【課題】腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ‐アルファ）に対する改良ナノボディ（商標）および１つ以上の前記のナノボディを含む、または主成分とするポリペプチドの提供。
【解決手段】前記のナノボディおよびポリペプチドをコードする核酸、前記のナノボディおよびポリペプチドの調製方法、前記のナノボディまたはポリペプチドを発現している、または発現可能な宿主細胞、前記のナノボディ、ポリペプチド、核酸、または宿主細胞を含む組成物、そして特に予防、治療、診断を目的とした前記のナノボディ、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、組成物。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
四つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１からＦＲ４）及び三つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１からＣＤＲ３）からなるヒト血清アルブミンに対するナノボディであって、
ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号３６）を含むか又はアミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号３６）であり、
ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４０）を含むか又はアミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号４０）であり、及び
ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号４８）を含むか又はアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号４８）である、ナノボディ。
【請求項２】
ナノボディが、Ｖ_ＨＨ、ヒト化Ｖ_ＨＨ又はラクダ化Ｖ_Ｈである、請求項１に記載のナノボディ。
【請求項３】
ナノボディが、ＡＬＢ３（配列番号８７）、ＡＬＢ４（配列番号８８）、ＡＬＢ５（配列番号８９）、ＡＬＢ６（配列番号１００）、ＡＬＢ７（配列番号１０１）、ＡＬＢ８（配列番号１０２）、ＡＬＢ９（配列番号１０３）及びＡＬＢ１０（配列番号１０４）からなる群から選択される、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ
【請求項４】
ナノボディがＡＬＢ８（配列番号１０２）である、請求項３に記載のナノボディ。
【請求項５】
四つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１からＦＲ４）及び三つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１からＣＤＲ３）からなるヒト血清アルブミンに対するナノボディであって、
（ｉ） ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号３６）を含むか若しくはアミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号３６）であり、又は
ＣＤＲ１が配列番号３６に示されるアミノ酸配列と２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するものであり、
（１）任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものであり、
及び
（ｉｉ） ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４０）を含むか若しくはアミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号４０）であり、又は
ＣＤＲ２が、配列番号４０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するものであり、
（１）任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものであり、及び／又は
ＣＤＲ２が配列番号４０に示されるアミノ酸配列と２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するものであり、
（１）任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものであり、
及び
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号４８）を含むか若しくはアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号４８）であり、又は
ＣＤＲ３が配列番号４８に示されるアミノ酸配列と３つ、２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するものであり、
（１）任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であり、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
ナノボディ。
【請求項６】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号３６）であり、ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４０）であり及びＣＤＲ３がアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号４８）である、請求項５に記載のナノボディ。
【請求項７】
（ｉ） ＦＲ１が配列番号３７０、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３及び３７４からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、
（ｉｉ） ＦＲ２が配列番号３８４、３８３及び３８５〜３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ） ＦＲ３が配列番号３９８、３９６、３９７、３９９、４００及び４０２からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、並びに
（ｉｖ） ＦＲ４が配列番号４１２、４１０、４１１及び４１３〜４１６からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか又は該アミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする、請求項５又は６に記載のヒト血清アルブミンに対するナノボディ。
【請求項８】
（ｉ） ＦＲ１は、アミノ酸配列：
［１］ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＸＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ［２６］ （配列番号１）
及び
［１］ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ［２６］ （配列番号５）
からなる群から選択される、又は
配列番号１若しくは５に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であり、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表４に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び／又は
前記アミノ酸配列のいずれか１つのうち、３つ、２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表４に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び
（ｉｉ）ＦＲ２は、アミノ酸配列：
［３６］ＷＸＲＱＡＰＧＫＸＸＥＸＶＡ［４９］ （配列番号２）
［３６］ＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡ［４９］ （配列番号６）
［３６］ＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡ［４９］（配列番号７）
［３６］ＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＡ［４９］（配列番号８）
［３６］ＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡ［４９］（配列番号９）
［３６］ＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＦＶＡ［４９］（配列番号１０）
［３６］ＷＹＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＡ［４９］（配列番号１１）
からなる群から選択される、又は
配列番号２、６〜１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択される、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表５に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び／又は
前記アミノ酸配列のいずれか１つのうち、３つ、２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表５に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び
（ｉｉｉ）ＦＲ３は、アミノ酸配列：
［６６］ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＸＸＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡ［９４］ （配列番号３）
及び
［６６］ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡ［９４］ （配列番号１２）
からなる群から選択される、又は
配列番号３若しくは１２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であり、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表６に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び／又は
前記アミノ酸配列のいずれか１つのうち、３つ、２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表６に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び
（ｉｖ）ＦＲ４は、アミノ酸配列：
［１０３］ＸＸＱＧＴＸＶＴＶＳＳ［１１３］ （配列番号４）
［１０３］ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ［１１３］ （配列番号１３）及び
［１０３］ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ［１１３］（配列番号１４）
からなる群から選択される、又は
配列番号４、１３若しくは１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であり、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表７に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
及び／又は
前記アミノ酸配列のいずれか１つのうち、３つ、２つ若しくは１つの「アミノ酸の相違」を有するアミノ酸配列からなる群から選択され、
（１）特徴残基のある位置を除く位置での任意のアミノ酸置換が、保存アミノ酸の置換であるか及び／又は表７に示されるアミノ酸置換である、及び／又は
（２）前記アミノ酸配列において、保存アミノ酸で置換されたアミノ酸配列は、置換前のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失又は挿入を含まないものである、
ここで、上記アミノ酸配列において、角括弧中に該アミノ酸配列の最初と最後に対応するKabat番号によるアミノ酸位置を示す番号を付し、特徴残基はアミノ酸残基に下線を引いて示す、
請求項５〜７のいずれか１項に記載のヒト血清アルブミンに対するナノボディ。
【請求項９】
ＧＬＥＷ群に属するナノボディである、請求項５〜８のいずれか１項に記載のナノボディ。
【請求項１０】
Kabat番号による１０３の位置にアルギニン残基（Ｒ）を含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載のナノボディ。
【請求項１１】
Kabat番号による１０８の位置にロイシン残基（Ｌ）を含む、請求項５〜１０のいずれか１項に記載のナノボディ。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のナノボディを含むか又は本質的に該ナノボディからなる、タンパク質又はポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含むか又は本質的に該ナノボディからなる、請求項１２に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１４】
タンパク質又はポリペプチドは２つ又は複数のナノボディを含み、任意でリンカーを介して連結されており、該タンパク質又はポリペプチドは請求項１〜１１のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含む、タンパク質又はポリペプチド。
【請求項１５】
タンパク質又はポリペプチドは請求項１〜１１のいずれかに記載の２つのナノボディを含む、請求項１４に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１６】
タンパク質又はポリペプチドは３つのナノボディを含み、任意でリンカーを介して連結されており、該タンパク質又はポリペプチドは請求項１〜１１のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含む、タンパク質又はポリペプチド。
【請求項１７】
タンパク質又はポリペプチドは請求項１〜１１のいずれかに記載の２つ又は３つのナノボディを含む、請求項１６に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の第一抗原に指向性を有する第一ナノボディ及び第一抗原とは異なる第二抗原に指向性を有する第二ナノボディを含み、任意で第一及び第二ナノボディはリンカーを介して連結されている、二価ポリペプチドであるタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の第一抗原に指向性を有する第一ナノボディ、第一抗原とは異なる第二抗原に指向性を有する第二ナノボディ並びに第一及び第二抗原とは異なる第三抗原に指向性を有する第三ナノボディを含み、任意で第一、第二及び第三ナノボディは１つ又は複数のリンカーを介して連結されていてもよい、三価ポリペプチドであるタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２０】
タンパク質又はポリペプチドは請求項１〜１１のいずれかに記載の１つのナノボディ及びさらに少なくとも１つの他のナノボディを含み、これらのナノボディは互いに直接連結されているか又はリンカーを介して連結されている、タンパク質又はポリペプチド。
【請求項２１】
リンカーがアミノ酸からなるリンカーである、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２２】
リンカーが少なくとも１４個のアミノ酸、少なくとも１７個のアミノ酸又は２０〜４０個のアミノ酸を含む、請求項２１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２３】
リンカーはグリシン及びセリン残基を含む、請求項２１又は２２に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２４】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ８（配列番号１０２）に存在するＣＤＲ配列を有するものである、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２５】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディがヒト化ナノボディである、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２６】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディがナノボディ ＡＬＢ １（配列番号６３）のヒト化変異体である、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２７】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディが、ＡＬＢ３（配列番号８７）、ＡＬＢ４（配列番号８８）、ＡＬＢ５（配列番号８９）、ＡＬＢ６（配列番号１００）、ＡＬＢ７（配列番号１０１）、ＡＬＢ８（配列番号１０２）、ＡＬＢ９（配列番号１０３）及びＡＬＢ１０（配列番号１０４）からなるグループから選択される、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【請求項２８】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ８（配列番号１０２）である、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１−１】

【図２１−２】

【図２１−３】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０−１】

【図３０−２】

【図３０−３】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０−１】

【図４０−２】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９】

【図６０】

【図６１】

【図６】

【図７】

【図６２】

【公開番号】特開２０１２−１６７１１２（Ｐ２０１２−１６７１１２Ａ）
【公開日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１０５０８９（Ｐ２０１２−１０５０８９）
【出願日】平成２４年５月２日（２０１２．５．２）
【分割の表示】特願２００８−５１１６２７（Ｐ２００８−５１１６２７）の分割
【原出願日】平成１８年５月１７日（２００６．５．１７）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス　エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】