脂肪滴・セルライト抑制装置および脂質抑制効果増強薬、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ製剤
【課題】プロビタミンＣ剤と高周波温熱装置を組み合わせることにより、脂肪滴抑制効果・セルライト抑制の大幅な向上を可能ならしめるとともに温熱による細胞死の最小限の抑制を図り、かつ被施術者にとって温熱による苦痛を感じることが無く穏やかな温熱処理を行うことができる脂肪滴・セルライト抑制装置を提供するとともに、脂質抑制効果増強薬を提供する。
【解決手段】 セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向けの上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有することを特徴とする脂質抑制効果増強薬である。
【解決手段】 セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向けの上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有することを特徴とする脂質抑制効果増強薬である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は高周波温熱による細胞死の最小限抑制、好ましくは９７％以上の細胞生存率をもたらす安全性の高いセルライト／脂質代謝の改善を図ることができる脂肪滴・セルライト抑制装置およびに脂質抑制効果増強薬、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、脂肪滴に係わる組織や細胞の好ましくない発現とその影響を抑制することのできる新しい組成物とその薬剤に関するものが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
従来、脂肪滴形成抑制剤として、水酸化フラーレン類および有機化合物により修飾もしくは包接されたフラーレン複合体のうち１種以上を有効成分として含有していることを特徴とする脂肪滴形成抑制剤（請求項１）の発明がある（特許文献１：特開２００８−２２２６４５）。
同文献１には、請求項２以下に次の通り記載されている。水酸化フラーレン類は、水酸基を１分子当り３０以上４０以下で結合しているフラーレンまたはその誘導体であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪滴形成抑制剤（請求項２）。フラーレン複合体は、フラーレンおよびフラーレン誘導体のうちの１種以上と、有機オリゴマー、有機ポリマー、シクロデキストリンおよびクラウンエーテルとその類縁化合物のうちの１種以上の有機化合物との複合体であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪滴形成抑制剤（請求項３）。γ−シクロデキストリンにより１．５〜２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ比で包接されているフラーレン複合体であることを特徴とする請求項３に記載の脂肪滴形成抑制剤（請求項４）。請求項１から４のうちのいずれかの抑制剤からなることを特徴とする脂肪滴由来の細胞傷害の防御剤（請求項５）。請求項１から４のうちのいずれかの抑制剤からなることを特徴とする脂肪細胞分化抑制剤（請求項６）。
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−２２２６４５公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記特許文献１は、従来のレチノイドに代わり得る高活性の脂肪滴形成の抑制が実現され、これによって、脂肪滴由来の細胞傷害の発生が効果的に防御され、脂肪細胞そのものの分化が抑制されることになる旨の記載がされ、スキンケア、化粧品、皮膚活性剤等として有用である旨の記載がされている。
しかし、脂肪滴形成抑制剤を配合したスキンケア、化粧品等が市販されたとしてもこれだけでは脂肪滴形成抑制やセルライト抑制に十分な効果が期待できるものであるとは言えない。
【０００６】
また、従来の高周波温熱機器では、被施術者が温熱に耐えられる範囲での高い温度設定をすることでより温熱効果が得られるとされていたが被施術者にとっては温熱による苦痛は避けがたいものであった。
【０００７】
さらに、温熱が脂肪滴・セルライト（皮膚表面凸凹脂肪塊）を抑制するらしいことは、従来は経験的に漠然と知られているに過ぎなかったが、その具体的な温熱条件も解明されてこなかったし、その解明のために人体それ自体で解析することは、統計学的に充分に多数の症例数を確保することも困難な上に、対照群と試験群との間で人体特性条件を同一に揃えることも容易ではなく、さらに、その人体においてセルライトや脂肪滴の増減を解析することも精度と感度の観点から困難であった。
【０００８】
本発明は上記の点に鑑みてなされたもので、その目的とするところは、プロビタミンＣ剤（体内に吸収された後、化学変化を起こしてビタミンＣになるものをいう。前駆体ともいう。）と高周波温熱装置を組み合わせることにより、脂肪滴抑制効果・セルライト抑制の大幅な向上を可能ならしめるとともに温熱による細胞死の最小限の抑制を図り、かつ被施術者にとって温熱による苦痛を感じることが無く穏やかな温熱処理を行うことができる脂肪滴・セルライト抑制装置および脂質抑制効果増強薬、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明に係る脂肪滴・セルライト抑制装置は、プロビタミンＣ剤の標的体部への投与手段と、被施術部位に当接するためのエレクトロードと、該エレクトロードに当接する被施術対象体の背後に設置する戻し電極であるレジスティブを備え、かつ０．４５ＭＨｚの高周波の下で、温度３７〜４１℃の範囲の温度調節部を備えるとともに１回当たりの温熱処理時間を１分〜３０分に設定する温熱処理時間調節部を備え、合計で６時間〜１週間のインターバルを置いた温熱投与手段を備えたことを特徴とする。
【００１０】
上記プロビタミンＣ剤は、アスコルビン酸−２−０−フォスフェート・アスコルビン酸−２−０−α−Ｄ−グルコシド・アスコルビン酸−２−０−フォスフェート−６−０−パルミチン酸エステル・アスコルビン酸−２−０−フォスフェート−６−０−（２−ヘキシルデカン酸）エステル・アスコルビン酸−２，３，５，６−０−（２’−ヘキシルデカン酸）テトラエステル、アスコルビン酸−６−０−パルミチン酸エステル、アスコルビン酸−６−０−ステアリン酸エステルからなる群から選ばれた一つまたは二つ以上を用いることを特徴とする。
【００１１】
本発明に係る脂肪抑制効果増強薬は、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向けの上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有することを特徴とする。特に、ビタミンＣの場合にあっては、水素添加大豆レシチン・コレステロールから構成され、超音波装置・エクストルーダから調整されたリポソームによってアスコルビン酸のまま包含する皮膚浸透性が増強されたビタミンＣであることを特徴とする。
【００１２】
本発明に係るセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを温熱処理においても分解せずに保持させる温熱安定化剤を含有することを特徴とする。
【００１３】
本発明に係るセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向け上記プロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、温熱安定化剤として、マニトール、コーンスターチ、キチン・キトサンからなる群から選ばれた一つ以上の物質を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
温熱が脂肪滴・セルライト（皮膚表面凸凹脂肪塊）を抑制するらしいことは、従来は経験的に漠然と知られているに過ぎなかったが、その具体的な温熱条件も解明されてこなかったし、その解明のために人体それ自体で解析することは、統計学的に充分に多数の症例数を確保することも困難な上に、対照群と試験群との間で人体特性条件を同一に揃えることも容易ではなく、さらに、その人体においてセルライトや脂肪滴の増減を解析することも精度と感度の観点から困難であった。
【００１５】
本発明は、脂肪滴やセルライトの形成に関する中心的役割を果たす前駆脂肪細胞および／または脂肪細胞を用い、さらには、これら前駆脂肪細胞および／または脂肪細胞を組み込んだ３次元ヒト皮膚組織モデル、加えて、ヒト皮膚摘出組織片、および、ユカタン産ミニ豚皮膚摘出組織片などを用いて、各々、同一の皮膚特性条件の下に、試験群と比較対照群を操作し、統計学的に充分に多数の適用例を解析して、脂肪滴とセルライトを抑制する最適条件を求めた上で、その範囲前後に絞って臨床上の最適条件を求めた。
【００１６】
その結果、温熱処理装置の単独使用よりも、温熱に加えて、各種プロビタミンＣ剤を併用したことにより、相乗効果として、脂肪滴とセルライトの抑制が顕著になることが判明した。
また、温熱を一定期間のインターバルを置いて温熱処理する手段と、各温熱処理手段の適用に際して本発明で見いだした特定プロビタミンＣ剤を特定濃度で標的体部に投与する併用手段が脂肪滴・セルライト抑制に著効を示すことが本発明によって見いだされた。
【００１７】
さらに、本発明に係る脂肪抑制効果増強薬は、上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有するので、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向け治療に有効に機能することとなる。
【００１８】
さらにまた、本発明に係るセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを温熱処理においても分解せずに保持させる温熱安定化剤として寄与することができる。
【００１９】
そして、本発明の上記プロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、温熱安定化剤として、マニトール、コーンスターチ、キチン・キトサンからなる群から選ばれた一つ以上の物質を含有することによりセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けとして好適である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ユカタン産ミニ豚皮膚摘出組織片を用いてプロビタミンＣ剤と高周波温熱装置の併用による脂肪滴・セルライト抑制装置を示す斜視図である。
【図２】図１のプロビタミンＣ剤を投与した試験片Ａ、Ｂ、Ｃに本発明に係る温熱処理装置を用いて４１℃の温度条件下で５分間、高周波温熱を投与した場合を示す状態図である。
【図３】ＡＰＳ投与量に対する脂肪滴蓄積量の変化を示す状態図である。
【図４】脂肪滴の顕微鏡写真で、左上写真はプロビタミンＣ剤及び温熱処理装置を無投与の場合を示し、右上写真は０．０３％濃度のＡＰＳのみを投与した場合を示し、左下写真はＡＰＳは無投与で温熱処理装置のみを適用した場合を示し、右下写真は０．０３％濃度のＡＰＳ及び温熱処理装置を適用した場合の脂肪滴の状態を示す。
【図５】３０，０００個の細胞群を２日放置後、ＡＰＳ投与と温熱処理装置を適用し、６時間後に温熱処理装置のみを適用し、１８時間後にＡＰＳ投与と温熱処理装置を適用する操作を繰り返して、顕微鏡写真撮影の条件とした説明図である。
【図６】脂肪滴蓄積量の相対比を示す顕微鏡写真である。
【図７】図８の顕微鏡写真を撮影するための試験片の顕微鏡写真撮影の条件とした説明図である。
【図８】０．０３％濃度のＡＰＳを投与せず温熱処理装置の適用もしない場合及びいずれか一方を採用した場合及び併用した場合の脂肪滴の状態を示す顕微鏡写真である。
【図９】キャパシティブエレクトリックトランスファーシステムの電流の動きを示す説明図である。
【図１０】非対称電極間で加えられたエネルギー分配を示す説明図である。
【図１１】ＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍの背面図である。
【図１２】ＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍの正面図である。
【図１３】ＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ前面に表示されるコントロール類の表示部の説明図である。
【発明を実施するための形態】
【実施例１】
【００２１】
脂肪細胞／前駆脂肪細胞での脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御についてについて実施した。
間葉系前駆脂肪細胞ＯＰ９を培養し通常培地からインスリン含有ＫＳＲ培地に置換すると、脂肪細胞への分化が開始されるが、この時に本発明のＣａｐａｃｉｔｉｖｅ−Ｒｅｓｉｓｔｉｖｅ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ−Ｔｒａｎｓｆｅｒ装置（（株）インディバ・ジャパン製品：ＭＤ５３０） （ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ ）の身体温熱装置を使用してＬｅｖｅｌ ５， Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ５， ２０ ｓｅｃに該当する電気特性を設定した。室温２６．５℃から４１℃にシフトアップするが、その後に、同装置のＬｅｖｅｌ ２〜３に設定した。脂肪細胞は４１℃で１ ｍｉｎ保持した。この時に、プロビタミンＣ剤としてアスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェート ナトリウム塩（ＡＰＳ） を１ ｍＭ （３００ ｐｐｍ， ０．０３ｗｔ％）の濃度で投与して一日１２時間おきに２回反復して３日間実施する試験区と無投与の比較対照区とを比較した。
細胞内の脂肪滴は、オイルレッドオー色素で染色した後に１０％メタノール水溶液でリンスしてリンス廃液が５３０ ｎｍでの吸光度がゼロと成る３〜５回まで徹底的にリンスして、細胞外や細胞表面のオイルレッドオー色素を消滅させた後に、位相差顕微鏡で撮影すると共に、細胞内のオイルレッドオー色素を抽出して５３０ ｎｍで吸光プレ−トリーダーと分光光度計で細胞内脂肪滴を定量した。細胞死と細胞生存は、各々、プロピジウムヨーダイドとカルセインアミノメトキシエステルで染色し、その蛍光度を蛍光プレートリーダーで評価した。
【００２２】
本発明で使用するＭＤ５３０は０．４５ＭＨｚの高周波温熱機器であり、施術箇所への循環を通じて人体細胞の深部加温を行う。キャパシティブ用エレクトロードとレジスティブ用エレクトロードを使用し、深部加温を行う。キャパシティブモードを採用する場合、ステンレス製のエレクロロードの円形盤の表面は人の肌に直接触れないようにプラスチックで表面をコーティングしている。エレクトロードは、細胞に高周波エネルギーを透過するコンデンサーの役割をし、施術部位を加温する。透過された高周波エネルギーは、板型戻し電極に向って透過される。他方、レジスティブモードでは、直接、施術箇所に置かれたＲＥＳ用エレクトロード（ステンレス製）を通して人体細胞へ高周波電流を流す。この電流は戻し電極に電導する。高周波エネルギーが細胞内に透過されたとき、細胞が抵抗体となり組織の温度を集中的に上昇させ、深部加温が行われる。本機器では、被施術者に流れる電流の強さ、被施術者に加えられる皮相電力（キャパシティブモード）、アクティブパワー（レジスティブモード）及びエレクトロードと被施術者の抵抗を測定し、モニタリングができる。
【００２３】
図１１はＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍの背面図で、１は電源スイッチ、２はヒューズホルダー、３は電源ソケット、４はアース用ジャック、５は冷却ファン、６は仕様ラベルをそれぞれ示す。図１２はＭＤ５３０の正面図で、７はＬＣＤ画面、８はキーパッド、９はキャパシティブ用出力、１０は戻し電極用出力、１１はレジスティブ用出力をそれぞれ示す。図１３はＭＤ５３０の前面に表示されるコントロール類の表示部の説明図で、１２はスタンバイインジケータランプ、１３はＯＮ／ＯＦＦキー、１４はメニューキー、１５はキャパシティブモードキー、レジスティブモードキー、１７はリセットキー、１８はスタート／ストップキー、１９は時間増キー、時間減キー、２１は出力増／減ダイヤルノブをそれぞれ示す。
【００２４】
キャパシティブモードの出力に対するインピーダンスは、皮膚組織上に置かれたエレクトロードのインピーダンス（１，０００オーム）に相応するように計算されている。この方法により多容量のエネルギーの透過を実現できる。エレクトロードを通じての組織への循環高周波エネルギーの行方は、図９に示す。ＭＤ５３０からのエネルギーは、金属軸Ａを通してＢの先端（エレクトロードの最下部）へ伝わる。そのエネルギーは，Ｃの絶縁体部分により組織と隔てられるため低下し、エレクトロード全表面、容量的に組織に伝達される。組織Ｄは、合計で１，０００オームとなる複数の無限大の抵抗を定着させ、そのコンデンサーの性質により第二のプレートのような働きをする。図９の点線Ｅが第二のプレートとして定義され、コンデンサーとしての働きがなされる。１，０００オーム相当の抵抗は、実際はＢ点とＥ点の間で発生し、その部分で温度上昇が起こり、その強深度は、本機器のパワー（レベル調整に対応）・エレクトロードの大きさ・施術部位の組織の特質・施術時間により決まる。特に本発明では、被施術者が被施術者にとって温熱による苦痛を感じることが無く穏やかな温熱処理、すなわち３７〜４１℃の範囲の温度設定により温熱処理を行うことができる点にある。
【００２５】
上記の条件下において、その結果を以下に示す。
（１）脂肪細胞への分化誘導処理によって、細胞の核の周辺に、ドーナッツ状に脂肪滴（赤く染色；細胞１個当たり約２０個余り）蓄積が見られた。細胞生存率は９９．３±０．４％だった。
（２）４１℃でのＣＲｅｔ温熱装置は、プロビタミンＣ剤なしでも脂肪滴蓄積量を２２％減少した。ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の適用により脂肪滴蓄積が抑制された。細胞死は０．８±０．２％と少しあるが顕著ではなかった。
【００２６】
（３）プロビタミンＣ剤（アスコルビン酸誘導体）ＡＰＳ（アスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェート ナトリウム塩）の３００ ｐｐｍ （０．０３ｗｔ％， １ ｍＭ）の濃度での上記温熱装置を適用しない場合での３７℃での投与は、細胞核の周辺に脂肪滴蓄積が見られたが、脂肪滴蓄積を２０％抑制した。ＡＰＳまたはＣＲｅｔ温熱装置（１ ｍｉｎ）適用による細胞死は０．１±０．０％と少し見られたが、無視しうるレベルであった。
【００２７】
（４）ＡＰＳの３００ ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用は、脂肪滴蓄積を５４％抑制した。アスコルビン酸誘導体ＡＰＳの投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用により脂肪滴抑制効果は大幅に増大した。脂肪滴のない細胞が過半数を占めた。細胞核の周辺に脂肪滴が蓄積されたが、ＡＰＳ投与で細胞全体に脂肪滴蓄積が抑制され、この抑制は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用で一層増大した。細胞生存率は９９．０±０．６％を維持した。ＡＰＳから変換されたビタミンＣが脂肪燃焼促進剤カルニチンを合成する酵素トリメチルリシン ジオキゲナーゼ＆γ−ブチロベタイン ジオキシゲナーゼを促進すると共に、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置による脂肪滴流動化＆分散化が奏功したことを示唆するものである。
【００２８】
（５）従来法として、通常の身体温熱装置で４２，４３，４４，４５℃の温度４点で各々６０分間の処理による温熱単独を行なう比較対照例を試験した結果、脂肪滴抑制は、各温度で、８．９，１１．６，１０．４，５．２％の抑制であり、細胞死が各々、１８．１±４．７，２７．０±５．９，４１．３±１１．０，６１．８±５．５％だった。過酷な温熱装置の単独使用は細胞傷害と細胞生存の指標であるサクシネートデヒドロゲナーゼを主体とするミトコンドリア脱水素酵素の活性低下をもたらすと共に、透過型電子顕微鏡による細胞形態では、活発な細胞代謝の指標となるマイクロビラスの消失、細胞膜の破綻、シュリンキッジ（細胞萎縮）、ピクノーシス（核凝縮）、カリオレキシス（核断片化）が認められた。これらは従来の過酷な温熱装置の適用が細胞死を広範囲に惹起させるという犠牲の下に施行されていた可能性を示唆するものである。
【実施例２】
【００２９】
前駆脂肪細胞を組み込んだ３次元ヒト皮膚組織モデルでの脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御について実施した。
ヒト皮膚繊維芽細胞ＯＵＭＳ−３６を含むＩ型コラーゲンから構成される真皮、その上にＩＶ型コラーゲン・ラミニン・エンタクチン・フィブロネクチンを含有するマトリゲルから構成される基底膜、さらにその上に、間葉系前駆脂肪細胞ＯＰ９を添加することを特徴とし、その上に、ヒト皮膚角化細胞ＨａＣａＴから構成される表皮を各々重層し、最後にエアーリフトによって角層を形成させて取得される脂肪滴形成量評価向けの３次元ヒト皮膚組織モデルを作製し、実施例１と同様な試験を行ない、脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御を評価し、併せて、皮膚組織片をクライオスタットで４μｍ厚の超薄切片を調製してオイルレッドオー色素で脂肪滴を染色した皮膚組織の断面構造において、断面積に占める脂肪滴の面積の割合をＮＩＨ−ＩｍａｇｅとＩｍａｇｅ−Ｊソフトウェアで解析した。細胞死レベルはヘマトキシリンーエオシン染色によって、変質細胞の細胞総数に占める比率から、評価した。さらに、皮膚表面の凹凸形状も走査型電子顕微鏡で撮影した。皮膚表面の凹凸形状はシリコーンゴムを用いたレプリカを作製して凸凹度をラインヒストグラム化してセルライト度を評価した。
【００３０】
この結果、比較例として、４１℃でのＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の単独適用（常温からのシフトアップ３４ｓｅｃ、設定温度到達後の温度平行時間５ｍｉｎ、常温へ低下するシフトダウン３ｍｉｎ１４ｓｅｃ：以下、これらを単に「５ｍｉｎ適用」と呼ぶ）は、プロビタミンＣ剤なしでも脂肪滴蓄積量を２２．４±３．７％減少させた。ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の単独適用による脂肪滴蓄積抑制効果が有意に示された。
もう一つの比較例として、プロビタミンＣ剤（アスコルビン酸誘導体）ＡＰＳ（アスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェート ナトリウム塩）の３００ｐｐｍ（０．０３ｗｔ％）の濃度での上記温熱装置を適用しない場合での３７℃での投与は、細胞核の周辺に脂肪滴蓄積が見られたが、脂肪滴蓄積を１６．１±２．９％抑制した。ＡＰＳ単独投与またはＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置（５ｍｉｎ適用）単独適用による細胞死は各々０．１±０．０％、２．２±０．３％と無視しうるレベルまたは僅少レベルであった。
【００３１】
一方、本発明では、ＡＰＳの３００ ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用、または、温熱安定化剤としてマニトール５００ｐｐｍ、コーンスターチ８００ｐｐｍ、イカ筋（中骨）キトサン（キトサン成分８３〜９７％、キチン成分３〜１７％；β型キチンを出発材料にして脱アセチル反応などの処理で調製したキチン・キトサン）３５０ｐｐｍを添加したＡＰＳの３００ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用、は、脂肪滴蓄積を５４．７±４．６％、または、７３．３±５．８％抑制した。アスコルビン酸誘導体ＡＰＳの投与とＣＲｅｔ温熱装置（５ｍｉｎ適用）の併用により脂肪滴抑制効果は増大し、さらに、温熱安定化剤の添加によってこの効果が促進された。これら本発明例ではいずれも脂肪滴のほぼ検出されない細胞が過半数を占めた。細胞核の周辺に脂肪滴が蓄積されたが、ＡＰＳ投与で細胞全体に脂肪滴蓄積が抑制され、この抑制は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用で一層増大し、さらに温熱安定化剤によって顕著になったことになる。細胞死率も各々０．３±０．０％と０．２±０．０％と無視しうるレベルだった。
【実施例３】
【００３２】
改変ブロノフ拡散チェンバーに組み込んだインフォームドコンセントを提出した４８歳の日本人女性の耳后下の皮膚摘出組織片での脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御について実施例２と同様に実施した。
脂肪滴抑制試験の終了後に当該チェンバーより単離した皮膚組織片をクライオスタットで４μｍ厚の超薄切片を調製し、実施例２と同様に脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御を評価した。
【００３３】
この結果、比較例として、４１℃でのＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の単独適用（常温からのシフトアップ３３ｓｅｃ、設定温度到達後の温度平行時間５ｍｉｎ、常温へ低下するシフトダウン３ｍｉｎ２７ｓｅｃ：以下、これらを単に「５ｍｉｎ適用」と呼ぶ）は、プロビタミンＣ剤なしでも脂肪滴蓄積量を１９．１±２．９％減少させた。ＣＲｅｔ温熱装置の単独適用による脂肪滴蓄積抑制効果が有意に示された。
もう一つの比較例として、プロビタミンＣ剤（アスコルビン酸誘導体）ＡＰＳ（アスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェートナトリウム塩）の３００ｐｐｍ（０．０３ｗｔ％）の濃度での上記温熱装置を適用しない場合での３７℃での投与は、細胞核の周辺に脂肪滴蓄積が見られたが、脂肪滴蓄積を１２．０±３．５％抑制した。ＡＰＳ投与またはＡＰＳなしのＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置（５ｍｉｎ適用）単独適用による細胞死は各々２．０±０．４％または６．９±０．８％と無視しうるレベルまたは僅少レベルであった。
【００３４】
一方、本発明では、ＡＰＳの３００ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用、または、温熱安定化剤としてマニトール５００ｐｐｍ、コーンスターチ８００ｐｐｍ、イカ筋（中骨）キトサン（キトサン成分８３〜９７％、キチン成分３〜１７％；β型キチンを出発材料にして脱アセチル反応などの処理で調製したキチン・キトサン）３５０ｐｐｍを添加したＡＰＳの３００ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用は、各々５４．８±１２．６％または７０．４±６．３％脂肪滴蓄積を抑制した。脂肪滴抑制効果はプロビタミンＣのＡＰＳの投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置（５ｍｉｎ適用）の併用により明確となり、さらに温熱安定化剤を併用すると脂肪滴抑制効果は顕著になった。脂肪滴のほぼ検出されない細胞が過半数を占めた。細胞核の周辺に脂肪滴が蓄積されたが、ＡＰＳ投与で細胞全体に脂肪滴蓄積が抑制され、この抑制は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用で一層増大したことになり温熱安定化剤による促進効果も認められた。細胞死率も各々１．１±０．２％または１．７±０．２％と無視しうるレベルだった。
【実施例４】
【００３５】
臨床試験での脂肪塊・セルライトはインフォームドコンセントを得た健康な２６〜５６歳の日本人女性２４名をあらかじめ大腿最太部後側と臀部最厚部先端での皮下脂肪率をＭＲＩで評価し、当該部の皮膚表面形状は、セルライト皮表凹凸度として、スキンキャスト皮表形状レプリカ法で評価した。
この試験前の皮下脂肪率とセルライト皮表度および平均年齢に偏りがないように２４名を８名ずつ３群に分けて、毎週３回、各回、Ａ群は、温熱安定化剤なしのＡＰＳ３００ｐｐｍを太腿と臀部に１ｍＬ／ｃｍ２で塗布しＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置を各々１０分間と１５分間適用し、本発明のＢ群は、温熱安定化剤としてマニトール５００ｐｐｍ、コーンスターチ８００ｐｐｍ、イカ筋（中骨）キトサン（キトサン成分８３〜９７％、キチン成分３〜１７％；β型キチンを出発材料にして脱アセチル反応などの処理で調製したキチン・キトサン）３５０ｐｐｍを添加したＡＰＳ３００ｐｐｍを同様に塗布してＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍも同様に適用し、比較対照のＣ群は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ適用のみとして、各３週間継続して試験した。ＭＲＩ画像データは０−Ｇａｕｇｅソフトウェアを用いて内臓脂肪との境界線をも識別し皮下脂肪を自動判別して脂肪面積を算出する計測アルゴリズムで高精度に解析した。セルライト皮表凹凸度は、太腿・臀部の各当該部を各々１０ｃｍ平方、１５ｃｍ平方でスキンキャストで皮表形状を複製し、キメ・シワの小（上下）振幅を平坦化してセルライトの中〜大（上下）振幅を計測対象としてＩｍａｇｅ−ｊソフトウェアで解析した。
【００３６】
この結果、皮下脂肪面積率は、被験者８名の平均で試験前の数値を基準にして試験後に各々、Ａ群は８４．５±７．４％、Ｂ群は６８．９±４．０％、Ｃ群は９２．５±６．２％であり、セルライト皮表凸凹度は、Ａ群は７３．１±４．８％、Ｂ群は４４．５±２．０％、Ｃ群は８８．９±９．３％と３群いずれも試験前に比較して、皮下脂肪もセルライト形状も両方とも低下し、Ａ・Ｂ・Ｃ３群とも改善効果が有意に認められたことになるが、このうち、Ｃ群に比較してＡ群の改善効果が大きく、プロビタミンＣ剤のＡＰＳによる併用効果が優れていることを示すと共に、Ａ群に比較してＢ群は皮下脂肪もセルライト形状も両方ともより顕著な改善効果が認められ、ＡＰＳの温熱に対する安定化剤の添加効果が著明なことが検証された。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明はエステティック美容業界及び皮膚科医療等の分野あるいは医療装置・美容装置産業等に多大の貢献することができる。
【符号の説明】
【００３８】
Ａ 金属軸
Ｂ エレクトロード
Ｃ 絶縁体部分
Ｅ 第二のプレート
９ キャパシティブ用出力
１０ 戻し電極用出力
１１ レジスティブ用出力
１５ キャパシティブモードキー
１６ レジスティブモードキー
１９ 時間増キー
２０ 時間減キー
【技術分野】
【０００１】
本発明は高周波温熱による細胞死の最小限抑制、好ましくは９７％以上の細胞生存率をもたらす安全性の高いセルライト／脂質代謝の改善を図ることができる脂肪滴・セルライト抑制装置およびに脂質抑制効果増強薬、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、脂肪滴に係わる組織や細胞の好ましくない発現とその影響を抑制することのできる新しい組成物とその薬剤に関するものが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
従来、脂肪滴形成抑制剤として、水酸化フラーレン類および有機化合物により修飾もしくは包接されたフラーレン複合体のうち１種以上を有効成分として含有していることを特徴とする脂肪滴形成抑制剤（請求項１）の発明がある（特許文献１：特開２００８−２２２６４５）。
同文献１には、請求項２以下に次の通り記載されている。水酸化フラーレン類は、水酸基を１分子当り３０以上４０以下で結合しているフラーレンまたはその誘導体であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪滴形成抑制剤（請求項２）。フラーレン複合体は、フラーレンおよびフラーレン誘導体のうちの１種以上と、有機オリゴマー、有機ポリマー、シクロデキストリンおよびクラウンエーテルとその類縁化合物のうちの１種以上の有機化合物との複合体であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪滴形成抑制剤（請求項３）。γ−シクロデキストリンにより１．５〜２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ比で包接されているフラーレン複合体であることを特徴とする請求項３に記載の脂肪滴形成抑制剤（請求項４）。請求項１から４のうちのいずれかの抑制剤からなることを特徴とする脂肪滴由来の細胞傷害の防御剤（請求項５）。請求項１から４のうちのいずれかの抑制剤からなることを特徴とする脂肪細胞分化抑制剤（請求項６）。
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−２２２６４５公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記特許文献１は、従来のレチノイドに代わり得る高活性の脂肪滴形成の抑制が実現され、これによって、脂肪滴由来の細胞傷害の発生が効果的に防御され、脂肪細胞そのものの分化が抑制されることになる旨の記載がされ、スキンケア、化粧品、皮膚活性剤等として有用である旨の記載がされている。
しかし、脂肪滴形成抑制剤を配合したスキンケア、化粧品等が市販されたとしてもこれだけでは脂肪滴形成抑制やセルライト抑制に十分な効果が期待できるものであるとは言えない。
【０００６】
また、従来の高周波温熱機器では、被施術者が温熱に耐えられる範囲での高い温度設定をすることでより温熱効果が得られるとされていたが被施術者にとっては温熱による苦痛は避けがたいものであった。
【０００７】
さらに、温熱が脂肪滴・セルライト（皮膚表面凸凹脂肪塊）を抑制するらしいことは、従来は経験的に漠然と知られているに過ぎなかったが、その具体的な温熱条件も解明されてこなかったし、その解明のために人体それ自体で解析することは、統計学的に充分に多数の症例数を確保することも困難な上に、対照群と試験群との間で人体特性条件を同一に揃えることも容易ではなく、さらに、その人体においてセルライトや脂肪滴の増減を解析することも精度と感度の観点から困難であった。
【０００８】
本発明は上記の点に鑑みてなされたもので、その目的とするところは、プロビタミンＣ剤（体内に吸収された後、化学変化を起こしてビタミンＣになるものをいう。前駆体ともいう。）と高周波温熱装置を組み合わせることにより、脂肪滴抑制効果・セルライト抑制の大幅な向上を可能ならしめるとともに温熱による細胞死の最小限の抑制を図り、かつ被施術者にとって温熱による苦痛を感じることが無く穏やかな温熱処理を行うことができる脂肪滴・セルライト抑制装置および脂質抑制効果増強薬、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明に係る脂肪滴・セルライト抑制装置は、プロビタミンＣ剤の標的体部への投与手段と、被施術部位に当接するためのエレクトロードと、該エレクトロードに当接する被施術対象体の背後に設置する戻し電極であるレジスティブを備え、かつ０．４５ＭＨｚの高周波の下で、温度３７〜４１℃の範囲の温度調節部を備えるとともに１回当たりの温熱処理時間を１分〜３０分に設定する温熱処理時間調節部を備え、合計で６時間〜１週間のインターバルを置いた温熱投与手段を備えたことを特徴とする。
【００１０】
上記プロビタミンＣ剤は、アスコルビン酸−２−０−フォスフェート・アスコルビン酸−２−０−α−Ｄ−グルコシド・アスコルビン酸−２−０−フォスフェート−６−０−パルミチン酸エステル・アスコルビン酸−２−０−フォスフェート−６−０−（２−ヘキシルデカン酸）エステル・アスコルビン酸−２，３，５，６−０−（２’−ヘキシルデカン酸）テトラエステル、アスコルビン酸−６−０−パルミチン酸エステル、アスコルビン酸−６−０−ステアリン酸エステルからなる群から選ばれた一つまたは二つ以上を用いることを特徴とする。
【００１１】
本発明に係る脂肪抑制効果増強薬は、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向けの上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有することを特徴とする。特に、ビタミンＣの場合にあっては、水素添加大豆レシチン・コレステロールから構成され、超音波装置・エクストルーダから調整されたリポソームによってアスコルビン酸のまま包含する皮膚浸透性が増強されたビタミンＣであることを特徴とする。
【００１２】
本発明に係るセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを温熱処理においても分解せずに保持させる温熱安定化剤を含有することを特徴とする。
【００１３】
本発明に係るセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向け上記プロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、温熱安定化剤として、マニトール、コーンスターチ、キチン・キトサンからなる群から選ばれた一つ以上の物質を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
温熱が脂肪滴・セルライト（皮膚表面凸凹脂肪塊）を抑制するらしいことは、従来は経験的に漠然と知られているに過ぎなかったが、その具体的な温熱条件も解明されてこなかったし、その解明のために人体それ自体で解析することは、統計学的に充分に多数の症例数を確保することも困難な上に、対照群と試験群との間で人体特性条件を同一に揃えることも容易ではなく、さらに、その人体においてセルライトや脂肪滴の増減を解析することも精度と感度の観点から困難であった。
【００１５】
本発明は、脂肪滴やセルライトの形成に関する中心的役割を果たす前駆脂肪細胞および／または脂肪細胞を用い、さらには、これら前駆脂肪細胞および／または脂肪細胞を組み込んだ３次元ヒト皮膚組織モデル、加えて、ヒト皮膚摘出組織片、および、ユカタン産ミニ豚皮膚摘出組織片などを用いて、各々、同一の皮膚特性条件の下に、試験群と比較対照群を操作し、統計学的に充分に多数の適用例を解析して、脂肪滴とセルライトを抑制する最適条件を求めた上で、その範囲前後に絞って臨床上の最適条件を求めた。
【００１６】
その結果、温熱処理装置の単独使用よりも、温熱に加えて、各種プロビタミンＣ剤を併用したことにより、相乗効果として、脂肪滴とセルライトの抑制が顕著になることが判明した。
また、温熱を一定期間のインターバルを置いて温熱処理する手段と、各温熱処理手段の適用に際して本発明で見いだした特定プロビタミンＣ剤を特定濃度で標的体部に投与する併用手段が脂肪滴・セルライト抑制に著効を示すことが本発明によって見いだされた。
【００１７】
さらに、本発明に係る脂肪抑制効果増強薬は、上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有するので、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向け治療に有効に機能することとなる。
【００１８】
さらにまた、本発明に係るセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けプロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを温熱処理においても分解せずに保持させる温熱安定化剤として寄与することができる。
【００１９】
そして、本発明の上記プロビタミンＣ剤および／ビタミンＣ製剤は、温熱安定化剤として、マニトール、コーンスターチ、キチン・キトサンからなる群から選ばれた一つ以上の物質を含有することによりセルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けとして好適である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ユカタン産ミニ豚皮膚摘出組織片を用いてプロビタミンＣ剤と高周波温熱装置の併用による脂肪滴・セルライト抑制装置を示す斜視図である。
【図２】図１のプロビタミンＣ剤を投与した試験片Ａ、Ｂ、Ｃに本発明に係る温熱処理装置を用いて４１℃の温度条件下で５分間、高周波温熱を投与した場合を示す状態図である。
【図３】ＡＰＳ投与量に対する脂肪滴蓄積量の変化を示す状態図である。
【図４】脂肪滴の顕微鏡写真で、左上写真はプロビタミンＣ剤及び温熱処理装置を無投与の場合を示し、右上写真は０．０３％濃度のＡＰＳのみを投与した場合を示し、左下写真はＡＰＳは無投与で温熱処理装置のみを適用した場合を示し、右下写真は０．０３％濃度のＡＰＳ及び温熱処理装置を適用した場合の脂肪滴の状態を示す。
【図５】３０，０００個の細胞群を２日放置後、ＡＰＳ投与と温熱処理装置を適用し、６時間後に温熱処理装置のみを適用し、１８時間後にＡＰＳ投与と温熱処理装置を適用する操作を繰り返して、顕微鏡写真撮影の条件とした説明図である。
【図６】脂肪滴蓄積量の相対比を示す顕微鏡写真である。
【図７】図８の顕微鏡写真を撮影するための試験片の顕微鏡写真撮影の条件とした説明図である。
【図８】０．０３％濃度のＡＰＳを投与せず温熱処理装置の適用もしない場合及びいずれか一方を採用した場合及び併用した場合の脂肪滴の状態を示す顕微鏡写真である。
【図９】キャパシティブエレクトリックトランスファーシステムの電流の動きを示す説明図である。
【図１０】非対称電極間で加えられたエネルギー分配を示す説明図である。
【図１１】ＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍの背面図である。
【図１２】ＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍの正面図である。
【図１３】ＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ前面に表示されるコントロール類の表示部の説明図である。
【発明を実施するための形態】
【実施例１】
【００２１】
脂肪細胞／前駆脂肪細胞での脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御についてについて実施した。
間葉系前駆脂肪細胞ＯＰ９を培養し通常培地からインスリン含有ＫＳＲ培地に置換すると、脂肪細胞への分化が開始されるが、この時に本発明のＣａｐａｃｉｔｉｖｅ−Ｒｅｓｉｓｔｉｖｅ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ−Ｔｒａｎｓｆｅｒ装置（（株）インディバ・ジャパン製品：ＭＤ５３０） （ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ ）の身体温熱装置を使用してＬｅｖｅｌ ５， Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ５， ２０ ｓｅｃに該当する電気特性を設定した。室温２６．５℃から４１℃にシフトアップするが、その後に、同装置のＬｅｖｅｌ ２〜３に設定した。脂肪細胞は４１℃で１ ｍｉｎ保持した。この時に、プロビタミンＣ剤としてアスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェート ナトリウム塩（ＡＰＳ） を１ ｍＭ （３００ ｐｐｍ， ０．０３ｗｔ％）の濃度で投与して一日１２時間おきに２回反復して３日間実施する試験区と無投与の比較対照区とを比較した。
細胞内の脂肪滴は、オイルレッドオー色素で染色した後に１０％メタノール水溶液でリンスしてリンス廃液が５３０ ｎｍでの吸光度がゼロと成る３〜５回まで徹底的にリンスして、細胞外や細胞表面のオイルレッドオー色素を消滅させた後に、位相差顕微鏡で撮影すると共に、細胞内のオイルレッドオー色素を抽出して５３０ ｎｍで吸光プレ−トリーダーと分光光度計で細胞内脂肪滴を定量した。細胞死と細胞生存は、各々、プロピジウムヨーダイドとカルセインアミノメトキシエステルで染色し、その蛍光度を蛍光プレートリーダーで評価した。
【００２２】
本発明で使用するＭＤ５３０は０．４５ＭＨｚの高周波温熱機器であり、施術箇所への循環を通じて人体細胞の深部加温を行う。キャパシティブ用エレクトロードとレジスティブ用エレクトロードを使用し、深部加温を行う。キャパシティブモードを採用する場合、ステンレス製のエレクロロードの円形盤の表面は人の肌に直接触れないようにプラスチックで表面をコーティングしている。エレクトロードは、細胞に高周波エネルギーを透過するコンデンサーの役割をし、施術部位を加温する。透過された高周波エネルギーは、板型戻し電極に向って透過される。他方、レジスティブモードでは、直接、施術箇所に置かれたＲＥＳ用エレクトロード（ステンレス製）を通して人体細胞へ高周波電流を流す。この電流は戻し電極に電導する。高周波エネルギーが細胞内に透過されたとき、細胞が抵抗体となり組織の温度を集中的に上昇させ、深部加温が行われる。本機器では、被施術者に流れる電流の強さ、被施術者に加えられる皮相電力（キャパシティブモード）、アクティブパワー（レジスティブモード）及びエレクトロードと被施術者の抵抗を測定し、モニタリングができる。
【００２３】
図１１はＭＤ５３０のインディバＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍの背面図で、１は電源スイッチ、２はヒューズホルダー、３は電源ソケット、４はアース用ジャック、５は冷却ファン、６は仕様ラベルをそれぞれ示す。図１２はＭＤ５３０の正面図で、７はＬＣＤ画面、８はキーパッド、９はキャパシティブ用出力、１０は戻し電極用出力、１１はレジスティブ用出力をそれぞれ示す。図１３はＭＤ５３０の前面に表示されるコントロール類の表示部の説明図で、１２はスタンバイインジケータランプ、１３はＯＮ／ＯＦＦキー、１４はメニューキー、１５はキャパシティブモードキー、レジスティブモードキー、１７はリセットキー、１８はスタート／ストップキー、１９は時間増キー、時間減キー、２１は出力増／減ダイヤルノブをそれぞれ示す。
【００２４】
キャパシティブモードの出力に対するインピーダンスは、皮膚組織上に置かれたエレクトロードのインピーダンス（１，０００オーム）に相応するように計算されている。この方法により多容量のエネルギーの透過を実現できる。エレクトロードを通じての組織への循環高周波エネルギーの行方は、図９に示す。ＭＤ５３０からのエネルギーは、金属軸Ａを通してＢの先端（エレクトロードの最下部）へ伝わる。そのエネルギーは，Ｃの絶縁体部分により組織と隔てられるため低下し、エレクトロード全表面、容量的に組織に伝達される。組織Ｄは、合計で１，０００オームとなる複数の無限大の抵抗を定着させ、そのコンデンサーの性質により第二のプレートのような働きをする。図９の点線Ｅが第二のプレートとして定義され、コンデンサーとしての働きがなされる。１，０００オーム相当の抵抗は、実際はＢ点とＥ点の間で発生し、その部分で温度上昇が起こり、その強深度は、本機器のパワー（レベル調整に対応）・エレクトロードの大きさ・施術部位の組織の特質・施術時間により決まる。特に本発明では、被施術者が被施術者にとって温熱による苦痛を感じることが無く穏やかな温熱処理、すなわち３７〜４１℃の範囲の温度設定により温熱処理を行うことができる点にある。
【００２５】
上記の条件下において、その結果を以下に示す。
（１）脂肪細胞への分化誘導処理によって、細胞の核の周辺に、ドーナッツ状に脂肪滴（赤く染色；細胞１個当たり約２０個余り）蓄積が見られた。細胞生存率は９９．３±０．４％だった。
（２）４１℃でのＣＲｅｔ温熱装置は、プロビタミンＣ剤なしでも脂肪滴蓄積量を２２％減少した。ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の適用により脂肪滴蓄積が抑制された。細胞死は０．８±０．２％と少しあるが顕著ではなかった。
【００２６】
（３）プロビタミンＣ剤（アスコルビン酸誘導体）ＡＰＳ（アスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェート ナトリウム塩）の３００ ｐｐｍ （０．０３ｗｔ％， １ ｍＭ）の濃度での上記温熱装置を適用しない場合での３７℃での投与は、細胞核の周辺に脂肪滴蓄積が見られたが、脂肪滴蓄積を２０％抑制した。ＡＰＳまたはＣＲｅｔ温熱装置（１ ｍｉｎ）適用による細胞死は０．１±０．０％と少し見られたが、無視しうるレベルであった。
【００２７】
（４）ＡＰＳの３００ ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用は、脂肪滴蓄積を５４％抑制した。アスコルビン酸誘導体ＡＰＳの投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用により脂肪滴抑制効果は大幅に増大した。脂肪滴のない細胞が過半数を占めた。細胞核の周辺に脂肪滴が蓄積されたが、ＡＰＳ投与で細胞全体に脂肪滴蓄積が抑制され、この抑制は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用で一層増大した。細胞生存率は９９．０±０．６％を維持した。ＡＰＳから変換されたビタミンＣが脂肪燃焼促進剤カルニチンを合成する酵素トリメチルリシン ジオキゲナーゼ＆γ−ブチロベタイン ジオキシゲナーゼを促進すると共に、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置による脂肪滴流動化＆分散化が奏功したことを示唆するものである。
【００２８】
（５）従来法として、通常の身体温熱装置で４２，４３，４４，４５℃の温度４点で各々６０分間の処理による温熱単独を行なう比較対照例を試験した結果、脂肪滴抑制は、各温度で、８．９，１１．６，１０．４，５．２％の抑制であり、細胞死が各々、１８．１±４．７，２７．０±５．９，４１．３±１１．０，６１．８±５．５％だった。過酷な温熱装置の単独使用は細胞傷害と細胞生存の指標であるサクシネートデヒドロゲナーゼを主体とするミトコンドリア脱水素酵素の活性低下をもたらすと共に、透過型電子顕微鏡による細胞形態では、活発な細胞代謝の指標となるマイクロビラスの消失、細胞膜の破綻、シュリンキッジ（細胞萎縮）、ピクノーシス（核凝縮）、カリオレキシス（核断片化）が認められた。これらは従来の過酷な温熱装置の適用が細胞死を広範囲に惹起させるという犠牲の下に施行されていた可能性を示唆するものである。
【実施例２】
【００２９】
前駆脂肪細胞を組み込んだ３次元ヒト皮膚組織モデルでの脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御について実施した。
ヒト皮膚繊維芽細胞ＯＵＭＳ−３６を含むＩ型コラーゲンから構成される真皮、その上にＩＶ型コラーゲン・ラミニン・エンタクチン・フィブロネクチンを含有するマトリゲルから構成される基底膜、さらにその上に、間葉系前駆脂肪細胞ＯＰ９を添加することを特徴とし、その上に、ヒト皮膚角化細胞ＨａＣａＴから構成される表皮を各々重層し、最後にエアーリフトによって角層を形成させて取得される脂肪滴形成量評価向けの３次元ヒト皮膚組織モデルを作製し、実施例１と同様な試験を行ない、脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御を評価し、併せて、皮膚組織片をクライオスタットで４μｍ厚の超薄切片を調製してオイルレッドオー色素で脂肪滴を染色した皮膚組織の断面構造において、断面積に占める脂肪滴の面積の割合をＮＩＨ−ＩｍａｇｅとＩｍａｇｅ−Ｊソフトウェアで解析した。細胞死レベルはヘマトキシリンーエオシン染色によって、変質細胞の細胞総数に占める比率から、評価した。さらに、皮膚表面の凹凸形状も走査型電子顕微鏡で撮影した。皮膚表面の凹凸形状はシリコーンゴムを用いたレプリカを作製して凸凹度をラインヒストグラム化してセルライト度を評価した。
【００３０】
この結果、比較例として、４１℃でのＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の単独適用（常温からのシフトアップ３４ｓｅｃ、設定温度到達後の温度平行時間５ｍｉｎ、常温へ低下するシフトダウン３ｍｉｎ１４ｓｅｃ：以下、これらを単に「５ｍｉｎ適用」と呼ぶ）は、プロビタミンＣ剤なしでも脂肪滴蓄積量を２２．４±３．７％減少させた。ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の単独適用による脂肪滴蓄積抑制効果が有意に示された。
もう一つの比較例として、プロビタミンＣ剤（アスコルビン酸誘導体）ＡＰＳ（アスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェート ナトリウム塩）の３００ｐｐｍ（０．０３ｗｔ％）の濃度での上記温熱装置を適用しない場合での３７℃での投与は、細胞核の周辺に脂肪滴蓄積が見られたが、脂肪滴蓄積を１６．１±２．９％抑制した。ＡＰＳ単独投与またはＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置（５ｍｉｎ適用）単独適用による細胞死は各々０．１±０．０％、２．２±０．３％と無視しうるレベルまたは僅少レベルであった。
【００３１】
一方、本発明では、ＡＰＳの３００ ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用、または、温熱安定化剤としてマニトール５００ｐｐｍ、コーンスターチ８００ｐｐｍ、イカ筋（中骨）キトサン（キトサン成分８３〜９７％、キチン成分３〜１７％；β型キチンを出発材料にして脱アセチル反応などの処理で調製したキチン・キトサン）３５０ｐｐｍを添加したＡＰＳの３００ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用、は、脂肪滴蓄積を５４．７±４．６％、または、７３．３±５．８％抑制した。アスコルビン酸誘導体ＡＰＳの投与とＣＲｅｔ温熱装置（５ｍｉｎ適用）の併用により脂肪滴抑制効果は増大し、さらに、温熱安定化剤の添加によってこの効果が促進された。これら本発明例ではいずれも脂肪滴のほぼ検出されない細胞が過半数を占めた。細胞核の周辺に脂肪滴が蓄積されたが、ＡＰＳ投与で細胞全体に脂肪滴蓄積が抑制され、この抑制は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用で一層増大し、さらに温熱安定化剤によって顕著になったことになる。細胞死率も各々０．３±０．０％と０．２±０．０％と無視しうるレベルだった。
【実施例３】
【００３２】
改変ブロノフ拡散チェンバーに組み込んだインフォームドコンセントを提出した４８歳の日本人女性の耳后下の皮膚摘出組織片での脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御について実施例２と同様に実施した。
脂肪滴抑制試験の終了後に当該チェンバーより単離した皮膚組織片をクライオスタットで４μｍ厚の超薄切片を調製し、実施例２と同様に脂肪滴・セルライト抑制と細胞死防御を評価した。
【００３３】
この結果、比較例として、４１℃でのＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の単独適用（常温からのシフトアップ３３ｓｅｃ、設定温度到達後の温度平行時間５ｍｉｎ、常温へ低下するシフトダウン３ｍｉｎ２７ｓｅｃ：以下、これらを単に「５ｍｉｎ適用」と呼ぶ）は、プロビタミンＣ剤なしでも脂肪滴蓄積量を１９．１±２．９％減少させた。ＣＲｅｔ温熱装置の単独適用による脂肪滴蓄積抑制効果が有意に示された。
もう一つの比較例として、プロビタミンＣ剤（アスコルビン酸誘導体）ＡＰＳ（アスコルビン酸−２−Ｏ−フォスフェートナトリウム塩）の３００ｐｐｍ（０．０３ｗｔ％）の濃度での上記温熱装置を適用しない場合での３７℃での投与は、細胞核の周辺に脂肪滴蓄積が見られたが、脂肪滴蓄積を１２．０±３．５％抑制した。ＡＰＳ投与またはＡＰＳなしのＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置（５ｍｉｎ適用）単独適用による細胞死は各々２．０±０．４％または６．９±０．８％と無視しうるレベルまたは僅少レベルであった。
【００３４】
一方、本発明では、ＡＰＳの３００ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用、または、温熱安定化剤としてマニトール５００ｐｐｍ、コーンスターチ８００ｐｐｍ、イカ筋（中骨）キトサン（キトサン成分８３〜９７％、キチン成分３〜１７％；β型キチンを出発材料にして脱アセチル反応などの処理で調製したキチン・キトサン）３５０ｐｐｍを添加したＡＰＳの３００ｐｐｍ投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用は、各々５４．８±１２．６％または７０．４±６．３％脂肪滴蓄積を抑制した。脂肪滴抑制効果はプロビタミンＣのＡＰＳの投与とＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置（５ｍｉｎ適用）の併用により明確となり、さらに温熱安定化剤を併用すると脂肪滴抑制効果は顕著になった。脂肪滴のほぼ検出されない細胞が過半数を占めた。細胞核の周辺に脂肪滴が蓄積されたが、ＡＰＳ投与で細胞全体に脂肪滴蓄積が抑制され、この抑制は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置の併用で一層増大したことになり温熱安定化剤による促進効果も認められた。細胞死率も各々１．１±０．２％または１．７±０．２％と無視しうるレベルだった。
【実施例４】
【００３５】
臨床試験での脂肪塊・セルライトはインフォームドコンセントを得た健康な２６〜５６歳の日本人女性２４名をあらかじめ大腿最太部後側と臀部最厚部先端での皮下脂肪率をＭＲＩで評価し、当該部の皮膚表面形状は、セルライト皮表凹凸度として、スキンキャスト皮表形状レプリカ法で評価した。
この試験前の皮下脂肪率とセルライト皮表度および平均年齢に偏りがないように２４名を８名ずつ３群に分けて、毎週３回、各回、Ａ群は、温熱安定化剤なしのＡＰＳ３００ｐｐｍを太腿と臀部に１ｍＬ／ｃｍ２で塗布しＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ温熱装置を各々１０分間と１５分間適用し、本発明のＢ群は、温熱安定化剤としてマニトール５００ｐｐｍ、コーンスターチ８００ｐｐｍ、イカ筋（中骨）キトサン（キトサン成分８３〜９７％、キチン成分３〜１７％；β型キチンを出発材料にして脱アセチル反応などの処理で調製したキチン・キトサン）３５０ｐｐｍを添加したＡＰＳ３００ｐｐｍを同様に塗布してＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍも同様に適用し、比較対照のＣ群は、ＣＲｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ適用のみとして、各３週間継続して試験した。ＭＲＩ画像データは０−Ｇａｕｇｅソフトウェアを用いて内臓脂肪との境界線をも識別し皮下脂肪を自動判別して脂肪面積を算出する計測アルゴリズムで高精度に解析した。セルライト皮表凹凸度は、太腿・臀部の各当該部を各々１０ｃｍ平方、１５ｃｍ平方でスキンキャストで皮表形状を複製し、キメ・シワの小（上下）振幅を平坦化してセルライトの中〜大（上下）振幅を計測対象としてＩｍａｇｅ−ｊソフトウェアで解析した。
【００３６】
この結果、皮下脂肪面積率は、被験者８名の平均で試験前の数値を基準にして試験後に各々、Ａ群は８４．５±７．４％、Ｂ群は６８．９±４．０％、Ｃ群は９２．５±６．２％であり、セルライト皮表凸凹度は、Ａ群は７３．１±４．８％、Ｂ群は４４．５±２．０％、Ｃ群は８８．９±９．３％と３群いずれも試験前に比較して、皮下脂肪もセルライト形状も両方とも低下し、Ａ・Ｂ・Ｃ３群とも改善効果が有意に認められたことになるが、このうち、Ｃ群に比較してＡ群の改善効果が大きく、プロビタミンＣ剤のＡＰＳによる併用効果が優れていることを示すと共に、Ａ群に比較してＢ群は皮下脂肪もセルライト形状も両方ともより顕著な改善効果が認められ、ＡＰＳの温熱に対する安定化剤の添加効果が著明なことが検証された。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明はエステティック美容業界及び皮膚科医療等の分野あるいは医療装置・美容装置産業等に多大の貢献することができる。
【符号の説明】
【００３８】
Ａ 金属軸
Ｂ エレクトロード
Ｃ 絶縁体部分
Ｅ 第二のプレート
９ キャパシティブ用出力
１０ 戻し電極用出力
１１ レジスティブ用出力
１５ キャパシティブモードキー
１６ レジスティブモードキー
１９ 時間増キー
２０ 時間減キー
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向けの上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有することを特徴とする脂質抑制効果増強薬。
【請求項２】
上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣは、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けとして温熱処理においても分解せずに保持させる温熱安定化剤を含有することを特徴とする請求項３記載の脂質抑制効果増強薬。
【請求項３】
上記温熱安定化剤は、マニトール、コーンスターチ、キチン・キトサンからなる群から選ばれた一つ以上の物質を含有することを特徴とする請求項３又は４記載の脂質抑制効果増強薬。
【請求項４】
上記ビタミンＣは、水素添加大豆レシチン・コレステロールから構成され、超音波装置・エクストルーダから調整されたリポソームによってアスコルビン酸のまま包含する皮膚浸透性が増強されたビタミンＣであることを特徴とする請求項３、４又は５記載の脂質抑制効果増強薬。
【請求項１】
セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱向けの上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣを含有することを特徴とする脂質抑制効果増強薬。
【請求項２】
上記プロビタミンＣ剤および／またはビタミンＣは、セルライト予防治療・脂肪滴抑制・脂質代謝改善用の温熱療法向けとして温熱処理においても分解せずに保持させる温熱安定化剤を含有することを特徴とする請求項３記載の脂質抑制効果増強薬。
【請求項３】
上記温熱安定化剤は、マニトール、コーンスターチ、キチン・キトサンからなる群から選ばれた一つ以上の物質を含有することを特徴とする請求項３又は４記載の脂質抑制効果増強薬。
【請求項４】
上記ビタミンＣは、水素添加大豆レシチン・コレステロールから構成され、超音波装置・エクストルーダから調整されたリポソームによってアスコルビン酸のまま包含する皮膚浸透性が増強されたビタミンＣであることを特徴とする請求項３、４又は５記載の脂質抑制効果増強薬。
【図１】
【図２】
【図３】
【図５】
【図７】
【図９】
【図１０】
【図４】
【図６】
【図８】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図２】
【図３】
【図５】
【図７】
【図９】
【図１０】
【図４】
【図６】
【図８】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公開番号】特開２０１３−２３４９６（Ｐ２０１３−２３４９６Ａ）
【公開日】平成２５年２月４日（２０１３．２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２１６７４１（Ｐ２０１１−２１６７４１）
【出願日】平成２３年９月３０日（２０１１．９．３０）
【分割の表示】特願２０１１−１６２５０９（Ｐ２０１１−１６２５０９）の分割
【原出願日】平成２３年７月２５日（２０１１．７．２５）
【出願人】（５０３３２１７０３）株式会社インディバ・ジャパン (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年２月４日（２０１３．２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年９月３０日（２０１１．９．３０）
【分割の表示】特願２０１１−１６２５０９（Ｐ２０１１−１６２５０９）の分割
【原出願日】平成２３年７月２５日（２０１１．７．２５）
【出願人】（５０３３２１７０３）株式会社インディバ・ジャパン (3)
【Ｆターム（参考）】
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