腎細胞ガンを処置するための方法
【課題】ＩＬ−２で腎細胞ガンを処置するための有効な方法を提供する。
【解決手段】低用量のＩＬ−２を使用して腎細胞ガンを処置するための方法が開示される。具体的には、本発明は、腎臓が正常に機能していない、および／または高用量のＩＬ−２療法に寛容ではない患者の転移性腎細胞ガンを処置する方法に関する。本明細書中で開示される治療レジュメによっては、腫瘍の増殖が有意に阻害され、高用量のＩＬ−２療法と比較すると毒性が低く有害な副作用も少ない。
【解決手段】低用量のＩＬ−２を使用して腎細胞ガンを処置するための方法が開示される。具体的には、本発明は、腎臓が正常に機能していない、および／または高用量のＩＬ−２療法に寛容ではない患者の転移性腎細胞ガンを処置する方法に関する。本明細書中で開示される治療レジュメによっては、腫瘍の増殖が有意に阻害され、高用量のＩＬ−２療法と比較すると毒性が低く有害な副作用も少ない。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ＩＬ−２で腎細胞ガンを処置するための方法に関する。具体的には、本発明は、腎臓が正常に機能していないか、または高用量のＩＬ−２療法に寛容ではない患者の腎細胞ガンを処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞の増殖および機能の強力な刺激因子である（非特許文献１）。この自然界に存在しているリンホカインは、様々な悪性腫瘍に対して、単独で、またはリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞もしくは腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）と組み合わせられた場合に、抗腫瘍活性を有していることが示されている（例えば、非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６を参照のこと）。ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、転移性黒色腫および腎細胞ガンの患者において、Ｃｈｒｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡから市販されている。ＩＬ−２製剤であるプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）を使用して記載されている。リンパ腫を含む他の疾患もまた、ＩＬ−２での処置に応答するようである（非特許文献７）。しかし、腫瘍の増殖に関してポジティブな治療結果を得るために使用される高用量のＩＬ−２は、頻繁に、深刻な副作用を引き起こし、これには、発熱および悪寒、低血圧および毛細血管漏出（毛細血管漏出症候群すなわちＶＬＳ）、ならびに神経学的変化が含まれる（例えば、非特許文献８；非特許文献９；および非特許文献１０を参照のこと）。
【０００３】
転移性腎細胞ガン（ＲＣＣ）は、一般的には、単剤または組み合わせられた複合剤のいずれを用いた場合にも、化学療法に対しては抵抗性である。免疫療法を用いて、具体的には、ＩＬ−２の使用によっては、より大きな成功が見られている。高用量の静脈内ＩＬ−２を用いた治療によっては、およそ１５％の患者において目的とする腫瘍応答が生じ、その一部は持続性であった。しかし、高用量のＩＬ−２の投与には毛細管漏出症候群が伴い、これによっては、低血圧や臓器の潅流の低下が生じ、これは重症となり得、時には死に至る。これらの毒性により、一般的には、その投与に関してかなりの経験を持つ医師によって投与される患者の厳選されたグループに対しては、ＩＬ−２の使用は制限される。低容量の使用、および単独で、または他の生物剤（例えば、インターフェロン−α）と組み合わせられたＩＬ−２の皮下投与レジュメは、この疾患により広く適用できる治療法を開発するために努力して研究されてきた（例えば、非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；および非特許文献１５を参照のこと）。
毒性が低く、そして治療効果が改善された、腎細胞ガンの患者を処置するための改良された治療方法が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｍｏｒｇａｎら、（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９３：１００７−１０１１
【非特許文献２】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９８７）３１６：８８９−８９７
【非特許文献３】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．（１９８８）２０８：１２１−１３５
【非特許文献４】Ｔｏｐａｌｉａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９８８）６：８３９−８５３
【非特許文献５】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９８８）３１９：１６７６−１６８０
【非特許文献６】Ｗｅｂｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９２）１０：３３−４０
【非特許文献７】Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら、Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８３：２０２０−２０２２
【非特許文献８】Ｄｕｇｇａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９２）１２：１１５−１２２
【非特許文献９】Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら、Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８３：２０８１−２０８５
【非特許文献１０】Ｓｚｎｏｌ ａｎｄ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ，Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８３：２０２０−２０２２
【非特許文献１１】Ｎｉｅｋｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．（１９９６）１１：２８９−２９５
【非特許文献１２】Ｓｌｅｉｊｆｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９２）１０：１１１９−１１２３
【非特許文献１３】Ｌｅｓｓｏｎｉら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００２）２２：１０６１−１−１０６４
【非特許文献１４】Ｔｏｕｒａｎｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９８）１６：２５０５
【非特許文献１５】Ｓｃｈｉｌｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９３）５３：１２８６−１２９２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ＩＬ−２で腎細胞ガンを処置するための有効な方法を提供する。この方法は、毒性を低下させるために、高用量のＩＬ−２療法においてこれまでに使用されてきた投与量と比較して比較的低用量のＩＬ−２を利用する。本明細書中の実施例に示すように、この治療レジュメによっては腫瘍の増殖が有意に阻害され、有害な副作用は少ない。そして高用量のＩＬ−２療法を寛容できない患者についての別の処置を提供する。
【０００６】
１つの態様においては、本発明は、腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法を提供する。特定の実施形態においては、患者は、腎臓が正常に機能していない。特定の実施形態においては、腎細胞ガンは転移性である。特定の実施形態においては、患者は、高用量のＩＬ−２療法に寛容ではない。
【０００７】
１つの実施形態においては、この方法は、ａ）１日に１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；およびｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む。
【０００８】
別の実施形態においては、この方法は、ａ）１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、５日〜１ヶ月ごとに、１〜２４週間繰り返して投与する工程であって、ＩＬ−２がポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに共有結合されている工程；およびｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む。
【０００９】
さらなる実施形態においては、この方法は、ａ）１日に９〜１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；ｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程；ｃ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；およびｄ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む。
【００１０】
なお別の実施形態においては、この方法は、ａ）最初に、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間のうちに５日間投与する工程；ｂ）第２に、１週間のうちに、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を２日間、続いて、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、３日間投与することを、５週間繰り返す工程；ｃ）第３に、３週間、ＩＬ−２を投与しない工程；ｄ）第４に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間に５日間、６週間繰り返して投与する工程；ならびに、ｅ）第５に、３週間、ＩＬ−３を投与しない工程を含む。
【００１１】
本明細書中に記載される方法の任意のものにおいては、ＩＬ−２は組み換え生成されたＩＬ−２であり得る。ＩＬ−２には、ヒトＩＬ−２、あるいは、ヒトＩＬ−２（配列番号１）の配列に対して少なくとも約７０〜１００％の配列同一性（これには、これらの範囲内の任意のパーセント同一性、例えば、それに対する７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％の配列同一性が含まれる）を有している配列を含むその変異体を含み得る。特定の実施形態においては、ＩＬ−２はＩＬ−２ムテインであり、例えば、Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；ｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；およびｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４ｄｅｓ−Ｓｅｒ５ｄｅｓ−Ｓｅｒ６ＩＬ−２であるが、これらに限定はされない。好ましい実施形態においては、ＩＬ−２ムテインは、ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）である。
【００１２】
特定の実施形態においては、ＩＬ−２はポリエチレングリコールに結合している。例示的なポリエチレングリコールとしては、１，０００から４０，０００ダルトンの平均分子量を有しているポリエチレングリコール、２，０００から２０，０００ダルトンの平均分子量を有しているポリエチレングリコール、および３，０００から１２，０００ダルトンの平均分子量を有しているポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００１３】
他の実施形態においては、ＩＬ−２は、ポリオキシエチル化ポリオールに共有結合している。例示的なポリオキシエチル化ポリオールとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、およびポリオキシエチル化グリセロールが挙げられるが、これらに限定はされない。特定の実施形態においては、ポリオキシエチル化ポリオールは、１，０００から４０，０００の平均分子量を有しているポリオキシエチル化グリセロールである。
【００１４】
本明細書中に記載される方法の任意のものにおいては、多サイクルの処置方法を、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な時間、被験体に施行する、ことができる。特定の実施形態においては、時間は少なくとも６ヶ月間である。特定の実施形態においては、時間は少なくとも１２ヶ月間である。特定の実施形態においては、時間は、完全な腫瘍応答を得るために十分である。
【００１５】
特定の実施形態においては、処置方法はさらに、ａ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回で、１週間に３〜６日間、１〜２４週間の間繰り返して投与する工程；およびｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む、多サイクルの処置を含み、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な時間、被検体に投与する。
【００１６】
本明細書中に記載される方法の任意のものにおいては、ＩＬ−２は、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、経口、肺、鼻腔、局所、または経皮投与によって、あるいは、注入または坐剤によって投与することができる。好ましい実施形態においては、ＩＬ−２は皮下投与される。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法であって、該患者は腎機能が低下しており、以下：
ａ）１日に１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間に３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；および
ｂ）１〜４週間ＩＬ−２を投与しない工程
を含む方法。
（項目２）
腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法であって、該患者は腎機能が低下しており、以下：
ａ）１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、５日〜１ヶ月ごとに、１〜２４週間繰り返して投与する工程であって、該ＩＬ−２が、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに共有結合している工程；および
ｂ）１〜４週間ＩＬ−２を投与しない工程
を含む方法。
（項目３）
腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法であって、以下：
ａ）１日に９〜１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；
ｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程；
ｃ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；および
ｄ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程
を含む方法。
（項目４）
以下：
ａ）最初に、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間に５日間投与する工程；
ｂ）第２に、各週の間に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を２日間投与し、続いて、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を３日間投与し、これを５週間繰り返す工程；
ｃ）第３に、３週間ＩＬ−２を投与しない工程；
ｄ）第４に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間に５日間、６週間繰り返して投与する工程；ならびに、
ｅ）第５に、３週間ＩＬ−２を投与しない工程
を含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、組み換え生成されたＩＬ−２である、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ＩＬ−２がＩＬ−２ムテインである、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記ＩＬ−２がｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ＩＬ−２が、Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；ｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；およびｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４ｄｅｓ−Ｓｅｒ５ｄｅｓ−Ｓｅｒ６ＩＬ−２からなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記ＩＬ−２がポリエチレングリコールに結合されている、項目２に記載の方法。
（項目１３）
前記ポリエチレングリコールが、１，０００から４０，０００ダルトンの平均分子量を有している、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ポリエチレングリコールが、２，０００から２０，０００ダルトンの平均分子量を有している、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記ポリエチレングリコールが、３，０００から１２，０００ダルトンの平均分子量を有している、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記ＩＬ−２がポリオキシエチル化ポリオールに共有結合されている、項目２に記載の方法。
（項目１７）
前記ポリオキシエチル化ポリオールが、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、およびポリオキシエチル化グリセロールからなる群より選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ポリオキシエチル化ポリオールがポリオキシエチル化グリセロールである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記ポリオキシエチル化グリセロールが、１，０００から４０，０００の平均分子量を有している、項目１８に記載の方法
（項目２０）
前記腎細胞ガンが転移性である、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
多サイクルの処置方法が、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な期間、前記被験体に施行される、項目３に記載の方法。
（項目２２）
以下：
ａ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間に３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；および
ｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程
を含む複数回の処置サイクルをさらに含み、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な期間、前記被験体に施行する、項目３に記載の方法。
（項目２３）
前記期間が少なくとも６ヶ月間である、項目２１または２２に記載の方法。
（項目２４）
前記期間が少なくとも１２ヶ月間である、項目２１または２２のいずれかに記載の方法。
（項目２５）
腫瘍の完全寛解が生じる、項目２１または２２のいずれかに記載の方法。
（項目２６）
前記ＩＬ−２を、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、経口、肺、鼻腔、局所、または経皮投与によって、あるいは、注入または坐剤によって投与する、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記ＩＬ−２を皮下投与する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記患者は腎機能が低下している、項目３に記載の方法。
（項目２９）
前記患者は高用量のＩＬ−２処置を寛容できない、項目３に記載の方法。
（項目３０）
項目１〜２９のいずれか１項に記載の腎細胞ガンのヒト患者を処置するための医薬品の製造における、ＩＬ−２の使用。
本発明のこれらおよび他の実施形態は、本明細書中の開示を参照して当業者であれば容易に思い浮かぶであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、実施例３に記載される投与レジュメの後の、正常な腎機能を有している転移性腎細胞ガンの患者（血清クレアチニン（ＳＣｒ）≦１．５ｍｇ／ｄＬ）および腎機能が正常に機能していない転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）における低用量のＩＬ−２の相対的な効力を比較する。図１は、年数での時間に対する無増悪生存率（ＰＦＳ）を示す被験体の割合（％）のプロットと、年数での時間に対する生存している被験体の割合（％）のプロットを示す。
【図２】図２は、実施例３に記載される投与レジュメの後の、正常な腎機能を有している転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ≦１．５ｍｇ／ｄＬ）および腎機能が正常に機能していない転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）についての、全体的な応答率を示している棒グラフである。完全寛解（ＣＲ）を示す被験体の割合（％）を明るい影で示す。部分寛解（ＰＲ）を示す被験体の割合（％）を暗い影で示す。
【図３】図３は、ヒストリカル・コントロールグループに対して、本明細書中に記載される低用量のＩＬ−２の第ＩＶ相臨床試験において処置した集団の患者特性（ＰＳ、腎摘出術前）を比較する。腎細胞ガンの患者の臨床試験によるヒストリカル・コントロールグループの記載については、Ｐｙｒｈｏｎｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１７：２８５９−２８６７；Ｍｏｌｚｅｒら（１９９９）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２５３０−４０；Ｒｉｔｃｈｉｅら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３：１４−１７；Ｋｒｉｅｇｍａｉｒら（１９９５）Ｕｒｏｌｏｇｙ ４５：７５８−７６２；およびＪｏｎｅｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．８：２７５−２８８；Ｇｌｅａｖｅら（１９９８）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３８：１２６５−１２７１；Ｓｔｅｉｎｅｃｋら（１９９０）Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌ．２９：１５５−１６２；およびＯｓｂａｎｄら（１９９０）Ｌａｎｃｅｔ ３３５：９９４−９９８を参照のこと。
【図４】図４は、ヒストリカル・コントロールグループに対して、本明細書中に記載される低用量のＩＬ−２の第ＩＶ相臨床試験において処置した集団の患者予後（１年でのＯＲＲ、ＰＦＳ、ＯＳ、２年でのＯＳ）を比較する。
【図５】図５は、ＩＬ−２の代わりに化学療法で処置したヒストリカル・コントロールグループの患者の生存率に対して、実施例３に記載される投与レジュメの後に低用量のＩＬ−２で処置した患者の生存率を比較する（Ｊｏｎｅｓら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：２７１４−２７２２）。患者を、以下のようにリスクファクターの層化についてのＪｏｎｅｓシステムにしたがって、リスクグループに分けた：低リスク（Ｇｏｏｄ Ｒｉｓｋ）（０〜１のリスクファクター）、中程度のリスク（Ｍｏｄｅｒａｔｅ Ｒｉｓｋ）（２のリスクファクター）、および予後不良（３つのリスクファクターの全て）。図５は、個々のリスクグループについての、年数での時間に対する生存している被験体の割合（％）の別々のプロットを示す。低用量のＩＬ−２で処置した被験体についてのデータは実線で示す。化学療法で処置した被験体についてのデータは点線で示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施には、別段の記載がなければ、当業者の能力の範囲内である薬理学的、化学的、生化学的、組み換えＤＮＡ技術、および免疫学の従来法が使用されるであろう。このような技術は、文献の中で十分に説明されている。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第Ｉ巻〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，現行版）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｃａｌ（第２版，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｍ編．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｉｎｃ．）を参照のこと。
【００１９】
本明細書中で引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、上記または下記を問わず、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。
【００２０】
Ｉ．定義
本発明を記載する際には以下の用語を使用し、以下の用語は、以下に示されるように定義されることを意図する。
【００２１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合は、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、その状況について他に明確に示されていない限りは、複数についての言及も含まれる。したがって、例えば、「化学療法薬（ａ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ）」との言及には、２つ以上のそのような薬剤の混合物なども含まれる。
【００２２】
用語「ＩＬ−２」は、本明細書中で使用される場合は、正常な末梢血リンパ球によって生産され、低濃度で体内に存在する、リンパ球に由来するタンパク質である。ＩＬ−２は、Ｍｏｒｇａｎら（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９３：１００７−１００８によって最初に記載され、これは、刺激されたＴリンパ球の増殖を誘導するその能力の理由から、もともとはＴ細胞増殖因子と呼ばれていた。これは、１３，０００から１７，０００の範囲の分子量であることが報告されており（Ｇｉｌｌｉｓ ａｎｄ Ｗａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１７０９）、そして６〜８．５の範囲に等電点を有しているタンパク質である。全長のＩＬ−２タンパク質および生物学的活性のその断片のいずれもが、この定義に含まれる。この用語にはまた、ＩＬ−２の発現後修飾（例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など）も含まれる。さらに、本発明の目的については、用語「ＩＬ−２」は、タンパク質が生物学的活性（すなわち、抗腫瘍活性）を維持している限りにおいて、天然配列に対して欠失、付加、および置換（通常は、性質に関して保存的である）等の修飾が含まれているタンパク質も意味する。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発によるように意図的である場合も、また、例えば、タンパク質を生産する宿主の変異、もしくはＰＣＲ増幅が原因である誤りのような、偶然である場合もある。
【００２３】
用語「〜に由来する」は、分子のもともとの供給源を特定するために本明細書中で使用されるが、それによって分子が作製される方法（例えば、化学合成または組み換え手段であり得る）を限定するようには意味されない。
【００２４】
用語「変異体」、「アナログ」、および「ムテイン」は、所望される活性（例えば、本明細書中に記載される腎細胞ガンの処置における抗腫瘍活性）を保持している、参照分子の生物学的活性の誘導体を意味する。一般的には、用語「変異体」および「アナログ」は、修飾によって生物学的活性が破壊されない限りにおいて、天然分子と比較すると１つ以上のアミノ酸の付加、置換（通常は、性質に関して保存的である）、および／または欠失を有している天然ポリペプチド配列および構造を有している化合物を意味する。これは、以下に定義されるように、参照分子と「実質的に相同」である。一般的には、このようなアナログのアミノ酸配列は、参照配列に対して高い程度の配列相同性を有する。例えば、２つの配列がアラインメントされた場合には、アミノ酸配列相同性は５０％を上回る、通常は、６０〜７０％を上回る、なおさらに具体的には、８０〜８５％またはそれ以上、例えば、少なくとも９０〜９５％またはそれ以上である。多くの場合は、アナログには、同じ数のアミノ酸が含まれるが、本明細書中で説明されるように、置換が含まれる。用語「ムテイン」には、さらに、１つ以上のアミノ酸様分子を有しているポリペプチドが含まれる。これには、アミノ酸および／またはイミノ分子だけを含む化合物、アミノ酸のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を１つ以上含むポリペプチド、置換された連結ならびに当該分野で公知の他の修飾を含むポリペプチド（自然界に存在しているものおよび自然界には存在しないもの（例えば、合成のもの）の両方、環化させられた分子、または分岐している分子）などが含まれるが、これらに限定はされない。この用語にはまた、１つ以上のＮ置換されたグリシン残基（「ペプトイド」）および他の合成のアミノ酸またはペプチドを含む分子も含まれる（ペプトイドの記載については、例えば、米国特許第５，８３１，００５号；同第５，８７７，２７８号；および同第５，９７７，３０１号；Ｎｇｕｙｅｎら、Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．（２０００）７：４６３−４７３；およびＳｉｍｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（１９９２）８９：９３６７−９３７１を参照のこと）。好ましくは、アナログまたはムテインは、少なくとも、天然分子と同じ抗腫瘍活性を有する。ポリペプチドアナログおよびムテインを作製するための方法は当該分野で公知であり、以下にさらに記載される。
【００２５】
上記に説明されるように、アナログには、一般的には、その性質に関して保存的である置換、すなわち、それらの側鎖に関係しているアミノ酸のファミリーの中で行われる置換が含まれる。具体的には、アミノ酸は、一般的には、以下の４つのファミリーに分けられる：（１）酸性−−アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性−−リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性−−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）電荷を有していない極性−−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、芳香族アミノ酸として分類される場合もある。例えば、イソロイシンまたはバリンでのロイシンの単独の置換、グルタミンでのアスパラギン酸の単独の置換、セリンでのスレオニンの単独の置換、または構造的に関係しているアミノ酸でのアミノ酸の同様の保存的置換は、生物学的活性に対して主要な効果がないことは、合理的に推測できる。例えば、目的のポリペプチドには、約５個から１０個までの保存的または非保存的アミノ酸置換を、なおさらには、約１５個から２５個までの保存的または非保存的アミノ酸置換を、または、５〜２５の間の任意の整数個の置換が、分子の所望される機能が完全なまま保たれる限りは、含まれ得る。当業者は、当該分野で周知のＨｏｐｐ／ＷｏｏｄｓプロットおよびＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅプロットを参照することにより、変化を容認することができる目的の分子の領域を容易に決定することができる。
【００２６】
「誘導」により、天然ポリペプチドの所望される生物学的活性が保持される限り、目的の天然ポリペプチド、または天然ポリペプチドの断片、またはそれらのそれぞれのアナログの任意の適切な修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化、ポリマーの結合（例えば、ポリエチレングリコールとの結合）、または他の外来部分の付加）が意図される。ポリペプチド断片、アナログ、および誘導体を作製する方法は、当該分野において一般的に利用することができる。
【００２７】
「断片」により、完全な全長の配列および構造の一部だけから構成される分子が意図される。断片には、天然ポリペプチドのＣ末端欠失、Ｎ末端欠失、および／または内部欠失が含まれ得る。特定のタンパク質の活性断片には、通常、全長の分子の少なくとも約５〜１０個の連続しているアミノ酸残基、好ましくは、全長の分子の少なくとも約１５〜２５個の連続しているアミノ酸残基、そして最も好ましくは、全長の分子の少なくとも約２０〜５０個またはそれ以上の連続しているアミノ酸残基、または、５個のアミノ酸から全長までの間の任意の整数個の配列が、問題となっている断片が生物学的活性（例えば、本明細書中で定義されるような抗腫瘍活性）を保持している限り、含まれる。
【００２８】
「実質的に精製された」は、一般的には、存在している試料の大部分の割合（％）を占めるような物質（化合物、ポリヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド組成物）の単離を意味する。通常、試料中には、実質的に精製された成分が試料のうちの５０％、好ましくは、８０〜８５％、より好ましくは９０〜９５％を占める。目的のポリヌクレオチドおよびポリペプチドを精製するための技術は当該分野で周知であり、これには、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、および密度による沈殿が含まれる。
【００２９】
「単離された」により、ポリペプチドについて言及される場合、示された分子が、その分子が自然界において見出される生物体全体とは分けられ、そして分離されているか、または、同じタイプの他の生物学的巨大分子が実質的に存在していない条件下で存在していることが意味される。用語「単離された」は、ポリヌクレオチドに関しては、自然界において通常それに伴われる配列が、完全に、または一部含まれない核酸分子であるか；または、それが自然界において存在しているのと同様に存在しているが、それとともに異種配列を有している配列であるか；あるいは、染色体から解離した分子である。
【００３０】
「相同性」は、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド部分の間での同一性の割合（％）を意味する。２つの核酸、または２つのポリペプチドの配列は、これらの配列が、定義された分子の長さにわたって、少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、そして最も好ましくは少なくとも約９５％〜９８％の配列同一性を示す場合に、互いに「実質的に相同」である。本明細書中で使用される場合は、実質的に相同とは、特定の配列に対して完全な同一性を示す配列も意味する。
【００３１】
一般的には、「同一性」は、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の、それぞれ、正確なヌクレオチド−対−ヌクレオチド、またはアミノ酸−対−アミノ酸の対応を意味する。同一性の割合（％）は、２つの分子（参照配列と、参照分子に対する％同一性がわかっていない配列）の間で配列情報を、配列をアラインメントし、２つのアラインメントされた配列の間での正確な適合の数をカウントし、参照配列の長さで割り算し、そして結果に１００を掛け算することにより直接比較することによって決定することができる。ＡＬＩＧＮ、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ．編．，５ Ｓｕｐｐｌ．３：３５３−３５８，Ｎａｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）等の、容易に利用できるコンピュータープログラムを、分析の補助のために使用することができる。ここでは、ペプチドの分析のためには、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズムが採用されている（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９，１９８１）。ヌクレオチド配列同一性を決定するためのプログラムは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン８（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから入手できる）において、例えば、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＧＡＰプログラムを利用することができる。これらもまた、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムによる。これらのプログラムは、製造業者によって推奨され、そして上記のＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅにおいて記載されているデフォルトパラメーターを用いて、容易に利用できる。例えば、参照配列に対する特定のヌクレオチド配列の同一性の割合（％）は、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性アルゴリズムを、デフォルトスコア表と、６ヌクレオチド位置のギャップペナルティーと共に使用して決定することができる。
【００３２】
本発明の状況において同一性の割合（％）を確立するための別の方法は、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｃｏｌｌｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｎｅ Ｓ．Ｓｔｕｒｒｏｋによって開発され、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によって流通されている、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈが著作権を有しているプログラムのＭＰＳＲＣＨパッケージを使用することである。この一式のパッケージから、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが使用され得、ここでは、スコア表のデフォルトパラメーターが使用される（例えば、１２のギャップ開放ペナルティー、１のギャップ伸張ペナルティー、および６のギャップ）。データから生じた「適合（Ｍａｔｃｈ）」値は、「配列同一性」を反映する。配列間の同一性または類似性の割合（％）を計算するための他の適しているプログラムは当該分野で一般的に公知である。例えば、別のアラインメントプログラムは、デフォルトパラメーターと共に使用されるＢＬＡＳＴである。例えば、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰを、以下のデフォルトパラメーターを使用して使用することができる：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス（Ｍａｔｒｉｘ）＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記述（ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ）＝５０の配列；選別＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；データベース＝余剰なし、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ翻訳＋Ｓｗｉｓｓタンパク質＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は容易に入手できる。
【００３３】
あるいは、相同性は、相同領域間で安定な二本鎖を形成する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、その後の、一本鎖特異的ヌクレアーゼ（単数または複数）での消化、および消化された断片のサイズ決定によって決定することができる。実質的に相同であるＤＮＡ配列は、例えば、その特定のシステムについて定義されるストリンジェントな条件下でのサザンハイブリダイゼーション実験において同定することができる。適切なハイブリダイゼーション条件を決めることは、当業者の能力の範囲内である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，（前出）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，（前出）を参照のこと。
【００３４】
「組み換え体」は、核酸分子を記載するように本明細書中で使用される場合は、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成または合成起源のポリヌクレオチドを意味する。これには、その起源または操作の理由によって、自然界においてそれに付随しているポリヌクレオチドの全てまたは一部が伴われていない。用語「組み換え体」は、タンパク質またはポリペプチドに関して使用される場合には、組み換え体ポリヌクレオチドの発現によって生産されるポリペプチドを意味する。一般的には、以下にさらに記載されるように、目的の遺伝子がクローニングされ、その後、形質転換された生物中で発現させられる。宿主生物は、発現条件下で外来遺伝子を発現して、タンパク質を生じる。
【００３５】
「腎臓が正常に機能していない」は、本明細書中で使用される場合は、糸球体濾過率が不足している患者を意味する。このような患者は、本明細書中では、１．５ｍｇ／ｄＬより高い血清クレアチニンレベル（ＳＣｒ）によって特性決定される。
【００３６】
「抗腫瘍活性」により、細胞増殖速度の低下、したがって、既存の腫瘍もしくは治療の間に生じる腫瘍の増殖速度の低下、および／または既存の新生物（腫瘍）細胞もしくは新しく形成された新生物細胞の崩壊、したがって、治療の間の腫瘍の大きさの全面的な減少が意図される。このような活性は、動物モデル（例えば、ヒト腎細胞ガンの異種移植モデル）を使用して評価することができる。例えば、動物モデルの記載については、Ｐｕｌｋｋａｎｅｎら、Ｉｎ Ｖｉｖｏ（２０００）１４：３９３−４００およびＥｖｅｒｉｔｔら、Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９５）８２−８３：６２１−６２５を参照のこと。
【００３７】
ＩＬ−２またはその変異体の「治療有効用量または量」により、本明細書中に記載されるように投与された場合に、ポジティブな治療応答（例えば、抗腫瘍活性）をもたらす量が意図される。
【００３８】
用語「腫瘍応答」は、本明細書中で使用される場合は、全ての測定可能な病変の縮小または排除を意味する。腫瘍応答の基準は、ＷＨＯ Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ Ｃｒｉｔｅｒｉａ［ＷＨＯ Ｏｆｆｓｅｔ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，４８−Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅｖａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９７９）］に基づく。理想的には、一次元的に測定することができる病変または二次元的に測定することができる病変の全てが、それぞれの評価の時点で測定されるべきである。複数の病変が任意の臓器に存在している場合には、このような測定が不可能である場合があり、そのような状況では、可能な場合は、６個までの代表的な病変が選択されるべきである。
【００３９】
用語「完全寛解」（ＣＲ）は、本明細書中で使用される場合は、少なくとも４週間の間隔をあけた２回の評価によって決定される、全ての臨床的に検出可能な悪性疾患の完全な消滅を意味する。
【００４０】
用語「部分寛解」（ＰＲ）は、本明細書中で使用される場合は、少なくとも４週間の間隔をあけた少なくとも２回の連続する測定によって決定される場合に、評価できるほどの疾患の進行を伴わず、そして新しい病変の証拠が全くない、全ての測定可能な疾患の最も長い垂直直径の積の和のベースラインからの５０％以上の減少を意味する。評価は、渙散性病変の大きさの部分的な減少、渙散性病変のカルシウム再沈着、または芽球性病変の密度の低下を示すはずである。ＩＬ−２については、転移性疾患の部位で一時的な炎症を引き起こすことは一般的ではない。大きさが増加するように見える個々の病変は、その増加が少なくとも２８日の間隔をあけて行われる２回の連続する測定において報告される限りは、必ずしもＰＲに不適格とみなされるわけではない。
【００４１】
用語「進行性疾患」（ＰＤ）は、本明細書中で使用される場合は、少なくとも２８日の間隔をあけた少なくとも２回の連続する評価によって決定される、少なくとも１つの二次元的に（最大垂直直径の積）または一次元的に測定することができる病変の大きさの２５％以上の増加；任意の評価可能な病変の明確な悪化；消滅した任意の病変の再発；または新しい病変の出現を意味する。
【００４２】
用語「安定な疾患」（ＳＤ）または「変化なし」は、（ａ）二次元的に測定できる疾患についての言及において本明細書中で使用される場合は、全ての測定可能な病変の最大垂直直径の積の和の約５０％未満の減少または約２５％未満の増加を意味し、そして、（ｂ）一次元的に測定できる疾患についての言及において本明細書中で使用される場合には、全ての病変の直径の和における、約５０％未満の減少または約２５％未満の増加を意味する。新しい病変は出現してはならない。完全寛解、部分寛解、または進行もない。処置に対する骨病変のゆっくりとした応答の理由から、記号表示「変化なし」は、治療の開始から少なくとも８週間経過するまでは、適用されるべきではない。
【００４３】
用語「応答なし」は、本明細書中で使用される場合は、安定な疾患または軽微な応答（全身腫瘍組織量の２５％を超えるが５０％未満である減少）を有している患者を意味する。
【００４４】
用語「進行」は、本明細書中で使用される場合は、観察された最少の和を上回る、またはベースラインからの減少がない場合には、ベースラインを上回る全ての測定可能な病変の積の和の２５％の増加；任意の評価することができる病変の明確な悪化；消滅していた任意の病変の再発；任意の新しい病変または部位（評価できない疾患の新しい部位を含む）の出現を意味し；そして／または、最初の腫瘍再燃が起こり得る（高カルシウム血症、骨痛、皮膚病変の紅斑）場合には、症状は４週間を超えて持続するか、または進行のさらなる証拠が存在するかのいずれかでなければならない。
【００４５】
用語「全体的な応答（ｏｖｅｒａｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」は、本明細書中で使用される場合は、悪性疾患の全ての部位を考慮することによって決定される応答を意味する。測定可能な疾患を有している被験体においては、最も乏しい応答が全体的な応答に該当する。測定することができない病変において変化がないことは、測定可能な病変における部分寛解によって損なわれることはない；すなわち、全体的な応答は、部分寛解である。測定することができない病変に変化がないことは、測定可能な病変の完全寛解を損なう；すなわち、全体的な応答は部分寛解である。
【００４６】
用語「応答期間」は、本明細書中で使用される場合は、最良の目的とする腫瘍応答の最初の記録から、進行時までの時間を意味する。
【００４７】
用語「生存」は、本明細書中で使用される場合は、ＩＬ−２の最初の用量から死亡時までの時間を意味する。
【００４８】
用語「無増悪生存率」（ＰＦＳ）は、本明細書中で使用される場合は、レスポンダーについての、ＩＬ−２の最初の用量から腫瘍の進行時、死亡時、または応答がなおも持続している場合には、患者が最後に病院に訪れるまでの時間を意味する。
【００４９】
ＩＩ．発明の実施形態
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の処方物またはプロセスのパラメーターに限定はされず、それ自体がもちろん変化し得ることが理解される。本明細書中で使用される専門用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的のためのものにすぎず、限定とは意図されないことも理解される。
【００５０】
本明細書中に記載されるものと類似するかまたは同等である多数の方法および材料を本発明の実施において使用することができるが、好ましい材料および方法が本明細書中に記載される。
【００５１】
本発明は、低用量のＩＬ−２の投与により腎細胞ガンを安全にそして効率的に処置するための新規の治療方法の発見に基づく。本明細書中に記載される処置レジュメによって腫瘍の増殖が有意に阻害され、これには、高用量のＩＬ−２処置と比較して低い毒性および減少した有害な副作用が伴う。
【００５２】
本発明の方法は既存の腫瘍の処置を対象としているが、この方法が、治療の間に生じるさらなる腫瘍の増殖を防ぐことにおいて有用であり得ることが理解される。本発明の方法は、腎臓が正常に機能していない、および／または高用量のＩＬ−２での処置を寛容できない、転移性の腎細胞ガンを有している被験体の処置に特に有用である。
【００５３】
本発明の方法で使用されるＩＬ−２は、天然である場合も、また、組み換え技術によって得られる場合もあり、そして哺乳動物供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、およびヒト）を含む任意の供給源に由来し得る。多数の種に由来するＩＬ−２配列が当該分野で周知であり、これには、以下が含まれるがこれらに限定はされない：ヒトＩＬ−２（ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＨ６６２５４；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＨ６６２５４の残基２１〜１５３によって示される成熟配列）；アカゲザルＩＬ−２（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔｏ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１４９８；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１４９８配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ヒヒＩＬ−２（ヒヒ（Ｐａｐｉｏ ａｎｕｂｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８７５Ｙ１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８６５Ｙ１配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；シロエリマンガベイＩＬ−２（シロエリマンガベイ（Ｃｅｒｃｏｃｅｂｕｓ ｔｏｒｑｕａｔｕｓ ａｔｙｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ４６６４９；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ４６６４９配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；カニクイザルＩＬ−２（カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９６１５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９６１５配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；シロテナガザルＩＬ−２（シロテナガザル（Ｈｙｌｏｂａｔｅｓ ｌａｒ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＩＣＧＩ２；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＩＣＧＩ２配列の残基２１〜１５３によって示される成熟配列）；コモンリスザルＩＬ−２（コモンリスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８ＭＫＨ２；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８ＭＫＨ２配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ウシＩＬ−２（ウシ（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ０５０１６；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ０５０１６配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ−８５１３４０に報告されている変異体前駆体配列；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ−８５１３４０配列の残基２４〜１５８によって示される成熟配列もまた参照のこと）；スイギュウＩＬ−２（スイギュウ（Ｂｕｂａｌｕｓ ｂｕｂａｌｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ９５ＫＰ３；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ９５ＫＰ３配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ウマＩＬ−２（ウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３７９９７；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３７９９７配列の残基２１〜１４９によって示される成熟配列）；ヤギＩＬ−２（ヤギ（Ｃａｐｒａ ｈｉｒｃｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３６８３５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３６８３５配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ヒツジＩＬ−２（ヒツジ（Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１９１１４；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１９１１４配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ブタＩＬ−２（ブタ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ２６８９１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ２６８９１の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；アカシカＩＬ−２（アカシカ（Ｃｅｒｖｕｓ ｅｌａｐｈｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１７４７；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１７４７配列の残基２１〜１６２によって示される成熟配列）；イヌＩＬ−２（イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９４１６；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９４１６配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ネコＩＬ−２（ネコ（Ｆｅｒｉｓ ｃａｔｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０７８８５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０７８８５配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ウサギＩＬ−２（ウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ７７６２０；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ７７６２０配列の残基２１〜１５３によって示される成熟配列）；シャチＩＬ−２（シャチ（Ｏｒｃｉｎｕｓ ｏｒｃａ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ９７５１３；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ９７５１３配列の残基２１〜１５２によって示される成熟配列）；キタゾウアザラシＩＬ−２（キタゾウアザラシ（Ｍｉｒｏｕｎｇａ ａｎｇｕｓｔｉｒｏｓｔｒｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ６２６４１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ６２６４１配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ハツカネズミＩＬ−２（ハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３２３９２；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３２３９２配列の残基２１〜１６９によって示される成熟配列）；アルジェリアハツカネズミＩＬ−２（アルジェリアハツカネズミ（Ｍｕｓ ｓｐｒｅｔｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８８６７；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８８６７配列の残基２１〜１６６によって示される成熟配列）；ドブネズミＩＬ−２（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１７１０８；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１７１０８の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；スナネズミＩＬ−２（スナネズミ（Ｍｅｒｉｏｎｅｓ ｕｎｇｕｉｃｕｌａｔｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８０８１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８０８１の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；これらの上記ＧｅｎＢａｎｋ登録番号に開示されている変異体ＩＬ−２ポリペプチドの任意のもの；ＧｅｎＢａｎｋレポートのそれぞれは、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。ＩＬ−２の任意の供給源を、本発明を実施するために利用することができるが、特に、治療を受けている被験体がヒトである場合には、ＩＬ−２はヒト供給源に由来することが好ましい。いくつかの実施形態においては、本発明の方法で使用されるＩＬ−２は組み換えによって生産され、例えば、組み換え体ヒトＩＬ−２タンパク質であり、これには、微生物宿主から得られたものが含まれるが、これらに限定はされない。
【００５４】
本発明の方法において有用な組成物には、任意の種に由来するＩＬ−２の変異体を含む、生物学的活性のＩＬ−２変異体が含まれ得る。このような変異体は、天然ポリペプチドの所望される生物学的活性を保持していなければならず、その結果、変異体ポリペプチドを含む薬学的組成物は、被験体に投与された場合に、天然ポリペプチドを含む薬学的組成物と同じ治療効果を有する。すなわち、変異体ポリペプチドは天然ポリペプチドについて観察される様式と同様の様式で、薬学的組成物において治療上有効な成分として作用するであろう。変異体ポリペプチドが所望される生物学的活性を保持しており、それにより、薬学的組成物中の治療有効成分として作用するかどうかを決定するためには、複数の方法を当該分野で利用することができる。生物学的活性は、天然ポリペプチドまたはタンパク質の活性を測定するために特異的に設計されたアッセイを使用して測定することができる。これには、本発明に記載されるアッセイが含まれる。加えて、生物学的活性の天然ポリペプチドに対して惹起させられた抗体を、変異体ポリペプチドに結合するそれらの能力について試験することができる。この場合、有効な結合は、天然ポリペプチドの立体構造と類似の立体構造を有しているポリペプチドの指標である。
【００５５】
天然のまたは自然界に存在しているＩＬ−２の適切な生物学的活性の変異体は、上記で定義されるように、ポリペプチドの断片、アナログ、および誘導体であり得る。
【００５６】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列変異体は、目的の天然ポリペプチドをコードするクローニングされたＤＮＡ配列中の変異によって調製することができる。突然変異誘発およびヌクレオチド配列の変更のための方法は、当該分野で周知である。例えば、引用により本明細書中に組み入れられる、Ｗａｌｋｅｒ ａｎｄ Ｇａａｓｔｒａ，編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；ならびにその中で引用されている参考文献を参照のこと。目的のポリペプチドの生物学的活性には影響を与えない適切なアミノ酸置換に関する指針は、引用により本明細書中に組み入れられる、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のＤａｙｈｏｆｆら（１９８７）のモデルに見ることができる。類似の特性を有している別のアミノ酸での１つのアミノ酸の交換等の保存的置換が好ましい場合がある。保存的置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００５７】
残基の置換、欠失、または挿入のいずれかによって変更することができるＩＬ−２タンパク質の領域に関する指針は、当該分野において見ることができる。例えば、Ｂａｚａｎ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：４１０−４１２；ＭｃＫａｙ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：４１２；Ｔｈｅｚｅら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １７：４８１−４８６；Ｂｕｃｈｌｉ ａｎｄ Ｃｉａｒｄｅｌｌｉ（１９９３）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３０７：４１１−４１５；Ｃｏｌｌｉｎｓら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：７７０９−７７１３；Ｋｕｚｉｅｌら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５７３１；Ｅｃｋｅｎｂｅｒｇら（１９９７）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９：４８８−４９８（それらの内容は、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）で議論されている構造／機能の関係、および／または結合実験を参照のこと。
【００５８】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの変異体の構築においては、修飾は、そのような変異体が所望される活性を持ち続けるように行われる。明らかに、変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡの中に作成される任意の変異は、必ずリーディングフレームの外側の配列で行われなければならないわけではなく、二次的なｍＲＮＡ構造を生じることができる相補的な領域を生じないことが好ましい。欧州特許出願公開第７５，４４４号を参照のこと。
【００５９】
ＩＬ−２の生物学的活性のある変異体は、通常、比較のための基準とされる参照ＩＬ−２ポリペプチド分子（例えば、天然のヒトＩＬ−２）のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％〜９５％またはそれ以上、そして最も好ましくは少なくとも約９８％、９９％、またはそれ以上のアミノ酸配列同一性を有する。配列同一性の割合（％）は、１２のギャップ開放ペナルティーおよび２のギャップ伸張ペナルティー、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いるアフィンギャップ検索を使用する、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍｅｔｈ．（１９８１）２：４８２−４８９に教示されている。例えば、変異体は、わずかに１個から１５個のアミノ酸残基、わずかに１個から１０個の残基、例えば、６個〜１０個、わずかに５個、わずかに４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ酸残基が異なる。
【００６０】
２つのアミノ酸配列の最適なアラインメントに関して、変異体アミノ酸配列の連続するセグメントは、参照アミノ酸配列と同じ数のアミノ酸を有している場合も、さらなるアミノ酸残基を有している場合も、また、アミノ酸残基が欠失している場合もある。参照アミノ酸配列との比較に使用される連続するセグメントには、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基が含まれ、３０個、４０個、５０個、またはそれ以上のアミノ酸残基であり得る。保存的な残基の置換またはギャップを伴う配列同一性の補正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを参照のこと）。目的の天然ＩＬ−２ポリペプチドの生物学的活性変異体は、わずかに１個から１５個のアミノ酸残基、わずかに１個から１０個の残基、例えば、６個〜１０個、わずかに５個、わずかに４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ酸残基が、天然ポリペプチドとは異なる。
【００６１】
ＩＬ−２活性を有しているポリペプチドの正確な化学構造は、多数の要因に依存する。イオン化できるアミノ基およびカルボキシル基が分子の中に存在しているので、特定のポリペプチドを、酸性の塩または塩基性の塩、あるいは中性の形態として得ることができる。それらの生物学的活性を保持している全てのこのような調製物は、適切な環境条件に置かれている場合には、本明細書中で使用される、ＩＬ−２活性を有しているポリペプチドの定義に含まれる。さらに、ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用する誘導によって（グリコシル化）、または脂質、リン酸塩、アセチル基などの他の補助的な分子によって補強することができる。これはまた、糖との結合によっても補強することができる。このような補強の特定の態様は、生産宿主の翻訳後プロセシングシステムによって行うことができる；他のこのような修飾はインビトロで導入することができる。いずれにしても、このような修飾は、ポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限りは、本明細書中で使用されるＩＬ−２ポリペプチドの定義に含まれる。このような修飾は、ポリペプチドの活性を高めるかまたは低下させるかのいずれかによって、種々のアッセイにおいて、活性に定量的または定性的な影響を与える可能性があると予想される。さらに、鎖の中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導によって修飾することができ、ポリペプチドは、活性を保持している断片が得られるように切断することができる。活性を破壊してしまうことのないこのような変更によっては、本明細書中で使用される目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義からこのポリペプチド配列が除外されることはない。
【００６２】
当該分野では、ポリペプチド変異体の調製および使用に関する実質的な指針が提供されている。ＩＬ−２変異体の調製においては、当業者は、天然タンパク質ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対するどの修飾によって本発明の方法で使用される薬学的組成物の治療活性のある成分としての使用に適している変異体が生じるかを容易に決定することができる。
【００６３】
本発明の方法で使用されるＩＬ−２またはその変異体は任意の供給源に由来するものであり得るが、組み換えによって生産されることが好ましい。「組み換え体ＩＬ−２」または「組み換え体ＩＬ−２変異体」は、意図されるインターロイキン−２、あるいは、天然配列ＩＬ−２と匹敵する生物学的活性を有しており、そして例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０２：３０５−３１０およびＤｅｖｏｓ（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１：４３０７−４３２３によって記載されるような組み換えＤＮＡ技術によって調製されたその変異体、あるいは、Ｗａｎｇら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：１４３１−１４３３に記載されているような突然変異によって変化したＩＬ−２である。一般的には、ＩＬ−２をコードする遺伝子がクローニングされ、その後、形質転換された生物体（好ましくは、微生物、そして最も好ましくは、本明細書中に記載されるように、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））の中で発現させられる。宿主生物は、発現条件下で外来遺伝子を発現してＩＬ−２を生産する。合成の組み換え体ＩＬ−２はまた、真核生物（例えば、酵母またはヒト細胞）でも生産させることができる。ＩＬ−２を増殖させる、回収する、破壊する、または細胞から抽出するためのプロセスは、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同第４，５６９，７９０号；同第４，７４８，２３４号；同第４，５３０，７８７号；同第４，５７２，７９８号；同第４，７４８，２３４号；および同第４，９３１，５４３号（それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に実質的に記載されている。
【００６４】
変異体ＩＬ−２タンパク質の例については、欧州特許（ＥＰ）公開番号ＥＰ１３６，４８９（自然界に存在しているＩＬ−２のアミノ酸配列の中の以下の変更の１つ以上を開示している：Ａｓｎ２６からＧｌｎ２６；Ｔｒｐ１２１からＰｈｅ１２１；Ｃｙｓ５８からＳｅｒ５８またはＡｌａ５８，Ｃｙｓ１０５からＳｅｒ１０５またはＡｌａ１０５；Ｃｙｓ１２５からＳｅｒ１２５またはＡｌａ１２５；Ａｒｇ１２０以降の全ての残基の欠失；およびそのＭｅｔ−１形態）；および１９８３年１０月１３日に提出された欧州特許出願番号８３３０６２２１．９（公開番号ＥＰ１０９，７４８として１９８４年５月３０日に公開された）（これは、ベルギー特許第８９３，０１６号および共有にかかる米国特許第４，５１８，５８４号に記載されている組み換え体ＩＬ−２ムテイン（ここでは、天然ヒトＩＬ−２にしたがって番号付けされた１２５位のシステインが欠失させられているか、または中性アミノ酸で置き換えられている組み換え体ヒトＩＬ−２ムテイン；アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２；およびｄｅｓ−アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２が開示されている）を参照のこと。米国特許第４，７５２，５８５号（ここでは、以下の変異体ＩＬ−２タンパク質が開示されている：ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、およびｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２）、ならびに、米国特許第４，９３１，５４３号（ここでは、本明細書中の実施例で使用されるＩＬ−２ムテインｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトＩＬ−２、ならびに、他のＩＬ−２ムテインが開示されている）もまた参照のこと。
【００６５】
欧州特許公開番号ＥＰ２００，２８０（１９８６年１２月１０日に公開）（ここでは、１０４位のメチオニンが保存的アミノ酸で置き換えられている組み換え体ＩＬ−２ムテインが開示されている）もまた参照のこと。例として、以下のムテインが挙げられる：ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｇｌｕ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｇｌｕ１０４ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｇｌｕ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｇｌｕ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｇｌｕ１０４ ＩＬ−２；およびｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｇｌｕ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２。欧州特許公開番号ＥＰ１１８，６１７および米国特許第５，７００，９１３号もまた参照のこと。ここでは、天然分子で見られるＮ末端アミノ酸としてのメチオニンの代わりにアラニンを有している非グリコシル化ヒトＩＬ−２変異体；開始メチオニンが欠失しており、その結果、プロリンがＮ末端アミノ酸である非グリコシル化ヒトＩＬ−２；およびＮ末端メチオニンとプロリンアミノ酸との間にアラニンが挿入されている非グリコシル化ヒトＩＬ−２が開示されている。
【００６６】
他のＩＬ−２ムテインとしては、ＷＯ９９／６０１２８に開示されているムテイン（ヒスチジンまたはイソロイシンでの２０位のアスパラギン酸（ａｓｐａｒｔａｔｅ）の置換、アルギニン、グリシン、またはイソロイシンでの８８位のアスパラギンの置換、あるいは、ロイシンまたはグルタミン酸での１２６位のグルタミンの置換）（これは、ＮＫ細胞に対して優先して、Ｔ細胞受容体を発現している細胞によって発現される高親和性ＩＬ−２受容体の選択的活性を有しており、そしてＩＬ−２毒性が低いことが報告されている）；米国特許第５，２２９，１０９号に開示されているムテイン（アラニンでの３８位のアルギニンの置換、またはリジンでの４２位のフェニルアラニンの置換）（これは、ＬＡＫ細胞を刺激する能力を維持したまま、天然ＩＬ−２と比較すると、高親和性ＩＬ−２受容体に対しては少ない結合を示す）；国際特許公開番号ＷＯ００／５８４５６に開示されているムテイン（天然ＩＬ−２の中の自然界に存在している（ｘ）Ｄ（ｙ）配列の変更または欠失、ここでは、Ｄはアスパラギン酸であり、（ｘ）はロイシン、イソロイシン、グリシン、またはバリンであり、そして（ｙ）はバリン、ロイシン、またはセリンである）（これは、毛細血管漏出症候群を軽減すると主張されている）；国際公開番号ＷＯ００／０４０４８に開示されているＩＬ−２ ｐ１−３０ペプチド（ＩＬ−２のα−ヘリックスＡの全体が含まれており、ＩＬ−２受容体のｂ鎖と相互作用する、ＩＬ−２の最初の３０個のアミノ酸に対応する）（これは、ＮＫ細胞とＬＡＫ細胞の誘導とを刺激することが報告されている）；および、ＷＯ００／０４０４８においても開示されているＩＬ−２ ｐ１−３０ペプチドの変異体形態（リジンでの２０位のアスパラギン酸の置換）（これは、血管出血を誘導することはできないが、なおもＬＡＫ細胞を生じることができると報告されている）が挙げられる。さらに、ＩＬ−２は、高い溶解度を提供し、そして変化した薬物動態プロフィールを提供するように、ポリエチレングリコールで修飾することができる（米国特許第４，７６６，１０６号を参照のこと）。
【００６７】
毒性が低いと予想されるＩＬ−２ムテインのさらなる例は、２００４年３月５日に提出された米国仮特許出願番号６０／５５０，８６８（その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に開示されている。これらのムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の１２５位のシステインに置き換わったセリン、および成熟ヒトＩＬ−２配列の中に少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を有している、成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列が含まれる。その結果、このムテインは、以下の機能特性を有する：同等のアッセイ条件下で、類似量のｄｅｓ−アラニル−１、Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２またはＣ１２５ＳヒトＩＬ−２と比較すると、１）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を維持または促進し、そして２）ＮＫ細胞によるプロ炎症性サイトカインの生産のレベルの低下を誘導する。いくつかの実施形態においては、さらなる置換は以下からなる群より選択される：Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ、およびＱ１２６Ｖ；ここでは、アミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと比較している。他の実施形態においては、これらのムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の１２５位のシステインに置き換わったアラニン、および成熟ヒトＩＬ−２配列の中の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を有している、成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列が含まれる。その結果、ムテインは、これらの同じ機能特性を有する。いくつかの実施形態においては、さらなる置換は、以下からなる群より選択される：Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ、およびＱ１２６Ｖ；ここでは、アミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと比較している。別の実施形態においては、これらのムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の中に少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を有している成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列が含まれる。その結果、このムテインは、これらの同じ機能特性を有する。いくつかの実施形態においては、さらなる置換は以下からなる群より選択される：Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ、およびＱ１２６Ｖ；ここでは、アミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと比較している。米国仮特許出願番号６０／５５０，８６８に開示されているさらなるムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の１位の最初のアラニン残基が欠失していることを除く、上記のムテインが含まれる。
【００６８】
用語ＩＬ−２は、本明細書中で使用される場合には、投与頻度を少なくするか、またはＩＬ−２寛容性を改善するために、第２のタンパク質に融合されたか、またはポリプロリンもしくは水溶性ポリマーに対して共有結合されたＩＬ−２を含む、ＩＬ−２融合体または結合体を含むことも意図される。例えば、ＩＬ−２（または本明細書中で定義されるその変異体）は、当該分野で公知の方法を使用してヒトアルブミンまたはアルブミン断片に融合させることができる（ＷＯ０１／７９２５８を参照のこと）。
あるいは、ＩＬ−２は、ポリプロリンまたはポリエチレングリコールホモポリマー、およびポリオキシエチル化ポリオールに共有結合させることができる。この場合、当該分野で公知の方法を使用することにより、ホモポリマーは未置換であるか、またはアルキル基で一方の末端が置換されており、そしてポリオールは未置換である（例えば、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、同第４，８９４，２２６号、および同第５，８３０，４５２号を参照のこと）。
【００６９】
治療有効成分としてＩＬ−２を含む任意の薬学的組成物を本発明の方法において使用することができる。このような薬学的組成物は当該分野で公知であり、これには、米国特許第４，７４５，１８０号；同第４，７６６，１０６号；同第４，８１６，４４０号；同第４，８９４，２２６号；同第４，９３１，５４４号；および同第５，０７８，９９７号（引用により本明細書中に組み入れられる）に開示されているものが含まれるが、これらに限定はされない。したがって、ＩＬ−２または当該分野で公知であるその変異体を含む、液体の、凍結乾燥させられた、または噴霧乾燥させられた組成物は、続いて本発明の方法にしたがって被験体に投与される水性または非水性の溶液または懸濁液として調製することができる。これらの組成物のそれぞれには、治療有効成分または予防有効成分としてＩＬ−２またはその変異体が含まれる。「治療有効成分または予防有効成分」により、ＩＬ−２またはその変異体が、薬学的組成物が被験体に投与された場合に、その被験体の疾患または症状の処置または予防に関して、所望される治療応答または予防応答をもたらす組成物に具体的に配合されることが意図される。好ましくは、薬学的組成物には、調製または保存の間のタンパク質の安定性および生物学的活性の消失に関係する問題を最少にするために、適切な安定化剤、充填剤、またはそれらの両方が含まれる。
【００７０】
本発明の好ましい実施形態においては、本発明の方法において有用であるＩＬ−２を含む薬学的組成物は、安定化された単量体ＩＬ−２またはその変異体を含む組成物、多量体ＩＬ−２またはその変異体を含む組成物、および安定化された、凍結乾燥された、もしくは噴霧乾燥されたＩＬ−２またはその変異体を含む組成物である。
【００７１】
安定化された単量体ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、２０００年１０月３日に提出されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／２７１５６に開示されている（その開示は引用により本明細書中に組み入れられる）。「単量体」ＩＬ−２により、タンパク質分子が、本明細書中に記載される薬学的組成物中で、それらの単量体形態で実質的に存在し、凝集した形体ではないことが意図される。したがって、ＩＬ−２の共有結合によるオリゴマーもしくは疎水性オリゴマーまたは凝集物は存在しない。簡単に説明すると、これらの液体組成物中のＩＬ−２またはその変異体は、保存の間のＩＬ−２またはその変異体の凝集物の形成を減少させるために十分な量のアミノ酸塩基と共に処方される。アミノ酸塩基は、アミノ酸またはアミノ酸の組み合わせであり、ここでは、任意の所定のアミノ酸は、遊離の塩基の形態、またはその塩の形態のいずれかで存在する。好ましいアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される。これらの組成物には、さらに、ＩＬ−２またはその変異体の安定性について許容される範囲の間に、液体組成物のｐＨを維持するために緩衝化剤がさらに含まれる。この場合、緩衝化剤は、その塩の形態を実質的に含まない酸、その塩の形態の酸、または酸とその塩の形態との混合物である。好ましくは、酸は、コハク酸、クエン酸、リン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される。このような組成物は、本明細書中では、安定化された単量体ＩＬ−２薬学的組成物と呼ばれる。
【００７２】
これらの組成物中のアミノ酸塩基は、ＩＬ−２またはその変異体を、液体の薬学的組成物の保存の間の凝集物の形成に対して安定化させるように作用する。一方、その塩の形態を実質的に含まない酸、その塩の形態の酸、または酸とその塩の形態との混合物の、緩衝化剤としての使用によっては、ほぼ等張である浸透圧を有している液体組成物が生じる。液体の薬学的組成物には、さらに、他の安定化剤、より具体的には、メチオニン、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）、およびＥＤＴＡが、ポリペプチドの安定性をさらに高めるために配合される場合がある。このような液体の薬学的組成物は、その塩の形態を実質的に含まない酸、その塩の形態の酸、または酸とその塩の形態との混合物と組み合わせられたアミノ酸塩基の添加によって、これらの２つの成分が組み合わせられていない条件で処方された液体の薬学的組成物と比較して高い保存安定性を有している組成物を生じるので、安定化されているといわれる。
【００７３】
安定化された単量体ＩＬ−２またはその変異体を含むこれらの液体の薬学的組成物は、水性の液体の形態で使用することができ、また、凍結させられた状態、もしくは、本発明の方法にしたがった被験体への投与に適している液体形態もしくは他の形態への後の再構成のための乾燥形態で保存することもできる。「乾燥形態」により、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ）（すなわち、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）；例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｐｏｌｌｉｓ（１９８４）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３８：４８−５９を参照のこと）、噴霧乾燥（例えば、Ｍａｓｔｅｒｓ（１９９１）Ｓｕｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第５版；Ｌｏｎｇｍａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｚ，Ｕ．Ｋ．），４９１−６７６頁；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら（１９９２）Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．１８：１１６９−１２０６；およびＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒら（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２−２０を参照のこと）、または風乾（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ａｎｄ Ｃｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ２５：４５９−４７０；およびＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７−５３）のいずれかによって乾燥される液体の薬学的組成物または処方物が意図される。
【００７４】
その凝集していない単量体状態のＩＬ−２を含むＩＬ−２処方物の他の例としては、Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｆａｕｌｄｓ（１９９３）Ｄｒｕｇｓ ４６（３）：４４６−５１４に記載されている処方物が挙げられる。これらの処方物には、組み換え体ＩＬ−２産物が含まれる。ここでは、組み換え体ＩＬ−２ムテインＴｅｃｅｌｅｕｋｉｎ（アミノ末端にメチオニン残基が付加されているグリコシル化されていないヒトＩＬ−２）が、等張性の生理食塩水の中で再構成される凍結乾燥させられた粉末の中に、０．２５％のヒト血清アルブミンとともに処方される。そして組み換え体ＩＬ−２ムテインＢｉｏｌｅｕｋｉｎ（アミノ酸末端にメチオニン残基が付加されており、そしてヒトＩＬ−２配列の１２５位のシステイン残基がアラニンで置換されている、ヒトＩＬ−２）は、０．１から１．０ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２ムテインが酸と混合されるように処方される。この場合、処方物は、３．０から４．０のｐＨを有しており、緩衝液を含まないことが効果的であり、そして、１０００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満の伝導率（５００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満が効果的である）を有する。ＥＰ３７３，６７９号；Ｘｈａｎｇら（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１３（４）：６４３−６４４；およびＰｒｅｓｔｒｅｌｓｋｉら（１９９５）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１２（９）：１２５０−１２５８を参照のこと。
【００７５】
多量体ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物の例は、共有にかかる米国特許第４，６０４，３７７号（その開示は、引用により本明細書中に組み入れられる）に開示されている。「多量体」により、薬学的組成物の中で、平均して１０〜５０個の分子の会合を有しているミクロの凝集した形態で存在しているタンパク質分子が意図される。これらの多量体は、ゆるく結合した、物理的に会合したＩＬ−２分子として存在している。これらの組成物の凍結乾燥させられた形態は、商品名プロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）として市販されている。この参考文献の中で開示されている凍結乾燥させられた処方物には、選択的に酸化された、微生物によって生産された組み換え体ＩＬ−２が開示されている。ここでは、組み換え体ＩＬ−２は、バルクを提供するマンニトール等の水溶性の担体、および水中での組み換え体ＩＬ−２の溶解を確実にするための十分な量のドデシル硫酸ナトリウムとともに投与される。これらの組成物は、非経口投与のための注射水溶液への再構成に適しており、安定であり、そしてヒト患者においては十分に寛容である。再構成された場合でも、ＩＬ−２またはその変異体は、その多量体の状態を維持している。多量体ＩＬ−２またはその変異体を含むこのような凍結乾燥させられたまたは液体組成物は、本発明の方法に含まれる。このような組成物は、本明細書中では、多量体ＩＬ−２薬学的組成物と呼ばれる。
【００７６】
本発明の方法はまた、ＩＬ−２またはその変異体を含む、安定化され凍結乾燥されたかまたは噴霧乾燥された薬学的組成物も使用することができる。この薬学的組成物は、本発明の方法にしたがった投与のための液体またはそれに適している他の形態に再構成することができる。このような薬学的組成物は、２０００年１１月２８日に提出された、同時係属中の出願である米国特許出願番号０９／７２４，８１０、および２０００年１２月２７日に提出された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／３５４５２に開示されている（それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。これらの組成物には、さらに、少なくとも１つの充填剤、乾燥プロセスの間のタンパク質の安定化に十分な量の少なくとも１つの薬剤、またはそれらの両方が含まれる場合がある。「安定化された」により、ＩＬ−２タンパク質またはその変異体が、その単量体形態または多量体形態を維持し、さらには、組成物の固体形態または乾燥粉末形態を得るための凍結乾燥または噴霧乾燥後のその他の鍵となる、質、純度、および効力の特性を維持することが意図される。これらの組成物中では、充填剤としての使用に好ましい担体材料としては、グリシン、マンニトール、アラニン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ、最も好ましくは、グリシンが含まれる。充填剤は、使用される薬剤に応じて、０％から約１０％（ｗ／ｖ）の範囲で、処方物の中に存在する。安定化剤としての使用に好ましい担体材料としては、任意の糖または糖アルコール、または任意のアミノ酸が挙げられる。好ましい糖としては、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコース、ラクトース、デキストロース、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられ、好ましくは、スクロースである。安定化剤が糖である場合は、これは、約０％から約９．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは、約０．５％から約５．０％（ｗ／ｖ）、より好ましくは、約１．０％から約３．０％（ｗ／ｖ）の範囲、最も好ましくは、約１．０％（ｗ／ｖ）で存在する。安定化剤がアミノ酸である場合は、これは、約０％から約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは、約０．３％から約０．７％（ｗ／ｖ）の範囲で、最も好ましくは、約０．５％で存在する。これらの安定化され凍結乾燥されたかまたは噴霧乾燥された組成物には、状況に応じて、メチオニン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、またはその塩の１つ（例えば、ＥＤＴＡニナトリウム）、または他のキレート化剤が含まれる。これらは、メチオニンの酸化に対してＩＬ−２またはその変異体を保護する。この様式でのこれらの薬剤の使用は、同時係属中の米国特許仮特許出願番号６０／１５７６９６（引用により本明細書中に組み入れられる）に記載されている。安定化され、凍結乾燥されたかまたは噴霧乾燥された組成物は、緩衝化剤を使用して処方することができる。緩衝化剤は、例えば、処方プロセスの間、または乾燥形態の組成物の再構成後の液相の中で、許容される範囲（好ましくは、約ｐＨ４．０から約ｐＨ８．５の間）に薬学的組成物のｐＨを維持する。緩衝化剤は、それらが乾燥処理と適合し、そして、処理の間および保存の間に、タンパク質の質、純度、効力、および安定性に影響を与えないように選択される。
【００７７】
上記の安定化された単量体、多量体、および安定化され凍結乾燥されたかもしくは噴霧乾燥されたＩＬ−２薬学的組成物は、本発明の方法での使用に適している組成物を呈する。しかし、治療有効成分としてＩＬ−２またはその変異体を含む任意の薬学的組成物が、本発明の方法に含まれる。
【００７８】
投与
低用量のＩＬ−２またはその変異体での少なくとも１回の治療に有効な処置サイクルが投与される。「治療に有効な処置サイクル」により、投与されると、腎細胞ガン、具体的には、転移性腎細胞ガンについての個体の処置に関して、ポジティブな治療応答をもたらす処置の１サイクルが意図される。特に目的とするものは、本明細書中で定義されるような抗腫瘍効果を提供する、低用量のＩＬ−２での処置のサイクルである。「ポジティブな治療応答」により、本発明にしたがう処置を受けている個体が、それについて個体が治療を受けている腎細胞ガンの１つ以上の症状の改善を示すことが意図される。
【００７９】
したがって、例えば、「ポジティブな治療応答」は、治療に伴う疾患の改善、および／または治療に伴う疾患の１つ以上の症状の改善である。したがって、例えば、ポジティブな治療応答は、疾患における以下の改善の１つ以上を意味する：（１）腫瘍の大きさの縮小；（２）ガン細胞の数の減少；（３）腫瘍の増殖の阻害（すなわち、いくらかの程度の遅延、好ましくは、停止）；（４）末梢臓器へのガン細胞の浸潤の阻害（すなわち、いくらかの程度の遅延、好ましくは、停止）；（５）腫瘍の転移の阻害（すなわち、いくらかの程度の遅延、好ましくは、停止）；および（６）ガンに伴う１つ以上の症状からのいくらかの程度の緩和。このような治療応答は、改善の程度としてさらに特性決定することができる。したがって、例えば、改善は、完全寛解として特性決定される場合がある。「完全寛解」により、実験に入る時点でポジティブであった全ての初期の異常または部位について報告された、物理的試験、研究室での実験、核およびＸ線写真（すなわち、ＣＴ（コンピュータ断層撮影法）および／またはＭＲＩ（磁気共鳴画像化法））、ならびに、他の非侵襲性の手順によって確認された、全ての測定可能であるかまたは評価することができる疾患のあらゆる兆候および症候の消滅の記録が意図される。あるいは、疾患の改善は、部分寛解として分類される場合もある。「部分寛解」により、処置前の測定値と比較した場合に、全ての測定可能な病変の垂直直径の積の和の５０％を上回る減少、および評価することができる疾患が進行していないこと、さらには、少なくとも２８日間にわたって任意の新しい病変の形成がないことが意図される。
【００８０】
本発明の特定の実施形態においては、ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、徐放処方物であるか、または徐放デバイスを使用して投与される処方物である。このようなデバイスは当該分野で周知であり、これには、例えば、経皮パッチ、および小型の埋め込み型のポンプが含まれる。これによっては、徐放型ではない薬学的組成物を用いた場合の徐放効果が得られるように、様々な用量の持続性の定常様式での長時間にわたる薬剤の送達を提供することができる。
【００８１】
ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、当該分野で公知の任意の医学的に許容される方法にしたがって投与することができる。適切な投与経路としては、非経口投与（例えば、皮下（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、筋肉内（ＩＭ）、静脈内（ＩＶ）、または注入）、経口および肺、鼻腔、局所、経皮、および坐剤が挙げられる。組成物が肺投与によって投与される場合は、治療有効用量は、血流中の薬剤（例えば、ＩＬ−２またはその変異体）の可溶性レベルが、非経口的（例えば、ＳＣ、ＩＰ、ＩＭ、またはＩＶ）に投与される治療有効用量を用いた場合に得られるレベルと同等となるように調節される。本発明のいくつかの実施形態においては、ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、ＩＭまたはＳＣ注射（具体的には、ガン治療プロトコールにおいて使用される治療薬（単数または複数）が投与される領域に対する局所的なＩＭまたはＳＣ）によって投与される。
【００８２】
投与されるＩＬ−２の量に影響を与える要因としては、投与様式、投与頻度、治療を受けている特定の疾患、疾患の重篤度、病歴、個体が現在別の治療薬での治療を受けているかどうか、および治療を受けている個体の年齢、身長、体重、健康状態、および体調が挙げられるが、これらに限定はされない。一般的には、この薬剤のより多い投与量が、治療を受けている被験体の体重が重いほど好ましい。
【００８３】
効果を得るためには、ＩＬ−２の血中濃度は、特定の時間の間に特定のレベルを上回らなければならない。効果は用量依存性であり、ＩＬ−２のレベルが高いほど抗腫瘍効果は高くなる。毒性を最少にするためには、ＩＬ−２の血中濃度は、特定の時間内に、そして特定の時間の間、一定のレベルを下回らなければならない（ＩＬ−２のクリアランスができるように「休息期間」が存在しなければならない）。すなわち、薬剤は、次の用量が投与される前の一定時間、一定のレベルを下回らなければならない。用量の間の休息が短いほど、毒性は高くなる。
【００８４】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者の処置方法には、低用量のＩＬ−２（１〜５２ＭＩＵ）、それに続く、ＩＬ−２の望ましくない効果から患者を「回復」させるための休息期間を含む処置サイクルが含まれる。多用量のＩＬ−２またはその変異体は、１日１回の投与レジュメにしたがって投与することができる。例えば、１日に１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２、またはより好ましくは、９〜１８ＭＩＵのＩＬ−２が、１日に１回から３回、１週間のうちに３回から６回、１〜２４週間にわたって投与され、その後に休息期間が続く。好ましくは、休息期間は、投与レジュメの間の１〜４週間である。その後、新しいスケジュールのＩＬ−２用量が投与されて、別のブーストとともに免疫系に提供される。特定の実施形態においては、第２の処置サイクルには、１日に９ＭＩＵが１回から３回の投与で、１週間のうちに３日から６日まで、１〜２４週間投与される工程と、その後の休息期間が含まれる。
【００８５】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者の処置方法には、低用量のＩＬ−２（９〜１８ＭＩＵ）、１日に１回、１週間のうちの５日（ｑｄ×５ｄ）での６週間の処置、その後の、ＩＬ−２が投与されない１から４週間の「休息期間」からなる処置サイクルと、９ＭＩＵのＩＬ−２用量で、１日に１回、１週間のうちの５日の６週間の処置、それに続くＩＬ−２が投与されない１から４週間の休息期間からなるその後の処置サイクルが含まれる。特定の実施形態においては、９ＭＩＵの用量のＩＬ−２での、１日に１回、１週間のうちの５日の６週間の処置、その後の、ＩＬ−２が投与されない１週間から４週間の休息期間からなる上記のその後の処置サイクルが、複数回繰り返される。
【００８６】
好ましい実施形態においては、腎細胞ガンの患者は、最初に、１日に１８ＩＭＵのＩＬ−２の用量が、各週の間に５日間投与され；第２に、１週間の間に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量が２日間、続いて、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量が３日間、これが５週間繰り返して投与され；第３に、３週間、ＩＬ−２は投与されず；第４に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量が、１週間のうちの５日間、これが６週間繰り返して投与され；そして第５に、３週間、ＩＬ−２が投与されないことによって、処置される。
【００８７】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者の処置に使用されるＩＬ−２は、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに共有結合される。特定の実施態様においては、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに結合されたＩＬ−２での処置サイクルには、１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２を、５日から１ヶ月ごとに、１〜２４週間繰り返して投与する工程、続いて、休息期間が含まれる。
【００８８】
特定の実施形態においては、本明細書中に記載される方法の任意のものによる処置の複数回のサイクルが、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な時間、患者に投与される。例えば、期間は、少なくとも６ヶ月または少なくとも１２ヶ月であり得る。好ましくは、期間は、腫瘍の完全寛解を得るために十分である。
【００８９】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者は、腎臓が十分に機能していない（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）、高用量のＩＬ−２での処置を寛容できない、または高用量のＩＬ−２での処置が不適切である。このような患者は、本明細書中に記載される方法の任意のものによって、低用量のＩＬ−２で処置することができる。
【００９０】
先に記載された投与レジュメにしたがう処置を受けている被験体が部分寛解、またはより長い期間の寛解の後に再発を示す場合には、次の治療が、疾患の完全寛解を得るために必要である場合がある。したがって、最初の処置期間の後の休息期間に続いて、被験体には、１回以上のさらなるＩＬ−２治療での処置期間が設けられる場合がある。このような、処置期間の間の休息期間は、本明細書中では、中断期間と呼ばれる。中断期間の長さは、ＩＬ−２での治療の処置期間の前に得られていた腫瘍応答の程度（すなわち、完全対部分）に依存する。
【実施例】
【００９１】
ＩＩＩ．実験
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の実施例である。実施例は、説明の目的だけのために提供され、いかなる方法でも本発明の範囲を限定するようには意図されない。
【００９２】
使用される数値（例えば、量、温度など）に関する正確さを確保するための努力を行ってきたが、ある程度の実験誤差および偏差は、当然、考慮されるべきである。
【００９３】
（実施例１）
第ＩＶ相ヒト臨床試験のためのＩＬ−２の薬学的組成物
使用したＩＬ−２処方物は、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ州ＥｍｅｒｙｖｉｌｌｅにあるＣｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって、商品名プロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）として製造されたものであった。この処方物中のＩＬ−２は組み換え生成された、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２ムテインであり、アルデスロイキンと呼ばれている。これは、最初のアラニン残基が排除されており、そして１２５位のシステイン残基がセリン残基で置き換えられている点で、天然ヒトＩＬ−２アミノ酸配列とは異なる（ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２と呼ばれている）。このＩＬ−２ムテインは、米国特許第４，９３１，５４３号（その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に記載されているように、大腸菌の中で発現し、続いて、透析および陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。プロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）として販売されているＩＬ−２処方物は、滅菌の、白色から灰色がかった白色の保存料を含まない凍結乾燥粉末として、１．３ｍｇのタンパク質を含むバイアルの中に供給する。
【００９４】
（実施例２）
第ＩＶ相ヒト臨床試験におけるＩＬ−２での処置のための転移性腎細胞ガンの患者の選択基準
以下の選択基準を、転移性腎細胞ガンの患者に適用した：
試験対象患者基準：
患者については、転移性疾患の証拠とともに腎細胞ガン（透明細胞、乳頭、混合腫瘍または肉腫様腫瘍）が組織学的に報告されている；
患者は、試験の開始から４週間以内に決定された、測定可能であるかまたは評価可能である新生物性疾患を有している；
患者のカルノフスキーの一般状態指数（Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ Ｐｅｒｆｏａｍａｎｃｅ Ｓｔａｔｕｓ）が≧６０であり、これは、０〜２の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）の一般状態指数（ＰＳ）に対応している；
患者は１８歳を超える年齢でなければならない；
患者は、１．８ｍｇ／ｄｌ未満の血清クレアチニンレベルによって明らかにされるような、不適切な腎機能を有していなければならない；
ヘモグロビン≧１０ｇｍ／ｄｌ；白血球≧４，０００個／ｍｌ；血小板≧１００，０００個／ｍｌ；
正常な甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）レベル；および
患者には意欲があり、そして全ての必要な試験手順と追訪を含む、この試験に参加することに関する書面による同意書を提供できる。
【００９５】
臨床試験除外基準：
これまでにプロリューキンでの処置を受けていた患者；
コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）スキャン上で検出された中枢神経系に活動性疾患を有している患者；
プロリューキン（登録商標）の成分のいずれかに対する過敏性がわかっている患者；
治験薬に関する同時臨床試験中の患者、または先の４週間以内に治験薬が投与された患者；
腎細胞ガンについて先に全身的治療を受けた患者（腎細胞ガンの外科手術を受けた患者は含めることがふさわしい；指標を示さない病変に対する放射線治療を受けた患者は、放射線治療の完了の２週間後であれば、試験にふさわしい）；
ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）のクラスＩＩＩまたはＩＶの心疾患を有している患者；
自己免疫疾患（例えば、クローン病）が明らかになっている患者；
妊娠中または授乳中の女性患者；ならびに、
転移部位の外科手術による切除後に疾患の証拠を示していない転移性疾患の患者。
【００９６】
（実施例３）
ヒトに投与した低用量のＩＬ−２の第ＩＶ相臨床試験
臨床試験の計画および目的
別の用量のインターロイキン−２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ｉｎ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ（ＩＬＩＡＤ））の第ＩＶ相臨床試験を、転移性腎細胞ガンの患者に皮下投与した低容量のプロリューキン（登録商標）の効力と安全性を評価するために、プロスペクティブ研究、多施設共同研究、単群研究、オープンラベル研究として設計した。主要な目的は、≧１６％の奏効率（ＯＲＲ）とした。第２の目的には、完全寛解（ＣＲ）率および部分寛解（ＰＲ）率、応答期間、無増悪生存率（ＰＦ）、全体の生存率（ＯＳ）、および有害事象（ＡＥ）の発生を含めた。参加者には社会環境と理論的な環境の両方からの臨床研究者を含め、社会環境の医師が数の上では優勢であった。ＩＬＩＡＤ試験は２７０人の患者をスクリーニングし、うち、２６７人を登録した。
【００９７】
処置前の評価には、全病歴、身体検査、全血球計算値（ＣＢＣ）、血清化学パネル（ｓｅｒｕｍ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｐａｎｅｌ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）レベル、および、転移性疾患の部位を明らかにするための適切なＸ線撮影試験を含めた。処置の間の評価には、ＣＢＣ、血清化学パネル、ＴＳＨ、および各新しい処置サイクルの開始前の身体検査、各処置サイクルの前から４週間まではＣＢＣ、および患者との接触のたびのＡＥの評価を含めた。２サイクル後の各処置サイクルの開始前には、先に決定した転移性疾患の部位のＸ線撮影による評価が必要であった。症例報告書に、転移性疾患の評価できる領域と、そのような決定を行うために使用した方法をまとめた。
【００９８】
ＩＬＩＡＤ処置レジュメ
全ての患者に、以下の処置スケジュールでプロリューキン（登録商標）を投与した：
【００９９】
【表１】
プロリューキン（登録商標）を、１８００万国際単位（ＭＩＵ）／日を５日間（１週目、１サイクル目）、９ＭＩＵ／日を２日間、続いて、１８ＭＩＵ／日を３日間（２〜６週目、１サイクル目）、そして９ＭＩＵを５日間（１〜６週目、≧２サイクル目）投与した。処置サイクル全体は、６週間のオン期間と、３週間のオフ処置との９週間であった。処置期間は、少なくとも２サイクル続けるように意図した。進行性疾患の患者は試験から除外し、一方、レスポンダーは、治験責任医師の判断で処置を続けさせることができた。腫瘍応答を、疾患の増悪まで最長で２年間、９週間ごとに評価した。患者を、１年および２年の時点で生存について評価した。ＩＬＩＡＤ ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）集団（ｎ＝２６３人の患者）には、少なくとも１用量の治験薬を投与した。
【０１００】
毒性についての用量の変更を、プロトコールに明記されている指針にしたがって行った。悪性度３またはそれ以上の毒性を示している患者には、症状が消滅するまで処置をふせておき、そして半分に減らした次の用量を投与した。寛容化された場合には、特定のプロトコールの用量にまで、段階的に用量を増やして戻すことを実行した。用量の増加速度と最終的な用量は、治験責任医師の判断に委ねた。プロトコールに従うと、任意の目的とする用量は、患者に、通院患者としてプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）を投与できるようにするには十分に低くなければならないが、全身からの吸収を確実にするためには十分に高くなければならない（一般的には、皮下投与による５〜１０ＭＩＵ／日の範囲である）。２週間を超えて毒性が持続していた患者は試験から除外した。
【０１０１】
全部で２７０人の患者についてデータを回収した。２７０人の患者のうちの３人は、スクリーニングに失敗し、そして４人は登録したが一度も投与できなかった。残りの２６３人の患者には、少なくとも１用量の治験薬を投与し、分析に値していた（Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ集団）。２６３人の患者の投与記録にしたがって、１４２人の患者には、２サイクル目の治験薬を投与した（Ｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）。Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者の６５パーセント、およびｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ患者の７０．４％は、疾患の進行または再発の理由から、薬の投与を中止した。
【０１０２】
効力
２サイクルの処置の後、患者を、治験責任医師によって進行または応答について評価した（以下の表を参照のこと）。応答のカテゴリーは、「完全寛解」（ＣＲ）、「部分寛解」（ＰＲ）、「進行性疾患」（ＰＤ）、「安定な疾患」（ＳＤ）、および「不確定」（ＵＤ）であった。
【０１０３】
２６３人のＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者のうちの６人（２．３％）は、治験責任医師により完全なレスポンダーと評価され、１２人（４．６％）は部分的なレスポンダーと評価された。４８人のＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者（１８．３％）は安定な疾患を有しており、１５６人（５９．３％）は進行性疾患の状態を有していた。３８人のＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者（１４．４％）は不確定と考えられ、そして３人（１．１％）については、評価は行われていなかった。全体的な応答率（完全寛解＋部分寛解）は、６．８％であり、これには、４．１〜１０．６％の９５％信頼区間（ＣＩ）が伴っていた。
【０１０４】
１４２人のｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ（すなわち、治験薬を２サイクル投与した）患者のうちの６人（４．２％）は、治験責任医師によって完全なレスポンダーと評価され、１１人（７．７％）は部分的なレスポンダーと評価された。全体的な応答率（完全寛解＋部分寛解）は、１２．０％であり、これには、７．１〜１８．５％の９５％信頼区間（ＣＩ）が伴っていた。
【０１０５】
【表２】
２６３人のｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者のうち、１６９人（６４．３％）が、２年間のフォローアップ期間の間に死亡した。１４２人のｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ患者については、７３人（５１．４％）が死亡した。以下の表には、生存性についての分析結果をまとめる。
【０１０６】
【表３】
腎機能に関するサブグループ
ＩＬＩＡＤ試験によるデータのサブグループ分析を、正常な腎機能を有している患者（血清クレアチニン（ＳＣｒ）≦１．５ｍｇ／ｄＬ）を腎機能が低下している患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）に対して比較することによって行った。正常であるサブグループと腎機能が低下しているサブグループとの比較は、それぞれ、類似する腎摘出術（７３％対７０％）、ＰＳ＝０（２８％対２３％）、ＰＳ＝１（５９％対６０％）、およびＰＳ＝２〜３（１３％対１７％）の頻度を示した。以下の表を参照のこと。
【０１０７】
【表４】
正常な腎機能を有している患者および腎機能が低下している患者についての効力の比較
正常な腎機能を有している患者および腎機能が低下している患者は、同様の結果であったことが明らかになった。図１〜３では、上記の投与レジュメの後の、正常な腎機能を有している転移性腎細胞ガンの患者（血清クレアチニン（ＳＣｒ）≦１．５ｍｇ／ｄＬ）および腎機能が低下している転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）における、低用量のＩＬ−２の相対的な効力を比較しているグラフを示す。正常な腎機能を有している患者に対して比較すると、腎機能が低下している患者は、ＰＲ（５．７％対４．３％）、ＯＲＲ（７．６％対６．７％）、平均ＰＦＳ（０．３４年対０．３３年）、ＰＦＳ−１年（２８％対１８％）、ＰＦＳ−２年（１６％対１０％）、およびＯＳ−２年（３９％対３１％）、ＣＲ（１．９％対２．４％）の、類似しているかまたはより高い率を有していた。平均生存期間（１．０年対１．１年）、およびＯＳ−１年（５２％対５５％）は、腎機能が低下しているサブグループにおいてはわずかに低かった。腎機能に関するサブグループについての処置の効力の比較については、以下の表を参照のこと。
【０１０８】
【表５】
腎機能に関するサブグループを腎摘出術の前の状態と一般状態について管理した場合には、ＰＦＳおよびＯＳは同等のままであった。一変量ロジスティック回帰モデルを、標準的なＳＡＳプログラムを使用して作成して、ＯＲＲについてのオッズ比とＷａｌｄ ９５％信頼区間を推定した。腎機能が低下している患者については、ＯＲＲは、サブグループを腎摘出術（オッズ比＝０．５２）、ＰＳ＝０（オッズ比＝０．５７）、およびＰＳ＝１（オッズ比＝０．６３）に管理した場合には、正常な腎機能を有している患者よりも数値的に低かった。しかし、これらの差は統計学的には有意ではなく、正常な腎機能を有しているサブグループ（ｎ＝１４）と腎機能が低下しているサブグループ（ｎ＝４）との中にレスポンダーが少なかったことが原因で、慎重に判断しなければならなかった。Ｃｏｘ比例ハザード回帰モデルを使用して、ＰＦＳおよびＯＳについてのハザード比と９５％信頼区間を得た。サブグループを腎摘出術（ハザード比＝０．８６）、非腎摘出術（ハザード比＝１．０９）、ＰＳ＝０（ハザード比＝１．１５）、およびＰＳ＝１（ハザード比＝０．７１）に管理した場合には、腎機能が低下している患者についてのＰＦＳは、正常な腎機能を有している患者のＰＦＳと類似していた。腎機能が低下している患者についての生存率もまた、サブグループを腎摘出術（ハザード比＝０．９２）、非腎摘出術（ハザード比＝１．０３）、ＰＳ＝０（ハザード比＝１．１１）、およびＰＳ＝１（ハザード比＝０．８２）に管理した場合には、正常な腎機能を有している患者の生存率と類似していた。以下の表を参照のこと。
【０１０９】
【表６】
ヒストリカル・コントロールとの比較
文献検索により、以前に免疫治療で処置されたことのない腎細胞ガンの患者の研究におけるプラセボコントロールまたはシュードプラセボ（ｐｓｕｅｄｏ−ｐｌａｃｅｂｏ）コントロールを使用した８つの刊行物を特定した（Ｐｙｒｈｏｎｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２８５９−２８６７；Ｍｏｔｚｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２５３０−４０；Ｒｉｔｃｈｉｅら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３：１４−１７；Ｋｒｉｅｇｍａｉｒら（１９９５）Ｕｒｏｌｏｇｙ ４５：７５８−７６２；およびＪｏｎｅｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．８：２７５−２８８；Ｇｌｅａｖｅら（１９９８）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３８：１２６５−１２７１；Ｓｔｅｉｎｅｃｋら（１９９９）Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌ．２９：１５５−１６２；Ｏｓｂａｎｄら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３３５：９９４−９９８）。これらの公開されている試験の中でのコントロールグループについての結果は非常に様々であり、これはほぼおそらく、コントロールとした処置（なし、ホルモン療法、または化学療法）、試験計画、患者の選択基準、およびそれまでの患者の処置に原因がある。以下の表を参照のこと。
【０１１０】
【表７】
正常な腎機能を有しているサブグループ、腎機能が低下しているサブグループ、およびＩＬＩＡＤ ＩＴＴ集団についての結果は、ヒストリカル・コントロールグループにおいて測定されたほとんどの結果よりも好ましかった。ＩＬＩＡＤ腎臓サブグループおよびＩＴＴ集団についてのＰＳ＝０、ＰＳ＝１、および腎摘出術前の患者の割合は、ヒストリカル・コントロールグループの範囲の平均に近く、このことは、ＩＬＩＡＤ患者集団がヒストリカル・コントロールの集団と同等であることを示唆している（図３を参照のこと）。対照的に、ＩＬＩＡＤ ＩＴＴ集団および腎臓サブグループは、効力に関する結果の大部分（４３／５０、８６％）について、ヒストリカル・コントロールよりも数的に好ましかった（図４を参照のこと）。腎臓サブグループおよびＩＴＴ集団についての結果は、ヒストリカル・コントロールによる効力の結果の７／５０（１４％）と比較して同じまたは数的に低かった：Ｓｔｅｉｎｅｃｋ（１９９０）の実験のＣＲ；Ｏｓｂａｎｄ（１９９０）の実験のＰＲ；Ｒｉｔｃｈｉｅ（１９９９）の実験のＰＲおよびＯＲＲ；ならびに、Ｇｌｅａｖｅ（１９９８）の実験のＣＲ、平均生存期間、およびＯＳ−１年。終了時点で比較した場合には、ＩＬＩＡＤ試験が、応答（１６／２１、７６％）、ＰＦＳ（８／８、１００％）、および生存率（１９／２１、９０％）の結果の大部分について、ヒストリカル・コントロールよりも好ましかった。
【０１１１】
加えて、リスクグループによって階層化したＩＬＩＡＤ患者は、ヒストリカル・コントロールよりも高い生存率を有していた。低用量のＩＬ−２で処置した患者の生存率を、ＩＬ−２の代わりに化学療法で処置された患者のヒストリカル・コントロールグループ（Ｊｏｎｅｓら（前出）に記載されている）の生存率と比較した。患者を、リスクファクターの階層化に関するＪｏｎｅｓシステム（これは、特定されたリスクファクターの組み合わせに基づく：ＥＣＯＧ ＰＳ＞１、＜２年である診断から処置までの時間、および１つ以上の部位での転移）にしたがってリスクグループに分類した。患者を、以下のＪｏｎｅｓリスクグループに分けた：低リスク（Ｇｏｏｄ Ｒｉｓｋ）（０〜１のリスクファクター）、中程度のリスク（Ｍｏｄｅｒａｔｅ Ｒｉｓｋ）（２のリスクファクター）、および予後不良（３つのリスクファクターの全て）。図５は、個々のリスクグループについての、年数での時間に対する生存している被験体の割合（％）の別々のプロットを示す。実施例３に記載するレジュメにしたがって低用量のＩＬ−２で処置した患者は、ヒストリカル・コントロールと比較すると、３つのＪｏｎｅｓリスクグループの全てにおいて数的に高い生存率を有していた。しかし、ＩＬＩＡＤ患者とヒストリカル・コントロールとの間での生存性の差は、リスクグループが悪くなるに伴って小さくなるようである。以下の表を参照のこと。
【０１１２】
【表８】
毒性
有害事象を、治験責任医師によって、「無関係」、「関係している可能性あり」、または「おそらく関係している」と決定して、処置について研究した。最も頻繁に生じる悪影響は疲労（患者の４１．１％）、続いて、過酷（３６．９％）、吐気（３６．５％）、発熱（３２．７％）、嘔吐ＮＯＳ（２２．１％）、および無食欲（２０．９％）であった。以下の処置に関係している有害事象が、少なくとも１０％の患者において観察された（以下の表を参照のこと）。
【０１１３】
【表９】
低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）療法は、高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）よりも腎毒性が少ない。高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）療法は、ベースラインで高いＳＣｒを有している患者についての、１回目の処置サイクルの間のＳＣｒ＞４ｍｇ／ｄＬの平均ピークと２回目の治療サイクルの間の＞６ｍｇ／ｄＬの平均ピークとによって測定される、顕著な腎毒性を引き起こすことが示されている（Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎら、１９８７）。より小さいが、なおも劇的である、平均ピークＳＣｒの増加（３ｍｇ／ｄＬまで）が、ベースラインで正常なＳＣｒを有していた患者について観察された。ＳＣｒレベルは、正常な腎機能を有している患者の９８％と比較して、腎機能が低下していた患者の６０％について、３０日以内にベースラインに戻った。これらの結果は、高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）によって、正常な腎機能を有していた患者よりも腎機能が低下していた患者において高い腎毒性が生じたことを示唆している。対照的に、低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）によっては、処置の間にはＳＣｒのごくわずかな増加（通常は、＜２ｍｇ／ｄＬ）が生じた。これは、正常な腎機能のサブグループと腎機能が低下していたサブグループとの間で同等であった。ＳＣｒ＞３ｍｇ／ｄＬの上昇は、いずれのサブグループについてもまれであった。この範囲内（＜３ｍｇ／ｄＬ）のＳＣｒ偏差を有していた患者は、重い症状を有しているか、または特殊療法の必要があると見込まれることはない。
【０１１４】
悪性度と有害事象（ＡＥ）の頻度は、一般的には、正常な腎機能を有していた患者のサブグループと腎機能が低下していた患者のサブグループとの間では同等であった。正常なサブグループと比較すると、腎機能が低下していたサブグループは、全体としての深刻な有害事象（ＳＡＥ）（２６％対３０％）、ＡＥ（７７％対８９％）、および薬物に関係するＡＥ（７６％対８１％）に関してわずかに少ない数を有していた。中断につながるＡＥの数は、腎機能が低下していたサブグループにおいてわずかに高かった（３０％対２５％）。正常な腎機能を有していたサブグループおよび腎機能が低下していたサブグループのいずれにおいても、それぞれ、最も高いＡＥの割合（％）は、悪性度３であり（４２％対３４％）、その後に、悪性度２（３３％対２３％）、悪性度４（９％対１３％）、悪性度１（４％対８％）、そして悪性度５（１％対０％）であった。
【０１１５】
最も一般的な有害事象（いずれのサブグループにおいても＞１０％の患者において報告された）は、通常は、正常な腎機能を有していたサブグループと腎機能が低下していたサブグループとの間では同等であり、これには、それぞれ、疲労（４３％対４５％）、過酷（３８％対３６％）、発熱（３９％対２３％）、注射部位の反応（１８％対２１％）、吐気（３９％対３６％）、嘔吐（２５％対１９％）、下痢（２０％対１９％）、皮膚炎ＮＯＳ（１８％対１１％）、無食欲（２３％対１９％）、咳（２０％対９％）、呼吸困難ＮＯＳ（１３％対２６％）、不眠（９％対１７％）、関節痛（１２％対１３％）、筋痛症（１１％対９％）、下肢の浮腫（８％対１７％）、体重減少（１１％対４％）、および低血圧ＮＯＳ（６％対１１％）が含まれていた。
【０１１６】
ＬＤのプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）の腎毒性は、腎機能に関するサブグループの間で類似していた。ＬＤのプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）療法の腎毒性は、ベースラインの測定値に対して、各処置サイクルの間のＳＣｒレベルを比較することによって評価した。ピークのＳＣｒレベルは多数の患者については処置の間にわずかに上昇したが、ピークＳＣｒ＞２．０ｍｇ／ｄＬが、腎機能が低下していたサブグループのうちのわずか５人の患者、および正常な腎機能を有していたサブグループのうちの８人の患者において観察された。ピークＳＣｒ＞３．０ｍｇ／ｄＬは一般的ではなく、腎機能が低下していたサブグループのうちのわずかに１人の患者、および正常な腎機能を有していたサブグループのうちの２人の患者でしか観察されなかった。
【０１１７】
結論
低用量のインターロイキン−２は、高用量のＩＬ−２療法には不適格である、転移性腎細胞ガンを有している腎機能が低下している患者について安全であり、有効であるようである。第ＩＶ相臨床試験の結果は、低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）によって、正常な腎機能を有していた患者および腎機能が低下していた患者のいずれにおいても、同様の応答率、無増悪生存率（ＰＦＳ）、および全体の生存率（ＯＳ）が生じたことを示している。低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）で処置した正常な腎機能を有していた患者および腎機能が低下していた患者についての効力の結果は、一般的には、ヒストリカル・コントロールグループについて報告された効力よりも高かった。低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）に伴う腎毒性は、腎機能のサブグループの間では同様であり、腎機能が低下していた患者において高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）を用いた場合に観察された腎毒性よりも劇的に低かった。
【０１１８】
（実施例４）
低用量のＩＬ−２の投与による転移性腎細胞ガンの処置
ＩＬ−２処方物を、転移性腎細胞ガンの組織学的診断について、患者に投与した。処方物中のＩＬ−２の濃度は約２２ＭＩＵであった。ＩＬ−２処方物は皮下注射によって投与した。処置には、９週間のサイクルを２回含めた。最初のサイクルには、９〜１８ＭＩＵの低用量のＩＬ−２で、１日に１回、１週間のうちに５日（ｑｄ×５ｄ）の６週間の処置、続く３週間の休息期間を含めた。２回目のサイクルには、９ＭＩＵの低用量のＩＬ−２で、１日に１回、１週間のうちに５日（ｑｄ×５ｄ）の６週間の処置、続く３週間の休息期間を含めた。処置サイクルを、応答している患者については繰り返した。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態が説明され、記載されたが、様々な変更を、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行うことができることは明らかであろう。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ＩＬ−２で腎細胞ガンを処置するための方法に関する。具体的には、本発明は、腎臓が正常に機能していないか、または高用量のＩＬ−２療法に寛容ではない患者の腎細胞ガンを処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞の増殖および機能の強力な刺激因子である（非特許文献１）。この自然界に存在しているリンホカインは、様々な悪性腫瘍に対して、単独で、またはリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞もしくは腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）と組み合わせられた場合に、抗腫瘍活性を有していることが示されている（例えば、非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６を参照のこと）。ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、転移性黒色腫および腎細胞ガンの患者において、Ｃｈｒｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡから市販されている。ＩＬ−２製剤であるプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）を使用して記載されている。リンパ腫を含む他の疾患もまた、ＩＬ−２での処置に応答するようである（非特許文献７）。しかし、腫瘍の増殖に関してポジティブな治療結果を得るために使用される高用量のＩＬ−２は、頻繁に、深刻な副作用を引き起こし、これには、発熱および悪寒、低血圧および毛細血管漏出（毛細血管漏出症候群すなわちＶＬＳ）、ならびに神経学的変化が含まれる（例えば、非特許文献８；非特許文献９；および非特許文献１０を参照のこと）。
【０００３】
転移性腎細胞ガン（ＲＣＣ）は、一般的には、単剤または組み合わせられた複合剤のいずれを用いた場合にも、化学療法に対しては抵抗性である。免疫療法を用いて、具体的には、ＩＬ−２の使用によっては、より大きな成功が見られている。高用量の静脈内ＩＬ−２を用いた治療によっては、およそ１５％の患者において目的とする腫瘍応答が生じ、その一部は持続性であった。しかし、高用量のＩＬ−２の投与には毛細管漏出症候群が伴い、これによっては、低血圧や臓器の潅流の低下が生じ、これは重症となり得、時には死に至る。これらの毒性により、一般的には、その投与に関してかなりの経験を持つ医師によって投与される患者の厳選されたグループに対しては、ＩＬ−２の使用は制限される。低容量の使用、および単独で、または他の生物剤（例えば、インターフェロン−α）と組み合わせられたＩＬ−２の皮下投与レジュメは、この疾患により広く適用できる治療法を開発するために努力して研究されてきた（例えば、非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；および非特許文献１５を参照のこと）。
毒性が低く、そして治療効果が改善された、腎細胞ガンの患者を処置するための改良された治療方法が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｍｏｒｇａｎら、（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９３：１００７−１０１１
【非特許文献２】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９８７）３１６：８８９−８９７
【非特許文献３】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．（１９８８）２０８：１２１−１３５
【非特許文献４】Ｔｏｐａｌｉａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９８８）６：８３９−８５３
【非特許文献５】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９８８）３１９：１６７６−１６８０
【非特許文献６】Ｗｅｂｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９２）１０：３３−４０
【非特許文献７】Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら、Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８３：２０２０−２０２２
【非特許文献８】Ｄｕｇｇａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９２）１２：１１５−１２２
【非特許文献９】Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら、Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８３：２０８１−２０８５
【非特許文献１０】Ｓｚｎｏｌ ａｎｄ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ，Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８３：２０２０−２０２２
【非特許文献１１】Ｎｉｅｋｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．（１９９６）１１：２８９−２９５
【非特許文献１２】Ｓｌｅｉｊｆｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９２）１０：１１１９−１１２３
【非特許文献１３】Ｌｅｓｓｏｎｉら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００２）２２：１０６１−１−１０６４
【非特許文献１４】Ｔｏｕｒａｎｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９８）１６：２５０５
【非特許文献１５】Ｓｃｈｉｌｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９３）５３：１２８６−１２９２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ＩＬ−２で腎細胞ガンを処置するための有効な方法を提供する。この方法は、毒性を低下させるために、高用量のＩＬ−２療法においてこれまでに使用されてきた投与量と比較して比較的低用量のＩＬ−２を利用する。本明細書中の実施例に示すように、この治療レジュメによっては腫瘍の増殖が有意に阻害され、有害な副作用は少ない。そして高用量のＩＬ−２療法を寛容できない患者についての別の処置を提供する。
【０００６】
１つの態様においては、本発明は、腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法を提供する。特定の実施形態においては、患者は、腎臓が正常に機能していない。特定の実施形態においては、腎細胞ガンは転移性である。特定の実施形態においては、患者は、高用量のＩＬ−２療法に寛容ではない。
【０００７】
１つの実施形態においては、この方法は、ａ）１日に１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；およびｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む。
【０００８】
別の実施形態においては、この方法は、ａ）１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、５日〜１ヶ月ごとに、１〜２４週間繰り返して投与する工程であって、ＩＬ−２がポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに共有結合されている工程；およびｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む。
【０００９】
さらなる実施形態においては、この方法は、ａ）１日に９〜１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；ｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程；ｃ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；およびｄ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む。
【００１０】
なお別の実施形態においては、この方法は、ａ）最初に、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間のうちに５日間投与する工程；ｂ）第２に、１週間のうちに、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を２日間、続いて、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、３日間投与することを、５週間繰り返す工程；ｃ）第３に、３週間、ＩＬ−２を投与しない工程；ｄ）第４に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間に５日間、６週間繰り返して投与する工程；ならびに、ｅ）第５に、３週間、ＩＬ−３を投与しない工程を含む。
【００１１】
本明細書中に記載される方法の任意のものにおいては、ＩＬ−２は組み換え生成されたＩＬ−２であり得る。ＩＬ−２には、ヒトＩＬ−２、あるいは、ヒトＩＬ−２（配列番号１）の配列に対して少なくとも約７０〜１００％の配列同一性（これには、これらの範囲内の任意のパーセント同一性、例えば、それに対する７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％の配列同一性が含まれる）を有している配列を含むその変異体を含み得る。特定の実施形態においては、ＩＬ−２はＩＬ−２ムテインであり、例えば、Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；ｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；およびｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４ｄｅｓ−Ｓｅｒ５ｄｅｓ−Ｓｅｒ６ＩＬ−２であるが、これらに限定はされない。好ましい実施形態においては、ＩＬ−２ムテインは、ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）である。
【００１２】
特定の実施形態においては、ＩＬ−２はポリエチレングリコールに結合している。例示的なポリエチレングリコールとしては、１，０００から４０，０００ダルトンの平均分子量を有しているポリエチレングリコール、２，０００から２０，０００ダルトンの平均分子量を有しているポリエチレングリコール、および３，０００から１２，０００ダルトンの平均分子量を有しているポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００１３】
他の実施形態においては、ＩＬ−２は、ポリオキシエチル化ポリオールに共有結合している。例示的なポリオキシエチル化ポリオールとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、およびポリオキシエチル化グリセロールが挙げられるが、これらに限定はされない。特定の実施形態においては、ポリオキシエチル化ポリオールは、１，０００から４０，０００の平均分子量を有しているポリオキシエチル化グリセロールである。
【００１４】
本明細書中に記載される方法の任意のものにおいては、多サイクルの処置方法を、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な時間、被験体に施行する、ことができる。特定の実施形態においては、時間は少なくとも６ヶ月間である。特定の実施形態においては、時間は少なくとも１２ヶ月間である。特定の実施形態においては、時間は、完全な腫瘍応答を得るために十分である。
【００１５】
特定の実施形態においては、処置方法はさらに、ａ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回で、１週間に３〜６日間、１〜２４週間の間繰り返して投与する工程；およびｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程を含む、多サイクルの処置を含み、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な時間、被検体に投与する。
【００１６】
本明細書中に記載される方法の任意のものにおいては、ＩＬ−２は、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、経口、肺、鼻腔、局所、または経皮投与によって、あるいは、注入または坐剤によって投与することができる。好ましい実施形態においては、ＩＬ−２は皮下投与される。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法であって、該患者は腎機能が低下しており、以下：
ａ）１日に１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間に３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；および
ｂ）１〜４週間ＩＬ−２を投与しない工程
を含む方法。
（項目２）
腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法であって、該患者は腎機能が低下しており、以下：
ａ）１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、５日〜１ヶ月ごとに、１〜２４週間繰り返して投与する工程であって、該ＩＬ−２が、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに共有結合している工程；および
ｂ）１〜４週間ＩＬ−２を投与しない工程
を含む方法。
（項目３）
腎細胞ガンのヒト患者を処置するための方法であって、以下：
ａ）１日に９〜１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；
ｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程；
ｃ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間のうちに３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；および
ｄ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程
を含む方法。
（項目４）
以下：
ａ）最初に、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間に５日間投与する工程；
ｂ）第２に、各週の間に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を２日間投与し、続いて、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量を３日間投与し、これを５週間繰り返す工程；
ｃ）第３に、３週間ＩＬ−２を投与しない工程；
ｄ）第４に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１週間に５日間、６週間繰り返して投与する工程；ならびに、
ｅ）第５に、３週間ＩＬ−２を投与しない工程
を含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、組み換え生成されたＩＬ−２である、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ＩＬ−２がＩＬ−２ムテインである、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記ＩＬ−２がｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ＩＬ−２が、Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；ｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４Ａｌａ１０４Ｓｅｒ１２５ＩＬ−２；およびｄｅｓ−Ａｌａ１ｄｅｓ−Ｐｒｏ２ｄｅｓ−Ｔｈｒ３ｄｅｓ−Ｓｅｒ４ｄｅｓ−Ｓｅｒ５ｄｅｓ−Ｓｅｒ６ＩＬ−２からなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記ＩＬ−２がポリエチレングリコールに結合されている、項目２に記載の方法。
（項目１３）
前記ポリエチレングリコールが、１，０００から４０，０００ダルトンの平均分子量を有している、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ポリエチレングリコールが、２，０００から２０，０００ダルトンの平均分子量を有している、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記ポリエチレングリコールが、３，０００から１２，０００ダルトンの平均分子量を有している、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記ＩＬ−２がポリオキシエチル化ポリオールに共有結合されている、項目２に記載の方法。
（項目１７）
前記ポリオキシエチル化ポリオールが、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、およびポリオキシエチル化グリセロールからなる群より選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ポリオキシエチル化ポリオールがポリオキシエチル化グリセロールである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記ポリオキシエチル化グリセロールが、１，０００から４０，０００の平均分子量を有している、項目１８に記載の方法
（項目２０）
前記腎細胞ガンが転移性である、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
多サイクルの処置方法が、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な期間、前記被験体に施行される、項目３に記載の方法。
（項目２２）
以下：
ａ）１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量を、１日に１〜３回の投与で、１週間に３〜６日間、１〜２４週間繰り返して投与する工程；および
ｂ）１〜４週間、ＩＬ−２を投与しない工程
を含む複数回の処置サイクルをさらに含み、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な期間、前記被験体に施行する、項目３に記載の方法。
（項目２３）
前記期間が少なくとも６ヶ月間である、項目２１または２２に記載の方法。
（項目２４）
前記期間が少なくとも１２ヶ月間である、項目２１または２２のいずれかに記載の方法。
（項目２５）
腫瘍の完全寛解が生じる、項目２１または２２のいずれかに記載の方法。
（項目２６）
前記ＩＬ−２を、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、経口、肺、鼻腔、局所、または経皮投与によって、あるいは、注入または坐剤によって投与する、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記ＩＬ−２を皮下投与する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記患者は腎機能が低下している、項目３に記載の方法。
（項目２９）
前記患者は高用量のＩＬ−２処置を寛容できない、項目３に記載の方法。
（項目３０）
項目１〜２９のいずれか１項に記載の腎細胞ガンのヒト患者を処置するための医薬品の製造における、ＩＬ−２の使用。
本発明のこれらおよび他の実施形態は、本明細書中の開示を参照して当業者であれば容易に思い浮かぶであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、実施例３に記載される投与レジュメの後の、正常な腎機能を有している転移性腎細胞ガンの患者（血清クレアチニン（ＳＣｒ）≦１．５ｍｇ／ｄＬ）および腎機能が正常に機能していない転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）における低用量のＩＬ−２の相対的な効力を比較する。図１は、年数での時間に対する無増悪生存率（ＰＦＳ）を示す被験体の割合（％）のプロットと、年数での時間に対する生存している被験体の割合（％）のプロットを示す。
【図２】図２は、実施例３に記載される投与レジュメの後の、正常な腎機能を有している転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ≦１．５ｍｇ／ｄＬ）および腎機能が正常に機能していない転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）についての、全体的な応答率を示している棒グラフである。完全寛解（ＣＲ）を示す被験体の割合（％）を明るい影で示す。部分寛解（ＰＲ）を示す被験体の割合（％）を暗い影で示す。
【図３】図３は、ヒストリカル・コントロールグループに対して、本明細書中に記載される低用量のＩＬ−２の第ＩＶ相臨床試験において処置した集団の患者特性（ＰＳ、腎摘出術前）を比較する。腎細胞ガンの患者の臨床試験によるヒストリカル・コントロールグループの記載については、Ｐｙｒｈｏｎｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１７：２８５９−２８６７；Ｍｏｌｚｅｒら（１９９９）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２５３０−４０；Ｒｉｔｃｈｉｅら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３：１４−１７；Ｋｒｉｅｇｍａｉｒら（１９９５）Ｕｒｏｌｏｇｙ ４５：７５８−７６２；およびＪｏｎｅｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．８：２７５−２８８；Ｇｌｅａｖｅら（１９９８）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３８：１２６５−１２７１；Ｓｔｅｉｎｅｃｋら（１９９０）Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌ．２９：１５５−１６２；およびＯｓｂａｎｄら（１９９０）Ｌａｎｃｅｔ ３３５：９９４−９９８を参照のこと。
【図４】図４は、ヒストリカル・コントロールグループに対して、本明細書中に記載される低用量のＩＬ−２の第ＩＶ相臨床試験において処置した集団の患者予後（１年でのＯＲＲ、ＰＦＳ、ＯＳ、２年でのＯＳ）を比較する。
【図５】図５は、ＩＬ−２の代わりに化学療法で処置したヒストリカル・コントロールグループの患者の生存率に対して、実施例３に記載される投与レジュメの後に低用量のＩＬ−２で処置した患者の生存率を比較する（Ｊｏｎｅｓら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：２７１４−２７２２）。患者を、以下のようにリスクファクターの層化についてのＪｏｎｅｓシステムにしたがって、リスクグループに分けた：低リスク（Ｇｏｏｄ Ｒｉｓｋ）（０〜１のリスクファクター）、中程度のリスク（Ｍｏｄｅｒａｔｅ Ｒｉｓｋ）（２のリスクファクター）、および予後不良（３つのリスクファクターの全て）。図５は、個々のリスクグループについての、年数での時間に対する生存している被験体の割合（％）の別々のプロットを示す。低用量のＩＬ−２で処置した被験体についてのデータは実線で示す。化学療法で処置した被験体についてのデータは点線で示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施には、別段の記載がなければ、当業者の能力の範囲内である薬理学的、化学的、生化学的、組み換えＤＮＡ技術、および免疫学の従来法が使用されるであろう。このような技術は、文献の中で十分に説明されている。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第Ｉ巻〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，現行版）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｃａｌ（第２版，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｍ編．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｉｎｃ．）を参照のこと。
【００１９】
本明細書中で引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、上記または下記を問わず、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。
【００２０】
Ｉ．定義
本発明を記載する際には以下の用語を使用し、以下の用語は、以下に示されるように定義されることを意図する。
【００２１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合は、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、その状況について他に明確に示されていない限りは、複数についての言及も含まれる。したがって、例えば、「化学療法薬（ａ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ）」との言及には、２つ以上のそのような薬剤の混合物なども含まれる。
【００２２】
用語「ＩＬ−２」は、本明細書中で使用される場合は、正常な末梢血リンパ球によって生産され、低濃度で体内に存在する、リンパ球に由来するタンパク質である。ＩＬ−２は、Ｍｏｒｇａｎら（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９３：１００７−１００８によって最初に記載され、これは、刺激されたＴリンパ球の増殖を誘導するその能力の理由から、もともとはＴ細胞増殖因子と呼ばれていた。これは、１３，０００から１７，０００の範囲の分子量であることが報告されており（Ｇｉｌｌｉｓ ａｎｄ Ｗａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１７０９）、そして６〜８．５の範囲に等電点を有しているタンパク質である。全長のＩＬ−２タンパク質および生物学的活性のその断片のいずれもが、この定義に含まれる。この用語にはまた、ＩＬ−２の発現後修飾（例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など）も含まれる。さらに、本発明の目的については、用語「ＩＬ−２」は、タンパク質が生物学的活性（すなわち、抗腫瘍活性）を維持している限りにおいて、天然配列に対して欠失、付加、および置換（通常は、性質に関して保存的である）等の修飾が含まれているタンパク質も意味する。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発によるように意図的である場合も、また、例えば、タンパク質を生産する宿主の変異、もしくはＰＣＲ増幅が原因である誤りのような、偶然である場合もある。
【００２３】
用語「〜に由来する」は、分子のもともとの供給源を特定するために本明細書中で使用されるが、それによって分子が作製される方法（例えば、化学合成または組み換え手段であり得る）を限定するようには意味されない。
【００２４】
用語「変異体」、「アナログ」、および「ムテイン」は、所望される活性（例えば、本明細書中に記載される腎細胞ガンの処置における抗腫瘍活性）を保持している、参照分子の生物学的活性の誘導体を意味する。一般的には、用語「変異体」および「アナログ」は、修飾によって生物学的活性が破壊されない限りにおいて、天然分子と比較すると１つ以上のアミノ酸の付加、置換（通常は、性質に関して保存的である）、および／または欠失を有している天然ポリペプチド配列および構造を有している化合物を意味する。これは、以下に定義されるように、参照分子と「実質的に相同」である。一般的には、このようなアナログのアミノ酸配列は、参照配列に対して高い程度の配列相同性を有する。例えば、２つの配列がアラインメントされた場合には、アミノ酸配列相同性は５０％を上回る、通常は、６０〜７０％を上回る、なおさらに具体的には、８０〜８５％またはそれ以上、例えば、少なくとも９０〜９５％またはそれ以上である。多くの場合は、アナログには、同じ数のアミノ酸が含まれるが、本明細書中で説明されるように、置換が含まれる。用語「ムテイン」には、さらに、１つ以上のアミノ酸様分子を有しているポリペプチドが含まれる。これには、アミノ酸および／またはイミノ分子だけを含む化合物、アミノ酸のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を１つ以上含むポリペプチド、置換された連結ならびに当該分野で公知の他の修飾を含むポリペプチド（自然界に存在しているものおよび自然界には存在しないもの（例えば、合成のもの）の両方、環化させられた分子、または分岐している分子）などが含まれるが、これらに限定はされない。この用語にはまた、１つ以上のＮ置換されたグリシン残基（「ペプトイド」）および他の合成のアミノ酸またはペプチドを含む分子も含まれる（ペプトイドの記載については、例えば、米国特許第５，８３１，００５号；同第５，８７７，２７８号；および同第５，９７７，３０１号；Ｎｇｕｙｅｎら、Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．（２０００）７：４６３−４７３；およびＳｉｍｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（１９９２）８９：９３６７−９３７１を参照のこと）。好ましくは、アナログまたはムテインは、少なくとも、天然分子と同じ抗腫瘍活性を有する。ポリペプチドアナログおよびムテインを作製するための方法は当該分野で公知であり、以下にさらに記載される。
【００２５】
上記に説明されるように、アナログには、一般的には、その性質に関して保存的である置換、すなわち、それらの側鎖に関係しているアミノ酸のファミリーの中で行われる置換が含まれる。具体的には、アミノ酸は、一般的には、以下の４つのファミリーに分けられる：（１）酸性−−アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性−−リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性−−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）電荷を有していない極性−−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、芳香族アミノ酸として分類される場合もある。例えば、イソロイシンまたはバリンでのロイシンの単独の置換、グルタミンでのアスパラギン酸の単独の置換、セリンでのスレオニンの単独の置換、または構造的に関係しているアミノ酸でのアミノ酸の同様の保存的置換は、生物学的活性に対して主要な効果がないことは、合理的に推測できる。例えば、目的のポリペプチドには、約５個から１０個までの保存的または非保存的アミノ酸置換を、なおさらには、約１５個から２５個までの保存的または非保存的アミノ酸置換を、または、５〜２５の間の任意の整数個の置換が、分子の所望される機能が完全なまま保たれる限りは、含まれ得る。当業者は、当該分野で周知のＨｏｐｐ／ＷｏｏｄｓプロットおよびＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅプロットを参照することにより、変化を容認することができる目的の分子の領域を容易に決定することができる。
【００２６】
「誘導」により、天然ポリペプチドの所望される生物学的活性が保持される限り、目的の天然ポリペプチド、または天然ポリペプチドの断片、またはそれらのそれぞれのアナログの任意の適切な修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化、ポリマーの結合（例えば、ポリエチレングリコールとの結合）、または他の外来部分の付加）が意図される。ポリペプチド断片、アナログ、および誘導体を作製する方法は、当該分野において一般的に利用することができる。
【００２７】
「断片」により、完全な全長の配列および構造の一部だけから構成される分子が意図される。断片には、天然ポリペプチドのＣ末端欠失、Ｎ末端欠失、および／または内部欠失が含まれ得る。特定のタンパク質の活性断片には、通常、全長の分子の少なくとも約５〜１０個の連続しているアミノ酸残基、好ましくは、全長の分子の少なくとも約１５〜２５個の連続しているアミノ酸残基、そして最も好ましくは、全長の分子の少なくとも約２０〜５０個またはそれ以上の連続しているアミノ酸残基、または、５個のアミノ酸から全長までの間の任意の整数個の配列が、問題となっている断片が生物学的活性（例えば、本明細書中で定義されるような抗腫瘍活性）を保持している限り、含まれる。
【００２８】
「実質的に精製された」は、一般的には、存在している試料の大部分の割合（％）を占めるような物質（化合物、ポリヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド組成物）の単離を意味する。通常、試料中には、実質的に精製された成分が試料のうちの５０％、好ましくは、８０〜８５％、より好ましくは９０〜９５％を占める。目的のポリヌクレオチドおよびポリペプチドを精製するための技術は当該分野で周知であり、これには、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、および密度による沈殿が含まれる。
【００２９】
「単離された」により、ポリペプチドについて言及される場合、示された分子が、その分子が自然界において見出される生物体全体とは分けられ、そして分離されているか、または、同じタイプの他の生物学的巨大分子が実質的に存在していない条件下で存在していることが意味される。用語「単離された」は、ポリヌクレオチドに関しては、自然界において通常それに伴われる配列が、完全に、または一部含まれない核酸分子であるか；または、それが自然界において存在しているのと同様に存在しているが、それとともに異種配列を有している配列であるか；あるいは、染色体から解離した分子である。
【００３０】
「相同性」は、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド部分の間での同一性の割合（％）を意味する。２つの核酸、または２つのポリペプチドの配列は、これらの配列が、定義された分子の長さにわたって、少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、そして最も好ましくは少なくとも約９５％〜９８％の配列同一性を示す場合に、互いに「実質的に相同」である。本明細書中で使用される場合は、実質的に相同とは、特定の配列に対して完全な同一性を示す配列も意味する。
【００３１】
一般的には、「同一性」は、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の、それぞれ、正確なヌクレオチド−対−ヌクレオチド、またはアミノ酸−対−アミノ酸の対応を意味する。同一性の割合（％）は、２つの分子（参照配列と、参照分子に対する％同一性がわかっていない配列）の間で配列情報を、配列をアラインメントし、２つのアラインメントされた配列の間での正確な適合の数をカウントし、参照配列の長さで割り算し、そして結果に１００を掛け算することにより直接比較することによって決定することができる。ＡＬＩＧＮ、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ．編．，５ Ｓｕｐｐｌ．３：３５３−３５８，Ｎａｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）等の、容易に利用できるコンピュータープログラムを、分析の補助のために使用することができる。ここでは、ペプチドの分析のためには、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズムが採用されている（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９，１９８１）。ヌクレオチド配列同一性を決定するためのプログラムは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン８（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから入手できる）において、例えば、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＧＡＰプログラムを利用することができる。これらもまた、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムによる。これらのプログラムは、製造業者によって推奨され、そして上記のＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅにおいて記載されているデフォルトパラメーターを用いて、容易に利用できる。例えば、参照配列に対する特定のヌクレオチド配列の同一性の割合（％）は、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性アルゴリズムを、デフォルトスコア表と、６ヌクレオチド位置のギャップペナルティーと共に使用して決定することができる。
【００３２】
本発明の状況において同一性の割合（％）を確立するための別の方法は、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｃｏｌｌｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｎｅ Ｓ．Ｓｔｕｒｒｏｋによって開発され、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によって流通されている、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈが著作権を有しているプログラムのＭＰＳＲＣＨパッケージを使用することである。この一式のパッケージから、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが使用され得、ここでは、スコア表のデフォルトパラメーターが使用される（例えば、１２のギャップ開放ペナルティー、１のギャップ伸張ペナルティー、および６のギャップ）。データから生じた「適合（Ｍａｔｃｈ）」値は、「配列同一性」を反映する。配列間の同一性または類似性の割合（％）を計算するための他の適しているプログラムは当該分野で一般的に公知である。例えば、別のアラインメントプログラムは、デフォルトパラメーターと共に使用されるＢＬＡＳＴである。例えば、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰを、以下のデフォルトパラメーターを使用して使用することができる：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス（Ｍａｔｒｉｘ）＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記述（ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ）＝５０の配列；選別＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；データベース＝余剰なし、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ翻訳＋Ｓｗｉｓｓタンパク質＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は容易に入手できる。
【００３３】
あるいは、相同性は、相同領域間で安定な二本鎖を形成する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、その後の、一本鎖特異的ヌクレアーゼ（単数または複数）での消化、および消化された断片のサイズ決定によって決定することができる。実質的に相同であるＤＮＡ配列は、例えば、その特定のシステムについて定義されるストリンジェントな条件下でのサザンハイブリダイゼーション実験において同定することができる。適切なハイブリダイゼーション条件を決めることは、当業者の能力の範囲内である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，（前出）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，（前出）を参照のこと。
【００３４】
「組み換え体」は、核酸分子を記載するように本明細書中で使用される場合は、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成または合成起源のポリヌクレオチドを意味する。これには、その起源または操作の理由によって、自然界においてそれに付随しているポリヌクレオチドの全てまたは一部が伴われていない。用語「組み換え体」は、タンパク質またはポリペプチドに関して使用される場合には、組み換え体ポリヌクレオチドの発現によって生産されるポリペプチドを意味する。一般的には、以下にさらに記載されるように、目的の遺伝子がクローニングされ、その後、形質転換された生物中で発現させられる。宿主生物は、発現条件下で外来遺伝子を発現して、タンパク質を生じる。
【００３５】
「腎臓が正常に機能していない」は、本明細書中で使用される場合は、糸球体濾過率が不足している患者を意味する。このような患者は、本明細書中では、１．５ｍｇ／ｄＬより高い血清クレアチニンレベル（ＳＣｒ）によって特性決定される。
【００３６】
「抗腫瘍活性」により、細胞増殖速度の低下、したがって、既存の腫瘍もしくは治療の間に生じる腫瘍の増殖速度の低下、および／または既存の新生物（腫瘍）細胞もしくは新しく形成された新生物細胞の崩壊、したがって、治療の間の腫瘍の大きさの全面的な減少が意図される。このような活性は、動物モデル（例えば、ヒト腎細胞ガンの異種移植モデル）を使用して評価することができる。例えば、動物モデルの記載については、Ｐｕｌｋｋａｎｅｎら、Ｉｎ Ｖｉｖｏ（２０００）１４：３９３−４００およびＥｖｅｒｉｔｔら、Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９５）８２−８３：６２１−６２５を参照のこと。
【００３７】
ＩＬ−２またはその変異体の「治療有効用量または量」により、本明細書中に記載されるように投与された場合に、ポジティブな治療応答（例えば、抗腫瘍活性）をもたらす量が意図される。
【００３８】
用語「腫瘍応答」は、本明細書中で使用される場合は、全ての測定可能な病変の縮小または排除を意味する。腫瘍応答の基準は、ＷＨＯ Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ Ｃｒｉｔｅｒｉａ［ＷＨＯ Ｏｆｆｓｅｔ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，４８−Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅｖａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９７９）］に基づく。理想的には、一次元的に測定することができる病変または二次元的に測定することができる病変の全てが、それぞれの評価の時点で測定されるべきである。複数の病変が任意の臓器に存在している場合には、このような測定が不可能である場合があり、そのような状況では、可能な場合は、６個までの代表的な病変が選択されるべきである。
【００３９】
用語「完全寛解」（ＣＲ）は、本明細書中で使用される場合は、少なくとも４週間の間隔をあけた２回の評価によって決定される、全ての臨床的に検出可能な悪性疾患の完全な消滅を意味する。
【００４０】
用語「部分寛解」（ＰＲ）は、本明細書中で使用される場合は、少なくとも４週間の間隔をあけた少なくとも２回の連続する測定によって決定される場合に、評価できるほどの疾患の進行を伴わず、そして新しい病変の証拠が全くない、全ての測定可能な疾患の最も長い垂直直径の積の和のベースラインからの５０％以上の減少を意味する。評価は、渙散性病変の大きさの部分的な減少、渙散性病変のカルシウム再沈着、または芽球性病変の密度の低下を示すはずである。ＩＬ−２については、転移性疾患の部位で一時的な炎症を引き起こすことは一般的ではない。大きさが増加するように見える個々の病変は、その増加が少なくとも２８日の間隔をあけて行われる２回の連続する測定において報告される限りは、必ずしもＰＲに不適格とみなされるわけではない。
【００４１】
用語「進行性疾患」（ＰＤ）は、本明細書中で使用される場合は、少なくとも２８日の間隔をあけた少なくとも２回の連続する評価によって決定される、少なくとも１つの二次元的に（最大垂直直径の積）または一次元的に測定することができる病変の大きさの２５％以上の増加；任意の評価可能な病変の明確な悪化；消滅した任意の病変の再発；または新しい病変の出現を意味する。
【００４２】
用語「安定な疾患」（ＳＤ）または「変化なし」は、（ａ）二次元的に測定できる疾患についての言及において本明細書中で使用される場合は、全ての測定可能な病変の最大垂直直径の積の和の約５０％未満の減少または約２５％未満の増加を意味し、そして、（ｂ）一次元的に測定できる疾患についての言及において本明細書中で使用される場合には、全ての病変の直径の和における、約５０％未満の減少または約２５％未満の増加を意味する。新しい病変は出現してはならない。完全寛解、部分寛解、または進行もない。処置に対する骨病変のゆっくりとした応答の理由から、記号表示「変化なし」は、治療の開始から少なくとも８週間経過するまでは、適用されるべきではない。
【００４３】
用語「応答なし」は、本明細書中で使用される場合は、安定な疾患または軽微な応答（全身腫瘍組織量の２５％を超えるが５０％未満である減少）を有している患者を意味する。
【００４４】
用語「進行」は、本明細書中で使用される場合は、観察された最少の和を上回る、またはベースラインからの減少がない場合には、ベースラインを上回る全ての測定可能な病変の積の和の２５％の増加；任意の評価することができる病変の明確な悪化；消滅していた任意の病変の再発；任意の新しい病変または部位（評価できない疾患の新しい部位を含む）の出現を意味し；そして／または、最初の腫瘍再燃が起こり得る（高カルシウム血症、骨痛、皮膚病変の紅斑）場合には、症状は４週間を超えて持続するか、または進行のさらなる証拠が存在するかのいずれかでなければならない。
【００４５】
用語「全体的な応答（ｏｖｅｒａｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」は、本明細書中で使用される場合は、悪性疾患の全ての部位を考慮することによって決定される応答を意味する。測定可能な疾患を有している被験体においては、最も乏しい応答が全体的な応答に該当する。測定することができない病変において変化がないことは、測定可能な病変における部分寛解によって損なわれることはない；すなわち、全体的な応答は、部分寛解である。測定することができない病変に変化がないことは、測定可能な病変の完全寛解を損なう；すなわち、全体的な応答は部分寛解である。
【００４６】
用語「応答期間」は、本明細書中で使用される場合は、最良の目的とする腫瘍応答の最初の記録から、進行時までの時間を意味する。
【００４７】
用語「生存」は、本明細書中で使用される場合は、ＩＬ−２の最初の用量から死亡時までの時間を意味する。
【００４８】
用語「無増悪生存率」（ＰＦＳ）は、本明細書中で使用される場合は、レスポンダーについての、ＩＬ−２の最初の用量から腫瘍の進行時、死亡時、または応答がなおも持続している場合には、患者が最後に病院に訪れるまでの時間を意味する。
【００４９】
ＩＩ．発明の実施形態
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の処方物またはプロセスのパラメーターに限定はされず、それ自体がもちろん変化し得ることが理解される。本明細書中で使用される専門用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的のためのものにすぎず、限定とは意図されないことも理解される。
【００５０】
本明細書中に記載されるものと類似するかまたは同等である多数の方法および材料を本発明の実施において使用することができるが、好ましい材料および方法が本明細書中に記載される。
【００５１】
本発明は、低用量のＩＬ−２の投与により腎細胞ガンを安全にそして効率的に処置するための新規の治療方法の発見に基づく。本明細書中に記載される処置レジュメによって腫瘍の増殖が有意に阻害され、これには、高用量のＩＬ−２処置と比較して低い毒性および減少した有害な副作用が伴う。
【００５２】
本発明の方法は既存の腫瘍の処置を対象としているが、この方法が、治療の間に生じるさらなる腫瘍の増殖を防ぐことにおいて有用であり得ることが理解される。本発明の方法は、腎臓が正常に機能していない、および／または高用量のＩＬ−２での処置を寛容できない、転移性の腎細胞ガンを有している被験体の処置に特に有用である。
【００５３】
本発明の方法で使用されるＩＬ−２は、天然である場合も、また、組み換え技術によって得られる場合もあり、そして哺乳動物供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、およびヒト）を含む任意の供給源に由来し得る。多数の種に由来するＩＬ−２配列が当該分野で周知であり、これには、以下が含まれるがこれらに限定はされない：ヒトＩＬ−２（ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＨ６６２５４；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＨ６６２５４の残基２１〜１５３によって示される成熟配列）；アカゲザルＩＬ−２（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔｏ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１４９８；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１４９８配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ヒヒＩＬ−２（ヒヒ（Ｐａｐｉｏ ａｎｕｂｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８７５Ｙ１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８６５Ｙ１配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；シロエリマンガベイＩＬ−２（シロエリマンガベイ（Ｃｅｒｃｏｃｅｂｕｓ ｔｏｒｑｕａｔｕｓ ａｔｙｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ４６６４９；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ４６６４９配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；カニクイザルＩＬ−２（カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９６１５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９６１５配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；シロテナガザルＩＬ−２（シロテナガザル（Ｈｙｌｏｂａｔｅｓ ｌａｒ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＩＣＧＩ２；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＩＣＧＩ２配列の残基２１〜１５３によって示される成熟配列）；コモンリスザルＩＬ−２（コモンリスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８ＭＫＨ２；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ８ＭＫＨ２配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ウシＩＬ−２（ウシ（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ０５０１６；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ０５０１６配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ−８５１３４０に報告されている変異体前駆体配列；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ−８５１３４０配列の残基２４〜１５８によって示される成熟配列もまた参照のこと）；スイギュウＩＬ−２（スイギュウ（Ｂｕｂａｌｕｓ ｂｕｂａｌｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ９５ＫＰ３；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ９５ＫＰ３配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ウマＩＬ−２（ウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３７９９７；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３７９９７配列の残基２１〜１４９によって示される成熟配列）；ヤギＩＬ−２（ヤギ（Ｃａｐｒａ ｈｉｒｃｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３６８３５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ３６８３５配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ヒツジＩＬ−２（ヒツジ（Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１９１１４；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１９１１４配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ブタＩＬ−２（ブタ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ２６８９１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ２６８９１の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；アカシカＩＬ−２（アカシカ（Ｃｅｒｖｕｓ ｅｌａｐｈｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１７４７；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５１７４７配列の残基２１〜１６２によって示される成熟配列）；イヌＩＬ−２（イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９４１６；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ２９４１６配列の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；ネコＩＬ−２（ネコ（Ｆｅｒｉｓ ｃａｔｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０７８８５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０７８８５配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ウサギＩＬ−２（ウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ７７６２０；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ７７６２０配列の残基２１〜１５３によって示される成熟配列）；シャチＩＬ−２（シャチ（Ｏｒｃｉｎｕｓ ｏｒｃａ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ９７５１３；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ９７５１３配列の残基２１〜１５２によって示される成熟配列）；キタゾウアザラシＩＬ−２（キタゾウアザラシ（Ｍｉｒｏｕｎｇａ ａｎｇｕｓｔｉｒｏｓｔｒｉｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ６２６４１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｏ６２６４１配列の残基２１〜１５４によって示される成熟配列）；ハツカネズミＩＬ−２（ハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３２３９２；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３２３９２配列の残基２１〜１６９によって示される成熟配列）；アルジェリアハツカネズミＩＬ−２（アルジェリアハツカネズミ（Ｍｕｓ ｓｐｒｅｔｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８８６７；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８８６７配列の残基２１〜１６６によって示される成熟配列）；ドブネズミＩＬ−２（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１７１０８；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１７１０８の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；スナネズミＩＬ−２（スナネズミ（Ｍｅｒｉｏｎｅｓ ｕｎｇｕｉｃｕｌａｔｕｓ）；前駆体配列、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８０８１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ０８０８１の残基２１〜１５５によって示される成熟配列）；これらの上記ＧｅｎＢａｎｋ登録番号に開示されている変異体ＩＬ−２ポリペプチドの任意のもの；ＧｅｎＢａｎｋレポートのそれぞれは、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。ＩＬ−２の任意の供給源を、本発明を実施するために利用することができるが、特に、治療を受けている被験体がヒトである場合には、ＩＬ−２はヒト供給源に由来することが好ましい。いくつかの実施形態においては、本発明の方法で使用されるＩＬ−２は組み換えによって生産され、例えば、組み換え体ヒトＩＬ−２タンパク質であり、これには、微生物宿主から得られたものが含まれるが、これらに限定はされない。
【００５４】
本発明の方法において有用な組成物には、任意の種に由来するＩＬ−２の変異体を含む、生物学的活性のＩＬ−２変異体が含まれ得る。このような変異体は、天然ポリペプチドの所望される生物学的活性を保持していなければならず、その結果、変異体ポリペプチドを含む薬学的組成物は、被験体に投与された場合に、天然ポリペプチドを含む薬学的組成物と同じ治療効果を有する。すなわち、変異体ポリペプチドは天然ポリペプチドについて観察される様式と同様の様式で、薬学的組成物において治療上有効な成分として作用するであろう。変異体ポリペプチドが所望される生物学的活性を保持しており、それにより、薬学的組成物中の治療有効成分として作用するかどうかを決定するためには、複数の方法を当該分野で利用することができる。生物学的活性は、天然ポリペプチドまたはタンパク質の活性を測定するために特異的に設計されたアッセイを使用して測定することができる。これには、本発明に記載されるアッセイが含まれる。加えて、生物学的活性の天然ポリペプチドに対して惹起させられた抗体を、変異体ポリペプチドに結合するそれらの能力について試験することができる。この場合、有効な結合は、天然ポリペプチドの立体構造と類似の立体構造を有しているポリペプチドの指標である。
【００５５】
天然のまたは自然界に存在しているＩＬ−２の適切な生物学的活性の変異体は、上記で定義されるように、ポリペプチドの断片、アナログ、および誘導体であり得る。
【００５６】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列変異体は、目的の天然ポリペプチドをコードするクローニングされたＤＮＡ配列中の変異によって調製することができる。突然変異誘発およびヌクレオチド配列の変更のための方法は、当該分野で周知である。例えば、引用により本明細書中に組み入れられる、Ｗａｌｋｅｒ ａｎｄ Ｇａａｓｔｒａ，編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；ならびにその中で引用されている参考文献を参照のこと。目的のポリペプチドの生物学的活性には影響を与えない適切なアミノ酸置換に関する指針は、引用により本明細書中に組み入れられる、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のＤａｙｈｏｆｆら（１９８７）のモデルに見ることができる。類似の特性を有している別のアミノ酸での１つのアミノ酸の交換等の保存的置換が好ましい場合がある。保存的置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００５７】
残基の置換、欠失、または挿入のいずれかによって変更することができるＩＬ−２タンパク質の領域に関する指針は、当該分野において見ることができる。例えば、Ｂａｚａｎ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：４１０−４１２；ＭｃＫａｙ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：４１２；Ｔｈｅｚｅら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １７：４８１−４８６；Ｂｕｃｈｌｉ ａｎｄ Ｃｉａｒｄｅｌｌｉ（１９９３）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３０７：４１１−４１５；Ｃｏｌｌｉｎｓら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：７７０９−７７１３；Ｋｕｚｉｅｌら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５７３１；Ｅｃｋｅｎｂｅｒｇら（１９９７）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９：４８８−４９８（それらの内容は、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）で議論されている構造／機能の関係、および／または結合実験を参照のこと。
【００５８】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの変異体の構築においては、修飾は、そのような変異体が所望される活性を持ち続けるように行われる。明らかに、変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡの中に作成される任意の変異は、必ずリーディングフレームの外側の配列で行われなければならないわけではなく、二次的なｍＲＮＡ構造を生じることができる相補的な領域を生じないことが好ましい。欧州特許出願公開第７５，４４４号を参照のこと。
【００５９】
ＩＬ−２の生物学的活性のある変異体は、通常、比較のための基準とされる参照ＩＬ−２ポリペプチド分子（例えば、天然のヒトＩＬ−２）のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％〜９５％またはそれ以上、そして最も好ましくは少なくとも約９８％、９９％、またはそれ以上のアミノ酸配列同一性を有する。配列同一性の割合（％）は、１２のギャップ開放ペナルティーおよび２のギャップ伸張ペナルティー、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いるアフィンギャップ検索を使用する、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍｅｔｈ．（１９８１）２：４８２−４８９に教示されている。例えば、変異体は、わずかに１個から１５個のアミノ酸残基、わずかに１個から１０個の残基、例えば、６個〜１０個、わずかに５個、わずかに４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ酸残基が異なる。
【００６０】
２つのアミノ酸配列の最適なアラインメントに関して、変異体アミノ酸配列の連続するセグメントは、参照アミノ酸配列と同じ数のアミノ酸を有している場合も、さらなるアミノ酸残基を有している場合も、また、アミノ酸残基が欠失している場合もある。参照アミノ酸配列との比較に使用される連続するセグメントには、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基が含まれ、３０個、４０個、５０個、またはそれ以上のアミノ酸残基であり得る。保存的な残基の置換またはギャップを伴う配列同一性の補正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを参照のこと）。目的の天然ＩＬ−２ポリペプチドの生物学的活性変異体は、わずかに１個から１５個のアミノ酸残基、わずかに１個から１０個の残基、例えば、６個〜１０個、わずかに５個、わずかに４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ酸残基が、天然ポリペプチドとは異なる。
【００６１】
ＩＬ−２活性を有しているポリペプチドの正確な化学構造は、多数の要因に依存する。イオン化できるアミノ基およびカルボキシル基が分子の中に存在しているので、特定のポリペプチドを、酸性の塩または塩基性の塩、あるいは中性の形態として得ることができる。それらの生物学的活性を保持している全てのこのような調製物は、適切な環境条件に置かれている場合には、本明細書中で使用される、ＩＬ−２活性を有しているポリペプチドの定義に含まれる。さらに、ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用する誘導によって（グリコシル化）、または脂質、リン酸塩、アセチル基などの他の補助的な分子によって補強することができる。これはまた、糖との結合によっても補強することができる。このような補強の特定の態様は、生産宿主の翻訳後プロセシングシステムによって行うことができる；他のこのような修飾はインビトロで導入することができる。いずれにしても、このような修飾は、ポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限りは、本明細書中で使用されるＩＬ−２ポリペプチドの定義に含まれる。このような修飾は、ポリペプチドの活性を高めるかまたは低下させるかのいずれかによって、種々のアッセイにおいて、活性に定量的または定性的な影響を与える可能性があると予想される。さらに、鎖の中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導によって修飾することができ、ポリペプチドは、活性を保持している断片が得られるように切断することができる。活性を破壊してしまうことのないこのような変更によっては、本明細書中で使用される目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義からこのポリペプチド配列が除外されることはない。
【００６２】
当該分野では、ポリペプチド変異体の調製および使用に関する実質的な指針が提供されている。ＩＬ−２変異体の調製においては、当業者は、天然タンパク質ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対するどの修飾によって本発明の方法で使用される薬学的組成物の治療活性のある成分としての使用に適している変異体が生じるかを容易に決定することができる。
【００６３】
本発明の方法で使用されるＩＬ−２またはその変異体は任意の供給源に由来するものであり得るが、組み換えによって生産されることが好ましい。「組み換え体ＩＬ−２」または「組み換え体ＩＬ−２変異体」は、意図されるインターロイキン−２、あるいは、天然配列ＩＬ−２と匹敵する生物学的活性を有しており、そして例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０２：３０５−３１０およびＤｅｖｏｓ（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１：４３０７−４３２３によって記載されるような組み換えＤＮＡ技術によって調製されたその変異体、あるいは、Ｗａｎｇら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：１４３１−１４３３に記載されているような突然変異によって変化したＩＬ−２である。一般的には、ＩＬ−２をコードする遺伝子がクローニングされ、その後、形質転換された生物体（好ましくは、微生物、そして最も好ましくは、本明細書中に記載されるように、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））の中で発現させられる。宿主生物は、発現条件下で外来遺伝子を発現してＩＬ−２を生産する。合成の組み換え体ＩＬ−２はまた、真核生物（例えば、酵母またはヒト細胞）でも生産させることができる。ＩＬ−２を増殖させる、回収する、破壊する、または細胞から抽出するためのプロセスは、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同第４，５６９，７９０号；同第４，７４８，２３４号；同第４，５３０，７８７号；同第４，５７２，７９８号；同第４，７４８，２３４号；および同第４，９３１，５４３号（それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に実質的に記載されている。
【００６４】
変異体ＩＬ−２タンパク質の例については、欧州特許（ＥＰ）公開番号ＥＰ１３６，４８９（自然界に存在しているＩＬ−２のアミノ酸配列の中の以下の変更の１つ以上を開示している：Ａｓｎ２６からＧｌｎ２６；Ｔｒｐ１２１からＰｈｅ１２１；Ｃｙｓ５８からＳｅｒ５８またはＡｌａ５８，Ｃｙｓ１０５からＳｅｒ１０５またはＡｌａ１０５；Ｃｙｓ１２５からＳｅｒ１２５またはＡｌａ１２５；Ａｒｇ１２０以降の全ての残基の欠失；およびそのＭｅｔ−１形態）；および１９８３年１０月１３日に提出された欧州特許出願番号８３３０６２２１．９（公開番号ＥＰ１０９，７４８として１９８４年５月３０日に公開された）（これは、ベルギー特許第８９３，０１６号および共有にかかる米国特許第４，５１８，５８４号に記載されている組み換え体ＩＬ−２ムテイン（ここでは、天然ヒトＩＬ−２にしたがって番号付けされた１２５位のシステインが欠失させられているか、または中性アミノ酸で置き換えられている組み換え体ヒトＩＬ−２ムテイン；アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２；およびｄｅｓ−アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２が開示されている）を参照のこと。米国特許第４，７５２，５８５号（ここでは、以下の変異体ＩＬ−２タンパク質が開示されている：ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｖａｌ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｖａｌ１０４ ＩＬ−２、およびｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｖａｌ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２）、ならびに、米国特許第４，９３１，５４３号（ここでは、本明細書中の実施例で使用されるＩＬ−２ムテインｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトＩＬ−２、ならびに、他のＩＬ−２ムテインが開示されている）もまた参照のこと。
【００６５】
欧州特許公開番号ＥＰ２００，２８０（１９８６年１２月１０日に公開）（ここでは、１０４位のメチオニンが保存的アミノ酸で置き換えられている組み換え体ＩＬ−２ムテインが開示されている）もまた参照のこと。例として、以下のムテインが挙げられる：ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｇｌｕ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｇｌｕ１０４ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｇｌｕ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ａｌａ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｇｌｕ１０４ ｓｅｒ１２５ ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｇｌｕ１０４ ＩＬ−２；およびｄｅｓ−ａｌａ１ ｄｅｓ−ｐｒｏ２ ｄｅｓ−ｔｈｒ３ ｄｅｓ−ｓｅｒ４ ｄｅｓ−ｓｅｒ５ ｄｅｓ−ｓｅｒ６ ｇｌｕ１０４ ａｌａ１２５ ＩＬ−２。欧州特許公開番号ＥＰ１１８，６１７および米国特許第５，７００，９１３号もまた参照のこと。ここでは、天然分子で見られるＮ末端アミノ酸としてのメチオニンの代わりにアラニンを有している非グリコシル化ヒトＩＬ−２変異体；開始メチオニンが欠失しており、その結果、プロリンがＮ末端アミノ酸である非グリコシル化ヒトＩＬ−２；およびＮ末端メチオニンとプロリンアミノ酸との間にアラニンが挿入されている非グリコシル化ヒトＩＬ−２が開示されている。
【００６６】
他のＩＬ−２ムテインとしては、ＷＯ９９／６０１２８に開示されているムテイン（ヒスチジンまたはイソロイシンでの２０位のアスパラギン酸（ａｓｐａｒｔａｔｅ）の置換、アルギニン、グリシン、またはイソロイシンでの８８位のアスパラギンの置換、あるいは、ロイシンまたはグルタミン酸での１２６位のグルタミンの置換）（これは、ＮＫ細胞に対して優先して、Ｔ細胞受容体を発現している細胞によって発現される高親和性ＩＬ−２受容体の選択的活性を有しており、そしてＩＬ−２毒性が低いことが報告されている）；米国特許第５，２２９，１０９号に開示されているムテイン（アラニンでの３８位のアルギニンの置換、またはリジンでの４２位のフェニルアラニンの置換）（これは、ＬＡＫ細胞を刺激する能力を維持したまま、天然ＩＬ−２と比較すると、高親和性ＩＬ−２受容体に対しては少ない結合を示す）；国際特許公開番号ＷＯ００／５８４５６に開示されているムテイン（天然ＩＬ−２の中の自然界に存在している（ｘ）Ｄ（ｙ）配列の変更または欠失、ここでは、Ｄはアスパラギン酸であり、（ｘ）はロイシン、イソロイシン、グリシン、またはバリンであり、そして（ｙ）はバリン、ロイシン、またはセリンである）（これは、毛細血管漏出症候群を軽減すると主張されている）；国際公開番号ＷＯ００／０４０４８に開示されているＩＬ−２ ｐ１−３０ペプチド（ＩＬ−２のα−ヘリックスＡの全体が含まれており、ＩＬ−２受容体のｂ鎖と相互作用する、ＩＬ−２の最初の３０個のアミノ酸に対応する）（これは、ＮＫ細胞とＬＡＫ細胞の誘導とを刺激することが報告されている）；および、ＷＯ００／０４０４８においても開示されているＩＬ−２ ｐ１−３０ペプチドの変異体形態（リジンでの２０位のアスパラギン酸の置換）（これは、血管出血を誘導することはできないが、なおもＬＡＫ細胞を生じることができると報告されている）が挙げられる。さらに、ＩＬ−２は、高い溶解度を提供し、そして変化した薬物動態プロフィールを提供するように、ポリエチレングリコールで修飾することができる（米国特許第４，７６６，１０６号を参照のこと）。
【００６７】
毒性が低いと予想されるＩＬ−２ムテインのさらなる例は、２００４年３月５日に提出された米国仮特許出願番号６０／５５０，８６８（その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に開示されている。これらのムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の１２５位のシステインに置き換わったセリン、および成熟ヒトＩＬ−２配列の中に少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を有している、成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列が含まれる。その結果、このムテインは、以下の機能特性を有する：同等のアッセイ条件下で、類似量のｄｅｓ−アラニル−１、Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２またはＣ１２５ＳヒトＩＬ−２と比較すると、１）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を維持または促進し、そして２）ＮＫ細胞によるプロ炎症性サイトカインの生産のレベルの低下を誘導する。いくつかの実施形態においては、さらなる置換は以下からなる群より選択される：Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ、およびＱ１２６Ｖ；ここでは、アミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと比較している。他の実施形態においては、これらのムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の１２５位のシステインに置き換わったアラニン、および成熟ヒトＩＬ−２配列の中の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を有している、成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列が含まれる。その結果、ムテインは、これらの同じ機能特性を有する。いくつかの実施形態においては、さらなる置換は、以下からなる群より選択される：Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ、およびＱ１２６Ｖ；ここでは、アミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと比較している。別の実施形態においては、これらのムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の中に少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換を有している成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列が含まれる。その結果、このムテインは、これらの同じ機能特性を有する。いくつかの実施形態においては、さらなる置換は以下からなる群より選択される：Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ、およびＱ１２６Ｖ；ここでは、アミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと比較している。米国仮特許出願番号６０／５５０，８６８に開示されているさらなるムテインには、成熟ヒトＩＬ−２配列の１位の最初のアラニン残基が欠失していることを除く、上記のムテインが含まれる。
【００６８】
用語ＩＬ−２は、本明細書中で使用される場合には、投与頻度を少なくするか、またはＩＬ−２寛容性を改善するために、第２のタンパク質に融合されたか、またはポリプロリンもしくは水溶性ポリマーに対して共有結合されたＩＬ−２を含む、ＩＬ−２融合体または結合体を含むことも意図される。例えば、ＩＬ−２（または本明細書中で定義されるその変異体）は、当該分野で公知の方法を使用してヒトアルブミンまたはアルブミン断片に融合させることができる（ＷＯ０１／７９２５８を参照のこと）。
あるいは、ＩＬ−２は、ポリプロリンまたはポリエチレングリコールホモポリマー、およびポリオキシエチル化ポリオールに共有結合させることができる。この場合、当該分野で公知の方法を使用することにより、ホモポリマーは未置換であるか、またはアルキル基で一方の末端が置換されており、そしてポリオールは未置換である（例えば、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、同第４，８９４，２２６号、および同第５，８３０，４５２号を参照のこと）。
【００６９】
治療有効成分としてＩＬ−２を含む任意の薬学的組成物を本発明の方法において使用することができる。このような薬学的組成物は当該分野で公知であり、これには、米国特許第４，７４５，１８０号；同第４，７６６，１０６号；同第４，８１６，４４０号；同第４，８９４，２２６号；同第４，９３１，５４４号；および同第５，０７８，９９７号（引用により本明細書中に組み入れられる）に開示されているものが含まれるが、これらに限定はされない。したがって、ＩＬ−２または当該分野で公知であるその変異体を含む、液体の、凍結乾燥させられた、または噴霧乾燥させられた組成物は、続いて本発明の方法にしたがって被験体に投与される水性または非水性の溶液または懸濁液として調製することができる。これらの組成物のそれぞれには、治療有効成分または予防有効成分としてＩＬ−２またはその変異体が含まれる。「治療有効成分または予防有効成分」により、ＩＬ−２またはその変異体が、薬学的組成物が被験体に投与された場合に、その被験体の疾患または症状の処置または予防に関して、所望される治療応答または予防応答をもたらす組成物に具体的に配合されることが意図される。好ましくは、薬学的組成物には、調製または保存の間のタンパク質の安定性および生物学的活性の消失に関係する問題を最少にするために、適切な安定化剤、充填剤、またはそれらの両方が含まれる。
【００７０】
本発明の好ましい実施形態においては、本発明の方法において有用であるＩＬ−２を含む薬学的組成物は、安定化された単量体ＩＬ−２またはその変異体を含む組成物、多量体ＩＬ−２またはその変異体を含む組成物、および安定化された、凍結乾燥された、もしくは噴霧乾燥されたＩＬ−２またはその変異体を含む組成物である。
【００７１】
安定化された単量体ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、２０００年１０月３日に提出されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／２７１５６に開示されている（その開示は引用により本明細書中に組み入れられる）。「単量体」ＩＬ−２により、タンパク質分子が、本明細書中に記載される薬学的組成物中で、それらの単量体形態で実質的に存在し、凝集した形体ではないことが意図される。したがって、ＩＬ−２の共有結合によるオリゴマーもしくは疎水性オリゴマーまたは凝集物は存在しない。簡単に説明すると、これらの液体組成物中のＩＬ−２またはその変異体は、保存の間のＩＬ−２またはその変異体の凝集物の形成を減少させるために十分な量のアミノ酸塩基と共に処方される。アミノ酸塩基は、アミノ酸またはアミノ酸の組み合わせであり、ここでは、任意の所定のアミノ酸は、遊離の塩基の形態、またはその塩の形態のいずれかで存在する。好ましいアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される。これらの組成物には、さらに、ＩＬ−２またはその変異体の安定性について許容される範囲の間に、液体組成物のｐＨを維持するために緩衝化剤がさらに含まれる。この場合、緩衝化剤は、その塩の形態を実質的に含まない酸、その塩の形態の酸、または酸とその塩の形態との混合物である。好ましくは、酸は、コハク酸、クエン酸、リン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される。このような組成物は、本明細書中では、安定化された単量体ＩＬ−２薬学的組成物と呼ばれる。
【００７２】
これらの組成物中のアミノ酸塩基は、ＩＬ−２またはその変異体を、液体の薬学的組成物の保存の間の凝集物の形成に対して安定化させるように作用する。一方、その塩の形態を実質的に含まない酸、その塩の形態の酸、または酸とその塩の形態との混合物の、緩衝化剤としての使用によっては、ほぼ等張である浸透圧を有している液体組成物が生じる。液体の薬学的組成物には、さらに、他の安定化剤、より具体的には、メチオニン、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）、およびＥＤＴＡが、ポリペプチドの安定性をさらに高めるために配合される場合がある。このような液体の薬学的組成物は、その塩の形態を実質的に含まない酸、その塩の形態の酸、または酸とその塩の形態との混合物と組み合わせられたアミノ酸塩基の添加によって、これらの２つの成分が組み合わせられていない条件で処方された液体の薬学的組成物と比較して高い保存安定性を有している組成物を生じるので、安定化されているといわれる。
【００７３】
安定化された単量体ＩＬ−２またはその変異体を含むこれらの液体の薬学的組成物は、水性の液体の形態で使用することができ、また、凍結させられた状態、もしくは、本発明の方法にしたがった被験体への投与に適している液体形態もしくは他の形態への後の再構成のための乾燥形態で保存することもできる。「乾燥形態」により、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ）（すなわち、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）；例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｐｏｌｌｉｓ（１９８４）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３８：４８−５９を参照のこと）、噴霧乾燥（例えば、Ｍａｓｔｅｒｓ（１９９１）Ｓｕｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第５版；Ｌｏｎｇｍａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｚ，Ｕ．Ｋ．），４９１−６７６頁；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら（１９９２）Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．１８：１１６９−１２０６；およびＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒら（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２−２０を参照のこと）、または風乾（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ａｎｄ Ｃｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ２５：４５９−４７０；およびＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７−５３）のいずれかによって乾燥される液体の薬学的組成物または処方物が意図される。
【００７４】
その凝集していない単量体状態のＩＬ−２を含むＩＬ−２処方物の他の例としては、Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｆａｕｌｄｓ（１９９３）Ｄｒｕｇｓ ４６（３）：４４６−５１４に記載されている処方物が挙げられる。これらの処方物には、組み換え体ＩＬ−２産物が含まれる。ここでは、組み換え体ＩＬ−２ムテインＴｅｃｅｌｅｕｋｉｎ（アミノ末端にメチオニン残基が付加されているグリコシル化されていないヒトＩＬ−２）が、等張性の生理食塩水の中で再構成される凍結乾燥させられた粉末の中に、０．２５％のヒト血清アルブミンとともに処方される。そして組み換え体ＩＬ−２ムテインＢｉｏｌｅｕｋｉｎ（アミノ酸末端にメチオニン残基が付加されており、そしてヒトＩＬ−２配列の１２５位のシステイン残基がアラニンで置換されている、ヒトＩＬ−２）は、０．１から１．０ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２ムテインが酸と混合されるように処方される。この場合、処方物は、３．０から４．０のｐＨを有しており、緩衝液を含まないことが効果的であり、そして、１０００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満の伝導率（５００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満が効果的である）を有する。ＥＰ３７３，６７９号；Ｘｈａｎｇら（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１３（４）：６４３−６４４；およびＰｒｅｓｔｒｅｌｓｋｉら（１９９５）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１２（９）：１２５０−１２５８を参照のこと。
【００７５】
多量体ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物の例は、共有にかかる米国特許第４，６０４，３７７号（その開示は、引用により本明細書中に組み入れられる）に開示されている。「多量体」により、薬学的組成物の中で、平均して１０〜５０個の分子の会合を有しているミクロの凝集した形態で存在しているタンパク質分子が意図される。これらの多量体は、ゆるく結合した、物理的に会合したＩＬ−２分子として存在している。これらの組成物の凍結乾燥させられた形態は、商品名プロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）として市販されている。この参考文献の中で開示されている凍結乾燥させられた処方物には、選択的に酸化された、微生物によって生産された組み換え体ＩＬ−２が開示されている。ここでは、組み換え体ＩＬ−２は、バルクを提供するマンニトール等の水溶性の担体、および水中での組み換え体ＩＬ−２の溶解を確実にするための十分な量のドデシル硫酸ナトリウムとともに投与される。これらの組成物は、非経口投与のための注射水溶液への再構成に適しており、安定であり、そしてヒト患者においては十分に寛容である。再構成された場合でも、ＩＬ−２またはその変異体は、その多量体の状態を維持している。多量体ＩＬ−２またはその変異体を含むこのような凍結乾燥させられたまたは液体組成物は、本発明の方法に含まれる。このような組成物は、本明細書中では、多量体ＩＬ−２薬学的組成物と呼ばれる。
【００７６】
本発明の方法はまた、ＩＬ−２またはその変異体を含む、安定化され凍結乾燥されたかまたは噴霧乾燥された薬学的組成物も使用することができる。この薬学的組成物は、本発明の方法にしたがった投与のための液体またはそれに適している他の形態に再構成することができる。このような薬学的組成物は、２０００年１１月２８日に提出された、同時係属中の出願である米国特許出願番号０９／７２４，８１０、および２０００年１２月２７日に提出された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／３５４５２に開示されている（それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。これらの組成物には、さらに、少なくとも１つの充填剤、乾燥プロセスの間のタンパク質の安定化に十分な量の少なくとも１つの薬剤、またはそれらの両方が含まれる場合がある。「安定化された」により、ＩＬ−２タンパク質またはその変異体が、その単量体形態または多量体形態を維持し、さらには、組成物の固体形態または乾燥粉末形態を得るための凍結乾燥または噴霧乾燥後のその他の鍵となる、質、純度、および効力の特性を維持することが意図される。これらの組成物中では、充填剤としての使用に好ましい担体材料としては、グリシン、マンニトール、アラニン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ、最も好ましくは、グリシンが含まれる。充填剤は、使用される薬剤に応じて、０％から約１０％（ｗ／ｖ）の範囲で、処方物の中に存在する。安定化剤としての使用に好ましい担体材料としては、任意の糖または糖アルコール、または任意のアミノ酸が挙げられる。好ましい糖としては、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコース、ラクトース、デキストロース、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられ、好ましくは、スクロースである。安定化剤が糖である場合は、これは、約０％から約９．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは、約０．５％から約５．０％（ｗ／ｖ）、より好ましくは、約１．０％から約３．０％（ｗ／ｖ）の範囲、最も好ましくは、約１．０％（ｗ／ｖ）で存在する。安定化剤がアミノ酸である場合は、これは、約０％から約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは、約０．３％から約０．７％（ｗ／ｖ）の範囲で、最も好ましくは、約０．５％で存在する。これらの安定化され凍結乾燥されたかまたは噴霧乾燥された組成物には、状況に応じて、メチオニン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、またはその塩の１つ（例えば、ＥＤＴＡニナトリウム）、または他のキレート化剤が含まれる。これらは、メチオニンの酸化に対してＩＬ−２またはその変異体を保護する。この様式でのこれらの薬剤の使用は、同時係属中の米国特許仮特許出願番号６０／１５７６９６（引用により本明細書中に組み入れられる）に記載されている。安定化され、凍結乾燥されたかまたは噴霧乾燥された組成物は、緩衝化剤を使用して処方することができる。緩衝化剤は、例えば、処方プロセスの間、または乾燥形態の組成物の再構成後の液相の中で、許容される範囲（好ましくは、約ｐＨ４．０から約ｐＨ８．５の間）に薬学的組成物のｐＨを維持する。緩衝化剤は、それらが乾燥処理と適合し、そして、処理の間および保存の間に、タンパク質の質、純度、効力、および安定性に影響を与えないように選択される。
【００７７】
上記の安定化された単量体、多量体、および安定化され凍結乾燥されたかもしくは噴霧乾燥されたＩＬ−２薬学的組成物は、本発明の方法での使用に適している組成物を呈する。しかし、治療有効成分としてＩＬ−２またはその変異体を含む任意の薬学的組成物が、本発明の方法に含まれる。
【００７８】
投与
低用量のＩＬ−２またはその変異体での少なくとも１回の治療に有効な処置サイクルが投与される。「治療に有効な処置サイクル」により、投与されると、腎細胞ガン、具体的には、転移性腎細胞ガンについての個体の処置に関して、ポジティブな治療応答をもたらす処置の１サイクルが意図される。特に目的とするものは、本明細書中で定義されるような抗腫瘍効果を提供する、低用量のＩＬ−２での処置のサイクルである。「ポジティブな治療応答」により、本発明にしたがう処置を受けている個体が、それについて個体が治療を受けている腎細胞ガンの１つ以上の症状の改善を示すことが意図される。
【００７９】
したがって、例えば、「ポジティブな治療応答」は、治療に伴う疾患の改善、および／または治療に伴う疾患の１つ以上の症状の改善である。したがって、例えば、ポジティブな治療応答は、疾患における以下の改善の１つ以上を意味する：（１）腫瘍の大きさの縮小；（２）ガン細胞の数の減少；（３）腫瘍の増殖の阻害（すなわち、いくらかの程度の遅延、好ましくは、停止）；（４）末梢臓器へのガン細胞の浸潤の阻害（すなわち、いくらかの程度の遅延、好ましくは、停止）；（５）腫瘍の転移の阻害（すなわち、いくらかの程度の遅延、好ましくは、停止）；および（６）ガンに伴う１つ以上の症状からのいくらかの程度の緩和。このような治療応答は、改善の程度としてさらに特性決定することができる。したがって、例えば、改善は、完全寛解として特性決定される場合がある。「完全寛解」により、実験に入る時点でポジティブであった全ての初期の異常または部位について報告された、物理的試験、研究室での実験、核およびＸ線写真（すなわち、ＣＴ（コンピュータ断層撮影法）および／またはＭＲＩ（磁気共鳴画像化法））、ならびに、他の非侵襲性の手順によって確認された、全ての測定可能であるかまたは評価することができる疾患のあらゆる兆候および症候の消滅の記録が意図される。あるいは、疾患の改善は、部分寛解として分類される場合もある。「部分寛解」により、処置前の測定値と比較した場合に、全ての測定可能な病変の垂直直径の積の和の５０％を上回る減少、および評価することができる疾患が進行していないこと、さらには、少なくとも２８日間にわたって任意の新しい病変の形成がないことが意図される。
【００８０】
本発明の特定の実施形態においては、ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、徐放処方物であるか、または徐放デバイスを使用して投与される処方物である。このようなデバイスは当該分野で周知であり、これには、例えば、経皮パッチ、および小型の埋め込み型のポンプが含まれる。これによっては、徐放型ではない薬学的組成物を用いた場合の徐放効果が得られるように、様々な用量の持続性の定常様式での長時間にわたる薬剤の送達を提供することができる。
【００８１】
ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、当該分野で公知の任意の医学的に許容される方法にしたがって投与することができる。適切な投与経路としては、非経口投与（例えば、皮下（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、筋肉内（ＩＭ）、静脈内（ＩＶ）、または注入）、経口および肺、鼻腔、局所、経皮、および坐剤が挙げられる。組成物が肺投与によって投与される場合は、治療有効用量は、血流中の薬剤（例えば、ＩＬ−２またはその変異体）の可溶性レベルが、非経口的（例えば、ＳＣ、ＩＰ、ＩＭ、またはＩＶ）に投与される治療有効用量を用いた場合に得られるレベルと同等となるように調節される。本発明のいくつかの実施形態においては、ＩＬ−２またはその変異体を含む薬学的組成物は、ＩＭまたはＳＣ注射（具体的には、ガン治療プロトコールにおいて使用される治療薬（単数または複数）が投与される領域に対する局所的なＩＭまたはＳＣ）によって投与される。
【００８２】
投与されるＩＬ−２の量に影響を与える要因としては、投与様式、投与頻度、治療を受けている特定の疾患、疾患の重篤度、病歴、個体が現在別の治療薬での治療を受けているかどうか、および治療を受けている個体の年齢、身長、体重、健康状態、および体調が挙げられるが、これらに限定はされない。一般的には、この薬剤のより多い投与量が、治療を受けている被験体の体重が重いほど好ましい。
【００８３】
効果を得るためには、ＩＬ−２の血中濃度は、特定の時間の間に特定のレベルを上回らなければならない。効果は用量依存性であり、ＩＬ−２のレベルが高いほど抗腫瘍効果は高くなる。毒性を最少にするためには、ＩＬ−２の血中濃度は、特定の時間内に、そして特定の時間の間、一定のレベルを下回らなければならない（ＩＬ−２のクリアランスができるように「休息期間」が存在しなければならない）。すなわち、薬剤は、次の用量が投与される前の一定時間、一定のレベルを下回らなければならない。用量の間の休息が短いほど、毒性は高くなる。
【００８４】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者の処置方法には、低用量のＩＬ−２（１〜５２ＭＩＵ）、それに続く、ＩＬ−２の望ましくない効果から患者を「回復」させるための休息期間を含む処置サイクルが含まれる。多用量のＩＬ−２またはその変異体は、１日１回の投与レジュメにしたがって投与することができる。例えば、１日に１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２、またはより好ましくは、９〜１８ＭＩＵのＩＬ−２が、１日に１回から３回、１週間のうちに３回から６回、１〜２４週間にわたって投与され、その後に休息期間が続く。好ましくは、休息期間は、投与レジュメの間の１〜４週間である。その後、新しいスケジュールのＩＬ−２用量が投与されて、別のブーストとともに免疫系に提供される。特定の実施形態においては、第２の処置サイクルには、１日に９ＭＩＵが１回から３回の投与で、１週間のうちに３日から６日まで、１〜２４週間投与される工程と、その後の休息期間が含まれる。
【００８５】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者の処置方法には、低用量のＩＬ−２（９〜１８ＭＩＵ）、１日に１回、１週間のうちの５日（ｑｄ×５ｄ）での６週間の処置、その後の、ＩＬ−２が投与されない１から４週間の「休息期間」からなる処置サイクルと、９ＭＩＵのＩＬ−２用量で、１日に１回、１週間のうちの５日の６週間の処置、それに続くＩＬ−２が投与されない１から４週間の休息期間からなるその後の処置サイクルが含まれる。特定の実施形態においては、９ＭＩＵの用量のＩＬ−２での、１日に１回、１週間のうちの５日の６週間の処置、その後の、ＩＬ−２が投与されない１週間から４週間の休息期間からなる上記のその後の処置サイクルが、複数回繰り返される。
【００８６】
好ましい実施形態においては、腎細胞ガンの患者は、最初に、１日に１８ＩＭＵのＩＬ−２の用量が、各週の間に５日間投与され；第２に、１週間の間に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量が２日間、続いて、１日に１８ＭＩＵのＩＬ−２の用量が３日間、これが５週間繰り返して投与され；第３に、３週間、ＩＬ−２は投与されず；第４に、１日に９ＭＩＵのＩＬ−２の用量が、１週間のうちの５日間、これが６週間繰り返して投与され；そして第５に、３週間、ＩＬ−２が投与されないことによって、処置される。
【００８７】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者の処置に使用されるＩＬ−２は、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに共有結合される。特定の実施態様においては、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオールに結合されたＩＬ−２での処置サイクルには、１〜５２ＭＩＵのＩＬ−２を、５日から１ヶ月ごとに、１〜２４週間繰り返して投与する工程、続いて、休息期間が含まれる。
【００８８】
特定の実施形態においては、本明細書中に記載される方法の任意のものによる処置の複数回のサイクルが、少なくとも部分的な腫瘍応答を得るために十分な時間、患者に投与される。例えば、期間は、少なくとも６ヶ月または少なくとも１２ヶ月であり得る。好ましくは、期間は、腫瘍の完全寛解を得るために十分である。
【００８９】
特定の実施形態においては、腎細胞ガンの患者は、腎臓が十分に機能していない（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）、高用量のＩＬ−２での処置を寛容できない、または高用量のＩＬ−２での処置が不適切である。このような患者は、本明細書中に記載される方法の任意のものによって、低用量のＩＬ−２で処置することができる。
【００９０】
先に記載された投与レジュメにしたがう処置を受けている被験体が部分寛解、またはより長い期間の寛解の後に再発を示す場合には、次の治療が、疾患の完全寛解を得るために必要である場合がある。したがって、最初の処置期間の後の休息期間に続いて、被験体には、１回以上のさらなるＩＬ−２治療での処置期間が設けられる場合がある。このような、処置期間の間の休息期間は、本明細書中では、中断期間と呼ばれる。中断期間の長さは、ＩＬ−２での治療の処置期間の前に得られていた腫瘍応答の程度（すなわち、完全対部分）に依存する。
【実施例】
【００９１】
ＩＩＩ．実験
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の実施例である。実施例は、説明の目的だけのために提供され、いかなる方法でも本発明の範囲を限定するようには意図されない。
【００９２】
使用される数値（例えば、量、温度など）に関する正確さを確保するための努力を行ってきたが、ある程度の実験誤差および偏差は、当然、考慮されるべきである。
【００９３】
（実施例１）
第ＩＶ相ヒト臨床試験のためのＩＬ−２の薬学的組成物
使用したＩＬ−２処方物は、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ州ＥｍｅｒｙｖｉｌｌｅにあるＣｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって、商品名プロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）として製造されたものであった。この処方物中のＩＬ−２は組み換え生成された、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２ムテインであり、アルデスロイキンと呼ばれている。これは、最初のアラニン残基が排除されており、そして１２５位のシステイン残基がセリン残基で置き換えられている点で、天然ヒトＩＬ−２アミノ酸配列とは異なる（ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２と呼ばれている）。このＩＬ−２ムテインは、米国特許第４，９３１，５４３号（その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に記載されているように、大腸菌の中で発現し、続いて、透析および陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。プロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）として販売されているＩＬ−２処方物は、滅菌の、白色から灰色がかった白色の保存料を含まない凍結乾燥粉末として、１．３ｍｇのタンパク質を含むバイアルの中に供給する。
【００９４】
（実施例２）
第ＩＶ相ヒト臨床試験におけるＩＬ−２での処置のための転移性腎細胞ガンの患者の選択基準
以下の選択基準を、転移性腎細胞ガンの患者に適用した：
試験対象患者基準：
患者については、転移性疾患の証拠とともに腎細胞ガン（透明細胞、乳頭、混合腫瘍または肉腫様腫瘍）が組織学的に報告されている；
患者は、試験の開始から４週間以内に決定された、測定可能であるかまたは評価可能である新生物性疾患を有している；
患者のカルノフスキーの一般状態指数（Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ Ｐｅｒｆｏａｍａｎｃｅ Ｓｔａｔｕｓ）が≧６０であり、これは、０〜２の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）の一般状態指数（ＰＳ）に対応している；
患者は１８歳を超える年齢でなければならない；
患者は、１．８ｍｇ／ｄｌ未満の血清クレアチニンレベルによって明らかにされるような、不適切な腎機能を有していなければならない；
ヘモグロビン≧１０ｇｍ／ｄｌ；白血球≧４，０００個／ｍｌ；血小板≧１００，０００個／ｍｌ；
正常な甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）レベル；および
患者には意欲があり、そして全ての必要な試験手順と追訪を含む、この試験に参加することに関する書面による同意書を提供できる。
【００９５】
臨床試験除外基準：
これまでにプロリューキンでの処置を受けていた患者；
コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）スキャン上で検出された中枢神経系に活動性疾患を有している患者；
プロリューキン（登録商標）の成分のいずれかに対する過敏性がわかっている患者；
治験薬に関する同時臨床試験中の患者、または先の４週間以内に治験薬が投与された患者；
腎細胞ガンについて先に全身的治療を受けた患者（腎細胞ガンの外科手術を受けた患者は含めることがふさわしい；指標を示さない病変に対する放射線治療を受けた患者は、放射線治療の完了の２週間後であれば、試験にふさわしい）；
ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）のクラスＩＩＩまたはＩＶの心疾患を有している患者；
自己免疫疾患（例えば、クローン病）が明らかになっている患者；
妊娠中または授乳中の女性患者；ならびに、
転移部位の外科手術による切除後に疾患の証拠を示していない転移性疾患の患者。
【００９６】
（実施例３）
ヒトに投与した低用量のＩＬ−２の第ＩＶ相臨床試験
臨床試験の計画および目的
別の用量のインターロイキン−２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ｉｎ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ（ＩＬＩＡＤ））の第ＩＶ相臨床試験を、転移性腎細胞ガンの患者に皮下投与した低容量のプロリューキン（登録商標）の効力と安全性を評価するために、プロスペクティブ研究、多施設共同研究、単群研究、オープンラベル研究として設計した。主要な目的は、≧１６％の奏効率（ＯＲＲ）とした。第２の目的には、完全寛解（ＣＲ）率および部分寛解（ＰＲ）率、応答期間、無増悪生存率（ＰＦ）、全体の生存率（ＯＳ）、および有害事象（ＡＥ）の発生を含めた。参加者には社会環境と理論的な環境の両方からの臨床研究者を含め、社会環境の医師が数の上では優勢であった。ＩＬＩＡＤ試験は２７０人の患者をスクリーニングし、うち、２６７人を登録した。
【００９７】
処置前の評価には、全病歴、身体検査、全血球計算値（ＣＢＣ）、血清化学パネル（ｓｅｒｕｍ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｐａｎｅｌ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）レベル、および、転移性疾患の部位を明らかにするための適切なＸ線撮影試験を含めた。処置の間の評価には、ＣＢＣ、血清化学パネル、ＴＳＨ、および各新しい処置サイクルの開始前の身体検査、各処置サイクルの前から４週間まではＣＢＣ、および患者との接触のたびのＡＥの評価を含めた。２サイクル後の各処置サイクルの開始前には、先に決定した転移性疾患の部位のＸ線撮影による評価が必要であった。症例報告書に、転移性疾患の評価できる領域と、そのような決定を行うために使用した方法をまとめた。
【００９８】
ＩＬＩＡＤ処置レジュメ
全ての患者に、以下の処置スケジュールでプロリューキン（登録商標）を投与した：
【００９９】
【表１】
プロリューキン（登録商標）を、１８００万国際単位（ＭＩＵ）／日を５日間（１週目、１サイクル目）、９ＭＩＵ／日を２日間、続いて、１８ＭＩＵ／日を３日間（２〜６週目、１サイクル目）、そして９ＭＩＵを５日間（１〜６週目、≧２サイクル目）投与した。処置サイクル全体は、６週間のオン期間と、３週間のオフ処置との９週間であった。処置期間は、少なくとも２サイクル続けるように意図した。進行性疾患の患者は試験から除外し、一方、レスポンダーは、治験責任医師の判断で処置を続けさせることができた。腫瘍応答を、疾患の増悪まで最長で２年間、９週間ごとに評価した。患者を、１年および２年の時点で生存について評価した。ＩＬＩＡＤ ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）集団（ｎ＝２６３人の患者）には、少なくとも１用量の治験薬を投与した。
【０１００】
毒性についての用量の変更を、プロトコールに明記されている指針にしたがって行った。悪性度３またはそれ以上の毒性を示している患者には、症状が消滅するまで処置をふせておき、そして半分に減らした次の用量を投与した。寛容化された場合には、特定のプロトコールの用量にまで、段階的に用量を増やして戻すことを実行した。用量の増加速度と最終的な用量は、治験責任医師の判断に委ねた。プロトコールに従うと、任意の目的とする用量は、患者に、通院患者としてプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）を投与できるようにするには十分に低くなければならないが、全身からの吸収を確実にするためには十分に高くなければならない（一般的には、皮下投与による５〜１０ＭＩＵ／日の範囲である）。２週間を超えて毒性が持続していた患者は試験から除外した。
【０１０１】
全部で２７０人の患者についてデータを回収した。２７０人の患者のうちの３人は、スクリーニングに失敗し、そして４人は登録したが一度も投与できなかった。残りの２６３人の患者には、少なくとも１用量の治験薬を投与し、分析に値していた（Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ集団）。２６３人の患者の投与記録にしたがって、１４２人の患者には、２サイクル目の治験薬を投与した（Ｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）。Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者の６５パーセント、およびｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ患者の７０．４％は、疾患の進行または再発の理由から、薬の投与を中止した。
【０１０２】
効力
２サイクルの処置の後、患者を、治験責任医師によって進行または応答について評価した（以下の表を参照のこと）。応答のカテゴリーは、「完全寛解」（ＣＲ）、「部分寛解」（ＰＲ）、「進行性疾患」（ＰＤ）、「安定な疾患」（ＳＤ）、および「不確定」（ＵＤ）であった。
【０１０３】
２６３人のＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者のうちの６人（２．３％）は、治験責任医師により完全なレスポンダーと評価され、１２人（４．６％）は部分的なレスポンダーと評価された。４８人のＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者（１８．３％）は安定な疾患を有しており、１５６人（５９．３％）は進行性疾患の状態を有していた。３８人のＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者（１４．４％）は不確定と考えられ、そして３人（１．１％）については、評価は行われていなかった。全体的な応答率（完全寛解＋部分寛解）は、６．８％であり、これには、４．１〜１０．６％の９５％信頼区間（ＣＩ）が伴っていた。
【０１０４】
１４２人のｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ（すなわち、治験薬を２サイクル投与した）患者のうちの６人（４．２％）は、治験責任医師によって完全なレスポンダーと評価され、１１人（７．７％）は部分的なレスポンダーと評価された。全体的な応答率（完全寛解＋部分寛解）は、１２．０％であり、これには、７．１〜１８．５％の９５％信頼区間（ＣＩ）が伴っていた。
【０１０５】
【表２】
２６３人のｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ患者のうち、１６９人（６４．３％）が、２年間のフォローアップ期間の間に死亡した。１４２人のｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ患者については、７３人（５１．４％）が死亡した。以下の表には、生存性についての分析結果をまとめる。
【０１０６】
【表３】
腎機能に関するサブグループ
ＩＬＩＡＤ試験によるデータのサブグループ分析を、正常な腎機能を有している患者（血清クレアチニン（ＳＣｒ）≦１．５ｍｇ／ｄＬ）を腎機能が低下している患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）に対して比較することによって行った。正常であるサブグループと腎機能が低下しているサブグループとの比較は、それぞれ、類似する腎摘出術（７３％対７０％）、ＰＳ＝０（２８％対２３％）、ＰＳ＝１（５９％対６０％）、およびＰＳ＝２〜３（１３％対１７％）の頻度を示した。以下の表を参照のこと。
【０１０７】
【表４】
正常な腎機能を有している患者および腎機能が低下している患者についての効力の比較
正常な腎機能を有している患者および腎機能が低下している患者は、同様の結果であったことが明らかになった。図１〜３では、上記の投与レジュメの後の、正常な腎機能を有している転移性腎細胞ガンの患者（血清クレアチニン（ＳＣｒ）≦１．５ｍｇ／ｄＬ）および腎機能が低下している転移性腎細胞ガンの患者（ＳＣｒ＞１．５ｍｇ／ｄＬ）における、低用量のＩＬ−２の相対的な効力を比較しているグラフを示す。正常な腎機能を有している患者に対して比較すると、腎機能が低下している患者は、ＰＲ（５．７％対４．３％）、ＯＲＲ（７．６％対６．７％）、平均ＰＦＳ（０．３４年対０．３３年）、ＰＦＳ−１年（２８％対１８％）、ＰＦＳ−２年（１６％対１０％）、およびＯＳ−２年（３９％対３１％）、ＣＲ（１．９％対２．４％）の、類似しているかまたはより高い率を有していた。平均生存期間（１．０年対１．１年）、およびＯＳ−１年（５２％対５５％）は、腎機能が低下しているサブグループにおいてはわずかに低かった。腎機能に関するサブグループについての処置の効力の比較については、以下の表を参照のこと。
【０１０８】
【表５】
腎機能に関するサブグループを腎摘出術の前の状態と一般状態について管理した場合には、ＰＦＳおよびＯＳは同等のままであった。一変量ロジスティック回帰モデルを、標準的なＳＡＳプログラムを使用して作成して、ＯＲＲについてのオッズ比とＷａｌｄ ９５％信頼区間を推定した。腎機能が低下している患者については、ＯＲＲは、サブグループを腎摘出術（オッズ比＝０．５２）、ＰＳ＝０（オッズ比＝０．５７）、およびＰＳ＝１（オッズ比＝０．６３）に管理した場合には、正常な腎機能を有している患者よりも数値的に低かった。しかし、これらの差は統計学的には有意ではなく、正常な腎機能を有しているサブグループ（ｎ＝１４）と腎機能が低下しているサブグループ（ｎ＝４）との中にレスポンダーが少なかったことが原因で、慎重に判断しなければならなかった。Ｃｏｘ比例ハザード回帰モデルを使用して、ＰＦＳおよびＯＳについてのハザード比と９５％信頼区間を得た。サブグループを腎摘出術（ハザード比＝０．８６）、非腎摘出術（ハザード比＝１．０９）、ＰＳ＝０（ハザード比＝１．１５）、およびＰＳ＝１（ハザード比＝０．７１）に管理した場合には、腎機能が低下している患者についてのＰＦＳは、正常な腎機能を有している患者のＰＦＳと類似していた。腎機能が低下している患者についての生存率もまた、サブグループを腎摘出術（ハザード比＝０．９２）、非腎摘出術（ハザード比＝１．０３）、ＰＳ＝０（ハザード比＝１．１１）、およびＰＳ＝１（ハザード比＝０．８２）に管理した場合には、正常な腎機能を有している患者の生存率と類似していた。以下の表を参照のこと。
【０１０９】
【表６】
ヒストリカル・コントロールとの比較
文献検索により、以前に免疫治療で処置されたことのない腎細胞ガンの患者の研究におけるプラセボコントロールまたはシュードプラセボ（ｐｓｕｅｄｏ−ｐｌａｃｅｂｏ）コントロールを使用した８つの刊行物を特定した（Ｐｙｒｈｏｎｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２８５９−２８６７；Ｍｏｔｚｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２５３０−４０；Ｒｉｔｃｈｉｅら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３：１４−１７；Ｋｒｉｅｇｍａｉｒら（１９９５）Ｕｒｏｌｏｇｙ ４５：７５８−７６２；およびＪｏｎｅｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．８：２７５−２８８；Ｇｌｅａｖｅら（１９９８）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３８：１２６５−１２７１；Ｓｔｅｉｎｅｃｋら（１９９９）Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌ．２９：１５５−１６２；Ｏｓｂａｎｄら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３３５：９９４−９９８）。これらの公開されている試験の中でのコントロールグループについての結果は非常に様々であり、これはほぼおそらく、コントロールとした処置（なし、ホルモン療法、または化学療法）、試験計画、患者の選択基準、およびそれまでの患者の処置に原因がある。以下の表を参照のこと。
【０１１０】
【表７】
正常な腎機能を有しているサブグループ、腎機能が低下しているサブグループ、およびＩＬＩＡＤ ＩＴＴ集団についての結果は、ヒストリカル・コントロールグループにおいて測定されたほとんどの結果よりも好ましかった。ＩＬＩＡＤ腎臓サブグループおよびＩＴＴ集団についてのＰＳ＝０、ＰＳ＝１、および腎摘出術前の患者の割合は、ヒストリカル・コントロールグループの範囲の平均に近く、このことは、ＩＬＩＡＤ患者集団がヒストリカル・コントロールの集団と同等であることを示唆している（図３を参照のこと）。対照的に、ＩＬＩＡＤ ＩＴＴ集団および腎臓サブグループは、効力に関する結果の大部分（４３／５０、８６％）について、ヒストリカル・コントロールよりも数的に好ましかった（図４を参照のこと）。腎臓サブグループおよびＩＴＴ集団についての結果は、ヒストリカル・コントロールによる効力の結果の７／５０（１４％）と比較して同じまたは数的に低かった：Ｓｔｅｉｎｅｃｋ（１９９０）の実験のＣＲ；Ｏｓｂａｎｄ（１９９０）の実験のＰＲ；Ｒｉｔｃｈｉｅ（１９９９）の実験のＰＲおよびＯＲＲ；ならびに、Ｇｌｅａｖｅ（１９９８）の実験のＣＲ、平均生存期間、およびＯＳ−１年。終了時点で比較した場合には、ＩＬＩＡＤ試験が、応答（１６／２１、７６％）、ＰＦＳ（８／８、１００％）、および生存率（１９／２１、９０％）の結果の大部分について、ヒストリカル・コントロールよりも好ましかった。
【０１１１】
加えて、リスクグループによって階層化したＩＬＩＡＤ患者は、ヒストリカル・コントロールよりも高い生存率を有していた。低用量のＩＬ−２で処置した患者の生存率を、ＩＬ−２の代わりに化学療法で処置された患者のヒストリカル・コントロールグループ（Ｊｏｎｅｓら（前出）に記載されている）の生存率と比較した。患者を、リスクファクターの階層化に関するＪｏｎｅｓシステム（これは、特定されたリスクファクターの組み合わせに基づく：ＥＣＯＧ ＰＳ＞１、＜２年である診断から処置までの時間、および１つ以上の部位での転移）にしたがってリスクグループに分類した。患者を、以下のＪｏｎｅｓリスクグループに分けた：低リスク（Ｇｏｏｄ Ｒｉｓｋ）（０〜１のリスクファクター）、中程度のリスク（Ｍｏｄｅｒａｔｅ Ｒｉｓｋ）（２のリスクファクター）、および予後不良（３つのリスクファクターの全て）。図５は、個々のリスクグループについての、年数での時間に対する生存している被験体の割合（％）の別々のプロットを示す。実施例３に記載するレジュメにしたがって低用量のＩＬ−２で処置した患者は、ヒストリカル・コントロールと比較すると、３つのＪｏｎｅｓリスクグループの全てにおいて数的に高い生存率を有していた。しかし、ＩＬＩＡＤ患者とヒストリカル・コントロールとの間での生存性の差は、リスクグループが悪くなるに伴って小さくなるようである。以下の表を参照のこと。
【０１１２】
【表８】
毒性
有害事象を、治験責任医師によって、「無関係」、「関係している可能性あり」、または「おそらく関係している」と決定して、処置について研究した。最も頻繁に生じる悪影響は疲労（患者の４１．１％）、続いて、過酷（３６．９％）、吐気（３６．５％）、発熱（３２．７％）、嘔吐ＮＯＳ（２２．１％）、および無食欲（２０．９％）であった。以下の処置に関係している有害事象が、少なくとも１０％の患者において観察された（以下の表を参照のこと）。
【０１１３】
【表９】
低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）療法は、高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）よりも腎毒性が少ない。高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）療法は、ベースラインで高いＳＣｒを有している患者についての、１回目の処置サイクルの間のＳＣｒ＞４ｍｇ／ｄＬの平均ピークと２回目の治療サイクルの間の＞６ｍｇ／ｄＬの平均ピークとによって測定される、顕著な腎毒性を引き起こすことが示されている（Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎら、１９８７）。より小さいが、なおも劇的である、平均ピークＳＣｒの増加（３ｍｇ／ｄＬまで）が、ベースラインで正常なＳＣｒを有していた患者について観察された。ＳＣｒレベルは、正常な腎機能を有している患者の９８％と比較して、腎機能が低下していた患者の６０％について、３０日以内にベースラインに戻った。これらの結果は、高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）によって、正常な腎機能を有していた患者よりも腎機能が低下していた患者において高い腎毒性が生じたことを示唆している。対照的に、低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）によっては、処置の間にはＳＣｒのごくわずかな増加（通常は、＜２ｍｇ／ｄＬ）が生じた。これは、正常な腎機能のサブグループと腎機能が低下していたサブグループとの間で同等であった。ＳＣｒ＞３ｍｇ／ｄＬの上昇は、いずれのサブグループについてもまれであった。この範囲内（＜３ｍｇ／ｄＬ）のＳＣｒ偏差を有していた患者は、重い症状を有しているか、または特殊療法の必要があると見込まれることはない。
【０１１４】
悪性度と有害事象（ＡＥ）の頻度は、一般的には、正常な腎機能を有していた患者のサブグループと腎機能が低下していた患者のサブグループとの間では同等であった。正常なサブグループと比較すると、腎機能が低下していたサブグループは、全体としての深刻な有害事象（ＳＡＥ）（２６％対３０％）、ＡＥ（７７％対８９％）、および薬物に関係するＡＥ（７６％対８１％）に関してわずかに少ない数を有していた。中断につながるＡＥの数は、腎機能が低下していたサブグループにおいてわずかに高かった（３０％対２５％）。正常な腎機能を有していたサブグループおよび腎機能が低下していたサブグループのいずれにおいても、それぞれ、最も高いＡＥの割合（％）は、悪性度３であり（４２％対３４％）、その後に、悪性度２（３３％対２３％）、悪性度４（９％対１３％）、悪性度１（４％対８％）、そして悪性度５（１％対０％）であった。
【０１１５】
最も一般的な有害事象（いずれのサブグループにおいても＞１０％の患者において報告された）は、通常は、正常な腎機能を有していたサブグループと腎機能が低下していたサブグループとの間では同等であり、これには、それぞれ、疲労（４３％対４５％）、過酷（３８％対３６％）、発熱（３９％対２３％）、注射部位の反応（１８％対２１％）、吐気（３９％対３６％）、嘔吐（２５％対１９％）、下痢（２０％対１９％）、皮膚炎ＮＯＳ（１８％対１１％）、無食欲（２３％対１９％）、咳（２０％対９％）、呼吸困難ＮＯＳ（１３％対２６％）、不眠（９％対１７％）、関節痛（１２％対１３％）、筋痛症（１１％対９％）、下肢の浮腫（８％対１７％）、体重減少（１１％対４％）、および低血圧ＮＯＳ（６％対１１％）が含まれていた。
【０１１６】
ＬＤのプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）の腎毒性は、腎機能に関するサブグループの間で類似していた。ＬＤのプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）療法の腎毒性は、ベースラインの測定値に対して、各処置サイクルの間のＳＣｒレベルを比較することによって評価した。ピークのＳＣｒレベルは多数の患者については処置の間にわずかに上昇したが、ピークＳＣｒ＞２．０ｍｇ／ｄＬが、腎機能が低下していたサブグループのうちのわずか５人の患者、および正常な腎機能を有していたサブグループのうちの８人の患者において観察された。ピークＳＣｒ＞３．０ｍｇ／ｄＬは一般的ではなく、腎機能が低下していたサブグループのうちのわずかに１人の患者、および正常な腎機能を有していたサブグループのうちの２人の患者でしか観察されなかった。
【０１１７】
結論
低用量のインターロイキン−２は、高用量のＩＬ−２療法には不適格である、転移性腎細胞ガンを有している腎機能が低下している患者について安全であり、有効であるようである。第ＩＶ相臨床試験の結果は、低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）によって、正常な腎機能を有していた患者および腎機能が低下していた患者のいずれにおいても、同様の応答率、無増悪生存率（ＰＦＳ）、および全体の生存率（ＯＳ）が生じたことを示している。低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）で処置した正常な腎機能を有していた患者および腎機能が低下していた患者についての効力の結果は、一般的には、ヒストリカル・コントロールグループについて報告された効力よりも高かった。低用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）に伴う腎毒性は、腎機能のサブグループの間では同様であり、腎機能が低下していた患者において高用量のプロリューキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標）を用いた場合に観察された腎毒性よりも劇的に低かった。
【０１１８】
（実施例４）
低用量のＩＬ−２の投与による転移性腎細胞ガンの処置
ＩＬ−２処方物を、転移性腎細胞ガンの組織学的診断について、患者に投与した。処方物中のＩＬ−２の濃度は約２２ＭＩＵであった。ＩＬ−２処方物は皮下注射によって投与した。処置には、９週間のサイクルを２回含めた。最初のサイクルには、９〜１８ＭＩＵの低用量のＩＬ−２で、１日に１回、１週間のうちに５日（ｑｄ×５ｄ）の６週間の処置、続く３週間の休息期間を含めた。２回目のサイクルには、９ＭＩＵの低用量のＩＬ−２で、１日に１回、１週間のうちに５日（ｑｄ×５ｄ）の６週間の処置、続く３週間の休息期間を含めた。処置サイクルを、応答している患者については繰り返した。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態が説明され、記載されたが、様々な変更を、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行うことができることは明らかであろう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１２−４６５５２（Ｐ２０１２−４６５５２Ａ）
【公開日】平成２４年３月８日（２０１２．３．８）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−２６６８０９（Ｐ２０１１−２６６８０９）
【出願日】平成２３年１２月６日（２０１１．１２．６）
【分割の表示】特願２００７−５５３３０４（Ｐ２００７−５５３３０４）の分割
【原出願日】平成１８年１月２７日（２００６．１．２７）
【出願人】（５０７２５１９１８）ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス インコーポレイテッド (17)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月８日（２０１２．３．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２６６８０９（Ｐ２０１１−２６６８０９）
【出願日】平成２３年１２月６日（２０１１．１２．６）
【分割の表示】特願２００７−５５３３０４（Ｐ２００７−５５３３０４）の分割
【原出願日】平成１８年１月２７日（２００６．１．２７）
【出願人】（５０７２５１９１８）ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス インコーポレイテッド (17)
【Ｆターム（参考）】
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