線維症用の新規造影剤
本発明は、線維症の非侵襲的な可視化に適した新規な造影剤を提供する。本発明では、造影剤の製造方法、並びに、この方法で使用する前駆体も提供する。本発明は、この造影剤を含む医薬組成物、並びにこの医薬組成物の製造に用いるキットも提供する。さらに別の態様では、インビボイメージングを行う際の造影剤の使用及びマンノース−６−リン酸塩受容体が上方制御される病態を診断するための薬剤を造影するにあたっての造影剤の使用も提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、画像診断、特に線維症の画像診断に関する。この目的に適した診断用造影剤、特に肝臓、心臓、腎臓及び肺の線維症の画像診断に適した診断用造影剤について開示する。
【背景技術】
【０００２】
線維症は、細胞外マトリックス成分の過剰分泌を特徴とするプロセスである。これは、マトリックスタンパク質、特にＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンの合成増大と分解減少によって起こり、炎症、感染又は損傷に起因する組織損傷に対する反応として引き起こされる。簡単にいうと、線維症は瘢痕組織であり、組織の「修復」プロセス全体の一部をなす。しかし、炎症や感染の進行及び損傷の繰り返しによって、線維症の瘢痕組織が増加し、「機能性」細胞に置き換えられないので、臓器の機能に異常をきたし、ひいては臓器不全を招く。
【０００３】
線維症は医学における重要で古典的な病理過程の一つである。以下に挙げるような世界中で何百万人もの人々が罹患する多くの疾患の重要な構成要素である。
ａ）特発性肺線維症（原因不明の肺線維症）、喘息及び慢性閉塞性肺疾患のような肺疾患、
ｂ）強皮症：体内の結合組織（すなわち、皮膚及び内蔵）中での細胞外マトリックスの過剰蓄積を特徴とする重篤な不均質疾患、
ｃ）移植後の手術後瘢痕、
ｄ）糖尿病性網膜症及び加齢性黄斑変性症（目の線維性疾患で、失明の最大の原因）、
ｅ）アテローム性動脈硬化症及び不安定プラークを始めとする循環器病、
ｆ）糖尿病に関連した腎線維症：糖尿病性腎症及び糸球体硬化症、
ｇ）ＩｇＡ腎症（腎不全の原因であり、透析及び再移植が必要となる。）、
ｈ）肝硬変及び胆道閉鎖症（肝線維症及び肝不全の最大の原因）、
ｉ）関節リウマチ、
ｊ）皮膚筋炎のような自己免疫疾患、
ｋ）うっ血性心不全。
【０００４】
線維症の臨床症状は変化に富む。肝硬変を例にとると、臨床症状は、症状の全くないものから肝不全まで様々であり、根底にある肝疾患の性状及び程度、さらには肝線維症の程度によって決まる。肝硬変の患者の４０％以下は無症状で、十年以上無症状であることもあるが、ひとたび腹水、静脈瘤出血、脳症などの合併症を発症すると、進行性機能低下は避けられない。肝線維症及び肝硬変は、ウイルス、自己免疫、薬物性、コレステロール性及び代謝疾患を始めとする様々な原因に由来する慢性肝障害の持続性創傷治癒反応の結果であるといえる。肝線維症及び肝硬変の一般的原因としては、免疫媒介障害、遺伝的異常、糖尿病やメタボリックシンドローム（ＭＳ）に付随することが特に多い非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が挙げられる。西欧ではメタボリックシンドローム（ＭＳ）の割合が高い。メタボリックシンドロームは通例肥満で高脂血症や高血圧の個体で起こり、ＩＩ型糖尿病の発症につながることが多い。メタボリックシンドロームの肝臓での症状は、非アルコール性脂肪肝症（ＮＡＦＬＤ）であり、米国での推定罹患率は人口の２４％である。脂肪肝は、非アルコール性脂肪肝症ＮＡＦＬＤの一群の症状としては軽いものであるが、進行すると、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）やひいては肝硬変になる。線維症の発症はかかる進行のリスクを示し、現在では肝臓の生検によって診断されている。しかし、肝臓の生検は、相当の不快感を伴い、リスクもあり、費用もかさむ。さらに、肝線維症に関して現在利用可能な血液検査は、ＮＡＦＬＤにおいては信頼性に欠ける。
【０００５】
国際公開第００／２３１１３号には、肝星細胞（ＨＳＣ）を標的とするペプチドと担体分子とを含む化合物が開示されている。標的受容体の例は、ＨＳＣに対して特異的なもの、又は疾患（例えば線維症）時にＨＳＣで上方制御される受容体、例えば血小板由来増殖因子受容体、コラーゲンＶＩ受容体、トランスフォーミング増殖因子β受容体、インターロイキン−１β受容体、腫瘍壊死因子α受容体である。国際公開第００／２３１１３号の別の態様では、標的受容体は、肝線維症での過剰発現が報告されている陽イオン非依存性のマンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）受容体である。適当な担体の例は、ヒト血清アルブミン、タンパク質、ポリマー担体及びリポソームである。これらの開示された化合物は主に薬剤担体であり、あらゆる種類の治療薬のターゲティングに利用できる。担体は好適には５０００Ｄａ超であると開示されている。また、担体は診断のためのＨＳＣの可視化にも利用でき、化合物は別の診断マーカーをさらに含んでもよいと記載されている。しかし、診断マーカーをどのようにして開示された化合物に結合させるかについては記載されていない。
【０００６】
欧州特許出願公開第１４９５７６９号には、アンチセンス法、特にインビボアンチセンス法に用いるための配糖体−化合物コンジュゲートが開示されている。このコンジュゲートは、化合物に結合した配糖体を含んでおり、配糖体は、筋細胞のマンノース−６−リン酸塩受容体と結合し得るリガンドである。インビボ又はインビトロ診断のため、蛍光、放射性、酵素又は分子マーカーを含むように「マーカー」を付したコンジュゲートが挙げられているが、マーカーを付した化合物をどのようにして得るかについては記載されていない。
【特許文献１】国際公開第００／２３１１３号パンフレット
【特許文献２】欧州特許出願公開第１４９５７６９号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、線維症、特に肝線維症を検出するための代替的な非侵襲性検査に対するニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、線維症の非侵襲的な可視化に適した造影剤を提供する。本発明では、造影剤の製造方法、並びに該方法で用いる前駆体も提供する。本発明は、造影剤を含む医薬組成物、並びに医薬組成物の調製用キットも提供する。本発明の別の態様では、インビボイメージング並びにマンノース−６−リン酸塩受容体が上方制御される病態を診断するための薬剤の製造における造影剤の使用を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の一態様では、
（ｉ）マンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）受容体に対する親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）造影基と
を含む造影剤であって、造影基がベクターの一体部分として存在しているか、或いは造影基が適当な化学基を介してベクターと結合している造影剤を提供する。
【００１０】
本発明に関して、「Ｍ６Ｐ受容体」という用語は、具体的には陽イオン非依存性のＭ６Ｐ受容体の細胞外ドメインに関する。
【００１１】
「造影剤」という用語は、哺乳類の特定の生理又は病態生理をターゲティングするように設計された化合物であって、哺乳類の身体に投与した後でインビボで検出できる化合物を意味する。
【００１２】
上述の通り、本発明の造影剤において、造影基はベクターの一体部分として存在していてもよく、例えば、ベクターの構成原子の１つを１２Ｃでなく１１Ｃとすることもできる。或いは、造影基は、適当な化学基（例えば、金属イオンである造影基と錯形成できる金属キレート）を介してベクターに結合していてもよい。ベクターを適当な化学基又は直接造影基自体に結合するためのリンカーが存在していてもよい。本発明の適当なリンカーは式−（Ｌ１）ｎ−のものである。
式中、
各Ｌ１は独立に−ＣＯ−、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、Ｃ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸残基、ポリアルキレングリコール、ポリ乳酸又はポリグリコール酸部分であり、
ｎは０〜２０の整数であり、
各Ｒ基は独立にＨ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル又はＣ１−１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に飽和又は不飽和炭素環又は複素環を形成したものである。
【００１３】
枝分れリンカー基、つまり別のリンカー−（Ｌ２）ｏ−Ｒ′でさらに置換されたリンカー基−（Ｌ１）ｎ−（Ｌ２、ｏ及びＲ′はそれぞれＬ１、ｎ及びＲについて定義した通りである。）も利用できる。
【００１４】
かかるリンカーは、造影剤の体内分布及び／又は分泌プロファイルを操作する場合に特に有用である。例えば、ポリエチレングリコール基又はアセチル基を含むリンカーを導入すると、造影剤の血液滞留時間を改善することができる。
【００１５】
「アミノ酸」という用語は、Ｌ−若しくはＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（ナフチルアラニンなど）又はアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のものであっても純粋な合成品であってもよく、光学的に純粋、つまり単一の鏡像異性体でキラルなものであってもよいし、鏡像異性体の混合物であってもよい。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋である。
【００１６】
かかるリンカーは、以下で説明する本発明の他の部分についても有用である。本発明では、好ましいＬ１基及びＬ２基は、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−及びアミノ酸残基である。
【００１７】
本発明に関して、「親和性」という用語は、インビトロでＭ６Ｐ受容体に対して１００ｎＭ未満、好ましくは５０ｎＭ未満、最も好ましくは１０ｎＭ未満のＫｄ値で結合することを意味する。別法として、親和性は、インビトロでのＭ６Ｐ受容体へのβ−ガラクトシダーゼの結合を阻害する能力としても定義でき（Ｄｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９１，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６６（３２）２１６８７−９２に記載）、ＩＣ５０値は１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満、さらに好ましくは０．１μＭ未満、最も好ましくは０．０１μＭ未満である。親和性は、インビトロでのＭ６Ｐ受容体へのインシュリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）の結合を阻害する能力として定義することもでき（Ｍａｒｒｏｎ Ｐ．Ｇ． ｅｔ ａｌ，１９９８，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７３（３５）、２２３５８−２２３６６）、ＩＣ５０値は１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満、さらに好ましくは０．１μＭ未満、最も好ましくは０．０１μＭ未満である。
【００１８】
本発明の造影剤は、好ましくは、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ペプチド核酸、増殖因子、ワクチン、ビタミン又は抗体がＭ６Ｐベクターに結合していないものである。最も好ましくは、本発明の造影剤は、Ｍ６Ｐベクターに造影基しか結合していないものであり、それ以外のものがＭ６Ｐに結合していないものである。
【００１９】
Ｍ６Ｐ受容体用のベクターは、好ましくは、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１種以上を含む。
【００２０】
（ｉ）６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列又はその断片もしくは類似体、
（ｉｉ）Ｍ６Ｐ、
（ｉｉｉ）二リン酸化糖ペプチド、又は
（ｉｖ）レチノイン酸又はその誘導体。
【００２１】
ＩＧＦ−ＩＩは、Ｍ６Ｐ受容体に高い親和性（ｐＨ７．４でＫｄ０．３〜１４ｎＭ）で結合し、本発明のベクターとしての使用に適している。ＩＧＦ−ＩＩは、配列番号１に示す通り、６７のアミノ酸残基からなる非グリコシル化一本鎖である。好ましくは、６７のアミノ酸からなる配列のペプチド断片又はペプチド類似体を使用し得る。
【００２２】
「ペプチド断片」という用語は、本発明では、６７のアミノ酸からなるＩＧＦ−ＩＩ配列の一部分を含んでいてＭ６Ｐ受容体に対する親和性を保持している天然又は合成ペプチドを意味する。ＩＧＦ−ＩＩ配列のペプチド断片は、５〜６０のアミノ酸残基、好ましくは８〜６０のアミノ酸残基からなる。好ましいペプチド断片は合成ペプチドである。
【００２３】
「ペプチド類似体」という用語は、本発明では、６７のアミノ酸からなるＩＧＦ−ＩＩ配列の全長又は一部を含む天然又は合成ペプチドであって、１以上のアミノ酸残基が代替アミノ酸残基で置換されていてＭ６Ｐ受容体に対する親和性が保持されている天然又は合成ペプチドを意味する。好ましいペプチド類似体は合成ペプチドである。ペプチドの変化を最小限にとどめるため、わずかなアミノ酸残基だけを置換し、保存的置換のみを行うのが慣行である。以下の表に、保存的とみなされる置換の概要をまとめた。
【００２４】
【表１】
ただし、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性が保持される限り、どのようなアミノ酸置換も適している。また、好ましいアミノ酸置換は、インシュリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）受容体よりも、Ｍ６Ｐ受容体に対して向上した特異性を有するペプチド類似体を与える置換である。例えば、ＬｅｕによるＴｙｒ２７の非保存的置換は、ＩＧＦ−Ｉ受容体に対する親和性は低下するものの、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性は保たれる。
【００２５】
以下に、６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列の最も好ましいペプチド断片及びペプチド類似体の例を挙げる。
（ｉ）アミノ酸残基４８〜５５（配列番号２）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉ）アミノ酸残基８〜２８（配列番号３）と４１〜６１（配列番号４）とが直接又は式−（Ｌ３）ｐ−のリンカーを介して結合しているペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉｉ）アミノ酸残基８〜６７（配列番号５）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｖ）以下の各種のアミノ酸残基の置換体：Ｐｈｅ２６Ｓｅｒ（配列番号６）、Ｐｈｅ１９Ｓｅｒ（配列番号７）、Ｇｌｕ１２Ｌｙｓ（配列番号８）、Ｔｙｒ２７Ｌｅｕ（配列番号９）
式中、Ｌ３は上記のＬ１について定義した通りであり、ｐは１〜３０である。
【００２６】
本発明の好ましいＩＧＦ−ＩＩ断片の例は、以下のＩＧＦ化合物１である。
【００２７】
【化１】
これらのペプチドは従来の固相合成で得ることができる。固相ペプチド合成の方法論について最新の概説については、Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ， Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００４８ ２１１−２１を参照されたい。
【００２８】
２以上のＩＧＦ−ＩＩのペプチド断片を、適宜、１以上のリンカー基−（Ｌ３）ｐ−で結合してもよい。ＩＧＦ−ＩＩの２つのペプチド断片を結合する場合には、Ｌ３基がアミノ酸及び／又はＰＥＧであるリンカーが好ましい。リンカーがＰＥＧリンカーのときは、１〜３０のエチレングリコール単位からなるものが好ましい。
【００２９】
ＩＧＦ−ＩＩペプチド及びその断片又は類似体について、造影基の適当な位置としては、ペプチドのアミノ末端及びカルボキシ末端がある。その他の適当な位置は、ペプチドを構成するアミノ酸の側鎖である。好ましくは、ＩＧＦ−ＩＩ又はその断片もしくペプチド類似体を造影基と連結するリンカーが存在する。例えば、上述のＩＧＦ化合物１の場合、造影剤は好ましくはリンカーの末端のアミノ基に位置する。
【００３０】
Ｍ６Ｐを有する数多くの化合物が、本発明の造影剤のベクターとしての使用に適している。かかる化合物の例としては、Ｍ６Ｐ、Ｍ６Ｐ修飾ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及びＭ６Ｐ含有オリゴマンノシド、例えば以下のようなＤｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９１ ２６６（３２）２１６８７−９２に記載されたものが挙げられる（式中、Ｍａｎはマンノースである。）。
（ｉ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合ジマンノシド）
（ｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，３）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，３結合ジマンノシド）
（ｉｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，６）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，６結合ジマンノシド）
（ｉｖ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合トリマンノシド）
（ｖ）次式の二分岐オリゴマンノシド
【００３１】
【化２】
上述の化合物（ｉ）〜（ｖ）を、本明細書では、それぞれ「Ｍ６Ｐ化合物１」〜「Ｍ６Ｐ化合物５」という。上記オリゴ糖化合物の合成は、Ｄｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ１９９１ ２６６（３２）２１６８７−９２及びＳｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７ ５２ ２８６９−７５に記載されている。
【００３２】
Ｍ６Ｐ含有化合物がベクターである場合には、造影基は好適には、Ｍ６Ｐ受容体との結合に関与しないベクターの置換基を介して連結させる。好ましくは、Ｍ６Ｐ含有化合物はＭ６Ｐ化合物１〜６のいずれかであり、造影基がＭ６Ｐ化合物１〜５のカルボキシメチル基を介して又はＭ６Ｐ化合物６のリジン残基のアミンを介して結合している。
【００３３】
別の好ましい実施形態では、Ｍ６Ｐ含有化合物は上述の化合物のいずれかであるが、リン酸塩基の１以上がホスホン酸基で置換された化合物であってもよい。
【００３４】
本発明の造影剤におけるベクターとしての使用に適した他の化合物は、二リン酸化糖ペプチドである。国際公開第９５／０１４０３６号には、かかる化合物でＭ６Ｐ受容体に結合するものが開示されており、これらは炎症その他の疾患の治療に有用であり、それらの合成はＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１９９４ １２９９−１３１０）に記載されている。これらの化合物はいずれも本発明のベクターに適している。これらは次の式Ｉで表すことができる。
【００３５】
【化３】
式中、
Ｒ１及びＲ２は各々独立に（ｉ）グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、ラマノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミニル、フルクトース及びＮ−アセチルノイラミン酸から選択される天然Ｌ又はＤ単糖又はそれらのリン酸化物もしくは硫酸化物並びに（ｉｉ）上記の（ｉ）から選択される単糖からなるオリゴ糖から選択され、
Ａ１及びＡ５は各々独立に−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−アセチル、Ｄ又はＬアミノ酸、ペプチド、糖ペプチド、ペプチド類縁体及びオリゴヌクレオチドから選択され、
Ａ２及びＡ４は各々独立にＤ又はＬ−ヒドロキシアミノ酸、例えば、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｙｌ、Ｈｙｐ、Ｔｙｒ、或いはＤ又はＬカルボキシアミドアミノ酸、例えばＡｓｎ及びＧｌｎであり、
Ａ３は、遺伝的コード又は非コードＤ又はＬ型アミノ酸又はペプチド模倣体又はヌクレオチドからなる群から選択され、
ｍは１〜３０の整数であり、
線状配列Ａ１〜Ａ５のいずれかの残基が共有結合して環状化合物を形成していてもよい。
【００３６】
好ましくは、Ｒ１及びＲ２はＭ６Ｐ基であり、Ａ１はアセチル基であり、Ａ５は−ＮＨ２であり、Ａ２及びＡ４はＴｈｒであり、Ａ３は１〜５アミノ酸残基の鎖である。
【００３７】
最も好ましくは、本発明の二リン酸化糖ペプチドは以下の（ｉ）又は（ｉｉ）である。
（ｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１、２）−α−Ｄ−マンノース］−Ｌｙｓ（アミノベンズアミド）−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１、２）−α−Ｄ−マンノース］−ＮＨ２（「糖ペプチド化合物１」）
（ｉｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−ＮＨ２（「糖ペプチド化合物２」）。
【００３８】
二リン酸化糖ペプチドが、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性を有するベクターである場合、造影基は好ましくは基（Ａ３）ｍに存在するアミノ酸の一つを介して結合する。
【００３９】
別の好ましい実施形態では、二リン酸化糖ペプチドは上述の化合物のいずれかであるが、リン酸塩基の１以上がホスホン酸基で置換された化合物であってもよい。
【００４０】
レチノイン酸はＭ６Ｐ受容体にＩＧＦ−ＩＩ結合部位とは異なる部位で、高い親和性（Ｋｄ、２．４ｎＭ）で結合する。レチノイン酸及びその誘導体は、本発明の造影剤のベクターとして適している。レチノイン酸の構造を以下に示す。
【００４１】
【化４】
本発明で好適なレチノイン酸の誘導体としては、式−（Ｌ４）ｑ−Ｒ″（式中、Ｌ４、ｑ及びＲ″は、Ｌ１、ｎ及びＲについて定義した通りである）の付加によって修飾されたレチノイン酸が挙げられる。Ｒ″は好ましくはアミノ、カルボキシ又はヒドロキシルであり、Ｌ４は好ましくはアミノ酸又はＰＥＧである。リンカーがＰＥＧリンカーの場合には、リンカーは好ましくは１〜２０のエチレングリコール単位からなり、さらに好ましくは１〜１５のエチレングリコール単位からなり、最も好ましくは１〜１２のエチレングリコール単位からなる。
【００４２】
この種の好ましいレチノイン酸誘導体としては、ＰＥＧリンカーと１以上のアミノ酸残基を含むものがある。ＰＥＧリンカーは、得られる造影剤の体内分布及び／又は分泌を調製する手段として１以上の荷電アミノ酸基を含んでいてもよい。
【００４３】
Ｍ６Ｐ受容体用のベクターがレチノイン酸又はその類似体である場合、造影基は好ましくはレチノイン酸のカルボキシ基を介して又はレチノイン酸類似体に存在する反応性基（例えば上述のレチノイン酸化合物１のアミノ又はカルボキシ基）を介してベクターに結合する。
【００４４】
さらに、ベクターは、上述の２種以上のベクターを組み合わせた多価ターゲティングベクターであってもよい。かかるベクターを含む造影剤は、Ｍ６Ｐ受容体が各々のベクターについて独立した結合部位を有しているので、Ｍ６Ｐ受容体に対して向上した親和性を呈すると予想される。かかる多価ベクターの例を以下に示す。
【００４５】
【化５】
２つのＭ６Ｐ基を含む多価ベクターについては、好ましくは上述の枝分れＰＥＧリンカー基で結合される。上記に示したリンカーは式−（Ｌ５）ｒ−のものである（式中、Ｌ５はＬ１について定義したのと同じであり、ｒは１０〜５０である。）。理想的には、リンカーは個々のベクター部分が離隔するように作用して、それらがＭ６Ｐ受容体のそれぞれの結合部位で最適に結合するように配置されるようにする。アミノ酸及び／又はＰＥＧを含むリンカーが好ましい。
【００４６】
造影剤の投与後、「造影基」は患者の体外から検出してもよいし、或いはインビボ用に設計された検出機器、例えば血管内放射線又は光学検出機器（内視鏡など）又は術中用に設計された放射線検出機器を使用することによって検出してもよい。
【００４７】
造影基は、好ましくは、以下の（ｉ）〜（ｖｉｉ）から選択される。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｖｉ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（ｖｉｉ）血管内検出に適したβ線放射体。
【００４８】
造影基が放射性金属イオンつまり放射性金属である場合、好適な放射性金属は、６４Ｃｕ、４８Ｖ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、９４ｍＴｃ又は６８Ｇａのような陽電子放射体、或いは９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ又は６７Ｇａのようなγ線放射体である。好ましい放射性金属は９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ及び１１１Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ放射体、特に９９ｍＴｃである。
【００４９】
造影基が常磁性金属イオンである場合、かかる金属イオンの好適なものとして、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）又はＤｙ（ＩＩＩ）が挙げられる。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）及びＦｅ（ＩＩＩ）であり、Ｇｄ（ＩＩＩ）が特に好ましい。
【００５０】
造影基がγ線放出型放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは好適には１２３Ｉ、１３１Ｉ又は７７Ｂｒから選択される。１２５Ｉは、画像診断用の造影基としての使用には適していないので、特に除外してある。好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは１２３Ｉである。
【００５１】
造影基が陽電子放出型放射性非金属である場合、かかる陽電子放射体の好適なものとして、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ又は１２４Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は１１Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ及び１２４Ｉであり、特に好ましくは１１Ｃ及び１８Ｆであり、最も好ましくは１８Ｆである。
【００５２】
造影基が過分極ＮＭＲ活性核種である場合、かかるＮＭＲ活性核種はゼロ以外の核スピンを有し、１３Ｃ、１５Ｎ、１９Ｆ、２９Ｓｉ及び３１Ｐが挙げられる。これらのうち、１３Ｃが好ましい。「過分極」という用語は、ＮＭＲ活性核種の分極の程度がその平衡分極を超えていることを意味する。１３Ｃの天然存在量（１２Ｃに対して）は約１％であり、適当な１３Ｃ標識化合物は過分極する前に好適には５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上の存在量となるように濃縮される。本発明の造影剤の１以上の炭素原子は好適には１３Ｃで濃縮され、これを次いで過分極させる。
【００５３】
造影基がインビボ光学イメージングに適したレポーターである場合、レポーターは光学イメージング法で直接又は間接的に検出できる部分であればよい。レポーターは光散乱体（例えば着色又は未着色粒子）でも、光吸収体でも、発光体でもよい。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような色素である。色素は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。最も好ましくはレポーターは蛍光特性を有する。
【００５４】
好ましい有機発色団及び蛍光団レポーターとしては、広範な非局在化電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素鎖体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）鎖体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）鎖体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）鎖体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾体も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の鎖体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）と同様に、特定の状況で用いられる。
【００５５】
使用し得る発色団の具体例としては、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、マリーナブルー、パシフィックブルー、オレゴングリーン８８、オレゴングリーン５１４、テトラメチルローダミン並びにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０が挙げられる。
【００５６】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの可視又は近赤外（ＮＩＲ）域に吸収極大を有する色素である。光学イメージングモダリティ及び測定法としては、特に限定されないが、発光イメージング、内視鏡検査、蛍光内視鏡検査、光干渉断層撮影、透過イメージング、時間分解透過イメージング、共焦点イメージング、非線形顕微鏡、光音響イメージング、音響光学イメージング、分光法、反射分光法、干渉分光法、コヒーレンス干渉法、拡散光トモグラフィー及び蛍光媒介拡散光トモグラフィー（連続波、時間領域及び周波数領域システム）、並びに光散乱、吸収、偏光、発光、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定が挙げられる。
【００５７】
造影基が血管内検出に適したβ線放射体である場合、かかるβ線放射体の好適なものとして、放射性金属の６７Ｃｕ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ又は１９２Ｉｒ並びに非金属の３２Ｐ、３３Ｐ、３８Ｓ、３８Ｃｌ、３９Ｃｌ、８２Ｂｒ及び８３Ｂｒが挙げられる。
【００５８】
好ましい造影基は、インビボ投与後に、非侵襲的方法で外部から検出できるものである。最も好ましい造影基は、放射性、特に放射性金属イオン、γ線放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属、特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いたイメージングに適したものである。造影基を各種のベクターに導入することができる様々な手段については、以下の本発明の別の態様についての説明で概説する。
【００５９】
本発明の好ましい造影剤はインビボで容易に代謝されず、最も好ましくは人体で６０〜２４０分のインビボ半減期を示す。造影剤は好ましくは腎臓経由で排泄（つまり尿中排泄）される。造影剤の好ましくは病巣で１．５以上、さらに好ましくは５以上、特に好ましくは１０以上の信号対バックグラウンド比を示す。造影剤が放射性同位体を含む場合、生体内で非特異的に結合しているか或いは遊離している造影剤のピーク値の半量のクリアランスは、好ましくは造影基の放射性同位体の放射性崩壊の半減期以下の時間で起こる。
【００６０】
また、造影剤の分子量は好適には５０００Ｄａ以下である。好ましくは、分子量は１５０〜３０００Ｄａ、最も好ましくは２００〜１５００Ｄａの範囲であり、３００〜８００Ｄａであるのが特に好ましい。
【００６１】
本発明の造影剤の例を以下に例示する。
【００６２】
【化６】
【００６３】
【化７】
上記化合物を得るための合成経路はそれぞれ実施例４、７、８、１０に記載されている。
【００６４】
本発明のこの態様の造影剤は前駆体化合物から製造されるが、前駆体化合物は本発明の別の態様をなすものであり、以下でさらに詳しく説明する。
【００６５】
別の態様では、本発明は、前駆体と適当な造影基源との反応を含む、本発明の造影剤の製造方法であって、上記前駆体が、
（ｉ）Ｍ６Ｐ受容体に対して親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）上記造影基源と反応し得る化学基であって、造影基が化合物と結合して造影剤を生じる化学基と
を含んでおり、上記化学基がベクターの一体部分であるか或いはベクターと結合している、方法を提供する。
【００６６】
「前駆体」には、ベクターの誘導体であって、適当な化学的形態の造影剤との化学反応が部位特異的に起こり、最小限の段階数（理想的には一段階）で実施でき、しかも多大な精製を行わずに（理想的にはそれ以上精製しなくても）所望の造影剤が得られるように設計されたものが包含される。かかる前駆体は合成品であり、良好な化学的純度で得ることができる。「前駆体」は、適宜、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性を有するベクターの官能基に対する保護基を含んでいてもよい。
【００６７】
「保護基」という用語は、不都合な化学反応は阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない十分穏和な条件下で当該官能基から脱離させることができる十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後に、所望の生成物が得られる。保護基は当業者に周知であり、好適には、アミン基については、Ｂｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から、カルボニル基については、メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル又はベンジルエステルから選択される。
ヒドロキシ基に対する適当な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル（Ｔｒｔ）或いはテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。チオール基に対する適当な保護基は、トリチル及び４−メトキシベンジルである。その他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００６８】
好ましくは、造影基源と反応し得る化学基は、以下の（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれかを含む。
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート、又はアルキルメシレートを含有する誘導体、
（ｉｖ）求核又は求電子置換反応用の活性化芳香族環を含む誘導体、
（ｖ）容易にアルキル化を起こす官能基を有する誘導体、
（ｖｉ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体。
【００６９】
造影基が金属イオンを含む場合、前駆体は、金属イオンと錯形成して金属錯体を形成することのできる化学基を含む。「金属鎖体」という用語は、金属イオンと１以上の配位子との配位鎖体を意味する。金属鎖体は「キレート交換耐性」、つまり金属の配位部位に対する他の潜在的な競合配位子との配位子交換を容易に起こさないものであるのが極めて好ましい。潜在的な競合配位子には、Ｍ６Ｐ受容体用のベクター自体並びにインビトロ標品中の他の賦形剤（製剤に使用される例えば放射線防護剤又は抗菌保存剤）又は生体の内在性化合物（例えばグルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）がある。
【００７０】
キレート交換に耐性の金属鎖体を形成する本発明の使用に適した配位子としては、（金属ドナー原子同士が炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位骨格で連結されて）五又は六員キレート環が形成されるように２〜６、好ましくは２〜４個の金属ドナー原子が配列したキレート剤、又はイソニトリル、ホスフィン又はジアゼニドのように金属イオンに強く結合するドナー原子を含む単座配位子が挙げられる。キレート剤の一部として金属によく結合するドナー原子の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィン類は強固な金属鎖体を形成し、単座又は二座ホスフィンであっても適当な金属鎖体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドの線状構造は、それらをキレート剤に導入するのが容易ではないので、通例、単座配位子として使用される。適当なイソニトリルの例としては、ｔｅｒｔ−ブチルイソニトリルのような単純なアルキルイソニトリル及びｍｉｂｉ（すなわち、１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルが挙げられる。適当なホスフィンの例としては、テトロホスミン及び単座ホスフィン類、例えばトリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンが挙げられる。適当なジアゼニドの例としては、配位子のＨＹＮＩＣ系配位子、すなわちヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミドが挙げられる。
【００７１】
キレート交換耐性の金属鎖体を形成するテクネチウム用の適当なキレート剤の例としては、特に限定されないが、以下の（ｉ）〜（ｖ）が挙げられる。
（ｉ）ジアミンジオキシム；
（ｉｉ）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ３Ｓ配位子、例えばＭＡＧ３（メルカプトアセチルトリグリシン）及び関連配位子、又はジアミドピリジンチオールドナーセットを有するもの、例えばＰｉｃａ；
（ｉｉｉ）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ２Ｓ２配位子、例えばＢＡＴ又はＥＣＤ（すなわちエチルシステイネート二量体）又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するもの、例えばＭＡＭＡ；
（ｉｖ）テトラミン、アミドトリアミン又はジアミンジアミンドナーセットを有する開環又はマクロ環状配位子であるＮ４配位子、例えばサイクラム、モノオキシサイクラム又はジオキシサイクラム；又は
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ２Ｏ２配位子。
【００７２】
本発明の好ましいテクネチウム用キレート剤はジアミンジオキシム及びテトラアミンであり、それらの好ましいものについて以下で詳しく説明する。
【００７３】
好ましいジアミンジオキシムは、次の式（Ｘ）のものである。
【００７４】
【化８】
式中、
Ｅ１〜Ｅ６は各々独立にＲ＊基であり、
各Ｒ＊はＨ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−１０フルオロアルキル、Ｃ２−１０カルボキシアルキル、又はＣ１−１０アミノアルキルであるか、或いは２以上のＲ＊基がそれらと結合した原子と共に飽和又は不飽和炭素環又は複素環を形成するもので、１以上のＲ＊基がベクターと結合しており、
Ｑ１は式−（Ｊ１）ｆ−の架橋基であり、ｆは３、４、又は５であり、各Ｊ１は独立に−Ｏ−、−ＮＲ＊−、又は−Ｃ（Ｒ＊）２−であるが、−（Ｊ１）ｆ−が、−Ｏ−又は−ＮＲ＊−であるＪ１基を最大１個しか含まないことを条件とする。
【００７５】
好ましいＱ１基は以下のものである。
Ｑ１＝−（ＣＨ２）（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）−、すなわちプロピレンアミンオキシムつまりＰｎＡＯ誘導体、
Ｑ１＝−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）２−、すなわちペンチレンアミンオキシムつまりＰｅｎｔＡＯ誘導体、
Ｑ１＝−（ＣＨ２）２ＮＲ＊（ＣＨ２）２−。
【００７６】
Ｅ１〜Ｅ６は、好ましくは、Ｃ１−３アルキル、アルキルアリールアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、カルボキシアルキル、アミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各Ｅ１〜Ｅ６基はＣＨ３である。
【００７７】
Ｍ６Ｐ受容体のベクターは、好ましくは、Ｅ１もしくはＥ６のＲ＊基又はＱ１部分のＲ＊基で結合している。最も好ましくは、Ｑ１部分のＲ＊基で結合する。Ｑ１部分のＲ＊基で結合している場合、Ｒ＊基は好ましくは橋頭位である。この場合、Ｑ１は、好ましくは、−（ＣＨ２）（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）２−、又は−（ＣＨ２）２ＮＲ＊（ＣＨ２）２−であり、最も好ましくは−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）２−である。特に好ましい二官能性ジアミンジオキシムキレート剤は、次の式（Ｘａ）のものである。
【００７８】
【化９】
式中、
Ｅ７〜Ｅ２０は各々独立に上記で定義したＲ＊基であり、
Ｇ１はＮ又はＣＲ＊であり、
Ｙ１は−（Ｌ６）ｓ−ベクターであり、Ｌ６及びｓはそれぞれ上記でＬ１及びｎについて定義した通りであり、「ベクター」は、上記で定義したＭ６Ｐ受容体に対する親和性を示すベクターである。リンカー基−（Ｌ６）ｓ−が存在する場合、それ以外にキレートとベクターを連結する他のリンカー基は存在しない。
【００７９】
式（Ｘａ）の好ましいキレート剤は、次の式（Ｘｂ）のものである。
【００８０】
【化１０】
式中、Ｇ２は上記のＧ１で定義した通りであり、好ましくはＣＨ（＝「キレートＸ」、その合成方法については実施例５に記載）であって、Ｍ６Ｐ受容体のベクターが橋頭位−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２基を介して結合する。
【００８１】
本発明の好ましいテトラアミンキレート剤は、次の式Ｚのものである。
【００８２】
【化１１】
式中、Ｑ２は式−（Ｊ２）ｇ−の架橋基であり、ｇは１〜８であり、各Ｊ２は独立に−Ｏ−、−ＮＲ＊−又は−Ｃ（Ｒ＊）２−、好ましくは−Ｃ（Ｒ＊）２−、最も好ましくは−ＣＨ２−であり、Ｒ＊は上記で定義した通りである。
【００８３】
Ｙ２は−（Ｌ７）ｔ−ベクター基であり、Ｌ７及びｔはそれぞれＬ１及びｎについて上記で定義した通りである。リンカー−（Ｌ７）ｔ−が存在している場合、これ以外にキレートをベクターに連結するリンカーは存在しない。かかるテトラアミンキレートでは、好ましくはリンカーはアリール環を含まない。こうすると、錯体の親油性を下げるのに役立つ。
【００８４】
Ｅ２１〜Ｅ２６は、上記で定義したＲ＊基である。
【００８５】
最も好ましい本発明のテトラアミンキレートは、次の式Ｚａのものである。
【００８６】
【化１２】
式中、Ｙ３は上記でＹ２について定義した通りである。
【００８７】
本発明の特に好ましいテトラアミンキレートは、式ＺａのものでＹ３が−ＣＯ−であるものである（「キレートＺ」、ベクターの結合していないキレートの合成については実施例２に記載）。
【００８８】
上述の配位子は、テクネチウム（例えば９４ｍＴｃ又は９９ｍＴｃ）の錯体の形成に特に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）に詳細に記載されている。この配位子は、銅（６４Ｃｕ又は６７Ｃｕ）、バナジウム（例えば４８Ｖ）、鉄（例えば５２Ｆｅ）又はコバルト（例えば５５Ｃｏ）のような他の金属にも有用である。その他の適当な配位子については、インジウム、イットリウム及びガドリニウム、特に単環アミノカルボキシレート及びアミノホスホン酸配位子に特に適した配位子を始めとして、Ｓａｎｄｏzの国際公開第９１／０１１４４号に記載されている。この種の適当なキレート剤の例としては、１、４、７、１０−テトラアザシクロデカン−１、４、７、１０−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）及びジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げられる。ガドリニウムの非イオン性（すなわち中性）の金属錯体を形成する配位子は公知であり、米国特許第４８８５３６３号に記載されている。放射性金属がテクネチウムの場合、配位子は好ましくは四座のキレート剤である。テクネチウム用の好ましいキレート剤は、ジアミンジオキシム又は上述のＮ２Ｓ２又はＮ３Ｓドナーセットを有するものである。
【００８９】
リンカー基（−（Ｌ６）ｓ−又は−（Ｌ７）ｔ−として上述したもの）の役割は、金属の配位で得られる比較的嵩高い金属錯体を、Ｍ６Ｐ受容体のベクターの活性部位から遠ざけることによって、例えば、受容体の結合がに支障をきたさないようにすることである。これは、嵩高い基が活性部位から遠ざかる自由度をもつようにするための柔軟性（例えば単純なアルキル鎖）及び／又は金属錯体を活性部位から遠ざけるシクロアルキル系もしくはアリール系スペーサーのような剛直性の組合せによって達成することができる。リンカー基の性状は、得られるコンジュゲートの金属錯体の体内分布又は分泌特性を変更するのにも利用できる。例えばエーテル基をリンカーに導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限に抑制するのに役立つし、ポリアルキレングリコールのようなポリマー系リンカー基、特にＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を使用すると、血液中での造影剤のインビボ寿命を延ばすのに役立つ。
【００９０】
好ましいリンカー基−（Ｌ６）ｓ−又は−（Ｌ７）ｔ−は、原子数２〜１０、最も好ましくは原子数２〜５の骨格鎖を含むもので、原子数２又は３の物が特に好ましい。原子数２の最短のリンカー基骨格鎖であっても、生物学的ターゲティング基からキレーターが十分に離隔して相互反応が最小限になるという利点が得られる。さらに、ベクターも、金属イオンへのキレーターの配位に有効に拮抗できなくなる。こうして、ベクターの生物学的ターゲティング特性とキレーターの金属錯形成能が共に保持される。なお、Ｍ６Ｐ受容体のベクターがキレーターに、それらの結合が血中で容易に代謝されないように結合していることが強く望まれる。かかる代謝によって、標識した受容体ベクターがインビボで所望の標的部位に達する前に、造影用の金属錯体が開裂してしまうからである。そこで、Ｍ６Ｐ受容体のベクターは、好ましくは、容易には代謝されないリンカー基を介して本発明の金属錯体に共有結合させる。かかる好適な結合は、炭素−炭素結合、アミド結合、尿素もしくはチオ尿素結合又はエーテル結合である。
【００９１】
アルキレン基又はアリーレン基のような非ペプチド系リンカー基は、連結されたＭ６Ｐ受容体ベクターと有意の水素結合相互作用がないため、リンカーがベクターに巻き付くことがないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ２）ｕ−であり、式中、ｕは２〜５の整数である。好ましくは、ｑは２又は３である。好ましいアリーレンスペーサーは次式のものである。
【００９２】
【化１３】
式中、ａ及びｂは各々独立に０、１又は２である。
【００９３】
好ましいＹ１−Ｙ３基は−ＣＨ２ＣＨ２−（Ｌ８）ｖ−であり、ｖは０〜３の整数である。
【００９４】
ベクターがペプチドの場合、Ｙ１−Ｙ３は好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−（Ｌ９）ｗ−であり、式中、Ｌ９は−ＣＯ−又は−ＮＲ'''−（Ｒ'''はＲについて上記で定義した通り）であり、ｗは０〜３である。Ｇ１又はＧ２のいずれかがＮであり、−（Ｌ９）ｗ−が−ＮＨ−である場合、この組合せは市販の対称中間生成物Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）３から誘導できるという追加の利点がある。
【００９５】
造影用金属がテクネチウムの場合、通常のテクネチウム出発原料は過テクネチウム酸塩、すなわちＴｃＯ４−つまり酸化状態がＴｃ（ＶＩＩ）のテクネチウムである。過テクネチウム酸塩自体は金属錯体を形成しにくいので、テクネチウム錯体の製造に際しては、テクネチウムの酸化状態を低酸化状態（Ｔｃ（Ｉ）〜Ｔｃ（Ｖ））に還元することによって錯形成を促進するための第一スズイオンのような適当な還元剤を添加する必要がある。溶媒は有機溶媒でも、無機溶媒でも、それらの混合物でもよい。溶媒が有機溶媒を含む場合、有機溶媒は好ましくはエタノール又はＤＭＳＯのような生体適合性溶媒である。好ましくは、溶媒は水性溶媒であり、最も好ましくは等張塩類溶液である。
【００９６】
造影基が放射性ヨウ素である場合、好ましい前駆体は、求電子又は求核ヨウ素化或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を起こすような誘導体を含むものである。前者に属するものの例としては、以下の（ａ）〜（ｃ）が挙げられる。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えばトリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えばトリメチルシリル）又は有機ホウ素化合物（例えば、ボロン酸エステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体、
（ｂ）ハロゲン交換のための非放射性臭化アルキル、或いは求核ヨウ素化のためのアルキルトシレート、メシレート又はトリフレート、
（ｃ）求電子ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばフェノール）及び求核ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばアリールヨードニウム、アリールジアゾニウム、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。
【００９７】
前駆体は、好ましくは、ヨウ化又は臭化アリールのような非放射性ハロゲン原子（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、活性化前駆体アリール環（例えばフェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えばトリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、トリアゼンのような有機前駆体、或いはヨードニウム塩のような求核置換反応のための良好な脱離基を含む。放射性ヨウ素化では、前駆体は好ましくは有機金属前駆体化合物を含み、最も好ましくはトリアルキルスズを含む。
【００９８】
前駆体及び放射性ヨウ素を有機分子に導入する方法は、Ｂｏｌｔｏｎ， Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。前駆体及び放射性ヨウ素をタンパク質に導入する方法は、Ｗｉｌｂｕｒ， Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，３（６）、４３３−４７０（１９９２）に記載されている。適当なボロン酸エステル有機ホウ素化合物及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２９、８４１−８４３（２００２）及び３０，３６９−３７３（２００３）に記載されている。適当なオルガノトリフルオロホウ化物及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３１、９３５−９３８（２００４）に記載されている。
【００９９】
放射性ヨウ素を結合させることのできるアリール基の例としては、以下ののものがある。
【０１００】
【化１４】
これらはいずれも、芳香族環での放射性ヨウ素置換が容易な置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を含む他の置換基は、例えば以下のような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成することができる。
【０１０１】
【化１５】
飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子はインビボで代謝され易く、放射性ヨウ素が失われ易いことが知られているので、放射性ヨウ素原子は好ましくは芳香族環（ベンゼン環など）又はビニル基に直接共有結合で結合させる。
【０１０２】
造影基がフッ素の放射性同位体である場合、フッ化アルキルはインビボ代謝に抵抗性であるので、放射性フッ素原子はフルオロアルキル基又はフルオロアルコキシ基の一部としてもよい。或いは、放射性フッ素原子は、芳香族環（例えばベンゼン環）に直接共有結合で結合させてもよい。放射性ハロゲン化は、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する前駆体の適当な化学基と１８Ｆ−フッ化物との反応を用いた直接標識法で実施できる。１８Ｆは、１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＨ反応体を用いたＮ−ハロアセチル基のアルキル化によって導入することもでき、−ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）３１８Ｆ誘導体が得られる。アリール系については、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの１８Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−１８Ｆ誘導体への好適な経路である。
【０１０３】
国際公開第０３／０８０５４４号に記載された放射性フッ素化の別の方法は、以下の置換基のいずれかを含む前駆体化合物を式Ｖの化合物と反応させて、それぞれ式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）の放射性フッ素化造影剤を生成させる。
【０１０４】
【化１６】
１８Ｆ−Ｙ４−ＳＨ（Ｖ）
式中、Ｙ３は式−（Ｌ１０）ｘ−のリンカーであって、適宜１〜６のヘテロ原子を含んでいてもよく（Ｌ１０はＬ１について上記で定義した通りであり、ｘは１〜１０である。）、
Ｙ４は式−（Ｌ１１）ｙ−のリンカーであって、適宜１〜１０のヘテロ原子を含んでいてもよい（式中１１はＬ１について上記で定義した通りであり、ｙは１〜３０である。）。
【０１０５】
【化１７】
式中、Ｙ４は上記で定義した通りであり、「ベクター」は、本発明の造影剤について上記で定義した通りＭ６Ｐ受容体に対して親和性を有するベクターである。
【０１０６】
１８Ｆ−標識誘導体の合成経路についてのさらに詳しい内容は、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。
【０１０７】
本発明の１８Ｆ−標識化合物は、１８Ｆフルオロジアルキルアミンの形成後、１８Ｆフルオロジアルキルアミンを、例えば塩素、Ｐ（Ｏ）Ｐｈ３又は活性化エステルを含む前駆体と反応させてアミドを形成することによって得ることができる。
【０１０８】
ベクターがＩＧＦ−ＩＩ又はその断片もしくは類似体である場合、そのアミノ又はカルボキシ末端を介して造影基を導入することができる。リンカーが存在する場合、造影基はリンカーの反応性基を介して導入することができる。例えば、ＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のアミノ末端にリンカーを付加し、次いで造影基の導入に適した化学基を付加すれば、以下に示すような前駆体化合物を得ることができる。
【０１０９】
【化１８】
ベクターがＭ６Ｐを含む場合、上述の好ましい化合物のカルボキシメチル基の誘導体化によって造影基を導入すれば、以下に示すような前駆体化合物を得ることができる。
【０１１０】
【化１９】
ベクターがジリン酸化糖ペプチドである場合、例えばＭ６Ｐ単位のペプチド結合に存在するいずれかのアミノ酸残基を介して造影基を導入すれば、以下に示すような前駆体化合物を得ることができる。
【０１１１】
（ｉｉｉ） Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−Ｌｙｓ（キレート）−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−ＮＨ２（「糖ペプチド前駆体１」）
（ｉｖ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（キレート）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−ＮＨ２（「糖ペプチド前駆体２」）
ベクターがレチノイン酸又はその誘導体である場合、造影基は直接又はリンカーを介して間接的にカルボキシル基に導入することができる。カルボキシル基は、Ｍ６Ｐ受容体との結合には必要とされないので、造影基を導入するのに最も好ましい部位である。造影基源と反応し得る化学基とリンカーとを有するレチノイン酸前駆体化合物の例としては、以下のものがある。
【０１１２】
【化２０】
レチノイン酸は親油性化合物であり、金属錯形成キレートと結合させて前駆体化合物を形成する際は、テトラミンのような親水性金属錯化キレートと結合させるべきである。
【０１１３】
複数のベクターを組み合わせる場合、上記の構成要素を、上述の通り、前駆体を形成するための誘導体化に利用できる適当な基を介して誘導体化すればよい。
【０１１４】
好ましい実施形態では、本発明の前駆体は、滅菌された非発熱性の形態である。したがって、前駆体は医薬組成物の製造に使用することができ、医薬組成物の調製用キットの構成成分としてキットに含めるのにも適している。これらの態様については、本発明の追加の態様に関連して、以下で詳しく説明する。
【０１１５】
別の好ましい実施形態では、本発明の前駆体は固相に結合している。前駆体は好ましくは固形担体マトリックスに共有結合した形で供給され、標識反応で標識と同時に固相からの開裂が起こるようにする。したがって、所望の造影剤生成物は溶液中で形成され、出発材料及び不純物は固相に結合したまま残る。かかる系の例として、国際公開第０３／００２４８９号には１８Ｆ−フッ化物による固相求電子フッ素化のための前駆体が記載されており、国際公開第０３／００２１５７号には１８Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化のための前駆体が記載されている。適切に適合させた自動化合成装置に挿入できるカートリッジを、好ましくはキットの一部として用意してもよい。カートリッジは、固相担体に結合した前駆体とは別個に、不要フッ化物イオンを除去するためのカラム、及び反応混合物を蒸発させて、生成物を適宜製剤化できるようにカラムに接続した容器を含んでいてもよい。
【０１１６】
本発明の別の態様は、造影剤の製造方法に関して定義した前駆体であり、上記化学基は、好ましくは、
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含有する誘導体、
（ｖｉ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体
を含む。
【０１１７】
本発明は、別の態様では、上述の造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物を提供する。好ましくは、医薬組成物は放射性医薬組成物である。
【０１１８】
「生体適合性担体」とは、造影剤を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性担体は、エタノールのような生体適合性の有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は製剤の可溶化に有用である。好ましくは、生体適合性担体はパイロジェンフリーの注射用水、等張塩類溶液又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性担体のｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内である。
【０１１９】
かかる医薬品は、好適には、無菌状態を維持したまま皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れて供給される。かかる容器には、１回又は複数回分の用量を入れることができる。好ましい多用量用容器は、複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ３のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードのシリンジに吸引することができる。プレフィルドシリンジは１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨て又はその他臨床用に適したシリンジである。医薬組成物が放射性医薬組成物の場合、プレフィルドシリンジは、適宜、オペレーターを放射能被曝から保護するためのシリンジシールドを備えていてもよい。かかる適当な放射性医薬品シリンジシールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなる。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、以下の本発明の追加の態様で説明する通り、キットから調製することもできる。或いは、医薬組成物は、所望の滅菌生成物が得られるような無菌製造条件下で製造してもよい。医薬組成物を非滅菌条件下で調製した後、例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて最終的に滅菌してもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物はキットから調製される。
【０１２１】
本発明の造影剤に関して上述した通り、放射性医薬組成物に対して最も好ましい本発明の放射性造影基は９９ｍＴｃ、１２３Ｉ及び１８Ｆである。
【０１２２】
本発明は、さらに別の態様では、本発明の医薬組成物の調製用キットを提供する。かかるキットは、本発明の適当な前駆体、好ましくは滅菌された非発熱性の形態の前駆体を含んでいて、滅菌造影基源との反応で所望の医薬組成物を最低限の操作数で生ずる。かかる配慮は、放射性医薬品、特に放射性同位体の半減期が比較的短い放射性医薬品に対して重要であり、取扱いの容易さ及び放射性医薬品の取扱者の放射線被曝量の低減という点でも重要である。したがって、かかるキットの再構成用の反応溶媒は、好ましくは上記で定義した「生体適合性担体」であり、最も好ましくは水性担体である。
【０１２３】
キットの容器として適しているのは、無菌健全性及び／又は放射能の安全性並びに適宜、不活性ヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）を維持することができ、しかも、シリンジで溶液の添加及び吸引もできる密封容器である。かかる容器として好ましいのはセプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通例アルミニウム製）でクリンプしたものである。かかる容器は、適宜、例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気などのため、蓋が真空に耐えることができるという追加の利点も有する。
【０１２４】
前駆体をキットに用いる際の好ましい態様は、本発明の造影剤の合成法に関して上記で説明した通りである。キットに用いられる前駆体は、望ましい無菌の非発熱性物質を生じるように無菌製造条件下で用いられる。前駆体を非無菌条件下で使用し、最後に例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて滅菌してもよい。好ましくは、前駆体は無菌非発熱性の形態で用いられる。最も好ましくは、無菌の非発熱性の前駆体を上述の密封容器内で用いる。
【０１２５】
キットの前駆体は、好ましくは、本発明の造影剤の合成法に関して説明した固形担体マトリックスに共有結合させた形態で供給される。
【０１２６】
９９ｍＴｃ用には、キットは好ましくは凍結乾燥したもので、９９ｍＴｃ放射性同位体ジェネレータからの無菌９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸（ＴｃＯ４−）で再構成すれば、それ以上操作しなくてもヒトへの投与に適した溶液が得られるように設計される。適当なキットは、上述の未錯化キレート剤を、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような薬学的に許容される還元剤、並びに弱有機酸と生体適合性陽イオンとの１種以上の塩と共に収容した容器（例えばセプタムシールバイアル）を備える。「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化し負に荷電した基と塩を形成する正に荷電した対イオンであって、該正に荷電した対イオンが無毒性で、哺乳類の身体、特に人体への投与に適しているものを意味する。好適な生体適合性陽イオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【０１２７】
９９ｍＴｃ造影剤の調製用キットは、適宜、トランスキレーターとして機能する第二の弱有機酸又はその生体適合性陽イオンとの塩をさらに含んでいてもよい。トランスキレーターは、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、次いでキットのキレート剤で置き換えられる化合物である。これは、テクネチウム錯形成と競合する過テクネチウム酸の迅速な還元に起因した還元型加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）が形成されるおそれを最小限に抑制する。かかるトランスキレーターとして適しているのは、上述の弱有機酸及びその塩であり、好ましくは、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプタン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、好ましくはホスホン酸塩、特に好ましくはジホスホン酸塩である。かかる好ましいトランスキレーターは、ＭＤＰ（メチレンジホスホン酸）又はその生体適合性陽イオンとの塩である。
【０１２８】
遊離型のキレート剤の使用に代えて、９９ｍＴｃ造影剤の調製用キットは、適宜、キレート剤の非放射性金属錯体を含んでいてもよく、テクネチウムを添加すると、トランスメタレーション（配位子交換）によって所望の生成物を生じる。かかるトランスメタレーションに適した錯体は銅又は亜鉛錯体である。
【０１２９】
キットに用いられる薬学的に許容される還元剤は、好ましくは、塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズのような第一スズ塩であり、これらは無水塩でも水和塩でもよい。第一スズ塩は好ましくは塩化第一スズ又はフッ化第一スズである。
【０１３０】
キットは、適宜、放射線防護剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤又は充填剤のような追加の成分をさらに含んでいてもよい。
【０１３１】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元過程のような分解反応を阻害する化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（すなわち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（すなわち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）並びにこれらと生体適合性陽イオンとの塩から選択される。「生体適合性陽イオン」及びその好適な実施形態は上述の通りである。
【０１３２】
「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、濃度に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、再構成後の医薬組成物（つまり、造影剤自体）での微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌保存剤は、再構成前のキットの１以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類、すなわちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。
【０１３３】
「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成したキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類への投与に関して許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかる適当なｐＨ調節剤としては、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容される塩基が挙げられる。コンジュゲートを酸塩の形態で用いる場合、キットのユーザーが多段階法の一部としてｐＨを調節できるようにｐＨ調節剤を適宜別のバイアル又は容器で提供してもよい。
【０１３４】
「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩並びに水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【０１３５】
本発明の造影剤は、インビボイメージングに有用である。したがって、別の態様では、本発明は、インビボ診断又はイメージング法、例えばＳＰＥＣＴ又はＰＥＴに用いる造影剤を提供する。好ましくは、この方法は、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボイメージングに関する方法であり、肝線維症、うっ血性心不全、糸球体硬化症及び呼吸不全のように、線維症に関連した病態の診断に有用である。最も好ましい実施形態では、上記病態は、ＨＳＣ及び肝実質細胞でＭ６Ｐ受容体が上方制御されることが知られている肝線維症である。
【０１３６】
本発明のこの態様では、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象でインビボ診断又は造影する方法であって、上述の本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。対象は好ましくは哺乳類であり、最も好ましくはヒトである。別の実施形態では、本発明のこの態様は、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象のインビボイメージングにおける本発明の造影剤の使用であって、対象に本発明の医薬組成物を予め投与しておく使用を提供する。「予め投与」とは、医療従事者が関与する段階であり、患者には医薬品が投与されていること、例えば、静脈内注射が既に実施されていることを意味する。
【０１３７】
本発明のこの態様には、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボ画像診断用の医薬品の製造における本発明の造影剤の使用も包含される。
【０１３８】
さらに別の態様では、本発明は、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、本発明の造影剤を身体に投与し、造影剤の取込を検出し、任意ではあるが好ましくは、上記投与と検出を、例えば上記薬剤による治療の前後途中のいずれかに繰り返すことを含んでなる方法を提供する。
【０１３９】
実施例の簡単な説明
実施例１では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片（ＩＧＦ化合物１）の合成について記載する。
【０１４０】
実施例２では、保護テトラアミンキレート化合物であるテトラ−Ｂｏｃ−テトラアミンＮＨＳエステル（保護キレートＺ）の合成について記載する。
【０１４１】
実施例３では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片にキレートＺを結合させて、９９ｍＴｃ標識に適した本発明の前駆体（ＩＧＦ前駆体１）を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４２】
実施例４では、ＩＧＦ前駆体１を９９ｍＴｃで標識してＩＧＦ造影剤１を形成する方法について記載する。
【０１４３】
実施例５では、ジアミンジオキシムキレートであるキレートＸ（すなわち式ＸｂでＧ＝Ｃのもの）の合成について記載する。
【０１４４】
実施例６では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片にキレートＸを結合させて、９９ｍＴｃ標識に適した本発明の前駆体（ＩＧＦ前駆体２）を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４５】
実施例７では、ＩＧＦ前駆体２を９９ｍＴｃで標識してＩＧＦ造影剤２を形成する方法について記載する。
【０１４６】
実施例８では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片にヨウ素化ボルトン−ハンター基を結合させて、本発明の放射性ヨウ素化造影剤（非放射性ＩＧＦ造影剤３）の非放射性型を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４７】
実施例９では、レチノイン酸誘導体レチノイル−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（レチノイン酸前駆体１）の合成について記載する。
【０１４８】
実施例１０では、レチノイン酸誘導体レチノイル−ＰＥＧ−Ｌｙｓにヨウ素化ボルトン−ハンター基を結合させて、本発明の放射性ヨウ素化造影剤（非放射性レチノイン酸造影剤１）の非放射性型を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４９】
実施例１１では、１２３Ｉ標識糖ペプチド造影剤１の合成について記載する。
【実施例】
【０１５０】
実施例で用いた略語のリスト
ＡｃＯＨ：酢酸
Ｃ１８：炭素原子数１８の炭素鎖
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄｅ：ジクロロジフェニルジクロロエチレン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＥＭＳ：エチルメチルスルフィド
ＦＭｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＢＨＡ：４−メチルベンズヒドリルアミン
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＯｔＢｕ：ｔ−ブチルエステル
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール
Ｐｍｃ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
ｔＢｕ：ｔ−ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ：テトラフルオロエチレン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン。
【０１５１】
実施例１：ＩＧＦ化合物１［Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ法を用いて、０．２５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂から出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成装置でペプチジル樹脂Ｈ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒを合成した。カップリング段階では、ＨＢＴＵを用いて予め活性化しておいたアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。
【０１５２】
Ｆｍｏｃ−アミノＰＥＧジグリコール酸（１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解して５分間放置した。この混合物を、上記ペプチジル樹脂に加えて一晩反応させた。最後のＦｍｏｃの脱保護は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて行った。
【０１５３】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し風乾した。
【０１５４】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３１．５分）による精製で、６ｍｇの精製標品を得た。精製標品を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分，カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．８９分）で分析した。さらに質量分析で生成物のキャラクタリゼーションを行った（ＭＨ＋計算値：１２４１．７，ＭＨ＋実測値：１２４７．７）。
【０１５５】
実施例２：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（保護キレートＺ）の合成
段階（ａ）：２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）テトラヒドロピラン
６−クロロヘキサノール（６．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（５００ｍｇ）を乾燥エーテル（７５ｍｌ）に溶解し、氷浴中で０〜５℃まで冷却した。攪拌しながら、乾燥エーテル（２５ｍｌ）中のジヒドロピラン（４．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０分間滴下した。添加完了後、冷却浴を取り除き、１６時間攪拌した。溶液を水で抽出し（５０ｍｌ×２）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発したところ、薄黄色油状物が得られた。この油状物は、１３Ｃ−ＮＭＲ分光分析で十分に純粋であり、それ以上精製しなくてもその後の反応に使用できることが判明した。収量１０．１ｇ（９１％）。
【０１５６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．３０−１．７１（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ２×７），３．２４−３．３２（１Ｈ３．４１−３．４８（３Ｈ，ｍ ＣＨ ａｎｄ ＣＨ２），３．６０−３．６７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７２−３．８２（１Ｈ，ｂｍ，ＣＨ），４．４４−４．４９（１Ｈ，ｂｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１５７】
段階（ｂ）：２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル
乾燥窒素ブランケット中、撹拌しながら、乾燥エタノール（１００ｍｌ）に少量のナトリウム（１．１３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を溶解した。マロン酸ジエチル（８．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を一度に加え、溶液を６０℃で１時間加熱した。２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）−テトラヒドロピラン（９．３ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を一度に加え、温度を７５〜８０℃に上げて、この温度に２４時間保った。冷却後、無機固形物を濾過で除き、濾液から溶媒を蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に溶解し、水で抽出し（３０ｍｌ×２）、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、揮発分を除去して、薄黄色油状物を得た。この油状物を、溶出液として石油エーテル４０：６０／エーテル（２００：４０）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。所要生成物はｒｆ＝０．１５で溶出し、無色油状物として単離した。収量８．７ｇ、（６０％）。
【０１５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１０−１．２５（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ３×２，ＣＨ２×４），１．３６−１．５０（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３），１．７０−１．８１（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），３．１７−３．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），３，５６−３．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７０−３．８０（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨ），４．０４−４．１６（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ２×２），４．０３−４．０８（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１５９】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノ−エチル）−２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロンアミド
２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル（５．１ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を、１，２−ジアミノエタン（１０ｇ、１６７ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で１６時間撹拌した。揮発分を真空中（４０〜５０℃、０．０１ｍｍＨｇ）で除去して、薄緑色の粘稠残渣を得て、これをカラムクロマトグラフィーにかけてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（５０：５０：５）で溶出したところ、標記化合物がｒｆ＝０．２で薄緑色の粘稠油状物として溶出した。これを放置すると固化した（収量：３．９ｇ、７１％）。
【０１６０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１５−１．２８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．３９−１．４４（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３），１．６９−１．７４（４Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×２），２．６４（４Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２×２），２．７３４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈz，ＣＨ２×２），３．０８−３．２９（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２×３），３．３５−３．４１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．５５−３．６３（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７０−３．７８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．４３（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝４Ｈz，ＯＣＨＯ），７．７８（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝５Ｈz，ＯＣＮＨ×２）。
【０１６１】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：−３４１７，３０８２，２９３６，２８６２，１６６３，１５５８，１４３９，１３５４，１３２３，１２６１，１２００，１１８９，１０７６，１０２６，９５６，９０７，８６７，８１０。
【０１６２】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシ−ヘキシル）−マロンアミド
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロンアミド（３．９ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８．５ｇ、３ｍｍｏｌ）及びエタノール（５０ｍｌ）を７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、ｐＨ９の状態に達するまで濃水酸化アンモニウム（．８８０）を滴下した。沈殿した白色固体をセライトで濾別し、フィルターケークをエタノール（３０ｍｌ）で洗浄した。エタノールを減圧下（１５ｍｍＨｇ、４０℃）で除去して、半固形ワックスを得た。この残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにかけて、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（１００：５０：１０）で溶出したところ、標記化合物のｒｆは０．２であった。この生成物を集め、エタノール（１００ｍｌ×３）で共蒸留して、残留水分を完全に蒸発させた。薄緑色の粘稠残渣が得られ、これを放置すると固化した（収量２．１ｇ、６９％）。
【０１６３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ１．２８−１．３８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．４６−１．５５（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），１．７９−１．８７（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），２．７３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈz，Ｈ２ＮＣＨ２×２），３．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＣＨ），３．２７（４Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６及び２Ｈz，ＨＮＣＨ２×２），３．５３（２Ｈｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＯＣＨ２）。
【０１６４】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ１３Ｈ２９Ｎ４Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）の計算値：２８９、実測値：２８９。
【０１６５】
段階（ｅ）： （２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシ−オクチル）−炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥窒素ブランケット中で、ボラン−ジメチルスルフィド付加物（ニート）（１５ｍｌ，１５０ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシヘキシル）マロンアミド（２．１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）とジオキサン（５０ｍｌ）の混合物に、撹拌しながら、シリンジで滴下した。添加終了後、混合物を１１０℃で５日間穏やかに加熱還流した。この間に、ある程度の白色固形分が残った。冷却後に、揮発分を減圧下で除去すると白色固形分が残り、これにメタノール（５０ｍｌ）を滴下して無色溶液を得た。この溶液を、３時間加熱還流し、冷却し、濃ＨＣｌ（５ｍｌ）を加え、７０〜７５℃で４８時間加熱還流を続けた。溶媒を除去して、粘稠緑色の残留物を得て、これをメタノール（１００ｍｌ×３）と共に蒸発させて、薄緑色固形物を得た。この固形物を乾燥メタノールに再度溶解し、無水炭酸カリウム（４．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。無機固形物をセライトによる濾過で除き、濾液から溶媒を蒸発させて粘稠残渣を得た。この残渣を水（５０ｍｌ）と混合し、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ×３）で抽出した。有機画分を一緒にし、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させて、淡黄色残留物を得た。
【０１６６】
注：この時点では、１３Ｃ−ＮＭＲで反応を監視するのがよい。
【０１６７】
残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにかけて、溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５：５）を用いて溶出したところ、標記化合物はｒｆ＝０．４１で溶出し、無色粘稠油状物として単離された（収量２．５ｇ、５２％）。
【０１６８】
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２５．６（ＣＨ２），２６．４（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ３×１２），２９．８（ＣＨ２×２），３２．６（ＣＨ２），３６．５（ｖｅｒｙ ｂｒｏａｄ，ＣＨ），３９．２（ＮＣＨ２×２，ａｄｊａｃｅｎｔ ＣＨ），４６．９（ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ，ＨＮＣＨ２×２），５０．０（ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ，ＮＣＨ２×２），６２．４（ＨＯＣＨ２），７９．０（ＯＣ×２），７９．９（ＯＣ×２），１５６．４（ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１６９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０５−１．１８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２７（１８ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ｂｕｔｙｌ），１．３１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ｂｕｔｙｌ），１．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８１（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．６３（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ），２．９８（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１１（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ２Ｏ），５．２（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１７０】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６５Ｎ４Ｏ９（Ｍ＋Ｈ）の計算値：６６１、実測値：６６１。
【０１７１】
段階（ｆ）：トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチルエステル
（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５２ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）を室温で撹拌し、溶媒をゆっくりと蒸発させた。反応を炭素ＮＭＲで監視したところ、３日間後の時点で、少量の出発原料が残存していた。反応体積をＣＨ２Ｃｌ２で３０ｍｌとし、水で抽出し（５０ｍｌ×３）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させると、褐色残留物が残った。この残留物を、溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００：５）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。最初に溶出した化合物は未反応トシルクロリドで、ｒｆ＝０．９５で溶出した。標記化合物はｒｆ＝０．２で溶出し、淡黄色の粘稠油状物として単離された。収量（１．２０ｇ、３９％）。
【０１７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．８８（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３トシル），３．１０−３．１２（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１９（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．９３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＣＨ２ＯＴｓ），５．０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．０８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），７．２９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ×２，Ａｒ），７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ×２，Ａｒ）。
【０１７３】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ４０Ｈ７１Ｎ４Ｏ１１Ｓ（Ｍ＋Ｈ）の計算値：８１５、実測値：８１５。
【０１７４】
段階（ｇ）：（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］メチル｝−オクチルエステル（１．１０５ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（３５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びメタノール（１０ｍｌ）を、７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、メタノールを、室温で減圧下にて除去したところ、約１〜２ｍｌが残った。この残留物を水（２５ｍｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ×４）で抽出した。有機抽出物を一緒にして、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、揮発成分を室温で蒸発させたところ（注：アジド類は、爆発の危険性があるので、この段階は安全防護シールド内で行うべきである。）、淡黄色の粘稠残渣が残存し、この残留物は純粋な所望化合物であった（収量：８２０ｍｇ、８８％）。
【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４７（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝６．５Ｈz，ＣＨ２ ａｄｊａｃｅｎｔ ＣＨ），１．８６（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．９５−３．０５（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．０５−３．２０（１０Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４及びＣＨ２Ｎ３），５．０９（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１７６】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：−３３５０，２９７４，２９３２，２８６０，２０９７（強いバンドＮ３），１６９４，１５２０，１４７０，１４１８，１３９１，１３６６，１２５０，１１６７，１０６９，８７０，７７７。
【０１７７】
段階（ｈ）：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物２）
（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、木炭担持１０％パラジウム（１００ｍｇ）及びメタノール（１０ｍｌ）を、３０気圧の圧力及び室温で１６時間処理した。固形分をセライトによる濾過によって濾別し、フィルターケークをメタノール（５０ｍｌ）で洗浄した。揮発成分を濾液から除去すると、粘稠油状物が得られたが、この油状物は純粋な所望物質であった（収量：７００ｍｇ、８９％）。
【０１７８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．２７（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ３×６及びＣＨ２），１．７７（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．４０（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＣＨ２ＮＨ２），２．９７（４Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×２），３．００−３．１６（８Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×４），５．２１（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．３０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）。
【０１７９】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６６Ｎ５Ｏ８（Ｍ＋Ｈ）の計算値：６６０、実測値：６６０。
【０１８０】
実施例３：ＩＧＦ前駆体１［テトラアミン−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
ペプチジル樹脂Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のｔｅｔｒａ−Ｂｏｃ−テトラアミンＮＨＳエステル（０．０５ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）で３日間処理した。反応試薬を濾過によって濾別し、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０１８１】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し、空気で乾燥させた。
【０１８２】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２５分）による精製で、３８ｍｇの精製標品を得た。精製標品を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．０５分）で分析した。さらに質量分析で生成物のキャラクタリゼーションを行った（ＭＨ＋計算値：１４４１．８、ＭＨ＋実測値：１４４１．７）。
【０１８３】
実施例４：ＩＧＦ前駆体１の９９ｍＴｃによる放射性標識の付与（ＩＧＦ造影剤１の製造）
窒素パージしたＰ４６バイアルに、以下のものを加えて、９９ｍＴｃ錯体を製造した。
【０１８４】
１００μｇのＩＧＦ前駆体１又は２のＭｅＯＨ溶液、
０．５ｍｌのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３緩衝液（ｐＨ９．２）、
０．５ｍｌの、９９ｍＴｃジェネレータから得たＴｃＯ４−、
０．１ｍｌのＳｎＣｌ２／ＭＤＰ溶液（１０．２ｍｇのＳｎＣｌ２と１０１ｍｇのメチレンジホスホン酸との１００ｍｌのＮ２パージした生理食塩水溶液）。
【０１８５】
ＩＴＬＣ（インスタント薄層クロマトグラフィー）を用いてＲＣＰを測定した。ＩＧＦ前駆体Ｉについては、ＳＧプレートと移動相（ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＡｃ（０．１Ｍ）１：１）で、ＲＨＴ（還元加水分解Ｔｃ）は起点に、過テクネチウム酸は溶媒先端に、テクネチウム錯体は中間のＲｆにみられた。
【０１８６】
反応混合物を逆相ＨＰＬＣ（ＸｔｅｒｒａカラムＲＰ１８、３．５μｇ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ）で分析した。ＩＧＦ前駆体ＩについてのＨＰＬＣ条件は以下の通りであった。
【０１８７】
溶媒Ａ：０．０７％アンモニア水溶液
溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ
０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
１０分：４０％溶媒Ａ、６０％溶媒Ｂ
１５分：４０％溶媒Ａ、６０％溶媒Ｂ
１７分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
２０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ。
【０１８８】
実施例５：キレートＸ［ｂｉｓ［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン］の合成
（段階ａ）：トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタンの調製
メタノール（２００ｍｌ）中の３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を（１０％パラジウム担持木炭：水５０％）（９ｇ）と共に水素ガス雰囲気下（３．５ｂａｒ）で３０時間振盪した。溶液を、珪藻土で濾過し、真空濃縮して３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを油状物として得た、収量（８４．９ｇ、９４％）。
【０１８９】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ２．４８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz，３×ＣＨ２），２．７８（１Ｈ，ｈｅｘｔｅｔ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ，）３．７（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）。
【０１９０】
（段階ｂ）：トリメチルエステルのｐ−メトキシ−ベンジルアミンとのアミド化
トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタン［２ｇ、８．４ｍｍｏｌ］をｐ−メトキシ−ベンジルアミン（２５ｇ、１７８．６ｍｍｏｌ）に溶解した。蒸留用の装置を組み立て、窒素気流下１２０℃で２４時間加熱した。反応の進行は回収メタノール量によって監視した。反応混合物を周囲温度まで冷却し、酢酸エチル３０ｍｌを加え、次いで沈殿したトリアミド生成物を３０分間攪拌した。トリアミドを濾過で単離し、フィルターケークを十分量の酢酸エチルで数回洗浄して過剰のｐ−メトキシ−ベンジルアミンを除去した。乾燥後、４．６ｇ、１００％の白色粉末を得た。この高度に不溶性の生成物は、それ以上精製もキャラクタリゼーションもせずに、そのまま次の段階に使用した。
【０１９１】
（段階ｃ）：１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタンの調製
氷水浴中で冷却しておいた１０００ｍｌの三口丸底フラスコに、段階２（ａ）で得たトリアミド（１０ｇ、１７．８９ｍｍｏｌ）を、２５０ｍｌの１Ｍボラン溶液（３．５ｇ、２４４．３ｍｍｏｌのボラン）に注意深く加える。添加後、氷水浴を取り外し、反応混合物を６０℃までゆっくりと加熱する。反応混合物を６０℃で２０時間撹拌する。反応混合物のサンプル（１ｍｌ）を採取し、０．５ｍｌの５Ｎ ＨＣｌと混合し、３０分間静置した。サンプルに、０．５ｍｌの５０ＮａＯＨを加え、次いで２ｍｌの水を加え、白色沈殿が完全に溶解するまで溶液を撹拌した。溶液をエーテル（５ｍｌ）で抽出し、蒸発させた。残留物をアセトニトリルに１ｍｇ／ｍｌ濃度で溶解し、ＭＳで分析した。ＭＳスペクトルにモノアミン及びジアミン（Ｍ＋Ｈ／ｚ＝５２０及び５３４）が見られる場合は、反応は完結していない。反応を完結させるには、さらに１ＭボランＴＨＦ溶液１００ｍｌを加え、反応混合物を６０℃でさらに６時間攪拌し、上述のサンプリング法で新たなサンプルを抽出する。トリアミンへの転化が完結するまで、必要に応じて１ＭボランＴＨＦ溶液の追加を続ける。
【０１９２】
反応混合物を周囲温度まで冷却し、５ＮのＨＣｌをゆっくりと加える［注意：活発な発泡が起こる］。ＨＣｌは、気体の発生が観察されなくなるまで加えた。混合物を３０分間撹拌し、次いで蒸発させた。ケークをＮａＯＨ水溶液に懸濁し（２０〜４０％、１：２ｗ／ｖ）、３０分間撹拌した。混合物を水（３倍容）で希釈した。次に、混合物をジエチルエーテル（２×１５０ｍｌ）で抽出した［注意：ハロゲン化溶媒は使用しないこと］。次に、有機相を一緒にして、水（１×２００ｍｌ）及び食塩水（１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。蒸発後の収量：７．６ｇ、８４％（油状物）。
【０１９３】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ：１．４５，（６Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２；１．５４，（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，ＣＨ）；２．６０（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ）；３．６８（６Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ２）；３．７８（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３Ｏ）；６．９４（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）．７．２０（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）。
【０１９４】
（段階ｄ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの調製
１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタン（２０．０ｇ、０．０３６ｍｏｌ）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５．０ｇ）を加えた。混合物の水素添加を行い（３ｂａｒ、１００℃、オートクレーブ中）、５時間撹拌した。Ｐｄ（ＯＨ）２を、さらに、１０時間後と１５時間後に２回に分けて加えた（２×５ｇ）。
【０１９５】
反応混合物を濾過し、濾液をメタノールで洗浄した。有機相を一緒にして蒸発させ、残留物を減圧蒸留（１×１０−２、１１０℃）して、２．６０ｇ（５０％）の１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンを得た。
【０１９６】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ２．７２（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ），１．４１（Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，ＣＨ），１．３９（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１９７】
ＮＭＲ １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ３９．８（ＣＨ２ＮＨ２），３８．２（ＣＨ２．），３１．０（ＣＨ）。
【０１９８】
（段階ｅ）：キレートＸ（すなわち、式ＺａでＧ＝Ｃのもの）の調製
トリス（２−アミノエチル）メタン（４．０４７ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の乾燥エタノール（３０ｍｌ）溶液に、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、２当量）を、窒素雰囲気中室温で激しく撹拌しながら加えた。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（７．５６ｇ、５５．８ｍｏｌ、２当量）の溶液を乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくりと滴下した。反応はシリカプレート上のＴＬＣで追跡した［ジクロロメタン、メタノール、濃（比重０．８８）アンモニア、１００／３０／５で展開、ＴＬＣプレートはニンヒドリンをスプレーして加熱することによって発色させた］。モノ−、ジ−及びトリアルキル化生成物が観察され、ＲＦはその順で上昇していた。分析用ＨＰＬＣは、ＲＰＲ逆相カラムを使用して３％アンモニア水中７．５〜７５％アセトニトリルの勾配で行った。反応生成物を真空濃縮してエタノールを除去し、水（１１０ｍｌ）に再懸濁した。水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出して、トリアルキル化化合物の一部及び親油性不純物を除去し、モノ及び所望のジアルキル化生成物を水層に残した。良好なクロマトグラフィーを確保するため、水溶液を酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）で緩衝化した。水溶液を４℃で一晩保存してから、自動化分取ＨＰＬＣで精製を行った。
【０１９９】
収量（２．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ、２３％）。
【０２００】
質量分析：正イオン１０Ｖコーン電圧、実測値：３４４、計算値（Ｍ＋Ｈ）＝３４４。
【０２０１】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ１．２４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３），１．３（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３），１．２５−１．７５（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２，ＣＨ），（３Ｈ，ｓ，２×ＣＨ２），２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．８８（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｎ２），５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ２，２×ＮＨ，２×ＯＨ）。
【０２０２】
ＮＭＲ １３Ｃ（（ＣＤ３）２ＳＯ），δ９．０（４×ＣＨ３），２５．８（２×ＣＨ３），３１．０，２×ＣＨ２，３４．６，ＣＨ２，５６．８，２×ＣＨ２Ｎ；１６０．３，Ｃ＝Ｎ。
【０２０３】
ＨＰＬＣ条件：流速８ｍｌ／分、２５ｍｍＰＲＰカラムを使用
Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水、Ｂ＝アセトニトリル
時間 Ｂ（％）
０ ７．５
１５ ７５．０
２０ ７５．０
２２ ７．５
３０ ７．５
１回のラン当り３ｍｌの水溶液をロードし、１２．５〜１３．５分の時間枠で回収する。
【０２０４】
実施例６：ＩＧＦ前駆体２［キレートＸ−グルタリル−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
ペプチジル樹脂Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、キレートＸ−グルタリルテトラフルオロチオフェノールエステル（０．１ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液で三日間処理した。反応試薬を濾過によって濾別し、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０２０５】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し、風乾させた。
【０２０６】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：２０〜４０％のＢ、６０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：１３分）による精製で、３５ｍｇの純粋標品を得た。この純粋標品を、分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜５０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．６０分）で分析した。生成物を質量分析によってさらに調べた（ＭＨ＋計算値：１６８１．０、ＭＨ＋実測値：１６８１．１）。
【０２０７】
実施例７：ＩＧＦ前駆体２の放射性標識（ＩＧＦ造影剤２の形成）
上記実施例４に記載した方法を、以下のＨＰＬＣ及びＴＬＣを用いて、９９ｍＴｃによる標識を実施した。
【０２０８】
ＨＰＬＣ
溶媒Ａ：ＴＦＡの０．１％水溶液
溶媒Ｂ：ＴＦＡの０．１％ＭｅＣＮ溶液
０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
１０分：６０％溶媒Ａ、４０％溶媒Ｂ
１５分：６０％溶媒Ａ、４０％溶媒Ｂ
１７分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
２０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ。
【０２０９】
ＴＬＣ ＳＧプレート及び生理食塩水の移動相では、過テクネチウム酸は溶媒先端で観察され、ワットマン１プレートとＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ、１：１の移動相では、ＲＨＴは起点で観察された。
【０２１０】
実施例８：非放射性ＩＧＦ造影剤３［３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオネート−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
ペプチジル樹脂Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−スクシンイミジル−３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオネート（０．１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液で３日かけて処理した。反応試薬を濾過によって濾別し、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０２１１】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し、空気で乾燥させた。
【０２１２】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜５０％のＢ、６０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２７分）による精製で、５ｍｇの精製標品を得た。精製標品を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜５０％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分，カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．０３分）で分析した。さらに質量分析で生成物のキャラクタリゼーションを行った（ＭＨ＋計算値：１５１５．６，ＭＨ＋実測値：１５１５．８）。
【０２１３】
実施例９：レチノイン酸前駆体１［レチノイル−ＰＥＧ（１２）−プロピオニル−Ｌｙｓ−ＯＨ］の合成
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、０．４ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン中で、標準的な方法によって、ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍｍｏｌ）を塩基として用いて、過剰の２−クロロトリチルクロリド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）に結合させた。樹脂を、ジクロロメタン／メタノール／ジイソプロピルエチルアミン（１７：２：１）混合物、ジクロロメタン及びＤＭＦで洗浄した。Ｆｍｏｃ基を、標準的なピペリジンによる処理で脱離させ、Ｆｍｏｃ−アミノＰＥＧ（１２）−プロピオン酸（Ｐｏｌｙｐｕｒｅ ＡＳ、０．６ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ（０．６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍｍｏｌ）を用いてカップリングした。反応が完了したことを、標準的なカイザー法（Ｋａｉｓｅｒ ｔｅｓｔ）で確認した。Ｆｍｏｃ基の脱離後、レチノイン酸（Ｆｌｕｋａ、０．６ｍｍｏｌ）を、同じカップリング条件を使用してカップリングさせた。Ｄｄｅ保護基を、ＤＭＦ中で２％ヒドラジン水和物で処理することにより除去した（３×２分）。
【０２１４】
得られた樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ／ＴＦＥ／ＤＣＭ（２：２：６、１０ｍＬ）溶液で４５分間処理した。樹脂を濾過で除き、ヘキサン（２００ｍＬ）を濾液に加え、混合物を減圧蒸発させた。
【０２１５】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：３０〜８０％Ｂ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３３分）による精製で、１７ｍｇの純粋標品を得た。この純粋標品を、分析用（勾配：３０〜８０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．１１分）で分析した。生成物を質量分析によってさらに分析した（ＭＨ＋計算値：１０２８．７、ＭＨ＋実測値：１０２８．７）。
【０２１６】
実施例１０：非放射性レチノイン酸造影剤１［レチノイル−ＰＥＧ（１２）−プロピオニル−Ｌｙｓ（３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオニル）−ＯＨ）］の合成
樹脂レチノイル−ＰＥＧ（１２）−プロピオニル−Ｌｙｓ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−スクシンイミジル−３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオネート（０．１ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液で、２０時間処理した。反応試薬を濾過で除き、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭによって洗浄した。
【０２１７】
上記の樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ／ＴＦＥ／ＤＣＭ（２：２：６、１０ｍＬ）溶液で２時間処理した。樹脂を濾過で除去し、ヘキサン（２００ｍＬ）を濾液に加え、混合物を減圧蒸発させた。
【０２１８】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：５０〜１００％のＢ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３１分）による精製で、１７ｍｇの純粋標品を得た。この純粋標品を、分析用ＨＰＬＣ（勾配：５０〜９５％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％のＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．２４分）で分析した。生成物を質量分析によってさらに分析した（ＭＨ＋計算値：１３０２．６、ＭＨ＋実測値：１３０２．６）。
【０２１９】
実施例１１：１２３Ｉ標識糖ペプチド造影剤１の合成
【０２２０】
【化２１】
上記の糖ペプチド造影剤１の前駆体を以下の通り放射性標識した。
【０２２１】
１０μｌの１２７ＮａＩ（１５ｍｇ／０．０１ＭのＮａＯＨ１００ｍｌ）溶液（１×１０−８ｍｏｌの１２７ＮａＩを含有）を、まず、マイクロ遠心管中の２００μｌの酢酸アンモニウム緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ４）に加えた。次に、１２７ＮａＩ／ＮＨ４ＯＡｃ溶液を、１２３Ｉ−ＮａＩの０．０５ＭのＮａＯＨ溶液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）（活性、１０ｍＣｉ（３６４ｍＣｉ／ｍｌ））に加え、溶液をよく混合した。５μｌの過酢酸（３６〜４０ｗｔ％酢酸溶液）を５ｍｌのＨ２Ｏに加え、よく混合し、１０μｌの希釈溶液を１２３／１２７Ｉ−ＮａＩ反応混合物に加えた。
【０２２２】
１００μｌの前駆体（０．７４ｍＭの水溶液）を反応混合物に加え、ピペットで混合し、５分後に反応を分析した。生成物を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａカラム５μ、Ｃ１８（２）１００Ａ、１５０×４．６ｍｍを用いたＨＰＬＣで分析又は精製した。
【０２２３】
溶媒Ａ：ＴＦＡの０．１％水溶液
溶媒Ｂ：ＴＦＡの０．１％アセトニトリル溶液
２分：１００％溶媒Ａ、０％溶媒Ｂ
２０分：５０％溶媒Ａ、５０％溶媒Ｂ
２５分：１０％溶媒Ａ、９０％溶媒Ｂ
３５分：１０％溶媒Ａ、９０％溶媒Ｂ
３６分：１００％溶媒Ａ、０％溶媒Ｂ
４３分：１００％溶媒Ａ、０％溶媒Ｂ。
【０２２４】
かかる条件でのＭ６Ｐ造影剤１の保持時間は９．９分である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、画像診断、特に線維症の画像診断に関する。この目的に適した診断用造影剤、特に肝臓、心臓、腎臓及び肺の線維症の画像診断に適した診断用造影剤について開示する。
【背景技術】
【０００２】
線維症は、細胞外マトリックス成分の過剰分泌を特徴とするプロセスである。これは、マトリックスタンパク質、特にＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンの合成増大と分解減少によって起こり、炎症、感染又は損傷に起因する組織損傷に対する反応として引き起こされる。簡単にいうと、線維症は瘢痕組織であり、組織の「修復」プロセス全体の一部をなす。しかし、炎症や感染の進行及び損傷の繰り返しによって、線維症の瘢痕組織が増加し、「機能性」細胞に置き換えられないので、臓器の機能に異常をきたし、ひいては臓器不全を招く。
【０００３】
線維症は医学における重要で古典的な病理過程の一つである。以下に挙げるような世界中で何百万人もの人々が罹患する多くの疾患の重要な構成要素である。
ａ）特発性肺線維症（原因不明の肺線維症）、喘息及び慢性閉塞性肺疾患のような肺疾患、
ｂ）強皮症：体内の結合組織（すなわち、皮膚及び内蔵）中での細胞外マトリックスの過剰蓄積を特徴とする重篤な不均質疾患、
ｃ）移植後の手術後瘢痕、
ｄ）糖尿病性網膜症及び加齢性黄斑変性症（目の線維性疾患で、失明の最大の原因）、
ｅ）アテローム性動脈硬化症及び不安定プラークを始めとする循環器病、
ｆ）糖尿病に関連した腎線維症：糖尿病性腎症及び糸球体硬化症、
ｇ）ＩｇＡ腎症（腎不全の原因であり、透析及び再移植が必要となる。）、
ｈ）肝硬変及び胆道閉鎖症（肝線維症及び肝不全の最大の原因）、
ｉ）関節リウマチ、
ｊ）皮膚筋炎のような自己免疫疾患、
ｋ）うっ血性心不全。
【０００４】
線維症の臨床症状は変化に富む。肝硬変を例にとると、臨床症状は、症状の全くないものから肝不全まで様々であり、根底にある肝疾患の性状及び程度、さらには肝線維症の程度によって決まる。肝硬変の患者の４０％以下は無症状で、十年以上無症状であることもあるが、ひとたび腹水、静脈瘤出血、脳症などの合併症を発症すると、進行性機能低下は避けられない。肝線維症及び肝硬変は、ウイルス、自己免疫、薬物性、コレステロール性及び代謝疾患を始めとする様々な原因に由来する慢性肝障害の持続性創傷治癒反応の結果であるといえる。肝線維症及び肝硬変の一般的原因としては、免疫媒介障害、遺伝的異常、糖尿病やメタボリックシンドローム（ＭＳ）に付随することが特に多い非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が挙げられる。西欧ではメタボリックシンドローム（ＭＳ）の割合が高い。メタボリックシンドロームは通例肥満で高脂血症や高血圧の個体で起こり、ＩＩ型糖尿病の発症につながることが多い。メタボリックシンドロームの肝臓での症状は、非アルコール性脂肪肝症（ＮＡＦＬＤ）であり、米国での推定罹患率は人口の２４％である。脂肪肝は、非アルコール性脂肪肝症ＮＡＦＬＤの一群の症状としては軽いものであるが、進行すると、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）やひいては肝硬変になる。線維症の発症はかかる進行のリスクを示し、現在では肝臓の生検によって診断されている。しかし、肝臓の生検は、相当の不快感を伴い、リスクもあり、費用もかさむ。さらに、肝線維症に関して現在利用可能な血液検査は、ＮＡＦＬＤにおいては信頼性に欠ける。
【０００５】
国際公開第００／２３１１３号には、肝星細胞（ＨＳＣ）を標的とするペプチドと担体分子とを含む化合物が開示されている。標的受容体の例は、ＨＳＣに対して特異的なもの、又は疾患（例えば線維症）時にＨＳＣで上方制御される受容体、例えば血小板由来増殖因子受容体、コラーゲンＶＩ受容体、トランスフォーミング増殖因子β受容体、インターロイキン−１β受容体、腫瘍壊死因子α受容体である。国際公開第００／２３１１３号の別の態様では、標的受容体は、肝線維症での過剰発現が報告されている陽イオン非依存性のマンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）受容体である。適当な担体の例は、ヒト血清アルブミン、タンパク質、ポリマー担体及びリポソームである。これらの開示された化合物は主に薬剤担体であり、あらゆる種類の治療薬のターゲティングに利用できる。担体は好適には５０００Ｄａ超であると開示されている。また、担体は診断のためのＨＳＣの可視化にも利用でき、化合物は別の診断マーカーをさらに含んでもよいと記載されている。しかし、診断マーカーをどのようにして開示された化合物に結合させるかについては記載されていない。
【０００６】
欧州特許出願公開第１４９５７６９号には、アンチセンス法、特にインビボアンチセンス法に用いるための配糖体−化合物コンジュゲートが開示されている。このコンジュゲートは、化合物に結合した配糖体を含んでおり、配糖体は、筋細胞のマンノース−６−リン酸塩受容体と結合し得るリガンドである。インビボ又はインビトロ診断のため、蛍光、放射性、酵素又は分子マーカーを含むように「マーカー」を付したコンジュゲートが挙げられているが、マーカーを付した化合物をどのようにして得るかについては記載されていない。
【特許文献１】国際公開第００／２３１１３号パンフレット
【特許文献２】欧州特許出願公開第１４９５７６９号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、線維症、特に肝線維症を検出するための代替的な非侵襲性検査に対するニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、線維症の非侵襲的な可視化に適した造影剤を提供する。本発明では、造影剤の製造方法、並びに該方法で用いる前駆体も提供する。本発明は、造影剤を含む医薬組成物、並びに医薬組成物の調製用キットも提供する。本発明の別の態様では、インビボイメージング並びにマンノース−６−リン酸塩受容体が上方制御される病態を診断するための薬剤の製造における造影剤の使用を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の一態様では、
（ｉ）マンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）受容体に対する親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）造影基と
を含む造影剤であって、造影基がベクターの一体部分として存在しているか、或いは造影基が適当な化学基を介してベクターと結合している造影剤を提供する。
【００１０】
本発明に関して、「Ｍ６Ｐ受容体」という用語は、具体的には陽イオン非依存性のＭ６Ｐ受容体の細胞外ドメインに関する。
【００１１】
「造影剤」という用語は、哺乳類の特定の生理又は病態生理をターゲティングするように設計された化合物であって、哺乳類の身体に投与した後でインビボで検出できる化合物を意味する。
【００１２】
上述の通り、本発明の造影剤において、造影基はベクターの一体部分として存在していてもよく、例えば、ベクターの構成原子の１つを１２Ｃでなく１１Ｃとすることもできる。或いは、造影基は、適当な化学基（例えば、金属イオンである造影基と錯形成できる金属キレート）を介してベクターに結合していてもよい。ベクターを適当な化学基又は直接造影基自体に結合するためのリンカーが存在していてもよい。本発明の適当なリンカーは式−（Ｌ１）ｎ−のものである。
式中、
各Ｌ１は独立に−ＣＯ−、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、Ｃ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸残基、ポリアルキレングリコール、ポリ乳酸又はポリグリコール酸部分であり、
ｎは０〜２０の整数であり、
各Ｒ基は独立にＨ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル又はＣ１−１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に飽和又は不飽和炭素環又は複素環を形成したものである。
【００１３】
枝分れリンカー基、つまり別のリンカー−（Ｌ２）ｏ−Ｒ′でさらに置換されたリンカー基−（Ｌ１）ｎ−（Ｌ２、ｏ及びＲ′はそれぞれＬ１、ｎ及びＲについて定義した通りである。）も利用できる。
【００１４】
かかるリンカーは、造影剤の体内分布及び／又は分泌プロファイルを操作する場合に特に有用である。例えば、ポリエチレングリコール基又はアセチル基を含むリンカーを導入すると、造影剤の血液滞留時間を改善することができる。
【００１５】
「アミノ酸」という用語は、Ｌ−若しくはＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（ナフチルアラニンなど）又はアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のものであっても純粋な合成品であってもよく、光学的に純粋、つまり単一の鏡像異性体でキラルなものであってもよいし、鏡像異性体の混合物であってもよい。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋である。
【００１６】
かかるリンカーは、以下で説明する本発明の他の部分についても有用である。本発明では、好ましいＬ１基及びＬ２基は、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−及びアミノ酸残基である。
【００１７】
本発明に関して、「親和性」という用語は、インビトロでＭ６Ｐ受容体に対して１００ｎＭ未満、好ましくは５０ｎＭ未満、最も好ましくは１０ｎＭ未満のＫｄ値で結合することを意味する。別法として、親和性は、インビトロでのＭ６Ｐ受容体へのβ−ガラクトシダーゼの結合を阻害する能力としても定義でき（Ｄｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９１，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６６（３２）２１６８７−９２に記載）、ＩＣ５０値は１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満、さらに好ましくは０．１μＭ未満、最も好ましくは０．０１μＭ未満である。親和性は、インビトロでのＭ６Ｐ受容体へのインシュリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）の結合を阻害する能力として定義することもでき（Ｍａｒｒｏｎ Ｐ．Ｇ． ｅｔ ａｌ，１９９８，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７３（３５）、２２３５８−２２３６６）、ＩＣ５０値は１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満、さらに好ましくは０．１μＭ未満、最も好ましくは０．０１μＭ未満である。
【００１８】
本発明の造影剤は、好ましくは、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ペプチド核酸、増殖因子、ワクチン、ビタミン又は抗体がＭ６Ｐベクターに結合していないものである。最も好ましくは、本発明の造影剤は、Ｍ６Ｐベクターに造影基しか結合していないものであり、それ以外のものがＭ６Ｐに結合していないものである。
【００１９】
Ｍ６Ｐ受容体用のベクターは、好ましくは、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１種以上を含む。
【００２０】
（ｉ）６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列又はその断片もしくは類似体、
（ｉｉ）Ｍ６Ｐ、
（ｉｉｉ）二リン酸化糖ペプチド、又は
（ｉｖ）レチノイン酸又はその誘導体。
【００２１】
ＩＧＦ−ＩＩは、Ｍ６Ｐ受容体に高い親和性（ｐＨ７．４でＫｄ０．３〜１４ｎＭ）で結合し、本発明のベクターとしての使用に適している。ＩＧＦ−ＩＩは、配列番号１に示す通り、６７のアミノ酸残基からなる非グリコシル化一本鎖である。好ましくは、６７のアミノ酸からなる配列のペプチド断片又はペプチド類似体を使用し得る。
【００２２】
「ペプチド断片」という用語は、本発明では、６７のアミノ酸からなるＩＧＦ−ＩＩ配列の一部分を含んでいてＭ６Ｐ受容体に対する親和性を保持している天然又は合成ペプチドを意味する。ＩＧＦ−ＩＩ配列のペプチド断片は、５〜６０のアミノ酸残基、好ましくは８〜６０のアミノ酸残基からなる。好ましいペプチド断片は合成ペプチドである。
【００２３】
「ペプチド類似体」という用語は、本発明では、６７のアミノ酸からなるＩＧＦ−ＩＩ配列の全長又は一部を含む天然又は合成ペプチドであって、１以上のアミノ酸残基が代替アミノ酸残基で置換されていてＭ６Ｐ受容体に対する親和性が保持されている天然又は合成ペプチドを意味する。好ましいペプチド類似体は合成ペプチドである。ペプチドの変化を最小限にとどめるため、わずかなアミノ酸残基だけを置換し、保存的置換のみを行うのが慣行である。以下の表に、保存的とみなされる置換の概要をまとめた。
【００２４】
【表１】
ただし、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性が保持される限り、どのようなアミノ酸置換も適している。また、好ましいアミノ酸置換は、インシュリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）受容体よりも、Ｍ６Ｐ受容体に対して向上した特異性を有するペプチド類似体を与える置換である。例えば、ＬｅｕによるＴｙｒ２７の非保存的置換は、ＩＧＦ−Ｉ受容体に対する親和性は低下するものの、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性は保たれる。
【００２５】
以下に、６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列の最も好ましいペプチド断片及びペプチド類似体の例を挙げる。
（ｉ）アミノ酸残基４８〜５５（配列番号２）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉ）アミノ酸残基８〜２８（配列番号３）と４１〜６１（配列番号４）とが直接又は式−（Ｌ３）ｐ−のリンカーを介して結合しているペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉｉ）アミノ酸残基８〜６７（配列番号５）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｖ）以下の各種のアミノ酸残基の置換体：Ｐｈｅ２６Ｓｅｒ（配列番号６）、Ｐｈｅ１９Ｓｅｒ（配列番号７）、Ｇｌｕ１２Ｌｙｓ（配列番号８）、Ｔｙｒ２７Ｌｅｕ（配列番号９）
式中、Ｌ３は上記のＬ１について定義した通りであり、ｐは１〜３０である。
【００２６】
本発明の好ましいＩＧＦ−ＩＩ断片の例は、以下のＩＧＦ化合物１である。
【００２７】
【化１】
これらのペプチドは従来の固相合成で得ることができる。固相ペプチド合成の方法論について最新の概説については、Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ， Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００４８ ２１１−２１を参照されたい。
【００２８】
２以上のＩＧＦ−ＩＩのペプチド断片を、適宜、１以上のリンカー基−（Ｌ３）ｐ−で結合してもよい。ＩＧＦ−ＩＩの２つのペプチド断片を結合する場合には、Ｌ３基がアミノ酸及び／又はＰＥＧであるリンカーが好ましい。リンカーがＰＥＧリンカーのときは、１〜３０のエチレングリコール単位からなるものが好ましい。
【００２９】
ＩＧＦ−ＩＩペプチド及びその断片又は類似体について、造影基の適当な位置としては、ペプチドのアミノ末端及びカルボキシ末端がある。その他の適当な位置は、ペプチドを構成するアミノ酸の側鎖である。好ましくは、ＩＧＦ−ＩＩ又はその断片もしくペプチド類似体を造影基と連結するリンカーが存在する。例えば、上述のＩＧＦ化合物１の場合、造影剤は好ましくはリンカーの末端のアミノ基に位置する。
【００３０】
Ｍ６Ｐを有する数多くの化合物が、本発明の造影剤のベクターとしての使用に適している。かかる化合物の例としては、Ｍ６Ｐ、Ｍ６Ｐ修飾ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及びＭ６Ｐ含有オリゴマンノシド、例えば以下のようなＤｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９１ ２６６（３２）２１６８７−９２に記載されたものが挙げられる（式中、Ｍａｎはマンノースである。）。
（ｉ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合ジマンノシド）
（ｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，３）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，３結合ジマンノシド）
（ｉｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，６）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，６結合ジマンノシド）
（ｉｖ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合トリマンノシド）
（ｖ）次式の二分岐オリゴマンノシド
【００３１】
【化２】
上述の化合物（ｉ）〜（ｖ）を、本明細書では、それぞれ「Ｍ６Ｐ化合物１」〜「Ｍ６Ｐ化合物５」という。上記オリゴ糖化合物の合成は、Ｄｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ１９９１ ２６６（３２）２１６８７−９２及びＳｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７ ５２ ２８６９−７５に記載されている。
【００３２】
Ｍ６Ｐ含有化合物がベクターである場合には、造影基は好適には、Ｍ６Ｐ受容体との結合に関与しないベクターの置換基を介して連結させる。好ましくは、Ｍ６Ｐ含有化合物はＭ６Ｐ化合物１〜６のいずれかであり、造影基がＭ６Ｐ化合物１〜５のカルボキシメチル基を介して又はＭ６Ｐ化合物６のリジン残基のアミンを介して結合している。
【００３３】
別の好ましい実施形態では、Ｍ６Ｐ含有化合物は上述の化合物のいずれかであるが、リン酸塩基の１以上がホスホン酸基で置換された化合物であってもよい。
【００３４】
本発明の造影剤におけるベクターとしての使用に適した他の化合物は、二リン酸化糖ペプチドである。国際公開第９５／０１４０３６号には、かかる化合物でＭ６Ｐ受容体に結合するものが開示されており、これらは炎症その他の疾患の治療に有用であり、それらの合成はＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１９９４ １２９９−１３１０）に記載されている。これらの化合物はいずれも本発明のベクターに適している。これらは次の式Ｉで表すことができる。
【００３５】
【化３】
式中、
Ｒ１及びＲ２は各々独立に（ｉ）グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、ラマノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミニル、フルクトース及びＮ−アセチルノイラミン酸から選択される天然Ｌ又はＤ単糖又はそれらのリン酸化物もしくは硫酸化物並びに（ｉｉ）上記の（ｉ）から選択される単糖からなるオリゴ糖から選択され、
Ａ１及びＡ５は各々独立に−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−アセチル、Ｄ又はＬアミノ酸、ペプチド、糖ペプチド、ペプチド類縁体及びオリゴヌクレオチドから選択され、
Ａ２及びＡ４は各々独立にＤ又はＬ−ヒドロキシアミノ酸、例えば、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｙｌ、Ｈｙｐ、Ｔｙｒ、或いはＤ又はＬカルボキシアミドアミノ酸、例えばＡｓｎ及びＧｌｎであり、
Ａ３は、遺伝的コード又は非コードＤ又はＬ型アミノ酸又はペプチド模倣体又はヌクレオチドからなる群から選択され、
ｍは１〜３０の整数であり、
線状配列Ａ１〜Ａ５のいずれかの残基が共有結合して環状化合物を形成していてもよい。
【００３６】
好ましくは、Ｒ１及びＲ２はＭ６Ｐ基であり、Ａ１はアセチル基であり、Ａ５は−ＮＨ２であり、Ａ２及びＡ４はＴｈｒであり、Ａ３は１〜５アミノ酸残基の鎖である。
【００３７】
最も好ましくは、本発明の二リン酸化糖ペプチドは以下の（ｉ）又は（ｉｉ）である。
（ｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１、２）−α−Ｄ−マンノース］−Ｌｙｓ（アミノベンズアミド）−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１、２）−α−Ｄ−マンノース］−ＮＨ２（「糖ペプチド化合物１」）
（ｉｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−ＮＨ２（「糖ペプチド化合物２」）。
【００３８】
二リン酸化糖ペプチドが、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性を有するベクターである場合、造影基は好ましくは基（Ａ３）ｍに存在するアミノ酸の一つを介して結合する。
【００３９】
別の好ましい実施形態では、二リン酸化糖ペプチドは上述の化合物のいずれかであるが、リン酸塩基の１以上がホスホン酸基で置換された化合物であってもよい。
【００４０】
レチノイン酸はＭ６Ｐ受容体にＩＧＦ−ＩＩ結合部位とは異なる部位で、高い親和性（Ｋｄ、２．４ｎＭ）で結合する。レチノイン酸及びその誘導体は、本発明の造影剤のベクターとして適している。レチノイン酸の構造を以下に示す。
【００４１】
【化４】
本発明で好適なレチノイン酸の誘導体としては、式−（Ｌ４）ｑ−Ｒ″（式中、Ｌ４、ｑ及びＲ″は、Ｌ１、ｎ及びＲについて定義した通りである）の付加によって修飾されたレチノイン酸が挙げられる。Ｒ″は好ましくはアミノ、カルボキシ又はヒドロキシルであり、Ｌ４は好ましくはアミノ酸又はＰＥＧである。リンカーがＰＥＧリンカーの場合には、リンカーは好ましくは１〜２０のエチレングリコール単位からなり、さらに好ましくは１〜１５のエチレングリコール単位からなり、最も好ましくは１〜１２のエチレングリコール単位からなる。
【００４２】
この種の好ましいレチノイン酸誘導体としては、ＰＥＧリンカーと１以上のアミノ酸残基を含むものがある。ＰＥＧリンカーは、得られる造影剤の体内分布及び／又は分泌を調製する手段として１以上の荷電アミノ酸基を含んでいてもよい。
【００４３】
Ｍ６Ｐ受容体用のベクターがレチノイン酸又はその類似体である場合、造影基は好ましくはレチノイン酸のカルボキシ基を介して又はレチノイン酸類似体に存在する反応性基（例えば上述のレチノイン酸化合物１のアミノ又はカルボキシ基）を介してベクターに結合する。
【００４４】
さらに、ベクターは、上述の２種以上のベクターを組み合わせた多価ターゲティングベクターであってもよい。かかるベクターを含む造影剤は、Ｍ６Ｐ受容体が各々のベクターについて独立した結合部位を有しているので、Ｍ６Ｐ受容体に対して向上した親和性を呈すると予想される。かかる多価ベクターの例を以下に示す。
【００４５】
【化５】
２つのＭ６Ｐ基を含む多価ベクターについては、好ましくは上述の枝分れＰＥＧリンカー基で結合される。上記に示したリンカーは式−（Ｌ５）ｒ−のものである（式中、Ｌ５はＬ１について定義したのと同じであり、ｒは１０〜５０である。）。理想的には、リンカーは個々のベクター部分が離隔するように作用して、それらがＭ６Ｐ受容体のそれぞれの結合部位で最適に結合するように配置されるようにする。アミノ酸及び／又はＰＥＧを含むリンカーが好ましい。
【００４６】
造影剤の投与後、「造影基」は患者の体外から検出してもよいし、或いはインビボ用に設計された検出機器、例えば血管内放射線又は光学検出機器（内視鏡など）又は術中用に設計された放射線検出機器を使用することによって検出してもよい。
【００４７】
造影基は、好ましくは、以下の（ｉ）〜（ｖｉｉ）から選択される。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｖｉ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（ｖｉｉ）血管内検出に適したβ線放射体。
【００４８】
造影基が放射性金属イオンつまり放射性金属である場合、好適な放射性金属は、６４Ｃｕ、４８Ｖ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、９４ｍＴｃ又は６８Ｇａのような陽電子放射体、或いは９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ又は６７Ｇａのようなγ線放射体である。好ましい放射性金属は９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ及び１１１Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ放射体、特に９９ｍＴｃである。
【００４９】
造影基が常磁性金属イオンである場合、かかる金属イオンの好適なものとして、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）又はＤｙ（ＩＩＩ）が挙げられる。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）及びＦｅ（ＩＩＩ）であり、Ｇｄ（ＩＩＩ）が特に好ましい。
【００５０】
造影基がγ線放出型放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは好適には１２３Ｉ、１３１Ｉ又は７７Ｂｒから選択される。１２５Ｉは、画像診断用の造影基としての使用には適していないので、特に除外してある。好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは１２３Ｉである。
【００５１】
造影基が陽電子放出型放射性非金属である場合、かかる陽電子放射体の好適なものとして、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ又は１２４Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は１１Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ及び１２４Ｉであり、特に好ましくは１１Ｃ及び１８Ｆであり、最も好ましくは１８Ｆである。
【００５２】
造影基が過分極ＮＭＲ活性核種である場合、かかるＮＭＲ活性核種はゼロ以外の核スピンを有し、１３Ｃ、１５Ｎ、１９Ｆ、２９Ｓｉ及び３１Ｐが挙げられる。これらのうち、１３Ｃが好ましい。「過分極」という用語は、ＮＭＲ活性核種の分極の程度がその平衡分極を超えていることを意味する。１３Ｃの天然存在量（１２Ｃに対して）は約１％であり、適当な１３Ｃ標識化合物は過分極する前に好適には５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上の存在量となるように濃縮される。本発明の造影剤の１以上の炭素原子は好適には１３Ｃで濃縮され、これを次いで過分極させる。
【００５３】
造影基がインビボ光学イメージングに適したレポーターである場合、レポーターは光学イメージング法で直接又は間接的に検出できる部分であればよい。レポーターは光散乱体（例えば着色又は未着色粒子）でも、光吸収体でも、発光体でもよい。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような色素である。色素は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。最も好ましくはレポーターは蛍光特性を有する。
【００５４】
好ましい有機発色団及び蛍光団レポーターとしては、広範な非局在化電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素鎖体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）鎖体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）鎖体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）鎖体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾体も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の鎖体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）と同様に、特定の状況で用いられる。
【００５５】
使用し得る発色団の具体例としては、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、マリーナブルー、パシフィックブルー、オレゴングリーン８８、オレゴングリーン５１４、テトラメチルローダミン並びにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０が挙げられる。
【００５６】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの可視又は近赤外（ＮＩＲ）域に吸収極大を有する色素である。光学イメージングモダリティ及び測定法としては、特に限定されないが、発光イメージング、内視鏡検査、蛍光内視鏡検査、光干渉断層撮影、透過イメージング、時間分解透過イメージング、共焦点イメージング、非線形顕微鏡、光音響イメージング、音響光学イメージング、分光法、反射分光法、干渉分光法、コヒーレンス干渉法、拡散光トモグラフィー及び蛍光媒介拡散光トモグラフィー（連続波、時間領域及び周波数領域システム）、並びに光散乱、吸収、偏光、発光、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定が挙げられる。
【００５７】
造影基が血管内検出に適したβ線放射体である場合、かかるβ線放射体の好適なものとして、放射性金属の６７Ｃｕ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ又は１９２Ｉｒ並びに非金属の３２Ｐ、３３Ｐ、３８Ｓ、３８Ｃｌ、３９Ｃｌ、８２Ｂｒ及び８３Ｂｒが挙げられる。
【００５８】
好ましい造影基は、インビボ投与後に、非侵襲的方法で外部から検出できるものである。最も好ましい造影基は、放射性、特に放射性金属イオン、γ線放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属、特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いたイメージングに適したものである。造影基を各種のベクターに導入することができる様々な手段については、以下の本発明の別の態様についての説明で概説する。
【００５９】
本発明の好ましい造影剤はインビボで容易に代謝されず、最も好ましくは人体で６０〜２４０分のインビボ半減期を示す。造影剤は好ましくは腎臓経由で排泄（つまり尿中排泄）される。造影剤の好ましくは病巣で１．５以上、さらに好ましくは５以上、特に好ましくは１０以上の信号対バックグラウンド比を示す。造影剤が放射性同位体を含む場合、生体内で非特異的に結合しているか或いは遊離している造影剤のピーク値の半量のクリアランスは、好ましくは造影基の放射性同位体の放射性崩壊の半減期以下の時間で起こる。
【００６０】
また、造影剤の分子量は好適には５０００Ｄａ以下である。好ましくは、分子量は１５０〜３０００Ｄａ、最も好ましくは２００〜１５００Ｄａの範囲であり、３００〜８００Ｄａであるのが特に好ましい。
【００６１】
本発明の造影剤の例を以下に例示する。
【００６２】
【化６】
【００６３】
【化７】
上記化合物を得るための合成経路はそれぞれ実施例４、７、８、１０に記載されている。
【００６４】
本発明のこの態様の造影剤は前駆体化合物から製造されるが、前駆体化合物は本発明の別の態様をなすものであり、以下でさらに詳しく説明する。
【００６５】
別の態様では、本発明は、前駆体と適当な造影基源との反応を含む、本発明の造影剤の製造方法であって、上記前駆体が、
（ｉ）Ｍ６Ｐ受容体に対して親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）上記造影基源と反応し得る化学基であって、造影基が化合物と結合して造影剤を生じる化学基と
を含んでおり、上記化学基がベクターの一体部分であるか或いはベクターと結合している、方法を提供する。
【００６６】
「前駆体」には、ベクターの誘導体であって、適当な化学的形態の造影剤との化学反応が部位特異的に起こり、最小限の段階数（理想的には一段階）で実施でき、しかも多大な精製を行わずに（理想的にはそれ以上精製しなくても）所望の造影剤が得られるように設計されたものが包含される。かかる前駆体は合成品であり、良好な化学的純度で得ることができる。「前駆体」は、適宜、Ｍ６Ｐ受容体に対する親和性を有するベクターの官能基に対する保護基を含んでいてもよい。
【００６７】
「保護基」という用語は、不都合な化学反応は阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない十分穏和な条件下で当該官能基から脱離させることができる十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後に、所望の生成物が得られる。保護基は当業者に周知であり、好適には、アミン基については、Ｂｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から、カルボニル基については、メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル又はベンジルエステルから選択される。
ヒドロキシ基に対する適当な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル（Ｔｒｔ）或いはテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。チオール基に対する適当な保護基は、トリチル及び４−メトキシベンジルである。その他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００６８】
好ましくは、造影基源と反応し得る化学基は、以下の（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれかを含む。
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート、又はアルキルメシレートを含有する誘導体、
（ｉｖ）求核又は求電子置換反応用の活性化芳香族環を含む誘導体、
（ｖ）容易にアルキル化を起こす官能基を有する誘導体、
（ｖｉ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体。
【００６９】
造影基が金属イオンを含む場合、前駆体は、金属イオンと錯形成して金属錯体を形成することのできる化学基を含む。「金属鎖体」という用語は、金属イオンと１以上の配位子との配位鎖体を意味する。金属鎖体は「キレート交換耐性」、つまり金属の配位部位に対する他の潜在的な競合配位子との配位子交換を容易に起こさないものであるのが極めて好ましい。潜在的な競合配位子には、Ｍ６Ｐ受容体用のベクター自体並びにインビトロ標品中の他の賦形剤（製剤に使用される例えば放射線防護剤又は抗菌保存剤）又は生体の内在性化合物（例えばグルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）がある。
【００７０】
キレート交換に耐性の金属鎖体を形成する本発明の使用に適した配位子としては、（金属ドナー原子同士が炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位骨格で連結されて）五又は六員キレート環が形成されるように２〜６、好ましくは２〜４個の金属ドナー原子が配列したキレート剤、又はイソニトリル、ホスフィン又はジアゼニドのように金属イオンに強く結合するドナー原子を含む単座配位子が挙げられる。キレート剤の一部として金属によく結合するドナー原子の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィン類は強固な金属鎖体を形成し、単座又は二座ホスフィンであっても適当な金属鎖体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドの線状構造は、それらをキレート剤に導入するのが容易ではないので、通例、単座配位子として使用される。適当なイソニトリルの例としては、ｔｅｒｔ−ブチルイソニトリルのような単純なアルキルイソニトリル及びｍｉｂｉ（すなわち、１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルが挙げられる。適当なホスフィンの例としては、テトロホスミン及び単座ホスフィン類、例えばトリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンが挙げられる。適当なジアゼニドの例としては、配位子のＨＹＮＩＣ系配位子、すなわちヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミドが挙げられる。
【００７１】
キレート交換耐性の金属鎖体を形成するテクネチウム用の適当なキレート剤の例としては、特に限定されないが、以下の（ｉ）〜（ｖ）が挙げられる。
（ｉ）ジアミンジオキシム；
（ｉｉ）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ３Ｓ配位子、例えばＭＡＧ３（メルカプトアセチルトリグリシン）及び関連配位子、又はジアミドピリジンチオールドナーセットを有するもの、例えばＰｉｃａ；
（ｉｉｉ）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ２Ｓ２配位子、例えばＢＡＴ又はＥＣＤ（すなわちエチルシステイネート二量体）又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するもの、例えばＭＡＭＡ；
（ｉｖ）テトラミン、アミドトリアミン又はジアミンジアミンドナーセットを有する開環又はマクロ環状配位子であるＮ４配位子、例えばサイクラム、モノオキシサイクラム又はジオキシサイクラム；又は
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ２Ｏ２配位子。
【００７２】
本発明の好ましいテクネチウム用キレート剤はジアミンジオキシム及びテトラアミンであり、それらの好ましいものについて以下で詳しく説明する。
【００７３】
好ましいジアミンジオキシムは、次の式（Ｘ）のものである。
【００７４】
【化８】
式中、
Ｅ１〜Ｅ６は各々独立にＲ＊基であり、
各Ｒ＊はＨ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−１０フルオロアルキル、Ｃ２−１０カルボキシアルキル、又はＣ１−１０アミノアルキルであるか、或いは２以上のＲ＊基がそれらと結合した原子と共に飽和又は不飽和炭素環又は複素環を形成するもので、１以上のＲ＊基がベクターと結合しており、
Ｑ１は式−（Ｊ１）ｆ−の架橋基であり、ｆは３、４、又は５であり、各Ｊ１は独立に−Ｏ−、−ＮＲ＊−、又は−Ｃ（Ｒ＊）２−であるが、−（Ｊ１）ｆ−が、−Ｏ−又は−ＮＲ＊−であるＪ１基を最大１個しか含まないことを条件とする。
【００７５】
好ましいＱ１基は以下のものである。
Ｑ１＝−（ＣＨ２）（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）−、すなわちプロピレンアミンオキシムつまりＰｎＡＯ誘導体、
Ｑ１＝−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）２−、すなわちペンチレンアミンオキシムつまりＰｅｎｔＡＯ誘導体、
Ｑ１＝−（ＣＨ２）２ＮＲ＊（ＣＨ２）２−。
【００７６】
Ｅ１〜Ｅ６は、好ましくは、Ｃ１−３アルキル、アルキルアリールアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、カルボキシアルキル、アミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各Ｅ１〜Ｅ６基はＣＨ３である。
【００７７】
Ｍ６Ｐ受容体のベクターは、好ましくは、Ｅ１もしくはＥ６のＲ＊基又はＱ１部分のＲ＊基で結合している。最も好ましくは、Ｑ１部分のＲ＊基で結合する。Ｑ１部分のＲ＊基で結合している場合、Ｒ＊基は好ましくは橋頭位である。この場合、Ｑ１は、好ましくは、−（ＣＨ２）（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）２−、又は−（ＣＨ２）２ＮＲ＊（ＣＨ２）２−であり、最も好ましくは−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ＊）（ＣＨ２）２−である。特に好ましい二官能性ジアミンジオキシムキレート剤は、次の式（Ｘａ）のものである。
【００７８】
【化９】
式中、
Ｅ７〜Ｅ２０は各々独立に上記で定義したＲ＊基であり、
Ｇ１はＮ又はＣＲ＊であり、
Ｙ１は−（Ｌ６）ｓ−ベクターであり、Ｌ６及びｓはそれぞれ上記でＬ１及びｎについて定義した通りであり、「ベクター」は、上記で定義したＭ６Ｐ受容体に対する親和性を示すベクターである。リンカー基−（Ｌ６）ｓ−が存在する場合、それ以外にキレートとベクターを連結する他のリンカー基は存在しない。
【００７９】
式（Ｘａ）の好ましいキレート剤は、次の式（Ｘｂ）のものである。
【００８０】
【化１０】
式中、Ｇ２は上記のＧ１で定義した通りであり、好ましくはＣＨ（＝「キレートＸ」、その合成方法については実施例５に記載）であって、Ｍ６Ｐ受容体のベクターが橋頭位−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２基を介して結合する。
【００８１】
本発明の好ましいテトラアミンキレート剤は、次の式Ｚのものである。
【００８２】
【化１１】
式中、Ｑ２は式−（Ｊ２）ｇ−の架橋基であり、ｇは１〜８であり、各Ｊ２は独立に−Ｏ−、−ＮＲ＊−又は−Ｃ（Ｒ＊）２−、好ましくは−Ｃ（Ｒ＊）２−、最も好ましくは−ＣＨ２−であり、Ｒ＊は上記で定義した通りである。
【００８３】
Ｙ２は−（Ｌ７）ｔ−ベクター基であり、Ｌ７及びｔはそれぞれＬ１及びｎについて上記で定義した通りである。リンカー−（Ｌ７）ｔ−が存在している場合、これ以外にキレートをベクターに連結するリンカーは存在しない。かかるテトラアミンキレートでは、好ましくはリンカーはアリール環を含まない。こうすると、錯体の親油性を下げるのに役立つ。
【００８４】
Ｅ２１〜Ｅ２６は、上記で定義したＲ＊基である。
【００８５】
最も好ましい本発明のテトラアミンキレートは、次の式Ｚａのものである。
【００８６】
【化１２】
式中、Ｙ３は上記でＹ２について定義した通りである。
【００８７】
本発明の特に好ましいテトラアミンキレートは、式ＺａのものでＹ３が−ＣＯ−であるものである（「キレートＺ」、ベクターの結合していないキレートの合成については実施例２に記載）。
【００８８】
上述の配位子は、テクネチウム（例えば９４ｍＴｃ又は９９ｍＴｃ）の錯体の形成に特に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）に詳細に記載されている。この配位子は、銅（６４Ｃｕ又は６７Ｃｕ）、バナジウム（例えば４８Ｖ）、鉄（例えば５２Ｆｅ）又はコバルト（例えば５５Ｃｏ）のような他の金属にも有用である。その他の適当な配位子については、インジウム、イットリウム及びガドリニウム、特に単環アミノカルボキシレート及びアミノホスホン酸配位子に特に適した配位子を始めとして、Ｓａｎｄｏzの国際公開第９１／０１１４４号に記載されている。この種の適当なキレート剤の例としては、１、４、７、１０−テトラアザシクロデカン−１、４、７、１０−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）及びジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げられる。ガドリニウムの非イオン性（すなわち中性）の金属錯体を形成する配位子は公知であり、米国特許第４８８５３６３号に記載されている。放射性金属がテクネチウムの場合、配位子は好ましくは四座のキレート剤である。テクネチウム用の好ましいキレート剤は、ジアミンジオキシム又は上述のＮ２Ｓ２又はＮ３Ｓドナーセットを有するものである。
【００８９】
リンカー基（−（Ｌ６）ｓ−又は−（Ｌ７）ｔ−として上述したもの）の役割は、金属の配位で得られる比較的嵩高い金属錯体を、Ｍ６Ｐ受容体のベクターの活性部位から遠ざけることによって、例えば、受容体の結合がに支障をきたさないようにすることである。これは、嵩高い基が活性部位から遠ざかる自由度をもつようにするための柔軟性（例えば単純なアルキル鎖）及び／又は金属錯体を活性部位から遠ざけるシクロアルキル系もしくはアリール系スペーサーのような剛直性の組合せによって達成することができる。リンカー基の性状は、得られるコンジュゲートの金属錯体の体内分布又は分泌特性を変更するのにも利用できる。例えばエーテル基をリンカーに導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限に抑制するのに役立つし、ポリアルキレングリコールのようなポリマー系リンカー基、特にＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を使用すると、血液中での造影剤のインビボ寿命を延ばすのに役立つ。
【００９０】
好ましいリンカー基−（Ｌ６）ｓ−又は−（Ｌ７）ｔ−は、原子数２〜１０、最も好ましくは原子数２〜５の骨格鎖を含むもので、原子数２又は３の物が特に好ましい。原子数２の最短のリンカー基骨格鎖であっても、生物学的ターゲティング基からキレーターが十分に離隔して相互反応が最小限になるという利点が得られる。さらに、ベクターも、金属イオンへのキレーターの配位に有効に拮抗できなくなる。こうして、ベクターの生物学的ターゲティング特性とキレーターの金属錯形成能が共に保持される。なお、Ｍ６Ｐ受容体のベクターがキレーターに、それらの結合が血中で容易に代謝されないように結合していることが強く望まれる。かかる代謝によって、標識した受容体ベクターがインビボで所望の標的部位に達する前に、造影用の金属錯体が開裂してしまうからである。そこで、Ｍ６Ｐ受容体のベクターは、好ましくは、容易には代謝されないリンカー基を介して本発明の金属錯体に共有結合させる。かかる好適な結合は、炭素−炭素結合、アミド結合、尿素もしくはチオ尿素結合又はエーテル結合である。
【００９１】
アルキレン基又はアリーレン基のような非ペプチド系リンカー基は、連結されたＭ６Ｐ受容体ベクターと有意の水素結合相互作用がないため、リンカーがベクターに巻き付くことがないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ２）ｕ−であり、式中、ｕは２〜５の整数である。好ましくは、ｑは２又は３である。好ましいアリーレンスペーサーは次式のものである。
【００９２】
【化１３】
式中、ａ及びｂは各々独立に０、１又は２である。
【００９３】
好ましいＹ１−Ｙ３基は−ＣＨ２ＣＨ２−（Ｌ８）ｖ−であり、ｖは０〜３の整数である。
【００９４】
ベクターがペプチドの場合、Ｙ１−Ｙ３は好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−（Ｌ９）ｗ−であり、式中、Ｌ９は−ＣＯ−又は−ＮＲ'''−（Ｒ'''はＲについて上記で定義した通り）であり、ｗは０〜３である。Ｇ１又はＧ２のいずれかがＮであり、−（Ｌ９）ｗ−が−ＮＨ−である場合、この組合せは市販の対称中間生成物Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）３から誘導できるという追加の利点がある。
【００９５】
造影用金属がテクネチウムの場合、通常のテクネチウム出発原料は過テクネチウム酸塩、すなわちＴｃＯ４−つまり酸化状態がＴｃ（ＶＩＩ）のテクネチウムである。過テクネチウム酸塩自体は金属錯体を形成しにくいので、テクネチウム錯体の製造に際しては、テクネチウムの酸化状態を低酸化状態（Ｔｃ（Ｉ）〜Ｔｃ（Ｖ））に還元することによって錯形成を促進するための第一スズイオンのような適当な還元剤を添加する必要がある。溶媒は有機溶媒でも、無機溶媒でも、それらの混合物でもよい。溶媒が有機溶媒を含む場合、有機溶媒は好ましくはエタノール又はＤＭＳＯのような生体適合性溶媒である。好ましくは、溶媒は水性溶媒であり、最も好ましくは等張塩類溶液である。
【００９６】
造影基が放射性ヨウ素である場合、好ましい前駆体は、求電子又は求核ヨウ素化或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を起こすような誘導体を含むものである。前者に属するものの例としては、以下の（ａ）〜（ｃ）が挙げられる。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えばトリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えばトリメチルシリル）又は有機ホウ素化合物（例えば、ボロン酸エステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体、
（ｂ）ハロゲン交換のための非放射性臭化アルキル、或いは求核ヨウ素化のためのアルキルトシレート、メシレート又はトリフレート、
（ｃ）求電子ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばフェノール）及び求核ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばアリールヨードニウム、アリールジアゾニウム、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。
【００９７】
前駆体は、好ましくは、ヨウ化又は臭化アリールのような非放射性ハロゲン原子（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、活性化前駆体アリール環（例えばフェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えばトリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、トリアゼンのような有機前駆体、或いはヨードニウム塩のような求核置換反応のための良好な脱離基を含む。放射性ヨウ素化では、前駆体は好ましくは有機金属前駆体化合物を含み、最も好ましくはトリアルキルスズを含む。
【００９８】
前駆体及び放射性ヨウ素を有機分子に導入する方法は、Ｂｏｌｔｏｎ， Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。前駆体及び放射性ヨウ素をタンパク質に導入する方法は、Ｗｉｌｂｕｒ， Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，３（６）、４３３−４７０（１９９２）に記載されている。適当なボロン酸エステル有機ホウ素化合物及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２９、８４１−８４３（２００２）及び３０，３６９−３７３（２００３）に記載されている。適当なオルガノトリフルオロホウ化物及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３１、９３５−９３８（２００４）に記載されている。
【００９９】
放射性ヨウ素を結合させることのできるアリール基の例としては、以下ののものがある。
【０１００】
【化１４】
これらはいずれも、芳香族環での放射性ヨウ素置換が容易な置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を含む他の置換基は、例えば以下のような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成することができる。
【０１０１】
【化１５】
飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子はインビボで代謝され易く、放射性ヨウ素が失われ易いことが知られているので、放射性ヨウ素原子は好ましくは芳香族環（ベンゼン環など）又はビニル基に直接共有結合で結合させる。
【０１０２】
造影基がフッ素の放射性同位体である場合、フッ化アルキルはインビボ代謝に抵抗性であるので、放射性フッ素原子はフルオロアルキル基又はフルオロアルコキシ基の一部としてもよい。或いは、放射性フッ素原子は、芳香族環（例えばベンゼン環）に直接共有結合で結合させてもよい。放射性ハロゲン化は、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する前駆体の適当な化学基と１８Ｆ−フッ化物との反応を用いた直接標識法で実施できる。１８Ｆは、１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＨ反応体を用いたＮ−ハロアセチル基のアルキル化によって導入することもでき、−ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）３１８Ｆ誘導体が得られる。アリール系については、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの１８Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−１８Ｆ誘導体への好適な経路である。
【０１０３】
国際公開第０３／０８０５４４号に記載された放射性フッ素化の別の方法は、以下の置換基のいずれかを含む前駆体化合物を式Ｖの化合物と反応させて、それぞれ式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）の放射性フッ素化造影剤を生成させる。
【０１０４】
【化１６】
１８Ｆ−Ｙ４−ＳＨ（Ｖ）
式中、Ｙ３は式−（Ｌ１０）ｘ−のリンカーであって、適宜１〜６のヘテロ原子を含んでいてもよく（Ｌ１０はＬ１について上記で定義した通りであり、ｘは１〜１０である。）、
Ｙ４は式−（Ｌ１１）ｙ−のリンカーであって、適宜１〜１０のヘテロ原子を含んでいてもよい（式中１１はＬ１について上記で定義した通りであり、ｙは１〜３０である。）。
【０１０５】
【化１７】
式中、Ｙ４は上記で定義した通りであり、「ベクター」は、本発明の造影剤について上記で定義した通りＭ６Ｐ受容体に対して親和性を有するベクターである。
【０１０６】
１８Ｆ−標識誘導体の合成経路についてのさらに詳しい内容は、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。
【０１０７】
本発明の１８Ｆ−標識化合物は、１８Ｆフルオロジアルキルアミンの形成後、１８Ｆフルオロジアルキルアミンを、例えば塩素、Ｐ（Ｏ）Ｐｈ３又は活性化エステルを含む前駆体と反応させてアミドを形成することによって得ることができる。
【０１０８】
ベクターがＩＧＦ−ＩＩ又はその断片もしくは類似体である場合、そのアミノ又はカルボキシ末端を介して造影基を導入することができる。リンカーが存在する場合、造影基はリンカーの反応性基を介して導入することができる。例えば、ＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のアミノ末端にリンカーを付加し、次いで造影基の導入に適した化学基を付加すれば、以下に示すような前駆体化合物を得ることができる。
【０１０９】
【化１８】
ベクターがＭ６Ｐを含む場合、上述の好ましい化合物のカルボキシメチル基の誘導体化によって造影基を導入すれば、以下に示すような前駆体化合物を得ることができる。
【０１１０】
【化１９】
ベクターがジリン酸化糖ペプチドである場合、例えばＭ６Ｐ単位のペプチド結合に存在するいずれかのアミノ酸残基を介して造影基を導入すれば、以下に示すような前駆体化合物を得ることができる。
【０１１１】
（ｉｉｉ） Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−Ｌｙｓ（キレート）−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−ＮＨ２（「糖ペプチド前駆体１」）
（ｉｖ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（キレート）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−ＮＨ２（「糖ペプチド前駆体２」）
ベクターがレチノイン酸又はその誘導体である場合、造影基は直接又はリンカーを介して間接的にカルボキシル基に導入することができる。カルボキシル基は、Ｍ６Ｐ受容体との結合には必要とされないので、造影基を導入するのに最も好ましい部位である。造影基源と反応し得る化学基とリンカーとを有するレチノイン酸前駆体化合物の例としては、以下のものがある。
【０１１２】
【化２０】
レチノイン酸は親油性化合物であり、金属錯形成キレートと結合させて前駆体化合物を形成する際は、テトラミンのような親水性金属錯化キレートと結合させるべきである。
【０１１３】
複数のベクターを組み合わせる場合、上記の構成要素を、上述の通り、前駆体を形成するための誘導体化に利用できる適当な基を介して誘導体化すればよい。
【０１１４】
好ましい実施形態では、本発明の前駆体は、滅菌された非発熱性の形態である。したがって、前駆体は医薬組成物の製造に使用することができ、医薬組成物の調製用キットの構成成分としてキットに含めるのにも適している。これらの態様については、本発明の追加の態様に関連して、以下で詳しく説明する。
【０１１５】
別の好ましい実施形態では、本発明の前駆体は固相に結合している。前駆体は好ましくは固形担体マトリックスに共有結合した形で供給され、標識反応で標識と同時に固相からの開裂が起こるようにする。したがって、所望の造影剤生成物は溶液中で形成され、出発材料及び不純物は固相に結合したまま残る。かかる系の例として、国際公開第０３／００２４８９号には１８Ｆ−フッ化物による固相求電子フッ素化のための前駆体が記載されており、国際公開第０３／００２１５７号には１８Ｆ−フッ化物による固相求核フッ素化のための前駆体が記載されている。適切に適合させた自動化合成装置に挿入できるカートリッジを、好ましくはキットの一部として用意してもよい。カートリッジは、固相担体に結合した前駆体とは別個に、不要フッ化物イオンを除去するためのカラム、及び反応混合物を蒸発させて、生成物を適宜製剤化できるようにカラムに接続した容器を含んでいてもよい。
【０１１６】
本発明の別の態様は、造影剤の製造方法に関して定義した前駆体であり、上記化学基は、好ましくは、
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含有する誘導体、
（ｖｉ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体
を含む。
【０１１７】
本発明は、別の態様では、上述の造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物を提供する。好ましくは、医薬組成物は放射性医薬組成物である。
【０１１８】
「生体適合性担体」とは、造影剤を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性担体は、エタノールのような生体適合性の有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は製剤の可溶化に有用である。好ましくは、生体適合性担体はパイロジェンフリーの注射用水、等張塩類溶液又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性担体のｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内である。
【０１１９】
かかる医薬品は、好適には、無菌状態を維持したまま皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れて供給される。かかる容器には、１回又は複数回分の用量を入れることができる。好ましい多用量用容器は、複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ３のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードのシリンジに吸引することができる。プレフィルドシリンジは１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨て又はその他臨床用に適したシリンジである。医薬組成物が放射性医薬組成物の場合、プレフィルドシリンジは、適宜、オペレーターを放射能被曝から保護するためのシリンジシールドを備えていてもよい。かかる適当な放射性医薬品シリンジシールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなる。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、以下の本発明の追加の態様で説明する通り、キットから調製することもできる。或いは、医薬組成物は、所望の滅菌生成物が得られるような無菌製造条件下で製造してもよい。医薬組成物を非滅菌条件下で調製した後、例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて最終的に滅菌してもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物はキットから調製される。
【０１２１】
本発明の造影剤に関して上述した通り、放射性医薬組成物に対して最も好ましい本発明の放射性造影基は９９ｍＴｃ、１２３Ｉ及び１８Ｆである。
【０１２２】
本発明は、さらに別の態様では、本発明の医薬組成物の調製用キットを提供する。かかるキットは、本発明の適当な前駆体、好ましくは滅菌された非発熱性の形態の前駆体を含んでいて、滅菌造影基源との反応で所望の医薬組成物を最低限の操作数で生ずる。かかる配慮は、放射性医薬品、特に放射性同位体の半減期が比較的短い放射性医薬品に対して重要であり、取扱いの容易さ及び放射性医薬品の取扱者の放射線被曝量の低減という点でも重要である。したがって、かかるキットの再構成用の反応溶媒は、好ましくは上記で定義した「生体適合性担体」であり、最も好ましくは水性担体である。
【０１２３】
キットの容器として適しているのは、無菌健全性及び／又は放射能の安全性並びに適宜、不活性ヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）を維持することができ、しかも、シリンジで溶液の添加及び吸引もできる密封容器である。かかる容器として好ましいのはセプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通例アルミニウム製）でクリンプしたものである。かかる容器は、適宜、例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気などのため、蓋が真空に耐えることができるという追加の利点も有する。
【０１２４】
前駆体をキットに用いる際の好ましい態様は、本発明の造影剤の合成法に関して上記で説明した通りである。キットに用いられる前駆体は、望ましい無菌の非発熱性物質を生じるように無菌製造条件下で用いられる。前駆体を非無菌条件下で使用し、最後に例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて滅菌してもよい。好ましくは、前駆体は無菌非発熱性の形態で用いられる。最も好ましくは、無菌の非発熱性の前駆体を上述の密封容器内で用いる。
【０１２５】
キットの前駆体は、好ましくは、本発明の造影剤の合成法に関して説明した固形担体マトリックスに共有結合させた形態で供給される。
【０１２６】
９９ｍＴｃ用には、キットは好ましくは凍結乾燥したもので、９９ｍＴｃ放射性同位体ジェネレータからの無菌９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸（ＴｃＯ４−）で再構成すれば、それ以上操作しなくてもヒトへの投与に適した溶液が得られるように設計される。適当なキットは、上述の未錯化キレート剤を、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような薬学的に許容される還元剤、並びに弱有機酸と生体適合性陽イオンとの１種以上の塩と共に収容した容器（例えばセプタムシールバイアル）を備える。「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化し負に荷電した基と塩を形成する正に荷電した対イオンであって、該正に荷電した対イオンが無毒性で、哺乳類の身体、特に人体への投与に適しているものを意味する。好適な生体適合性陽イオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【０１２７】
９９ｍＴｃ造影剤の調製用キットは、適宜、トランスキレーターとして機能する第二の弱有機酸又はその生体適合性陽イオンとの塩をさらに含んでいてもよい。トランスキレーターは、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、次いでキットのキレート剤で置き換えられる化合物である。これは、テクネチウム錯形成と競合する過テクネチウム酸の迅速な還元に起因した還元型加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）が形成されるおそれを最小限に抑制する。かかるトランスキレーターとして適しているのは、上述の弱有機酸及びその塩であり、好ましくは、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプタン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、好ましくはホスホン酸塩、特に好ましくはジホスホン酸塩である。かかる好ましいトランスキレーターは、ＭＤＰ（メチレンジホスホン酸）又はその生体適合性陽イオンとの塩である。
【０１２８】
遊離型のキレート剤の使用に代えて、９９ｍＴｃ造影剤の調製用キットは、適宜、キレート剤の非放射性金属錯体を含んでいてもよく、テクネチウムを添加すると、トランスメタレーション（配位子交換）によって所望の生成物を生じる。かかるトランスメタレーションに適した錯体は銅又は亜鉛錯体である。
【０１２９】
キットに用いられる薬学的に許容される還元剤は、好ましくは、塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズのような第一スズ塩であり、これらは無水塩でも水和塩でもよい。第一スズ塩は好ましくは塩化第一スズ又はフッ化第一スズである。
【０１３０】
キットは、適宜、放射線防護剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤又は充填剤のような追加の成分をさらに含んでいてもよい。
【０１３１】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元過程のような分解反応を阻害する化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（すなわち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（すなわち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）並びにこれらと生体適合性陽イオンとの塩から選択される。「生体適合性陽イオン」及びその好適な実施形態は上述の通りである。
【０１３２】
「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、濃度に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、再構成後の医薬組成物（つまり、造影剤自体）での微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌保存剤は、再構成前のキットの１以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類、すなわちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。
【０１３３】
「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成したキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類への投与に関して許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかる適当なｐＨ調節剤としては、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容される塩基が挙げられる。コンジュゲートを酸塩の形態で用いる場合、キットのユーザーが多段階法の一部としてｐＨを調節できるようにｐＨ調節剤を適宜別のバイアル又は容器で提供してもよい。
【０１３４】
「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩並びに水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【０１３５】
本発明の造影剤は、インビボイメージングに有用である。したがって、別の態様では、本発明は、インビボ診断又はイメージング法、例えばＳＰＥＣＴ又はＰＥＴに用いる造影剤を提供する。好ましくは、この方法は、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボイメージングに関する方法であり、肝線維症、うっ血性心不全、糸球体硬化症及び呼吸不全のように、線維症に関連した病態の診断に有用である。最も好ましい実施形態では、上記病態は、ＨＳＣ及び肝実質細胞でＭ６Ｐ受容体が上方制御されることが知られている肝線維症である。
【０１３６】
本発明のこの態様では、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象でインビボ診断又は造影する方法であって、上述の本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。対象は好ましくは哺乳類であり、最も好ましくはヒトである。別の実施形態では、本発明のこの態様は、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象のインビボイメージングにおける本発明の造影剤の使用であって、対象に本発明の医薬組成物を予め投与しておく使用を提供する。「予め投与」とは、医療従事者が関与する段階であり、患者には医薬品が投与されていること、例えば、静脈内注射が既に実施されていることを意味する。
【０１３７】
本発明のこの態様には、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボ画像診断用の医薬品の製造における本発明の造影剤の使用も包含される。
【０１３８】
さらに別の態様では、本発明は、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、本発明の造影剤を身体に投与し、造影剤の取込を検出し、任意ではあるが好ましくは、上記投与と検出を、例えば上記薬剤による治療の前後途中のいずれかに繰り返すことを含んでなる方法を提供する。
【０１３９】
実施例の簡単な説明
実施例１では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片（ＩＧＦ化合物１）の合成について記載する。
【０１４０】
実施例２では、保護テトラアミンキレート化合物であるテトラ−Ｂｏｃ−テトラアミンＮＨＳエステル（保護キレートＺ）の合成について記載する。
【０１４１】
実施例３では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片にキレートＺを結合させて、９９ｍＴｃ標識に適した本発明の前駆体（ＩＧＦ前駆体１）を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４２】
実施例４では、ＩＧＦ前駆体１を９９ｍＴｃで標識してＩＧＦ造影剤１を形成する方法について記載する。
【０１４３】
実施例５では、ジアミンジオキシムキレートであるキレートＸ（すなわち式ＸｂでＧ＝Ｃのもの）の合成について記載する。
【０１４４】
実施例６では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片にキレートＸを結合させて、９９ｍＴｃ標識に適した本発明の前駆体（ＩＧＦ前駆体２）を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４５】
実施例７では、ＩＧＦ前駆体２を９９ｍＴｃで標識してＩＧＦ造影剤２を形成する方法について記載する。
【０１４６】
実施例８では、ＰＥＧリンカーに連結したＩＧＦ−ＩＩのアミノ酸４８〜５５のペプチド断片にヨウ素化ボルトン−ハンター基を結合させて、本発明の放射性ヨウ素化造影剤（非放射性ＩＧＦ造影剤３）の非放射性型を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４７】
実施例９では、レチノイン酸誘導体レチノイル−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（レチノイン酸前駆体１）の合成について記載する。
【０１４８】
実施例１０では、レチノイン酸誘導体レチノイル−ＰＥＧ−Ｌｙｓにヨウ素化ボルトン−ハンター基を結合させて、本発明の放射性ヨウ素化造影剤（非放射性レチノイン酸造影剤１）の非放射性型を製造するのに必要な段階について記載する。
【０１４９】
実施例１１では、１２３Ｉ標識糖ペプチド造影剤１の合成について記載する。
【実施例】
【０１５０】
実施例で用いた略語のリスト
ＡｃＯＨ：酢酸
Ｃ１８：炭素原子数１８の炭素鎖
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄｅ：ジクロロジフェニルジクロロエチレン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＥＭＳ：エチルメチルスルフィド
ＦＭｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＢＨＡ：４−メチルベンズヒドリルアミン
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＯｔＢｕ：ｔ−ブチルエステル
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール
Ｐｍｃ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
ｔＢｕ：ｔ−ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ：テトラフルオロエチレン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン。
【０１５１】
実施例１：ＩＧＦ化合物１［Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ法を用いて、０．２５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂から出発して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成装置でペプチジル樹脂Ｈ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒを合成した。カップリング段階では、ＨＢＴＵを用いて予め活性化しておいたアミノ酸を過剰の１ｍｍｏｌ用いた。
【０１５２】
Ｆｍｏｃ−アミノＰＥＧジグリコール酸（１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解して５分間放置した。この混合物を、上記ペプチジル樹脂に加えて一晩反応させた。最後のＦｍｏｃの脱保護は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて行った。
【０１５３】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し風乾した。
【０１５４】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３１．５分）による精製で、６ｍｇの精製標品を得た。精製標品を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分，カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．８９分）で分析した。さらに質量分析で生成物のキャラクタリゼーションを行った（ＭＨ＋計算値：１２４１．７，ＭＨ＋実測値：１２４７．７）。
【０１５５】
実施例２：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（保護キレートＺ）の合成
段階（ａ）：２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）テトラヒドロピラン
６−クロロヘキサノール（６．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（５００ｍｇ）を乾燥エーテル（７５ｍｌ）に溶解し、氷浴中で０〜５℃まで冷却した。攪拌しながら、乾燥エーテル（２５ｍｌ）中のジヒドロピラン（４．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０分間滴下した。添加完了後、冷却浴を取り除き、１６時間攪拌した。溶液を水で抽出し（５０ｍｌ×２）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発したところ、薄黄色油状物が得られた。この油状物は、１３Ｃ−ＮＭＲ分光分析で十分に純粋であり、それ以上精製しなくてもその後の反応に使用できることが判明した。収量１０．１ｇ（９１％）。
【０１５６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．３０−１．７１（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ２×７），３．２４−３．３２（１Ｈ３．４１−３．４８（３Ｈ，ｍ ＣＨ ａｎｄ ＣＨ２），３．６０−３．６７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７２−３．８２（１Ｈ，ｂｍ，ＣＨ），４．４４−４．４９（１Ｈ，ｂｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１５７】
段階（ｂ）：２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル
乾燥窒素ブランケット中、撹拌しながら、乾燥エタノール（１００ｍｌ）に少量のナトリウム（１．１３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を溶解した。マロン酸ジエチル（８．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を一度に加え、溶液を６０℃で１時間加熱した。２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）−テトラヒドロピラン（９．３ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を一度に加え、温度を７５〜８０℃に上げて、この温度に２４時間保った。冷却後、無機固形物を濾過で除き、濾液から溶媒を蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に溶解し、水で抽出し（３０ｍｌ×２）、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、揮発分を除去して、薄黄色油状物を得た。この油状物を、溶出液として石油エーテル４０：６０／エーテル（２００：４０）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。所要生成物はｒｆ＝０．１５で溶出し、無色油状物として単離した。収量８．７ｇ、（６０％）。
【０１５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１０−１．２５（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ３×２，ＣＨ２×４），１．３６−１．５０（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３），１．７０−１．８１（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），３．１７−３．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），３，５６−３．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７０−３．８０（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨ），４．０４−４．１６（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ２×２），４．０３−４．０８（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１５９】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノ−エチル）−２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロンアミド
２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル（５．１ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を、１，２−ジアミノエタン（１０ｇ、１６７ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で１６時間撹拌した。揮発分を真空中（４０〜５０℃、０．０１ｍｍＨｇ）で除去して、薄緑色の粘稠残渣を得て、これをカラムクロマトグラフィーにかけてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（５０：５０：５）で溶出したところ、標記化合物がｒｆ＝０．２で薄緑色の粘稠油状物として溶出した。これを放置すると固化した（収量：３．９ｇ、７１％）。
【０１６０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１５−１．２８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．３９−１．４４（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３），１．６９−１．７４（４Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×２），２．６４（４Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２×２），２．７３４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈz，ＣＨ２×２），３．０８−３．２９（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２×３），３．３５−３．４１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．５５−３．６３（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７０−３．７８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．４３（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝４Ｈz，ＯＣＨＯ），７．７８（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝５Ｈz，ＯＣＮＨ×２）。
【０１６１】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：−３４１７，３０８２，２９３６，２８６２，１６６３，１５５８，１４３９，１３５４，１３２３，１２６１，１２００，１１８９，１０７６，１０２６，９５６，９０７，８６７，８１０。
【０１６２】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシ−ヘキシル）−マロンアミド
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロンアミド（３．９ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８．５ｇ、３ｍｍｏｌ）及びエタノール（５０ｍｌ）を７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、ｐＨ９の状態に達するまで濃水酸化アンモニウム（．８８０）を滴下した。沈殿した白色固体をセライトで濾別し、フィルターケークをエタノール（３０ｍｌ）で洗浄した。エタノールを減圧下（１５ｍｍＨｇ、４０℃）で除去して、半固形ワックスを得た。この残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにかけて、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（１００：５０：１０）で溶出したところ、標記化合物のｒｆは０．２であった。この生成物を集め、エタノール（１００ｍｌ×３）で共蒸留して、残留水分を完全に蒸発させた。薄緑色の粘稠残渣が得られ、これを放置すると固化した（収量２．１ｇ、６９％）。
【０１６３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ１．２８−１．３８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．４６−１．５５（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），１．７９−１．８７（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），２．７３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈz，Ｈ２ＮＣＨ２×２），３．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＣＨ），３．２７（４Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６及び２Ｈz，ＨＮＣＨ２×２），３．５３（２Ｈｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＯＣＨ２）。
【０１６４】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ１３Ｈ２９Ｎ４Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）の計算値：２８９、実測値：２８９。
【０１６５】
段階（ｅ）： （２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシ−オクチル）−炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥窒素ブランケット中で、ボラン−ジメチルスルフィド付加物（ニート）（１５ｍｌ，１５０ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシヘキシル）マロンアミド（２．１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）とジオキサン（５０ｍｌ）の混合物に、撹拌しながら、シリンジで滴下した。添加終了後、混合物を１１０℃で５日間穏やかに加熱還流した。この間に、ある程度の白色固形分が残った。冷却後に、揮発分を減圧下で除去すると白色固形分が残り、これにメタノール（５０ｍｌ）を滴下して無色溶液を得た。この溶液を、３時間加熱還流し、冷却し、濃ＨＣｌ（５ｍｌ）を加え、７０〜７５℃で４８時間加熱還流を続けた。溶媒を除去して、粘稠緑色の残留物を得て、これをメタノール（１００ｍｌ×３）と共に蒸発させて、薄緑色固形物を得た。この固形物を乾燥メタノールに再度溶解し、無水炭酸カリウム（４．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。無機固形物をセライトによる濾過で除き、濾液から溶媒を蒸発させて粘稠残渣を得た。この残渣を水（５０ｍｌ）と混合し、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ×３）で抽出した。有機画分を一緒にし、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させて、淡黄色残留物を得た。
【０１６６】
注：この時点では、１３Ｃ−ＮＭＲで反応を監視するのがよい。
【０１６７】
残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにかけて、溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５：５）を用いて溶出したところ、標記化合物はｒｆ＝０．４１で溶出し、無色粘稠油状物として単離された（収量２．５ｇ、５２％）。
【０１６８】
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２５．６（ＣＨ２），２６．４（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ３×１２），２９．８（ＣＨ２×２），３２．６（ＣＨ２），３６．５（ｖｅｒｙ ｂｒｏａｄ，ＣＨ），３９．２（ＮＣＨ２×２，ａｄｊａｃｅｎｔ ＣＨ），４６．９（ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ，ＨＮＣＨ２×２），５０．０（ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ，ＮＣＨ２×２），６２．４（ＨＯＣＨ２），７９．０（ＯＣ×２），７９．９（ＯＣ×２），１５６．４（ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１６９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０５−１．１８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２７（１８ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ｂｕｔｙｌ），１．３１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ｂｕｔｙｌ），１．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８１（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．６３（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ），２．９８（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１１（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ２Ｏ），５．２（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１７０】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６５Ｎ４Ｏ９（Ｍ＋Ｈ）の計算値：６６１、実測値：６６１。
【０１７１】
段階（ｆ）：トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチルエステル
（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５２ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）を室温で撹拌し、溶媒をゆっくりと蒸発させた。反応を炭素ＮＭＲで監視したところ、３日間後の時点で、少量の出発原料が残存していた。反応体積をＣＨ２Ｃｌ２で３０ｍｌとし、水で抽出し（５０ｍｌ×３）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させると、褐色残留物が残った。この残留物を、溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００：５）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。最初に溶出した化合物は未反応トシルクロリドで、ｒｆ＝０．９５で溶出した。標記化合物はｒｆ＝０．２で溶出し、淡黄色の粘稠油状物として単離された。収量（１．２０ｇ、３９％）。
【０１７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．８８（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３トシル），３．１０−３．１２（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１９（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．９３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＣＨ２ＯＴｓ），５．０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．０８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），７．２９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ×２，Ａｒ），７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ×２，Ａｒ）。
【０１７３】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ４０Ｈ７１Ｎ４Ｏ１１Ｓ（Ｍ＋Ｈ）の計算値：８１５、実測値：８１５。
【０１７４】
段階（ｇ）：（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］メチル｝−オクチルエステル（１．１０５ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（３５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びメタノール（１０ｍｌ）を、７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、メタノールを、室温で減圧下にて除去したところ、約１〜２ｍｌが残った。この残留物を水（２５ｍｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ×４）で抽出した。有機抽出物を一緒にして、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、揮発成分を室温で蒸発させたところ（注：アジド類は、爆発の危険性があるので、この段階は安全防護シールド内で行うべきである。）、淡黄色の粘稠残渣が残存し、この残留物は純粋な所望化合物であった（収量：８２０ｍｇ、８８％）。
【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４７（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝６．５Ｈz，ＣＨ２ ａｄｊａｃｅｎｔ ＣＨ），１．８６（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．９５−３．０５（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．０５−３．２０（１０Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４及びＣＨ２Ｎ３），５．０９（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１７６】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：−３３５０，２９７４，２９３２，２８６０，２０９７（強いバンドＮ３），１６９４，１５２０，１４７０，１４１８，１３９１，１３６６，１２５０，１１６７，１０６９，８７０，７７７。
【０１７７】
段階（ｈ）：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物２）
（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、木炭担持１０％パラジウム（１００ｍｇ）及びメタノール（１０ｍｌ）を、３０気圧の圧力及び室温で１６時間処理した。固形分をセライトによる濾過によって濾別し、フィルターケークをメタノール（５０ｍｌ）で洗浄した。揮発成分を濾液から除去すると、粘稠油状物が得られたが、この油状物は純粋な所望物質であった（収量：７００ｍｇ、８９％）。
【０１７８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．２７（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ３×６及びＣＨ２），１．７７（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．４０（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈz，ＣＨ２ＮＨ２），２．９７（４Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×２），３．００−３．１６（８Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×４），５．２１（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．３０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）。
【０１７９】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６６Ｎ５Ｏ８（Ｍ＋Ｈ）の計算値：６６０、実測値：６６０。
【０１８０】
実施例３：ＩＧＦ前駆体１［テトラアミン−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
ペプチジル樹脂Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のｔｅｔｒａ−Ｂｏｃ−テトラアミンＮＨＳエステル（０．０５ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）で３日間処理した。反応試薬を濾過によって濾別し、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０１８１】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し、空気で乾燥させた。
【０１８２】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２５分）による精製で、３８ｍｇの精製標品を得た。精製標品を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．０５分）で分析した。さらに質量分析で生成物のキャラクタリゼーションを行った（ＭＨ＋計算値：１４４１．８、ＭＨ＋実測値：１４４１．７）。
【０１８３】
実施例４：ＩＧＦ前駆体１の９９ｍＴｃによる放射性標識の付与（ＩＧＦ造影剤１の製造）
窒素パージしたＰ４６バイアルに、以下のものを加えて、９９ｍＴｃ錯体を製造した。
【０１８４】
１００μｇのＩＧＦ前駆体１又は２のＭｅＯＨ溶液、
０．５ｍｌのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３緩衝液（ｐＨ９．２）、
０．５ｍｌの、９９ｍＴｃジェネレータから得たＴｃＯ４−、
０．１ｍｌのＳｎＣｌ２／ＭＤＰ溶液（１０．２ｍｇのＳｎＣｌ２と１０１ｍｇのメチレンジホスホン酸との１００ｍｌのＮ２パージした生理食塩水溶液）。
【０１８５】
ＩＴＬＣ（インスタント薄層クロマトグラフィー）を用いてＲＣＰを測定した。ＩＧＦ前駆体Ｉについては、ＳＧプレートと移動相（ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＡｃ（０．１Ｍ）１：１）で、ＲＨＴ（還元加水分解Ｔｃ）は起点に、過テクネチウム酸は溶媒先端に、テクネチウム錯体は中間のＲｆにみられた。
【０１８６】
反応混合物を逆相ＨＰＬＣ（ＸｔｅｒｒａカラムＲＰ１８、３．５μｇ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ）で分析した。ＩＧＦ前駆体ＩについてのＨＰＬＣ条件は以下の通りであった。
【０１８７】
溶媒Ａ：０．０７％アンモニア水溶液
溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ
０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
１０分：４０％溶媒Ａ、６０％溶媒Ｂ
１５分：４０％溶媒Ａ、６０％溶媒Ｂ
１７分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
２０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ。
【０１８８】
実施例５：キレートＸ［ｂｉｓ［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン］の合成
（段階ａ）：トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタンの調製
メタノール（２００ｍｌ）中の３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を（１０％パラジウム担持木炭：水５０％）（９ｇ）と共に水素ガス雰囲気下（３．５ｂａｒ）で３０時間振盪した。溶液を、珪藻土で濾過し、真空濃縮して３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを油状物として得た、収量（８４．９ｇ、９４％）。
【０１８９】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ２．４８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz，３×ＣＨ２），２．７８（１Ｈ，ｈｅｘｔｅｔ，Ｊ＝８Ｈz，ＣＨ，）３．７（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）。
【０１９０】
（段階ｂ）：トリメチルエステルのｐ−メトキシ−ベンジルアミンとのアミド化
トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタン［２ｇ、８．４ｍｍｏｌ］をｐ−メトキシ−ベンジルアミン（２５ｇ、１７８．６ｍｍｏｌ）に溶解した。蒸留用の装置を組み立て、窒素気流下１２０℃で２４時間加熱した。反応の進行は回収メタノール量によって監視した。反応混合物を周囲温度まで冷却し、酢酸エチル３０ｍｌを加え、次いで沈殿したトリアミド生成物を３０分間攪拌した。トリアミドを濾過で単離し、フィルターケークを十分量の酢酸エチルで数回洗浄して過剰のｐ−メトキシ−ベンジルアミンを除去した。乾燥後、４．６ｇ、１００％の白色粉末を得た。この高度に不溶性の生成物は、それ以上精製もキャラクタリゼーションもせずに、そのまま次の段階に使用した。
【０１９１】
（段階ｃ）：１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタンの調製
氷水浴中で冷却しておいた１０００ｍｌの三口丸底フラスコに、段階２（ａ）で得たトリアミド（１０ｇ、１７．８９ｍｍｏｌ）を、２５０ｍｌの１Ｍボラン溶液（３．５ｇ、２４４．３ｍｍｏｌのボラン）に注意深く加える。添加後、氷水浴を取り外し、反応混合物を６０℃までゆっくりと加熱する。反応混合物を６０℃で２０時間撹拌する。反応混合物のサンプル（１ｍｌ）を採取し、０．５ｍｌの５Ｎ ＨＣｌと混合し、３０分間静置した。サンプルに、０．５ｍｌの５０ＮａＯＨを加え、次いで２ｍｌの水を加え、白色沈殿が完全に溶解するまで溶液を撹拌した。溶液をエーテル（５ｍｌ）で抽出し、蒸発させた。残留物をアセトニトリルに１ｍｇ／ｍｌ濃度で溶解し、ＭＳで分析した。ＭＳスペクトルにモノアミン及びジアミン（Ｍ＋Ｈ／ｚ＝５２０及び５３４）が見られる場合は、反応は完結していない。反応を完結させるには、さらに１ＭボランＴＨＦ溶液１００ｍｌを加え、反応混合物を６０℃でさらに６時間攪拌し、上述のサンプリング法で新たなサンプルを抽出する。トリアミンへの転化が完結するまで、必要に応じて１ＭボランＴＨＦ溶液の追加を続ける。
【０１９２】
反応混合物を周囲温度まで冷却し、５ＮのＨＣｌをゆっくりと加える［注意：活発な発泡が起こる］。ＨＣｌは、気体の発生が観察されなくなるまで加えた。混合物を３０分間撹拌し、次いで蒸発させた。ケークをＮａＯＨ水溶液に懸濁し（２０〜４０％、１：２ｗ／ｖ）、３０分間撹拌した。混合物を水（３倍容）で希釈した。次に、混合物をジエチルエーテル（２×１５０ｍｌ）で抽出した［注意：ハロゲン化溶媒は使用しないこと］。次に、有機相を一緒にして、水（１×２００ｍｌ）及び食塩水（１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。蒸発後の収量：７．６ｇ、８４％（油状物）。
【０１９３】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ：１．４５，（６Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２；１．５４，（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，ＣＨ）；２．６０（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ）；３．６８（６Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ２）；３．７８（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３Ｏ）；６．９４（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）．７．２０（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）。
【０１９４】
（段階ｄ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの調製
１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタン（２０．０ｇ、０．０３６ｍｏｌ）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５．０ｇ）を加えた。混合物の水素添加を行い（３ｂａｒ、１００℃、オートクレーブ中）、５時間撹拌した。Ｐｄ（ＯＨ）２を、さらに、１０時間後と１５時間後に２回に分けて加えた（２×５ｇ）。
【０１９５】
反応混合物を濾過し、濾液をメタノールで洗浄した。有機相を一緒にして蒸発させ、残留物を減圧蒸留（１×１０−２、１１０℃）して、２．６０ｇ（５０％）の１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンを得た。
【０１９６】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ２．７２（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ），１．４１（Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，ＣＨ），１．３９（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１９７】
ＮＭＲ １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ３９．８（ＣＨ２ＮＨ２），３８．２（ＣＨ２．），３１．０（ＣＨ）。
【０１９８】
（段階ｅ）：キレートＸ（すなわち、式ＺａでＧ＝Ｃのもの）の調製
トリス（２−アミノエチル）メタン（４．０４７ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の乾燥エタノール（３０ｍｌ）溶液に、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、２当量）を、窒素雰囲気中室温で激しく撹拌しながら加えた。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（７．５６ｇ、５５．８ｍｏｌ、２当量）の溶液を乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくりと滴下した。反応はシリカプレート上のＴＬＣで追跡した［ジクロロメタン、メタノール、濃（比重０．８８）アンモニア、１００／３０／５で展開、ＴＬＣプレートはニンヒドリンをスプレーして加熱することによって発色させた］。モノ−、ジ−及びトリアルキル化生成物が観察され、ＲＦはその順で上昇していた。分析用ＨＰＬＣは、ＲＰＲ逆相カラムを使用して３％アンモニア水中７．５〜７５％アセトニトリルの勾配で行った。反応生成物を真空濃縮してエタノールを除去し、水（１１０ｍｌ）に再懸濁した。水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出して、トリアルキル化化合物の一部及び親油性不純物を除去し、モノ及び所望のジアルキル化生成物を水層に残した。良好なクロマトグラフィーを確保するため、水溶液を酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）で緩衝化した。水溶液を４℃で一晩保存してから、自動化分取ＨＰＬＣで精製を行った。
【０１９９】
収量（２．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ、２３％）。
【０２００】
質量分析：正イオン１０Ｖコーン電圧、実測値：３４４、計算値（Ｍ＋Ｈ）＝３４４。
【０２０１】
ＮＭＲ １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ１．２４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３），１．３（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３），１．２５−１．７５（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２，ＣＨ），（３Ｈ，ｓ，２×ＣＨ２），２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．８８（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｎ２），５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ２，２×ＮＨ，２×ＯＨ）。
【０２０２】
ＮＭＲ １３Ｃ（（ＣＤ３）２ＳＯ），δ９．０（４×ＣＨ３），２５．８（２×ＣＨ３），３１．０，２×ＣＨ２，３４．６，ＣＨ２，５６．８，２×ＣＨ２Ｎ；１６０．３，Ｃ＝Ｎ。
【０２０３】
ＨＰＬＣ条件：流速８ｍｌ／分、２５ｍｍＰＲＰカラムを使用
Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水、Ｂ＝アセトニトリル
時間 Ｂ（％）
０ ７．５
１５ ７５．０
２０ ７５．０
２２ ７．５
３０ ７．５
１回のラン当り３ｍｌの水溶液をロードし、１２．５〜１３．５分の時間枠で回収する。
【０２０４】
実施例６：ＩＧＦ前駆体２［キレートＸ−グルタリル−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
ペプチジル樹脂Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、キレートＸ−グルタリルテトラフルオロチオフェノールエステル（０．１ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液で三日間処理した。反応試薬を濾過によって濾別し、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０２０５】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し、風乾させた。
【０２０６】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：２０〜４０％のＢ、６０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：１３分）による精製で、３５ｍｇの純粋標品を得た。この純粋標品を、分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜５０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．６０分）で分析した。生成物を質量分析によってさらに調べた（ＭＨ＋計算値：１６８１．０、ＭＨ＋実測値：１６８１．１）。
【０２０７】
実施例７：ＩＧＦ前駆体２の放射性標識（ＩＧＦ造影剤２の形成）
上記実施例４に記載した方法を、以下のＨＰＬＣ及びＴＬＣを用いて、９９ｍＴｃによる標識を実施した。
【０２０８】
ＨＰＬＣ
溶媒Ａ：ＴＦＡの０．１％水溶液
溶媒Ｂ：ＴＦＡの０．１％ＭｅＣＮ溶液
０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
１０分：６０％溶媒Ａ、４０％溶媒Ｂ
１５分：６０％溶媒Ａ、４０％溶媒Ｂ
１７分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ
２０分：９０％溶媒Ａ、１０％溶媒Ｂ。
【０２０９】
ＴＬＣ ＳＧプレート及び生理食塩水の移動相では、過テクネチウム酸は溶媒先端で観察され、ワットマン１プレートとＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ、１：１の移動相では、ＲＨＴは起点で観察された。
【０２１０】
実施例８：非放射性ＩＧＦ造影剤３［３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオネート−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２］の合成
ペプチジル樹脂Ｈ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−スクシンイミジル−３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオネート（０．１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液で３日かけて処理した。反応試薬を濾過によって濾別し、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した。
【０２１１】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）中の２．５％水、２．５％ＥＭＳ及び２．５％ＴＩＳで２時間処理した。樹脂を濾過で除き、濾液を減圧蒸発させた。残渣にジエチルエーテルを加えた。得られた沈殿をエーテルで洗浄し、空気で乾燥させた。
【０２１２】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜５０％のＢ、６０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２７分）による精製で、５ｍｇの精製標品を得た。精製標品を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜５０％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分，カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．０３分）で分析した。さらに質量分析で生成物のキャラクタリゼーションを行った（ＭＨ＋計算値：１５１５．６，ＭＨ＋実測値：１５１５．８）。
【０２１３】
実施例９：レチノイン酸前駆体１［レチノイル−ＰＥＧ（１２）−プロピオニル−Ｌｙｓ−ＯＨ］の合成
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、０．４ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン中で、標準的な方法によって、ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍｍｏｌ）を塩基として用いて、過剰の２−クロロトリチルクロリド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）に結合させた。樹脂を、ジクロロメタン／メタノール／ジイソプロピルエチルアミン（１７：２：１）混合物、ジクロロメタン及びＤＭＦで洗浄した。Ｆｍｏｃ基を、標準的なピペリジンによる処理で脱離させ、Ｆｍｏｃ−アミノＰＥＧ（１２）−プロピオン酸（Ｐｏｌｙｐｕｒｅ ＡＳ、０．６ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ（０．６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍｍｏｌ）を用いてカップリングした。反応が完了したことを、標準的なカイザー法（Ｋａｉｓｅｒ ｔｅｓｔ）で確認した。Ｆｍｏｃ基の脱離後、レチノイン酸（Ｆｌｕｋａ、０．６ｍｍｏｌ）を、同じカップリング条件を使用してカップリングさせた。Ｄｄｅ保護基を、ＤＭＦ中で２％ヒドラジン水和物で処理することにより除去した（３×２分）。
【０２１４】
得られた樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ／ＴＦＥ／ＤＣＭ（２：２：６、１０ｍＬ）溶液で４５分間処理した。樹脂を濾過で除き、ヘキサン（２００ｍＬ）を濾液に加え、混合物を減圧蒸発させた。
【０２１５】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：３０〜８０％Ｂ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３３分）による精製で、１７ｍｇの純粋標品を得た。この純粋標品を、分析用（勾配：３０〜８０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：７．１１分）で分析した。生成物を質量分析によってさらに分析した（ＭＨ＋計算値：１０２８．７、ＭＨ＋実測値：１０２８．７）。
【０２１６】
実施例１０：非放射性レチノイン酸造影剤１［レチノイル−ＰＥＧ（１２）−プロピオニル−Ｌｙｓ（３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオニル）−ＯＨ）］の合成
樹脂レチノイル−ＰＥＧ（１２）−プロピオニル−Ｌｙｓ−Ｒ（０．０５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−スクシンイミジル−３−（４−ヒドロキシ−３−ヨードフェニル）プロピオネート（０．１ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液で、２０時間処理した。反応試薬を濾過で除き、樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭによって洗浄した。
【０２１７】
上記の樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ／ＴＦＥ／ＤＣＭ（２：２：６、１０ｍＬ）溶液で２時間処理した。樹脂を濾過で除去し、ヘキサン（２００ｍＬ）を濾液に加え、混合物を減圧蒸発させた。
【０２１８】
粗製物の分取用ＨＰＬＣ（勾配：５０〜１００％のＢ、４０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３１分）による精製で、１７ｍｇの純粋標品を得た。この純粋標品を、分析用ＨＰＬＣ（勾配：５０〜９５％のＢ、１０分間、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％のＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．２４分）で分析した。生成物を質量分析によってさらに分析した（ＭＨ＋計算値：１３０２．６、ＭＨ＋実測値：１３０２．６）。
【０２１９】
実施例１１：１２３Ｉ標識糖ペプチド造影剤１の合成
【０２２０】
【化２１】
上記の糖ペプチド造影剤１の前駆体を以下の通り放射性標識した。
【０２２１】
１０μｌの１２７ＮａＩ（１５ｍｇ／０．０１ＭのＮａＯＨ１００ｍｌ）溶液（１×１０−８ｍｏｌの１２７ＮａＩを含有）を、まず、マイクロ遠心管中の２００μｌの酢酸アンモニウム緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ４）に加えた。次に、１２７ＮａＩ／ＮＨ４ＯＡｃ溶液を、１２３Ｉ−ＮａＩの０．０５ＭのＮａＯＨ溶液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）（活性、１０ｍＣｉ（３６４ｍＣｉ／ｍｌ））に加え、溶液をよく混合した。５μｌの過酢酸（３６〜４０ｗｔ％酢酸溶液）を５ｍｌのＨ２Ｏに加え、よく混合し、１０μｌの希釈溶液を１２３／１２７Ｉ−ＮａＩ反応混合物に加えた。
【０２２２】
１００μｌの前駆体（０．７４ｍＭの水溶液）を反応混合物に加え、ピペットで混合し、５分後に反応を分析した。生成物を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａカラム５μ、Ｃ１８（２）１００Ａ、１５０×４．６ｍｍを用いたＨＰＬＣで分析又は精製した。
【０２２３】
溶媒Ａ：ＴＦＡの０．１％水溶液
溶媒Ｂ：ＴＦＡの０．１％アセトニトリル溶液
２分：１００％溶媒Ａ、０％溶媒Ｂ
２０分：５０％溶媒Ａ、５０％溶媒Ｂ
２５分：１０％溶媒Ａ、９０％溶媒Ｂ
３５分：１０％溶媒Ａ、９０％溶媒Ｂ
３６分：１００％溶媒Ａ、０％溶媒Ｂ
４３分：１００％溶媒Ａ、０％溶媒Ｂ。
【０２２４】
かかる条件でのＭ６Ｐ造影剤１の保持時間は９．９分である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）マンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）受容体に対する親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）造影基と
を含む造影剤であって、造影基がベクターの一体部分として存在しているか、或いは造影基が適当な化学基を介してベクターと結合している造影剤。
【請求項２】
前記ベクターが、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の少なくとも１種を含む、請求項１記載の造影剤。
（ｉ）６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列又はその断片もしくは類似体、
（ｉｉ）マンノース６−リン酸（Ｍ６Ｐ）、
（ｉｉｉ）二リン酸化糖ペプチド、又は
（ｉｖ）レチノイン酸又はその誘導体。
【請求項３】
前記ベクターが、６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列であるか、或いは以下の（ｉ）〜（ｉｖ）から選択される８〜６０アミノ酸の断片又はそのペプチド類似体である、請求項２記載の造影剤。
（ｉ）アミノ酸残基４８〜５５（配列番号２）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉ）アミノ酸残基８〜２８（配列番号３）とアミノ酸残基４１〜６１（配列番号４）とが直接又は式−（Ｌ３）ｐ−のリンカーを介して結合しているペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉｉ）アミノ酸残基８〜６７（配列番号５）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、及び
（ｉｖ）Ｐｈｅ２６Ｓｅｒ（配列番号６）、Ｐｈｅ１９Ｓｅｒ（配列番号７）、Ｇｌｕ１２Ｌｙｓ（配列番号８）、Ｔｙｒ２７Ｌｅｕ（配列番号９）のアミノ酸残基の置換体。
ただし、−（Ｌ３）ｐ−に関して、各Ｌ３は独立に−ＣＯ−、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、Ｃ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸残基、ポリアルキレングリコール、ポリ乳酸又はポリグリコール酸部分であり、
ｐは０〜３０の整数であり、
各Ｒ基は独立にＨ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル又はＣ１−１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に飽和又は不飽和炭素環又は複素環を形成する。
【請求項４】
前記ベクターがＭ６Ｐを含んでいて、以下の（ｉ）〜（ｖ）から選択される、請求項２記載の造影剤。
（ｉ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合ジマンノシド）
（ｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，３）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，３結合ジマンノシド）
（ｉｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，６）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，６結合ジマンノシド）
（ｉｖ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合トリマンノシド）
（ｖ）次式の二分岐オリゴマンノシド。
【化１】
式中、Ｍａｎはマンノースである。
【請求項５】
前記ベクターが二リン酸化糖ペプチドであって、次の式Ｉのものである、請求項２記載の造影剤。
【化２】
式中、
Ｒ１及びＲ２は各々独立に以下の（ｉ）〜（ｉｉ）：
（ｉ）グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、ラマノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミニル、フルクトース及びＮ−アセチルノイラミン酸から選択される天然Ｌ又はＤ単糖、又はそれらのリン酸化物もしくは硫酸化物、及び
（ｉｉ）（ｉ）から選択される複数の単糖からなるオリゴ糖
から選択され、
Ａ１及びＡ５は各々独立に−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−アセチル、Ｄ又はＬアミノ酸、ペプチド、糖ペプチド、ペプチド模倣体及びオリゴヌクレオチドから選択され、
Ａ２及びＡ４は各々独立にＤ又はＬ−ヒドロキシアミノ酸、例えばＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｙｌ、Ｈｙｐ、Ｔｙｒ、或いはＤ又はＬカルボキシアミドアミノ酸、例えばＡｓｎ及びＧｌｎであり、
Ａ３は、Ｄ又はＬ型の遺伝的コード又は非コードアミノ酸或いはペプチド模倣体又はヌクレオチドからなる群から選択され、
ｍは１〜３０の整数であり、
線状配列Ａ１〜Ａ５のいずれかの残基が共有結合して環状化合物を形成していてもよい。
【請求項６】
前記二リン酸化糖ペプチドが以下の（ｉ）又は（ｉｉ）である請求項５記載の造影剤。
（ｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−Ｌｙｓ（アミノベンズアミド）−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−ＮＨ２、又は
（ｉｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−ＮＨ２。
【請求項７】
前記ベクターがレチノイン酸又は次の式ＩＩのレチノイン酸類似体である、請求項２記載の造影剤。
【化３】
式中、Ｌ４、ｑ及びＲ″はそれぞれ請求項３でＬ３、ｐ及びＲについて定義した通りである。
【請求項８】
前記ベクターが、請求項２乃至請求項８の２種以上のベクターを組み合わせた多価ターゲティングベクターである、請求項２記載の造影剤。
【請求項９】
前記造影基が以下の（ｉ）〜（ｖｉｉ）から選択される、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の造影剤。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｖｉ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、及び
（ｖｉｉ）血管内検出に適したβ線放射体。
【請求項１０】
前記造影基が放射性金属イオンである、請求項９記載の造影剤。
【請求項１１】
前記放射性金属イオンが９９ｍＴｃである、請求項１０記載の造影剤。
【請求項１２】
前記造影基がγ線放出型放射性ハロゲンである、請求項９記載の造影剤。
【請求項１３】
前記γ線放出型放射性ハロゲンが１２３Ｉ及び１３１Ｉから選択される、請求項１２記載の造影剤。
【請求項１４】
前記造影基が陽電子放出型放射性非金属である、請求項９記載の造影剤。
【請求項１５】
前記陽電子放出型放射性非金属が１８Ｆである、請求項１４記載の造影剤。
【請求項１６】
前駆体と適当な造影基源との反応を含む、請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤の製造方法であって、上記前駆体が、
（ｉ）請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のＭ６Ｐ受容体に対して親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）上記造影基源と反応し得る化学基であって、造影基が化合物と結合して造影剤を生じる化学基と
を含んでおり、上記化学基がベクターの一体部分であるか或いはベクターと結合している、方法。
【請求項１７】
前記化学基が、
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含有する誘導体、
（ｉｖ）求核又は求電子置換反応用の活性化芳香族環を含む誘導体、
（ｖ）容易にアルキル化を起こす官能基を有する誘導体、又は
（ｖｉ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体
を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記前駆体が無菌の非発熱性の形態である、請求項１６又は請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記前駆体が固相と結合している、請求項１６乃至請求項１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
請求項１６乃至請求項１９のいずれか１項記載の方法で定義された前駆体であって、前記化学基が、
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含有する誘導体、又は
（ｉｖ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体
を含む、前駆体。
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物。
【請求項２２】
前記造影剤が放射性造影基を含む、請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２３】
一人の患者に適した放射性用量を有していて適当なシリンジ又は容器で供給される、請求項２２記載の医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２１乃至請求項２３のいずれか１項記載の医薬組成物の製造用キット。
【請求項２５】
インビボ診断又はイメージング法に用いられる請求項１乃至請求項１５記載の造影剤。
【請求項２６】
上記方法が、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボイメージングに関する、請求項２５記載の造影剤。
【請求項２７】
前記受容体が上方制御される病態が線維症に関連した病態である、請求項２６記載の造影剤。
【請求項２８】
前記線維症に関連した病態が、肝線維症、うっ血性心不全、糸球体硬化症又は呼吸不全である、請求項２７記載の造影剤。
【請求項２９】
前記線維症に関連した病態が肝線維症である、請求項２８記載の造影剤。
【請求項３０】
Ｍ６Ｐ受容体が肝実質細胞上で上方制御される、請求項２９記載の造影剤。
【請求項３１】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象でインビボ診断又はイメージングを行う方法であって、請求項２１乃至請求項２３の医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
【請求項３２】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象のインビボイメージングにおける請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤の使用であって、対象に請求項２１乃至請求項２３記載の医薬組成物を予め投与しておく使用。
【請求項３３】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボイメージング用の医薬品の製造における請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項３４】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤を身体に投与し、造影剤の取込を検出することを含んでなる方法。
【請求項１】
（ｉ）マンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）受容体に対する親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）造影基と
を含む造影剤であって、造影基がベクターの一体部分として存在しているか、或いは造影基が適当な化学基を介してベクターと結合している造影剤。
【請求項２】
前記ベクターが、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の少なくとも１種を含む、請求項１記載の造影剤。
（ｉ）６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列又はその断片もしくは類似体、
（ｉｉ）マンノース６−リン酸（Ｍ６Ｐ）、
（ｉｉｉ）二リン酸化糖ペプチド、又は
（ｉｖ）レチノイン酸又はその誘導体。
【請求項３】
前記ベクターが、６７アミノ酸ＩＧＦ−ＩＩ配列であるか、或いは以下の（ｉ）〜（ｉｖ）から選択される８〜６０アミノ酸の断片又はそのペプチド類似体である、請求項２記載の造影剤。
（ｉ）アミノ酸残基４８〜５５（配列番号２）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉ）アミノ酸残基８〜２８（配列番号３）とアミノ酸残基４１〜６１（配列番号４）とが直接又は式−（Ｌ３）ｐ−のリンカーを介して結合しているペプチド又はそのペプチド類似体、
（ｉｉｉ）アミノ酸残基８〜６７（配列番号５）を含むペプチド又はそのペプチド類似体、及び
（ｉｖ）Ｐｈｅ２６Ｓｅｒ（配列番号６）、Ｐｈｅ１９Ｓｅｒ（配列番号７）、Ｇｌｕ１２Ｌｙｓ（配列番号８）、Ｔｙｒ２７Ｌｅｕ（配列番号９）のアミノ酸残基の置換体。
ただし、−（Ｌ３）ｐ−に関して、各Ｌ３は独立に−ＣＯ−、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、Ｃ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸残基、ポリアルキレングリコール、ポリ乳酸又はポリグリコール酸部分であり、
ｐは０〜３０の整数であり、
各Ｒ基は独立にＨ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル又はＣ１−１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に飽和又は不飽和炭素環又は複素環を形成する。
【請求項４】
前記ベクターがＭ６Ｐを含んでいて、以下の（ｉ）〜（ｖ）から選択される、請求項２記載の造影剤。
（ｉ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合ジマンノシド）
（ｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，３）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，３結合ジマンノシド）
（ｉｉｉ）Ｍ６Ｐ（α１，６）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，６結合ジマンノシド）
（ｉｖ）Ｍ６Ｐ（α１，２）−Ｍａｎ（α１，２）−Ｍａｎ−Ｏ（ＣＨ２）８ＣＯ２Ｍｅ（α１，２結合トリマンノシド）
（ｖ）次式の二分岐オリゴマンノシド。
【化１】
式中、Ｍａｎはマンノースである。
【請求項５】
前記ベクターが二リン酸化糖ペプチドであって、次の式Ｉのものである、請求項２記載の造影剤。
【化２】
式中、
Ｒ１及びＲ２は各々独立に以下の（ｉ）〜（ｉｉ）：
（ｉ）グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、ラマノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミニル、フルクトース及びＮ−アセチルノイラミン酸から選択される天然Ｌ又はＤ単糖、又はそれらのリン酸化物もしくは硫酸化物、及び
（ｉｉ）（ｉ）から選択される複数の単糖からなるオリゴ糖
から選択され、
Ａ１及びＡ５は各々独立に−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−アセチル、Ｄ又はＬアミノ酸、ペプチド、糖ペプチド、ペプチド模倣体及びオリゴヌクレオチドから選択され、
Ａ２及びＡ４は各々独立にＤ又はＬ−ヒドロキシアミノ酸、例えばＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｙｌ、Ｈｙｐ、Ｔｙｒ、或いはＤ又はＬカルボキシアミドアミノ酸、例えばＡｓｎ及びＧｌｎであり、
Ａ３は、Ｄ又はＬ型の遺伝的コード又は非コードアミノ酸或いはペプチド模倣体又はヌクレオチドからなる群から選択され、
ｍは１〜３０の整数であり、
線状配列Ａ１〜Ａ５のいずれかの残基が共有結合して環状化合物を形成していてもよい。
【請求項６】
前記二リン酸化糖ペプチドが以下の（ｉ）又は（ｉｉ）である請求項５記載の造影剤。
（ｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−Ｌｙｓ（アミノベンズアミド）−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ−（１，２）−α−Ｄ−マンノース］−ＮＨ２、又は
（ｉｉ）Ａｃ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ［α−Ｄ−Ｍ６Ｐ］−ＮＨ２。
【請求項７】
前記ベクターがレチノイン酸又は次の式ＩＩのレチノイン酸類似体である、請求項２記載の造影剤。
【化３】
式中、Ｌ４、ｑ及びＲ″はそれぞれ請求項３でＬ３、ｐ及びＲについて定義した通りである。
【請求項８】
前記ベクターが、請求項２乃至請求項８の２種以上のベクターを組み合わせた多価ターゲティングベクターである、請求項２記載の造影剤。
【請求項９】
前記造影基が以下の（ｉ）〜（ｖｉｉ）から選択される、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の造影剤。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｖｉ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、及び
（ｖｉｉ）血管内検出に適したβ線放射体。
【請求項１０】
前記造影基が放射性金属イオンである、請求項９記載の造影剤。
【請求項１１】
前記放射性金属イオンが９９ｍＴｃである、請求項１０記載の造影剤。
【請求項１２】
前記造影基がγ線放出型放射性ハロゲンである、請求項９記載の造影剤。
【請求項１３】
前記γ線放出型放射性ハロゲンが１２３Ｉ及び１３１Ｉから選択される、請求項１２記載の造影剤。
【請求項１４】
前記造影基が陽電子放出型放射性非金属である、請求項９記載の造影剤。
【請求項１５】
前記陽電子放出型放射性非金属が１８Ｆである、請求項１４記載の造影剤。
【請求項１６】
前駆体と適当な造影基源との反応を含む、請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤の製造方法であって、上記前駆体が、
（ｉ）請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のＭ６Ｐ受容体に対して親和性を有するベクターと、
（ｉｉ）上記造影基源と反応し得る化学基であって、造影基が化合物と結合して造影剤を生じる化学基と
を含んでおり、上記化学基がベクターの一体部分であるか或いはベクターと結合している、方法。
【請求項１７】
前記化学基が、
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含有する誘導体、
（ｉｖ）求核又は求電子置換反応用の活性化芳香族環を含む誘導体、
（ｖ）容易にアルキル化を起こす官能基を有する誘導体、又は
（ｖｉ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体
を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記前駆体が無菌の非発熱性の形態である、請求項１６又は請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記前駆体が固相と結合している、請求項１６乃至請求項１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
請求項１６乃至請求項１９のいずれか１項記載の方法で定義された前駆体であって、前記化学基が、
（ｉ）金属造影基と錯形成し得るキレート剤、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換反応のためのアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含有する誘導体、又は
（ｉｖ）チオール含有化合物とのアルキル化によってチオエーテル含有生成物を生じる誘導体
を含む、前駆体。
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物。
【請求項２２】
前記造影剤が放射性造影基を含む、請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２３】
一人の患者に適した放射性用量を有していて適当なシリンジ又は容器で供給される、請求項２２記載の医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２１乃至請求項２３のいずれか１項記載の医薬組成物の製造用キット。
【請求項２５】
インビボ診断又はイメージング法に用いられる請求項１乃至請求項１５記載の造影剤。
【請求項２６】
上記方法が、Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボイメージングに関する、請求項２５記載の造影剤。
【請求項２７】
前記受容体が上方制御される病態が線維症に関連した病態である、請求項２６記載の造影剤。
【請求項２８】
前記線維症に関連した病態が、肝線維症、うっ血性心不全、糸球体硬化症又は呼吸不全である、請求項２７記載の造影剤。
【請求項２９】
前記線維症に関連した病態が肝線維症である、請求項２８記載の造影剤。
【請求項３０】
Ｍ６Ｐ受容体が肝実質細胞上で上方制御される、請求項２９記載の造影剤。
【請求項３１】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象でインビボ診断又はイメージングを行う方法であって、請求項２１乃至請求項２３の医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
【請求項３２】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態にある対象のインビボイメージングにおける請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤の使用であって、対象に請求項２１乃至請求項２３記載の医薬組成物を予め投与しておく使用。
【請求項３３】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態のインビボイメージング用の医薬品の製造における請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項３４】
Ｍ６Ｐ受容体が上方制御される病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の造影剤を身体に投与し、造影剤の取込を検出することを含んでなる方法。
【公表番号】特表２００９−５１８３７２（Ｐ２００９−５１８３７２Ａ）
【公表日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４３８９８（Ｐ２００８−５４３８９８）
【出願日】平成１８年１２月７日（２００６．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００４５７５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６６１１５
【国際公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月７日（２００６．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００４５７５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６６１１５
【国際公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
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