細胞分離装置および細胞分離方法
【課題】消化酵素液から脂分を十分に除去することで、脂肪由来細胞を高い収率で回収する。
【解決手段】脂肪組織からなる脂肪層と消化酵素液からなる水層とを静置状態で収容して脂肪層から水層に脂肪由来細胞を分離させる消化容器１１と、消化酵素液を消化容器１１に供給する酵素液供給部１４と、脂肪組織の残渣からなる残渣層を消化容器１１内から残渣回収容器１５に回収する残渣層除去部１５と、消化容器１１から搬送されてきた水層から脂肪由来細胞を回収する細胞回収部２０と、酵素液供給部１４により消化容器１１内に消化酵素液を供給させる酵素液供給処理と、脂肪層と水層を所定時間静置させる静置処理と、該静置処理後に水層を細胞回収部２０に搬送する水層搬送処理と、該水層搬送処理後に残渣層除去部１５によって残渣層を消化容器１１内から除去させる残渣除去処理とを複数回繰り返させる制御部４０とを備える細胞分離装置１を提供する。
【解決手段】脂肪組織からなる脂肪層と消化酵素液からなる水層とを静置状態で収容して脂肪層から水層に脂肪由来細胞を分離させる消化容器１１と、消化酵素液を消化容器１１に供給する酵素液供給部１４と、脂肪組織の残渣からなる残渣層を消化容器１１内から残渣回収容器１５に回収する残渣層除去部１５と、消化容器１１から搬送されてきた水層から脂肪由来細胞を回収する細胞回収部２０と、酵素液供給部１４により消化容器１１内に消化酵素液を供給させる酵素液供給処理と、脂肪層と水層を所定時間静置させる静置処理と、該静置処理後に水層を細胞回収部２０に搬送する水層搬送処理と、該水層搬送処理後に残渣層除去部１５によって残渣層を消化容器１１内から除去させる残渣除去処理とを複数回繰り返させる制御部４０とを備える細胞分離装置１を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離装置および細胞分離方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、生体内から採取した脂肪組織を消化酵素液によって分解することにより、脂肪組織に含まれていた幹細胞などの治療に有効な細胞を脂肪組織から分離させて抽出する装置が知られている（例えば、特許文献１および２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００７−２８９０７６号公報
【特許文献２】国際公開第２００５／０１２４８０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１および２では、脂肪組織を消化酵素液で処理することにより脂肪組織を分解している。したがって、消化酵素液には脂肪由来細胞の他に脂肪組織に含まれていた脂分が微粒子となって混入し、消化酵素液と脂分とのエマルションが生成される。このエマルションが細胞回収用や脂肪組織除去用のフィルタに通過させられたときに、フィルタに脂分が付着してフィルタが目詰まりを起こし、脂肪由来細胞の回収率が低下してしまうという問題がある。さらに、脂分によって脂肪由来細胞がフィルタや流路など装置内部に吸着されることによっても脂肪由来細胞の回収率が低下してしまうという問題がある。
【０００５】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、消化酵素液から脂分を十分に除去することで、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる細胞回収装置および細胞分離方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、脂肪組織からなる脂肪層と消化酵素液からなる水層とを静置させたまま収容して前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる消化容器と、前記消化酵素液を前記消化容器に供給する酵素液供給部と、前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記消化容器内から残渣回収容器に回収する残渣層除去部と、前記消化容器から搬送されてきた前記水層から前記脂肪由来細胞を回収する細胞回収部と、前記酵素液供給部により前記消化容器内に前記消化酵素液を供給させる酵素液供給処理と、前記脂肪層と前記水層とを所定時間静置させる静置処理と、該静置処理の後に前記水層を前記細胞回収部に搬送する水層搬送処理と、該水層搬送処理の後に前記残渣層除去部によって前記残渣層を前記消化容器内から除去させる残渣除去処理とを複数回繰り返させる制御部とを備える細胞分離装置を提供する。
【０００７】
本発明によれば、消化容器内において脂肪層から水層へ脂肪由来細胞が分離させられた後、水層中の脂肪由来細胞が細胞回収部によって回収される。このときに、制御部が、水層を消化容器から排出させた後に、残渣除去部によって残渣層を残渣回収容器内に除去させてから新しい消化酵素液を酵素液供給部によって消化容器内に供給させることにより、脂肪層が底部側から順番に水層と直接接触させられることとなり、脂肪層全体から脂肪由来細胞を分離して回収することができる。
【０００８】
この場合に、消化容器内において脂肪層と水層とが撹拌されないので、水層に脂肪組織由来の脂分が微粒子となって混入することが防止される。これにより、脂分が十分に除去された消化酵素液を得ることができ、水層から残渣を除去するフィルタが備えられていても、該フィルタに脂分が付着することによるフィルタの目詰まりや脂肪由来細胞のフィルタや流路への吸着が防止され、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる。
【０００９】
上記発明においては、前記消化容器内を保温するヒータを備えることとしてもよい。
このようにすることで、消化酵素液による脂肪組織の分解を促進することができる。
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタを備えることとしてもよい。
このようにすることで、水層を細胞捕捉フィルタに通過させるだけで脂肪由来細胞を水層から回収することができる。
【００１０】
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を電気泳動特性によって分離する細胞分離手段を備えることとしてもよい。この細胞分離手段は、水層に配置される一対の電極と、該電極間に電圧を印加する電界制御部とを備える。
このようにすることで、脂肪由来細胞を水層から回収する際に脂肪由来細胞に与えるダメージを低減することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を細胞表面特性によって分離する細胞分離手段を備えることとしてもよい。この細胞分離手段は、脂肪由来細胞の表面に特異的に発現している蛋白質などのマーカに特異的に結合し蛍光物質によって標識された抗体を検出するフローサイトメータ、または、水層が搬送される流路の途中位置や流路の内壁に設けられ脂肪由来細胞の表面と互いに吸着する吸着部を備える。
このようにすることで、脂肪由来細胞を水層から高精度に分離して回収することができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を光学特性によって分離する細胞分離手段を備えることとしてもよい。この細胞分離手段は、水層に対して検出光を照射する光源と、検出光の散乱光を検出する散乱光検出部とを備える。
このようにすることで、脂肪由来細胞を蛍光標識することなしに低侵襲に水層から回収することができる。
【００１３】
また、上記発明においては、前記水層と前記残渣層との界面の位置を検出する界面センサを備え、前記制御部は、前記界面センサによって前記界面の位置が前記消化容器の底面近傍において検出されたときに、前記水層搬送処理から前記残渣除去処理に移行することとしてもよい。
このようにすることで、消化容器内から水層のみを選択的に排出することができる。
【００１４】
また、上記発明においては、前記残渣回収容器に接続する前記消化容器の排出口に設けられ、前記脂肪残渣の通過を許容し前記脂肪組織の通過を禁止するフィルタを備えることとしてもよい。
このようにすることで、未消化の脂肪組織が残渣回収容器に排出されることを防ぎ、消化容器内に脂肪組織のみを残すことができ、未消化の脂肪組織を消化することができる。
【００１５】
また、上記発明においては、前記細胞回収部によって回収された前記脂肪由来細胞を洗浄する洗浄手段を備えることとしてもよい。
このようにすることで、最終的に回収される脂肪由来細胞の純度をさらに向上することができる。
【００１６】
また、本発明は、脂肪組織を収容する消化容器内に消化酵素液を供給する酵素液供給ステップと、前記脂肪組織からなる脂肪層と前記消化酵素液からなる水層とを静置することにより、前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる静置ステップと、該静置ステップの後に前記水層を回収する水層回収ステップと、前記静置ステップにおいて前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記水層回収ステップの後に前記消化容器内から除去する残渣除去ステップとを備え、前記酵素液供給ステップ、前記静置ステップ、前記水層回収ステップおよび前記残渣除去ステップを複数回繰り返す細胞分離方法を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、脂分による脂肪由来細胞の損失を低減し、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞分離装置の全体構成図である。
【図２】図１の細胞分離装置による細胞分離方法を説明する図であり、（ａ）酵素液供給処理、（ｂ）静置処理時、（ｃ）水層搬送処理および（ｄ）残渣除去処理における消化容器内を示す概略図である。
【図３】図１の細胞分離装置の変形例を示す図である。
【図４】図３の細胞分離装置による静置処理における消化容器内を示す概念図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下に、本発明の一実施形態に係る細胞分離装置１および細胞分離方法について図面を参照して説明する。
本実施形態に係る細胞分離装置１は、図１に示されるように、脂肪組織を消化して脂肪由来細胞の細胞懸濁液を生成する分解処理部１０と、該分解処理部１０において生成された細胞懸濁液から脂肪由来細胞を回収する細胞回収部２０と、分解処理部１０および細胞回収部２０に備えられる各容器１１，１３〜１５，２３〜２５と排液容器１７，２６との間で液体を搬送する搬送経路３０と、分解処理部１０、細胞回収部２０および搬送経路３０の動作を制御する制御部４０とを備えている。
【００２０】
分解処理部１０は、消化容器１１と、該消化容器１１内を保温するヒータ１２と、洗浄液容器１３と、酵素液容器（酵素液供給部）１４と、残渣回収容器（残渣除去部）１５とを備えている。
消化容器１１は、生体内から吸引などの方法によって採取された脂肪組織を収容している。消化容器１１は、残渣回収容器１５（後述）に接続する排出口と、搬送経路３０に接続される排出口とを底面に有している。残渣回収容器に接続する排出口には、残渣の通過を許容し脂肪組織の通過を禁止する残渣除去フィルタ（図示略）が設けられている。搬送経路３０に接続された排出口から排出された排液は、消化容器１１の下方に配置された排液容器１７に搬送される。
【００２１】
また、消化容器１１には、該消化容器１１内の水層Ａ（後述）と脂肪層Ｂ（後述）と残渣層Ｃ（後述）との界面の位置を検出する界面センサ１６が設けられている。界面センサ１６は、光学式、超音波式、レーザ式、磁気式などが用いられる。また、消化容器１１は、図示しない撹拌装置によって洗浄時に収容物が撹拌可能になっている。
【００２２】
ヒータ１２は、消化容器１１内を、消化酵素液に含まれる消化酵素が活性化される温度、例えば、約３７℃に保温する。
洗浄液容器１３は、脂肪組織を洗浄する洗浄液として、生理食塩水やリン酸緩衝液などを収容している。
酵素液容器１４は、脂肪組織を消化する消化酵素液を収容している。
【００２３】
消化容器１１が、脂肪組織と消化酵素液容器１４から供給された消化酵素液とを収容した状態で静置されることにより、消化酵素液からなる水層Ａと、消化酵素液の液面に浮いた脂肪組織からなる脂肪層Ｂとが形成される。この状態で消化容器１１内をヒータ１２で保温することにより、脂肪層Ｂが、水層Ａと接している底面側から順番に分解され、脂肪組織に含まれていた脂肪由来細胞が水層Ａ内に分離される。また、脂肪組織から分離された脂肪細胞やコラーゲン等の繊維組織からなる残渣によって、水層Ａと脂肪層Ｂとの間に残渣層Ｃが形成される。
【００２４】
細胞回収部２０は、脂肪組織片除去フィルタ２１と、細胞捕捉フィルタ２２と、洗浄液容器（洗浄手段）２３と、回収液容器２４と、細胞回収容器２５とを備え、これらは分解処理部１０の下方に配置されている。
脂肪組織片除去フィルタ２１は、消化容器１１と細胞捕捉フィルタ２２との間に設けられ、脂肪由来細胞を通過させて該脂肪由来細胞よりも大きい脂肪組織片の通過を禁止するフィルタであり、好ましくは１２０μｍ以上の孔径を有する。脂肪組織片除去フィルタ２１によって比較的大きな脂肪組織片は捕捉されて細胞捕捉フィルタ２２に搬送されることが防止される。
【００２５】
細胞捕捉フィルタ２２は、脂肪組織片除去フィルタ２１の下方に設けられている。細胞捕捉フィルタ２２は、脂肪由来細胞の通過を禁止し、脂肪由来細胞よりも小さい寸法の不純物を通過させる。例えば、細胞捕捉フィルタ２２の濾材としては、繊維径２０〜１００μｍの繊維からなる織布または不織布、もしくは、孔径２０〜１００μｍの細孔を有する多孔質材料または膜が好適に用いられる。
【００２６】
細胞捕捉フィルタ２２の濾材の材料としては、成形性、滅菌性、低細胞毒性の点から、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアクリルアミド、ポリウレタン等の合成高分子、アガロース、セルロース、酢酸セルロース、キチン、キトサン、アルギン酸塩等の天然高分子、ヒドロキシアパタイト、ガラス、アルミナ、チタニア等の無機材料、または、ステンレス、チタン、アルミニム等の金属が好適である。
【００２７】
洗浄液容器２３は、分解処理部１０に備えられる洗浄液容器１３と同様の洗浄液を収容している。
回収液容器２４は、回収液として、生理食塩水やリン酸緩衝液、培地などを収容している。
【００２８】
洗浄液容器２３および細胞回収容器２５は細胞捕捉フィルタ２２の上方に配置され、回収液容器２４は細胞捕捉フィルタ２２の下方に配置されている。これにより、洗浄液容器２３からの洗浄液は細胞捕捉フィルタ２２を上方から下方へ通過させられて排液容器２６へ搬送されるようになっている。一方、回収液容器２４からの回収液は細胞捕捉フィルタ２２を下方から上方へ通過させられて、細胞回収容器２５へ搬送されるようになっている。
【００２９】
搬送経路３０は、各容器１１，１３〜１５，１７，２３〜２６を接続するチューブ３１と、該チューブ３１の分岐地点または合流地点に設けられ液体の流路を切り替えるバルブＶ１〜Ｖ４と、各容器１１，１３〜１５，１７，２３〜２６の間で液体を搬送するポンプＰ１〜Ｐ３とを備えている。チューブ３１は、少なくとも、消化容器１１と細胞捕捉フィルタ２２とを接続する部分においては、疎水性の内面を有するものが使用される。
【００３０】
制御部４０は、処理の手順に従って分解処理部１０、細胞回収部２０および搬送経路３０の動作を制御するプログラムが記憶されている。
具体的には、制御部４０は、バルブＶ１，Ｖ２によって洗浄液容器１３から消化容器１１への流路に切り替え、ポンプＰ１によって洗浄液を消化容器１１内へ供給する。次に、制御部４０は、撹拌装置を作動させることにより、消化容器１１内で脂肪組織と洗浄液とを撹拌して脂肪組織を洗浄する。
【００３１】
次に、制御部４０は、消化容器１１を静置させることにより水層Ａと脂肪層Ｂとに層分離させてから、バルブＶ１によって消化容器１１から排液容器１７への流路に切り替え、消化容器１１内の水層Ａを排液容器１７へ排出する。このときに、制御部４０は、界面センサ１６によって水層Ａと脂肪層Ｂとの界面を検出させ、該界面の位置が消化容器１１の底面近傍まで低下したときに排出を停止させることにより、水層Ａのみを排出する。
【００３２】
次に、制御部４０は、バルブＶ１，Ｖ２によって酵素液容器１４から消化容器１１への流路に切り替え、ポンプＰ２の作動によって消化酵素液を消化容器１１へ供給させる（酵素液供給処理、酵素液供給ステップ、図２（ａ）参照。）。次に、制御部４０は、消化容器１１を静置させたままヒータ１２を作動させることにより、消化容器１１内を保温して脂肪層Ｂを消化させる（静置処理、静置ステップ、図２（ｂ）参照。）。
【００３３】
次に、制御部４０は、バルブＶ１，Ｖ３によって消化容器１１から排液容器２６への流路に切り替え、界面センサ１６で水層Ａと残渣層Ｃとの界面を検出しながらポンプ１，３の作動により消化容器１１内の水層Ａを排液容器２６へ排出する（水層搬送処理、水層回収ステップ、図２（ｃ）参照。）。このときに、水層Ａ内に含まれる脂肪組織片が脂肪組織片除去フィルタ２１において除去され、さらに、脂肪組織片除去フィルタ２１を通過した微小な脂分がチューブ３１の内面に吸着することにより除去される。これにより、細胞捕捉フィルタ２２には十分に高純度の脂肪由来細胞が捕捉される。制御部４０は、水層Ａと残渣層Ｃとの界面が消化容器１１の底面近傍まで低下したときに、排出を停止させる。
【００３４】
次に、制御部４０は、消化容器１１内に残存している残渣層Ｃを、ポンプＰ１の作動によって残渣回収容器１５に回収する（残渣除去処理、残渣除去ステップ、図２（ｄ）参照。）。このときも、制御部４０は、界面センサ１６に脂肪層Ｂと残渣層Ｃとの界面を検出させることにより、残渣層Ｃのみを残渣回収容器１５に排出する。
制御部４０は、以上で説明した酵素液供給処理から残渣除去処理までを、消化容器１１内の脂肪層Ｂが十分に減るまで、例えば、図示しない重量計によって測定される消化容器の重量が所定値を下回るまで繰り返す。
【００３５】
次に、制御部４０は、バルブＶ３，Ｖ４によって洗浄液容器２３から排液容器２６への流路に切り替え、ポンプＰ３を作動させることにより、細胞捕捉フィルタ２２に洗浄液を通過させる。これにより、細胞捕捉フィルタ２２に捕捉されている脂肪由来細胞が洗浄される。
【００３６】
次に、制御部４０は、バルブＶ３，Ｖ４によって回収液容器２４から細胞回収容器２５への流路に切り替え、ポンプＰ３を逆方向に作動させることにより、回収液を細胞捕捉フィルタ２２に通過させる。このときに、細胞捕捉フィルタ２２に補足されていた脂肪由来細胞は回収液とともに細胞回収容器２５に搬送され該細胞回収容器２５内に収容される。
【００３７】
以上の処理により、脂肪由来細胞を最終生成物として高い収率で細胞回収容器２５内に得ることができる。
【００３８】
このように、本実施形態によれば、脂肪組織と消化酵素液とが撹拌されることなく、脂肪組織が消化酵素液によって分解される。したがって、脂肪由来細胞を含む細胞懸濁液である水層Ａに脂肪組織由来の脂分が微粒子となって分散することが防止される。これにより、各フィルタ２１，２２に脂分が付着することによりこれらのフィル２１，２２が目詰まりしたり脂分によって脂肪由来細胞がフィルタ２１，２２に吸着されたりすることが防止され、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる。
【００３９】
また、このようにして脂肪組織と消化酵素液とを撹拌しない構成であっても、脂肪組織の分解によって生成される残渣層Ｃを繰り返し排出して脂肪層Ｂが水層Ａに直接接触するようにすることで、脂肪組織の分解を十分に効率良く行うことができる。また、各容器を上下方向に配置することにより、水平方向の設置面積を縮小することができる。
【００４０】
なお、本実施形態においては、制御部４０が消化酵素液の供給、水層Ａの排出および残渣層Ｃの排出を繰り返すことにより脂肪組織の分解を促進することとしたが、これに代えて、図３に示されるように、収容された脂肪組織が形成する水平方向の面積よりも大きな水平方向の面積を有する消化容器１１を使用することとしてもよい。
【００４１】
例えば、脂肪組織を生体内から吸引する際、吸引を容易にするために、脂肪組織を約０．１ｃｍの粒径の塊にほぐした状態で吸引する。このような場合には、消化容器１１の底面積をＳ、脂肪組織の体積をＶとしたときに、Ｓ≧１０×Ｖを満たす消化容器１１を使用する。
【００４２】
このように構成された細胞分離装置１の作用は以下の通りである。
１回目の水層搬送処理までは上述した実施形態と同様である。ここで、静置処理においては、図４に示されるように、脂肪層Ｂが水層Ａの液面に最小の厚みで広がった状態となる。これにより、脂肪組織全体が消化酵素液によって十分に消化されるので、水層搬送処理において搬送される水層Ａには十分な量の脂肪由来細胞が含まれることとなり、水層搬送処理が一度で済む。この後は、上述した実施形態と同様に、細胞捕捉フィルタ２２に補足された脂肪由来細胞は洗浄された後に細胞回収容器２５に回収される。
【００４３】
このような構成によっても、撹拌しなくても静置と保温のみで十分に効率良く脂肪組織を分解することができる。また、脂分の水層Ａへの混入の防止し、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる。また、このように消化容器１１の水平方向の面積を確保する必要がある構成であっても、上下方向に各容器１１，１３，１４，１７，２３〜２６を配置することにより、細胞分離装置１全体の水平方向の設置面積の増大を抑えることができる。
【符号の説明】
【００４４】
１ 細胞分離装置
１０ 分解処理部
１１ 消化容器
１２ ヒータ
１３ 洗浄液容器
１４ 酵素液容器（酵素液供給部）
１５ 残渣回収容器（残渣除去部）
１６ 界面センサ
１７ 排液容器
２０ 細胞回収部
２１ 脂肪組織片除去フィルタ
２２ 細胞捕捉フィルタ
２３ 洗浄液容器（洗浄手段）
２４ 回収液容器
２５ 細胞回収容器
２６ 排液容器
３０ 搬送経路
３１ チューブ
４０ 制御部
Ｐ１〜Ｐ３ ポンプ
Ｖ１〜Ｖ４ バルブ
Ａ 水層
Ｂ 脂肪層
Ｃ 残渣層
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離装置および細胞分離方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、生体内から採取した脂肪組織を消化酵素液によって分解することにより、脂肪組織に含まれていた幹細胞などの治療に有効な細胞を脂肪組織から分離させて抽出する装置が知られている（例えば、特許文献１および２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００７−２８９０７６号公報
【特許文献２】国際公開第２００５／０１２４８０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１および２では、脂肪組織を消化酵素液で処理することにより脂肪組織を分解している。したがって、消化酵素液には脂肪由来細胞の他に脂肪組織に含まれていた脂分が微粒子となって混入し、消化酵素液と脂分とのエマルションが生成される。このエマルションが細胞回収用や脂肪組織除去用のフィルタに通過させられたときに、フィルタに脂分が付着してフィルタが目詰まりを起こし、脂肪由来細胞の回収率が低下してしまうという問題がある。さらに、脂分によって脂肪由来細胞がフィルタや流路など装置内部に吸着されることによっても脂肪由来細胞の回収率が低下してしまうという問題がある。
【０００５】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、消化酵素液から脂分を十分に除去することで、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる細胞回収装置および細胞分離方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、脂肪組織からなる脂肪層と消化酵素液からなる水層とを静置させたまま収容して前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる消化容器と、前記消化酵素液を前記消化容器に供給する酵素液供給部と、前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記消化容器内から残渣回収容器に回収する残渣層除去部と、前記消化容器から搬送されてきた前記水層から前記脂肪由来細胞を回収する細胞回収部と、前記酵素液供給部により前記消化容器内に前記消化酵素液を供給させる酵素液供給処理と、前記脂肪層と前記水層とを所定時間静置させる静置処理と、該静置処理の後に前記水層を前記細胞回収部に搬送する水層搬送処理と、該水層搬送処理の後に前記残渣層除去部によって前記残渣層を前記消化容器内から除去させる残渣除去処理とを複数回繰り返させる制御部とを備える細胞分離装置を提供する。
【０００７】
本発明によれば、消化容器内において脂肪層から水層へ脂肪由来細胞が分離させられた後、水層中の脂肪由来細胞が細胞回収部によって回収される。このときに、制御部が、水層を消化容器から排出させた後に、残渣除去部によって残渣層を残渣回収容器内に除去させてから新しい消化酵素液を酵素液供給部によって消化容器内に供給させることにより、脂肪層が底部側から順番に水層と直接接触させられることとなり、脂肪層全体から脂肪由来細胞を分離して回収することができる。
【０００８】
この場合に、消化容器内において脂肪層と水層とが撹拌されないので、水層に脂肪組織由来の脂分が微粒子となって混入することが防止される。これにより、脂分が十分に除去された消化酵素液を得ることができ、水層から残渣を除去するフィルタが備えられていても、該フィルタに脂分が付着することによるフィルタの目詰まりや脂肪由来細胞のフィルタや流路への吸着が防止され、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる。
【０００９】
上記発明においては、前記消化容器内を保温するヒータを備えることとしてもよい。
このようにすることで、消化酵素液による脂肪組織の分解を促進することができる。
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタを備えることとしてもよい。
このようにすることで、水層を細胞捕捉フィルタに通過させるだけで脂肪由来細胞を水層から回収することができる。
【００１０】
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を電気泳動特性によって分離する細胞分離手段を備えることとしてもよい。この細胞分離手段は、水層に配置される一対の電極と、該電極間に電圧を印加する電界制御部とを備える。
このようにすることで、脂肪由来細胞を水層から回収する際に脂肪由来細胞に与えるダメージを低減することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を細胞表面特性によって分離する細胞分離手段を備えることとしてもよい。この細胞分離手段は、脂肪由来細胞の表面に特異的に発現している蛋白質などのマーカに特異的に結合し蛍光物質によって標識された抗体を検出するフローサイトメータ、または、水層が搬送される流路の途中位置や流路の内壁に設けられ脂肪由来細胞の表面と互いに吸着する吸着部を備える。
このようにすることで、脂肪由来細胞を水層から高精度に分離して回収することができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を光学特性によって分離する細胞分離手段を備えることとしてもよい。この細胞分離手段は、水層に対して検出光を照射する光源と、検出光の散乱光を検出する散乱光検出部とを備える。
このようにすることで、脂肪由来細胞を蛍光標識することなしに低侵襲に水層から回収することができる。
【００１３】
また、上記発明においては、前記水層と前記残渣層との界面の位置を検出する界面センサを備え、前記制御部は、前記界面センサによって前記界面の位置が前記消化容器の底面近傍において検出されたときに、前記水層搬送処理から前記残渣除去処理に移行することとしてもよい。
このようにすることで、消化容器内から水層のみを選択的に排出することができる。
【００１４】
また、上記発明においては、前記残渣回収容器に接続する前記消化容器の排出口に設けられ、前記脂肪残渣の通過を許容し前記脂肪組織の通過を禁止するフィルタを備えることとしてもよい。
このようにすることで、未消化の脂肪組織が残渣回収容器に排出されることを防ぎ、消化容器内に脂肪組織のみを残すことができ、未消化の脂肪組織を消化することができる。
【００１５】
また、上記発明においては、前記細胞回収部によって回収された前記脂肪由来細胞を洗浄する洗浄手段を備えることとしてもよい。
このようにすることで、最終的に回収される脂肪由来細胞の純度をさらに向上することができる。
【００１６】
また、本発明は、脂肪組織を収容する消化容器内に消化酵素液を供給する酵素液供給ステップと、前記脂肪組織からなる脂肪層と前記消化酵素液からなる水層とを静置することにより、前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる静置ステップと、該静置ステップの後に前記水層を回収する水層回収ステップと、前記静置ステップにおいて前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記水層回収ステップの後に前記消化容器内から除去する残渣除去ステップとを備え、前記酵素液供給ステップ、前記静置ステップ、前記水層回収ステップおよび前記残渣除去ステップを複数回繰り返す細胞分離方法を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、脂分による脂肪由来細胞の損失を低減し、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞分離装置の全体構成図である。
【図２】図１の細胞分離装置による細胞分離方法を説明する図であり、（ａ）酵素液供給処理、（ｂ）静置処理時、（ｃ）水層搬送処理および（ｄ）残渣除去処理における消化容器内を示す概略図である。
【図３】図１の細胞分離装置の変形例を示す図である。
【図４】図３の細胞分離装置による静置処理における消化容器内を示す概念図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下に、本発明の一実施形態に係る細胞分離装置１および細胞分離方法について図面を参照して説明する。
本実施形態に係る細胞分離装置１は、図１に示されるように、脂肪組織を消化して脂肪由来細胞の細胞懸濁液を生成する分解処理部１０と、該分解処理部１０において生成された細胞懸濁液から脂肪由来細胞を回収する細胞回収部２０と、分解処理部１０および細胞回収部２０に備えられる各容器１１，１３〜１５，２３〜２５と排液容器１７，２６との間で液体を搬送する搬送経路３０と、分解処理部１０、細胞回収部２０および搬送経路３０の動作を制御する制御部４０とを備えている。
【００２０】
分解処理部１０は、消化容器１１と、該消化容器１１内を保温するヒータ１２と、洗浄液容器１３と、酵素液容器（酵素液供給部）１４と、残渣回収容器（残渣除去部）１５とを備えている。
消化容器１１は、生体内から吸引などの方法によって採取された脂肪組織を収容している。消化容器１１は、残渣回収容器１５（後述）に接続する排出口と、搬送経路３０に接続される排出口とを底面に有している。残渣回収容器に接続する排出口には、残渣の通過を許容し脂肪組織の通過を禁止する残渣除去フィルタ（図示略）が設けられている。搬送経路３０に接続された排出口から排出された排液は、消化容器１１の下方に配置された排液容器１７に搬送される。
【００２１】
また、消化容器１１には、該消化容器１１内の水層Ａ（後述）と脂肪層Ｂ（後述）と残渣層Ｃ（後述）との界面の位置を検出する界面センサ１６が設けられている。界面センサ１６は、光学式、超音波式、レーザ式、磁気式などが用いられる。また、消化容器１１は、図示しない撹拌装置によって洗浄時に収容物が撹拌可能になっている。
【００２２】
ヒータ１２は、消化容器１１内を、消化酵素液に含まれる消化酵素が活性化される温度、例えば、約３７℃に保温する。
洗浄液容器１３は、脂肪組織を洗浄する洗浄液として、生理食塩水やリン酸緩衝液などを収容している。
酵素液容器１４は、脂肪組織を消化する消化酵素液を収容している。
【００２３】
消化容器１１が、脂肪組織と消化酵素液容器１４から供給された消化酵素液とを収容した状態で静置されることにより、消化酵素液からなる水層Ａと、消化酵素液の液面に浮いた脂肪組織からなる脂肪層Ｂとが形成される。この状態で消化容器１１内をヒータ１２で保温することにより、脂肪層Ｂが、水層Ａと接している底面側から順番に分解され、脂肪組織に含まれていた脂肪由来細胞が水層Ａ内に分離される。また、脂肪組織から分離された脂肪細胞やコラーゲン等の繊維組織からなる残渣によって、水層Ａと脂肪層Ｂとの間に残渣層Ｃが形成される。
【００２４】
細胞回収部２０は、脂肪組織片除去フィルタ２１と、細胞捕捉フィルタ２２と、洗浄液容器（洗浄手段）２３と、回収液容器２４と、細胞回収容器２５とを備え、これらは分解処理部１０の下方に配置されている。
脂肪組織片除去フィルタ２１は、消化容器１１と細胞捕捉フィルタ２２との間に設けられ、脂肪由来細胞を通過させて該脂肪由来細胞よりも大きい脂肪組織片の通過を禁止するフィルタであり、好ましくは１２０μｍ以上の孔径を有する。脂肪組織片除去フィルタ２１によって比較的大きな脂肪組織片は捕捉されて細胞捕捉フィルタ２２に搬送されることが防止される。
【００２５】
細胞捕捉フィルタ２２は、脂肪組織片除去フィルタ２１の下方に設けられている。細胞捕捉フィルタ２２は、脂肪由来細胞の通過を禁止し、脂肪由来細胞よりも小さい寸法の不純物を通過させる。例えば、細胞捕捉フィルタ２２の濾材としては、繊維径２０〜１００μｍの繊維からなる織布または不織布、もしくは、孔径２０〜１００μｍの細孔を有する多孔質材料または膜が好適に用いられる。
【００２６】
細胞捕捉フィルタ２２の濾材の材料としては、成形性、滅菌性、低細胞毒性の点から、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアクリルアミド、ポリウレタン等の合成高分子、アガロース、セルロース、酢酸セルロース、キチン、キトサン、アルギン酸塩等の天然高分子、ヒドロキシアパタイト、ガラス、アルミナ、チタニア等の無機材料、または、ステンレス、チタン、アルミニム等の金属が好適である。
【００２７】
洗浄液容器２３は、分解処理部１０に備えられる洗浄液容器１３と同様の洗浄液を収容している。
回収液容器２４は、回収液として、生理食塩水やリン酸緩衝液、培地などを収容している。
【００２８】
洗浄液容器２３および細胞回収容器２５は細胞捕捉フィルタ２２の上方に配置され、回収液容器２４は細胞捕捉フィルタ２２の下方に配置されている。これにより、洗浄液容器２３からの洗浄液は細胞捕捉フィルタ２２を上方から下方へ通過させられて排液容器２６へ搬送されるようになっている。一方、回収液容器２４からの回収液は細胞捕捉フィルタ２２を下方から上方へ通過させられて、細胞回収容器２５へ搬送されるようになっている。
【００２９】
搬送経路３０は、各容器１１，１３〜１５，１７，２３〜２６を接続するチューブ３１と、該チューブ３１の分岐地点または合流地点に設けられ液体の流路を切り替えるバルブＶ１〜Ｖ４と、各容器１１，１３〜１５，１７，２３〜２６の間で液体を搬送するポンプＰ１〜Ｐ３とを備えている。チューブ３１は、少なくとも、消化容器１１と細胞捕捉フィルタ２２とを接続する部分においては、疎水性の内面を有するものが使用される。
【００３０】
制御部４０は、処理の手順に従って分解処理部１０、細胞回収部２０および搬送経路３０の動作を制御するプログラムが記憶されている。
具体的には、制御部４０は、バルブＶ１，Ｖ２によって洗浄液容器１３から消化容器１１への流路に切り替え、ポンプＰ１によって洗浄液を消化容器１１内へ供給する。次に、制御部４０は、撹拌装置を作動させることにより、消化容器１１内で脂肪組織と洗浄液とを撹拌して脂肪組織を洗浄する。
【００３１】
次に、制御部４０は、消化容器１１を静置させることにより水層Ａと脂肪層Ｂとに層分離させてから、バルブＶ１によって消化容器１１から排液容器１７への流路に切り替え、消化容器１１内の水層Ａを排液容器１７へ排出する。このときに、制御部４０は、界面センサ１６によって水層Ａと脂肪層Ｂとの界面を検出させ、該界面の位置が消化容器１１の底面近傍まで低下したときに排出を停止させることにより、水層Ａのみを排出する。
【００３２】
次に、制御部４０は、バルブＶ１，Ｖ２によって酵素液容器１４から消化容器１１への流路に切り替え、ポンプＰ２の作動によって消化酵素液を消化容器１１へ供給させる（酵素液供給処理、酵素液供給ステップ、図２（ａ）参照。）。次に、制御部４０は、消化容器１１を静置させたままヒータ１２を作動させることにより、消化容器１１内を保温して脂肪層Ｂを消化させる（静置処理、静置ステップ、図２（ｂ）参照。）。
【００３３】
次に、制御部４０は、バルブＶ１，Ｖ３によって消化容器１１から排液容器２６への流路に切り替え、界面センサ１６で水層Ａと残渣層Ｃとの界面を検出しながらポンプ１，３の作動により消化容器１１内の水層Ａを排液容器２６へ排出する（水層搬送処理、水層回収ステップ、図２（ｃ）参照。）。このときに、水層Ａ内に含まれる脂肪組織片が脂肪組織片除去フィルタ２１において除去され、さらに、脂肪組織片除去フィルタ２１を通過した微小な脂分がチューブ３１の内面に吸着することにより除去される。これにより、細胞捕捉フィルタ２２には十分に高純度の脂肪由来細胞が捕捉される。制御部４０は、水層Ａと残渣層Ｃとの界面が消化容器１１の底面近傍まで低下したときに、排出を停止させる。
【００３４】
次に、制御部４０は、消化容器１１内に残存している残渣層Ｃを、ポンプＰ１の作動によって残渣回収容器１５に回収する（残渣除去処理、残渣除去ステップ、図２（ｄ）参照。）。このときも、制御部４０は、界面センサ１６に脂肪層Ｂと残渣層Ｃとの界面を検出させることにより、残渣層Ｃのみを残渣回収容器１５に排出する。
制御部４０は、以上で説明した酵素液供給処理から残渣除去処理までを、消化容器１１内の脂肪層Ｂが十分に減るまで、例えば、図示しない重量計によって測定される消化容器の重量が所定値を下回るまで繰り返す。
【００３５】
次に、制御部４０は、バルブＶ３，Ｖ４によって洗浄液容器２３から排液容器２６への流路に切り替え、ポンプＰ３を作動させることにより、細胞捕捉フィルタ２２に洗浄液を通過させる。これにより、細胞捕捉フィルタ２２に捕捉されている脂肪由来細胞が洗浄される。
【００３６】
次に、制御部４０は、バルブＶ３，Ｖ４によって回収液容器２４から細胞回収容器２５への流路に切り替え、ポンプＰ３を逆方向に作動させることにより、回収液を細胞捕捉フィルタ２２に通過させる。このときに、細胞捕捉フィルタ２２に補足されていた脂肪由来細胞は回収液とともに細胞回収容器２５に搬送され該細胞回収容器２５内に収容される。
【００３７】
以上の処理により、脂肪由来細胞を最終生成物として高い収率で細胞回収容器２５内に得ることができる。
【００３８】
このように、本実施形態によれば、脂肪組織と消化酵素液とが撹拌されることなく、脂肪組織が消化酵素液によって分解される。したがって、脂肪由来細胞を含む細胞懸濁液である水層Ａに脂肪組織由来の脂分が微粒子となって分散することが防止される。これにより、各フィルタ２１，２２に脂分が付着することによりこれらのフィル２１，２２が目詰まりしたり脂分によって脂肪由来細胞がフィルタ２１，２２に吸着されたりすることが防止され、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる。
【００３９】
また、このようにして脂肪組織と消化酵素液とを撹拌しない構成であっても、脂肪組織の分解によって生成される残渣層Ｃを繰り返し排出して脂肪層Ｂが水層Ａに直接接触するようにすることで、脂肪組織の分解を十分に効率良く行うことができる。また、各容器を上下方向に配置することにより、水平方向の設置面積を縮小することができる。
【００４０】
なお、本実施形態においては、制御部４０が消化酵素液の供給、水層Ａの排出および残渣層Ｃの排出を繰り返すことにより脂肪組織の分解を促進することとしたが、これに代えて、図３に示されるように、収容された脂肪組織が形成する水平方向の面積よりも大きな水平方向の面積を有する消化容器１１を使用することとしてもよい。
【００４１】
例えば、脂肪組織を生体内から吸引する際、吸引を容易にするために、脂肪組織を約０．１ｃｍの粒径の塊にほぐした状態で吸引する。このような場合には、消化容器１１の底面積をＳ、脂肪組織の体積をＶとしたときに、Ｓ≧１０×Ｖを満たす消化容器１１を使用する。
【００４２】
このように構成された細胞分離装置１の作用は以下の通りである。
１回目の水層搬送処理までは上述した実施形態と同様である。ここで、静置処理においては、図４に示されるように、脂肪層Ｂが水層Ａの液面に最小の厚みで広がった状態となる。これにより、脂肪組織全体が消化酵素液によって十分に消化されるので、水層搬送処理において搬送される水層Ａには十分な量の脂肪由来細胞が含まれることとなり、水層搬送処理が一度で済む。この後は、上述した実施形態と同様に、細胞捕捉フィルタ２２に補足された脂肪由来細胞は洗浄された後に細胞回収容器２５に回収される。
【００４３】
このような構成によっても、撹拌しなくても静置と保温のみで十分に効率良く脂肪組織を分解することができる。また、脂分の水層Ａへの混入の防止し、脂肪由来細胞を高い収率で回収することができる。また、このように消化容器１１の水平方向の面積を確保する必要がある構成であっても、上下方向に各容器１１，１３，１４，１７，２３〜２６を配置することにより、細胞分離装置１全体の水平方向の設置面積の増大を抑えることができる。
【符号の説明】
【００４４】
１ 細胞分離装置
１０ 分解処理部
１１ 消化容器
１２ ヒータ
１３ 洗浄液容器
１４ 酵素液容器（酵素液供給部）
１５ 残渣回収容器（残渣除去部）
１６ 界面センサ
１７ 排液容器
２０ 細胞回収部
２１ 脂肪組織片除去フィルタ
２２ 細胞捕捉フィルタ
２３ 洗浄液容器（洗浄手段）
２４ 回収液容器
２５ 細胞回収容器
２６ 排液容器
３０ 搬送経路
３１ チューブ
４０ 制御部
Ｐ１〜Ｐ３ ポンプ
Ｖ１〜Ｖ４ バルブ
Ａ 水層
Ｂ 脂肪層
Ｃ 残渣層
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪組織からなる脂肪層と消化酵素液からなる水層とを静置させたまま収容して前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる消化容器と、
前記消化酵素液を前記消化容器に供給する酵素液供給部と、
前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記消化容器内から残渣回収容器に回収する残渣層除去部と、
前記消化容器から搬送されてきた前記水層から前記脂肪由来細胞を回収する細胞回収部と、
前記酵素液供給部により前記消化容器内に前記消化酵素液を供給させる酵素液供給処理と、前記脂肪層と前記水層とを所定時間静置させる静置処理と、該静置処理の後に前記水層を前記細胞回収部に搬送する水層搬送処理と、該水層搬送処理の後に前記残渣層除去部によって前記残渣層を前記消化容器内から除去させる残渣除去処理とを複数回繰り返させる制御部とを備える細胞分離装置。
【請求項２】
前記消化容器内を保温するヒータを備える請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項３】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタを備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項４】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を電気泳動特性によって分離する細胞分離手段を備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項５】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を細胞表面特性によって分離する細胞分離手段を備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項６】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を光学特性によって分離する細胞分離手段を備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
前記水層と前記残渣層との界面の位置を検出する界面センサを備え、
前記制御部は、前記界面センサによって前記界面の位置が前記消化容器の底面近傍において検出されたときに、前記水層搬送処理から前記残渣除去処理に移行する請求項１から請求項６のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項８】
前記残渣と前記脂肪層との界面の位置を検出する界面センサを備え、
前記制御部は、前記界面センサによって前記界面の位置が前記消化容器の底面近傍において検出されたときに、前記残渣除去処理から再度前記酵素液供給処理に移行する請求項１から請求項７のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項９】
前記残渣回収容器に接続する前記消化容器の排出口に設けられ、前記脂肪残渣の通過を許容し前記脂肪組織の通過を禁止するフィルタを備える請求項１から請求項８のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項１０】
前記細胞回収部によって回収された前記脂肪由来細胞を洗浄する洗浄手段を備える請求項１から請求項９のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項１１】
脂肪組織を収容する消化容器内に消化酵素液を供給する酵素液供給ステップと、
前記脂肪組織からなる脂肪層と前記消化酵素液からなる水層とを静置することにより、前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる静置ステップと、
該静置ステップの後に前記水層を回収する水層回収ステップと、
前記静置ステップにおいて前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記水層回収ステップの後に前記消化容器内から除去する残渣除去ステップとを備え、
前記酵素液供給ステップ、前記静置ステップ、前記水層回収ステップおよび前記残渣除去ステップを複数回繰り返す細胞分離方法。
【請求項１】
脂肪組織からなる脂肪層と消化酵素液からなる水層とを静置させたまま収容して前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる消化容器と、
前記消化酵素液を前記消化容器に供給する酵素液供給部と、
前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記消化容器内から残渣回収容器に回収する残渣層除去部と、
前記消化容器から搬送されてきた前記水層から前記脂肪由来細胞を回収する細胞回収部と、
前記酵素液供給部により前記消化容器内に前記消化酵素液を供給させる酵素液供給処理と、前記脂肪層と前記水層とを所定時間静置させる静置処理と、該静置処理の後に前記水層を前記細胞回収部に搬送する水層搬送処理と、該水層搬送処理の後に前記残渣層除去部によって前記残渣層を前記消化容器内から除去させる残渣除去処理とを複数回繰り返させる制御部とを備える細胞分離装置。
【請求項２】
前記消化容器内を保温するヒータを備える請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項３】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタを備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項４】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を電気泳動特性によって分離する細胞分離手段を備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項５】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を細胞表面特性によって分離する細胞分離手段を備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項６】
前記細胞回収部が、前記水層に含まれる前記脂肪由来細胞を光学特性によって分離する細胞分離手段を備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
前記水層と前記残渣層との界面の位置を検出する界面センサを備え、
前記制御部は、前記界面センサによって前記界面の位置が前記消化容器の底面近傍において検出されたときに、前記水層搬送処理から前記残渣除去処理に移行する請求項１から請求項６のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項８】
前記残渣と前記脂肪層との界面の位置を検出する界面センサを備え、
前記制御部は、前記界面センサによって前記界面の位置が前記消化容器の底面近傍において検出されたときに、前記残渣除去処理から再度前記酵素液供給処理に移行する請求項１から請求項７のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項９】
前記残渣回収容器に接続する前記消化容器の排出口に設けられ、前記脂肪残渣の通過を許容し前記脂肪組織の通過を禁止するフィルタを備える請求項１から請求項８のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項１０】
前記細胞回収部によって回収された前記脂肪由来細胞を洗浄する洗浄手段を備える請求項１から請求項９のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項１１】
脂肪組織を収容する消化容器内に消化酵素液を供給する酵素液供給ステップと、
前記脂肪組織からなる脂肪層と前記消化酵素液からなる水層とを静置することにより、前記脂肪層から前記水層に脂肪由来細胞を分離させる静置ステップと、
該静置ステップの後に前記水層を回収する水層回収ステップと、
前記静置ステップにおいて前記消化酵素液によって分解された前記脂肪組織の残渣からなり前記脂肪層と前記水層との間に形成された残渣層を前記水層回収ステップの後に前記消化容器内から除去する残渣除去ステップとを備え、
前記酵素液供給ステップ、前記静置ステップ、前記水層回収ステップおよび前記残渣除去ステップを複数回繰り返す細胞分離方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１２−２３９４５８（Ｐ２０１２−２３９４５８Ａ）
【公開日】平成２４年１２月１０日（２０１２．１２．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１１５８２５（Ｐ２０１１−１１５８２５）
【出願日】平成２３年５月２４日（２０１１．５．２４）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月１０日（２０１２．１２．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年５月２４日（２０１１．５．２４）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
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