経口投与用吸着剤の投与治療対象の検出方法、及び治療効果の判定方法
【課題】本発明の目的は、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が上昇している経口投与用吸着剤の投与を必要としている患者と、必要としていない患者とを判別する方法、すなわち経口投与用吸着剤による治療対象を検出する方法、並びに投与用吸着剤の投与によって、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が低下したか否かを判定する方法、すなわち経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果を判定する方法を提供することにある。
【解決手段】前記課題は、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、並びにト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法によって解決することができる。
【解決手段】前記課題は、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、並びにト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法によって解決することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、及び経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法に関する。本発明によれば、血液中において、４−エチルフェニル硫酸の上昇した経口投与用吸着剤の投与対象を判定、及び経口投与用吸着剤の投与の治療効果を判定することが可能である。
【背景技術】
【０００２】
腎機能や肝機能の欠損患者らは、それらの臓器機能障害に伴って、血液中等の体内に有害な毒性物質が蓄積したり生成したりするので、慢性腎臓病による尿毒症や意識障害等の脳症をひきおこす。これらの患者数は年々増加する傾向を示しているため、これら欠損臓器に代わって毒性物質を体外へ除去する機能をもつ臓器代用機器あるいは治療薬の開発が重要な課題となっている。現在、人工腎臓としては、血液透析による有毒物質の除去方式が最も普及している。
【０００３】
一方、血液透析以外の治療法として、経口的な服用が可能で、腎臓や肝臓の機能障害を治療することができる経口投与用吸着剤が注目されている。例えば、特公昭６２−１１６１１号公報に記載の吸着剤は、特定の官能基を有する多孔性の球状活性炭からなり、生体に対する安全性や安定性が高く、同時に腸内での胆汁酸の存在下でも有毒物質の吸着性に優れ、しかも、消化酵素等の腸内有益成分の吸着が少ないという有益な選択吸着性を有し、また、便秘等の副作用の少ない経口投与用吸着剤として、例えば、肝腎機能障害患者に対して広く臨床的に利用されている。
【０００４】
前記慢性腎臓病における尿毒症毒素としては、インドキシル硫酸、ｐ−クレゾール硫酸、馬尿酸、フェニル硫酸、又はインドール酢酸が知られていた（非特許文献１）。これらの尿毒症物質を体内から取り除くために、前記血液透析又は経口投与用吸着剤の投与などが行われている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】「ジャーナル・オブ・クロマトグラフィーＢ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ）」（米国）２０１０年、第８７８巻、ｐ．２９９７〜３００２
【非特許文献１】「ジャーナル・オブ・マススペクトロメトリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）」（英国）２００４年、第３９巻、ｐ．６５５〜６６４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記非特許文献１には、４−エチルフェニル硫酸が、腎摘出の腎不全モデルラットの血液中で上昇することが記載されている（非特許文献１）。また、カドミウム由来の腎不全モデルラットの血液中においても、４−エチルフェニル硫酸が上昇することが報告されている（非特許文献２）。しかしながら、４−エチルフェニル硫酸が、ヒトの細胞に対して毒性を示すことは報告されていなかった。本発明者らは、尿毒症の原因物質として、４−エチルフェニル硫酸に着目し、その細胞に対する毒性について検討した。その結果、４−エチルフェニル硫酸が、腎細胞に毒性を示すことを見出した。更に、４−エチルフェニル硫酸のヒトの血液中の濃度について検討したところ、個体によってバラツキが大きく、例えば腎臓病の患者でも、４−エチルフェニル硫酸の濃度が高い患者と、健常人と同程度の患者がいることを見出した。また、透析患者においては、血液中の４−エチルフェニル硫酸が、透析により除去されず、４−エチルフェニル硫酸の濃度を低下させることはできなかった。なお、４−エチルフェニル硫酸のヒトの血液中の濃度は、球状活性炭を含む経口投与用吸着剤によって、減少させることができる。
従って、本発明の目的は、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が上昇している経口投与用吸着剤の投与を必要としている患者と、必要としていない患者とを判別する方法、すなわち経口投与用吸着剤による治療対象を検出する方法を提供することである。
更に、本発明の目的は、投与用吸着剤の投与によって、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が低下したか否かを判定する方法、すなわち経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果を判定する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、４−エチルフェニル硫酸の細胞毒性について、鋭意研究した結果、腎細胞に毒性を示すことを見出した。前記のように、４−エチルフェニル硫酸のヒトの血液中の濃度は、個人によってバラツキがある。また、血液透析によって、４−エチルフェニル硫酸が除去されないことから、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が高い患者には、球状活性炭を含む経口投与用吸着剤を投与する必要があることを見出した。
更に、本発明者らは、４−エチルフェニル硫酸が、血管内皮細胞にも、毒性を示すことを見出した。従って、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が高い患者は、血管内皮細胞への障害を介して、心血管疾患を発症する可能性があり、それを予防するために、経口投与用吸着剤の投与が有効である。そして、投与対象を判別するために、ヒトの血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定することは有用である。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
【０００８】
すなわち、本発明は、
［１］ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［２］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［１］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［３］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［２］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［４］前記投与対象が心血管疾患患者である、［１］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［５］ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法、
［６］投与対象が慢性腎臓病患者である、［５］に記載の治療効果の判定方法、
［７］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［６］に記載の治療効果の判定方法、
［８］前記投与対象が心血管疾患患者である、［５］に記載の治療効果の判定方法、
［９］４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１０］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［９］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１１］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［１０］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１２］前記投与対象が心血管疾患患者である、［９］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１３］４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１４］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［１３］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１５］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［１４］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１６］前記投与対象が心血管疾患患者である、［１３］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１７］４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［１８］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［１７］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［１９］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［１８］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［２０］前記投与対象が心血管疾患患者である、［１７］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［２１］４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、
［２２］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［２１］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、
［２３］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［２２］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、及び
［２４］前記投与対象が心血管疾患患者である、［２１］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の経口投与用吸着剤の投与治療対象の検出方法によれば、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度を分析することによって、経口投与用吸着剤を投与すべき対象を判別することができる。更に、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度の分析は、経口投与用吸着剤の治療効果の判定に用いることができる。４−エチルフェニル硫酸は、尿毒症毒素であり、また心血管疾患との関連性がある。従って、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度の分析は、慢性腎臓病の治療マーカー、又は心血管疾患の治療マーカーとして用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】４−エチルフェニル硫酸による細胞増殖の抑制効果を示したグラフである。コントロールとして、４−エチルフェニル硫酸による細胞増殖の抑制効果を示す。
【図２】健常人、並びに血液透析患者の透析前及び透析後の血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度をプロットしたグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする。
【００１２】
（４−エチルフェニル硫酸）
４−エチルフェニル硫酸（以下、４ＥｔＰｈＳと称することがある）は、４−エチルフェノールが、体内（肝臓）において硫酸エステル化されたものであり、式（１）
【化１】
で表される化合物である。４−エチルフェニル硫酸は、腎臓細胞（ＬＬＣ−ＰＫ１細胞）に対して、増殖阻害活性を示す。また、血管内皮細胞に対しても、障害活性を示す。
【００１３】
（４−エチルフェニル硫酸の分析方法）
４−エチルフェニル硫酸の分析方法は、血液中の濃度を分析可能な方法であれば、特に限定されるものではないが、ガスクロマトグラフィーを用いる方法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法、及び質量分析法、又は免疫学的分析法などを用いることができ、特には、質量分析法が好ましい。
【００１４】
質量分析法は、特に限定されるものではないが、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いる質量分析法、ガスクロマトクラフィー（ＧＣ）を用いる質量分析法、及びキャピラリー電気泳動（ＣＥ）を用いる質量分析法（以下、ＣＥ−ＭＳ法と称する）を挙げることができ、特には、ＬＣ／ＭＳ法の１つである液体クロマトグラフィー質量分析法（以下、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法と称する）が好ましい。
【００１５】
前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法における、高速液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に用いることのできるカラムとしては、逆相クロマトグラフィーカラムが好ましい。逆相クロマトグラフィーカラムとしては、オクタデシルシリル化シリカゲル（ＯＤＳ）系カラムが好ましく、例えばＳｈｉｍ−Ｐａｃｋ ＶＰ−ＯＤＳ（島津製作所）、又はＡｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８（日本ウォーターズ）を挙げることができる。
【００１６】
高速液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に用いる移動相は、質量分析に用いることができれば特に限定されるものではないが、揮発性緩衝系の移動相を用いることができ、例えば、酢酸緩衝液としては、酢酸アンモニウム水溶液、又はギ酸アンモニウムを挙げることができる。
【００１７】
移動相の流速は特に限定されるものではないが、例えば、０．２ｍＬ／ｍｉｎで行うことができる。
【００１８】
前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法における４−エチルフェニル硫酸のイオン化法としては、例えば、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、サーモスプレーイオン化（ＴＳＰ）、パーティクルビーム法（ＰＢ）、大気圧光イオン化法（ＡＰＰＩ）及び連続フロー高速原子衝撃（ＣＦ−ＦＡＢ）を挙げることができる。この中でもＥＳＩが好ましい。
【００１９】
免疫学的分析法としては、４−エチルフェニル硫酸に結合する抗体を用いるものであれば、特に限定されるものではないが、例えば、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、免疫組織染色法、又はウエスタンブロットによって行うことができるが、酵素免疫測定法、化学発光免疫測定法、又は放射免疫測定法の原理を用いたサンドイッチ法が好ましい。
【００２０】
ヒト由来の液体試料は、４−エチルフェニル硫酸が含まれる可能性のある試料であれば特に限定されるものではなく、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、組織液、唾液、尿、涙、汗などを挙げることができるが、特には血清又は血漿が好ましい。ヒトの血漿を生体試料として用いる場合は、血液を血液凝固剤（例えば、ＥＤＴＡ）の入った採血管で採血し、遠心分離により血球成分を除いて、用いることができる。
なお、ネコ又はイヌの４−エチルフェニル硫酸による尿毒症の治療を目的として、経口投与用吸着剤を投与する場合は、ネコ又はイヌ由来の液体試料を用いることもできる。
【００２１】
（投与対象）
経口投与用吸着剤の投与対象は、液体試料中の４−エチルフェニル硫酸の濃度が高い患者であれば、特に限定されるものではない。すなわち、４−エチルフェニル硫酸の液体試料中の濃度が高いすべての患者を、経口投与用吸着剤の投与対象とすることができる。具体的には、限定されるものではないが、経口投与用吸着剤の投与対象として、慢性腎臓病患者、又は心血管疾患患者を挙げることができる。
【００２２】
（慢性腎臓病患者）
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、慢性腎臓病患者において、特に有用である。
４−エチルフェニル硫酸は、実施例で示すように、腎臓細胞に対する細胞増殖抑制効果を有している。すなわち、慢性腎臓病患者における尿毒症毒素の１つである。しかしながら、慢性腎臓病患者における血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度は、０．０００〜０．１５５２ｍｇ／ｄＬの広い範囲に分布している。血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度の低い患者は、治療の必要がない可能性が高く、４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定し、治療の必要な患者と、治療の必要のない患者を判定することは有用である。
【００２３】
更に、４−エチルフェニル硫酸は、血液透析によって、ほとんど除去することができない。一方、経口投与用吸着剤の投与によって、血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度は、劇的に減少する。従って、血液透析を行っている患者において、血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定し、濃度の高い患者において経口投与用吸着剤の投与の判定を行うことは、有用である。
【００２４】
（心血管疾患患者）
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、心血管疾患患者において、特に有効である。例えば、心血管疾患である動脈硬化症は、脂質異常症、肥満、糖尿病、高血圧、喫煙、インシュリン抵抗性、高ホモシステイン血症、運動不足、慢性腎不全、又はストレスなどの危険因子が単独で、又はそれらの組み合わせによって発症すると考えられる。具体的には、それぞれの危険因子において、血管内皮を障害する物質が存在すると考えられており、例えば、高血圧の場合はアンジオテンシンＩＩが、脂質異常症の場合は酸化ＬＤＬコレステロールが、肥満の場合はＴＮＦ−αが、そして糖尿病の場合はフリーラジカルが、血管内皮の傷害を引き起こす物質であると考えられている。
４−エチルフェニル硫酸は、血管内皮細胞に対して毒性を示すことから、心血管疾患患者における血管内皮の傷害を引き起こす物質であると考えられる。従って、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析し、４−エチルフェニル硫酸濃度の高い患者に対する、経口投与用吸着剤の投与の判定を行うことは有用である。
【００２５】
（健常人）
一般的に、健常人は経口投与用吸着剤の投与対象には含まれない。但し、本願明細書において、健常人とは血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度が低いヒトを意味し、４−エチルフェニル硫酸の濃度が高く、障害を起こしている患者は含まれない。
【００２６】
（経口投与用吸着剤投与の判定基準）
経口投与用吸着剤は、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が高い患者に対して、投与されるものであり、経口投与用吸着剤投与の判定基準は、医師の判断に従えばよく特に限定されるものではないが、例えば制御された臨床試験により決定されることが好ましい。
具体的な判定基準としては、例えば、健常者の平均値を超える血液濃度の患者に経口投与用吸着剤の投与の判断を行うことも可能であるし、健常者の９０％が含まれる範囲の上限値を超える血液濃度の患者に経口投与用吸着剤の投与の判断を行うことも可能である。更に、平均値±ＳＤ、平均値±２ＳＤ、若しくは平均値±３ＳＤ、又は平均値±ＳＥ、平均値±２ＳＥ、若しくは平均値±３ＳＥを目安として、経口投与用吸着剤の投与の判断を行うこともできる。
例えば、後述の実施例においては、健常者の８人のうち、０．０２３７ｍｇ／ｄＬの高い値を示した１人を除く、７人の０．００００〜０．００４２ｍｇ／ｄＬを健常人の範囲と便宜的に仮定し、０．００４２ｍｇ／ｄＬを超える患者を、４−エチルフェニル硫酸の高い患者であると判断した。
【００２７】
（経口投与用吸着剤）
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法によって、対象と判定された患者に対して投与される経口投与用吸着剤は、４−エチルフェニル硫酸を吸着することができる限りにおいて、特に限定されるものではないが、医療用に使用することが可能な球状活性炭、すなわち、医療用に内服使用することが可能な経口投与用球状活性炭を含むものが好ましい。
【００２８】
前記球状活性炭の平均粒子径は、特に限定されるものではないが、０．０２〜１ｍｍが好ましく、０．０３〜０．９０ｍｍがより好ましく、０．０５〜０．８０ｍｍが更に好ましい。また、前記球状活性炭の粒径（直径）の範囲は、０．０１〜２ｍｍであることが好ましく、０．０２〜１．５ｍｍであることがより好ましく、０．０３〜１ｍｍであることが更に好ましい。「球状活性炭」とは、比表面積が１００ｍ２／ｇ以上であるものを意味するが、本発明に用いる球状活性炭の比表面積は５００ｍ２／ｇ以上が好ましく、７００ｍ２／ｇ以上がより好ましく、１３００ｍ２／ｇ以上が更に好ましく、１６５０ｍ２／ｇ以上が特に好ましい。
より具体的には、例えば、特開平１１−２９２７７０号公報、特開２００２−３０８７８５号公報（特許第３５２２７０８号公報）、ＷＯ２００４／３９３８１号公報、ＷＯ２００４／３９３８０号公報、特開２００５−３１４４１５号公報、特開２００５−３１４４１６号公報、特開２００４−２４４４１４号公報、特開２００７−１９７３３８号公報、及び特開２００８−３０３１９３号公報に記載の球状活性炭を挙げることができる。
【００２９】
２．経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法
本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法は、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする。ヒトの体液例えば血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度は、経口投与用吸着剤の投与により、減少する。しかしながら、４−エチルフェニル硫酸濃度の減少の程度は、ヒトにより異なるため、４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定することにより、経口投与用吸着剤の投与の効果を判定することが可能である。
【００３０】
本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法においては、前記の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法における「４−エチルフェニル硫酸の分析方法」を用いることができる。
【００３１】
更に、治療対象は、体液試料中の４−エチルフェニル硫酸が高い患者であれば、特に限定されるものではないが、慢性腎臓病患者（特には、透析治療患者）、又は心血管疾患患者を挙げることができる。
【００３２】
３．経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット及び経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キットは、４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とするものであり、前記経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法に用いることができる。
４−エチルフェニル硫酸は、特に限定されるものはないが、４−エチルフェニル硫酸の分析において、標準物質として含まれてもよい。すなわち、ガスクロマトグラフィーを用いる方法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法、及び質量分析法、又は免疫学的分析法において、検体中の分析される４−エチルフェニル硫酸の標準物質として使用されることができる。
【００３３】
また、前記４−エチルフェニル硫酸の分析が免疫学的分析法の場合は、経口投与用吸着剤の投与対象の検出キットは、４−エチルフェニル硫酸に対する抗体（例えば、モノクローナル抗体、若しくはポリクローナル抗体、又はその抗原結合性断片）を含むことができる。抗体を含むことによって、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、免疫組織染色法、又はウエスタンブロットを行うことができる。
【００３４】
また、本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キットは４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とするものであり、前記経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法に用いることができる。
また、本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キットは、前記経口投与用吸着剤の投与対象の検出キットと同じ構成とすることができる。
【００３５】
本発明の検出キット又は判定キットは、経口投与用吸着剤の投与対象の検出用である旨、又は経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定用である旨を明記した使用説明書を含むことができる。経口投与用吸着剤の投与対象の検出用又は経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定用である旨の記載は、分析キットの容器に付されていてもよい。
【００３６】
４．経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー及び経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカーは、４−エチルフェニル硫酸を含むか、又は４−エチルフェニル硫酸からなるものである。本発明の検出マーカーを用いることにより、経口投与用吸着剤の投与対象の検出を行うことができる。従って、経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカーは、前記経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法に用いることができる。
本発明の検出マーカーの濃度が生体内で上昇している場合、経口投与用吸着剤の投与を行うことが望ましい。
【００３７】
本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカーは、４−エチルフェニル硫酸を含むか、又は４−エチルフェニル硫酸からなるものである。本発明の判定マーカーを用いることにより、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定を行うことができる。従って、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカーは、前記経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法に用いることができる。
本発明の判定マーカーの濃度が生体内で上昇している場合、経口投与用吸着剤の投与を継続することが望ましく、判定マーカーの濃度が生体内で低下している場合は、治療の継続の要否について、医師が判断する材料とすることができる。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００３９】
《参考例１：４−エチルフェニル硫酸の腎臓細胞に対する細胞増殖抑制》
本参考例では、腎臓細胞株ＬＬＣ−ＰＫ１を用いて、４−エチルフェニル硫酸の細胞毒性を検討した。
ＬＬＣ−ＰＫ１細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）添加Ｍｅｄｉｕｍ１９９（Ｍ１９９）を用いて、７５ｍＬフラスコを用いて培養した。トリプシン処理により、細胞を剥離した後、１０％ＦＢＳ添加Ｍ１９９を用いて洗浄した。細胞は血球計で計数した後、１．６×１０４／ｍＬとなるように１０％ＦＢＳ添加Ｍ１９９に懸濁した。この細胞懸濁液を２４ウェルプレートに０．５ｍＬ／ウェルで播種し、インキュベーターにて一晩培養した。試験物質（４−エチルフェノール硫酸もしくはインドキシル硫酸）を０，１，５，１０ｍｍｏｌ／Ｌで含有する２％ＦＢＳ添加Ｍ１９９を調製し、これを試験液とした。前記の一晩培養した２４ウェルプレートより上清を除去し、試験液を０．５ｍＬ／ウェル添加した。２日間培養した後、上清を除去し、新しく調整した試験液を０．５ｍＬ／ウェル添加し、１日培養した。試験液下で培養した細胞の数をＣｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ−８（同仁化学）を用いて計数した。０ｍｍｏｌ／Ｌ含有試験液の値を１００％とし、抑制効果を算出した。結果を図１に示す（平均±標準誤差，ｎ＝３）。
コントロールと比較すると、４−エチルフェニル硫酸を添加することによって、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞の増殖は、３日後に、１ｍｍｏｌ／Ｌで２８％程度、５ｍｍｏｌ／Ｌで６５％程度、１０ｍｍｏｌ／Ｌで８０％程度減少した。また、４−エチルフェニル硫酸による細胞増殖の抑制効果は、インドキシル硫酸と比較しても強かった。
【００４０】
《実施例１：健常人及び透析患者（透析前）の４−エチルフェニル硫酸濃度の分析》
本実施例では、健常人８人及び血液透析患者４５人について、血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定した。
血液透析患者は、一般的ＥＳＲＤ（End stage renal disease）であり、性別は男性２０人及び女性２５名、年齢は６２．３歳±５歳である。なお、健常人８人は、５０歳以上のボランティアである。
血液透析患者及び健常人から採血を行い、血清を分離した。血清をアセトニトリルで除タンパクし、５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液及びメタノールを用いてＬＣ／ＭＳ／ＭＳで測定した。血液透析患者の平均±ＳＥは、０．０２５±０．００４ｍｇ／ｄＬ、健常人の平均±ＳＥは、０．００５±０．００３ｍｇ／ｄＬであり、血液透析患者の方が高い平均値を示した。個別のデータを表１、表２及び図２に示す。
【００４１】
個別のデータでは、健常人は、Ｎｏ．６が０．０２３７ｍｇ／ｄＬと高い値を示したが、残りの７人は０．００００〜０．００４２ｍｇ／ｄＬの範囲であった。
一方、血液透析患者（透析前）は、０．０００〜０．１５５２ｍｇ／ｄＬの広い範囲に分布していた。ここで、０．００００〜０．００４２ｍｇ／ｄＬを健常人の範囲と仮定すると、Ｎｏ．４（０．０００４ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．８（０．００４１ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．１３（０．００１８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．１５（０．００１８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．１８（０．００１２ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．２０（０．００２８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．２２（０．０００５ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．２７（０．００２８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．３１（０．０００９ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．３２（０．００００ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．３６（０．００００ｍｇ／ｄＬ）、及びＮｏ．３９（０．００３９ｍｇ／ｄＬ）の１２人が健常人の範囲となる。この割合は、２８．６％（１２／４２）であり、血液透析患者において、４−エチルフェニル硫酸の濃度の個人によるバラツキは大きかった。
【００４２】
【表１】
【００４３】
《実施例２：透析患者の透析前後の４−エチルフェニル硫酸濃度の分析》
本実施例では、血液透析による４−エチルフェニル硫酸の除去について検討した。
健常人及び血液透析患者の透析前の血清に代えて、血液透析患者の透析後の血漿を用いてことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。実施例１の透析前のデータとともに、表２に透析後の血漿中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を示す。血液透析患者の平均±ＳＥは、０．０２２±０．００３４ｍｇ／ｄＬであり、透析前の値とほとんど変化がなかった。すなわち、血液透析では、４−エチルフェニル硫酸は除去することができなかった。
【００４４】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度を測定することにより、経口投与用吸着剤の投与を行うか否かの判定を行うことができる。特には、４−エチルフェニル硫酸は血液透析によって除去することができないため、血液透析患者における経口投与用吸着剤の投与の判定に効果的に用いることができる。更に、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度の分析は、慢性腎臓病の治療マーカー、又は心血管疾患の治療マーカーとして用いることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、及び経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法に関する。本発明によれば、血液中において、４−エチルフェニル硫酸の上昇した経口投与用吸着剤の投与対象を判定、及び経口投与用吸着剤の投与の治療効果を判定することが可能である。
【背景技術】
【０００２】
腎機能や肝機能の欠損患者らは、それらの臓器機能障害に伴って、血液中等の体内に有害な毒性物質が蓄積したり生成したりするので、慢性腎臓病による尿毒症や意識障害等の脳症をひきおこす。これらの患者数は年々増加する傾向を示しているため、これら欠損臓器に代わって毒性物質を体外へ除去する機能をもつ臓器代用機器あるいは治療薬の開発が重要な課題となっている。現在、人工腎臓としては、血液透析による有毒物質の除去方式が最も普及している。
【０００３】
一方、血液透析以外の治療法として、経口的な服用が可能で、腎臓や肝臓の機能障害を治療することができる経口投与用吸着剤が注目されている。例えば、特公昭６２−１１６１１号公報に記載の吸着剤は、特定の官能基を有する多孔性の球状活性炭からなり、生体に対する安全性や安定性が高く、同時に腸内での胆汁酸の存在下でも有毒物質の吸着性に優れ、しかも、消化酵素等の腸内有益成分の吸着が少ないという有益な選択吸着性を有し、また、便秘等の副作用の少ない経口投与用吸着剤として、例えば、肝腎機能障害患者に対して広く臨床的に利用されている。
【０００４】
前記慢性腎臓病における尿毒症毒素としては、インドキシル硫酸、ｐ−クレゾール硫酸、馬尿酸、フェニル硫酸、又はインドール酢酸が知られていた（非特許文献１）。これらの尿毒症物質を体内から取り除くために、前記血液透析又は経口投与用吸着剤の投与などが行われている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】「ジャーナル・オブ・クロマトグラフィーＢ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ）」（米国）２０１０年、第８７８巻、ｐ．２９９７〜３００２
【非特許文献１】「ジャーナル・オブ・マススペクトロメトリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）」（英国）２００４年、第３９巻、ｐ．６５５〜６６４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記非特許文献１には、４−エチルフェニル硫酸が、腎摘出の腎不全モデルラットの血液中で上昇することが記載されている（非特許文献１）。また、カドミウム由来の腎不全モデルラットの血液中においても、４−エチルフェニル硫酸が上昇することが報告されている（非特許文献２）。しかしながら、４−エチルフェニル硫酸が、ヒトの細胞に対して毒性を示すことは報告されていなかった。本発明者らは、尿毒症の原因物質として、４−エチルフェニル硫酸に着目し、その細胞に対する毒性について検討した。その結果、４−エチルフェニル硫酸が、腎細胞に毒性を示すことを見出した。更に、４−エチルフェニル硫酸のヒトの血液中の濃度について検討したところ、個体によってバラツキが大きく、例えば腎臓病の患者でも、４−エチルフェニル硫酸の濃度が高い患者と、健常人と同程度の患者がいることを見出した。また、透析患者においては、血液中の４−エチルフェニル硫酸が、透析により除去されず、４−エチルフェニル硫酸の濃度を低下させることはできなかった。なお、４−エチルフェニル硫酸のヒトの血液中の濃度は、球状活性炭を含む経口投与用吸着剤によって、減少させることができる。
従って、本発明の目的は、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が上昇している経口投与用吸着剤の投与を必要としている患者と、必要としていない患者とを判別する方法、すなわち経口投与用吸着剤による治療対象を検出する方法を提供することである。
更に、本発明の目的は、投与用吸着剤の投与によって、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が低下したか否かを判定する方法、すなわち経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果を判定する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、４−エチルフェニル硫酸の細胞毒性について、鋭意研究した結果、腎細胞に毒性を示すことを見出した。前記のように、４−エチルフェニル硫酸のヒトの血液中の濃度は、個人によってバラツキがある。また、血液透析によって、４−エチルフェニル硫酸が除去されないことから、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が高い患者には、球状活性炭を含む経口投与用吸着剤を投与する必要があることを見出した。
更に、本発明者らは、４−エチルフェニル硫酸が、血管内皮細胞にも、毒性を示すことを見出した。従って、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が高い患者は、血管内皮細胞への障害を介して、心血管疾患を発症する可能性があり、それを予防するために、経口投与用吸着剤の投与が有効である。そして、投与対象を判別するために、ヒトの血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定することは有用である。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
【０００８】
すなわち、本発明は、
［１］ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［２］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［１］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［３］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［２］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［４］前記投与対象が心血管疾患患者である、［１］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法、
［５］ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法、
［６］投与対象が慢性腎臓病患者である、［５］に記載の治療効果の判定方法、
［７］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［６］に記載の治療効果の判定方法、
［８］前記投与対象が心血管疾患患者である、［５］に記載の治療効果の判定方法、
［９］４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１０］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［９］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１１］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［１０］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１２］前記投与対象が心血管疾患患者である、［９］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット、
［１３］４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１４］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［１３］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１５］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［１４］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１６］前記投与対象が心血管疾患患者である、［１３］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット、
［１７］４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［１８］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［１７］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［１９］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［１８］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［２０］前記投与対象が心血管疾患患者である、［１７］に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー、
［２１］４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、
［２２］前記投与対象が慢性腎臓病患者である、［２１］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、
［２３］前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、［２２］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、及び
［２４］前記投与対象が心血管疾患患者である、［２１］に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー、
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の経口投与用吸着剤の投与治療対象の検出方法によれば、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度を分析することによって、経口投与用吸着剤を投与すべき対象を判別することができる。更に、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度の分析は、経口投与用吸着剤の治療効果の判定に用いることができる。４−エチルフェニル硫酸は、尿毒症毒素であり、また心血管疾患との関連性がある。従って、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度の分析は、慢性腎臓病の治療マーカー、又は心血管疾患の治療マーカーとして用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】４−エチルフェニル硫酸による細胞増殖の抑制効果を示したグラフである。コントロールとして、４−エチルフェニル硫酸による細胞増殖の抑制効果を示す。
【図２】健常人、並びに血液透析患者の透析前及び透析後の血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度をプロットしたグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする。
【００１２】
（４−エチルフェニル硫酸）
４−エチルフェニル硫酸（以下、４ＥｔＰｈＳと称することがある）は、４−エチルフェノールが、体内（肝臓）において硫酸エステル化されたものであり、式（１）
【化１】
で表される化合物である。４−エチルフェニル硫酸は、腎臓細胞（ＬＬＣ−ＰＫ１細胞）に対して、増殖阻害活性を示す。また、血管内皮細胞に対しても、障害活性を示す。
【００１３】
（４−エチルフェニル硫酸の分析方法）
４−エチルフェニル硫酸の分析方法は、血液中の濃度を分析可能な方法であれば、特に限定されるものではないが、ガスクロマトグラフィーを用いる方法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法、及び質量分析法、又は免疫学的分析法などを用いることができ、特には、質量分析法が好ましい。
【００１４】
質量分析法は、特に限定されるものではないが、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いる質量分析法、ガスクロマトクラフィー（ＧＣ）を用いる質量分析法、及びキャピラリー電気泳動（ＣＥ）を用いる質量分析法（以下、ＣＥ−ＭＳ法と称する）を挙げることができ、特には、ＬＣ／ＭＳ法の１つである液体クロマトグラフィー質量分析法（以下、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法と称する）が好ましい。
【００１５】
前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法における、高速液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に用いることのできるカラムとしては、逆相クロマトグラフィーカラムが好ましい。逆相クロマトグラフィーカラムとしては、オクタデシルシリル化シリカゲル（ＯＤＳ）系カラムが好ましく、例えばＳｈｉｍ−Ｐａｃｋ ＶＰ−ＯＤＳ（島津製作所）、又はＡｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８（日本ウォーターズ）を挙げることができる。
【００１６】
高速液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に用いる移動相は、質量分析に用いることができれば特に限定されるものではないが、揮発性緩衝系の移動相を用いることができ、例えば、酢酸緩衝液としては、酢酸アンモニウム水溶液、又はギ酸アンモニウムを挙げることができる。
【００１７】
移動相の流速は特に限定されるものではないが、例えば、０．２ｍＬ／ｍｉｎで行うことができる。
【００１８】
前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法における４−エチルフェニル硫酸のイオン化法としては、例えば、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、サーモスプレーイオン化（ＴＳＰ）、パーティクルビーム法（ＰＢ）、大気圧光イオン化法（ＡＰＰＩ）及び連続フロー高速原子衝撃（ＣＦ−ＦＡＢ）を挙げることができる。この中でもＥＳＩが好ましい。
【００１９】
免疫学的分析法としては、４−エチルフェニル硫酸に結合する抗体を用いるものであれば、特に限定されるものではないが、例えば、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、免疫組織染色法、又はウエスタンブロットによって行うことができるが、酵素免疫測定法、化学発光免疫測定法、又は放射免疫測定法の原理を用いたサンドイッチ法が好ましい。
【００２０】
ヒト由来の液体試料は、４−エチルフェニル硫酸が含まれる可能性のある試料であれば特に限定されるものではなく、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、組織液、唾液、尿、涙、汗などを挙げることができるが、特には血清又は血漿が好ましい。ヒトの血漿を生体試料として用いる場合は、血液を血液凝固剤（例えば、ＥＤＴＡ）の入った採血管で採血し、遠心分離により血球成分を除いて、用いることができる。
なお、ネコ又はイヌの４−エチルフェニル硫酸による尿毒症の治療を目的として、経口投与用吸着剤を投与する場合は、ネコ又はイヌ由来の液体試料を用いることもできる。
【００２１】
（投与対象）
経口投与用吸着剤の投与対象は、液体試料中の４−エチルフェニル硫酸の濃度が高い患者であれば、特に限定されるものではない。すなわち、４−エチルフェニル硫酸の液体試料中の濃度が高いすべての患者を、経口投与用吸着剤の投与対象とすることができる。具体的には、限定されるものではないが、経口投与用吸着剤の投与対象として、慢性腎臓病患者、又は心血管疾患患者を挙げることができる。
【００２２】
（慢性腎臓病患者）
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、慢性腎臓病患者において、特に有用である。
４−エチルフェニル硫酸は、実施例で示すように、腎臓細胞に対する細胞増殖抑制効果を有している。すなわち、慢性腎臓病患者における尿毒症毒素の１つである。しかしながら、慢性腎臓病患者における血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度は、０．０００〜０．１５５２ｍｇ／ｄＬの広い範囲に分布している。血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度の低い患者は、治療の必要がない可能性が高く、４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定し、治療の必要な患者と、治療の必要のない患者を判定することは有用である。
【００２３】
更に、４−エチルフェニル硫酸は、血液透析によって、ほとんど除去することができない。一方、経口投与用吸着剤の投与によって、血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度は、劇的に減少する。従って、血液透析を行っている患者において、血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定し、濃度の高い患者において経口投与用吸着剤の投与の判定を行うことは、有用である。
【００２４】
（心血管疾患患者）
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、心血管疾患患者において、特に有効である。例えば、心血管疾患である動脈硬化症は、脂質異常症、肥満、糖尿病、高血圧、喫煙、インシュリン抵抗性、高ホモシステイン血症、運動不足、慢性腎不全、又はストレスなどの危険因子が単独で、又はそれらの組み合わせによって発症すると考えられる。具体的には、それぞれの危険因子において、血管内皮を障害する物質が存在すると考えられており、例えば、高血圧の場合はアンジオテンシンＩＩが、脂質異常症の場合は酸化ＬＤＬコレステロールが、肥満の場合はＴＮＦ−αが、そして糖尿病の場合はフリーラジカルが、血管内皮の傷害を引き起こす物質であると考えられている。
４−エチルフェニル硫酸は、血管内皮細胞に対して毒性を示すことから、心血管疾患患者における血管内皮の傷害を引き起こす物質であると考えられる。従って、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析し、４−エチルフェニル硫酸濃度の高い患者に対する、経口投与用吸着剤の投与の判定を行うことは有用である。
【００２５】
（健常人）
一般的に、健常人は経口投与用吸着剤の投与対象には含まれない。但し、本願明細書において、健常人とは血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度が低いヒトを意味し、４−エチルフェニル硫酸の濃度が高く、障害を起こしている患者は含まれない。
【００２６】
（経口投与用吸着剤投与の判定基準）
経口投与用吸着剤は、４−エチルフェニル硫酸の血液中の濃度が高い患者に対して、投与されるものであり、経口投与用吸着剤投与の判定基準は、医師の判断に従えばよく特に限定されるものではないが、例えば制御された臨床試験により決定されることが好ましい。
具体的な判定基準としては、例えば、健常者の平均値を超える血液濃度の患者に経口投与用吸着剤の投与の判断を行うことも可能であるし、健常者の９０％が含まれる範囲の上限値を超える血液濃度の患者に経口投与用吸着剤の投与の判断を行うことも可能である。更に、平均値±ＳＤ、平均値±２ＳＤ、若しくは平均値±３ＳＤ、又は平均値±ＳＥ、平均値±２ＳＥ、若しくは平均値±３ＳＥを目安として、経口投与用吸着剤の投与の判断を行うこともできる。
例えば、後述の実施例においては、健常者の８人のうち、０．０２３７ｍｇ／ｄＬの高い値を示した１人を除く、７人の０．００００〜０．００４２ｍｇ／ｄＬを健常人の範囲と便宜的に仮定し、０．００４２ｍｇ／ｄＬを超える患者を、４−エチルフェニル硫酸の高い患者であると判断した。
【００２７】
（経口投与用吸着剤）
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法によって、対象と判定された患者に対して投与される経口投与用吸着剤は、４−エチルフェニル硫酸を吸着することができる限りにおいて、特に限定されるものではないが、医療用に使用することが可能な球状活性炭、すなわち、医療用に内服使用することが可能な経口投与用球状活性炭を含むものが好ましい。
【００２８】
前記球状活性炭の平均粒子径は、特に限定されるものではないが、０．０２〜１ｍｍが好ましく、０．０３〜０．９０ｍｍがより好ましく、０．０５〜０．８０ｍｍが更に好ましい。また、前記球状活性炭の粒径（直径）の範囲は、０．０１〜２ｍｍであることが好ましく、０．０２〜１．５ｍｍであることがより好ましく、０．０３〜１ｍｍであることが更に好ましい。「球状活性炭」とは、比表面積が１００ｍ２／ｇ以上であるものを意味するが、本発明に用いる球状活性炭の比表面積は５００ｍ２／ｇ以上が好ましく、７００ｍ２／ｇ以上がより好ましく、１３００ｍ２／ｇ以上が更に好ましく、１６５０ｍ２／ｇ以上が特に好ましい。
より具体的には、例えば、特開平１１−２９２７７０号公報、特開２００２−３０８７８５号公報（特許第３５２２７０８号公報）、ＷＯ２００４／３９３８１号公報、ＷＯ２００４／３９３８０号公報、特開２００５−３１４４１５号公報、特開２００５−３１４４１６号公報、特開２００４−２４４４１４号公報、特開２００７−１９７３３８号公報、及び特開２００８−３０３１９３号公報に記載の球状活性炭を挙げることができる。
【００２９】
２．経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法
本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法は、ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする。ヒトの体液例えば血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度は、経口投与用吸着剤の投与により、減少する。しかしながら、４−エチルフェニル硫酸濃度の減少の程度は、ヒトにより異なるため、４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定することにより、経口投与用吸着剤の投与の効果を判定することが可能である。
【００３０】
本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法においては、前記の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法における「４−エチルフェニル硫酸の分析方法」を用いることができる。
【００３１】
更に、治療対象は、体液試料中の４−エチルフェニル硫酸が高い患者であれば、特に限定されるものではないが、慢性腎臓病患者（特には、透析治療患者）、又は心血管疾患患者を挙げることができる。
【００３２】
３．経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット及び経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キットは、４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とするものであり、前記経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法に用いることができる。
４−エチルフェニル硫酸は、特に限定されるものはないが、４−エチルフェニル硫酸の分析において、標準物質として含まれてもよい。すなわち、ガスクロマトグラフィーを用いる方法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法、及び質量分析法、又は免疫学的分析法において、検体中の分析される４−エチルフェニル硫酸の標準物質として使用されることができる。
【００３３】
また、前記４−エチルフェニル硫酸の分析が免疫学的分析法の場合は、経口投与用吸着剤の投与対象の検出キットは、４−エチルフェニル硫酸に対する抗体（例えば、モノクローナル抗体、若しくはポリクローナル抗体、又はその抗原結合性断片）を含むことができる。抗体を含むことによって、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、免疫組織染色法、又はウエスタンブロットを行うことができる。
【００３４】
また、本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キットは４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とするものであり、前記経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法に用いることができる。
また、本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キットは、前記経口投与用吸着剤の投与対象の検出キットと同じ構成とすることができる。
【００３５】
本発明の検出キット又は判定キットは、経口投与用吸着剤の投与対象の検出用である旨、又は経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定用である旨を明記した使用説明書を含むことができる。経口投与用吸着剤の投与対象の検出用又は経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定用である旨の記載は、分析キットの容器に付されていてもよい。
【００３６】
４．経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー及び経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカーは、４−エチルフェニル硫酸を含むか、又は４−エチルフェニル硫酸からなるものである。本発明の検出マーカーを用いることにより、経口投与用吸着剤の投与対象の検出を行うことができる。従って、経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカーは、前記経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法に用いることができる。
本発明の検出マーカーの濃度が生体内で上昇している場合、経口投与用吸着剤の投与を行うことが望ましい。
【００３７】
本発明の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカーは、４−エチルフェニル硫酸を含むか、又は４−エチルフェニル硫酸からなるものである。本発明の判定マーカーを用いることにより、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定を行うことができる。従って、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカーは、前記経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法に用いることができる。
本発明の判定マーカーの濃度が生体内で上昇している場合、経口投与用吸着剤の投与を継続することが望ましく、判定マーカーの濃度が生体内で低下している場合は、治療の継続の要否について、医師が判断する材料とすることができる。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００３９】
《参考例１：４−エチルフェニル硫酸の腎臓細胞に対する細胞増殖抑制》
本参考例では、腎臓細胞株ＬＬＣ−ＰＫ１を用いて、４−エチルフェニル硫酸の細胞毒性を検討した。
ＬＬＣ−ＰＫ１細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）添加Ｍｅｄｉｕｍ１９９（Ｍ１９９）を用いて、７５ｍＬフラスコを用いて培養した。トリプシン処理により、細胞を剥離した後、１０％ＦＢＳ添加Ｍ１９９を用いて洗浄した。細胞は血球計で計数した後、１．６×１０４／ｍＬとなるように１０％ＦＢＳ添加Ｍ１９９に懸濁した。この細胞懸濁液を２４ウェルプレートに０．５ｍＬ／ウェルで播種し、インキュベーターにて一晩培養した。試験物質（４−エチルフェノール硫酸もしくはインドキシル硫酸）を０，１，５，１０ｍｍｏｌ／Ｌで含有する２％ＦＢＳ添加Ｍ１９９を調製し、これを試験液とした。前記の一晩培養した２４ウェルプレートより上清を除去し、試験液を０．５ｍＬ／ウェル添加した。２日間培養した後、上清を除去し、新しく調整した試験液を０．５ｍＬ／ウェル添加し、１日培養した。試験液下で培養した細胞の数をＣｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ−８（同仁化学）を用いて計数した。０ｍｍｏｌ／Ｌ含有試験液の値を１００％とし、抑制効果を算出した。結果を図１に示す（平均±標準誤差，ｎ＝３）。
コントロールと比較すると、４−エチルフェニル硫酸を添加することによって、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞の増殖は、３日後に、１ｍｍｏｌ／Ｌで２８％程度、５ｍｍｏｌ／Ｌで６５％程度、１０ｍｍｏｌ／Ｌで８０％程度減少した。また、４−エチルフェニル硫酸による細胞増殖の抑制効果は、インドキシル硫酸と比較しても強かった。
【００４０】
《実施例１：健常人及び透析患者（透析前）の４−エチルフェニル硫酸濃度の分析》
本実施例では、健常人８人及び血液透析患者４５人について、血液中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を測定した。
血液透析患者は、一般的ＥＳＲＤ（End stage renal disease）であり、性別は男性２０人及び女性２５名、年齢は６２．３歳±５歳である。なお、健常人８人は、５０歳以上のボランティアである。
血液透析患者及び健常人から採血を行い、血清を分離した。血清をアセトニトリルで除タンパクし、５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液及びメタノールを用いてＬＣ／ＭＳ／ＭＳで測定した。血液透析患者の平均±ＳＥは、０．０２５±０．００４ｍｇ／ｄＬ、健常人の平均±ＳＥは、０．００５±０．００３ｍｇ／ｄＬであり、血液透析患者の方が高い平均値を示した。個別のデータを表１、表２及び図２に示す。
【００４１】
個別のデータでは、健常人は、Ｎｏ．６が０．０２３７ｍｇ／ｄＬと高い値を示したが、残りの７人は０．００００〜０．００４２ｍｇ／ｄＬの範囲であった。
一方、血液透析患者（透析前）は、０．０００〜０．１５５２ｍｇ／ｄＬの広い範囲に分布していた。ここで、０．００００〜０．００４２ｍｇ／ｄＬを健常人の範囲と仮定すると、Ｎｏ．４（０．０００４ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．８（０．００４１ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．１３（０．００１８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．１５（０．００１８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．１８（０．００１２ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．２０（０．００２８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．２２（０．０００５ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．２７（０．００２８ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．３１（０．０００９ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．３２（０．００００ｍｇ／ｄＬ）、Ｎｏ．３６（０．００００ｍｇ／ｄＬ）、及びＮｏ．３９（０．００３９ｍｇ／ｄＬ）の１２人が健常人の範囲となる。この割合は、２８．６％（１２／４２）であり、血液透析患者において、４−エチルフェニル硫酸の濃度の個人によるバラツキは大きかった。
【００４２】
【表１】
【００４３】
《実施例２：透析患者の透析前後の４−エチルフェニル硫酸濃度の分析》
本実施例では、血液透析による４−エチルフェニル硫酸の除去について検討した。
健常人及び血液透析患者の透析前の血清に代えて、血液透析患者の透析後の血漿を用いてことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。実施例１の透析前のデータとともに、表２に透析後の血漿中の４−エチルフェニル硫酸の濃度を示す。血液透析患者の平均±ＳＥは、０．０２２±０．００３４ｍｇ／ｄＬであり、透析前の値とほとんど変化がなかった。すなわち、血液透析では、４−エチルフェニル硫酸は除去することができなかった。
【００４４】
【表２】
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法は、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度を測定することにより、経口投与用吸着剤の投与を行うか否かの判定を行うことができる。特には、４−エチルフェニル硫酸は血液透析によって除去することができないため、血液透析患者における経口投与用吸着剤の投与の判定に効果的に用いることができる。更に、４−エチルフェニル硫酸の血液濃度の分析は、慢性腎臓病の治療マーカー、又は心血管疾患の治療マーカーとして用いることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項２】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項１に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項３】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項２に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項４】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項１に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項５】
ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法。
【請求項６】
投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項５に記載の治療効果の判定方法。
【請求項７】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項６に記載の治療効果の判定方法。
【請求項８】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項５に記載の治療効果の判定方法。
【請求項９】
４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１０】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項９に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１１】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項１０に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１２】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項９に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１３】
４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１４】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項１３に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１５】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項１４に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１６】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項１３に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１７】
４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項１８】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項１７に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項１９】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項１８に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項２０】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項１７に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項２１】
４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項２２】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項２１に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項２３】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項２２に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項２４】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項２１に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項１】
ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項２】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項１に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項３】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項２に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項４】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項１に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出方法。
【請求項５】
ヒト由来の液体試料中の４−エチルフェニル硫酸濃度を分析することを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定方法。
【請求項６】
投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項５に記載の治療効果の判定方法。
【請求項７】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項６に記載の治療効果の判定方法。
【請求項８】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項５に記載の治療効果の判定方法。
【請求項９】
４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１０】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項９に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１１】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項１０に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１２】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項９に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出キット。
【請求項１３】
４−エチルフェニル硫酸を含むことを特徴とする、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１４】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項１３に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１５】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項１４に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１６】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項１３に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定キット。
【請求項１７】
４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項１８】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項１７に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項１９】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項１８に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項２０】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項１７に記載の経口投与用吸着剤の投与対象の検出マーカー。
【請求項２１】
４−エチルフェニル硫酸を含む、経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項２２】
前記投与対象が慢性腎臓病患者である、請求項２１に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項２３】
前記慢性腎臓病患者が透析治療患者である、請求項２２に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【請求項２４】
前記投与対象が心血管疾患患者である、請求項２１に記載の経口投与用吸着剤の対象への投与による治療効果の判定マーカー。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−２３７６２３（Ｐ２０１２−２３７６２３Ａ）
【公開日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１０６１１５（Ｐ２０１１−１０６１１５）
【出願日】平成２３年５月１１日（２０１１．５．１１）
【出願人】（０００００１１００）株式会社クレハ (477)
【出願人】（５０４１３９６６２）国立大学法人名古屋大学 (996)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年５月１１日（２０１１．５．１１）
【出願人】（０００００１１００）株式会社クレハ (477)
【出願人】（５０４１３９６６２）国立大学法人名古屋大学 (996)
【Ｆターム（参考）】
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