脳卒中を処置する方法
【課題】脳卒中を処置するための方法及び組成物の提供。
【解決手段】脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法。また、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。さらに、被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷（ＳＣＩ）、虚血・再灌流損傷を処置する方法としても、これらＶＬＡ−１アンタゴニスト、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片の投与が有用。
【解決手段】脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法。また、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。さらに、被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷（ＳＣＩ）、虚血・再灌流損傷を処置する方法としても、これらＶＬＡ−１アンタゴニスト、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片の投与が有用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年５月２５日に出願され、その全体が本明細書中に参考として援用される米国仮特許出願第６０／８０９，１４９号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
脳卒中は世界中で死亡及び身体障害の主要原因である。本年、約７００，０００人のアメリカ人が脳卒中を有することになる。米国では脳卒中は３番目に頻度が高い死亡原因であり、長期的な重度身体障害の主要原因である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、ある程度、虚血障害、例えば、脳卒中を処置するのにＶＬＡ−１の調節を用いることができるという所見に基づく。従って、本発明は、一態様では被験体における脳卒中を処置する方法を提供する。該方法は、脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。「ＶＬＡ−１アンタゴニスト」とは、ＶＬＡ−１の相互作用又は活性を少なくともある程度阻害する薬剤（例えば、任意の化合物）を指す。例えば、該薬剤はＶＬＡ−１の活性（例えば、ＶＬＡ−１のリガンド、例えば、コラーゲンへの結合）を少なくともある程度阻害し、或いは該薬剤はＶＬＡ−１をコードする核酸を少なくともある程度阻害し、例えば、ＶＬＡ−１蛋白質の発現を低下させる。一実施形態では、該薬剤はＶＬＡ−１がコラーゲン、例えば、コラーゲンＩＶに結合する能力を低下させ、該薬剤の非存在下での結合と比べて、例えば、少なくとも２，３，５，１０，２０，５０又は１００倍、ＶＬＡ−１／コラーゲン結合の親和性を低下させ、且つ／或いは少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％，２５％，５０％，７５％，９０％，９５％又はそれ以上、ＶＬＡ−１／コラーゲン結合を低下させる。
【０００４】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である。該抗ＶＬＡ−１抗体はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片でよい。該抗ＶＬＡ−１抗体は、完全長でよく（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＭ，ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１，ＩｇＡ２），ＩｇＤ及びＩｇＥ）、或いは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）２又はｓｃＦｖ断片又は１つ若しくはそれ以上のＣＤＲ）のみを含んでもよい。抗体又はその抗原結合断片は、２本の重鎖の免疫グロブリン及び２本の軽鎖の免疫グロブリンを含んでよく、或いは１本鎖抗体でよい。該抗体は任意に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン又はミュー定常領域遺伝子を含んでもよい。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は実質的にヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域又はその一部分を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はヒト抗体である。
【０００５】
他の実施形態では、該抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化抗体である。本明細書で論じるように、該抗体は、ＣＤＲ移植又はヒト化、或いはより一般的には、非ヒト抗体由来のＣＤＲ及びヒトにおいてより免疫原性が低く、例えば、マウスＣＤＲが天然で生じるマウスフレームワークより抗原性が低いものとして選択されるフレームワークを有する抗体でよい。
【０００６】
好ましい実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、非天然抗体、例えば、非ヒト抗体、例えば、本明細書で述べる非ヒト抗体由来の、少なくとも重鎖ＣＤＲ３、好ましくは全重鎖ＣＤＲ、更に好ましくは全３本の重鎖ＣＤＲ及び全３本の軽鎖ＣＤＲを有する、キメラ、ＣＤＲ移植又はヒト化抗体である。好ましい実施形態では、該ＣＤＲは本明細書で言及されるＣＤＲと１，２又は３個のアミノ酸残基が異なってよく、例えば、重鎖ＣＤＲ３は本明細書で述べる供給源由来でよいが、その他の別のＣＤＲは本明細書で述べるように異なってよい。
【０００７】
好ましい抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、ヒト化ＡＱＣ２抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される）、ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６）、ｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）及びモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と同じエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はＶＬＡ−１への結合に対し、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と競合する。
【０００８】
一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＶＬＡ−１のα１サブユニット、例えば、ＶＬＡ−１のα１−Ｉドメインに結合する。
【０００９】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、ラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ或いは本明細書で述べるラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドである。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、α１サブユニットの断片、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は保存的アミノ酸置換を有する同様のアミノ酸配列を含むα１−Ｉドメインの断片である。ラミニン、コラーゲン又はＶＬＡ−１ペプチドは、例えば、本明細書で述べるように、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力によって試験されるように、ＶＬＡ−１機能を阻止する。
【００１０】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１核酸、例えば、２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、アンチセンス分子、リボザイム、三重らせん分子、アプタマー若しくはそれらの任意の組合せの発現又は翻訳のインヒビターである。
【００１１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、本明細書で述べる小分子（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学物質）又は化学物質、例えば、有機小分子である。
【００１２】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳内神経組織における虚血損傷を低減するほどの量及び／又は時間にて投与されうる。
【００１３】
典型的には、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、サル、ウサギ又は農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、被験体は、ヒト、例えば、ヒト男性又は女性である。該被験体は少なくとも１８，２５，３０，４５，５０，５５，６０又は７０歳でよい。
【００１４】
一実施形態では、被験体は脳卒中を起こしている。脳卒中は、出血性脳卒中、虚血性脳卒中又は一過性虚血発作（ＴＩＡ）でありうる。
【００１５】
一実施形態では、被験体は処置の４８時間以内、例えば、２，３，５，８，１２，２０又は３０時間以内に脳卒中を起こしている。別の実施形態では、被験体は、処置の４８時間以上前であるが、直近の３又は２週間以内に脳卒中を起こしている。
【００１６】
別の実施形態では、被験体は脳卒中のリスクがあり、例えば、脳卒中のリスクを生じさせる病状を起こし続けており、或いは起こしている。そのような病状の例には、高血圧；喫煙；糖尿病；頸動脈又は他の動脈疾患；末梢動脈疾患；心房細動；他の心疾患；一過性虚血発作（ＴＩＡ）；一部の血液障害（例えば、赤血球数増加；鎌状赤血球病）；高血中コレステロール；運動不足及び肥満；過度の飲酒；一部の違法薬物；脳卒中の既往；或いは心臓発作の既往が含まれる。
【００１７】
一実施形態では、被験体は、１つ又はそれ以上の以下の症状：突発性の顔面のしびれ又は脱力、突発性の腕のしびれ又は脱力；突発性の脚のしびれ又は脱力；突発性の意識混濁；突発性の発話困難；突発性の理解困難；突発性の片目又は両目での視覚困難；突発性の歩行困難；突発性眩暈；突発性の平衡感覚又は協調運動障害；突発的で重度の原因不明の頭痛を示す。一部の実施形態では、被験体は脳卒中を持続していると診断されている。
【００１８】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、未処置被験体における梗塞サイズに対し、脳内神経組織における梗塞のサイズを、例えば、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上縮小させるほどの量にて投与される。梗塞サイズを縮小させるほどの量は、例えば、本明細書で述べるように、動物モデルを用いて評価することができる。
【００１９】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１つ又はそれ以上の脳卒中評価基準、例えば、本明細書で述べる基準又は尺度における症状を、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上或いは尺度でのハーフステップ又はフルステップ分、改善するほどの量にて投与される。例えば、修正ランキンスケールスコアは、少なくとも１ステップ、例えば、少なくとも２，３又は４ステップ分、低下させることができ、且つ／或いは該スコアは、例えば、４，３，２，１又は０に低下させることができる。ＮＩＨＳＳスコアは、少なくとも１ステップ、例えば、少なくとも２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１２，１４，１６，１８，２０ステップ分又はそれ以上、低下させることができ、且つ／或いは該スコアは、例えば、１５，１３，１２，１０，９，８，７，６，５，４，３，２，１又は０に低下させることができる。バーセル指数スコアは、少なくとも５ステップ、例えば、少なくとも１０，１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，５０，５５，６０ステップ分又はそれ以上、上昇させることができ、且つ／或いは該スコアは、例えば、５０，６０，７０，７５，８０，８５，９０，９５又は１００に上昇させることができる。
【００２０】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１日あたり０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．３〜３ｍｇ／ｋｇの用量にて投与される。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中後１４日間以内に少なくとも２回、例えば、脳卒中後１４日間以内に少なくとも３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３又は１４回投与される。該アンタゴニストは、例えば、１日１回、隔日１回、週２回、週１回又は１日１回で１日、例えば、２，３，４，５，６，７，１４若しくは２８日間、投与することができる。該ＶＬＡ−１アンタゴニストは静脈内又は非経口投与することができる。
【００２１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中処置と併用して投与される。例えば、該処置は、脳卒中を有し、或いは脳卒中のリスクがある被験体に治療上の利益を付与する第二の薬剤投与を含む。例示的な第二の薬剤は、例えば、血栓溶解剤（例えば、ストレプトキナーゼ、アシル化プラスミノーゲン・ストレプトキナーゼ活性化因子複合体（ＡＰＳＡＣ）、ウロキナーゼ、１本鎖ウロキナーゼ・プラスミノーゲン活性化因子（ｓｃｕ−ＰＡ）、抗炎症剤、蛇毒由来トロンビン様酵素、例えば、アンクロド、トロンビン阻害剤、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）及び上記各々の生物活性変異体）；抗凝固剤（例えば、ワルファリン又はヘパリン）；抗血小板薬（例えば、アスピリン）；糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤；グリコサミノグリカン；クマリン；ＧＣＳＦ；メラトニン；アポトーシス阻害剤（例えば、カスパーゼ阻害剤）；抗酸化剤（例えば、ＮＸＹ−０５９）；及び神経保護剤（例えば、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬又はカンナビノイド拮抗薬）を含む。
【００２２】
好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストと該第二の薬剤は同時に投与される。好ましい実施形態では、最初に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与され、次に該第二の薬剤が投与される。好ましい実施形態では、最初に該第二の薬剤が投与され、次に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与される。
【００２３】
本明細書で用いられるように、「併用投与される」とは、２つ又はそれ以上の薬剤（例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストと第二の薬剤）が、各薬剤の被験体に対する重なり効果が生じるように、同時或いは一定間隔以内に被験体に投与されるということである。組合せ効果が得られるように、第一の薬剤と第二の薬剤の投与は十分に近接して間隔を置くことが好ましい。その間隔は、数時間、数日又は数週間の間隔でよい。一般的に、該薬剤は被験体において同時に生物学的に利用可能であり、例えば、検出可能である。好ましい実施形態では、該薬剤の１つ、例えば、第一の薬剤の少なくとも１回の投与が行われ、その間、他方の薬剤、例えば、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは被験体において治療レベルにて未だ存在する。
【００２４】
一実施形態では、該方法は、脳卒中後基準、例えば、本明細書で述べる脳卒中評価基準又は尺度で被験体を評価するステップも含む。一部の実施形態では、その評価は該ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与後少なくとも１時間、例えば、少なくとも２，４，６，８，１２，２４若しくは４８時間又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間若しくはそれ以上の週間にて行われる。１つ又はそれ以上の下記の期間すなわち：処置開始前；処置中；又は１つ若しくはそれ以上の処置要素がなされた後に、被験体を評価することができる。評価には、同一のＶＬＡ−１アンタゴニストによる更なる処置又は追加薬剤による追加処置の必要性の評価が含まれうる。好ましい実施形態では、事前に選択された評価結果が得られる場合、追加ステップがとられ、例えば、被験体は別の処置を施行され、或いは別の評価又は試験が行われる。
【００２５】
別の実施形態では、該方法は、脳卒中（例えば、虚血性脳卒中、出血性脳卒中又は一過性虚血発作）を有する又は脳卒中の症状を有する被験体を特定するステップを更に含む。
【００２６】
一態様では、本開示内容は被験体を処置する方法を特徴とし、該方法は、（ａ）被験体が虚血、例えば、脳卒中後虚血を有するかを判定するステップ；（ｂ）虚血を生じさせる脳卒中又は他の事象が事前に選択された時間、例えば、本明細書で述べる時間内であるかを判定するステップ；並びに（ａ）及び（ｂ）が満たされる場合、虚血を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。
【００２７】
一態様では、本開示内容は、脳卒中、例えば、本明細書で述べるような脳卒中を処置するのに用いるＶＬＡ−１アンタゴニストを特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。別の態様では、本開示内容は、脳卒中、例えば、本明細書で述べるような脳卒中を処置するための薬剤の製造のためのＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。
【００２８】
一態様では、本開示内容は、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体及び脳卒中を処置する際の該アンタゴニストの使用のための取扱説明書が付いたラベルを含む容器を特徴とする。
【００２９】
一態様では、本開示内容は、被験体における虚血損傷、例えば、本明細書で述べる虚血損傷を処置する方法を特徴とし、該方法は、虚血損傷を処置するのに有効な量にて、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べる抗ＶＬＡ−１抗体を被験体に投与するステップを含む。別の態様では、本開示内容は、被験体における虚血・再灌流損傷を処置する方法を特徴とし、該方法は、虚血・再灌流損傷を処置するのに有効な量にて、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べる抗ＶＬＡ−１抗体を被験体に投与するステップを含む。
【００３０】
別の態様では、本開示内容は被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法を特徴とする。該方法は、ＴＢＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。
【００３１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である。該抗ＶＬＡ−１抗体はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片でよい。該抗ＶＬＡ−１抗体は、完全長でよく（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＭ，ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１，ＩｇＡ２），ＩｇＤ及びＩｇＥ）、或いは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）２又はｓｃＦｖ断片又は１つ若しくはそれ以上のＣＤＲ）のみを含んでもよい。抗体又はその抗原結合断片は、２本の重鎖の免疫グロブリン及び２本の軽鎖の免疫グロブリンを含んでよく、或いは１本鎖抗体でよい。該抗体は任意に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン又はミュー定常領域遺伝子を含んでもよい。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は実質的にヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域又はその一部分を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はヒト抗体である。
【００３２】
他の実施形態では、該抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化抗体である。本明細書で論じるように、該抗体は、ＣＤＲ移植、ヒト化、或いはより一般的には、非ヒト抗体由来のＣＤＲ及びヒトにおいてより免疫原性が低く、例えば、マウスＣＤＲが天然で生じるマウスフレームワークより抗原性が低いものとして選択されるフレームワークを有する抗体でよい。
【００３３】
好ましい実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、非天然抗体、例えば、非ヒト抗体、例えば、本明細書で述べる非ヒト抗体由来の、少なくとも重鎖ＣＤＲ３、好ましくは全重鎖ＣＤＲ、更に好ましくは全３本の重鎖ＣＤＲ及び全３本の軽鎖ＣＤＲを有する、キメラ、ＣＤＲ移植又はヒト化抗体である。好ましい実施形態では、該ＣＤＲは本明細書で言及されるＣＤＲと１，２又は３個のアミノ酸残基が異なってよく、例えば、重鎖ＣＤＲ３は本明細書で述べる供給源由来でよいが、その他の別のＣＤＲは本明細書で述べるように異なってよい。
【００３４】
好ましい抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、ヒト化ＡＱＣ２抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される）、ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６）、ｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）及びモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と同じエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はＶＬＡ−１への結合に対し、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と競合する。
【００３５】
一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＶＬＡ−１のα１サブユニット、例えば、ＶＬＡ−１のα１−Ｉドメインに結合する。
【００３６】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、ラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ或いは本明細書で述べるラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドである。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、α１サブユニットの断片、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は保存的アミノ酸置換を有する同様のアミノ酸配列を含むα１−Ｉドメインの断片である。ラミニン、コラーゲン又はＶＬＡ−１ペプチドは、例えば、本明細書で述べるように、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力によって試験されるように、ＶＬＡ−１機能を阻止する。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１核酸、例えば、２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、アンチセンス分子、リボザイム、三重らせん分子、アプタマー若しくはそれらの任意の組合せの発現又は翻訳のインヒビターである。
【００３７】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、本明細書で述べる小分子（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学物質）又は化学物質、例えば、有機小分子である。
【００３８】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＴＢＩを処置し、例えば、治療、治癒、緩和、軽減、変質、是正、好転、改善し、或いはＴＢＩ、例えば本明細書で述べるＴＢＩの１以上の症状に作用するほどの量及び／又は時間にて投与されうる。
【００３９】
典型的には、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、サル、ウサギ又は農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、被験体は、ヒト、例えば、ヒト男性又は女性である。該被験体は少なくとも１８，２５，３０，４５，５０，５５，６０又は７０歳でよい。
【００４０】
ＴＢＩは、例えば、挫傷、打撲傷、裂傷又は血腫でありうる。一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは一次性ＴＢＩを処置するために投与される。一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは二次性ＴＢＩを処置或いは予防するために投与される。
【００４１】
一実施形態では、被験体は処置の４８時間以内、例えば、２，３，５，８，１２，２０又は３０時間以内にＴＢＩを被っている。別の実施形態では、被験体は、処置の４８時間以上前であるが、直近の３又は２週間以内にＴＢＩを被っている。
【００４２】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１つ又はそれ以上のＴＢＩ評価基準、例えば、本明細書で述べる基準にて、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上、症状を改善するほどの量にて投与される。
【００４３】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１日あたり０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．３〜３ｍｇ／ｋｇの用量にて投与される。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中後１４日間以内に少なくとも２回、例えば、脳卒中後１４日間以内に少なくとも３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３又は１４回投与される。該アンタゴニストは、例えば、１日１回、隔日１回、週２回、週１回又は１日１回で１日、例えば、２，３，４，５，６，７，１４若しくは２８日間、投与することができる。該ＶＬＡ−１アンタゴニストは静脈内又は非経口投与することができる。
【００４４】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストはＴＢＩ処置と併用して投与される。例えば、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、他の損傷及び感染のための手術及び／又は処置と併用して投与することができる。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストと第二の薬剤は同時に投与される。好ましい実施形態では、最初に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与され、次に第二の薬剤が投与される。好ましい実施形態では、最初に第二の薬剤が投与され、次に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与される。
【００４５】
一実施形態では、該方法は本明細書で述べるＴＢＩ基準で被験体を評価するステップも含む。一部の実施形態では、その評価は該ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与後少なくとも１時間、例えば、少なくとも２，４，６，８，１２，２４若しくは４８時間又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間若しくはそれ以上の週間にて行われる。１つ又はそれ以上の下記の期間すなわち：処置開始前；処置中；又は１つ若しくはそれ以上の処置要素がなされた後に被験体を評価することができる。評価には、同一のＶＬＡ−１アンタゴニストによる更なる処置又は追加薬剤による追加処置の必要性の評価が含まれうる。好ましい実施形態では、事前に選択された評価結果が得られる場合、追加ステップがとられ、例えば、被験体は別の処置を施行され、或いは別の評価又は試験が行われる。
【００４６】
一態様では、本開示内容は、ＴＢＩ、例えば、本明細書で述べるようなＴＢＩを処置するのに用いるＶＬＡ−１アンタゴニストを特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。別の態様では、本開示内容は、ＴＢＩ、例えば、本明細書で述べるようなＴＢＩを処置するための薬剤の製造のためのＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。
【００４７】
一態様では、本開示内容は、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体及びＴＢＩを処置する際の該アンタゴニストの使用のための取扱説明書が付いたラベルを含む容器を特徴とする。
【００４８】
別の態様では、本開示内容は被験体における脊髄損傷（ＳＣＩ）を処置する方法を特徴とする。該方法は、ＳＣＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。
【００４９】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である。該抗ＶＬＡ−１抗体はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片でよい。該抗ＶＬＡ−１抗体は、完全長でよく（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＭ，ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１，ＩｇＡ２），ＩｇＤ及びＩｇＥ）、或いは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）２又はｓｃＦｖ断片又は１つ若しくはそれ以上のＣＤＲ）のみを含んでもよい。抗体又はその抗原結合断片は、２本の重鎖の免疫グロブリン及び２本の軽鎖の免疫グロブリンを含んでよく、或いは１本鎖抗体でよい。該抗体は任意に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン又はミュー定常領域遺伝子を含んでもよい。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は実質的にヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域又はその一部分を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はヒト抗体である。
【００５０】
他の実施形態では、該抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化抗体である。本明細書で論じるように、該抗体は、ＣＤＲ移植、ヒト化、或いはより一般的には、非ヒト抗体由来のＣＤＲ及びヒトにおいてより免疫原性が低く、例えば、マウスＣＤＲが天然で生じるマウスフレームワークより抗原性が低いものとして選択されるフレームワークを有する抗体でよい。
【００５１】
好ましい実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、非天然抗体、例えば、非ヒト抗体、例えば、本明細書で述べる非ヒト抗体由来の、少なくとも重鎖ＣＤＲ３、好ましくは全重鎖ＣＤＲ、更に好ましくは全３本の重鎖ＣＤＲ及び全３本の軽鎖ＣＤＲを有する、キメラ、ＣＤＲ移植又はヒト化抗体である。好ましい実施形態では、該ＣＤＲは本明細書で言及されるＣＤＲと１，２又は３個のアミノ酸残基が異なってよく、例えば、重鎖ＣＤＲ３は本明細書で述べる供給源由来でよいが、その他の別のＣＤＲは本明細書で述べるように異なってよい。
【００５２】
好ましい抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、ヒト化ＡＱＣ２抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される）、ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６）、ｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）及びモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と同じエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はＶＬＡ−１への結合に対し、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と競合する。
【００５３】
一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＶＬＡ−１のα１サブユニット、例えば、ＶＬＡ−１のα１−Ｉドメインに結合する。
【００５４】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、ラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ或いは本明細書で述べるラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドである。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、α１サブユニットの断片、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は保存的アミノ酸置換を有する同様のアミノ酸配列を含むα１−Ｉドメインの断片である。ラミニン、コラーゲン又はＶＬＡ−１ペプチドは、例えば、本明細書で述べるように、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力によって試験されるように、ＶＬＡ−１機能を阻止する。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１核酸、例えば、２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、アンチセンス分子、リボザイム、三重らせん分子、アプタマー若しくはそれらの任意の組合せの発現又は翻訳のインヒビターである。
【００５５】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、本明細書で述べる小分子（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学物質）又は化学物質、例えば、有機小分子である。
【００５６】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＳＣＩを処置し、例えば、治療、治癒、緩和、軽減、変質、是正、好転、改善し、或いはＳＣＩ、例えば本明細書で述べるＳＣＩの１以上の症状に作用するほどの量及び／又は時間にて投与されうる。
【００５７】
典型的には、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、サル、ウサギ又は農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、被験体は、ヒト、例えば、ヒト男性又は女性である。該被験体は少なくとも１８，２５，３０，４５，５０，５５，６０又は７０歳でよい。
【００５８】
一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは一次性ＳＣＩを処置するために投与される。一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは二次性ＳＣＩを処置或いは予防するために投与される。
【００５９】
一実施形態では、被験体は処置の４８時間以内、例えば、２，３，５，８，１２，２０又は３０時間以内にＳＣＩを被っている。別の実施形態では、被験体は、処置の４８時間以上前であるが、直近の３又は２週間以内にＳＣＩを被っている。
【００６０】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１つ又はそれ以上のＳＣＩ評価基準、例えば、本明細書で述べる基準にて、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上、症状を改善するほどの量にて投与される。
【００６１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１日あたり０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．３〜３ｍｇ／ｋｇの用量にて投与される。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中後１４日間以内に少なくとも２回、例えば、脳卒中後１４日間以内に少なくとも３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３又は１４回投与される。該アンタゴニストは、例えば、１日１回、隔日１回、週２回、週１回又は１日１回で１日、例えば、２，３，４，５，６，７，１４若しくは２８日間、投与することができる。該ＶＬＡ−１アンタゴニストは静脈内又は非経口投与することができる。
【００６２】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストはＳＣＩ処置用の第二の薬剤と併用して投与される。該第二の薬剤は、例えば、メチルプレドニゾロンのようなコルチコステロイド又はグルココルチコイドでよい。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストと該第二の薬剤は同時に投与される。好ましい実施形態では、最初に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与され、次に該第二の薬剤が投与される。好ましい実施形態では、最初に該第二の薬剤が投与され、次に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与される。
【００６３】
一実施形態では、該方法は本明細書で述べるＳＣＩ基準で被験体を評価するステップも含む。一部の実施形態では、その評価は該ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与後少なくとも１時間、例えば、少なくとも２，４，６，８，１２，２４若しくは４８時間又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間若しくはそれ以上の週間にて行われる。１つ又はそれ以上の下記の期間：処置開始前；処置中；又は１つ若しくはそれ以上の処置要素がなされた後に被験体を評価することができる。評価には、同一のＶＬＡ−１アンタゴニストによる更なる処置又は追加薬剤による追加処置の必要性の評価が含まれうる。好ましい実施形態では、事前に選択された評価結果が得られる場合、追加ステップがとられ、例えば、被験体は別の処置を施行され、或いは別の評価又は試験が行われる。
【００６４】
一態様では、本開示内容は、ＳＣＩ、例えば、本明細書で述べるようなＳＣＩを処置するのに用いるＶＬＡ−１アンタゴニストを特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。別の態様では、本開示内容は、ＳＣＩ、例えば、本明細書で述べるようなＳＣＩを処置するための薬剤の製造のためのＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。
【００６５】
一態様では、本開示内容は、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体及びＳＣＩを処置する際の該アンタゴニストの使用のための取扱説明書が付いたラベルを含む
容器を特徴とする。
【００６６】
本明細書で用いられるように、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」又は「処置（する）（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、障害（例えば、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩ）と関連する病状、症状又はパラメータを改善し、或いは障害（障害、例えば、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩによって引き起こされる二次性損傷を含む）の発症、進行又は増悪を統計的に有意な程度又は当業者にとって検出可能な程度に低減するのに有効な量、態様及び／又はモードにて治療を施行することをいう。従って、処置は治療的及び／又は予防的利益をもたらすことができる。有効な量、態様又はモードは、被験体によって異なり得、被験体に合わせられうる。本明細書で用いられるように、「処置」は、脳卒中のリスクが高い被験体、例えば、一過性虚血発作を起こした被験体の予防的処置も包含する。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは虚血損傷後に投与される。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは被験体が脳卒中を有した後に投与される。
【００６７】
本明細書で用いられるように、「処置するのに有効な量」又は「治療有効量」という用語は、被験体への単回又は多回投与後、障害と関連する病状、症状若しくはパラメータを改善又は予防的に処置し、或いは障害の発症、進行又は増悪を統計的に有意な程度又は当業者にとって検出可能な程度に低減するのに有効なＶＬＡ−１アンタゴニストの量をいう。例えば、脳卒中の場合、「処置するのに有効な量」とは、未処置被験体における梗塞サイズに対し、脳内神経組織における梗塞のサイズを、例えば、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上縮小させるほどの量をいう。或いは、「処置するのに有効な量」とは、本明細書で述べる１つ若しくはそれ以上の脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩ評価基準にて、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上、症状を改善するほどの量をいう。
【００６８】
本明細書で用いられるように、「脳卒中」とは、脳に供給する１つ若しくはそれ以上の血管の閉塞又は出血によって引き起こされ、細胞死をもたらす病状を指す一般的な用語である。本明細書で用いられるような「虚血性脳卒中」とは、脳に供給する１つ又はそれ以上の血管の閉塞によって引き起こされる脳卒中をいう。虚血性脳卒中のタイプには、例えば、塞栓性脳卒中、心塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、大血管血栓症、ラクナ梗塞、動脈間性脳卒中（ａｒｔｅｒｙ−ａｒｔｅｒｙ ｓｔｒｏｋｅ）及び潜因性脳卒中が含まれる。本明細書で用いられるような「出血性脳卒中」とは、脳に供給する１つ又はそれ以上の血管の出血によって引き起こされる脳卒中をいう。出血性脳卒中のタイプには、例えば、硬膜下、実質内、硬膜外及びくも膜下出血性脳卒中が含まれる。
【００６９】
本明細書で用いられるように、「外傷性脳損傷」又は「ＴＢＩ」とは、物理的力又は外傷によって引き起こされる損傷をいう。ＴＢＩは一次性又は二次性でありうる。「一次性ＴＢＩ」は物理的力又は外傷の直後に生じ、例えば、血腫、くも膜下出血、脳浮腫、頭蓋内圧上昇及び脳低酸素をもたらしうる。「二次性ＴＢＩ」は物理的力又は外傷後、数時間から数日にわたって生じ得、重度の二次事象（例えば、脳卒中）をもたらしうる。被験体がグラスゴー・コーマ・スケール（ＧＣＳ）でスコア１３〜１５の場合、ＴＢＩは「軽度」と定義づけられる。軽度ＴＢＩは、物理的力又は外傷後５分以下の意識喪失（ＬＯＣ）並びに／或いは物理的力又は外傷後１０分以下の記憶喪失と関連しうる。被験体がＧＣＳでスコア１３未満の場合、ＴＢＩは「中等度〜重度」と定義づけられる。
【００７０】
本明細書で用いられるように、「脊髄損傷」又は“ＳＣＩ”とは、脊髄および／又はその周囲域に対して持続する外傷をいう。脊髄は、圧迫、切断或いは挫傷され、軸索への物理的又は生理的損傷をもたらし、損傷した軸索長に沿った神経電気インパルス伝達に影響を及ぼしうる。関連する細胞体を含む大集団の軸索が死滅し、脳と末梢神経との伝達の喪失を生じさせうる。従って、ＳＣＩは完全又は部分的な運動機能の突然の喪失をもたらし、その程度は損傷の位置に依存する。高度（頸部）ＳＣＩは、運動機能の全損、四肢麻痺、呼吸調節の喪失及び／又は心血管虚脱をもたらしうる。低度（胸部）ＳＣＩは、腕又は呼吸器疾患を伴わずに対麻痺をもたらしうる。
【００７１】
特許、特許出願及び参考文献はすべて、それらの全体を参照して本明細書に組み込まれる。相反する場合、本出願が統制する。
【００７２】
本発明の１つ又はそれ以上の実施形態の詳細が、添付図面及び以下の説明において示される。本発明の他の特徴、目的及び利点は、該説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかにあるであろう。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体における脳卒中を処置する方法であって、脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２）
被験体における脳卒中を処置する方法であって、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目３）
上記脳卒中が虚血性脳卒中である、項目１に記載の方法。
（項目４）
上記脳卒中が出血性脳卒中である、項目１に記載の方法。
（項目５）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、キメラ若しくはヒト化抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である、項目２に記載の方法。
（項目６）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化ＡＱＣ２抗体又はその抗原結合断片である、項目２に記載の方法。
（項目７）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される、項目２に記載の方法。
（項目８）
上記被験体が哺乳動物である、項目１に記載の方法。
（項目９）
上記被験体がヒトである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
上記被験体が脳卒中を起こしている、項目１に記載の方法。
（項目１１）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、脳卒中の４８時間以内に投与される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、静脈内又は非経口投与される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、１日あたり０．１ｍｇ／ｋｇから１日あたり５ｍｇ／ｋｇまでの用量にて投与される、項目１に記載の方法。
（項目１４）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、脳卒中後７日以内に少なくとも２回投与される、項目１０に記載の方法。
（項目１５）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、別の治療薬と併用して投与される、項目１に記載の方法。
（項目１６）
上記別の治療薬が、抗血小板薬、血栓溶解酵素、凝集阻害剤、糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤、グリコサミノグリカン、トロンビン阻害剤、抗凝固剤、ヘパリン、クマリン、ｔＰＡ、ＧＣＳＦ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アンクロド、アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ ａｃｉｄ）、メラトニン及びカスパーゼ阻害剤からなる群より選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
ヒトにおける脳卒中を処置する方法であって、脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記ヒトに投与するステップを含む方法。
（項目１８）
脳卒中を起こしたヒトを処置する方法であって、脳卒中を処置するのに有効な量にてヒト化抗ＶＬＡ−１ブロッキング抗体を脳卒中の７２時間以内に上記ヒトに投与するステップを含む方法。
（項目１９）
被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法であって、ＴＢＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２０）
被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法であって、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２１）
上記ＴＢＩが、挫傷、打撲傷、裂傷又は血腫である、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、キメラ若しくはヒト化抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
被験体における脊髄損傷（ＳＣＩ）を処置する方法であって、ＳＣＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２４）
被験体における脊髄損傷（ＳＣＩ）を処置する方法であって、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２５）
上記ＳＣＩが、不完全ＳＣＩ、脊髄中心症候群、ブラウン・セカール症候群、脊髄前方症候群、脊髄円錐症候群及び馬尾症候群からなる群より選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、キメラ若しくはヒト化抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
被験体における虚血損傷を処置する方法であって、上記損傷を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１ブロッキング抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２８）
被験体における虚血・再灌流損傷を処置する方法であって、上記損傷を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１ブロッキング抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１Ａ】図１ＡはＭＣＡＯ後の行動評価を示すグラフ図である。
【図１Ｂ】図１ＢはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける梗塞半球のパーセンテージを示すグラフ図である。
【図１Ｃ】図１ＣはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける梗塞体積を示すグラフ図である。
【図１Ｄ】図１ＤはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける浮腫パーセントを示すグラフ図である。
【図２Ａ】図２ＡはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける梗塞体積を示すグラフ図である。
【図２Ｂ】図２ＢはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける浮腫パーセントを示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
本明細書で提示される結果は、ＶＬＡ−１ブロッキング抗体が、脳虚血モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏにて梗塞サイズを縮小させることができることを示す。その結果は、特に、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体の投与がＣＮＳにおける虚血損傷、特に、外傷性虚血損傷を低減することを示す。従って、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体は、脳卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）及び脊髄損傷（ＳＣＩ）並びに他の虚血損傷を処置するため、単独で、或いは別の処置と併用して投与することができる。
【００７５】
（ＶＬＡ−１）
インテグリンは、細胞−細胞及び細胞−マトリックス接着を媒介する細胞表面受容体のスーパーファミリーである。これらの蛋白質は、発達及び組織修復時に細胞の成長、移動及び分化のための足場及びシグナルを付与することが知られている。該蛋白質は免疫及び炎症プロセスに関与している。
【００７６】
インテグリンは２本の非共有結合ポリペプチド鎖α及びβからなるヘテロ二量体蛋白質である。各鎖のアミノ末端は鎖間結合及びリガンド結合に寄与する球状頭部を形成する。該球状頭部はストークによって膜貫通セグメントに結合される。通常、細胞質尾部は５０アミノ酸残基長未満である。元々、インテグリンサブファミリーは、ヘテロ二量体を形成するのにどのβサブユニットが用いられるかということに基づいてもともと定義づけられた。β１含有インテグリンはＶＬＡ分子とも称され、「極晩期活性化（ｖｅｒｙ ｌａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」抗原を指す。ＶＬＡ−１〜ＶＬＡ−６は、それぞれα１〜α６（即ち、ＣＤ４９ａ〜ＣＤ４９ｆ）を含むβ１サブファミリーメンバーを指す。一般的評論については、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ａｂｕｌ Ｋ．Ａｂｂａｓら（編）、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２０００を参照されたい。
【００７７】
コラーゲン（両方のタイプＩ及びＩＶ）及びラミニンは、α１β１インテグリン（即ち、ＶＬＡ−１）の周知のリガンドである。ＶＬＡ−１は、コラーゲン上の細胞の接着及び移動（Ｋｅｅｌｙら、１９９５，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１０８：５９５−６０７；及びＧｏｔｗａｌｓら、１９９６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：２４６９−２４７７）；創傷治癒の重要な要素である、コラーゲン基質の収縮及び再構成の促進（上記Ｇｏｔｗａｌｓら；及びＣｈｉｒｏ，１９９１，Ｃｅｌｌ ６７：４０３−４１０）；並びに細胞外基質の再構築に関与する遺伝子の発現調節（Ｒｉｉｋｏｎｅｎら、１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１−５；及びＬａｎｇｈｏｌｚら、１９９５，Ｊ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．１３１：１９０３−１９１５）に関与している。
【００７８】
（ＶＬＡ−１アンタゴニスト）
脳卒中を処置するため、種々の薬剤をＶＬＡ−１アンタゴニストとして用いることができる。このような薬剤には、ＶＬＡ−１又はＶＬＡ−１の一部、例えば、ＶＬＡ−１のα１サブユニットに対する抗体が含まれる。一部の好ましい薬剤には、２００１年４月１４日に申請された米国特許出願６０／２８３，７９４及び２００１年７月６日に申請された米国特許出願６０／３０３，６８９に開示され、また、ＷＯ０２／０８３８５４に開示されている抗ＶＬＡ−１抗体が含まれる。これらの出願の開示内容はそれらの全体を参照して本明細書に組み込まれる。他の薬剤には、ＶＬＡ−１とそのリガンド、例えば、コラーゲン又はラミニンとの相互作用を阻止し、或いはインテグリンの細胞シグナル伝達を調節し、ＶＬＡ−１と関連する細胞活性又は生化学的機能を低下させる小分子が含まれる。また、本明細書で開示される方法において有用な薬剤には、例えば、遺伝子治療及びアンチセンス技術によってＶＬＡ−１の発現を低下させる薬剤が含まれる。
【００７９】
（抗ＶＬＡ−１抗体）
例示的なＶＬＡ−１アンタゴニストはＶＬＡ−１に結合する抗体を含む。一実施形態では、該抗体は、例えば、相互作用を物理的に阻止し、ＶＬＡ−１及び／又はＶＬＡ−１リガンドのその対応物に対する親和性を低下させ、ＶＬＡ−１複合体を崩壊又は不安定化し、ＶＬＡ−１を隔離し、或いは分解のためにＶＬＡ−１を標的とすることにより、ＶＬＡ−１とＶＬＡ−１リガンド（例えば、コラーゲン）との相互作用を阻害する。一実施形態では、該抗体は、ＶＬＡ−１／リガンド結合面に関与する、１つ又はそれ以上のアミノ酸残基においてＶＬＡ−１に結合することができる。そのようなアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャニングによって特定することができる。別の実施形態では、該抗体はＶＬＡ−１／リガンド結合に関与しない残基に結合することができる。例えば、該抗体はＶＬＡ−１の構造を変化させることができ、これにより、結合親和性を低下させ、或いは該抗体はＶＬＡ−１／リガンド結合を立体的に阻害しうる。一実施形態では、該抗体はＶＬＡ−１が媒介する事象又は活性の活性化を低下させることができる。
【００８０】
本明細書で用いられるように、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域、例えば、免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を付与するアミノ酸配列を含む蛋白質をいう。例えば、抗体は１つの重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略される）及び１つの軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略される）を含みうる。別例では、抗体は２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、１本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片及びｄＡｂ断片）並びに完全抗体、例えば、ＩｇＡ，ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＥ，ＩｇＤ，ＩｇＭ（及びそれらのサブタイプ）型の無傷及び／又は完全長免疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖はカッパ又はラムダ型の軽鎖でよい。一実施形態では、該抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体依存性細胞毒性及び／又は補体媒介性
細胞毒性に対して機能的になり得、或いはこれらの活性の一方又は両方に対して非機能的になりうる。
【００８１】
ＶＨ及びＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称される、より保存的な領域が散在する、相補性決定領域（“ＣＤＲ”）と称される超可変性領域に更に細分化されうる。ＦＲ及びＣＤＲの範囲は正確に画定されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健福祉省（ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２；及びＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照）。本明細書ではＫａｂａｔ定義が用いられる。典型的には、各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端へ以下の順序：ＦＲ１，ＣＤＲ１，ＦＲ２，ＣＤＲ２，ＦＲ３，ＣＤＲ３，ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。
【００８２】
「免疫グロブリンドメイン」とは、免疫グロブリン分子の可変又は定常ドメイン由来のドメインをいう。典型的には、免疫グロブリンドメインは約７つのβストランドから形成される２つのβシート及び保存的ジスルフィド結合を含む（例えば、Ａ．Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＡ．Ｎ．Ｂａｒｃｌａｙ（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３８１−４０５を参照）。「免疫グロブリン可変ドメイン配列」とは、抗原結合に好適な構造にＣＤＲ配列を位置決めするのに十分な構造を形成することができるアミノ酸配列をいう。例えば、該配列は天然可変ドメインのアミノ酸配列のすべて又は一部を含みうる。例えば、該配列は、１つ、２つ若しくはそれ以上のＮ又はＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸を省略し、１つ若しくはそれ以上の挿入又は追加末端アミノ酸を含み、或いは他の改変を含みうる。一実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合し、標的結合構造（又は「抗原結合部位」）、例えば、ＶＬＡ−１と相互作用する構造を形成することができる。
【００８３】
該抗体のＶＨ又はＶＬ鎖は重鎖又は軽鎖定常領域のすべて又は一部を更に含むことができ、これにより、それぞれ免疫グロブリン重鎖又は軽鎖を形成する。一実施形態では、該抗体は２本の免疫グロブリン重鎖及び２本の免疫グロブリン軽鎖の四量体である。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖はジスルフィド結合によって結合されうる。通常、重鎖定常領域は３つの定常ドメインＣＨ１，ＣＨ２及びＣＨ３を含む。通常、軽鎖定常領域は１つのＣＬドメインを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。通常、抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主の組織又は因子に対する抗体結合を媒介する。
【００８４】
抗体の１つ又はそれ以上の領域は、ヒト領域、有効的ヒト領域又はヒト化領域でよい。例えば、１つ又はそれ以上の可変領域はヒト領域又は有効的ヒト領域でよい。例えば、１つ又はそれ以上のＣＤＲ、例えば、ＨＣ ＣＤＲ１，ＨＣ ＣＤＲ２，ＨＣ ＣＤＲ３，ＬＣ ＣＤＲ１，ＬＣ ＣＤＲ２及びＬＣ ＣＤＲ３はヒトＣＤＲでよい。各軽鎖ＣＤＲはヒトＣＤＲでよい。ＨＣ ＣＤＲ３はヒトＣＤＲでよい。１つ又はそれ以上のフレームワーク領域は、ヒトフレームワーク領域、例えば、ＨＣ又はＬＣのＦＲ１，ＦＲ２，ＦＲ３及びＦＲ４でよい。一実施形態では、全フレームワーク領域がヒトフレームワーク領域、例えば、ヒト体細胞、例えば、免疫グロブリンを産生する造血細胞又は非造血細胞由来のヒトフレームワーク領域である。一実施形態では、ヒト配列は生殖細胞系配列、例えば、生殖細胞系核酸にコードされる生殖細胞系配列である。１つ又はそれ以上の定常領域は、ヒト領域、有効的ヒト領域又はヒト化領域でよい。別の実施形態では、フレームワーク領域（例えば、集合的にＦＲ１，ＦＲ２及びＦＲ３或いは集合的にＦＲ１，ＦＲ２，ＦＲ３及びＦＲ４）又は抗体全体の少なくとも７０，７５，８０，８５，９０，９２，９５若しくは９８％が、ヒト、有効的ヒト又はヒト化となりうる。例えば、ＦＲ１，ＦＲ２及びＦＲ３は集合的に、ヒト生殖細胞系セグメントにコードされるヒト配列と少なくとも７０，７５，８０，８５，９０，９２，９５，９８又は９９％同一或いは完全に同一となりうる。
【００８５】
「有効的ヒト」免疫グロブリン可変領域とは、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘起しないように、十分数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変領域である。「有効的ヒト」抗体とは、抗体が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘起しないように、十分数のヒトアミノ酸位置を含む抗体である。
【００８６】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域とは、修飾形態がヒトにおいて非修飾形態よりも免疫応答を誘起しないように修飾され、例えば、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘起しないように、十分数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾される免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの記述には、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号及び第５，６９３，７６２号が含まれる。場合により、ヒト化免疫グロブリンは１つ又はそれ以上のフレームワークアミノ酸位置において非ヒトアミノ酸を含みうる。
【００８７】
抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）（例えば、マウス、ラット又はウサギ）抗体を操作することによって生成されるキメラ抗体でもよい。例えば、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体は、重鎖及び／又は軽鎖のヒンジ及び／又は定常領域の一部又は全部が、別種（例えば、ヒト）由来抗体の対応する構成要素に置換されるように、組換えＤＮＡ技術によって改変することができる。一般的に、操作された抗体の可変ドメインは、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体の可変ドメインと同一或いは実質的に同一の状態である。そのような操作された抗体はキメラ抗体と称され、該ヒンジ及び／又は定常領域が由来する種（例えば、ヒト）の被験体に投与されると、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体より抗原性が低い。キメラ抗体を作製する方法は当該技術分野において公知である。好ましい定常領域は、限定されないが、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４由来の定常領域を含む。
【００８８】
本明細書で述べる方法において有用な例示的な抗ＶＬＡ−１抗体には、例えば、モノクローナル抗体ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０；２００１年８月２日、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９）に寄託）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５；２００１年４月１８日に寄託）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４；２００１年４月１８日に寄託）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６；２００１年５月４日に寄託）及びｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）が含まれる。これらの抗体はすべてブダペスト条約下で寄託された。他の抗ＶＬＡ−１抗体には、例えば、米国特許第５，３９１，４８１号及び第５，７８８，９６６号に述べられているモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）並びにＨａ３１／８が含まれる。
【００８９】
（抗体の生成）
ＶＬＡ−１に結合する抗体は、免疫化、例えば、動物を用いた免疫化又はファージ提示のようなｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を含む、様々な手段によって生成することができる。ＶＬＡ−１の一部又は全部を免疫原又は選択の標的として用いることができる。例えば、ＶＬＡ−１又はその断片、例えば、ＶＬＡ−１のα１サブユニットの全部又は一部、例えば、α１−Ｉドメインを免疫原として用いることができる。一実施形態では、免疫化動物は、天然、ヒト又は部分的ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する免疫グロブリン産生細胞を含む。一実施形態では、非ヒト動物は少なくとも一部のヒト免疫グロブリン遺伝子を含む。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大断片を用いて、マウス抗体産生に欠けるマウス株を操作することが可能である。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する遺伝子由来の
抗原特異的モノクローナル抗体が生成・選択されうる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔ．Ｇｅｎ．７：１３−２１；米国特許出願２００３−００７０１８５；米国特許第５，７８９，６５０号；及びＷＯ９６／３４０９６を参照されたい。
【００９０】
ＶＬＡ−１に対する非ヒト抗体は、例えば、齧歯動物において生成することもできる。非ヒト抗体は、例えば、欧州特許第２３９４００号；米国特許第６，６０２，５０３号；第５，６９３，７６１号；及び第６，４０７，２１３号に述べられているようにヒト化され、脱免疫化され、或いは修飾されて有効的ヒト抗体となる。
【００９１】
欧州特許第２３９４００号（Ｗｉｎｔｅｒら）では、１つの種の相補性決定領域（ＣＤＲ）の他種由来ＣＤＲとの置換（所定の可変領域内）によって抗体を改変することについて述べている。通常、非ヒト（例えば、マウス）抗体のＣＤＲは、組換え核酸技術を用いることによってヒト抗体における対応領域内に置換され、所望の置換抗体をコードする配列を生成する。所望のアイソタイプ（通常、ＣＨではガンマＩ、ＣＬではカッパ）のヒト定常領域遺伝子セグメントを付加することができ、ヒト化重鎖及び軽鎖遺伝子が哺乳動物細胞において同時発現され、可溶性ヒト化抗体を産生することができる。抗体をヒト化する他の方法も用いることができる。例えば、他の方法は、抗体の３次元構造、結合決定因子に３次元的に近接するフレームワーク位置及び免疫原性ペプチド配列を明らかにすることができる。例えば、ＷＯ９０／０７８６１；米国特許第５，６９３，７６２号；第５，６９３，７６１号；第５，５８５，０８９号；及び第５，５３０，１０１号；Ｔｅｍｐｅｓｔら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１並びに米国特許第６，４０７，２１３号を参照されたい。
【００９２】
時には、ヒトフレームワークへのＣＤＲの直接転移は、結果として得られる抗体の抗原結合親和性の喪失をもたらす。この理由は、一部の同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体ではフレームワーク領域内の一部のアミノ酸がＣＤＲと相互作用し、従って、抗体の全般的抗原結合親和性に影響を与えるためである。そのような場合、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体の抗原結合活性を保持するため、アクセプター抗体のフレームワーク領域に「復帰突然変異」を導入することが肝要であろう。復帰突然変異を作製する一般的手法は当該技術分野において公知である。例えば、Ｑｕｅｅｎら（上記）、Ｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：２８６９−２８７３（１９９１）及びＷＯ９０／０７８６１（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ Ｉｎｃ．）では、２つの主要ステップを含む手法について述べている。まず、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）マウス抗体のＶ領域フレームワークに対する至適蛋白質配列相同性のコンピュータ解析により、ヒトＶフレームワーク領域が選択される。次に、マウスＣＤＲと相互作用する可能性があるフレームワークアミノ酸残基を可視化するため、コンピュータによってマウスＶ領域の三次構造がモデル化され、次に、これらのマウスアミノ酸残基が相同性ヒトフレームワークに重ね合わされる。この２ステップ手法下では、ヒト化抗体を設計するための複数の基準がある。第一の基準は、ヒトアクセプターとして、通常、非ヒトドナー免疫グロブリンと相同の特定のヒト免疫グロブリン由来のフレームワークを用いることであり、或いは多くのヒト抗体由来のコンセンサスフレームワークを用いることである。第二の基準は、ヒトアクセプター残基が異常であって、ドナー残基がフレームワークの特定の残基においてヒト配列に典型的である場合、アクセプターアミノ酸よりもドナーアミノ酸を用いることである。第三の基準は、ＣＤＲにすぐ隣接する位置において、アクセプターフレームワークアミノ酸残基よりもドナーフレームワークアミノ酸残基を用いることである。
【００９３】
例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１（１９９１）に述べられているような異なる手法を用いてもよい。この手法下では、それぞれＮＥＷＭ及びＲＥＩ重鎖・軽鎖由来のＶ領域フレームワークが、マウス残基の過激な導入なしにＣＤＲ移植に用いられる。この手法を用いる利点は、ＮＥＷＭ及びＲＥＩ可変領域の三次元構造がＸ線結晶学から既知であり、従って、ＣＤＲとＶ領域フレームワーク残基との具体的な相互作用を容易にモデル化することができることである。
【００９４】
ＶＬＡ−１に結合する完全ヒトモノクローナル抗体は、例えば、Ｂｏｅｒｎｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５に述べられているように、ｉｎ ｖｉｔｒｏにて初回抗原刺激を受けたヒト脾細胞を用いて生成することができる。該完全ヒトモノクローナル抗体は、Ｐｅｒｓｓｏｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２４３２−２４３６或いはＨｕａｎｇ及びＳｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４１：２２７−２３６；また、米国特許第５，７９８，２３０号に述べられているようなレパートリークローニングによっても調製されうる。大規模な非免疫ヒトファージ提示ライブラリーを用いて、標準的なファージ技術を用いてヒト治療法として開発されうる高親和性抗体を単離してもよい（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１−８；及び米国特許出願２００３−０２３２３３３を参照）。完全ヒト抗体を生成するための他の方法は、不活性化された内在性Ｉｇ遺伝子座を有するとともに、非再配列ヒト抗体重鎖及び軽鎖遺伝子に対してトランスジェニックな非ヒト動物の使用を伴う。そのようなトランスジェニック動物はα１−Ｉ又はその所望の抗原性断片で免疫化することができ、次に、これに由来するＢ細胞からハイブリドーマが作製される。これらの方法は、例えば、ヒトＩｇミニ遺伝子座を含むトランスジェニックマウスに関するＧｅｎＰｈａｒｍ／Ｍｅｄａｒｅｘ社（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）の様々な出版物／特許（例えば、米国特許第５，７８９，６５０号）；ＸＥＮＯＭＩＣＥに関するＡｂｇｅｎｉｘ社（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）の様々な出版物／特許（例えば、米国特許第６，０７５，１８１号；第６，１５０，５８４号及び第６，１６２，９６３号；Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１（１９９４）；及びＭｅｎｄｅｚら、１５（２）：１４６−５６（１９９７））；並びに「トランソミック（ｔｒａｎｓｏｍｉｃ）」マウスに関するキリン社（日本）の様々な出版物／特許（例えば、欧州特許第８４３９６１号及び富塚（Ｔｏｍｉｚｕｋａ）ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６：１３３−１４４３（１９９７））に述べられている。
【００９５】
（抗体及び蛋白質の産生）
本明細書で述べる抗体及び他の蛋白質は原核細胞及び真核細胞において産生されうる。一実施形態では、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｐｉｃｈｉａ属（例えば、Ｐｏｗｅｒｓら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５１：１２３−３５を参照）、Ｈａｎｓｅｕｌａ属又はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のような酵母細胞において発現される。
【００９６】
抗体、特に完全長抗体、例えば、ＩｇＧは、哺乳動物細胞において産生されうる。組換え発現のための例示的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に述べられているようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に用いられる、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０に述べられているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、Ｋ５６２並びにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物由来細胞が含まれる。例えば、該細胞は哺乳動物上皮細胞である。
【００９７】
免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加え、組換え発現ベクターは更なる核酸配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択可能マーカー遺伝子を運びうる。選択可能マーカー遺伝子はベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号；第４，６３４，６６５号；及び第５，１７９，０１７号を参照）。例示的な選択可能マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅でｄｈｆｒ宿主細胞に用いる）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。
【００９８】
抗体（例えば、完全長抗体又はその抗原結合部）の組換え発現のための例示的な発現系では、抗体重鎖及び抗体軽鎖をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。該組換え発現ベクター内では、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は各々、高レベルの遺伝子の転写を促進するため、エンハンサー／プロモーター調節要素（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素又はＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素のような、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に機能的に結合している。該組換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子も運び、これは、メトトレキサート選択／増幅を用いて該ベクターをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能とする。選択された形質転換宿主細胞は抗体重鎖及び軽鎖の発現を可能とするように培養され、培地から無傷の抗体が回収される。標準的な分子生物学法を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換細胞を選択し、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。例えば、一部の抗体は、プロテインＡ又はプロテインＧを用いたアフィニティークロマトグラフィーによって分離することができる。
【００９９】
抗体は、例えば、Ｆｃ受容体又はＣ１ｑ又はその両方との相互作用を低下させ、或いは排除するため、修飾、例えば、Ｆｃ機能を変化させる修飾も含みうる。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つ又はそれ以上の残基、例えば、米国特許第５，６４８，２６０号におけるナンバリングに従って、例えば、１つ又はそれ以上の残基２３４及び２３７において突然変異させることができる。他の例示的な修飾には、米国特許第５，６４８，２６０号に述べられている修飾が含まれる。
【０１００】
Ｆｃドメインを含む一部の蛋白質では、抗体／蛋白質生成系は、Ｆｃ領域がグリコシル化される抗体又は他の蛋白質を合成するように設計されうる。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインはＣＨ２ドメインにおけるアスパラギン２９７においてグリコシル化される。Ｆｃドメインは他の真核細胞性翻訳後修飾も含みうる。他の場合では、蛋白質はグリコシル化されない形態で生成される。
【０１０１】
抗体はトランスジェニック動物によって生成することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号では、トランスジェニック哺乳動物の乳腺に抗体を発現させる方法について述べている。乳汁特異的プロモーター及び対象とする抗体、例えば、本明細書で述べる抗体をコードする核酸配列並びに分泌シグナル配列を含むトランス遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって生成される乳汁は、乳汁に分泌される、対象とする蛋白質、例えば、抗体を含む。該蛋白質は乳汁から精製され、或いは一部の用途では直接使用されうる。
【０１０２】
（他の部分）
本明細書で述べる抗体は所望の機能を果たすため、他の部分を更に含みうる。例えば、抗体は、抗体の標的とされる細胞の殺滅のための毒素部分（例えば、破傷風トキソイド又はリシン）又は放射性核種（例えば、１１１Ｉｎ又は９０Ｙ）を含みうる（例えば、米国特許第６，３０７，０２６号を参照）。抗体は簡便な分離又は検出のための部分（例えば、ビオチン、蛍光部分、放射活性部分、ヒスチジン標識など）を含みうる。抗体はその血清中半減期を延長することができる部分、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分も含みうる。
【０１０３】
（ポリペプチドアンタゴニスト）
抗体に加え、本明細書で述べる方法において有用なＶＬＡ−１アンタゴニストは、例えば、ＶＬＡ−１とその生理的リガンド、例えば、コラーゲン、例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ又はラミニンとの相互作用を遮断することにより、或いはＶＬＡ−１依存性細胞シグナル伝達を調節することにより、ＶＬＡ−１の機能を阻害するポリペプチドを含む。
【０１０４】
ＶＬＡ−１アンタゴニストは１つ又はそれ以上の下記の特性を有する薬剤である：（１）ＶＬＡ−１／ＶＬＡ−１リガンド相互作用、例えば、ＶＬＡ−１／コラーゲン相互作用を阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１保有細胞表面上のＶＬＡ−１抗原を覆い或いはこれに結合する；（２）ＶＬＡ−１媒介シグナル、例えば、ＶＬＡ−１／コラーゲン媒介シグナリングの伝達を変更し、好ましくは阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１保有細胞表面上のＶＬＡ−１抗原を覆い或いはこれに結合する；（３）ＶＬＡ−１／ＶＬＡ−１リガンド相互作用を阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１リガンド、例えば、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ又はＩＶ）又はラミニンを覆い或いはこれに結合する；（４）ＶＬＡ−１リガンド媒介ＶＬＡ−１シグナリング、例えば、コラーゲン媒介ＶＬＡ−１シグナリングの伝達を変更し、好ましくは阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１リガンド、例えば、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ又はＩＶ）又はラミニンを覆い或いはこれに結合する。好ましい実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニストは特性１及び２の一方又は両方を有する。他の好ましい実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニストは特性３及び４の一方又は両方を有する。
【０１０５】
本明細書で述べる方法の目的に照らせば、ＶＬＡ−１保有細胞表面上のＶＬＡ−１抗原に結合することが可能であって、ＶＬＡ−１抗原を効果的に遮断或いは覆う如何なる薬剤も、本明細書での実施例において用いられるモノクローナル抗体の等価物であるとみなされる。
【０１０６】
本明細書で論じるように、本明細書で述べる方法において用いられるＶＬＡ−１アンタゴニストは、抗体又は抗体誘導体に限定されず、他の分子、例えば、ＶＬＡ−１に結合する可溶性形態の他の蛋白質、例えば、ＶＬＡ−１に対する天然結合蛋白質でもよい。これらのアンタゴニストには、コラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ；コラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチド；ラミニン；及びラミニンのＶＬＡ−１結合ペプチドが含まれる（例えば、Ｐｆａｆｆら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２５：９７５−８４，１９９４；Ｃｏｌｏｇｎａｔｏ−Ｐｙｋｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９３９８−９４０６，１９９５；及びＣｏｌｏｇｎａｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２９３３０−２９３３６，１９９７を参照）。例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ又はＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドは、アミノ酸配列ＧＦＯＧＥＲ（例えば、Ｋｎｉｇｈｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３５−４０，２０００を参照）、ＧＲＯＧＥＲ（例えば、Ｋｉｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：３２５１２−３２５２０，２００５を参照）又は類似の保存的置換アミノ酸配列を含みうる。他のアンタゴニストには、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は類似の保存的置換アミノ酸配列を含むペプチド並びにペプチド模倣剤、例えば、ＷＯ０１／９６３６５；米国特許第６，３２６，４０３号及び第６，００１，９６１号に述べられているペプチド模倣剤が含まれる。これらのアンタゴニストは、ＶＬＡ−１に対する細胞表面結合蛋白質と競合することにより、或いはＶＬＡ−１機能を変化させることにより、作用しうる。
【０１０７】
（小分子アンタゴニスト）
抗体に加え、本明細書で述べる方法において有用なＶＬＡ−１アンタゴニストは、例えば、ＶＬＡ−１とその生理的リガンド、例えば、コラーゲンとの相互作用を遮断することにより、或いはＶＬＡ−１依存性細胞シグナル伝達を調節することにより、ＶＬＡ−１の機能を阻害する任意の非抗体化合物を含む。これらの化合物の例は、小分子化合物、例えば、Ｗｅｉｔｚ−Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：６８７−６９２，２００１）に述べられている小分子化合物である。これらの化合物は、例えば、コンビナトリアル小分子ライブラリー、コンビナトリアル抗体ライブラリー、合理的薬剤設計及び従来の有機合成、引き続いての、当該技術分野において公知の任意の方法を用いた拮抗作用に対するスクリーニングを用いて特定することができる。
【０１０８】
一例では、組換え発現されたＶＬＡ−１又はその機能的断片を用いて、天然、半合成又は合成化合物のライブラリーをスクリーニングすることができる。特に有用なタイプのライブラリーには、コンビナトリアル小有機分子ライブラリー、ファージ提示ライブラリー及びコンビナトリアルペプチドライブラリーが含まれる。
【０１０９】
ライブラリーの構成要素が特定のポリペプチドに結合するかを判定する方法は、当該技術分野において公知である。一般的に、ポリペプチド標的物質は非特異的或いは特異的結合により、固体支持体表面に結合される。特異的結合は、プレート又はカラムのような固体支持体に結合される蛋白質を認識する抗体を用いてなされうる。或いは、特異的結合は、エピトープタグを介し、グルタチオン被覆固体支持体へのＧＳＴ結合又はプロテインＡ固体支持体へのＩｇＧ融合蛋白質結合のようになされうる。
【０１１０】
或いは、組換え発現ＶＬＡ−１又はその部分は、Ｍ１３のようなファージの表面上に発現されうる。移動相におけるライブラリーは、標的と化合物との特異的結合を促進する条件下でインキュベートされる。次に、標的に結合する化合物が特定されうる。或いは、ライブラリーは固体支持体に結合され、ポリペプチド標的物質は移動相にある。
【０１１１】
化合物とＶＬＡ−１標的物質との結合は多くの方法によって判定されうる。競合ＥＬＩＳＡ又はＲＩＡのような技法によって結合を特定することができ、例えば、化合物の標的への結合が抗体の同一標的への結合を低減する。これらの方法は当該技術分野において公知である。別の方法は、製造業者が提供する方法を用いて標的と化合物との相互作用を測定するため、ＢｉａＣＯＲＥを用いることである。好ましい方法は自動化ハイスループットスクリーニングであり、例えば、Ｂｕｒｂａｕｍら、Ｃｕｒｒ ＯｐｉｎＣｈｅｍ Ｂｉｏｌ．１：７２−８（１９９７）及びＳｃｈｕｌｌｅｋら、Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４６：２０−９（１９９７）を参照されたい。
【０１１２】
標的に結合する候補化合物が特定されると、該化合物が標的の活性を阻害するかを判定することができる。例えば、候補化合物は、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力をスクリーニングするのに用いることができる。例えば、米国特許出願６０／３０３，６８９及びＷＯ０２／０８３８５４を参照されたい。別例では、候補化合物は、（１）ＶＬＡ−１発現細胞又は（２）α１β１インテグリン含有分子若しくはその断片、例えば、α１−Ｉドメインへの抗ＶＬＡ−１抗体の結合で競合するのに用いられる。ＶＬＡ−１アンタゴニストを特定する別の方法は、合理的な薬剤設計のため、組換え発現ＶＬＡ−１の構造を用いることである。例えば、ＷＯ０１／７３４４４を参照されたい。
【０１１３】
（核酸アンタゴニスト）
一部の実施形態では、ＶＬＡ−１をコードする内在性遺伝子の発現を低減するのに核酸アンタゴニストが用いられる。一実施形態では、該核酸アンタゴニストはＶＬＡ−１をコードするｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡである。他のタイプのブロッキング核酸、例えば、ｄｓＲＮＡ、リボザイム、三重らせん形成物質、アプタマー又はアンチセンス核酸も用いることができる。
【０１１４】
ｓｉＲＮＡは、オーバーハングを任意に含む小型２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。例えば、ｓｉＲＮＡの２本鎖領域は約１８〜２５ヌクレオチド長、例えば、約１９，２０，２１，２２，２３又は２４ヌクレオチド長である。通常、ｓｉＲＮＡ配列は標的ｍＲＮＡに正確に相補的である。ｄｓＲＮＡ、特にｓｉＲＮＡを用いて哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）における遺伝子発現をサイレンシングすることができる。例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：６４９９−６５０３；Ｂｉｌｌｙら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：１４４２８−１４４３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒら（２００１）Ｎａｔｕｒｅ．４１１：４９４−８；Ｙａｎｇら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：９９４２−９９４７、米国特許出願２００３０１６６２８２，２００３０１４３２０４，２００４００３８２７８及び２００３０２２４４３２を参照されたい。
【０１１５】
アンチセンス剤は、例えば、約８〜約８０核酸塩基（即ち、約８〜約８０ヌクレオチド）、例えば、約８〜約５０核酸塩基又は約１２〜約３０核酸塩基を含みうる。アンチセンス化合物は、リボザイム、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）及び標的核酸にハイブリダイズし、その発現を調節する他の短い触媒ＲＮＡ若しくは触媒オリゴヌクレオチドを含む。アンチセンス化合物は、標的遺伝子における配列に相補的な、少なくとも８個の一続きの連続核酸塩基を含みうる。オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズできるために、その標的核酸配列に１００％相補的である必要はない。オリゴヌクレオチドの標的への結合が標的分子の正常な機能に干渉し、有用性の喪失を生じさせる場合、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズでき、特異的結合が所望される条件下、即ち、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ又は治療処置の場合の生理的条件下、或いはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの場合、該アッセイが行われる条件下で、オリゴヌクレオチドの非標的配列への非特異的結合を避けるのに十分な程度の相補性がある。
【０１１６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのｍＲＮＡ（例えば、ＶＬＡ−１をコードするｍＲＮＡ）とのハイブリダイゼーションは、ｍＲＮＡの１つ又はそれ以上の正常な機能に干渉しうる。干渉されるｍＲＮＡの機能には、あらゆる主要な機能、例えば、蛋白質翻訳部位へのＲＮＡの転位、ＲＮＡからの蛋白質の翻訳、１つ若しくはそれ以上のｍＲＮＡ種を生じさせるＲＮＡのスプライシング及びＲＮＡによって関与されうる触媒活性が含まれる。特定の蛋白質のＲＮＡへの結合も、アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮＡへのハイブリダイゼーションによって干渉されうる。
【０１１７】
例示的なアンチセンス化合物には、標的核酸、例えば、ＶＬＡ−１をコードするｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするＤＮＡ又はＲＮＡ配列が含まれる。相補領域は約８〜約８０核酸塩基長にて延びうる。該化合物は１つ又はそれ以上の修飾核酸塩基を含みうる。修飾核酸塩基には、例えば、５−ヨードウラシル、５−ヨードシトシンのような５−置換ピリミジン並びにＣ５−プロピニルシトシン及びＣ５−プロピニルウラシルのようなＣ５−プロピニルピリミジンが含まれうる。他の好適な修飾核酸塩基には、Ｎ４−−（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルアミノシトシン及びＮ４，Ｎ４-−（Ｃ１−Ｃ１２）ジアルキルアミノ
シトシンが含まれる。修飾核酸塩基には、７−置換−８−アザ−７−デアザプリン及び７−置換−７−デアザプリン、例えば、７−ヨード−７−デアザプリン、７−シアノ−７−デアザプリン、７−アミノカルボニル−７−デアザプリンも含まれうる。これらの例には、６−アミノ−７−ヨード−７−デアザプリン、６−アミノ−７−シアノ−７−デアザプリン、６−アミノ−７−アミノカルボニル−７−デアザプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−ヨード−７−デアザプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−シアノ−７−デアザプリン及び２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−アミノカルボニル−７−デアザプリンが含まれる。更に、Ｎ６−メチルアミノアデニン及びＮ６，Ｎ６−ジメチルアミノアデニンを含む、Ｎ６−−（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルアミノプリン及びＮ６，Ｎ６−−（Ｃ１
−Ｃ１２）ジアルキルアミノプリンも好適な修飾核酸塩基である。同様に、例えば、６−チオグアニンを含む、他の６−置換プリンも適切な修飾核酸塩基を構成しうる。他の好適な核酸塩基には、２−チオウラシル、８−ブロモアデニン、８−ブロモグアニン、２−フルオロアデニン及び２−フルオログアニンが含まれる。いずれもの前記修飾核酸塩基の誘導体も適切である。いずれもの前述の化合物の置換基には、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ２−Ｃ３０アルケニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ハロ、アミノ、アミド、ニトロ、チオ、スルホニル、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニルなどが含まれる。
【０１１８】
他のタイプの核酸剤についての記述も利用できる。例えば、米国特許第４，９８７，０７１号；第５，１１６，７４２号；及び第５，０９３，２４６号；Ｗｏｏｌｆら（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ；Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ（編）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）；８９：７３０５−９；Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ及びＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４；Ｈｅｌｅｎｅ（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；並びにＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照されたい。
【０１１９】
本明細書で述べる核酸、例えば、本明細書で述べるアンチセンス核酸は、核酸を送達する遺伝子治療プロトコルの一部として用いられる遺伝子構築体に組み込むことができ、これは、作用物質、例えば、アンチセンス核酸を細胞内に発現・産生させるのに用いることができる。そのような構成要素の発現構築体は、任意の生物学的に有効な担体、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏにて該構成要素遺伝子を細胞に効果的に送達することができる任意の製剤又は組成物にて投与されうる。その手法には、組換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス及び単純ヘルペスウイルス１型を含むウイルスベクター或いは組換え細菌又は真核生物プラスミドへの対象遺伝子の挿入が含まれる。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクションする；プラスミドＤＮＡは、例えば、カチオン性リポソーム（リポフェクチン）或いは誘導体化（例えば、抗体結合）、ポリリシン共役体、グラマシジンＳ、人工ウイルスエンベロープ又は他のそのような細胞内担体の補助により、更に、遺伝子構築体の直接注入又はｉｎ ｖｉｖｏにて行われるＣａＰＯ４沈降により、送達されうる。
【０１２０】
細胞内への核酸のｉｎ ｖｉｖｏ導入に好ましい手法は、核酸、例えば、ｃＤＮＡを含むウイルスベクターの使用によるものである。ウイルスベクターによる細胞の感染は、標的細胞の大部分が核酸を受け取ることができるという利点を有する。加えて、ウイルスベクター内にて、例えば、ウイルスベクターに含まれるｃＤＮＡによってコードされた分子は、ウイルスベクターの核酸を取り込んだ細胞内で効率的に発現される。
【０１２１】
レトロウイルスベクター及びアデノ随伴ウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏでの外来遺伝子の、特にヒトへの送達のための組換え遺伝子送達系として用いることができる。これらのベクターは細胞への遺伝子の効率的な送達を与え、送達される核酸は宿主の染色体ＤＮＡ内に安定して組み込まれる。組換えレトロウイルスを生成し、また、そのようなウイルスによってｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏにて細胞を感染させるプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら（編）Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），セクション９．１０−９．１４及び他の標準的な実験室マニュアルに見出すことができる。好適なレトロウイルス例には、当業者には周知のｐＬＪ，ｐＺＩＰ，ｐＷＥ及びｐＥＭが含まれる。エコトロピック及びアンホトロピックレトロウイルス系を調製するための好適なパッケージングウイルス株例には、ΨＣｒｉｐ，ΨＣｒｅ，Ψ２及びΨＡｍが含まれる。レトロウイルスは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏにて上皮細胞を含む多くの異なる細胞型に種々の遺伝子を導入するのに用いられている（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５−１３９８；Ｄａｎｏｓ及びＭｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：６４６０−６４６４；Ｗｉｌｓｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：３０１４−３０１８；Ａｒｍｅｎｔａｎｏら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６１４１−６１４５；Ｈｕｂｅｒら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８０３９−８０４３；Ｆｅｒｒｙら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８３７７−８３８１；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５４：１８０２−１８０５；ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７６４０−７６４４；Ｋａｙら（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１−６４７；Ｄａｉら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０８９２−１０８９５；Ｈｗｕら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４１０４−４１１５；米国特許第４，８６８，１１６号及び第４，９８０，２８６号；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０７１３６；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０２４６８；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０５３４５；及びＰＣＴ出願ＷＯ９２／０７５７３を参照）。
【０１２２】
別のウイルス遺伝子送達系では、アデノウイルス由来ベクターを用いる。例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒら（１９８８）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５を参照されたい。アデノウイルス株Ａｄ５型ｄｌ３２４又は他のアデノウイルス株（例えば、Ａｄ２，Ａｄ３，Ａｄ７など）由来の好適なアデノウイルスベクターは当業者には公知である。
【０１２３】
対象遺伝子の送達に有用な更に別のウイルスベクター系はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅら（１９９２）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７：３４９−３５６；Ｓａｍｕｌｓｋｉら（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２８；及びＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１９６３−１９７３を参照されたい。
【０１２４】
（アプタマー）
アプタマーは、細胞表面蛋白質を含むほぼすべての分子を認識し、これに特異的に結合するのに用いることができる短いオリゴヌクレオチド配列である。指数的濃縮によるリガンドの系統的進化（ＳＥＬＥＸ）プロセスは強力であり、そのようなアプタマーを容易に特定するのに用いることができる。アプタマーは、治療及び診断に重要な広範な蛋白質、例えば、増殖因子及び細胞表面抗原のために作製されうる。これらのオリゴヌクレオチドは抗体と同様な親和性及び特異性によってその標的に結合する（Ｕｌｒｉｃｈ（２００６）Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：３０５−２６を参照）。Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標）は承認されたアプタマー治療法であり、一般的な眼球障害に対して承認された初の抗抗原性剤でもある。
【０１２５】
（人工転写因子）
ＶＬＡ−１の発現を調節するために人工転写因子を用いることもできる。人工転写因子は、ＶＬＡ−１をコードする内在性遺伝子における配列、例えば、調節領域にて、例えば、プロモーターに結合する能力のために、設計或いはライブラリーから選択することができる。例えば、人工転写因子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、ファージ提示を用いる、米国特許第６，５３４，２６１号）又はｉｎ ｖｉｖｏでの選択により、或いは認識コードに基づく設計により（例えば、ＷＯ００／４２２１９及び米国特許第６，５１１，８０８号を参照）、調製することができる。特に、多様なジンクフィンガードメインのライブラリーを作製する方法については、例えば、Ｒｅｂａｒら（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２６７：１２９；Ｇｒｅｉｓｍａｎ及びＰａｂｏ（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：６５７；Ｉｓａｌａｎら（２００１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １９：６５６；並びにＷｕら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９２：３４４を参照されたい。
【０１２６】
任意に、人工転写因子は、転写調節ドメイン、例えば、転写を活性化する活性ドメイン又は転写を抑制する抑制ドメインに融合させることができる。特に、抑制ドメインはＶＬＡ−１をコードする内在性遺伝子の発現を低減するのに用いることができる。人工転写因子自体が細胞に送達される異種核酸にコードされ得、或いは蛋白質自体が細胞に送達されうる（例えば、米国特許第６，５３４，２６１号を参照）。人工転写因子をコードする配列を含む異種核酸は、例えば、脳卒中損傷又は本明細書で述べる別の損傷の部位若しくはその近傍にて、細胞、例えば、神経細胞又はグリア細胞における人工転写因子の濃度の微調整を可能とするため、誘導プロモーターに機能的に結合されうる。
【０１２７】
（虚血損傷）
虚血とは組織への血液供給の低下又は消失をいう。本明細書で述べる方法は虚血と関連する損傷、即ち、「虚血損傷」を処置するのに用いることができる。虚血損傷は、例えば、腎臓、肝臓、肺、膵臓、骨格筋、腸、心臓及び脳に対する損傷を含みうる。虚血損傷は、例えば、急性心筋梗塞、選択的血管形成術、冠状動脈バイパス移植、心臓バイパス又は組織若しくは臓器移植を伴う手術（例えば、心臓移植）、移植後の組織拒絶反応、移植片対宿主病、脳卒中、頭部外傷、溺水、敗血症、心停止、ショック、アテローム性動脈硬化、高血圧、コカイン誘発性心疾患、喫煙誘発性心疾患、心不全、肺高血圧、出血、毛細血管漏出症候群（例えば、小児及び成人呼吸窮迫症候群）、多臓器系不全、低膠質浸透圧状態（例えば、飢餓、神経性無食欲症又は血清蛋白質の産生低下を伴う肝不全）、アナフィラキシー、低体温、寒冷傷害（例えば、低体温灌流又は凍傷に起因する）肝腎症候群、振戦譫妄、挫滅外傷、腸間膜不全、末梢血管障害、跛行、熱傷、感電、過剰薬剤誘発性血管拡張、過剰薬剤誘発性血管収縮、放射線暴露（例えば、蛍光透視又は放射線画像検査時）或いは高エネルギーへの暴露、例えば、レーザー光への暴露と関連し、或いはそれらによって引き起こされうる。過剰薬剤誘発性血管拡張は、例えば、ニトロプルシド、ヒドララゾン（ｈｙｄｒａｌａｚｏｎｅ）、ジアゾキサイド（ｄｙａｚｏｘｉｄｅ）、カルシウムチャンネル遮断薬又は全身麻酔薬によって引き起こされうる。過剰薬剤誘発性血管収縮は、例えば、ネオシネフリン、イソプロテレノール、ドーパミン、ドブタミン又はコカインによって引き起こされうる。
【０１２８】
（虚血再灌流損傷）
「虚血再灌流損傷」とは、一時的な血流停止後、身体領域への血流の再構築（再灌流）から生じる損傷をいう。例えば、虚血再灌流損傷は、大動脈瘤の修復及び臓器移植のような一部の外科的処置時に生じうる。臨床的に、虚血再灌流損傷は、合併症、例えば、成人呼吸窮迫症候群を含む肺機能障害、腎機能障害、血小板減少症、微小血管内へのフィブリン沈着及び播種性血管内凝固障害を含む消費性凝固障害、一過性及び持続性脊髄損傷、不整脈及び急性虚血性事象、急性肝細胞障害及び壊死を含む肝機能障害、出血及び／又は梗塞を含む消化管機能障害並びに多臓器不全（ＭＳＯＤ）或いは急性全身性炎症痛症候群（ａｃｕｔｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）（ＳＩＲＳ）により明らかとなりうる。該損傷は、血液供給が遮断された身体部において生じ得、或いは虚血期中に血液を十分に供給されている体部において生じうる。
【０１２９】
（脳卒中）
脳卒中は血管の疾患又は損傷から生じる急性脳損傷に対する一般的用語である。脳卒中は少なくとも２つの主要カテゴリー：出血性脳卒中（正常血管の外部への血液の漏出から生じる）及び虚血性脳卒中（血液供給不足による脳虚血）に分類することができる。虚血性脳卒中を引き起こしうる一部の事象には、血栓、塞栓及び全身性低循環（結果的に虚血及び低酸素を伴う）が含まれる。
【０１３０】
一般的に、脳卒中は酸素欠乏及び二次事象による脳内の神経細胞の死及び損傷を引き起こす。血液供給不足又は他の損傷の結果として死滅する脳領域は梗塞と称される。場合により、本明細書で述べる処置を用いて、例えば、神経細胞の死及び損傷を引き起こす二次事象を低減することにより、梗塞サイズを縮小させ、或いは最小化することができる。
【０１３１】
通常、脳動脈壁に蓄積した血栓から生じる大脳動脈の閉塞は脳血栓と称される。脳塞栓では、大脳動脈をブロックする閉塞性物質が循環の下流に生じる（例えば、塞栓子は心臓から大脳動脈に運搬される）。脳卒中が血栓又は塞栓のいずれによって引き起こされるかを識別することは困難であるため、血栓塞栓症という用語がこれらの両タイプの脳卒中を網羅するのに用いられる。全身性低循環は、血液濃度の低下、ヘマトクリット値の低下、低血圧又は血液を適切に送り込む心臓の能力低下の結果として生じうる。
【０１３２】
血栓塞栓性脳卒中の処置には組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）のような血栓溶解薬が用いられている。これらの分子は、虚血の原因となる血栓を溶解させることによって機能する。そのような薬剤は、虚血部位における大脳血流を少なくとも部分的に回復させ、且つ神経細胞生存能を維持するため、急性脳卒中後、可能な限り速やかに（好ましくは、３時間以内に）投与される場合、最も有用であると考えられている。血栓塞栓性脳卒中を起こした被験体において治療上の利益を得るため、そのような血栓溶解薬の代替として、或いは血栓溶解薬と組み合わせてＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。
【０１３３】
血栓溶解薬は出血を増悪させるため、出血性脳卒中におけるその使用は禁忌である。しかし、出血性脳卒中の場合において治療上の利益を付与するのにＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。
【０１３４】
更に、ＶＬＡ−１アンタゴニストは予防的脳卒中治療として、或いはその構成要素として、例えば、ＴＩＡを起こし、或いはＴＩＡの症状を示している被験体に投与することができる。脳卒中の症状が２４時間未満持続し、被験体が完全に回復する場合、被験体は一過性虚血発作（ＴＩＡ）を起こしたといわれる。ＴＩＡの症状には、発話、視覚、感覚又は動作の一時的な障害が含まれる。ＴＩＡは本格的な脳卒中の前兆であると考えられることが多く、ＴＩＡを起こした被験体は、例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニスト単独による、或いは別の薬剤、例えば、抗凝固剤（例えば、クマリン及びヘパリン）又は抗血小板薬（例えば、アスピリン及びチクロピジン）を併用した予防的脳卒中治療の適応となる。
【０１３５】
（他の脳卒中処置）
脳卒中処置は、１つ又はそれ以上の脳卒中処置と組み合わせて用いることができる、１つ又はそれ以上のＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を伴いうる。該処置は同時に施行することができるが、別個の時間に、例えば、所定の間隔内の別個の時間に、例えば、同じ４８，２４，１２，６，２又は１時間以内に施行することもできる。更に、該処置は明確な投与様式を用いて施行することができる。
【０１３６】
ＶＬＡ−１アンタゴニストを併用して施行することができる処置には、血栓溶解薬（例えば、ストレプトキナーゼ、アシル化プラスミノーゲン・ストレプトキナーゼ活性化因子
複合体（ＡＳＰＡＣ）、ウロキナーゼ、１本鎖ウロキナーゼ・プラスミノーゲン活性化因子（ｓｃｕ−ＰＡ）、抗炎症剤、蛇毒由来トロンビン様酵素、例えば、アンクロド、トロンビン阻害剤、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）及び上記各々の生物活性変異体）；抗凝固剤（例えば、ワルファリン又はヘパリン）；抗血小板薬（例えば、アスピリン）；糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤；グリコサミノグリカン；クマリン；ＧＣＳＦ；メラトニン；カスパーゼ阻害剤；抗酸化剤（例えば、ＮＸＹ−０５９、Ｌｅｅｓら（２００６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ ３５４，５８８−６００を参照）、神経保護剤（例えば、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬及びカンナビノイド拮抗薬）、抗ＣＤ１８抗体；抗ＣＤ１１ａ抗体；抗ＩＣＡＭ−１抗体；抗ＶＬＡ−４抗体、抗ＴＷＥＡＫ抗体、抗ＴＷＥＡＫ−Ｒ抗体、頸動脈内膜剥離術；血管形成術；ステントの挿入；並びに代替医療（例えば、鍼治療、漢方、瞑想、マッサージ、高圧酸素治療又は教育学的治療法（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅ
ｐｅｄａｇｏｇｙ））が含まれる。
【０１３７】
併用処置の特定例には、脳卒中症状の発症直後に脳卒中を起こした被験体にＶＬＡ−１アンタゴニストを投与すると同時に、別の処置として、例えば、ｔ−ＰＡを投与することを含む。翌日、被験体は、更に、以後の脳卒中を防ぐため、抗血小板薬による毎日の処置を開始し、その後、ＶＬＡ−１アンタゴニストの生物学的利用能を維持するため、追加用量のＶＬＡ−１アンタゴニストを服用しうる。別例として、ＴＩＡを起こした被験体は、ＴＩＡの診断直後に、少なくとも１週間、生物学的効果を付与する用量にてＶＬＡ−１アンタゴニスト処置を開始し、次に、翌日、抗血小板治療を開始しうる。
【０１３８】
（脳卒中のリスク因子）
脳卒中のリスク因子を用いて、予防的用量のＶＬＡ−１アンタゴニストを付与されうる被験体又はＶＬＡ−１アンタゴニストによる処置が必要とされる更なる兆候をモニタリングすべき被験体を特定することができる。場合により、被験体は、２，３若しくは４つ又はそれ以上のリスク因子、例えば、下記一覧の因子を有する場合、処置される。
【０１３９】
高血圧：高血圧（１４０／９０ｍｍＨｇ又はそれ以上）は極めて有意な脳卒中のリスク因子である。
【０１４０】
喫煙：喫煙は主要な予防可能な脳卒中のリスク因子である。たばこの煙中のニコチン及び一酸化炭素は血中酸素量を減少させる。これらは血管壁も損傷させ、凝塊をより形成しやすくさせる。喫煙と共に一部の種類の経口避妊薬を用いると、脳卒中リスクが大幅に上昇する。
【０１４１】
糖尿病：糖尿病は２回測定された１２６ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時血漿グルコース（血糖）と定義づけられる。糖尿病は治療可能であるが、糖尿病を有することは依然として脳卒中リスクを高める。糖尿病を有する多くの被験体は、高血圧、高血中コレステロールも有し、過体重である。これらの追加因子は脳卒中リスクを更に高める。
【０１４２】
頸動脈又は他の動脈疾患：頸部における頸動脈は血液を脳に供給する。アテローム性動脈硬化由来の脂肪性沈着物（動脈壁におけるプラークの蓄積）によって狭窄した頸動脈は、凝血塊によって遮断されうる。頸動脈疾患は頸動脈狭窄とも称される。
【０１４３】
末梢血管疾患：末梢血管疾患を有する被験体は頸動脈疾患のリスクが高く、これは脳卒中リスクを高める。末梢血管疾患は脚及び腕の筋肉へ血液を供給する血管の狭窄である。これは動脈壁における脂肪性沈着物のプラークによって生じる。
【０１４４】
心房細動は脳卒中リスクを高める。心臓の上方室が規則的に拍動するのではなく振動し、これは血液を貯留・凝固させうる。凝血塊が剥離し、血流に入り込み、脳に至る動脈に詰まると、脳卒中となる。
【０１４５】
他の心疾患：冠状動脈性心疾患又は心不全を有する被験体は、正常に働く心臓を有する被験体より高い脳卒中リスクを有する。拡張型心筋症（肥大した心臓）、心臓弁膜症及び一部のタイプの先天性心臓欠陥も脳卒中リスクを高める。
【０１４６】
一過性虚血発作（ＴＩＡ）：ＴＩＡは、脳卒中様症状を生じさせるが、持続的な損傷を生じさせない「警告脳卒中」である。ＴＩＡを認識・処置することにより、重症脳卒中のリスクを低減することができる。
【０１４７】
一部の血液障害：赤血球数の増加は血液を増粘させ、凝血塊を生じさせる可能性を高める。これは脳卒中リスクを高める。鎌状赤血球病（鎌状赤血球貧血とも称される）は、主にアフリカ系アメリカ人に影響を及ぼす遺伝性疾患である。「鎌状」赤血球は、身体の組織及び臓器へ酸素を運搬する能力が低下し、血管に粘着する傾向があり、これにより、脳への動脈が遮断され、脳卒中が引き起こされうる。
【０１４８】
高血中コレステロール：高濃度の血中総コレステロール（２４０ｍｇ／ｄＬ以上）は心疾患の主要なリスク因子であり、これは脳卒中リスクを高める。高濃度のＬＤＬコレステロール（１００ｍｇ／ｄＬ超）及びトリグリセリド（血中脂質、１５０ｍｇ／ｄＬ以上）は、冠状動脈性心臓病、虚血性脳卒中又は一過性虚血発作（ＴＩＡ）の既往を有する被験体において脳卒中リスクを高める。低濃度（４０ｍｇ／ｄＬ未満）のＨＤＬコレステロールも脳卒中リスクを高めうる。
【０１４９】
運動不足及び肥満：非活動性、肥満又はその両方の状態は、高血圧、高血中コレステロール、糖尿病、心疾患及び脳卒中のリスクを高めうる。
【０１５０】
過度の薬物乱用：過量のアルコールの飲酒及び静注薬物使用も脳卒中リスクを高めうる。
【０１５１】
加齢：小児を含むあらゆる年齢層の被験体が脳卒中を有するが、被験体が老齢であるほど脳卒中リスクが高まる。例えば、５５，６０，７０，８０又は８５歳以上でリスクは一層高くなりうる。
【０１５２】
性別（ジェンダー）：脳卒中は女性よりも男性において一般的である。ほとんどの年齢層において、任意の年において女性より多くの男性が脳卒中を有する。しかし、女性は全脳卒中死の半数以上を占める。妊娠女性はより高い脳卒中リスクを有する。
【０１５３】
遺伝（家族歴）：親、祖父母、姉妹又は兄弟が脳卒中を有したことがある場合、脳卒中リスクは高くなる。同様に、ある種の民族的背景は脳卒中リスクの上昇をもたらしうる。
【０１５４】
脳卒中又は心臓発作の既往：脳卒中又は心臓発作を有したことがある被験体は、その後、脳卒中を有するリスクがはるかに高くなる。
【０１５５】
（脳卒中評価基準）
脳卒中を有し、或いは脳卒中のリスクがある被験体を処置するＶＬＡ−１アンタゴニストの能力は、例えば、様々な基準を用いて主観的又は客観的に評価することができる。多くの評価ツールが評価することに利用できる。
【０１５６】
例示的な入院前脳卒中評価ツールには、シンシナチ脳卒中スケール（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ）及びロサンゼルス入院前脳卒中スクリーン（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ Ｐｒｅｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃｒｅｅｎ）（ＬＡＰＳＳ）が含まれる。急性期評価スケールには、例えば、カナダ神経学的スケール（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃａｌｅ）（ＣＮＳ）、グラスゴー・コーマ・スケール（ＧＣＳ）、半球脳卒中スケール（Ｈｅｍｐｉｓｐｈｅｒｉｃ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ）、Ｈｕｎｔ及びＨｅｓｓスケール、Ｍａｔｈｅｗ脳卒中スケール、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、ＮＩＨ脳卒中スケール（ＮＩＨＳＳ）、Ｏｒｇｏｇｏｚｏ脳卒中スケール、オックスフォードシャー地域脳卒中プロジェクト分類（Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｓｔｒｏｋｅ Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（Ｂａｍｆｏｒｄ）並びにスカンジナビア脳卒中スケールが含まれる。機能的評価スケールには、ベルグ・バランススケール（Ｂｅｒｇ Ｂａｌａｎｃｅ Ｓｃａｌｅ）、修正ランキンスケール（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｒａｎｋｉｎ Ｓｃａｌｅ）、脳卒中影響スケール（Ｓｔｒｏｋｅ Ｉｍｐａｃｔ Ｓｃａｌｅ）（ＳＩＳ）及び脳卒中特有生活の質評価（Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｍｅａｓｕｒｅ）（ＳＳ−ＱＯＬ）が含まれる。アウトカム評価ツールには、米国心臓協会脳卒中アウトカム分類（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｔｒｏｋｅ Ｏｕｔｃｏｍｅ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＡＨＡ ＳＯＣ）、バーセル指数、機能的自立度評価法（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）（ＦＩＭ（商標））、グラスゴー・アウトカム・スケール（Ｇｌａｓｇｏｗ Ｏｕｔｃｏｍｅ Ｓｃａｌｅ）（ＧＯＳ）並びに健康調査（Ｈｅａｌｔｈ Ｓｕｒｖｅｙ）ＳＦ−３６（商標）及びＳＦ−１２（商標）が含まれる。他の診断及びスクリーニング検査には、アクションリサーチ・アームテスト（Ａｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｒｍ Ｔｅｓｔ）、素晴らしき認知症スケール（Ｂｌｅｓｓｅｄ−Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ｓｃａｌｅ）、素晴らしき認知症情報・記憶・集中力検査（Ｂｌｅｓｓｅｄ−Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ−Ｍｅｍｏｒｙ−Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）、血管性認知症の診断のためのＤＳＭ−ＩＶ基準、Ｈａｃｈｉｎｓｋｉ虚血スケール、ハミルトンうつ病評価尺度（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、血管性認知症の診断のためのＮＩＮＤＳ−ＡＩＲＥＮ基準、Ｏｒｐｉｎｇｔｏｎ予後スコア、見当識・記憶・集中力小検査（Ｓｈｏｒｔ Ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ−Ｍｅｍｏｒｙ−Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）、心筋梗塞における血栓（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｉｎ Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）グレード評価スキーム、ＭＲＩ画像検査（例えば、拡散・灌流画像法（Ｈｅｎｎｉｎｇｅｒら、Ｓｔｒｏｋｅ ３７：１２８３−１２８７，２００６）、拡散強調（ＤＷＩ）ＭＲＩ法及びフロー感知画像（ｆｌｏｗ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｍａｇｉｎｇ）、例えば、水抑制反転回復（ｆｌｕｉｄ−ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒｅｃｏｖｅｒｙ）（ＦＬＡＩＲ））、機能及び分光画像（Ｋｏｒｏｓｈｅｔｚ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３９：２８３−２８４，１９９６）並びにＰＥＴ（Ｈｅｉｓｓら、Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｂｒａｉｎ Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｖ．５：２３５−２６３，１９９３）などが含まれる。
【０１５７】
評価はＶＬＡ−１アンタゴニストの投与前及び／又は投与後に行うことができる。
【０１５８】
（外傷性脳損傷）
本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストは外傷性脳損傷を処置するのに用いることができる。物理的力による脳に対する損傷は外傷性脳損傷（ＴＢＩ）と広義に称される。ＴＢＩの結果としての作用は、脳の構造及び／又は機能の変化に起因する、正常な脳プロセスの変化を引き起こす。脳損傷には開放性頭部損傷と閉鎖性頭部損傷の２つの基本的なタイプがある。開放性頭部損傷では、弾丸のような物体が頭蓋骨を貫通し、脳組織を損傷させる。通常、閉鎖性頭部損傷は、脳が前後に煽られ、頭蓋骨の内側に跳ね返る間の頭部の急激な動きによって引き起こされる。閉鎖性頭部損傷はこの２つ中で最も一般的であり、自動車又は転落に関わる事故から生じることが多い。閉鎖性頭部損傷では、蛮力又は強力な振動が脳を損傷させる。この急激な動きの圧迫は神経線維又は軸索を引き裂いて引き伸ばし、脳の異なる部分の間の結合を破壊する。ほとんどの場合、結果として生じる凝血塊又は血腫が脳又はその周囲を押し付け、頭部内圧を上昇させる。開放性及び閉鎖性頭部損傷は脳に重度の損傷を引き起こし、早急な治療を必要とすることになりうる。
【０１５９】
頭部を打ちつける力のタイプにより、以下のような様々な損傷：頭蓋骨内の脳の震動、震盪、頭蓋骨骨折、挫傷、硬膜下血腫又はびまん性軸索損傷が生じうる。各被験体の体験は異なるが、多くの被験体がＴＢＩに関して直面する共通の支障がある。報告されている可能性には、集中困難、無効な問題解決、短期・長期記憶障害及び運動若しくは感覚能力の低下が含まれ、摂食、着衣又は入浴のような日常生活技能を自立して行うことができなくなるほどである。最も広範に受け入れられている脳損傷の概念では、プロセスを一次性及び二次性事象に分ける。一次性脳損傷は衝撃時にある程度完結したものとみなされるが、二次損傷は外傷後数時間から数日にわたって進展する。
【０１６０】
一次性損傷は、交通事故のような救急事態又は一時的な意識喪失若しくは頭蓋骨骨折を引き起こす如何なることとも一般的に関連する損傷である。挫傷又は打撲傷様損傷は特定の衝撃位置下に生じることが多い。閉鎖性頭部損傷後の頭蓋骨内の脳の転位及び回旋は、長く結合している脳の神経線維又は軸索への剪断損傷をもたらし、これはびまん性軸索損傷と称される。裂傷は、脳が頭蓋骨内隆起に跨って回旋することによって引き起こされる、前頭葉・側頭葉又は血管の断裂と定義づけられる。血腫又は凝血塊は小血管が損傷によって破裂する際に生じる。これらは、頭蓋骨と脳の間（硬膜外又は硬膜下血腫）或いは脳実質自体の内部（脳内血腫）に生じうる。いずれの場合でも、十分に大きい場合、これらは脳を圧迫或いは転位させ、脳幹内の敏感な構造を損傷させる。また、これらは頭蓋骨内圧を上昇させ、最終的に脳への血液供給を遮断しうる。
【０１６１】
細胞レベルでの続発性二次性損傷は、脳損傷後に生じる最終的な組織喪失の主要原因と認識されるようになった。損傷組織では一連の生理、血管及び生化学事象が発動する。このプロセスは多数の系に関与し、神経ペプチド、カルシウム及びマグネシウムのような電解質、興奮性アミノ酸、プロスタグラジン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｄｉｎｓ）及びロイコトリエンのようなアラキドン酸代謝産物並びに酸素フリーラジカル形成の変化の可能性を含む。この二次性組織損傷が、脳損傷を有する被験体が被りうる大部分の長期重度有害作用の根底にある。この損傷を最小限にする処置は、正常若しくは正常に近い状態への回復又は恒久的障害の相違となりうる。
【０１６２】
広範な血管損傷は脳損傷の主要構成要素として益々関わるようになっている。血管反応は二相性であるように思われる。外傷の重症度により、初期変化には、血圧の初期上昇、脳血管の自動調節の初期喪失及び血液脳関門（ＢＢＢ）の一時的機能停止が含まれる。血管の変化は損傷後約６時間にて最大となるが、６日間も持続しうる。これらの血管の変化の臨床的意義は未だ不明であるが、特に若年被験体において認められることが多い遅発性脳腫脹に関連しうる。
【０１６３】
同様に、脳挫傷が脳壊死を生じさせるプロセスは複雑であり、また、数時間にわたって持続する。毒性プロセスには、酸素フリーラジカルの放出、細胞膜に対する損傷、カルシウムの流入に対するイオンチャネルの開口、サイトカインの放出並びに血管攣縮及び虚血を引き起こしうる高反応性物質中への遊離脂肪酸の代謝が含まれる。フリーラジカルは二次性損傷のほぼすべての機序のある時点で形成される。フリーラジカルの第一標的は細胞膜の脂肪酸である。脂質過酸化反応として周知のプロセスは、幾何級数的に進行する態様にて神経、グリア及び血管細胞膜を損傷させる。脂質過酸化反応は、抑制されないと、細胞膜表面上に拡大し、最終的に細胞死をもたらす。従って、フリーラジカルは、内皮細胞を損傷させ、血液脳関門（ＢＢＢ）に障害を与え、脳細胞を直接損傷させて、浮腫並びに
ニューロン及びグリアの構造変化を引き起こす。ＢＢＢの障害は脳浮腫及び脳細胞の損傷性血液由来産物への暴露の原因である。
【０１６４】
二次性全身性損傷（脳外）はその結果として脳への更なる損傷をもたらしうる。これは、あらゆる重症度の脳損傷後、特に、複数の損傷と関連する場合、極めて一般的である。従って、脳損傷を有する被験体は、脳損傷後数日間における再発間隔にて、低血中酸素、血圧、心肺の変化、発熱、血液凝固障害及び他の有害な変化の組合せを経験しうる。これらが生じるのは、そのような有害事象時に脳血管が弛緩して酸素及び血液の適切な供給を維持することができる正常な調節機構が、最初の外傷の結果として損なわれるときである。
【０１６５】
即時評価のプロトコルはその効率性及び信頼性において限界があり、侵襲的であることが多い。現在、コンピュータ支援断層撮影（ＣＴ）スキャンは、一次性脳損傷と関連する多くの異常を識別することができ、広範に利用でき、比較的低コストにて行うことができるため、ＴＢＩを評価するための標準的な診断処置として受け入れられている（Ｍａｒｉｋら、Ｃｈｅｓｔ １２２：６８８−７１１ ２００２；ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ ２３：７７５−７９１ ２００１）。しかし、ＴＢＩを有して救急科を受診する被験体の診断及び管理でのＣＴスキャンの使用は施設間で異なり得、ＣＴスキャン結果自体がＴＢＩ被験体において、特に、軽度ＴＢＩ損傷の場合、神経精神病学的転帰の不良予測因子となりうる（ＭｃＣｕｌｌａｇｈら、Ｂｒａｉｎ Ｉｎｊｕｒｙ １５：４８９−４９７ ２００１）。
【０１６６】
通常、ＴＢＩの即時処置は、脳内とその周囲における出血を制御するための手術、頭蓋内圧のモニタリング及び制御、脳への適切な血流の確保並びに他の損傷及び感染に対する身体処置を伴う。軽度脳損傷を有する被験体は軽微な症状を起こすことが多く、数日又は数週間、処置を引き延ばすことがある。被験体が治療を求めることを選択すると、診察、神経学的検査、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャン、シングルフォトンエミッションＣＴ（ＳＰＥＣＴ）スキャン、髄液中の神経伝達物質濃度のモニタリング、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン及びＸ線を用いて、被験体の損傷の程度を判定しうる。損傷のタイプ及び重症度によって更なるケアが決定する。
【０１６７】
ＴＢＩを受けた被験体において治療上の利益を果たすため、単独で、或いは別の処置と組み合わせてＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。更に、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、予防的ＴＢＩ治療として、或いはその構成要素として、例えば、ＴＢＩを受け、或いはＴＢＩの症状を示している被験体に投与することができる。例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、一次性損傷、二次性損傷又はその両方を処置するのに用いることができる。或いは、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、一次性損傷の処置に、また、二次性損傷の予防的治療として用いることができる。ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与前及び／又は投与後に評価を行うことができる。
【０１６８】
（脊髄損傷）
本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストは脊髄損傷を処置するのに用いることができる。脊髄損傷（ＳＣＩ）は脊髄に対する損傷であり、その正常な運動、感覚又は自律神経機能の一時的或いは恒久的変化をもたらす。臨床試験及び実験的試験では、急性ＳＣＩ後、脊髄が一次性及び二次性損傷を被ることを立証している。一次性ＳＣＩは、機械的破裂、離断、硬膜外損傷又は神経要素の逸れから生じる。通常、この損傷は脊椎の骨折及び／又は脱臼で生じる。しかし、一次性ＳＣＩは脊椎の骨折又は脱臼の非存在下で生じうる。弾丸又は武器による貫通性損傷も一次性ＳＣＩを引き起こしうる（Ｂｕｒｎｅｙら、Ａｒｃｈ Ｓｕｒｇ １２８（５）：５９６−９（１９９３））。より一般的には、変位した骨片が貫通性の脊髄又は分節脊髄神経損傷を引き起こす。硬膜外損傷も一次性ＳＣＩを引き起こしうる。脊髄硬膜外血腫又は膿瘍は急性脊髄圧迫及び損傷を引き起こす。転移性疾患由来の脊髄圧迫は一般的な腫瘍の救急事態である。屈曲又は伸長の有無に関わらない脊柱の縦方向の逸れは、脊椎の骨折又は脱臼を伴わない一次性ＳＣＩをもたらしうる。ＶＬＡ−１アンタゴニストを用いて一次性脊髄損傷を処置することができる。
【０１６９】
二次性ＳＣＩの病態生理は、損傷後の最初の数日にわたって進行する、多数の細胞及び分子事象に関わる（Ｔａｔｏｒ，Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５：４０７−４１３（１９９５））。二次性ＳＣＩの最も重要な原因は、動脈破壊、動脈血栓及びショックに起因する低灌流によって引き起こされる、脊髄への血管損傷である。ＳＣＩは脊髄動脈に対する損傷又は侵害に由来する虚血を通して持続されうる。虚血に起因するＳＣＩは、大動脈血流が一時的に停止される手術中に生じうる。本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストを用いて二次性ＳＣＩ損傷を処置或いは予防することができる。
【０１７０】
脊髄損傷は毒性によっても引き起こされうる（Ｔａｔｏｒ，Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５：４０７−４１３（１９９５））。脊髄損傷における最も強力な毒性の１つは、興奮性アミノ酸神経伝達物質の蓄積及びこれによる引き続いての損傷である。グルタミン酸誘発性興奮毒性は細胞内カルシウムの上昇を引き起こす。次に、細胞内カルシウムの上昇はカルシウム依存性プロテアーゼ又はリパーゼの活性化を引き起こし得、これは、ニューロフィラメントを含む細胞骨格成分の分解及び細胞膜の溶解に起因する更なる損傷を生じさせる。アラキドン酸及びプロスタグランジンのようなエイコサノイドの過剰産生は、脂質過酸化反応及び酸素フリーラジカルに関連しうる。次に、損傷したニューロン膜からの血管作用性エイコサノイドの放出は、血管攣縮を誘発することによって進行性の外傷後虚血を引き起こしうる。局所又は全身循環に対する作用により、或いは損傷脊髄に対する直接作用により、内因性オピオイドも二次性損傷プロセスに関与しうる。本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストを用いて毒性から生じる脊髄損傷を処置或いは予防することができる。
【０１７１】
重大で進行性の浮腫が脊髄損傷に続発しうる。浮腫自体が有害であるか、或いは別の損傷機構、例えば、虚血又はグルタミン酸毒性の付帯現象であるかは不明である。浮腫は実験モデル及び臨床例において、脊髄において損傷部位から相当な距離で吻側及び尾側に拡大しうる。
【０１７２】
ＳＣＩは、米国脊髄損傷協会機能評価スケール（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｐｉｎａｌ Ｉｎｊｕｒｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＳＩＡ）Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃａｌｅ）に従って、損傷の程度に基づいて完全又は不完全に分類される。完全ＳＣＩでは、最下位仙骨分節において感覚及び運動機能が保存されていない（Ｗａｔｅｒｓら、Ｐａｒａｐｌｅｇｉａ ２９（９）：５７３−８１（１９９１））。不完全ＳＣＩでは、最下位仙骨分節を含む損傷レベル下方に感覚又は運動機能が保存されている（Ｗａｔｅｒｓら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ ７５（３）：３０６−１１（１９９４））。不完全脊髄損傷はより完全な損傷に進展しうる。より一般的には、初期事象後数時間から数日間、損傷レベルは１又は２の脊髄レベルにて上昇する。
【０１７３】
ＳＣＩの他の分類には、脊髄中心症候群、ブラウン・セカール症候群、脊髄前方症候群、脊髄円錐症候群及び馬尾症候群が含まれる。脊髄中心症候群は、仙骨感覚が低下し、下肢よりも大きい上肢の衰弱をもたらす頸部損傷と関連することが多い。ブラウン・セカール症候群は、対側の疼痛及び温度に対する感受性の喪失を伴う、比較的大きな同側の固有感覚及び運動感覚の喪失を引き起こす、脊髄の半側切断損傷に関わる。脊髄前方症候群は、運動機能並びに疼痛及び温度に対する感受性の変動的喪失を引き起こすが、固有感覚は維持される障害と関連することが多い。脊髄円錐症候群は仙髄及び腰髄神経根に対する損傷と関連する。この症候群は、膀胱、腸及び下肢における反射消失を特徴とするが、仙骨分節は反射の維持を示すこともありうる（例えば、球海綿体反射及び排尿反射）。馬尾症候群は、無反射性の膀胱、腸及び下肢をもたらす、脊柱管における腰仙部神経根に対する損傷に起因する。
【０１７４】
ＳＣＩから神経原性ショックが生じうる（Ｔａｔｏｒ，Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５：４０７−４１３（１９９５））。神経原性ショックとは、急性ＳＣＩにおける自律神経機能障害及び交感神経系制御障害から生じる低血症、徐脈及び末梢血管拡張の血行力学的三徴候を指し、脊髄ショック及び乏血性ショックと識別される。乏血性ショックは頻脈と関連する傾向にある。脊髄ショックは、自律神経機能障害と関連する、特定レベル下方の反射及び直腸の緊張を含む全神経機能の完全喪失と定義づけされる。カテコールアミンの放出により初期血圧上昇が認められ、次に、低血圧が続く。腸及び膀胱を含む弛緩性麻痺が認められ、持続勃起が発現する。これらの症状は、損傷レベル下方の反射弓が再び機能し始めるまで、数時間から数日間、持続する傾向にある。
【０１７５】
ＳＣＩの現行治療は、該疾患を有する被験体における運動機能及び運動感覚を改善することを目的とする。コルチコステロイドが治療の中心である。メチルプレドニゾロンのようなグルココルチコイドは急性ＳＣＩの二次作用を低下させると考えられ、非貫通性急性ＳＣＩにおける高用量メチルプレドニゾロンの使用は北米でケアの基準となっている。本明細書で述べるようないずれの分類のＳＣＩ又はその症状を処置するのに、本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。ＶＬＡ−１アンタゴニストは単独で、或いは別の既知のＳＣＩ治療法と組み合わせて用いることができる。
【０１７６】
（医薬組成物）
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、例えば、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩを処置するための被験体への投与のための医薬組成物として製剤化することができる。通常、医薬組成物は医薬的に許容可能な担体を含む。本明細書で用いられるように、「医薬的に許容可能な担体」は、生理的に適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。該組成物は医薬的に許容可能な塩、例えば、酸付加塩又は塩基付加塩を含みうる（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ら（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照）。
【０１７７】
ＶＬＡ−１アンタゴニストは標準的な方法に従って製剤化することができる。製剤処方は十分に確立した技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；及びＫｉｂｂｅ（編）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、第３版（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）に更に述べられている。
【０１７８】
一実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、賦形剤物質、例えば、塩化ナトリウム、第二リン酸ナトリウム七水和物、第一リン酸ナトリウム及び安定剤で製剤化することができる。これは、例えば、好適な濃度で緩衝液中に入れることができ、２〜８℃で保存することができる。
【０１７９】
該医薬組成物は様々な形態でよい。その形態には、例えば、液体、半固体及び固体剤形、例えば、溶液（例えば、注射用及び注入用溶液）、分散剤又は懸濁剤、錠剤、ピル、粉末、リポソーム並びに坐剤が含まれる。好ましい形態は目的とする投与様式及び治療用途に依存しうる。典型的には、本明細書で述べる薬剤の組成物は注射用又は注入用溶液の形態である。
【０１８０】
このような組成物は非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内又は筋肉内注射）によって投与することができる。本明細書で用いられるような「非経口投与」及び「非経口投与される」という語句は、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、通常、注射による投与であり、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経皮気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、髄腔内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内及び胸骨内注射・注入を含む。
【０１８１】
該組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム又は高濃度での安定保存に適した他の規則構造物として製剤化することができる。無菌注射用溶液は、本明細書で述べる薬剤を必要量にて、必要とされる通りに上記一覧の成分の１つ又は組合せと共に適切な溶媒に組み入れ、次に、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散剤は、本明細書で述べる薬剤を、塩基性分散媒及び上記一覧の成分からの必要な他の成分を含む無菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、本明細書で述べる薬剤の粉末に加え、事前に濾過滅菌された溶液由来の任意の所望の追加成分を生じさせる真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散剤の場合、必要な粒子サイズの維持により、また、界面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、該組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアレート塩及びゼラチンを含有させることによってもたらされうる。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、該化合物を速放から保護する担体を用いて調製され得、例えば、インプラントを含む放出制御製剤及びマイクロカプセル化送達系である。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル及びポリ乳酸を用いることができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は特許化され、或いは公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（編）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０１８３】
例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、例えば、血液、血清又は他の組織中の循環におけるその安定化及び／又は保持を、例えば、少なくとも１．５，２，５，１０又は５０倍向上させる部分で修飾することができる。該修飾アンタゴニストは、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩ後、損傷部位に到達することができるかを評価するため、評価されうる（例えば、標識形態のアンタゴニストを用いることにより）。
【０１８４】
例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、ポリマー、例えば、実質的に非抗原性のポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシド又はポリエチレンオキシドと結合させることができる。好適なポリマーは重量で実質的に異なる。約２００〜約３５，０００ダルトン（又は約１，０００〜約１５，０００及び２，０００〜約１２，５００）の範囲の数平均分子量を有するポリマーを用いることができる。
【０１８５】
例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコール又はポリビニルピロリドンにコンジュゲートすることができる。このようなポリマーの非限定的一覧には、ポリアルキレンオキシドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー並びにそれらのブロックコポリマーが含まれる。但し、ブロックコポリマーの水溶性は維持されるものとする。更なる有用なポリマーには、ポリオキシアルキレン、例えば、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン及びポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー（プルロニックス（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ））；ポリメタクリレート；カルボマー；並びに分岐又は非分岐多糖が含まれる。
【０１８６】
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）が第二の薬剤と併用される場合、その２つの薬剤は別個或いは共に製剤化することができる。例えば、それぞれの医薬組成物は、例えば、投与直前に混合されて共に投与することができ、或いは、例えば、同時又は異なる時間に別個に投与することができる。
【０１８７】
（投与）
本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、被験体、例えば、ヒト被験体に種々の方法によって投与することができる。多くの用途では、投与経路は、静脈内注射若しくは注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）又は筋肉内注射の１つである。場合により、投与はＣＮＳ内、例えば、鞘内、脳室内（ＩＣＶ）、脳内又は頭蓋内に直接行われうる。該アンタゴニストは固定用量として、或いはｍｇ／ｋｇ用量にて投与することができる。
【０１８８】
投与量は該アンタゴニストに対する抗体の生成を低減或いは阻止するように選択することもできる。
【０１８９】
遮断剤の投与経路及び／又は様式は、例えば、断層画像、神経学的検査及び脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩと関連する標準的パラメータ、例えば、本明細書で述べる評価基準を用いて、例えば、被験体をモニタリングすることにより、個々の症例に合うように調整することもできる。
【０１９０】
投与レジメンは、所望の応答、例えば、治療応答又は組合せ治療効果を付与するように調整される。一般に、被験体に生物利用可能量の薬剤を与えるため、任意の組合せの用量（個別又は共調合）のＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）（及び任意に第二の薬剤）を用いることができる。例えば、０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ，０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ，０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ，０．１〜５ｍｇ／ｋｇ又は０．３〜３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。
【０１９１】
本明細書で用いられるような用量単位形態又は「固定用量」とは、処置対象の被験体に単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と組み合わせ、また、任意に他の薬剤と組み合わせて、所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含む。
【０１９２】
ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中症状若しくは徴候、ＴＢＩ症状又はＳＣＩ症状の発現後、約１０分〜約４８時間、より好ましくは、約１０分〜約２４時間、より好ましくは、３時間以内に少なくとも１回投与されうる。単回又は複数回投与が行われうる。代替的或いは付加的に、該アンタゴニストは連続注入によって投与されうる。脳卒中による虚血損傷を最小限にし、脳卒中後の炎症事象による損傷を最小限にし、別の脳卒中を予防し、或いは続発する脳卒中から生じうる損傷を最小限にし、一次性又は二次性ＴＢＩ若しくは症状を処置し、或いは一次性又は二次性ＳＣＩ若しくは症状を処置するため、該処置は、数日間、数週間、数カ月又は更に数年間継続しうる。
【０１９３】
例えば、被験体が脳卒中のリスクを有し、或いはＴＩＡを起こした場合、該アンタゴニストは予防措置として脳卒中の発症前に投与することができる。そのような予防的処置の期間は該アンタゴニストの単回投与でよく、或いは該処置は継続し得（例えば、複数回投与）、例えば、脳卒中のリスクがある被験体は、脳卒中が生じることを予防するため、数日間、数週間、数カ月又は更に数年間、該アンタゴニストで処置されうる。
【０１９４】
医薬組成物は治療有効量の本明細書記載のアンタゴニストを含む。そのような有効量は、投与アンタゴニストの効果、又は、２つ以上の薬剤が使用される場合、アンタゴニストと第二の薬剤との組合せ効果に基づいて決定することができる。また、アンタゴニストの治療有効量は、被験体の病態、年齢、性別及び体重のような因子並びに被験体において所望の応答を惹起する該化合物の能力、例えば、少なくとも１つの疾患パラメータ、例えば、脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩパラメータの改善、又は、疾患、例えば、脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩの少なくとも１つの症状の改善により異なりうる。治療有効量は、治療上有益な効果が該組成物の如何なる毒性又は有害作用をも上回る量でもある。
【０１９５】
（デバイス及びキット）
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）を含む医薬組成物は、医療デバイスを用いて投与することができる。該デバイスは、例えば、未熟な被験体又は当該分野の救急スタッフが救急事態において使用でき、医療施設及び他の医療装置に移動させることができるように、可搬性、室温保存及び使用容易性のような特徴を持たせて設計することができる。該デバイスは、例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストを含む医薬調製物を収納するための１つ又はそれ以上の収容部を含み得、１又はそれ以上の単位用量の該アンタゴニストを送達するように構成されうる。
【０１９６】
例えば、該医薬組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号；第５，３８３，８５１号；第５，３１２，３３５号；第５，０６４，４１３号；第４，９４１，８８０号；第４，７９０，８２４号；又は第４，５９６，５５６号に開示されているデバイスのような無針皮下注射デバイスを用いて投与することができる。周知のインプラント及びモジュール例には、制御速度にて薬剤を分注するための埋め込み型微量注入ポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通して薬剤投与するための治療デバイスを開示している米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度にて薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３３号；連続的薬剤送達のための変流量埋め込み型注入装置を開示している米国特許第４，４４７，２２４号；多室コンパートメントを有する浸透性薬剤送達系を開示している米国特許第４，４３９，１９６号；及び浸透性薬剤送達系を開示している米国特許第４，４７５，１９６号が含まれる。他の多くのデバイス、インプラント、送達系及びモジュールも公知である。
【０１９７】
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）はキットにて提供することができる。一実施形態では、該キットは、（ａ）ＶＬＡ−１アンタゴニストを含む組成物を収容する容器及び任意に（ｂ）情報資料を含む。該情報資料は、本明細書で述べる方法及び／又は治療上の有益性のための薬剤の使用に関する、説明的、使用説明的、営業的資料又は他の資料でよい。一実施形態では、該キットは、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩを処置するための第二の薬剤も含む。例えば、該キットは、ＶＬＡ−１アンタゴニストを含む組成物を収容する第一の容器及び該第二の薬剤を含む第二の容器を含む。
【０１９８】
該キットの情報資料はその形式において制約されない。一実施形態では、該情報資料は、該化合物の生成、該化合物の分子量、濃度、有効期限に関する情報、バッチ又は製造地情報などを含みうる。一実施形態では、該情報資料は、脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩを有している被験体又は脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩのリスクがある被験体を処置するため、例えば、好適な用量、剤形又は投与様式（例えば、本明細書で述べる用量、剤形又は投与様式）にてＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）を投与する方法に関する。該情報は様々な形式にて提供することができ、印刷文、コンピュータ読取可能資料、ビデオ記録若しくは録音又は実体資料へのリンク若しくはアドレスを提供する情報が含まれる。
【０１９９】
該アンタゴニストに加え、該キット中の組成物は、他の成分、例えば、溶媒若しくは緩衝剤、安定剤又は保存剤を含みうる。該アンタゴニストは、任意の形態、例えば、液体、乾燥又は凍結乾燥形態、好ましくは、実質的に純粋且つ／或いは無菌の形態にて提供することができる。該薬剤が溶液にて提供される場合、該溶液は水溶液であることが好ましい。該薬剤が乾燥形態として提供される場合、一般に、再構成は好適な溶媒の添加による。該溶媒、例えば、無菌水又は緩衝剤は該キット中に任意に提供することができる。
【０２００】
該キットは、該組成物又は該薬剤を含む組成物用の１つ又はそれ以上の容器を含みうる。一部の実施形態では、該キットは該組成物と該情報資料用の別個の容器、仕切り又はコンパートメントを含む。例えば、該組成物は、ビン、バイアル又は注射器内に収容することができ、該情報資料はプラスチックスリーブ又はパケット内に収容することができる。他の実施形態では、該キットの別個の要素は単一の非分割容器内に収容される。例えば、該組成物は、該情報資料をラベル形状にて添付したビン、バイアル又は注射器内に収容される。一部の実施形態では、該キットは複数（例えば、パック）の個々の容器を含み、各容器は１つ又はそれ以上の単位用量形態（例えば、本明細書で述べる剤形）の薬剤を含む。該容器は、組合せ単位用量、例えば、該ＶＬＡ−１アンタゴニスト及び該第二の薬剤の両方を、例えば、所望の比率で含む単位を含みうる。例えば、該キットは複数の注射器、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパック又は医療デバイスを含み、例えば、各々が単一組合せ単位用量を含む。該キットの容器は気密性、防水性（例えば、湿度又は蒸発の変化に対して不浸透性）且つ／或いは遮光性でよい。
【０２０１】
該キットは、該組成物の投与に適したデバイス、例えば、注射器又は他の好適な送達デバイスを任意に含む。該デバイスは、一方又は両方の薬剤を予め装填した状態で提供することができ、或いは中身がないが充填に適した状態でもよい。
【実施例】
【０２０２】
（実施例１−局所脳虚血に対する抗ＶＬＡ−１抗体の効果）
（プロトコル）
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂ社から得た体重１８〜２０ｇのＣ５７Ｂ６雌マウスを本試験に用いた。以下の条件で概述される二試験群にマウスを分類した。
【０２０３】
【化１】
マウスＨａ３１／８又はＰ１．１７の腹腔内注射後、最初にマウスを２％イソフランで麻酔し、その後、フェイスマスクを介して供給したＯ２中１．０％イソフランにて維持した。フィードバック制御式加温パッド（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｉｎｃ．Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いて直腸温を３６．８〜３７．２℃に維持した。中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）前及びその間並びに再灌流後、ＰｅｒｉＦｌｕｘ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｉｍｅｄ Ｉｎｃ．、スウェーデン）を用いて局所脳血流（ｒＣＢＦ）をモニターした。
【０２０４】
中大脳動脈（ＭＣＡ）の可逆性閉塞で局所脳虚血を誘発するため、シリコーン／硬化剤混合物（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｋｕｌｚｅｒ社、ドイツ）を被覆した７．０ナイロンモノフィラメント縫合糸を右総頸動脈の内腔内に挿入した。内頸動脈を通して前大脳動脈の近位部まで該縫合糸を該挿入部位から９±１．０ｍｍ進め、その起点にてＭＣＡを完全に閉塞させた。ｒＣＢＦのレーザードップラー血流測定では、ｒＣＢＦがベースラインの２０％に低下したため、両群においてＭＣＡ閉塞が良好であることが示された。ＭＣＡＯは２時間持続し、その間、傷口を縫合し、麻酔を中止した。２時間のＭＣＡ閉塞後、該フィラメントを取り出し、マウスに２４時間再灌流を行った。ｒＣＢＦが以前のレベル状態であるかを判定した。ＭＣＡＯの２時間後且つ再灌流前、ｒＣＢＦが以前のレベルの５０％以上に戻って増大することが見出されたため、４匹のマウスを本試験から除外した。虚血前中後の生理的パラメータはすべて正常範囲内であり、群間に相違はなかった。
【０２０５】
それぞれ、ＭＣＡＯ後３０分、再灌流後２４時間にてオープンフィールドで神経学的欠損を評価・スコアリングした。その試験はＨａｒａら（１９９７）によって報告された。
【０２０６】
０，神経学的欠損を認めない（正常）
１，右前足を伸ばすことができない（軽度）
２，対側への旋回（中等度）
３，歩行及び右側反射の喪失（重度）
両群においてＭＣＡ閉塞後の虚血損傷の体積を測定した。２時間のＭＣＡＯ後の再灌流の２４時間後、断頭によりマウスを殺処分し、脳を速やかに取り出し、マウス脳マトリックスを用いて６つの１ｍｍ厚冠状断面にスライスした。次に、暗所にて脳切片を室温で３０分、２％２，３，５−塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ，Ｓｉｇｍａ社）中で染色し、次に、一晩、１０％中性緩衝ホルマリンに入れた。イメージスキャナ上で脳薄片を直接スキャンした。各切片の後面上で損傷を測定した（ＮＩＨ Ｉｍａｇｅ １．６１、米国国立衛生研究所（ＵＳ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ））。皮質及び線条体における梗塞領域の直接測定を行い、次に、これを浮腫の影響を排除するために以下の式を用いて補正した。
対側皮質の間接梗塞領域（％）＝［（対側領域−同側非外傷領域）／対側領域］×１００
総梗塞体積は、皮質及び線条体を含む連続梗塞領域の数値積分により計算した。以前の処置に関して観察者が盲検化されるように、該切片をコード化した後に測定を行った。対側無傷半球と比較した虚血半球サイズの増大（％）として浮腫を定量化した。
【０２０７】
（結果）
ＭＣＡＯを受けた対照抗体処置マウスは、脳の皮質及び皮質下領域全体にわたり、広範な損傷を保持した。虚血半球は著しく肥大し、有意な行動欠陥が認められた（例えば、回旋及び肢麻痺をもたらす不全片麻痺；図１Ａ参照）。
【０２０８】
対照抗体（Ｐ１．１７）で処置したマウスは、虚血半球の４７．１±３．８％に及ぶ梗塞を保持した。抗ＶＬＡ−１抗体で処置したマウスは、虚血半球のわずか３４．３±４．２％に及ぶ、有意に小さい梗塞を保持し（Ｐ＜０．０２、Ｓｔｕｄｅｎｔの片側Ｔ検定、ｎ＝１２／群）、梗塞サイズの２４％縮小を示した（図１Ｂ）。絶対体積の点から、これは、対照の平均梗塞体積８０．８±６．８ｍｍ３、対、抗ＶＬＡ−１抗体処置の平均梗塞体積５５．６３±６．３ｍｍ３に相当した（図１Ｃ）。脳腫脹又は浮腫は、非損傷対側半球と比較した、梗塞半球の半球サイズの拡大パーセントとして計算した。８．２％±１．９％の半球サイズ増加率を保持した抗ＶＬＡ−１（Ｈａ／３１／８）処置マウスと比べ、対照（Ｐ１．１７）処置マウスは１８．１±％の半球サイズ平均増加率を保持した（Ｐ＜０．０５、Ｓｔｕｄｅｎｔの片側Ｔ検定 ｎ＝１２／群 図１Ｄ）。図２は３つの濃度の抗ＶＬＡ−１（Ｈａ３１／８）抗体を用いた用量反応を示し、梗塞体積（図２Ａ）及び浮腫（図２Ｂ）を共に減少させる点において、３ｍｇ／ｋｇの抗体が３０ｍｇ／ｋｇと同程度に有効であったことを示す。
これらのデータは、マウスでの可逆性中大脳動脈閉塞モデルにおける、ＶＬＡ−１阻害の神経保護及び抗炎症作用を示す。このモデルの病理は、ヒト脳卒中の病状並びに他のＣＮＳ虚血損傷、例えば、ＴＢＩ及びＳＣＩを臨床的に表し、本データは、ＶＬＡ−１の阻害剤がこれら及び他の虚血関連疾患の処置において有意な利益となりうることを示唆している。
【０２０９】
本発明の多くの実施形態について述べた。しかし、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な改変がなされうることが理解されるであろう。従って、他の実施形態も以下の特許請求の範囲内にある。
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年５月２５日に出願され、その全体が本明細書中に参考として援用される米国仮特許出願第６０／８０９，１４９号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
脳卒中は世界中で死亡及び身体障害の主要原因である。本年、約７００，０００人のアメリカ人が脳卒中を有することになる。米国では脳卒中は３番目に頻度が高い死亡原因であり、長期的な重度身体障害の主要原因である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、ある程度、虚血障害、例えば、脳卒中を処置するのにＶＬＡ−１の調節を用いることができるという所見に基づく。従って、本発明は、一態様では被験体における脳卒中を処置する方法を提供する。該方法は、脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。「ＶＬＡ−１アンタゴニスト」とは、ＶＬＡ−１の相互作用又は活性を少なくともある程度阻害する薬剤（例えば、任意の化合物）を指す。例えば、該薬剤はＶＬＡ−１の活性（例えば、ＶＬＡ−１のリガンド、例えば、コラーゲンへの結合）を少なくともある程度阻害し、或いは該薬剤はＶＬＡ−１をコードする核酸を少なくともある程度阻害し、例えば、ＶＬＡ−１蛋白質の発現を低下させる。一実施形態では、該薬剤はＶＬＡ−１がコラーゲン、例えば、コラーゲンＩＶに結合する能力を低下させ、該薬剤の非存在下での結合と比べて、例えば、少なくとも２，３，５，１０，２０，５０又は１００倍、ＶＬＡ−１／コラーゲン結合の親和性を低下させ、且つ／或いは少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％，２５％，５０％，７５％，９０％，９５％又はそれ以上、ＶＬＡ−１／コラーゲン結合を低下させる。
【０００４】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である。該抗ＶＬＡ−１抗体はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片でよい。該抗ＶＬＡ−１抗体は、完全長でよく（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＭ，ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１，ＩｇＡ２），ＩｇＤ及びＩｇＥ）、或いは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）２又はｓｃＦｖ断片又は１つ若しくはそれ以上のＣＤＲ）のみを含んでもよい。抗体又はその抗原結合断片は、２本の重鎖の免疫グロブリン及び２本の軽鎖の免疫グロブリンを含んでよく、或いは１本鎖抗体でよい。該抗体は任意に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン又はミュー定常領域遺伝子を含んでもよい。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は実質的にヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域又はその一部分を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はヒト抗体である。
【０００５】
他の実施形態では、該抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化抗体である。本明細書で論じるように、該抗体は、ＣＤＲ移植又はヒト化、或いはより一般的には、非ヒト抗体由来のＣＤＲ及びヒトにおいてより免疫原性が低く、例えば、マウスＣＤＲが天然で生じるマウスフレームワークより抗原性が低いものとして選択されるフレームワークを有する抗体でよい。
【０００６】
好ましい実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、非天然抗体、例えば、非ヒト抗体、例えば、本明細書で述べる非ヒト抗体由来の、少なくとも重鎖ＣＤＲ３、好ましくは全重鎖ＣＤＲ、更に好ましくは全３本の重鎖ＣＤＲ及び全３本の軽鎖ＣＤＲを有する、キメラ、ＣＤＲ移植又はヒト化抗体である。好ましい実施形態では、該ＣＤＲは本明細書で言及されるＣＤＲと１，２又は３個のアミノ酸残基が異なってよく、例えば、重鎖ＣＤＲ３は本明細書で述べる供給源由来でよいが、その他の別のＣＤＲは本明細書で述べるように異なってよい。
【０００７】
好ましい抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、ヒト化ＡＱＣ２抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される）、ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６）、ｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）及びモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と同じエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はＶＬＡ−１への結合に対し、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と競合する。
【０００８】
一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＶＬＡ−１のα１サブユニット、例えば、ＶＬＡ−１のα１−Ｉドメインに結合する。
【０００９】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、ラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ或いは本明細書で述べるラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドである。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、α１サブユニットの断片、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は保存的アミノ酸置換を有する同様のアミノ酸配列を含むα１−Ｉドメインの断片である。ラミニン、コラーゲン又はＶＬＡ−１ペプチドは、例えば、本明細書で述べるように、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力によって試験されるように、ＶＬＡ−１機能を阻止する。
【００１０】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１核酸、例えば、２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、アンチセンス分子、リボザイム、三重らせん分子、アプタマー若しくはそれらの任意の組合せの発現又は翻訳のインヒビターである。
【００１１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、本明細書で述べる小分子（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学物質）又は化学物質、例えば、有機小分子である。
【００１２】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳内神経組織における虚血損傷を低減するほどの量及び／又は時間にて投与されうる。
【００１３】
典型的には、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、サル、ウサギ又は農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、被験体は、ヒト、例えば、ヒト男性又は女性である。該被験体は少なくとも１８，２５，３０，４５，５０，５５，６０又は７０歳でよい。
【００１４】
一実施形態では、被験体は脳卒中を起こしている。脳卒中は、出血性脳卒中、虚血性脳卒中又は一過性虚血発作（ＴＩＡ）でありうる。
【００１５】
一実施形態では、被験体は処置の４８時間以内、例えば、２，３，５，８，１２，２０又は３０時間以内に脳卒中を起こしている。別の実施形態では、被験体は、処置の４８時間以上前であるが、直近の３又は２週間以内に脳卒中を起こしている。
【００１６】
別の実施形態では、被験体は脳卒中のリスクがあり、例えば、脳卒中のリスクを生じさせる病状を起こし続けており、或いは起こしている。そのような病状の例には、高血圧；喫煙；糖尿病；頸動脈又は他の動脈疾患；末梢動脈疾患；心房細動；他の心疾患；一過性虚血発作（ＴＩＡ）；一部の血液障害（例えば、赤血球数増加；鎌状赤血球病）；高血中コレステロール；運動不足及び肥満；過度の飲酒；一部の違法薬物；脳卒中の既往；或いは心臓発作の既往が含まれる。
【００１７】
一実施形態では、被験体は、１つ又はそれ以上の以下の症状：突発性の顔面のしびれ又は脱力、突発性の腕のしびれ又は脱力；突発性の脚のしびれ又は脱力；突発性の意識混濁；突発性の発話困難；突発性の理解困難；突発性の片目又は両目での視覚困難；突発性の歩行困難；突発性眩暈；突発性の平衡感覚又は協調運動障害；突発的で重度の原因不明の頭痛を示す。一部の実施形態では、被験体は脳卒中を持続していると診断されている。
【００１８】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、未処置被験体における梗塞サイズに対し、脳内神経組織における梗塞のサイズを、例えば、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上縮小させるほどの量にて投与される。梗塞サイズを縮小させるほどの量は、例えば、本明細書で述べるように、動物モデルを用いて評価することができる。
【００１９】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１つ又はそれ以上の脳卒中評価基準、例えば、本明細書で述べる基準又は尺度における症状を、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上或いは尺度でのハーフステップ又はフルステップ分、改善するほどの量にて投与される。例えば、修正ランキンスケールスコアは、少なくとも１ステップ、例えば、少なくとも２，３又は４ステップ分、低下させることができ、且つ／或いは該スコアは、例えば、４，３，２，１又は０に低下させることができる。ＮＩＨＳＳスコアは、少なくとも１ステップ、例えば、少なくとも２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１２，１４，１６，１８，２０ステップ分又はそれ以上、低下させることができ、且つ／或いは該スコアは、例えば、１５，１３，１２，１０，９，８，７，６，５，４，３，２，１又は０に低下させることができる。バーセル指数スコアは、少なくとも５ステップ、例えば、少なくとも１０，１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，５０，５５，６０ステップ分又はそれ以上、上昇させることができ、且つ／或いは該スコアは、例えば、５０，６０，７０，７５，８０，８５，９０，９５又は１００に上昇させることができる。
【００２０】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１日あたり０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．３〜３ｍｇ／ｋｇの用量にて投与される。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中後１４日間以内に少なくとも２回、例えば、脳卒中後１４日間以内に少なくとも３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３又は１４回投与される。該アンタゴニストは、例えば、１日１回、隔日１回、週２回、週１回又は１日１回で１日、例えば、２，３，４，５，６，７，１４若しくは２８日間、投与することができる。該ＶＬＡ−１アンタゴニストは静脈内又は非経口投与することができる。
【００２１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中処置と併用して投与される。例えば、該処置は、脳卒中を有し、或いは脳卒中のリスクがある被験体に治療上の利益を付与する第二の薬剤投与を含む。例示的な第二の薬剤は、例えば、血栓溶解剤（例えば、ストレプトキナーゼ、アシル化プラスミノーゲン・ストレプトキナーゼ活性化因子複合体（ＡＰＳＡＣ）、ウロキナーゼ、１本鎖ウロキナーゼ・プラスミノーゲン活性化因子（ｓｃｕ−ＰＡ）、抗炎症剤、蛇毒由来トロンビン様酵素、例えば、アンクロド、トロンビン阻害剤、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）及び上記各々の生物活性変異体）；抗凝固剤（例えば、ワルファリン又はヘパリン）；抗血小板薬（例えば、アスピリン）；糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤；グリコサミノグリカン；クマリン；ＧＣＳＦ；メラトニン；アポトーシス阻害剤（例えば、カスパーゼ阻害剤）；抗酸化剤（例えば、ＮＸＹ−０５９）；及び神経保護剤（例えば、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬又はカンナビノイド拮抗薬）を含む。
【００２２】
好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストと該第二の薬剤は同時に投与される。好ましい実施形態では、最初に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与され、次に該第二の薬剤が投与される。好ましい実施形態では、最初に該第二の薬剤が投与され、次に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与される。
【００２３】
本明細書で用いられるように、「併用投与される」とは、２つ又はそれ以上の薬剤（例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストと第二の薬剤）が、各薬剤の被験体に対する重なり効果が生じるように、同時或いは一定間隔以内に被験体に投与されるということである。組合せ効果が得られるように、第一の薬剤と第二の薬剤の投与は十分に近接して間隔を置くことが好ましい。その間隔は、数時間、数日又は数週間の間隔でよい。一般的に、該薬剤は被験体において同時に生物学的に利用可能であり、例えば、検出可能である。好ましい実施形態では、該薬剤の１つ、例えば、第一の薬剤の少なくとも１回の投与が行われ、その間、他方の薬剤、例えば、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは被験体において治療レベルにて未だ存在する。
【００２４】
一実施形態では、該方法は、脳卒中後基準、例えば、本明細書で述べる脳卒中評価基準又は尺度で被験体を評価するステップも含む。一部の実施形態では、その評価は該ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与後少なくとも１時間、例えば、少なくとも２，４，６，８，１２，２４若しくは４８時間又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間若しくはそれ以上の週間にて行われる。１つ又はそれ以上の下記の期間すなわち：処置開始前；処置中；又は１つ若しくはそれ以上の処置要素がなされた後に、被験体を評価することができる。評価には、同一のＶＬＡ−１アンタゴニストによる更なる処置又は追加薬剤による追加処置の必要性の評価が含まれうる。好ましい実施形態では、事前に選択された評価結果が得られる場合、追加ステップがとられ、例えば、被験体は別の処置を施行され、或いは別の評価又は試験が行われる。
【００２５】
別の実施形態では、該方法は、脳卒中（例えば、虚血性脳卒中、出血性脳卒中又は一過性虚血発作）を有する又は脳卒中の症状を有する被験体を特定するステップを更に含む。
【００２６】
一態様では、本開示内容は被験体を処置する方法を特徴とし、該方法は、（ａ）被験体が虚血、例えば、脳卒中後虚血を有するかを判定するステップ；（ｂ）虚血を生じさせる脳卒中又は他の事象が事前に選択された時間、例えば、本明細書で述べる時間内であるかを判定するステップ；並びに（ａ）及び（ｂ）が満たされる場合、虚血を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。
【００２７】
一態様では、本開示内容は、脳卒中、例えば、本明細書で述べるような脳卒中を処置するのに用いるＶＬＡ−１アンタゴニストを特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。別の態様では、本開示内容は、脳卒中、例えば、本明細書で述べるような脳卒中を処置するための薬剤の製造のためのＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。
【００２８】
一態様では、本開示内容は、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体及び脳卒中を処置する際の該アンタゴニストの使用のための取扱説明書が付いたラベルを含む容器を特徴とする。
【００２９】
一態様では、本開示内容は、被験体における虚血損傷、例えば、本明細書で述べる虚血損傷を処置する方法を特徴とし、該方法は、虚血損傷を処置するのに有効な量にて、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べる抗ＶＬＡ−１抗体を被験体に投与するステップを含む。別の態様では、本開示内容は、被験体における虚血・再灌流損傷を処置する方法を特徴とし、該方法は、虚血・再灌流損傷を処置するのに有効な量にて、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べる抗ＶＬＡ−１抗体を被験体に投与するステップを含む。
【００３０】
別の態様では、本開示内容は被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法を特徴とする。該方法は、ＴＢＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。
【００３１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である。該抗ＶＬＡ−１抗体はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片でよい。該抗ＶＬＡ−１抗体は、完全長でよく（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＭ，ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１，ＩｇＡ２），ＩｇＤ及びＩｇＥ）、或いは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）２又はｓｃＦｖ断片又は１つ若しくはそれ以上のＣＤＲ）のみを含んでもよい。抗体又はその抗原結合断片は、２本の重鎖の免疫グロブリン及び２本の軽鎖の免疫グロブリンを含んでよく、或いは１本鎖抗体でよい。該抗体は任意に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン又はミュー定常領域遺伝子を含んでもよい。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は実質的にヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域又はその一部分を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はヒト抗体である。
【００３２】
他の実施形態では、該抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化抗体である。本明細書で論じるように、該抗体は、ＣＤＲ移植、ヒト化、或いはより一般的には、非ヒト抗体由来のＣＤＲ及びヒトにおいてより免疫原性が低く、例えば、マウスＣＤＲが天然で生じるマウスフレームワークより抗原性が低いものとして選択されるフレームワークを有する抗体でよい。
【００３３】
好ましい実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、非天然抗体、例えば、非ヒト抗体、例えば、本明細書で述べる非ヒト抗体由来の、少なくとも重鎖ＣＤＲ３、好ましくは全重鎖ＣＤＲ、更に好ましくは全３本の重鎖ＣＤＲ及び全３本の軽鎖ＣＤＲを有する、キメラ、ＣＤＲ移植又はヒト化抗体である。好ましい実施形態では、該ＣＤＲは本明細書で言及されるＣＤＲと１，２又は３個のアミノ酸残基が異なってよく、例えば、重鎖ＣＤＲ３は本明細書で述べる供給源由来でよいが、その他の別のＣＤＲは本明細書で述べるように異なってよい。
【００３４】
好ましい抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、ヒト化ＡＱＣ２抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される）、ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６）、ｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）及びモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と同じエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はＶＬＡ−１への結合に対し、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と競合する。
【００３５】
一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＶＬＡ−１のα１サブユニット、例えば、ＶＬＡ−１のα１−Ｉドメインに結合する。
【００３６】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、ラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ或いは本明細書で述べるラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドである。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、α１サブユニットの断片、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は保存的アミノ酸置換を有する同様のアミノ酸配列を含むα１−Ｉドメインの断片である。ラミニン、コラーゲン又はＶＬＡ−１ペプチドは、例えば、本明細書で述べるように、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力によって試験されるように、ＶＬＡ−１機能を阻止する。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１核酸、例えば、２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、アンチセンス分子、リボザイム、三重らせん分子、アプタマー若しくはそれらの任意の組合せの発現又は翻訳のインヒビターである。
【００３７】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、本明細書で述べる小分子（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学物質）又は化学物質、例えば、有機小分子である。
【００３８】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＴＢＩを処置し、例えば、治療、治癒、緩和、軽減、変質、是正、好転、改善し、或いはＴＢＩ、例えば本明細書で述べるＴＢＩの１以上の症状に作用するほどの量及び／又は時間にて投与されうる。
【００３９】
典型的には、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、サル、ウサギ又は農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、被験体は、ヒト、例えば、ヒト男性又は女性である。該被験体は少なくとも１８，２５，３０，４５，５０，５５，６０又は７０歳でよい。
【００４０】
ＴＢＩは、例えば、挫傷、打撲傷、裂傷又は血腫でありうる。一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは一次性ＴＢＩを処置するために投与される。一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは二次性ＴＢＩを処置或いは予防するために投与される。
【００４１】
一実施形態では、被験体は処置の４８時間以内、例えば、２，３，５，８，１２，２０又は３０時間以内にＴＢＩを被っている。別の実施形態では、被験体は、処置の４８時間以上前であるが、直近の３又は２週間以内にＴＢＩを被っている。
【００４２】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１つ又はそれ以上のＴＢＩ評価基準、例えば、本明細書で述べる基準にて、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上、症状を改善するほどの量にて投与される。
【００４３】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１日あたり０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．３〜３ｍｇ／ｋｇの用量にて投与される。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中後１４日間以内に少なくとも２回、例えば、脳卒中後１４日間以内に少なくとも３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３又は１４回投与される。該アンタゴニストは、例えば、１日１回、隔日１回、週２回、週１回又は１日１回で１日、例えば、２，３，４，５，６，７，１４若しくは２８日間、投与することができる。該ＶＬＡ−１アンタゴニストは静脈内又は非経口投与することができる。
【００４４】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストはＴＢＩ処置と併用して投与される。例えば、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、他の損傷及び感染のための手術及び／又は処置と併用して投与することができる。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストと第二の薬剤は同時に投与される。好ましい実施形態では、最初に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与され、次に第二の薬剤が投与される。好ましい実施形態では、最初に第二の薬剤が投与され、次に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与される。
【００４５】
一実施形態では、該方法は本明細書で述べるＴＢＩ基準で被験体を評価するステップも含む。一部の実施形態では、その評価は該ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与後少なくとも１時間、例えば、少なくとも２，４，６，８，１２，２４若しくは４８時間又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間若しくはそれ以上の週間にて行われる。１つ又はそれ以上の下記の期間すなわち：処置開始前；処置中；又は１つ若しくはそれ以上の処置要素がなされた後に被験体を評価することができる。評価には、同一のＶＬＡ−１アンタゴニストによる更なる処置又は追加薬剤による追加処置の必要性の評価が含まれうる。好ましい実施形態では、事前に選択された評価結果が得られる場合、追加ステップがとられ、例えば、被験体は別の処置を施行され、或いは別の評価又は試験が行われる。
【００４６】
一態様では、本開示内容は、ＴＢＩ、例えば、本明細書で述べるようなＴＢＩを処置するのに用いるＶＬＡ−１アンタゴニストを特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。別の態様では、本開示内容は、ＴＢＩ、例えば、本明細書で述べるようなＴＢＩを処置するための薬剤の製造のためのＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。
【００４７】
一態様では、本開示内容は、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体及びＴＢＩを処置する際の該アンタゴニストの使用のための取扱説明書が付いたラベルを含む容器を特徴とする。
【００４８】
別の態様では、本開示内容は被験体における脊髄損傷（ＳＣＩ）を処置する方法を特徴とする。該方法は、ＳＣＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む。
【００４９】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である。該抗ＶＬＡ−１抗体はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片でよい。該抗ＶＬＡ−１抗体は、完全長でよく（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＭ，ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１，ＩｇＡ２），ＩｇＤ及びＩｇＥ）、或いは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）２又はｓｃＦｖ断片又は１つ若しくはそれ以上のＣＤＲ）のみを含んでもよい。抗体又はその抗原結合断片は、２本の重鎖の免疫グロブリン及び２本の軽鎖の免疫グロブリンを含んでよく、或いは１本鎖抗体でよい。該抗体は任意に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン又はミュー定常領域遺伝子を含んでもよい。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は実質的にヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域又はその一部分を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はヒト抗体である。
【００５０】
他の実施形態では、該抗体又はその抗原結合断片はキメラ又はヒト化抗体である。本明細書で論じるように、該抗体は、ＣＤＲ移植、ヒト化、或いはより一般的には、非ヒト抗体由来のＣＤＲ及びヒトにおいてより免疫原性が低く、例えば、マウスＣＤＲが天然で生じるマウスフレームワークより抗原性が低いものとして選択されるフレームワークを有する抗体でよい。
【００５１】
好ましい実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、非天然抗体、例えば、非ヒト抗体、例えば、本明細書で述べる非ヒト抗体由来の、少なくとも重鎖ＣＤＲ３、好ましくは全重鎖ＣＤＲ、更に好ましくは全３本の重鎖ＣＤＲ及び全３本の軽鎖ＣＤＲを有する、キメラ、ＣＤＲ移植又はヒト化抗体である。好ましい実施形態では、該ＣＤＲは本明細書で言及されるＣＤＲと１，２又は３個のアミノ酸残基が異なってよく、例えば、重鎖ＣＤＲ３は本明細書で述べる供給源由来でよいが、その他の別のＣＤＲは本明細書で述べるように異なってよい。
【００５２】
好ましい抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、ヒト化ＡＱＣ２抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される）、ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６）、ｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）及びモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）を含む。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と同じエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体はＶＬＡ−１への結合に対し、ＡＱＣ２，ＡＪＨ１０，ｈＡＱＣ２，ｈａＡＱＣ２，ｈｓＡＱＣ２，ｍＡＱＣ２及び／又は１Ｂ３と競合する。
【００５３】
一部の実施形態では、該抗ＶＬＡ−１抗体は、ＶＬＡ−１のα１サブユニット、例えば、ＶＬＡ−１のα１−Ｉドメインに結合する。
【００５４】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、ラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ或いは本明細書で述べるラミニン又はコラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドである。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、α１サブユニットの断片、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は保存的アミノ酸置換を有する同様のアミノ酸配列を含むα１−Ｉドメインの断片である。ラミニン、コラーゲン又はＶＬＡ−１ペプチドは、例えば、本明細書で述べるように、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力によって試験されるように、ＶＬＡ−１機能を阻止する。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＶＬＡ−１核酸、例えば、２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、アンチセンス分子、リボザイム、三重らせん分子、アプタマー若しくはそれらの任意の組合せの発現又は翻訳のインヒビターである。
【００５５】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、本明細書で述べる小分子（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学物質）又は化学物質、例えば、有機小分子である。
【００５６】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、ＳＣＩを処置し、例えば、治療、治癒、緩和、軽減、変質、是正、好転、改善し、或いはＳＣＩ、例えば本明細書で述べるＳＣＩの１以上の症状に作用するほどの量及び／又は時間にて投与されうる。
【００５７】
典型的には、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、サル、ウサギ又は農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、被験体は、ヒト、例えば、ヒト男性又は女性である。該被験体は少なくとも１８，２５，３０，４５，５０，５５，６０又は７０歳でよい。
【００５８】
一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは一次性ＳＣＩを処置するために投与される。一部の実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは二次性ＳＣＩを処置或いは予防するために投与される。
【００５９】
一実施形態では、被験体は処置の４８時間以内、例えば、２，３，５，８，１２，２０又は３０時間以内にＳＣＩを被っている。別の実施形態では、被験体は、処置の４８時間以上前であるが、直近の３又は２週間以内にＳＣＩを被っている。
【００６０】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１つ又はそれ以上のＳＣＩ評価基準、例えば、本明細書で述べる基準にて、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上、症状を改善するほどの量にて投与される。
【００６１】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、１日あたり０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．３〜３ｍｇ／ｋｇの用量にて投与される。一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中後１４日間以内に少なくとも２回、例えば、脳卒中後１４日間以内に少なくとも３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３又は１４回投与される。該アンタゴニストは、例えば、１日１回、隔日１回、週２回、週１回又は１日１回で１日、例えば、２，３，４，５，６，７，１４若しくは２８日間、投与することができる。該ＶＬＡ−１アンタゴニストは静脈内又は非経口投与することができる。
【００６２】
一実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストはＳＣＩ処置用の第二の薬剤と併用して投与される。該第二の薬剤は、例えば、メチルプレドニゾロンのようなコルチコステロイド又はグルココルチコイドでよい。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストと該第二の薬剤は同時に投与される。好ましい実施形態では、最初に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与され、次に該第二の薬剤が投与される。好ましい実施形態では、最初に該第二の薬剤が投与され、次に該ＶＬＡ−１アンタゴニストが投与される。
【００６３】
一実施形態では、該方法は本明細書で述べるＳＣＩ基準で被験体を評価するステップも含む。一部の実施形態では、その評価は該ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与後少なくとも１時間、例えば、少なくとも２，４，６，８，１２，２４若しくは４８時間又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間若しくはそれ以上の週間にて行われる。１つ又はそれ以上の下記の期間：処置開始前；処置中；又は１つ若しくはそれ以上の処置要素がなされた後に被験体を評価することができる。評価には、同一のＶＬＡ−１アンタゴニストによる更なる処置又は追加薬剤による追加処置の必要性の評価が含まれうる。好ましい実施形態では、事前に選択された評価結果が得られる場合、追加ステップがとられ、例えば、被験体は別の処置を施行され、或いは別の評価又は試験が行われる。
【００６４】
一態様では、本開示内容は、ＳＣＩ、例えば、本明細書で述べるようなＳＣＩを処置するのに用いるＶＬＡ−１アンタゴニストを特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。別の態様では、本開示内容は、ＳＣＩ、例えば、本明細書で述べるようなＳＣＩを処置するための薬剤の製造のためのＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を特徴とする。該アンタゴニストは本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書で述べるＶＬＡ−１抗体でよい。
【００６５】
一態様では、本開示内容は、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体及びＳＣＩを処置する際の該アンタゴニストの使用のための取扱説明書が付いたラベルを含む
容器を特徴とする。
【００６６】
本明細書で用いられるように、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」又は「処置（する）（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、障害（例えば、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩ）と関連する病状、症状又はパラメータを改善し、或いは障害（障害、例えば、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩによって引き起こされる二次性損傷を含む）の発症、進行又は増悪を統計的に有意な程度又は当業者にとって検出可能な程度に低減するのに有効な量、態様及び／又はモードにて治療を施行することをいう。従って、処置は治療的及び／又は予防的利益をもたらすことができる。有効な量、態様又はモードは、被験体によって異なり得、被験体に合わせられうる。本明細書で用いられるように、「処置」は、脳卒中のリスクが高い被験体、例えば、一過性虚血発作を起こした被験体の予防的処置も包含する。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは虚血損傷後に投与される。好ましい実施形態では、該ＶＬＡ−１アンタゴニストは被験体が脳卒中を有した後に投与される。
【００６７】
本明細書で用いられるように、「処置するのに有効な量」又は「治療有効量」という用語は、被験体への単回又は多回投与後、障害と関連する病状、症状若しくはパラメータを改善又は予防的に処置し、或いは障害の発症、進行又は増悪を統計的に有意な程度又は当業者にとって検出可能な程度に低減するのに有効なＶＬＡ−１アンタゴニストの量をいう。例えば、脳卒中の場合、「処置するのに有効な量」とは、未処置被験体における梗塞サイズに対し、脳内神経組織における梗塞のサイズを、例えば、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上縮小させるほどの量をいう。或いは、「処置するのに有効な量」とは、本明細書で述べる１つ若しくはそれ以上の脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩ評価基準にて、少なくとも５，１０，１５，２０，４０，５０，６０，７０若しくは８０％又はそれ以上、症状を改善するほどの量をいう。
【００６８】
本明細書で用いられるように、「脳卒中」とは、脳に供給する１つ若しくはそれ以上の血管の閉塞又は出血によって引き起こされ、細胞死をもたらす病状を指す一般的な用語である。本明細書で用いられるような「虚血性脳卒中」とは、脳に供給する１つ又はそれ以上の血管の閉塞によって引き起こされる脳卒中をいう。虚血性脳卒中のタイプには、例えば、塞栓性脳卒中、心塞栓性脳卒中、血栓性脳卒中、大血管血栓症、ラクナ梗塞、動脈間性脳卒中（ａｒｔｅｒｙ−ａｒｔｅｒｙ ｓｔｒｏｋｅ）及び潜因性脳卒中が含まれる。本明細書で用いられるような「出血性脳卒中」とは、脳に供給する１つ又はそれ以上の血管の出血によって引き起こされる脳卒中をいう。出血性脳卒中のタイプには、例えば、硬膜下、実質内、硬膜外及びくも膜下出血性脳卒中が含まれる。
【００６９】
本明細書で用いられるように、「外傷性脳損傷」又は「ＴＢＩ」とは、物理的力又は外傷によって引き起こされる損傷をいう。ＴＢＩは一次性又は二次性でありうる。「一次性ＴＢＩ」は物理的力又は外傷の直後に生じ、例えば、血腫、くも膜下出血、脳浮腫、頭蓋内圧上昇及び脳低酸素をもたらしうる。「二次性ＴＢＩ」は物理的力又は外傷後、数時間から数日にわたって生じ得、重度の二次事象（例えば、脳卒中）をもたらしうる。被験体がグラスゴー・コーマ・スケール（ＧＣＳ）でスコア１３〜１５の場合、ＴＢＩは「軽度」と定義づけられる。軽度ＴＢＩは、物理的力又は外傷後５分以下の意識喪失（ＬＯＣ）並びに／或いは物理的力又は外傷後１０分以下の記憶喪失と関連しうる。被験体がＧＣＳでスコア１３未満の場合、ＴＢＩは「中等度〜重度」と定義づけられる。
【００７０】
本明細書で用いられるように、「脊髄損傷」又は“ＳＣＩ”とは、脊髄および／又はその周囲域に対して持続する外傷をいう。脊髄は、圧迫、切断或いは挫傷され、軸索への物理的又は生理的損傷をもたらし、損傷した軸索長に沿った神経電気インパルス伝達に影響を及ぼしうる。関連する細胞体を含む大集団の軸索が死滅し、脳と末梢神経との伝達の喪失を生じさせうる。従って、ＳＣＩは完全又は部分的な運動機能の突然の喪失をもたらし、その程度は損傷の位置に依存する。高度（頸部）ＳＣＩは、運動機能の全損、四肢麻痺、呼吸調節の喪失及び／又は心血管虚脱をもたらしうる。低度（胸部）ＳＣＩは、腕又は呼吸器疾患を伴わずに対麻痺をもたらしうる。
【００７１】
特許、特許出願及び参考文献はすべて、それらの全体を参照して本明細書に組み込まれる。相反する場合、本出願が統制する。
【００７２】
本発明の１つ又はそれ以上の実施形態の詳細が、添付図面及び以下の説明において示される。本発明の他の特徴、目的及び利点は、該説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかにあるであろう。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体における脳卒中を処置する方法であって、脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２）
被験体における脳卒中を処置する方法であって、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目３）
上記脳卒中が虚血性脳卒中である、項目１に記載の方法。
（項目４）
上記脳卒中が出血性脳卒中である、項目１に記載の方法。
（項目５）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、キメラ若しくはヒト化抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である、項目２に記載の方法。
（項目６）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化ＡＱＣ２抗体又はその抗原結合断片である、項目２に記載の方法。
（項目７）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−３２７４を有するハイブリドーマによって産生される、項目２に記載の方法。
（項目８）
上記被験体が哺乳動物である、項目１に記載の方法。
（項目９）
上記被験体がヒトである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
上記被験体が脳卒中を起こしている、項目１に記載の方法。
（項目１１）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、脳卒中の４８時間以内に投与される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、静脈内又は非経口投与される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、１日あたり０．１ｍｇ／ｋｇから１日あたり５ｍｇ／ｋｇまでの用量にて投与される、項目１に記載の方法。
（項目１４）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、脳卒中後７日以内に少なくとも２回投与される、項目１０に記載の方法。
（項目１５）
上記ＶＬＡ−１アンタゴニストが、別の治療薬と併用して投与される、項目１に記載の方法。
（項目１６）
上記別の治療薬が、抗血小板薬、血栓溶解酵素、凝集阻害剤、糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤、グリコサミノグリカン、トロンビン阻害剤、抗凝固剤、ヘパリン、クマリン、ｔＰＡ、ＧＣＳＦ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アンクロド、アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ ａｃｉｄ）、メラトニン及びカスパーゼ阻害剤からなる群より選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
ヒトにおける脳卒中を処置する方法であって、脳卒中を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記ヒトに投与するステップを含む方法。
（項目１８）
脳卒中を起こしたヒトを処置する方法であって、脳卒中を処置するのに有効な量にてヒト化抗ＶＬＡ−１ブロッキング抗体を脳卒中の７２時間以内に上記ヒトに投与するステップを含む方法。
（項目１９）
被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法であって、ＴＢＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２０）
被験体における外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法であって、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２１）
上記ＴＢＩが、挫傷、打撲傷、裂傷又は血腫である、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、キメラ若しくはヒト化抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
被験体における脊髄損傷（ＳＣＩ）を処置する方法であって、ＳＣＩを処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１アンタゴニストを上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２４）
被験体における脊髄損傷（ＳＣＩ）を処置する方法であって、抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２５）
上記ＳＣＩが、不完全ＳＣＩ、脊髄中心症候群、ブラウン・セカール症候群、脊髄前方症候群、脊髄円錐症候群及び馬尾症候群からなる群より選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
上記抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、キメラ若しくはヒト化抗ＶＬＡ−１抗体又はその抗原結合断片である、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
被験体における虚血損傷を処置する方法であって、上記損傷を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１ブロッキング抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２８）
被験体における虚血・再灌流損傷を処置する方法であって、上記損傷を処置するのに有効な量にてＶＬＡ−１ブロッキング抗体又はその抗原結合断片を上記被験体に投与するステップを含む方法。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１Ａ】図１ＡはＭＣＡＯ後の行動評価を示すグラフ図である。
【図１Ｂ】図１ＢはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける梗塞半球のパーセンテージを示すグラフ図である。
【図１Ｃ】図１ＣはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける梗塞体積を示すグラフ図である。
【図１Ｄ】図１ＤはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける浮腫パーセントを示すグラフ図である。
【図２Ａ】図２ＡはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける梗塞体積を示すグラフ図である。
【図２Ｂ】図２ＢはＭＣＡＯ後の対照群と抗ＶＬＡ−１抗体で処置されたマウスにおける浮腫パーセントを示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
本明細書で提示される結果は、ＶＬＡ−１ブロッキング抗体が、脳虚血モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏにて梗塞サイズを縮小させることができることを示す。その結果は、特に、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体の投与がＣＮＳにおける虚血損傷、特に、外傷性虚血損傷を低減することを示す。従って、ＶＬＡ−１アンタゴニスト、例えば、ＶＬＡ−１抗体は、脳卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）及び脊髄損傷（ＳＣＩ）並びに他の虚血損傷を処置するため、単独で、或いは別の処置と併用して投与することができる。
【００７５】
（ＶＬＡ−１）
インテグリンは、細胞−細胞及び細胞−マトリックス接着を媒介する細胞表面受容体のスーパーファミリーである。これらの蛋白質は、発達及び組織修復時に細胞の成長、移動及び分化のための足場及びシグナルを付与することが知られている。該蛋白質は免疫及び炎症プロセスに関与している。
【００７６】
インテグリンは２本の非共有結合ポリペプチド鎖α及びβからなるヘテロ二量体蛋白質である。各鎖のアミノ末端は鎖間結合及びリガンド結合に寄与する球状頭部を形成する。該球状頭部はストークによって膜貫通セグメントに結合される。通常、細胞質尾部は５０アミノ酸残基長未満である。元々、インテグリンサブファミリーは、ヘテロ二量体を形成するのにどのβサブユニットが用いられるかということに基づいてもともと定義づけられた。β１含有インテグリンはＶＬＡ分子とも称され、「極晩期活性化（ｖｅｒｙ ｌａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」抗原を指す。ＶＬＡ−１〜ＶＬＡ−６は、それぞれα１〜α６（即ち、ＣＤ４９ａ〜ＣＤ４９ｆ）を含むβ１サブファミリーメンバーを指す。一般的評論については、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ａｂｕｌ Ｋ．Ａｂｂａｓら（編）、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２０００を参照されたい。
【００７７】
コラーゲン（両方のタイプＩ及びＩＶ）及びラミニンは、α１β１インテグリン（即ち、ＶＬＡ−１）の周知のリガンドである。ＶＬＡ−１は、コラーゲン上の細胞の接着及び移動（Ｋｅｅｌｙら、１９９５，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１０８：５９５−６０７；及びＧｏｔｗａｌｓら、１９９６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：２４６９−２４７７）；創傷治癒の重要な要素である、コラーゲン基質の収縮及び再構成の促進（上記Ｇｏｔｗａｌｓら；及びＣｈｉｒｏ，１９９１，Ｃｅｌｌ ６７：４０３−４１０）；並びに細胞外基質の再構築に関与する遺伝子の発現調節（Ｒｉｉｋｏｎｅｎら、１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１−５；及びＬａｎｇｈｏｌｚら、１９９５，Ｊ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．１３１：１９０３−１９１５）に関与している。
【００７８】
（ＶＬＡ−１アンタゴニスト）
脳卒中を処置するため、種々の薬剤をＶＬＡ−１アンタゴニストとして用いることができる。このような薬剤には、ＶＬＡ−１又はＶＬＡ−１の一部、例えば、ＶＬＡ−１のα１サブユニットに対する抗体が含まれる。一部の好ましい薬剤には、２００１年４月１４日に申請された米国特許出願６０／２８３，７９４及び２００１年７月６日に申請された米国特許出願６０／３０３，６８９に開示され、また、ＷＯ０２／０８３８５４に開示されている抗ＶＬＡ−１抗体が含まれる。これらの出願の開示内容はそれらの全体を参照して本明細書に組み込まれる。他の薬剤には、ＶＬＡ−１とそのリガンド、例えば、コラーゲン又はラミニンとの相互作用を阻止し、或いはインテグリンの細胞シグナル伝達を調節し、ＶＬＡ−１と関連する細胞活性又は生化学的機能を低下させる小分子が含まれる。また、本明細書で開示される方法において有用な薬剤には、例えば、遺伝子治療及びアンチセンス技術によってＶＬＡ−１の発現を低下させる薬剤が含まれる。
【００７９】
（抗ＶＬＡ−１抗体）
例示的なＶＬＡ−１アンタゴニストはＶＬＡ−１に結合する抗体を含む。一実施形態では、該抗体は、例えば、相互作用を物理的に阻止し、ＶＬＡ−１及び／又はＶＬＡ−１リガンドのその対応物に対する親和性を低下させ、ＶＬＡ−１複合体を崩壊又は不安定化し、ＶＬＡ−１を隔離し、或いは分解のためにＶＬＡ−１を標的とすることにより、ＶＬＡ−１とＶＬＡ−１リガンド（例えば、コラーゲン）との相互作用を阻害する。一実施形態では、該抗体は、ＶＬＡ−１／リガンド結合面に関与する、１つ又はそれ以上のアミノ酸残基においてＶＬＡ−１に結合することができる。そのようなアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャニングによって特定することができる。別の実施形態では、該抗体はＶＬＡ−１／リガンド結合に関与しない残基に結合することができる。例えば、該抗体はＶＬＡ−１の構造を変化させることができ、これにより、結合親和性を低下させ、或いは該抗体はＶＬＡ−１／リガンド結合を立体的に阻害しうる。一実施形態では、該抗体はＶＬＡ−１が媒介する事象又は活性の活性化を低下させることができる。
【００８０】
本明細書で用いられるように、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域、例えば、免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を付与するアミノ酸配列を含む蛋白質をいう。例えば、抗体は１つの重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略される）及び１つの軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略される）を含みうる。別例では、抗体は２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、１本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片及びｄＡｂ断片）並びに完全抗体、例えば、ＩｇＡ，ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４），ＩｇＥ，ＩｇＤ，ＩｇＭ（及びそれらのサブタイプ）型の無傷及び／又は完全長免疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖はカッパ又はラムダ型の軽鎖でよい。一実施形態では、該抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体依存性細胞毒性及び／又は補体媒介性
細胞毒性に対して機能的になり得、或いはこれらの活性の一方又は両方に対して非機能的になりうる。
【００８１】
ＶＨ及びＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称される、より保存的な領域が散在する、相補性決定領域（“ＣＤＲ”）と称される超可変性領域に更に細分化されうる。ＦＲ及びＣＤＲの範囲は正確に画定されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健福祉省（ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２；及びＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照）。本明細書ではＫａｂａｔ定義が用いられる。典型的には、各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端へ以下の順序：ＦＲ１，ＣＤＲ１，ＦＲ２，ＣＤＲ２，ＦＲ３，ＣＤＲ３，ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。
【００８２】
「免疫グロブリンドメイン」とは、免疫グロブリン分子の可変又は定常ドメイン由来のドメインをいう。典型的には、免疫グロブリンドメインは約７つのβストランドから形成される２つのβシート及び保存的ジスルフィド結合を含む（例えば、Ａ．Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＡ．Ｎ．Ｂａｒｃｌａｙ（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３８１−４０５を参照）。「免疫グロブリン可変ドメイン配列」とは、抗原結合に好適な構造にＣＤＲ配列を位置決めするのに十分な構造を形成することができるアミノ酸配列をいう。例えば、該配列は天然可変ドメインのアミノ酸配列のすべて又は一部を含みうる。例えば、該配列は、１つ、２つ若しくはそれ以上のＮ又はＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸を省略し、１つ若しくはそれ以上の挿入又は追加末端アミノ酸を含み、或いは他の改変を含みうる。一実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合し、標的結合構造（又は「抗原結合部位」）、例えば、ＶＬＡ−１と相互作用する構造を形成することができる。
【００８３】
該抗体のＶＨ又はＶＬ鎖は重鎖又は軽鎖定常領域のすべて又は一部を更に含むことができ、これにより、それぞれ免疫グロブリン重鎖又は軽鎖を形成する。一実施形態では、該抗体は２本の免疫グロブリン重鎖及び２本の免疫グロブリン軽鎖の四量体である。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖はジスルフィド結合によって結合されうる。通常、重鎖定常領域は３つの定常ドメインＣＨ１，ＣＨ２及びＣＨ３を含む。通常、軽鎖定常領域は１つのＣＬドメインを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。通常、抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主の組織又は因子に対する抗体結合を媒介する。
【００８４】
抗体の１つ又はそれ以上の領域は、ヒト領域、有効的ヒト領域又はヒト化領域でよい。例えば、１つ又はそれ以上の可変領域はヒト領域又は有効的ヒト領域でよい。例えば、１つ又はそれ以上のＣＤＲ、例えば、ＨＣ ＣＤＲ１，ＨＣ ＣＤＲ２，ＨＣ ＣＤＲ３，ＬＣ ＣＤＲ１，ＬＣ ＣＤＲ２及びＬＣ ＣＤＲ３はヒトＣＤＲでよい。各軽鎖ＣＤＲはヒトＣＤＲでよい。ＨＣ ＣＤＲ３はヒトＣＤＲでよい。１つ又はそれ以上のフレームワーク領域は、ヒトフレームワーク領域、例えば、ＨＣ又はＬＣのＦＲ１，ＦＲ２，ＦＲ３及びＦＲ４でよい。一実施形態では、全フレームワーク領域がヒトフレームワーク領域、例えば、ヒト体細胞、例えば、免疫グロブリンを産生する造血細胞又は非造血細胞由来のヒトフレームワーク領域である。一実施形態では、ヒト配列は生殖細胞系配列、例えば、生殖細胞系核酸にコードされる生殖細胞系配列である。１つ又はそれ以上の定常領域は、ヒト領域、有効的ヒト領域又はヒト化領域でよい。別の実施形態では、フレームワーク領域（例えば、集合的にＦＲ１，ＦＲ２及びＦＲ３或いは集合的にＦＲ１，ＦＲ２，ＦＲ３及びＦＲ４）又は抗体全体の少なくとも７０，７５，８０，８５，９０，９２，９５若しくは９８％が、ヒト、有効的ヒト又はヒト化となりうる。例えば、ＦＲ１，ＦＲ２及びＦＲ３は集合的に、ヒト生殖細胞系セグメントにコードされるヒト配列と少なくとも７０，７５，８０，８５，９０，９２，９５，９８又は９９％同一或いは完全に同一となりうる。
【００８５】
「有効的ヒト」免疫グロブリン可変領域とは、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘起しないように、十分数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変領域である。「有効的ヒト」抗体とは、抗体が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘起しないように、十分数のヒトアミノ酸位置を含む抗体である。
【００８６】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域とは、修飾形態がヒトにおいて非修飾形態よりも免疫応答を誘起しないように修飾され、例えば、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘起しないように、十分数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾される免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの記述には、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号及び第５，６９３，７６２号が含まれる。場合により、ヒト化免疫グロブリンは１つ又はそれ以上のフレームワークアミノ酸位置において非ヒトアミノ酸を含みうる。
【００８７】
抗ＶＬＡ−１抗体は、例えば、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）（例えば、マウス、ラット又はウサギ）抗体を操作することによって生成されるキメラ抗体でもよい。例えば、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体は、重鎖及び／又は軽鎖のヒンジ及び／又は定常領域の一部又は全部が、別種（例えば、ヒト）由来抗体の対応する構成要素に置換されるように、組換えＤＮＡ技術によって改変することができる。一般的に、操作された抗体の可変ドメインは、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体の可変ドメインと同一或いは実質的に同一の状態である。そのような操作された抗体はキメラ抗体と称され、該ヒンジ及び／又は定常領域が由来する種（例えば、ヒト）の被験体に投与されると、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体より抗原性が低い。キメラ抗体を作製する方法は当該技術分野において公知である。好ましい定常領域は、限定されないが、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４由来の定常領域を含む。
【００８８】
本明細書で述べる方法において有用な例示的な抗ＶＬＡ−１抗体には、例えば、モノクローナル抗体ＡＪＨ１０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３５８０；２００１年８月２日、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９）に寄託）、ｈＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７５；２００１年４月１８日に寄託）、ｈａＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７４；２００１年４月１８日に寄託）、ｈｓＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３３５６；２００１年５月４日に寄託）及びｍＡＱＣ２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−３２７３）が含まれる。これらの抗体はすべてブダペスト条約下で寄託された。他の抗ＶＬＡ−１抗体には、例えば、米国特許第５，３９１，４８１号及び第５，７８８，９６６号に述べられているモノクローナル抗体１Ｂ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１０５３６）並びにＨａ３１／８が含まれる。
【００８９】
（抗体の生成）
ＶＬＡ−１に結合する抗体は、免疫化、例えば、動物を用いた免疫化又はファージ提示のようなｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を含む、様々な手段によって生成することができる。ＶＬＡ−１の一部又は全部を免疫原又は選択の標的として用いることができる。例えば、ＶＬＡ−１又はその断片、例えば、ＶＬＡ−１のα１サブユニットの全部又は一部、例えば、α１−Ｉドメインを免疫原として用いることができる。一実施形態では、免疫化動物は、天然、ヒト又は部分的ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する免疫グロブリン産生細胞を含む。一実施形態では、非ヒト動物は少なくとも一部のヒト免疫グロブリン遺伝子を含む。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大断片を用いて、マウス抗体産生に欠けるマウス株を操作することが可能である。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する遺伝子由来の
抗原特異的モノクローナル抗体が生成・選択されうる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔ．Ｇｅｎ．７：１３−２１；米国特許出願２００３−００７０１８５；米国特許第５，７８９，６５０号；及びＷＯ９６／３４０９６を参照されたい。
【００９０】
ＶＬＡ−１に対する非ヒト抗体は、例えば、齧歯動物において生成することもできる。非ヒト抗体は、例えば、欧州特許第２３９４００号；米国特許第６，６０２，５０３号；第５，６９３，７６１号；及び第６，４０７，２１３号に述べられているようにヒト化され、脱免疫化され、或いは修飾されて有効的ヒト抗体となる。
【００９１】
欧州特許第２３９４００号（Ｗｉｎｔｅｒら）では、１つの種の相補性決定領域（ＣＤＲ）の他種由来ＣＤＲとの置換（所定の可変領域内）によって抗体を改変することについて述べている。通常、非ヒト（例えば、マウス）抗体のＣＤＲは、組換え核酸技術を用いることによってヒト抗体における対応領域内に置換され、所望の置換抗体をコードする配列を生成する。所望のアイソタイプ（通常、ＣＨではガンマＩ、ＣＬではカッパ）のヒト定常領域遺伝子セグメントを付加することができ、ヒト化重鎖及び軽鎖遺伝子が哺乳動物細胞において同時発現され、可溶性ヒト化抗体を産生することができる。抗体をヒト化する他の方法も用いることができる。例えば、他の方法は、抗体の３次元構造、結合決定因子に３次元的に近接するフレームワーク位置及び免疫原性ペプチド配列を明らかにすることができる。例えば、ＷＯ９０／０７８６１；米国特許第５，６９３，７６２号；第５，６９３，７６１号；第５，５８５，０８９号；及び第５，５３０，１０１号；Ｔｅｍｐｅｓｔら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１並びに米国特許第６，４０７，２１３号を参照されたい。
【００９２】
時には、ヒトフレームワークへのＣＤＲの直接転移は、結果として得られる抗体の抗原結合親和性の喪失をもたらす。この理由は、一部の同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体ではフレームワーク領域内の一部のアミノ酸がＣＤＲと相互作用し、従って、抗体の全般的抗原結合親和性に影響を与えるためである。そのような場合、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）抗体の抗原結合活性を保持するため、アクセプター抗体のフレームワーク領域に「復帰突然変異」を導入することが肝要であろう。復帰突然変異を作製する一般的手法は当該技術分野において公知である。例えば、Ｑｕｅｅｎら（上記）、Ｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：２８６９−２８７３（１９９１）及びＷＯ９０／０７８６１（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ Ｉｎｃ．）では、２つの主要ステップを含む手法について述べている。まず、同系（ｃｏｇｎａｔｅ）マウス抗体のＶ領域フレームワークに対する至適蛋白質配列相同性のコンピュータ解析により、ヒトＶフレームワーク領域が選択される。次に、マウスＣＤＲと相互作用する可能性があるフレームワークアミノ酸残基を可視化するため、コンピュータによってマウスＶ領域の三次構造がモデル化され、次に、これらのマウスアミノ酸残基が相同性ヒトフレームワークに重ね合わされる。この２ステップ手法下では、ヒト化抗体を設計するための複数の基準がある。第一の基準は、ヒトアクセプターとして、通常、非ヒトドナー免疫グロブリンと相同の特定のヒト免疫グロブリン由来のフレームワークを用いることであり、或いは多くのヒト抗体由来のコンセンサスフレームワークを用いることである。第二の基準は、ヒトアクセプター残基が異常であって、ドナー残基がフレームワークの特定の残基においてヒト配列に典型的である場合、アクセプターアミノ酸よりもドナーアミノ酸を用いることである。第三の基準は、ＣＤＲにすぐ隣接する位置において、アクセプターフレームワークアミノ酸残基よりもドナーフレームワークアミノ酸残基を用いることである。
【００９３】
例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１（１９９１）に述べられているような異なる手法を用いてもよい。この手法下では、それぞれＮＥＷＭ及びＲＥＩ重鎖・軽鎖由来のＶ領域フレームワークが、マウス残基の過激な導入なしにＣＤＲ移植に用いられる。この手法を用いる利点は、ＮＥＷＭ及びＲＥＩ可変領域の三次元構造がＸ線結晶学から既知であり、従って、ＣＤＲとＶ領域フレームワーク残基との具体的な相互作用を容易にモデル化することができることである。
【００９４】
ＶＬＡ−１に結合する完全ヒトモノクローナル抗体は、例えば、Ｂｏｅｒｎｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５に述べられているように、ｉｎ ｖｉｔｒｏにて初回抗原刺激を受けたヒト脾細胞を用いて生成することができる。該完全ヒトモノクローナル抗体は、Ｐｅｒｓｓｏｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２４３２−２４３６或いはＨｕａｎｇ及びＳｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４１：２２７−２３６；また、米国特許第５，７９８，２３０号に述べられているようなレパートリークローニングによっても調製されうる。大規模な非免疫ヒトファージ提示ライブラリーを用いて、標準的なファージ技術を用いてヒト治療法として開発されうる高親和性抗体を単離してもよい（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１−８；及び米国特許出願２００３−０２３２３３３を参照）。完全ヒト抗体を生成するための他の方法は、不活性化された内在性Ｉｇ遺伝子座を有するとともに、非再配列ヒト抗体重鎖及び軽鎖遺伝子に対してトランスジェニックな非ヒト動物の使用を伴う。そのようなトランスジェニック動物はα１−Ｉ又はその所望の抗原性断片で免疫化することができ、次に、これに由来するＢ細胞からハイブリドーマが作製される。これらの方法は、例えば、ヒトＩｇミニ遺伝子座を含むトランスジェニックマウスに関するＧｅｎＰｈａｒｍ／Ｍｅｄａｒｅｘ社（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）の様々な出版物／特許（例えば、米国特許第５，７８９，６５０号）；ＸＥＮＯＭＩＣＥに関するＡｂｇｅｎｉｘ社（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）の様々な出版物／特許（例えば、米国特許第６，０７５，１８１号；第６，１５０，５８４号及び第６，１６２，９６３号；Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１（１９９４）；及びＭｅｎｄｅｚら、１５（２）：１４６−５６（１９９７））；並びに「トランソミック（ｔｒａｎｓｏｍｉｃ）」マウスに関するキリン社（日本）の様々な出版物／特許（例えば、欧州特許第８４３９６１号及び富塚（Ｔｏｍｉｚｕｋａ）ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６：１３３−１４４３（１９９７））に述べられている。
【００９５】
（抗体及び蛋白質の産生）
本明細書で述べる抗体及び他の蛋白質は原核細胞及び真核細胞において産生されうる。一実施形態では、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｐｉｃｈｉａ属（例えば、Ｐｏｗｅｒｓら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５１：１２３−３５を参照）、Ｈａｎｓｅｕｌａ属又はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のような酵母細胞において発現される。
【００９６】
抗体、特に完全長抗体、例えば、ＩｇＧは、哺乳動物細胞において産生されうる。組換え発現のための例示的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に述べられているようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に用いられる、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０に述べられているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、Ｋ５６２並びにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物由来細胞が含まれる。例えば、該細胞は哺乳動物上皮細胞である。
【００９７】
免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加え、組換え発現ベクターは更なる核酸配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択可能マーカー遺伝子を運びうる。選択可能マーカー遺伝子はベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号；第４，６３４，６６５号；及び第５，１７９，０１７号を参照）。例示的な選択可能マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅でｄｈｆｒ宿主細胞に用いる）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。
【００９８】
抗体（例えば、完全長抗体又はその抗原結合部）の組換え発現のための例示的な発現系では、抗体重鎖及び抗体軽鎖をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。該組換え発現ベクター内では、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は各々、高レベルの遺伝子の転写を促進するため、エンハンサー／プロモーター調節要素（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素又はＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素のような、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に機能的に結合している。該組換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子も運び、これは、メトトレキサート選択／増幅を用いて該ベクターをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能とする。選択された形質転換宿主細胞は抗体重鎖及び軽鎖の発現を可能とするように培養され、培地から無傷の抗体が回収される。標準的な分子生物学法を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換細胞を選択し、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。例えば、一部の抗体は、プロテインＡ又はプロテインＧを用いたアフィニティークロマトグラフィーによって分離することができる。
【００９９】
抗体は、例えば、Ｆｃ受容体又はＣ１ｑ又はその両方との相互作用を低下させ、或いは排除するため、修飾、例えば、Ｆｃ機能を変化させる修飾も含みうる。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つ又はそれ以上の残基、例えば、米国特許第５，６４８，２６０号におけるナンバリングに従って、例えば、１つ又はそれ以上の残基２３４及び２３７において突然変異させることができる。他の例示的な修飾には、米国特許第５，６４８，２６０号に述べられている修飾が含まれる。
【０１００】
Ｆｃドメインを含む一部の蛋白質では、抗体／蛋白質生成系は、Ｆｃ領域がグリコシル化される抗体又は他の蛋白質を合成するように設計されうる。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインはＣＨ２ドメインにおけるアスパラギン２９７においてグリコシル化される。Ｆｃドメインは他の真核細胞性翻訳後修飾も含みうる。他の場合では、蛋白質はグリコシル化されない形態で生成される。
【０１０１】
抗体はトランスジェニック動物によって生成することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号では、トランスジェニック哺乳動物の乳腺に抗体を発現させる方法について述べている。乳汁特異的プロモーター及び対象とする抗体、例えば、本明細書で述べる抗体をコードする核酸配列並びに分泌シグナル配列を含むトランス遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって生成される乳汁は、乳汁に分泌される、対象とする蛋白質、例えば、抗体を含む。該蛋白質は乳汁から精製され、或いは一部の用途では直接使用されうる。
【０１０２】
（他の部分）
本明細書で述べる抗体は所望の機能を果たすため、他の部分を更に含みうる。例えば、抗体は、抗体の標的とされる細胞の殺滅のための毒素部分（例えば、破傷風トキソイド又はリシン）又は放射性核種（例えば、１１１Ｉｎ又は９０Ｙ）を含みうる（例えば、米国特許第６，３０７，０２６号を参照）。抗体は簡便な分離又は検出のための部分（例えば、ビオチン、蛍光部分、放射活性部分、ヒスチジン標識など）を含みうる。抗体はその血清中半減期を延長することができる部分、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分も含みうる。
【０１０３】
（ポリペプチドアンタゴニスト）
抗体に加え、本明細書で述べる方法において有用なＶＬＡ−１アンタゴニストは、例えば、ＶＬＡ−１とその生理的リガンド、例えば、コラーゲン、例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ又はラミニンとの相互作用を遮断することにより、或いはＶＬＡ−１依存性細胞シグナル伝達を調節することにより、ＶＬＡ−１の機能を阻害するポリペプチドを含む。
【０１０４】
ＶＬＡ−１アンタゴニストは１つ又はそれ以上の下記の特性を有する薬剤である：（１）ＶＬＡ−１／ＶＬＡ−１リガンド相互作用、例えば、ＶＬＡ−１／コラーゲン相互作用を阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１保有細胞表面上のＶＬＡ−１抗原を覆い或いはこれに結合する；（２）ＶＬＡ−１媒介シグナル、例えば、ＶＬＡ−１／コラーゲン媒介シグナリングの伝達を変更し、好ましくは阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１保有細胞表面上のＶＬＡ−１抗原を覆い或いはこれに結合する；（３）ＶＬＡ−１／ＶＬＡ−１リガンド相互作用を阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１リガンド、例えば、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ又はＩＶ）又はラミニンを覆い或いはこれに結合する；（４）ＶＬＡ−１リガンド媒介ＶＬＡ−１シグナリング、例えば、コラーゲン媒介ＶＬＡ−１シグナリングの伝達を変更し、好ましくは阻害するのに十分な特異性を有し、ＶＬＡ−１リガンド、例えば、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ又はＩＶ）又はラミニンを覆い或いはこれに結合する。好ましい実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニストは特性１及び２の一方又は両方を有する。他の好ましい実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニストは特性３及び４の一方又は両方を有する。
【０１０５】
本明細書で述べる方法の目的に照らせば、ＶＬＡ−１保有細胞表面上のＶＬＡ−１抗原に結合することが可能であって、ＶＬＡ−１抗原を効果的に遮断或いは覆う如何なる薬剤も、本明細書での実施例において用いられるモノクローナル抗体の等価物であるとみなされる。
【０１０６】
本明細書で論じるように、本明細書で述べる方法において用いられるＶＬＡ−１アンタゴニストは、抗体又は抗体誘導体に限定されず、他の分子、例えば、ＶＬＡ−１に結合する可溶性形態の他の蛋白質、例えば、ＶＬＡ−１に対する天然結合蛋白質でもよい。これらのアンタゴニストには、コラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶ；コラーゲンＩ，ＩＩＩ若しくはＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチド；ラミニン；及びラミニンのＶＬＡ−１結合ペプチドが含まれる（例えば、Ｐｆａｆｆら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２５：９７５−８４，１９９４；Ｃｏｌｏｇｎａｔｏ−Ｐｙｋｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９３９８−９４０６，１９９５；及びＣｏｌｏｇｎａｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２９３３０−２９３３６，１９９７を参照）。例えば、コラーゲンＩ，ＩＩＩ又はＩＶのＶＬＡ−１結合ペプチドは、アミノ酸配列ＧＦＯＧＥＲ（例えば、Ｋｎｉｇｈｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３５−４０，２０００を参照）、ＧＲＯＧＥＲ（例えば、Ｋｉｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：３２５１２−３２５２０，２００５を参照）又は類似の保存的置換アミノ酸配列を含みうる。他のアンタゴニストには、ＶＬＡ−１ペプチド、例えば、アミノ酸配列ＶＱＲＧＧＲ又は類似の保存的置換アミノ酸配列を含むペプチド並びにペプチド模倣剤、例えば、ＷＯ０１／９６３６５；米国特許第６，３２６，４０３号及び第６，００１，９６１号に述べられているペプチド模倣剤が含まれる。これらのアンタゴニストは、ＶＬＡ−１に対する細胞表面結合蛋白質と競合することにより、或いはＶＬＡ−１機能を変化させることにより、作用しうる。
【０１０７】
（小分子アンタゴニスト）
抗体に加え、本明細書で述べる方法において有用なＶＬＡ−１アンタゴニストは、例えば、ＶＬＡ−１とその生理的リガンド、例えば、コラーゲンとの相互作用を遮断することにより、或いはＶＬＡ−１依存性細胞シグナル伝達を調節することにより、ＶＬＡ−１の機能を阻害する任意の非抗体化合物を含む。これらの化合物の例は、小分子化合物、例えば、Ｗｅｉｔｚ−Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：６８７−６９２，２００１）に述べられている小分子化合物である。これらの化合物は、例えば、コンビナトリアル小分子ライブラリー、コンビナトリアル抗体ライブラリー、合理的薬剤設計及び従来の有機合成、引き続いての、当該技術分野において公知の任意の方法を用いた拮抗作用に対するスクリーニングを用いて特定することができる。
【０１０８】
一例では、組換え発現されたＶＬＡ−１又はその機能的断片を用いて、天然、半合成又は合成化合物のライブラリーをスクリーニングすることができる。特に有用なタイプのライブラリーには、コンビナトリアル小有機分子ライブラリー、ファージ提示ライブラリー及びコンビナトリアルペプチドライブラリーが含まれる。
【０１０９】
ライブラリーの構成要素が特定のポリペプチドに結合するかを判定する方法は、当該技術分野において公知である。一般的に、ポリペプチド標的物質は非特異的或いは特異的結合により、固体支持体表面に結合される。特異的結合は、プレート又はカラムのような固体支持体に結合される蛋白質を認識する抗体を用いてなされうる。或いは、特異的結合は、エピトープタグを介し、グルタチオン被覆固体支持体へのＧＳＴ結合又はプロテインＡ固体支持体へのＩｇＧ融合蛋白質結合のようになされうる。
【０１１０】
或いは、組換え発現ＶＬＡ−１又はその部分は、Ｍ１３のようなファージの表面上に発現されうる。移動相におけるライブラリーは、標的と化合物との特異的結合を促進する条件下でインキュベートされる。次に、標的に結合する化合物が特定されうる。或いは、ライブラリーは固体支持体に結合され、ポリペプチド標的物質は移動相にある。
【０１１１】
化合物とＶＬＡ−１標的物質との結合は多くの方法によって判定されうる。競合ＥＬＩＳＡ又はＲＩＡのような技法によって結合を特定することができ、例えば、化合物の標的への結合が抗体の同一標的への結合を低減する。これらの方法は当該技術分野において公知である。別の方法は、製造業者が提供する方法を用いて標的と化合物との相互作用を測定するため、ＢｉａＣＯＲＥを用いることである。好ましい方法は自動化ハイスループットスクリーニングであり、例えば、Ｂｕｒｂａｕｍら、Ｃｕｒｒ ＯｐｉｎＣｈｅｍ Ｂｉｏｌ．１：７２−８（１９９７）及びＳｃｈｕｌｌｅｋら、Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４６：２０−９（１９９７）を参照されたい。
【０１１２】
標的に結合する候補化合物が特定されると、該化合物が標的の活性を阻害するかを判定することができる。例えば、候補化合物は、コラーゲンＩＶに対するＫ５６２−α１依存性接着を阻害する能力をスクリーニングするのに用いることができる。例えば、米国特許出願６０／３０３，６８９及びＷＯ０２／０８３８５４を参照されたい。別例では、候補化合物は、（１）ＶＬＡ−１発現細胞又は（２）α１β１インテグリン含有分子若しくはその断片、例えば、α１−Ｉドメインへの抗ＶＬＡ−１抗体の結合で競合するのに用いられる。ＶＬＡ−１アンタゴニストを特定する別の方法は、合理的な薬剤設計のため、組換え発現ＶＬＡ−１の構造を用いることである。例えば、ＷＯ０１／７３４４４を参照されたい。
【０１１３】
（核酸アンタゴニスト）
一部の実施形態では、ＶＬＡ−１をコードする内在性遺伝子の発現を低減するのに核酸アンタゴニストが用いられる。一実施形態では、該核酸アンタゴニストはＶＬＡ−１をコードするｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡである。他のタイプのブロッキング核酸、例えば、ｄｓＲＮＡ、リボザイム、三重らせん形成物質、アプタマー又はアンチセンス核酸も用いることができる。
【０１１４】
ｓｉＲＮＡは、オーバーハングを任意に含む小型２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。例えば、ｓｉＲＮＡの２本鎖領域は約１８〜２５ヌクレオチド長、例えば、約１９，２０，２１，２２，２３又は２４ヌクレオチド長である。通常、ｓｉＲＮＡ配列は標的ｍＲＮＡに正確に相補的である。ｄｓＲＮＡ、特にｓｉＲＮＡを用いて哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）における遺伝子発現をサイレンシングすることができる。例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：６４９９−６５０３；Ｂｉｌｌｙら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：１４４２８−１４４３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒら（２００１）Ｎａｔｕｒｅ．４１１：４９４−８；Ｙａｎｇら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：９９４２−９９４７、米国特許出願２００３０１６６２８２，２００３０１４３２０４，２００４００３８２７８及び２００３０２２４４３２を参照されたい。
【０１１５】
アンチセンス剤は、例えば、約８〜約８０核酸塩基（即ち、約８〜約８０ヌクレオチド）、例えば、約８〜約５０核酸塩基又は約１２〜約３０核酸塩基を含みうる。アンチセンス化合物は、リボザイム、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）及び標的核酸にハイブリダイズし、その発現を調節する他の短い触媒ＲＮＡ若しくは触媒オリゴヌクレオチドを含む。アンチセンス化合物は、標的遺伝子における配列に相補的な、少なくとも８個の一続きの連続核酸塩基を含みうる。オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズできるために、その標的核酸配列に１００％相補的である必要はない。オリゴヌクレオチドの標的への結合が標的分子の正常な機能に干渉し、有用性の喪失を生じさせる場合、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズでき、特異的結合が所望される条件下、即ち、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ又は治療処置の場合の生理的条件下、或いはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの場合、該アッセイが行われる条件下で、オリゴヌクレオチドの非標的配列への非特異的結合を避けるのに十分な程度の相補性がある。
【０１１６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのｍＲＮＡ（例えば、ＶＬＡ−１をコードするｍＲＮＡ）とのハイブリダイゼーションは、ｍＲＮＡの１つ又はそれ以上の正常な機能に干渉しうる。干渉されるｍＲＮＡの機能には、あらゆる主要な機能、例えば、蛋白質翻訳部位へのＲＮＡの転位、ＲＮＡからの蛋白質の翻訳、１つ若しくはそれ以上のｍＲＮＡ種を生じさせるＲＮＡのスプライシング及びＲＮＡによって関与されうる触媒活性が含まれる。特定の蛋白質のＲＮＡへの結合も、アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮＡへのハイブリダイゼーションによって干渉されうる。
【０１１７】
例示的なアンチセンス化合物には、標的核酸、例えば、ＶＬＡ−１をコードするｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするＤＮＡ又はＲＮＡ配列が含まれる。相補領域は約８〜約８０核酸塩基長にて延びうる。該化合物は１つ又はそれ以上の修飾核酸塩基を含みうる。修飾核酸塩基には、例えば、５−ヨードウラシル、５−ヨードシトシンのような５−置換ピリミジン並びにＣ５−プロピニルシトシン及びＣ５−プロピニルウラシルのようなＣ５−プロピニルピリミジンが含まれうる。他の好適な修飾核酸塩基には、Ｎ４−−（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルアミノシトシン及びＮ４，Ｎ４-−（Ｃ１−Ｃ１２）ジアルキルアミノ
シトシンが含まれる。修飾核酸塩基には、７−置換−８−アザ−７−デアザプリン及び７−置換−７−デアザプリン、例えば、７−ヨード−７−デアザプリン、７−シアノ−７−デアザプリン、７−アミノカルボニル−７−デアザプリンも含まれうる。これらの例には、６−アミノ−７−ヨード−７−デアザプリン、６−アミノ−７−シアノ−７−デアザプリン、６−アミノ−７−アミノカルボニル−７−デアザプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−ヨード−７−デアザプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−シアノ−７−デアザプリン及び２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−アミノカルボニル−７−デアザプリンが含まれる。更に、Ｎ６−メチルアミノアデニン及びＮ６，Ｎ６−ジメチルアミノアデニンを含む、Ｎ６−−（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルアミノプリン及びＮ６，Ｎ６−−（Ｃ１
−Ｃ１２）ジアルキルアミノプリンも好適な修飾核酸塩基である。同様に、例えば、６−チオグアニンを含む、他の６−置換プリンも適切な修飾核酸塩基を構成しうる。他の好適な核酸塩基には、２−チオウラシル、８−ブロモアデニン、８−ブロモグアニン、２−フルオロアデニン及び２−フルオログアニンが含まれる。いずれもの前記修飾核酸塩基の誘導体も適切である。いずれもの前述の化合物の置換基には、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ２−Ｃ３０アルケニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ハロ、アミノ、アミド、ニトロ、チオ、スルホニル、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニルなどが含まれる。
【０１１８】
他のタイプの核酸剤についての記述も利用できる。例えば、米国特許第４，９８７，０７１号；第５，１１６，７４２号；及び第５，０９３，２４６号；Ｗｏｏｌｆら（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ；Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ（編）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）；８９：７３０５−９；Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ及びＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４；Ｈｅｌｅｎｅ（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；並びにＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照されたい。
【０１１９】
本明細書で述べる核酸、例えば、本明細書で述べるアンチセンス核酸は、核酸を送達する遺伝子治療プロトコルの一部として用いられる遺伝子構築体に組み込むことができ、これは、作用物質、例えば、アンチセンス核酸を細胞内に発現・産生させるのに用いることができる。そのような構成要素の発現構築体は、任意の生物学的に有効な担体、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏにて該構成要素遺伝子を細胞に効果的に送達することができる任意の製剤又は組成物にて投与されうる。その手法には、組換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス及び単純ヘルペスウイルス１型を含むウイルスベクター或いは組換え細菌又は真核生物プラスミドへの対象遺伝子の挿入が含まれる。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクションする；プラスミドＤＮＡは、例えば、カチオン性リポソーム（リポフェクチン）或いは誘導体化（例えば、抗体結合）、ポリリシン共役体、グラマシジンＳ、人工ウイルスエンベロープ又は他のそのような細胞内担体の補助により、更に、遺伝子構築体の直接注入又はｉｎ ｖｉｖｏにて行われるＣａＰＯ４沈降により、送達されうる。
【０１２０】
細胞内への核酸のｉｎ ｖｉｖｏ導入に好ましい手法は、核酸、例えば、ｃＤＮＡを含むウイルスベクターの使用によるものである。ウイルスベクターによる細胞の感染は、標的細胞の大部分が核酸を受け取ることができるという利点を有する。加えて、ウイルスベクター内にて、例えば、ウイルスベクターに含まれるｃＤＮＡによってコードされた分子は、ウイルスベクターの核酸を取り込んだ細胞内で効率的に発現される。
【０１２１】
レトロウイルスベクター及びアデノ随伴ウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏでの外来遺伝子の、特にヒトへの送達のための組換え遺伝子送達系として用いることができる。これらのベクターは細胞への遺伝子の効率的な送達を与え、送達される核酸は宿主の染色体ＤＮＡ内に安定して組み込まれる。組換えレトロウイルスを生成し、また、そのようなウイルスによってｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏにて細胞を感染させるプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら（編）Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），セクション９．１０−９．１４及び他の標準的な実験室マニュアルに見出すことができる。好適なレトロウイルス例には、当業者には周知のｐＬＪ，ｐＺＩＰ，ｐＷＥ及びｐＥＭが含まれる。エコトロピック及びアンホトロピックレトロウイルス系を調製するための好適なパッケージングウイルス株例には、ΨＣｒｉｐ，ΨＣｒｅ，Ψ２及びΨＡｍが含まれる。レトロウイルスは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏにて上皮細胞を含む多くの異なる細胞型に種々の遺伝子を導入するのに用いられている（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５−１３９８；Ｄａｎｏｓ及びＭｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：６４６０−６４６４；Ｗｉｌｓｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：３０１４−３０１８；Ａｒｍｅｎｔａｎｏら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６１４１−６１４５；Ｈｕｂｅｒら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８０３９−８０４３；Ｆｅｒｒｙら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８３７７−８３８１；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５４：１８０２−１８０５；ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７６４０−７６４４；Ｋａｙら（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１−６４７；Ｄａｉら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０８９２−１０８９５；Ｈｗｕら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４１０４−４１１５；米国特許第４，８６８，１１６号及び第４，９８０，２８６号；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０７１３６；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０２４６８；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０５３４５；及びＰＣＴ出願ＷＯ９２／０７５７３を参照）。
【０１２２】
別のウイルス遺伝子送達系では、アデノウイルス由来ベクターを用いる。例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒら（１９８８）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５を参照されたい。アデノウイルス株Ａｄ５型ｄｌ３２４又は他のアデノウイルス株（例えば、Ａｄ２，Ａｄ３，Ａｄ７など）由来の好適なアデノウイルスベクターは当業者には公知である。
【０１２３】
対象遺伝子の送達に有用な更に別のウイルスベクター系はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅら（１９９２）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７：３４９−３５６；Ｓａｍｕｌｓｋｉら（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２８；及びＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１９６３−１９７３を参照されたい。
【０１２４】
（アプタマー）
アプタマーは、細胞表面蛋白質を含むほぼすべての分子を認識し、これに特異的に結合するのに用いることができる短いオリゴヌクレオチド配列である。指数的濃縮によるリガンドの系統的進化（ＳＥＬＥＸ）プロセスは強力であり、そのようなアプタマーを容易に特定するのに用いることができる。アプタマーは、治療及び診断に重要な広範な蛋白質、例えば、増殖因子及び細胞表面抗原のために作製されうる。これらのオリゴヌクレオチドは抗体と同様な親和性及び特異性によってその標的に結合する（Ｕｌｒｉｃｈ（２００６）Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：３０５−２６を参照）。Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標）は承認されたアプタマー治療法であり、一般的な眼球障害に対して承認された初の抗抗原性剤でもある。
【０１２５】
（人工転写因子）
ＶＬＡ−１の発現を調節するために人工転写因子を用いることもできる。人工転写因子は、ＶＬＡ−１をコードする内在性遺伝子における配列、例えば、調節領域にて、例えば、プロモーターに結合する能力のために、設計或いはライブラリーから選択することができる。例えば、人工転写因子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、ファージ提示を用いる、米国特許第６，５３４，２６１号）又はｉｎ ｖｉｖｏでの選択により、或いは認識コードに基づく設計により（例えば、ＷＯ００／４２２１９及び米国特許第６，５１１，８０８号を参照）、調製することができる。特に、多様なジンクフィンガードメインのライブラリーを作製する方法については、例えば、Ｒｅｂａｒら（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２６７：１２９；Ｇｒｅｉｓｍａｎ及びＰａｂｏ（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：６５７；Ｉｓａｌａｎら（２００１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １９：６５６；並びにＷｕら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９２：３４４を参照されたい。
【０１２６】
任意に、人工転写因子は、転写調節ドメイン、例えば、転写を活性化する活性ドメイン又は転写を抑制する抑制ドメインに融合させることができる。特に、抑制ドメインはＶＬＡ−１をコードする内在性遺伝子の発現を低減するのに用いることができる。人工転写因子自体が細胞に送達される異種核酸にコードされ得、或いは蛋白質自体が細胞に送達されうる（例えば、米国特許第６，５３４，２６１号を参照）。人工転写因子をコードする配列を含む異種核酸は、例えば、脳卒中損傷又は本明細書で述べる別の損傷の部位若しくはその近傍にて、細胞、例えば、神経細胞又はグリア細胞における人工転写因子の濃度の微調整を可能とするため、誘導プロモーターに機能的に結合されうる。
【０１２７】
（虚血損傷）
虚血とは組織への血液供給の低下又は消失をいう。本明細書で述べる方法は虚血と関連する損傷、即ち、「虚血損傷」を処置するのに用いることができる。虚血損傷は、例えば、腎臓、肝臓、肺、膵臓、骨格筋、腸、心臓及び脳に対する損傷を含みうる。虚血損傷は、例えば、急性心筋梗塞、選択的血管形成術、冠状動脈バイパス移植、心臓バイパス又は組織若しくは臓器移植を伴う手術（例えば、心臓移植）、移植後の組織拒絶反応、移植片対宿主病、脳卒中、頭部外傷、溺水、敗血症、心停止、ショック、アテローム性動脈硬化、高血圧、コカイン誘発性心疾患、喫煙誘発性心疾患、心不全、肺高血圧、出血、毛細血管漏出症候群（例えば、小児及び成人呼吸窮迫症候群）、多臓器系不全、低膠質浸透圧状態（例えば、飢餓、神経性無食欲症又は血清蛋白質の産生低下を伴う肝不全）、アナフィラキシー、低体温、寒冷傷害（例えば、低体温灌流又は凍傷に起因する）肝腎症候群、振戦譫妄、挫滅外傷、腸間膜不全、末梢血管障害、跛行、熱傷、感電、過剰薬剤誘発性血管拡張、過剰薬剤誘発性血管収縮、放射線暴露（例えば、蛍光透視又は放射線画像検査時）或いは高エネルギーへの暴露、例えば、レーザー光への暴露と関連し、或いはそれらによって引き起こされうる。過剰薬剤誘発性血管拡張は、例えば、ニトロプルシド、ヒドララゾン（ｈｙｄｒａｌａｚｏｎｅ）、ジアゾキサイド（ｄｙａｚｏｘｉｄｅ）、カルシウムチャンネル遮断薬又は全身麻酔薬によって引き起こされうる。過剰薬剤誘発性血管収縮は、例えば、ネオシネフリン、イソプロテレノール、ドーパミン、ドブタミン又はコカインによって引き起こされうる。
【０１２８】
（虚血再灌流損傷）
「虚血再灌流損傷」とは、一時的な血流停止後、身体領域への血流の再構築（再灌流）から生じる損傷をいう。例えば、虚血再灌流損傷は、大動脈瘤の修復及び臓器移植のような一部の外科的処置時に生じうる。臨床的に、虚血再灌流損傷は、合併症、例えば、成人呼吸窮迫症候群を含む肺機能障害、腎機能障害、血小板減少症、微小血管内へのフィブリン沈着及び播種性血管内凝固障害を含む消費性凝固障害、一過性及び持続性脊髄損傷、不整脈及び急性虚血性事象、急性肝細胞障害及び壊死を含む肝機能障害、出血及び／又は梗塞を含む消化管機能障害並びに多臓器不全（ＭＳＯＤ）或いは急性全身性炎症痛症候群（ａｃｕｔｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）（ＳＩＲＳ）により明らかとなりうる。該損傷は、血液供給が遮断された身体部において生じ得、或いは虚血期中に血液を十分に供給されている体部において生じうる。
【０１２９】
（脳卒中）
脳卒中は血管の疾患又は損傷から生じる急性脳損傷に対する一般的用語である。脳卒中は少なくとも２つの主要カテゴリー：出血性脳卒中（正常血管の外部への血液の漏出から生じる）及び虚血性脳卒中（血液供給不足による脳虚血）に分類することができる。虚血性脳卒中を引き起こしうる一部の事象には、血栓、塞栓及び全身性低循環（結果的に虚血及び低酸素を伴う）が含まれる。
【０１３０】
一般的に、脳卒中は酸素欠乏及び二次事象による脳内の神経細胞の死及び損傷を引き起こす。血液供給不足又は他の損傷の結果として死滅する脳領域は梗塞と称される。場合により、本明細書で述べる処置を用いて、例えば、神経細胞の死及び損傷を引き起こす二次事象を低減することにより、梗塞サイズを縮小させ、或いは最小化することができる。
【０１３１】
通常、脳動脈壁に蓄積した血栓から生じる大脳動脈の閉塞は脳血栓と称される。脳塞栓では、大脳動脈をブロックする閉塞性物質が循環の下流に生じる（例えば、塞栓子は心臓から大脳動脈に運搬される）。脳卒中が血栓又は塞栓のいずれによって引き起こされるかを識別することは困難であるため、血栓塞栓症という用語がこれらの両タイプの脳卒中を網羅するのに用いられる。全身性低循環は、血液濃度の低下、ヘマトクリット値の低下、低血圧又は血液を適切に送り込む心臓の能力低下の結果として生じうる。
【０１３２】
血栓塞栓性脳卒中の処置には組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）のような血栓溶解薬が用いられている。これらの分子は、虚血の原因となる血栓を溶解させることによって機能する。そのような薬剤は、虚血部位における大脳血流を少なくとも部分的に回復させ、且つ神経細胞生存能を維持するため、急性脳卒中後、可能な限り速やかに（好ましくは、３時間以内に）投与される場合、最も有用であると考えられている。血栓塞栓性脳卒中を起こした被験体において治療上の利益を得るため、そのような血栓溶解薬の代替として、或いは血栓溶解薬と組み合わせてＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。
【０１３３】
血栓溶解薬は出血を増悪させるため、出血性脳卒中におけるその使用は禁忌である。しかし、出血性脳卒中の場合において治療上の利益を付与するのにＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。
【０１３４】
更に、ＶＬＡ−１アンタゴニストは予防的脳卒中治療として、或いはその構成要素として、例えば、ＴＩＡを起こし、或いはＴＩＡの症状を示している被験体に投与することができる。脳卒中の症状が２４時間未満持続し、被験体が完全に回復する場合、被験体は一過性虚血発作（ＴＩＡ）を起こしたといわれる。ＴＩＡの症状には、発話、視覚、感覚又は動作の一時的な障害が含まれる。ＴＩＡは本格的な脳卒中の前兆であると考えられることが多く、ＴＩＡを起こした被験体は、例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニスト単独による、或いは別の薬剤、例えば、抗凝固剤（例えば、クマリン及びヘパリン）又は抗血小板薬（例えば、アスピリン及びチクロピジン）を併用した予防的脳卒中治療の適応となる。
【０１３５】
（他の脳卒中処置）
脳卒中処置は、１つ又はそれ以上の脳卒中処置と組み合わせて用いることができる、１つ又はそれ以上のＶＬＡ−１アンタゴニストの使用を伴いうる。該処置は同時に施行することができるが、別個の時間に、例えば、所定の間隔内の別個の時間に、例えば、同じ４８，２４，１２，６，２又は１時間以内に施行することもできる。更に、該処置は明確な投与様式を用いて施行することができる。
【０１３６】
ＶＬＡ−１アンタゴニストを併用して施行することができる処置には、血栓溶解薬（例えば、ストレプトキナーゼ、アシル化プラスミノーゲン・ストレプトキナーゼ活性化因子
複合体（ＡＳＰＡＣ）、ウロキナーゼ、１本鎖ウロキナーゼ・プラスミノーゲン活性化因子（ｓｃｕ−ＰＡ）、抗炎症剤、蛇毒由来トロンビン様酵素、例えば、アンクロド、トロンビン阻害剤、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）及び上記各々の生物活性変異体）；抗凝固剤（例えば、ワルファリン又はヘパリン）；抗血小板薬（例えば、アスピリン）；糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤；グリコサミノグリカン；クマリン；ＧＣＳＦ；メラトニン；カスパーゼ阻害剤；抗酸化剤（例えば、ＮＸＹ−０５９、Ｌｅｅｓら（２００６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ ３５４，５８８−６００を参照）、神経保護剤（例えば、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬及びカンナビノイド拮抗薬）、抗ＣＤ１８抗体；抗ＣＤ１１ａ抗体；抗ＩＣＡＭ−１抗体；抗ＶＬＡ−４抗体、抗ＴＷＥＡＫ抗体、抗ＴＷＥＡＫ−Ｒ抗体、頸動脈内膜剥離術；血管形成術；ステントの挿入；並びに代替医療（例えば、鍼治療、漢方、瞑想、マッサージ、高圧酸素治療又は教育学的治療法（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅ
ｐｅｄａｇｏｇｙ））が含まれる。
【０１３７】
併用処置の特定例には、脳卒中症状の発症直後に脳卒中を起こした被験体にＶＬＡ−１アンタゴニストを投与すると同時に、別の処置として、例えば、ｔ−ＰＡを投与することを含む。翌日、被験体は、更に、以後の脳卒中を防ぐため、抗血小板薬による毎日の処置を開始し、その後、ＶＬＡ−１アンタゴニストの生物学的利用能を維持するため、追加用量のＶＬＡ−１アンタゴニストを服用しうる。別例として、ＴＩＡを起こした被験体は、ＴＩＡの診断直後に、少なくとも１週間、生物学的効果を付与する用量にてＶＬＡ−１アンタゴニスト処置を開始し、次に、翌日、抗血小板治療を開始しうる。
【０１３８】
（脳卒中のリスク因子）
脳卒中のリスク因子を用いて、予防的用量のＶＬＡ−１アンタゴニストを付与されうる被験体又はＶＬＡ−１アンタゴニストによる処置が必要とされる更なる兆候をモニタリングすべき被験体を特定することができる。場合により、被験体は、２，３若しくは４つ又はそれ以上のリスク因子、例えば、下記一覧の因子を有する場合、処置される。
【０１３９】
高血圧：高血圧（１４０／９０ｍｍＨｇ又はそれ以上）は極めて有意な脳卒中のリスク因子である。
【０１４０】
喫煙：喫煙は主要な予防可能な脳卒中のリスク因子である。たばこの煙中のニコチン及び一酸化炭素は血中酸素量を減少させる。これらは血管壁も損傷させ、凝塊をより形成しやすくさせる。喫煙と共に一部の種類の経口避妊薬を用いると、脳卒中リスクが大幅に上昇する。
【０１４１】
糖尿病：糖尿病は２回測定された１２６ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時血漿グルコース（血糖）と定義づけられる。糖尿病は治療可能であるが、糖尿病を有することは依然として脳卒中リスクを高める。糖尿病を有する多くの被験体は、高血圧、高血中コレステロールも有し、過体重である。これらの追加因子は脳卒中リスクを更に高める。
【０１４２】
頸動脈又は他の動脈疾患：頸部における頸動脈は血液を脳に供給する。アテローム性動脈硬化由来の脂肪性沈着物（動脈壁におけるプラークの蓄積）によって狭窄した頸動脈は、凝血塊によって遮断されうる。頸動脈疾患は頸動脈狭窄とも称される。
【０１４３】
末梢血管疾患：末梢血管疾患を有する被験体は頸動脈疾患のリスクが高く、これは脳卒中リスクを高める。末梢血管疾患は脚及び腕の筋肉へ血液を供給する血管の狭窄である。これは動脈壁における脂肪性沈着物のプラークによって生じる。
【０１４４】
心房細動は脳卒中リスクを高める。心臓の上方室が規則的に拍動するのではなく振動し、これは血液を貯留・凝固させうる。凝血塊が剥離し、血流に入り込み、脳に至る動脈に詰まると、脳卒中となる。
【０１４５】
他の心疾患：冠状動脈性心疾患又は心不全を有する被験体は、正常に働く心臓を有する被験体より高い脳卒中リスクを有する。拡張型心筋症（肥大した心臓）、心臓弁膜症及び一部のタイプの先天性心臓欠陥も脳卒中リスクを高める。
【０１４６】
一過性虚血発作（ＴＩＡ）：ＴＩＡは、脳卒中様症状を生じさせるが、持続的な損傷を生じさせない「警告脳卒中」である。ＴＩＡを認識・処置することにより、重症脳卒中のリスクを低減することができる。
【０１４７】
一部の血液障害：赤血球数の増加は血液を増粘させ、凝血塊を生じさせる可能性を高める。これは脳卒中リスクを高める。鎌状赤血球病（鎌状赤血球貧血とも称される）は、主にアフリカ系アメリカ人に影響を及ぼす遺伝性疾患である。「鎌状」赤血球は、身体の組織及び臓器へ酸素を運搬する能力が低下し、血管に粘着する傾向があり、これにより、脳への動脈が遮断され、脳卒中が引き起こされうる。
【０１４８】
高血中コレステロール：高濃度の血中総コレステロール（２４０ｍｇ／ｄＬ以上）は心疾患の主要なリスク因子であり、これは脳卒中リスクを高める。高濃度のＬＤＬコレステロール（１００ｍｇ／ｄＬ超）及びトリグリセリド（血中脂質、１５０ｍｇ／ｄＬ以上）は、冠状動脈性心臓病、虚血性脳卒中又は一過性虚血発作（ＴＩＡ）の既往を有する被験体において脳卒中リスクを高める。低濃度（４０ｍｇ／ｄＬ未満）のＨＤＬコレステロールも脳卒中リスクを高めうる。
【０１４９】
運動不足及び肥満：非活動性、肥満又はその両方の状態は、高血圧、高血中コレステロール、糖尿病、心疾患及び脳卒中のリスクを高めうる。
【０１５０】
過度の薬物乱用：過量のアルコールの飲酒及び静注薬物使用も脳卒中リスクを高めうる。
【０１５１】
加齢：小児を含むあらゆる年齢層の被験体が脳卒中を有するが、被験体が老齢であるほど脳卒中リスクが高まる。例えば、５５，６０，７０，８０又は８５歳以上でリスクは一層高くなりうる。
【０１５２】
性別（ジェンダー）：脳卒中は女性よりも男性において一般的である。ほとんどの年齢層において、任意の年において女性より多くの男性が脳卒中を有する。しかし、女性は全脳卒中死の半数以上を占める。妊娠女性はより高い脳卒中リスクを有する。
【０１５３】
遺伝（家族歴）：親、祖父母、姉妹又は兄弟が脳卒中を有したことがある場合、脳卒中リスクは高くなる。同様に、ある種の民族的背景は脳卒中リスクの上昇をもたらしうる。
【０１５４】
脳卒中又は心臓発作の既往：脳卒中又は心臓発作を有したことがある被験体は、その後、脳卒中を有するリスクがはるかに高くなる。
【０１５５】
（脳卒中評価基準）
脳卒中を有し、或いは脳卒中のリスクがある被験体を処置するＶＬＡ−１アンタゴニストの能力は、例えば、様々な基準を用いて主観的又は客観的に評価することができる。多くの評価ツールが評価することに利用できる。
【０１５６】
例示的な入院前脳卒中評価ツールには、シンシナチ脳卒中スケール（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ）及びロサンゼルス入院前脳卒中スクリーン（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ Ｐｒｅｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃｒｅｅｎ）（ＬＡＰＳＳ）が含まれる。急性期評価スケールには、例えば、カナダ神経学的スケール（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃａｌｅ）（ＣＮＳ）、グラスゴー・コーマ・スケール（ＧＣＳ）、半球脳卒中スケール（Ｈｅｍｐｉｓｐｈｅｒｉｃ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ）、Ｈｕｎｔ及びＨｅｓｓスケール、Ｍａｔｈｅｗ脳卒中スケール、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、ＮＩＨ脳卒中スケール（ＮＩＨＳＳ）、Ｏｒｇｏｇｏｚｏ脳卒中スケール、オックスフォードシャー地域脳卒中プロジェクト分類（Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｓｔｒｏｋｅ Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（Ｂａｍｆｏｒｄ）並びにスカンジナビア脳卒中スケールが含まれる。機能的評価スケールには、ベルグ・バランススケール（Ｂｅｒｇ Ｂａｌａｎｃｅ Ｓｃａｌｅ）、修正ランキンスケール（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｒａｎｋｉｎ Ｓｃａｌｅ）、脳卒中影響スケール（Ｓｔｒｏｋｅ Ｉｍｐａｃｔ Ｓｃａｌｅ）（ＳＩＳ）及び脳卒中特有生活の質評価（Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｍｅａｓｕｒｅ）（ＳＳ−ＱＯＬ）が含まれる。アウトカム評価ツールには、米国心臓協会脳卒中アウトカム分類（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｔｒｏｋｅ Ｏｕｔｃｏｍｅ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＡＨＡ ＳＯＣ）、バーセル指数、機能的自立度評価法（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）（ＦＩＭ（商標））、グラスゴー・アウトカム・スケール（Ｇｌａｓｇｏｗ Ｏｕｔｃｏｍｅ Ｓｃａｌｅ）（ＧＯＳ）並びに健康調査（Ｈｅａｌｔｈ Ｓｕｒｖｅｙ）ＳＦ−３６（商標）及びＳＦ−１２（商標）が含まれる。他の診断及びスクリーニング検査には、アクションリサーチ・アームテスト（Ａｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｒｍ Ｔｅｓｔ）、素晴らしき認知症スケール（Ｂｌｅｓｓｅｄ−Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ｓｃａｌｅ）、素晴らしき認知症情報・記憶・集中力検査（Ｂｌｅｓｓｅｄ−Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ−Ｍｅｍｏｒｙ−Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）、血管性認知症の診断のためのＤＳＭ−ＩＶ基準、Ｈａｃｈｉｎｓｋｉ虚血スケール、ハミルトンうつ病評価尺度（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、血管性認知症の診断のためのＮＩＮＤＳ−ＡＩＲＥＮ基準、Ｏｒｐｉｎｇｔｏｎ予後スコア、見当識・記憶・集中力小検査（Ｓｈｏｒｔ Ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ−Ｍｅｍｏｒｙ−Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）、心筋梗塞における血栓（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｉｎ Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）グレード評価スキーム、ＭＲＩ画像検査（例えば、拡散・灌流画像法（Ｈｅｎｎｉｎｇｅｒら、Ｓｔｒｏｋｅ ３７：１２８３−１２８７，２００６）、拡散強調（ＤＷＩ）ＭＲＩ法及びフロー感知画像（ｆｌｏｗ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｍａｇｉｎｇ）、例えば、水抑制反転回復（ｆｌｕｉｄ−ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒｅｃｏｖｅｒｙ）（ＦＬＡＩＲ））、機能及び分光画像（Ｋｏｒｏｓｈｅｔｚ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３９：２８３−２８４，１９９６）並びにＰＥＴ（Ｈｅｉｓｓら、Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｂｒａｉｎ Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｖ．５：２３５−２６３，１９９３）などが含まれる。
【０１５７】
評価はＶＬＡ−１アンタゴニストの投与前及び／又は投与後に行うことができる。
【０１５８】
（外傷性脳損傷）
本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストは外傷性脳損傷を処置するのに用いることができる。物理的力による脳に対する損傷は外傷性脳損傷（ＴＢＩ）と広義に称される。ＴＢＩの結果としての作用は、脳の構造及び／又は機能の変化に起因する、正常な脳プロセスの変化を引き起こす。脳損傷には開放性頭部損傷と閉鎖性頭部損傷の２つの基本的なタイプがある。開放性頭部損傷では、弾丸のような物体が頭蓋骨を貫通し、脳組織を損傷させる。通常、閉鎖性頭部損傷は、脳が前後に煽られ、頭蓋骨の内側に跳ね返る間の頭部の急激な動きによって引き起こされる。閉鎖性頭部損傷はこの２つ中で最も一般的であり、自動車又は転落に関わる事故から生じることが多い。閉鎖性頭部損傷では、蛮力又は強力な振動が脳を損傷させる。この急激な動きの圧迫は神経線維又は軸索を引き裂いて引き伸ばし、脳の異なる部分の間の結合を破壊する。ほとんどの場合、結果として生じる凝血塊又は血腫が脳又はその周囲を押し付け、頭部内圧を上昇させる。開放性及び閉鎖性頭部損傷は脳に重度の損傷を引き起こし、早急な治療を必要とすることになりうる。
【０１５９】
頭部を打ちつける力のタイプにより、以下のような様々な損傷：頭蓋骨内の脳の震動、震盪、頭蓋骨骨折、挫傷、硬膜下血腫又はびまん性軸索損傷が生じうる。各被験体の体験は異なるが、多くの被験体がＴＢＩに関して直面する共通の支障がある。報告されている可能性には、集中困難、無効な問題解決、短期・長期記憶障害及び運動若しくは感覚能力の低下が含まれ、摂食、着衣又は入浴のような日常生活技能を自立して行うことができなくなるほどである。最も広範に受け入れられている脳損傷の概念では、プロセスを一次性及び二次性事象に分ける。一次性脳損傷は衝撃時にある程度完結したものとみなされるが、二次損傷は外傷後数時間から数日にわたって進展する。
【０１６０】
一次性損傷は、交通事故のような救急事態又は一時的な意識喪失若しくは頭蓋骨骨折を引き起こす如何なることとも一般的に関連する損傷である。挫傷又は打撲傷様損傷は特定の衝撃位置下に生じることが多い。閉鎖性頭部損傷後の頭蓋骨内の脳の転位及び回旋は、長く結合している脳の神経線維又は軸索への剪断損傷をもたらし、これはびまん性軸索損傷と称される。裂傷は、脳が頭蓋骨内隆起に跨って回旋することによって引き起こされる、前頭葉・側頭葉又は血管の断裂と定義づけられる。血腫又は凝血塊は小血管が損傷によって破裂する際に生じる。これらは、頭蓋骨と脳の間（硬膜外又は硬膜下血腫）或いは脳実質自体の内部（脳内血腫）に生じうる。いずれの場合でも、十分に大きい場合、これらは脳を圧迫或いは転位させ、脳幹内の敏感な構造を損傷させる。また、これらは頭蓋骨内圧を上昇させ、最終的に脳への血液供給を遮断しうる。
【０１６１】
細胞レベルでの続発性二次性損傷は、脳損傷後に生じる最終的な組織喪失の主要原因と認識されるようになった。損傷組織では一連の生理、血管及び生化学事象が発動する。このプロセスは多数の系に関与し、神経ペプチド、カルシウム及びマグネシウムのような電解質、興奮性アミノ酸、プロスタグラジン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｄｉｎｓ）及びロイコトリエンのようなアラキドン酸代謝産物並びに酸素フリーラジカル形成の変化の可能性を含む。この二次性組織損傷が、脳損傷を有する被験体が被りうる大部分の長期重度有害作用の根底にある。この損傷を最小限にする処置は、正常若しくは正常に近い状態への回復又は恒久的障害の相違となりうる。
【０１６２】
広範な血管損傷は脳損傷の主要構成要素として益々関わるようになっている。血管反応は二相性であるように思われる。外傷の重症度により、初期変化には、血圧の初期上昇、脳血管の自動調節の初期喪失及び血液脳関門（ＢＢＢ）の一時的機能停止が含まれる。血管の変化は損傷後約６時間にて最大となるが、６日間も持続しうる。これらの血管の変化の臨床的意義は未だ不明であるが、特に若年被験体において認められることが多い遅発性脳腫脹に関連しうる。
【０１６３】
同様に、脳挫傷が脳壊死を生じさせるプロセスは複雑であり、また、数時間にわたって持続する。毒性プロセスには、酸素フリーラジカルの放出、細胞膜に対する損傷、カルシウムの流入に対するイオンチャネルの開口、サイトカインの放出並びに血管攣縮及び虚血を引き起こしうる高反応性物質中への遊離脂肪酸の代謝が含まれる。フリーラジカルは二次性損傷のほぼすべての機序のある時点で形成される。フリーラジカルの第一標的は細胞膜の脂肪酸である。脂質過酸化反応として周知のプロセスは、幾何級数的に進行する態様にて神経、グリア及び血管細胞膜を損傷させる。脂質過酸化反応は、抑制されないと、細胞膜表面上に拡大し、最終的に細胞死をもたらす。従って、フリーラジカルは、内皮細胞を損傷させ、血液脳関門（ＢＢＢ）に障害を与え、脳細胞を直接損傷させて、浮腫並びに
ニューロン及びグリアの構造変化を引き起こす。ＢＢＢの障害は脳浮腫及び脳細胞の損傷性血液由来産物への暴露の原因である。
【０１６４】
二次性全身性損傷（脳外）はその結果として脳への更なる損傷をもたらしうる。これは、あらゆる重症度の脳損傷後、特に、複数の損傷と関連する場合、極めて一般的である。従って、脳損傷を有する被験体は、脳損傷後数日間における再発間隔にて、低血中酸素、血圧、心肺の変化、発熱、血液凝固障害及び他の有害な変化の組合せを経験しうる。これらが生じるのは、そのような有害事象時に脳血管が弛緩して酸素及び血液の適切な供給を維持することができる正常な調節機構が、最初の外傷の結果として損なわれるときである。
【０１６５】
即時評価のプロトコルはその効率性及び信頼性において限界があり、侵襲的であることが多い。現在、コンピュータ支援断層撮影（ＣＴ）スキャンは、一次性脳損傷と関連する多くの異常を識別することができ、広範に利用でき、比較的低コストにて行うことができるため、ＴＢＩを評価するための標準的な診断処置として受け入れられている（Ｍａｒｉｋら、Ｃｈｅｓｔ １２２：６８８−７１１ ２００２；ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ ２３：７７５−７９１ ２００１）。しかし、ＴＢＩを有して救急科を受診する被験体の診断及び管理でのＣＴスキャンの使用は施設間で異なり得、ＣＴスキャン結果自体がＴＢＩ被験体において、特に、軽度ＴＢＩ損傷の場合、神経精神病学的転帰の不良予測因子となりうる（ＭｃＣｕｌｌａｇｈら、Ｂｒａｉｎ Ｉｎｊｕｒｙ １５：４８９−４９７ ２００１）。
【０１６６】
通常、ＴＢＩの即時処置は、脳内とその周囲における出血を制御するための手術、頭蓋内圧のモニタリング及び制御、脳への適切な血流の確保並びに他の損傷及び感染に対する身体処置を伴う。軽度脳損傷を有する被験体は軽微な症状を起こすことが多く、数日又は数週間、処置を引き延ばすことがある。被験体が治療を求めることを選択すると、診察、神経学的検査、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャン、シングルフォトンエミッションＣＴ（ＳＰＥＣＴ）スキャン、髄液中の神経伝達物質濃度のモニタリング、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン及びＸ線を用いて、被験体の損傷の程度を判定しうる。損傷のタイプ及び重症度によって更なるケアが決定する。
【０１６７】
ＴＢＩを受けた被験体において治療上の利益を果たすため、単独で、或いは別の処置と組み合わせてＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。更に、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、予防的ＴＢＩ治療として、或いはその構成要素として、例えば、ＴＢＩを受け、或いはＴＢＩの症状を示している被験体に投与することができる。例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、一次性損傷、二次性損傷又はその両方を処置するのに用いることができる。或いは、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、一次性損傷の処置に、また、二次性損傷の予防的治療として用いることができる。ＶＬＡ−１アンタゴニストの投与前及び／又は投与後に評価を行うことができる。
【０１６８】
（脊髄損傷）
本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストは脊髄損傷を処置するのに用いることができる。脊髄損傷（ＳＣＩ）は脊髄に対する損傷であり、その正常な運動、感覚又は自律神経機能の一時的或いは恒久的変化をもたらす。臨床試験及び実験的試験では、急性ＳＣＩ後、脊髄が一次性及び二次性損傷を被ることを立証している。一次性ＳＣＩは、機械的破裂、離断、硬膜外損傷又は神経要素の逸れから生じる。通常、この損傷は脊椎の骨折及び／又は脱臼で生じる。しかし、一次性ＳＣＩは脊椎の骨折又は脱臼の非存在下で生じうる。弾丸又は武器による貫通性損傷も一次性ＳＣＩを引き起こしうる（Ｂｕｒｎｅｙら、Ａｒｃｈ Ｓｕｒｇ １２８（５）：５９６−９（１９９３））。より一般的には、変位した骨片が貫通性の脊髄又は分節脊髄神経損傷を引き起こす。硬膜外損傷も一次性ＳＣＩを引き起こしうる。脊髄硬膜外血腫又は膿瘍は急性脊髄圧迫及び損傷を引き起こす。転移性疾患由来の脊髄圧迫は一般的な腫瘍の救急事態である。屈曲又は伸長の有無に関わらない脊柱の縦方向の逸れは、脊椎の骨折又は脱臼を伴わない一次性ＳＣＩをもたらしうる。ＶＬＡ−１アンタゴニストを用いて一次性脊髄損傷を処置することができる。
【０１６９】
二次性ＳＣＩの病態生理は、損傷後の最初の数日にわたって進行する、多数の細胞及び分子事象に関わる（Ｔａｔｏｒ，Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５：４０７−４１３（１９９５））。二次性ＳＣＩの最も重要な原因は、動脈破壊、動脈血栓及びショックに起因する低灌流によって引き起こされる、脊髄への血管損傷である。ＳＣＩは脊髄動脈に対する損傷又は侵害に由来する虚血を通して持続されうる。虚血に起因するＳＣＩは、大動脈血流が一時的に停止される手術中に生じうる。本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストを用いて二次性ＳＣＩ損傷を処置或いは予防することができる。
【０１７０】
脊髄損傷は毒性によっても引き起こされうる（Ｔａｔｏｒ，Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５：４０７−４１３（１９９５））。脊髄損傷における最も強力な毒性の１つは、興奮性アミノ酸神経伝達物質の蓄積及びこれによる引き続いての損傷である。グルタミン酸誘発性興奮毒性は細胞内カルシウムの上昇を引き起こす。次に、細胞内カルシウムの上昇はカルシウム依存性プロテアーゼ又はリパーゼの活性化を引き起こし得、これは、ニューロフィラメントを含む細胞骨格成分の分解及び細胞膜の溶解に起因する更なる損傷を生じさせる。アラキドン酸及びプロスタグランジンのようなエイコサノイドの過剰産生は、脂質過酸化反応及び酸素フリーラジカルに関連しうる。次に、損傷したニューロン膜からの血管作用性エイコサノイドの放出は、血管攣縮を誘発することによって進行性の外傷後虚血を引き起こしうる。局所又は全身循環に対する作用により、或いは損傷脊髄に対する直接作用により、内因性オピオイドも二次性損傷プロセスに関与しうる。本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストを用いて毒性から生じる脊髄損傷を処置或いは予防することができる。
【０１７１】
重大で進行性の浮腫が脊髄損傷に続発しうる。浮腫自体が有害であるか、或いは別の損傷機構、例えば、虚血又はグルタミン酸毒性の付帯現象であるかは不明である。浮腫は実験モデル及び臨床例において、脊髄において損傷部位から相当な距離で吻側及び尾側に拡大しうる。
【０１７２】
ＳＣＩは、米国脊髄損傷協会機能評価スケール（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｐｉｎａｌ Ｉｎｊｕｒｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＳＩＡ）Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃａｌｅ）に従って、損傷の程度に基づいて完全又は不完全に分類される。完全ＳＣＩでは、最下位仙骨分節において感覚及び運動機能が保存されていない（Ｗａｔｅｒｓら、Ｐａｒａｐｌｅｇｉａ ２９（９）：５７３−８１（１９９１））。不完全ＳＣＩでは、最下位仙骨分節を含む損傷レベル下方に感覚又は運動機能が保存されている（Ｗａｔｅｒｓら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ ７５（３）：３０６−１１（１９９４））。不完全脊髄損傷はより完全な損傷に進展しうる。より一般的には、初期事象後数時間から数日間、損傷レベルは１又は２の脊髄レベルにて上昇する。
【０１７３】
ＳＣＩの他の分類には、脊髄中心症候群、ブラウン・セカール症候群、脊髄前方症候群、脊髄円錐症候群及び馬尾症候群が含まれる。脊髄中心症候群は、仙骨感覚が低下し、下肢よりも大きい上肢の衰弱をもたらす頸部損傷と関連することが多い。ブラウン・セカール症候群は、対側の疼痛及び温度に対する感受性の喪失を伴う、比較的大きな同側の固有感覚及び運動感覚の喪失を引き起こす、脊髄の半側切断損傷に関わる。脊髄前方症候群は、運動機能並びに疼痛及び温度に対する感受性の変動的喪失を引き起こすが、固有感覚は維持される障害と関連することが多い。脊髄円錐症候群は仙髄及び腰髄神経根に対する損傷と関連する。この症候群は、膀胱、腸及び下肢における反射消失を特徴とするが、仙骨分節は反射の維持を示すこともありうる（例えば、球海綿体反射及び排尿反射）。馬尾症候群は、無反射性の膀胱、腸及び下肢をもたらす、脊柱管における腰仙部神経根に対する損傷に起因する。
【０１７４】
ＳＣＩから神経原性ショックが生じうる（Ｔａｔｏｒ，Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５：４０７−４１３（１９９５））。神経原性ショックとは、急性ＳＣＩにおける自律神経機能障害及び交感神経系制御障害から生じる低血症、徐脈及び末梢血管拡張の血行力学的三徴候を指し、脊髄ショック及び乏血性ショックと識別される。乏血性ショックは頻脈と関連する傾向にある。脊髄ショックは、自律神経機能障害と関連する、特定レベル下方の反射及び直腸の緊張を含む全神経機能の完全喪失と定義づけされる。カテコールアミンの放出により初期血圧上昇が認められ、次に、低血圧が続く。腸及び膀胱を含む弛緩性麻痺が認められ、持続勃起が発現する。これらの症状は、損傷レベル下方の反射弓が再び機能し始めるまで、数時間から数日間、持続する傾向にある。
【０１７５】
ＳＣＩの現行治療は、該疾患を有する被験体における運動機能及び運動感覚を改善することを目的とする。コルチコステロイドが治療の中心である。メチルプレドニゾロンのようなグルココルチコイドは急性ＳＣＩの二次作用を低下させると考えられ、非貫通性急性ＳＣＩにおける高用量メチルプレドニゾロンの使用は北米でケアの基準となっている。本明細書で述べるようないずれの分類のＳＣＩ又はその症状を処置するのに、本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニストを用いることができる。ＶＬＡ−１アンタゴニストは単独で、或いは別の既知のＳＣＩ治療法と組み合わせて用いることができる。
【０１７６】
（医薬組成物）
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、例えば、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩを処置するための被験体への投与のための医薬組成物として製剤化することができる。通常、医薬組成物は医薬的に許容可能な担体を含む。本明細書で用いられるように、「医薬的に許容可能な担体」は、生理的に適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。該組成物は医薬的に許容可能な塩、例えば、酸付加塩又は塩基付加塩を含みうる（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ら（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照）。
【０１７７】
ＶＬＡ−１アンタゴニストは標準的な方法に従って製剤化することができる。製剤処方は十分に確立した技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；及びＫｉｂｂｅ（編）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、第３版（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）に更に述べられている。
【０１７８】
一実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、賦形剤物質、例えば、塩化ナトリウム、第二リン酸ナトリウム七水和物、第一リン酸ナトリウム及び安定剤で製剤化することができる。これは、例えば、好適な濃度で緩衝液中に入れることができ、２〜８℃で保存することができる。
【０１７９】
該医薬組成物は様々な形態でよい。その形態には、例えば、液体、半固体及び固体剤形、例えば、溶液（例えば、注射用及び注入用溶液）、分散剤又は懸濁剤、錠剤、ピル、粉末、リポソーム並びに坐剤が含まれる。好ましい形態は目的とする投与様式及び治療用途に依存しうる。典型的には、本明細書で述べる薬剤の組成物は注射用又は注入用溶液の形態である。
【０１８０】
このような組成物は非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内又は筋肉内注射）によって投与することができる。本明細書で用いられるような「非経口投与」及び「非経口投与される」という語句は、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、通常、注射による投与であり、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経皮気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、髄腔内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内及び胸骨内注射・注入を含む。
【０１８１】
該組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム又は高濃度での安定保存に適した他の規則構造物として製剤化することができる。無菌注射用溶液は、本明細書で述べる薬剤を必要量にて、必要とされる通りに上記一覧の成分の１つ又は組合せと共に適切な溶媒に組み入れ、次に、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散剤は、本明細書で述べる薬剤を、塩基性分散媒及び上記一覧の成分からの必要な他の成分を含む無菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、本明細書で述べる薬剤の粉末に加え、事前に濾過滅菌された溶液由来の任意の所望の追加成分を生じさせる真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散剤の場合、必要な粒子サイズの維持により、また、界面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、該組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアレート塩及びゼラチンを含有させることによってもたらされうる。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、該化合物を速放から保護する担体を用いて調製され得、例えば、インプラントを含む放出制御製剤及びマイクロカプセル化送達系である。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル及びポリ乳酸を用いることができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は特許化され、或いは公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（編）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０１８３】
例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、例えば、血液、血清又は他の組織中の循環におけるその安定化及び／又は保持を、例えば、少なくとも１．５，２，５，１０又は５０倍向上させる部分で修飾することができる。該修飾アンタゴニストは、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩ後、損傷部位に到達することができるかを評価するため、評価されうる（例えば、標識形態のアンタゴニストを用いることにより）。
【０１８４】
例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、ポリマー、例えば、実質的に非抗原性のポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシド又はポリエチレンオキシドと結合させることができる。好適なポリマーは重量で実質的に異なる。約２００〜約３５，０００ダルトン（又は約１，０００〜約１５，０００及び２，０００〜約１２，５００）の範囲の数平均分子量を有するポリマーを用いることができる。
【０１８５】
例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストは、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコール又はポリビニルピロリドンにコンジュゲートすることができる。このようなポリマーの非限定的一覧には、ポリアルキレンオキシドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー並びにそれらのブロックコポリマーが含まれる。但し、ブロックコポリマーの水溶性は維持されるものとする。更なる有用なポリマーには、ポリオキシアルキレン、例えば、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン及びポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー（プルロニックス（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ））；ポリメタクリレート；カルボマー；並びに分岐又は非分岐多糖が含まれる。
【０１８６】
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）が第二の薬剤と併用される場合、その２つの薬剤は別個或いは共に製剤化することができる。例えば、それぞれの医薬組成物は、例えば、投与直前に混合されて共に投与することができ、或いは、例えば、同時又は異なる時間に別個に投与することができる。
【０１８７】
（投与）
本明細書で述べるＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）は、被験体、例えば、ヒト被験体に種々の方法によって投与することができる。多くの用途では、投与経路は、静脈内注射若しくは注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）又は筋肉内注射の１つである。場合により、投与はＣＮＳ内、例えば、鞘内、脳室内（ＩＣＶ）、脳内又は頭蓋内に直接行われうる。該アンタゴニストは固定用量として、或いはｍｇ／ｋｇ用量にて投与することができる。
【０１８８】
投与量は該アンタゴニストに対する抗体の生成を低減或いは阻止するように選択することもできる。
【０１８９】
遮断剤の投与経路及び／又は様式は、例えば、断層画像、神経学的検査及び脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩと関連する標準的パラメータ、例えば、本明細書で述べる評価基準を用いて、例えば、被験体をモニタリングすることにより、個々の症例に合うように調整することもできる。
【０１９０】
投与レジメンは、所望の応答、例えば、治療応答又は組合せ治療効果を付与するように調整される。一般に、被験体に生物利用可能量の薬剤を与えるため、任意の組合せの用量（個別又は共調合）のＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）（及び任意に第二の薬剤）を用いることができる。例えば、０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ，０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ，０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ，０．１〜５ｍｇ／ｋｇ又は０．３〜３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。
【０１９１】
本明細書で用いられるような用量単位形態又は「固定用量」とは、処置対象の被験体に単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と組み合わせ、また、任意に他の薬剤と組み合わせて、所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含む。
【０１９２】
ＶＬＡ−１アンタゴニストは、脳卒中症状若しくは徴候、ＴＢＩ症状又はＳＣＩ症状の発現後、約１０分〜約４８時間、より好ましくは、約１０分〜約２４時間、より好ましくは、３時間以内に少なくとも１回投与されうる。単回又は複数回投与が行われうる。代替的或いは付加的に、該アンタゴニストは連続注入によって投与されうる。脳卒中による虚血損傷を最小限にし、脳卒中後の炎症事象による損傷を最小限にし、別の脳卒中を予防し、或いは続発する脳卒中から生じうる損傷を最小限にし、一次性又は二次性ＴＢＩ若しくは症状を処置し、或いは一次性又は二次性ＳＣＩ若しくは症状を処置するため、該処置は、数日間、数週間、数カ月又は更に数年間継続しうる。
【０１９３】
例えば、被験体が脳卒中のリスクを有し、或いはＴＩＡを起こした場合、該アンタゴニストは予防措置として脳卒中の発症前に投与することができる。そのような予防的処置の期間は該アンタゴニストの単回投与でよく、或いは該処置は継続し得（例えば、複数回投与）、例えば、脳卒中のリスクがある被験体は、脳卒中が生じることを予防するため、数日間、数週間、数カ月又は更に数年間、該アンタゴニストで処置されうる。
【０１９４】
医薬組成物は治療有効量の本明細書記載のアンタゴニストを含む。そのような有効量は、投与アンタゴニストの効果、又は、２つ以上の薬剤が使用される場合、アンタゴニストと第二の薬剤との組合せ効果に基づいて決定することができる。また、アンタゴニストの治療有効量は、被験体の病態、年齢、性別及び体重のような因子並びに被験体において所望の応答を惹起する該化合物の能力、例えば、少なくとも１つの疾患パラメータ、例えば、脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩパラメータの改善、又は、疾患、例えば、脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩの少なくとも１つの症状の改善により異なりうる。治療有効量は、治療上有益な効果が該組成物の如何なる毒性又は有害作用をも上回る量でもある。
【０１９５】
（デバイス及びキット）
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）を含む医薬組成物は、医療デバイスを用いて投与することができる。該デバイスは、例えば、未熟な被験体又は当該分野の救急スタッフが救急事態において使用でき、医療施設及び他の医療装置に移動させることができるように、可搬性、室温保存及び使用容易性のような特徴を持たせて設計することができる。該デバイスは、例えば、ＶＬＡ−１アンタゴニストを含む医薬調製物を収納するための１つ又はそれ以上の収容部を含み得、１又はそれ以上の単位用量の該アンタゴニストを送達するように構成されうる。
【０１９６】
例えば、該医薬組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号；第５，３８３，８５１号；第５，３１２，３３５号；第５，０６４，４１３号；第４，９４１，８８０号；第４，７９０，８２４号；又は第４，５９６，５５６号に開示されているデバイスのような無針皮下注射デバイスを用いて投与することができる。周知のインプラント及びモジュール例には、制御速度にて薬剤を分注するための埋め込み型微量注入ポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通して薬剤投与するための治療デバイスを開示している米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度にて薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３３号；連続的薬剤送達のための変流量埋め込み型注入装置を開示している米国特許第４，４４７，２２４号；多室コンパートメントを有する浸透性薬剤送達系を開示している米国特許第４，４３９，１９６号；及び浸透性薬剤送達系を開示している米国特許第４，４７５，１９６号が含まれる。他の多くのデバイス、インプラント、送達系及びモジュールも公知である。
【０１９７】
ＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）はキットにて提供することができる。一実施形態では、該キットは、（ａ）ＶＬＡ−１アンタゴニストを含む組成物を収容する容器及び任意に（ｂ）情報資料を含む。該情報資料は、本明細書で述べる方法及び／又は治療上の有益性のための薬剤の使用に関する、説明的、使用説明的、営業的資料又は他の資料でよい。一実施形態では、該キットは、脳卒中、ＴＢＩ又はＳＣＩを処置するための第二の薬剤も含む。例えば、該キットは、ＶＬＡ−１アンタゴニストを含む組成物を収容する第一の容器及び該第二の薬剤を含む第二の容器を含む。
【０１９８】
該キットの情報資料はその形式において制約されない。一実施形態では、該情報資料は、該化合物の生成、該化合物の分子量、濃度、有効期限に関する情報、バッチ又は製造地情報などを含みうる。一実施形態では、該情報資料は、脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩを有している被験体又は脳卒中、ＴＢＩ若しくはＳＣＩのリスクがある被験体を処置するため、例えば、好適な用量、剤形又は投与様式（例えば、本明細書で述べる用量、剤形又は投与様式）にてＶＬＡ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＶＬＡ−１抗体）を投与する方法に関する。該情報は様々な形式にて提供することができ、印刷文、コンピュータ読取可能資料、ビデオ記録若しくは録音又は実体資料へのリンク若しくはアドレスを提供する情報が含まれる。
【０１９９】
該アンタゴニストに加え、該キット中の組成物は、他の成分、例えば、溶媒若しくは緩衝剤、安定剤又は保存剤を含みうる。該アンタゴニストは、任意の形態、例えば、液体、乾燥又は凍結乾燥形態、好ましくは、実質的に純粋且つ／或いは無菌の形態にて提供することができる。該薬剤が溶液にて提供される場合、該溶液は水溶液であることが好ましい。該薬剤が乾燥形態として提供される場合、一般に、再構成は好適な溶媒の添加による。該溶媒、例えば、無菌水又は緩衝剤は該キット中に任意に提供することができる。
【０２００】
該キットは、該組成物又は該薬剤を含む組成物用の１つ又はそれ以上の容器を含みうる。一部の実施形態では、該キットは該組成物と該情報資料用の別個の容器、仕切り又はコンパートメントを含む。例えば、該組成物は、ビン、バイアル又は注射器内に収容することができ、該情報資料はプラスチックスリーブ又はパケット内に収容することができる。他の実施形態では、該キットの別個の要素は単一の非分割容器内に収容される。例えば、該組成物は、該情報資料をラベル形状にて添付したビン、バイアル又は注射器内に収容される。一部の実施形態では、該キットは複数（例えば、パック）の個々の容器を含み、各容器は１つ又はそれ以上の単位用量形態（例えば、本明細書で述べる剤形）の薬剤を含む。該容器は、組合せ単位用量、例えば、該ＶＬＡ−１アンタゴニスト及び該第二の薬剤の両方を、例えば、所望の比率で含む単位を含みうる。例えば、該キットは複数の注射器、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパック又は医療デバイスを含み、例えば、各々が単一組合せ単位用量を含む。該キットの容器は気密性、防水性（例えば、湿度又は蒸発の変化に対して不浸透性）且つ／或いは遮光性でよい。
【０２０１】
該キットは、該組成物の投与に適したデバイス、例えば、注射器又は他の好適な送達デバイスを任意に含む。該デバイスは、一方又は両方の薬剤を予め装填した状態で提供することができ、或いは中身がないが充填に適した状態でもよい。
【実施例】
【０２０２】
（実施例１−局所脳虚血に対する抗ＶＬＡ−１抗体の効果）
（プロトコル）
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂ社から得た体重１８〜２０ｇのＣ５７Ｂ６雌マウスを本試験に用いた。以下の条件で概述される二試験群にマウスを分類した。
【０２０３】
【化１】
マウスＨａ３１／８又はＰ１．１７の腹腔内注射後、最初にマウスを２％イソフランで麻酔し、その後、フェイスマスクを介して供給したＯ２中１．０％イソフランにて維持した。フィードバック制御式加温パッド（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｉｎｃ．Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いて直腸温を３６．８〜３７．２℃に維持した。中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）前及びその間並びに再灌流後、ＰｅｒｉＦｌｕｘ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｉｍｅｄ Ｉｎｃ．、スウェーデン）を用いて局所脳血流（ｒＣＢＦ）をモニターした。
【０２０４】
中大脳動脈（ＭＣＡ）の可逆性閉塞で局所脳虚血を誘発するため、シリコーン／硬化剤混合物（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｋｕｌｚｅｒ社、ドイツ）を被覆した７．０ナイロンモノフィラメント縫合糸を右総頸動脈の内腔内に挿入した。内頸動脈を通して前大脳動脈の近位部まで該縫合糸を該挿入部位から９±１．０ｍｍ進め、その起点にてＭＣＡを完全に閉塞させた。ｒＣＢＦのレーザードップラー血流測定では、ｒＣＢＦがベースラインの２０％に低下したため、両群においてＭＣＡ閉塞が良好であることが示された。ＭＣＡＯは２時間持続し、その間、傷口を縫合し、麻酔を中止した。２時間のＭＣＡ閉塞後、該フィラメントを取り出し、マウスに２４時間再灌流を行った。ｒＣＢＦが以前のレベル状態であるかを判定した。ＭＣＡＯの２時間後且つ再灌流前、ｒＣＢＦが以前のレベルの５０％以上に戻って増大することが見出されたため、４匹のマウスを本試験から除外した。虚血前中後の生理的パラメータはすべて正常範囲内であり、群間に相違はなかった。
【０２０５】
それぞれ、ＭＣＡＯ後３０分、再灌流後２４時間にてオープンフィールドで神経学的欠損を評価・スコアリングした。その試験はＨａｒａら（１９９７）によって報告された。
【０２０６】
０，神経学的欠損を認めない（正常）
１，右前足を伸ばすことができない（軽度）
２，対側への旋回（中等度）
３，歩行及び右側反射の喪失（重度）
両群においてＭＣＡ閉塞後の虚血損傷の体積を測定した。２時間のＭＣＡＯ後の再灌流の２４時間後、断頭によりマウスを殺処分し、脳を速やかに取り出し、マウス脳マトリックスを用いて６つの１ｍｍ厚冠状断面にスライスした。次に、暗所にて脳切片を室温で３０分、２％２，３，５−塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ，Ｓｉｇｍａ社）中で染色し、次に、一晩、１０％中性緩衝ホルマリンに入れた。イメージスキャナ上で脳薄片を直接スキャンした。各切片の後面上で損傷を測定した（ＮＩＨ Ｉｍａｇｅ １．６１、米国国立衛生研究所（ＵＳ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ））。皮質及び線条体における梗塞領域の直接測定を行い、次に、これを浮腫の影響を排除するために以下の式を用いて補正した。
対側皮質の間接梗塞領域（％）＝［（対側領域−同側非外傷領域）／対側領域］×１００
総梗塞体積は、皮質及び線条体を含む連続梗塞領域の数値積分により計算した。以前の処置に関して観察者が盲検化されるように、該切片をコード化した後に測定を行った。対側無傷半球と比較した虚血半球サイズの増大（％）として浮腫を定量化した。
【０２０７】
（結果）
ＭＣＡＯを受けた対照抗体処置マウスは、脳の皮質及び皮質下領域全体にわたり、広範な損傷を保持した。虚血半球は著しく肥大し、有意な行動欠陥が認められた（例えば、回旋及び肢麻痺をもたらす不全片麻痺；図１Ａ参照）。
【０２０８】
対照抗体（Ｐ１．１７）で処置したマウスは、虚血半球の４７．１±３．８％に及ぶ梗塞を保持した。抗ＶＬＡ−１抗体で処置したマウスは、虚血半球のわずか３４．３±４．２％に及ぶ、有意に小さい梗塞を保持し（Ｐ＜０．０２、Ｓｔｕｄｅｎｔの片側Ｔ検定、ｎ＝１２／群）、梗塞サイズの２４％縮小を示した（図１Ｂ）。絶対体積の点から、これは、対照の平均梗塞体積８０．８±６．８ｍｍ３、対、抗ＶＬＡ−１抗体処置の平均梗塞体積５５．６３±６．３ｍｍ３に相当した（図１Ｃ）。脳腫脹又は浮腫は、非損傷対側半球と比較した、梗塞半球の半球サイズの拡大パーセントとして計算した。８．２％±１．９％の半球サイズ増加率を保持した抗ＶＬＡ−１（Ｈａ／３１／８）処置マウスと比べ、対照（Ｐ１．１７）処置マウスは１８．１±％の半球サイズ平均増加率を保持した（Ｐ＜０．０５、Ｓｔｕｄｅｎｔの片側Ｔ検定 ｎ＝１２／群 図１Ｄ）。図２は３つの濃度の抗ＶＬＡ−１（Ｈａ３１／８）抗体を用いた用量反応を示し、梗塞体積（図２Ａ）及び浮腫（図２Ｂ）を共に減少させる点において、３ｍｇ／ｋｇの抗体が３０ｍｇ／ｋｇと同程度に有効であったことを示す。
これらのデータは、マウスでの可逆性中大脳動脈閉塞モデルにおける、ＶＬＡ−１阻害の神経保護及び抗炎症作用を示す。このモデルの病理は、ヒト脳卒中の病状並びに他のＣＮＳ虚血損傷、例えば、ＴＢＩ及びＳＣＩを臨床的に表し、本データは、ＶＬＡ−１の阻害剤がこれら及び他の虚血関連疾患の処置において有意な利益となりうることを示唆している。
【０２０９】
本発明の多くの実施形態について述べた。しかし、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な改変がなされうることが理解されるであろう。従って、他の実施形態も以下の特許請求の範囲内にある。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書の一部に記載の発明。
【請求項１】
本明細書の一部に記載の発明。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【公開番号】特開２０１３−８２７３２（Ｐ２０１３−８２７３２Ａ）
【公開日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２８４７６２（Ｐ２０１２−２８４７６２）
【出願日】平成２４年１２月２７日（２０１２．１２．２７）
【分割の表示】特願２００９−５１２３０３（Ｐ２００９−５１２３０３）の分割
【原出願日】平成１９年５月２４日（２００７．５．２４）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２８４７６２（Ｐ２０１２−２８４７６２）
【出願日】平成２４年１２月２７日（２０１２．１２．２７）
【分割の表示】特願２００９−５１２３０３（Ｐ２００９−５１２３０３）の分割
【原出願日】平成１９年５月２４日（２００７．５．２４）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]