結晶性形態のビフェニル化合物
本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を提供する。本発明はまた、そのような塩を含む薬学的組成物、またはそのような塩を使用して調製される薬学的組成物；そのような塩を調製するためのプロセスおよび中間体；およびそのような塩を使用して肺障害を処置する方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、肺障害を処置するための治療因子として有用であると期待されるビフェニル化合物の新規結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩に関する。本発明はまた、そのような結晶性化合物を含む薬学的組成物、もしくはそのような結晶性化合物から調製される薬学的組成物、そのような結晶性化合物を調製するためのプロセスおよび中間体、ならびにそのような結晶性化合物を使用して肺障害を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（技術的現状）
同一出願人による２００４年２月１３日出願の米国特許出願第１０／７７９，１５７号は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および喘息などの肺障害を処置するための治療因子として有用である新規ビフェニル化合物を開示している。特に、この化合物、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルは、ムスカリンアンタゴニストおよびβ２アドレナリンレセプターアゴニスト活性の両方を有するとして、これらの出願に特異的に開示される。ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの化学構造は、式Ｉ：
【０００３】
【化２】
によって表される。
【０００４】
肺障害を処置するために有用な治療因子は、吸入により、好都合に直接気道へと投与される。そのため、いくつかの種類の薬学的吸入デバイスが、吸入により治療因子を投与するために開発されており、その中には、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）、およびネブライザー吸入器が含まれる。そのようなデバイス中での使用のための薬学的組成物および調合物を調製する場合、吸湿性でも潮解性でもなく、比較的高い融点（すなわち、約１５０℃より高い融点）を有し、それにより結晶性の重大な分壊または喪失なくこの物質を微粉化し得る結晶性形態の治療因子を有することが非常に望ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
式Ｉの化合物の結晶性塩形態は、以前に報告されていない。したがって、受容可能な水準の吸湿性および比較的高い融点を有する式Ｉの化合物の、安定した、非潮解性の結晶性塩形態に対する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を提供する。
【０００７】
驚くことに、式Ｉの化合物のそのような結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、大気中の湿気に曝露される場合でさえも、潮解性ではないことが見出された。さらに、そのような結晶性塩は、受容可能な水準の吸湿性および非常に高い融点（例えば、約２１５℃より高い融点）を有する。特定の実施形態において、本発明の結晶性塩は、約２３０℃より高い融点を有する。
【０００８】
いくつかある使用の中で、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、肺障害を処置するために有用であると期待される薬学的組成物を調製するために有用である。したがって、その組成物の別の局面おいて、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアおよびビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む薬学的組成物を提供する。
【０００９】
特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、さらにステロイド抗炎症因子（たとえば、コルチコステロイド（ｃｏｒｔｅｃｏｓｔｅｒｏｉｄ））；もしくはホスホジエステラーゼ−４インヒビター；またはそれらの組み合わせを含む。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩を含み、約４〜約６の範囲におけるｐＨを有する等張生理食塩水溶液を含む薬学的組成物を提供する。
【００１１】
さらに別の実施形態において、本発明は：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子
を含む組み合わせを提供する。
【００１２】
式Ｉの化合物は、ムスカリンアンタゴニスト活性およびβ２アドレナリンレセプターアゴニスト活性の両方を有する。したがって、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩は、肺障害（例えば、喘息、および慢性閉塞性肺疾患）を治療するための治療因子として有用であると期待される。
【００１３】
さらに、方法の局面のうちの１つにおいて、本発明は、肺障害を処置するための方法を提供し、この方法は、処置を必要としている患者に、治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。
【００１４】
さらに、方法の別の局面において、本発明は、患者において気管支拡張（ｂｒｏｎｃｈｏｄｉｌａｔｉｏｎ）を生じさせる方法を提供し、この方法は、気管支拡張を生じさせる量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を、吸入により患者に投与する工程を包含する。
【００１５】
本発明はまた、慢性閉塞性肺疾患または喘息を処置する方法を提供し、この方法は、処置を必要としている患者に、治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。
【００１６】
本発明はまた、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するためのプロセスに向けられる。したがって、その方法の別の局面において、本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を調製するためのプロセス；ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを１，２−エタンジスルホン酸と接触させる工程を包含するプロセスを提供する。
【００１７】
その方法のさらに別の局面において、本発明は、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは：
（ａ）式ＩＩの化合物：
【００１８】
【化３】
をフッ化物イオンと接触させる工程であって、ここで
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃが、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、−Ｃ１〜４アルキル−（フェニル）から独立して選択されるか、またはＲ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのうちの１つが−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である工程；および
（ｂ）工程（ａ）からの生成物を、１，２−エタンジスルホン酸もしくはその水和物と接触させて式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を形成させる工程であって、
工程（ａ）および（ｂ）が、同じ反応容器中で、工程（ａ）の生成物を分離せずに実施される工程
を包含する。
【００１９】
その方法の別の局面において、本発明は、約２３０℃より高い融点を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するプロセスを提供し、このプロセスは、不活性希釈剤に溶解させた式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩を含む溶液に、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を加える工程を包含し、ここでこの種結晶は、約２３０℃より高い融点を有する。
【００２０】
このプロセスはまた、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を再結晶化し、約２３０℃より高い融点を有する結晶性形態を提供するために使用され得る。したがって、本発明は、約２３０℃より高い融点を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するためのプロセスをさらに提供し、このプロセスは：
（ａ）式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を、第一の温度にて不活性な希釈剤に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の生成物を第二の温度に冷却する工程；および
（ｃ）式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を加える工程
を包含し、ここで、種結晶は約２３０℃より高い融点を有し、第一の温度は、１，２−エタンジスルホン酸塩を溶解させるのに十分な温度であり、そして第二の温度は、種結晶が工程（ｂ）の生成物に加えられる場合に完全に溶解する温度より低い。
【００２１】
さらに、本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを精製するためのプロセス；ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を形成させる工程を包含するプロセスに向けられる。本発明はまた、本明細書中に記載されるプロセスによって調製される生成物にも向けられる。
【００２２】
本発明はまた、治療における使用または薬としての使用のためのビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物に向けられる。
【００２３】
さらに、本発明は、薬の製造；特に肺障害の処置のための薬の製造のためのビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の使用に向けられる。
【００２４】
本発明はまた、肺障害の処置のための薬の製造における：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子
の使用に向けられる。
【００２５】
本発明はまた、微粉形態のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；ならびに、微粉形態の薬学的に受容可能なキャリアおよびビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む薬学的組成物に向けられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を提供する。これらの塩（すなわち、式Ｉの化合物）中の活性な治療因子は、（Ｒ）配置を有する１つのキラル中心を含んでいる。しかしながら、全体として組成物の任意の有用性がそのような異性体の存在によって排除されないならば、他に示さない限り、少量の（Ｓ）立体異性体が本発明の組成物中に存在し得ることが、当業者には理解される。
【００２７】
式Ｉの化合物は、市販のＡｕｔｏＮｏｍソフトウェア（ＭＤＬ，Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して命名された。加えて、１，２−エタンジスルホン酸塩はまた、時にエジシラート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅまたはｅｄｉｓｉｌａｔｅ）塩として述べられることがある。
【００２８】
（定義）
本発明の化合物、組成物、方法、およびプロセスを記載する場合、次の用語は、他に示さない限り、次の意味を有する。
【００２９】
用語「融点」は、本明細書中で使用される場合、最大吸熱熱流が、示差走査熱量測定により得られる温度を意味する。
【００３０】
用語「微粉形態」は、少なくとも約９０％の粒子が約１０μｍより小さな直径を有する粒子の形態を意味する。
【００３１】
用語「溶媒和物」は、溶質の１つ以上の分子によって形成される複合体または凝集物（すなわち、式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩）、および溶媒の１つ以上の分子を意味する。そのような溶媒和物は、典型的に、実質的に固定された溶質と溶媒とのモル比を有する。この用語はまた、水を有する包接化合物を含む包接化合物を含む。代表的な溶媒は、例として、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸などが挙げられる。溶媒が水の場合、その形成される溶媒は水和物である。
【００３２】
用語「治療有効量」は、処置を必要としている患者に投与される場合、処置を達成するのに十分な量を意味する。
【００３３】
用語「処置する」または「処置」は、本明細書中で使用される場合：
（ａ）疾患または医学的状態（ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）が生じるのを防ぐ（すなわち、患者の予防的処置）こと；
（ｂ）疾患または医学的状態を改善する（すなわち、患者において、疾患または医学的状態の排除または軽減をもたらす）こと；
（ｃ）疾患または医学的状態を抑制する（すなわち、患者において、疾患または医学的状態の発達を減速させるかまたは阻止する）こと；あるいは
（ｄ）患者において、疾患の症状または医学的状態を緩和すること
を含み、患者（例えば、哺乳動物（特にヒト）において疾患もしくは医学的状態（例えば、ＣＯＰＤ）を処置することまたはその処置を意味する。
【００３４】
用語「単位投薬形態」は、患者に投薬するのに適した物理的に分離した単位、すなわち、本発明の塩の予め決定された量を含む各単位を表す。この予め決定された量は、単独で、または１つ以上の付加的な単位との組み合わせにおいて所望の治療効果を生むように算定される。例えば、そのような単位投薬形態は、乾燥粉末吸入カプセル、定量吸入器からの一定用量、カプセル、錠剤、丸剤などであり得る。
【００３５】
（本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩）
本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル、および１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその水和物から調製され得る。
【００３６】
本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩は、典型的に、式Ｉの化合物１モル当量当たり約０．９０と約１．１０モル当量との間の１，２−エタンジスルホン酸を含み；式Ｉの化合物１モル当量当たり約０．９５と約１．０５モル当量との間の１，２−エタンジスルホン酸を含む。特定の実施形態において、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩は、式Ｉの化合物１モル当量当たり約１モル当量の１，２−エタンジスルホン酸を含む。
【００３７】
１，２−エタンジスルホン酸のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルに対するモル比率は、当業者が利用し得る種々の方法により、容易に決定され得る。例えば、そのようなモル比率は、１Ｈ ＮＭＲにより容易に決定され得る。あるいは、元素分析およびＨＰＬＣ法が、モル比率を決定するために使用され得る。
【００３８】
本発明で使用されるビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルは、市販の出発物質および試薬から、以下の実施例に記載される手順を使用するか；または本出願の背景部分に記載される同一出願人による米国特許出願に記載される手順を使用して、容易に調製され得る。
【００３９】
１，２−エタンジスルホン酸は、例えば、Ａｌｆａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．，Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ，ＵＫから市販されている。１つの実施形態において、本発明の塩を調製するのに使用される１，２−エタンジスルホン酸は、二水和物である。特定の実施形態において、１，２−エタンジスルホン酸二水和物は、９７％以上の純度（ＨＰＬＣによって決定される場合）を有する。望ましい場合は、本発明に使用される１，２−エタンジスルホン酸二水和物を、使用する前に、例えば酢酸および無水酢酸から再結晶化し得る。
【００４０】
本発明の結晶性塩を調製するために、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを、典型的には、約０．７５〜約１．３モル当量の１，２−エタンジスルホン酸、またはその水和物と接触させる。一般的に、この反応は、約０℃〜約６０℃；約２０℃〜約５５℃（例えば、約２５℃〜約５０℃）を含む範囲の温度にて、不活性な希釈剤中で実施される。この反応に適した不活性な希釈剤としては、これらに限定されないが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、酢酸エチル、ジクロロメタンなどが挙げられ、必要に応じて水を含む。特定の実施形態において、エタノール中の１，２−エタンジスルホン酸二水和物の溶液を、イソプロパノールとジクロロメタン（６４：１）との混合物中のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの体積の約５倍まで加える。他の特定の実施形態において、１，２−エタンジスルホン酸二水和物の溶液は、希釈剤として水またはエタノールを含み、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル溶液は、希釈剤としてイソプロパノールまたはエタノールを含む。
【００４１】
あるいは、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、式Ｉの化合物のシリルで保護された誘導体（すなわち、式ＩＩの化合物）を、フッ化物イオンの供給源と接触させ、次いで同じ反応容器中で、その生成物を１，２−エタンジスルホン酸またはその水和物と接触させることにより調製し得る。特定の実施形態において、シリル保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基である。他の適切なシリル保護基としては、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル（ｂｕｙｌｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ）、ｔｅｒｔ−ブトキシジフェニルシリルなどが挙げられる。このプロセスで使用されるフッ化物イオンの供給源は、フッ化物イオンまたはフッ化水素を含んでいるか、または包含している任意の試薬であり得る。特定の実施形態において、フッ化物イオンの供給源は、三フッ化水素トリエチルアミンである。フッ化物イオンの他の適切な供給源は、フッ化テトラブチルアンモニウム、１８−クラウン−６を有するフッ化カリウム、フッ化水素、ピリジンフッ化水素塩などが挙げられる。
【００４２】
一般的に、このプロセスは、約０℃〜約５０℃；約２０℃〜約３５℃（例えば、約２５℃〜約３０℃）を含む範囲の温度において不活性な希釈剤中で実施される。この反応に適切した不活性な希釈剤としては、これらに限定されないが、ジクロロメタン、メタノール、およびそれらの混合物が挙げられる。特定の実施形態において、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（４−｛［（Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−２−クロロ−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの溶液を、ジクロロメタン中の約２．５〜約３．０モル当量のトリエチルアミン三フッ化水素塩と、周囲温度にて約１２〜２４時間、またはシリル基の除去が実質的に完了するまで接触させる。得られた溶液を、反応生成物を分離せず、メタノール中の約０．９〜約１．１モル当量の１，２−エタンジスルホン酸二水和物を加え、そしてこの混合物を約２５℃〜約３５℃にて約２〜約６時間加熱する。この反応の完了の際に、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、任意の従来の方法（例えば、沈殿、濃縮、遠心分離など）により、反応混合物から分離される。
【００４３】
必要に応じて、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、容量で約１５％〜約２５％（約２０％を含む）の水を含むイソプロパノール中で、塩を攪拌または懸濁（ｓｌｕｒｒｉｎｇ）させることによりさらに精製され得る。特定の実施形態において、１，２−エタンジスルホン酸塩１ｇ当たり約１０ｍＬのイソプロパノール／水混合物が使用される。
【００４４】
本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するプロセスは、必要に応じて、特定の結晶性塩を優位に生産するための種結晶の使用を含む。例えば、高温で（すなわち、約２３０℃より高い温度で）融解する結晶性塩の種結晶を使用することにより、種結晶と本質的に同じ融点を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製し得る。そのような種結晶は、最初、結晶性塩を形成する場合に使用され得るか、または結晶性もしくは一部が結晶性の塩を再結晶化するために使用され得る。
【００４５】
典型的に、種結晶は、攪拌せず、冷却を適用しないゆっくりとした結晶化により、小規模で調製される。種結晶を得るための例として、典型的に、溶解を与えるのに十分な温度で不活性な希釈剤に結晶性塩を溶解させる。一般的に、種結晶を得る最初のプロセスにおいて、少量の、典型的に１０ｇ未満（５ｇ未満（例えば１ｇ未満）を含む）の結晶性塩が使用される。特定の実施形態において、希釈剤として約１２％〜約２０％の水（約１３％〜約１５％の水を含む）が、約６０℃〜約７０℃（例えば、約６０℃〜約６５℃）の範囲の温度にて使用される。この溶液を、室温に冷却させる。約１日〜約３日後、得られた結晶を濾過、または他の慣例的な方法により単離する。あるいは、以前の結晶性物質の調製から、種結晶が得られ得る。
【００４６】
種結晶を使用した再結晶化プロセスにおいて、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を、種結晶を得るプロセスの場合のように、不活性な希釈剤、典型的には１５％の水を含むメタノールに、約６０℃〜約６５℃の範囲の温度にて溶解させる。この溶液を種結晶が溶解しない温度、例えば、約３０℃〜約４０℃の範囲における温度に冷却させ、次いで、種結晶を加える。典型的に、この溶液中の結晶性塩の重量に対する種結晶の重量の比は、約１：５と約１：３５との間である。この溶液を結晶化が起こる温度、例えば約２０度に冷却し、約２時間〜約２４時間、攪拌する。得られた結晶を、慣例的な方法により単離する。大量の物質を調製するのに十分な種結晶を得るために、最初の再結晶化によって得られた結晶を、次の再結晶化工程のための種結晶として使用し、この再結晶化プロセスを連続的に実施し得る。再結晶化プロセスの工程が実施される特異的な温度は、希釈剤の性質および希釈剤中の結晶性塩の濃度に従い選択されることが理解される。さらに、冷却する代わりにエバポレーションかまたは抗溶媒を、結晶化を促進するために使用して、この再結晶化プロセスを実施し得る。
【００４７】
いくつかある利点の中で、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を形成することが、式Ｉの化合物を精製するために有用であることが見出された。一般的に、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、高速液体クロマトグラフィーにより決定される場合、９５％より高い純度；典型的に９８％より高い純度を有する。
【００４８】
本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、約２１５℃〜約２４０℃の範囲で吸熱熱流におけるピークを示す示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の記録によって明示されるように、非常に高い融点を特徴とする。結晶性塩の融点温度は、その結晶性塩が形成されたプロセスに従うことが認められた。攪拌せず、冷却を適用しないゆっくりとした結晶化によって形成される種結晶は、約２３０℃より高い融点を示す。そのような種結晶を用いた再結晶化を含むプロセスによって形成される結晶性塩は、典型的に、例えば図１に示されるように、約２３０℃〜約２４５℃の範囲における融点を示す。約２３０℃より高い融点を有する種結晶を用いずに形成された結晶性塩は、典型的に、例えば図２に示されるように、約２１５℃〜約２２９℃の範囲における融点を示す。したがって、特定の実施形態において、本発明は、実質的に図１または図２に示される記録に従う約２００℃より高い温度範囲にＤＳＣの記録を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を提供する。
【００４９】
別の実施形態において、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、５．０±０．３および１５．０±０．３の２θの値において有意な回析ピークを有する粉末エックス線回析（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。図３に示されるような融点が高い種結晶からの再結晶化により調製した結晶化塩のＰＸＲＤスペクトルにおけるピーク位置と、図４に示されるようなそのような種結晶を使用せずに調製した塩のピーク位置との間に、微妙な違いが認められた。従って、別の実施形態において、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、ピーク位置が実質的に図３または図４に示されるＰＸＲＤスペクトルにおけるピーク位置と一致する粉末エックス線回析パターンを特徴とする。
【００５０】
別の実施形態において、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、図５に図示されるように、約７０４ｃｍ−１、約７４８ｃｍ−１、約７６８ｃｍ−１、約８４１ｃｍ−１、約９００ｃｍ−１、約１０５５ｃｍ−１、約１１０４ｃｍ−１、約１１６６ｃｍ−１、約１２１８ｃｍ−１、約１２９４ｃｍ−１、約１４０８ｃｍ−１、約１５２２ｃｍ−１、約１６０９ｃｍ−１、約１６５５ｃｍ−１、および約１７０１ｃｍ−１において有意な吸収帯を示す赤外線（ＩＲ）吸収スペクトルを特徴とする。
【００５１】
式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、受容可能な適度な水準の吸湿性（すなわち、相対湿度４０％〜相対湿度７５％の湿度範囲において約２．５％未満重量増）を有する可逆的吸着／脱着プロフィールを有することが示された。
【００５２】
本発明の塩のこれらの特性について、以下の実施例においてさらに説明する。
【００５３】
（薬学的組成物および調合物）
式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩を、典型的には、薬学的組成物または調合物の形態で患者に投与する。そのような薬学的組成物を、投与の任意の受容可能な経路（これらに限定されないが、吸引、経口、鼻腔、局所（経皮を含む）を含む）、および投与の非経口形態によって患者に投与し得る。しかしながら、本発明の結晶性塩は調合されてしまうと結晶性形態ではなくなり得る（すなわち、この塩を適切なキャリアに溶解し得る）ということが当業者には理解される。
【００５４】
したがって、組成物の局面のうちの１つにおいて、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアもしくは賦形剤、およびビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む薬学的組成物に向けられる。必要に応じ、そのような薬学的組成物は、望ましい場合、他の治療剤および／または調合剤を含み得る。
【００５５】
本発明の薬学的組成物は、典型的に、治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む。典型的に、そのような薬学的組成物は、約０．０１〜約９５重量％；約０．０１〜約３０重量％；例えば、約０．０１〜約１０％の活性因子を含む。
【００５６】
任意の従来のキャリアもしくは賦形剤を、本発明の薬学的組成物に使用し得る。特定のキャリアもしくは賦形剤の選択、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を治療するために使用されている投与の形態、または医学的状態もしくは病状（ｄｉｓｅａｓｅ ｓｔａｔｅ）の種類に従う。この点で、特定の形態の投与に適した薬学的組成物の調製は、まさに薬学分野の当業者の範囲内である。さらに、そのような組成物の成分は、例えば、Ｓｉｇｍａ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １４５０８、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ ６３１７８から市販されている。さらなる例として、慣例的な調合技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００５７】
薬学的に受容可能なキャリアとなり得る物質の代表的な例としては、これらに限定されないが、次の：（１）糖（例えば、ラクトース、ブドウ糖、およびスクロース）；（２）デンプン（例えば、コーンスターチ、およびジャガイモデンプン）；（３）セルロース、およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロース）；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤（例えば、ココアバター、および座剤用ワックス；（９）油（例えば、ピーナツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油；（１０）グリコール（例えば、プロピレングリコール）；（１１）多価アルコール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール）；（１２）エステル（例えば、オレイン酸エチル、およびラウリン酸エチル）；（１３）寒天；（１４）緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウム、および水酸化アルミニウム）；（１５）アルギン酸；（１６）発熱因子非含有水（ｐｙｒｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ）；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝溶液；（２１）圧縮噴霧ガス（例えば、クロロフルオロカーボン、およびハイドロフルオロカーボン）；そして（２２）薬学的組成物に使用される他の無毒性適合性物質が挙げられる。
【００５８】
本発明の薬学的組成物は、典型的に、薬学的に受容可能なキャリアおよび１つ以上の任意の成分と本発明の塩とを混合するかまたは組み合わせて調製される。必要な場合、または望ましい場合は、得られた均質に混和した混合物を、慣例的な手順および装置を使用して形作られるか、あるいは錠剤、カプセル剤、丸剤、キャニスター、カートリッジ、ディペンサーなどに詰め込み得る。
【００５９】
１つの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、吸入投与に適している。吸入投与に適した薬学的組成物は、典型的に、エアゾール、または粉末の形態である。そのような組成物は、一般的に、周知の送達デバイス（例えば、ネブライザー吸入器、定量吸入器（ＭＤＩ）、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、または類似した送達デバイスを使用して投与される。
【００６０】
本発明の特異的な実施形態において、活性因子を含む薬学的組成物は、ネブライザー吸入器を使用して吸入により投与される。そのようなネブライザーデバイスは、典型的に、高速の気流を生成し、活性因子を含む薬学的組成物がミストとしてスプレーされ、患者の気道に運ばれる。したがって、ネブライザー吸入器中での使用のために調合される場合、典型的に、適切なキャリアにこの活性因子を溶解させて溶液を形成する。適切なネブライザーデバイスは、例えば、ＰＡＲＩ ＧｍｂＨ（Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎ）により市販されている。他のネブライザーデバイスとしては、Ｒｅｓｐｉｍａｔ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ならびに例えば、米国特許第６，１２３，０６８号および国際公開第９７／１２６８７号で開示されているものが挙げられる。
【００６１】
ネブライザー吸入器中での使用のための代表的な薬学的組成物は、約０．０５μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む水溶液を含む。１つの実施形態において、このネブライザー調合水は等張性である。１つの実施形態において、このネブライザー調合水は、約４〜約６の範囲におけるｐＨを有する。特定の実施形態において、このネブライザー調合水は、ｐＨが約５までのクエン酸緩衝液で緩衝される。別の特定の実施形態において、このネブライザー調合水は約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬの遊離塩基当量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを含む。
【００６２】
本発明の別の特定の実施形態において、活性因子を含む薬学的組成物は、乾燥粉末吸入器を使用して、吸入により投与される。そのような乾燥粉末吸入器は、典型的に、吸息中に患者の気流中に分散される自由流れ粉末（ｆｒｅｅ−ｆｌｏｗｉｎｇ ｐｏｗｄｅｒ）として活性因子を投与する。自由流れ粉末を達成するために、活性因子は、典型的に、適切な賦形剤（例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、ブドウ糖、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ乳酸・グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）、またはそれらの組み合わせ）と共に調合される。典型的に、この活性因子は、微粉化され、適切なキャリアと組み合わせて呼吸に適した大きさの微粉粒の混合物を形成する。ここで「微粉粒」または「微粉形態」は、少なくとも約９０％の粒子が約１０μｍ未満の直径を有することを意味する。
【００６３】
乾燥粉末吸入器中での使用のための代表的な薬学的組成物は、約１μｍと約１００μｍとの間の粒径を有するラクトース、および式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の微粉粒子を含む。
【００６４】
そのような乾燥粉末調合物を、例えば、ラクトースを活性因子と組み合わせ、次いでその成分を乾式混合することにより作製し得る。あるいは、望ましい場合、この活性因子を、賦形剤を用いずに調合し得る。次いで、薬学的組成物を、典型的に、乾燥粉末ディスペンサー、または乾燥粉末送達デバイスと共に使用するための吸入カートリッジ、もしくはカプセル剤に詰める。
【００６５】
乾燥粉末吸入器送達デバイスの例としては、Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣ）（例えば、米国特許第５，０３５，２３７号を参照）；Ｄｉｓｋｕｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（例えば、米国特許第６，３７８，５１９号を参照）；Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）（例えば、米国特許第４，５２４，７６９号を参照）；Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（例えば、米国特許第４，３５３，３６５号を参照）、およびＨａｎｄｉｈａｌｅｒ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）が挙げられる。適切なＤＰＩデバイスのさらなる例には、米国特許第５，４１５，１６２号、米国特許第５，２３９，９９３号、および米国特許第５，７１５，８１０号に記載されており、これらの文献は、本明細書中で引用される。
【００６６】
本発明のさらに別の特異的な実施形態において、活性因子を含む薬学的組成物は、定量吸入器を使用して吸入により投与される。そのような定量吸入器は、典型的に、圧縮噴霧ガスを使用して、一定量の活性因子またはその薬学的に受容可能な塩を放出する。したがって、定量吸入器を使用して投与される薬学的組成物は、典型的に、液化された噴霧剤中に、活性因子の溶液または懸濁液を含む。クロロフルオロカーボン（例えば、ＣＣｌ３Ｆ）、およびハイドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）（例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４ａ）、および１，１，１，２，３，３，３−へプタフルオロ−ｎ−プロパン（ＨＦＡ ２２７））を含む任意の適した液化噴霧剤を使用し得る。オゾン層に影響を及ぼすクロロフルオロカーボンについての懸念から、ＨＦＡを含む調合物が、一般的に好ましい。ＨＦＡ調合物のさらなる任意の成分としては、共溶媒（例えば、エタノールまたはペンタン）および表面活性剤（例えば、ソルビタントリオレエイト（ｔｒｉｏｌｅａｔｅ）、オレイン酸、レシチン、およびグリセリン）が挙げられる。例えば、米国特許第５，２２５，１８３号、欧州特許第０７１７９８７Ａ２号、および国際公開９２／２２２８６号を参照されたい。
【００６７】
定量吸入器中における使用のための代表的な薬学的組成物は、約０．０１重量％〜約５重量％の式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物；約０重量％〜２０重量％のエタノール；そして約０重量％〜約５重量％の表面活性剤を含み、その残りがＨＦＡ噴霧剤である。
【００６８】
そのような組成物を、典型的に、冷却もしくは加圧ヒドロフルオロアルカンを、活性因子、エタノール（あれば）、および表面活性剤（あれば）を含む適切な容器に加えることにより調製する。懸濁液を調製するために、活性因子を微粉化し、次いで、噴霧剤と組み合わせる。次いで、この調合物をエアゾールキャニスターに詰めて、定量吸入デバイスの一部とする。特異的にＨＦＡ噴霧剤と共に使用するために開発された定量吸入器デバイスの例が、米国特許第６，００６，７４５号、および第６，１４３，２７７号に提供されている。あるいは、懸濁調合物を、活性因子の微粉粒子上の表面活性剤のコーティングをスプレー乾燥させることにより調製し得る。例えば、国際公開第９９／５３９０１号、および国際公開第００／６１１０８号を参照されたい。
【００６９】
呼吸に適した粒子を調製するプロセス、ならびに吸入投薬に適した調合物およびデバイスのさらなる例については、米国特許第６，２６８，５３３号、第５，９８３，９５６号、第５，８７４，０６３号、および６，２２１，３９８号、ならびに国際公開第９９／５５３１９号、および国際公開第００／３０６１４号を参照されたい。
【００７０】
別の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適している。経口投与に適した薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、ドロップ剤、カシェ剤、糖衣剤、粉剤、顆粒剤の形態であるか；あるいは溶液または水性もしくは非水性の液体中の懸濁液として；あるいは水中油もしくは油中水液体乳剤として；あるいはエリキシル剤またはシロップ剤として；などであり得、それぞれ活性成分として所定量の本発明の塩を含む。
【００７１】
固形の投薬形態（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤など）での経口投与に向けられる場合、本発明の薬学的組成物は、典型的に、活性成分として本発明の塩、および１種以上の薬学的に受容可能なキャリア（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）を含む。必要に応じ、または代替的に、そのような固形の投薬形態はまた：（１）充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸）；（２）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシア）；（３）湿潤剤（例えば、グリセリン）；（４）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、および／または炭酸ナトリウム）；（５）溶液緩染剤（例えば、パラフィン）；（６）吸収促進剤（例えば、第四アンモニウム化合物）；（７）加湿剤（例えば、セチルアルコール、および／またはグリセロールモノステアレート）；（８）吸収剤（例えば、カロリン、および／またはベントナイトクレー）；（９）潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはそれらの混合物）；（１０）着色剤；そして（１１）緩衝剤を含む。
【００７２】
離型剤、加湿剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤、ならびに酸化防止剤もまた、本発明の薬学的組成物中に存在し得る。薬学的に受容可能な酸化防止剤の例としては：（１）水溶性酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；（２）油溶性酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど）；そして（３）金属キレート因子（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸、など）が挙げられる。錠剤、カプセル剤、丸剤などのための被膜因子としては、腸溶コーティング用に使用される被膜因子（例えば、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸−メタクリル酸エステルコポリマー、セルソースアセテートトリメリテート（ｔｒｉｍｅｌｌｉｔａｔｅ）（ＣＡＴ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ），ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシナート（ＨＰＭＣＡＳ）など）が挙げられる。
【００７３】
望ましい場合、本発明の薬学的組成物は、例として、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース；あるいは他のポリマーマトリックス（例えば、ポリ乳酸（ＰＬＡ）もしくはポリ乳酸・グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）、リポソームおよび／または小球体を有するようなポリマーマトリクス）を使用して、活性成分のゆっくりとした、もしくは制御された放出を提供するように調合され得る。
【００７４】
さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて不透明化因子を含み得、胃腸管の特定の部分において、必要に応じ、遅延させる様式で、活性成分のみを、または活性成分を優先的に、放出するように調合され得る。使用し得る包埋組成物（ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）の例としては、高分子物質、およびワックスが挙げられる。この活性成分はまた、適切である場合、１種以上の上記賦形剤を有するマイクロカプセル形態であり得る。
【００７５】
経口投与に適した液体投薬形態としては、例として、薬学的に受容可能な乳剤、ミクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が挙げられる。そのような液体投与形態は、典型的に、活性成分および不活性な希釈剤（例えば、水または他の溶媒など）、可溶化剤、および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセリン、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタン脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物を含む。活性成分に加えて懸濁剤は、懸濁化剤（例えば、エトキシ化したイソステアリールアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステルなど）、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、ならびにこれらの混合物を含み得る。
【００７６】
経口投与に向けられる場合、本発明の薬学的組成物は、好ましくは、単位投薬形態にまとめられる。例えば、そのような単位投薬形態は、カプセル、錠剤、丸剤などであり得る。
【００７７】
本発明の塩はまた、公知の経皮送達システムおよび賦形剤を使用して、経皮投与され得る。例えば、本発明の化合物を、浸透促進剤（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｒ）（例えば、プロピレングリコール、モノラウリン酸ポリエチレングリコルム（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌｍ ｍｏｎｏｌａｕｒａｔｅ）、アザシクロアルカン−２−オンなど）と混合し、貼付剤もしくは類似の送達システムに組み込み得る。ゲル化剤、乳白剤、および緩衝剤を含むさらなる賦形剤を、望ましい場合、そのような経皮組成物中に使用し得る。
【００７８】
本発明の薬学的組成物はまた、他の治療因子を含んで式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物と同時投与し得る。例えば、本発明の薬学的組成物は、抗炎症剤（例えば、ステロイド抗炎症剤（コルチコステロイドなど）；および非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、ホスホジエステラーゼＩＶ阻害物質、抗感染剤（例えば、抗生物質または抗ウィルス薬）、抗ヒスタミン剤、β２アドレナリンレセプターアゴニスト、ムスカリンレセプターアンタゴニスト（すなわち、抗コリン作用薬）などから選択される１種以上の治療因子をさらに含み得る。他の治療因子は、薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物の形態で使用され得る。さらに、適切である場合、他の治療因子は、光学的に純粋な立体異性体として使用され得る。
【００７９】
望ましい場合、本発明の塩はまた、別の治療因子または本明細書中に記載される因子と組み合せて投与され得る。この実施形態において、成分が物理的に混合しているのではなく、同時にまたは連続的に、別個の組成物として投与される。例えば本発明の塩は、各治療因子に対し別個のコンパートメントを使用する吸入薬送達デバイス（例えば、ブリスターパック）を使用して、ステロイド抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド）と共に、吸入により同時にまたは連続的に投与され得る。あるいは、この組み合せは、多数の送達デバイス（すなわち各治療因子に対し１つの送達デバイス）から投与され得る。
【００８０】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的なβ２アドレナリンレセプターアゴニストとしては、これらに限定されないが、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）、サルブタモール、フォルモテロール、サルメファモール（ｓａｌｍｅｆａｍｏｌ）、フェノテロール、テルブタリン、アルブテロール、イソエタリン、メタプロテレノール、ビトルテロール、ピルブテロール、レバルブテロール（ｌｅｖａｌｂｕｔｅｒｏｌ）など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。本発明の化合物と組み合わせて使用し得る他のβ２アドレナリンレセプターアゴニストとしては、これらに限定されないが、３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、３−（−３−｛［７−（｛（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル｝アミノ）へプチル］オキシ｝プロピル）ベンゼンスルホンアミド、および２００２年８月２９日公開の国際公開第０２／０６６４２２号に開示されている関連化合物；３−［３−（４−｛［６−（［（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル］アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン、および２００２年９月１２日公開の国際公開第０２／０７０４９０号に開示されている関連化合物；３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、３−（４−｛［６−（｛（２Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）−ベンゼンスルホンアミド、３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ／Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（４−｛［６−（｛（２Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ／Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、および２００２年１０月３日公開の国際公開第０２／０７６９３３号に開示されている関連化合物；４−｛（１Ｒ）−２−［（６−｛２−［（２，６−ジクロロベンジル）オキシ］エトキシ｝ヘキシル）アミノ］−１−ヒドロキシエチル｝−２−（ヒドロキシメチル）フェノール、および２００３年３月２７日公開の国際公開第０３／０２４４３９号に開示されている関連化合物；Ｎ−｛２−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−フェニルエチルアミノ）フェニル］エチル｝−（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ホルムアミド−４−ヒドロキシフェニル）エチルアミン、および２００３年６月１０日発行の米国特許第６，５７６，７９３号Ｂ１に開示されている関連化合物；Ｎ−｛２−［４−（３−フェニル−４−メトキシフェニル）アミノフェニル］エチル｝−（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−キノリノン−５−イル）エチルアミン、および２００３年１１月２５日発行の米国特許第６，６５３，３２３号Ｂ２に開示されている関連化合物；ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。特定の実施形態において、β２アドレナリンレセプターアゴニストは、Ｎ−｛２−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−フェニルエチルアミノ）フェニル］エチル｝−（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ホルムアミド−４−ヒドロキシフェニル）エチルアミンの結晶性モノヒドロクロリド塩である。使用される場合、β２アドレナリンレセプターアゴニストは、治療有効量で薬学的組成物中に存在する。典型的に、このβ２アドレナリンレセプターアゴニストは、１用量あたり約０．０５μｇ〜約５００μｇを提供するのに十分な量で存在する。
【００８１】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的なステロイド抗炎症剤としては、これらに限定されないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、フルチカソンプロピオナート（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、６，９−ジフルオロ−１７−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１−ヒドロキシ−１６−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６，９−ジフルオロ−１１−ヒドロキシ−１６−メチル−３−オキソ−１７−プロピオニルオキシ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７−カルボチオ酸Ｓ−（２−オキソテトラヒドロフラン−３Ｓ−イル）エステル、ベクロメタゾンエステル（例えば、１７−プロピオン酸エステル、または１７，２１−ジプロピオン酸エステル）、ブデソニド、フルニソリド、モメタソンエステル（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ ｅｓｔｅｒ）（例えば、フロン酸エステル）、トリアムシノロンアセトニド、ロフレポニド（ｒｏｆｌｅｐｏｎｉｄｅ）、シクルソニド（ｃｉｃｌｅｓｏｎｉｄｅ）、ブチキソコルトプロピオナート（ｂｕｔｉｘｏｃｏｒｔ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ＲＰＲ−１０６５４１、ＳＴ−１２６など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。特定の実施形態において、ステロイド抗炎症剤は、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物である。使用される場合、ステロイド抗炎症剤は、治療有効量で薬学的組成物中に存在する。典型的に、ステロイド抗炎症剤は、１用量あたり約０．０５μｇ〜約５００μｇを提供するのに十分な量で存在する。
【００８２】
他の適切な組み合わせとしては、例として、他の抗炎症剤、例えば、ＮＳＡＩＤ（クロモグリク酸ナトリウム；ネドクロミルナトリウム（ｎｅｄｏｃｒｏｍｉｌ ｓｏｄｉｕｍ）；ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害物質（例えば、テオフィリン、ＰＤＥ４阻害物質、または混合ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害物質）；ロイコトリエンアンタゴニスト（例えば、モンテルカスト）；ロイコトリエン合成の阻害物質；ｉＮＯＳ阻害物質；プロテアーゼ阻害物質（例えば、トリプターゼ阻害物質、およびエラスターゼ阻害物質）；β−２インテグリンアンタゴニスト、およびアデノシンレセプターアゴニストもしくはアンタゴニスト（例えば、アデノシン２ａアゴニスト）；サイトカインアンタゴニスト（例えば、ケモカインアンタゴニスト（インターロイキン抗体（ＩＬ抗体）、特にＩＬ−４療法、ＩＬ−１３療法、またはそれらの組み合わせなど））；あるいはサイトカイン合成の阻害物質が挙げられる。
【００８３】
例えば、本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的なホスホジエステラーゼ−４（ＰＤＥ４）阻害物質、または混合ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害物質としては、これらに限定されないが、シス４−シアノ−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸、２−カルボメトキシ−４−シアノ−４−（３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシフェニル）シクロヘキサン−１−オン；シス−［４−シアノ−４−（３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシフェニル）シクロヘキサン−１−オール］；シス−４−シアノ−４−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシフェニル］シクロヘキサン−１−カルボン酸など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。他の代表的なＰＤＥ４または混合ＰＤＥ４／ＰＤＥ３阻害物質としては、ＡＷＤ−１２−２８１（ｅｌｂｉｏｎ）；ＮＣＳ−６１３（ＩＮＳＥＲＭ）；Ｄ−４４１８（Ｃｈｉｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）；ＣＩ−１０１８、またはＰＤ−１６８７８７（Ｐｆｉｚｅｒ）；国際公開第９９／１６７６６号で開示されているベンゾジオキソール化合物（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ）；Ｋ−３４（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ）；Ｖ−１１２９４Ａ（Ｎａｐｐ）；ｒｏｆｌｕｍｉｌａｓｔ（Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ）；国際公開第９９／４７５０５号で開示されているフタラジノン（ｐｔｈａｌａｚｉｎｏｎｅ）化合物（Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ）；Ｐｕｍａｆｅｎｔｒｉｎｅ（Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ、現在はＡｌｔａｎａ）；ａｒｏｆｙｌｌｉｎｅ（Ａｌｍｉｒａｌｌ−Ｐｒｏｄｅｓｆａｒｍａ）；ＶＭ５５４／ＵＭ５６５（Ｖｅｒｎａｌｉｓ）；Ｔ−４４０（Ｔａｎａｂｅ Ｓｅｉｙａｋｕ）；およびＴ２５８５（Ｔａｎａｂｅ Ｓｅｉｙａｋｕ）が挙げられる。
【００８４】
本発明の化合物と組み合わせて、そして本発明の化合物に加えて、使用し得る代表的なムスカリンアンタゴニスト（すなわち、抗コリン作用薬）としては、これらに限定されないが、アトロピン、硫酸アトロピン、酸化アトロピン、硝酸メチルアトロピン、臭化水素酸ホマトロピン、臭化水素酸ヒオスシアミン（ｄ，ｌ）、臭化水素酸スコポラミン、臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウム、臭化チオトロピウム（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ）、メタンテリン、臭化プロパンテリン、臭化メチルアニソトロピン、臭化クリジニウム、ｃｏｐｙｒｒｏｌａｔｅ（Ｒｏｂｉｎｕｌ）、ヨウ化イソプロパミド、臭化メペンゾラート、塩化トリジヘキセチル（Ｐａｔｈｉｌｏｎｅ）、ヘキソシクリウム硫酸メチル（ｈｅｘｏｃｙｃｌｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ）、塩酸シクロペントレート、トロピカミド、塩酸トリヘキシフェニジル、ピレンゼピン、テレンゼピン（ｔｅｌｅｎｚｅｐｉｎｅ）、ＡＦ−ＤＸ １１６、およびメトクトラミン（ｍｅｔｈｏｃｔｒａｍｉｎｅ）など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩；もしくは、塩として列挙された化合物の代わりに、それらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。
【００８５】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的な抗ヒスタミン剤（すなわち、Ｈ１−レセプターアンタゴニスト）としては、これらに限定されないが、エタノールアミン（例えば、マレイン酸カルビノキサミン、フマル酸クレマスチン、塩酸ジフェニルヒドラミン、およびジメンヒドリナート；エチレンジアミン（例えば、ピリラミンアムリエート（ｐｙｒｉｌａｍｉｎｅ ａｍｌｅａｔｅ））、塩酸トリペレナミン（ｔｒｉｐｅｌｅｎｎａｍｉｎｅ）、クエン酸トリペレンアミン；アルキルアミン（例えば、クロルフェニラミン、およびアクリバスチン（ａｃｒｉｖａｓｔｉｎｅ）；ピペラジン（例えば、塩酸ヒドロキシジン、ヒドロキシジンパモエート、塩酸シクリジン、乳酸シクリジン、塩酸メクリジン、および塩酸セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）；ピペリジン（例えば、アステミゾール、塩酸レボカバスチン（ｌｅｖｏｃａｂａｓｔｉｎｅ）、ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）もしくはそのデスカルボエトキシアナログ（ｄｅｓｃａｒｂｏｅｔｈｏｘｙ ａｎａｌｏｇｕｅ）、テルフェナジン、および塩酸フェキソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）；塩酸アゼラスチン；など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩；もしくは、塩として列挙された化合物の代わりとして、それらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。
【００８６】
本発明の化合物と組み合わせて投与される他の治療因子に適した用量は、約０．０５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日の範囲である。
【００８７】
次の調合物は、本発明の代表的な薬学的組成物を示している：
（調合物実施例Ａ）
吸入による投与のための乾燥粉末を次のように調製する：
【００８８】
【化４】
代表的な手順：本発明の化合物を微粉化し、次いでラクトースと混和する。次いで、この混和した混合物を、ゼラチン吸入カートリッジに詰める。このカートリッジの内容物を、粉末吸入器を使用して投与する。
【００８９】
（調合物実施例Ｂ）
乾燥粉末吸入デバイス中における使用のための乾燥粉末調合物を次のように調製する：
（代表的な手順）本発明の微粉化した塩とラクトースとの調合容積比（ｂｕｌｋ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ）が１：２００である薬学的組成物を調製する。この組成物を１用量当たり約１０μｇと約１００μｇとの間の本発明の化合物を送達し得る乾燥粉末吸入デバイスに詰め込む。
【００９０】
（調合物実施例Ｃ）
定量吸入器での吸入による投与のための乾燥粉末を次のように調製する：
代表的な手順：５重量％の本発明の塩、および０．１重量％のレシチンを含む懸濁液を、０．２ｇのレシチンを２００ｍＬの脱塩水に溶解させて生成した溶液に、１０μｍ未満の平均粒径を有する微粉粒子として１０ｇの本発明の化合物を分散させることにより調製する。この懸濁液を噴霧乾燥（ｓｐｒａｙ ｄｒｙ）させ、得られた物質を１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子に微粉化する。この粒子を加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンと共にカートリッジに詰める。
【００９１】
（調合物実施例Ｄ）
定量吸入器中における使用のための薬学的組成物を次のように調製する：
代表的な手順：５％の本発明の塩、０．５％のレシチン、および０．５％のトレハロースを含む懸濁液を、０．５ｇのトレハロース、および０．５ｇのレシチンを１００ｍＬの脱塩水に溶解させて生成したコロイド溶液に、１０μｍ未満の平均粒径を有する微粉粒子として５ｇの活性成分を分散させることにより調製する。この懸濁液を噴霧乾燥させ、得られた物質を１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子に微粉化する。この粒子を加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンと共にキャニスターに詰める。
【００９２】
（調合物実施例Ｅ）
ネブライザー吸入器中における使用のための薬学的組成物を次のように調製する：
代表的な手順：ネブライザー中における使用のためのエアゾール調合水を、クエン酸を用いて酸性化した１ｍＬの０．９％塩化ナトリム溶液に、０．５ｍｇの本発明の塩を溶解させることにより調製する。この混合物を攪拌し、活性成分が溶解するまで超音波処理する。この溶液のｐＨを、ＮａＯＨのゆっくりとした添加により約５の値に調節する。
【００９３】
（調合物実施例Ｆ）
経口投与のための硬ゼラチンカプセル剤を、次のように調製する：
【００９４】
【化５】
代表的な手順：これらの成分を完全に混和させ、次いで、硬カプセルに詰める（１カプセル当たり４６０ｍｇの組成物）。
【００９５】
（調合物実施例Ｇ）
経口投与のための懸濁液を次のように調製する：
【００９６】
【化６】
代表的な手順：これらの成分を混合し、１０ｍＬの懸濁液につき１００ｍｇの活性成分を含む懸濁液を生成する。
【００９７】
（調合物実施例Ｈ）
注射可能な調合物を次のように調製する：
【００９８】
【化７】
代表的な手順：上記成分を混和させ、０．５Ｎ ＨＣｌ、または０．５Ｎ ＮａＯＨを使用して、ｐＨを４±０．５に調節する。
【００９９】
（効用）
式Ｉの化合物は、β２アドレナリンレセプターアゴニスト、およびムスカリンレセプターアンタゴニスト活性の両方を有するため、本発明の式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩は、β２アドレナリンレセプターもしくはムスカリンレセプターが介在する医学的状態（すなわち、β２アドレナリンレセプターアゴニストもしくはムスカリンレセプターアンタゴニストを用いた処置により改善される医学的状態）を処置するための治療因子として有用であると期待される。そのような医学的状態としては、例として、肺障害、または可逆性気道閉塞と関連する疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患（例えば、慢性的で息苦しい（ｗｈｅｅｚｙ）気管支炎、および肺気腫）、喘息、肺線維症、アレルギー性鼻炎、鼻漏など））を含む疾患が挙げられる。処置し得る他の状態としては、早期分娩、鬱病、鬱血性心不全、皮膚病（例えば、炎症性、アレルギー性、乾癬性、および増殖性皮膚疾患）、ペプシンの酸性を低下させることが望ましい状態（例えば、消化性および胃潰瘍）、および筋肉消耗性疾患が挙げられる。
【０１００】
したがって、１つの実施形態において本発明は、肺障害を処置するための方法に向けられ、この方法は、処置を必要とする患者に治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。肺障害を処置するために使用される場合、本発明の塩は、典型的に、１日当たり複数回分の用量、１回で１日分の用量、または１回で１週間分の用量で、吸入により投与される。一般的に、肺障害を処置するための用量は、約１０μｇ／日〜約２００μｇ／日の範囲である。
【０１０１】
吸入により投与される場合、本発明の化合物は、典型的に気管支拡張を提供する効果を有する。したがって、その方法の別の局面において、本発明は、気管支拡張を必要としている患者に気管支拡張を提供する方法に向けられ、この方法は、気管支拡張を生じる量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を患者に投与する工程を包含する。一般的に、気管支拡張を提供するための用量は、約１０μｇ／日〜約２００μｇ／日の範囲である。
【０１０２】
１つの実施形態において、本発明は、慢性閉塞性肺疾患または喘息を処置する方法に向けられ、この方法は、処置を必要とする患者に治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。ＣＯＰＤまたは喘息を処置するために使用される場合、本発明の塩は、典型的に、１日当たり複数回分の用量、または１回で１日分の用量で、吸入により投与される。一般的に、ＣＯＰＤまたは喘息を処置するための用量は、約１０μｇ／日〜約２００μｇ／日の範囲である。本明細書中で使用される場合、ＣＯＰＤは、慢性閉塞性気管支炎および肺気腫を含む（例えば、Ｂａｒｎｅｓ，Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０００：３４３：２６９−７８を参照）。
【０１０３】
肺障害を処置するために使用される場合、本発明の塩は、必要に応じ、他の治療因子と組み合せて投与される。したがって、特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物および方法は、治療有効量のステロイド抗炎症剤をさらに含む。本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩の特性および効用は、当該技術分野で周知の種々のインビトロおよびインビボアッセイを使用して明らかにされ得る。例えば代表的なアッセイは、次の実施例においてさらに詳細に記載されている。
【実施例】
【０１０４】
次の（調製）および（実施例）は、本発明の具体的な実施例を説明するために提供される。しかしながら、これらの具体的な実施例は、他に示さない限り、決して本発明の範囲を限定することを意図していない。
【０１０５】
次の略語は、他に示さない限り次の意味を有し、本明細書中で使用され規定されていない任意の他の略語は、それらの標準的な意味を有する：
ＡＣ アデニリルシクラーゼ
Ａｃｈ アセチルコリン
ＡＴＣＣ アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ｃＡＭＰ ３’−５’環状アデノシン一リン酸
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣
ｃＭ５ クローンチンパンジーのＭ５レセプター
ＤＣＭ ジクロロメタン（すなわち、塩化メチレン）
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ｄＰＢＳ ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水
ＤＭＥＭ ダルベッコ改変イーグル培地
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
Ｅｍａｘ 最大効果
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＦＢＳ 胎仔ウシ血清
ＦＬＩＰＲ 蛍光定量的イメージングプレートリーダー
Ｇｌｙ グリシン
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＳＳ ハンクス緩衝食塩水
ＨＥＫ ヒト胚腎臓細胞
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ｈＭ１ クローンヒトＭ１レセプター
ｈＭ２ クローンヒトＭ２レセプター
ｈＭ３ クローンヒトＭ３レセプター
ｈＭ４ クローンヒトＭ４レセプター
ｈＭ５ クローンヒトＭ５レセプター
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＩＢＭＸ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン
％Ｅｆｆ ％効果
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ｒｐｍ １分当たりの回転数
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
Ｔｒｉｓ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
他に断りのない限り、試薬、出発物質、および溶媒は、供給業者（例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入され、さらなる精製なしに使用された。
【０１０６】
下記の実施例において、ＨＰＬＣ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔが提供する３．５ミクロンの粒径を有するＺｏｒｂａｘ Ｂｏｎｕｓ ＲＰ２．１×５０ｍｍのカラム（Ｃ１４カラム）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）１１００シリーズ機器を使用して実施した。検出は、２１４ｎｍにおけるＵＶ吸収度による。ＨＰＬＣ１０〜７０データを、１０％〜７０％のＢ０．５ｍＬ／分の流速で６分間にわたり入手した。流動相Ａは、２％−９８％−０．１％のＡＣＮ−Ｈ２Ｏ−ＴＦＡ：そして流動相Ｂは、９０％−１０％−０．１％のＡＣＮ−Ｈ２Ｏ−ＴＦＡであった。上記流動相ＡおよびＢを使用して、ＨＰＬＣ５−３５のデータ、およびＨＰＬＣ１０−９０のデータを、５分間の勾配で入手した。
【０１０７】
液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）データを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のＡＰＩ−１５０ＥＸ型の機器を使用して入手した。ＬＣＭＳ１０−９０のデータを、１０％〜９０％の流動相Ｂを用い、５分の勾配で入手した。
【０１０８】
小規模な精製を、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＡＰＩ １５０ＥＸ Ｐｒｅｐ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍを使用して入手した。流動相は、Ａ：水＋０．０５容量（ｖ／ｖ）％ＴＦＡ；そしてＢ：アセトニトリル＋０．０５容量（ｖ／ｖ）％ＴＦＡであった。アレイ（典型的に約３〜５０ｍｇの回収サンプルサイズ）に対し、次の条件が使用された：流速２０ｍＬ／分；勾配１５分、および５ミクロンの粒子を有する２０ｍｍ×５０ｍｍのＰｒｉｓｍ ＲＰカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ−Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｅｔｅ，ＰＡ）。より大規模な精製（典型的に１００ｍｇより大きなの粗サンプル）に対しては、次の条件を使用した：流速６０ｍＬ／分；勾配３０分、および１０ミクロンの粒子を有する４１．４ｍｍ×２５０ｍｍのＭｉｃｒｏｓｏｒｂ ＢＤＳカラム（Ｖａｒｉａｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）。
【０１０９】
タングステンハロゲン光源、および５８９ｎｍフィルターを用いたＪａｓｃｏ Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ（Ｐ−１０１０型）を使用して、２０℃にてキラル化合物（［α］２０Ｄと示す）についての比旋光度を測定した。テスト化合物のサンプルは、典型的に、１ｍｇ／ｍＬの水にて測定された。
【０１１０】
（調製１）
（４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
トルエン（９ｍＬ）とメタノール（１ｍＬ）との混合物中の４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸（１．００８ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液に、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（ヘキサン中２．０Ｍ、３．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）を、０℃にて滴下した。次いで、この反応混合物を室温に温め、１６時間、攪拌した。過剰な（トリメチルシリル）ジアゾメタンを、反応混合物の鮮明な黄色が消えるまで、酢酸を加えることによってクエンチした。次いで、この混合物を真空下で濃縮することにより、オフホワイトの固体として表題の化合物を得、これをさらなる精製なしに使用した。
【０１１１】
（調製２）
（４−アクリロイルアミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
調製２の粗生成物に、ジクロロメタン（１０ｍＬ、０．５Ｍ）およびトリエチルアミン（２．１ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（８１２μＬ、１０ｍｍｏｌ）を攪拌しながら滴下した。２時間後、この反応物をメタノール（約２ｍＬ）を０℃にて加えることによりクエンチし、得られた混合物を室温にて１５分間攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。ジクロロメタン（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）をこの残留物に加え、この混合物を十分に混合した。この層を分離し、水層をジクロロメタン（２０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を合わせて、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空下で除去することにより、褐色の泡沫状固体として表題の化合物を得、これをさらなる精製なしに使用した。
【０１１２】
（調製３）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸ピペリジン−４−イルエステル）
ビフェニル−２−イソシアネート（９７．５ｇ、５２１ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシ−１−ベンジルピペリジン（１０５ｇ、５４９ｍｍｏｌ）（共にＡｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩから市販されている）を、１２時間、７０℃にて一緒に加熱し、その間、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−ベンジルピペリジン−４−イルエステルの形成をＬＣＭＳによりモニターした。次いで、この反応混合物を５０℃に冷却し、エタノール（１Ｌ）を加え、次いで、６Ｍ 塩酸（１９１ｍＬ）をゆっくりと加えた。次いで、この反応混合物を周囲温度に冷却し、蟻酸アンモニウム（９８．５ｇ、１．５６ｍｏｌ）を加え、窒素ガスを２０分間溶液に通して活発に泡立てた。次いで、パラジウム（活性炭担持１０重量％（乾燥ベース））（２０ｇ）を加えた。この反応混合物を、１２時間、４０℃にて加熱し、次いで、セライトパッドに通して濾過した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、１Ｍ 塩酸（４０ｍＬ）を粗残留物に加えた。次いで、水酸化ナトリウム（１０Ｎ）を加えてｐＨを１２に調節した。水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）を用いて抽出し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、次いで、溶媒を減圧下で除去することにより、表題の化合物（１５５ｇ、１００％）を得た。ＨＰＬＣ（１０−７０）Ｒｔ＝２．５２；ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］Ｃ１８Ｈ２０Ｎ２Ｏ２についての計算値２９７．１５；測定値２９７．３。
【０１１３】
（調製４）
（４−｛３−［４−（ビフェニル−２−イルカルバモイルオキシ）ピペリジン−１−イル］プロピオニルアミノ｝−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
調製２からの粗生成物に、調製３の生成物（１．３３ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（２２．５ｍＬ）とメタノール（２．５ｍＬ）との混合物を加えた。この混合物を５０℃にて１６時間、攪拌しながら加熱し、次いで溶媒を、真空下で除去した。残留物をクロマトグラフィー法（シリカゲル；ＥｔＯＡｃ）で分離することにより、オフホワイトの泡沫状固体として、表題の化合物（０．８２ｇ；Ｒｆ＝０．４、３工程にわたる収率２９％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ５６６．４（Ｍ＋Ｈ、Ｃ３０Ｈ３２ＣｌＮ３Ｏ６についての期待値５６５．２０）。
【０１１４】
（調製５）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ヒドロキシメチル−５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ＴＨＦ（４．５ｍＬ）とメタノール（０．５ｍＬ）との混合物中の調製４の生成物（０．８２ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてホウ化水素リチウム（３２ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、室温に温めさせ、４１時間、攪拌した。次いで、この反応物を、さらなる泡立ちが観察されなくなるまで、１Ｎ塩酸水を０℃にて加えることによりクエンチし、この混合物を１０分間、攪拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物をアセトニトリル（約２ｍＬ）に溶解させた。この溶液を、ｐｒｅｐ−ＲＰ−ＨＰＬＣ（勾配：０．０５％のＴＦＡを有する水中に２〜５０％のアセトニトリル）により精製した。適切な分画を回収して合わせ、凍結乾燥することにより、トリフルオロ酢酸塩として表題の化合物を得た。この塩を酢酸イソプロピル（１０ｍＬ）、および１Ｎ 水酸化ナトリウム水（１０ｍＬ）を用いて処理し、有機層を回収し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を真空下で除去することにより、白色泡沫状固体として表題の化合物（１６１ｍｇ、収率２１％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ５３８．４（Ｍ＋Ｈ、Ｃ２９Ｈ３２ＣｌＮ３Ｏ５についての期待値５３７．２０）。
【０１１５】
（調製６）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ホルミル−５−メトキシフェニル−カルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の調製５の生成物（１６１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチルスルホキシド（２１３μＬ、３．０ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（２６１μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を−２０℃に冷却し、三酸化硫黄ピリジン錯体（２３８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。３０分後、この反応混合物を水（約３ｍＬ）を加えることによりクエンチした。層を分離して、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空下で除去することにより、薄黄色の固体として表題の化合物を得た。ＭＳ ｍ／ｚ５３６．３（Ｍ＋Ｈ、Ｃ２９Ｈ３０ＣｌＮ３Ｏ５についての期待値５３５．１９）。
【０１１６】
（調製７）
（８−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン）
（（ａ）８−アセトキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン）
８−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキシド（１６０．０ｇ、１．０ｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩから市販されている）、および無水酢酸（８００ｍＬ、８．４ｍｏｌ）を、３時間、１００℃にて加熱し、次いで、氷中で冷却した。この生成物を、ブフナー漏斗で回収し、無水酢酸（２×１００ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させることにより、固体として８−アセトキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン（１４４ｇ）を得た。
【０１１７】
（（ｂ）５−アセチル−８−ヒドロキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン）
１，２−ジクロロエタン（２８０ｍＬ）中の塩化アルミニウム（８５．７ｇ、６４０ｍｍｏｌ）のスラリーを氷中で冷却し、工程（ａ）からの生成物（５６．８ｇ、２８０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温に温め、次いで、８５℃にて加熱した。３０分後、塩化アセチル（１．５ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を加え、この混合物をさらに６０分間、加熱した。次いで、この反応混合物を冷却し、０℃にてよく攪拌しながら１Ｎ 塩酸（３Ｌ）に加えた。２時間攪拌後、固体をブフナー漏斗で回収し、水（３×２５０ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させた。いくつかのバッチから分離させた粗生成物（１３５ｇ）を合わせ、６時間、ジクロロメタン（４Ｌ）を用いて粉砕した。得られた固体をブフナー漏斗で回収し、減圧下で乾燥させることにより、表題の化合物（１２１ｇ）を得た。
【０１１８】
（（ｃ）５−アセチル−８−ベンジルオキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン）
工程（ｂ）からの生成物（３７．７ｇ、１８６ｍｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）、および炭酸カリウム（３４．５ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を加え、続いて臭化ベンジル（３１．８ｇ、１８６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２．２５時間、室温にて攪拌し、次いで、飽和塩化ナトリウム（３．５Ｌ）に０℃にて注ぎ入れ、１時間、攪拌した。この生成物を回収し、１時間、ブフナー漏斗で乾燥させ、得られた固体をジクロロメタン（２Ｌ）に溶解させ、この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をセライトパッドに通して濾過し、次いで、ジクロロメタン（５×２００ｍＬ）を用いて洗浄した。次いで、合わせた濾液を濃縮乾固し、得られた固体を２時間、エーテル（５００ｍＬ）を用いて粉砕した。この生成物をブフナー漏斗で回収し、エーテル（２×２５０ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させ、粉末として表題の化合物（４４ｇ）を得た。
【０１１９】
（（ｄ）８−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン）
工程（ｃ）からの生成物（２０．０ｇ、６８．２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解させ、０℃にて冷却した。三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（１０．４ｍＬ、８２．０ｍｍｏｌ）をシリンジによって加え、この混合物を室温に温めることにより、濃厚な懸濁液を得た。この懸濁液を４５℃（油浴）にて加熱し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の臭素（１１．５ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）の溶液を、４０分間にわたり加えた。この混合物をさらに１５分間、４５℃にて保ち、次いで、室温に冷却した。この混合物を減圧下で濃縮し、次いで１時間、１０％炭酸ナトリウム水（２００ｍＬ）を用いて粉砕した。固体をブフナー漏斗で回収し、水（４×１００ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させた。２処理分の生成物を精製用に合わせた。この粗生成物（５２ｇ）を、クロロホルム（５００ｍＬ）中の５０％メタノールを用いて１時間、粉砕した。この生成物をブフナー漏斗で回収し、クロロホルム（２×５０ｍＬ）およびメタノール（２×５０ｍＬ）中の５０％メタノールを用いて洗浄した。固体を減圧下で乾燥させることにより、粉末として表題の化合物（３４．１ｇ）を得た。
【０１２０】
（調製８）
（８−ベンゾイルオキシ−５−［（Ｒ）−２−ブロモ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ（ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｙｌｏｘｙ））エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
（（ａ）８−ベンジルオキシ−５−（（Ｒ）−２−ブロモ−１−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン）
（Ｒ）−（＋）−α，α−ジフェニルプロリノール（３０．０ｇ、１１７ｍｍｏｌ）とトリメチルボロキシン（１１．１ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）とをトルエン（３００ｍＬ）中で合わせ、３０分間、室温にて攪拌した。この混合物を、１５０℃の油浴中に置き、液体を蒸留により取り除いた。トルエンを２０ｍＬのアリコートに加え、４時間、蒸留を続けた。総量で３００ｍＬのトルエンを加えた。次いで、この混合物を室温に冷却した。５００μＬのアリコートをエバポレートして乾固し、計量し（２４６ｍｇ）、この触媒濃度を１．８Ｍと決定した。
【０１２１】
８−ベンジルオキシ５−（２−ブロモアセチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（９０．０ｇ、２４３ｍｍｏｌ）を、窒素下に置き、テトラヒドロフラン（９００ｍＬ）を加え、続いて上記の触媒（トルエン中１．８Ｍ、１５ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を氷／イソプロパノール浴中で、−１０±５℃に冷却した。ボラン（ＴＨＦ中１．０Ｍ、２９４ｍＬ、２９４ｍｍｏｌ）を、４時間にわたり加えた。次いでこの反応物を、さらに４５分間、−１０℃にて攪拌し、次いで、メタノール（２５０ｍＬ）をゆっくりと加えた。この混合物を真空下で濃縮し、残留物を沸騰アセトニトリル（１．３Ｌ）に溶解させ、熱いうちに濾過し、次いで、室温に冷却した。結晶を濾過し、アセトニトリルを用いて洗浄し、真空下で乾燥させることにより、表題の化合物を得た（７２．５ｇ、１９６ｍｍｏｌ、収率８１％、９５％ｅｅ、ＨＰＬＣによる純度９５％）。
【０１２２】
（（ｂ）８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−ブロモ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
工程（ｂ）の生成物（７０．２ｇ、１８９ｍｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２６０ｍＬ）を加え、窒素下にてこの混合物を氷浴中で冷却した。２，６−ルチジン（４０．３ｇ、３７６ｍｍｏｌ）を、５分間にわたり加え、次いで、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（９９．８ｇ、３７８ｍｍｏｌ）を、２０℃未満の温度を維持しながらゆっくりと加えた。この混合物を４５分間、室温に温めさせた。メタノール（４５ｍＬ）を混合物に１０分にわたって滴下し、この混合物を、酢酸エチル／クロロヘキサン（１：１、５００ｍＬ）と水／ブライン（１：１、５００ｍＬ）との間で分割した。有機物（ｏｒｇａｎｉｃｓ）をさらに２度、水／ブライン（１：１、各回５００ｍＬ）を用いて洗浄した。合わせた有機物を減圧下でエバポレートすることにより、薄黄色の油状体を得た。シクロヘキサン（４００ｍＬ）を、２度に分けてこの油状体に加え、濃厚な白色のスラリーが生成するまで蒸留を続けた。シクロヘキサン（３００ｍＬ）をスラリーに加え、得られた白色結晶を濾過し、シクロヘキサン（３００ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させ、表題の化合物（７５．４ｇ、１５１ｍｍｏｌ、収率８０％、９８．６％ｅｅ）を得た。
【０１２３】
（調製９Ａ）
（８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−（Ｎ−ベンジルアミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
ＤＭＳＯ（１．７ｍＬ）中の調製８の生成物（１．００ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）とベンジルアミン（４９３μＬ、４．５1ｍｍｏｌ）との攪拌溶液を、１０５℃にて４時間、加熱した。この反応混合物を冷却させ、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、有機層を飽和塩化アンモニア水溶液（５ｍＬ）および１Ｎ 水酸化ナトリウム（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。この粗残留物を、カラムクロマトグラフィー（５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製し、表題の化合物（７００ｍｇ、６７％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］Ｃ３１Ｈ３８Ｎ２Ｏ３Ｓｉについての計算値５１５．２７；測定値５１５．５。
【０１２４】
（調製９Ｂ）
（８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−（Ｎ−ベンジルアミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
５００ｍＬの三ッ口丸底フラスコに、８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−ブロモ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（４３ｇ、０．１２４ｍｏｌ、キラル純度約９５％）、１−メチル−２−ピロリジノン（２１０ｍＬ）、およびベンジルアミン（２８．３ｇ、０．３７ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を窒素を用いて洗い流し、次いで、９０℃にて６時間、攪拌した。次いで、この混合物を室温に冷却し、水（３００ｍＬ）および酢酸エチル（３００ｍＬ）を加えた。層を分離し、有機層を水（２００ｍＬ）、水と飽和塩化ナトリウム水溶液との１：１混合物（２００ｍＬ）、および水（２００ｍＬ）を用いて洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮することにより、橙色の油状体として表題の化合物を得た。
【０１２５】
この橙色の油状体にヘプタン（２００ｍＬ）および酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、得られた混合物を６５℃に加熱することにより、透明な溶液を得た。この溶液を室温に冷却し、一晩（約１６時間）おいた時点で沈殿物を生成した。この沈殿物を濾過により回収し、立体化学的には不純な表題の化合物（８．８５ｇ、７９．６％ｅｅ）を得た。濾液を減圧下で濃縮することにより、表題の化合物（３８．６ｇ、９９．４％）を得た。この物質を先の物質（１９．２ｇ、９９．５％ｅｅ）のバッチと合わせ、そしてヘプタン（２５０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えた。この混合物を８０℃に加熱し（濁りを帯びた〜透明な溶液）、次いで、室温に冷却し、一晩おいた。得られた沈殿物を濾過により回収し、白色固体（３６．８ｇ、９８．４％ｅｅ、化学的純度９９．９％）として表題の化合物を得た。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をヘプタン（１００ｍＬ）に溶解させた。得られた固体を回収することにより、黄褐色の固体（２４ｇ、キラル純度１００％、化学的純度９５％）として表題の化合物を得た。
【０１２６】
（調製１０Ａ）
（５−［（Ｒ）−２−アミノ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−８−ヒドロキシー１Ｈ−キノリン−２−オン）
エタノール（６２ｍＬ）中の調製９Ａの生成物（３．１６ｇ、６．１５ｍｍｏｌ）とパラジウム（活性炭担持１０重量％（乾燥ベース））（１．５８ｇ）との攪拌溶液を、２４時間、水素雰囲気下に置いた。この反応混合物をセライトに通して濾過し、メタノール（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、次いで、溶媒を減圧下で除去することにより、固体として表題の化合物（１．５２ｇ、４．５５ｍｍｏｌ、７４％）を得た。
【０１２７】
（調製１０Ｂ）
（５−［（Ｒ）−２−アミノ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−８−ヒドロキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン酢酸塩）
８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−（Ｎ−ベンジルアミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（１００ｇ、１９４ｍｍｏｌ）および酢酸（１７．５ｍＬ、２９１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１Ｌ）に溶解させた。この透明な溶液を窒素を用いてパージし、次いで、炭素担持水酸化パラジウム（２０ｇ、２０重量％のＰｄ（乾燥ベース）、湿気（約５０％の水分））を加えた。室温にて６時間、水素ガスを攪拌溶液に通じて泡立て、その間に、濃厚なスラリーを生じさせた。次いで、この反応混合物を窒素を用いてパージし、メタノール（１Ｌ）を加えた。約３０分間、得られた混合物を（生成物を溶解させるために）攪拌し、次いで、この混合物をセライトパッドに通して濾過した。濾液を約５００ｍＬの容量まで減圧下で濃縮し、得られたスラリーにエタノール（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を再度、減圧下で約５００ｍＬの容量まで濃縮し、得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させることにより、黄白色の固体として表題の化合物を得た（６５ｇ、収率８５％、純度＞９８％）。
【０１２８】
（調製１１）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（４−｛［（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−２−クロロー５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）とメタノール（０．５ｍＬ）との混合物中の調製６からの生成物に、調製１０Ａの生成物（１２４．１ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、室温にて１．５時間、攪拌した。トリアセトキシホウ化水素ナトリウム（１９０．７ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、室温にて１５時間、攪拌した。この反応物を、水（約０．２ｍＬ）を加えることによりクエンチし、この混合物を真空下で濃縮することにより、表題の化合物を得、これをさらなる精製なしに使用した。ＭＳ ｍ／ｚ８５４．５（Ｍ＋Ｈ、Ｃ４６Ｈ５６ＣｌＮ５Ｏ７Ｓｉについての期待値８５３．３６）。
【０１２９】
（調製１２）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ジクロロメタン（１．０ｍＬ、０．３Ｍ）中の調製１１の生成物の懸濁液に、トリエチルアミン三フッ化水素塩（２４５μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、室温にて４５時間、攪拌し、次いで、この混合物を真空下で濃縮した。残留物を、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）と、アセトニトリル／水（１：１、０．１％ＴＦＡを含む、０．６ｍＬ）と、ＴＦＡ（０．３ｍＬ）と、アセトニトリル（約１ｍＬ）との混合物に溶解させ、この混合物を、ｐｒｅｐ−ＲＰ−ＨＰＬＣ（勾配：０．０５％ＴＦＡを含む水中のアセトニトリル２〜５０％）によって精製した。適切な分画を回収して合わせ、凍結乾燥させることにより、オフホワイトの固体として、表題の化合物のジトリフルオロ酢酸塩（１００ｍｇ、収率３４％、ＨＰＬＣによる純度９８．７％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ７４０．５（Ｍ＋Ｈ、Ｃ４０Ｈ４２ＣｌＮ５Ｏ７についての期待値７３９．２８）。
【０１３０】
（実施例１）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
エタノール（０．２ｍＬ）中の１，２−エタンジスルホン酸二水和物（３．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液を、イソプロパノールとジクロロメタン（１ｍＬ）との６４：１ｖ／ｖ混合物中の調製１２の生成物（１４．３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。得られた溶液を、４５℃〜５０℃にて約３０分間、加熱した。次いで、この混合物をゆっくりと室温に冷却し、室温になった時点で溶液は僅かに濁った。この溶液を、一晩、窒素の緩流下で周囲温度においた。得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させることにより、白色結晶性固体として表題の化合物（１３ｍｇ、収率７２％）を得た。
【０１３１】
（実施例２）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル（２６．８ｍｇ、０．０３６２ｍｍｏｌ）の溶液を、エタノール（５．３６ｍＬ）中に調製し、室温にて、完全な溶解が得られるまで（５分）攪拌した。エタノール（０．２ｍＬ）中の１，２エタンジスルホン酸二水和物（８．２ｍｇ、０．０３６２ｍｍｏｌ）の溶液を、約１分かけて最初の溶液にゆっくりと加えた。５分間、得られた懸濁液を攪拌し、次いで、窒素下で濾過により分離した。得られた沈殿物を乾燥させることにより、白色固体として表題の化合物（２８．５ｍｇ、収率８５％）を得た。
【０１３２】
（実施例３）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル（５ｇ、６．７５ｍｍｏｌ、純度＞９９％）を、イソプロパノール（１００ｍＬ）に溶解させ、水（２０ｍＬ）に溶解させたエタンジスルホン酸二水和物（１．５２５ｍｇ、６．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られたスラリーを、室温にて１時間攪拌し、次いで約３０℃にて一晩攪拌した。表題の化合物（６．０ｇ）を、白色粉末として分離した。この生成物を、３０℃にて４８時間、イソプロパノール中の２０％の水（１００ｍＬ）中で加熱した。室温に冷却後、得られた沈殿物を濾過により単離し、２時間、風乾させることにより、表題の化合物（５．４ｇ）を得た。
【０１３３】
（調製１３）
（４−アクリロイルアミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
オーバーヘッドスターラー、温度調節および追加漏斗（ａｄｄｉｔｉｏｎ ｆｕｎｎｅｌ）を備えた１リットルの３ツ口丸底フラスコに、４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル（４４．２ｇ、２００ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５００ｍｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（１０４．５ｍＬ、６００ｍｍｏｌ）を加えた。この得られた混合物を、室温にて成分が溶解するまで攪拌し、次いでこの混合物を０℃に冷却した。次いで、内部の反応混合物温度を１０℃未満に維持しながら、塩化アクリロイル（１６．２５ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）を滴下した。添加の合計時間は約３０分であった。次いでこの反応混合物を、約２時間かけて０℃〜室温にゆっくりと温めた。次いで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）、およびジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、この混合物を１５分間攪拌し、次いで層を分離した。ジクロロメタン層を１Ｍ 塩酸（２００ｍＬ）を用いて洗浄し、次いで、減圧下で元の容量の約３分の１に濃縮し、濃厚なスラリーを得た。このスラリーを濾過し、濾塊をジクロロメタン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させることにより、オフホワイトの固体として表題の化合物（３６ｇ、収率６７％、ＨＰＬＣによる純度＞９８％）を得た。
（調製１４）
（４−｛３−［４−（ビフェニル−２−イルカルバモイルオキシ）ピペリジン−１−イル］プロピオニルアミノ｝−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
オーバーヘッドスターラー、温度調節および還流凝縮器を備えた１リットルの３ツ口丸底フラスコに、ビフェニル−２−イルカルバミン酸ピペリジン−４−イルエステル（３６．３ｇ、１２２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５００ｍＬ）、およびイソプロパノール（１００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、調製１０からの生成物（３０ｇ、１１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌を、成分が溶解するまで室温で続け、次いでこの混合物を、還流下（５０℃〜５５℃）で１８時間、加熱した。次いで、この反応混合物を室温に冷却し、エタノール（２００ｍＬ）を加えた。この混合物を減圧下で約１５０ｍＬの容量に濃縮し、濃厚なスラリーを得た。このスラリーを濾過し、濾塊をエタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させることにより、白色固体として表題の化合物（５８ｇ、収率９２％、ＨＰＬＣによる純度９９．５％）を得た。
【０１３４】
（調製１５）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ヒドロキシメチル−５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
２リットルの丸底フラスコに、調製１４からの生成物（４０ｇ、７０．８ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（４００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いでこのフラスコを、窒素で５分間パージした。次いでこの混合物を０℃（内部温度）に冷却し、ＴＨＦ（１０６ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）中の水素化リチウムアルミニウムの１Ｍ溶液を、内部の反応混合物温度を１０℃未満に維持しながら、追加漏斗を通じて滴下した。合計添加時間は、約４０分であった。次いでこの反応混合物を、０℃にて１時間、攪拌し、次いで内部の反応混合物温度を１５℃未満に維持しながら、１Ｍ水酸化ナトリウム（２００ｍＬ）を加えた。次いで、層を分離し、ＴＨＦ層を飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、硫化ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮することにより、白色固体として表題の化合物（３８ｇ、収率１００％、ＨＰＬＣによる純度９４％）を得た。
【０１３５】
（調製１６）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ホルミル−５−メトキシフェニル−カルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
１リットルの丸底フラスコに、調製１５からの生成物（２８ｇ、５２ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、活性酸化マンガン（ＩＶ）（４５ｇ、５２０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、窒素下で室温にて１２時間、攪拌し、次いで、セライトパッドに通して濾過した。次いで、この混合物を減圧下で濃縮し、残留物を真空下で一晩乾燥させることにより、黄色固体として表題の化合物（２６ｇ、収率９３％、ＨＰＬＣによる純度約９３％）を得た。
【０１３６】
（調製１７）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（４−｛［（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−２−クロロ−５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
５００ｍＬの丸底フラスコに、調製１６からの生成物（６ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、調製７の生成物（６ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）および乾燥メタノール（５０ｍＬ）を加えた。この混合物を窒素下で室温にて２時間、攪拌し（透明な黄色から橙色の溶液）、次いで、この混合物を０℃〜５℃に冷却した。固体のナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（７．２ｇ、３４ｍｍｏｌ）を１０分間かけて少しずつ加え、次いで、この反応混合物を、約２時間かけて、０℃〜室温にゆっくりと温めた。次いで、この混合物を０℃に冷却し、１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）およびジクロロメタン（１５０ｍＬ）を加えた。この混合物を十分に攪拌し、次いで、層を分離した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、濾過し、硫化ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮することにより、黄色固体として表題の化合物（１０．１ｇ、収率１００％、ＨＰＬＣによる純度８７％）を得た。
【０１３７】
（実施例４）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
５０ｍＬの丸底フラスコに、調製１７からの生成物（２．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分を溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、三フッ化水素トリエチルアミン（１．２ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、２５℃にて２０時間、攪拌した。次いで、メタノール（１０ｍＬ）中の１，２−エタンジスルホン酸二水和物（０．５６ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、この混合物を３０℃にて２時間攪拌した時点で、濃厚な白色スラリーが形成された。このスラリーをゆっくりと濾過し、濾塊をメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、２時間、風乾し、次いで、真空下で一晩乾燥させることにより、微細な白色粉末として表題の化合物（１．５ｇ、ＨＰＬＣによる純度＞９８％）を得た。
【０１３８】
（実施例５）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩の精製）
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（８０ｇ）に、イソプロパノール（８００ｍＬ）中の容量で２０％の水の溶液を加えた。得られたスラリーを室温にて一晩おき、次いで濾過することにより、改善した結晶性および純度を有する表題の化合物（７４ｇ）を得た。
【０１３９】
（調製１８）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶）
（工程(ａ)）
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（１００ｍｇ）を、メタノール（２０ｍＬ）中の１３％の水に、約６０℃にて溶解させた。得られた透明溶液を、密閉容器中で室温に冷却させた。４８時間後、得られた板様結晶を、濾過により分離した。
【０１４０】
（工程（ｂ））
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（１．０ｇ）を、メタノール（１００ｍＬ）中の１５％の水に、６０〜６５℃にて溶解させた。この透明な攪拌溶液を、３０℃に冷却させ、次いで、工程（ａ）の結晶性生成物（４．２ｍｇ）を加えた。この溶液を２０℃に冷却し、２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過により分離し、空気中で１時間、乾燥させることにより、表題の化合物（６８０ｍｇ）を得た。
【０１４１】
（工程（ｃ））
工程（ｂ）の手順を、工程（ａ）の生成物の代わりに工程（ｂ）の生成物（２０ｍｇ）を用いて繰り返し、表題の化合物（６９０ｍｇ）を得た。
【０１４２】
（工程（ｄ））
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（１０ｇ）を、メタノール（１Ｌ）中の１５％の水に、６０〜６５℃にて溶解させた。この透明な攪拌溶液を、３０℃に冷却させ、次いで、工程（ｃ）の結晶性生成物（４．２ｍｇ）を加えた。この溶液を２０℃に冷却し、１８時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過により分離し、空気中で２時間、乾燥させることにより、表題の化合物（５．５ｇ）を得た。
【０１４３】
（実施例６）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を使用した再結晶化）
１２Ｌの丸底フラスコに、実施例５からの生成物（６０ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）、水（０．９Ｌ）、およびメタノール（５．１Ｌ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで攪拌しながら２５℃から６１〜６５℃に加熱し、さらに２０分間、６０〜６５℃にて攪拌した。この混合物を３０℃に冷却させ、次いで、調製１８の生成物（２ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２０℃にゆっくりと冷却し、得られたスラリーを、３０℃にてさらに２時間、攪拌した。この生成物をメタノール（５００ｍＬ）と共に濾過し、２時間空気中で乾燥させ、次いで真空中で２５〜３０℃にて１８時間、乾燥させることにより、表題の化合物（４３ｇ、収率７２％、純度９９．２％）を得た。
【０１４４】
（実施例７）
（熱分析）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｎａｌｙｓｔコントローラーを備えたＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＱ−１０型モジュールを使用して実施した。データを回収し、ＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＴｈｅｒｍａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを使用して分析した。約１ｍｇのサンプルを正確に計量して蓋付きのアルミパンに入れた。このサンプルを、周囲温度から約３００℃まで５℃／分の一次加熱傾斜（ｌｉｎｅａｒ ｈｅａｔｉｎｇ ｒａｍｐ）を使用して評価した。使用中、ＤＳＣセルを、乾燥窒素を用いてパージした。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＤＳＣの記録を図１に、実施例２のサンプルについての代表的なＤＳＣの記録を図２に示す。
【０１４５】
熱重量分析（ＴＧＡ）を、高分解能を備えたＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＱ−５０型モジュールを使用して実施した。データを回収し、ＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＴｈｅｒｍａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを使用して分析した。約１０ｍｇのサンプルをプラチナパンに置き、周囲温度〜３００℃の高分解能加熱速度（ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｈｅａｔｉｎｇ ｒａｔｅ）でスキャンした。使用中、天秤および加熱炉チャンバーを、窒素フローでパージした。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＴＧＡの記録を図１に示す。
【０１４６】
ＤＳＣの記録は、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩が、それぞれ約２３９℃、および約２１９℃の融点を有して熱安定性に優れており、約２００℃未満で熱分解しないことを示している。
【０１４７】
（実施例８）
（粉末エックス線回析）
粉末エックス線回析パターンを、Ｓｉ（Ｌｉ）半導体検出器を備え、１．５４２Å（４５ｋＶ、４０ｍＡ）におけるＣｕのＫα線を使用したＴｈｅｒｍｏ ＡＲＬ Ｘ−Ｒａｙ ＤｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒのＸ’ＴＲＡ型（Ｔｈｅｒｍｏ ＡＲＬ ＳＡ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて得た。この分析を、典型的に、２θ角で２〜３０°の範囲にかけて１点当たり０．０３°の刻み幅を用い、２°／分のスキャン速度で実施した。入手したままかまたは微細な粉末に磨り潰したサンプルを、機器の分析用のトップローディングカップに合わせて設計された特別注文の小容量インサートに優しく詰め込んだ。機器を週に一度、±０．０２°の２θ角内のシリコン金属基準に対応させる。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＰＸＲＤパターンを図３に示し、実施例２のサンプルについてのパターンを図４に示す。
【０１４８】
（実施例９）
（赤外分析法）
赤外（ＩＲ）吸収スペクトルを、Ｎｉｃｏｌｅｔ減衰全反射（ＡＴＲ）サンプルホルダーを備えたＡｖａｔａｒ ３６０ ＦＴ−ＩＲ分光計を使用して、４０００〜６７５ｃｍ−１の周波数範囲にわたり決定した。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＩＲ吸収スペクトルは、図５に示されるように、７０４±１、７４８±１、７６８±１、８４１±１、９００±１、１０５５±１、１１０４±１、１１６６±１、１２１８±１、１２９４±１、１４０８±１、１５２２±１、１６０９±１、１６５５±１、および１７０１±１において有意な吸収帯を有する。
【０１４９】
（実施例１０）
（力学的水分吸着アセスメント）
力学的水分吸着（ＤＭＳ：ｄｙｎａｍｉｃ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｓｏｒｐｔｉｏｎ）アセスメント（水分吸着−脱着プロフィールとしても知られる）を、ＶＴＩ大気マイクロバランス（ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ ｍｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ）、ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ ３３０１６）を使用して、手で砕いた調製１８のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについて実施した。約１０ｍｇのサンプルサイズを使用し、湿度を分析の開始時に周囲値に設定した。典型的なＤＭＳ分析は、３つのスキャンからなる：周囲〜相対湿度（ＲＨ）２％、２％ＲＨ〜９０％ＲＨ、９０％ＲＨ〜５％ＲＨ（スキャン速度：５％ＲＨ／ステップ）。質量を２分毎に測定し、サンプルの質量が５連続点の間、０．０１％以内に安定したときに、ＲＨを次の値（＋／−５％ＲＨ）に変更した。代表的なＤＭＳの記録を、図６に示す。
【０１５０】
このＤＭＳの記録は、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩が、中程度（＜９％）の吸湿性と共に、可逆的な吸着／脱着プロフィールを有することを示している。この塩は、４０％ＲＨ〜７５％ＲＨの湿度範囲において２．５％未満の増量がある。この可逆的な湿気吸着／脱着プロフィールは、本発明の結晶性塩が、受容可能な吸湿性を有し、潮解性ではないことを示している。
【０１５１】
（実施例１１）
（元素分析、および対イオン比率）
実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルの、炭素、水素、窒素、および硫黄の次の元素百分比を、Ｆｌａｓｈ ＥＡ １１１２ Ｅｌｅｍｅｎｔａｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＣＥ Ｅｌａｎｔｅｃｈ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）を使用した燃焼分析により決定した：炭素５２．９５％、水素５．４３％、窒素６．８３％、および硫黄６．８７％。硫黄の測定重量百分比から計算した結晶性サンプル中の１，２−エタンジスルホン酸の重量百分比は、２０．４％で理論上の重量百分比２０．４％と等しく、対イオン比率１：１が得られた。
【０１５２】
（調製Ａ）
（細胞培養およびヒトβ１、β２またはβ３アドレナリンレセプターを発現する細胞からの細胞膜の調製）
クローニングしたヒトβ１、β２、またはβ３アドレナリンレセプターをそれぞれ安定的に発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を、５００μｇ／ｍＬのジェネテシンの存在下で１０％ＦＢＳを用いたＨａｍｓ Ｆ−１２培地において、ほぼコンフルエンシーまで培養した。細胞単層をＰＢＳ中の２ｍＭ ＥＤＴＡで浮かせた。細胞を１，０００ｒｐｍにおける遠心分離によりペレットにし、この細胞ペレットを、−８０℃にて冷凍保存するか、または使用の直前に、細胞膜を調製した。β１およびβ２レセプターを発現する細胞膜の調製に関し、細胞ペレットを溶解緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＨＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、４℃にてｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ぴったりと適合したＤｏｕｎｃｅガラス製ホモジナイザー（３０ストローク）を氷上で使用して均質化した。さらなるプロテアーゼ感受性のβ３レセプターを発現する細胞膜に関しては、細胞ペレットを、「Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ Ｔａｂｌｅｔｓ ｗｉｔｈ ２ｍＭ ＥＤＴＡ」の錠剤（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１６９７４９８、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を緩衝液５０ｍＬにつき１つで補った溶解緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４）中で均質化した。このホモジェネートを２０，０００×ｇにて遠心分離し、得られたペレットを、上記のような再懸濁および遠心分離により、溶解緩衝液を用いて１度、洗浄した。次いでこの最終ペレットを、氷冷の結合アッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に再懸濁させた。この細胞膜懸濁液のタンパク質濃度を、Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９５１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９３，２６５；およびＢｒａｄｆｏｒｄ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７６，７２，２４８−５４に記載される方法により決定した。全ての細胞膜を、−８０℃にて分割して保存するか、または直ちに使用した。
【０１５３】
（調製Ｂ）
（細胞培養およびヒトＭ１、Ｍ２、Ｍ３およびＭ４ムスカリンレセプターを発現する細胞からの細胞膜の調製）
クローニングしたヒトｈＭ１、ｈＭ２、ｈＭ３、およびｈＭ４ムスカリンレセプターサブタイプをそれぞれ安定的に発現するＣＨＯ細胞株を、１０％ＦＢＳ、および２５０μｇ／ｍＬのジェネテシンで補ったＨａｍｓ Ｆ−１２培地において、ほぼコンフルエンシーまで培養した。これらの細胞を、ＣＯ２５％、３７℃のインキュベータ中で増殖させ、ｄＰＢＳ中の２ｍＭ ＥＤＴＡで浮かせた。細胞を６５０×ｇにおける５分の遠心分離により回収し、細胞ペレットを、−８０℃にて冷凍保存するか、または使用の直前に、細胞膜を調製した。細胞膜の調製に関し、細胞ペレットを溶解緩衝液に再懸濁させ、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ−２１００組織粉砕器（ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｒｕｐｔｅｒ）（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ ＡＧ；２０秒×２バースト）を用いて均質化した。粗細胞膜を、４０，０００×ｇで４℃にて１５分間、遠心分離した。次いでこの細胞膜ペレットを、再懸濁緩衝液を用いて再懸濁させ、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ組織粉砕器を用いて再度均質化した。この細胞膜懸濁液のタンパク質濃度を、Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９５１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９３，２６５に記載される方法により決定した。全ての細胞膜を、分割して−８０℃にて保存するか、または直ちに使用した。調製されたｈＭ５レセプター細胞膜のアリコートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから直接購入し、使用まで−８０℃にて保存した。
【０１５４】
（アッセイテスト手順Ａ）
（ヒトβ１、β２およびβ３アドレナリンレセプターについての放射性リガンド結合アッセイ）
結合アッセイを、９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて、アッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ２５℃にてｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ，０．２％ ＢＳＡ）中のヒトβ１、β２、またはβ３アドレナリンレセプターを含む１０〜１５μｇの細胞膜タンパク質を用い、総アッセイ容量１００μＬで実施した。放射性リガンドのＫｄ値の決定のための飽和結合調査を、β１およびβ２レセプターについては［３Ｈ］−ジヒドロアルプレノロール（ＮＥＴ−７２０、１００ Ｃｉ/ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を、そして［１２５Ｉ］−（−）−ヨードシアノピンドロール（ＮＥＸ−１８９、２２０ Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を、０．０１ｎＭ〜２０ｎＭの範囲の１０もしくは１１の異なる濃度で使用して実施した。テスト化合物のＫｉ値の決定のための置換アッセイを、［３Ｈ］−ジヒドロアルプレノロールを１ｎＭにて、そして［１２５Ｉ］−（−）−ヨードシアノピンドロールを０．５ｎＭにて用い、１０ｐＭ〜１０μＭの範囲における１０もしくは１１の異なる濃度のテスト化合物について実施した。非特異的な結合を、１０μＭのプロプラノロールの存在下で決定した。分析物を３７℃にて１時間インキュベートし、次いで、β１およびβ２レセプターについてはＧＦ／Ｂ、β３レセプターについてはＧＦ／Ｃガラス繊維フィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）（０．３％のポリエチレンイミンに予浸しておく）を用いた急速濾過により、結合反応を終わらせた。フィルタープレートを濾過緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ４℃にてｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ）を用いて３回洗浄し、結合していない放射能を除去した。次いでこのプレートを乾燥させ、５０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０液体シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）を加え、プレートをＰａｃｋａｒｄ Ｔｏｐｃｏｕｎｔ液体シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で計数した。結合データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、ワンサイト・コンペティション（ｏｎｅ−ｓｉｔｅ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）についての３パラメーターモデルを使用して、非線形回帰分析により分析した。曲線の最小値（ｃｕｒｖｅ ｍｉｎｉｍｕｍ）を、１０μＭのプロプラノロールの存在下で決定された非特異的な結合についての値に固定した。テスト化合物についてのＫｉ値を、観測されたＩＣ５０値、および放射性リガンドのＫｄ値から、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ａｎｄ Ｐｒｕｓｏｆｆ ＷＨ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９７３，２２，２３，３０９９−１０８）を使用して計算した。
【０１５５】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターに対するより高い結合親和力を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ヒトβ２アドレナリンレセプターに対し、１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１５６】
（アッセイテスト手順Ｂ）
（ムスカリンレセプターについての放射性リガンド結合アッセイ）
クローニングしたヒトムスカリンレセプターについての放射性リガンド結合アッセイを、総アッセイ容量１００μＬで、９６ウェルマイクロタイタープレートにて実施した。ｈＭ１、ｈＭ２、ｈＭ３、ｈＭ４、またはｈＭ５のいずれかのムスカリンサブタイプを安定的に発現するＣＨＯ細胞の細胞膜を、類似したシグナル（ｃｐｍ）を得るために、次の特異的なターゲットタンパク質濃度（μｇ／ウェル）までアッセイ緩衝液で希釈した：ｈＭ１については１０μｇ、ｈＭ２については１０〜１５μｇ、ｈＭ３については１０〜２０μｇ、ｈＭ４については１０〜２０μｇ、そしてｈＭ５については１０〜１２μｇ。これらの細胞膜を、アッセイプレートへの添加前に、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ組織粉砕器を使用して（１０秒）簡単に均質化した。放射性リガンドのＫＤ値を決定するための飽和結合調査を、０．００１ｎＭ〜２０ｎＭの範囲の濃度でＬ−［Ｎ−メチル−３Ｈ］スコポラミンメチルクロリド（［３Ｈ］−ＮＭＳ）（ＴＲＫ６６６、８４．０ Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を使用して実施した。テスト化合物のＫｉ値の決定のための置換アッセイを、１ｎＭの［３Ｈ］−ＮＭＳ、および１１の異なるテスト化合物濃度を用いて実施した。これらのテスト化合物を、初めに希釈緩衝液に溶解して４００μＭの濃度にし、次いで、連続的に希釈緩衝液で５×に希釈して、最終濃度を１０ｐＭ〜１００μＭの範囲にした。アッセイプレートへの添加順序および容量は次のとおりである：２５μＬの放射性リガンド、２５μＬの希釈したテスト化合物、そして５０μＬの細胞膜。アッセイプレートを、３７℃にて６０分間、インキュベートした。結合反応を、１％ＢＳＡ中で予め処理したＧＦ／Ｂガラス繊維フィルタープレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を用いた急速濾過により終わらせた。フィルタープレートを、洗浄緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ）で３回すすぎ、結合していない放射能を除去した。次いで、これらのプレートを風乾させ、５０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０液体シンチレーション液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を各ウェルに加えた。次いでこれらのプレートを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｔｏｐｃｏｕｎｔ液体シンチレーションカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）で計数した。結合データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、ワンサイト・コンペティションモデルを使用して、非線形回帰分析により分析した。テスト化合物についてのＫｉ値を、観測されたＩＣ５０値、および放射性リガンドのＫＤ値から、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ Ｙ；Ｐｒｕｓｏｆｆ ＷＨ．（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２２（２３）：３０９９−１０８）を使用して計算した。Ｋｉ値をｐＫｉ値に変換し、幾何平均および９５％信頼区間を決定した。次いで、これらの要約統計を、データ報告のためにＫｉ値に変換し直した。
【０１５７】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターに対するより高い結合親和力を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ヒトＭ２およびＭ３ムスカリンレセプターに対し、１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１５８】
（アッセイテスト手順Ｃ）
（非相同的にヒトβ１、β２またはβ３アドレナリンレセプターを発現するＣＨＯ細胞株における細胞全体ｃＡＭＰフラッシュアッセイ）
ｃＡＭＰアッセイを、製造業者の説明に従い、［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰを用いたＦｌａｓｈｐｌａｔｅ Ａｄｅｎｙｌｙｌ Ｃｙｃｌａｓｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ＮＥＮ ＳＭＰ００４，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、放射線免疫アッセイ形式で実施した。βレセプターアゴニストの効力（ＥＣ５０）の決定のために、クローニングしたヒトβ１、β２またはβ３アドレナリンレセプターを安定的に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞株を、１０％ＦＢＳ、およびジェネテシン（２５０μｇ／ｍＬ）で補ったＨａｍｓ Ｆ−１２培地において、ほぼコンフルエンシーまで培養した。細胞をＰＢＳですすぎ、２ｍＭ ＥＤＴＡまたはトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．０５％トリプシン／０．５３ｍＭ ＥＤＴＡ）を含むｄＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ＣａＣｌ２およびＭｇＣｌ２を含まない）で分離した。Ｃｏｕｌｔｅｒ細胞カウンターで細胞を計数後、細胞を１，０００ｒｐｍにおける遠心分離によってペレットにし、予め室温に温めたＩＢＭＸ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｋｉｔ）を含む刺激緩衝液に再懸濁させ、１．６×１０６〜２．８×１０６細胞／ｍＬの濃度にした。１ウェル当たり約６０，０００〜８０，０００細胞を、このアッセイで使用した。テスト化合物（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）をＢｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ−２０００中の０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で希釈し、１００μＭ〜１ｐＭの範囲の１１の異なる濃度にてテストした。反応物を３７℃にて１０分間インキュベートし、［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰ（ＮＥＮ ＳＭＰ００４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を含む１００μＬの冷たい検出緩衝液を加えることにより止めた。生成されたｃＡＭＰの量（ｐｍｏｌ／ウェル）を、サンプルについて観測された数、および製造業者の使用者マニュアルに記載されるｃＡＭＰ標準に基づき計算した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、シグモイド方程式（ｓｉｇｍｏｉｄａｌ ｅｑｕａｔｉｏｎ）を用いて、非線形回帰分析により分析した。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ａｎｄ Ｐｒｕｓｏｆｆ ＷＨ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９７３，２２，２３：３０９９−１０８）を使用して、ＥＣ５０値を計算した。
【０１５９】
このアッセイにおいて、より低いＥＣ５０値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ヒトβ２アドレナリンレセプターに対し、１０ｎＭ未満のＥＣ５０値を有することが見出された。
【０１６０】
（アッセイテスト手順Ｄ）
（ムスカリンレセプターサブタイプについての拮抗作用の機能アッセイ）
（Ａ．アゴニストが媒介する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合の遮断）
テスト化合物の機能的効力を、ｈＭ２レセプターを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞に結合するオキソトレモリンが刺激する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を遮断する化合物の能力を計測することにより決定した。
使用のときに、冷凍細胞膜を解凍し、次いで、最終ターゲット組織濃度１ウェル当たり５〜１０μｇのタンパク質を用いてアッセイ緩衝液中で希釈した。この細胞膜を、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ−２１００組織粉砕器を使用して簡単に均質化し、次いで、アッセイプレートに加えた。
【０１６１】
アゴニストオキソトレモリンによる［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合の刺激に対するＥＣ９０値（９０％の最大応答に対する有効濃度）をそれぞれの実験において決定した。
【０１６２】
オキソトレモリンが刺激する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を阻害するテスト化合物の能力を決定するために、次の：［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．４ｎＭ）を有する２５μＬのアッセイ緩衝液、２５μＬのオキソトレモリン（ＥＣ９０）およびＧＤＰ（３μＭ）、２５μＬの希釈したテスト化合物、ならびにｈＭ２レセプターを発現する２５μＬのＣＨＯ細胞の細胞膜を、９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。次いで、アッセイプレートを３７℃にて６０分間インキュベートした。これらのアッセイプレートを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ９６ウェルハーベスターを使用し、１％ＢＳＡで予め処理したＧＦ／Ｂフィルターを用いて濾過した。これらのプレートを、３回×３秒間、氷冷の洗浄緩衝液を用いてすすぎ、次いで、風乾または真空乾燥させた。Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０シンチレーション液（５０μＬ）を、各ウェルに加え、各プレートを密封し、放射能をＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で算出した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、非線形回帰分析であるワンサイト・コンペティションを使用して分析した。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を、Ｋｉ値を計算するために使用し、ＫＤおよび［Ｌ］のリガンド濃度として、それぞれアッセイにおけるテスト化合物およびオキソトレモリン濃度についての濃度−応答曲線のＩＣ５０値を使用した。
【０１６３】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ｈＭ２レセプターを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞におけるオキソトレモリンが刺激する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合の遮断に対して、約１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１６４】
（Ｂ．ＦＬＩＰＲアッセイによるアゴニストが媒介するカルシウム放出の遮断）
Ｇｑタンパク質に結合するムスカリンレセプターサブタイプ（Ｍ１、Ｍ３、およびＭ５レセプター）は、アゴニストがレセプターに結合すると、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）経路を活性化する。その結果、活性化されたＰＬＣはホスファチジル（ｐｈｏｓｐｈａｔｙｌ）イノシトール二リン酸（ＰＩＰ２）を、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）とホスファチジル−１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）とに加水分解し、次いで、細胞内貯蔵（すなわち、小胞体および筋小胞体）からカルシウム放出を生じさせる。ＦＬＩＰＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）アッセイは、遊離カルシウムが結合するときに蛍光を発するカルシウム感受性色素（Ｆｌｕｏ−４ＡＭ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を使用することにより、この細胞内カルシウムの増加を利用する（ｃａｐｉｔａｌｉｚｅ）。この蛍光イベントを、ヒトＭ１およびＭ３レセプター、ならびにチンパンジーＭ５レセプターを有するクローンされた細胞の単層から蛍光の変化を検出するＦＬＩＰＲにより、実時間で計測する。アンタゴニストの効力を、アゴニストが媒介する細胞内カルシウムの増加を阻害するアンタゴニストの能力によって決定し得る。
【０１６５】
ＦＬＩＰＲカルシウム刺激アッセイに関し、ｈＭ１、ｈＭ３、およびｃＭ５レセプターを安定的に発現するＣＨＯ細胞を、アッセイを実施する前夜に、９６ウェルＦＬＩＰＲプレートに播種した。播種した細胞をＦＬＩＰＲ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、２ｍＭ 塩化カルシウム、カルシウムおよびマグネシウムを含まないハンクス緩衝食塩水中（ＨＢＳＳ）の２．５ｍＭ プロベネシド）を用いて、Ｃｅｌｌｗａｓｈ（ＭＴＸ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）により２回洗浄し、増殖培地、そしてＦＬＩＰＲ緩衝液５０μＬ／ウェルを残した。次いでこれらの細胞を、二酸化炭素５％で３７℃にて４０分間、５０μＬ／ウェルの４μＭ ＦＬＵＯ−４ＡＭ（２Ｘ溶液が生成された）を用いてインキュベートした。染色インキュベーションに続き、ＦＬＩＰＲ緩衝液で２回洗浄し、最終用量５０μＬ／ウェルを残した。
アンタゴニストの効力を決定するために、後でアンタゴニストの効力をＥＣ９０濃度におけるオキソトレモリン刺激に対して計測し得るように、まず、オキソトレモリンについての細胞内Ｃａ２＋放出の用量依存性刺激を決定した。細胞をまず２０分間、化合物希釈緩衝液を用いてインキュベートし、続くアゴニストの添加はＦＬＩＰＲによって実施された。オキソトレモリンについてのＥＣ９０値を、以下のＦＬＩＰＲ測定およびデータ整理の節にて、式ＥＣＦ＝（（Ｆ／１００−Ｆ）＾１／Ｈ）＊ＥＣ５０とともに詳述される方法に従って得た。オキソトレモリンのＥＣ９０濃度がアンタゴニスト阻害アッセイプレート中の各ウェルに加えられるように、３×ＥＣＦのオキソトレモリン濃度を刺激プレート中に調製した。
【０１６６】
ＦＬＩＰＲに使用されるパラメーターは：０．４秒の曝露時間、０．５ワットのレーザー強度、４８８ｎｍの励起波長、５５０ｎｍの発光波長であった。アゴニストの添加前に、１０秒間の蛍光の変化を測定することにより、基準線（ｂａｓｅｌｉｎｅ）を決定した。アゴニストの刺激に続き、ＦＬＩＰＲは、０．５秒から１秒毎の蛍光の変化を１．５分間、最大蛍光変化を得るために、継続的に計測した。
発光の変化を各ウェルについて、最大蛍光マイナス基準線蛍光として表した。生データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、シグモイド用量反応についてのビルトインモデルを使用して、非線形回帰分析により、薬物濃度の対数に対して分析した。アンタゴニストのＫ１値を、ＫＤとしてオキソトレモリンＥＣ５０値、およびＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ＆Ｐｒｕｓｏｆｆ，１９７３）に従うリガンド濃度についてのオキソトレモリンＥＣ９０を使用し、Ｐｒｉｓｍにより決定した。
【０１６７】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ｈＭ１、ｈＭ３、およびｃＭ５レセプターを安定的に発現するＣＨＯ細胞におけるアゴニストが媒介するカルシウム放出の遮断に対し、約１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１６８】
（アッセイテスト手順Ｅ）
（内因的にヒトβ２アドレナリンレセプターを発現する肺上皮細胞株を用いた細胞全体ｃＡＭＰフラッシュアッセイ）
内因的濃度のβ２アドレナリンレセプターを発現している細胞株におけるアゴニストの効力および効能（内因性の活性）の決定に関し、ヒト肺上皮細胞株（ＢＥＡＳ−２Ｂ）を使用した（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９６０９、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）（Ｊａｎｕａｒｙ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９８，１２３，４，７０１−１１）。細胞を、完全な無血清培地（エピネフリンおよびレチノイン酸を含むＬＨＣ−９ ＭＥＤＩＵＭ、カタログ番号１８１−５００、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）において、７５〜９０％のコンフルエンシーまで培養した。アッセイ前日に、培地をＬＨＣ−８（エピネフリンおよびレチノイン酸を含まない、カタログ番号１４１−５００、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）に変更した。
ｃＡＭＰアッセイを、製造業者の説明に従い、［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰを用いたＦｌａｓｈｐｌａｔｅ Ａｄｅｎｙｌｙｌ Ｃｙｃｌａｓｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ＮＥＮ ＳＭＰ００４，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、放射線免疫アッセイ形式で実施した。
【０１６９】
アッセイの当日、細胞をＰＢＳですすぎ、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＥＤＴＡで擦る（ｓｃｒａｐｅ）ことによって浮かせ、計数した。細胞を１，０００ｒｐｍにて遠心分離によりペレットにし、３７℃に予め温めておいた刺激緩衝液に、６００，０００細胞／ｍＬの最終濃度で再懸濁させた。このアッセイでは、１００，０００〜１２０，０００細胞／ウェルの最終濃度で、細胞を使用した。テスト化合物を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ−２０００で、アッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ２５℃にてｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ＢＳＡ）で、連続的に希釈した。このアッセイでは、１０μＭ〜１０ｐＭの範囲における１１の異なる濃度で、テスト化合物をテストした。反応物を３７℃にて１０分間、インキュベートし、１００μＬの氷冷の検出緩衝液の添加により止めた。プレートを密閉し、４℃にて一晩中インキュベートし、翌朝、Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で計数した。反応物１ｍＬ当たりに生成されたｃＡＭＰ量を、製造業者の使用者マニュアルに記載のとおり、サンプルについて観測された数、およびｃＡＭＰ標準に基づき算定した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、シグモイド用量反応に関する４−パラメーターモデルを使用して、非線形回帰分析により分析した。
【０１７０】
このアッセイにおいて、より低いＥＣ５０値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、β２アドレナリンレセプターに対し、約１０ｎＭ未満のＥＣ５０値を有することが見出された。
【０１７１】
（アッセイテスト手順Ｆ）
（アセチルコリン誘発またはヒスタミン誘発気管支収縮のモルモットモデルにおける気管支保護（ｂｒｏｎｃｈｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）の持続時間）
これらのインビボアッセイを使用して、ムスカリンレセプターアンタゴニストおよびβ２アドレナリンレセプターアゴニスト活性の両方を示すテスト化合物の気管支保護効果を評価した。アセチルコリン誘発気管支収縮モデルにおけるムスカリンアンタゴニスト活性を分離するために、これらの動物にプロパノロール（βレセプター活性を遮断する化合物）を、アセチルコリンの投与の前に投与した。ヒスタミン誘発気管支収縮モデルにおける気管支保護の持続時間は、β２アドレナリンレセプターアゴニスト活性を反映する。
【０１７２】
２５０ｇと３５０ｇとの間の重さの６匹の雄のモルモット（Ｄｕｎｃａｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ（ＨｓｄＰｏｃ：ＤＨ）Ｈａｒｌａｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）群を、それぞれケージカードにより同定した。調査の間中、動物に自由に食料および水を入手させた。
【０１７３】
テスト化合物を、全身曝露投薬チャンバ（ｗｈｏｌｅ−ｂｏｄｙ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｄｏｓｉｎｇ ｃｈａｍｂｅｒ）（Ｒ＆Ｓ Ｍｏｌｄｓ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）で１０分間にわたり、吸引により投与した。この投薬チャンバを、エアゾールが中央の多岐管から６つの個々のチャンバに同時に送達されるように設計した。モルモットをテスト化合物またはビヒクル（ＷＦＩ）のエアゾールに曝露させた。これらのエアゾールを、２２ｐｓｉの圧力にて気体の混合物（ＣＯ２＝５％、Ｏ２＝２１％、およびＮ２＝７４％）により作動するＬＣ Ｓｔａｒ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ Ｓｅｔ（Ｍｏｄｅｌ ２２Ｆ５１，ＰＡＲＩ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．Ｍｉｄｌｏｔｈｉａｎ，ＶＡ）を使用し、水溶液から生じさせた。この作動圧においてネブライザーを通した気体流は、約３Ｌ／分であった。この生じたエアゾールを、陽圧によりチャンバ内に押し流した。エアゾール化した溶液の送達の間、希釈用空気は使用されなかった。１０分の噴霧療法の間、約１．８ｍＬの溶液を噴霧した。この値を、充填したネブライザーの噴霧前および噴霧後の重量を比較することにより、重量分析的に測定した。
【０１７４】
吸引により投与されるテスト化合物の気管支保護効果を、投与後１．５時間、２４時間、４８時間、および７２時間に、全身プレチスモグラフ法を使用して評価した。
肺評価の開始４５分前に、各モルモットをケタミン（４３．７５ｍｇ／ｋｇ）、キシラジン（３．５０ｍｇ／ｋｇ）、およびアセプロマジン（１．０５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔した。手術部位を剃り、７０％アルコールで清潔にした後、頸部腹側面の２〜３ｃｍの正中切開を実施した。次いで、頚静脈を分離し、生理食塩水中のアセチルコリン（Ａｃｈ）またはヒスタミンの静脈内注入を考慮して、生理食塩水を充填したポリエチレンカテーテル（ＰＥ−５０，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）と共にカニューレを挿入した。次いで、この気管を切開解放（ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ ｆｒｅｅ）し、１４Ｇテフロン（登録商標）チューブ（＃ＮＥ−０１４，Ｓｍａｌｌ Ｐａｒｔｓ，Ｍｉａｍｉ Ｌａｋｅｓ，ＦＬ）と共にカニューレを挿入した。必要な場合は、前記した麻酔混合物のさらなる筋肉内注射によって知覚麻痺を維持した。知覚麻痺の程度をモニターし、動物が足をつまんで（ｐｉｎｃｈ）反応する場合、または呼吸数が１００呼吸／分を超えた場合に調節した。
【０１７５】
カニューレの挿入が完了すると、動物をプレチスモグラフ（＃ＰＬＹ３１１４，Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｈａｒｏｎ，ＣＴ）に置き、食道圧力カニューレ（ＰＥ−１６０，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を、肺の駆動圧（プレッシャー）を測定するために挿入した。テフロン（登録商標）導管チューブをプレチスモグラフの開口部に取り付け、モルモットにチャンバの外からの大気を吸わせた。次いで、チャンバを密閉した。体温を維持するために加熱灯を使用し、モルモットの肺を、１０ｍＬ較正シリンジ（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｓｙｒｉｎｇｅ）（＃５５２０ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｈａｎｓ Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用して、４ｍＬの空気で３回膨張させ、気道下部が無空気状態にならないことを、そして動物が過呼吸に陥らないことを確実にした。
基準線の値がコンプライアンスについて０．３〜０．９ｍＬ／ｃｍ Ｈ２Ｏの範囲内であると決定し、抵抗について０．１〜０．１９９ｃｍ Ｈ２Ｏ／ｍＬ毎秒の範囲内であると決定すると、肺評価を開始した。Ｂｕｘｃｏ肺測定コンピュータープログラムにより、肺の値の収集および導出を実施した。
【０１７６】
このプログラムをスタートさせると、実験プロトコルおよびデータ収集を開始した。各呼吸に関するプレチスモグラフ中で起こる、容量の経時変化を、Ｂｕｘｃｏ圧力変換器により測定した。この経時シグナルを取り入れることにより、各呼吸についてのフローの測定値を算定した。このシグナルを、Ｓｅｎｓｙｍ圧力変換器（＃ＴＲＤ４１００）を使用して回収された肺の駆動圧力の変化と共に、Ｂｕｘｃｏ（ＭＡＸ ２２７０）前置増幅器によりデータ収集インターフェース（＃ＳＦＴ３４００および＃ＳＦＴ３８１３）と結びつけた。全ての他の肺のパラメーターをこれら２つのインプットから引き出した。
【０１７７】
基準線値を５分間で収集し、その後、モルモットをＡｃｈまたはヒスタミンでチャレンジした。ムスカリンアンタゴニストの効果を評価する場合、プロパノロール（５ｍｇ／Ｋｇ、ｉｖ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、Ａｃｈでチャレンジする１５分前に投与した。Ａｃｈ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（０．１ｍｇ／ｍＬ）を、シリンジポンプ（ｓｐ２１０ｉｗ、Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ）から１分間、次の用量および指定された実験の開始からの時間で静脈内に注入した：５分の時点で１．９μｇ／分、１０分の時点で３．８μｇ／分、１５分の時点で７．５μｇ／分、２０分の時点で１５．０μｇ、２５分の時点で３０μｇ／分、および３０分の時点で６０μｇ／分。あるいは、テスト化合物の気管支保護を、β遮断化合物での前処理なしのアセチルコリンチャレンジモデルで評価した。
【０１７８】
テスト化合物のβ２アドレナリンレセプターアゴニスト効果を評価する場合、ヒスタミン（２５μｇ／ｍＬ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、シリンジポンプから１分間、次の用量および指定された実験の開始からの時間で静脈内に注入した：５分の時点で０．５μｇ／分、１０分の時点で０．９μｇ／分、１５分の時点で１．９μｇ／分、２０分の時点で３．８μｇ、２５分の時点で７．５μｇ／分、および３０分の時点で１５μｇ／分。抵抗またはコンプライアンスが、Ａｃｈまたはヒスタミンのそれぞれの投薬に続く３分の時点で基準線値に戻らない場合は、モルモットの肺を、１０ｍＬ較正シリングから４ｍＬの空気で３回膨張させた。記録された肺のパラメーターには、呼吸回数（呼吸／分）、コンプライアンス（ｍＬ／ｃｍ Ｈ２Ｏ）、および肺抵抗（ｃｍ Ｈ２Ｏ／ｍＬ毎秒）が含まれる。このプロトコルの３５分の時点で肺機能測定が完了すると、モルモットをプレチスモグラフから取り出し、二酸化炭素の窒息により安楽死させた。
【０１７９】
これらのデータを２つの方法のうちの一方で評価した：
（ａ）肺抵抗（ＲＬ、ｃｍ Ｈ２Ｏ／ｍＬ毎秒）を、「圧力の変化」対「流量の変化」の比から計算した。ＡＣｈへのＲＬ応答（６０μｇ／分、ＩＨ）をビヒクルおよびテスト化合物群について、コンピュータで算定した。ビヒクル−処置動物において、各前処理時点の平均ＡＣｈ応答を計算し、各テスト化合物用量にて対応する前処理時点のＡＣｈ応答の阻害％をコンピュータで算定するために使用した。「ＲＬ」についての阻害用量−応答曲線を、気管支保護ＩＤ５０（ＡＣｈ（６０μｇ／分）気管支収縮物質（ｂｒｏｎｃｈｏｃｏｎｔｒｉｃｔｏｒ）応答を５０％阻害するのに必要とされる用量）を推定するために、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ ３．００（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して、４パラメーター論理方程式を用いて調節した。使用された方程式は次のとおりである：
Ｙ＝Ｍｉｎ＋（Ｍａｘ−Ｍｉｎ）／（１＋１０（（ｌｏｇＩＤ５０−Ｘ）＊Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ））
ここでＸは用量の対数であり、Ｙは応答（Ａｃｈが誘発するＲＬ増加の阻害％）である。ＹはＭｉｎで始まり、漸近的にＭａｘへとＳ字状（ｓｉｇｍｏｉｄａｌ ｓｈａｐｅ）を描く。
【０１８０】
（ｂ）基準線の肺抵抗を倍にするために必要とされるＡｃｈまたはヒスタミンの量、として規定される量ＰＤ２は、次の方程式（クリニックでＰＣ２０値を計算するために使用される方程式から導かれる）を使用して、Ａｃｈまたはヒスタミンのチャレンジの範囲にわたるフローおよびプレッシャーから導かれる肺の抵抗値を使用して算定される（Ａｍ．Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃ，２０００を参照）。
【０１８１】
【数１】
ここで：
Ｃ１＝Ｃ２に先行するＡｃｈまたはヒスタミンの濃度
Ｃ２＝肺抵抗（ＲＬ）の少なくとも２倍の増加をもたらすＡｃｈまたはヒスタミンの濃度
Ｒ０＝基準線ＲＬ値
Ｒ１＝Ｃ１に従うＲＬ値
Ｒ２＝Ｃ２に従うＲＬ値
データの統計分析を、両側スチューデントｔ検定を使用して実施した。Ｐ値＜０．０５を有意とみなした。
【０１８２】
このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ＭＣｈ誘発気管支収縮およびＨｉｓ誘発気管支収縮に対する、用量依存性気管支保護効果をもたらした。さらに、式Ｉの化合物は、このアッセイにおいて少なくとも約２４時間の気管支保護活性の持続時間（ＰＤ Ｔ１／２）を有した。
【０１８３】
本発明は、その特異的な局面または実施形態を参照して記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなしに、種々の変更がなされ得、等価物を代わりに使用し得ることが、当業者には理解される。さらに、適用し得る特許法および規制により認可される範囲まで、本明細書中で引用するすべての刊行物、特許および特許出願を、各書類が個々に本明細書中に参考として援用された場合と同程度に、それらの全体が参考として本明細書中で援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１８４】
本発明の種々の局面が、添付の図の参照により説明される。
【図１】図１は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の記録および熱重量分析（ＴＧＡ）の記録を示している。
【図２】図２は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについてのＤＳＣの記録を示す。
【図３】図３は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルの粉末エックス線回析（ＰＸＲＤ）パターンを示している。
【図４】図４は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルの粉末エックス線回析（ＰＸＲＤ）パターンを示している。
【図５】図５は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩についての赤外線（ＩＲ）吸収スペクトルを示している。
【図６】図６は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩についての力学的水分吸着（ＤＭＳ）の記録を示している。
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、肺障害を処置するための治療因子として有用であると期待されるビフェニル化合物の新規結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩に関する。本発明はまた、そのような結晶性化合物を含む薬学的組成物、もしくはそのような結晶性化合物から調製される薬学的組成物、そのような結晶性化合物を調製するためのプロセスおよび中間体、ならびにそのような結晶性化合物を使用して肺障害を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（技術的現状）
同一出願人による２００４年２月１３日出願の米国特許出願第１０／７７９，１５７号は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および喘息などの肺障害を処置するための治療因子として有用である新規ビフェニル化合物を開示している。特に、この化合物、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルは、ムスカリンアンタゴニストおよびβ２アドレナリンレセプターアゴニスト活性の両方を有するとして、これらの出願に特異的に開示される。ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの化学構造は、式Ｉ：
【０００３】
【化２】
によって表される。
【０００４】
肺障害を処置するために有用な治療因子は、吸入により、好都合に直接気道へと投与される。そのため、いくつかの種類の薬学的吸入デバイスが、吸入により治療因子を投与するために開発されており、その中には、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）、およびネブライザー吸入器が含まれる。そのようなデバイス中での使用のための薬学的組成物および調合物を調製する場合、吸湿性でも潮解性でもなく、比較的高い融点（すなわち、約１５０℃より高い融点）を有し、それにより結晶性の重大な分壊または喪失なくこの物質を微粉化し得る結晶性形態の治療因子を有することが非常に望ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
式Ｉの化合物の結晶性塩形態は、以前に報告されていない。したがって、受容可能な水準の吸湿性および比較的高い融点を有する式Ｉの化合物の、安定した、非潮解性の結晶性塩形態に対する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を提供する。
【０００７】
驚くことに、式Ｉの化合物のそのような結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、大気中の湿気に曝露される場合でさえも、潮解性ではないことが見出された。さらに、そのような結晶性塩は、受容可能な水準の吸湿性および非常に高い融点（例えば、約２１５℃より高い融点）を有する。特定の実施形態において、本発明の結晶性塩は、約２３０℃より高い融点を有する。
【０００８】
いくつかある使用の中で、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、肺障害を処置するために有用であると期待される薬学的組成物を調製するために有用である。したがって、その組成物の別の局面おいて、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアおよびビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む薬学的組成物を提供する。
【０００９】
特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、さらにステロイド抗炎症因子（たとえば、コルチコステロイド（ｃｏｒｔｅｃｏｓｔｅｒｏｉｄ））；もしくはホスホジエステラーゼ−４インヒビター；またはそれらの組み合わせを含む。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩を含み、約４〜約６の範囲におけるｐＨを有する等張生理食塩水溶液を含む薬学的組成物を提供する。
【００１１】
さらに別の実施形態において、本発明は：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子
を含む組み合わせを提供する。
【００１２】
式Ｉの化合物は、ムスカリンアンタゴニスト活性およびβ２アドレナリンレセプターアゴニスト活性の両方を有する。したがって、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩は、肺障害（例えば、喘息、および慢性閉塞性肺疾患）を治療するための治療因子として有用であると期待される。
【００１３】
さらに、方法の局面のうちの１つにおいて、本発明は、肺障害を処置するための方法を提供し、この方法は、処置を必要としている患者に、治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。
【００１４】
さらに、方法の別の局面において、本発明は、患者において気管支拡張（ｂｒｏｎｃｈｏｄｉｌａｔｉｏｎ）を生じさせる方法を提供し、この方法は、気管支拡張を生じさせる量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を、吸入により患者に投与する工程を包含する。
【００１５】
本発明はまた、慢性閉塞性肺疾患または喘息を処置する方法を提供し、この方法は、処置を必要としている患者に、治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。
【００１６】
本発明はまた、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するためのプロセスに向けられる。したがって、その方法の別の局面において、本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を調製するためのプロセス；ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを１，２−エタンジスルホン酸と接触させる工程を包含するプロセスを提供する。
【００１７】
その方法のさらに別の局面において、本発明は、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは：
（ａ）式ＩＩの化合物：
【００１８】
【化３】
をフッ化物イオンと接触させる工程であって、ここで
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃが、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、−Ｃ１〜４アルキル−（フェニル）から独立して選択されるか、またはＲ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのうちの１つが−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である工程；および
（ｂ）工程（ａ）からの生成物を、１，２−エタンジスルホン酸もしくはその水和物と接触させて式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を形成させる工程であって、
工程（ａ）および（ｂ）が、同じ反応容器中で、工程（ａ）の生成物を分離せずに実施される工程
を包含する。
【００１９】
その方法の別の局面において、本発明は、約２３０℃より高い融点を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するプロセスを提供し、このプロセスは、不活性希釈剤に溶解させた式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩を含む溶液に、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を加える工程を包含し、ここでこの種結晶は、約２３０℃より高い融点を有する。
【００２０】
このプロセスはまた、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を再結晶化し、約２３０℃より高い融点を有する結晶性形態を提供するために使用され得る。したがって、本発明は、約２３０℃より高い融点を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するためのプロセスをさらに提供し、このプロセスは：
（ａ）式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を、第一の温度にて不活性な希釈剤に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の生成物を第二の温度に冷却する工程；および
（ｃ）式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を加える工程
を包含し、ここで、種結晶は約２３０℃より高い融点を有し、第一の温度は、１，２−エタンジスルホン酸塩を溶解させるのに十分な温度であり、そして第二の温度は、種結晶が工程（ｂ）の生成物に加えられる場合に完全に溶解する温度より低い。
【００２１】
さらに、本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを精製するためのプロセス；ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を形成させる工程を包含するプロセスに向けられる。本発明はまた、本明細書中に記載されるプロセスによって調製される生成物にも向けられる。
【００２２】
本発明はまた、治療における使用または薬としての使用のためのビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物に向けられる。
【００２３】
さらに、本発明は、薬の製造；特に肺障害の処置のための薬の製造のためのビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の使用に向けられる。
【００２４】
本発明はまた、肺障害の処置のための薬の製造における：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子
の使用に向けられる。
【００２５】
本発明はまた、微粉形態のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；ならびに、微粉形態の薬学的に受容可能なキャリアおよびビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む薬学的組成物に向けられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を提供する。これらの塩（すなわち、式Ｉの化合物）中の活性な治療因子は、（Ｒ）配置を有する１つのキラル中心を含んでいる。しかしながら、全体として組成物の任意の有用性がそのような異性体の存在によって排除されないならば、他に示さない限り、少量の（Ｓ）立体異性体が本発明の組成物中に存在し得ることが、当業者には理解される。
【００２７】
式Ｉの化合物は、市販のＡｕｔｏＮｏｍソフトウェア（ＭＤＬ，Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して命名された。加えて、１，２−エタンジスルホン酸塩はまた、時にエジシラート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅまたはｅｄｉｓｉｌａｔｅ）塩として述べられることがある。
【００２８】
（定義）
本発明の化合物、組成物、方法、およびプロセスを記載する場合、次の用語は、他に示さない限り、次の意味を有する。
【００２９】
用語「融点」は、本明細書中で使用される場合、最大吸熱熱流が、示差走査熱量測定により得られる温度を意味する。
【００３０】
用語「微粉形態」は、少なくとも約９０％の粒子が約１０μｍより小さな直径を有する粒子の形態を意味する。
【００３１】
用語「溶媒和物」は、溶質の１つ以上の分子によって形成される複合体または凝集物（すなわち、式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩）、および溶媒の１つ以上の分子を意味する。そのような溶媒和物は、典型的に、実質的に固定された溶質と溶媒とのモル比を有する。この用語はまた、水を有する包接化合物を含む包接化合物を含む。代表的な溶媒は、例として、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸などが挙げられる。溶媒が水の場合、その形成される溶媒は水和物である。
【００３２】
用語「治療有効量」は、処置を必要としている患者に投与される場合、処置を達成するのに十分な量を意味する。
【００３３】
用語「処置する」または「処置」は、本明細書中で使用される場合：
（ａ）疾患または医学的状態（ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）が生じるのを防ぐ（すなわち、患者の予防的処置）こと；
（ｂ）疾患または医学的状態を改善する（すなわち、患者において、疾患または医学的状態の排除または軽減をもたらす）こと；
（ｃ）疾患または医学的状態を抑制する（すなわち、患者において、疾患または医学的状態の発達を減速させるかまたは阻止する）こと；あるいは
（ｄ）患者において、疾患の症状または医学的状態を緩和すること
を含み、患者（例えば、哺乳動物（特にヒト）において疾患もしくは医学的状態（例えば、ＣＯＰＤ）を処置することまたはその処置を意味する。
【００３４】
用語「単位投薬形態」は、患者に投薬するのに適した物理的に分離した単位、すなわち、本発明の塩の予め決定された量を含む各単位を表す。この予め決定された量は、単独で、または１つ以上の付加的な単位との組み合わせにおいて所望の治療効果を生むように算定される。例えば、そのような単位投薬形態は、乾燥粉末吸入カプセル、定量吸入器からの一定用量、カプセル、錠剤、丸剤などであり得る。
【００３５】
（本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩）
本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル、および１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその水和物から調製され得る。
【００３６】
本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩は、典型的に、式Ｉの化合物１モル当量当たり約０．９０と約１．１０モル当量との間の１，２−エタンジスルホン酸を含み；式Ｉの化合物１モル当量当たり約０．９５と約１．０５モル当量との間の１，２−エタンジスルホン酸を含む。特定の実施形態において、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩は、式Ｉの化合物１モル当量当たり約１モル当量の１，２−エタンジスルホン酸を含む。
【００３７】
１，２−エタンジスルホン酸のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルに対するモル比率は、当業者が利用し得る種々の方法により、容易に決定され得る。例えば、そのようなモル比率は、１Ｈ ＮＭＲにより容易に決定され得る。あるいは、元素分析およびＨＰＬＣ法が、モル比率を決定するために使用され得る。
【００３８】
本発明で使用されるビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルは、市販の出発物質および試薬から、以下の実施例に記載される手順を使用するか；または本出願の背景部分に記載される同一出願人による米国特許出願に記載される手順を使用して、容易に調製され得る。
【００３９】
１，２−エタンジスルホン酸は、例えば、Ａｌｆａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．，Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ，ＵＫから市販されている。１つの実施形態において、本発明の塩を調製するのに使用される１，２−エタンジスルホン酸は、二水和物である。特定の実施形態において、１，２−エタンジスルホン酸二水和物は、９７％以上の純度（ＨＰＬＣによって決定される場合）を有する。望ましい場合は、本発明に使用される１，２−エタンジスルホン酸二水和物を、使用する前に、例えば酢酸および無水酢酸から再結晶化し得る。
【００４０】
本発明の結晶性塩を調製するために、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを、典型的には、約０．７５〜約１．３モル当量の１，２−エタンジスルホン酸、またはその水和物と接触させる。一般的に、この反応は、約０℃〜約６０℃；約２０℃〜約５５℃（例えば、約２５℃〜約５０℃）を含む範囲の温度にて、不活性な希釈剤中で実施される。この反応に適した不活性な希釈剤としては、これらに限定されないが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、酢酸エチル、ジクロロメタンなどが挙げられ、必要に応じて水を含む。特定の実施形態において、エタノール中の１，２−エタンジスルホン酸二水和物の溶液を、イソプロパノールとジクロロメタン（６４：１）との混合物中のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの体積の約５倍まで加える。他の特定の実施形態において、１，２−エタンジスルホン酸二水和物の溶液は、希釈剤として水またはエタノールを含み、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル溶液は、希釈剤としてイソプロパノールまたはエタノールを含む。
【００４１】
あるいは、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、式Ｉの化合物のシリルで保護された誘導体（すなわち、式ＩＩの化合物）を、フッ化物イオンの供給源と接触させ、次いで同じ反応容器中で、その生成物を１，２−エタンジスルホン酸またはその水和物と接触させることにより調製し得る。特定の実施形態において、シリル保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基である。他の適切なシリル保護基としては、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル（ｂｕｙｌｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ）、ｔｅｒｔ−ブトキシジフェニルシリルなどが挙げられる。このプロセスで使用されるフッ化物イオンの供給源は、フッ化物イオンまたはフッ化水素を含んでいるか、または包含している任意の試薬であり得る。特定の実施形態において、フッ化物イオンの供給源は、三フッ化水素トリエチルアミンである。フッ化物イオンの他の適切な供給源は、フッ化テトラブチルアンモニウム、１８−クラウン−６を有するフッ化カリウム、フッ化水素、ピリジンフッ化水素塩などが挙げられる。
【００４２】
一般的に、このプロセスは、約０℃〜約５０℃；約２０℃〜約３５℃（例えば、約２５℃〜約３０℃）を含む範囲の温度において不活性な希釈剤中で実施される。この反応に適切した不活性な希釈剤としては、これらに限定されないが、ジクロロメタン、メタノール、およびそれらの混合物が挙げられる。特定の実施形態において、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（４−｛［（Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−２−クロロ−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの溶液を、ジクロロメタン中の約２．５〜約３．０モル当量のトリエチルアミン三フッ化水素塩と、周囲温度にて約１２〜２４時間、またはシリル基の除去が実質的に完了するまで接触させる。得られた溶液を、反応生成物を分離せず、メタノール中の約０．９〜約１．１モル当量の１，２−エタンジスルホン酸二水和物を加え、そしてこの混合物を約２５℃〜約３５℃にて約２〜約６時間加熱する。この反応の完了の際に、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、任意の従来の方法（例えば、沈殿、濃縮、遠心分離など）により、反応混合物から分離される。
【００４３】
必要に応じて、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、容量で約１５％〜約２５％（約２０％を含む）の水を含むイソプロパノール中で、塩を攪拌または懸濁（ｓｌｕｒｒｉｎｇ）させることによりさらに精製され得る。特定の実施形態において、１，２−エタンジスルホン酸塩１ｇ当たり約１０ｍＬのイソプロパノール／水混合物が使用される。
【００４４】
本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製するプロセスは、必要に応じて、特定の結晶性塩を優位に生産するための種結晶の使用を含む。例えば、高温で（すなわち、約２３０℃より高い温度で）融解する結晶性塩の種結晶を使用することにより、種結晶と本質的に同じ融点を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を調製し得る。そのような種結晶は、最初、結晶性塩を形成する場合に使用され得るか、または結晶性もしくは一部が結晶性の塩を再結晶化するために使用され得る。
【００４５】
典型的に、種結晶は、攪拌せず、冷却を適用しないゆっくりとした結晶化により、小規模で調製される。種結晶を得るための例として、典型的に、溶解を与えるのに十分な温度で不活性な希釈剤に結晶性塩を溶解させる。一般的に、種結晶を得る最初のプロセスにおいて、少量の、典型的に１０ｇ未満（５ｇ未満（例えば１ｇ未満）を含む）の結晶性塩が使用される。特定の実施形態において、希釈剤として約１２％〜約２０％の水（約１３％〜約１５％の水を含む）が、約６０℃〜約７０℃（例えば、約６０℃〜約６５℃）の範囲の温度にて使用される。この溶液を、室温に冷却させる。約１日〜約３日後、得られた結晶を濾過、または他の慣例的な方法により単離する。あるいは、以前の結晶性物質の調製から、種結晶が得られ得る。
【００４６】
種結晶を使用した再結晶化プロセスにおいて、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を、種結晶を得るプロセスの場合のように、不活性な希釈剤、典型的には１５％の水を含むメタノールに、約６０℃〜約６５℃の範囲の温度にて溶解させる。この溶液を種結晶が溶解しない温度、例えば、約３０℃〜約４０℃の範囲における温度に冷却させ、次いで、種結晶を加える。典型的に、この溶液中の結晶性塩の重量に対する種結晶の重量の比は、約１：５と約１：３５との間である。この溶液を結晶化が起こる温度、例えば約２０度に冷却し、約２時間〜約２４時間、攪拌する。得られた結晶を、慣例的な方法により単離する。大量の物質を調製するのに十分な種結晶を得るために、最初の再結晶化によって得られた結晶を、次の再結晶化工程のための種結晶として使用し、この再結晶化プロセスを連続的に実施し得る。再結晶化プロセスの工程が実施される特異的な温度は、希釈剤の性質および希釈剤中の結晶性塩の濃度に従い選択されることが理解される。さらに、冷却する代わりにエバポレーションかまたは抗溶媒を、結晶化を促進するために使用して、この再結晶化プロセスを実施し得る。
【００４７】
いくつかある利点の中で、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を形成することが、式Ｉの化合物を精製するために有用であることが見出された。一般的に、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、高速液体クロマトグラフィーにより決定される場合、９５％より高い純度；典型的に９８％より高い純度を有する。
【００４８】
本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、約２１５℃〜約２４０℃の範囲で吸熱熱流におけるピークを示す示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の記録によって明示されるように、非常に高い融点を特徴とする。結晶性塩の融点温度は、その結晶性塩が形成されたプロセスに従うことが認められた。攪拌せず、冷却を適用しないゆっくりとした結晶化によって形成される種結晶は、約２３０℃より高い融点を示す。そのような種結晶を用いた再結晶化を含むプロセスによって形成される結晶性塩は、典型的に、例えば図１に示されるように、約２３０℃〜約２４５℃の範囲における融点を示す。約２３０℃より高い融点を有する種結晶を用いずに形成された結晶性塩は、典型的に、例えば図２に示されるように、約２１５℃〜約２２９℃の範囲における融点を示す。したがって、特定の実施形態において、本発明は、実質的に図１または図２に示される記録に従う約２００℃より高い温度範囲にＤＳＣの記録を有する式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を提供する。
【００４９】
別の実施形態において、本発明の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、５．０±０．３および１５．０±０．３の２θの値において有意な回析ピークを有する粉末エックス線回析（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。図３に示されるような融点が高い種結晶からの再結晶化により調製した結晶化塩のＰＸＲＤスペクトルにおけるピーク位置と、図４に示されるようなそのような種結晶を使用せずに調製した塩のピーク位置との間に、微妙な違いが認められた。従って、別の実施形態において、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、ピーク位置が実質的に図３または図４に示されるＰＸＲＤスペクトルにおけるピーク位置と一致する粉末エックス線回析パターンを特徴とする。
【００５０】
別の実施形態において、式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、図５に図示されるように、約７０４ｃｍ−１、約７４８ｃｍ−１、約７６８ｃｍ−１、約８４１ｃｍ−１、約９００ｃｍ−１、約１０５５ｃｍ−１、約１１０４ｃｍ−１、約１１６６ｃｍ−１、約１２１８ｃｍ−１、約１２９４ｃｍ−１、約１４０８ｃｍ−１、約１５２２ｃｍ−１、約１６０９ｃｍ−１、約１６５５ｃｍ−１、および約１７０１ｃｍ−１において有意な吸収帯を示す赤外線（ＩＲ）吸収スペクトルを特徴とする。
【００５１】
式Ｉの化合物の結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩は、受容可能な適度な水準の吸湿性（すなわち、相対湿度４０％〜相対湿度７５％の湿度範囲において約２．５％未満重量増）を有する可逆的吸着／脱着プロフィールを有することが示された。
【００５２】
本発明の塩のこれらの特性について、以下の実施例においてさらに説明する。
【００５３】
（薬学的組成物および調合物）
式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩を、典型的には、薬学的組成物または調合物の形態で患者に投与する。そのような薬学的組成物を、投与の任意の受容可能な経路（これらに限定されないが、吸引、経口、鼻腔、局所（経皮を含む）を含む）、および投与の非経口形態によって患者に投与し得る。しかしながら、本発明の結晶性塩は調合されてしまうと結晶性形態ではなくなり得る（すなわち、この塩を適切なキャリアに溶解し得る）ということが当業者には理解される。
【００５４】
したがって、組成物の局面のうちの１つにおいて、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアもしくは賦形剤、およびビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む薬学的組成物に向けられる。必要に応じ、そのような薬学的組成物は、望ましい場合、他の治療剤および／または調合剤を含み得る。
【００５５】
本発明の薬学的組成物は、典型的に、治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む。典型的に、そのような薬学的組成物は、約０．０１〜約９５重量％；約０．０１〜約３０重量％；例えば、約０．０１〜約１０％の活性因子を含む。
【００５６】
任意の従来のキャリアもしくは賦形剤を、本発明の薬学的組成物に使用し得る。特定のキャリアもしくは賦形剤の選択、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を治療するために使用されている投与の形態、または医学的状態もしくは病状（ｄｉｓｅａｓｅ ｓｔａｔｅ）の種類に従う。この点で、特定の形態の投与に適した薬学的組成物の調製は、まさに薬学分野の当業者の範囲内である。さらに、そのような組成物の成分は、例えば、Ｓｉｇｍａ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １４５０８、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ ６３１７８から市販されている。さらなる例として、慣例的な調合技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００５７】
薬学的に受容可能なキャリアとなり得る物質の代表的な例としては、これらに限定されないが、次の：（１）糖（例えば、ラクトース、ブドウ糖、およびスクロース）；（２）デンプン（例えば、コーンスターチ、およびジャガイモデンプン）；（３）セルロース、およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロース）；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤（例えば、ココアバター、および座剤用ワックス；（９）油（例えば、ピーナツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油；（１０）グリコール（例えば、プロピレングリコール）；（１１）多価アルコール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール）；（１２）エステル（例えば、オレイン酸エチル、およびラウリン酸エチル）；（１３）寒天；（１４）緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウム、および水酸化アルミニウム）；（１５）アルギン酸；（１６）発熱因子非含有水（ｐｙｒｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ）；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝溶液；（２１）圧縮噴霧ガス（例えば、クロロフルオロカーボン、およびハイドロフルオロカーボン）；そして（２２）薬学的組成物に使用される他の無毒性適合性物質が挙げられる。
【００５８】
本発明の薬学的組成物は、典型的に、薬学的に受容可能なキャリアおよび１つ以上の任意の成分と本発明の塩とを混合するかまたは組み合わせて調製される。必要な場合、または望ましい場合は、得られた均質に混和した混合物を、慣例的な手順および装置を使用して形作られるか、あるいは錠剤、カプセル剤、丸剤、キャニスター、カートリッジ、ディペンサーなどに詰め込み得る。
【００５９】
１つの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、吸入投与に適している。吸入投与に適した薬学的組成物は、典型的に、エアゾール、または粉末の形態である。そのような組成物は、一般的に、周知の送達デバイス（例えば、ネブライザー吸入器、定量吸入器（ＭＤＩ）、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、または類似した送達デバイスを使用して投与される。
【００６０】
本発明の特異的な実施形態において、活性因子を含む薬学的組成物は、ネブライザー吸入器を使用して吸入により投与される。そのようなネブライザーデバイスは、典型的に、高速の気流を生成し、活性因子を含む薬学的組成物がミストとしてスプレーされ、患者の気道に運ばれる。したがって、ネブライザー吸入器中での使用のために調合される場合、典型的に、適切なキャリアにこの活性因子を溶解させて溶液を形成する。適切なネブライザーデバイスは、例えば、ＰＡＲＩ ＧｍｂＨ（Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎ）により市販されている。他のネブライザーデバイスとしては、Ｒｅｓｐｉｍａｔ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ならびに例えば、米国特許第６，１２３，０６８号および国際公開第９７／１２６８７号で開示されているものが挙げられる。
【００６１】
ネブライザー吸入器中での使用のための代表的な薬学的組成物は、約０．０５μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む水溶液を含む。１つの実施形態において、このネブライザー調合水は等張性である。１つの実施形態において、このネブライザー調合水は、約４〜約６の範囲におけるｐＨを有する。特定の実施形態において、このネブライザー調合水は、ｐＨが約５までのクエン酸緩衝液で緩衝される。別の特定の実施形態において、このネブライザー調合水は約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬの遊離塩基当量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルを含む。
【００６２】
本発明の別の特定の実施形態において、活性因子を含む薬学的組成物は、乾燥粉末吸入器を使用して、吸入により投与される。そのような乾燥粉末吸入器は、典型的に、吸息中に患者の気流中に分散される自由流れ粉末（ｆｒｅｅ−ｆｌｏｗｉｎｇ ｐｏｗｄｅｒ）として活性因子を投与する。自由流れ粉末を達成するために、活性因子は、典型的に、適切な賦形剤（例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、ブドウ糖、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ乳酸・グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）、またはそれらの組み合わせ）と共に調合される。典型的に、この活性因子は、微粉化され、適切なキャリアと組み合わせて呼吸に適した大きさの微粉粒の混合物を形成する。ここで「微粉粒」または「微粉形態」は、少なくとも約９０％の粒子が約１０μｍ未満の直径を有することを意味する。
【００６３】
乾燥粉末吸入器中での使用のための代表的な薬学的組成物は、約１μｍと約１００μｍとの間の粒径を有するラクトース、および式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の微粉粒子を含む。
【００６４】
そのような乾燥粉末調合物を、例えば、ラクトースを活性因子と組み合わせ、次いでその成分を乾式混合することにより作製し得る。あるいは、望ましい場合、この活性因子を、賦形剤を用いずに調合し得る。次いで、薬学的組成物を、典型的に、乾燥粉末ディスペンサー、または乾燥粉末送達デバイスと共に使用するための吸入カートリッジ、もしくはカプセル剤に詰める。
【００６５】
乾燥粉末吸入器送達デバイスの例としては、Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣ）（例えば、米国特許第５，０３５，２３７号を参照）；Ｄｉｓｋｕｓ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（例えば、米国特許第６，３７８，５１９号を参照）；Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）（例えば、米国特許第４，５２４，７６９号を参照）；Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（例えば、米国特許第４，３５３，３６５号を参照）、およびＨａｎｄｉｈａｌｅｒ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）が挙げられる。適切なＤＰＩデバイスのさらなる例には、米国特許第５，４１５，１６２号、米国特許第５，２３９，９９３号、および米国特許第５，７１５，８１０号に記載されており、これらの文献は、本明細書中で引用される。
【００６６】
本発明のさらに別の特異的な実施形態において、活性因子を含む薬学的組成物は、定量吸入器を使用して吸入により投与される。そのような定量吸入器は、典型的に、圧縮噴霧ガスを使用して、一定量の活性因子またはその薬学的に受容可能な塩を放出する。したがって、定量吸入器を使用して投与される薬学的組成物は、典型的に、液化された噴霧剤中に、活性因子の溶液または懸濁液を含む。クロロフルオロカーボン（例えば、ＣＣｌ３Ｆ）、およびハイドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）（例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４ａ）、および１，１，１，２，３，３，３−へプタフルオロ−ｎ−プロパン（ＨＦＡ ２２７））を含む任意の適した液化噴霧剤を使用し得る。オゾン層に影響を及ぼすクロロフルオロカーボンについての懸念から、ＨＦＡを含む調合物が、一般的に好ましい。ＨＦＡ調合物のさらなる任意の成分としては、共溶媒（例えば、エタノールまたはペンタン）および表面活性剤（例えば、ソルビタントリオレエイト（ｔｒｉｏｌｅａｔｅ）、オレイン酸、レシチン、およびグリセリン）が挙げられる。例えば、米国特許第５，２２５，１８３号、欧州特許第０７１７９８７Ａ２号、および国際公開９２／２２２８６号を参照されたい。
【００６７】
定量吸入器中における使用のための代表的な薬学的組成物は、約０．０１重量％〜約５重量％の式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物；約０重量％〜２０重量％のエタノール；そして約０重量％〜約５重量％の表面活性剤を含み、その残りがＨＦＡ噴霧剤である。
【００６８】
そのような組成物を、典型的に、冷却もしくは加圧ヒドロフルオロアルカンを、活性因子、エタノール（あれば）、および表面活性剤（あれば）を含む適切な容器に加えることにより調製する。懸濁液を調製するために、活性因子を微粉化し、次いで、噴霧剤と組み合わせる。次いで、この調合物をエアゾールキャニスターに詰めて、定量吸入デバイスの一部とする。特異的にＨＦＡ噴霧剤と共に使用するために開発された定量吸入器デバイスの例が、米国特許第６，００６，７４５号、および第６，１４３，２７７号に提供されている。あるいは、懸濁調合物を、活性因子の微粉粒子上の表面活性剤のコーティングをスプレー乾燥させることにより調製し得る。例えば、国際公開第９９／５３９０１号、および国際公開第００／６１１０８号を参照されたい。
【００６９】
呼吸に適した粒子を調製するプロセス、ならびに吸入投薬に適した調合物およびデバイスのさらなる例については、米国特許第６，２６８，５３３号、第５，９８３，９５６号、第５，８７４，０６３号、および６，２２１，３９８号、ならびに国際公開第９９／５５３１９号、および国際公開第００／３０６１４号を参照されたい。
【００７０】
別の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適している。経口投与に適した薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、ドロップ剤、カシェ剤、糖衣剤、粉剤、顆粒剤の形態であるか；あるいは溶液または水性もしくは非水性の液体中の懸濁液として；あるいは水中油もしくは油中水液体乳剤として；あるいはエリキシル剤またはシロップ剤として；などであり得、それぞれ活性成分として所定量の本発明の塩を含む。
【００７１】
固形の投薬形態（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤など）での経口投与に向けられる場合、本発明の薬学的組成物は、典型的に、活性成分として本発明の塩、および１種以上の薬学的に受容可能なキャリア（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）を含む。必要に応じ、または代替的に、そのような固形の投薬形態はまた：（１）充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸）；（２）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシア）；（３）湿潤剤（例えば、グリセリン）；（４）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、および／または炭酸ナトリウム）；（５）溶液緩染剤（例えば、パラフィン）；（６）吸収促進剤（例えば、第四アンモニウム化合物）；（７）加湿剤（例えば、セチルアルコール、および／またはグリセロールモノステアレート）；（８）吸収剤（例えば、カロリン、および／またはベントナイトクレー）；（９）潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはそれらの混合物）；（１０）着色剤；そして（１１）緩衝剤を含む。
【００７２】
離型剤、加湿剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤、ならびに酸化防止剤もまた、本発明の薬学的組成物中に存在し得る。薬学的に受容可能な酸化防止剤の例としては：（１）水溶性酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；（２）油溶性酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど）；そして（３）金属キレート因子（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸、など）が挙げられる。錠剤、カプセル剤、丸剤などのための被膜因子としては、腸溶コーティング用に使用される被膜因子（例えば、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸−メタクリル酸エステルコポリマー、セルソースアセテートトリメリテート（ｔｒｉｍｅｌｌｉｔａｔｅ）（ＣＡＴ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ），ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシナート（ＨＰＭＣＡＳ）など）が挙げられる。
【００７３】
望ましい場合、本発明の薬学的組成物は、例として、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース；あるいは他のポリマーマトリックス（例えば、ポリ乳酸（ＰＬＡ）もしくはポリ乳酸・グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）、リポソームおよび／または小球体を有するようなポリマーマトリクス）を使用して、活性成分のゆっくりとした、もしくは制御された放出を提供するように調合され得る。
【００７４】
さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて不透明化因子を含み得、胃腸管の特定の部分において、必要に応じ、遅延させる様式で、活性成分のみを、または活性成分を優先的に、放出するように調合され得る。使用し得る包埋組成物（ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）の例としては、高分子物質、およびワックスが挙げられる。この活性成分はまた、適切である場合、１種以上の上記賦形剤を有するマイクロカプセル形態であり得る。
【００７５】
経口投与に適した液体投薬形態としては、例として、薬学的に受容可能な乳剤、ミクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が挙げられる。そのような液体投与形態は、典型的に、活性成分および不活性な希釈剤（例えば、水または他の溶媒など）、可溶化剤、および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセリン、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタン脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物を含む。活性成分に加えて懸濁剤は、懸濁化剤（例えば、エトキシ化したイソステアリールアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステルなど）、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、ならびにこれらの混合物を含み得る。
【００７６】
経口投与に向けられる場合、本発明の薬学的組成物は、好ましくは、単位投薬形態にまとめられる。例えば、そのような単位投薬形態は、カプセル、錠剤、丸剤などであり得る。
【００７７】
本発明の塩はまた、公知の経皮送達システムおよび賦形剤を使用して、経皮投与され得る。例えば、本発明の化合物を、浸透促進剤（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｒ）（例えば、プロピレングリコール、モノラウリン酸ポリエチレングリコルム（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌｍ ｍｏｎｏｌａｕｒａｔｅ）、アザシクロアルカン−２−オンなど）と混合し、貼付剤もしくは類似の送達システムに組み込み得る。ゲル化剤、乳白剤、および緩衝剤を含むさらなる賦形剤を、望ましい場合、そのような経皮組成物中に使用し得る。
【００７８】
本発明の薬学的組成物はまた、他の治療因子を含んで式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物と同時投与し得る。例えば、本発明の薬学的組成物は、抗炎症剤（例えば、ステロイド抗炎症剤（コルチコステロイドなど）；および非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、ホスホジエステラーゼＩＶ阻害物質、抗感染剤（例えば、抗生物質または抗ウィルス薬）、抗ヒスタミン剤、β２アドレナリンレセプターアゴニスト、ムスカリンレセプターアンタゴニスト（すなわち、抗コリン作用薬）などから選択される１種以上の治療因子をさらに含み得る。他の治療因子は、薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物の形態で使用され得る。さらに、適切である場合、他の治療因子は、光学的に純粋な立体異性体として使用され得る。
【００７９】
望ましい場合、本発明の塩はまた、別の治療因子または本明細書中に記載される因子と組み合せて投与され得る。この実施形態において、成分が物理的に混合しているのではなく、同時にまたは連続的に、別個の組成物として投与される。例えば本発明の塩は、各治療因子に対し別個のコンパートメントを使用する吸入薬送達デバイス（例えば、ブリスターパック）を使用して、ステロイド抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド）と共に、吸入により同時にまたは連続的に投与され得る。あるいは、この組み合せは、多数の送達デバイス（すなわち各治療因子に対し１つの送達デバイス）から投与され得る。
【００８０】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的なβ２アドレナリンレセプターアゴニストとしては、これらに限定されないが、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）、サルブタモール、フォルモテロール、サルメファモール（ｓａｌｍｅｆａｍｏｌ）、フェノテロール、テルブタリン、アルブテロール、イソエタリン、メタプロテレノール、ビトルテロール、ピルブテロール、レバルブテロール（ｌｅｖａｌｂｕｔｅｒｏｌ）など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。本発明の化合物と組み合わせて使用し得る他のβ２アドレナリンレセプターアゴニストとしては、これらに限定されないが、３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、３−（−３−｛［７−（｛（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル｝アミノ）へプチル］オキシ｝プロピル）ベンゼンスルホンアミド、および２００２年８月２９日公開の国際公開第０２／０６６４２２号に開示されている関連化合物；３−［３−（４−｛［６−（［（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル］アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン、および２００２年９月１２日公開の国際公開第０２／０７０４９０号に開示されている関連化合物；３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、３−（４−｛［６−（｛（２Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）−ベンゼンスルホンアミド、３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ／Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（４−｛［６−（｛（２Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ／Ｓ）−２−［３−（ホルミルアミノ）−４−ヒドロキシフェニル］−２−ヒドロキシエチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド、および２００２年１０月３日公開の国際公開第０２／０７６９３３号に開示されている関連化合物；４−｛（１Ｒ）−２−［（６−｛２−［（２，６−ジクロロベンジル）オキシ］エトキシ｝ヘキシル）アミノ］−１−ヒドロキシエチル｝−２−（ヒドロキシメチル）フェノール、および２００３年３月２７日公開の国際公開第０３／０２４４３９号に開示されている関連化合物；Ｎ−｛２−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−フェニルエチルアミノ）フェニル］エチル｝−（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ホルムアミド−４−ヒドロキシフェニル）エチルアミン、および２００３年６月１０日発行の米国特許第６，５７６，７９３号Ｂ１に開示されている関連化合物；Ｎ−｛２−［４−（３−フェニル−４−メトキシフェニル）アミノフェニル］エチル｝−（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−キノリノン−５−イル）エチルアミン、および２００３年１１月２５日発行の米国特許第６，６５３，３２３号Ｂ２に開示されている関連化合物；ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。特定の実施形態において、β２アドレナリンレセプターアゴニストは、Ｎ−｛２−［４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−フェニルエチルアミノ）フェニル］エチル｝−（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ホルムアミド−４−ヒドロキシフェニル）エチルアミンの結晶性モノヒドロクロリド塩である。使用される場合、β２アドレナリンレセプターアゴニストは、治療有効量で薬学的組成物中に存在する。典型的に、このβ２アドレナリンレセプターアゴニストは、１用量あたり約０．０５μｇ〜約５００μｇを提供するのに十分な量で存在する。
【００８１】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的なステロイド抗炎症剤としては、これらに限定されないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、フルチカソンプロピオナート（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、６，９−ジフルオロ−１７−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１−ヒドロキシ−１６−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６，９−ジフルオロ−１１−ヒドロキシ−１６−メチル−３−オキソ−１７−プロピオニルオキシ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７−カルボチオ酸Ｓ−（２−オキソテトラヒドロフラン−３Ｓ−イル）エステル、ベクロメタゾンエステル（例えば、１７−プロピオン酸エステル、または１７，２１−ジプロピオン酸エステル）、ブデソニド、フルニソリド、モメタソンエステル（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ ｅｓｔｅｒ）（例えば、フロン酸エステル）、トリアムシノロンアセトニド、ロフレポニド（ｒｏｆｌｅｐｏｎｉｄｅ）、シクルソニド（ｃｉｃｌｅｓｏｎｉｄｅ）、ブチキソコルトプロピオナート（ｂｕｔｉｘｏｃｏｒｔ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ＲＰＲ−１０６５４１、ＳＴ−１２６など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。特定の実施形態において、ステロイド抗炎症剤は、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物である。使用される場合、ステロイド抗炎症剤は、治療有効量で薬学的組成物中に存在する。典型的に、ステロイド抗炎症剤は、１用量あたり約０．０５μｇ〜約５００μｇを提供するのに十分な量で存在する。
【００８２】
他の適切な組み合わせとしては、例として、他の抗炎症剤、例えば、ＮＳＡＩＤ（クロモグリク酸ナトリウム；ネドクロミルナトリウム（ｎｅｄｏｃｒｏｍｉｌ ｓｏｄｉｕｍ）；ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害物質（例えば、テオフィリン、ＰＤＥ４阻害物質、または混合ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害物質）；ロイコトリエンアンタゴニスト（例えば、モンテルカスト）；ロイコトリエン合成の阻害物質；ｉＮＯＳ阻害物質；プロテアーゼ阻害物質（例えば、トリプターゼ阻害物質、およびエラスターゼ阻害物質）；β−２インテグリンアンタゴニスト、およびアデノシンレセプターアゴニストもしくはアンタゴニスト（例えば、アデノシン２ａアゴニスト）；サイトカインアンタゴニスト（例えば、ケモカインアンタゴニスト（インターロイキン抗体（ＩＬ抗体）、特にＩＬ−４療法、ＩＬ−１３療法、またはそれらの組み合わせなど））；あるいはサイトカイン合成の阻害物質が挙げられる。
【００８３】
例えば、本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的なホスホジエステラーゼ−４（ＰＤＥ４）阻害物質、または混合ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害物質としては、これらに限定されないが、シス４−シアノ−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸、２−カルボメトキシ−４−シアノ−４−（３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシフェニル）シクロヘキサン−１−オン；シス−［４−シアノ−４−（３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシフェニル）シクロヘキサン−１−オール］；シス−４−シアノ−４−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシフェニル］シクロヘキサン−１−カルボン酸など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。他の代表的なＰＤＥ４または混合ＰＤＥ４／ＰＤＥ３阻害物質としては、ＡＷＤ−１２−２８１（ｅｌｂｉｏｎ）；ＮＣＳ−６１３（ＩＮＳＥＲＭ）；Ｄ−４４１８（Ｃｈｉｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）；ＣＩ−１０１８、またはＰＤ−１６８７８７（Ｐｆｉｚｅｒ）；国際公開第９９／１６７６６号で開示されているベンゾジオキソール化合物（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ）；Ｋ−３４（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ）；Ｖ−１１２９４Ａ（Ｎａｐｐ）；ｒｏｆｌｕｍｉｌａｓｔ（Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ）；国際公開第９９／４７５０５号で開示されているフタラジノン（ｐｔｈａｌａｚｉｎｏｎｅ）化合物（Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ）；Ｐｕｍａｆｅｎｔｒｉｎｅ（Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ、現在はＡｌｔａｎａ）；ａｒｏｆｙｌｌｉｎｅ（Ａｌｍｉｒａｌｌ−Ｐｒｏｄｅｓｆａｒｍａ）；ＶＭ５５４／ＵＭ５６５（Ｖｅｒｎａｌｉｓ）；Ｔ−４４０（Ｔａｎａｂｅ Ｓｅｉｙａｋｕ）；およびＴ２５８５（Ｔａｎａｂｅ Ｓｅｉｙａｋｕ）が挙げられる。
【００８４】
本発明の化合物と組み合わせて、そして本発明の化合物に加えて、使用し得る代表的なムスカリンアンタゴニスト（すなわち、抗コリン作用薬）としては、これらに限定されないが、アトロピン、硫酸アトロピン、酸化アトロピン、硝酸メチルアトロピン、臭化水素酸ホマトロピン、臭化水素酸ヒオスシアミン（ｄ，ｌ）、臭化水素酸スコポラミン、臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウム、臭化チオトロピウム（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ）、メタンテリン、臭化プロパンテリン、臭化メチルアニソトロピン、臭化クリジニウム、ｃｏｐｙｒｒｏｌａｔｅ（Ｒｏｂｉｎｕｌ）、ヨウ化イソプロパミド、臭化メペンゾラート、塩化トリジヘキセチル（Ｐａｔｈｉｌｏｎｅ）、ヘキソシクリウム硫酸メチル（ｈｅｘｏｃｙｃｌｉｕｍ ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ）、塩酸シクロペントレート、トロピカミド、塩酸トリヘキシフェニジル、ピレンゼピン、テレンゼピン（ｔｅｌｅｎｚｅｐｉｎｅ）、ＡＦ−ＤＸ １１６、およびメトクトラミン（ｍｅｔｈｏｃｔｒａｍｉｎｅ）など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩；もしくは、塩として列挙された化合物の代わりに、それらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。
【００８５】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る代表的な抗ヒスタミン剤（すなわち、Ｈ１−レセプターアンタゴニスト）としては、これらに限定されないが、エタノールアミン（例えば、マレイン酸カルビノキサミン、フマル酸クレマスチン、塩酸ジフェニルヒドラミン、およびジメンヒドリナート；エチレンジアミン（例えば、ピリラミンアムリエート（ｐｙｒｉｌａｍｉｎｅ ａｍｌｅａｔｅ））、塩酸トリペレナミン（ｔｒｉｐｅｌｅｎｎａｍｉｎｅ）、クエン酸トリペレンアミン；アルキルアミン（例えば、クロルフェニラミン、およびアクリバスチン（ａｃｒｉｖａｓｔｉｎｅ）；ピペラジン（例えば、塩酸ヒドロキシジン、ヒドロキシジンパモエート、塩酸シクリジン、乳酸シクリジン、塩酸メクリジン、および塩酸セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）；ピペリジン（例えば、アステミゾール、塩酸レボカバスチン（ｌｅｖｏｃａｂａｓｔｉｎｅ）、ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）もしくはそのデスカルボエトキシアナログ（ｄｅｓｃａｒｂｏｅｔｈｏｘｙ ａｎａｌｏｇｕｅ）、テルフェナジン、および塩酸フェキソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）；塩酸アゼラスチン；など、またはそれらの薬学的に受容可能な塩；もしくは、塩として列挙された化合物の代わりとして、それらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。
【００８６】
本発明の化合物と組み合わせて投与される他の治療因子に適した用量は、約０．０５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日の範囲である。
【００８７】
次の調合物は、本発明の代表的な薬学的組成物を示している：
（調合物実施例Ａ）
吸入による投与のための乾燥粉末を次のように調製する：
【００８８】
【化４】
代表的な手順：本発明の化合物を微粉化し、次いでラクトースと混和する。次いで、この混和した混合物を、ゼラチン吸入カートリッジに詰める。このカートリッジの内容物を、粉末吸入器を使用して投与する。
【００８９】
（調合物実施例Ｂ）
乾燥粉末吸入デバイス中における使用のための乾燥粉末調合物を次のように調製する：
（代表的な手順）本発明の微粉化した塩とラクトースとの調合容積比（ｂｕｌｋ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ）が１：２００である薬学的組成物を調製する。この組成物を１用量当たり約１０μｇと約１００μｇとの間の本発明の化合物を送達し得る乾燥粉末吸入デバイスに詰め込む。
【００９０】
（調合物実施例Ｃ）
定量吸入器での吸入による投与のための乾燥粉末を次のように調製する：
代表的な手順：５重量％の本発明の塩、および０．１重量％のレシチンを含む懸濁液を、０．２ｇのレシチンを２００ｍＬの脱塩水に溶解させて生成した溶液に、１０μｍ未満の平均粒径を有する微粉粒子として１０ｇの本発明の化合物を分散させることにより調製する。この懸濁液を噴霧乾燥（ｓｐｒａｙ ｄｒｙ）させ、得られた物質を１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子に微粉化する。この粒子を加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンと共にカートリッジに詰める。
【００９１】
（調合物実施例Ｄ）
定量吸入器中における使用のための薬学的組成物を次のように調製する：
代表的な手順：５％の本発明の塩、０．５％のレシチン、および０．５％のトレハロースを含む懸濁液を、０．５ｇのトレハロース、および０．５ｇのレシチンを１００ｍＬの脱塩水に溶解させて生成したコロイド溶液に、１０μｍ未満の平均粒径を有する微粉粒子として５ｇの活性成分を分散させることにより調製する。この懸濁液を噴霧乾燥させ、得られた物質を１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子に微粉化する。この粒子を加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンと共にキャニスターに詰める。
【００９２】
（調合物実施例Ｅ）
ネブライザー吸入器中における使用のための薬学的組成物を次のように調製する：
代表的な手順：ネブライザー中における使用のためのエアゾール調合水を、クエン酸を用いて酸性化した１ｍＬの０．９％塩化ナトリム溶液に、０．５ｍｇの本発明の塩を溶解させることにより調製する。この混合物を攪拌し、活性成分が溶解するまで超音波処理する。この溶液のｐＨを、ＮａＯＨのゆっくりとした添加により約５の値に調節する。
【００９３】
（調合物実施例Ｆ）
経口投与のための硬ゼラチンカプセル剤を、次のように調製する：
【００９４】
【化５】
代表的な手順：これらの成分を完全に混和させ、次いで、硬カプセルに詰める（１カプセル当たり４６０ｍｇの組成物）。
【００９５】
（調合物実施例Ｇ）
経口投与のための懸濁液を次のように調製する：
【００９６】
【化６】
代表的な手順：これらの成分を混合し、１０ｍＬの懸濁液につき１００ｍｇの活性成分を含む懸濁液を生成する。
【００９７】
（調合物実施例Ｈ）
注射可能な調合物を次のように調製する：
【００９８】
【化７】
代表的な手順：上記成分を混和させ、０．５Ｎ ＨＣｌ、または０．５Ｎ ＮａＯＨを使用して、ｐＨを４±０．５に調節する。
【００９９】
（効用）
式Ｉの化合物は、β２アドレナリンレセプターアゴニスト、およびムスカリンレセプターアンタゴニスト活性の両方を有するため、本発明の式Ｉの化合物の１，２−エタンジスルホン酸塩は、β２アドレナリンレセプターもしくはムスカリンレセプターが介在する医学的状態（すなわち、β２アドレナリンレセプターアゴニストもしくはムスカリンレセプターアンタゴニストを用いた処置により改善される医学的状態）を処置するための治療因子として有用であると期待される。そのような医学的状態としては、例として、肺障害、または可逆性気道閉塞と関連する疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患（例えば、慢性的で息苦しい（ｗｈｅｅｚｙ）気管支炎、および肺気腫）、喘息、肺線維症、アレルギー性鼻炎、鼻漏など））を含む疾患が挙げられる。処置し得る他の状態としては、早期分娩、鬱病、鬱血性心不全、皮膚病（例えば、炎症性、アレルギー性、乾癬性、および増殖性皮膚疾患）、ペプシンの酸性を低下させることが望ましい状態（例えば、消化性および胃潰瘍）、および筋肉消耗性疾患が挙げられる。
【０１００】
したがって、１つの実施形態において本発明は、肺障害を処置するための方法に向けられ、この方法は、処置を必要とする患者に治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。肺障害を処置するために使用される場合、本発明の塩は、典型的に、１日当たり複数回分の用量、１回で１日分の用量、または１回で１週間分の用量で、吸入により投与される。一般的に、肺障害を処置するための用量は、約１０μｇ／日〜約２００μｇ／日の範囲である。
【０１０１】
吸入により投与される場合、本発明の化合物は、典型的に気管支拡張を提供する効果を有する。したがって、その方法の別の局面において、本発明は、気管支拡張を必要としている患者に気管支拡張を提供する方法に向けられ、この方法は、気管支拡張を生じる量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を患者に投与する工程を包含する。一般的に、気管支拡張を提供するための用量は、約１０μｇ／日〜約２００μｇ／日の範囲である。
【０１０２】
１つの実施形態において、本発明は、慢性閉塞性肺疾患または喘息を処置する方法に向けられ、この方法は、処置を必要とする患者に治療有効量のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を投与する工程を包含する。ＣＯＰＤまたは喘息を処置するために使用される場合、本発明の塩は、典型的に、１日当たり複数回分の用量、または１回で１日分の用量で、吸入により投与される。一般的に、ＣＯＰＤまたは喘息を処置するための用量は、約１０μｇ／日〜約２００μｇ／日の範囲である。本明細書中で使用される場合、ＣＯＰＤは、慢性閉塞性気管支炎および肺気腫を含む（例えば、Ｂａｒｎｅｓ，Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０００：３４３：２６９−７８を参照）。
【０１０３】
肺障害を処置するために使用される場合、本発明の塩は、必要に応じ、他の治療因子と組み合せて投与される。したがって、特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物および方法は、治療有効量のステロイド抗炎症剤をさらに含む。本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩の特性および効用は、当該技術分野で周知の種々のインビトロおよびインビボアッセイを使用して明らかにされ得る。例えば代表的なアッセイは、次の実施例においてさらに詳細に記載されている。
【実施例】
【０１０４】
次の（調製）および（実施例）は、本発明の具体的な実施例を説明するために提供される。しかしながら、これらの具体的な実施例は、他に示さない限り、決して本発明の範囲を限定することを意図していない。
【０１０５】
次の略語は、他に示さない限り次の意味を有し、本明細書中で使用され規定されていない任意の他の略語は、それらの標準的な意味を有する：
ＡＣ アデニリルシクラーゼ
Ａｃｈ アセチルコリン
ＡＴＣＣ アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ｃＡＭＰ ３’−５’環状アデノシン一リン酸
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣
ｃＭ５ クローンチンパンジーのＭ５レセプター
ＤＣＭ ジクロロメタン（すなわち、塩化メチレン）
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ｄＰＢＳ ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水
ＤＭＥＭ ダルベッコ改変イーグル培地
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
Ｅｍａｘ 最大効果
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＦＢＳ 胎仔ウシ血清
ＦＬＩＰＲ 蛍光定量的イメージングプレートリーダー
Ｇｌｙ グリシン
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＳＳ ハンクス緩衝食塩水
ＨＥＫ ヒト胚腎臓細胞
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ｈＭ１ クローンヒトＭ１レセプター
ｈＭ２ クローンヒトＭ２レセプター
ｈＭ３ クローンヒトＭ３レセプター
ｈＭ４ クローンヒトＭ４レセプター
ｈＭ５ クローンヒトＭ５レセプター
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＩＢＭＸ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン
％Ｅｆｆ ％効果
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ｒｐｍ １分当たりの回転数
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
Ｔｒｉｓ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
他に断りのない限り、試薬、出発物質、および溶媒は、供給業者（例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入され、さらなる精製なしに使用された。
【０１０６】
下記の実施例において、ＨＰＬＣ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔが提供する３．５ミクロンの粒径を有するＺｏｒｂａｘ Ｂｏｎｕｓ ＲＰ２．１×５０ｍｍのカラム（Ｃ１４カラム）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）１１００シリーズ機器を使用して実施した。検出は、２１４ｎｍにおけるＵＶ吸収度による。ＨＰＬＣ１０〜７０データを、１０％〜７０％のＢ０．５ｍＬ／分の流速で６分間にわたり入手した。流動相Ａは、２％−９８％−０．１％のＡＣＮ−Ｈ２Ｏ−ＴＦＡ：そして流動相Ｂは、９０％−１０％−０．１％のＡＣＮ−Ｈ２Ｏ−ＴＦＡであった。上記流動相ＡおよびＢを使用して、ＨＰＬＣ５−３５のデータ、およびＨＰＬＣ１０−９０のデータを、５分間の勾配で入手した。
【０１０７】
液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）データを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のＡＰＩ−１５０ＥＸ型の機器を使用して入手した。ＬＣＭＳ１０−９０のデータを、１０％〜９０％の流動相Ｂを用い、５分の勾配で入手した。
【０１０８】
小規模な精製を、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＡＰＩ １５０ＥＸ Ｐｒｅｐ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍを使用して入手した。流動相は、Ａ：水＋０．０５容量（ｖ／ｖ）％ＴＦＡ；そしてＢ：アセトニトリル＋０．０５容量（ｖ／ｖ）％ＴＦＡであった。アレイ（典型的に約３〜５０ｍｇの回収サンプルサイズ）に対し、次の条件が使用された：流速２０ｍＬ／分；勾配１５分、および５ミクロンの粒子を有する２０ｍｍ×５０ｍｍのＰｒｉｓｍ ＲＰカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ−Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｅｔｅ，ＰＡ）。より大規模な精製（典型的に１００ｍｇより大きなの粗サンプル）に対しては、次の条件を使用した：流速６０ｍＬ／分；勾配３０分、および１０ミクロンの粒子を有する４１．４ｍｍ×２５０ｍｍのＭｉｃｒｏｓｏｒｂ ＢＤＳカラム（Ｖａｒｉａｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）。
【０１０９】
タングステンハロゲン光源、および５８９ｎｍフィルターを用いたＪａｓｃｏ Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ（Ｐ−１０１０型）を使用して、２０℃にてキラル化合物（［α］２０Ｄと示す）についての比旋光度を測定した。テスト化合物のサンプルは、典型的に、１ｍｇ／ｍＬの水にて測定された。
【０１１０】
（調製１）
（４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
トルエン（９ｍＬ）とメタノール（１ｍＬ）との混合物中の４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸（１．００８ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液に、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（ヘキサン中２．０Ｍ、３．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）を、０℃にて滴下した。次いで、この反応混合物を室温に温め、１６時間、攪拌した。過剰な（トリメチルシリル）ジアゾメタンを、反応混合物の鮮明な黄色が消えるまで、酢酸を加えることによってクエンチした。次いで、この混合物を真空下で濃縮することにより、オフホワイトの固体として表題の化合物を得、これをさらなる精製なしに使用した。
【０１１１】
（調製２）
（４−アクリロイルアミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
調製２の粗生成物に、ジクロロメタン（１０ｍＬ、０．５Ｍ）およびトリエチルアミン（２．１ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（８１２μＬ、１０ｍｍｏｌ）を攪拌しながら滴下した。２時間後、この反応物をメタノール（約２ｍＬ）を０℃にて加えることによりクエンチし、得られた混合物を室温にて１５分間攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。ジクロロメタン（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）をこの残留物に加え、この混合物を十分に混合した。この層を分離し、水層をジクロロメタン（２０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を合わせて、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空下で除去することにより、褐色の泡沫状固体として表題の化合物を得、これをさらなる精製なしに使用した。
【０１１２】
（調製３）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸ピペリジン−４−イルエステル）
ビフェニル−２−イソシアネート（９７．５ｇ、５２１ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシ−１−ベンジルピペリジン（１０５ｇ、５４９ｍｍｏｌ）（共にＡｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩから市販されている）を、１２時間、７０℃にて一緒に加熱し、その間、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−ベンジルピペリジン−４−イルエステルの形成をＬＣＭＳによりモニターした。次いで、この反応混合物を５０℃に冷却し、エタノール（１Ｌ）を加え、次いで、６Ｍ 塩酸（１９１ｍＬ）をゆっくりと加えた。次いで、この反応混合物を周囲温度に冷却し、蟻酸アンモニウム（９８．５ｇ、１．５６ｍｏｌ）を加え、窒素ガスを２０分間溶液に通して活発に泡立てた。次いで、パラジウム（活性炭担持１０重量％（乾燥ベース））（２０ｇ）を加えた。この反応混合物を、１２時間、４０℃にて加熱し、次いで、セライトパッドに通して濾過した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、１Ｍ 塩酸（４０ｍＬ）を粗残留物に加えた。次いで、水酸化ナトリウム（１０Ｎ）を加えてｐＨを１２に調節した。水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）を用いて抽出し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、次いで、溶媒を減圧下で除去することにより、表題の化合物（１５５ｇ、１００％）を得た。ＨＰＬＣ（１０−７０）Ｒｔ＝２．５２；ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］Ｃ１８Ｈ２０Ｎ２Ｏ２についての計算値２９７．１５；測定値２９７．３。
【０１１３】
（調製４）
（４−｛３−［４−（ビフェニル−２−イルカルバモイルオキシ）ピペリジン−１−イル］プロピオニルアミノ｝−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
調製２からの粗生成物に、調製３の生成物（１．３３ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（２２．５ｍＬ）とメタノール（２．５ｍＬ）との混合物を加えた。この混合物を５０℃にて１６時間、攪拌しながら加熱し、次いで溶媒を、真空下で除去した。残留物をクロマトグラフィー法（シリカゲル；ＥｔＯＡｃ）で分離することにより、オフホワイトの泡沫状固体として、表題の化合物（０．８２ｇ；Ｒｆ＝０．４、３工程にわたる収率２９％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ５６６．４（Ｍ＋Ｈ、Ｃ３０Ｈ３２ＣｌＮ３Ｏ６についての期待値５６５．２０）。
【０１１４】
（調製５）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ヒドロキシメチル−５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ＴＨＦ（４．５ｍＬ）とメタノール（０．５ｍＬ）との混合物中の調製４の生成物（０．８２ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてホウ化水素リチウム（３２ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、室温に温めさせ、４１時間、攪拌した。次いで、この反応物を、さらなる泡立ちが観察されなくなるまで、１Ｎ塩酸水を０℃にて加えることによりクエンチし、この混合物を１０分間、攪拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物をアセトニトリル（約２ｍＬ）に溶解させた。この溶液を、ｐｒｅｐ−ＲＰ−ＨＰＬＣ（勾配：０．０５％のＴＦＡを有する水中に２〜５０％のアセトニトリル）により精製した。適切な分画を回収して合わせ、凍結乾燥することにより、トリフルオロ酢酸塩として表題の化合物を得た。この塩を酢酸イソプロピル（１０ｍＬ）、および１Ｎ 水酸化ナトリウム水（１０ｍＬ）を用いて処理し、有機層を回収し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を真空下で除去することにより、白色泡沫状固体として表題の化合物（１６１ｍｇ、収率２１％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ５３８．４（Ｍ＋Ｈ、Ｃ２９Ｈ３２ＣｌＮ３Ｏ５についての期待値５３７．２０）。
【０１１５】
（調製６）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ホルミル−５−メトキシフェニル−カルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の調製５の生成物（１６１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチルスルホキシド（２１３μＬ、３．０ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（２６１μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を−２０℃に冷却し、三酸化硫黄ピリジン錯体（２３８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。３０分後、この反応混合物を水（約３ｍＬ）を加えることによりクエンチした。層を分離して、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空下で除去することにより、薄黄色の固体として表題の化合物を得た。ＭＳ ｍ／ｚ５３６．３（Ｍ＋Ｈ、Ｃ２９Ｈ３０ＣｌＮ３Ｏ５についての期待値５３５．１９）。
【０１１６】
（調製７）
（８−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン）
（（ａ）８−アセトキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン）
８−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキシド（１６０．０ｇ、１．０ｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩから市販されている）、および無水酢酸（８００ｍＬ、８．４ｍｏｌ）を、３時間、１００℃にて加熱し、次いで、氷中で冷却した。この生成物を、ブフナー漏斗で回収し、無水酢酸（２×１００ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させることにより、固体として８−アセトキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン（１４４ｇ）を得た。
【０１１７】
（（ｂ）５−アセチル−８−ヒドロキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン）
１，２−ジクロロエタン（２８０ｍＬ）中の塩化アルミニウム（８５．７ｇ、６４０ｍｍｏｌ）のスラリーを氷中で冷却し、工程（ａ）からの生成物（５６．８ｇ、２８０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温に温め、次いで、８５℃にて加熱した。３０分後、塩化アセチル（１．５ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を加え、この混合物をさらに６０分間、加熱した。次いで、この反応混合物を冷却し、０℃にてよく攪拌しながら１Ｎ 塩酸（３Ｌ）に加えた。２時間攪拌後、固体をブフナー漏斗で回収し、水（３×２５０ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させた。いくつかのバッチから分離させた粗生成物（１３５ｇ）を合わせ、６時間、ジクロロメタン（４Ｌ）を用いて粉砕した。得られた固体をブフナー漏斗で回収し、減圧下で乾燥させることにより、表題の化合物（１２１ｇ）を得た。
【０１１８】
（（ｃ）５−アセチル−８−ベンジルオキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン）
工程（ｂ）からの生成物（３７．７ｇ、１８６ｍｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）、および炭酸カリウム（３４．５ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を加え、続いて臭化ベンジル（３１．８ｇ、１８６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２．２５時間、室温にて攪拌し、次いで、飽和塩化ナトリウム（３．５Ｌ）に０℃にて注ぎ入れ、１時間、攪拌した。この生成物を回収し、１時間、ブフナー漏斗で乾燥させ、得られた固体をジクロロメタン（２Ｌ）に溶解させ、この混合物を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をセライトパッドに通して濾過し、次いで、ジクロロメタン（５×２００ｍＬ）を用いて洗浄した。次いで、合わせた濾液を濃縮乾固し、得られた固体を２時間、エーテル（５００ｍＬ）を用いて粉砕した。この生成物をブフナー漏斗で回収し、エーテル（２×２５０ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させ、粉末として表題の化合物（４４ｇ）を得た。
【０１１９】
（（ｄ）８−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン）
工程（ｃ）からの生成物（２０．０ｇ、６８．２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解させ、０℃にて冷却した。三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（１０．４ｍＬ、８２．０ｍｍｏｌ）をシリンジによって加え、この混合物を室温に温めることにより、濃厚な懸濁液を得た。この懸濁液を４５℃（油浴）にて加熱し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の臭素（１１．５ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）の溶液を、４０分間にわたり加えた。この混合物をさらに１５分間、４５℃にて保ち、次いで、室温に冷却した。この混合物を減圧下で濃縮し、次いで１時間、１０％炭酸ナトリウム水（２００ｍＬ）を用いて粉砕した。固体をブフナー漏斗で回収し、水（４×１００ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させた。２処理分の生成物を精製用に合わせた。この粗生成物（５２ｇ）を、クロロホルム（５００ｍＬ）中の５０％メタノールを用いて１時間、粉砕した。この生成物をブフナー漏斗で回収し、クロロホルム（２×５０ｍＬ）およびメタノール（２×５０ｍＬ）中の５０％メタノールを用いて洗浄した。固体を減圧下で乾燥させることにより、粉末として表題の化合物（３４．１ｇ）を得た。
【０１２０】
（調製８）
（８−ベンゾイルオキシ−５−［（Ｒ）−２−ブロモ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ（ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｙｌｏｘｙ））エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
（（ａ）８−ベンジルオキシ−５−（（Ｒ）−２−ブロモ−１−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン）
（Ｒ）−（＋）−α，α−ジフェニルプロリノール（３０．０ｇ、１１７ｍｍｏｌ）とトリメチルボロキシン（１１．１ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）とをトルエン（３００ｍＬ）中で合わせ、３０分間、室温にて攪拌した。この混合物を、１５０℃の油浴中に置き、液体を蒸留により取り除いた。トルエンを２０ｍＬのアリコートに加え、４時間、蒸留を続けた。総量で３００ｍＬのトルエンを加えた。次いで、この混合物を室温に冷却した。５００μＬのアリコートをエバポレートして乾固し、計量し（２４６ｍｇ）、この触媒濃度を１．８Ｍと決定した。
【０１２１】
８−ベンジルオキシ５−（２−ブロモアセチル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（９０．０ｇ、２４３ｍｍｏｌ）を、窒素下に置き、テトラヒドロフラン（９００ｍＬ）を加え、続いて上記の触媒（トルエン中１．８Ｍ、１５ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を氷／イソプロパノール浴中で、−１０±５℃に冷却した。ボラン（ＴＨＦ中１．０Ｍ、２９４ｍＬ、２９４ｍｍｏｌ）を、４時間にわたり加えた。次いでこの反応物を、さらに４５分間、−１０℃にて攪拌し、次いで、メタノール（２５０ｍＬ）をゆっくりと加えた。この混合物を真空下で濃縮し、残留物を沸騰アセトニトリル（１．３Ｌ）に溶解させ、熱いうちに濾過し、次いで、室温に冷却した。結晶を濾過し、アセトニトリルを用いて洗浄し、真空下で乾燥させることにより、表題の化合物を得た（７２．５ｇ、１９６ｍｍｏｌ、収率８１％、９５％ｅｅ、ＨＰＬＣによる純度９５％）。
【０１２２】
（（ｂ）８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−ブロモ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
工程（ｂ）の生成物（７０．２ｇ、１８９ｍｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２６０ｍＬ）を加え、窒素下にてこの混合物を氷浴中で冷却した。２，６−ルチジン（４０．３ｇ、３７６ｍｍｏｌ）を、５分間にわたり加え、次いで、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（９９．８ｇ、３７８ｍｍｏｌ）を、２０℃未満の温度を維持しながらゆっくりと加えた。この混合物を４５分間、室温に温めさせた。メタノール（４５ｍＬ）を混合物に１０分にわたって滴下し、この混合物を、酢酸エチル／クロロヘキサン（１：１、５００ｍＬ）と水／ブライン（１：１、５００ｍＬ）との間で分割した。有機物（ｏｒｇａｎｉｃｓ）をさらに２度、水／ブライン（１：１、各回５００ｍＬ）を用いて洗浄した。合わせた有機物を減圧下でエバポレートすることにより、薄黄色の油状体を得た。シクロヘキサン（４００ｍＬ）を、２度に分けてこの油状体に加え、濃厚な白色のスラリーが生成するまで蒸留を続けた。シクロヘキサン（３００ｍＬ）をスラリーに加え、得られた白色結晶を濾過し、シクロヘキサン（３００ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させ、表題の化合物（７５．４ｇ、１５１ｍｍｏｌ、収率８０％、９８．６％ｅｅ）を得た。
【０１２３】
（調製９Ａ）
（８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−（Ｎ−ベンジルアミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
ＤＭＳＯ（１．７ｍＬ）中の調製８の生成物（１．００ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）とベンジルアミン（４９３μＬ、４．５1ｍｍｏｌ）との攪拌溶液を、１０５℃にて４時間、加熱した。この反応混合物を冷却させ、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、有機層を飽和塩化アンモニア水溶液（５ｍＬ）および１Ｎ 水酸化ナトリウム（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。この粗残留物を、カラムクロマトグラフィー（５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製し、表題の化合物（７００ｍｇ、６７％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］Ｃ３１Ｈ３８Ｎ２Ｏ３Ｓｉについての計算値５１５．２７；測定値５１５．５。
【０１２４】
（調製９Ｂ）
（８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−（Ｎ−ベンジルアミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン）
５００ｍＬの三ッ口丸底フラスコに、８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−ブロモ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（４３ｇ、０．１２４ｍｏｌ、キラル純度約９５％）、１−メチル−２−ピロリジノン（２１０ｍＬ）、およびベンジルアミン（２８．３ｇ、０．３７ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を窒素を用いて洗い流し、次いで、９０℃にて６時間、攪拌した。次いで、この混合物を室温に冷却し、水（３００ｍＬ）および酢酸エチル（３００ｍＬ）を加えた。層を分離し、有機層を水（２００ｍＬ）、水と飽和塩化ナトリウム水溶液との１：１混合物（２００ｍＬ）、および水（２００ｍＬ）を用いて洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮することにより、橙色の油状体として表題の化合物を得た。
【０１２５】
この橙色の油状体にヘプタン（２００ｍＬ）および酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、得られた混合物を６５℃に加熱することにより、透明な溶液を得た。この溶液を室温に冷却し、一晩（約１６時間）おいた時点で沈殿物を生成した。この沈殿物を濾過により回収し、立体化学的には不純な表題の化合物（８．８５ｇ、７９．６％ｅｅ）を得た。濾液を減圧下で濃縮することにより、表題の化合物（３８．６ｇ、９９．４％）を得た。この物質を先の物質（１９．２ｇ、９９．５％ｅｅ）のバッチと合わせ、そしてヘプタン（２５０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えた。この混合物を８０℃に加熱し（濁りを帯びた〜透明な溶液）、次いで、室温に冷却し、一晩おいた。得られた沈殿物を濾過により回収し、白色固体（３６．８ｇ、９８．４％ｅｅ、化学的純度９９．９％）として表題の化合物を得た。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をヘプタン（１００ｍＬ）に溶解させた。得られた固体を回収することにより、黄褐色の固体（２４ｇ、キラル純度１００％、化学的純度９５％）として表題の化合物を得た。
【０１２６】
（調製１０Ａ）
（５−［（Ｒ）−２−アミノ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−８−ヒドロキシー１Ｈ−キノリン−２−オン）
エタノール（６２ｍＬ）中の調製９Ａの生成物（３．１６ｇ、６．１５ｍｍｏｌ）とパラジウム（活性炭担持１０重量％（乾燥ベース））（１．５８ｇ）との攪拌溶液を、２４時間、水素雰囲気下に置いた。この反応混合物をセライトに通して濾過し、メタノール（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、次いで、溶媒を減圧下で除去することにより、固体として表題の化合物（１．５２ｇ、４．５５ｍｍｏｌ、７４％）を得た。
【０１２７】
（調製１０Ｂ）
（５−［（Ｒ）−２−アミノ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−８−ヒドロキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン酢酸塩）
８−ベンジルオキシ−５−［（Ｒ）−２−（Ｎ−ベンジルアミノ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）エチル］−１Ｈ−キノリン−２−オン（１００ｇ、１９４ｍｍｏｌ）および酢酸（１７．５ｍＬ、２９１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１Ｌ）に溶解させた。この透明な溶液を窒素を用いてパージし、次いで、炭素担持水酸化パラジウム（２０ｇ、２０重量％のＰｄ（乾燥ベース）、湿気（約５０％の水分））を加えた。室温にて６時間、水素ガスを攪拌溶液に通じて泡立て、その間に、濃厚なスラリーを生じさせた。次いで、この反応混合物を窒素を用いてパージし、メタノール（１Ｌ）を加えた。約３０分間、得られた混合物を（生成物を溶解させるために）攪拌し、次いで、この混合物をセライトパッドに通して濾過した。濾液を約５００ｍＬの容量まで減圧下で濃縮し、得られたスラリーにエタノール（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を再度、減圧下で約５００ｍＬの容量まで濃縮し、得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させることにより、黄白色の固体として表題の化合物を得た（６５ｇ、収率８５％、純度＞９８％）。
【０１２８】
（調製１１）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（４−｛［（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−２−クロロー５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）とメタノール（０．５ｍＬ）との混合物中の調製６からの生成物に、調製１０Ａの生成物（１２４．１ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、室温にて１．５時間、攪拌した。トリアセトキシホウ化水素ナトリウム（１９０．７ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、室温にて１５時間、攪拌した。この反応物を、水（約０．２ｍＬ）を加えることによりクエンチし、この混合物を真空下で濃縮することにより、表題の化合物を得、これをさらなる精製なしに使用した。ＭＳ ｍ／ｚ８５４．５（Ｍ＋Ｈ、Ｃ４６Ｈ５６ＣｌＮ５Ｏ７Ｓｉについての期待値８５３．３６）。
【０１２９】
（調製１２）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
ジクロロメタン（１．０ｍＬ、０．３Ｍ）中の調製１１の生成物の懸濁液に、トリエチルアミン三フッ化水素塩（２４５μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、室温にて４５時間、攪拌し、次いで、この混合物を真空下で濃縮した。残留物を、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）と、アセトニトリル／水（１：１、０．１％ＴＦＡを含む、０．６ｍＬ）と、ＴＦＡ（０．３ｍＬ）と、アセトニトリル（約１ｍＬ）との混合物に溶解させ、この混合物を、ｐｒｅｐ−ＲＰ−ＨＰＬＣ（勾配：０．０５％ＴＦＡを含む水中のアセトニトリル２〜５０％）によって精製した。適切な分画を回収して合わせ、凍結乾燥させることにより、オフホワイトの固体として、表題の化合物のジトリフルオロ酢酸塩（１００ｍｇ、収率３４％、ＨＰＬＣによる純度９８．７％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ７４０．５（Ｍ＋Ｈ、Ｃ４０Ｈ４２ＣｌＮ５Ｏ７についての期待値７３９．２８）。
【０１３０】
（実施例１）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
エタノール（０．２ｍＬ）中の１，２−エタンジスルホン酸二水和物（３．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液を、イソプロパノールとジクロロメタン（１ｍＬ）との６４：１ｖ／ｖ混合物中の調製１２の生成物（１４．３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。得られた溶液を、４５℃〜５０℃にて約３０分間、加熱した。次いで、この混合物をゆっくりと室温に冷却し、室温になった時点で溶液は僅かに濁った。この溶液を、一晩、窒素の緩流下で周囲温度においた。得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させることにより、白色結晶性固体として表題の化合物（１３ｍｇ、収率７２％）を得た。
【０１３１】
（実施例２）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル（２６．８ｍｇ、０．０３６２ｍｍｏｌ）の溶液を、エタノール（５．３６ｍＬ）中に調製し、室温にて、完全な溶解が得られるまで（５分）攪拌した。エタノール（０．２ｍＬ）中の１，２エタンジスルホン酸二水和物（８．２ｍｇ、０．０３６２ｍｍｏｌ）の溶液を、約１分かけて最初の溶液にゆっくりと加えた。５分間、得られた懸濁液を攪拌し、次いで、窒素下で濾過により分離した。得られた沈殿物を乾燥させることにより、白色固体として表題の化合物（２８．５ｍｇ、収率８５％）を得た。
【０１３２】
（実施例３）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル（５ｇ、６．７５ｍｍｏｌ、純度＞９９％）を、イソプロパノール（１００ｍＬ）に溶解させ、水（２０ｍＬ）に溶解させたエタンジスルホン酸二水和物（１．５２５ｍｇ、６．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られたスラリーを、室温にて１時間攪拌し、次いで約３０℃にて一晩攪拌した。表題の化合物（６．０ｇ）を、白色粉末として分離した。この生成物を、３０℃にて４８時間、イソプロパノール中の２０％の水（１００ｍＬ）中で加熱した。室温に冷却後、得られた沈殿物を濾過により単離し、２時間、風乾させることにより、表題の化合物（５．４ｇ）を得た。
【０１３３】
（調製１３）
（４−アクリロイルアミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
オーバーヘッドスターラー、温度調節および追加漏斗（ａｄｄｉｔｉｏｎ ｆｕｎｎｅｌ）を備えた１リットルの３ツ口丸底フラスコに、４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル（４４．２ｇ、２００ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５００ｍｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（１０４．５ｍＬ、６００ｍｍｏｌ）を加えた。この得られた混合物を、室温にて成分が溶解するまで攪拌し、次いでこの混合物を０℃に冷却した。次いで、内部の反応混合物温度を１０℃未満に維持しながら、塩化アクリロイル（１６．２５ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）を滴下した。添加の合計時間は約３０分であった。次いでこの反応混合物を、約２時間かけて０℃〜室温にゆっくりと温めた。次いで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）、およびジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、この混合物を１５分間攪拌し、次いで層を分離した。ジクロロメタン層を１Ｍ 塩酸（２００ｍＬ）を用いて洗浄し、次いで、減圧下で元の容量の約３分の１に濃縮し、濃厚なスラリーを得た。このスラリーを濾過し、濾塊をジクロロメタン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させることにより、オフホワイトの固体として表題の化合物（３６ｇ、収率６７％、ＨＰＬＣによる純度＞９８％）を得た。
（調製１４）
（４−｛３−［４−（ビフェニル−２−イルカルバモイルオキシ）ピペリジン−１−イル］プロピオニルアミノ｝−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸メチル）
オーバーヘッドスターラー、温度調節および還流凝縮器を備えた１リットルの３ツ口丸底フラスコに、ビフェニル−２−イルカルバミン酸ピペリジン−４−イルエステル（３６．３ｇ、１２２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５００ｍＬ）、およびイソプロパノール（１００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、調製１０からの生成物（３０ｇ、１１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌を、成分が溶解するまで室温で続け、次いでこの混合物を、還流下（５０℃〜５５℃）で１８時間、加熱した。次いで、この反応混合物を室温に冷却し、エタノール（２００ｍＬ）を加えた。この混合物を減圧下で約１５０ｍＬの容量に濃縮し、濃厚なスラリーを得た。このスラリーを濾過し、濾塊をエタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させることにより、白色固体として表題の化合物（５８ｇ、収率９２％、ＨＰＬＣによる純度９９．５％）を得た。
【０１３４】
（調製１５）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ヒドロキシメチル−５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
２リットルの丸底フラスコに、調製１４からの生成物（４０ｇ、７０．８ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（４００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いでこのフラスコを、窒素で５分間パージした。次いでこの混合物を０℃（内部温度）に冷却し、ＴＨＦ（１０６ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）中の水素化リチウムアルミニウムの１Ｍ溶液を、内部の反応混合物温度を１０℃未満に維持しながら、追加漏斗を通じて滴下した。合計添加時間は、約４０分であった。次いでこの反応混合物を、０℃にて１時間、攪拌し、次いで内部の反応混合物温度を１５℃未満に維持しながら、１Ｍ水酸化ナトリウム（２００ｍＬ）を加えた。次いで、層を分離し、ＴＨＦ層を飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、硫化ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮することにより、白色固体として表題の化合物（３８ｇ、収率１００％、ＨＰＬＣによる純度９４％）を得た。
【０１３５】
（調製１６）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−ホルミル−５−メトキシフェニル−カルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
１リットルの丸底フラスコに、調製１５からの生成物（２８ｇ、５２ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、活性酸化マンガン（ＩＶ）（４５ｇ、５２０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、窒素下で室温にて１２時間、攪拌し、次いで、セライトパッドに通して濾過した。次いで、この混合物を減圧下で濃縮し、残留物を真空下で一晩乾燥させることにより、黄色固体として表題の化合物（２６ｇ、収率９３％、ＨＰＬＣによる純度約９３％）を得た。
【０１３６】
（調製１７）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（４−｛［（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−２−クロロ−５−メトキシ−フェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステル）
５００ｍＬの丸底フラスコに、調製１６からの生成物（６ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を成分が溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、調製７の生成物（６ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）および乾燥メタノール（５０ｍＬ）を加えた。この混合物を窒素下で室温にて２時間、攪拌し（透明な黄色から橙色の溶液）、次いで、この混合物を０℃〜５℃に冷却した。固体のナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（７．２ｇ、３４ｍｍｏｌ）を１０分間かけて少しずつ加え、次いで、この反応混合物を、約２時間かけて、０℃〜室温にゆっくりと温めた。次いで、この混合物を０℃に冷却し、１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）およびジクロロメタン（１５０ｍＬ）を加えた。この混合物を十分に攪拌し、次いで、層を分離した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、濾過し、硫化ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮することにより、黄色固体として表題の化合物（１０．１ｇ、収率１００％、ＨＰＬＣによる純度８７％）を得た。
【０１３７】
（実施例４）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩）
５０ｍＬの丸底フラスコに、調製１７からの生成物（２．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、成分を溶解するまで室温にて攪拌し、次いで、三フッ化水素トリエチルアミン（１．２ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、２５℃にて２０時間、攪拌した。次いで、メタノール（１０ｍＬ）中の１，２−エタンジスルホン酸二水和物（０．５６ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、この混合物を３０℃にて２時間攪拌した時点で、濃厚な白色スラリーが形成された。このスラリーをゆっくりと濾過し、濾塊をメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、２時間、風乾し、次いで、真空下で一晩乾燥させることにより、微細な白色粉末として表題の化合物（１．５ｇ、ＨＰＬＣによる純度＞９８％）を得た。
【０１３８】
（実施例５）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩の精製）
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（８０ｇ）に、イソプロパノール（８００ｍＬ）中の容量で２０％の水の溶液を加えた。得られたスラリーを室温にて一晩おき、次いで濾過することにより、改善した結晶性および純度を有する表題の化合物（７４ｇ）を得た。
【０１３９】
（調製１８）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶）
（工程(ａ)）
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（１００ｍｇ）を、メタノール（２０ｍＬ）中の１３％の水に、約６０℃にて溶解させた。得られた透明溶液を、密閉容器中で室温に冷却させた。４８時間後、得られた板様結晶を、濾過により分離した。
【０１４０】
（工程（ｂ））
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（１．０ｇ）を、メタノール（１００ｍＬ）中の１５％の水に、６０〜６５℃にて溶解させた。この透明な攪拌溶液を、３０℃に冷却させ、次いで、工程（ａ）の結晶性生成物（４．２ｍｇ）を加えた。この溶液を２０℃に冷却し、２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過により分離し、空気中で１時間、乾燥させることにより、表題の化合物（６８０ｍｇ）を得た。
【０１４１】
（工程（ｃ））
工程（ｂ）の手順を、工程（ａ）の生成物の代わりに工程（ｂ）の生成物（２０ｍｇ）を用いて繰り返し、表題の化合物（６９０ｍｇ）を得た。
【０１４２】
（工程（ｄ））
実施例４のとおり調製したビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩（１０ｇ）を、メタノール（１Ｌ）中の１５％の水に、６０〜６５℃にて溶解させた。この透明な攪拌溶液を、３０℃に冷却させ、次いで、工程（ｃ）の結晶性生成物（４．２ｍｇ）を加えた。この溶液を２０℃に冷却し、１８時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過により分離し、空気中で２時間、乾燥させることにより、表題の化合物（５．５ｇ）を得た。
【０１４３】
（実施例６）
（ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステル１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を使用した再結晶化）
１２Ｌの丸底フラスコに、実施例５からの生成物（６０ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）、水（０．９Ｌ）、およびメタノール（５．１Ｌ）を加えた。得られた混合物を、成分が溶解するまで攪拌しながら２５℃から６１〜６５℃に加熱し、さらに２０分間、６０〜６５℃にて攪拌した。この混合物を３０℃に冷却させ、次いで、調製１８の生成物（２ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２０℃にゆっくりと冷却し、得られたスラリーを、３０℃にてさらに２時間、攪拌した。この生成物をメタノール（５００ｍＬ）と共に濾過し、２時間空気中で乾燥させ、次いで真空中で２５〜３０℃にて１８時間、乾燥させることにより、表題の化合物（４３ｇ、収率７２％、純度９９．２％）を得た。
【０１４４】
（実施例７）
（熱分析）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｎａｌｙｓｔコントローラーを備えたＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＱ−１０型モジュールを使用して実施した。データを回収し、ＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＴｈｅｒｍａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを使用して分析した。約１ｍｇのサンプルを正確に計量して蓋付きのアルミパンに入れた。このサンプルを、周囲温度から約３００℃まで５℃／分の一次加熱傾斜（ｌｉｎｅａｒ ｈｅａｔｉｎｇ ｒａｍｐ）を使用して評価した。使用中、ＤＳＣセルを、乾燥窒素を用いてパージした。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＤＳＣの記録を図１に、実施例２のサンプルについての代表的なＤＳＣの記録を図２に示す。
【０１４５】
熱重量分析（ＴＧＡ）を、高分解能を備えたＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＱ−５０型モジュールを使用して実施した。データを回収し、ＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＴｈｅｒｍａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを使用して分析した。約１０ｍｇのサンプルをプラチナパンに置き、周囲温度〜３００℃の高分解能加熱速度（ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｈｅａｔｉｎｇ ｒａｔｅ）でスキャンした。使用中、天秤および加熱炉チャンバーを、窒素フローでパージした。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＴＧＡの記録を図１に示す。
【０１４６】
ＤＳＣの記録は、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩が、それぞれ約２３９℃、および約２１９℃の融点を有して熱安定性に優れており、約２００℃未満で熱分解しないことを示している。
【０１４７】
（実施例８）
（粉末エックス線回析）
粉末エックス線回析パターンを、Ｓｉ（Ｌｉ）半導体検出器を備え、１．５４２Å（４５ｋＶ、４０ｍＡ）におけるＣｕのＫα線を使用したＴｈｅｒｍｏ ＡＲＬ Ｘ−Ｒａｙ ＤｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒのＸ’ＴＲＡ型（Ｔｈｅｒｍｏ ＡＲＬ ＳＡ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて得た。この分析を、典型的に、２θ角で２〜３０°の範囲にかけて１点当たり０．０３°の刻み幅を用い、２°／分のスキャン速度で実施した。入手したままかまたは微細な粉末に磨り潰したサンプルを、機器の分析用のトップローディングカップに合わせて設計された特別注文の小容量インサートに優しく詰め込んだ。機器を週に一度、±０．０２°の２θ角内のシリコン金属基準に対応させる。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＰＸＲＤパターンを図３に示し、実施例２のサンプルについてのパターンを図４に示す。
【０１４８】
（実施例９）
（赤外分析法）
赤外（ＩＲ）吸収スペクトルを、Ｎｉｃｏｌｅｔ減衰全反射（ＡＴＲ）サンプルホルダーを備えたＡｖａｔａｒ ３６０ ＦＴ−ＩＲ分光計を使用して、４０００〜６７５ｃｍ−１の周波数範囲にわたり決定した。実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについての代表的なＩＲ吸収スペクトルは、図５に示されるように、７０４±１、７４８±１、７６８±１、８４１±１、９００±１、１０５５±１、１１０４±１、１１６６±１、１２１８±１、１２９４±１、１４０８±１、１５２２±１、１６０９±１、１６５５±１、および１７０１±１において有意な吸収帯を有する。
【０１４９】
（実施例１０）
（力学的水分吸着アセスメント）
力学的水分吸着（ＤＭＳ：ｄｙｎａｍｉｃ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｓｏｒｐｔｉｏｎ）アセスメント（水分吸着−脱着プロフィールとしても知られる）を、ＶＴＩ大気マイクロバランス（ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ ｍｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ）、ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ ３３０１６）を使用して、手で砕いた調製１８のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについて実施した。約１０ｍｇのサンプルサイズを使用し、湿度を分析の開始時に周囲値に設定した。典型的なＤＭＳ分析は、３つのスキャンからなる：周囲〜相対湿度（ＲＨ）２％、２％ＲＨ〜９０％ＲＨ、９０％ＲＨ〜５％ＲＨ（スキャン速度：５％ＲＨ／ステップ）。質量を２分毎に測定し、サンプルの質量が５連続点の間、０．０１％以内に安定したときに、ＲＨを次の値（＋／−５％ＲＨ）に変更した。代表的なＤＭＳの記録を、図６に示す。
【０１５０】
このＤＭＳの記録は、本発明の１，２−エタンジスルホン酸塩が、中程度（＜９％）の吸湿性と共に、可逆的な吸着／脱着プロフィールを有することを示している。この塩は、４０％ＲＨ〜７５％ＲＨの湿度範囲において２．５％未満の増量がある。この可逆的な湿気吸着／脱着プロフィールは、本発明の結晶性塩が、受容可能な吸湿性を有し、潮解性ではないことを示している。
【０１５１】
（実施例１１）
（元素分析、および対イオン比率）
実施例６のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルの、炭素、水素、窒素、および硫黄の次の元素百分比を、Ｆｌａｓｈ ＥＡ １１１２ Ｅｌｅｍｅｎｔａｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＣＥ Ｅｌａｎｔｅｃｈ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）を使用した燃焼分析により決定した：炭素５２．９５％、水素５．４３％、窒素６．８３％、および硫黄６．８７％。硫黄の測定重量百分比から計算した結晶性サンプル中の１，２−エタンジスルホン酸の重量百分比は、２０．４％で理論上の重量百分比２０．４％と等しく、対イオン比率１：１が得られた。
【０１５２】
（調製Ａ）
（細胞培養およびヒトβ１、β２またはβ３アドレナリンレセプターを発現する細胞からの細胞膜の調製）
クローニングしたヒトβ１、β２、またはβ３アドレナリンレセプターをそれぞれ安定的に発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を、５００μｇ／ｍＬのジェネテシンの存在下で１０％ＦＢＳを用いたＨａｍｓ Ｆ−１２培地において、ほぼコンフルエンシーまで培養した。細胞単層をＰＢＳ中の２ｍＭ ＥＤＴＡで浮かせた。細胞を１，０００ｒｐｍにおける遠心分離によりペレットにし、この細胞ペレットを、−８０℃にて冷凍保存するか、または使用の直前に、細胞膜を調製した。β１およびβ２レセプターを発現する細胞膜の調製に関し、細胞ペレットを溶解緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＨＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、４℃にてｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ぴったりと適合したＤｏｕｎｃｅガラス製ホモジナイザー（３０ストローク）を氷上で使用して均質化した。さらなるプロテアーゼ感受性のβ３レセプターを発現する細胞膜に関しては、細胞ペレットを、「Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ Ｔａｂｌｅｔｓ ｗｉｔｈ ２ｍＭ ＥＤＴＡ」の錠剤（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１６９７４９８、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を緩衝液５０ｍＬにつき１つで補った溶解緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４）中で均質化した。このホモジェネートを２０，０００×ｇにて遠心分離し、得られたペレットを、上記のような再懸濁および遠心分離により、溶解緩衝液を用いて１度、洗浄した。次いでこの最終ペレットを、氷冷の結合アッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に再懸濁させた。この細胞膜懸濁液のタンパク質濃度を、Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９５１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９３，２６５；およびＢｒａｄｆｏｒｄ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７６，７２，２４８−５４に記載される方法により決定した。全ての細胞膜を、−８０℃にて分割して保存するか、または直ちに使用した。
【０１５３】
（調製Ｂ）
（細胞培養およびヒトＭ１、Ｍ２、Ｍ３およびＭ４ムスカリンレセプターを発現する細胞からの細胞膜の調製）
クローニングしたヒトｈＭ１、ｈＭ２、ｈＭ３、およびｈＭ４ムスカリンレセプターサブタイプをそれぞれ安定的に発現するＣＨＯ細胞株を、１０％ＦＢＳ、および２５０μｇ／ｍＬのジェネテシンで補ったＨａｍｓ Ｆ−１２培地において、ほぼコンフルエンシーまで培養した。これらの細胞を、ＣＯ２５％、３７℃のインキュベータ中で増殖させ、ｄＰＢＳ中の２ｍＭ ＥＤＴＡで浮かせた。細胞を６５０×ｇにおける５分の遠心分離により回収し、細胞ペレットを、−８０℃にて冷凍保存するか、または使用の直前に、細胞膜を調製した。細胞膜の調製に関し、細胞ペレットを溶解緩衝液に再懸濁させ、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ−２１００組織粉砕器（ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｒｕｐｔｅｒ）（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ ＡＧ；２０秒×２バースト）を用いて均質化した。粗細胞膜を、４０，０００×ｇで４℃にて１５分間、遠心分離した。次いでこの細胞膜ペレットを、再懸濁緩衝液を用いて再懸濁させ、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ組織粉砕器を用いて再度均質化した。この細胞膜懸濁液のタンパク質濃度を、Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９５１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９３，２６５に記載される方法により決定した。全ての細胞膜を、分割して−８０℃にて保存するか、または直ちに使用した。調製されたｈＭ５レセプター細胞膜のアリコートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから直接購入し、使用まで−８０℃にて保存した。
【０１５４】
（アッセイテスト手順Ａ）
（ヒトβ１、β２およびβ３アドレナリンレセプターについての放射性リガンド結合アッセイ）
結合アッセイを、９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて、アッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ２５℃にてｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ，０．２％ ＢＳＡ）中のヒトβ１、β２、またはβ３アドレナリンレセプターを含む１０〜１５μｇの細胞膜タンパク質を用い、総アッセイ容量１００μＬで実施した。放射性リガンドのＫｄ値の決定のための飽和結合調査を、β１およびβ２レセプターについては［３Ｈ］−ジヒドロアルプレノロール（ＮＥＴ−７２０、１００ Ｃｉ/ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を、そして［１２５Ｉ］−（−）−ヨードシアノピンドロール（ＮＥＸ−１８９、２２０ Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を、０．０１ｎＭ〜２０ｎＭの範囲の１０もしくは１１の異なる濃度で使用して実施した。テスト化合物のＫｉ値の決定のための置換アッセイを、［３Ｈ］−ジヒドロアルプレノロールを１ｎＭにて、そして［１２５Ｉ］−（−）−ヨードシアノピンドロールを０．５ｎＭにて用い、１０ｐＭ〜１０μＭの範囲における１０もしくは１１の異なる濃度のテスト化合物について実施した。非特異的な結合を、１０μＭのプロプラノロールの存在下で決定した。分析物を３７℃にて１時間インキュベートし、次いで、β１およびβ２レセプターについてはＧＦ／Ｂ、β３レセプターについてはＧＦ／Ｃガラス繊維フィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）（０．３％のポリエチレンイミンに予浸しておく）を用いた急速濾過により、結合反応を終わらせた。フィルタープレートを濾過緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ４℃にてｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ）を用いて３回洗浄し、結合していない放射能を除去した。次いでこのプレートを乾燥させ、５０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０液体シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）を加え、プレートをＰａｃｋａｒｄ Ｔｏｐｃｏｕｎｔ液体シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で計数した。結合データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、ワンサイト・コンペティション（ｏｎｅ−ｓｉｔｅ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）についての３パラメーターモデルを使用して、非線形回帰分析により分析した。曲線の最小値（ｃｕｒｖｅ ｍｉｎｉｍｕｍ）を、１０μＭのプロプラノロールの存在下で決定された非特異的な結合についての値に固定した。テスト化合物についてのＫｉ値を、観測されたＩＣ５０値、および放射性リガンドのＫｄ値から、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ａｎｄ Ｐｒｕｓｏｆｆ ＷＨ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９７３，２２，２３，３０９９−１０８）を使用して計算した。
【０１５５】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターに対するより高い結合親和力を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ヒトβ２アドレナリンレセプターに対し、１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１５６】
（アッセイテスト手順Ｂ）
（ムスカリンレセプターについての放射性リガンド結合アッセイ）
クローニングしたヒトムスカリンレセプターについての放射性リガンド結合アッセイを、総アッセイ容量１００μＬで、９６ウェルマイクロタイタープレートにて実施した。ｈＭ１、ｈＭ２、ｈＭ３、ｈＭ４、またはｈＭ５のいずれかのムスカリンサブタイプを安定的に発現するＣＨＯ細胞の細胞膜を、類似したシグナル（ｃｐｍ）を得るために、次の特異的なターゲットタンパク質濃度（μｇ／ウェル）までアッセイ緩衝液で希釈した：ｈＭ１については１０μｇ、ｈＭ２については１０〜１５μｇ、ｈＭ３については１０〜２０μｇ、ｈＭ４については１０〜２０μｇ、そしてｈＭ５については１０〜１２μｇ。これらの細胞膜を、アッセイプレートへの添加前に、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ組織粉砕器を使用して（１０秒）簡単に均質化した。放射性リガンドのＫＤ値を決定するための飽和結合調査を、０．００１ｎＭ〜２０ｎＭの範囲の濃度でＬ−［Ｎ−メチル−３Ｈ］スコポラミンメチルクロリド（［３Ｈ］−ＮＭＳ）（ＴＲＫ６６６、８４．０ Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を使用して実施した。テスト化合物のＫｉ値の決定のための置換アッセイを、１ｎＭの［３Ｈ］−ＮＭＳ、および１１の異なるテスト化合物濃度を用いて実施した。これらのテスト化合物を、初めに希釈緩衝液に溶解して４００μＭの濃度にし、次いで、連続的に希釈緩衝液で５×に希釈して、最終濃度を１０ｐＭ〜１００μＭの範囲にした。アッセイプレートへの添加順序および容量は次のとおりである：２５μＬの放射性リガンド、２５μＬの希釈したテスト化合物、そして５０μＬの細胞膜。アッセイプレートを、３７℃にて６０分間、インキュベートした。結合反応を、１％ＢＳＡ中で予め処理したＧＦ／Ｂガラス繊維フィルタープレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を用いた急速濾過により終わらせた。フィルタープレートを、洗浄緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ）で３回すすぎ、結合していない放射能を除去した。次いで、これらのプレートを風乾させ、５０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０液体シンチレーション液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を各ウェルに加えた。次いでこれらのプレートを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｔｏｐｃｏｕｎｔ液体シンチレーションカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）で計数した。結合データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、ワンサイト・コンペティションモデルを使用して、非線形回帰分析により分析した。テスト化合物についてのＫｉ値を、観測されたＩＣ５０値、および放射性リガンドのＫＤ値から、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ Ｙ；Ｐｒｕｓｏｆｆ ＷＨ．（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２２（２３）：３０９９−１０８）を使用して計算した。Ｋｉ値をｐＫｉ値に変換し、幾何平均および９５％信頼区間を決定した。次いで、これらの要約統計を、データ報告のためにＫｉ値に変換し直した。
【０１５７】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターに対するより高い結合親和力を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ヒトＭ２およびＭ３ムスカリンレセプターに対し、１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１５８】
（アッセイテスト手順Ｃ）
（非相同的にヒトβ１、β２またはβ３アドレナリンレセプターを発現するＣＨＯ細胞株における細胞全体ｃＡＭＰフラッシュアッセイ）
ｃＡＭＰアッセイを、製造業者の説明に従い、［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰを用いたＦｌａｓｈｐｌａｔｅ Ａｄｅｎｙｌｙｌ Ｃｙｃｌａｓｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ＮＥＮ ＳＭＰ００４，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、放射線免疫アッセイ形式で実施した。βレセプターアゴニストの効力（ＥＣ５０）の決定のために、クローニングしたヒトβ１、β２またはβ３アドレナリンレセプターを安定的に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞株を、１０％ＦＢＳ、およびジェネテシン（２５０μｇ／ｍＬ）で補ったＨａｍｓ Ｆ−１２培地において、ほぼコンフルエンシーまで培養した。細胞をＰＢＳですすぎ、２ｍＭ ＥＤＴＡまたはトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．０５％トリプシン／０．５３ｍＭ ＥＤＴＡ）を含むｄＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ＣａＣｌ２およびＭｇＣｌ２を含まない）で分離した。Ｃｏｕｌｔｅｒ細胞カウンターで細胞を計数後、細胞を１，０００ｒｐｍにおける遠心分離によってペレットにし、予め室温に温めたＩＢＭＸ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｋｉｔ）を含む刺激緩衝液に再懸濁させ、１．６×１０６〜２．８×１０６細胞／ｍＬの濃度にした。１ウェル当たり約６０，０００〜８０，０００細胞を、このアッセイで使用した。テスト化合物（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）をＢｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ−２０００中の０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で希釈し、１００μＭ〜１ｐＭの範囲の１１の異なる濃度にてテストした。反応物を３７℃にて１０分間インキュベートし、［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰ（ＮＥＮ ＳＭＰ００４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を含む１００μＬの冷たい検出緩衝液を加えることにより止めた。生成されたｃＡＭＰの量（ｐｍｏｌ／ウェル）を、サンプルについて観測された数、および製造業者の使用者マニュアルに記載されるｃＡＭＰ標準に基づき計算した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、シグモイド方程式（ｓｉｇｍｏｉｄａｌ ｅｑｕａｔｉｏｎ）を用いて、非線形回帰分析により分析した。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ａｎｄ Ｐｒｕｓｏｆｆ ＷＨ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９７３，２２，２３：３０９９−１０８）を使用して、ＥＣ５０値を計算した。
【０１５９】
このアッセイにおいて、より低いＥＣ５０値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ヒトβ２アドレナリンレセプターに対し、１０ｎＭ未満のＥＣ５０値を有することが見出された。
【０１６０】
（アッセイテスト手順Ｄ）
（ムスカリンレセプターサブタイプについての拮抗作用の機能アッセイ）
（Ａ．アゴニストが媒介する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合の遮断）
テスト化合物の機能的効力を、ｈＭ２レセプターを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞に結合するオキソトレモリンが刺激する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を遮断する化合物の能力を計測することにより決定した。
使用のときに、冷凍細胞膜を解凍し、次いで、最終ターゲット組織濃度１ウェル当たり５〜１０μｇのタンパク質を用いてアッセイ緩衝液中で希釈した。この細胞膜を、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ−２１００組織粉砕器を使用して簡単に均質化し、次いで、アッセイプレートに加えた。
【０１６１】
アゴニストオキソトレモリンによる［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合の刺激に対するＥＣ９０値（９０％の最大応答に対する有効濃度）をそれぞれの実験において決定した。
【０１６２】
オキソトレモリンが刺激する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を阻害するテスト化合物の能力を決定するために、次の：［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．４ｎＭ）を有する２５μＬのアッセイ緩衝液、２５μＬのオキソトレモリン（ＥＣ９０）およびＧＤＰ（３μＭ）、２５μＬの希釈したテスト化合物、ならびにｈＭ２レセプターを発現する２５μＬのＣＨＯ細胞の細胞膜を、９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。次いで、アッセイプレートを３７℃にて６０分間インキュベートした。これらのアッセイプレートを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ９６ウェルハーベスターを使用し、１％ＢＳＡで予め処理したＧＦ／Ｂフィルターを用いて濾過した。これらのプレートを、３回×３秒間、氷冷の洗浄緩衝液を用いてすすぎ、次いで、風乾または真空乾燥させた。Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０シンチレーション液（５０μＬ）を、各ウェルに加え、各プレートを密封し、放射能をＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で算出した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、非線形回帰分析であるワンサイト・コンペティションを使用して分析した。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を、Ｋｉ値を計算するために使用し、ＫＤおよび［Ｌ］のリガンド濃度として、それぞれアッセイにおけるテスト化合物およびオキソトレモリン濃度についての濃度−応答曲線のＩＣ５０値を使用した。
【０１６３】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ｈＭ２レセプターを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞におけるオキソトレモリンが刺激する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合の遮断に対して、約１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１６４】
（Ｂ．ＦＬＩＰＲアッセイによるアゴニストが媒介するカルシウム放出の遮断）
Ｇｑタンパク質に結合するムスカリンレセプターサブタイプ（Ｍ１、Ｍ３、およびＭ５レセプター）は、アゴニストがレセプターに結合すると、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）経路を活性化する。その結果、活性化されたＰＬＣはホスファチジル（ｐｈｏｓｐｈａｔｙｌ）イノシトール二リン酸（ＰＩＰ２）を、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）とホスファチジル−１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）とに加水分解し、次いで、細胞内貯蔵（すなわち、小胞体および筋小胞体）からカルシウム放出を生じさせる。ＦＬＩＰＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）アッセイは、遊離カルシウムが結合するときに蛍光を発するカルシウム感受性色素（Ｆｌｕｏ−４ＡＭ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を使用することにより、この細胞内カルシウムの増加を利用する（ｃａｐｉｔａｌｉｚｅ）。この蛍光イベントを、ヒトＭ１およびＭ３レセプター、ならびにチンパンジーＭ５レセプターを有するクローンされた細胞の単層から蛍光の変化を検出するＦＬＩＰＲにより、実時間で計測する。アンタゴニストの効力を、アゴニストが媒介する細胞内カルシウムの増加を阻害するアンタゴニストの能力によって決定し得る。
【０１６５】
ＦＬＩＰＲカルシウム刺激アッセイに関し、ｈＭ１、ｈＭ３、およびｃＭ５レセプターを安定的に発現するＣＨＯ細胞を、アッセイを実施する前夜に、９６ウェルＦＬＩＰＲプレートに播種した。播種した細胞をＦＬＩＰＲ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、２ｍＭ 塩化カルシウム、カルシウムおよびマグネシウムを含まないハンクス緩衝食塩水中（ＨＢＳＳ）の２．５ｍＭ プロベネシド）を用いて、Ｃｅｌｌｗａｓｈ（ＭＴＸ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）により２回洗浄し、増殖培地、そしてＦＬＩＰＲ緩衝液５０μＬ／ウェルを残した。次いでこれらの細胞を、二酸化炭素５％で３７℃にて４０分間、５０μＬ／ウェルの４μＭ ＦＬＵＯ−４ＡＭ（２Ｘ溶液が生成された）を用いてインキュベートした。染色インキュベーションに続き、ＦＬＩＰＲ緩衝液で２回洗浄し、最終用量５０μＬ／ウェルを残した。
アンタゴニストの効力を決定するために、後でアンタゴニストの効力をＥＣ９０濃度におけるオキソトレモリン刺激に対して計測し得るように、まず、オキソトレモリンについての細胞内Ｃａ２＋放出の用量依存性刺激を決定した。細胞をまず２０分間、化合物希釈緩衝液を用いてインキュベートし、続くアゴニストの添加はＦＬＩＰＲによって実施された。オキソトレモリンについてのＥＣ９０値を、以下のＦＬＩＰＲ測定およびデータ整理の節にて、式ＥＣＦ＝（（Ｆ／１００−Ｆ）＾１／Ｈ）＊ＥＣ５０とともに詳述される方法に従って得た。オキソトレモリンのＥＣ９０濃度がアンタゴニスト阻害アッセイプレート中の各ウェルに加えられるように、３×ＥＣＦのオキソトレモリン濃度を刺激プレート中に調製した。
【０１６６】
ＦＬＩＰＲに使用されるパラメーターは：０．４秒の曝露時間、０．５ワットのレーザー強度、４８８ｎｍの励起波長、５５０ｎｍの発光波長であった。アゴニストの添加前に、１０秒間の蛍光の変化を測定することにより、基準線（ｂａｓｅｌｉｎｅ）を決定した。アゴニストの刺激に続き、ＦＬＩＰＲは、０．５秒から１秒毎の蛍光の変化を１．５分間、最大蛍光変化を得るために、継続的に計測した。
発光の変化を各ウェルについて、最大蛍光マイナス基準線蛍光として表した。生データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、シグモイド用量反応についてのビルトインモデルを使用して、非線形回帰分析により、薬物濃度の対数に対して分析した。アンタゴニストのＫ１値を、ＫＤとしてオキソトレモリンＥＣ５０値、およびＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（Ｃｈｅｎｇ＆Ｐｒｕｓｏｆｆ，１９７３）に従うリガンド濃度についてのオキソトレモリンＥＣ９０を使用し、Ｐｒｉｓｍにより決定した。
【０１６７】
このアッセイにおいて、より低いＫｉ値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ｈＭ１、ｈＭ３、およびｃＭ５レセプターを安定的に発現するＣＨＯ細胞におけるアゴニストが媒介するカルシウム放出の遮断に対し、約１０ｎＭ未満のＫｉ値を有することが見出された。
【０１６８】
（アッセイテスト手順Ｅ）
（内因的にヒトβ２アドレナリンレセプターを発現する肺上皮細胞株を用いた細胞全体ｃＡＭＰフラッシュアッセイ）
内因的濃度のβ２アドレナリンレセプターを発現している細胞株におけるアゴニストの効力および効能（内因性の活性）の決定に関し、ヒト肺上皮細胞株（ＢＥＡＳ−２Ｂ）を使用した（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９６０９、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）（Ｊａｎｕａｒｙ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９８，１２３，４，７０１−１１）。細胞を、完全な無血清培地（エピネフリンおよびレチノイン酸を含むＬＨＣ−９ ＭＥＤＩＵＭ、カタログ番号１８１−５００、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）において、７５〜９０％のコンフルエンシーまで培養した。アッセイ前日に、培地をＬＨＣ−８（エピネフリンおよびレチノイン酸を含まない、カタログ番号１４１−５００、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）に変更した。
ｃＡＭＰアッセイを、製造業者の説明に従い、［１２５Ｉ］−ｃＡＭＰを用いたＦｌａｓｈｐｌａｔｅ Ａｄｅｎｙｌｙｌ Ｃｙｃｌａｓｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ＮＥＮ ＳＭＰ００４，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、放射線免疫アッセイ形式で実施した。
【０１６９】
アッセイの当日、細胞をＰＢＳですすぎ、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＥＤＴＡで擦る（ｓｃｒａｐｅ）ことによって浮かせ、計数した。細胞を１，０００ｒｐｍにて遠心分離によりペレットにし、３７℃に予め温めておいた刺激緩衝液に、６００，０００細胞／ｍＬの最終濃度で再懸濁させた。このアッセイでは、１００，０００〜１２０，０００細胞／ウェルの最終濃度で、細胞を使用した。テスト化合物を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ−２０００で、アッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ２５℃にてｐＨ７．４、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ＢＳＡ）で、連続的に希釈した。このアッセイでは、１０μＭ〜１０ｐＭの範囲における１１の異なる濃度で、テスト化合物をテストした。反応物を３７℃にて１０分間、インキュベートし、１００μＬの氷冷の検出緩衝液の添加により止めた。プレートを密閉し、４℃にて一晩中インキュベートし、翌朝、Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で計数した。反応物１ｍＬ当たりに生成されたｃＡＭＰ量を、製造業者の使用者マニュアルに記載のとおり、サンプルについて観測された数、およびｃＡＭＰ標準に基づき算定した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用い、シグモイド用量反応に関する４−パラメーターモデルを使用して、非線形回帰分析により分析した。
【０１７０】
このアッセイにおいて、より低いＥＣ５０値は、テスト化合物が、テストされたレセプターにおいてより高い機能活性を有することを示す。このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、β２アドレナリンレセプターに対し、約１０ｎＭ未満のＥＣ５０値を有することが見出された。
【０１７１】
（アッセイテスト手順Ｆ）
（アセチルコリン誘発またはヒスタミン誘発気管支収縮のモルモットモデルにおける気管支保護（ｂｒｏｎｃｈｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）の持続時間）
これらのインビボアッセイを使用して、ムスカリンレセプターアンタゴニストおよびβ２アドレナリンレセプターアゴニスト活性の両方を示すテスト化合物の気管支保護効果を評価した。アセチルコリン誘発気管支収縮モデルにおけるムスカリンアンタゴニスト活性を分離するために、これらの動物にプロパノロール（βレセプター活性を遮断する化合物）を、アセチルコリンの投与の前に投与した。ヒスタミン誘発気管支収縮モデルにおける気管支保護の持続時間は、β２アドレナリンレセプターアゴニスト活性を反映する。
【０１７２】
２５０ｇと３５０ｇとの間の重さの６匹の雄のモルモット（Ｄｕｎｃａｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ（ＨｓｄＰｏｃ：ＤＨ）Ｈａｒｌａｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）群を、それぞれケージカードにより同定した。調査の間中、動物に自由に食料および水を入手させた。
【０１７３】
テスト化合物を、全身曝露投薬チャンバ（ｗｈｏｌｅ−ｂｏｄｙ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｄｏｓｉｎｇ ｃｈａｍｂｅｒ）（Ｒ＆Ｓ Ｍｏｌｄｓ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）で１０分間にわたり、吸引により投与した。この投薬チャンバを、エアゾールが中央の多岐管から６つの個々のチャンバに同時に送達されるように設計した。モルモットをテスト化合物またはビヒクル（ＷＦＩ）のエアゾールに曝露させた。これらのエアゾールを、２２ｐｓｉの圧力にて気体の混合物（ＣＯ２＝５％、Ｏ２＝２１％、およびＮ２＝７４％）により作動するＬＣ Ｓｔａｒ Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ Ｓｅｔ（Ｍｏｄｅｌ ２２Ｆ５１，ＰＡＲＩ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．Ｍｉｄｌｏｔｈｉａｎ，ＶＡ）を使用し、水溶液から生じさせた。この作動圧においてネブライザーを通した気体流は、約３Ｌ／分であった。この生じたエアゾールを、陽圧によりチャンバ内に押し流した。エアゾール化した溶液の送達の間、希釈用空気は使用されなかった。１０分の噴霧療法の間、約１．８ｍＬの溶液を噴霧した。この値を、充填したネブライザーの噴霧前および噴霧後の重量を比較することにより、重量分析的に測定した。
【０１７４】
吸引により投与されるテスト化合物の気管支保護効果を、投与後１．５時間、２４時間、４８時間、および７２時間に、全身プレチスモグラフ法を使用して評価した。
肺評価の開始４５分前に、各モルモットをケタミン（４３．７５ｍｇ／ｋｇ）、キシラジン（３．５０ｍｇ／ｋｇ）、およびアセプロマジン（１．０５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔した。手術部位を剃り、７０％アルコールで清潔にした後、頸部腹側面の２〜３ｃｍの正中切開を実施した。次いで、頚静脈を分離し、生理食塩水中のアセチルコリン（Ａｃｈ）またはヒスタミンの静脈内注入を考慮して、生理食塩水を充填したポリエチレンカテーテル（ＰＥ−５０，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）と共にカニューレを挿入した。次いで、この気管を切開解放（ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ ｆｒｅｅ）し、１４Ｇテフロン（登録商標）チューブ（＃ＮＥ−０１４，Ｓｍａｌｌ Ｐａｒｔｓ，Ｍｉａｍｉ Ｌａｋｅｓ，ＦＬ）と共にカニューレを挿入した。必要な場合は、前記した麻酔混合物のさらなる筋肉内注射によって知覚麻痺を維持した。知覚麻痺の程度をモニターし、動物が足をつまんで（ｐｉｎｃｈ）反応する場合、または呼吸数が１００呼吸／分を超えた場合に調節した。
【０１７５】
カニューレの挿入が完了すると、動物をプレチスモグラフ（＃ＰＬＹ３１１４，Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｈａｒｏｎ，ＣＴ）に置き、食道圧力カニューレ（ＰＥ−１６０，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を、肺の駆動圧（プレッシャー）を測定するために挿入した。テフロン（登録商標）導管チューブをプレチスモグラフの開口部に取り付け、モルモットにチャンバの外からの大気を吸わせた。次いで、チャンバを密閉した。体温を維持するために加熱灯を使用し、モルモットの肺を、１０ｍＬ較正シリンジ（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｓｙｒｉｎｇｅ）（＃５５２０ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｈａｎｓ Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用して、４ｍＬの空気で３回膨張させ、気道下部が無空気状態にならないことを、そして動物が過呼吸に陥らないことを確実にした。
基準線の値がコンプライアンスについて０．３〜０．９ｍＬ／ｃｍ Ｈ２Ｏの範囲内であると決定し、抵抗について０．１〜０．１９９ｃｍ Ｈ２Ｏ／ｍＬ毎秒の範囲内であると決定すると、肺評価を開始した。Ｂｕｘｃｏ肺測定コンピュータープログラムにより、肺の値の収集および導出を実施した。
【０１７６】
このプログラムをスタートさせると、実験プロトコルおよびデータ収集を開始した。各呼吸に関するプレチスモグラフ中で起こる、容量の経時変化を、Ｂｕｘｃｏ圧力変換器により測定した。この経時シグナルを取り入れることにより、各呼吸についてのフローの測定値を算定した。このシグナルを、Ｓｅｎｓｙｍ圧力変換器（＃ＴＲＤ４１００）を使用して回収された肺の駆動圧力の変化と共に、Ｂｕｘｃｏ（ＭＡＸ ２２７０）前置増幅器によりデータ収集インターフェース（＃ＳＦＴ３４００および＃ＳＦＴ３８１３）と結びつけた。全ての他の肺のパラメーターをこれら２つのインプットから引き出した。
【０１７７】
基準線値を５分間で収集し、その後、モルモットをＡｃｈまたはヒスタミンでチャレンジした。ムスカリンアンタゴニストの効果を評価する場合、プロパノロール（５ｍｇ／Ｋｇ、ｉｖ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、Ａｃｈでチャレンジする１５分前に投与した。Ａｃｈ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（０．１ｍｇ／ｍＬ）を、シリンジポンプ（ｓｐ２１０ｉｗ、Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ）から１分間、次の用量および指定された実験の開始からの時間で静脈内に注入した：５分の時点で１．９μｇ／分、１０分の時点で３．８μｇ／分、１５分の時点で７．５μｇ／分、２０分の時点で１５．０μｇ、２５分の時点で３０μｇ／分、および３０分の時点で６０μｇ／分。あるいは、テスト化合物の気管支保護を、β遮断化合物での前処理なしのアセチルコリンチャレンジモデルで評価した。
【０１７８】
テスト化合物のβ２アドレナリンレセプターアゴニスト効果を評価する場合、ヒスタミン（２５μｇ／ｍＬ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、シリンジポンプから１分間、次の用量および指定された実験の開始からの時間で静脈内に注入した：５分の時点で０．５μｇ／分、１０分の時点で０．９μｇ／分、１５分の時点で１．９μｇ／分、２０分の時点で３．８μｇ、２５分の時点で７．５μｇ／分、および３０分の時点で１５μｇ／分。抵抗またはコンプライアンスが、Ａｃｈまたはヒスタミンのそれぞれの投薬に続く３分の時点で基準線値に戻らない場合は、モルモットの肺を、１０ｍＬ較正シリングから４ｍＬの空気で３回膨張させた。記録された肺のパラメーターには、呼吸回数（呼吸／分）、コンプライアンス（ｍＬ／ｃｍ Ｈ２Ｏ）、および肺抵抗（ｃｍ Ｈ２Ｏ／ｍＬ毎秒）が含まれる。このプロトコルの３５分の時点で肺機能測定が完了すると、モルモットをプレチスモグラフから取り出し、二酸化炭素の窒息により安楽死させた。
【０１７９】
これらのデータを２つの方法のうちの一方で評価した：
（ａ）肺抵抗（ＲＬ、ｃｍ Ｈ２Ｏ／ｍＬ毎秒）を、「圧力の変化」対「流量の変化」の比から計算した。ＡＣｈへのＲＬ応答（６０μｇ／分、ＩＨ）をビヒクルおよびテスト化合物群について、コンピュータで算定した。ビヒクル−処置動物において、各前処理時点の平均ＡＣｈ応答を計算し、各テスト化合物用量にて対応する前処理時点のＡＣｈ応答の阻害％をコンピュータで算定するために使用した。「ＲＬ」についての阻害用量−応答曲線を、気管支保護ＩＤ５０（ＡＣｈ（６０μｇ／分）気管支収縮物質（ｂｒｏｎｃｈｏｃｏｎｔｒｉｃｔｏｒ）応答を５０％阻害するのに必要とされる用量）を推定するために、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ ３．００（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して、４パラメーター論理方程式を用いて調節した。使用された方程式は次のとおりである：
Ｙ＝Ｍｉｎ＋（Ｍａｘ−Ｍｉｎ）／（１＋１０（（ｌｏｇＩＤ５０−Ｘ）＊Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ））
ここでＸは用量の対数であり、Ｙは応答（Ａｃｈが誘発するＲＬ増加の阻害％）である。ＹはＭｉｎで始まり、漸近的にＭａｘへとＳ字状（ｓｉｇｍｏｉｄａｌ ｓｈａｐｅ）を描く。
【０１８０】
（ｂ）基準線の肺抵抗を倍にするために必要とされるＡｃｈまたはヒスタミンの量、として規定される量ＰＤ２は、次の方程式（クリニックでＰＣ２０値を計算するために使用される方程式から導かれる）を使用して、Ａｃｈまたはヒスタミンのチャレンジの範囲にわたるフローおよびプレッシャーから導かれる肺の抵抗値を使用して算定される（Ａｍ．Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃ，２０００を参照）。
【０１８１】
【数１】
ここで：
Ｃ１＝Ｃ２に先行するＡｃｈまたはヒスタミンの濃度
Ｃ２＝肺抵抗（ＲＬ）の少なくとも２倍の増加をもたらすＡｃｈまたはヒスタミンの濃度
Ｒ０＝基準線ＲＬ値
Ｒ１＝Ｃ１に従うＲＬ値
Ｒ２＝Ｃ２に従うＲＬ値
データの統計分析を、両側スチューデントｔ検定を使用して実施した。Ｐ値＜０．０５を有意とみなした。
【０１８２】
このアッセイにおいてテストされる場合、式Ｉの化合物は、ＭＣｈ誘発気管支収縮およびＨｉｓ誘発気管支収縮に対する、用量依存性気管支保護効果をもたらした。さらに、式Ｉの化合物は、このアッセイにおいて少なくとも約２４時間の気管支保護活性の持続時間（ＰＤ Ｔ１／２）を有した。
【０１８３】
本発明は、その特異的な局面または実施形態を参照して記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなしに、種々の変更がなされ得、等価物を代わりに使用し得ることが、当業者には理解される。さらに、適用し得る特許法および規制により認可される範囲まで、本明細書中で引用するすべての刊行物、特許および特許出願を、各書類が個々に本明細書中に参考として援用された場合と同程度に、それらの全体が参考として本明細書中で援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１８４】
本発明の種々の局面が、添付の図の参照により説明される。
【図１】図１は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の記録および熱重量分析（ＴＧＡ）の記録を示している。
【図２】図２は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルについてのＤＳＣの記録を示す。
【図３】図３は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルの粉末エックス線回析（ＰＸＲＤ）パターンを示している。
【図４】図４は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩のサンプルの粉末エックス線回析（ＰＸＲＤ）パターンを示している。
【図５】図５は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩についての赤外線（ＩＲ）吸収スペクトルを示している。
【図６】図６は、本発明のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩についての力学的水分吸着（ＤＭＳ）の記録を示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、約２１５℃〜約２４０℃の範囲において最大吸熱熱流を示す示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、約２１５℃〜約２２９℃の範囲において最大吸熱熱流を示す示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、約２３０℃〜約２４０℃の範囲において最大吸熱熱流を示す示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、２００℃を超える温度範囲において図１に示される記録に実質的に従う示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、２００℃を超える温度範囲において図２に示される記録に実質的に従う示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、５．０±０．３および１５．０±０．３の２θの値における回析ピークを有する粉末エックス線回析パターンによって特徴付けられる、化合物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物であって、そのピーク位置が、図３に示されるパターンのピーク位置に実質的に従う粉末エックス線回析パターンによって特徴付けられる、化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物であって、そのピーク位置が、図４に示されるパターンのピーク位置に実質的に従う粉末エックス線回析パターンによって特徴付けられる、化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物であって、約７０４ｃｍ−１、約７４８ｃｍ−１、約７６８ｃｍ−１、約８４１ｃｍ−１、約９００ｃｍ−１、約１０５５ｃｍ−１、約１１０４ｃｍ−１、約１１６６ｃｍ−１、約１２１８ｃｍ−１、約１２９４ｃｍ−１、約１４０８ｃｍ−１、約１５２２ｃｍ−１、約１６０９ｃｍ−１、約１６５５ｃｍ−１、および約１７０１ｃｍ−１において有意な吸収帯を有する赤外線吸収スペクトルを有する、化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物であって、図５に示されるスペクトルに実質的に従う赤外線吸収スペクトルによって特徴付けられる、化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物であって、微粉形態である、化合物。
【請求項１３】
薬学的に受容可能なキャリアおよび請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、ステロイド抗炎症因子をさらに含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の薬学的組成物であって、前記ステロイド抗炎症因子が、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその溶媒和物である、薬学的組成物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、ホスホジエステラーゼ−４インヒビターをさらに含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、吸入による投与のために処方される、薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、微粉形態である、薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の薬学的組成物であって、前記キャリアが、ラクトース、デンプン、マンニトール、ブドウ糖、ポリ乳酸、ポリラクチド−コ−グリコリド、またはそれらの組み合わせである、薬学的組成物。
【請求項２０】
組み合わせであって、
（ａ）請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子
を含む、組み合わせ。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組み合わせであって、前記ステロイド抗炎症因子が、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその溶媒和物である、組み合わせ。
【請求項２２】
肺障害を処置するための方法であって、処置を必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２３】
患者において気管支拡張を生じさせる方法であって、該患者に、気管支拡張を生じさせる量の請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物を吸引により投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
慢性閉塞性肺疾患または喘息を処置する方法であって、処置を必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の化合物を調製するプロセスであって、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルを、１，２−エタンジスルホン酸またはその水和物と接触させる工程を包含する、プロセス。
【請求項２６】
請求項１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって：
（ａ）式ＩＩ：
【化１】
の化合物を、フッ化物イオンと接触させる工程であって、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃが、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、−Ｃ１〜４アルキル−（フェニル）から独立して選択されるか、またはＲ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのうちの１つが−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である、工程；そして
（ｂ）工程（ａ）からの生成物を、１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物と接触させてビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を形成させる工程
を包含し、ここで、工程（ａ）および（ｂ）が、同じ反応容器中で、該工程（ａ）の生成物を分離せずに実施される、プロセス。
【請求項２７】
約２３０℃よりも高い融点を有する請求項１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の種結晶を、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、または不活性な希釈剤に溶解させたその溶媒和物を含む溶液に加える工程を包含し、ここで該種結晶は、約２３０℃より高い融点を有する、プロセス。
【請求項２８】
約２３０℃より高い融点を有する請求項１に記載の化合物を調製するための工程であって：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を、第一の温度にて、不活性な希釈剤に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の生成物を第二の温度に冷却する工程；そして
（ｃ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を加える工程、
を包含し、ここで種結晶が、約２３０℃より高い融点を有し、第一の温度が、１，２−エタンジスルホン酸塩を溶解させるのに十分な温度であり、そして、第二の温度が、種結晶が工程（ｂ）の生成物に加えられる場合に完全に溶解する温度より低い、
プロセス。
【請求項２９】
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルを精製するためのプロセスであって、請求項１に記載の化合物を形成させる工程を包含する、プロセス。
【請求項３０】
治療における使用のため、または薬としての、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物。
【請求項３１】
薬の製造のための、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の、使用。
【請求項３２】
請求項３１に記載の使用であって、前記薬が、肺障害を処置するための薬である、使用。
【請求項３３】
請求項３２に記載の使用であって、前記肺障害が、慢性閉塞性肺疾患または喘息である、使用。
【請求項３４】
結晶性のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む、薬。
【請求項３５】
肺障害の処置用薬の製造における：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子；
の、使用。
【請求項３６】
請求項３５に記載の使用であって、前記ステロイド抗炎症因子が、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその溶媒和物である、使用。
【請求項１】
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）−エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、約２１５℃〜約２４０℃の範囲において最大吸熱熱流を示す示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、約２１５℃〜約２２９℃の範囲において最大吸熱熱流を示す示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、約２３０℃〜約２４０℃の範囲において最大吸熱熱流を示す示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、２００℃を超える温度範囲において図１に示される記録に実質的に従う示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、２００℃を超える温度範囲において図２に示される記録に実質的に従う示差走査熱量測定の記録によって特徴付けられる、化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、５．０±０．３および１５．０±０．３の２θの値における回析ピークを有する粉末エックス線回析パターンによって特徴付けられる、化合物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物であって、そのピーク位置が、図３に示されるパターンのピーク位置に実質的に従う粉末エックス線回析パターンによって特徴付けられる、化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物であって、そのピーク位置が、図４に示されるパターンのピーク位置に実質的に従う粉末エックス線回析パターンによって特徴付けられる、化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物であって、約７０４ｃｍ−１、約７４８ｃｍ−１、約７６８ｃｍ−１、約８４１ｃｍ−１、約９００ｃｍ−１、約１０５５ｃｍ−１、約１１０４ｃｍ−１、約１１６６ｃｍ−１、約１２１８ｃｍ−１、約１２９４ｃｍ−１、約１４０８ｃｍ−１、約１５２２ｃｍ−１、約１６０９ｃｍ−１、約１６５５ｃｍ−１、および約１７０１ｃｍ−１において有意な吸収帯を有する赤外線吸収スペクトルを有する、化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物であって、図５に示されるスペクトルに実質的に従う赤外線吸収スペクトルによって特徴付けられる、化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物であって、微粉形態である、化合物。
【請求項１３】
薬学的に受容可能なキャリアおよび請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、ステロイド抗炎症因子をさらに含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の薬学的組成物であって、前記ステロイド抗炎症因子が、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその溶媒和物である、薬学的組成物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、ホスホジエステラーゼ−４インヒビターをさらに含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、吸入による投与のために処方される、薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項１３に記載の薬学的組成物であって、微粉形態である、薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の薬学的組成物であって、前記キャリアが、ラクトース、デンプン、マンニトール、ブドウ糖、ポリ乳酸、ポリラクチド−コ−グリコリド、またはそれらの組み合わせである、薬学的組成物。
【請求項２０】
組み合わせであって、
（ａ）請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子
を含む、組み合わせ。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組み合わせであって、前記ステロイド抗炎症因子が、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその溶媒和物である、組み合わせ。
【請求項２２】
肺障害を処置するための方法であって、処置を必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２３】
患者において気管支拡張を生じさせる方法であって、該患者に、気管支拡張を生じさせる量の請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物を吸引により投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
慢性閉塞性肺疾患または喘息を処置する方法であって、処置を必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の化合物を調製するプロセスであって、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルを、１，２−エタンジスルホン酸またはその水和物と接触させる工程を包含する、プロセス。
【請求項２６】
請求項１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって：
（ａ）式ＩＩ：
【化１】
の化合物を、フッ化物イオンと接触させる工程であって、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃが、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、−Ｃ１〜４アルキル−（フェニル）から独立して選択されるか、またはＲ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ１ｃのうちの１つが−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である、工程；そして
（ｂ）工程（ａ）からの生成物を、１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物と接触させてビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩またはその溶媒和物を形成させる工程
を包含し、ここで、工程（ａ）および（ｂ）が、同じ反応容器中で、該工程（ａ）の生成物を分離せずに実施される、プロセス。
【請求項２７】
約２３０℃よりも高い融点を有する請求項１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の種結晶を、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、または不活性な希釈剤に溶解させたその溶媒和物を含む溶液に加える工程を包含し、ここで該種結晶は、約２３０℃より高い融点を有する、プロセス。
【請求項２８】
約２３０℃より高い融点を有する請求項１に記載の化合物を調製するための工程であって：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩を、第一の温度にて、不活性な希釈剤に溶解させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の生成物を第二の温度に冷却する工程；そして
（ｃ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩の種結晶を加える工程、
を包含し、ここで種結晶が、約２３０℃より高い融点を有し、第一の温度が、１，２−エタンジスルホン酸塩を溶解させるのに十分な温度であり、そして、第二の温度が、種結晶が工程（ｂ）の生成物に加えられる場合に完全に溶解する温度より低い、
プロセス。
【請求項２９】
ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルを精製するためのプロセスであって、請求項１に記載の化合物を形成させる工程を包含する、プロセス。
【請求項３０】
治療における使用のため、または薬としての、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物。
【請求項３１】
薬の製造のための、ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］−ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物の、使用。
【請求項３２】
請求項３１に記載の使用であって、前記薬が、肺障害を処置するための薬である、使用。
【請求項３３】
請求項３２に記載の使用であって、前記肺障害が、慢性閉塞性肺疾患または喘息である、使用。
【請求項３４】
結晶性のビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物を含む、薬。
【請求項３５】
肺障害の処置用薬の製造における：
（ａ）ビフェニル−２−イルカルバミン酸１−［２−（２−クロロ−４−｛［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−５−イル）エチルアミノ］メチル｝−５−メトキシフェニルカルバモイル）エチル］ピペリジン−４−イルエステルの結晶性１，２−エタンジスルホン酸塩、またはその溶媒和物；および
（ｂ）ステロイド抗炎症因子；
の、使用。
【請求項３６】
請求項３５に記載の使用であって、前記ステロイド抗炎症因子が、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、またはその溶媒和物である、使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２００８−５１３３５８（Ｐ２００８−５１３３５８Ａ）
【公表日】平成２０年５月１日（２００８．５．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２７９１９（Ｐ２００７−５２７９１９）
【出願日】平成１７年８月１５日（２００５．８．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２９０１３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２３４５４
【国際公開日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【出願人】（５００１５４７１１）セラヴァンス， インコーポレーテッド (129)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年５月１日（２００８．５．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月１５日（２００５．８．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２９０１３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２３４５４
【国際公開日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【出願人】（５００１５４７１１）セラヴァンス， インコーポレーテッド (129)
【Ｆターム（参考）】
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