経口組成物
【課題】分子中に１つ以上α−１，３−グルコシド結合を含む重合度２〜１０程度のオリゴ糖であるニゲロオリゴ糖を有効成分とする経口組成物によりアルコールを含有する飲食物の経口摂取にあたり、その摂取量を調節することを可能とする。
【解決手段】副作用の可能性が極めて少なく、安価且つ簡便に得られるアルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有する分子中に１つ以上α−１，３−グルコシド結合を含む重合度２〜１０程度のオリゴ糖であるニゲロオリゴ糖を有効成分とする経口組成物を提供する。
【解決手段】副作用の可能性が極めて少なく、安価且つ簡便に得られるアルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有する分子中に１つ以上α−１，３−グルコシド結合を含む重合度２〜１０程度のオリゴ糖であるニゲロオリゴ糖を有効成分とする経口組成物を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有する経口組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
飲酒を行うと、体内でエタノールは、先ずアルコールデヒドロゲナーゼの作用によりアセトアルデヒドに代謝され、次いでアルデヒドデヒドロゲナーゼにより酢酸に代謝される。
【０００３】
アルデヒドデヒドロゲナーゼの働きが阻害されると、血中にアセトアルデヒドが蓄積し、悪心、嘔吐等の不快な症状をもたらす。アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用を有する物質を服用した後に、アルコールを摂取すると、上記のような不快な症状が引き起こされることにより、アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤は、アルコール依存症患者に断酒を行わせる嫌酒薬として用いられている。
【０００４】
現在、臨床に用いられている嫌酒薬としては、非特許文献１に記載のジスルフィラム、非特許文献２に記載のシアナミドなどの合成化合物がある。また、特許文献３において天然由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤が開示されている。
【非特許文献１】Ｋｉｔｓｏｎ，Ｔ．Ｍ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７５，８３−９０ （１９７８）
【非特許文献２】ＤｅＭａｓｔｅｒ， Ｅ．Ｇ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０７，１３３３−１３３９
【特許文献３】特開２００３−７３３２９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ジスルフィラム、シアナミドは、情緒不安定、めまい、倦怠感などの副作用をもたらす場合がある。
【０００６】
特許文献３のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤は、微量にしか存在せず抽出方法が煩雑であるため、工業化には至っていない。そこで、容易に得られ、かつ副作用の可能性の少ない新たな物質の提供が望まれていた。
【０００７】
ニゲロオリゴ糖は、天然に存在する糖質であり、従来のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤のような副作用などはない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、食品成分であり安全性に優れかつ工業的に提供可能なニゲロオリゴ糖を含有する経口組成物にアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用を見いだし、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００９】
ニゲロオリゴ糖を含有する経口組成物は、副作用や経口による摂取量の制限なしにアルデヒドデヒドロゲナーゼを阻害することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のニゲロオリゴ糖は、分子中に１つ以上α−１，３−グルコシド結合を含む重合度２〜１０程度のオリゴ糖のことであり、α−１，３−グルコシド結合のみからなるオリゴ糖の他、α−１，３−グルコシド結合とそれ以外の結合とからなるオリゴ糖も含む。
【００１１】
例えばニゲロース（重合度２）、４−α−ニゲロシルグルコース（重合度３）、ニゲロトリオース（重合度３）、３２−Ｏ−α−ニゲロシルマルトース（重合度４）、３２−Ｏ−α−マルトシルマルトース（重合度４）、４２−α−ニゲロシルマルトース（重合度４）などが例示されるが特に限定されるものではない。
【００１２】
本発明の経口組成物に含まれるニゲロオリゴ糖は、１種類のニゲロオリゴ糖だけでなく、２種以上のニゲロオリゴ糖の混合物でもよい。
【００１３】
本発明の経口組成物は、食品及び医薬として使用できるものであれば蛋白質、炭水化物、脂質などを含むことが出来る。
【００１４】
さらにグルコース、フルクトース、ショ糖、乳糖、マルトース、トレハロース、マルトオリゴ糖、分岐オリゴ糖、他の糖類を含有させてもよい。
【００１５】
発明の効果を得る為に必要な経口組成物の摂取量に特に制限はなく、ニゲロオリゴ糖の含量として５〜３０ｇ程度の摂取が好ましく、それ以上の摂取は、飲食に困難を伴うので好ましくない
【００１６】
本発明の経口組成物の形態は、特に制限はないが、本発明の経口組成物に含まれるニゲロオリゴ糖は、濃縮、噴霧乾燥や造粒乾燥等による粉末化、成形等の操作を行って、液状品、粉末品、顆粒品、成形品、他の成分との混合品等の各種形態の製品とすることができる。
【００１７】
ニゲロオリゴ糖を得る方法は、特に限定されないが、例えばデンプンを原料として酵素的に糖転移反応・縮合反応を利用する方法が開示されている（特開平９−２９９０９５， 特開２００３−１６９６６５）ほか、α−１，３−およびα−１，６−グルコシド結合からなる環状四糖に酢酸を作用させ得る方法（日本農芸化学会２００３年度大会講演要旨集 ｐ．６８）などが挙げられる。
【００１８】
より詳細には、原料として、澱粉、マルトース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖及びデキストリンから選ばれた少なくとも１種が用いられる。この場合、澱粉としては、例えば、馬鈴薯澱粉、甘藷澱粉、コーンスターチ、ワキシーコーンスターチ、キャッサバ澱粉等が好ましく用いられるが、これらの澱粉を液化させた澱粉液化液を用いることもできる。
【００１９】
澱粉液化液は常法に従って調製することができ、例えば、澱粉を加熱糊化させた後、α−アミラーゼを添加して調製する。なお、澱粉液化液は、濃度１０〜３５重量％、グルコース当量０．５ 〜２０程度のものが好ましい。
【００２０】
マルトース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖としては、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース等の、α−１，４−グルコシド結合を有し、グルコース重合度が２〜１０のオリゴ糖を用いることができる。
【００２１】
デキストリンとしては、例えば、マルトデキストリン、分岐デキストリン、焙焼デキストリン等を用いることが好ましい。
【００２２】
ニゲロオリゴ糖の製造法において、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素は、周知のいずれの起源のものであってもよく、それぞれの酵素に応じた反応条件下に用いることが好ましい。原料として、澱粉、デキストリンを用いる場合には、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を作用させることにより、グルコース重合度２以上の糖を高含有量で含有する糖液を得ることができる。
【００２３】
また、原料としてマルトオリゴ糖を用いる場合にも、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を作用させることにより、マルトース、マルトトリオースなどの、ニゲロオリゴ糖生成酵素が反応しやすい糖を多く含有する糖液が得られる。このようにして調製された糖液を、糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素の基質とする。
【００２４】
糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素は、糖転移・縮合反応によりα−１，３−グルコシド結合を生成する酵素であればよいが、例えば、特開平９−２９９０９５や特開２００４−１０５０７２に開示されているアクレモニウムに属する菌株が生産するニゲロオリゴ糖生成酵素や特開２００３−１６９６６５号公報に開示されているペシロマイセスに属する菌株が生産するα−グルコシダーゼが好ましく用いられる。上記アクレモニウムに属する菌株としては、例えばアクレモニウム ｓｐ． Ｓ４Ｇ１３株（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ． Ｓ４Ｇ１３、ＦＥＲＭ ＢＰ−４３７３）が好ましく採用される。ニゲロオリゴ糖生成酵素は、例えば上記菌株を好気的に培養して、培養物中にニゲロオリゴ糖生成酵素を蓄積させ、これを採取することにより得ることができる。
【００２５】
糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素を、前記糖液からなる基質に反応させる条件は、それぞれの酵素に応じた条件とすることが好ましい。例えば、上記アクレモニウムに属する菌株が生産するニゲロオリゴ糖生成酵素を使用する場合には、基質１ｇ当たりニゲロオリゴ糖生成酵素を０．０１〜５単位添加し、ｐＨ４〜１０、３０〜７０℃の条件下に作用させることが好ましい。
【００２６】
なお、ニゲロオリゴ糖生成酵素の酵素活性は、ｐＨ ７．０ の２０ｍＭリン酸緩衝液に、マルトースを０．６６重量％濃度で溶解させたマルトース溶液０．７５ｍｌに、０．２５ｍｌの酵素溶液を加えて、３７℃で反応させた際に、基質のマルトースから、１分間に１ｍｍｏｌ のグルコースを生成する酵素量を１単位と定義する。
【００２７】
本発明においては、澱粉、マルトース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖及びデキストリンから選ばれた少なくとも１種からなる原料に、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を作用させた後、糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素を作用させてもよく、あるいはこれらの酵素を同時に作用させてもよい。
【００２８】
なお、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種と、糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素とを同時に作用させる場合、それぞれの酵素の反応条件において一致する条件の範囲で反応させることが好ましい。また、上記のような反応を行い、ニゲロオリゴ糖を含有するシロップが市販されている（日食テイストオリゴ、日本食品化工株式会社製）。
【００２９】
こうして得られたニゲロオリゴ糖を含有する糖液は、必要に応じて更に精製して、ニゲロオリゴ糖含量を高くすることもできる。精製の方法としては、例えば、糖液にアルコール類等の有機溶媒を添加してオリゴ糖類を沈殿分別する方法、活性炭カラム、ゲル濾過等の分子量による分離法を採用したクロマトグラフィー、あるいはイオン交換樹脂を用いたクロマト分画によりニゲロオリゴ糖以外の糖類を除去する方法、シラップに酵母を添加して発酵性糖類を資化させる方法等が挙げられる。
【００３０】
上記ようにして得られたニゲロオリゴ糖は、通常の飲食物用途に供する程度の品質にするため、必要に応じて、活性炭による脱色及び脱臭、イオン交換樹脂等による脱イオン、クロマト分離等による含有量の調整等を行って精製することができる。
【００３１】
なお、本発明において、アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用を示すか否かを判断する方法としては、例えば後記実施例に示す通り、公知のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用の評価方法を用いることができる。
【００３２】
本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤であるニゲロオリゴ糖による香料の品質方法は、特に限定されないが、一般に製剤上許容される１または２種類以上の担体、賦型剤、統合剤、防腐剤、安定剤等と共に混合して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水薬、ドリンク剤等の内服剤型とすることができる。このような製剤化は、通常、香料や医薬品の製造に用いられる方法に従って製剤化することができる。
【実施例１】
【００３３】
ニゲロオリゴ糖を固形分あたり４０ ％以上含有する市販ニゲロオリゴ糖含有シラップ（日食テイストオリゴ、日本食品化工株式会社製）１０ ｋｇを原料に、以下のようにニゲロースを調製した。
【００３４】
この水溶液を珪藻土ろ過、活性炭による脱色、イオン交換樹脂による精製を行った後、固形分濃度５０％まで濃縮し、ニゲロオリゴ糖を９５％含有するシラップ１８ ｋｇを得た。このシロップをスプレドライヤーを用いて噴霧乾燥することにより、白色のニゲロオリゴ糖を９５％含有する粉末１６ｋｇを得た。
【実施例２】
【００３５】
ニゲロオリゴ糖を９５％含有する白色粉末を固形分濃度が５０％になるよう水に溶解し、このシラップをあらかじめ水で平衡化された活性炭カラムに供し、グルコースを除去後２％エタノール溶液によりニゲロースを溶出させた。溶出した画分を回収し、ろ過、濃縮操作によるエタノールを除去、イオン交換樹脂による精製後、凍結乾燥し粉末を画分 ２００ｇ を得た。その糖組成は、グルコース ２ ％、ニゲロース ９６ ％、３糖類 ２ ％）であった。なお、糖組成の分析方法は、高速液体クロマトグラフィーを用い、分析条件は以下の通りである。
【００３６】
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ２Ｐ−５０ ４Ｅ （４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍｍ）
溶離液：アセトニトリル／水＝７５／２５
流速：０．９ ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
カラム温度：３０℃
【実施例３】
【００３７】
実施例１で得られたニゲロオリゴ糖とショ糖、マルトース、イソマルトオリゴ糖（日食バイオトース）のアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性の阻害を以下のように評価した。
【００３８】
試験管に酵母由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼ（０．１Ｕ） １０ ｍｌおよびエタノールで４０ ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したニゲロオリゴ糖、砂糖、マルトース、イソマルトオリゴ糖もしくは、エタノール（コントロール） １０ ｍｌ、５０ ｍＭ ピロリン酸緩衝液（ｐＨ ８．８） １８０ ｍｌをそれぞれ加え、２２℃にて１５分間保持した。
【００３９】
これに２６．４ ｍＭ ＮＡＤ＋を１０ ｍｌ添加し、次いで７．５ ｍＭのアセトアルデヒド １０ ｍｌ添加した。アセトアルデヒドを添加したときを反応開始点とした。反応は、３４０ ｎｍの吸光度の増加を測定することで行った。阻害率の判定は、次のように行った。
【００４０】
反応開始点から反応初速段階９０秒後の吸光度の経時変化を取り、この近似曲線を求めた。近似曲線の傾きをコントロールと比較することにより阻害率を算出した。その結果を図１に示す。
【実施例４】
【００４１】
実施例２で得られたニゲロースをエタノールで４０， ４， ０．４ ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、実施例３と同様な方法でアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性の阻害を評価した。その結果を、図２に示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有する経口組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
飲酒を行うと、体内でエタノールは、先ずアルコールデヒドロゲナーゼの作用によりアセトアルデヒドに代謝され、次いでアルデヒドデヒドロゲナーゼにより酢酸に代謝される。
【０００３】
アルデヒドデヒドロゲナーゼの働きが阻害されると、血中にアセトアルデヒドが蓄積し、悪心、嘔吐等の不快な症状をもたらす。アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用を有する物質を服用した後に、アルコールを摂取すると、上記のような不快な症状が引き起こされることにより、アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤は、アルコール依存症患者に断酒を行わせる嫌酒薬として用いられている。
【０００４】
現在、臨床に用いられている嫌酒薬としては、非特許文献１に記載のジスルフィラム、非特許文献２に記載のシアナミドなどの合成化合物がある。また、特許文献３において天然由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤が開示されている。
【非特許文献１】Ｋｉｔｓｏｎ，Ｔ．Ｍ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７５，８３−９０ （１９７８）
【非特許文献２】ＤｅＭａｓｔｅｒ， Ｅ．Ｇ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０７，１３３３−１３３９
【特許文献３】特開２００３−７３３２９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ジスルフィラム、シアナミドは、情緒不安定、めまい、倦怠感などの副作用をもたらす場合がある。
【０００６】
特許文献３のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤は、微量にしか存在せず抽出方法が煩雑であるため、工業化には至っていない。そこで、容易に得られ、かつ副作用の可能性の少ない新たな物質の提供が望まれていた。
【０００７】
ニゲロオリゴ糖は、天然に存在する糖質であり、従来のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤のような副作用などはない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、食品成分であり安全性に優れかつ工業的に提供可能なニゲロオリゴ糖を含有する経口組成物にアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用を見いだし、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００９】
ニゲロオリゴ糖を含有する経口組成物は、副作用や経口による摂取量の制限なしにアルデヒドデヒドロゲナーゼを阻害することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のニゲロオリゴ糖は、分子中に１つ以上α−１，３−グルコシド結合を含む重合度２〜１０程度のオリゴ糖のことであり、α−１，３−グルコシド結合のみからなるオリゴ糖の他、α−１，３−グルコシド結合とそれ以外の結合とからなるオリゴ糖も含む。
【００１１】
例えばニゲロース（重合度２）、４−α−ニゲロシルグルコース（重合度３）、ニゲロトリオース（重合度３）、３２−Ｏ−α−ニゲロシルマルトース（重合度４）、３２−Ｏ−α−マルトシルマルトース（重合度４）、４２−α−ニゲロシルマルトース（重合度４）などが例示されるが特に限定されるものではない。
【００１２】
本発明の経口組成物に含まれるニゲロオリゴ糖は、１種類のニゲロオリゴ糖だけでなく、２種以上のニゲロオリゴ糖の混合物でもよい。
【００１３】
本発明の経口組成物は、食品及び医薬として使用できるものであれば蛋白質、炭水化物、脂質などを含むことが出来る。
【００１４】
さらにグルコース、フルクトース、ショ糖、乳糖、マルトース、トレハロース、マルトオリゴ糖、分岐オリゴ糖、他の糖類を含有させてもよい。
【００１５】
発明の効果を得る為に必要な経口組成物の摂取量に特に制限はなく、ニゲロオリゴ糖の含量として５〜３０ｇ程度の摂取が好ましく、それ以上の摂取は、飲食に困難を伴うので好ましくない
【００１６】
本発明の経口組成物の形態は、特に制限はないが、本発明の経口組成物に含まれるニゲロオリゴ糖は、濃縮、噴霧乾燥や造粒乾燥等による粉末化、成形等の操作を行って、液状品、粉末品、顆粒品、成形品、他の成分との混合品等の各種形態の製品とすることができる。
【００１７】
ニゲロオリゴ糖を得る方法は、特に限定されないが、例えばデンプンを原料として酵素的に糖転移反応・縮合反応を利用する方法が開示されている（特開平９−２９９０９５， 特開２００３−１６９６６５）ほか、α−１，３−およびα−１，６−グルコシド結合からなる環状四糖に酢酸を作用させ得る方法（日本農芸化学会２００３年度大会講演要旨集 ｐ．６８）などが挙げられる。
【００１８】
より詳細には、原料として、澱粉、マルトース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖及びデキストリンから選ばれた少なくとも１種が用いられる。この場合、澱粉としては、例えば、馬鈴薯澱粉、甘藷澱粉、コーンスターチ、ワキシーコーンスターチ、キャッサバ澱粉等が好ましく用いられるが、これらの澱粉を液化させた澱粉液化液を用いることもできる。
【００１９】
澱粉液化液は常法に従って調製することができ、例えば、澱粉を加熱糊化させた後、α−アミラーゼを添加して調製する。なお、澱粉液化液は、濃度１０〜３５重量％、グルコース当量０．５ 〜２０程度のものが好ましい。
【００２０】
マルトース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖としては、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース等の、α−１，４−グルコシド結合を有し、グルコース重合度が２〜１０のオリゴ糖を用いることができる。
【００２１】
デキストリンとしては、例えば、マルトデキストリン、分岐デキストリン、焙焼デキストリン等を用いることが好ましい。
【００２２】
ニゲロオリゴ糖の製造法において、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素は、周知のいずれの起源のものであってもよく、それぞれの酵素に応じた反応条件下に用いることが好ましい。原料として、澱粉、デキストリンを用いる場合には、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を作用させることにより、グルコース重合度２以上の糖を高含有量で含有する糖液を得ることができる。
【００２３】
また、原料としてマルトオリゴ糖を用いる場合にも、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を作用させることにより、マルトース、マルトトリオースなどの、ニゲロオリゴ糖生成酵素が反応しやすい糖を多く含有する糖液が得られる。このようにして調製された糖液を、糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素の基質とする。
【００２４】
糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素は、糖転移・縮合反応によりα−１，３−グルコシド結合を生成する酵素であればよいが、例えば、特開平９−２９９０９５や特開２００４−１０５０７２に開示されているアクレモニウムに属する菌株が生産するニゲロオリゴ糖生成酵素や特開２００３−１６９６６５号公報に開示されているペシロマイセスに属する菌株が生産するα−グルコシダーゼが好ましく用いられる。上記アクレモニウムに属する菌株としては、例えばアクレモニウム ｓｐ． Ｓ４Ｇ１３株（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ． Ｓ４Ｇ１３、ＦＥＲＭ ＢＰ−４３７３）が好ましく採用される。ニゲロオリゴ糖生成酵素は、例えば上記菌株を好気的に培養して、培養物中にニゲロオリゴ糖生成酵素を蓄積させ、これを採取することにより得ることができる。
【００２５】
糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素を、前記糖液からなる基質に反応させる条件は、それぞれの酵素に応じた条件とすることが好ましい。例えば、上記アクレモニウムに属する菌株が生産するニゲロオリゴ糖生成酵素を使用する場合には、基質１ｇ当たりニゲロオリゴ糖生成酵素を０．０１〜５単位添加し、ｐＨ４〜１０、３０〜７０℃の条件下に作用させることが好ましい。
【００２６】
なお、ニゲロオリゴ糖生成酵素の酵素活性は、ｐＨ ７．０ の２０ｍＭリン酸緩衝液に、マルトースを０．６６重量％濃度で溶解させたマルトース溶液０．７５ｍｌに、０．２５ｍｌの酵素溶液を加えて、３７℃で反応させた際に、基質のマルトースから、１分間に１ｍｍｏｌ のグルコースを生成する酵素量を１単位と定義する。
【００２７】
本発明においては、澱粉、マルトース以上の重合度を有するマルトオリゴ糖及びデキストリンから選ばれた少なくとも１種からなる原料に、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を作用させた後、糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素を作用させてもよく、あるいはこれらの酵素を同時に作用させてもよい。
【００２８】
なお、α−アミラーゼ、オリゴ糖生成アミラーゼ、ｂ−アミラーゼ、枝切り酵素から選ばれた少なくとも１種と、糖転移・縮合反応によりニゲロオリゴ糖を生成する酵素とを同時に作用させる場合、それぞれの酵素の反応条件において一致する条件の範囲で反応させることが好ましい。また、上記のような反応を行い、ニゲロオリゴ糖を含有するシロップが市販されている（日食テイストオリゴ、日本食品化工株式会社製）。
【００２９】
こうして得られたニゲロオリゴ糖を含有する糖液は、必要に応じて更に精製して、ニゲロオリゴ糖含量を高くすることもできる。精製の方法としては、例えば、糖液にアルコール類等の有機溶媒を添加してオリゴ糖類を沈殿分別する方法、活性炭カラム、ゲル濾過等の分子量による分離法を採用したクロマトグラフィー、あるいはイオン交換樹脂を用いたクロマト分画によりニゲロオリゴ糖以外の糖類を除去する方法、シラップに酵母を添加して発酵性糖類を資化させる方法等が挙げられる。
【００３０】
上記ようにして得られたニゲロオリゴ糖は、通常の飲食物用途に供する程度の品質にするため、必要に応じて、活性炭による脱色及び脱臭、イオン交換樹脂等による脱イオン、クロマト分離等による含有量の調整等を行って精製することができる。
【００３１】
なお、本発明において、アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用を示すか否かを判断する方法としては、例えば後記実施例に示す通り、公知のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害作用の評価方法を用いることができる。
【００３２】
本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤であるニゲロオリゴ糖による香料の品質方法は、特に限定されないが、一般に製剤上許容される１または２種類以上の担体、賦型剤、統合剤、防腐剤、安定剤等と共に混合して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水薬、ドリンク剤等の内服剤型とすることができる。このような製剤化は、通常、香料や医薬品の製造に用いられる方法に従って製剤化することができる。
【実施例１】
【００３３】
ニゲロオリゴ糖を固形分あたり４０ ％以上含有する市販ニゲロオリゴ糖含有シラップ（日食テイストオリゴ、日本食品化工株式会社製）１０ ｋｇを原料に、以下のようにニゲロースを調製した。
【００３４】
この水溶液を珪藻土ろ過、活性炭による脱色、イオン交換樹脂による精製を行った後、固形分濃度５０％まで濃縮し、ニゲロオリゴ糖を９５％含有するシラップ１８ ｋｇを得た。このシロップをスプレドライヤーを用いて噴霧乾燥することにより、白色のニゲロオリゴ糖を９５％含有する粉末１６ｋｇを得た。
【実施例２】
【００３５】
ニゲロオリゴ糖を９５％含有する白色粉末を固形分濃度が５０％になるよう水に溶解し、このシラップをあらかじめ水で平衡化された活性炭カラムに供し、グルコースを除去後２％エタノール溶液によりニゲロースを溶出させた。溶出した画分を回収し、ろ過、濃縮操作によるエタノールを除去、イオン交換樹脂による精製後、凍結乾燥し粉末を画分 ２００ｇ を得た。その糖組成は、グルコース ２ ％、ニゲロース ９６ ％、３糖類 ２ ％）であった。なお、糖組成の分析方法は、高速液体クロマトグラフィーを用い、分析条件は以下の通りである。
【００３６】
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ２Ｐ−５０ ４Ｅ （４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍｍ）
溶離液：アセトニトリル／水＝７５／２５
流速：０．９ ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
カラム温度：３０℃
【実施例３】
【００３７】
実施例１で得られたニゲロオリゴ糖とショ糖、マルトース、イソマルトオリゴ糖（日食バイオトース）のアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性の阻害を以下のように評価した。
【００３８】
試験管に酵母由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼ（０．１Ｕ） １０ ｍｌおよびエタノールで４０ ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したニゲロオリゴ糖、砂糖、マルトース、イソマルトオリゴ糖もしくは、エタノール（コントロール） １０ ｍｌ、５０ ｍＭ ピロリン酸緩衝液（ｐＨ ８．８） １８０ ｍｌをそれぞれ加え、２２℃にて１５分間保持した。
【００３９】
これに２６．４ ｍＭ ＮＡＤ＋を１０ ｍｌ添加し、次いで７．５ ｍＭのアセトアルデヒド １０ ｍｌ添加した。アセトアルデヒドを添加したときを反応開始点とした。反応は、３４０ ｎｍの吸光度の増加を測定することで行った。阻害率の判定は、次のように行った。
【００４０】
反応開始点から反応初速段階９０秒後の吸光度の経時変化を取り、この近似曲線を求めた。近似曲線の傾きをコントロールと比較することにより阻害率を算出した。その結果を図１に示す。
【実施例４】
【００４１】
実施例２で得られたニゲロースをエタノールで４０， ４， ０．４ ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、実施例３と同様な方法でアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性の阻害を評価した。その結果を、図２に示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニゲロオリゴ糖を含有し、アルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有するものであることを特徴とした経口組成物。
【請求項２】
ニゲロオリゴ糖を含有し、アルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有するものであることを特徴とし、アルコールを含有した飲食物を忌避する目的に用いられる旨の表示を付した請求項１記載の経口組成物。
【請求項１】
ニゲロオリゴ糖を含有し、アルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有するものであることを特徴とした経口組成物。
【請求項２】
ニゲロオリゴ糖を含有し、アルデヒドデヒドロゲナーゼの阻害作用を有するものであることを特徴とし、アルコールを含有した飲食物を忌避する目的に用いられる旨の表示を付した請求項１記載の経口組成物。
【公開番号】特開２００６−９６７００（Ｐ２００６−９６７００Ａ）
【公開日】平成１８年４月１３日（２００６．４．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２８４５２４（Ｐ２００４−２８４５２４）
【出願日】平成１６年９月２９日（２００４．９．２９）
【出願人】（０００２３１４５３）日本食品化工株式会社 (68)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年４月１３日（２００６．４．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２９日（２００４．９．２９）
【出願人】（０００２３１４５３）日本食品化工株式会社 (68)
【Ｆターム（参考）】
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