを順次入れ、パラフィルムでふたをしてセルを上下にして混合し、３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着し、経時的に吸光度を測定（４１２ｎｍ、Ｒａｔｅ Ｔｉｍｅ１２０秒）した。次に２ｍＭパルミトイル−ＣｏＡ０．０２ｍｌを加え混合し、経時的に吸光度を測定（４１２ｎｍ、Ｒａｔｅ Ｔｉｍｅ１２０秒）した。また、ブランクとして１１６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．００５ｍＭ ＤＴＮＢ含有）０．０２ｍｌを用い、サンプルの吸光度を補正した。分子吸光係数を１３６００Ｍ−１ｃｍ−１として、酵素活性を［式２］で求めた。
【００７２】
［式２］
カルニチンパルミトイル転移酵素（ｍｍｏｌ／ｍｇ）＝（吸光度の変化量／１３６００）×１０００／サンプル中のタンパク質量（ｍｇ）
【００７３】
血清レプチンはモリナガレプチン測定キット（株式会社森永生化学研究所）を用い、ＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００７４】
血清インスリンはレビスインスリン−マウス（Ｓタイプ）（株式会社シバヤギ）を用い、ＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００７５】
血清アディポネクチンはマウス／ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬株式会社）を用い、ＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００７６】
遺伝子発現評価は、肝臓より抽出したＲＮＡを用い、ＧｅｎｅＳＱＵＡＲＥ（登録商標）生活習慣病研究用マウス（倉敷紡績株式会社）にて分析し、ＤＮＡマイクロアレイ解析を行った。解析は、ＧｅｎｅＰｉｘ Ｐｒｏ ６．１．０．４（Ａｘｏｎ ＣＮＳ）にて行った。フィルター後、ＨＦ群を対照としてそれぞれ発現差解析を行った。Ｆｏｌｄが２以上を誘導、０．５未満を抑制とした。なお、Ｔｈｅａ群については分析を行わなかった。
【００７７】
結果を図６〜２４に示す。
図６に示すように、体重の推移はＣＢＴ１、ＣＢＴ２群でＨＦ群と比べて増加が少ない傾向が見られた。また、図７（ａ）に示すように、体重当たりの内臓（腸間膜）周囲脂肪はＣＢＴ２群で有意に低下した。図７（ｂ）に示すように、腎臓周囲脂肪もまたＣＢＴ２群で低下したが有意差は見られなかった。図８に示すように、精巣周囲脂肪はＣＢＴ１，ＣＢＴ２群でＨＦ群に比べ低下傾向であった。図７、８の結果から脂肪の蓄積に関しては、全体的にＣＢＴ２群で低下の傾向が示された。
【００７８】
図９で示すように、空腹時血糖値は、本飼育４４日目まではそれぞれの群間で差は見られなかったが、５９日目にＣＢＴ１群がＨＦ群に比べて有意に低下した。本飼育８１日目にはＣＢＴ１，ＣＢＴ２群いずれも有意に低下した。図１０は、総ヘモグロビン中のヘモグロビンＡ１ｃの割合を示す図である。
【００７９】
図１１（ａ）は、血清脂質に関し、トリグリセリド（ＴＧ）の結果を示す。図１１（ｂ）で示すように、総コレステロール（ＴＣ）はサンプル群での有意差は見られなかった。図１２で示すように、血清ＮＥＦＡはＣＢＴ１群で有意に低下し、ＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。
【００８０】
図１３（ａ）で示すように、肝臓脂質に関しては、総脂質はＣＢＴ１，ＣＢＴ２群で有意に低下した。図１３（ｂ）で示すように、トリグリセリド（ＴＧ）はＣＢＴ１群で有意に低下し、ＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。図１４（ａ）で示すように、総コレステロール（ＴＣ）はＣＢＴ２群で有意に低下し、ＣＢＴ１群で低下傾向が見られた。図１４（ｂ）で示すように、ＮＥＦＡはＣＢＴ２群で有意に低下し、ＣＢＴ１群で低下傾向が見られた。図１５で示すように、リン脂質（ＰＬ）はすべてのサンプル群で有意に低下した。
【００８１】
図１６（ａ）で示すように、糞中脂質排泄量に関しては、総脂質はＣＢＴ２群がＨＦ群よりも高い傾向にあった。図１６（ｂ）は、トリグリセリド（ＴＧ）の結果を示す。図１７（ａ）で示すように、総コレステロール（ＴＣ）はＣＢＴ２群がＨＦ群よりも高い傾向にあった。図１７（ｂ）で示すように、総胆汁酸はＣＢＴ２群がＨＦ群よりも高い傾向にあった。
【００８２】
図１８（ａ）で示すように、肝臓脂質代謝系酵素活性に関しては、脂肪酸合成酵素活性の結果を示す。図１８（ｂ）で示すように、カルニチンパルミトイル転移酵素活性はＣＢＴ２群で高い傾向にあった。
【００８３】
ホルモン、サイトカインに関しては、図１９（ａ）で示すように、血清レプチンはＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。図１９（ｂ）で示すように、インスリンもＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。図２０で示すように、アディポネクチンは群間差がなかった。
【００８４】
遺伝子発現解析に関しては、脂質代謝関連遺伝子として、紅茶群でＡＰＯＡ２（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−ＩＩ）、ＦＡＢＰ１（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １，ｌｉｖｅｒ）が発現抑制されており（図２１（ａ）、（ｂ））、ＡＰＯＣ３（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ−ＩＩＩ）が発現抑制の傾向が見られた（図２２（ａ））。また、糖質代謝関連遺伝子として、紅茶群でＧＣＫ（ｇｌｕｃｏｋｉｎａｓｅ）が発現抑制されており（図２２（ｂ））、ＰＴＥＮ（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ ｔｅｎｓｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇ）、ＲＢＰ４（ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４，ｐｌａｓｍａ）で発現抑制の傾向が見られた（図２３（ａ）、（ｂ））。その他、代表的なところでは、紅茶群でＦＢＰ１（ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ １）が発現誘導、ＮＦＫＢＩＡ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｋａｐｐａ ｌｉｇｈｔ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｇｅｎｅ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｉｎ Ｂ−ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ， ａｌｐｈａ）が発現抑制されていた（図２４（ａ）、（ｂ））。
【００８５】
以上の結果から、紅茶ポリフェノール飲料摂取により、高脂肪食によって引き起こされる肥満を抑制することが示唆され、その効果には、エステラーゼにより分解された紅茶ポリフェノール分解物が関与していることが推察された。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅茶飲料およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、茶抽出物をタンナーゼで処理する技術が知られている（特許文献１〜５）。
【０００３】
特許文献１には、水性茶抽出物にオキシダーゼとタンナーゼとを加えることで、冷蔵貯蔵時の濁りの発生が減じられることが記載されている。また、特許文献２には、タンナーゼとクロロゲン酸エステラーゼとを併用するときに著しく茶抽出液の混濁を分解除去できることが記載されている。
【０００４】
特許文献３には、高濃度のカテキンを含有する状態においてタンナーゼ処理を施すことにより、茶飲料の旨味やコク味を損なわずに渋味を低減することができることが記載されている。
【０００５】
特許文献４には、抗酸化力を高めた茶抽出物からなる抗酸化剤組成物が記載されている。また、特許文献４には、茶葉の抽出時および／または抽出後にタンニン分解酵素タンナーゼを作用させ、ガレート型カテキン類の没食子酸エステルを切断し、非ガレート型カテキン類と没食子酸に分解すること、エピガロカテキンガレートにタンナーゼを作用させ生じるエピガロカテキンと没食子酸はいずれも強い抗酸化力を持っていること等が記載されている。
また、特許文献５には、茶抽出物又はその濃縮物をタンナーゼ処理することにより、ガレート体カテキン率を低下させることが記載されている。特許文献５では、予めガレート体カテキン率が５０質量％未満に調整された茶抽出物を用いて容器詰茶飲料を製造するにあたって、没食子酸の含有量を２１〜１５０ｐｐｍに調整し、非重合体カテキン類中のガレート体カテキン率が０〜５０質量％かつエピ体率を３０〜６０質量％に調整すれば、非重合体カテキン類濃度が高い場合でも、苦味が抑制されるだけでなく、長期保存してもカテキン類の組成変化が起こりにくいとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平７−３０３４５０号公報
【特許文献２】特開平１１−３０８９６５号公報
【特許文献３】特開２００５−１３０８０９号公報
【特許文献４】特開２００６−８３３５２号公報
【特許文献５】特開２００７−３２５５８５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところが、本発明者らは、タンナーゼ処理された紅茶抽出物が脂肪の蓄積を抑制することを新たに知見した。また、このことは、タンナーゼだけでなく、クロロゲン酸エステラーゼのようなエステラーゼで処理された紅茶抽出物に共通した作用であることが予測された。
【０００８】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、抗肥満作用の高い紅茶飲料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によれば、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料が提供される。
【００１０】
また、本発明によれば、上記の紅茶飲料を飲料用容器に充填してなる容器詰飲料が提供される。
【００１１】
また、本発明によれば、上記の紅茶飲料を摂取することにより肥満を抑制する方法が提供される。
【００１２】
さらに、本発明によれば、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する工程と、前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の際および／または前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の後に前記紅茶抽出物をエステラーゼで処理する工程と、を含み、ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料を製造する方法が提供される。
【００１３】
この発明によれば、エステラーゼで処理された紅茶抽出物から製造された紅茶飲料にタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上の高濃度のポリフェノールを含有させる。これにより、食事として摂取することにより、高い脂肪蓄積抑制作用を得ることができる。したがって、高い抗肥満作用が得られる紅茶飲料が実現可能になる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、高い抗肥満作用が得られる紅茶飲料が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】紅茶飲料のポリフェノール組成比を示す図である。
【図２】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図３】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図４】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図５】マウス単回投与試験における血漿トリグリセリド値の経時変化を示す図である。
【図６】マウス長期投与試験におけるマウスの体重の増減の推移を示す図である。
【図７】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウスの体重当たりの内臓（腸間膜）周囲脂肪の割合（％）を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウスの体重当たりの腎臓周囲脂肪の割合（％）を示す図である。
【図８】マウス長期投与試験におけるマウスの体重当たりの精巣周囲脂肪の割合（％）を示す図である。
【図９】マウス長期投与試験におけるマウスの空腹時の血糖値の推移を示す図である。
【図１０】マウス長期投与試験における総ヘモグロビン中のヘモグロビンＡ１ｃ（ヘモグロビンとブドウ糖が結合したもの）の割合を示す図である。
【図１１】（ａ）マウス長期投与試験における飼育終了後のマウスの血清トリグリセリド値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験における飼育終了後のマウス血液中の総コレステロール値を示す図である。
【図１２】マウス長期投与試験におけるマウスの血清ＮＥＦＡ値を示す図である。
【図１３】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中の総脂質量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のトリグリセリド値を示す図である。
【図１４】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中の総コレステロール値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のＮＥＦＡ値を示す図である。
【図１５】マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のリン脂質値を示す図である。
【図１６】（ａ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中の総脂質値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中のトリグリセリド値を示す図である。
【図１７】（ａ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中の総コレステロール値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験における飼育８９〜９１日目のマウス糞中の総胆汁酸を示す図である。
【図１８】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中の脂肪酸合成酵素活性を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓中のカルニチンパルミトイル転移酵素活性を示す図である。
【図１９】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウスの血清レプチン値を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウスの血清インスリン値を示す図である。
【図２０】マウス長期投与試験におけるマウスの血清アディポネクチン値を示す図である。
【図２１】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＡＰＯＡ２発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＦＡＢＰ１発現量を示す図である。
【図２２】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＡＰＯＣ３発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＧＣＫ発現量を示す図である。
【図２３】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＰＴＥＮ発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＲＢＰ４発現量を示す図である。
【図２４】（ａ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＦＢＰ１発現量を示す図である。（ｂ）マウス長期投与試験におけるマウス肝臓のＮＦＫＢＩＡ発現量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について、説明する。本発明は、上述のとおり、紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、タンニン量に換算してポリフェノールを６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有する紅茶飲料である。
【００１７】
＜紅茶葉＞
本発明で用いる紅茶抽出液の原料は、紅茶葉（茶樹Ｃａｍｅｒｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓの茶葉を完全に酸化発酵させて得られる全発酵茶葉）であれば特に品種は限定されず、オーソドックス（伝統的）製法による紅茶葉であってもよいし、ＣＴＣ（非伝統的）製法による紅茶葉であってもよい。紅茶葉は、市販のものをそのまま使用してもよいが、粉砕、摩砕等の処理を施してもよい。
【００１８】
＜紅茶抽出液＞
紅茶葉の抽出液は、例えば、抽出カラムに充填した原料茶類に水または熱水を一定流量で送水し、所定量の抽出液を得る方法や、抽出釜に茶葉を仕込み、所定量の水または熱水で一定時間浸積した後、茶葉と分離して抽出液を得る方法等、通常使用される方法を適宜選択して調製することができる。抽出倍率は、３倍〜５０倍が好ましい。抽出倍率とは、抽出に使用する茶葉重量に対する抽出溶媒の容量の比率のことをいう。抽出条件は、例えば、水または熱水の温度を３５℃以上１００℃以下とすることができる。抽出の際には、抽出助剤を添加してもよい。抽出助剤としては特に限定されず、従来公知の抽出助剤を用いることができる。例えば、抗酸化剤として、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムやＬ−アスコルビン酸を用いることができ、ｐＨ調整剤として、重炭酸ナトリウムや炭酸カリウムを用いることができる。また、これらの抽出助剤を、茶葉の質量に対して０．１〜１０質量％を添加して用いることができる。
【００１９】
本発明では、これらの紅茶葉の抽出の際および／または抽出後にエステラーゼを作用させる。本発明のエステラーゼは、縮合型タンニンを分解できる作用を有するものであればよく、具体的には、ガレート型カテキンを非ガレート型カテキンに分解できる作用、または／及び、ガレート型テアフラビンを非ガレート型テアフラビンに分解できる作用を有するものが好ましい。例えば、ぺクチナーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、タンナーゼが挙げられるが、タンナーゼもしくはクロロゲン酸エステラーゼのいずれかまたは両方を用いると好ましく、タンナーゼが特に好ましい。タンナーゼとしては、タンニンを分解する活性を有するものであれば任意のものを使用することができる。また、クロロゲン酸エステラーゼとしては、クロロゲン酸エステルを分解する活性を有するものであれば任意のものを使用することができる。
【００２０】
紅茶葉から紅茶抽出液を抽出した後にエステラーゼを作用させる場合、紅茶抽出液にそのままエステラーゼを添加してもよいし、たとえば１０倍程度濃縮した紅茶抽出液にエステラーゼを添加してもよい。紅茶抽出液をエステラーゼ処理するとき、温度は、１０℃以上６０℃以下、好ましくは、２０℃以上５５℃以下、より好ましくは、２０℃以上４０℃以下とすることができる。また、ｐＨを２．０以上８．０以下、好ましくは、４．０以上７．０以下に調製しておいてもよい。そして、このような条件下でエステラーゼを１０分以上４８０分以下反応させることができる。
【００２１】
本発明では、紅茶抽出液をエステラーゼ処理することにより、紅茶抽出液中のガレート型カテキンおよびガレート型テアフラビンを非ガレート型にすることができる。ガレート型の含有量を減少させることで、渋みが低減され、非ガレート型のポリフェノールを含有することで、脂肪蓄積抑制作用を得ることができる。本発明の紅茶飲料に含有するガレート型カテキンとガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）に対する非ガレート型カテキンと非ガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）の比率は、２〜１５とすると好ましい。
【００２２】
＜ポリフェノール＞
本発明の「紅茶飲料」は、「単体で混入された場合には苦渋味を感じる程度」のポリフェノールを含有する。ここで「ポリフェノール」とは、紅茶の抽出物から得られる紅茶葉由来ポリフェノールのみならず、これとは別途添加される一般的な植物に含有されるポリフェノール（添加ポリフェノール）をも含む意味である。ここで、「紅茶葉由来ポリフェノール」とは、本発明の紅茶飲料に用いられる主原料の紅茶葉由来のポリフェノールであり、紅茶飲料の製造において、主原料の紅茶葉から水または熱水などにて抽出されるものである。または別途調製した紅茶エキスも含まれる。
【００２３】
「紅茶葉由来ポリフェノール」としては、ガレート型カテキンとしては、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、カテキンガレートが挙げられる。また、非ガレート型カテキンとしては、カテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンが挙げられる。ガレート型テアフラビンとしては、テアフラビン３ガレート、テアフラビン３'ガレート、テアフラビン３，３'ジガレートが挙げられる。非ガレート型テアフラビンとしては、テアフラビンが挙げられる。
【００２４】
「添加ポリフェノール」の種類としては、植物に含有されるポリフェノールであれば特に限定されるものではないが、茶ポリフェノールや果実ポリフェノールが好ましい。
【００２５】
「茶ポリフェノール」は、茶由来であれば特に限定されず、紅茶ポリフェノール、緑茶ポリフェノール、烏龍茶ポリフェノールなどが挙げられる。なかでも、甘味料との相性がよく、環状オリゴ糖を添加する必要がない、紅茶ポリフェノールを添加することが好ましい。添加ポリフェノールの製造方法は特に限定されないが、例えば、従来公知の方法で茶葉からの抽出等によって得られたものを使用できる。また、これらの添加ポリフェノールとして市販されているもの用いてもよい。また、添加ポリフェノールは濃縮物であってもよい。
【００２６】
上記の「茶ポリフェノール」は各種のカテキン類を含んでおり、例えば、カテキン類の非重合体であるエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキンもしくはガロカテキンなどのカテキン類などの他、紅茶ポリフェノールには、テアフラビン類、テアシネンシン類、テアルビジン類、プロアントシアニジン類などが含まれている。
【００２７】
前述の「単体で混入された場合には苦渋味を感じる程度」とは、茶ポリフェノールを紅茶に混入した場合に、渋く、苦くて飲用できないと官能的に感じられる程度である。ポリフェノールによる苦渋味は、一般に水または熱水で抽出した紅茶、緑茶、烏龍茶など茶類を飲用する場合にも、感じられる。しかし、上記の添加茶ポリフェノールを紅茶に混入すると、紅茶の苦渋味は、嗜好品としての飲用が困難な程度になる。苦渋味は飲用する個々人の味覚によって差異があるため、苦渋味の度合いは相対的なものであるが、一例として、タンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上が挙げられる。
【００２８】
「果実ポリフェノール」としては、りんごやぶどうなどのポリフェノールが挙げられる。これらの果実ポリフェノールにも、抗酸化作用、血圧上昇抑制作用などが知られており、ポリフェノールの効果は強化される。なかでも、特に香味の点において紅茶飲料との相性がよい、りんごポリフェノールが好ましい。りんごポリフェノールは少量の添加で効果があり、添加した際に渋苦味が低い。紅茶飲料に緑茶由来のポリフェノールを添加すると、苦渋味を感じやすくなる。
【００２９】
そして、上記のように、主原料となる紅茶葉由来の紅茶葉由来ポリフェノールに、更に上記の添加ポリフェノール、好ましくは、添加紅茶ポリフェノール、及び／又はりんごポリフェノールを添加することにより、ポリフェノールを大量に摂取することができる。すなわち、紅茶葉から、茶葉と熱水のみで抽出する紅茶を飲用する場合と比較して、一度の飲用で、多くのポリフェノールを摂取することができる。
【００３０】
＜ポリフェノールの含有量＞
本発明においては、紅茶飲料の総ポリフェノールにおける上記の紅茶葉由来ポリフェノール及び添加茶ポリフェノールの合計量の割合は、１質量％以上１００質量％以下が好ましい。さらに好ましくは２０質量％以上１００質量％以下である。ここで、「総ポリフェノール」とは、紅茶葉由来ポリフェノールの他に、上記の添加される茶ポリフェノールや果物ポリフェノールを含めたポリフェノール全体の総量を意味する。
【００３１】
また、前記の総ポリフェノールはタンニン量に換算して、６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有することが特に好ましい。このように、エステラーゼ処理された紅茶抽出液に、さらに上記の添加ポリフェノールを添加して、ポリフェノールを６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有させることにより、抗酸化作用、抗菌作用、糖分解酵素の阻害作用によるダイエット効果といった保健機能を有する紅茶飲料とすることができる。また、紅茶飲料中「紅茶葉由来ポリフェノール」の含有量がタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有するとより好ましい。このタンニン量は、酒石酸鉄法により測定することができる。
【００３２】
＜紅茶飲料＞
本発明の紅茶飲料は、紅茶葉由来の紅茶葉ポリフェノールを含有し、かつ、エステラーゼで処理された紅茶抽出物に、茶ポリフェノール及び／またはその他のポリフェノールを添加し、更に、高甘味度甘味料及び／又は糖アルコールを、添加することが好ましい。
【００３３】
ここでいう「高甘味度甘味料」とは、非糖質系の甘味料であり、甘味度が高く、ショ糖と比べてごく微量で甘さを発揮することができる甘味料である。甘味度とは、ショ糖を１．００とした場合の、純ショ糖溶液と比較した甘さの値である。官能検査により測定されるため、正確に規定することは困難であるが、例えばスクラロースは６００倍、アセスルファムカリウムは２００倍、ステビアは２００倍近いと言われている。
【００３４】
また、「糖アルコール」とは、糖分子のアルデヒド基を還元して得られる還元基を有する糖類を、高温高圧下で水素と反応、還元して製造（接触還元）されるものであり、例えば、ソルビトール、マルチトール、キシリトールのような鎖状多価アルコールの総称である。
【００３５】
甘味料とは、食品に甘みをつけるために使われる調味料であり、高甘味度甘味料や糖アルコールは、甘味料に含まれる。本発明における「高甘味度甘味料もしくは糖アルコールのいずれかまたは両方」とは、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、ステビア等の高甘味度甘味料、キシリトール、マルチトール、エリスリトール等の糖アルコールのいずれか又はこれらの群から選ばれる２種以上からなる甘味料であってよい。
【００３６】
高甘味度甘味料及び／または糖アルコールを添加することにより、茶ポリフェノールの苦渋味を緩和することができる。高甘味度甘味料のみではやや苦渋みが目立ち、また、糖アルコールと高甘味度甘味料を組み合わせることにより、砂糖を添加することで甘みを与えるよりも紅茶飲料を低熱量に抑えることができる。
【００３７】
茶ポリフェノールに含まれるエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキンもしくはガロカテキンや、テアフラビン類、テアシネンシン類、テアルビジン類、プロアントシアニジン類などはタンニン成分であり、その性質として渋みを有する。このため、ポリフェノールの量が通常の熱水などにて抽出して飲用している量を超えたポリフェノール含有飲料とすると、飲用に適さない度合いまで苦くなり、環状オリゴ糖を添加して苦味をマスキングすることが必要となる。
【００３８】
一方、上記の本発明の紅茶飲料によれば、エステラーゼ処理をしてガレート型のカテキンを非ガレート型のカテキンとする。そのため、渋みを低減させることができる。また、渋みが残る場合は、高甘味度甘味料と糖アルコールとを添加させればよいため、環状オリゴ糖を添加する必要がない。したがって、紅茶飲料を低熱量に抑えつつ脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料を提供することができる。
【００３９】
ところで、エステラーゼの作用を受けた茶抽出液は、ｐＨの低下が見られることがある。そこで、処理後の茶抽出液にアルカリを添加して、エステラーゼ処理前のｐＨ値に調整することが望ましい。ここに用いられるアルカリとしては、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどが挙げられる。具体的には、紅茶飲料のｐＨは、２．５〜８．０であることが好ましく、３．０〜７．９がより好ましい。
【００４０】
また、本発明の紅茶飲料には、上記の他に果汁、香料、酸味料、栄養強化剤、安定剤などを使用してよい。
【００４１】
また、本発明の紅茶飲料の製造方法においては、上記のエステラーゼ処理の後に７０℃以上１４５℃以下、より好ましくは、９０℃から１４２℃で、０．０２分間から６０分間、より好ましくは、０．０３分間から４０分間加熱する高温加熱工程を実行することができる。こうした加熱工程を実行することで、通常の紅茶飲料の殺菌工程を実行するとともに、同時にエステラーゼを失活させることができる。
【００４２】
このようにして得られた茶抽出液を飲用に適する濃度に濃縮あるいは水で希釈して紅茶飲料を得る。あるいは、上記の紅茶抽出液を粉末化して即席粉末茶として利用してもよい。ここで得られる粉末茶は、冷水に対する溶解性、および溶液の冷却時の透明度に優れる。
【００４３】
＜容器詰飲料＞
本発明の容器詰飲料は、上記の紅茶飲料を従来公知の方法で飲料用容器に充填して得られる。
【００４４】
飲料用容器としては、従来公知のガラス瓶、金属缶、紙、プラスチックなどが用いられ特に限定されない。また、容器とは、金属缶、ＰＥＴボトル、紙容器などが用いられるがこれらに限定されない。また、容器詰飲料は、そのまま充填されていてもよく、必要に応じて殺菌処理が施されていてもよい。上記のうち、携帯が容易であり、栓の開閉が自由で軽量である点から、ＰＥＴボトルが特に好ましい。
【００４５】
容器詰飲料の場合、前述の加熱工程は、缶やＰＥＴボトル等の容器に充填した紅茶飲料に対して行ってもよい。殺菌工程は、加熱温度および加熱時間は、前述のとおりである。
【００４６】
＜脂肪蓄積抑制作用＞
本発明の紅茶飲料における脂肪蓄積抑制作用とは、体内に蓄積する脂肪の量を低減させる作用を意味する。したがって、脂肪蓄積抑制作用は、例えば、体重あたりの内臓脂肪重量（肝臓、腎臓、精巣など）を測定することにより、評価することができる。
【００４７】
＜抗肥満作用＞
本発明の紅茶飲料を摂取することで得られる抗肥満作用とは、肥満を抑制するものであれば特に限定されるものではないが、体重増加抑制及び血清トリグリセリド濃度上昇抑制効果等があげられる。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【００４９】
（実施例１）
まず、紅茶葉４０ｇ（スリランカ産セイロン紅茶、三井農林株式会社製）から紅茶抽出液を抽出倍率２０倍で抽出した。抽出条件は、８５℃、７分とした。次に、この濃縮抽出により得られた紅茶抽出液をタンナーゼ０．２ｇ（タンナーゼＫＴＦＨ、キッコーマン株式会社製）により、温度２５〜３０℃の下で６０分間処理した。このタンナーゼ処理の後に、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム１ｇ、重炭酸ナトリウム０．３ｇでｐＨを調製し、全量を１０００ｍＬとなるよう純水で希釈し、想定飲用濃度の２倍となるよう調製した。さらに、１３５℃で３０秒加熱する超高温殺菌を行い、紅茶飲料を得た。
【００５０】
（実施例２）
タンナーゼ処理の後にキシリトール２０ｇ（ダニスコジャパン社製）及びスクラロース０．０８ｇ（三栄源エフ・エフ・アイ）を加えた以外は、実施例１と同様にした。
【００５１】
（実施例３）
紅茶葉３６ｇ（ケニア産、三井農林株式会社製）を用いた以外は、実施例１と同様にした。
【００５２】
（比較例１）
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例１と同様にした。
【００５３】
（比較例２）
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例２と同様にした。
【００５４】
（比較例３）
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例３と同様にした。
【００５５】
１．紅茶飲料の分析
実施例１〜３、比較例１〜３について、分析を行った。分析項目は、以下のとおり。結果は、表１に示す。なお、表１中、ＴＦ−１は、テアフラビン３−モノガレートであり、ＴＦ−１'は、テアフラビン３'−モノガレートであり、ＴＦ−２は、テアフラビン３，３'−ジガレートである。
（１）ｐＨ
ｐＨ計（製品名：ｐＨメーターＭ−１３、堀場製作所社製）により測定した。
（２）吸光度
褐色度（４２０ｎｍ）及び濁度（７２０ｎｍ）について、紫外・可視分光強度計（製品名：分光光度計Ｕ−１５００、日立ハイテク社製）により測定した。
（３）Ｂｒｉｘ値（糖度）
糖度計（製品名：デジタル示差濃度計ＤＤ−７、アタゴ社製、またはデジタル屈折計ＲＸ−５０００α、アタゴ社製）により測定した。
（４）ポリフェノール
試料の紅茶飲料を酒石酸鉄法によるタンニン値を３５０ｍｇ／１００ｍｌに調製した。その他分析項目については、アサヒ飲料社定法にて測定した。
【００５６】
【表１】
【００５７】
分析の結果、表１及び図１で示すように、実施例１〜３では、ポリフェノール組成において非ガレート型カテキンの占める割合が多くなった。また、実施例１と実施例３とを比較すると、茶葉製法の違いによるポリフェノール組成の差が現れた。
【００５８】
２．マウス単回投与試験
８週齢雄性ＩＣＲマウスを５日間順化させた後３群に分け、１０時間絶食後、採血し（０時間）、直ちにオリーブオイル０．１ｍｌと実施例１〜３、または、比較例１〜３いずれかの紅茶飲料０．２ｍｌ（対照群は脱塩水）を経口投与し、２、３、５時間後の血漿トリグリセリド（ＴＧ）を測定した。血液は３０分放置後遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５℃、２０分）を行い、得られた上清を血漿とし、トリグリセリドの測定に用いた。血漿トリグリセリドは、トリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素法（ＧＰＯ・ＤＡＯＳ法）にて測定した。なお、血漿トリグリセリド濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。また試験結果は、平均値は±標準誤差で示し、各群間の有意差はＦｉｓｈｅｒの最小有意差法（Ｆｉｓｈｅｒ−ＬＤＳ）を用いて検定した（以降すべての試験結果の各群間の有意差についても同様である）。
【００５９】
結果を図２〜５に示す。まず、実施例１と比較例１との結果の比較（図２）、実施例２と比較例２との結果の比較（図３）、実施例３と比較例３との結果の比較（図４）から、実施例１〜３について、血漿トリグリセリド値の上昇を抑制する傾向にあり、図５で示すように、実施例１と比較例１との結果の比較において、２時間後で有意差が見られた。
【００６０】
３．マウス長期投与試験
５週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを５日間予備飼育した後、空腹時血糖値と体重を測定し、対照群５匹（Ｃｏｎ）、高脂肪食群６匹（ＨＦ）、比較例１の紅茶群５匹（ＣＢＴ１）、実施例１の紅茶群６匹（ＣＢＴ２）、イソケルシトリン（Ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ）群５匹（Ｉｓｏ）、テアフラビン（Ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）群６匹（Ｔｈｅａ）の６群に分けた。飼育期間は９４日間とし、期間中体重と食餌摂取量は毎日測定した。また、本飼育１，４，７，９，１２週目（本飼育１日目、２２日目、４４日目、５９日目、８１日目）に血糖値の測定を行い、本飼育１２週目（本飼育８１日目）に血漿トリグリセリド、血漿遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）の測定を行った。また、本飼育１３週目（本飼育８９〜９１日目）にパルマスＩＩＩＮ１４５×１９５ｍｍ（株式会社天然素材探索研究所）をマウスゲージの下に置き糞の採取を７２時間行った。
マウスは９４日間の本飼育の後、１２時間絶食後開腹し、心臓より血液を採取した。次に肝臓、腎臓、腎周囲脂肪、精巣周囲脂肪、内臓（腸間膜）周囲脂肪を摘出した。摘出した臓器は直ちに測定用に調製するもの以外は液体窒素にて凍結し凍結保存（−８４℃）した。血液サンプルはエッペンチューブに入れ１時間放置し、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５℃、３０分）を行い、得られた上清を血清として新たなエッペンチューブに移し、測定まで−８４℃に保存した。
【００６１】
飼料組成は表２に示した。ＣＢＴ１群、ＣＢＴ２群はカゼイン８０ｇに紅茶３０ｍｌの割合で混合し、凍結乾燥したものをカゼインとし、高脂肪食と同じ組成のものを給餌した（紅茶カゼインは水分補正を行い２０％とした）。Ｉｓｏ群にはＩｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ粉末（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ社製）を、Ｔｈｅａ群にはＴｈｅａｆｌａｖｉｎ粉末（三井農林株式会社製）をそれぞれサンプルとして高脂肪食に添加したものを給餌した。
【００６２】
【表２】
【００６３】
空腹時血糖値は１２時間絶食後、メディセーフミニＧＲ−１０２（テルモ株式会社）を用いて測定した。ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）は、解剖時に心臓より採血した血液で、マイクロマットＩＩＨｂＡ１ｃカートリッジ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて測定した。
血漿トリグリセリド，血漿ＮＥＦＡは１２時間絶食後「２．マウス単回投与試験」と同様に処理した。血漿トリグリセリドは「２．マウス単回投与試験」と同様の方法で測定し、血漿ＮＥＦＡはＮＥＦＡ Ｃ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素法（ＡＣＳ・ＡＣＯＤ法）にて測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００６４】
血清トリグリセリド、血清ＮＥＦＡは既述の保存した血清を用いて測定した。血清総コレステロール（ＴＣ）はコレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素法（コレステロールオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法）にて測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００６５】
肝臓脂質、糞中脂質の抽出は、Ｊ．Ｆｏｌｃｈらの方法（Ｊ．Ｆｏｌｃｈ，Ｍ．Ｌｅｓｓ，ａｎｄ Ｈ．Ｓ．Ｓｔａｎｌｙ：Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ ａｎｉｍａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２２６，４９７−５０９（１９５７））にて行い、各脂質の測定は前述の方法にて行った。
【００６６】
肝臓リン脂質（ＰＬ）は、リン脂質Ｃ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、コリンオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法にて測定した。
【００６７】
糞中総胆汁酸は、総胆汁酸−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、酵素比色法にて測定した。
【００６８】
肝臓脂質代謝系酵素活性の測定に用いるサンプルの調製は次のとおり行った。採血後直ちに摘出した肝臓から０．５ｇを切り分け、７倍量の０．２５Ｍショ糖破砕溶液（ｐＨ７．２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、３ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ含有）を加え、氷中でガラス製ホモジナイザーを用いてホモジナイズした。このホモジネート液を遠心分離（１０００ｒｐｍ、４℃、１０分）し、得られた上清をさらに遠心分離（９０００ｒｐｍ、４℃、１０分）し上清と沈殿を分取した。この上清をさらに遠心分離（１０００００×ｇ、４℃、６０分）し、上清と沈殿を分取した。得られた上清はサイトゾル画分として肝臓における脂質代謝系酵素活性の測定に用いた。酵素活性をタンパク質ｍｇで求めるため、Ａ／Ｇ Ｂ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用い、ビウレット法にてタンパク質を定量した。
【００６９】
脂肪酸合成酵素活性は、セルに０．２Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）０．５ｍｌ、２．５ｍＭ アセチル−ＣｏＡ０．２ｍｌ、１０ｍＭ ＮＡＤＰＨ０．０３ｍｌ、サンプル０．０５ｍｌ、蒸留水０．４１ｍｌを順次入れ、パラフィルムでふたをしてセルを上下にして混合した後、３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着し、経時的に吸光度を測定（３３９ｎｍ、測定時間１２０秒）した。次に１０ｍＭマロニル−ＣｏＡ ０．０２ｍｌを加えて混合した後、３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着し、再び経時的に吸光度を測定（３３９ｎｍ、測定時間１２０秒）した。また、ブランクは０．２Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）０．０５ｍｌを用い、サンプルの吸光度を補正した。分子吸光係数を６６２０Ｍ−１ｃｍ−１として、酵素活性を［式１］で求めた。
【００７０】
［式１］
脂肪酸合成酵素（ｍｍｏｌ／ｍｇ）＝（吸光度の変化量／６６２０）×１０００／サンプル中のタンパク質量（ｍｇ）
【００７１】
カルニチンパルミトイル転移酵素活性の測定は、カルニチン依存的にアシル−ＣｏＡから遊離するＣｏＡをジチオニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）と反応させ、生じる黄色の色素を経時的に測定する逆反応により活性値を求めた。すなわち、セルに１１６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．００５ｍＭ ＤＴＮＢ含有）０．５ｍｌ、サンプル０．０２ｍｌ、蒸留水０．４５ｍｌを順次入れ、パラフィルムでふたをしてセルを上下にして混合し、３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着し、経時的に吸光度を測定（４１２ｎｍ、Ｒａｔｅ Ｔｉｍｅ１２０秒）した。次に２ｍＭパルミトイル−ＣｏＡ０．０２ｍｌを加え混合し、経時的に吸光度を測定（４１２ｎｍ、Ｒａｔｅ Ｔｉｍｅ１２０秒）した。また、ブランクとして１１６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．００５ｍＭ ＤＴＮＢ含有）０．０２ｍｌを用い、サンプルの吸光度を補正した。分子吸光係数を１３６００Ｍ−１ｃｍ−１として、酵素活性を［式２］で求めた。
【００７２】
［式２］
カルニチンパルミトイル転移酵素（ｍｍｏｌ／ｍｇ）＝（吸光度の変化量／１３６００）×１０００／サンプル中のタンパク質量（ｍｇ）
【００７３】
血清レプチンはモリナガレプチン測定キット（株式会社森永生化学研究所）を用い、ＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００７４】
血清インスリンはレビスインスリン−マウス（Ｓタイプ）（株式会社シバヤギ）を用い、ＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００７５】
血清アディポネクチンはマウス／ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬株式会社）を用い、ＥＬＩＳＡ法により測定した。なお、濃度は、標準液を用いて作成した標準曲線を用いて算出した。
【００７６】
遺伝子発現評価は、肝臓より抽出したＲＮＡを用い、ＧｅｎｅＳＱＵＡＲＥ（登録商標）生活習慣病研究用マウス（倉敷紡績株式会社）にて分析し、ＤＮＡマイクロアレイ解析を行った。解析は、ＧｅｎｅＰｉｘ Ｐｒｏ ６．１．０．４（Ａｘｏｎ ＣＮＳ）にて行った。フィルター後、ＨＦ群を対照としてそれぞれ発現差解析を行った。Ｆｏｌｄが２以上を誘導、０．５未満を抑制とした。なお、Ｔｈｅａ群については分析を行わなかった。
【００７７】
結果を図６〜２４に示す。
図６に示すように、体重の推移はＣＢＴ１、ＣＢＴ２群でＨＦ群と比べて増加が少ない傾向が見られた。また、図７（ａ）に示すように、体重当たりの内臓（腸間膜）周囲脂肪はＣＢＴ２群で有意に低下した。図７（ｂ）に示すように、腎臓周囲脂肪もまたＣＢＴ２群で低下したが有意差は見られなかった。図８に示すように、精巣周囲脂肪はＣＢＴ１，ＣＢＴ２群でＨＦ群に比べ低下傾向であった。図７、８の結果から脂肪の蓄積に関しては、全体的にＣＢＴ２群で低下の傾向が示された。
【００７８】
図９で示すように、空腹時血糖値は、本飼育４４日目まではそれぞれの群間で差は見られなかったが、５９日目にＣＢＴ１群がＨＦ群に比べて有意に低下した。本飼育８１日目にはＣＢＴ１，ＣＢＴ２群いずれも有意に低下した。図１０は、総ヘモグロビン中のヘモグロビンＡ１ｃの割合を示す図である。
【００７９】
図１１（ａ）は、血清脂質に関し、トリグリセリド（ＴＧ）の結果を示す。図１１（ｂ）で示すように、総コレステロール（ＴＣ）はサンプル群での有意差は見られなかった。図１２で示すように、血清ＮＥＦＡはＣＢＴ１群で有意に低下し、ＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。
【００８０】
図１３（ａ）で示すように、肝臓脂質に関しては、総脂質はＣＢＴ１，ＣＢＴ２群で有意に低下した。図１３（ｂ）で示すように、トリグリセリド（ＴＧ）はＣＢＴ１群で有意に低下し、ＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。図１４（ａ）で示すように、総コレステロール（ＴＣ）はＣＢＴ２群で有意に低下し、ＣＢＴ１群で低下傾向が見られた。図１４（ｂ）で示すように、ＮＥＦＡはＣＢＴ２群で有意に低下し、ＣＢＴ１群で低下傾向が見られた。図１５で示すように、リン脂質（ＰＬ）はすべてのサンプル群で有意に低下した。
【００８１】
図１６（ａ）で示すように、糞中脂質排泄量に関しては、総脂質はＣＢＴ２群がＨＦ群よりも高い傾向にあった。図１６（ｂ）は、トリグリセリド（ＴＧ）の結果を示す。図１７（ａ）で示すように、総コレステロール（ＴＣ）はＣＢＴ２群がＨＦ群よりも高い傾向にあった。図１７（ｂ）で示すように、総胆汁酸はＣＢＴ２群がＨＦ群よりも高い傾向にあった。
【００８２】
図１８（ａ）で示すように、肝臓脂質代謝系酵素活性に関しては、脂肪酸合成酵素活性の結果を示す。図１８（ｂ）で示すように、カルニチンパルミトイル転移酵素活性はＣＢＴ２群で高い傾向にあった。
【００８３】
ホルモン、サイトカインに関しては、図１９（ａ）で示すように、血清レプチンはＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。図１９（ｂ）で示すように、インスリンもＣＢＴ２群で低下傾向が見られた。図２０で示すように、アディポネクチンは群間差がなかった。
【００８４】
遺伝子発現解析に関しては、脂質代謝関連遺伝子として、紅茶群でＡＰＯＡ２（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−ＩＩ）、ＦＡＢＰ１（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １，ｌｉｖｅｒ）が発現抑制されており（図２１（ａ）、（ｂ））、ＡＰＯＣ３（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ−ＩＩＩ）が発現抑制の傾向が見られた（図２２（ａ））。また、糖質代謝関連遺伝子として、紅茶群でＧＣＫ（ｇｌｕｃｏｋｉｎａｓｅ）が発現抑制されており（図２２（ｂ））、ＰＴＥＮ（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ ｔｅｎｓｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇ）、ＲＢＰ４（ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４，ｐｌａｓｍａ）で発現抑制の傾向が見られた（図２３（ａ）、（ｂ））。その他、代表的なところでは、紅茶群でＦＢＰ１（ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ １）が発現誘導、ＮＦＫＢＩＡ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｋａｐｐａ ｌｉｇｈｔ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｇｅｎｅ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｉｎ Ｂ−ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ， ａｌｐｈａ）が発現抑制されていた（図２４（ａ）、（ｂ））。
【００８５】
以上の結果から、紅茶ポリフェノール飲料摂取により、高脂肪食によって引き起こされる肥満を抑制することが示唆され、その効果には、エステラーゼにより分解された紅茶ポリフェノール分解物が関与していることが推察された。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料。
【請求項２】
前記エステラーゼが、タンナーゼおよびクロロゲン酸エステラーゼのいずれかまたは両方を含む、請求項１に記載の紅茶飲料。
【請求項３】
ガレート型カテキンとガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）に対する非ガレート型カテキンと非ガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）の比率が、２以上１５以下である、請求項１又は２に記載の紅茶飲料。
【請求項４】
高甘味度甘味料もしくは糖アルコールのいずれか又は両方を含有する、請求項１乃至３いずれか１項に記載の紅茶飲料。
【請求項５】
当該紅茶飲料の総ポリフェノールとして、タンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有する、請求項１乃至４いずれか１項に記載の紅茶飲料。
【請求項６】
請求項１乃至５いずれか１項に記載の紅茶飲料を飲料用容器に充填してなる容器詰飲料。
【請求項７】
請求項１乃至５いずれか１項に記載の紅茶飲料を摂取することにより肥満を抑制する方法。
【請求項８】
紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する工程と、
前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の際および／または前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の後に前記紅茶抽出物をエステラーゼで処理する工程と、
を含み、
ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料を製造する方法。
【請求項９】
前記エステラーゼが、タンナーゼおよびクロロゲン酸エステラーゼのいずれか又は両方を含む、請求項８に記載の紅茶飲料を製造する方法。
【請求項１】
紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する際および／または抽出後にエステラーゼで処理した紅茶抽出物から製造され、ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料。
【請求項２】
前記エステラーゼが、タンナーゼおよびクロロゲン酸エステラーゼのいずれかまたは両方を含む、請求項１に記載の紅茶飲料。
【請求項３】
ガレート型カテキンとガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）に対する非ガレート型カテキンと非ガレート型テアフラビンとの総量（ｍｇ／１００ｍｌ）の比率が、２以上１５以下である、請求項１又は２に記載の紅茶飲料。
【請求項４】
高甘味度甘味料もしくは糖アルコールのいずれか又は両方を含有する、請求項１乃至３いずれか１項に記載の紅茶飲料。
【請求項５】
当該紅茶飲料の総ポリフェノールとして、タンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上２５０ｍｇ／１００ｍｌ以下含有する、請求項１乃至４いずれか１項に記載の紅茶飲料。
【請求項６】
請求項１乃至５いずれか１項に記載の紅茶飲料を飲料用容器に充填してなる容器詰飲料。
【請求項７】
請求項１乃至５いずれか１項に記載の紅茶飲料を摂取することにより肥満を抑制する方法。
【請求項８】
紅茶葉から紅茶抽出液を抽出する工程と、
前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の際および／または前記紅茶抽出液を抽出する前記工程の後に前記紅茶抽出物をエステラーゼで処理する工程と、
を含み、
ポリフェノールをタンニン量に換算して６０ｍｇ／１００ｍｌ以上含有し、脂肪蓄積抑制作用を有する紅茶飲料を製造する方法。
【請求項９】
前記エステラーゼが、タンナーゼおよびクロロゲン酸エステラーゼのいずれか又は両方を含む、請求項８に記載の紅茶飲料を製造する方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図６】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図６】
【図９】
【公開番号】特開２０１２−１８３００９（Ｐ２０１２−１８３００９Ａ）
【公開日】平成２４年９月２７日（２０１２．９．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−４７３４８（Ｐ２０１１−４７３４８）
【出願日】平成２３年３月４日（２０１１．３．４）
【出願人】（５９６１２６４６５）アサヒ飲料株式会社 (84)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年９月２７日（２０１２．９．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年３月４日（２０１１．３．４）
【出願人】（５９６１２６４６５）アサヒ飲料株式会社 (84)
【Ｆターム（参考）】
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