腫瘍壊死因子レセプター関連因子
【課題】新規な融合ポリペプチドを提供する。
【解決手段】天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメイン配列と転写アクチベーターのＤＮＡ結合ドメインの融合物を含むポリペプチド。また天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインに特異的に結合する因子を同定する方法。
【解決手段】天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメイン配列と転写アクチベーターのＤＮＡ結合ドメインの融合物を含むポリペプチド。また天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインに特異的に結合する因子を同定する方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）ＴＮＦＲ２に結合でき、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号１の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｆ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号１の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｇ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｈ）ＣＤ４０に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉ）配列番号２のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｊ）配列番号２のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｋ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｌ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｍ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｎ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、ＣＤ４０に結合できるポリペプチド；
（ｏ）配列番号２の残基１８０−４０９のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｐ）配列番号２の残基１８０−４０９のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｑ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｒ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｓ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｔ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤ４０に結合できるポリペプチド；
よりなる群から選択される単離されたポリペプチド。
【請求項２】
ハツカネズミＴＲＡＦ配列である請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
天然のヒトＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインに結合できる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
天然のヒトＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインに特異的に結合できる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
天然である請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ホモダイマー形である請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
請求項１に記載のポリペプチドとのヘテロダイマー形である請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ＴＲＡＦ１（配列番号２）またはＴＲＡＦ２（配列番号４）である請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列番号４のアミノ酸２７２−５０１と少なくとも約５０％の配列同一性を有するドメインを含む請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号４のアミノ酸２７２−５０１をコードするヌクレオチド配列の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸分子によりコードされる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
（１）配列番号１にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列またはその相補物；
（２）配列番号３にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列またはその相補物；または
（３）請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸配列；
よりなる群から選択される核酸配列を含む単離された核酸分子。
【請求項１２】
ベクターで形質転換された宿主細胞により認識される調節配列に作動可能に結合した請求項１１に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１３】
請求項１１に記載の核酸分子または該分子を含むベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１に記載のポリペプチドと天然のＴＮＦ−Ｒ２との相互作用を破壊させることができる抗体。
【請求項１５】
請求項１に記載のポリペプチドに特異的に結合することができる抗体。
【請求項１６】
請求項１５に記載の抗体を製造するハイブリドーマセルライン。
【請求項１７】
請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸分子を用いる方法であって、その方法は宿主細胞により認識される調節配列に作動可能に結合したそのような核酸を含むベクターで形質転換された培養された宿主細胞中でそのような核酸を発現させ、宿主細胞から該核酸分子によりコードされたポリペプチドを回収する方法。
【請求項１８】
請求項１に記載のポリペプチドを製造する方法であって、該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞のＤＮＡ中に転写修飾因子を核酸分子に対し十分な近接と配向で挿入し、その転写に影響させる方法。
【請求項１９】
請求項１に記載のポリペプチドの存在を測定する方法であって、そのようなポリヌクレオチドをコードするＤＮＡを試験サンプル核酸とハイブリダイズさせ、ポリペプチドをコードする核酸の存在を決定する方法。
【請求項２０】
請求項１に記載のポリペプチドの転写アクチベーターの活性化ドメインへの融合物をコードする単離された核酸分子。
【請求項２１】
転写アクチベーターが酵母ＧＡＬ４である請求項２０に記載の核酸分子。
【請求項２２】
請求項２０に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２３】
核酸試験サンプルを増幅する方法であって、天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインと結合できる請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸で核酸ポリメラーゼ反応をプライムすることを含む方法。
【請求項２４】
請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を検出する方法であって、該核酸配列の少なくとも部分に特異的に結合する検出可能なマーカーとその核酸配列を接触させ、結合したマーカーを検出する方法。
【請求項２５】
請求項１に記載のポリペプチドと天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの複合体を破壊させることができる分子を同定する方法であって、天然のＴＮＦ−Ｒ２、天然のＴＲＡＦポリペプチドおよびリポーター遺伝子を候補分子と接触させ、リポーター遺伝子によりコードされた分子を検出することによりＴＲＡＦおよびＴＮＦ−Ｒ２細胞内ドメイン配列の結合を破壊させる候補分子の能力をモニターすることを含む方法。
【請求項２６】
請求項１に記載のポリペプチドと天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの複合体を破壊させることができる分子を同定する方法であって、１．天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの転写アクチベーターの活性化ドメインへの融合体、２．ポリペプチドの転写アクチベーターの活性化ドメインへの融合体、および３．リポーター遺伝子を発現する細胞を候補分子と接触させ、該ポリペプチドおよびＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの結合を破壊させる該候補分子の能力をリポーター遺伝子によりコードされる分子を検出することによってモニターすることを含む方法。
【請求項２７】
ＣＤ４０に結合できるポリペプチドおよびＣＤ４０の相互作用の阻害剤を同定する方法であって、該ポリペプチドは、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド
（ｂ）ＴＮＦＲ２に結合でき、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｆ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｇ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｈ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、ＴＮＦＲ２へ結合できるポリペプチド；
（ｉ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導されるポリペプチド；
（ｊ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｋ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｌ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｍ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；
よりなる群から選択され、その方法は、
ＣＤ４０およびポリペプチドを発現する組み換え宿主細胞におけるＣＤ４０：ポリペプチド相互作用にその発現が依存する、リポーター遺伝子の発現を阻害する分子を選択する工程を含む方法。
【請求項２８】
ポリペプチドが配列番号４のＴＲＡＦ２である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
組換え宿主細胞が、配列番号２のＴＲＡＦ１および配列番号４のＴＲＡＦ２を共発現する請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
リポーター遺伝子がＮＦ−κＢ依存性である請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
ＮＦ−κＢ依存性のリポーター遺伝子がＥ−セレクチンルシフェラーゼリポーター遺伝子構築物である請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ツーハイブリッドフォーマットで行われる請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
ＬＭＰに結合できるポリペプチドとＬＭＰ１の相互作用の阻害剤を同定する方法であって、ポリペプチドは、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド
（ｂ）ＴＮＦＲ２に結合でき、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｆ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｇ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｈ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、ＴＮＦＲ２へ結合できるポリペプチド；
（ｉ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導されるポリペプチド；
（ｊ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｋ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｌ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｍ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤ４０と結合できるポリペプチド；
よりなる群から選択され、該方法はリポーター遺伝子の発現を阻害する分子を選択する工程を含んでなり、該発現はＬＭＰ１およびポリペプチドを発現する組み換え宿主細胞におけるＬＭＰ１：ポリペプチド相互作用に依存する方法。
【請求項３４】
ＴＲＡＦタンパク質が配列番号４のＴＲＡＦ２である請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
該組換え宿主細胞が配列番号２のＴＲＡＦ１と配列番号４のＴＲＡＦ２を共発現する請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
レポーター遺伝子がＮＦ−κＢ依存性である請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
ＮＦ−κＢ依存性レポーター遺伝子がＥ−セレクチンルシフェラーゼレポーター遺伝子構築物である請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ツーハイブリッドフォーマットで行われる請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
配列番号４の残基８７−５０１（ＴＲＡＦ２（８７−５０１）またはＣＤ４０若しくはＴＮＦＲ２媒介ＮＦ−κＢ活性化を阻害できるその誘導体を含むポリペプチド。
【請求項１】
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）ＴＮＦＲ２に結合でき、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号１の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｆ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号１の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｇ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｈ）ＣＤ４０に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉ）配列番号２のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｊ）配列番号２のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｋ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｌ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｍ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｎ）配列番号４のいずれかの１または数個のアミノ酸の置換、削除または付加により（ｂ）のポリペプチドから誘導され、ＣＤ４０に結合できるポリペプチド；
（ｏ）配列番号２の残基１８０−４０９のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｐ）配列番号２の残基１８０−４０９のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｑ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｒ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｓ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｔ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤ４０に結合できるポリペプチド；
よりなる群から選択される単離されたポリペプチド。
【請求項２】
ハツカネズミＴＲＡＦ配列である請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
天然のヒトＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインに結合できる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
天然のヒトＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインに特異的に結合できる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
天然である請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ホモダイマー形である請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
請求項１に記載のポリペプチドとのヘテロダイマー形である請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ＴＲＡＦ１（配列番号２）またはＴＲＡＦ２（配列番号４）である請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列番号４のアミノ酸２７２−５０１と少なくとも約５０％の配列同一性を有するドメインを含む請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号４のアミノ酸２７２−５０１をコードするヌクレオチド配列の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸分子によりコードされる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
（１）配列番号１にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列またはその相補物；
（２）配列番号３にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列またはその相補物；または
（３）請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸配列；
よりなる群から選択される核酸配列を含む単離された核酸分子。
【請求項１２】
ベクターで形質転換された宿主細胞により認識される調節配列に作動可能に結合した請求項１１に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１３】
請求項１１に記載の核酸分子または該分子を含むベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１に記載のポリペプチドと天然のＴＮＦ−Ｒ２との相互作用を破壊させることができる抗体。
【請求項１５】
請求項１に記載のポリペプチドに特異的に結合することができる抗体。
【請求項１６】
請求項１５に記載の抗体を製造するハイブリドーマセルライン。
【請求項１７】
請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸分子を用いる方法であって、その方法は宿主細胞により認識される調節配列に作動可能に結合したそのような核酸を含むベクターで形質転換された培養された宿主細胞中でそのような核酸を発現させ、宿主細胞から該核酸分子によりコードされたポリペプチドを回収する方法。
【請求項１８】
請求項１に記載のポリペプチドを製造する方法であって、該ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞のＤＮＡ中に転写修飾因子を核酸分子に対し十分な近接と配向で挿入し、その転写に影響させる方法。
【請求項１９】
請求項１に記載のポリペプチドの存在を測定する方法であって、そのようなポリヌクレオチドをコードするＤＮＡを試験サンプル核酸とハイブリダイズさせ、ポリペプチドをコードする核酸の存在を決定する方法。
【請求項２０】
請求項１に記載のポリペプチドの転写アクチベーターの活性化ドメインへの融合物をコードする単離された核酸分子。
【請求項２１】
転写アクチベーターが酵母ＧＡＬ４である請求項２０に記載の核酸分子。
【請求項２２】
請求項２０に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２３】
核酸試験サンプルを増幅する方法であって、天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインと結合できる請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸で核酸ポリメラーゼ反応をプライムすることを含む方法。
【請求項２４】
請求項１に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を検出する方法であって、該核酸配列の少なくとも部分に特異的に結合する検出可能なマーカーとその核酸配列を接触させ、結合したマーカーを検出する方法。
【請求項２５】
請求項１に記載のポリペプチドと天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの複合体を破壊させることができる分子を同定する方法であって、天然のＴＮＦ−Ｒ２、天然のＴＲＡＦポリペプチドおよびリポーター遺伝子を候補分子と接触させ、リポーター遺伝子によりコードされた分子を検出することによりＴＲＡＦおよびＴＮＦ−Ｒ２細胞内ドメイン配列の結合を破壊させる候補分子の能力をモニターすることを含む方法。
【請求項２６】
請求項１に記載のポリペプチドと天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの複合体を破壊させることができる分子を同定する方法であって、１．天然のＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの転写アクチベーターの活性化ドメインへの融合体、２．ポリペプチドの転写アクチベーターの活性化ドメインへの融合体、および３．リポーター遺伝子を発現する細胞を候補分子と接触させ、該ポリペプチドおよびＴＮＦ−Ｒ２の細胞内ドメインの結合を破壊させる該候補分子の能力をリポーター遺伝子によりコードされる分子を検出することによってモニターすることを含む方法。
【請求項２７】
ＣＤ４０に結合できるポリペプチドおよびＣＤ４０の相互作用の阻害剤を同定する方法であって、該ポリペプチドは、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド
（ｂ）ＴＮＦＲ２に結合でき、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｆ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｇ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｈ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、ＴＮＦＲ２へ結合できるポリペプチド；
（ｉ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導されるポリペプチド；
（ｊ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｋ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｌ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｍ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；
よりなる群から選択され、その方法は、
ＣＤ４０およびポリペプチドを発現する組み換え宿主細胞におけるＣＤ４０：ポリペプチド相互作用にその発現が依存する、リポーター遺伝子の発現を阻害する分子を選択する工程を含む方法。
【請求項２８】
ポリペプチドが配列番号４のＴＲＡＦ２である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
組換え宿主細胞が、配列番号２のＴＲＡＦ１および配列番号４のＴＲＡＦ２を共発現する請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
リポーター遺伝子がＮＦ−κＢ依存性である請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
ＮＦ−κＢ依存性のリポーター遺伝子がＥ−セレクチンルシフェラーゼリポーター遺伝子構築物である請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ツーハイブリッドフォーマットで行われる請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
ＬＭＰに結合できるポリペプチドとＬＭＰ１の相互作用の阻害剤を同定する方法であって、ポリペプチドは、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド
（ｂ）ＴＮＦＲ２に結合でき、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号４のＴＲＡＦ２に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のＴＲＡＦ１に結合することができ、配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号３の相補物にストリンジェント条件下にハイブリダイズできる核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｆ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｇ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｈ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導され、ＴＮＦＲ２へ結合できるポリペプチド；
（ｉ）配列番号４の１または数個のいずれかのアミノ酸の置換、削除または付加により（ａ）のポリペプチドから誘導されるポリペプチド；
（ｊ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のＴＲＡＦ１に結合できるポリペプチド；
（ｋ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号４のＴＲＡＦ２に結合できるポリペプチド；
（ｌ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＴＮＦＲ２に結合できるポリペプチド；
（ｍ）配列番号４の残基２７２−５０１のＴＲＡＦドメインに、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤ４０と結合できるポリペプチド；
よりなる群から選択され、該方法はリポーター遺伝子の発現を阻害する分子を選択する工程を含んでなり、該発現はＬＭＰ１およびポリペプチドを発現する組み換え宿主細胞におけるＬＭＰ１：ポリペプチド相互作用に依存する方法。
【請求項３４】
ＴＲＡＦタンパク質が配列番号４のＴＲＡＦ２である請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
該組換え宿主細胞が配列番号２のＴＲＡＦ１と配列番号４のＴＲＡＦ２を共発現する請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
レポーター遺伝子がＮＦ−κＢ依存性である請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
ＮＦ−κＢ依存性レポーター遺伝子がＥ−セレクチンルシフェラーゼレポーター遺伝子構築物である請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ツーハイブリッドフォーマットで行われる請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
配列番号４の残基８７−５０１（ＴＲＡＦ２（８７−５０１）またはＣＤ４０若しくはＴＮＦＲ２媒介ＮＦ−κＢ活性化を阻害できるその誘導体を含むポリペプチド。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０ａ】
【図１０ｂ】
【図１１ａ】
【図１１ｂ】
【図１２ａ】
【図１２ｂ】
【図１３】
【図１４ａ】
【図１４ｂ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０ａ】
【図１０ｂ】
【図１１ａ】
【図１１ｂ】
【図１２ａ】
【図１２ｂ】
【図１３】
【図１４ａ】
【図１４ｂ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【公開番号】特開２０１０−１３１０１８（Ｐ２０１０−１３１０１８Ａ）
【公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００９−２９４７７０（Ｐ２００９−２９４７７０）
【出願日】平成２１年１２月２５日（２００９．１２．２５）
【分割の表示】特願２００６−２８４３２４（Ｐ２００６−２８４３２４）の分割
【原出願日】平成７年５月２５日（１９９５．５．２５）
【出願人】（５０９０１２６２５）ジェネンテック， インコーポレイテッド (357)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２９４７７０（Ｐ２００９−２９４７７０）
【出願日】平成２１年１２月２５日（２００９．１２．２５）
【分割の表示】特願２００６−２８４３２４（Ｐ２００６−２８４３２４）の分割
【原出願日】平成７年５月２５日（１９９５．５．２５）
【出願人】（５０９０１２６２５）ジェネンテック， インコーポレイテッド (357)
【Ｆターム（参考）】
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