脂質代謝改善剤、機能性食品、食品添加物、抗酸化剤、医薬、動脈硬化予防・改善剤、香粧品、及び脂質代謝改善剤の製造方法
【課題】効果の高い脂質代謝改善剤を提供する。
【解決手段】ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を加工して脂質代謝改善剤を製造する。この脂質代謝改善剤は、血中中性脂肪値を低下させる。また、特に全ＬＤＬに占めるｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ（ｓｄＬＤＬ）の割合を低下させる。実際に、この脂質代謝改善剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験にて、脂肪酸合成系及びコレステロール合成系の脂質代謝関連遺伝子の発現を低下させる。また、ヒトにおいても、ＬＤＬコレステロールの分子量の減少を抑え、ｓｄＬＤＬを少なくすることができる。
【解決手段】ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を加工して脂質代謝改善剤を製造する。この脂質代謝改善剤は、血中中性脂肪値を低下させる。また、特に全ＬＤＬに占めるｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ（ｓｄＬＤＬ）の割合を低下させる。実際に、この脂質代謝改善剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験にて、脂肪酸合成系及びコレステロール合成系の脂質代謝関連遺伝子の発現を低下させる。また、ヒトにおいても、ＬＤＬコレステロールの分子量の減少を抑え、ｓｄＬＤＬを少なくすることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質代謝改善剤、機能性食品、食品添加物、抗酸化剤、医薬、動脈硬化予防・改善剤、香粧品、及び脂質代謝改善剤の製造方法に係り、特にジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を用いた脂質代謝改善剤、機能性食品、食品添加物、抗酸化剤、医薬、動脈硬化予防・改善剤、香粧品、及び脂質代謝改善剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、先進国や豊かになった発展途上国では、内臓脂肪の蓄積により引き起こされるメタボリックシンドロームが重大な健康問題となっている。
メタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）は、内臓の周囲に脂肪が蓄積するタイプの内臓脂肪型肥満に加えて、高血糖、高血圧、脂質異常のうちいずれか２つ以上が生じている状態である。メタボリックシンドロームは、動脈硬化の進行等により、循環器系の重大疾患の発生頻度が高まることが疑われている。
このうち、脂質異常については、高ＬＤＬ（Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、低比重リポタンパク）コレステロール血症、低ＨＤＬ（Ｈｉｇｈ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、高比重リポタンパク）コレステロール血症、及び高トリグリセリド血症等の種類がある。
ここで、コレステロールは、動物の生体内の代謝過程において主要な役割を果たし、細胞膜の必須成分である。動物の血液中では、コレステロールはリポタンパク質と結びついて輸送される。このため、コレステロールの担体となるリポタンパク質の種類と量（割合）が、脂質異常の指標として重要である。
また、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、ＴＧ）は、１分子のグリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ、ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ）に３分子の脂肪酸がエステル結合したアシルグリセロールであり、中性脂肪の一種である。血液中のトリグリセリドが高いことにより、後述するリポタンパクのｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬができやすくなるため、動脈硬化への関与が疑われている。
【０００３】
ここで、コレステロールを輸送するリポタンパクの種類としては、カイロミクロン（ｃｈｙｌｏｍｉｃｒｏｎ、ＣＭ）、ＶＬＤＬ（Ｖｅｒｙ Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、超低比重リポタンパク）、ＬＤＬ、ＩＤＬ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、中間比重リポタンパク）、ＨＤＬ等が存在する。
このうち、ＬＤＬは、主に、肝臓から体内の各部位へ、コレステロールを運ぶ役割を担う。後述するように、ＬＤＬは、血中に増えすぎると、血管壁に沈着して動脈硬化の原因となるため、「悪玉コレステロール」と呼ばれる。このようにＬＤＬが血液中に多く存在する（１４０ｍｇ／ｄＬ以上）脂質異常症が、高ＬＤＬコレステロール血症である。
また、近年、このＬＤＬのうち、特に小型で比重の高いｓｄＬＤＬ（ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、小粒子ＬＤＬ）の役割が注目されるようになってきた。ｓｄＬＤＬは、肝臓のＬＤＬ受容体と結合しにくいため、通常のＬＤＬより血中での滞在時間が長くなり、血管内皮と長時間接触する。このｓｄＬＤＬが多いと、動脈硬化が進行しやすいとされ、「動脈硬化惹起性リポタンパク質」であると疑われている。このため、ｓｄＬＤＬコレステロールは「超悪玉コレステロール」とも呼ばれている。
【０００４】
また、ＨＤＬは、細胞内や動脈内から取り込まれた不要なコレステロールを、肝臓に戻す役割を担っており、動脈硬化を防ぐため「善玉コレステロール」とも呼ばれている。このＨＤＬが血液中に少ない（４０ｍｇ／ｄＬ未満）脂質異常症が、低ＨＤＬコレステロール血症である。
【０００５】
従来のこのようなメタボリックシンドロームの改善剤として、特許文献１を参照すると、ブドウの乳酸発酵物を有効成分として含有することを特徴とするメタボリックシンドローム改善組成物が記載されている（以下、従来技術１とする。）
従来技術１のメタボリックシンドローム改善組成物によれば、これを摂取することにより糖質等の消化吸収性が抑制され、血糖値の急激な上昇を抑制できる。その結果、過血糖症状及び過血糖に起因する肥満症、脂肪過多症、糖尿病等のメタボリックシンドローム関連症を効果的に予防ないし治療でき、メタボリックシンドロームの症状を効率よく改善できる。
【０００６】
一方、ジュンサイ（蓴菜、純菜、Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）は、スイレン科ジュンサイ属の多年生水生植物である。
ジュンサイは、日本及び中国にて、幼葉と、幼葉に隣接する茎が食用に用いられている。ジュンサイの幼葉は、表面が透明なゲル状粘物質で覆われており、独特の食感を有する。このため、日本において、ジュンサイは古代から食されており、水が育む夏の味覚として珍重されてきた。また、中国でも２０００年以上前に、歴代帝王への献上品として宮庭宴会の名菜と重宝されていた。
日本では、ジュンサイは澄んだ淡水の池沼に自生するものの、近年は純天然産のものが少なくなっており、栽培によって量産されることが多い。この栽培としては、例えば、ジュンサイ沼に大きなたらいを漕ぎ、晩春〜夏に若芽を摘む方法が用いられている。
日本のジュンサイの主要生産地は秋田県であり、郷土料理として有名である。特に、秋田県山本郡三種町（旧山本町）の収穫・販売量は、日本全国の９割を占め、生産量日本一を誇っている。
ジュンサイそのものは淡白な味のため、お吸い物、酢の物、天ぷらをはじめ、さまざまな料理に応用されており、首都圏や関西圏では高級食材として珍重されている。
【０００７】
ここで、従来のジュンサイの応用製品として、特許文献２を参照すると、ストレプトコッカス・ミュータンスが産生するグルコシルトランスフェラーゼの活性を阻害することで、歯垢形成を抑制し、う蝕を予防するグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤の技術が開示されている（以下、従来技術２とする。）。
従来技術２は、グルコシルトランスフェラーゼの活性阻害作用が極めて強く、歯垢の形成抑制及びう蝕の予防に著しい効果を発揮する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１１−１０６４８号公報
【特許文献２】特開２００６−４５１５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従来技術１のメタボリックシンドローム改善組成物は、脂肪の代謝を直接上げることで肥満を抑制する訳ではないため、効果が低かった。
このため、安全に摂取できて確実に脂肪代謝を改善する食物由来の脂質代謝改善組成物が求められていた。
一方、ジュンサイは、従来より１００ｇ当たりのカロリーが６ｋｃａｌと極めて低く、健康的な自然食品として用いられていた。
しかしながら、ジュンサイの生理活性作用については殆ど知られておらず、従来技術２のグルコシルトランスフェラーゼ活性以外の用途は、あまり分かっていなかった。
【００１０】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、上述の課題を解消することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の脂質代謝改善剤は、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を加工してなることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、血中中性脂肪値を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール値を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、全ＬＤＬに占めるｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの割合を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記ＬＤＬの粒子サイズを増加させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、脂肪酸合成系及びコレステロール合成系の脂質代謝関連遺伝子の発現を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記ジュンサイは、乾燥加工された植物体であることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記ジュンサイは、水又は有機溶媒にて抽出されたエキスであることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記有機溶媒がエタノールであることを特徴とする。
本発明の機能性食品は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の食品添加物は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の抗酸化剤は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の医薬は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の動脈硬化予防・改善剤は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の香粧品は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤の製造方法は、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を水又は有機溶媒にて抽出することを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤の製造方法は、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を乾燥加工することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、加工したジュンサイの成分により、動物の脂質代謝異常を改善する脂質代謝改善剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の製造の工程図である。
【図２】本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の製造に用いるジュンサイの部位の概念図である。
【図３】本発明の実施の形態に係るジュンサイを加熱乾燥した粉末の組成と検査の結果を示す図である。
【図４】本発明の実施の形態に係るＨＦＤ（高脂肪食）とジュンサイ飼料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）の組成、及びマウスの取得量を示す図である。
【図５】本発明の実施の形態に係るヒト肝癌由来ＨｅｐＧ２細胞から分泌されたＴＧ及びコレステロール複合体の測定量を示す図である。
【図６】本発明の実施の形態に係るＴＧ及びコレステロール複合体のリポタンパク質プロファイルを示すグラフである。
【図７】本発明の実施の形態に係るリポタンパク関連遺伝子発現に対するジュンサイの影響を調べたリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図８】本発明の実施の形態の実施例１に係るＨＦＤとジュンサイ飼料が給餌されたマウスの組織重量及び血清指標の測定値の図である。
【図９】本発明の実施の形態の実施例１に係るマウスの体重、内蔵脂肪の重量、血中及び中性脂肪に対するジュンサイの影響のグラフである。
【図１０】本発明の実施の形態の実施例２に係るコゴミの非加熱のフリリーズドライ粉末のサンプル調整に係る部位を示す概念図である。
【図１１】本発明の実施の形態の実施例２に係るジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性を測定した結果を示す図である。
【図１２】本発明の実施の形態の実施例２に係るジュンサイと他のサンプルの希釈率とＣｕ還元力との関係を示すグラフである。
【図１３】本発明の実施の形態の実施例２に係るジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性の平均値を示すグラフである。
【図１４】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査の血中脂質４分画の非検品群の測定結果を示すグラフである。
【図１５】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査の血中脂質４分画の変化率を示すグラフである。
【図１６】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査のコレステロール２０分画の変化率を示すグラフである。
【図１７】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査の中性脂肪２０分画の変化率を示すグラフである。
【図１８】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査のＭＤＡ−ＬＤＬ・遊離コリンの変化率を示すグラフである。
【図１９】本発明の実施の形態の実施例３に係る血液検査結果の変化量を示すグラフである。
【図２０】本発明の実施の形態の実施例３に係る身体測定・理学検査の変化量を示すグラフである。
【図２１】本発明の実施の形態の実施例３に係るＶＡＳの変化率を示すグラフである。
【図２２】本発明の実施の形態の実施例３に係るジュンサイ摂取によるＬＤＬ粒子サイズ減少値とｓｄＬＤＬの増加量との関係を示す概念図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
＜実施の形態＞
〔本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤、脂質代謝改善剤の製造方法〕
以下、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤、及び脂質代謝改善剤の製造方法の構成例について説明する。
本発明の発明者らは、メタボリックシンドロームを解消するために、従来よりも効果が高い食物由来の脂質代謝改善剤を開発すべく、鋭意、研究・実験を進めた。
そして、ジュンサイ（蓴菜、純菜、Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）には、従来よりも顕著な脂質代謝改善の作用があることを見いだし、本発明を完成させた。
すなわち、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、ジュンサイを加工したものを用いることを特徴とする。
以下で、図１の製造工程図を参照して、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の製造方法について説明する。
【００１５】
まず、ステップＳ１０１において、ジュンサイを調製する原料取得処理について説明する。
ここで、図２を参照して、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の原料となるジュンサイについて説明する。
ジュンサイは、表面が透明なゲル状粘物質で覆われた幼葉と、それに隣接する茎が古くから食用に用いられており、その独特の食感から高級食材として珍重されている。
ジュンサイは９８％が水分であり、ビタミンや食物繊維を始め、様々な栄養素が含まれている。特に若芽、若葉は栄養価が高く、タンパク質、ビタミン、微量元素などを豊富に含んでいる。また、葉が若く小さいほどゲル状物質が多く、上等品と言われている。
この原料取得処理においては、ジュンサイの若芽・若葉を選別して取得し、乾燥、粉砕、エキス抽出等の加工を行って、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤として用いることができる。
この際に、生のジュンサイの若芽・若葉は、冷蔵保管で１週間程度日持ちさせることができる。さらに、熱処理（水煮）やｐＨ調整剤の添加により、半年〜１年程日持ちさせることもできる。
また、従来、ジュンサイは、若芽・若葉以外は食用とされておらず、廃棄されていた。この成長芽・葉、茎、根、花等を原材料として用いることもできる。
さらに、栽培中のジュンサイは、気温の高くなる時期に若葉周辺が黒く変色することがある。黒変したジュンサイは、食感や味に変化はないものの、市場で敬遠されるため商品価値がなく、容易に脱色できないため廃棄処分となっていた。
また、ジュンサイはゼラチン質の多い若芽・若葉が最も市場価値が高く、成長した芽や葉は収穫せず廃棄されるのが一般的であった。生産量の５０％が廃棄されているとの推測もあり、損失が大きかった。
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、これらの廃棄されるジュンサイを用いることができ、コストを削減できる。
【００１６】
次に、ステップＳ１０２において、ジュンサイの乾燥粉末を作成する処理について説明する。
この処理においては、選別されたジュンサイの原料を、通常の温風乾燥、真空凍結乾燥（フリーズドライ）等の手法を用いて乾燥する。この際に、図２のように若芽、若葉のみを乾燥して用いることができる。また、廃棄される部位や、黒変して廃棄されるジュンサイについても、乾燥して用いることができる。
【００１７】
ここで、図３を参照して、温風乾燥されたジュンサイ粉末の例について説明する。
図３（ａ）は、原材料としてジュンサイの若芽・若葉を１００％使用してジュンサイ粉末を得た例である。
生のジュンサイを取得して、例えば納品重量が１５８．０ｋｇ、水切重量が１２０．０ｋｇであった際に、水分は９８．０％、固形分は２．０％程度であった。
このようなジュンサイについて、傷んだ部位や若芽・若葉以外等を除き、７５％程度の部位を、例えば６０℃〜１００℃で温風乾燥させる。この乾燥させる方法としては、ジュンサイを、所定温度の空気流により乾燥する方法等を用いることができる。
具体的には、扇風機を稼動させ、所定温度・湿度に保持された乾燥室内でジュンサイを乾燥させることができる。
また、所定温度・湿度に保持された乾燥室、乾燥箱等内に静置することで乾燥させることもできる。
この際、例えば、乾燥品予定重量が図３の例のように、１５８．０ｋｇの原料が、２．４０ｋｇ程度になるように乾燥させる。
【００１８】
次に、ステップＳ１０３において、乾燥後のジュンサイの検査、例えば金属探知処理について説明する。
まず、上述のステップにて温風乾燥したジュンサイから、さらに食味に影響を及ぼす繊維等を除き、２．０８ｋｇ程度を回転粉砕機等を用いて粉砕する。
この上で、金属探知機により異物が混入していないか確認する。確認後の製品となる粉末は、図３（ａ）によると、水分は、５．９０％程度になる、
この状態で、食品細菌検査も行うことができる。
図３（ｂ）は、食品細菌検査の結果例である。この検査により、細菌、カビ・酵母、大腸菌群等の菌量の単位で、ＣＦＵ（Ｃｏｌｏｎｙ Ｆｏｒｍｉｎｇ Ｕｎｉｔ）／ｇは、それぞれ０になるようにする。
【００１９】
また、ステップＳ１０４において、ジュンサイの抽出物（エキス）を作成する処理について説明する。
上述の乾燥粉末の作成と同様の原料を、水や有機溶媒を用いて抽出してエキスを作成する。この際に、上述の温風乾燥やフリーズドライで乾燥された粉末を用いて抽出を行うことが好適であるが、乾燥を行わずに抽出することもできる。
この際、有機溶媒としては、エタノール等のアルコール類に加え、ヘキサンやアセトンやエステル等の食品加工に用いられる任意の有機溶媒を用いることができる。
具体的には、フリーズドライにより作成したジュンサイ粉末を、１ｇ／５０ｍＬ程度の割合で蒸留水又はエタノールで抽出することができる。水抽出物及びエタノール抽出物は、凍結乾燥と蒸発により乾燥することができる。
工業的に生産する場合、粉砕され粉末になったジュンサイを、ステンレスの抽出管等に入れて、上部より有機溶媒を滴下して溶出液を回収する。その後、エバポレーター等で濃縮し回収された、有機溶媒を再度抽出用に循環させることもできる。
【００２０】
次に、ステップＳ１０５にて、出荷用処理を行う。
具体的には、脂質代謝改善剤の用途に合わせて、各種担体や防腐剤等を加えてパッケージングする。
たとえば、ジュンサイ粉末や抽出したエキスを乾燥・固化させて脂質代謝改善剤として用いるための、任意の製剤上許容しうる担体（例えば、生理食塩水、ブドウ糖、その他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等が挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０等を挙げることができるが、それらに限定されない）と共に投与することができる。また、適切な賦形剤等を含んでもよい。
なお、抽出した溶媒を乾燥させた粉末、製品についても、金属探知処理により異物の混入を防ぐことができる。
【００２１】
また、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、製剤上許容しうる担体を調製するために、適切な薬学的に許容可能なキャリアを含み得る。
このキャリアとしては、シリコーン、コラーゲン、ゼラチン等の生体親和性材料を含んでもよい。あるいはまた、種々の乳濁液であってもよい。
さらには、例えば、希釈剤、香料、防腐剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、乳化剤、可塑剤などから選択される１種又は２種以上の製剤用添加物を含有させてもよい。
脂質代謝改善剤の形態としては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、丸剤、散剤、シロップ剤、液剤、ゼリー剤、トローチ剤等の剤型を用いることができる。
【００２２】
また、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、飲食品に添加する場合、ドリンク剤等の飲料品、クッキーやクラッカー等の一般の食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品等に配合して用いることができる。
【００２３】
また、本発明の実施の形態の脂質代謝改善剤は、生物体、生物体の体内の一部分、または生物体より摘出または排出されたその一部分について、治療用の対象とすることができる。この生物体は特に限定されるものではないが、動物（例えば、ヒト、家畜動物種、野生動物）を含む。
【００２４】
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、経口投与のための投与に適した投与形態において、当該分野で周知の製剤上許容しうる担体を用いて処方され得る。
本発明に係る脂質代謝改善剤は、投与経路は特に限定されないが、非経口的に投与する場合、例えば、静脈内、動脈内、皮下、真皮内、筋肉内または腹腔内の投与が挙げられる。
【００２５】
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の１回の投与量及び投与回数は、投与の目的により、さらに患者の年齢及び体重、症状及び疾患の重篤度などの種々の条件に応じて適宜選択及び変更することが可能である。
本発明の脂質代謝改善剤は、他の組成物等と併用することも可能である。また、他の組成物と同時に本発明の組成物を投与してもよく、また間隔を空けて投与してもよいが、その投与順序は特に問わない。
【００２６】
また、本発明の実施の形態において、疾患が改善または軽減される期間は特に限定されないが、一時的な改善または軽減であってもよいし、一定期間の改善または軽減であってもよい。
【００２７】
以上のように構成することで、以下のような効果を得ることができる。
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、抗肥満、血中ＴＧ低減、及び血中コレステロール低減の効果を得ることができる。
この効果は、ジュンサイの成分が、脂肪代謝やコレステロール合成酵素である、例えばステロール脂肪酸シンターゼ（ｓｔｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＦＡＳ）、コレステロール生成のために必要なＨＭＧ−ＣｏＡ合成酵素−１（ＨＭＧＣＳ−１）の遺伝子発現を減少させることにより生じると考えられる。また、ＨＭＧ−ＣｏＡ合成酵素−１の上流に働く転写制御因子であるＳＲＥＢＰ−１ｃ、ＳＲＥＢＰ−２の遺伝子発現も減少させる。
このため、本実施形態に係る脂質代謝改善剤は、メタボリックシンドローム等の生活習慣病の改善効果が得られ、脂質異常症、動脈硬化症、心疾患などの予防効果を発揮することができる。
また、ジュンサイは、高い抗酸化効果をもつため、動脈硬化性疾患の他にも、肝疾患（ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ等）の予防・改善も期待できる。
【００２８】
次に図面に基づき本発明を実施例によりさらに説明するが、以下の具体例は本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００２９】
（ヒト肝臓癌細胞から分泌された脂質を用いたリポタンパク質プロファイリングによる食物材料の脂質代謝改善活性に関するｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニング）
本発明者らは、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料を用いて、ヒト肝癌（ヘパトーマ）由来細胞株ＨｅｐＧ２から分泌されたＴＧ及びコレステロール複合体のプロファイルの評価による抗脂血剤的な影響をスクリーニングした。
結果として、１００ｍｇ／ｍＬのジュンサイの水及びエタノール抽出物は、オレイン酸ナトリウムにより刺激されたＨｅｐＧ２細胞からのＴＧとコレステロールの分泌に対する、非常に強い抑制活性を示した。
この上で、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析を行ったところ、ジュンサイのエタノール抽出物は、肝細胞／肝臓癌細胞の脂質合成に関連する、ステロール脂肪酸シンターゼ（ｓｔｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＦＡＳ）、及びコレステロール生合成に必要なＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ−１（ＨＭＧＣＳ−１）、ＳＲＥＢＰ（Ｓｔｅｒｏｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ−Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）−１ｃ及びＳＲＥＢＰ−２の各遺伝子発現を減少させた。
更に、本発明者らは、高脂肪食を与えたマウスの脂肪組織蓄積と血清の状態へのジュンサイの作用を検討した。
高脂肪食を与えられたマウスにおいて、ジュンサイは腸間膜・精巣上体の脂肪組織蓄積を抑えて、血清ＴＧ及びグルコースを正常状態にした。このため、血中コレステロールの状態を正常な状態に近づけると考えられる。
【００３０】
より具体的に説明すると、本発明の実施例１においては、ジュンサイ及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料を用いて、メタボリックシンドロームに係る脂肪代謝改善活性のスクリーニングを行った。
このようなスクリーニングでは、通常、脂質異常症マウス／ラット等の実験動物が使用される。しかしながら、実験動物を使用する研究は費用が掛かるのと、多くの試験サンプルを一度に評価することができないため、まずは、細胞系を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ（細胞外）のスクリーニングを行った。
ここで、本発明者らは、従来、ＨｅｐＧ２ヒト肝臓癌細胞から分泌されたリポタンパク質プロファイルの評価を用いて、抗脂血剤作用薬の作用をスクリーンニングする評価システムを開発した（Ｍｉｚｕｈｏ Ｉｔｏｈ他、”ＨＰＬＣ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ： ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｔｉｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ｄｒｕｇｓ”、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ．、、、Ｓｐｌｉｎｇｅｒ、２００９年、３１号、、ｐ．９５３〜９５７）。この評価システムを使って、本発明者らは、以前、ルペオール、ルパン・トリテルペン、及び米糠発酵エキスの抗脂血剤作用薬の作用をスクリーンニングし、シグナル伝達機構を分析した（Ｍｉｚｕｈｏ Ｉｔｏｈ他、”Ｌｕｐｅｏｌ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｎｄ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ”、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ、、ＥＬＥＳＥＶＩＥＲ、２００９年、２号、、ｐ．１７６〜１７８を参照。）。この評価システムは抗脂血剤を評価する際に、非常に有用な手法であった。
本実施例において、本発明者らは、この評価システムのアッセイ系を使用して、いくつかの食用植物の脂質代謝改善活性をスクリーニングした。
この結果、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）からのエタノール抽出物は、ＨｅｐＧ２細胞からの脂質放出を著しく引き下げると分かった。
また、私たちは、ｉｎ ｖｉｖｏ（生体内）において、高脂肪食を与えたマウスの脂肪組織蓄積と血清パラメーターに対するジュンサイの予防及び正常化の影響を検討した。これによると、実際に、ジュンサイエキスは、高脂肪食を与えたマウスの血清脂質レベルを正常にし、腸間膜の脂肪組織の蓄積を抑えることができた。
以下で、評価の際の各プロトコルと、結果について説明する。
【００３１】
（エキス抽出方法）
凍結乾燥され、入手可能な食用植物が使用された。
フリーズドライされた植物（１ｇ）は、５０ｍＬの蒸留水又はエタノールで抽出された。抽出された抽出物は、遠心分離で収集された。水又はエタノール抽出物は、凍結乾燥と蒸発によりそれぞれ乾燥させた。
【００３２】
（細胞培養、及びヘパトーマ細胞から分泌されたリポタンパク質の取得）
ＨｅｐＧ２ヒト・ヘパトーマ細胞は、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１００Ｕのペニシリンを含むダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ'ｓ ｍｅｄｉｕｍ、ＤＭＥＭ）で維持された。
その後、ヘパトーマ細胞（１×１０5細胞）は、２４−ウェルプレート内の１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ（１ｍＬ）に接種され、２日間、あらかじめ培養された。
培養した細胞は、ＰＢＳで２度洗浄され、その後４日間、０．１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含むＦＣＳを含まないＤＭＥＭ（２５０μＬ）を用いて、抽出物あり／なしの状態で培養された。
培養後の培地は５分間１５，０００×ｇで遠心分離され、以下のリポタンパク質プロファイルの分析が行われた。
【００３３】
（培地のリポタンパク質プロファイル分析）
上述のように、トリグリセリド（ＴＧ）と主に３つのクラスのリポタンパク質（ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、及びＨＤＬ）の分離及び決定が行なわれた。
まず、リポタンパク質が、８０ｍＬの培地からゲル浸透ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）システムを使用して分離された。
この際に、ＴＧの分析用として、Ｄｉａｃｏｌｏｒ Ｌｉｑｕｉｄ ＴＧ−Ｓ（東洋紡績株式会社製）を使用し、酵素反応させた。また、コレステロールの分析用には、Ｃｈｏｌｅｓｃｏｌｏｒ Ｌｉｑｕｉｄ Ｋｉｔ（東洋紡績株式会社製）を使用し、酵素反応させた。その後、溶出液は、波長５５０ｎｍについてオンラインで連続的にモニタリンされた。
ＴＧと３つの主なリポタンパク質におけるコレステロールの濃度の値は、発明者らの作成したコンピュータ・プログラムで計算された。この際に、冷凍血清を基にしたスタンダード（協和発酵キリン株式会社製）を使用して、規格化（標準化）された。
【００３４】
（ＲＮＡ抽出及びｃＤＮＡ合成）
１２ウェル・プレート（１ｍＬ）のＨｅｐＧ２細胞（２．５×１０5細胞）は、２日間、１０％ＦＣＳを含んでいるＤＭＥＭで培養された。
細胞は、ＰＢＳにより２度洗われ、０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム又は１００μｇ／ｍＬのジュンサイとオレイン酸ナトリウムがあり／なしの状態で、２日間、０．１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含むＦＣＳを含まないＤＭＥＭ（５００μＬ）で培養した。
トータルＲＮＡはＱｕｉｃｋＧｅｎｅ ＲＮＡ培養細胞キットＳ（富士フイルム株式会社製）を使用して単離された。
テンプレート相補的ＤＮＡ合成はＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ試薬キット（タカラバイオ株式会社製）を使用して、トータルＲＮＡを５μｇ用いて行なわれた。
【００３５】
（リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ）
２．５％（ｗ／ｖ）の各ＲＴ反応溶液は、蛍光温度サイクラー（Ｃｈｒｏｍｏ４、バイオ・ラッド・ラボラトリーズ社製）にて、各プライマーを０．２μＭを含んでいる、１×ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（タカラバイオ株式会社製）２５μＬを用いて増幅された。
サンプルは、最初に９５℃で１０秒間変性させ、続いてサーマルサイクラーで４０回のＰＣＲサイクルが実行された。各サイクルは、９５℃で５秒、及び６０℃で３０秒であった。
実験の中で使用されるオリゴヌクレオチド・プライマーは、上述の論文（Ｍｉｚｕｈｏ Ｉｔｏｈ他、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ．）と同様のプライマーを用いた。
特異的なトランスクリプトの増幅を確認するため、各ＰＣＲの終了時に、サンプルを６０℃に冷却し、９５℃にゆっくり加熱しつつ、蛍光を連続測定する融解曲線プロファイルを得た。
各ｍＲＮＡの相対的な発現レベルは、β−アクチンのｍＲＮＡの量で正規化された。このβ−アクチンのｍＲＮＡは、上述のキットに付属のプライマーを用いて測定された。
【００３６】
（動物試験の予備実験）
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、Ｈｉｇｈ Ｆａｔ ＤｉｅｔとジュンサイＥｔＯＨ抽出エキス１％を混餌し、２週間投与した。
これにより、対照群と比較し、有意に、中性脂肪値の改善と内臓脂肪蓄積抑制効果がみられた。
【００３７】
（動物実験）
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ系統のマウス（６週、雄）は、日本クレア株式会社から購入された。
それらのマウスは、ポリカーボネート・ケージに収容され、２３±２℃に維持された部屋で１２時間の明暗サイクル（８：００〜２０：００）で飼育された。
マウスは、実験期間において、新鮮な飼料及び飲料水に、制限なしに接近できた。
それらは７日間、Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２（ＨＦＤ、日本クレア株式会社製）を与えられ、６つのマウス各々の２つのグループへ分割した；
【００３８】
（コントロール群とジュンサイ飼料群の投与試験）
マウスは、ＨＦＤ（高脂肪食）を与えられた対照（コントロール）群と、ジュンサイ飼料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）を与えられたジュンサイ飼料群により試験された。
図４に、このＨＦＤと、ジュンサイ試料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）の組成を示す。ジュンサイ飼料は、ＨＦＤに、試験物質であるジュンサイを１％含む飼料である。
コントロール群又はジュンサイ飼料群は、１４日連続してＨＦＤ又はジュンサイ飼料をそれぞれ与えられた。
マウスの食物摂取量は、毎日記録された。また、体重が２日又は３日に１回測定された。
実験期間の終了時、マウスは１６時間絶食させた後に、光ジエチルエーテル麻酔の下で処理された。
血液は、腹大動脈から集められた。また、血清は、分析まで−２０℃で保管された。
肝臓、腸間膜・精巣上体の脂肪組織が切除され、計量された。
全実験は、日本の政府立法による委員会で発行されたガイドラインに厳密に従って行われた。
【００３９】
（血清指標）
マウスの血清のグルコース、総コレステロール、ＴＧ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、及びアラニン・トランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の血中濃度が、生化学自動分析装置（ＦＵＪＩ ＤＲＩ−ＣＨＥＭ ３５００Ｖ、富士フイルム株式会社製）にて測定された。
【００４０】
（統計分析）
各測定データは、平均±標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現された。
差異の有意性は、スチューデントｔ検定（図８参照）、又はＤｕｎｎｅｔｔ（図５参照）及びＴｕｋｅｙ（図７参照）の多重比較テストを用いた一元配置分散分析を使用して分析された。ｐ＜０．０５が、有意であるとみなされた。
以下の図５、７、８の各図においては、「＊」がｐ＜０．０５を示し、「＊＊」がｐ＜０．０１を示す。
【００４１】
（ＨｅｐＧ２のリポタンパク質プロファイルの分析）
まず、図５を参照して、ジュンサイ及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料による脂質代謝改善効果について、ＨｅｐＧ２のリポタンパク質プロファイルにより評価した例について説明する。
本発明者らは、ジュンサイと他の食物材料として、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ、ＢＳＥＴ）と、他の５つの食用植物であるミョウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｍｉｏｇａ）、オクラ（Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ）、ウド（Ａｒａｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ）、トンブリ（ホウキギ、Ｋｏｃｈｉａ ｓｃｏｐａｒｉａ）、ネギ（Ａｌｌｉｕｍ ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ）を用いた。そして、これらの水及びエタノール抽出物を１００μｇ／ｍＬ加えた際に、ＨｅｐＧ２細胞から放出されたＴＧ及び３つの主なリポタンパク質であるＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬのコレステロール値の影響を検討した。
図５は、要約されたデータであり、細胞は０．１％のＢＳＡを含んでいる血清を含まないＤＭＥＭで２日間、オレイン酸ナトリウムなし、０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム、又は１００μｇ／ｍＬの各食物材料とオレイン酸ナトリウムを用いて培養された。また、培地のＴＧ及びコレステロールのレベルが決定された。データは平均±ＳＤ（ｎ＝４）を示す。各データは、オレイン酸ナトリウムのみのデータと検定している。
結果として、ＨｅｐＧ２の培養液中のＴＧ及びコレステロール値は、脂肪代謝を高めるオレイン酸ナトリウムで上昇した。
また、ポジティブコントロールである脂質異常症治療薬のフェノフィブラート（Ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、及び、いくつかの植物の抽出物は、オレイン酸ナトリウムで脂肪代謝が促進された細胞から放出されるＴＧ及び／又はコレステロールを減少させた。
特に、ジュンサイの水及びエタノール抽出物は、ＴＧ及び３つのリポタンパク質のコレステロール値を著しく抑えた。
【００４２】
次に、図６を参照して、各サンプルについての、実際のリポタンパク質プロファイルについて説明する。
図６は、オレイン酸ナトリウム刺激の下で（ジュンサイ）のエタノール抽出物により未処理／処理されたＨｅｐＧ２細胞のリポタンパク質プロファイルを示す。具体的には、２日間、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭであらかじめ培養されたＨｅｐＧ２細胞において、ＨｅｐＧ２細胞のリポタンパク質プロファイルに対するジュンサイ及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料の影響をリポタンパク質プロファイルのグラフとして示している。
各グラフにおいて、縦軸は５５０ｎｍでの吸収度（ｍＶ）、横軸はリテンションタイムを示す。各グラフについて、「系列１」はＴＧを、「系列２」はコレステロールのプロファイルを示す。
図６に示すように、コントロールに対して、オレイン酸のみを与えた場合、ＨｅｐＧ２細胞からＴＧ及び各コレステロール複合体の放出が増えることが分かる。
これに対して、ジュンサイは、オレイン酸ナトリウムで誘発されたＨｅｐＧ２細胞からのＴＧとコレステロールの放出に対する強い低下活性を示した。
他には、ミョウガの水抽出物は、細胞からのＴＧとコレステロールの分泌を少しだけ引き下げた。それ以外の食物材料のサンプルは、特にＴＧ及び各コレステロール複合体の放出を低下させる活性は確認できなかった。
なお、図示していないが、コゴミ（クサソテツ、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉａ ｓｔｒｕｔｈｉｏｐｔｅｒｉｓのエタノール抽出物は、ＨｅｐＧ２細胞からのコレステロールの放出のみ引き下げ、ＴＧレベルについては有意に減少しなかった。
【００４３】
次に、図７を参照して、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより、ＨｅｐＧ２細胞において、リポタンパク質合成に関するｍＲＮＡ発現に対するジュンサイの影響を調べた結果について説明する。
ここでは、本発明者らは、定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いて、１００μｇ／ｍＬのジュンサイがＨｅｐＧ２細胞のＴＧ及びコレステロール合成のために必要な、各種の遺伝子の発現に影響するかどうか調べた。
具体的には、ＨｅｐＧ２細胞は、オレイン酸ナトリウムなし、０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム、又は１００μｇ／ｍＬのジュンサイのエタノールエキスとオレイン酸ナトリウムにより、２日間、培養された。
図７の各グラフはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲで分析された各遺伝子のｍＲＮＡ発現を示している。縦軸は、コントロールのβアクチンに対する比較発現量（％）を示し、横軸は各遺伝子のグラフを示す。各グラフにおいて、白抜きはオレイン酸ナトリウムなし、斜線は０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム、黒塗りは１００μｇ／ｍＬのジュンサイのエタノールエキスとオレイン酸ナトリウムを投入した結果を示す。また、各グラフのデータは未処理のコントロールの細胞に相対的に表現され、平均±ＳＤを示す（ｎ＝４）。
結果として、オレイン酸ナトリウムのみを与えた場合、未処理の細胞と比較すると、ＨｅｐＧ２細胞は、ｍＲＮＡレベルで、酵素であるステロール脂肪酸シンターゼ（ｓｔｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＦＡＳ）及びコレステロール生合成に必要なＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ−１（ＨＭＧＣＳ−１）の発現を著しく上げた。
これに対して、オレイン酸ナトリウムで誘発された細胞と比較した場合、ジュンサイエキスを投入した細胞は、ＳＲＥＢＰ−１ｃを５１．７％、ＦＡＳを７８．８％、ＨＭＧＣＳ−１を４５．６％、及びＦＤＦＴ（ｆａｒｎｅｓｙｌ−ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）を５６．４％、それぞれ遺伝子発現を減少させた。
なお、コントロールとして、ハウスキーピング遺伝子であるβ−グルクロニダーゼ（β−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ、ＧＵＳ）のみの発現をみたところ、オレイン酸ナトリウムとジュンサイエキスの有無に関わらず発現が変わっていなかった。
【００４４】
また、アポリポ蛋白質（ａｐｏ）は５つの主なクラス、ａｐｏＡ−Ｅに分類される。ａｐｏＡのサブクラスであるＡｐｏＡ−１は、ＨＤＬの構成分子で、ＨＤＬ物質代謝に関係する。ａｐｏＢ遺伝子にコードされているＡｐｏＢ−１００は、肝臓の組織で合成され、ＶＬＤＬとＬＤＬの構成の成分である。
図７の各グラフを参照すると、オレイン酸ナトリウムは、ＨｅｐＧ２細胞で、２つのアポリポ蛋白質、特にａｐｏＢ−１００の遺伝子発現（ＡｐｏＢ−１００）を増やした。
オレイン酸塩処理／未処理のＨｅＰＧ２細胞と比較すると、ジュンサイはａｐｏＡ−１の量を常態に戻し、ＡｐｏＢ−１００遺伝子を抑えた。
【００４５】
ここで、肝臓と腸の小胞体のルーメンに局在しているミクロゾームトリグリセリド転移蛋白（ＭＴＴＰ）は、ａｐｏＢ−１００のアセンブリに必要なファクターであると確認されている。
したがって、従来から、肝臓及び／又は肝細胞からのＭＴＴＰ及びリポタンパク質分泌の関係が研究されてきた。すなわち、ＭＴＴＰ阻害剤はＴＧのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにて、ＴＧのレベルを下げる薬剤として使用されている。
図７によると、本発明の実施例において、オレイン酸塩で処理されたＨｅｐＧ２細胞と比較した場合、ジュンサイはＭＴＴＰの遺伝子発現を５１．４％低下させた。
【００４６】
（マウスの体重、及び肝臓及び脂肪組織の重量に対するジュンサイの効果）
発明者らは、ジュンサイのｉｎ ｖｉｖｏでの抗脂血剤活性を確認するために、マウスの組織重量及び血清指標に対するジュンサイの影響を調査した。
ここで、図８及び図９を参照して、高脂肪食（ＨＦＤ）が給餌されたマウスに対して、体重、内臓重量及び脂肪組織の重量、血清指標に対するジュンサイの影響を調べた結果について説明する。図８は、ＨＦＤのみを与えたコントロール群と、ジュンサイ飼料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）を与えられたジュンサイ飼料群の各測定値を示す。各測定値は平均±ＳＤ（ｎ＝６）で示す。図９は、図８のうち、効果があったデータのグラフである。
結果として、ジュンサイは体重、肝臓、腎臓及び脾臓重量に影響を及ぼさなかった。この結果を体重のグラフ図９（ａ）に示す。
しかしながら、コントロールと比較した場合、ジュンサイの経口投与は腸間膜及び精巣上体の脂肪組織（内臓脂肪）の蓄積を、それぞれ７２．２％及び７３．９％と著しく抑えた。この結果を図９（ｂ）に示す。
これらの実験結果は、ジュンサイが身体の重量への影響のない腸間膜と精巣上体の脂肪組織及び組織の蓄積を抑えることを示唆した。
また、図８の血清指標においては、ジュンサイは、ＨＦＤ食餌されたマウスで、トータル血清トリグリセリド（血中中性脂肪値）及びグルコース・レベルを、それぞれ７０．５及び１７．５％減少させた。この結果を、図９（ｃ）に示す。
さらに、ジュンサイは血清コレステロールレベル、組織や細胞の傷害を診断するための指標であるＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＧＯＴ）レベル、及び肝臓の傷害の指標であるＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＧＰＴ）レベルに影響しなかった。
【００４７】
以上のように、本実施例において、発明者らは、以前に高度に発展させたｉｎ ｖｉｔｒｏのアッセイ系を用いて、ジュンサイを含むいくつかの食用植物の抗脂血剤活性をスクリーニングした。
ジュンサイは、オレイン酸塩に刺激されたＨｅｐＧ２細胞からのＴＧ及びコレステロール放出を著しく低下させ、細胞のＴＧ及びコレステロール合成のために必要な遺伝子発現を減少させた。
更に、ジュンサイは、血清ＴＧレベルを常態にすることによりＨＦＤ飼料マウスの脂肪組織の蓄積を引き下げた。
【実施例２】
【００４８】
（ジュンサイの抗酸化活性）
次に、図１０〜１３を参照して、ジュンサイの抗酸化活性について検証した結果について説明する。
発明者らは、日研ザイル株式会社、日本老化制御研究所製の抗酸化測定キット「ＰＡＯ」を用いて、ジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性を調べた。ＰＡＯの試薬は銅イオンの還元反応（Ｃｕ＋＋ −＞ Ｃｕ＋）により、サンプルの抗酸化能を測定する試薬である。この試薬による測定値は、血清の酸化ラグタイムと高い相関性があり、食品サンプルの抗酸化能評価にも利用できる。
以下で、この実施例２の詳細について説明する。
【００４９】
（サンプル調整）
ジュンサイと、他の抗酸化活性が知られている食物材料のサンプルとして、トンブリ、ほうれん草（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ）、モロヘイヤ（Ｃｏｒｃｈｏｒｕｓ ｏｌｉｔｏｒｉｕｓ）、ネギ、コゴミの各非加熱フリーズドライの粉末（株式会社Ｈａｒｖｅｓｔｅｃｈ製）をサンプルとして用いた。また、抗酸化活性が知られているアセロラ（Ｍａｌｐｉｇｈｉａ ｇｌａｂｒａ Ｌ．）の市販飲料（「ニチレイ アセロラドリンク」、サントリーホールディングス株式会社製、２０１０年）も比較用に用いた。さらに、主に植物中に含まれるトリテルペンであり、抗菌作用を持つルペオール（ｌｕｐｅｏｌ）についてもコントロールとして用いた。
また、図１０を参照すると、コゴミについては、加熱後の粉末、非加熱のフリーズドライ粉末をそれぞれ用いた。また非加熱のフリリーズドライ粉末に関しては、異なる部位を用いてサンプル調整を行った。ここでは、葉の歪曲した先端部位を部位１、茎の地上部の中間程度を部位２、残りを部位３として、部位１と部位２とを用いて測定した。部位３は、木質で硬いため、粉末化できなかったためである。
具体的なサンプルの調整方法としては、３２ｍｇの各粉末と蒸留水１ｍＬを十分攪拌し、遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分）し、上澄みを取得した。すなわち、基準量となる１倍（×１）のサンプルは３２ｍｇ／ｍＬである。このサンプルのうち、１００μＬを１００μＬの蒸留水で希釈し、２倍希釈（×２）、４倍希釈（×４）、８倍希釈（×８）、１６倍希釈（×１６）のサンプルをそれぞれ作成した。
さらに、ルペオールに関しては、分子量４２６．７２のエタノール抽出ルペオール（１ｍＭ）を用いて、４倍希釈（×４）、１６倍希釈（×１６）、６４倍希釈（×６４）のサンプルを作成した。
アセロラ溶液については、商品原液を１倍（×１）とし、４倍希釈（×４）、８倍希釈（×８）、１６倍希釈（×１６）のサンプルをそれぞれ作成した。
【００５０】
（測定方法）
測定は、ＰＡＯキットの説明書に従って行った。測定は、サーモサイエンティフィック社製のマイクロプレートリーダー（測定波長４８０〜４９２ｎｍ）を用いて行った。
【００５１】
図１１は、ジュンサイと他のサンプルを測定した結果を示す図である。図１１では、各サンプルの希釈倍率、尿酸相当濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｃｕ還元力（μｍｏｌ／Ｌ）を示す。
ジュンサイは、他のサンプルよりも際だった抗酸化能を示した。すなわち、１６倍希釈においても、尿酸相当濃度０．８４ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｃｕ還元力１８３５μｍｏｌ／Ｌの値を示した。
【００５２】
図１２は、上述のジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性について、希釈率とＣｕ還元力との関係を示すグラフである。
結果として、抗酸化活性の強さは以下の通りとなった。
ジュンサイ＞アセロラ＞トンブリ＞加熱コゴミ＞モロヘイヤ＞ネギ＞ほうれん草＞ルペオール
ジュンサイは、このように非常に強い抗酸化活性を示した。
なお、非常に活性の高いジュンサイ、アセロラ、トンブリを除いて抗酸化活性を評価した場合（図示せず）、十分な直線性が見られ、正しく測定ができているものと考えられる。加熱こごみの抗酸化活性は、次に高い抗酸化活性を示すモロヘイヤに比べ、２倍以上の強さを示していることが確認できた。
【００５３】
図１３は、これらのサンプルの抗酸化活性を平均値で比較したグラフである。
上述のように、ジュンサイは、他の抗酸化活性がある他の野菜・山菜等の食物材料に比べて、傑出した抗酸化活性があることが分かった。
【実施例３】
【００５４】
（ヒト臨床試験）
次に、ジュンサイ含有サプリメントの生活習慣病改善効果に関する評価試験を行った。この試験の試験分類は、安全性・有効性試験であり、試験タイプは並行群間比較試験である。
具体的には、健常人に対するジュンサイの生活習慣病改善効果を無作為割付試験により評価した。
腹囲９０ｃｍ以上のメタボリックシンドロームの傾向がある健常男性１２名が試験に参加し、全員が試験を完遂した。被験品群は被験品であるジュンサイ含有サプリメントを１日１６粒ずつ１０週間に渡って摂取し、非摂取群は通常通りの生活を１０週間続けた。
摂取前及び摂取１０週後に検査を実施し、生活習慣病改善効果及び安全性についての検討を行った。
【００５５】
（試験方法）
〈試験群〉
被験品群：ジュンサイ含有サプリメントを摂取する群
非摂取群：試験食品は摂取せず、通常通りの生活をする群
この群分けに際しては、ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール濃度及びＬＤＬコレステロールの粒子サイズが群間で均等になることを条件にした。
この上で、株式会社ユックムス製Ｅｘｃｅｌアドイン「Ｓｔａｔｌｉｇｈｔ ＃１１」を用いて、被験者を２つの群に対して無作為に割り付けた。
【００５６】
〈被験者〉
被験品群 ８名 （４１．１±７．５０歳） エントリー８名／試験完遂８名
非摂取群 ４名 （３４．８±０．５０歳） エントリー４名／試験完遂４名
【００５７】
〈被験者選定基準〉
被験者の選定に際しては、以下ａ）からｃ）を遵守し実施した。
ａ）通常生活を営んでいる年齢３０歳以上６０歳未満の健常男性
ｂ）腹囲９０ｃｍ以上
ｃ）下記の被験者除外基準に該当しない者
【００５８】
〈被験者除外基準〉
（ａ）心不全、心筋梗塞などの治療の既往歴がある者
（ｂ）疾患等による除外（心房細動、不整脈、肝障害、腎障害、脳血管障害、リウマチ、
糖尿病、脂質異常症、高血圧症、その他の慢性疾患等で治療中の者）
（ｃ）（ｂ）の疾患に関わる医薬品（漢方薬を含む）を服用している者
（ｄ）アレルギー（被験品関連食品、医薬品）がある者
（ｅ）スクリーニング検査開始時点を起点として、３ヶ月以内に他の臨床試験に参加
した者、または試験期間中に参加していた者
（ｆ）その他、試験担当医師が本試験の対象として不適当と判断した者
【００５９】
〈試験食品〉
株式会社Ｈａｒｖｅｓｔｅｃｈ製ジュンサイ含有サプリメント
用法： １日２回、朝食及び夕食後に水で摂取
１回８粒 （１６粒／日）
【００６０】
〈試験食品組成表〉
被験食品の形状：ハードカプセル
原料名：
ジュンサイ １５７．５ ｍｇ
結晶セルロース ６３．０ ｍｇ
二酸化ケイ素 ４．５ ｍｇ
１号透明豚ゼラチンカプセル ７７．０ ｍｇ
容量 ３０２．０ ｍｇ／粒
【００６１】
〈被験者管理〉
（ａ）説明事項
被験者には、事前説明会において、１）モニター試験の内容、実施方法、２）予測しうる有害事象、３）遵守事項の項目について説明した。
これらの説明を受け、試験参加に同意した者のみが試験に参加した。
また、試験参加に対する同意については文書にて記録した。
（ｂ） 遵守事項
被験者に対し、摂取期間中の遵守事項として以下の通り指導した。
１）摂取１週間前より摂取期間中は暴飲暴食を避ける。
２）摂取期間中は、それまでの食生活及び運動などの生活習慣を変えない。
３）試験期間中は、医薬品及びサプリメントの摂取を避ける。
４）検査前日は、飲酒や過度の運動を避ける。
５）検査６時間前から飲食をしない（※但し、水のみは摂取可とした）。
６）摂取期間中は試験日誌を毎日記録する。
記録項目：試験食品摂取の有無、薬物・サプリメント類の服用・摂取状況
食事及び飲酒内容、体重、歩数、体調、便通、特記事項
【００６２】
〈摂取期間〉
１０週間
【００６３】
〈検査項目〉
（ア）内科的検査
実施内容： 便通・軟便・嘔吐・嘔気・食欲不振及びその他の自覚症状の有無を問診
実施日： 全検査日
（イ）身体測定・理学検査
実施内容： 身長、体重、ＢＭＩ、腹囲、ヒップ周囲長、体脂肪率、血圧、脈拍
実施日： 身長はスクリーニング検査時のみ。その他は全検査日。
（ウ）尿検査
採取量： 約５ｍＬ
検査項目： 蛋白定性、糖定性、ウロビリノーゲン定性、ビリルビン定性、ケトン体、比重、ｐＨ、潜血、亜硝酸塩、白血球
実施日： 全検査日
（エ）抹消血液検査
採取量： 約２０ｍＬ
血液学検査：白血球数、赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット値、血小板数、ＭＣＶ（平均赤血球容積）、ＭＣＨ（平均赤血球色素量）、ＭＣＨＣ（平均赤血球色素濃度）、白血球像
血液生化学検査：ＡＳＴ（ＧＯＴ）、ＡＬＴ（ＧＰＴ）、γ−ＧＴＰ、ＡＬＰ、ＬＤ（ＬＤＨ）、ＬＡＰ、総ビリルビン、コリンエステラーゼ、ＺＴＴ、総蛋白、尿素窒素、クレアチニン、尿酸、ＣＫ、カルシウム、血清アミラーゼ、グルコース、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＴＧ（中性脂肪）、遊離脂肪酸
特殊検査１：ｓｄ−ＬＤＬ
特殊検査２：ＭＤＡ−ＬＤＬ、遊離コリン
実施日：特殊検査２のみ摂取前及び摂取１０週後、それ以外は全検査日
（オ）アンケート調査（ＶＡＳ法）
実施内容： 被験者の健康状態について、下記７項目に回答を求めた。
調査項目： お腹のでっぱり、肌の状態、胃もたれ、疲れやすさ、むくみ、肌の状態（肌荒れ）、お通じ
測定内容： Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）を用い、上記７項目について測定した。被験者は、上記８項目について想像できる最悪の状態を０（ゼロ）、最良の状態を１０として評価した。
実施日： 摂取前及び摂取１０週後
【００６４】
〈統計解析〉
血中脂質、遊離コリン、血液検査、身体測定・理学検査、ＶＡＳについて、被験品群及び非摂取群それぞれに対して、摂取前後で変化があるかどうかを検証するため、対応のあるｔ検定（ｐａｉｒｅｄ ｔ−ｔｅｓｔ）を実施した。摂取前後で変化しないという帰無仮説の検証を行い、帰無仮説が棄却された場合に有意差があるとした。
また、血中脂質、遊離コリン、血液検査、身体測定・理学検査、ＶＡＳについて、摂取前後の変化量が、被験品群と非摂取群とで異なるかどうかを検討するため、対応のないｔ検定を実施した。群間で変化量が異らないという帰無仮説の検証を行い、帰無仮説が棄却された場合に有意差があるとした。
いずれの検定においても、統計解析はＩＢＭ社製ＳＰＳＳ Ｖｅｒ．１８．０を用いて行った。有意水準を５％とし、両側検定で有意確率ｐ＜０．０５を「有意差あり」、ｐ＜０．１０を「傾向あり」と判定した。以下の図１４〜図２１の各値において、「＊」はｐ＜０．０５を、「＋」はｐ＜０．１０であることを示す。また、「＊＊」は、特に有意差が認められたｐ＜０．０１であることを示す。
【００６５】
（試験結果）
〈分析対象〉
本実施例の試験では、摂取群８名、非摂取群４名の計１２名がエントリーし、全員が試験を完遂した。
血液検査や尿検査、内科的検査の結果、及び日報の記述を考慮したところ、試験参加者として不適当な者や試験を真面目に受けなかった者は認められなかった。
そこで、全ての試験参加者を分析の対象とした。
【００６６】
〈血中脂質詳細検査〉
図１４〜図１７を参照して、血中脂質詳細検査である「特殊検査１」検査について説明する。ここでは、摂取前及び摂取１０週後の、被験品群の摂取前後の検査結果、被験品群及び非摂取群の摂取前後の変化率について説明する。
図１４は、被験品群の脂質４分画の検査結果を示す図である。図１４の脂質４分画において、摂取前後で有意な変化が認められたのは、ＬＤＬ中性脂肪濃度 （ｐ＝０．００４＊＊）およびＬＤＬ粒子サイズ （ｐ＝０．００４＊＊）であった。また、ＶＬＤＬコレステロール濃度（ｐ＝０．０８９＋）、ＶＬＤＬの粒子サイズ（ｐ＝０．０９６＋）であった。各検査項目の平均値は、ＶＬＤＬコレステロール濃度において２２．２％の上昇（３３．９ｍｇ／ｄＬから４１．５ｍｇ／ｄＬ）、ＬＤＬ中性脂肪濃度において２３．２％の低下（３０．６ｍｇ／ｄＬから２３．５ｍｇ／ｄＬ）、ＬＤＬの粒子サイズにおいて１．２％の上昇（２５．１ｎｍから２５．４ｎｍ）、ＶＬＤＬの粒子サイズにおいて７．３％の上昇（４４．３ｎｍから４７．５ｎｍ）であった。このように、ＬＤＬの粒子サイズが摂取前後で有意に上昇した。
図１５は、脂質４分画の変化率の結果を示す図である。図１５の脂質４分画において、ＬＤＬ粒子サイズに有意差が認められた（ｐ＝０．０１２＊）。すなわち、非摂取群と比較して、被験品群の変化率が大きかった。被験品群は１．２％の上昇、非摂取群は−０．１％の低下であった。
図１６は、コレステロール２０分画の結果を示す図である。コレステロール２０分画においては、ｓｄ ＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏに群間の有意差が認められ（ｐ＝０．０４３＊）、被験品群は非摂取群よりも大きく減少した。被験品群は１１．１％の減少、非摂取群は４．５％の減少であった。
図１７は、中性脂肪２０分画の結果を示す図である。中性脂肪２０分画においては、いずれの項目において群間に有意差は認められなかった。また、Ｇ１１分画ＴＧにおいて両群の間に傾向差が認められ （ｐ＝０．０５７＋）、被験品群は非摂取群と比較して大きく減少した。被験品群では５３．４％の減少、非摂取群は３８．３％の減少であった。
【００６７】
〈ＭＤＡ−ＬＤＬ・遊離コリンの検査〉
次に、図１８を参照して、血中脂質詳細検査である「特殊検査２」検査について説明する。この検査では、摂取前及び摂取１０週後において、被験品群及び非摂取群のＭＤＡ−ＬＤＬ及び遊離コリンの摂取前からの変化率を調べた。
図１８に示したように、いずれの項目においても、被験品群と非摂取群との間に有意差は認められなかった。
【００６８】
〈抹消血液検査〉
次に、図１９を参照して、抹消血液検査の被験品群及び非摂取群の血液検査の各項目における摂取前から摂取１０週後までの変化量について説明する。
図１９によると、ＬＤ（ＬＤＨ）において、被験品群と非摂取群との間に有意差が認められ（ｐ＝０．０２１＊）、非摂取群は被験品群と比較して値が大きく低下した。
また、白血球像（好中球数）において、被験品群と非摂取群との間に傾向差が認められ（ｐ＝０．０５１＋）、被験品群では増加したが、非摂取群では低下した。
【００６９】
〈身体測定・理学検査〉
次に、図２０を参照して、被験品群及び非摂取群の身体測定・理学検査の測定値における摂取前から摂取１０週後にかけての変化量について説明する。
図２０で示したように、ヒップ周囲長において両群の間に有意差が認められた（ｐ＝０．０４３＊）。
被験品群では平均値が０．２ｃｍ増加したが、非摂取群では１．０ｃｍ減少した。
【００７０】
〈ＶＡＳ〉
次に、図２１を参照して、被験品群及び非摂取群のＶＡＳ得点の摂取前から摂取１０週後にかけての変化量について説明する。
図２１によると、むくみにおいて両群の間に有意差が認められ（ｐ＝０．０４９＊）、被験品群の方が値の上昇量が大きかった。また、お通じにおいて両群の間に傾向差が認められ（ｐ＝０．０６２＋）、被験品群の方が値の上昇量が大きかった。
【００７１】
〈尿検査〉
摂取前検査終了直後、及び摂取１０週後検査終了直後に、先述した血液検査の結果と共に試験責任医師に提出し診断を求めた。
それによると、試験参加に問題のある者、及び被験食品が原因で重篤な体調の変化が生じた者は認められなかった。
【００７２】
〈内科的検査〉
被験食品の摂取によって重篤な体調の変化が生じたと考えられる者は認められなかった。
【００７３】
〈試験日誌〉
起床時の体重、１日の総歩数、食事によって摂取したカロリー、サプリメントの摂取数、排便回数の５項目について、毎日記録させた。
被験品群における摂取率は９９．４％であった。摂取期間中の平均体重は、被験品群において８３．１ｋｇ、非摂取群において８６．０ｋｇであった。１日当たりの歩数の平均値は、被験品群において９２１３．３歩、非摂取群において１０２１４．６歩であった。１日当たりの食事による摂取カロリーの平均値は、被験品群において１９８４．０ｋｃａｌ、非摂取群において１９６４．５ｋｃａｌであった。１日当たりの排便回数の平均値は、被験品群においては１．２７回、非摂取群においては１．３０回であった。また、歩数１００歩当たりの消費カロリーを３ｋｃａｌとし、１日あたりの歩行による消費カロリーの平均値を求めたところ、被験品群の消費カロリーは２７６．４ｋｃａｌ、非摂取群は３０６．４ｋｃａｌであった。
【００７４】
〈被験者の声〉
被験品群の被験者からは、以下のようなコメントが得られた。
・始めた当初は疲れ気味だったが、疲れが軽減された。
※夏バテだったからかもしれないとの但書あり。
・週休が２日から１日に減ったが、体が軽くなり、ズボンが緩くなってきた。
・一時的に体重が１ｋｇほど減少した。
・最初は量が多くて飲みづらかったが、次第に慣れた。
【００７５】
以上のように、本実施例の試験では、秋田県産ジュンサイ含有サプリメントを摂取することによる、生活習慣病の改善効果の評価を行った。
生活習慣病改善効果を検証するために、血中脂質の分画検査を行った。その結果、被験品群において、Ｇ１１分画Ｃｈｏ、Ｇ１２分画Ｃｈｏ、Ｇ１３分画Ｃｈｏ及びＧ１０−１３分画Ｃｈｏ（ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール、ｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ）が有意に低下し、ｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏ（全ＬＤＬコレステロールに占めるｓｄＬＤＬの割合）も有意に低下した。非摂取群においてはこれらの有意な変化は認められず、Ｇ１３分画Ｃｈｏ及びｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏが低下する傾向を示したのみに留まった。
被験品群と非摂取群とでｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏの低減率を比較したところ、被験品群の低減率が非摂取群よりも有意に大きかった。また、Ｇ１３分画Ｃｈｏについても、有意ではないものの、低減率は被験品群の方が大きかった。
以上をまとめると、被験品群において摂取１０週後にｓｄＬＤＬ濃度が低下したこと、及び全ＬＤＬコレステロールに占めるｓｄＬＤＬコレステロールの割合（ｓｄＬＤＬコレステロール値）の低下率が、非摂取群よりも被験品群において大きかった。
本試験の被験品群において、ｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏの濃度が低下したが、ＬＤＬコレステロール濃度は変化しなかった。このことから、本試験で観察されたｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ低減のメカニズムは、血中コレステロールの総量の低下によるものではなく、ＬＤＬコレステロールの質的変化によるものであると考えられる。すなわち、ＬＤＬの粒子サイズが全体的に大きくなったために、ｓｄＬＤＬに分類されるコレステロール粒子の割合が少なくなったと推測できる。
これは、ＬＤＬの粒子サイズの平均値が被験品群においてのみ上昇していること、及び、その変化率に群間で有意差が認められたことからも裏付けられる。
【００７６】
図２２を参照して、ＬＤＬコレステロールと循環器系疾患のリスクについて説明する。
図２２は、被験品群の被験者（ジュンサイ区）と、非摂取群の被験者（コントロール区）のＬＤＬ粒子サイズ減少量（縦軸）と、ｓｄＬＤＬコレステロールの増加量（横軸、超悪玉コレステロール増加量）をプロットした図である。
上述したように、ｓｄＬＤＬコレステロールは、心筋梗塞や脳卒中等、血管と関連のある生活習慣病の危険性を高めることが知られており、「超悪玉コレステロール」とも呼ばれる。
ｓｄＬＤＬコレステロールは通常サイズのＬＤＬコレステロールよりも血中滞在時間が長く、血管内皮と長時間接触する（例えば、平野勉、「リポ蛋白から動脈硬化との関連を探る」、Ｌｉｆｅ Ｓｔｙｌｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００８、、２、４、ｐ．３２３−３２９、及び．平野勉、「ＴＧと動脈硬化．診断と診療」、２００８、Ｌｉｆｅ Ｓｔｙｌｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、９６、７、ｐ．１２２５−１２３１、を参照）。また、ｓｄＬＤＬは酸化を防止する物質に乏しいため、酸化されやすい。これらの結果として、動脈硬化を引き起こしやすくなると考えられている。
つまり、図２２においては、ＬＤＬ粒子サイズが増え、ｓｄＬＤＬコレステロールが増加すると、動脈硬化のリスクが増大する。逆に、ＬＤＬ粒子サイズが相対的に減らず、ｓｄＬＤＬコレステロールが減少すると、動脈硬化のリスクが軽減されると考えられる。
すなわち、被験品群においては、ＬＤＬ粒子サイズの減少値が低下し、ｓｄＬＤＬコレステロール値が有意に低下した。
このことから、ジュンサイ含有サプリメントは、動脈硬化をはじめとする生活習慣病を予防する効果が得られる。
【００７７】
なお、血液生化学検査の血中脂質と関連した項目には有意差は認められなかった。しかしながら、被験品群では中性脂肪濃度が摂取前と比較して３．２％低下したのに対して、非摂取群では１５．３％上昇した。
両群の変化量に有意差がなく、非摂取群の人数が少ないものの、本試験の結果からジュンサイ含有サプリメントは、中性脂肪量の上昇を抑制する効果があると推測される。
また、ヒップの大きさに有意差が認められたことで、皮下脂肪・内臓脂肪のうち、特定の部位の脂肪を燃焼させることが期待できる。
【００７８】
また、試験日誌の記録を集計し、分析したところ、両群共に１日当たり概ね１万歩近く歩いており、摂取カロリーも２０００ｋｃａｌ程度と、比較的健康な生活を送っていたのではないかと思われる。統計的な有意差は認められなかったが、被験品群は非摂取群よりも歩数や歩行による消費カロリーが少なく、摂取期間の８週目以降においては食事や飲酒による摂取カロリーが多い傾向にあった。
すなわち、被験品群は非摂取群と比較すると、脂肪低減や生活習慣改善には不利な生活を送っていた。それにもかかわらず、被験品群においてｓｄＬＤＬコレステロール値（濃度）が低下したことや、中性脂肪濃度の上昇を抑制したことは、本実施例のジュンサイ含有サプリメントの生活習慣病改善効果を考慮する上で注目に値する。ジュンサイ含有サプリメントは、ある程度の範囲であれば、不摂生な生活を補う効果が期待できる。
【００７９】
また、身体測定・理学検査の結果、被験品群において体脂肪率や拡張期血圧が上昇した。
しかしながら、これは季節性の変動であると考えられる。また、上昇幅も体脂肪率において１．４％、拡張期血圧においては６．２ｍｍＨｇであり、いずれも重篤なものではないと考えられる。
加えて、血液検査の結果、いくつかの項目において変化が認められたが、いずれも基準値内の変動であった。また、尿検査の結果と併せて試験責任医師の診断を求めたところ、特に問題のある被験者は認められなかった。少なくとも本試験の使用条件下においては、ジュンサイ含有サプリメントは安全であったと考えられる。
また、血中遊離コリンによる肝機能の評価も行ったところ、こちらも変化がなかったため、ジュンサイ含有サプリメントは肝臓障害を引き起こさない。
【００８０】
以上をまとめると、実施例３において、腹囲やＢＭＩ等の身体検査、血算や生化学項目の血液検査等の主要項目の評価により生活習慣病改善効果について検証した。特に、動脈硬化惹起性リポタンパク質であるｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ （ｓｄＬＤＬ）の増減に伴うＬＤＬの質的変化があることが分かった。
本実施例に係るジュンサイ含有サプリメントの生活習慣病改善効果として、超悪玉コレステロールであるｓｄＬＤＬコレステロール濃度が低下し、ＬＤＬの粒子サイズの平均値が大型化した。
よって、本実施例に係るジュンサイ含有サプリメントが、動脈硬化や心筋梗塞など、ｓｄＬＤＬコレステロールによってリスクが高まるとされる疾病への予防効果を持つ可能性が示唆された。
なお、本実施例では、ジュンサイのフリーズドライ粉末を用いた。しかしながら、上述の実施例１のｉｎ ｖｉｔｒｏ実験で示したように、ジュンサイのエキスを用いることで、よりＴＧ、コレステロール低下の効果を高めることができる。この際に、効果の高いポリフェノール等の成分のみを抽出する抽出方法を用いることができる。
【００８１】
なお、上記実施の形態の構成及び動作は例であって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で適宜変更して実行することができることは言うまでもない。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明の脂質代謝改善剤は、ｓｄＬＤＬコレステロールを低下させ生活習慣病改善効果があるジュンサイ含有サプリメント等として提供可能であり、産業上に利用することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質代謝改善剤、機能性食品、食品添加物、抗酸化剤、医薬、動脈硬化予防・改善剤、香粧品、及び脂質代謝改善剤の製造方法に係り、特にジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を用いた脂質代謝改善剤、機能性食品、食品添加物、抗酸化剤、医薬、動脈硬化予防・改善剤、香粧品、及び脂質代謝改善剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、先進国や豊かになった発展途上国では、内臓脂肪の蓄積により引き起こされるメタボリックシンドロームが重大な健康問題となっている。
メタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）は、内臓の周囲に脂肪が蓄積するタイプの内臓脂肪型肥満に加えて、高血糖、高血圧、脂質異常のうちいずれか２つ以上が生じている状態である。メタボリックシンドロームは、動脈硬化の進行等により、循環器系の重大疾患の発生頻度が高まることが疑われている。
このうち、脂質異常については、高ＬＤＬ（Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、低比重リポタンパク）コレステロール血症、低ＨＤＬ（Ｈｉｇｈ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、高比重リポタンパク）コレステロール血症、及び高トリグリセリド血症等の種類がある。
ここで、コレステロールは、動物の生体内の代謝過程において主要な役割を果たし、細胞膜の必須成分である。動物の血液中では、コレステロールはリポタンパク質と結びついて輸送される。このため、コレステロールの担体となるリポタンパク質の種類と量（割合）が、脂質異常の指標として重要である。
また、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、ＴＧ）は、１分子のグリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ、ｇｌｙｃｅｒｉｎｅ）に３分子の脂肪酸がエステル結合したアシルグリセロールであり、中性脂肪の一種である。血液中のトリグリセリドが高いことにより、後述するリポタンパクのｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬができやすくなるため、動脈硬化への関与が疑われている。
【０００３】
ここで、コレステロールを輸送するリポタンパクの種類としては、カイロミクロン（ｃｈｙｌｏｍｉｃｒｏｎ、ＣＭ）、ＶＬＤＬ（Ｖｅｒｙ Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、超低比重リポタンパク）、ＬＤＬ、ＩＤＬ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、中間比重リポタンパク）、ＨＤＬ等が存在する。
このうち、ＬＤＬは、主に、肝臓から体内の各部位へ、コレステロールを運ぶ役割を担う。後述するように、ＬＤＬは、血中に増えすぎると、血管壁に沈着して動脈硬化の原因となるため、「悪玉コレステロール」と呼ばれる。このようにＬＤＬが血液中に多く存在する（１４０ｍｇ／ｄＬ以上）脂質異常症が、高ＬＤＬコレステロール血症である。
また、近年、このＬＤＬのうち、特に小型で比重の高いｓｄＬＤＬ（ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、小粒子ＬＤＬ）の役割が注目されるようになってきた。ｓｄＬＤＬは、肝臓のＬＤＬ受容体と結合しにくいため、通常のＬＤＬより血中での滞在時間が長くなり、血管内皮と長時間接触する。このｓｄＬＤＬが多いと、動脈硬化が進行しやすいとされ、「動脈硬化惹起性リポタンパク質」であると疑われている。このため、ｓｄＬＤＬコレステロールは「超悪玉コレステロール」とも呼ばれている。
【０００４】
また、ＨＤＬは、細胞内や動脈内から取り込まれた不要なコレステロールを、肝臓に戻す役割を担っており、動脈硬化を防ぐため「善玉コレステロール」とも呼ばれている。このＨＤＬが血液中に少ない（４０ｍｇ／ｄＬ未満）脂質異常症が、低ＨＤＬコレステロール血症である。
【０００５】
従来のこのようなメタボリックシンドロームの改善剤として、特許文献１を参照すると、ブドウの乳酸発酵物を有効成分として含有することを特徴とするメタボリックシンドローム改善組成物が記載されている（以下、従来技術１とする。）
従来技術１のメタボリックシンドローム改善組成物によれば、これを摂取することにより糖質等の消化吸収性が抑制され、血糖値の急激な上昇を抑制できる。その結果、過血糖症状及び過血糖に起因する肥満症、脂肪過多症、糖尿病等のメタボリックシンドローム関連症を効果的に予防ないし治療でき、メタボリックシンドロームの症状を効率よく改善できる。
【０００６】
一方、ジュンサイ（蓴菜、純菜、Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）は、スイレン科ジュンサイ属の多年生水生植物である。
ジュンサイは、日本及び中国にて、幼葉と、幼葉に隣接する茎が食用に用いられている。ジュンサイの幼葉は、表面が透明なゲル状粘物質で覆われており、独特の食感を有する。このため、日本において、ジュンサイは古代から食されており、水が育む夏の味覚として珍重されてきた。また、中国でも２０００年以上前に、歴代帝王への献上品として宮庭宴会の名菜と重宝されていた。
日本では、ジュンサイは澄んだ淡水の池沼に自生するものの、近年は純天然産のものが少なくなっており、栽培によって量産されることが多い。この栽培としては、例えば、ジュンサイ沼に大きなたらいを漕ぎ、晩春〜夏に若芽を摘む方法が用いられている。
日本のジュンサイの主要生産地は秋田県であり、郷土料理として有名である。特に、秋田県山本郡三種町（旧山本町）の収穫・販売量は、日本全国の９割を占め、生産量日本一を誇っている。
ジュンサイそのものは淡白な味のため、お吸い物、酢の物、天ぷらをはじめ、さまざまな料理に応用されており、首都圏や関西圏では高級食材として珍重されている。
【０００７】
ここで、従来のジュンサイの応用製品として、特許文献２を参照すると、ストレプトコッカス・ミュータンスが産生するグルコシルトランスフェラーゼの活性を阻害することで、歯垢形成を抑制し、う蝕を予防するグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤の技術が開示されている（以下、従来技術２とする。）。
従来技術２は、グルコシルトランスフェラーゼの活性阻害作用が極めて強く、歯垢の形成抑制及びう蝕の予防に著しい効果を発揮する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１１−１０６４８号公報
【特許文献２】特開２００６−４５１５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従来技術１のメタボリックシンドローム改善組成物は、脂肪の代謝を直接上げることで肥満を抑制する訳ではないため、効果が低かった。
このため、安全に摂取できて確実に脂肪代謝を改善する食物由来の脂質代謝改善組成物が求められていた。
一方、ジュンサイは、従来より１００ｇ当たりのカロリーが６ｋｃａｌと極めて低く、健康的な自然食品として用いられていた。
しかしながら、ジュンサイの生理活性作用については殆ど知られておらず、従来技術２のグルコシルトランスフェラーゼ活性以外の用途は、あまり分かっていなかった。
【００１０】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、上述の課題を解消することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の脂質代謝改善剤は、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を加工してなることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、血中中性脂肪値を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール値を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、全ＬＤＬに占めるｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの割合を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記ＬＤＬの粒子サイズを増加させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、脂肪酸合成系及びコレステロール合成系の脂質代謝関連遺伝子の発現を低下させることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記ジュンサイは、乾燥加工された植物体であることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記ジュンサイは、水又は有機溶媒にて抽出されたエキスであることを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤は、前記有機溶媒がエタノールであることを特徴とする。
本発明の機能性食品は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の食品添加物は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の抗酸化剤は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の医薬は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の動脈硬化予防・改善剤は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の香粧品は、前記脂質代謝改善剤を含むことを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤の製造方法は、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を水又は有機溶媒にて抽出することを特徴とする。
本発明の脂質代謝改善剤の製造方法は、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を乾燥加工することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、加工したジュンサイの成分により、動物の脂質代謝異常を改善する脂質代謝改善剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の製造の工程図である。
【図２】本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の製造に用いるジュンサイの部位の概念図である。
【図３】本発明の実施の形態に係るジュンサイを加熱乾燥した粉末の組成と検査の結果を示す図である。
【図４】本発明の実施の形態に係るＨＦＤ（高脂肪食）とジュンサイ飼料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）の組成、及びマウスの取得量を示す図である。
【図５】本発明の実施の形態に係るヒト肝癌由来ＨｅｐＧ２細胞から分泌されたＴＧ及びコレステロール複合体の測定量を示す図である。
【図６】本発明の実施の形態に係るＴＧ及びコレステロール複合体のリポタンパク質プロファイルを示すグラフである。
【図７】本発明の実施の形態に係るリポタンパク関連遺伝子発現に対するジュンサイの影響を調べたリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図８】本発明の実施の形態の実施例１に係るＨＦＤとジュンサイ飼料が給餌されたマウスの組織重量及び血清指標の測定値の図である。
【図９】本発明の実施の形態の実施例１に係るマウスの体重、内蔵脂肪の重量、血中及び中性脂肪に対するジュンサイの影響のグラフである。
【図１０】本発明の実施の形態の実施例２に係るコゴミの非加熱のフリリーズドライ粉末のサンプル調整に係る部位を示す概念図である。
【図１１】本発明の実施の形態の実施例２に係るジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性を測定した結果を示す図である。
【図１２】本発明の実施の形態の実施例２に係るジュンサイと他のサンプルの希釈率とＣｕ還元力との関係を示すグラフである。
【図１３】本発明の実施の形態の実施例２に係るジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性の平均値を示すグラフである。
【図１４】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査の血中脂質４分画の非検品群の測定結果を示すグラフである。
【図１５】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査の血中脂質４分画の変化率を示すグラフである。
【図１６】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査のコレステロール２０分画の変化率を示すグラフである。
【図１７】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査の中性脂肪２０分画の変化率を示すグラフである。
【図１８】本発明の実施の形態の実施例３に係る血中脂質詳細検査のＭＤＡ−ＬＤＬ・遊離コリンの変化率を示すグラフである。
【図１９】本発明の実施の形態の実施例３に係る血液検査結果の変化量を示すグラフである。
【図２０】本発明の実施の形態の実施例３に係る身体測定・理学検査の変化量を示すグラフである。
【図２１】本発明の実施の形態の実施例３に係るＶＡＳの変化率を示すグラフである。
【図２２】本発明の実施の形態の実施例３に係るジュンサイ摂取によるＬＤＬ粒子サイズ減少値とｓｄＬＤＬの増加量との関係を示す概念図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
＜実施の形態＞
〔本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤、脂質代謝改善剤の製造方法〕
以下、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤、及び脂質代謝改善剤の製造方法の構成例について説明する。
本発明の発明者らは、メタボリックシンドロームを解消するために、従来よりも効果が高い食物由来の脂質代謝改善剤を開発すべく、鋭意、研究・実験を進めた。
そして、ジュンサイ（蓴菜、純菜、Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）には、従来よりも顕著な脂質代謝改善の作用があることを見いだし、本発明を完成させた。
すなわち、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、ジュンサイを加工したものを用いることを特徴とする。
以下で、図１の製造工程図を参照して、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の製造方法について説明する。
【００１５】
まず、ステップＳ１０１において、ジュンサイを調製する原料取得処理について説明する。
ここで、図２を参照して、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の原料となるジュンサイについて説明する。
ジュンサイは、表面が透明なゲル状粘物質で覆われた幼葉と、それに隣接する茎が古くから食用に用いられており、その独特の食感から高級食材として珍重されている。
ジュンサイは９８％が水分であり、ビタミンや食物繊維を始め、様々な栄養素が含まれている。特に若芽、若葉は栄養価が高く、タンパク質、ビタミン、微量元素などを豊富に含んでいる。また、葉が若く小さいほどゲル状物質が多く、上等品と言われている。
この原料取得処理においては、ジュンサイの若芽・若葉を選別して取得し、乾燥、粉砕、エキス抽出等の加工を行って、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤として用いることができる。
この際に、生のジュンサイの若芽・若葉は、冷蔵保管で１週間程度日持ちさせることができる。さらに、熱処理（水煮）やｐＨ調整剤の添加により、半年〜１年程日持ちさせることもできる。
また、従来、ジュンサイは、若芽・若葉以外は食用とされておらず、廃棄されていた。この成長芽・葉、茎、根、花等を原材料として用いることもできる。
さらに、栽培中のジュンサイは、気温の高くなる時期に若葉周辺が黒く変色することがある。黒変したジュンサイは、食感や味に変化はないものの、市場で敬遠されるため商品価値がなく、容易に脱色できないため廃棄処分となっていた。
また、ジュンサイはゼラチン質の多い若芽・若葉が最も市場価値が高く、成長した芽や葉は収穫せず廃棄されるのが一般的であった。生産量の５０％が廃棄されているとの推測もあり、損失が大きかった。
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、これらの廃棄されるジュンサイを用いることができ、コストを削減できる。
【００１６】
次に、ステップＳ１０２において、ジュンサイの乾燥粉末を作成する処理について説明する。
この処理においては、選別されたジュンサイの原料を、通常の温風乾燥、真空凍結乾燥（フリーズドライ）等の手法を用いて乾燥する。この際に、図２のように若芽、若葉のみを乾燥して用いることができる。また、廃棄される部位や、黒変して廃棄されるジュンサイについても、乾燥して用いることができる。
【００１７】
ここで、図３を参照して、温風乾燥されたジュンサイ粉末の例について説明する。
図３（ａ）は、原材料としてジュンサイの若芽・若葉を１００％使用してジュンサイ粉末を得た例である。
生のジュンサイを取得して、例えば納品重量が１５８．０ｋｇ、水切重量が１２０．０ｋｇであった際に、水分は９８．０％、固形分は２．０％程度であった。
このようなジュンサイについて、傷んだ部位や若芽・若葉以外等を除き、７５％程度の部位を、例えば６０℃〜１００℃で温風乾燥させる。この乾燥させる方法としては、ジュンサイを、所定温度の空気流により乾燥する方法等を用いることができる。
具体的には、扇風機を稼動させ、所定温度・湿度に保持された乾燥室内でジュンサイを乾燥させることができる。
また、所定温度・湿度に保持された乾燥室、乾燥箱等内に静置することで乾燥させることもできる。
この際、例えば、乾燥品予定重量が図３の例のように、１５８．０ｋｇの原料が、２．４０ｋｇ程度になるように乾燥させる。
【００１８】
次に、ステップＳ１０３において、乾燥後のジュンサイの検査、例えば金属探知処理について説明する。
まず、上述のステップにて温風乾燥したジュンサイから、さらに食味に影響を及ぼす繊維等を除き、２．０８ｋｇ程度を回転粉砕機等を用いて粉砕する。
この上で、金属探知機により異物が混入していないか確認する。確認後の製品となる粉末は、図３（ａ）によると、水分は、５．９０％程度になる、
この状態で、食品細菌検査も行うことができる。
図３（ｂ）は、食品細菌検査の結果例である。この検査により、細菌、カビ・酵母、大腸菌群等の菌量の単位で、ＣＦＵ（Ｃｏｌｏｎｙ Ｆｏｒｍｉｎｇ Ｕｎｉｔ）／ｇは、それぞれ０になるようにする。
【００１９】
また、ステップＳ１０４において、ジュンサイの抽出物（エキス）を作成する処理について説明する。
上述の乾燥粉末の作成と同様の原料を、水や有機溶媒を用いて抽出してエキスを作成する。この際に、上述の温風乾燥やフリーズドライで乾燥された粉末を用いて抽出を行うことが好適であるが、乾燥を行わずに抽出することもできる。
この際、有機溶媒としては、エタノール等のアルコール類に加え、ヘキサンやアセトンやエステル等の食品加工に用いられる任意の有機溶媒を用いることができる。
具体的には、フリーズドライにより作成したジュンサイ粉末を、１ｇ／５０ｍＬ程度の割合で蒸留水又はエタノールで抽出することができる。水抽出物及びエタノール抽出物は、凍結乾燥と蒸発により乾燥することができる。
工業的に生産する場合、粉砕され粉末になったジュンサイを、ステンレスの抽出管等に入れて、上部より有機溶媒を滴下して溶出液を回収する。その後、エバポレーター等で濃縮し回収された、有機溶媒を再度抽出用に循環させることもできる。
【００２０】
次に、ステップＳ１０５にて、出荷用処理を行う。
具体的には、脂質代謝改善剤の用途に合わせて、各種担体や防腐剤等を加えてパッケージングする。
たとえば、ジュンサイ粉末や抽出したエキスを乾燥・固化させて脂質代謝改善剤として用いるための、任意の製剤上許容しうる担体（例えば、生理食塩水、ブドウ糖、その他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等が挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０等を挙げることができるが、それらに限定されない）と共に投与することができる。また、適切な賦形剤等を含んでもよい。
なお、抽出した溶媒を乾燥させた粉末、製品についても、金属探知処理により異物の混入を防ぐことができる。
【００２１】
また、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、製剤上許容しうる担体を調製するために、適切な薬学的に許容可能なキャリアを含み得る。
このキャリアとしては、シリコーン、コラーゲン、ゼラチン等の生体親和性材料を含んでもよい。あるいはまた、種々の乳濁液であってもよい。
さらには、例えば、希釈剤、香料、防腐剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、乳化剤、可塑剤などから選択される１種又は２種以上の製剤用添加物を含有させてもよい。
脂質代謝改善剤の形態としては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、丸剤、散剤、シロップ剤、液剤、ゼリー剤、トローチ剤等の剤型を用いることができる。
【００２２】
また、本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、飲食品に添加する場合、ドリンク剤等の飲料品、クッキーやクラッカー等の一般の食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品等に配合して用いることができる。
【００２３】
また、本発明の実施の形態の脂質代謝改善剤は、生物体、生物体の体内の一部分、または生物体より摘出または排出されたその一部分について、治療用の対象とすることができる。この生物体は特に限定されるものではないが、動物（例えば、ヒト、家畜動物種、野生動物）を含む。
【００２４】
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、経口投与のための投与に適した投与形態において、当該分野で周知の製剤上許容しうる担体を用いて処方され得る。
本発明に係る脂質代謝改善剤は、投与経路は特に限定されないが、非経口的に投与する場合、例えば、静脈内、動脈内、皮下、真皮内、筋肉内または腹腔内の投与が挙げられる。
【００２５】
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤の１回の投与量及び投与回数は、投与の目的により、さらに患者の年齢及び体重、症状及び疾患の重篤度などの種々の条件に応じて適宜選択及び変更することが可能である。
本発明の脂質代謝改善剤は、他の組成物等と併用することも可能である。また、他の組成物と同時に本発明の組成物を投与してもよく、また間隔を空けて投与してもよいが、その投与順序は特に問わない。
【００２６】
また、本発明の実施の形態において、疾患が改善または軽減される期間は特に限定されないが、一時的な改善または軽減であってもよいし、一定期間の改善または軽減であってもよい。
【００２７】
以上のように構成することで、以下のような効果を得ることができる。
本発明の実施の形態に係る脂質代謝改善剤は、抗肥満、血中ＴＧ低減、及び血中コレステロール低減の効果を得ることができる。
この効果は、ジュンサイの成分が、脂肪代謝やコレステロール合成酵素である、例えばステロール脂肪酸シンターゼ（ｓｔｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＦＡＳ）、コレステロール生成のために必要なＨＭＧ−ＣｏＡ合成酵素−１（ＨＭＧＣＳ−１）の遺伝子発現を減少させることにより生じると考えられる。また、ＨＭＧ−ＣｏＡ合成酵素−１の上流に働く転写制御因子であるＳＲＥＢＰ−１ｃ、ＳＲＥＢＰ−２の遺伝子発現も減少させる。
このため、本実施形態に係る脂質代謝改善剤は、メタボリックシンドローム等の生活習慣病の改善効果が得られ、脂質異常症、動脈硬化症、心疾患などの予防効果を発揮することができる。
また、ジュンサイは、高い抗酸化効果をもつため、動脈硬化性疾患の他にも、肝疾患（ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ等）の予防・改善も期待できる。
【００２８】
次に図面に基づき本発明を実施例によりさらに説明するが、以下の具体例は本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００２９】
（ヒト肝臓癌細胞から分泌された脂質を用いたリポタンパク質プロファイリングによる食物材料の脂質代謝改善活性に関するｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニング）
本発明者らは、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料を用いて、ヒト肝癌（ヘパトーマ）由来細胞株ＨｅｐＧ２から分泌されたＴＧ及びコレステロール複合体のプロファイルの評価による抗脂血剤的な影響をスクリーニングした。
結果として、１００ｍｇ／ｍＬのジュンサイの水及びエタノール抽出物は、オレイン酸ナトリウムにより刺激されたＨｅｐＧ２細胞からのＴＧとコレステロールの分泌に対する、非常に強い抑制活性を示した。
この上で、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析を行ったところ、ジュンサイのエタノール抽出物は、肝細胞／肝臓癌細胞の脂質合成に関連する、ステロール脂肪酸シンターゼ（ｓｔｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＦＡＳ）、及びコレステロール生合成に必要なＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ−１（ＨＭＧＣＳ−１）、ＳＲＥＢＰ（Ｓｔｅｒｏｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ−Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）−１ｃ及びＳＲＥＢＰ−２の各遺伝子発現を減少させた。
更に、本発明者らは、高脂肪食を与えたマウスの脂肪組織蓄積と血清の状態へのジュンサイの作用を検討した。
高脂肪食を与えられたマウスにおいて、ジュンサイは腸間膜・精巣上体の脂肪組織蓄積を抑えて、血清ＴＧ及びグルコースを正常状態にした。このため、血中コレステロールの状態を正常な状態に近づけると考えられる。
【００３０】
より具体的に説明すると、本発明の実施例１においては、ジュンサイ及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料を用いて、メタボリックシンドロームに係る脂肪代謝改善活性のスクリーニングを行った。
このようなスクリーニングでは、通常、脂質異常症マウス／ラット等の実験動物が使用される。しかしながら、実験動物を使用する研究は費用が掛かるのと、多くの試験サンプルを一度に評価することができないため、まずは、細胞系を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ（細胞外）のスクリーニングを行った。
ここで、本発明者らは、従来、ＨｅｐＧ２ヒト肝臓癌細胞から分泌されたリポタンパク質プロファイルの評価を用いて、抗脂血剤作用薬の作用をスクリーンニングする評価システムを開発した（Ｍｉｚｕｈｏ Ｉｔｏｈ他、”ＨＰＬＣ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ： ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｔｉｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ｄｒｕｇｓ”、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ．、、、Ｓｐｌｉｎｇｅｒ、２００９年、３１号、、ｐ．９５３〜９５７）。この評価システムを使って、本発明者らは、以前、ルペオール、ルパン・トリテルペン、及び米糠発酵エキスの抗脂血剤作用薬の作用をスクリーンニングし、シグナル伝達機構を分析した（Ｍｉｚｕｈｏ Ｉｔｏｈ他、”Ｌｕｐｅｏｌ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｎｄ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ”、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ、、ＥＬＥＳＥＶＩＥＲ、２００９年、２号、、ｐ．１７６〜１７８を参照。）。この評価システムは抗脂血剤を評価する際に、非常に有用な手法であった。
本実施例において、本発明者らは、この評価システムのアッセイ系を使用して、いくつかの食用植物の脂質代謝改善活性をスクリーニングした。
この結果、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）からのエタノール抽出物は、ＨｅｐＧ２細胞からの脂質放出を著しく引き下げると分かった。
また、私たちは、ｉｎ ｖｉｖｏ（生体内）において、高脂肪食を与えたマウスの脂肪組織蓄積と血清パラメーターに対するジュンサイの予防及び正常化の影響を検討した。これによると、実際に、ジュンサイエキスは、高脂肪食を与えたマウスの血清脂質レベルを正常にし、腸間膜の脂肪組織の蓄積を抑えることができた。
以下で、評価の際の各プロトコルと、結果について説明する。
【００３１】
（エキス抽出方法）
凍結乾燥され、入手可能な食用植物が使用された。
フリーズドライされた植物（１ｇ）は、５０ｍＬの蒸留水又はエタノールで抽出された。抽出された抽出物は、遠心分離で収集された。水又はエタノール抽出物は、凍結乾燥と蒸発によりそれぞれ乾燥させた。
【００３２】
（細胞培養、及びヘパトーマ細胞から分泌されたリポタンパク質の取得）
ＨｅｐＧ２ヒト・ヘパトーマ細胞は、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１００Ｕのペニシリンを含むダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ'ｓ ｍｅｄｉｕｍ、ＤＭＥＭ）で維持された。
その後、ヘパトーマ細胞（１×１０5細胞）は、２４−ウェルプレート内の１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ（１ｍＬ）に接種され、２日間、あらかじめ培養された。
培養した細胞は、ＰＢＳで２度洗浄され、その後４日間、０．１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含むＦＣＳを含まないＤＭＥＭ（２５０μＬ）を用いて、抽出物あり／なしの状態で培養された。
培養後の培地は５分間１５，０００×ｇで遠心分離され、以下のリポタンパク質プロファイルの分析が行われた。
【００３３】
（培地のリポタンパク質プロファイル分析）
上述のように、トリグリセリド（ＴＧ）と主に３つのクラスのリポタンパク質（ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、及びＨＤＬ）の分離及び決定が行なわれた。
まず、リポタンパク質が、８０ｍＬの培地からゲル浸透ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）システムを使用して分離された。
この際に、ＴＧの分析用として、Ｄｉａｃｏｌｏｒ Ｌｉｑｕｉｄ ＴＧ−Ｓ（東洋紡績株式会社製）を使用し、酵素反応させた。また、コレステロールの分析用には、Ｃｈｏｌｅｓｃｏｌｏｒ Ｌｉｑｕｉｄ Ｋｉｔ（東洋紡績株式会社製）を使用し、酵素反応させた。その後、溶出液は、波長５５０ｎｍについてオンラインで連続的にモニタリンされた。
ＴＧと３つの主なリポタンパク質におけるコレステロールの濃度の値は、発明者らの作成したコンピュータ・プログラムで計算された。この際に、冷凍血清を基にしたスタンダード（協和発酵キリン株式会社製）を使用して、規格化（標準化）された。
【００３４】
（ＲＮＡ抽出及びｃＤＮＡ合成）
１２ウェル・プレート（１ｍＬ）のＨｅｐＧ２細胞（２．５×１０5細胞）は、２日間、１０％ＦＣＳを含んでいるＤＭＥＭで培養された。
細胞は、ＰＢＳにより２度洗われ、０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム又は１００μｇ／ｍＬのジュンサイとオレイン酸ナトリウムがあり／なしの状態で、２日間、０．１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含むＦＣＳを含まないＤＭＥＭ（５００μＬ）で培養した。
トータルＲＮＡはＱｕｉｃｋＧｅｎｅ ＲＮＡ培養細胞キットＳ（富士フイルム株式会社製）を使用して単離された。
テンプレート相補的ＤＮＡ合成はＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ試薬キット（タカラバイオ株式会社製）を使用して、トータルＲＮＡを５μｇ用いて行なわれた。
【００３５】
（リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ）
２．５％（ｗ／ｖ）の各ＲＴ反応溶液は、蛍光温度サイクラー（Ｃｈｒｏｍｏ４、バイオ・ラッド・ラボラトリーズ社製）にて、各プライマーを０．２μＭを含んでいる、１×ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（タカラバイオ株式会社製）２５μＬを用いて増幅された。
サンプルは、最初に９５℃で１０秒間変性させ、続いてサーマルサイクラーで４０回のＰＣＲサイクルが実行された。各サイクルは、９５℃で５秒、及び６０℃で３０秒であった。
実験の中で使用されるオリゴヌクレオチド・プライマーは、上述の論文（Ｍｉｚｕｈｏ Ｉｔｏｈ他、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ．）と同様のプライマーを用いた。
特異的なトランスクリプトの増幅を確認するため、各ＰＣＲの終了時に、サンプルを６０℃に冷却し、９５℃にゆっくり加熱しつつ、蛍光を連続測定する融解曲線プロファイルを得た。
各ｍＲＮＡの相対的な発現レベルは、β−アクチンのｍＲＮＡの量で正規化された。このβ−アクチンのｍＲＮＡは、上述のキットに付属のプライマーを用いて測定された。
【００３６】
（動物試験の予備実験）
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、Ｈｉｇｈ Ｆａｔ ＤｉｅｔとジュンサイＥｔＯＨ抽出エキス１％を混餌し、２週間投与した。
これにより、対照群と比較し、有意に、中性脂肪値の改善と内臓脂肪蓄積抑制効果がみられた。
【００３７】
（動物実験）
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ系統のマウス（６週、雄）は、日本クレア株式会社から購入された。
それらのマウスは、ポリカーボネート・ケージに収容され、２３±２℃に維持された部屋で１２時間の明暗サイクル（８：００〜２０：００）で飼育された。
マウスは、実験期間において、新鮮な飼料及び飲料水に、制限なしに接近できた。
それらは７日間、Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２（ＨＦＤ、日本クレア株式会社製）を与えられ、６つのマウス各々の２つのグループへ分割した；
【００３８】
（コントロール群とジュンサイ飼料群の投与試験）
マウスは、ＨＦＤ（高脂肪食）を与えられた対照（コントロール）群と、ジュンサイ飼料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）を与えられたジュンサイ飼料群により試験された。
図４に、このＨＦＤと、ジュンサイ試料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）の組成を示す。ジュンサイ飼料は、ＨＦＤに、試験物質であるジュンサイを１％含む飼料である。
コントロール群又はジュンサイ飼料群は、１４日連続してＨＦＤ又はジュンサイ飼料をそれぞれ与えられた。
マウスの食物摂取量は、毎日記録された。また、体重が２日又は３日に１回測定された。
実験期間の終了時、マウスは１６時間絶食させた後に、光ジエチルエーテル麻酔の下で処理された。
血液は、腹大動脈から集められた。また、血清は、分析まで−２０℃で保管された。
肝臓、腸間膜・精巣上体の脂肪組織が切除され、計量された。
全実験は、日本の政府立法による委員会で発行されたガイドラインに厳密に従って行われた。
【００３９】
（血清指標）
マウスの血清のグルコース、総コレステロール、ＴＧ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、及びアラニン・トランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の血中濃度が、生化学自動分析装置（ＦＵＪＩ ＤＲＩ−ＣＨＥＭ ３５００Ｖ、富士フイルム株式会社製）にて測定された。
【００４０】
（統計分析）
各測定データは、平均±標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現された。
差異の有意性は、スチューデントｔ検定（図８参照）、又はＤｕｎｎｅｔｔ（図５参照）及びＴｕｋｅｙ（図７参照）の多重比較テストを用いた一元配置分散分析を使用して分析された。ｐ＜０．０５が、有意であるとみなされた。
以下の図５、７、８の各図においては、「＊」がｐ＜０．０５を示し、「＊＊」がｐ＜０．０１を示す。
【００４１】
（ＨｅｐＧ２のリポタンパク質プロファイルの分析）
まず、図５を参照して、ジュンサイ及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料による脂質代謝改善効果について、ＨｅｐＧ２のリポタンパク質プロファイルにより評価した例について説明する。
本発明者らは、ジュンサイと他の食物材料として、ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ、ＢＳＥＴ）と、他の５つの食用植物であるミョウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｍｉｏｇａ）、オクラ（Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ）、ウド（Ａｒａｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ）、トンブリ（ホウキギ、Ｋｏｃｈｉａ ｓｃｏｐａｒｉａ）、ネギ（Ａｌｌｉｕｍ ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ）を用いた。そして、これらの水及びエタノール抽出物を１００μｇ／ｍＬ加えた際に、ＨｅｐＧ２細胞から放出されたＴＧ及び３つの主なリポタンパク質であるＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬのコレステロール値の影響を検討した。
図５は、要約されたデータであり、細胞は０．１％のＢＳＡを含んでいる血清を含まないＤＭＥＭで２日間、オレイン酸ナトリウムなし、０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム、又は１００μｇ／ｍＬの各食物材料とオレイン酸ナトリウムを用いて培養された。また、培地のＴＧ及びコレステロールのレベルが決定された。データは平均±ＳＤ（ｎ＝４）を示す。各データは、オレイン酸ナトリウムのみのデータと検定している。
結果として、ＨｅｐＧ２の培養液中のＴＧ及びコレステロール値は、脂肪代謝を高めるオレイン酸ナトリウムで上昇した。
また、ポジティブコントロールである脂質異常症治療薬のフェノフィブラート（Ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、及び、いくつかの植物の抽出物は、オレイン酸ナトリウムで脂肪代謝が促進された細胞から放出されるＴＧ及び／又はコレステロールを減少させた。
特に、ジュンサイの水及びエタノール抽出物は、ＴＧ及び３つのリポタンパク質のコレステロール値を著しく抑えた。
【００４２】
次に、図６を参照して、各サンプルについての、実際のリポタンパク質プロファイルについて説明する。
図６は、オレイン酸ナトリウム刺激の下で（ジュンサイ）のエタノール抽出物により未処理／処理されたＨｅｐＧ２細胞のリポタンパク質プロファイルを示す。具体的には、２日間、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭであらかじめ培養されたＨｅｐＧ２細胞において、ＨｅｐＧ２細胞のリポタンパク質プロファイルに対するジュンサイ及び他の生薬又は食用植物由来の食物材料の影響をリポタンパク質プロファイルのグラフとして示している。
各グラフにおいて、縦軸は５５０ｎｍでの吸収度（ｍＶ）、横軸はリテンションタイムを示す。各グラフについて、「系列１」はＴＧを、「系列２」はコレステロールのプロファイルを示す。
図６に示すように、コントロールに対して、オレイン酸のみを与えた場合、ＨｅｐＧ２細胞からＴＧ及び各コレステロール複合体の放出が増えることが分かる。
これに対して、ジュンサイは、オレイン酸ナトリウムで誘発されたＨｅｐＧ２細胞からのＴＧとコレステロールの放出に対する強い低下活性を示した。
他には、ミョウガの水抽出物は、細胞からのＴＧとコレステロールの分泌を少しだけ引き下げた。それ以外の食物材料のサンプルは、特にＴＧ及び各コレステロール複合体の放出を低下させる活性は確認できなかった。
なお、図示していないが、コゴミ（クサソテツ、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉａ ｓｔｒｕｔｈｉｏｐｔｅｒｉｓのエタノール抽出物は、ＨｅｐＧ２細胞からのコレステロールの放出のみ引き下げ、ＴＧレベルについては有意に減少しなかった。
【００４３】
次に、図７を参照して、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより、ＨｅｐＧ２細胞において、リポタンパク質合成に関するｍＲＮＡ発現に対するジュンサイの影響を調べた結果について説明する。
ここでは、本発明者らは、定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いて、１００μｇ／ｍＬのジュンサイがＨｅｐＧ２細胞のＴＧ及びコレステロール合成のために必要な、各種の遺伝子の発現に影響するかどうか調べた。
具体的には、ＨｅｐＧ２細胞は、オレイン酸ナトリウムなし、０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム、又は１００μｇ／ｍＬのジュンサイのエタノールエキスとオレイン酸ナトリウムにより、２日間、培養された。
図７の各グラフはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲで分析された各遺伝子のｍＲＮＡ発現を示している。縦軸は、コントロールのβアクチンに対する比較発現量（％）を示し、横軸は各遺伝子のグラフを示す。各グラフにおいて、白抜きはオレイン酸ナトリウムなし、斜線は０．７５ｍＭオレイン酸ナトリウム、黒塗りは１００μｇ／ｍＬのジュンサイのエタノールエキスとオレイン酸ナトリウムを投入した結果を示す。また、各グラフのデータは未処理のコントロールの細胞に相対的に表現され、平均±ＳＤを示す（ｎ＝４）。
結果として、オレイン酸ナトリウムのみを与えた場合、未処理の細胞と比較すると、ＨｅｐＧ２細胞は、ｍＲＮＡレベルで、酵素であるステロール脂肪酸シンターゼ（ｓｔｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＦＡＳ）及びコレステロール生合成に必要なＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ−１（ＨＭＧＣＳ−１）の発現を著しく上げた。
これに対して、オレイン酸ナトリウムで誘発された細胞と比較した場合、ジュンサイエキスを投入した細胞は、ＳＲＥＢＰ−１ｃを５１．７％、ＦＡＳを７８．８％、ＨＭＧＣＳ−１を４５．６％、及びＦＤＦＴ（ｆａｒｎｅｓｙｌ−ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）を５６．４％、それぞれ遺伝子発現を減少させた。
なお、コントロールとして、ハウスキーピング遺伝子であるβ−グルクロニダーゼ（β−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ、ＧＵＳ）のみの発現をみたところ、オレイン酸ナトリウムとジュンサイエキスの有無に関わらず発現が変わっていなかった。
【００４４】
また、アポリポ蛋白質（ａｐｏ）は５つの主なクラス、ａｐｏＡ−Ｅに分類される。ａｐｏＡのサブクラスであるＡｐｏＡ−１は、ＨＤＬの構成分子で、ＨＤＬ物質代謝に関係する。ａｐｏＢ遺伝子にコードされているＡｐｏＢ−１００は、肝臓の組織で合成され、ＶＬＤＬとＬＤＬの構成の成分である。
図７の各グラフを参照すると、オレイン酸ナトリウムは、ＨｅｐＧ２細胞で、２つのアポリポ蛋白質、特にａｐｏＢ−１００の遺伝子発現（ＡｐｏＢ−１００）を増やした。
オレイン酸塩処理／未処理のＨｅＰＧ２細胞と比較すると、ジュンサイはａｐｏＡ−１の量を常態に戻し、ＡｐｏＢ−１００遺伝子を抑えた。
【００４５】
ここで、肝臓と腸の小胞体のルーメンに局在しているミクロゾームトリグリセリド転移蛋白（ＭＴＴＰ）は、ａｐｏＢ−１００のアセンブリに必要なファクターであると確認されている。
したがって、従来から、肝臓及び／又は肝細胞からのＭＴＴＰ及びリポタンパク質分泌の関係が研究されてきた。すなわち、ＭＴＴＰ阻害剤はＴＧのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにて、ＴＧのレベルを下げる薬剤として使用されている。
図７によると、本発明の実施例において、オレイン酸塩で処理されたＨｅｐＧ２細胞と比較した場合、ジュンサイはＭＴＴＰの遺伝子発現を５１．４％低下させた。
【００４６】
（マウスの体重、及び肝臓及び脂肪組織の重量に対するジュンサイの効果）
発明者らは、ジュンサイのｉｎ ｖｉｖｏでの抗脂血剤活性を確認するために、マウスの組織重量及び血清指標に対するジュンサイの影響を調査した。
ここで、図８及び図９を参照して、高脂肪食（ＨＦＤ）が給餌されたマウスに対して、体重、内臓重量及び脂肪組織の重量、血清指標に対するジュンサイの影響を調べた結果について説明する。図８は、ＨＦＤのみを与えたコントロール群と、ジュンサイ飼料（ＨＦＤ＋ＢＳＥＴ）を与えられたジュンサイ飼料群の各測定値を示す。各測定値は平均±ＳＤ（ｎ＝６）で示す。図９は、図８のうち、効果があったデータのグラフである。
結果として、ジュンサイは体重、肝臓、腎臓及び脾臓重量に影響を及ぼさなかった。この結果を体重のグラフ図９（ａ）に示す。
しかしながら、コントロールと比較した場合、ジュンサイの経口投与は腸間膜及び精巣上体の脂肪組織（内臓脂肪）の蓄積を、それぞれ７２．２％及び７３．９％と著しく抑えた。この結果を図９（ｂ）に示す。
これらの実験結果は、ジュンサイが身体の重量への影響のない腸間膜と精巣上体の脂肪組織及び組織の蓄積を抑えることを示唆した。
また、図８の血清指標においては、ジュンサイは、ＨＦＤ食餌されたマウスで、トータル血清トリグリセリド（血中中性脂肪値）及びグルコース・レベルを、それぞれ７０．５及び１７．５％減少させた。この結果を、図９（ｃ）に示す。
さらに、ジュンサイは血清コレステロールレベル、組織や細胞の傷害を診断するための指標であるＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＧＯＴ）レベル、及び肝臓の傷害の指標であるＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＧＰＴ）レベルに影響しなかった。
【００４７】
以上のように、本実施例において、発明者らは、以前に高度に発展させたｉｎ ｖｉｔｒｏのアッセイ系を用いて、ジュンサイを含むいくつかの食用植物の抗脂血剤活性をスクリーニングした。
ジュンサイは、オレイン酸塩に刺激されたＨｅｐＧ２細胞からのＴＧ及びコレステロール放出を著しく低下させ、細胞のＴＧ及びコレステロール合成のために必要な遺伝子発現を減少させた。
更に、ジュンサイは、血清ＴＧレベルを常態にすることによりＨＦＤ飼料マウスの脂肪組織の蓄積を引き下げた。
【実施例２】
【００４８】
（ジュンサイの抗酸化活性）
次に、図１０〜１３を参照して、ジュンサイの抗酸化活性について検証した結果について説明する。
発明者らは、日研ザイル株式会社、日本老化制御研究所製の抗酸化測定キット「ＰＡＯ」を用いて、ジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性を調べた。ＰＡＯの試薬は銅イオンの還元反応（Ｃｕ＋＋ −＞ Ｃｕ＋）により、サンプルの抗酸化能を測定する試薬である。この試薬による測定値は、血清の酸化ラグタイムと高い相関性があり、食品サンプルの抗酸化能評価にも利用できる。
以下で、この実施例２の詳細について説明する。
【００４９】
（サンプル調整）
ジュンサイと、他の抗酸化活性が知られている食物材料のサンプルとして、トンブリ、ほうれん草（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ）、モロヘイヤ（Ｃｏｒｃｈｏｒｕｓ ｏｌｉｔｏｒｉｕｓ）、ネギ、コゴミの各非加熱フリーズドライの粉末（株式会社Ｈａｒｖｅｓｔｅｃｈ製）をサンプルとして用いた。また、抗酸化活性が知られているアセロラ（Ｍａｌｐｉｇｈｉａ ｇｌａｂｒａ Ｌ．）の市販飲料（「ニチレイ アセロラドリンク」、サントリーホールディングス株式会社製、２０１０年）も比較用に用いた。さらに、主に植物中に含まれるトリテルペンであり、抗菌作用を持つルペオール（ｌｕｐｅｏｌ）についてもコントロールとして用いた。
また、図１０を参照すると、コゴミについては、加熱後の粉末、非加熱のフリーズドライ粉末をそれぞれ用いた。また非加熱のフリリーズドライ粉末に関しては、異なる部位を用いてサンプル調整を行った。ここでは、葉の歪曲した先端部位を部位１、茎の地上部の中間程度を部位２、残りを部位３として、部位１と部位２とを用いて測定した。部位３は、木質で硬いため、粉末化できなかったためである。
具体的なサンプルの調整方法としては、３２ｍｇの各粉末と蒸留水１ｍＬを十分攪拌し、遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分）し、上澄みを取得した。すなわち、基準量となる１倍（×１）のサンプルは３２ｍｇ／ｍＬである。このサンプルのうち、１００μＬを１００μＬの蒸留水で希釈し、２倍希釈（×２）、４倍希釈（×４）、８倍希釈（×８）、１６倍希釈（×１６）のサンプルをそれぞれ作成した。
さらに、ルペオールに関しては、分子量４２６．７２のエタノール抽出ルペオール（１ｍＭ）を用いて、４倍希釈（×４）、１６倍希釈（×１６）、６４倍希釈（×６４）のサンプルを作成した。
アセロラ溶液については、商品原液を１倍（×１）とし、４倍希釈（×４）、８倍希釈（×８）、１６倍希釈（×１６）のサンプルをそれぞれ作成した。
【００５０】
（測定方法）
測定は、ＰＡＯキットの説明書に従って行った。測定は、サーモサイエンティフィック社製のマイクロプレートリーダー（測定波長４８０〜４９２ｎｍ）を用いて行った。
【００５１】
図１１は、ジュンサイと他のサンプルを測定した結果を示す図である。図１１では、各サンプルの希釈倍率、尿酸相当濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｃｕ還元力（μｍｏｌ／Ｌ）を示す。
ジュンサイは、他のサンプルよりも際だった抗酸化能を示した。すなわち、１６倍希釈においても、尿酸相当濃度０．８４ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｃｕ還元力１８３５μｍｏｌ／Ｌの値を示した。
【００５２】
図１２は、上述のジュンサイと他のサンプルの抗酸化活性について、希釈率とＣｕ還元力との関係を示すグラフである。
結果として、抗酸化活性の強さは以下の通りとなった。
ジュンサイ＞アセロラ＞トンブリ＞加熱コゴミ＞モロヘイヤ＞ネギ＞ほうれん草＞ルペオール
ジュンサイは、このように非常に強い抗酸化活性を示した。
なお、非常に活性の高いジュンサイ、アセロラ、トンブリを除いて抗酸化活性を評価した場合（図示せず）、十分な直線性が見られ、正しく測定ができているものと考えられる。加熱こごみの抗酸化活性は、次に高い抗酸化活性を示すモロヘイヤに比べ、２倍以上の強さを示していることが確認できた。
【００５３】
図１３は、これらのサンプルの抗酸化活性を平均値で比較したグラフである。
上述のように、ジュンサイは、他の抗酸化活性がある他の野菜・山菜等の食物材料に比べて、傑出した抗酸化活性があることが分かった。
【実施例３】
【００５４】
（ヒト臨床試験）
次に、ジュンサイ含有サプリメントの生活習慣病改善効果に関する評価試験を行った。この試験の試験分類は、安全性・有効性試験であり、試験タイプは並行群間比較試験である。
具体的には、健常人に対するジュンサイの生活習慣病改善効果を無作為割付試験により評価した。
腹囲９０ｃｍ以上のメタボリックシンドロームの傾向がある健常男性１２名が試験に参加し、全員が試験を完遂した。被験品群は被験品であるジュンサイ含有サプリメントを１日１６粒ずつ１０週間に渡って摂取し、非摂取群は通常通りの生活を１０週間続けた。
摂取前及び摂取１０週後に検査を実施し、生活習慣病改善効果及び安全性についての検討を行った。
【００５５】
（試験方法）
〈試験群〉
被験品群：ジュンサイ含有サプリメントを摂取する群
非摂取群：試験食品は摂取せず、通常通りの生活をする群
この群分けに際しては、ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール濃度及びＬＤＬコレステロールの粒子サイズが群間で均等になることを条件にした。
この上で、株式会社ユックムス製Ｅｘｃｅｌアドイン「Ｓｔａｔｌｉｇｈｔ ＃１１」を用いて、被験者を２つの群に対して無作為に割り付けた。
【００５６】
〈被験者〉
被験品群 ８名 （４１．１±７．５０歳） エントリー８名／試験完遂８名
非摂取群 ４名 （３４．８±０．５０歳） エントリー４名／試験完遂４名
【００５７】
〈被験者選定基準〉
被験者の選定に際しては、以下ａ）からｃ）を遵守し実施した。
ａ）通常生活を営んでいる年齢３０歳以上６０歳未満の健常男性
ｂ）腹囲９０ｃｍ以上
ｃ）下記の被験者除外基準に該当しない者
【００５８】
〈被験者除外基準〉
（ａ）心不全、心筋梗塞などの治療の既往歴がある者
（ｂ）疾患等による除外（心房細動、不整脈、肝障害、腎障害、脳血管障害、リウマチ、
糖尿病、脂質異常症、高血圧症、その他の慢性疾患等で治療中の者）
（ｃ）（ｂ）の疾患に関わる医薬品（漢方薬を含む）を服用している者
（ｄ）アレルギー（被験品関連食品、医薬品）がある者
（ｅ）スクリーニング検査開始時点を起点として、３ヶ月以内に他の臨床試験に参加
した者、または試験期間中に参加していた者
（ｆ）その他、試験担当医師が本試験の対象として不適当と判断した者
【００５９】
〈試験食品〉
株式会社Ｈａｒｖｅｓｔｅｃｈ製ジュンサイ含有サプリメント
用法： １日２回、朝食及び夕食後に水で摂取
１回８粒 （１６粒／日）
【００６０】
〈試験食品組成表〉
被験食品の形状：ハードカプセル
原料名：
ジュンサイ １５７．５ ｍｇ
結晶セルロース ６３．０ ｍｇ
二酸化ケイ素 ４．５ ｍｇ
１号透明豚ゼラチンカプセル ７７．０ ｍｇ
容量 ３０２．０ ｍｇ／粒
【００６１】
〈被験者管理〉
（ａ）説明事項
被験者には、事前説明会において、１）モニター試験の内容、実施方法、２）予測しうる有害事象、３）遵守事項の項目について説明した。
これらの説明を受け、試験参加に同意した者のみが試験に参加した。
また、試験参加に対する同意については文書にて記録した。
（ｂ） 遵守事項
被験者に対し、摂取期間中の遵守事項として以下の通り指導した。
１）摂取１週間前より摂取期間中は暴飲暴食を避ける。
２）摂取期間中は、それまでの食生活及び運動などの生活習慣を変えない。
３）試験期間中は、医薬品及びサプリメントの摂取を避ける。
４）検査前日は、飲酒や過度の運動を避ける。
５）検査６時間前から飲食をしない（※但し、水のみは摂取可とした）。
６）摂取期間中は試験日誌を毎日記録する。
記録項目：試験食品摂取の有無、薬物・サプリメント類の服用・摂取状況
食事及び飲酒内容、体重、歩数、体調、便通、特記事項
【００６２】
〈摂取期間〉
１０週間
【００６３】
〈検査項目〉
（ア）内科的検査
実施内容： 便通・軟便・嘔吐・嘔気・食欲不振及びその他の自覚症状の有無を問診
実施日： 全検査日
（イ）身体測定・理学検査
実施内容： 身長、体重、ＢＭＩ、腹囲、ヒップ周囲長、体脂肪率、血圧、脈拍
実施日： 身長はスクリーニング検査時のみ。その他は全検査日。
（ウ）尿検査
採取量： 約５ｍＬ
検査項目： 蛋白定性、糖定性、ウロビリノーゲン定性、ビリルビン定性、ケトン体、比重、ｐＨ、潜血、亜硝酸塩、白血球
実施日： 全検査日
（エ）抹消血液検査
採取量： 約２０ｍＬ
血液学検査：白血球数、赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット値、血小板数、ＭＣＶ（平均赤血球容積）、ＭＣＨ（平均赤血球色素量）、ＭＣＨＣ（平均赤血球色素濃度）、白血球像
血液生化学検査：ＡＳＴ（ＧＯＴ）、ＡＬＴ（ＧＰＴ）、γ−ＧＴＰ、ＡＬＰ、ＬＤ（ＬＤＨ）、ＬＡＰ、総ビリルビン、コリンエステラーゼ、ＺＴＴ、総蛋白、尿素窒素、クレアチニン、尿酸、ＣＫ、カルシウム、血清アミラーゼ、グルコース、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＴＧ（中性脂肪）、遊離脂肪酸
特殊検査１：ｓｄ−ＬＤＬ
特殊検査２：ＭＤＡ−ＬＤＬ、遊離コリン
実施日：特殊検査２のみ摂取前及び摂取１０週後、それ以外は全検査日
（オ）アンケート調査（ＶＡＳ法）
実施内容： 被験者の健康状態について、下記７項目に回答を求めた。
調査項目： お腹のでっぱり、肌の状態、胃もたれ、疲れやすさ、むくみ、肌の状態（肌荒れ）、お通じ
測定内容： Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）を用い、上記７項目について測定した。被験者は、上記８項目について想像できる最悪の状態を０（ゼロ）、最良の状態を１０として評価した。
実施日： 摂取前及び摂取１０週後
【００６４】
〈統計解析〉
血中脂質、遊離コリン、血液検査、身体測定・理学検査、ＶＡＳについて、被験品群及び非摂取群それぞれに対して、摂取前後で変化があるかどうかを検証するため、対応のあるｔ検定（ｐａｉｒｅｄ ｔ−ｔｅｓｔ）を実施した。摂取前後で変化しないという帰無仮説の検証を行い、帰無仮説が棄却された場合に有意差があるとした。
また、血中脂質、遊離コリン、血液検査、身体測定・理学検査、ＶＡＳについて、摂取前後の変化量が、被験品群と非摂取群とで異なるかどうかを検討するため、対応のないｔ検定を実施した。群間で変化量が異らないという帰無仮説の検証を行い、帰無仮説が棄却された場合に有意差があるとした。
いずれの検定においても、統計解析はＩＢＭ社製ＳＰＳＳ Ｖｅｒ．１８．０を用いて行った。有意水準を５％とし、両側検定で有意確率ｐ＜０．０５を「有意差あり」、ｐ＜０．１０を「傾向あり」と判定した。以下の図１４〜図２１の各値において、「＊」はｐ＜０．０５を、「＋」はｐ＜０．１０であることを示す。また、「＊＊」は、特に有意差が認められたｐ＜０．０１であることを示す。
【００６５】
（試験結果）
〈分析対象〉
本実施例の試験では、摂取群８名、非摂取群４名の計１２名がエントリーし、全員が試験を完遂した。
血液検査や尿検査、内科的検査の結果、及び日報の記述を考慮したところ、試験参加者として不適当な者や試験を真面目に受けなかった者は認められなかった。
そこで、全ての試験参加者を分析の対象とした。
【００６６】
〈血中脂質詳細検査〉
図１４〜図１７を参照して、血中脂質詳細検査である「特殊検査１」検査について説明する。ここでは、摂取前及び摂取１０週後の、被験品群の摂取前後の検査結果、被験品群及び非摂取群の摂取前後の変化率について説明する。
図１４は、被験品群の脂質４分画の検査結果を示す図である。図１４の脂質４分画において、摂取前後で有意な変化が認められたのは、ＬＤＬ中性脂肪濃度 （ｐ＝０．００４＊＊）およびＬＤＬ粒子サイズ （ｐ＝０．００４＊＊）であった。また、ＶＬＤＬコレステロール濃度（ｐ＝０．０８９＋）、ＶＬＤＬの粒子サイズ（ｐ＝０．０９６＋）であった。各検査項目の平均値は、ＶＬＤＬコレステロール濃度において２２．２％の上昇（３３．９ｍｇ／ｄＬから４１．５ｍｇ／ｄＬ）、ＬＤＬ中性脂肪濃度において２３．２％の低下（３０．６ｍｇ／ｄＬから２３．５ｍｇ／ｄＬ）、ＬＤＬの粒子サイズにおいて１．２％の上昇（２５．１ｎｍから２５．４ｎｍ）、ＶＬＤＬの粒子サイズにおいて７．３％の上昇（４４．３ｎｍから４７．５ｎｍ）であった。このように、ＬＤＬの粒子サイズが摂取前後で有意に上昇した。
図１５は、脂質４分画の変化率の結果を示す図である。図１５の脂質４分画において、ＬＤＬ粒子サイズに有意差が認められた（ｐ＝０．０１２＊）。すなわち、非摂取群と比較して、被験品群の変化率が大きかった。被験品群は１．２％の上昇、非摂取群は−０．１％の低下であった。
図１６は、コレステロール２０分画の結果を示す図である。コレステロール２０分画においては、ｓｄ ＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏに群間の有意差が認められ（ｐ＝０．０４３＊）、被験品群は非摂取群よりも大きく減少した。被験品群は１１．１％の減少、非摂取群は４．５％の減少であった。
図１７は、中性脂肪２０分画の結果を示す図である。中性脂肪２０分画においては、いずれの項目において群間に有意差は認められなかった。また、Ｇ１１分画ＴＧにおいて両群の間に傾向差が認められ （ｐ＝０．０５７＋）、被験品群は非摂取群と比較して大きく減少した。被験品群では５３．４％の減少、非摂取群は３８．３％の減少であった。
【００６７】
〈ＭＤＡ−ＬＤＬ・遊離コリンの検査〉
次に、図１８を参照して、血中脂質詳細検査である「特殊検査２」検査について説明する。この検査では、摂取前及び摂取１０週後において、被験品群及び非摂取群のＭＤＡ−ＬＤＬ及び遊離コリンの摂取前からの変化率を調べた。
図１８に示したように、いずれの項目においても、被験品群と非摂取群との間に有意差は認められなかった。
【００６８】
〈抹消血液検査〉
次に、図１９を参照して、抹消血液検査の被験品群及び非摂取群の血液検査の各項目における摂取前から摂取１０週後までの変化量について説明する。
図１９によると、ＬＤ（ＬＤＨ）において、被験品群と非摂取群との間に有意差が認められ（ｐ＝０．０２１＊）、非摂取群は被験品群と比較して値が大きく低下した。
また、白血球像（好中球数）において、被験品群と非摂取群との間に傾向差が認められ（ｐ＝０．０５１＋）、被験品群では増加したが、非摂取群では低下した。
【００６９】
〈身体測定・理学検査〉
次に、図２０を参照して、被験品群及び非摂取群の身体測定・理学検査の測定値における摂取前から摂取１０週後にかけての変化量について説明する。
図２０で示したように、ヒップ周囲長において両群の間に有意差が認められた（ｐ＝０．０４３＊）。
被験品群では平均値が０．２ｃｍ増加したが、非摂取群では１．０ｃｍ減少した。
【００７０】
〈ＶＡＳ〉
次に、図２１を参照して、被験品群及び非摂取群のＶＡＳ得点の摂取前から摂取１０週後にかけての変化量について説明する。
図２１によると、むくみにおいて両群の間に有意差が認められ（ｐ＝０．０４９＊）、被験品群の方が値の上昇量が大きかった。また、お通じにおいて両群の間に傾向差が認められ（ｐ＝０．０６２＋）、被験品群の方が値の上昇量が大きかった。
【００７１】
〈尿検査〉
摂取前検査終了直後、及び摂取１０週後検査終了直後に、先述した血液検査の結果と共に試験責任医師に提出し診断を求めた。
それによると、試験参加に問題のある者、及び被験食品が原因で重篤な体調の変化が生じた者は認められなかった。
【００７２】
〈内科的検査〉
被験食品の摂取によって重篤な体調の変化が生じたと考えられる者は認められなかった。
【００７３】
〈試験日誌〉
起床時の体重、１日の総歩数、食事によって摂取したカロリー、サプリメントの摂取数、排便回数の５項目について、毎日記録させた。
被験品群における摂取率は９９．４％であった。摂取期間中の平均体重は、被験品群において８３．１ｋｇ、非摂取群において８６．０ｋｇであった。１日当たりの歩数の平均値は、被験品群において９２１３．３歩、非摂取群において１０２１４．６歩であった。１日当たりの食事による摂取カロリーの平均値は、被験品群において１９８４．０ｋｃａｌ、非摂取群において１９６４．５ｋｃａｌであった。１日当たりの排便回数の平均値は、被験品群においては１．２７回、非摂取群においては１．３０回であった。また、歩数１００歩当たりの消費カロリーを３ｋｃａｌとし、１日あたりの歩行による消費カロリーの平均値を求めたところ、被験品群の消費カロリーは２７６．４ｋｃａｌ、非摂取群は３０６．４ｋｃａｌであった。
【００７４】
〈被験者の声〉
被験品群の被験者からは、以下のようなコメントが得られた。
・始めた当初は疲れ気味だったが、疲れが軽減された。
※夏バテだったからかもしれないとの但書あり。
・週休が２日から１日に減ったが、体が軽くなり、ズボンが緩くなってきた。
・一時的に体重が１ｋｇほど減少した。
・最初は量が多くて飲みづらかったが、次第に慣れた。
【００７５】
以上のように、本実施例の試験では、秋田県産ジュンサイ含有サプリメントを摂取することによる、生活習慣病の改善効果の評価を行った。
生活習慣病改善効果を検証するために、血中脂質の分画検査を行った。その結果、被験品群において、Ｇ１１分画Ｃｈｏ、Ｇ１２分画Ｃｈｏ、Ｇ１３分画Ｃｈｏ及びＧ１０−１３分画Ｃｈｏ（ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール、ｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ）が有意に低下し、ｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏ（全ＬＤＬコレステロールに占めるｓｄＬＤＬの割合）も有意に低下した。非摂取群においてはこれらの有意な変化は認められず、Ｇ１３分画Ｃｈｏ及びｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏが低下する傾向を示したのみに留まった。
被験品群と非摂取群とでｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ／ＬＤＬ−Ｃｈｏの低減率を比較したところ、被験品群の低減率が非摂取群よりも有意に大きかった。また、Ｇ１３分画Ｃｈｏについても、有意ではないものの、低減率は被験品群の方が大きかった。
以上をまとめると、被験品群において摂取１０週後にｓｄＬＤＬ濃度が低下したこと、及び全ＬＤＬコレステロールに占めるｓｄＬＤＬコレステロールの割合（ｓｄＬＤＬコレステロール値）の低下率が、非摂取群よりも被験品群において大きかった。
本試験の被験品群において、ｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏの濃度が低下したが、ＬＤＬコレステロール濃度は変化しなかった。このことから、本試験で観察されたｓｄＬＤＬ−Ｃｈｏ低減のメカニズムは、血中コレステロールの総量の低下によるものではなく、ＬＤＬコレステロールの質的変化によるものであると考えられる。すなわち、ＬＤＬの粒子サイズが全体的に大きくなったために、ｓｄＬＤＬに分類されるコレステロール粒子の割合が少なくなったと推測できる。
これは、ＬＤＬの粒子サイズの平均値が被験品群においてのみ上昇していること、及び、その変化率に群間で有意差が認められたことからも裏付けられる。
【００７６】
図２２を参照して、ＬＤＬコレステロールと循環器系疾患のリスクについて説明する。
図２２は、被験品群の被験者（ジュンサイ区）と、非摂取群の被験者（コントロール区）のＬＤＬ粒子サイズ減少量（縦軸）と、ｓｄＬＤＬコレステロールの増加量（横軸、超悪玉コレステロール増加量）をプロットした図である。
上述したように、ｓｄＬＤＬコレステロールは、心筋梗塞や脳卒中等、血管と関連のある生活習慣病の危険性を高めることが知られており、「超悪玉コレステロール」とも呼ばれる。
ｓｄＬＤＬコレステロールは通常サイズのＬＤＬコレステロールよりも血中滞在時間が長く、血管内皮と長時間接触する（例えば、平野勉、「リポ蛋白から動脈硬化との関連を探る」、Ｌｉｆｅ Ｓｔｙｌｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００８、、２、４、ｐ．３２３−３２９、及び．平野勉、「ＴＧと動脈硬化．診断と診療」、２００８、Ｌｉｆｅ Ｓｔｙｌｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、９６、７、ｐ．１２２５−１２３１、を参照）。また、ｓｄＬＤＬは酸化を防止する物質に乏しいため、酸化されやすい。これらの結果として、動脈硬化を引き起こしやすくなると考えられている。
つまり、図２２においては、ＬＤＬ粒子サイズが増え、ｓｄＬＤＬコレステロールが増加すると、動脈硬化のリスクが増大する。逆に、ＬＤＬ粒子サイズが相対的に減らず、ｓｄＬＤＬコレステロールが減少すると、動脈硬化のリスクが軽減されると考えられる。
すなわち、被験品群においては、ＬＤＬ粒子サイズの減少値が低下し、ｓｄＬＤＬコレステロール値が有意に低下した。
このことから、ジュンサイ含有サプリメントは、動脈硬化をはじめとする生活習慣病を予防する効果が得られる。
【００７７】
なお、血液生化学検査の血中脂質と関連した項目には有意差は認められなかった。しかしながら、被験品群では中性脂肪濃度が摂取前と比較して３．２％低下したのに対して、非摂取群では１５．３％上昇した。
両群の変化量に有意差がなく、非摂取群の人数が少ないものの、本試験の結果からジュンサイ含有サプリメントは、中性脂肪量の上昇を抑制する効果があると推測される。
また、ヒップの大きさに有意差が認められたことで、皮下脂肪・内臓脂肪のうち、特定の部位の脂肪を燃焼させることが期待できる。
【００７８】
また、試験日誌の記録を集計し、分析したところ、両群共に１日当たり概ね１万歩近く歩いており、摂取カロリーも２０００ｋｃａｌ程度と、比較的健康な生活を送っていたのではないかと思われる。統計的な有意差は認められなかったが、被験品群は非摂取群よりも歩数や歩行による消費カロリーが少なく、摂取期間の８週目以降においては食事や飲酒による摂取カロリーが多い傾向にあった。
すなわち、被験品群は非摂取群と比較すると、脂肪低減や生活習慣改善には不利な生活を送っていた。それにもかかわらず、被験品群においてｓｄＬＤＬコレステロール値（濃度）が低下したことや、中性脂肪濃度の上昇を抑制したことは、本実施例のジュンサイ含有サプリメントの生活習慣病改善効果を考慮する上で注目に値する。ジュンサイ含有サプリメントは、ある程度の範囲であれば、不摂生な生活を補う効果が期待できる。
【００７９】
また、身体測定・理学検査の結果、被験品群において体脂肪率や拡張期血圧が上昇した。
しかしながら、これは季節性の変動であると考えられる。また、上昇幅も体脂肪率において１．４％、拡張期血圧においては６．２ｍｍＨｇであり、いずれも重篤なものではないと考えられる。
加えて、血液検査の結果、いくつかの項目において変化が認められたが、いずれも基準値内の変動であった。また、尿検査の結果と併せて試験責任医師の診断を求めたところ、特に問題のある被験者は認められなかった。少なくとも本試験の使用条件下においては、ジュンサイ含有サプリメントは安全であったと考えられる。
また、血中遊離コリンによる肝機能の評価も行ったところ、こちらも変化がなかったため、ジュンサイ含有サプリメントは肝臓障害を引き起こさない。
【００８０】
以上をまとめると、実施例３において、腹囲やＢＭＩ等の身体検査、血算や生化学項目の血液検査等の主要項目の評価により生活習慣病改善効果について検証した。特に、動脈硬化惹起性リポタンパク質であるｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ （ｓｄＬＤＬ）の増減に伴うＬＤＬの質的変化があることが分かった。
本実施例に係るジュンサイ含有サプリメントの生活習慣病改善効果として、超悪玉コレステロールであるｓｄＬＤＬコレステロール濃度が低下し、ＬＤＬの粒子サイズの平均値が大型化した。
よって、本実施例に係るジュンサイ含有サプリメントが、動脈硬化や心筋梗塞など、ｓｄＬＤＬコレステロールによってリスクが高まるとされる疾病への予防効果を持つ可能性が示唆された。
なお、本実施例では、ジュンサイのフリーズドライ粉末を用いた。しかしながら、上述の実施例１のｉｎ ｖｉｔｒｏ実験で示したように、ジュンサイのエキスを用いることで、よりＴＧ、コレステロール低下の効果を高めることができる。この際に、効果の高いポリフェノール等の成分のみを抽出する抽出方法を用いることができる。
【００８１】
なお、上記実施の形態の構成及び動作は例であって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で適宜変更して実行することができることは言うまでもない。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明の脂質代謝改善剤は、ｓｄＬＤＬコレステロールを低下させ生活習慣病改善効果があるジュンサイ含有サプリメント等として提供可能であり、産業上に利用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を加工してなる
ことを特徴とする脂質代謝改善剤。
【請求項２】
血中中性脂肪値を低下させる
ことを特徴とする請求項１に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項３】
ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール値を低下させる
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項４】
全ＬＤＬに占めるｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの割合を低下させる
ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項５】
前記ＬＤＬの粒子サイズを増加させる
ことを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項６】
脂肪酸合成系及びコレステロール合成系の脂質代謝関連遺伝子の発現を低下させる
ことを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項７】
前記ジュンサイは、乾燥加工された植物体である
ことを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項８】
前記ジュンサイは、水又は有機溶媒にて抽出されたエキスである
ことを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項９】
前記有機溶媒がエタノールである
ことを特徴とする請求項８に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項１１】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする食品添加物。
【請求項１２】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする抗酸化剤。
【請求項１３】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする医薬。
【請求項１４】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする動脈硬化予防・改善剤。
【請求項１５】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする香粧品。
【請求項１６】
ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を水又は有機溶媒にて抽出する
ことを特徴とする脂質代謝改善剤の製造方法。
【請求項１７】
ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を乾燥加工する
ことを特徴とする脂質代謝改善剤の製造方法。
【請求項１】
ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を加工してなる
ことを特徴とする脂質代謝改善剤。
【請求項２】
血中中性脂肪値を低下させる
ことを特徴とする請求項１に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項３】
ｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬコレステロール値を低下させる
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項４】
全ＬＤＬに占めるｓｍａｌｌ， ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの割合を低下させる
ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項５】
前記ＬＤＬの粒子サイズを増加させる
ことを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項６】
脂肪酸合成系及びコレステロール合成系の脂質代謝関連遺伝子の発現を低下させる
ことを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項７】
前記ジュンサイは、乾燥加工された植物体である
ことを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項８】
前記ジュンサイは、水又は有機溶媒にて抽出されたエキスである
ことを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項９】
前記有機溶媒がエタノールである
ことを特徴とする請求項８に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項１１】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする食品添加物。
【請求項１２】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする抗酸化剤。
【請求項１３】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする医薬。
【請求項１４】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする動脈硬化予防・改善剤。
【請求項１５】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の脂質代謝改善剤を含む
ことを特徴とする香粧品。
【請求項１６】
ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を水又は有機溶媒にて抽出する
ことを特徴とする脂質代謝改善剤の製造方法。
【請求項１７】
ジュンサイ（Ｂｒａｓｅｎｉａ ｓｃｈｒｅｂｅｒｉ）を乾燥加工する
ことを特徴とする脂質代謝改善剤の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【公開番号】特開２０１２−１６７０６９（Ｐ２０１２−１６７０６９Ａ）
【公開日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−３０１６６（Ｐ２０１１−３０１６６）
【出願日】平成２３年２月１５日（２０１１．２．１５）
【出願人】（５１１０４０９６４）株式会社Ｈａｒｖｅｓｔｅｃｈ (1)
【出願人】（５９１１０８１７８）秋田県 (126)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年２月１５日（２０１１．２．１５）
【出願人】（５１１０４０９６４）株式会社Ｈａｒｖｅｓｔｅｃｈ (1)
【出願人】（５９１１０８１７８）秋田県 (126)
【Ｆターム（参考）】
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