【課題】精製された組換えウイルスベクター（特にアルファウイルスベクター）を凍結乾燥の形で高温で保存する方法、かつこれが患者への注射に適した形であることを提供すること。
【解決手段】ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、誘導性プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターは、細胞内での該プロモーターの誘導の際にアルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、そしてここで、細胞内の誘導の前に、該発現カセットは、 該発現カセットを含むＢＨＫ細胞に対して細胞毒性であるのに十分な量の構造タンパク質を発現しない、発現カセット。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルファウイルス構造タンパク質を誘導性に発現するパッケージング細胞株であって、そしてアルファウイルスベクターコンストラクトの導入の際に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、パッケージング細胞株。
【請求項２】
哺乳動物細胞から誘導される、請求項１に記載のパッケージング細胞株。
【請求項３】
哺乳動物でない細胞から誘導される、請求項１に記載のパッケージング細胞株。
【請求項４】
昆虫細胞から誘導される、請求項３に記載のパッケージング細胞株。
【請求項５】
前記昆虫細胞が蚊細胞である、請求項３に記載のパッケージング細胞株。
【請求項６】
請求項１に記載のパッケージング細胞株であって、ここで該パッケージング細胞株が、ベクターコンストラクトの導入の時点で、ヒト細胞を感染するアルファウイルス粒子を産生する、パッケージング細胞株。
【請求項７】
請求項１に記載のパッケージング細胞株であって、ここでアルファウイルス阻害タンパク質が、産生されない、パッケージング細胞株。
【請求項８】
アルファウイルスベクターのパッケージング及び産生に適したパッケージング細胞株であって、ここで該パッケージング細胞株が、ＶＳＶ−Ｇの発現を配向する発現カセットを含む、パッケージング細胞株。
【請求項９】
請求項８に記載のパッケージング細胞株であって、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質の発現を配向する発現カセットをさらに含む、パッケージング細胞株。
【請求項１０】
請求項１〜８に記載のパッケージング細胞株であって、ここで該細胞株が、アポトーシスを抑制する遺伝子産物を発現する、パッケージング細胞株。
【請求項１１】
請求項１０に記載のパッケージング細胞株であって、ここで前記遺伝子産物が、ｂｃｌ−２オンコ遺伝子、１９−ｋＤタンパク質をコードするアデノウイルスＥＩＢ遺伝子、Ｉ型単純ヘルペスウイルス、ガンマ３４．５遺伝子、及びＡｃＭＮＰＶバキュロウイルスｐ３５遺伝子からなるグループの中から選択される遺伝子によってコードされる、パッケージング細胞株。
【請求項１２】
アルファウイルスプロデューサー細胞株であって、請求項１に記載のパッケージング細胞株、及びアルファウイルスウイルスベクターコンストラクト又はアルファウイルスｃＤＮＡベクターコンストラクトを含み、ここで該プロデューサー細胞株が、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、アルファウイルスプロデューサー細胞株。
【請求項１３】
請求項１２に記載のアルファウイルスプロデューサー細胞株であって、ここで前記組換え型アルファウイルス粒子が、ヒト細胞を感染する、アルファウイルスプロデューサー細胞株。
【請求項１４】
請求項１２に記載のアルファウイルスプロデューサー細胞株であって、ここで該プロデューサー細胞株が、組換え型アルファウイルス粒子を誘導性に産生する、アルファウイルスプロデューサー細胞株。
【請求項１５】
請求項１２に記載のアルファウイルスプロデューサー細胞株であって、ここで該プロデューサー細胞株が、該プロデューサー細胞株の分化状態に応答して組換え型アルファウイルス粒子を産生する、アルファウイルスプロデューサー細胞株。
【請求項１６】
組換え型アルファウイルス粒子のパッケージング及び産生に適したプロデューサー細胞株であって、ここで該プロデューサー細胞株が、ｇａｇ／ｐｏｌの発現を配向する発現カセット、ｅｎｖの発現を配向する発現カセット、及びレトロウイルスパッケージング配列を含むアルファウイルスベクターコンストラクトを含む、プロデューサー細胞株。
【請求項１７】
組換え型アルファウイルス粒子のパッケージング及び産生に適したプロデューサー細胞株であって、ここで該細胞株が、非アルファウイルス構造タンパク質の発現を配向する１つ以上の発現カセット、及び非アルファウイルス構造タンパク質が誘導されるウイルスに対応するパッケージング配列を含むアルファウイルスベクターコンストラクトを含む、プロデューサー細胞株。
【請求項１８】
パッケージング細胞株から組換え型アルファウイルス粒子を産生するための方法であって、該方法は、アルファウイルスベクターコンストラクトを請求項１〜１２のいずれか１項に従うパッケージング細胞株に、以下（ｉ）真核細胞重層ベクターイニシエーション系を用いたパッケージング細胞株のトランスフェクション、（ｉｉ）インビトロでアルファウイルスベクターコンストラクトから転写されるＲＮＡを用いたパッケージング細胞株のトランスフェクション、及び（ｉｉｉ）組換えアルファウイルス粒子を用いたパッケージング細胞株の感染からなるグループの中から選択されるプロセスによって導入することを含む、方法。
【請求項１９】
動物における抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって、アルファウイルスでの感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導くベクターを含む組換え型アルファウイルス粒子で、感受性のある動物標的細胞を感染させることを含み、ここで該抗原又はその修正された形態が動物内での免疫応答を刺激し、そしてここで該組換え型アルファウイルス粒子は、アルファウイルス構造タンパク質を発現する安定に形質転換された発現カセットを含むアルファウイルスパッケージング細胞から得られ、アルファウイルスベクターコンストラクトの導入後に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、方法。
【請求項２０】
前記抗原がウイルス抗原である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、ここで前記ウイルス抗原が、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、ＨＰＶ，ＨＢＶ，ＨＩＶ，ＨＳＶ，ＦｅＬＶ，ＦＩＶ，ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−２及びＣＭＶからなるグループの中から選択されるウイルスから得られる、方法。
【請求項２２】
請求項２０に記載の方法であって、ここで前記ウイルス抗原が、Ｃ型肝炎ウイルスから得られる、方法。
【請求項２３】
請求項１９に記載の方法であって、ここで前記抗原が、腫瘍抗原である、方法。
【請求項２４】
請求項１９に記載の方法であって、ここで前記抗原が、細菌、寄生虫又は真菌から得られる、方法。
【請求項２５】
請求項１９に記載の方法であって、ここで前記アルファウイルスベクターコンストラクトが、真核細胞重層ベクターイニシエーション系又はアルファウイルスベクターコンストラクトＲＮＡの前記パッケージング細胞へのトランスフェクトによって、該パッケージング細胞に導入される、方法。
【請求項２６】
請求項１９に記載の方法であって、ここで前記アルファウイルスベクターコンストラクトが、組換え型アルファウイルス粒子を有する前記パッケージング細胞を感染することによって、該パッケージング細胞に導入される、方法。

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図３Ｅ】

【図３Ｆ】

【図３Ｇ】

【図３Ｈ】

【図４】

【図６】

【図８】

【図９】

【図１】

【図２】

【図５】

【図７】

【図１０】

【図１１】

【公開番号】特開２００７−３２５５９７（Ｐ２００７−３２５５９７Ａ）
【公開日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１８８８９４（Ｐ２００７−１８８８９４）
【出願日】平成１９年７月１９日（２００７．７．１９）
【分割の表示】特願２００５−１８１３１９（Ｐ２００５−１８１３１９）の分割
【原出願日】平成６年９月１５日（１９９４．９．１５）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＦＬＯＰＰＹ
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン　コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】