細胞の再プログラミングのための方法とその用途
本明細書に記載されたものは、細胞退行分化、形質転換及び真核細胞再プログラミングのための方法である。更に本明細書に記載されたものは、インヴィトロ退行分化及びインヴィトロ再プログラミングの工程後に、患者に移植され得る細胞、細胞系、及び組織である。特定の実施形態では、細胞は、神経幹様細胞（ＮＳＬＣｓ）を含む幹様細胞（ＳＬＣｓ）である。更に本明細書に記載されたものは、これら細胞をヒト体細胞及び他の型の細胞から再生させるための方法である。更に、本明細書に提供されたものは、ヒト治療及び他の分野において、このように生成された細胞を使用する組成物及び方法である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の型の細胞を異なる型の所望の細胞へと形質転換する方法であって、
ｉ）第１の型の細胞を提供することと、
ｉｉ）前記第１の型の細胞中で、少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを一過性的に増加させて、これによって前記一過性増加が少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的又は間接的に誘導させることと、
ｉｉｉ）前記細胞を、前記所望の細胞の形質転換を支援するための条件中に配置させて、並びに前記再プログラミング剤の不在下において前記少なくとも１つの遺伝子調節因子を安定して発現させるために十分な期間時間で、前記少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを維持することと、
ｉｖ）その発現が前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有するような複数個の第２の遺伝子を安定して発現させるのに十分な期間時間で、前記所望の細胞の形質転換を支援する培養条件中で前記細胞を維持すること、とを含み、前記第２の遺伝子の少なくとも１つが、胚幹細胞の表現型的及び機能的特徴の特性を有さない方法であり、これによって前記期間時間の最終にて、前記第１の型の細胞が前記異なる型の所望の細胞へ形質転換される、方法。
【請求項２】
取得された前記異なる型の所望の細胞が、前記第１の型の細胞中で発現される複数個の遺伝子の安定した抑制によって特性評価される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、化合物又は小分子である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤がポリヌクレオチド又はポリペプチドであり、並びに前記ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、その受入番号が表Ａに表示されている、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ-Ｐｒｏｔ又はＵｎｉＧｅｎｅ配列から選択される配列を含む、請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、次のＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｍｓｉ１及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）、Ｍｓｉ１及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＢＤ２）、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２、並びにＭｓｉ１、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤がポリペプチドであり、前記少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを増加させることが、前記ポリペプチドを細胞内に送達させることを含む、請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリペプチドを送達させることが、トランスフェクションによって細胞内に送達される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤がポリヌクレオチド又はポリペプチドであり、前記ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、その受入番号が表Ａに表示されている、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ-Ｐｒｏｔ又はＵｎｉＧｅｎｅ配列から選択される配列を含む、請求項１〜７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記複数個の第２の遺伝子が、その受入番号が表Ａに提供されたＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ-Ｐｒｏｔ又はＵｎｉＧｅｎｅ受入番号中に表示されているポリヌクレオチド又はポリペプチド配列に関して、ポリヌクレオチドを含む遺伝子又はポリペプチドをコ-ド化する遺伝子から選択される、請求項１〜８のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有する第２の遺伝子の発現が、以下の表によって定義された１つ又はそれ以上のマ-カ-の発現によって特性評価される、請求項１〜９のうちのいずれか一項に記載の方法。
【表１】
【請求項１１】
その発現が安定して抑制される前記複数個の遺伝子が、表Ｃに表示された遺伝子に従って選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の細胞中で発現された複数個の遺伝子の安定した抑制が、表Ｃで定義されたような相当する細胞マ-カ-の消失によって特性評価される、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
工程ｉｉ）が工程ｉｉｉ）へ連続して実行されるか、又は工程ｉｉｉ）と同時に実行される、請求項１〜１２のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の型の細胞のクロマチン及び／又はＤＮＡを、前記細胞のクロマチン及び／又はＤＮＡの再構築を可能にする薬剤と接触させることを更に含む、請求項１〜１３のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記クロマチン及び／又はＤＮＡの再構築を可能にする薬剤が、ヒストンアセチル化剤、ヒストン脱アセチル化の阻害剤、ＤＮＡ脱メチル化剤、ＤＮＡメチル化の阻害剤及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＤＮＡメチル化の阻害剤が、５-アザシチジン、５-アザ-２-デオキシシチジン、１-β-Ｄ-アラビノフラノシル-５-アザシトシン、ジヒドロ-５-アザシチジン、ゼブラリン、及びＲＧ１０８からなる群から選択されて、前記ヒストン脱アセチル化の阻害剤が、バルプロン酸、酪酸フェニル、トリコスタチンＡ、酪酸ナトリウム、ベンズアミド、及び環式テトラペプチドからなる群から選択されて、並びにＤＮＡ脱メチル化剤がＭＢＤ２である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１の型の細胞を細胞骨格崩壊剤と接触させることを更に含む、請求項１〜１６のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の型の細胞が、生殖細胞、胚幹細胞及びそれらの由来物、成幹細胞及びそれらの由来物、プロジェニタ-細胞及びそれらの由来物、中胚葉、内胚葉又は外胚葉に由来する細胞、及び中胚葉、内胚葉又は外胚葉系統の細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１の型の細胞が、脂肪細胞由来幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、皮膚由来前駆体細胞、毛胞細胞、繊維芽細胞、角化細胞、表皮細胞、内皮細胞、上皮細胞、顆粒膜上皮細胞、メラニン形成細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、肝細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒細胞、マクロファ-ジ、単球、単核細胞、膵臓島細胞、セルトリ細胞、ニュ-ロン、グリア細胞、心筋細胞、及び他の筋肉細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の異なる型の細胞が、生殖細胞、胚幹細胞及びそれらの由来物、成幹細胞及びそれらの由来物、プロジェニタ-細胞及びそれらの由来物、中胚葉、内胚葉又は外肺葉に由来する細胞、及び中胚葉、内胚葉又は外胚葉系統の細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第２の異なる型の細胞が、脂肪細胞由来幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、皮膚由来前駆体細胞、毛胞細胞、繊維芽細胞、角化細胞、表皮細胞、内皮細胞、上皮細胞、顆粒膜上皮細胞、メラニン形成細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、肝細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒細胞、マクロファ-ジ、単球、単核細胞、膵臓島細胞、セルトリ細胞、ニュ-ロン、グリア細胞、心筋細胞、及び他の筋肉細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記所望の細胞が神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であり、ＮＳＬＣの形質転換を支援するための培養条件中に前記細胞を配置することが、レチノイド化合物、神経栄養因子、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＳＨＨ、Ｗｎｔ３ａ、形質転換成長因子α、神経ペプチドＹ、エストロゲン、リチウム及びＬ-アスコルビン酸からなる群から選択される１つまたはそれ以上の因子を含む培養培地に前記細胞を接触させることを含む、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の型の細胞が、脂肪細胞由来幹細胞、造血幹細胞、繊維芽細胞、及び核化細胞からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
第１の型の細胞を異なる型の所望の細胞へと形質転換させる方法であって、
所望の第２の細胞の形態的及び／又は機能的特性の発現を直接的又は間接的に誘導するために選択された、少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを増加させることと、
その発現が前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有する複数個の第２の遺伝子を安定して発現させるような十分な期間時間で、前記所望の細胞の形質転換を支援するための培養条件中で前記細胞を維持すること、とを含み、前記第２の遺伝子の少なくとも１つは、胚幹細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有さない方法であり、これによって、前記期間時間の最終にて、前記異なる型の所望の細胞が取得され、並びに前記取得された細胞が、前記第１の型の細胞中で発現された複数個の遺伝子の安定な抑制によって更に特性評価される、方法。
【請求項２５】
幹様細胞（ＳＬＣ）を取得する方法であって、
ｉ）第１の型の細胞を提供することと、
ｉｉ）前記細胞中で、少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを一過性的に増加させて、これによって前記一過性増加が少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的又は間接的に誘導させることと、
ｉｉｉ）前記細胞を、幹様細胞の形質転換を支援するための条件中に配置させて、並びに前記再プログラミング剤の不在下において前記少なくとも１つの遺伝子調節因子を安定して発現させるために十分な期間時間で、前記少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを維持することと、
ｉｖ）その発現が前記幹様細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有するような複数個の第２の遺伝子を安定して発現させるのに十分な期間時間で、前記幹様細胞の形質転換を支援する培養条件中で前記細胞を維持すること、とを含み、前記第２の遺伝子の少なくとも１つが、胚幹細胞の表現型的及び機能的特徴の特性を有さない方法であり、これによって前記期間時間の最終にて、幹様細胞が取得される、方法。
【請求項２６】
前記幹様細胞が神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であり、前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｍｓｉ１及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）、Ｍｓｉ１及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＢＤ２）、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２、並びにＭｓｉ１、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２からなる群から選択され、並びに前記少なくとも１つの遺伝子調節因子が、Ｓｏｘ２、ネスチン、及びＭｓｉ１からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）を取得する方法であって、
第１の型の細胞を提供することと、
前記細胞に、以下のポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｇｉ１（Ｍｓｉ１）及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）、並びにＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチドのうちの１つまたはそれ以上の一過性発現が可能である１つまたはそれ以上のポリヌクレオチドを導入することと、並びに、
その発現がＮＳＬＣの表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有するような複数個の遺伝子を安定して発現させるのに十分な期間時間で、ＮＳＬＣへの形質転換を支援する培養条件中に、前記細胞を配置させること、とを含む方法であり、前記期間時間の最終にて、ＮＳＬＣが取得され、並びに前記取得されたＮＳＬＣが、前記第１の型の細胞中で発現される複数個の遺伝子の安定な抑制によって更に特性評価される方法。
【請求項２８】
ＮＳＬＣの形質転換を支援するための培養条件中に前記細胞を配置させることが、レチノイド化合物、神経栄養因子、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＳＨＨ、Ｗｎｔ３ａ、形質転換成長因子α、神経ペプチドＹ、エストロゲン、リチウム及びＬ-アスコルビン酸からなる群から選択される１つまたはそれ以上の因子を含む培養培地に前記細胞を接触させることを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）を取得する方法であって、
ＮＳＬＣではない第１の型の細胞を提供することと、
前記第１の型の細胞のＮＳＬＣへの形質転換を直接的又は間接的に操作することが可能である、少なくとも１つの神経幹細胞特異的ポリペプチドの細胞内レベルを増加させることと、並びに、
前記第１の型の細胞のクロマチン及び／又はＤＮＡを、ヒストンアセチル化剤、ヒストン脱アセチル化の阻害剤、ＤＮＡ脱メチル化剤、及び／又はＤＮＡメチル化の化学的阻害剤と接触させること、とを含む方法であり、これによってＮＳＬＣが取得される方法。
【請求項３０】
前記第１の型の細胞を、細胞骨格崩壊剤で処理することを更に含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つの神経幹細胞特異的ポリペプチドの細胞内レベルを増加させることが、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｇｉ１（Ｍｓｉ１）及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチド、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチド、又はＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチドの発現を可能にする発現ベクタ-で、前記第１の型の細胞を一過性トランスフェクトすることを含む、請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＤＮＡメチル化の阻害剤が、５-アザシチジン、５-アザ-２-デオキシシチジン、１-β-Ｄ-アラビノフラノシル-５-アザシトシン、ジヒドロ-５-アザシチジン、ゼブラリン、及びＲＧ１０８からなる群から選択されて、前記ヒストン脱アセチル化の阻害剤が、バルプロン酸、酪酸フェニル、トリコスタチンＡ、酪酸ナトリウム、ベンズアミド、及び環式テトラペプチドからなる群から選択されて、並びにＤＮＡ脱メチル化剤がＭＢＤ２である、請求項２９〜３１のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ＮＳＬＣの形態的及び機能的特性を維持、支援及び／又は誘導するために適切な１つ又はそれ以上の因子を含む培地中で、前記細胞を培養することを更に含む、請求項２９〜３２のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記１つ又はそれ以上の因子が、レチノイド化合物、神経栄養因子、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＳＨＨ、Ｗｎｔ３ａ、形質転換成長因子α、神経ペプチドＹ、エストロゲン、リチウム及びＬ-アスコルビン酸からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
このように取得された前記ＮＳＬＣが、以下の特性の１つまたはそれ以上を所有し、特性が、
Ｓｏｘ２、ネスチン、ＧＦＡＰ、Ｍｓｉ１及びＮｇｎ２からなる群から選択される１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の発現と、
前記第１の型の細胞に特異的な１つ又はそれ以上の遺伝子の低減された発現と、
神経球コロニ-形成アッセイにおける神経球の形成と、
懸濁液中で培養されること又は接着培養として培養されることが可能であることと、
外因性再プログラミング剤の存在なしに、一か月間を超えて増殖することが可能であることと、
低継代にて、３６時間ごとに分裂することが可能であることと、
テロメラ-ゼ活性に対して陽性であることと、
ニュ-ロン様細胞、星状様細胞、希突起神経膠様細胞及びそれらの組み合わせへと分化することが可能であることと、
テロメラ-ゼ及び１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の低減された発現と、
長さで１つの細胞直径よりも大きな１つ又はそれ以上の形態的神経突起様過程（軸索及び／又は樹状突起）を有することと、
神経特異的チュ-ブリン、微小管関連蛋白質２、ＮＣＡＭ、及び神経伝達物質のためのマ-カ-からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原の発現と、
１つ又はそれ以上の機能的神経マ-カ-の発現と、
１つ又はそれ以上の神経栄養因子の放出が可能であることと、
腫瘍コロニ-形成アッセイにおける陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの腫瘍成長に関して陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの奇形腫成長に関して陰性であることと、
脳アブレ-ションモデルへの空隙中へのＮＳＬＣｓの適当数の配置後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善する可能性があることと、
ＮＳＬＣｓの適当数のＥＡＥモデルへの注入投与後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善又は維持する可能性があること、並びに、
ＣＮＳ損傷又は神経変性モデルにおけるｈＮＰＣｓよりもなおいっそう顕著に１つ又はそれ以上の機能的測定を改善する可能性があること、である、請求項２９〜３４のうちのいずれか一項に記載された方法。
【請求項３６】
このようにして取得された前記ＮＳＬＣｓが、以下の特性の全てを所有し、特異性は、
体細胞よりも著しく長く自己再生する能力と、
それが癌性細胞ではないことと、
それが安定であり、かつ強制的遺伝子発現又は同様な手段によって人工的に維持されず、並びに標準神経幹細胞培地中で維持され得ることと、
プロジェニタ-、前駆体、体細胞へ、又は同一の系統の別のより分化した細胞型へと分化することができることと、
特定のマ-カ-又は遺伝子発現或いは形態的外観だけではない幹細胞の特性を有することと、並びに、
インヴィヴォにおける制御されない成長、奇形腫形成、及び腫瘍形成を表さないこと、である、請求項２９〜３４のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
複数個のＮＳＬＣｓが取得され、並びに前記複数個のＮＳＬＣｓが、三次元構造内に組み立てられる、請求項２９〜３５のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
非ＮＳＬＣから神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）を取得するための方法であって、
非ＮＳＬＣを得ることと、
ＭＢＤ２ポリペプチドをコ-ド化する第１のポリヌクレオチドと、ＭＵＳＡＳＨＩ１ポリペプチド及び／又はＮＧＮ２ポリペプチドをコ-ド化する少なくとも１つの第２のポリヌクレオチドで、前記非ＮＳＬＣをコトランスフェクトすることと、
ＮＳＬＣへの形質転換を支援するための培養条件中に、前記コトランスフェクトされた細胞をＮＳＬＣが取得されるまで配置させること、とを含む方法。
【請求項３９】
前記非ＮＳＬＣが、角化細胞、脂肪細胞由来幹細胞（ＡＤＳＣｓ）及びヒト造血幹細胞から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１〜３８のうちのいずれか一項に記載の方法を用いて取得された細胞系。
【請求項４１】
以下の特性を所有する幹様細胞であって、特性が、
体細胞よりも著しく長く自己再生する能力と、
それが癌性細胞ではないことと、
それが安定であり、かつ強制的遺伝子発現又は同様な手段によって人工的に維持されず、並びに標準神経幹細胞培地中で維持され得ることと、
プロジェニタ-、前駆体、体細胞へ、又は同一の系統の別のより分化した細胞型へと分化することができることと、
特定のマ-カ-又は遺伝子発現或いは形態的外観だけではない幹細胞の特性を有することと、並びに、
インヴィヴォにおける制御されない成長、奇形腫形成、及び腫瘍形成を表さないこと、である幹様細胞。
【請求項４２】
以下の特性を所有する神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であって、特性が
Ｓｏｘ２、ネスチン、ＧＦＡＰ、Ｍｓｉ１及びＮｇｎ２からなる群から選択される１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の発現と、
前記第１の型の細胞に特異的な１つ又はそれ以上の遺伝子の低減された発現と、
神経球コロニ-形成アッセイにおける神経球の形成と、
懸濁液中で培養されること又は接着培養として培養されることが可能であることと、
外因性再プログラミング剤の存在なしに、一か月間を超えて増殖することが可能であることと、
低継代にて、３６時間ごとに分裂することが可能であることと、
テロメラ-ゼ活性に対して陽性であることと、
ニュ-ロン様細胞、星状様細胞、希突起神経膠様細胞及びそれらの組み合わせへと分化することが可能であることと、
テロメラ-ゼ及び１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の低減された発現と、
長さで１つの細胞直径よりも大きな１つ又はそれ以上の形態的神経突起様過程（軸索及び／又は樹状突起）を有することと、
神経特異的チュ-ブリン、微小管関連蛋白質２、ＮＣＡＭ、及び神経伝達物質のためのマ-カ-からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原の発現と、
１つ又はそれ以上の機能的神経マ-カ-の発現と、
１つ又はそれ以上の神経栄養因子の放出が可能であることと、
腫瘍コロニ-形成アッセイにおいて陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの腫瘍成長に関して陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの奇形腫成長に関して陰性であることと、
脳アブレ-ションモデルへの空隙中へのＮＳＬＣｓの適当数の配置後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善する可能性があることと、
ＮＳＬＣｓの適当数のＥＡＥモデルへの注入投与後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善又は維持する可能性があること、並びに、
ＣＮＳ損傷又は神経変性モデルにおけるｈＮＰＣｓよりもなおいっそう顕著に１つ又はそれ以上の機能的測定を改善する可能性があること、である神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）。
【請求項４３】
このように取得された前記ＮＳＬＣが、以下のすべての特性を有し、特性が
体細胞よりも著しく長く自己再生する能力と、
それが癌性細胞ではないことと、
それが安定であり、かつ強制的遺伝子発現又は同様な手段によって人工的に維持されず、並びに標準神経幹細胞培地中で維持され得ることと、
プロジェニタ-、前駆体、体細胞へ、又は同一の系統の別のより分化した細胞型へと分化することができることと、
特定のマ-カ-又は遺伝子発現或いは形態的外観だけではない幹細胞の特性を有することと、並びに、
インヴィヴォにおける制御されない成長、奇形腫形成、及び腫瘍形成を表さないこと、である、請求項４２に記載の神経幹様細胞。
【請求項４４】
前記ＮＳＬＣが、体細胞、プロジェニタ-細胞又は幹細胞の退行分化、形質転換又は再プログラミングから誘導される、請求項４２又は４３に記載のＮＳＬＣ。
【請求項４５】
インヴィトロで培養された細胞を含む３Ｄ組み立て品人工組織構造であって、前記３Ｄ組み立て品が、請求項１〜２４に記載された方法のいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の所望の細胞と、請求項２５又は２６に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個のＳＬＣと、請求項２７〜３９に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）と、請求項４１で定義されたような複数個のＳＬＣと、及び／又は請求項４２〜４４のうちのいずれか一項で定義されたような複数個のＮＳＬＣと、これら細胞によって生成された細胞外マトリックスとを含む、人工組織構造。
【請求項４６】
哺乳類組織または臓器を再生する方法であって、請求項１〜２４に記載された方法のいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の所望の細胞と、請求項２５又は２６に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個のＳＬＣと、請求項２７〜３９に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）と、請求項４１で定義されたような複数個のＳＬＣと、及び／又は請求項４２〜４４のうちのいずれか一項で定義されたような複数個のＮＳＬＣとを提供することと、再生される前記組織または臓器を前記複数個の所望の細胞、ＳＬＣ、及び／又はＮＳＬＣと接触させること、とを含む方法。
【請求項４７】
前記所望の細胞、ＳＬＣ、及び／又はＮＳＬＣが、再生される組織又は臓器の近接に配置される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
それを必要とする対象者の組織または臓器を修復または再生させる方法であって、前記方法が、前記組織または臓器を、請求項１〜２４に記載された方法のいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の所望の細胞と、請求項２５又は２６に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個のＳＬＣと、請求項２７〜３９に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）と、請求項４１で定義されたような複数個のＳＬＣと、及び／又は請求項４２〜４４のうちのいずれか一項で定義されたような複数個のＮＳＬＣと、及び／又は請求項４５で定義されたような人工組織構造とに接触させることを含む、方法。
【請求項４９】
それを必要とする被験者の組織または臓器を修復または再生させる方法であって、前記方法が、前記対象者に、前記組織又は臓器の細胞中で少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的または間接的に誘導する化合物及び／又は前記被験者のインヴォヴォにて、形質転換、退行分化又は再プログラムされることが可能な細胞中で、少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を誘導する化合物を投与することを含む方法であり、前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の発現が、前記細胞を所望の異なる型の細胞へと再プログラムし、並びに前記異なる型の細胞が、前記組織又は臓器の修復または再生において効果的であるような、方法。
【請求項５０】
前記所望の異なる型の細胞が、幹様細胞である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記組織又は臓器が、脳、脊髄、心臓、眼、網膜、内耳、皮膚、筋肉、腸、膵臓、腎臓、肝臓、肺、骨、骨髄、軟骨板、毛胞、歯、血管、内分泌腺、外分泌腺、卵巣、生殖器、乳房組織及び胸部組織からなる群から選択される、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
第１の型の細胞が所望の異なる型の細胞へ再プログラムされるような工程であって、
少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルの一過性増加であって、前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的又は間接的に誘導し、並びに前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現が、前記異なる型の所望の細胞の存在に必要である、一過性増加と、
前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の安定な発現と、
複数個の第２の遺伝子の安定な発現であって、前記複数個の第２の遺伝子の前記安定な発現が、前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の前記安定な発現の結果であり、並びに（ｉ）複数個の第２の遺伝子の安定な発現が、前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性であり、（ｉｉ）前記少なくとも１つの第２の遺伝子の安定な発現が、胚幹細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性ではなく、並びに（ｉ）及び（ｉｉ）が、前記第１の型の細胞の前記異なる型の所望の細胞への成功した再プログラミングの指標であるような安定な発現を含む、工程。
【請求項５３】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、Ｍｓｉ１ポリペプチド、又はＮｇｎ２ポリペプチド及びＭＤＢ２ポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドである、請求項５２に記載の工程。
【請求項５４】
前記少なくとも１つの遺伝子調節因子が、Ｓｏｘ２、Ｍｓｉ１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドである、請求項５２又は５３に記載の工程。
【請求項５５】
前記所望の細胞が神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であって並びに前記第１の型の細胞が、角化細胞、脂肪細胞由来幹細胞（ＡＤＳＣＶｓ）及びヒト造血幹細胞から選択される細胞である、請求項５２〜５４のうちのいずれか一項に記載の工程。
【請求項１】
第１の型の細胞を異なる型の所望の細胞へと形質転換する方法であって、
ｉ）第１の型の細胞を提供することと、
ｉｉ）前記第１の型の細胞中で、少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを一過性的に増加させて、これによって前記一過性増加が少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的又は間接的に誘導させることと、
ｉｉｉ）前記細胞を、前記所望の細胞の形質転換を支援するための条件中に配置させて、並びに前記再プログラミング剤の不在下において前記少なくとも１つの遺伝子調節因子を安定して発現させるために十分な期間時間で、前記少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを維持することと、
ｉｖ）その発現が前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有するような複数個の第２の遺伝子を安定して発現させるのに十分な期間時間で、前記所望の細胞の形質転換を支援する培養条件中で前記細胞を維持すること、とを含み、前記第２の遺伝子の少なくとも１つが、胚幹細胞の表現型的及び機能的特徴の特性を有さない方法であり、これによって前記期間時間の最終にて、前記第１の型の細胞が前記異なる型の所望の細胞へ形質転換される、方法。
【請求項２】
取得された前記異なる型の所望の細胞が、前記第１の型の細胞中で発現される複数個の遺伝子の安定した抑制によって特性評価される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、化合物又は小分子である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤がポリヌクレオチド又はポリペプチドであり、並びに前記ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、その受入番号が表Ａに表示されている、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ-Ｐｒｏｔ又はＵｎｉＧｅｎｅ配列から選択される配列を含む、請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、次のＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｍｓｉ１及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）、Ｍｓｉ１及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＢＤ２）、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２、並びにＭｓｉ１、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤がポリペプチドであり、前記少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを増加させることが、前記ポリペプチドを細胞内に送達させることを含む、請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリペプチドを送達させることが、トランスフェクションによって細胞内に送達される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤がポリヌクレオチド又はポリペプチドであり、前記ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、その受入番号が表Ａに表示されている、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ-Ｐｒｏｔ又はＵｎｉＧｅｎｅ配列から選択される配列を含む、請求項１〜７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記複数個の第２の遺伝子が、その受入番号が表Ａに提供されたＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ-Ｐｒｏｔ又はＵｎｉＧｅｎｅ受入番号中に表示されているポリヌクレオチド又はポリペプチド配列に関して、ポリヌクレオチドを含む遺伝子又はポリペプチドをコ-ド化する遺伝子から選択される、請求項１〜８のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有する第２の遺伝子の発現が、以下の表によって定義された１つ又はそれ以上のマ-カ-の発現によって特性評価される、請求項１〜９のうちのいずれか一項に記載の方法。
【表１】
【請求項１１】
その発現が安定して抑制される前記複数個の遺伝子が、表Ｃに表示された遺伝子に従って選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の細胞中で発現された複数個の遺伝子の安定した抑制が、表Ｃで定義されたような相当する細胞マ-カ-の消失によって特性評価される、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
工程ｉｉ）が工程ｉｉｉ）へ連続して実行されるか、又は工程ｉｉｉ）と同時に実行される、請求項１〜１２のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の型の細胞のクロマチン及び／又はＤＮＡを、前記細胞のクロマチン及び／又はＤＮＡの再構築を可能にする薬剤と接触させることを更に含む、請求項１〜１３のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記クロマチン及び／又はＤＮＡの再構築を可能にする薬剤が、ヒストンアセチル化剤、ヒストン脱アセチル化の阻害剤、ＤＮＡ脱メチル化剤、ＤＮＡメチル化の阻害剤及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＤＮＡメチル化の阻害剤が、５-アザシチジン、５-アザ-２-デオキシシチジン、１-β-Ｄ-アラビノフラノシル-５-アザシトシン、ジヒドロ-５-アザシチジン、ゼブラリン、及びＲＧ１０８からなる群から選択されて、前記ヒストン脱アセチル化の阻害剤が、バルプロン酸、酪酸フェニル、トリコスタチンＡ、酪酸ナトリウム、ベンズアミド、及び環式テトラペプチドからなる群から選択されて、並びにＤＮＡ脱メチル化剤がＭＢＤ２である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１の型の細胞を細胞骨格崩壊剤と接触させることを更に含む、請求項１〜１６のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の型の細胞が、生殖細胞、胚幹細胞及びそれらの由来物、成幹細胞及びそれらの由来物、プロジェニタ-細胞及びそれらの由来物、中胚葉、内胚葉又は外胚葉に由来する細胞、及び中胚葉、内胚葉又は外胚葉系統の細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１の型の細胞が、脂肪細胞由来幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、皮膚由来前駆体細胞、毛胞細胞、繊維芽細胞、角化細胞、表皮細胞、内皮細胞、上皮細胞、顆粒膜上皮細胞、メラニン形成細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、肝細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒細胞、マクロファ-ジ、単球、単核細胞、膵臓島細胞、セルトリ細胞、ニュ-ロン、グリア細胞、心筋細胞、及び他の筋肉細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の異なる型の細胞が、生殖細胞、胚幹細胞及びそれらの由来物、成幹細胞及びそれらの由来物、プロジェニタ-細胞及びそれらの由来物、中胚葉、内胚葉又は外肺葉に由来する細胞、及び中胚葉、内胚葉又は外胚葉系統の細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第２の異なる型の細胞が、脂肪細胞由来幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、皮膚由来前駆体細胞、毛胞細胞、繊維芽細胞、角化細胞、表皮細胞、内皮細胞、上皮細胞、顆粒膜上皮細胞、メラニン形成細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、肝細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒細胞、マクロファ-ジ、単球、単核細胞、膵臓島細胞、セルトリ細胞、ニュ-ロン、グリア細胞、心筋細胞、及び他の筋肉細胞からなる群から選択される、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記所望の細胞が神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であり、ＮＳＬＣの形質転換を支援するための培養条件中に前記細胞を配置することが、レチノイド化合物、神経栄養因子、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＳＨＨ、Ｗｎｔ３ａ、形質転換成長因子α、神経ペプチドＹ、エストロゲン、リチウム及びＬ-アスコルビン酸からなる群から選択される１つまたはそれ以上の因子を含む培養培地に前記細胞を接触させることを含む、請求項１〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の型の細胞が、脂肪細胞由来幹細胞、造血幹細胞、繊維芽細胞、及び核化細胞からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
第１の型の細胞を異なる型の所望の細胞へと形質転換させる方法であって、
所望の第２の細胞の形態的及び／又は機能的特性の発現を直接的又は間接的に誘導するために選択された、少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを増加させることと、
その発現が前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有する複数個の第２の遺伝子を安定して発現させるような十分な期間時間で、前記所望の細胞の形質転換を支援するための培養条件中で前記細胞を維持すること、とを含み、前記第２の遺伝子の少なくとも１つは、胚幹細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有さない方法であり、これによって、前記期間時間の最終にて、前記異なる型の所望の細胞が取得され、並びに前記取得された細胞が、前記第１の型の細胞中で発現された複数個の遺伝子の安定な抑制によって更に特性評価される、方法。
【請求項２５】
幹様細胞（ＳＬＣ）を取得する方法であって、
ｉ）第１の型の細胞を提供することと、
ｉｉ）前記細胞中で、少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを一過性的に増加させて、これによって前記一過性増加が少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的又は間接的に誘導させることと、
ｉｉｉ）前記細胞を、幹様細胞の形質転換を支援するための条件中に配置させて、並びに前記再プログラミング剤の不在下において前記少なくとも１つの遺伝子調節因子を安定して発現させるために十分な期間時間で、前記少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルを維持することと、
ｉｖ）その発現が前記幹様細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有するような複数個の第２の遺伝子を安定して発現させるのに十分な期間時間で、前記幹様細胞の形質転換を支援する培養条件中で前記細胞を維持すること、とを含み、前記第２の遺伝子の少なくとも１つが、胚幹細胞の表現型的及び機能的特徴の特性を有さない方法であり、これによって前記期間時間の最終にて、幹様細胞が取得される、方法。
【請求項２６】
前記幹様細胞が神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であり、前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｍｓｉ１及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）、Ｍｓｉ１及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＢＤ２）、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２、並びにＭｓｉ１、Ｎｇｎ２及びＭＢＤ２からなる群から選択され、並びに前記少なくとも１つの遺伝子調節因子が、Ｓｏｘ２、ネスチン、及びＭｓｉ１からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）を取得する方法であって、
第１の型の細胞を提供することと、
前記細胞に、以下のポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｇｉ１（Ｍｓｉ１）及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）、並びにＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチドのうちの１つまたはそれ以上の一過性発現が可能である１つまたはそれ以上のポリヌクレオチドを導入することと、並びに、
その発現がＮＳＬＣの表現型的及び／又は機能的特徴の特性を有するような複数個の遺伝子を安定して発現させるのに十分な期間時間で、ＮＳＬＣへの形質転換を支援する培養条件中に、前記細胞を配置させること、とを含む方法であり、前記期間時間の最終にて、ＮＳＬＣが取得され、並びに前記取得されたＮＳＬＣが、前記第１の型の細胞中で発現される複数個の遺伝子の安定な抑制によって更に特性評価される方法。
【請求項２８】
ＮＳＬＣの形質転換を支援するための培養条件中に前記細胞を配置させることが、レチノイド化合物、神経栄養因子、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＳＨＨ、Ｗｎｔ３ａ、形質転換成長因子α、神経ペプチドＹ、エストロゲン、リチウム及びＬ-アスコルビン酸からなる群から選択される１つまたはそれ以上の因子を含む培養培地に前記細胞を接触させることを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）を取得する方法であって、
ＮＳＬＣではない第１の型の細胞を提供することと、
前記第１の型の細胞のＮＳＬＣへの形質転換を直接的又は間接的に操作することが可能である、少なくとも１つの神経幹細胞特異的ポリペプチドの細胞内レベルを増加させることと、並びに、
前記第１の型の細胞のクロマチン及び／又はＤＮＡを、ヒストンアセチル化剤、ヒストン脱アセチル化の阻害剤、ＤＮＡ脱メチル化剤、及び／又はＤＮＡメチル化の化学的阻害剤と接触させること、とを含む方法であり、これによってＮＳＬＣが取得される方法。
【請求項３０】
前記第１の型の細胞を、細胞骨格崩壊剤で処理することを更に含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つの神経幹細胞特異的ポリペプチドの細胞内レベルを増加させることが、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｇｉ１（Ｍｓｉ１）及びＮｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、Ｍｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチド、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチド、又はＭｕｓａｓｈｉ１（Ｍｓｉ１）、Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ２（Ｎｇｎ２）ポリペプチド、及びメチル-ＣｐＧ結合ドメイン蛋白質２（ＭＤＢＤ２）ポリペプチドの発現を可能にする発現ベクタ-で、前記第１の型の細胞を一過性トランスフェクトすることを含む、請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＤＮＡメチル化の阻害剤が、５-アザシチジン、５-アザ-２-デオキシシチジン、１-β-Ｄ-アラビノフラノシル-５-アザシトシン、ジヒドロ-５-アザシチジン、ゼブラリン、及びＲＧ１０８からなる群から選択されて、前記ヒストン脱アセチル化の阻害剤が、バルプロン酸、酪酸フェニル、トリコスタチンＡ、酪酸ナトリウム、ベンズアミド、及び環式テトラペプチドからなる群から選択されて、並びにＤＮＡ脱メチル化剤がＭＢＤ２である、請求項２９〜３１のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ＮＳＬＣの形態的及び機能的特性を維持、支援及び／又は誘導するために適切な１つ又はそれ以上の因子を含む培地中で、前記細胞を培養することを更に含む、請求項２９〜３２のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記１つ又はそれ以上の因子が、レチノイド化合物、神経栄養因子、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＳＨＨ、Ｗｎｔ３ａ、形質転換成長因子α、神経ペプチドＹ、エストロゲン、リチウム及びＬ-アスコルビン酸からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
このように取得された前記ＮＳＬＣが、以下の特性の１つまたはそれ以上を所有し、特性が、
Ｓｏｘ２、ネスチン、ＧＦＡＰ、Ｍｓｉ１及びＮｇｎ２からなる群から選択される１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の発現と、
前記第１の型の細胞に特異的な１つ又はそれ以上の遺伝子の低減された発現と、
神経球コロニ-形成アッセイにおける神経球の形成と、
懸濁液中で培養されること又は接着培養として培養されることが可能であることと、
外因性再プログラミング剤の存在なしに、一か月間を超えて増殖することが可能であることと、
低継代にて、３６時間ごとに分裂することが可能であることと、
テロメラ-ゼ活性に対して陽性であることと、
ニュ-ロン様細胞、星状様細胞、希突起神経膠様細胞及びそれらの組み合わせへと分化することが可能であることと、
テロメラ-ゼ及び１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の低減された発現と、
長さで１つの細胞直径よりも大きな１つ又はそれ以上の形態的神経突起様過程（軸索及び／又は樹状突起）を有することと、
神経特異的チュ-ブリン、微小管関連蛋白質２、ＮＣＡＭ、及び神経伝達物質のためのマ-カ-からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原の発現と、
１つ又はそれ以上の機能的神経マ-カ-の発現と、
１つ又はそれ以上の神経栄養因子の放出が可能であることと、
腫瘍コロニ-形成アッセイにおける陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの腫瘍成長に関して陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの奇形腫成長に関して陰性であることと、
脳アブレ-ションモデルへの空隙中へのＮＳＬＣｓの適当数の配置後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善する可能性があることと、
ＮＳＬＣｓの適当数のＥＡＥモデルへの注入投与後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善又は維持する可能性があること、並びに、
ＣＮＳ損傷又は神経変性モデルにおけるｈＮＰＣｓよりもなおいっそう顕著に１つ又はそれ以上の機能的測定を改善する可能性があること、である、請求項２９〜３４のうちのいずれか一項に記載された方法。
【請求項３６】
このようにして取得された前記ＮＳＬＣｓが、以下の特性の全てを所有し、特異性は、
体細胞よりも著しく長く自己再生する能力と、
それが癌性細胞ではないことと、
それが安定であり、かつ強制的遺伝子発現又は同様な手段によって人工的に維持されず、並びに標準神経幹細胞培地中で維持され得ることと、
プロジェニタ-、前駆体、体細胞へ、又は同一の系統の別のより分化した細胞型へと分化することができることと、
特定のマ-カ-又は遺伝子発現或いは形態的外観だけではない幹細胞の特性を有することと、並びに、
インヴィヴォにおける制御されない成長、奇形腫形成、及び腫瘍形成を表さないこと、である、請求項２９〜３４のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
複数個のＮＳＬＣｓが取得され、並びに前記複数個のＮＳＬＣｓが、三次元構造内に組み立てられる、請求項２９〜３５のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
非ＮＳＬＣから神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）を取得するための方法であって、
非ＮＳＬＣを得ることと、
ＭＢＤ２ポリペプチドをコ-ド化する第１のポリヌクレオチドと、ＭＵＳＡＳＨＩ１ポリペプチド及び／又はＮＧＮ２ポリペプチドをコ-ド化する少なくとも１つの第２のポリヌクレオチドで、前記非ＮＳＬＣをコトランスフェクトすることと、
ＮＳＬＣへの形質転換を支援するための培養条件中に、前記コトランスフェクトされた細胞をＮＳＬＣが取得されるまで配置させること、とを含む方法。
【請求項３９】
前記非ＮＳＬＣが、角化細胞、脂肪細胞由来幹細胞（ＡＤＳＣｓ）及びヒト造血幹細胞から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１〜３８のうちのいずれか一項に記載の方法を用いて取得された細胞系。
【請求項４１】
以下の特性を所有する幹様細胞であって、特性が、
体細胞よりも著しく長く自己再生する能力と、
それが癌性細胞ではないことと、
それが安定であり、かつ強制的遺伝子発現又は同様な手段によって人工的に維持されず、並びに標準神経幹細胞培地中で維持され得ることと、
プロジェニタ-、前駆体、体細胞へ、又は同一の系統の別のより分化した細胞型へと分化することができることと、
特定のマ-カ-又は遺伝子発現或いは形態的外観だけではない幹細胞の特性を有することと、並びに、
インヴィヴォにおける制御されない成長、奇形腫形成、及び腫瘍形成を表さないこと、である幹様細胞。
【請求項４２】
以下の特性を所有する神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であって、特性が
Ｓｏｘ２、ネスチン、ＧＦＡＰ、Ｍｓｉ１及びＮｇｎ２からなる群から選択される１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の発現と、
前記第１の型の細胞に特異的な１つ又はそれ以上の遺伝子の低減された発現と、
神経球コロニ-形成アッセイにおける神経球の形成と、
懸濁液中で培養されること又は接着培養として培養されることが可能であることと、
外因性再プログラミング剤の存在なしに、一か月間を超えて増殖することが可能であることと、
低継代にて、３６時間ごとに分裂することが可能であることと、
テロメラ-ゼ活性に対して陽性であることと、
ニュ-ロン様細胞、星状様細胞、希突起神経膠様細胞及びそれらの組み合わせへと分化することが可能であることと、
テロメラ-ゼ及び１つ又はそれ以上の神経幹細胞マ-カ-の低減された発現と、
長さで１つの細胞直径よりも大きな１つ又はそれ以上の形態的神経突起様過程（軸索及び／又は樹状突起）を有することと、
神経特異的チュ-ブリン、微小管関連蛋白質２、ＮＣＡＭ、及び神経伝達物質のためのマ-カ-からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原の発現と、
１つ又はそれ以上の機能的神経マ-カ-の発現と、
１つ又はそれ以上の神経栄養因子の放出が可能であることと、
腫瘍コロニ-形成アッセイにおいて陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの腫瘍成長に関して陰性であることと、
ＳＣＩＤマウスでの奇形腫成長に関して陰性であることと、
脳アブレ-ションモデルへの空隙中へのＮＳＬＣｓの適当数の配置後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善する可能性があることと、
ＮＳＬＣｓの適当数のＥＡＥモデルへの注入投与後における１つ又はそれ以上の機能的測定を著しく改善又は維持する可能性があること、並びに、
ＣＮＳ損傷又は神経変性モデルにおけるｈＮＰＣｓよりもなおいっそう顕著に１つ又はそれ以上の機能的測定を改善する可能性があること、である神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）。
【請求項４３】
このように取得された前記ＮＳＬＣが、以下のすべての特性を有し、特性が
体細胞よりも著しく長く自己再生する能力と、
それが癌性細胞ではないことと、
それが安定であり、かつ強制的遺伝子発現又は同様な手段によって人工的に維持されず、並びに標準神経幹細胞培地中で維持され得ることと、
プロジェニタ-、前駆体、体細胞へ、又は同一の系統の別のより分化した細胞型へと分化することができることと、
特定のマ-カ-又は遺伝子発現或いは形態的外観だけではない幹細胞の特性を有することと、並びに、
インヴィヴォにおける制御されない成長、奇形腫形成、及び腫瘍形成を表さないこと、である、請求項４２に記載の神経幹様細胞。
【請求項４４】
前記ＮＳＬＣが、体細胞、プロジェニタ-細胞又は幹細胞の退行分化、形質転換又は再プログラミングから誘導される、請求項４２又は４３に記載のＮＳＬＣ。
【請求項４５】
インヴィトロで培養された細胞を含む３Ｄ組み立て品人工組織構造であって、前記３Ｄ組み立て品が、請求項１〜２４に記載された方法のいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の所望の細胞と、請求項２５又は２６に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個のＳＬＣと、請求項２７〜３９に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）と、請求項４１で定義されたような複数個のＳＬＣと、及び／又は請求項４２〜４４のうちのいずれか一項で定義されたような複数個のＮＳＬＣと、これら細胞によって生成された細胞外マトリックスとを含む、人工組織構造。
【請求項４６】
哺乳類組織または臓器を再生する方法であって、請求項１〜２４に記載された方法のいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の所望の細胞と、請求項２５又は２６に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個のＳＬＣと、請求項２７〜３９に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）と、請求項４１で定義されたような複数個のＳＬＣと、及び／又は請求項４２〜４４のうちのいずれか一項で定義されたような複数個のＮＳＬＣとを提供することと、再生される前記組織または臓器を前記複数個の所望の細胞、ＳＬＣ、及び／又はＮＳＬＣと接触させること、とを含む方法。
【請求項４７】
前記所望の細胞、ＳＬＣ、及び／又はＮＳＬＣが、再生される組織又は臓器の近接に配置される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
それを必要とする対象者の組織または臓器を修復または再生させる方法であって、前記方法が、前記組織または臓器を、請求項１〜２４に記載された方法のいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の所望の細胞と、請求項２５又は２６に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個のＳＬＣと、請求項２７〜３９に記載されたいずれか１つの方法を使用して得られた複数個の神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）と、請求項４１で定義されたような複数個のＳＬＣと、及び／又は請求項４２〜４４のうちのいずれか一項で定義されたような複数個のＮＳＬＣと、及び／又は請求項４５で定義されたような人工組織構造とに接触させることを含む、方法。
【請求項４９】
それを必要とする被験者の組織または臓器を修復または再生させる方法であって、前記方法が、前記対象者に、前記組織又は臓器の細胞中で少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的または間接的に誘導する化合物及び／又は前記被験者のインヴォヴォにて、形質転換、退行分化又は再プログラムされることが可能な細胞中で、少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を誘導する化合物を投与することを含む方法であり、前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の発現が、前記細胞を所望の異なる型の細胞へと再プログラムし、並びに前記異なる型の細胞が、前記組織又は臓器の修復または再生において効果的であるような、方法。
【請求項５０】
前記所望の異なる型の細胞が、幹様細胞である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記組織又は臓器が、脳、脊髄、心臓、眼、網膜、内耳、皮膚、筋肉、腸、膵臓、腎臓、肝臓、肺、骨、骨髄、軟骨板、毛胞、歯、血管、内分泌腺、外分泌腺、卵巣、生殖器、乳房組織及び胸部組織からなる群から選択される、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
第１の型の細胞が所望の異なる型の細胞へ再プログラムされるような工程であって、
少なくとも１つの再プログラミング剤の細胞内レベルの一過性増加であって、前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現を直接的又は間接的に誘導し、並びに前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の内因性発現が、前記異なる型の所望の細胞の存在に必要である、一過性増加と、
前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の安定な発現と、
複数個の第２の遺伝子の安定な発現であって、前記複数個の第２の遺伝子の前記安定な発現が、前記少なくとも１つの遺伝子調節因子の前記安定な発現の結果であり、並びに（ｉ）複数個の第２の遺伝子の安定な発現が、前記所望の細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性であり、（ｉｉ）前記少なくとも１つの第２の遺伝子の安定な発現が、胚幹細胞の表現型的及び／又は機能的特徴の特性ではなく、並びに（ｉ）及び（ｉｉ）が、前記第１の型の細胞の前記異なる型の所望の細胞への成功した再プログラミングの指標であるような安定な発現を含む、工程。
【請求項５３】
前記少なくとも１つの再プログラミング剤が、Ｍｓｉ１ポリペプチド、又はＮｇｎ２ポリペプチド及びＭＤＢ２ポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドである、請求項５２に記載の工程。
【請求項５４】
前記少なくとも１つの遺伝子調節因子が、Ｓｏｘ２、Ｍｓｉ１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドである、請求項５２又は５３に記載の工程。
【請求項５５】
前記所望の細胞が神経幹様細胞（ＮＳＬＣ）であって並びに前記第１の型の細胞が、角化細胞、脂肪細胞由来幹細胞（ＡＤＳＣＶｓ）及びヒト造血幹細胞から選択される細胞である、請求項５２〜５４のうちのいずれか一項に記載の工程。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【公表番号】特表２０１３−５０９１５９（Ｐ２０１３−５０９１５９Ａ）
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３５５６５（Ｐ２０１２−５３５５６５）
【出願日】平成２２年１１月１日（２０１０．１１．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２０１０／００１７２７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５０４７６
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（５１０３０８６２１）ニュー・ワールド・ラボラトリーズ・インコーポレイテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＮＥＷ ＷＯＲＬＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１日（２０１０．１１．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２０１０／００１７２７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５０４７６
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（５１０３０８６２１）ニュー・ワールド・ラボラトリーズ・インコーポレイテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＮＥＷ ＷＯＲＬＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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