細胞透過のための過剰に荷電されたタンパク質
過剰に荷電されたタンパク質または過剰に荷電されたタンパク質と作用物質（例えば、核酸、ペプチド、タンパク質、小分子）の複合体を細胞に送達するための組成物、調製物、システムおよび関連方法を提供する。そのようなシステムおよび方法は、過剰に荷電されたタンパク質の使用を含む。例えば、過剰に正に荷電されたタンパク質を（典型的には正味負電荷を有する）核酸と静電相互作用によって会合させることができる。いくつかの実施形態において、そのようなシステムおよび方法は、そのタンパク質を「過剰に荷電させる」（例えば、過剰に正に荷電されたタンパク質を生じさせる）ためにタンパク質の一次配列を改変することを含む。いくつかの実施形態において、過剰に荷電されたタンパク質と送達すべき１つ以上の作用物質とを含む複合体は、治療薬として有用である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
過剰に荷電されたタンパク質の調製物であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味負電荷または正電荷を有し、かつ細胞への透過のために十分な量で存在し、かつ細胞への透過のために調合されるものである、調製物。
【請求項２】
医薬的に許容され得る調製物である、請求項１に記載の調製物。
【請求項３】
過剰に荷電されたタンパク質、もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する方法であって、
該過剰に荷電されたタンパク質、または過剰に荷電されたタンパク質および該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を、該細胞と、該過剰に荷電されたタンパク質、または該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質の該細胞への透過を可能にするために十分な条件下で接触させ、それによって過剰に荷電されたタンパク質、もしくは該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する工程、
を含む、方法。
【請求項４】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質が前記細胞を透過したことを、標識の検出、該細胞における生物学的変化の検出、または該過剰に荷電されたタンパク質もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を投与した被験体における応答、例えば障害の処置、の検出のうちの１つ以上によってさらに確認する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の核の作用物質（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｇｅｎｔ）と、
を含む、複合体。
【請求項６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、全体の正味正電荷を有する、請求項５に記載の複合体。
【請求項７】
前記全体の正味正電荷が、約＋５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記全体の正味正電荷が、約＋１０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項９】
前記全体の正味正電荷が、約＋１５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１０】
前記全体の正味正電荷が、約＋２０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１１】
前記全体の正味正電荷が、約＋２５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１２】
前記全体の正味正電荷が、約＋３０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１３】
前記全体の正味正電荷が、約＋３５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１４】
前記全体の正味正電荷が、約＋４０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１５】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質よりもより正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１６】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１７】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋１０より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１８】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１９】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項２０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、蛍光タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に正に荷電されたＧＦＰである、請求項５に記載の複合体。
【請求項２３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１０】
の過剰に正に荷電されたＧＦＰ（＋３６ ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約２０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約３０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約４０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約５０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２９】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約１００アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約４０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約５０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約６０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１１】
の、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３９】
前記核酸が、ＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４０】
前記核酸が、ＤＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４１】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４２】
前記ＲＮＡｉ剤が、短い干渉性ＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記核酸が、ＲＮＡｉを誘導する実体を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４４】
前記核酸が、アンチセンスＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４５】
前記核酸が、リボザイムまたはデオキシリボザイムを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４６】
前記核酸が、三重らせん形成を誘導するＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４７】
前記核酸が、ＲＮＡアプタマーを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４８】
前記核酸が、ベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４９】
前記核酸が、ｍＲＮＡの発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５０】
前記核酸が、タンパク質の発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５１】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：１である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５２】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：２である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５３】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：３である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５４】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：４である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５５】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：５である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５６】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上のペプチドまたはタンパク質と、
を含む、複合体。
【請求項５７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の小分子と、
を含む、複合体。
【請求項５８】
サイクロン（ＩＤ番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（ＩＤ番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（ＩＤ番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（ＩＤ番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（ＩＤ番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（ＩＤ番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（ＩＤ番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（ＩＤ番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（ＩＤ番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（ＩＤ番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（ＩＤ番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（ＩＤ番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（ＩＤ番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（ＩＤ番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（ＩＤ番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（ＩＤ番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（ＩＤ番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（ＩＤ番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（ＩＤ番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（ＩＤ番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（ＩＤ番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（ＩＤ番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（ＩＤ番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のポリヌクレオチドとを含む複合体。
【請求項５９】
サイクロン（ＩＤ番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（ＩＤ番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（ＩＤ番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（ＩＤ番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（ＩＤ番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（ＩＤ番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（ＩＤ番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（ＩＤ番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（ＩＤ番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（ＩＤ番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（ＩＤ番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（ＩＤ番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（ＩＤ番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（ＩＤ番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（ＩＤ番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（ＩＤ番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（ＩＤ番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（ＩＤ番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（ＩＤ番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（ＩＤ番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（ＩＤ番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（ＩＤ番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（ＩＤ番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のペプチドまたはタンパク質とを含む複合体。
【請求項６０】
サイクロン（ＩＤ番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（ＩＤ番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（ＩＤ番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（ＩＤ番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（ＩＤ番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（ＩＤ番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（ＩＤ番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（ＩＤ番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（ＩＤ番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（ＩＤ番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（ＩＤ番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（ＩＤ番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（ＩＤ番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（ＩＤ番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（ＩＤ番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（ＩＤ番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（ＩＤ番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（ＩＤ番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（ＩＤ番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（ＩＤ番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（ＩＤ番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（ＩＤ番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（ＩＤ番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上の小分子とを含む複合体。
【請求項６１】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、該対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６２】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６３】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６４】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６５】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６６】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも２つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６７】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも３つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６８】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも５つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６９】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１０のアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７０】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが、少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７１】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基のアミノ最末端とカルボキシ最末端の間の距離が、約１０アミノ酸である、請求項６１または７０に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７２】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも６０％が、該タンパク質の表面に位置する、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７３】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも７０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７４】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも８０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７５】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７６】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９５％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基が、対応する未修飾タンパク質の対応するアミノ酸残基と異なり；最高ＡｖＮＡＰＳＡスコアを有する該対応する未修飾タンパク質の少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基がリシンに変異され；および該少なくとも５つのアミノ酸残基が正に荷電される、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７８】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体と、
医薬的に許容され得る賦形剤と、
を含む、医薬組成物。
【請求項７９】
疾患、障害もしくは状態に罹患しやすいか、疾患、障害もしくは状態に罹患しているか、または疾患、障害もしくは状態の１つ以上の症状を示す被験体を提供する工程；および
請求項１〜７７のいずれか一項に記載の過剰に荷電されたタンパク質もしくは複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を、該被験体に、少なくとも１つの症状が改善されるように投与する工程、
を含む、方法。
【請求項８０】
前記投与する工程が、前記過剰に荷電されたタンパク質または複合体が前記被験体の細胞を透過するために十分な条件下で行われる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの異常に上昇したレベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを低下させる核酸を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの発現に関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記複合体が、発現した前記ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを低下させる核酸を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉを誘導する実体、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患、障害または状態が、異常に低いｍＲＮＡまたはタンパク質レベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを増大させる核酸を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記核酸が、発現ベクターを構成する、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記投与する工程が、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、皮下、心室内、局所、吸入および粘膜送達からなる群より選択される投与経路を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
請求項７９〜８９のいずれか一項に記載の方法を行うためのキット。
【請求項９１】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項９２】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電されたタンパク質を場合によっては選択する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項９３】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電させるべきタンパク質を選択する工程；
変更すべき１つまたは複数の残基のセットを得て、過剰に荷電されたタンパク質を生成する工程；
該変更された残基のセットを有する過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項９４】
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は：
過剰に荷電されたタンパク質と、
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と
を含み、ここで、
該過剰に荷電されたタンパク質は、該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質と会合し、
該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質と会合している該過剰に荷電されたタンパク質は、細胞を透過することができ、かつ該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質を該細胞に送達することができる、
過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドに共有結合している、請求項９４に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドにペプチド結合によって結合しており、従って融合タンパク質を形成している、請求項９５に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９７】
前記過剰に荷電されたタンパク質および前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドが、該過剰に荷電されたタンパク質と該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質とを接続するリンカーに結合している、請求項９４〜９６のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９８】
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合またはジスルフィド結合を含む、請求項９７に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９９】
前記過剰に荷電されているタンパク質または前記リンカーが、細胞酵素によって切断され得る、請求項９４〜９８のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１００】
前記細胞酵素が、細胞プロテアーゼまたは細胞エステラーゼである、請求項９９に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０１】
前記細胞プロテアーゼが、エンドソームプロテアーゼである、または前記細胞エステラーゼが、エンドソームエステラーゼである、請求項１００に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０２】
前記細胞酵素が、ターゲット細胞または細胞タイプにおいて優先的に発現されるまたは特異的に発現される、請求項９９〜１０１のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０３】
前記ターゲット細胞または細胞タイプが、癌細胞もしくは癌細胞タイプ、免疫系の細胞もしくは細胞タイプ、または病原性細胞もしくは細胞タイプである、請求項１０２に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０４】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記リンカーが、Ｘ−ＡＧＶＦ−Ｘ（配列番号：１３６）、Ｘ−ＧＦＬＧ−Ｘ（配列番号：１３７）、Ｘ−ＦＫ−Ｘ（配列番号：１３８）、Ｘ−ＡＬ−Ｘ（配列番号：１３９）、Ｘ−ＡＬＡＬ−Ｘ（配列番号：１４０）またはＸ−ＡＬＡＬＡ−Ｘ（配列番号：１４１）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、Ｘは、該過剰に荷電されたタンパク質または前記機能性ペプチドもしくは前記機能性タンパク質を含む残部を示す、請求項９７〜１０３のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に荷電されたＧＦＰのものに類似した表面電荷密度または表面電荷分布を有する球状タンパク質である、請求項９４〜１０４のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、β−バレルを含むタンパク質である、請求項９４〜１０５のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に荷電されたＧＦＰである、請求項９４〜１０６のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、＋３６ＧＦＰである、請求項９４〜１０７のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０９】
前記機能性タンパク質が、転写因子、腫瘍抑制因子、発生調節因子、成長因子、転移抑制因子、アポトーシス促進タンパク質、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼ、およびリコンビナーゼを含む群から選択されるタンパク質である、請求項９４〜１０８のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１１０】
前記機能性タンパク質が、ｐ５３、Ｒｂ（網膜芽細胞腫タンパク質）、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＰＴＥＮ、ＡＰＣ、ＣＤ９５、ＳＴ７、ＳＴ１４、ＢＣＬ−２ファミリータンパク質、カスパーゼ；ＢＲＭＳ１、ＣＲＳＰ３、ＤＲＧ１、ＫＡＩ１、ＫＩＳＳ１、ＮＭ２３、ＴＩＭＰファミリータンパク質、ＢＭＰファミリー成長因子、ＥＧＦ、ＥＰＯ、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＤＦファミリー成長因子、ＨＧＦ、ＨＤＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＰＯ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ；ヒトＣＣＲ５遺伝子内の部位をターゲットにするジンク・フィンガー・ヌクレアーゼ、Ｃｒｅ、Ｄｒｅ、およびＦＬＰリコンビナーゼを含む群から選択されるタンパク質である、請求項１０９に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１１２】
ペプチドまたはタンパク質を細胞に送達する方法であって、該ペプチドまたは該タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質と該細胞を、該ペプチドまたは該タンパク質が該細胞に侵入するのに十分な条件下で接触させることを含む、方法。
【請求項１１３】
前記ペプチドまたは前記タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記機能性ペプチドまたは前記機能性タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、請求項９４〜１１１のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ペプチドまたは前記タンパク質が、核ペプチドまたは核タンパク質であり、前記接触させることが、前記細胞の核への該タンパク質の送達をもたらす、請求項１１２〜１１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１１６】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、転写因子である、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１１７】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、リプログラミング因子である、請求項１１２〜１１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１８】
前記細胞が、疾患を有すると診断された被験体からの体細胞である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記細胞を、該細胞の多能性状態へのリプログラミングの誘導に十分な量のリプログラミング因子と会合している過剰に荷電されたタンパク質と、該誘導に十分な時間、および該誘導に十分な条件下で接触させる、請求項１１７または１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記体細胞から産生された多能性細胞を単離することをさらに含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
単離された前記多能性細胞、またはその後代、を分化した細胞タイプに分化させることをさらに含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記多能性細胞、またはその分化された後代、を細胞補充療法アプローチにおいて使用することをさらに含む、請求項１２０または１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記細胞が、望ましくないゲノム対立遺伝子を有する細胞であり、前記過剰に荷電されたタンパク質が、該対立遺伝子を特異的にターゲットにするヌクレアーゼと会合している、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２４】
前記望ましくない対立遺伝子が、疾患と関連づけられ、前記ヌクレアーゼが、該対立遺伝子の変異を誘発する、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記細胞をエクスビボで接触させ、前記ヌクレアーゼによる前記望ましくない対立遺伝子のターゲッティング成功後に前記被験体に再投与する、請求項１２３または１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ヌクレアーゼが、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼである、請求項１２３〜１２５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２７】
前記ヌクレアーゼが、ヒトＣＣＲ５遺伝子をターゲットにする、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記被験体が、ＨＩＶ／ＡＩＤＳと診断された被験体であり、前記細胞が、Ｔリンパ球である、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記タンパク質が、リコンビナーゼであり、前記細胞が、そのゲノム内に該リコンビナーゼによって認識される組み換え部位を含む、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１３０】
前記細胞が、前記リコンビナーゼによって認識される多数の組み換え部位を含み、該多数の組み換え部位のリコンビナーゼ媒介組み換えが、ゲノム領域の欠失をもたらす、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記細胞が、腫瘍細胞であり、前記タンパク質が、腫瘍抑制タンパク質、転移抑制タンパク質、細胞増殖抑制タンパク質または細胞毒性タンパク質である、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１】
過剰に荷電されたタンパク質の調製物であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味負電荷または正電荷を有し、かつ細胞への透過のために十分な量で存在し、かつ細胞への透過のために調合されるものである、調製物。
【請求項２】
医薬的に許容され得る調製物である、請求項１に記載の調製物。
【請求項３】
過剰に荷電されたタンパク質、もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する方法であって、
該過剰に荷電されたタンパク質、または過剰に荷電されたタンパク質および該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を、該細胞と、該過剰に荷電されたタンパク質、または該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質の該細胞への透過を可能にするために十分な条件下で接触させ、それによって過剰に荷電されたタンパク質、もしくは該過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質、またはその両方を細胞に導入する工程、
を含む、方法。
【請求項４】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質が前記細胞を透過したことを、標識の検出、該細胞における生物学的変化の検出、または該過剰に荷電されたタンパク質もしくは過剰に荷電されたタンパク質と会合している作用物質を投与した被験体における応答、例えば障害の処置、の検出のうちの１つ以上によってさらに確認する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の核の作用物質（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｇｅｎｔ）と、
を含む、複合体。
【請求項６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、全体の正味正電荷を有する、請求項５に記載の複合体。
【請求項７】
前記全体の正味正電荷が、約＋５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記全体の正味正電荷が、約＋１０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項９】
前記全体の正味正電荷が、約＋１５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１０】
前記全体の正味正電荷が、約＋２０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１１】
前記全体の正味正電荷が、約＋２５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１２】
前記全体の正味正電荷が、約＋３０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１３】
前記全体の正味正電荷が、約＋３５である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１４】
前記全体の正味正電荷が、約＋４０である、請求項６に記載の複合体。
【請求項１５】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質よりもより正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１６】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１７】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋１０より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１８】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項１９】
対象となる前記過剰に荷電されたタンパク質が、生理的なｐＨで、その対応する未修飾タンパク質より少なくとも＋５より正に荷電される、請求項６に記載の複合体。
【請求項２０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、蛍光タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に正に荷電されたＧＦＰである、請求項５に記載の複合体。
【請求項２３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１０】
の過剰に正に荷電されたＧＦＰ（＋３６ ＧＦＰ）である、請求項５に記載の複合体。
【請求項２４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約２０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約３０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約４０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約５０アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項２９】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列の約１００アミノ酸の伸長部を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３０】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約４０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３１】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約５０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約６０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列番号：７に記載のアミノ酸配列と約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項３７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、配列：
【化１１】
の、緑色蛍光タンパク質と血球凝集素２（ＨＡ２）ペプチドの融合タンパク質である、請求項５に記載の複合体。
【請求項３９】
前記核酸が、ＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４０】
前記核酸が、ＤＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４１】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４２】
前記ＲＮＡｉ剤が、短い干渉性ＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記核酸が、ＲＮＡｉを誘導する実体を含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４４】
前記核酸が、アンチセンスＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４５】
前記核酸が、リボザイムまたはデオキシリボザイムを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４６】
前記核酸が、三重らせん形成を誘導するＲＮＡを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４７】
前記核酸が、ＲＮＡアプタマーを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４８】
前記核酸が、ベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項４９】
前記核酸が、ｍＲＮＡの発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５０】
前記核酸が、タンパク質の発現を駆動するベクターを含む、請求項５に記載の複合体。
【請求項５１】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：１である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５２】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：２である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５３】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：３である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５４】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：４である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５５】
過剰に荷電されたタンパク質の核酸に対する比率が、約１：５である、請求項５に記載の複合体。
【請求項５６】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上のペプチドまたはタンパク質と、
を含む、複合体。
【請求項５７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有する、過剰に荷電されたタンパク質と、
１つ以上の小分子と、
を含む、複合体。
【請求項５８】
サイクロン（ＩＤ番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（ＩＤ番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（ＩＤ番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（ＩＤ番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（ＩＤ番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（ＩＤ番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（ＩＤ番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（ＩＤ番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（ＩＤ番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（ＩＤ番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（ＩＤ番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（ＩＤ番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（ＩＤ番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（ＩＤ番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（ＩＤ番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（ＩＤ番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（ＩＤ番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（ＩＤ番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（ＩＤ番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（ＩＤ番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（ＩＤ番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（ＩＤ番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（ＩＤ番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のポリヌクレオチドとを含む複合体。
【請求項５９】
サイクロン（ＩＤ番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（ＩＤ番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（ＩＤ番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（ＩＤ番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（ＩＤ番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（ＩＤ番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（ＩＤ番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（ＩＤ番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（ＩＤ番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（ＩＤ番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（ＩＤ番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（ＩＤ番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（ＩＤ番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（ＩＤ番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（ＩＤ番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（ＩＤ番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（ＩＤ番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（ＩＤ番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（ＩＤ番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（ＩＤ番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（ＩＤ番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（ＩＤ番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（ＩＤ番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上のペプチドまたはタンパク質とを含む複合体。
【請求項６０】
サイクロン（ＩＤ番号：Ｑ９Ｈ６Ｆ５）、ＰＮＲＣ１（ＩＤ番号：Ｑ１２７９６）、ＲＮＰＳ１（ＩＤ番号：Ｑ１５２８７）、ＳＵＲＦ６（ＩＤ番号：Ｏ７５６８３）、ＡＲ６Ｐ（ＩＤ番号：Ｑ６６ＰＪ３）、ＮＫＡＰ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ５Ｆ７）、ＥＢＰ２（ＩＤ番号：Ｑ９９８４８）、ＬＳＭ１１（ＩＤ番号：Ｐ８３３６９）、ＲＬ４（ＩＤ番号：Ｐ３６５７８）、ＫＲＲ１（ＩＤ番号：Ｑ１３６０１）、ＲＹ−１（ＩＤ番号：Ｑ８ＷＶＫ２）、ＢｒｉＸ（ＩＤ番号：Ｑ８ＴＤＮ６）、ＭＮＤＡ（ＩＤ番号：Ｐ４１２１８）、Ｈ１ｂ（ＩＤ番号：Ｐ１６４０１）、サイクリン（ＩＤ番号：Ｑ９ＵＫ５８）、ＭＤＫ（ＩＤ番号：Ｐ２１７４１）、ＰＲＯＫ（ＩＤ番号：Ｑ９ＨＣ２３）、ＦＧＦ５（ＩＤ番号：Ｐ１２０３４）、ＳＦＲＳ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ９Ｑ２）、ＡＫＩＰ（ＩＤ番号：Ｑ９ＮＷＴ８）、ＣＤＫ（ＩＤ番号：Ｑ８Ｎ７２６）、ベータ−ディフェンシン（ＩＤ番号：Ｐ８１５３４）、ＰＡＶＡＣ（ＩＤ番号：Ｐ１８５０９）、エオタキシン−３（ＩＤ番号：Ｑ９Ｙ２５８）、ヒストンＨ２Ａ（ＩＤ番号：Ｑ７Ｌ７Ｌ０）、およびＨＭＧＢ１（ＩＤ番号：Ｐ０９４２９）からなる群より選択されるタンパク質と；１つ以上の小分子とを含む複合体。
【請求項６１】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、該対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６２】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６３】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも１５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６４】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２０個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６５】
前記対応する未修飾タンパク質では正に荷電されない、少なくとも２５個の正に荷電されたアミノ酸残基を含む、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６６】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも２つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６７】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも３つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６８】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも５つのアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６９】
正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが少なくとも１０のアミノ酸残基によって隔てられている、請求項６１に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７０】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該正に荷電されたアミノ酸残基のそれぞれが、少なくとも１つのアミノ酸残基によって隔てられている、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７１】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基のアミノ最末端とカルボキシ最末端の間の距離が、約１０アミノ酸である、請求項６１または７０に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７２】
過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は、その対応する未修飾タンパク質より大きい全体の正味電荷を有し；該過剰に荷電されたタンパク質は、少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基を含み；該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基が、該対応する未修飾タンパク質中に存在する対応するアミノ酸残基とは異なり；および該少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも６０％が、該タンパク質の表面に位置する、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７３】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも７０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７４】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも８０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７５】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９０％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７６】
前記少なくとも５つの正に荷電されたアミノ酸残基の少なくとも９５％が、前記タンパク質の表面に位置する、請求項７２に記載の過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７７】
過剰に荷電されたタンパク質であって、少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基が、対応する未修飾タンパク質の対応するアミノ酸残基と異なり；最高ＡｖＮＡＰＳＡスコアを有する該対応する未修飾タンパク質の少なくとも５つのアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンアミノ酸残基がリシンに変異され；および該少なくとも５つのアミノ酸残基が正に荷電される、過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７８】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体と、
医薬的に許容され得る賦形剤と、
を含む、医薬組成物。
【請求項７９】
疾患、障害もしくは状態に罹患しやすいか、疾患、障害もしくは状態に罹患しているか、または疾患、障害もしくは状態の１つ以上の症状を示す被験体を提供する工程；および
請求項１〜７７のいずれか一項に記載の過剰に荷電されたタンパク質もしくは複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を、該被験体に、少なくとも１つの症状が改善されるように投与する工程、
を含む、方法。
【請求項８０】
前記投与する工程が、前記過剰に荷電されたタンパク質または複合体が前記被験体の細胞を透過するために十分な条件下で行われる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの異常に上昇したレベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを低下させる核酸を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記疾患、障害または状態が、ｍＲＮＡ、タンパク質、またはそれらの組み合わせの発現に関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記複合体が、発現した前記ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを低下させる核酸を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記核酸が、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉを誘導する実体、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患、障害または状態が、異常に低いｍＲＮＡまたはタンパク質レベルに関連している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記複合体が、異常に上昇したｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを増大させる核酸を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記核酸が、発現ベクターを構成する、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記投与する工程が、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、皮下、心室内、局所、吸入および粘膜送達からなる群より選択される投与経路を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
請求項７９〜８９のいずれか一項に記載の方法を行うためのキット。
【請求項９１】
請求項５〜６０のいずれか一項に記載の複合体または請求項７８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項９２】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電されたタンパク質を場合によっては選択する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項９３】
過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する方法であって、
過剰に荷電させるべきタンパク質を選択する工程；
変更すべき１つまたは複数の残基のセットを得て、過剰に荷電されたタンパク質を生成する工程；
該変更された残基のセットを有する過剰に荷電されたタンパク質を提供する工程；
該過剰に荷電されたタンパク質と細胞とを接触させる工程；および
該過剰に荷電されたタンパク質が該細胞を透過するかどうかを決定し、それによって過剰に荷電されたタンパク質を細胞透過について評価する工程、
を含む、方法。
【請求項９４】
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質であって、該過剰に荷電されたタンパク質は：
過剰に荷電されたタンパク質と、
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と
を含み、ここで、
該過剰に荷電されたタンパク質は、該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質と会合し、
該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質と会合している該過剰に荷電されたタンパク質は、細胞を透過することができ、かつ該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質を該細胞に送達することができる、
過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドに共有結合している、請求項９４に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドにペプチド結合によって結合しており、従って融合タンパク質を形成している、請求項９５に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９７】
前記過剰に荷電されたタンパク質および前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドが、該過剰に荷電されたタンパク質と該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質とを接続するリンカーに結合している、請求項９４〜９６のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９８】
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合またはジスルフィド結合を含む、請求項９７に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９９】
前記過剰に荷電されているタンパク質または前記リンカーが、細胞酵素によって切断され得る、請求項９４〜９８のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１００】
前記細胞酵素が、細胞プロテアーゼまたは細胞エステラーゼである、請求項９９に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０１】
前記細胞プロテアーゼが、エンドソームプロテアーゼである、または前記細胞エステラーゼが、エンドソームエステラーゼである、請求項１００に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０２】
前記細胞酵素が、ターゲット細胞または細胞タイプにおいて優先的に発現されるまたは特異的に発現される、請求項９９〜１０１のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０３】
前記ターゲット細胞または細胞タイプが、癌細胞もしくは癌細胞タイプ、免疫系の細胞もしくは細胞タイプ、または病原性細胞もしくは細胞タイプである、請求項１０２に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０４】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記リンカーが、Ｘ−ＡＧＶＦ−Ｘ（配列番号：１３６）、Ｘ−ＧＦＬＧ−Ｘ（配列番号：１３７）、Ｘ−ＦＫ−Ｘ（配列番号：１３８）、Ｘ−ＡＬ−Ｘ（配列番号：１３９）、Ｘ−ＡＬＡＬ−Ｘ（配列番号：１４０）またはＸ−ＡＬＡＬＡ−Ｘ（配列番号：１４１）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、Ｘは、該過剰に荷電されたタンパク質または前記機能性ペプチドもしくは前記機能性タンパク質を含む残部を示す、請求項９７〜１０３のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に荷電されたＧＦＰのものに類似した表面電荷密度または表面電荷分布を有する球状タンパク質である、請求項９４〜１０４のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０６】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、β−バレルを含むタンパク質である、請求項９４〜１０５のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０７】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に荷電されたＧＦＰである、請求項９４〜１０６のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０８】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、＋３６ＧＦＰである、請求項９４〜１０７のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０９】
前記機能性タンパク質が、転写因子、腫瘍抑制因子、発生調節因子、成長因子、転移抑制因子、アポトーシス促進タンパク質、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼ、およびリコンビナーゼを含む群から選択されるタンパク質である、請求項９４〜１０８のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１１０】
前記機能性タンパク質が、ｐ５３、Ｒｂ（網膜芽細胞腫タンパク質）、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＰＴＥＮ、ＡＰＣ、ＣＤ９５、ＳＴ７、ＳＴ１４、ＢＣＬ−２ファミリータンパク質、カスパーゼ；ＢＲＭＳ１、ＣＲＳＰ３、ＤＲＧ１、ＫＡＩ１、ＫＩＳＳ１、ＮＭ２３、ＴＩＭＰファミリータンパク質、ＢＭＰファミリー成長因子、ＥＧＦ、ＥＰＯ、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＤＦファミリー成長因子、ＨＧＦ、ＨＤＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＰＯ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ；ヒトＣＣＲ５遺伝子内の部位をターゲットにするジンク・フィンガー・ヌクレアーゼ、Ｃｒｅ、Ｄｒｅ、およびＦＬＰリコンビナーゼを含む群から選択されるタンパク質である、請求項１０９に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１１２】
ペプチドまたはタンパク質を細胞に送達する方法であって、該ペプチドまたは該タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質と該細胞を、該ペプチドまたは該タンパク質が該細胞に侵入するのに十分な条件下で接触させることを含む、方法。
【請求項１１３】
前記ペプチドまたは前記タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記機能性ペプチドまたは前記機能性タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、請求項９４〜１１１のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ペプチドまたは前記タンパク質が、核ペプチドまたは核タンパク質であり、前記接触させることが、前記細胞の核への該タンパク質の送達をもたらす、請求項１１２〜１１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１１６】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、転写因子である、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１１７】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、リプログラミング因子である、請求項１１２〜１１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１８】
前記細胞が、疾患を有すると診断された被験体からの体細胞である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記細胞を、該細胞の多能性状態へのリプログラミングの誘導に十分な量のリプログラミング因子と会合している過剰に荷電されたタンパク質と、該誘導に十分な時間、および該誘導に十分な条件下で接触させる、請求項１１７または１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記体細胞から産生された多能性細胞を単離することをさらに含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
単離された前記多能性細胞、またはその後代、を分化した細胞タイプに分化させることをさらに含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記多能性細胞、またはその分化された後代、を細胞補充療法アプローチにおいて使用することをさらに含む、請求項１２０または１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記細胞が、望ましくないゲノム対立遺伝子を有する細胞であり、前記過剰に荷電されたタンパク質が、該対立遺伝子を特異的にターゲットにするヌクレアーゼと会合している、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２４】
前記望ましくない対立遺伝子が、疾患と関連づけられ、前記ヌクレアーゼが、該対立遺伝子の変異を誘発する、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記細胞をエクスビボで接触させ、前記ヌクレアーゼによる前記望ましくない対立遺伝子のターゲッティング成功後に前記被験体に再投与する、請求項１２３または１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ヌクレアーゼが、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼである、請求項１２３〜１２５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２７】
前記ヌクレアーゼが、ヒトＣＣＲ５遺伝子をターゲットにする、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記被験体が、ＨＩＶ／ＡＩＤＳと診断された被験体であり、前記細胞が、Ｔリンパ球である、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記タンパク質が、リコンビナーゼであり、前記細胞が、そのゲノム内に該リコンビナーゼによって認識される組み換え部位を含む、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１３０】
前記細胞が、前記リコンビナーゼによって認識される多数の組み換え部位を含み、該多数の組み換え部位のリコンビナーゼ媒介組み換えが、ゲノム領域の欠失をもたらす、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記細胞が、腫瘍細胞であり、前記タンパク質が、腫瘍抑制タンパク質、転移抑制タンパク質、細胞増殖抑制タンパク質または細胞毒性タンパク質である、請求項１１２〜１１５のいずれかに記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図３Ｃ】
【図２４】
【図２７】
【図３１Ａ】
【図３１Ｂ】
【図３３Ａ】
【図３４】
【図３９】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２６】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３２】
【図３３Ｂ】
【図３５】
【図３６】
【図３７Ａ】
【図３７Ｂ】
【図３８】
【図４０】
【図４１Ａ】
【図４１Ｂ】
【図４２】
【図４３】
【図４４Ａ】
【図４４Ｂ】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図３Ｃ】
【図２４】
【図２７】
【図３１Ａ】
【図３１Ｂ】
【図３３Ａ】
【図３４】
【図３９】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２６】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３２】
【図３３Ｂ】
【図３５】
【図３６】
【図３７Ａ】
【図３７Ｂ】
【図３８】
【図４０】
【図４１Ａ】
【図４１Ｂ】
【図４２】
【図４３】
【図４４Ａ】
【図４４Ｂ】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【公表番号】特表２０１２−５２５１４６（Ｐ２０１２−５２５１４６Ａ）
【公表日】平成２４年１０月２２日（２０１２．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０８４７８（Ｐ２０１２−５０８４７８）
【出願日】平成２２年４月２８日（２０１０．４．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００１２５０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１２９０２３
【国際公開日】平成２２年１１月１１日（２０１０．１１．１１）
【出願人】（５０２０７２１３４）プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ (92)
【氏名又は名称原語表記】Ｐｒｅｓｉｄｅｎｔ ａｎｄ Ｆｅｌｌｏｗｓ ｏｆ Ｈａｒｖａｒｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１０月２２日（２０１２．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月２８日（２０１０．４．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００１２５０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１２９０２３
【国際公開日】平成２２年１１月１１日（２０１０．１１．１１）
【出願人】（５０２０７２１３４）プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ (92)
【氏名又は名称原語表記】Ｐｒｅｓｉｄｅｎｔ ａｎｄ Ｆｅｌｌｏｗｓ ｏｆ Ｈａｒｖａｒｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ
【Ｆターム（参考）】
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