結晶形態の６−Ｎ−ピリジルメチルアミノインドロカルバゾール化合物
本発明は、下記式（Ｉ）：（式中、Ｒは、無置換又はヒドロキシメチル基で置換されたピリジルメチル基を表す。）で示される結晶形態の６−Ｎ−ピリジルメチルアミノ−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒドロキシ−１２−β−Ｄ−グルコピラノシル−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオンの遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、医薬の分野で有用であり、具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮する、新規な結晶形態のインドロピロロカルバゾール誘導体の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物、その製法、及びそれを有効成分として含む医薬組成物などに関する。
【背景技術】
我々は、抗がん活性を有する新規インドロピロロカルバゾール誘導体を見出し、かかる一連の化合物について特許出願をしてきた（米国特許第５５９１８４２号明細書、米国特許第５６６８２７１号明細書、米国特許第５８０４５６４号明細書、米国特許第５９２２８６０号明細書、国際公開第９５／３０６８２号パンフレット、国際公開第９６／０４２９３号パンフレット、国際公開第９８／０７４３号パンフレット、欧州特許出願公開公報第０５２８０３０号明細書、特開平１０−２４５３９０号公報など）。
ここで、特開平１０−２４５３９０号明細書には、下記の式：
［式中、Ｒは、ヒドロキシ基、低級アルコキシ基、ヒドロキシ低級アルキル基及びヒドロキシ低級アルケニル基からなる群から選ばれる１又は２個の置換基を有するフェニル基、ナフチル基、ピリジル基、フリル基又はチエニル基（但し、置換基として低級アルコキシ基を有する場合は、同時にヒドロキシ基、低級アルコキシ基、ヒドロキシ低級アルキル基及びヒドロキシ低級アルケニル基からなる群から選ばれるもう一つの置換基を有する）を示し、ｍは、１〜３の整数を示し、Ｇは、β−Ｄ−グルコピラノシル基を示し、インドロピロロカルバゾール環上のヒドロキシ基の置換位置は、１位と１１位又は２位と１０位である］で表される化合物が記載されている。しかしながら、この明細書には当該化合物の結晶形についての記載も示唆もない。現に当該明細書に記載の製法で実施例化合物を合成・単離すると非晶質であることが確かめられている。
上記化合物を実際の抗腫瘍剤として市場化する場合には、その化合物の物理化学的安定性の面からみて結晶形態であることが望ましい。特に上記化合物の非晶形の固体は安定性が不十分であり、通常の条件化で長期間保存すると、変色し、純度の低下をきたす。また、仮に上記化合物を非晶固体あるいは液剤として市場化するとしても、該非晶形固体を実質的に純粋なものとして製造するためには複雑な精製工程を要し、結晶化による精製工程なしには実際の市場化には種々問題がある。
このように、結晶形態である上記インドロカルバゾール化合物を得ることは極めて重要なことにも関わらず、これまで上記化合物の結晶について詳細な検討はなされてこなかった。
【発明の開示】
本発明者らは、非晶形であることに由来する上記の問題を解決すべく鋭意研究した結果、上記式（ＩＡ）で示される化合物の中で、結晶形態の化合物を見いだし、本発明を完成した。
本発明は、下記式（Ｉ）：
（式中、Ｒは、無置換又はヒドロキシメチル基で置換されたピリジルメチル基を表す。）で示される結晶形態の６−Ｎ−ピリジルメチルアミノ−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒドロキシ−１２−β−Ｄ−グルコピラノシル−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオンの遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物に関する。
本発明は、好ましくは、結晶形態の下記式（ＩＩ）：
で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物；
結晶形態の下記式（ＩＩＩ）：
で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物；或いは、結晶形態の下記式（ＩＶ）：
で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物に関する。
ここで、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基と、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の医薬上許容される塩（以下、「分子内塩」という。）を比べると、特に注射剤としての処方に関しては、その水溶性の向上及び製剤上、添加剤を多量に添加する必要がないと期待されることなどから、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩であることが望ましい。
なお、特開平１０−２４５３９０号明細書には、上記式（ＩＶ）で示される化合物の具体的な構造及び製法の開示はないので、新規な化合物であると認められる。当該化合物の製法は、実施例７−１に記載する。
また、本発明は、さらに好ましくは、結晶形態である上記式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩、硫酸塩、若しくはメタンスルホン酸塩；
結晶形態である上記式（ＩＩＩ）で示される化合物の塩酸塩、硫酸塩、若しくはメタンスルホン酸塩；又は
結晶形態である上記式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩、硫酸塩、若しくはメタンスルホン酸塩に関する。
また、本発明は、好ましくは、結晶形態である上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物の溶媒和物に関する。
本発明は、さらに好ましくは、結晶形態である上記式（ＩＩ）で示される化合物のメタンスルホン酸塩のエタノール和物に関する。
本発明は、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、医薬組成物に関する。
また、本発明は、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、抗がん剤に関する。
さらに、本発明は、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤に関する。
また、本発明は、好ましくは、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態の上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤に関する。
ここで、本明細書で用いる「結晶形態」とは、固体であって、その内部構造が三次元的に構成原子の規則正しい繰り返しでできているものをいい、結晶多形を含む。一方、「非晶形」とは、結晶状態ではない、アモルファス（無定形）の状態をいう。
本明細書で用いる「遊離塩基」とは、塩基分子が酸又は水素イオンと結合していない状態をいう。
本明細書で用いる「医薬上許容される塩」とは、例えば、塩酸、硫酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、過塩素酸等の無機酸；例えば酢酸、マレイン酸、フマール酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、アスコルビン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸；例えばメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のスルホン酸等との付加塩が挙げられ、好ましくは、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、フマール酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、メタンスルホン酸、又はベンゼンスルホン酸との付加塩であり、さらに好ましくは、塩酸、硫酸、又はメタンスルホン酸との付加塩である。
本明細書で用いる「溶媒和物」とは、溶媒の結合した化合物をいい、例えば、エタノール和物、水和物等である。
本明細書で用いる「薬学的に許容される担体若しくは希釈剤」という用語は、溶剤〔例えば、水、生理食塩水、アルコール（例えば、エタノール）、グリセリン、植物オイルなど〕；添加剤〔例えば、賦形剤、基剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味剤、着色剤、矯味剤、芳香剤、緩衝剤、さらに可溶化剤、又は防腐剤、浸透圧を変えるための塩、コーティング剤、あるいは抗酸化剤〕などを含む。
本明細書で用いる「抗がん剤」は、「がん」患者を治療するための「製剤」であり、「がん」とは、固形がん及び造血器がんをいう。ここで、固形がんは、例えば、脳腫瘍、頭頸部がん、食道がん、甲状腺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、乳がん、胃がん、胆のう・胆管がん、肝がん、膵がん、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、絨毛上皮がん、子宮体がん、子宮頸がん、腎孟・尿管がん、膀胱がん、前立腺がん、陰茎がん、睾丸がん、胎児性がん、ウイルス腫瘍、皮膚がん、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング腫、軟部肉腫などであり、好ましくは、結腸がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膀胱がん、頭頸部がん、胃がん、膵がん、肝がん、卵巣がんであり、さらに好ましくは、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頸部がんである。一方、造血器がんとしては、例えば、急性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、真性多血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫などである。また、「製剤」とは、経口製剤及び非経口製剤を含む。経口製剤としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などであり、一方、非経口製剤としては、例えば、溶液若しくは懸濁液等の殺菌した液状の製剤、具体的には、注射剤、点滴剤などであり、好ましくは、静脈内注射剤又は静脈内点滴剤であり、さらに好ましくは静脈内点滴剤である。これらの静脈内注射剤及び静脈内点滴剤は、予め溶解したものの他、粉末のまま或いは適当な担体（添加物）を加えたものを用時溶解する形態もとり得る。
次に、結晶形態である式（Ｉ）で示される化合物の製法を記載する。
本発明は、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
・非晶形の上記式（Ｉ）で示される化合物に対して、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液を、その濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加える工程、
・得られた溶液を加熱環流する工程、
・必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程、
・得られた溶液から溶媒を留去し、濃縮する工程、
・得られた固体の懸濁溶液を加熱環流する工程、
・得られた懸濁溶液を０℃から３５℃に冷却する工程、及び
・得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法に関する。当該方法のより具体的な実施形態は、下記の製法１及び製法２である。
製法１（上記式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、１等量から１００等量、好ましくは、５から２０等量の対応する酸（塩酸、硫酸、メタンスルホン酸等）を含む、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶液からなる群から選択される溶液； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれら混合溶媒からなる群から選択される溶液； さらに好ましくは、メタノール溶液を、その溶液の濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加え、５分から２００時間、好ましくは、１０から２０時間、さらに好ましくは１５時間、加熱還流する。
得られた溶液中、完全に溶解しないものがある場合には、常圧もしくは減圧下濾過して不溶物を除く。次に、その溶媒を常圧もしくは減圧下で１／３から１／１０になるまで濃縮留去すると固体が析出する。
析出した固体の懸濁溶液をそのまま１時間から２００時間、好ましくは、１０時間から２０時間、さらに好ましくは１５時間、加熱還流する。
得られた懸濁溶液を０℃から３５℃に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、メタノール又はエタノールで、１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは４０℃で、０．５時間から１００時間、減圧下乾燥すると固体が得られる。得られた固体を適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノールに懸濁し、４０℃から１３０℃、好ましくは、７０℃から８０℃、さらに好ましくは７５℃で０．１時間から２００時間、好ましくは１５時間から２５時間、さらに好ましくは、２０時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃、好ましくは室温に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒、さらに好ましくは、エタノール又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶を製造することができる。
製法２（上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基の結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノール、或いは、０．１等量から１００等量の酢酸を含む上記溶媒の溶液を、その溶液の濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加え、５分から２００時間、好ましくは、０．２５時間から１５時間、加熱還流する。得られた溶液中、完全に溶解しないものがある場合には、常圧もしくは減圧下濾過して不溶物を除く。
次に、その溶媒を常圧もしくは減圧下で１／３から１／１０になるまで濃縮留去すると固体が析出する。析出した固体の懸濁溶液をそのまま０分から２００時間、好ましくは、２．５時間から１５時間、加熱還流する。
得られた懸濁溶液を０℃から３５℃、好ましくは、室温に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒； さらに好ましくは、メタノール、エタノール、又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で、０．５時間から１００時間減圧下乾燥すると固体が得られる。得られた固体を適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒に懸濁し、４０℃から１３０℃、好ましくは、７０℃から８０℃で０．１時間から２００時間、好ましくは１５時間から２５時間、さらに好ましくは２０時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃、好ましくは３５℃に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはメタノール、エタノール、又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは、５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基結晶を製造することができる。
また、本発明は、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
・非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液に懸濁させる工程、
・得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程、
・得られた溶液を０℃から３５℃に冷却する工程、及び
・得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法に関する。当該方法のより具体的な実施形態は、下記の製法３及び製法４である。
製法３（上記式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、１等量から１００等量、好ましくは２等量の対応する酸（塩酸、硫酸、メタンスルホン酸等）を含む、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、エタノールに懸濁させ、４０℃から１３０℃、好ましくは７５℃から８０℃で、０．１時間から２００時間、好ましくは、１５から１６８時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、エタノール又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶を製造することができる。
製法４（上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基の結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒、或いは、０．１等量から１００等量の酢酸を含む上記溶媒に懸濁し、４０℃から１３０℃、好ましくは、７５℃から８０℃で０．１時間から２００時間、好ましくは、１５時間から２４時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃、好ましくは室温に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、エタノール又は２−プロパノールで１から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは、５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基の結晶を製造できる。
さらに、本発明は、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
・非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、水又は１等量から１００等量の対応する酸を含む水溶液に加える工程、
・得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程、
・必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程、
・得られた反応溶液の温度を０℃から３５℃に下げながら攪拌する工程、及び
・得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法に関する。当該方法のより具体的な実施形態は、下記の製法５である。
製法５（上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基結晶及び分子内塩結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、水或いは１等量から１００等量の対応する酸（酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸等）を含む水溶液を適量加え、０．５分から２０時間、４０℃から１３０℃、好ましくは、６０℃から７０℃に加熱する。得られた溶液中、完全に溶解しないものがある場合は、必要に応じ常圧もしくは減圧下濾過して不溶物を除く。
得られた溶液に、０℃から１３０℃、好ましくは６０℃から８０℃、さらに好ましくは７０℃で適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノールを加え、０℃から３５℃、好ましくは室温で０．１時間から１００時間、好ましくは１５時間から２０時間、さらに好ましくは１８時間攪拌する。
得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノール又は２−プロパノールで数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で０．５時間から１００時間、好ましくは６０時間から８０時間、さらに好ましくは７２時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基結晶及び分子内塩結晶を製造することができる。
また、上記に記載の、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含む、医薬組成物； 薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含む、抗がん剤； 並びに、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤、は、製剤技術分野の当業者に周知ないし慣用の方法を用いることにより容易に製造することができる。例えば、静脈注射用液剤、静脈注射用凍結乾燥製剤若しくは静脈注射用粉末充填製剤が挙げられる。
静脈注射用液剤は、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を適当な溶剤、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、アルコール類、大豆油などの植物由来の油、静脈注射用液体（例えばクエン酸ナトリウム及びクエン酸の水溶液）等又はその混合溶液に溶解することにより製造することができる。
また、静脈注射用凍結乾燥製剤は、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物をそのまま或いは適当な添加剤と共に適当な溶剤に溶解し、注射用バイアル等に小分けしたのち、凍結乾燥することにより製造することができる。
さらに、静脈注射用粉末充填製剤は、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を粉末のまま或いは適当な添加物を加えたものを、注射用バイアル等に小分けすることにより製造することができる。
静脈注射用液剤は予め溶解したものをそのまま投与に用いる他、適当な溶剤又は希釈剤で用時希釈して投与する形態もとり得る。静脈注射用凍結乾燥製剤及び静脈注射用粉末充填製剤は、適当な溶剤又は希釈剤で用時溶解して投与される。ここでいう適当な溶剤又は希釈剤としては、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、アルコール類、静脈内注射用液体（例えばクエン酸ナトリウム及びクエン酸の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。
次に、熱安定性、光安定性、溶解度、及び吸湿性に関して、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物と非晶形の式（Ｉ）で示される化合物のデータを比較する。
（１）熱安定性試験
式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体熱安定性試験を表１に示す。なお、本試験は、密閉バイアル中で行われた８０℃加速試験である。表１から明らかなように、各アモルファスに比べて結晶は際立って優れた熱安定性を示す（第１図）。
（２）光安定性試験
式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体光安定性試験を表２に示す。なお、本試験は、密閉バイアル中で２５℃、２０００ルックスの光源下で行われた。表２から明らかなように、各アモルファスに比べて結晶は際立って優れた光安定性を示す（第２図）。
（３）水に対する溶解度の試験
上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物の各分子内塩結晶とそれぞれの遊離塩基アモルファスの水に対する溶解度を以下に示す。
式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファス： ０．００１ｍｇ／ｍＬ以下
式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶： １０−５０ｍｇ／ｍＬ
式（ＩＩ）で示される化合物のメタンスルホン酸塩結晶： １０−５０ｍｇ／ｍＬ
式（ＩＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファス： ０．００１ｍｇ／ｍＬ以下
式（ＩＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶： ５０−１００ｍｇ／ｍＬ
式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファス： ０．００１ｍｇ／ｍＬ以下
式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩結晶： １０−５０ｍｇ／ｍＬ
以上より、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物の各分子内塩結晶は、それぞれの遊離塩基アモルファスと比べて、際だって優れた水に対する溶解度を示すと言える。
（４）吸湿性試験
上記式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の塩酸塩結晶の吸湿性を比較したところ、通常の保管湿度である湿度３０％から７５％で比較すると、遊離塩基アモルファスの重量は加湿条件（水の吸着過程）において７．６％増量するのに対し、結晶の重量は１．５％の微増であった。即ち、式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、７．６％であった。一方、式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、１．５％であり、加湿による影響が非常に小さかった。
また、除湿条件の重量変化（水の脱着過程）については、遊離塩基アモルファスの場合は加湿条件の重量変化と著しく異なることから吸湿性による溶解等が疑われるが、結晶の場合は重量変化がどちらの条件でもほぼ一致しており吸湿による影響は観察されなかった（第３図参照）。
上記式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の結晶の吸湿性を比較した場合も、湿度３０％から７５％で比較すると、遊離塩基アモルファスの重量は２．８％増量するのに対し、結晶の重量は０．６％の微増であった。即ち、式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、２．８％であった。一方、式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、０．６％であり、加湿による影響が非常に小さかった。
更に、除湿条件の重量変化について、遊離塩基アモルファスの場合は加湿条件の重量変化と著しく異なることから吸湿性による溶解等が疑われるが、結晶の場合は重量変化がどちらの条件でもほぼ一致しており吸湿による影響は少ない（第４図参照）。つまり、結晶にすることでアモルファスの持つ吸湿性が著しく改善されたものと言える。
以上より、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物、特に、結晶形態の式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基及び分子内塩； 結晶形態の式（ＩＩＩ）で示される化合物の遊離塩基及び分子内塩； 結晶形態の式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基及び分子内塩は、それぞれの対応する非結晶形のもの（遊離塩基アモルファス）に比べて、際だって優れた熱安定性・光安定性及び水溶性・低吸湿性を示すものと認められる。さらに、参考例に示されるように、遊離塩基アモルファスを結晶化することで、式（Ｉ）で示される化合物の純度を際だって向上させることもできる。
【図面の簡単な説明】
第１図は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体熱安定性試験（８０℃加速試験）の結果を示す図である。図中の白カラムは、アモルファス試料の４週間後残存率（％）を表し、斜線カラムは、結晶試料の４週間後残存率（％）を表す。
第２図は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体光安定性試験（２５℃、２０００ルックス光源下での試験）の結果を示す。図中の白カラムは、アモルファス試料の４週間後残存率（％）を表し、斜線カラムは、結晶試料の４週間後残存率（％）を表す。
第３図は、上記式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の塩酸塩結晶の吸湿性試験の結果を示す図である。
図中の■は、式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時における重量変化率（％）を表し、□は、同化合物の遊離塩基アモルファスの除湿時における重量変化率（％）を表す。一方、図中の●は、式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時における重量変化率（％）を表し、○は、同化合物の塩酸塩結晶の除湿時における重量変化率（％）を表す。
第４図は、上記式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の塩酸塩結晶の吸湿性試験の結果を示す図である。
図中の■は、式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時における重量変化率（％）を表し、□は、同化合物の遊離塩基アモルファスの除湿時における重量変化率（％）を表す。一方、図中の●は、式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時における重量変化率（％）を表し、○は、同化合物の塩酸塩結晶の除湿時における重量変化率（％）を表す。
第５図は、実施例２−１に記載の方法で得られた化合物２の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
第６図は、実施例３に記載の方法で得られた化合物３の結晶の写真（偏光顕微鏡、倍率４００倍）である。
第７図は、実施例４に記載の方法で得られた化合物４の結晶の写真（偏光顕微鏡、倍率４００倍）である。
第８図は、実施例７−１に記載の方法で得られた化合物８の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【発明を実施するための最良の形態】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、もとより本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
実施例１−１
化合物１の結晶の製法Ａ（上記の製法２による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５００ｍｇ）を酢酸（０．２１８ｍｌ）及びメタノール（５００ｍｌ）に加え、１５時間加熱還流した。化合物１を完全に溶解した後、４００ｍｌのメタノールを常圧で留去することにより濃縮し、析出した固体の懸濁溶液をそのまま１５時間加熱還流した。室温で冷却した後、得られた固体を濾取し、メタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し４０℃で２４時間減圧下乾燥すると、３８１ｍｇの赤色固体が得られた。こうして得られた赤色固体（２５０ｍｇ）をエタノール（６．５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で２０時間加熱攪拌すると、黄色結晶の生成が認められた。室温で冷却した後、得られた結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物１（２４７ｍｇ）を得た。
分子量：
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルデータ：
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）、δｐｐｍ）：１１．１７（１Ｈ、ｓ）、９．７９（２Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．５０（１Ｈ、ｓ）、８．４０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．５９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．２６（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、５．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．８８（１Ｈ、ｓ）、５．３９（１Ｈ、ｓ）、５．２４（１Ｈ、ｓ）、５．１４（１Ｈ、ｓ）、４．９３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）、４．３６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、３．７６〜４．０２（４Ｈ、ｍ）、３．４３〜３．５２（２Ｈ、ｍ）
赤外吸収（ＩＲ）スペクトル：
ＩＲ（全反射型赤外吸収法（ＡＴＲ：Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ Ｔｏｔａｌ Ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ Ｉｎｆｒａｒｅｄ））：３３１５，１７４６、１６９７，１６２０，１５７６，１４５８，１３７１，１３３３，１２３２，１１９８，１１１９，１０６９，１０１５，６１５ ｃｍ−１
高圧液体クロマトグラフイ（ＨＰＬＣ）純度データ：
純度：９９．６％（逆相カラム：ワイエムシーパックプロ シー１８、エーエス−３０３（ＹＭＣ−ＰＡＣＫ Ｐｒｏ Ｃ１８、ＡＳ−３０３））
上記粉末Ｘ線回折分析データは自動Ｘ線装置リント アルティマ プラス システム（ＲＩＮＴ−Ｕｌｔｉｍａ＋システム）（２ｋＷ）（リガクインターナショナルコーポレーション（Ｒｉｇａｋｕ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）製造）によって測定した。分析方法は次のとおりである。
Ｘ線放射源：銅（Ｃｕ）
チューブ電圧／チューブ電流：４０ｋＶ／３０ｍＡ
モノクロメーター：自動モノクロメーター
ゴニオメーター：広角ゴニオメーター
スキャンステップ：０．０２度（ｄｅｇ．）
スキャン速度：２．００度（ｄｅｇ．）／分
ディバージェンス・スリット（ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｓｌｉｔ）：１度（ｄｅｇ．）
スキャッターリング・スリット（ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｓｌｉｔ）：１度（ｄｅｇ．）
レシービング・スリット（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｓｌｉｔ）：０．１５ｍｍ
測定温度：室温
残留溶媒測定：
エタノール＜０．０１％
残留溶媒含量はヘッドスペ−スサンプラ／ガスクロマトグラフ／質量選択的検出器（ＨＳＳ／ＧＣ／ＭＳＤ）（アジレント・テクノロジー（Ａｇｌｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｉｅｓ）製造）によって測定した。
吸湿性試験：
吸湿性試験は、アイガソープ モイスチャー ソープション アナライザー、ハイデン アナリティカル リミテッド（ＩＧＡｓｏｒｐ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ、Ｈｉｄｅｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ）製造によって測定した（第３図参照）。
実施例１−２
化合物１の結晶の製法Ｂ（上記の製法４による）：特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（３０ｍｇ）を、エタノール（１．０ｍｌ）及び酢酸（０．００５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で１２０時間減圧下乾燥することにより、２９ｍｇの黄色結晶の化合物１を得た。
なお、実施例１−２で示した方法により得られた結晶も実施例１−１と同様の粉末Ｘ線回折スペクトルをしめした。
実施例２−１
化合物２の結晶の製法Ａ（上記の製法１による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５００ｍｇ）をメタノール（３００ｍｌ）及び塩酸−メタノール試薬（１０ｍｌ）からなる混合溶媒に加え、４時間加熱還流した。化合物１を完全に溶解した後、得られた溶液から２００ｍｌのメタノールを常圧で留去することにより濃縮し、析出した固体の懸濁溶液をそのまま１５時間加熱還流した。室温に冷却した後、得られた固体を濾取し、メタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、４０℃で２４時間減圧下乾燥すると、３９３ｍｇの黄色固体が得られた。こうして得られた黄色固体（２４０ｍｇ）をエタノール（６ｍｌ）に懸濁し、７５℃で２０時間加熱攪拌した。室温に冷却した後、黄色結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物２（２３５ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８２（２Ｈ、ｓ）、８．８３（２Ｈ、ｍ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．７１（１Ｈ、ｓ）、８．５１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ）、６．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４、１．８Ｈｚ）、６．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４，２．２Ｈｚ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、４．８３（２Ｈ、ｓ）、４．５８（２Ｈ、ｓ）、３．７２〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４０〜３．５５（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３２４０，１７３８，１６９３，１６２０，１５７６，１４７２，１４１０，１３７７，１３３９，１３２１，１２２５，１１８６，１１２１，１０５１，１００５，９０５，８２９，８１８，７４３ ｃｍ−１
純度：９９．１％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
塩酸（ＨＣｌ） １．０１ モル比率
イオン定量はキャピラリー電気泳動（ＨＰＣＥ，Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｐｌｏｇｉｅｓ製造）によって測定した。
残留溶媒：エタノール（ＥｔＯＨ）＜０．０１％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
実施例２−２
化合物２の結晶の製法Ｂ（上記の製法３による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（３０ｍｇ）を、エタノール（１．０ｍｌ）及び１モル濃度（Ｍ）塩酸水溶液（０．０９ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温で冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で２４時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物２（２９ｍｇ）を得た。
なお、実施例２−２で示した方法により得られた結晶も実施例２−１と同様の粉末Ｘ線回折スペクトルを示した。
【実施例３】
化合物３の結晶の製法（上記の製法５による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５００ｍｇ）を、エタノール（１８０ｍｌ）、水（１８０ｍｌ）および、硫酸（０．０４０７ｍｌ）からなる混合溶媒に加え、７０℃で加熱攪拌することにより溶解した。この溶液を、室温で１８時間ゆっくり攪拌すると、燈色結晶が析出した。この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、燈色針状結晶の化合物３（４９１ｍｇ）を得た（第６図参照）。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１９（１Ｈ、ｓ）、９．８０（１Ｈ、ｓ）、９．７７（１Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、８．６２（１Ｈ、ｓ）、８．０８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８、１．１Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８，１．８Ｈｚ）、６．４１（１Ｈ、ｂｓ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．８７（１Ｈ、ｂｓ）、５．０５〜５．７２（３Ｈ、ｍ）、４．９２（１Ｈ、ｂｓ）、４．７９（２Ｈ、ｓ）、４．４８（２Ｈ、ｓ）、３．７６〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４１〜３．５４（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３２９０，２３６０，１７４４，１６９２，１６１８，１５７８，１４５８，１４００，１３７５，１３２９，１２３１，１１９６，１１２０，１０４９，１０１５，７３９ ｃｍ−１
純度：９８．４％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
Ｈ２ＳＯ４ ０．４８ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール 検出されず
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
【実施例４】
化合物４の結晶の製法（上記の製法５による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５０ｍｇ）を、エタノール（１．８ｍｌ）、水（０．５ｍｌ）、及びメタンスルホン酸（０．００９９ｍｌ）からなる混合溶媒に加え、６５℃で加熱攪拌することにより溶解した。この溶液を、室温で２２時間ゆっくり攪拌すると、黄燈色結晶が析出した。この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄燈色結晶の化合物４（４９ｍｇ）を得た（第７図参照）。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８０（１Ｈ、ｓ）、９．７７（１Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．８１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．７１（１Ｈ、ｓ）、８．４６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．５２（１Ｈ、ｂｓ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ）、５．８３（１Ｈ、ｂｓ）、４．８３（２Ｈ、ｓ）、４．５６（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０２（４Ｈ、ｍ）、３．４０〜３．５３（２Ｈ、ｍ）、２．３０（３Ｈ、ｓ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３３１１，１７４７，１６９９，１６２０，１５８３，１４５６，１３２９，１１９６，１１５３，１１２４，１０４２，１０１６，７７９，７４２ ｃｍ−１
イオン定量：
メタンスルホン酸（ＣＨ３ＳＯ３Ｈ） １．００ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール 検出されず
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
【実施例５】
化合物５の結晶の製法（上記の製法３による）：特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（１０９ｍｇ）を、エタノール（３．６ｍｌ）及びメタンスルホン酸（０．０２２ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると、黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物５（１０７ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．７７（２Ｈ、ｂｓ）、８．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、８．８６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７１（１Ｈ、ｓ）、８．５０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．８３（２Ｈ、ｓ）、４．５７（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４２〜３．５２（４Ｈ、ｍ）、２．３０（３Ｈ、ｓ）、１．０５（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３３１２，２３４１，１７５３，１７０７，１６２２，１５８１，１４５６，１３７７，１３２７，１２３２，１１９６，１１１１，１０２２，７４５，６３５，６１７ ｃｍ−１
純度：９９．２％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
メタンスルホン酸 １．１４ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒： エタノール ５．４９％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
【実施例６】
化合物７の結晶の製法（上記の製法３による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例２７に記載の方法で調整した非結晶形の化合物６（５００ｍｇ）を、エタノール（１５ｍｌ）及び６Ｍ塩酸水（０．２５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１６８時間加熱攪拌すると、燈色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、燈色結晶の化合物７（４３０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８２（２Ｈ、ｓ）、８．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．３８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、８．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、７．７７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、４．７７（２Ｈ、ｓ）、４．６３（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４２〜３．５４（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３１７０，１７３８，１６８８，１６１４，１５８０，１４１５，１３４５，１２９０，１２５０，１１９８，１０８８，１０６１，１００２，９０７，８３１，７９９，７４１ ｃｍ−１
純度：９９．５％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
塩酸 １．１３ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール ０．２７％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
実施例７−１
化合物８の結晶の製法：
１）非晶形の化合物８の製法
化合物Ａ（ヒドラジン体）６．３ｇ及び４−ピリジンカルボアルデヒド１．４５ｍｌをメタノール２１０ｍｌに溶解し、１．７６ｍｌの酢酸を加えた後、７０℃で終夜撹拌した。析出した固体を濾別してメタノールで洗浄した後、得られた固体をメタノールー−テトラヒドロフラン（１：１）の混合溶媒７．０Ｌに溶解し、１０％パラジウム炭素１ｇを加え、水素雰囲気下で終夜撹拌した。得られた反応液をセライトで濾過したのち、その濾液を濃縮した。残差をセファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィに充填し、メタノールで展開した。目的とする分画を濃縮乾燥することにより化合物８（３．３ｇ）を得た。
２）化合物８の結晶の製法（上記の製法２による）
上記１）で調整した非結晶形の化合物８（２５０ｍｇ）を、メタノール（５００ｍｌ）及び酢酸（０．１３５ｍｌ）に加え、１５分間加熱還流した。化合物８を完全に溶解した後、得られた溶液から４３０ｍｌのメタノールを常圧で留去することにより濃縮し、析出した固体の懸濁溶液をそのまま２．５時間加熱還流した。この溶液を室温に冷却した後、得られた固体を濾取し、メタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で２時間減圧下乾燥すると、２００ｍｇの黄色固体が得られた。こうして得られた黄色固体（２００ｍｇ）をエタノール（５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で２０時間加熱攪拌した。得られた溶液を室温に冷却した後、黄色結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物８（１９７ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６２４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１７（１Ｈ、ｓ）、９．７８（１Ｈ、ｓ）、９．７６（１Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．４７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．５４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．８２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８、１．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８，１．８Ｈｚ）、６．３２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．９５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、５．８７（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．３４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．１２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．３３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、３．７６〜４．０２（４Ｈ、ｍ）、３．４４〜３．５２（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：１７４９，１６９０，１６３０，１５７８，１４５６，１４００，１３６９，１３２９，１２５３，１１９６，１１５３，１１２１，１０８０，１０６１，１０１３，８００，７４３，６１７ ｃｍ−１
純度：９８．２％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：
エタノール ０．１０％、 メタノール ０．３２％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
実施例７−２
化合物８の結晶の製法Ｂ（上記の製法４による）： 実施例７−１の１）に記載の方法で調整した非結晶形の化合物８（３０ｍｇ）を、エタノール（１ｍｌ）及び酢酸（０．００５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると、黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で１５時間減圧下乾燥することにより、２７ｍｇの黄色結晶の化合物８を得た。
実施例７−２で示した方法により得られた結晶も実施例７−１と同様の粉末Ｘ線回折スペクトルを示した。
【実施例８】
化合物９の結晶の製法Ａ（上記の製法３による）： 実施例７−１の１）に記載の方法で調整した非結晶形の化合物８（３００ｍｇ）を、エタノール（１０ｍｌ）及び１Ｍ塩酸水（０．９ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１１４時間加熱攪拌すると、燈色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、燈色結晶の化合物９（２７９ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６２４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８３（２Ｈ、ｓ）、８．８５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．２７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ）、６．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４、１．１Ｈｚ）、６．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４，１．９Ｈｚ）、５．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、４．６４（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４２〜３．５５（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３３１２，１７４０，１６６６，１６１６，１５７６，１４８１，１３８１，１３１９，１１９０，１１５９，１１２３，１０７４，７３９，６１３ ｃｍ−１
純度：９８．２％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
塩酸 ０．９７ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール 検出されず
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
参考例： 結晶化による式（ＩＩ）で示される化合物の高純度化例
特開平１０−２４５３９０の実施例１４に示す方法で調整した未精製の化合物（ＩＩ）（純度８８％）を製法２により結晶化したところ純度９８％の化合物（ＩＩ）を得た。
【産業上の利用可能性】
結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物は、対応する非晶形の化合物に比べて際だって優れた安定性、溶解度などを示すので、抗がん剤の有効成分として産業上の利用可能性がある。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【技術分野】
本発明は、医薬の分野で有用であり、具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮する、新規な結晶形態のインドロピロロカルバゾール誘導体の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物、その製法、及びそれを有効成分として含む医薬組成物などに関する。
【背景技術】
我々は、抗がん活性を有する新規インドロピロロカルバゾール誘導体を見出し、かかる一連の化合物について特許出願をしてきた（米国特許第５５９１８４２号明細書、米国特許第５６６８２７１号明細書、米国特許第５８０４５６４号明細書、米国特許第５９２２８６０号明細書、国際公開第９５／３０６８２号パンフレット、国際公開第９６／０４２９３号パンフレット、国際公開第９８／０７４３号パンフレット、欧州特許出願公開公報第０５２８０３０号明細書、特開平１０−２４５３９０号公報など）。
ここで、特開平１０−２４５３９０号明細書には、下記の式：
［式中、Ｒは、ヒドロキシ基、低級アルコキシ基、ヒドロキシ低級アルキル基及びヒドロキシ低級アルケニル基からなる群から選ばれる１又は２個の置換基を有するフェニル基、ナフチル基、ピリジル基、フリル基又はチエニル基（但し、置換基として低級アルコキシ基を有する場合は、同時にヒドロキシ基、低級アルコキシ基、ヒドロキシ低級アルキル基及びヒドロキシ低級アルケニル基からなる群から選ばれるもう一つの置換基を有する）を示し、ｍは、１〜３の整数を示し、Ｇは、β−Ｄ−グルコピラノシル基を示し、インドロピロロカルバゾール環上のヒドロキシ基の置換位置は、１位と１１位又は２位と１０位である］で表される化合物が記載されている。しかしながら、この明細書には当該化合物の結晶形についての記載も示唆もない。現に当該明細書に記載の製法で実施例化合物を合成・単離すると非晶質であることが確かめられている。
上記化合物を実際の抗腫瘍剤として市場化する場合には、その化合物の物理化学的安定性の面からみて結晶形態であることが望ましい。特に上記化合物の非晶形の固体は安定性が不十分であり、通常の条件化で長期間保存すると、変色し、純度の低下をきたす。また、仮に上記化合物を非晶固体あるいは液剤として市場化するとしても、該非晶形固体を実質的に純粋なものとして製造するためには複雑な精製工程を要し、結晶化による精製工程なしには実際の市場化には種々問題がある。
このように、結晶形態である上記インドロカルバゾール化合物を得ることは極めて重要なことにも関わらず、これまで上記化合物の結晶について詳細な検討はなされてこなかった。
【発明の開示】
本発明者らは、非晶形であることに由来する上記の問題を解決すべく鋭意研究した結果、上記式（ＩＡ）で示される化合物の中で、結晶形態の化合物を見いだし、本発明を完成した。
本発明は、下記式（Ｉ）：
（式中、Ｒは、無置換又はヒドロキシメチル基で置換されたピリジルメチル基を表す。）で示される結晶形態の６−Ｎ−ピリジルメチルアミノ−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒドロキシ−１２−β−Ｄ−グルコピラノシル−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオンの遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物に関する。
本発明は、好ましくは、結晶形態の下記式（ＩＩ）：
で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物；
結晶形態の下記式（ＩＩＩ）：
で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物；或いは、結晶形態の下記式（ＩＶ）：
で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物に関する。
ここで、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基と、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の医薬上許容される塩（以下、「分子内塩」という。）を比べると、特に注射剤としての処方に関しては、その水溶性の向上及び製剤上、添加剤を多量に添加する必要がないと期待されることなどから、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩であることが望ましい。
なお、特開平１０−２４５３９０号明細書には、上記式（ＩＶ）で示される化合物の具体的な構造及び製法の開示はないので、新規な化合物であると認められる。当該化合物の製法は、実施例７−１に記載する。
また、本発明は、さらに好ましくは、結晶形態である上記式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩、硫酸塩、若しくはメタンスルホン酸塩；
結晶形態である上記式（ＩＩＩ）で示される化合物の塩酸塩、硫酸塩、若しくはメタンスルホン酸塩；又は
結晶形態である上記式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩、硫酸塩、若しくはメタンスルホン酸塩に関する。
また、本発明は、好ましくは、結晶形態である上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物の溶媒和物に関する。
本発明は、さらに好ましくは、結晶形態である上記式（ＩＩ）で示される化合物のメタンスルホン酸塩のエタノール和物に関する。
本発明は、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、医薬組成物に関する。
また、本発明は、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、抗がん剤に関する。
さらに、本発明は、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤に関する。
また、本発明は、好ましくは、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態の上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤に関する。
ここで、本明細書で用いる「結晶形態」とは、固体であって、その内部構造が三次元的に構成原子の規則正しい繰り返しでできているものをいい、結晶多形を含む。一方、「非晶形」とは、結晶状態ではない、アモルファス（無定形）の状態をいう。
本明細書で用いる「遊離塩基」とは、塩基分子が酸又は水素イオンと結合していない状態をいう。
本明細書で用いる「医薬上許容される塩」とは、例えば、塩酸、硫酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、過塩素酸等の無機酸；例えば酢酸、マレイン酸、フマール酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、アスコルビン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸；例えばメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のスルホン酸等との付加塩が挙げられ、好ましくは、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、フマール酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、メタンスルホン酸、又はベンゼンスルホン酸との付加塩であり、さらに好ましくは、塩酸、硫酸、又はメタンスルホン酸との付加塩である。
本明細書で用いる「溶媒和物」とは、溶媒の結合した化合物をいい、例えば、エタノール和物、水和物等である。
本明細書で用いる「薬学的に許容される担体若しくは希釈剤」という用語は、溶剤〔例えば、水、生理食塩水、アルコール（例えば、エタノール）、グリセリン、植物オイルなど〕；添加剤〔例えば、賦形剤、基剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味剤、着色剤、矯味剤、芳香剤、緩衝剤、さらに可溶化剤、又は防腐剤、浸透圧を変えるための塩、コーティング剤、あるいは抗酸化剤〕などを含む。
本明細書で用いる「抗がん剤」は、「がん」患者を治療するための「製剤」であり、「がん」とは、固形がん及び造血器がんをいう。ここで、固形がんは、例えば、脳腫瘍、頭頸部がん、食道がん、甲状腺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、乳がん、胃がん、胆のう・胆管がん、肝がん、膵がん、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、絨毛上皮がん、子宮体がん、子宮頸がん、腎孟・尿管がん、膀胱がん、前立腺がん、陰茎がん、睾丸がん、胎児性がん、ウイルス腫瘍、皮膚がん、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング腫、軟部肉腫などであり、好ましくは、結腸がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膀胱がん、頭頸部がん、胃がん、膵がん、肝がん、卵巣がんであり、さらに好ましくは、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頸部がんである。一方、造血器がんとしては、例えば、急性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、真性多血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫などである。また、「製剤」とは、経口製剤及び非経口製剤を含む。経口製剤としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などであり、一方、非経口製剤としては、例えば、溶液若しくは懸濁液等の殺菌した液状の製剤、具体的には、注射剤、点滴剤などであり、好ましくは、静脈内注射剤又は静脈内点滴剤であり、さらに好ましくは静脈内点滴剤である。これらの静脈内注射剤及び静脈内点滴剤は、予め溶解したものの他、粉末のまま或いは適当な担体（添加物）を加えたものを用時溶解する形態もとり得る。
次に、結晶形態である式（Ｉ）で示される化合物の製法を記載する。
本発明は、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
・非晶形の上記式（Ｉ）で示される化合物に対して、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液を、その濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加える工程、
・得られた溶液を加熱環流する工程、
・必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程、
・得られた溶液から溶媒を留去し、濃縮する工程、
・得られた固体の懸濁溶液を加熱環流する工程、
・得られた懸濁溶液を０℃から３５℃に冷却する工程、及び
・得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法に関する。当該方法のより具体的な実施形態は、下記の製法１及び製法２である。
製法１（上記式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、１等量から１００等量、好ましくは、５から２０等量の対応する酸（塩酸、硫酸、メタンスルホン酸等）を含む、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶液からなる群から選択される溶液； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれら混合溶媒からなる群から選択される溶液； さらに好ましくは、メタノール溶液を、その溶液の濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加え、５分から２００時間、好ましくは、１０から２０時間、さらに好ましくは１５時間、加熱還流する。
得られた溶液中、完全に溶解しないものがある場合には、常圧もしくは減圧下濾過して不溶物を除く。次に、その溶媒を常圧もしくは減圧下で１／３から１／１０になるまで濃縮留去すると固体が析出する。
析出した固体の懸濁溶液をそのまま１時間から２００時間、好ましくは、１０時間から２０時間、さらに好ましくは１５時間、加熱還流する。
得られた懸濁溶液を０℃から３５℃に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、メタノール又はエタノールで、１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは４０℃で、０．５時間から１００時間、減圧下乾燥すると固体が得られる。得られた固体を適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノールに懸濁し、４０℃から１３０℃、好ましくは、７０℃から８０℃、さらに好ましくは７５℃で０．１時間から２００時間、好ましくは１５時間から２５時間、さらに好ましくは、２０時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃、好ましくは室温に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒、さらに好ましくは、エタノール又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶を製造することができる。
製法２（上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基の結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノール、或いは、０．１等量から１００等量の酢酸を含む上記溶媒の溶液を、その溶液の濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加え、５分から２００時間、好ましくは、０．２５時間から１５時間、加熱還流する。得られた溶液中、完全に溶解しないものがある場合には、常圧もしくは減圧下濾過して不溶物を除く。
次に、その溶媒を常圧もしくは減圧下で１／３から１／１０になるまで濃縮留去すると固体が析出する。析出した固体の懸濁溶液をそのまま０分から２００時間、好ましくは、２．５時間から１５時間、加熱還流する。
得られた懸濁溶液を０℃から３５℃、好ましくは、室温に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒； さらに好ましくは、メタノール、エタノール、又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で、０．５時間から１００時間減圧下乾燥すると固体が得られる。得られた固体を適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒に懸濁し、４０℃から１３０℃、好ましくは、７０℃から８０℃で０．１時間から２００時間、好ましくは１５時間から２５時間、さらに好ましくは２０時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃、好ましくは３５℃に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量の、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはメタノール、エタノール、又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは、５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基結晶を製造することができる。
また、本発明は、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
・非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液に懸濁させる工程、
・得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程、
・得られた溶液を０℃から３５℃に冷却する工程、及び
・得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法に関する。当該方法のより具体的な実施形態は、下記の製法３及び製法４である。
製法３（上記式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、１等量から１００等量、好ましくは２等量の対応する酸（塩酸、硫酸、メタンスルホン酸等）を含む、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、エタノールに懸濁させ、４０℃から１３０℃、好ましくは７５℃から８０℃で、０．１時間から２００時間、好ましくは、１５から１６８時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、エタノール又は２−プロパノールで１回から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の分子内塩結晶を製造することができる。
製法４（上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基の結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒、或いは、０．１等量から１００等量の酢酸を含む上記溶媒に懸濁し、４０℃から１３０℃、好ましくは、７５℃から８０℃で０．１時間から２００時間、好ましくは、１５時間から２４時間、加熱攪拌する。
得られた反応液を０℃から３５℃、好ましくは室温に冷却した後、得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくは、エタノール又は２−プロパノールで１から数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは、４０℃から６０℃、さらに好ましくは、５０℃で０．５時間から１００時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基の結晶を製造できる。
さらに、本発明は、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
・非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、水又は１等量から１００等量の対応する酸を含む水溶液に加える工程、
・得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程、
・必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程、
・得られた反応溶液の温度を０℃から３５℃に下げながら攪拌する工程、及び
・得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法に関する。当該方法のより具体的な実施形態は、下記の製法５である。
製法５（上記式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基結晶及び分子内塩結晶の場合）
非結晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対し、水或いは１等量から１００等量の対応する酸（酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸等）を含む水溶液を適量加え、０．５分から２０時間、４０℃から１３０℃、好ましくは、６０℃から７０℃に加熱する。得られた溶液中、完全に溶解しないものがある場合は、必要に応じ常圧もしくは減圧下濾過して不溶物を除く。
得られた溶液に、０℃から１３０℃、好ましくは６０℃から８０℃、さらに好ましくは７０℃で適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； 又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノールを加え、０℃から３５℃、好ましくは室温で０．１時間から１００時間、好ましくは１５時間から２０時間、さらに好ましくは１８時間攪拌する。
得られた固体を常圧または減圧下濾取し、適量のジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒；又は、好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、及びこれらの混合溶媒からなる群から選択される溶媒； さらに好ましくはエタノール又は２−プロパノールで数回洗浄する。
得られた固体を２５℃から８０℃、好ましくは４０℃から６０℃、さらに好ましくは５０℃で０．５時間から１００時間、好ましくは６０時間から８０時間、さらに好ましくは７２時間、減圧下乾燥することにより目的とする、式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基結晶及び分子内塩結晶を製造することができる。
また、上記に記載の、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含む、医薬組成物； 薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含む、抗がん剤； 並びに、薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、結晶形態の上記式（Ｉ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤、は、製剤技術分野の当業者に周知ないし慣用の方法を用いることにより容易に製造することができる。例えば、静脈注射用液剤、静脈注射用凍結乾燥製剤若しくは静脈注射用粉末充填製剤が挙げられる。
静脈注射用液剤は、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を適当な溶剤、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、アルコール類、大豆油などの植物由来の油、静脈注射用液体（例えばクエン酸ナトリウム及びクエン酸の水溶液）等又はその混合溶液に溶解することにより製造することができる。
また、静脈注射用凍結乾燥製剤は、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物をそのまま或いは適当な添加剤と共に適当な溶剤に溶解し、注射用バイアル等に小分けしたのち、凍結乾燥することにより製造することができる。
さらに、静脈注射用粉末充填製剤は、結晶形態である上記式（Ｉ）で示される化合物を粉末のまま或いは適当な添加物を加えたものを、注射用バイアル等に小分けすることにより製造することができる。
静脈注射用液剤は予め溶解したものをそのまま投与に用いる他、適当な溶剤又は希釈剤で用時希釈して投与する形態もとり得る。静脈注射用凍結乾燥製剤及び静脈注射用粉末充填製剤は、適当な溶剤又は希釈剤で用時溶解して投与される。ここでいう適当な溶剤又は希釈剤としては、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、アルコール類、静脈内注射用液体（例えばクエン酸ナトリウム及びクエン酸の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。
次に、熱安定性、光安定性、溶解度、及び吸湿性に関して、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物と非晶形の式（Ｉ）で示される化合物のデータを比較する。
（１）熱安定性試験
式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体熱安定性試験を表１に示す。なお、本試験は、密閉バイアル中で行われた８０℃加速試験である。表１から明らかなように、各アモルファスに比べて結晶は際立って優れた熱安定性を示す（第１図）。
（２）光安定性試験
式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体光安定性試験を表２に示す。なお、本試験は、密閉バイアル中で２５℃、２０００ルックスの光源下で行われた。表２から明らかなように、各アモルファスに比べて結晶は際立って優れた光安定性を示す（第２図）。
（３）水に対する溶解度の試験
上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物の各分子内塩結晶とそれぞれの遊離塩基アモルファスの水に対する溶解度を以下に示す。
式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファス： ０．００１ｍｇ／ｍＬ以下
式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶： １０−５０ｍｇ／ｍＬ
式（ＩＩ）で示される化合物のメタンスルホン酸塩結晶： １０−５０ｍｇ／ｍＬ
式（ＩＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファス： ０．００１ｍｇ／ｍＬ以下
式（ＩＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶： ５０−１００ｍｇ／ｍＬ
式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファス： ０．００１ｍｇ／ｍＬ以下
式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩結晶： １０−５０ｍｇ／ｍＬ
以上より、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物の各分子内塩結晶は、それぞれの遊離塩基アモルファスと比べて、際だって優れた水に対する溶解度を示すと言える。
（４）吸湿性試験
上記式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の塩酸塩結晶の吸湿性を比較したところ、通常の保管湿度である湿度３０％から７５％で比較すると、遊離塩基アモルファスの重量は加湿条件（水の吸着過程）において７．６％増量するのに対し、結晶の重量は１．５％の微増であった。即ち、式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、７．６％であった。一方、式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、１．５％であり、加湿による影響が非常に小さかった。
また、除湿条件の重量変化（水の脱着過程）については、遊離塩基アモルファスの場合は加湿条件の重量変化と著しく異なることから吸湿性による溶解等が疑われるが、結晶の場合は重量変化がどちらの条件でもほぼ一致しており吸湿による影響は観察されなかった（第３図参照）。
上記式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の結晶の吸湿性を比較した場合も、湿度３０％から７５％で比較すると、遊離塩基アモルファスの重量は２．８％増量するのに対し、結晶の重量は０．６％の微増であった。即ち、式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、２．８％であった。一方、式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時（相対湿度３０％から７５％）における重量変化率は、０．６％であり、加湿による影響が非常に小さかった。
更に、除湿条件の重量変化について、遊離塩基アモルファスの場合は加湿条件の重量変化と著しく異なることから吸湿性による溶解等が疑われるが、結晶の場合は重量変化がどちらの条件でもほぼ一致しており吸湿による影響は少ない（第４図参照）。つまり、結晶にすることでアモルファスの持つ吸湿性が著しく改善されたものと言える。
以上より、結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物、特に、結晶形態の式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基及び分子内塩； 結晶形態の式（ＩＩＩ）で示される化合物の遊離塩基及び分子内塩； 結晶形態の式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基及び分子内塩は、それぞれの対応する非結晶形のもの（遊離塩基アモルファス）に比べて、際だって優れた熱安定性・光安定性及び水溶性・低吸湿性を示すものと認められる。さらに、参考例に示されるように、遊離塩基アモルファスを結晶化することで、式（Ｉ）で示される化合物の純度を際だって向上させることもできる。
【図面の簡単な説明】
第１図は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体熱安定性試験（８０℃加速試験）の結果を示す図である。図中の白カラムは、アモルファス試料の４週間後残存率（％）を表し、斜線カラムは、結晶試料の４週間後残存率（％）を表す。
第２図は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスとそれぞれの結晶の固体光安定性試験（２５℃、２０００ルックス光源下での試験）の結果を示す。図中の白カラムは、アモルファス試料の４週間後残存率（％）を表し、斜線カラムは、結晶試料の４週間後残存率（％）を表す。
第３図は、上記式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の塩酸塩結晶の吸湿性試験の結果を示す図である。
図中の■は、式（ＩＩ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時における重量変化率（％）を表し、□は、同化合物の遊離塩基アモルファスの除湿時における重量変化率（％）を表す。一方、図中の●は、式（ＩＩ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時における重量変化率（％）を表し、○は、同化合物の塩酸塩結晶の除湿時における重量変化率（％）を表す。
第４図は、上記式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスと同化合物の塩酸塩結晶の吸湿性試験の結果を示す図である。
図中の■は、式（ＩＶ）で示される化合物の遊離塩基アモルファスの加湿時における重量変化率（％）を表し、□は、同化合物の遊離塩基アモルファスの除湿時における重量変化率（％）を表す。一方、図中の●は、式（ＩＶ）で示される化合物の塩酸塩結晶の加湿時における重量変化率（％）を表し、○は、同化合物の塩酸塩結晶の除湿時における重量変化率（％）を表す。
第５図は、実施例２−１に記載の方法で得られた化合物２の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
第６図は、実施例３に記載の方法で得られた化合物３の結晶の写真（偏光顕微鏡、倍率４００倍）である。
第７図は、実施例４に記載の方法で得られた化合物４の結晶の写真（偏光顕微鏡、倍率４００倍）である。
第８図は、実施例７−１に記載の方法で得られた化合物８の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【発明を実施するための最良の形態】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、もとより本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
実施例１−１
化合物１の結晶の製法Ａ（上記の製法２による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５００ｍｇ）を酢酸（０．２１８ｍｌ）及びメタノール（５００ｍｌ）に加え、１５時間加熱還流した。化合物１を完全に溶解した後、４００ｍｌのメタノールを常圧で留去することにより濃縮し、析出した固体の懸濁溶液をそのまま１５時間加熱還流した。室温で冷却した後、得られた固体を濾取し、メタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し４０℃で２４時間減圧下乾燥すると、３８１ｍｇの赤色固体が得られた。こうして得られた赤色固体（２５０ｍｇ）をエタノール（６．５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で２０時間加熱攪拌すると、黄色結晶の生成が認められた。室温で冷却した後、得られた結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物１（２４７ｍｇ）を得た。
分子量：
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルデータ：
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）、δｐｐｍ）：１１．１７（１Ｈ、ｓ）、９．７９（２Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．５０（１Ｈ、ｓ）、８．４０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．５９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．２６（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、５．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、５．８８（１Ｈ、ｓ）、５．３９（１Ｈ、ｓ）、５．２４（１Ｈ、ｓ）、５．１４（１Ｈ、ｓ）、４．９３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）、４．３６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、３．７６〜４．０２（４Ｈ、ｍ）、３．４３〜３．５２（２Ｈ、ｍ）
赤外吸収（ＩＲ）スペクトル：
ＩＲ（全反射型赤外吸収法（ＡＴＲ：Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ Ｔｏｔａｌ Ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ Ｉｎｆｒａｒｅｄ））：３３１５，１７４６、１６９７，１６２０，１５７６，１４５８，１３７１，１３３３，１２３２，１１９８，１１１９，１０６９，１０１５，６１５ ｃｍ−１
高圧液体クロマトグラフイ（ＨＰＬＣ）純度データ：
純度：９９．６％（逆相カラム：ワイエムシーパックプロ シー１８、エーエス−３０３（ＹＭＣ−ＰＡＣＫ Ｐｒｏ Ｃ１８、ＡＳ−３０３））
上記粉末Ｘ線回折分析データは自動Ｘ線装置リント アルティマ プラス システム（ＲＩＮＴ−Ｕｌｔｉｍａ＋システム）（２ｋＷ）（リガクインターナショナルコーポレーション（Ｒｉｇａｋｕ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）製造）によって測定した。分析方法は次のとおりである。
Ｘ線放射源：銅（Ｃｕ）
チューブ電圧／チューブ電流：４０ｋＶ／３０ｍＡ
モノクロメーター：自動モノクロメーター
ゴニオメーター：広角ゴニオメーター
スキャンステップ：０．０２度（ｄｅｇ．）
スキャン速度：２．００度（ｄｅｇ．）／分
ディバージェンス・スリット（ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｓｌｉｔ）：１度（ｄｅｇ．）
スキャッターリング・スリット（ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｓｌｉｔ）：１度（ｄｅｇ．）
レシービング・スリット（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｓｌｉｔ）：０．１５ｍｍ
測定温度：室温
残留溶媒測定：
エタノール＜０．０１％
残留溶媒含量はヘッドスペ−スサンプラ／ガスクロマトグラフ／質量選択的検出器（ＨＳＳ／ＧＣ／ＭＳＤ）（アジレント・テクノロジー（Ａｇｌｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｉｅｓ）製造）によって測定した。
吸湿性試験：
吸湿性試験は、アイガソープ モイスチャー ソープション アナライザー、ハイデン アナリティカル リミテッド（ＩＧＡｓｏｒｐ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ、Ｈｉｄｅｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ）製造によって測定した（第３図参照）。
実施例１−２
化合物１の結晶の製法Ｂ（上記の製法４による）：特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（３０ｍｇ）を、エタノール（１．０ｍｌ）及び酢酸（０．００５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で１２０時間減圧下乾燥することにより、２９ｍｇの黄色結晶の化合物１を得た。
なお、実施例１−２で示した方法により得られた結晶も実施例１−１と同様の粉末Ｘ線回折スペクトルをしめした。
実施例２−１
化合物２の結晶の製法Ａ（上記の製法１による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５００ｍｇ）をメタノール（３００ｍｌ）及び塩酸−メタノール試薬（１０ｍｌ）からなる混合溶媒に加え、４時間加熱還流した。化合物１を完全に溶解した後、得られた溶液から２００ｍｌのメタノールを常圧で留去することにより濃縮し、析出した固体の懸濁溶液をそのまま１５時間加熱還流した。室温に冷却した後、得られた固体を濾取し、メタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、４０℃で２４時間減圧下乾燥すると、３９３ｍｇの黄色固体が得られた。こうして得られた黄色固体（２４０ｍｇ）をエタノール（６ｍｌ）に懸濁し、７５℃で２０時間加熱攪拌した。室温に冷却した後、黄色結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物２（２３５ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８２（２Ｈ、ｓ）、８．８３（２Ｈ、ｍ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．７１（１Ｈ、ｓ）、８．５１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ）、６．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４、１．８Ｈｚ）、６．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４，２．２Ｈｚ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、４．８３（２Ｈ、ｓ）、４．５８（２Ｈ、ｓ）、３．７２〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４０〜３．５５（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３２４０，１７３８，１６９３，１６２０，１５７６，１４７２，１４１０，１３７７，１３３９，１３２１，１２２５，１１８６，１１２１，１０５１，１００５，９０５，８２９，８１８，７４３ ｃｍ−１
純度：９９．１％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
塩酸（ＨＣｌ） １．０１ モル比率
イオン定量はキャピラリー電気泳動（ＨＰＣＥ，Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｐｌｏｇｉｅｓ製造）によって測定した。
残留溶媒：エタノール（ＥｔＯＨ）＜０．０１％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
実施例２−２
化合物２の結晶の製法Ｂ（上記の製法３による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（３０ｍｇ）を、エタノール（１．０ｍｌ）及び１モル濃度（Ｍ）塩酸水溶液（０．０９ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温で冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で２４時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物２（２９ｍｇ）を得た。
なお、実施例２−２で示した方法により得られた結晶も実施例２−１と同様の粉末Ｘ線回折スペクトルを示した。
【実施例３】
化合物３の結晶の製法（上記の製法５による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５００ｍｇ）を、エタノール（１８０ｍｌ）、水（１８０ｍｌ）および、硫酸（０．０４０７ｍｌ）からなる混合溶媒に加え、７０℃で加熱攪拌することにより溶解した。この溶液を、室温で１８時間ゆっくり攪拌すると、燈色結晶が析出した。この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、燈色針状結晶の化合物３（４９１ｍｇ）を得た（第６図参照）。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１９（１Ｈ、ｓ）、９．８０（１Ｈ、ｓ）、９．７７（１Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、８．６２（１Ｈ、ｓ）、８．０８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８、１．１Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８，１．８Ｈｚ）、６．４１（１Ｈ、ｂｓ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．８７（１Ｈ、ｂｓ）、５．０５〜５．７２（３Ｈ、ｍ）、４．９２（１Ｈ、ｂｓ）、４．７９（２Ｈ、ｓ）、４．４８（２Ｈ、ｓ）、３．７６〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４１〜３．５４（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３２９０，２３６０，１７４４，１６９２，１６１８，１５７８，１４５８，１４００，１３７５，１３２９，１２３１，１１９６，１１２０，１０４９，１０１５，７３９ ｃｍ−１
純度：９８．４％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
Ｈ２ＳＯ４ ０．４８ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール 検出されず
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
【実施例４】
化合物４の結晶の製法（上記の製法５による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（５０ｍｇ）を、エタノール（１．８ｍｌ）、水（０．５ｍｌ）、及びメタンスルホン酸（０．００９９ｍｌ）からなる混合溶媒に加え、６５℃で加熱攪拌することにより溶解した。この溶液を、室温で２２時間ゆっくり攪拌すると、黄燈色結晶が析出した。この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄燈色結晶の化合物４（４９ｍｇ）を得た（第７図参照）。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８０（１Ｈ、ｓ）、９．７７（１Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．８１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．７１（１Ｈ、ｓ）、８．４６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．５２（１Ｈ、ｂｓ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ）、５．８３（１Ｈ、ｂｓ）、４．８３（２Ｈ、ｓ）、４．５６（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０２（４Ｈ、ｍ）、３．４０〜３．５３（２Ｈ、ｍ）、２．３０（３Ｈ、ｓ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３３１１，１７４７，１６９９，１６２０，１５８３，１４５６，１３２９，１１９６，１１５３，１１２４，１０４２，１０１６，７７９，７４２ ｃｍ−１
イオン定量：
メタンスルホン酸（ＣＨ３ＳＯ３Ｈ） １．００ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール 検出されず
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
【実施例５】
化合物５の結晶の製法（上記の製法３による）：特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例１４に記載の方法で調整した非結晶形の化合物１（１０９ｍｇ）を、エタノール（３．６ｍｌ）及びメタンスルホン酸（０．０２２ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると、黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物５（１０７ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．７７（２Ｈ、ｂｓ）、８．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、８．８６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７１（１Ｈ、ｓ）、８．５０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．８３（２Ｈ、ｓ）、４．５７（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４２〜３．５２（４Ｈ、ｍ）、２．３０（３Ｈ、ｓ）、１．０５（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３３１２，２３４１，１７５３，１７０７，１６２２，１５８１，１４５６，１３７７，１３２７，１２３２，１１９６，１１１１，１０２２，７４５，６３５，６１７ ｃｍ−１
純度：９９．２％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
メタンスルホン酸 １．１４ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒： エタノール ５．４９％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
【実施例６】
化合物７の結晶の製法（上記の製法３による）： 特開平１０−２４５３９０号明細書の実施例２７に記載の方法で調整した非結晶形の化合物６（５００ｍｇ）を、エタノール（１５ｍｌ）及び６Ｍ塩酸水（０．２５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１６８時間加熱攪拌すると、燈色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、燈色結晶の化合物７（４３０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６５４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８２（２Ｈ、ｓ）、８．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．３８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、８．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、７．７７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）、６．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、４．７７（２Ｈ、ｓ）、４．６３（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４２〜３．５４（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３１７０，１７３８，１６８８，１６１４，１５８０，１４１５，１３４５，１２９０，１２５０，１１９８，１０８８，１０６１，１００２，９０７，８３１，７９９，７４１ ｃｍ−１
純度：９９．５％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
塩酸 １．１３ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール ０．２７％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
実施例７−１
化合物８の結晶の製法：
１）非晶形の化合物８の製法
化合物Ａ（ヒドラジン体）６．３ｇ及び４−ピリジンカルボアルデヒド１．４５ｍｌをメタノール２１０ｍｌに溶解し、１．７６ｍｌの酢酸を加えた後、７０℃で終夜撹拌した。析出した固体を濾別してメタノールで洗浄した後、得られた固体をメタノールー−テトラヒドロフラン（１：１）の混合溶媒７．０Ｌに溶解し、１０％パラジウム炭素１ｇを加え、水素雰囲気下で終夜撹拌した。得られた反応液をセライトで濾過したのち、その濾液を濃縮した。残差をセファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィに充填し、メタノールで展開した。目的とする分画を濃縮乾燥することにより化合物８（３．３ｇ）を得た。
２）化合物８の結晶の製法（上記の製法２による）
上記１）で調整した非結晶形の化合物８（２５０ｍｇ）を、メタノール（５００ｍｌ）及び酢酸（０．１３５ｍｌ）に加え、１５分間加熱還流した。化合物８を完全に溶解した後、得られた溶液から４３０ｍｌのメタノールを常圧で留去することにより濃縮し、析出した固体の懸濁溶液をそのまま２．５時間加熱還流した。この溶液を室温に冷却した後、得られた固体を濾取し、メタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で２時間減圧下乾燥すると、２００ｍｇの黄色固体が得られた。こうして得られた黄色固体（２００ｍｇ）をエタノール（５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で２０時間加熱攪拌した。得られた溶液を室温に冷却した後、黄色結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、黄色結晶の化合物８（１９７ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６２４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１７（１Ｈ、ｓ）、９．７８（１Ｈ、ｓ）、９．７６（１Ｈ、ｓ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．４７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．５４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、６．８２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８、１．８Ｈｚ）、６．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８，１．８Ｈｚ）、６．３２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．９５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、５．８７（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．３４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．１２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．３３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、３．７６〜４．０２（４Ｈ、ｍ）、３．４４〜３．５２（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：１７４９，１６９０，１６３０，１５７８，１４５６，１４００，１３６９，１３２９，１２５３，１１９６，１１５３，１１２１，１０８０，１０６１，１０１３，８００，７４３，６１７ ｃｍ−１
純度：９８．２％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：
エタノール ０．１０％、 メタノール ０．３２％
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
実施例７−２
化合物８の結晶の製法Ｂ（上記の製法４による）： 実施例７−１の１）に記載の方法で調整した非結晶形の化合物８（３０ｍｇ）を、エタノール（１ｍｌ）及び酢酸（０．００５ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１５時間加熱攪拌すると、黄色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で１５時間減圧下乾燥することにより、２７ｍｇの黄色結晶の化合物８を得た。
実施例７−２で示した方法により得られた結晶も実施例７−１と同様の粉末Ｘ線回折スペクトルを示した。
【実施例８】
化合物９の結晶の製法Ａ（上記の製法３による）： 実施例７−１の１）に記載の方法で調整した非結晶形の化合物８（３００ｍｇ）を、エタノール（１０ｍｌ）及び１Ｍ塩酸水（０．９ｍｌ）に懸濁し、７５℃で１１４時間加熱攪拌すると、燈色結晶の生成が認められた。得られた溶液を室温に冷却した後、この結晶を濾取し、エタノール（１ｍｌ）で３回洗浄し、５０℃で７２時間減圧下乾燥することにより、燈色結晶の化合物９（２７９ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：６２４ （Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δｐｐｍ）：１１．１８（１Ｈ、ｓ）、９．８３（２Ｈ、ｓ）、８．８５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、８．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．２７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ）、６．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４、１．１Ｈｚ）、６．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４，１．９Ｈｚ）、５．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、４．６４（２Ｈ、ｓ）、３．７５〜４．０３（４Ｈ、ｍ）、３．４２〜３．５５（２Ｈ、ｍ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：３３１２，１７４０，１６６６，１６１６，１５７６，１４８１，１３８１，１３１９，１１９０，１１５９，１１２３，１０７４，７３９，６１３ ｃｍ−１
純度：９８．２％
上記純度データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
上記粉末Ｘ線回折分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
イオン定量：
塩酸 ０．９７ モル比率
上記イオン定量分析データは実施例２−１と同じ条件で測定された。
残留溶媒：エタノール 検出されず
上記残留溶媒分析データは実施例１−１と同じ条件で測定された。
参考例： 結晶化による式（ＩＩ）で示される化合物の高純度化例
特開平１０−２４５３９０の実施例１４に示す方法で調整した未精製の化合物（ＩＩ）（純度８８％）を製法２により結晶化したところ純度９８％の化合物（ＩＩ）を得た。
【産業上の利用可能性】
結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物は、対応する非晶形の化合物に比べて際だって優れた安定性、溶解度などを示すので、抗がん剤の有効成分として産業上の利用可能性がある。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
（式中、Ｒは、無置換又はヒドロキシメチル基で置換されたピリジルメチル基を表す。）で示される結晶形態の６−Ｎ−ピリジルメチルアミノ−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒドロキシ−１２−β−Ｄ−グルコピラノシル−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオンの遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物。
【請求項２】
式（Ｉ）の化合物が、下記式（ＩＩ）：
で示される化合物；
下記式（ＩＩＩ）：
で示される化合物；又は
下記式（ＩＶ）：
で示される化合物である、請求の範囲１記載の遊離塩基、その医薬上許容される塩、又はその溶媒和物。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）で示される化合物であり、かつ、その医薬上許容される塩が、塩酸塩、硫酸塩、又はメタンスルホン酸塩であるか；
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩＩ）で示される化合物であり、かつ、その医薬上許容される塩が塩酸塩、硫酸塩、又はメタンスルホン酸塩であるか；又は
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＶ）で示される化合物であり、かつ、その医薬上許容される塩が塩酸塩、硫酸塩、又はメタンスルホン酸塩である、請求の範囲１記載の医薬上許容される塩。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物である、請求の範囲１記載の溶媒和物。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）で示される化合物であり、その医薬上許容される塩がメタンスルホン酸塩であり、かつ、エタノール和物である、請求の範囲１記載の溶媒和物。
【請求項６】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
非晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対して、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液を、その濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加える工程；
得られた溶液を加熱環流する工程；
必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程；
得られた溶液から溶媒を留去し、濃縮する工程；
得られた固体の懸濁溶液を加熱環流する工程；
得られた懸濁溶液を０℃から３５℃に冷却する工程；及び
得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項７】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液に懸濁させる工程；
得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程；
得られた溶液を０℃から３５℃に冷却する工程； 及び
得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項８】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、水又は１等量から１００等量の対応する酸を含む水溶液に加える工程；
得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程；
必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程；
得られた反応溶液の温度を０℃から３５℃に下げながら攪拌する工程；及び
得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項９】
薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、医薬組成物。
【請求項１０】
薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、抗がん剤。
【請求項１１】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤。
【請求項１２】
式（Ｉ）で示される化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物である、請求の範囲１１記載の注射用抗がん剤。
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
（式中、Ｒは、無置換又はヒドロキシメチル基で置換されたピリジルメチル基を表す。）で示される結晶形態の６−Ｎ−ピリジルメチルアミノ−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒドロキシ−１２−β−Ｄ−グルコピラノシル−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオンの遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物。
【請求項２】
式（Ｉ）の化合物が、下記式（ＩＩ）：
で示される化合物；
下記式（ＩＩＩ）：
で示される化合物；又は
下記式（ＩＶ）：
で示される化合物である、請求の範囲１記載の遊離塩基、その医薬上許容される塩、又はその溶媒和物。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）で示される化合物であり、かつ、その医薬上許容される塩が、塩酸塩、硫酸塩、又はメタンスルホン酸塩であるか；
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩＩ）で示される化合物であり、かつ、その医薬上許容される塩が塩酸塩、硫酸塩、又はメタンスルホン酸塩であるか；又は
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＶ）で示される化合物であり、かつ、その医薬上許容される塩が塩酸塩、硫酸塩、又はメタンスルホン酸塩である、請求の範囲１記載の医薬上許容される塩。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物である、請求の範囲１記載の溶媒和物。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）で示される化合物であり、その医薬上許容される塩がメタンスルホン酸塩であり、かつ、エタノール和物である、請求の範囲１記載の溶媒和物。
【請求項６】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
非晶形の式（Ｉ）で示される化合物に対して、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液を、その濃度が５０ｍｇ／Ｌから１ｇ／Ｌになるように加える工程；
得られた溶液を加熱環流する工程；
必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程；
得られた溶液から溶媒を留去し、濃縮する工程；
得られた固体の懸濁溶液を加熱環流する工程；
得られた懸濁溶液を０℃から３５℃に冷却する工程；及び
得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項７】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、１等量から１００等量の対応する酸を含むか又は適量の酢酸を含んでいてもよい有機溶媒溶液に懸濁させる工程；
得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程；
得られた溶液を０℃から３５℃に冷却する工程； 及び
得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項８】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、
非晶形の式（Ｉ）で示される化合物を、水又は１等量から１００等量の対応する酸を含む水溶液に加える工程；
得られた溶液を４０℃から１３０℃で加熱攪拌する工程；
必要に応じて、得られた溶液を濾過することにより不溶物を除去する工程；
得られた反応溶液の温度を０℃から３５℃に下げながら攪拌する工程；及び
得られた結晶を単離する工程、を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項９】
薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、医薬組成物。
【請求項１０】
薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に、請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物の遊離塩基、その医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含む、抗がん剤。
【請求項１１】
請求の範囲１記載の結晶形態の式（Ｉ）で示される化合物を用いた、注射用抗がん剤。
【請求項１２】
式（Ｉ）で示される化合物が、請求の範囲２記載の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、又は（ＩＶ）で示される化合物である、請求の範囲１１記載の注射用抗がん剤。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０１００１９
【国際公開日】平成１７年２月３日（２００５．２．３）
【発行日】平成１８年９月７日（２００６．９．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１２０７３（Ｐ２００５−５１２０７３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１０７４１
【国際出願日】平成１６年７月２１日（２００４．７．２１）
【出願人】（０００００５０７２）萬有製薬株式会社 (51)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年２月３日（２００５．２．３）
【発行日】平成１８年９月７日（２００６．９．７）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１０７４１
【国際出願日】平成１６年７月２１日（２００４．７．２１）
【出願人】（０００００５０７２）萬有製薬株式会社 (51)
【Ｆターム（参考）】
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