腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品およびその製造方法
【課題】腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品およびその製造方法を提供する。
【解決手段】 ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および腫瘍細胞増殖抑制作用に相乗効果が期待できる少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を加えた飲料である腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品、およびその製造方法。
【解決手段】 ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および腫瘍細胞増殖抑制作用に相乗効果が期待できる少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を加えた飲料である腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品、およびその製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍細胞増殖抑制効果を持つビルベリー配合食品、特にその効果を期待できるビルベリー配合健康飲料およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
主として、ヨーロッパ等で栽培されてきたビルベリーは、古くから鮮やかな赤色や紫色等いわゆるビルベリー色の色素特性を利用することに多く用いられてきた。また、近年はその薬効に関する論文が発表され、主として、眼精疲労回復、視力回復や血管の透過性等に有効であるとするこの種の研究も進んでいる。
また、昨今ビルベリーを含有する飲料についても、色々開発がすすめられている。（例えば、特許文献１参照）
【特許文献１】特開平１１−１７８５５３号公報
【０００３】
また、前記薬効もビルベリーから抽出されたビルベリーエキスの含有量によりその効果が異なり、視力治療、回復や毛細血管の浸透性の低減などには、或る所定の濃度のビルベリーエキスが必要であることがわかっている。しかしながら、従来ビルベリーエキスはその溶解度に難があるため、その処方は粉末乃至粉末を固めた錠剤の形で服用されているのが現実であった。従って、より服用し易くかつ、薬効を示すい所定の濃度のアントシアニジンを含む液体処方としてのものが強く要求されている。
【０００４】
今世紀における高死亡率を占める各種のがん疾患は、消化器系、呼吸器系を初めとして身体のあらゆる部分へと拡大されてきており、先端医学による初期のがん疾患の検出技術、抗がん剤の進歩等とそれなりの成果は認められるものの、副作用を含めこれらが必ずしも十分に対処されているとは言い得ず、大きな社会問題となってきている。
【０００５】
一般的にがん疾患に対する考え方としては、当然予防的対処および治療的対処とがあり、この内、治療的対処としては、（１）外科的手法によるがん細胞・組織の除去、（２）化学療法・放射線療法によるがん細胞の増殖阻止、および（３）新しい細胞免疫療法などがある。しかしながら、侵襲性、副作用などの点から、患者の苦痛を軽減する新しい治療法の開発が求められている。
特に、近年その手法の一つとして、健康食品による漢方医学的な予防的対処が脚光を浴びてきており、アガリスク茸を含有する健康食品などはこれらの最たるものとして認められてきている。しかしこのアガリスク茸系の健康食品もそれが効果ありとするためには価格的に問題がある。
他方、本出願人は、多くの実験の結果、従来視力治療、回復に効果ありとして認められているビルベリー果実より抽出標準化した所定量のビルベリーエキスが、がん細胞、特に白血球系由来腫瘍細胞および消化器系由来腫瘍細胞に顕著なる細胞増殖抑制作用を示す知見を得た。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は由来の異なる腫瘍細胞に対する増殖抑制効果、しかも、安価で且つ服用し易いビルベリーエキスを用いた配合健康飲料、およびその製造方法が望まれており、本発明はこれらを提供することを、その目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品は、
１） ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有するものであり、
２） 上述の１）において、ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および添加物を配合したビルベリー飲料としたものであり、
３） 上述の２）において、前記酸味料をクエン酸とし、糖類を少なくともブドウ糖、果糖、麦芽糖から選ばれた糖類としたビルベリー飲料としたものであり、
４） 上述の２）において、前記添加物として腫瘍細胞増殖抑制作用の相乗効果が期待できる少なくとも 種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を加えたビルベリー飲料としたものである。
【０００８】
本発明の腫瘍細胞増殖抑制作用を有するビルベリー配合食品の製造方法は、
５） ビルベリー果実を圧縮粉砕する第１工程と、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して概ね２５％のアントシアニジンを含む粉体のビルベリーエキスを生成する第２工程と、該粉体のビルベリーエキスを８５〜１００℃の高温水にて攪拌、溶解しビルベリーエキスを１００ｍｌ当たり１０，０００ｍｇ以上含有するビルベリーエキストラクト（原液）とする第３工程と、該ビルベリーエキストラクト（原液）にビルベリー調合香料、糖類、酸味料および少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を添加物として加えてビルベリー飲料原液とする第４工程と、該ビルベリー飲料原液を、最終アントシアニジンを０．０２５〜０．２５ｍｇ／ｍｌ相当含有するようにろ過滅菌したリン酸緩衝液（ｐH７．０）に溶解し混合添加してビルベリー配合飲料とする第５工程を有するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、 ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、 さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および添加物として腫瘍細胞増殖抑制作用に相乗効果が期待できる少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸などを添加物として加えることが可能で、その作用の増強と共に安価で、服用し易い腫瘍細胞増殖抑制作用を有するビルベリー配合健康飲料を提供することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
ビルベリーは、植物学的分類におけるツツジ（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）科、スノキ（Ｖａｃｃｉｎｕｍ）属、Ｍｙｔｉｌｌｕｓ節に属する主として北部ヨーロッパ自生する落葉性低木であって、その果実特にその果皮は紫色でアントシアニン色素に富む。このアントシアニンは、シアニジン（Ｃｙａｎｉｄｉｎ）、デルフィニジン（Ｄｅｌｐｈｅｎｉｄｉｎ）、マルビジン（Ｍａｌｖｉｄｉｎ）、ペラルゴニジン（Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ）、ペオニジン（Ｐｅｏｎｉｄｉｎ）ペチュニジン（Ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ）、の６種のアントシアニジンに、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）、ガラクトース（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、アラビノース（ａｒａｂｉｎｏｓｅ）の３つの糖類がそれぞれ１つずつ結合した配糖体よりなる。
このアントシアニンの代表的構造式は次式で示される。
【００１１】
【表１】
【００１２】
従来から、ビルベリーの薬効として、眼の網膜活性化効果、毛細血管保護効果、抗酸化作用効果，抗炎症作用効果、抗潰瘍活性効果などが知られている。
本発明は、上記ビルベリーの各種効果に対し、腫瘍細胞、特に白血病由来腫瘍細胞および消化器系由来腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制作用効果に焦点を合わせ、特殊の方法により抽出標準化したビルベリーエキスを使用することにより、従来の適用量に較べて極めて低いビルベリー濃度の適用量にて、十分上記作用効果を実現したところにそのポイントがある。
【００１３】
本発明に使用するビルベリーエキスは、本発明の出願人による特許出願である特願２００３−１５７７２７号「ビルベリー原液の製造方法」に記載されたものをベースとしており、ビルベリー果実を圧縮粉砕し、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して２５％以上のアントシアニジンを含有する粉体のビルベリーエキスを使用するものである。
すなわち、ビルベリーエキスラクト（原液）は、ビルベリー果実を圧縮粉砕する第１工程と、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して２５％以上のアントシアニジンを含む粉体のビルベリーエキスを生成する第２工程と、該粉体のビルベリーエキスを８５〜１００℃の高温水にて攪拌、溶解しビルベリーエキスを１００ｍｌ当たり１０，０００ｍｇ以上含有するビルベリーエキスラクト（原液）とする第３工程により作成される。
このビルベリーエキスラクト（原液）にビルベリー調合香料、糖類、酸味料および少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を添加物として加えてビルベリー飲料原液とする第４工程と、該ビルベリー飲料原液を、最終アントシアニジンを０．０２５〜０．２５μｇ／ｍｌ含有するように混合添加してビルベリー配合飲料とする第５工程により本発明の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品は製造される。
【００１４】
多くの実験の結果、このビルベリーエキスによるビルベリー濃度として１ｍｌ当たり０．２〜１．０μｇ含有する混合液、が顕著な腫瘍細胞増殖抑制効果発現に望ましいことがわかった。
０．２μｇ未満では腫瘍細胞増殖抑制作用効果は殆ど現れず、０．２μｇ以上の濃度において顕著な細胞増殖抑制効果を発現し始める。また１．０１μｇを越えても該効果（９０％以上の細胞において増殖抑制が認められる）はサチュレートしており、意味がない。
従って、ビルベリー濃度としての最適範囲としては、１ｍｌ当たり０．２μｇ〜１．０μｇとすることが望ましい。
【００１５】
また、本発明は、抗細胞増殖抑制に対する相乗効果を期待するため、抗酸化作用を有するビタミンＥ（最終濃度１ｍＭ：通常は２００．４００ＩＵを摂取し、１ｍＭはほぼ２５０ＩＵに相当する）を混合すると、その細胞増殖抑制効果は増強されるという知見を得ている。 このことは、該物質とビタミン類、アミノ酸などのサプリメントを添加し、その作用効果の増強が可能という点で新規性がある。
【実施例１】
【００１６】
出願人は、上記アントシアニジン成分に注目し、腫瘍細胞の増殖に対する効果の確認試験を行った。
試験がん細胞としては、大腸がん細胞（ＣＯＬＯ２０１）、胃印環細胞がん細胞（ＫＡＴＯ−III）、Ｔリンパ血球系白血病細胞（Ｉ９．１）、単球由来白血病細胞（Ｕ９３７）を用いた。
各がん細胞の細胞株をそれぞれ培養液と混ぜ約106 個の細胞数（２００μｌ）に調製し、９６穴培養用マイクロプレートに播種し、ビルベリーエキスより調製したビルベリー液を培養液の１／１０量（最終濃度：０、０．１、０．３、０．６および１．０μｇ／ｍｌ）加え一定時間（２４時間）インキュベーター（３７℃）中で培養した後生細胞数を計数した。
なお、比較のためヒト正常内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の場合についても、同様の実験を行った。
【００１７】
図１は、本発明の実施例１における、ビルベリー濃度と各種腫瘍由来ガン細胞に対する効果確認試験した結果を示した図である。なお、ビルベリー濃度０．１ｍｇ／ｍｌはアントシアニジン含有量として０．０２５ｍｇ／ｍｌに相当する。
図において、ＨＣＦおよびＨＵＶ（ＨＵＶＥＣ）は正常培養細胞でありそれぞれヒト子宮頸管繊維芽細胞およびヒト内皮細胞、ＣＯＬＯは大腸がん細胞、ＫＡＴＯ−IIIは胃印環がん細胞、Ｕ９３７およびＨＬ−６０は単核球由来白血病細胞、Ａ３およびＩ９．１はＴリンパ球由来白血病細胞の場合である。
【００１８】
試験結果より、腫瘍細胞の種類によりビルベリエキス濃度による影響は異なっており、白血病由来の細胞の場合は極めて低濃度（０．１μｇ／ｍｌ）から、その細胞増殖抑制効果を発揮し、０．２μｇ／ｍｌ以上で残存生存率約３０％に達しほぼその効果はサチュレートする。
これに対して、大腸がん細胞、胃がん細胞の場合は、アントシアニジン量にほぼ比例して、細胞死滅効果が高くなることがわかった。ただし、１．０μｇ／ｍｌ以上ではこれもサチュレートすることが確認された。
白血病由来の細胞の場合は５０〜７０％程度の細胞死滅が認められ、また消化器系のがん細胞の場合は約２５〜５０％程度のがん細胞死滅が確認され、ビルベリー濃度の増加によりより大きな効果を期待することができる。
なお、正常細胞である内皮細胞（ＨＵＶ）に対しては増殖抑制を示さず、また正常子宮頸管繊維芽細胞（ＨＣＦ）に対してはその増殖を促進することから、該物質は選択的に腫瘍細胞の増殖を抑制する知見を得た。
【実施例２】
【００１９】
本実施例２は、ビルベリーエキスにさらに添加物としてビタミンＥ（以下、ＶＥという）を大腸がん由来細胞（ＣＯＬＯ２０１）に添加し、ビルベリーエキスと添加物による細胞増殖抑制作用の相乗効果を測定した。
ビルベリー濃度０、０．０１、０．１、０．３、０．６、１．０μｇ／ｍｌ含有の培養液にＶＥ１ｍＭを添加し、２４時間培養後および４８時間培養後の実施例１に準じた方法で、細胞生存率を測定した。
【００２０】
図２は、本発明の実施例２における、ビルベリーエキスにさらに上記添加物を加えた混合液による各種腫瘍由来ガン細胞に対する相乗効果を確認試験した結果を示す図であり、（ａ）は２４ｈｒ培養後の細胞生存率、（ｂ）は４８ｈｒ後の細胞生存率を示す。
試験結果より、前記添加物ＶＥを加えた場合、ビルベリーエキスのみの場合に較べていずれも細胞増殖抑制作用が増すことが明らかとなり、特にビルベリー濃度０．１μｇ／ｍｌ含有においてＶＥ添加の有無による効果が顕著であり、４８時間培養時における細胞生存率は２０％以下となっている。また、４８時間培養の場合の細胞生存率は２４時間培養の場合の細胞生存率の約５０％、すなわち約２倍の効果があることがわかった。
なお、ビルベリーエキスに対する添加剤ＶＥの添加による細胞増殖抑制作用への相乗効果は、他の添加剤（アミノ酸等）の添加、または他の添加剤（アミノ酸等）との併用添加による場合も期待できるものである。
また、本実施例２においては、添加量を固定したが、添加剤の多量添加による相乗効果アップも期待することができる。
【産業上の利用可能性】
【００２１】
本発明の実施例においては、対象がん細胞を大腸がん細胞（ＣＯＬＯ）、胃がん細胞（ＫＡＴＯ−III）、白血球系Ｔ細胞由来がん細胞（１９．１）、血球系単球由来がん細胞（Ｕ９３７）の場合としたが、上記のごとく、ビルベリーエキスおよび添加物による細胞増殖抑制効果はこれらに限られるものではなく、各種のがん細胞に対し有効な細胞増殖抑制作用を有する健康食品（飲料）として適用することができる。また、本発明に示したように、正常細胞に対しては増殖抑制を示さないことから、安全性の高い飲料である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の実施例１における、ビルベリーの濃度と各種腫瘍由来ガン細胞に対する効果確認試験した結果を示す図である。
【図２】本発明の実施例２における、ビルベリーエキスにさらに添加物を加えた場合の各種腫瘍由来がん細胞に対する相乗効果確認試験の結果を示す図であり、（ａ）は２４ｈｒ培養後の細胞生存率、（ｂ）は４８ｈｒ後の細胞生存率を示す。
【符号の説明】
【００２３】
ＨＣＦ ヒト子宮頸管繊維芽細胞（正常細胞）、ＨＵＶ 正常内皮細胞、ＣＯＬＯ 大腸がん細胞、ＫＡＴＯ−III 胃印環がん細胞、Ｕ９３７ 単核球由来白血病細胞、Ａ３およびＩ９．１はＴリンパ球由来白血病細胞。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍細胞増殖抑制効果を持つビルベリー配合食品、特にその効果を期待できるビルベリー配合健康飲料およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
主として、ヨーロッパ等で栽培されてきたビルベリーは、古くから鮮やかな赤色や紫色等いわゆるビルベリー色の色素特性を利用することに多く用いられてきた。また、近年はその薬効に関する論文が発表され、主として、眼精疲労回復、視力回復や血管の透過性等に有効であるとするこの種の研究も進んでいる。
また、昨今ビルベリーを含有する飲料についても、色々開発がすすめられている。（例えば、特許文献１参照）
【特許文献１】特開平１１−１７８５５３号公報
【０００３】
また、前記薬効もビルベリーから抽出されたビルベリーエキスの含有量によりその効果が異なり、視力治療、回復や毛細血管の浸透性の低減などには、或る所定の濃度のビルベリーエキスが必要であることがわかっている。しかしながら、従来ビルベリーエキスはその溶解度に難があるため、その処方は粉末乃至粉末を固めた錠剤の形で服用されているのが現実であった。従って、より服用し易くかつ、薬効を示すい所定の濃度のアントシアニジンを含む液体処方としてのものが強く要求されている。
【０００４】
今世紀における高死亡率を占める各種のがん疾患は、消化器系、呼吸器系を初めとして身体のあらゆる部分へと拡大されてきており、先端医学による初期のがん疾患の検出技術、抗がん剤の進歩等とそれなりの成果は認められるものの、副作用を含めこれらが必ずしも十分に対処されているとは言い得ず、大きな社会問題となってきている。
【０００５】
一般的にがん疾患に対する考え方としては、当然予防的対処および治療的対処とがあり、この内、治療的対処としては、（１）外科的手法によるがん細胞・組織の除去、（２）化学療法・放射線療法によるがん細胞の増殖阻止、および（３）新しい細胞免疫療法などがある。しかしながら、侵襲性、副作用などの点から、患者の苦痛を軽減する新しい治療法の開発が求められている。
特に、近年その手法の一つとして、健康食品による漢方医学的な予防的対処が脚光を浴びてきており、アガリスク茸を含有する健康食品などはこれらの最たるものとして認められてきている。しかしこのアガリスク茸系の健康食品もそれが効果ありとするためには価格的に問題がある。
他方、本出願人は、多くの実験の結果、従来視力治療、回復に効果ありとして認められているビルベリー果実より抽出標準化した所定量のビルベリーエキスが、がん細胞、特に白血球系由来腫瘍細胞および消化器系由来腫瘍細胞に顕著なる細胞増殖抑制作用を示す知見を得た。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は由来の異なる腫瘍細胞に対する増殖抑制効果、しかも、安価で且つ服用し易いビルベリーエキスを用いた配合健康飲料、およびその製造方法が望まれており、本発明はこれらを提供することを、その目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品は、
１） ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有するものであり、
２） 上述の１）において、ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および添加物を配合したビルベリー飲料としたものであり、
３） 上述の２）において、前記酸味料をクエン酸とし、糖類を少なくともブドウ糖、果糖、麦芽糖から選ばれた糖類としたビルベリー飲料としたものであり、
４） 上述の２）において、前記添加物として腫瘍細胞増殖抑制作用の相乗効果が期待できる少なくとも 種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を加えたビルベリー飲料としたものである。
【０００８】
本発明の腫瘍細胞増殖抑制作用を有するビルベリー配合食品の製造方法は、
５） ビルベリー果実を圧縮粉砕する第１工程と、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して概ね２５％のアントシアニジンを含む粉体のビルベリーエキスを生成する第２工程と、該粉体のビルベリーエキスを８５〜１００℃の高温水にて攪拌、溶解しビルベリーエキスを１００ｍｌ当たり１０，０００ｍｇ以上含有するビルベリーエキストラクト（原液）とする第３工程と、該ビルベリーエキストラクト（原液）にビルベリー調合香料、糖類、酸味料および少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を添加物として加えてビルベリー飲料原液とする第４工程と、該ビルベリー飲料原液を、最終アントシアニジンを０．０２５〜０．２５ｍｇ／ｍｌ相当含有するようにろ過滅菌したリン酸緩衝液（ｐH７．０）に溶解し混合添加してビルベリー配合飲料とする第５工程を有するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、 ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、 さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および添加物として腫瘍細胞増殖抑制作用に相乗効果が期待できる少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸などを添加物として加えることが可能で、その作用の増強と共に安価で、服用し易い腫瘍細胞増殖抑制作用を有するビルベリー配合健康飲料を提供することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
ビルベリーは、植物学的分類におけるツツジ（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）科、スノキ（Ｖａｃｃｉｎｕｍ）属、Ｍｙｔｉｌｌｕｓ節に属する主として北部ヨーロッパ自生する落葉性低木であって、その果実特にその果皮は紫色でアントシアニン色素に富む。このアントシアニンは、シアニジン（Ｃｙａｎｉｄｉｎ）、デルフィニジン（Ｄｅｌｐｈｅｎｉｄｉｎ）、マルビジン（Ｍａｌｖｉｄｉｎ）、ペラルゴニジン（Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ）、ペオニジン（Ｐｅｏｎｉｄｉｎ）ペチュニジン（Ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ）、の６種のアントシアニジンに、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）、ガラクトース（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、アラビノース（ａｒａｂｉｎｏｓｅ）の３つの糖類がそれぞれ１つずつ結合した配糖体よりなる。
このアントシアニンの代表的構造式は次式で示される。
【００１１】
【表１】
【００１２】
従来から、ビルベリーの薬効として、眼の網膜活性化効果、毛細血管保護効果、抗酸化作用効果，抗炎症作用効果、抗潰瘍活性効果などが知られている。
本発明は、上記ビルベリーの各種効果に対し、腫瘍細胞、特に白血病由来腫瘍細胞および消化器系由来腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制作用効果に焦点を合わせ、特殊の方法により抽出標準化したビルベリーエキスを使用することにより、従来の適用量に較べて極めて低いビルベリー濃度の適用量にて、十分上記作用効果を実現したところにそのポイントがある。
【００１３】
本発明に使用するビルベリーエキスは、本発明の出願人による特許出願である特願２００３−１５７７２７号「ビルベリー原液の製造方法」に記載されたものをベースとしており、ビルベリー果実を圧縮粉砕し、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して２５％以上のアントシアニジンを含有する粉体のビルベリーエキスを使用するものである。
すなわち、ビルベリーエキスラクト（原液）は、ビルベリー果実を圧縮粉砕する第１工程と、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して２５％以上のアントシアニジンを含む粉体のビルベリーエキスを生成する第２工程と、該粉体のビルベリーエキスを８５〜１００℃の高温水にて攪拌、溶解しビルベリーエキスを１００ｍｌ当たり１０，０００ｍｇ以上含有するビルベリーエキスラクト（原液）とする第３工程により作成される。
このビルベリーエキスラクト（原液）にビルベリー調合香料、糖類、酸味料および少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を添加物として加えてビルベリー飲料原液とする第４工程と、該ビルベリー飲料原液を、最終アントシアニジンを０．０２５〜０．２５μｇ／ｍｌ含有するように混合添加してビルベリー配合飲料とする第５工程により本発明の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品は製造される。
【００１４】
多くの実験の結果、このビルベリーエキスによるビルベリー濃度として１ｍｌ当たり０．２〜１．０μｇ含有する混合液、が顕著な腫瘍細胞増殖抑制効果発現に望ましいことがわかった。
０．２μｇ未満では腫瘍細胞増殖抑制作用効果は殆ど現れず、０．２μｇ以上の濃度において顕著な細胞増殖抑制効果を発現し始める。また１．０１μｇを越えても該効果（９０％以上の細胞において増殖抑制が認められる）はサチュレートしており、意味がない。
従って、ビルベリー濃度としての最適範囲としては、１ｍｌ当たり０．２μｇ〜１．０μｇとすることが望ましい。
【００１５】
また、本発明は、抗細胞増殖抑制に対する相乗効果を期待するため、抗酸化作用を有するビタミンＥ（最終濃度１ｍＭ：通常は２００．４００ＩＵを摂取し、１ｍＭはほぼ２５０ＩＵに相当する）を混合すると、その細胞増殖抑制効果は増強されるという知見を得ている。 このことは、該物質とビタミン類、アミノ酸などのサプリメントを添加し、その作用効果の増強が可能という点で新規性がある。
【実施例１】
【００１６】
出願人は、上記アントシアニジン成分に注目し、腫瘍細胞の増殖に対する効果の確認試験を行った。
試験がん細胞としては、大腸がん細胞（ＣＯＬＯ２０１）、胃印環細胞がん細胞（ＫＡＴＯ−III）、Ｔリンパ血球系白血病細胞（Ｉ９．１）、単球由来白血病細胞（Ｕ９３７）を用いた。
各がん細胞の細胞株をそれぞれ培養液と混ぜ約106 個の細胞数（２００μｌ）に調製し、９６穴培養用マイクロプレートに播種し、ビルベリーエキスより調製したビルベリー液を培養液の１／１０量（最終濃度：０、０．１、０．３、０．６および１．０μｇ／ｍｌ）加え一定時間（２４時間）インキュベーター（３７℃）中で培養した後生細胞数を計数した。
なお、比較のためヒト正常内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の場合についても、同様の実験を行った。
【００１７】
図１は、本発明の実施例１における、ビルベリー濃度と各種腫瘍由来ガン細胞に対する効果確認試験した結果を示した図である。なお、ビルベリー濃度０．１ｍｇ／ｍｌはアントシアニジン含有量として０．０２５ｍｇ／ｍｌに相当する。
図において、ＨＣＦおよびＨＵＶ（ＨＵＶＥＣ）は正常培養細胞でありそれぞれヒト子宮頸管繊維芽細胞およびヒト内皮細胞、ＣＯＬＯは大腸がん細胞、ＫＡＴＯ−IIIは胃印環がん細胞、Ｕ９３７およびＨＬ−６０は単核球由来白血病細胞、Ａ３およびＩ９．１はＴリンパ球由来白血病細胞の場合である。
【００１８】
試験結果より、腫瘍細胞の種類によりビルベリエキス濃度による影響は異なっており、白血病由来の細胞の場合は極めて低濃度（０．１μｇ／ｍｌ）から、その細胞増殖抑制効果を発揮し、０．２μｇ／ｍｌ以上で残存生存率約３０％に達しほぼその効果はサチュレートする。
これに対して、大腸がん細胞、胃がん細胞の場合は、アントシアニジン量にほぼ比例して、細胞死滅効果が高くなることがわかった。ただし、１．０μｇ／ｍｌ以上ではこれもサチュレートすることが確認された。
白血病由来の細胞の場合は５０〜７０％程度の細胞死滅が認められ、また消化器系のがん細胞の場合は約２５〜５０％程度のがん細胞死滅が確認され、ビルベリー濃度の増加によりより大きな効果を期待することができる。
なお、正常細胞である内皮細胞（ＨＵＶ）に対しては増殖抑制を示さず、また正常子宮頸管繊維芽細胞（ＨＣＦ）に対してはその増殖を促進することから、該物質は選択的に腫瘍細胞の増殖を抑制する知見を得た。
【実施例２】
【００１９】
本実施例２は、ビルベリーエキスにさらに添加物としてビタミンＥ（以下、ＶＥという）を大腸がん由来細胞（ＣＯＬＯ２０１）に添加し、ビルベリーエキスと添加物による細胞増殖抑制作用の相乗効果を測定した。
ビルベリー濃度０、０．０１、０．１、０．３、０．６、１．０μｇ／ｍｌ含有の培養液にＶＥ１ｍＭを添加し、２４時間培養後および４８時間培養後の実施例１に準じた方法で、細胞生存率を測定した。
【００２０】
図２は、本発明の実施例２における、ビルベリーエキスにさらに上記添加物を加えた混合液による各種腫瘍由来ガン細胞に対する相乗効果を確認試験した結果を示す図であり、（ａ）は２４ｈｒ培養後の細胞生存率、（ｂ）は４８ｈｒ後の細胞生存率を示す。
試験結果より、前記添加物ＶＥを加えた場合、ビルベリーエキスのみの場合に較べていずれも細胞増殖抑制作用が増すことが明らかとなり、特にビルベリー濃度０．１μｇ／ｍｌ含有においてＶＥ添加の有無による効果が顕著であり、４８時間培養時における細胞生存率は２０％以下となっている。また、４８時間培養の場合の細胞生存率は２４時間培養の場合の細胞生存率の約５０％、すなわち約２倍の効果があることがわかった。
なお、ビルベリーエキスに対する添加剤ＶＥの添加による細胞増殖抑制作用への相乗効果は、他の添加剤（アミノ酸等）の添加、または他の添加剤（アミノ酸等）との併用添加による場合も期待できるものである。
また、本実施例２においては、添加量を固定したが、添加剤の多量添加による相乗効果アップも期待することができる。
【産業上の利用可能性】
【００２１】
本発明の実施例においては、対象がん細胞を大腸がん細胞（ＣＯＬＯ）、胃がん細胞（ＫＡＴＯ−III）、白血球系Ｔ細胞由来がん細胞（１９．１）、血球系単球由来がん細胞（Ｕ９３７）の場合としたが、上記のごとく、ビルベリーエキスおよび添加物による細胞増殖抑制効果はこれらに限られるものではなく、各種のがん細胞に対し有効な細胞増殖抑制作用を有する健康食品（飲料）として適用することができる。また、本発明に示したように、正常細胞に対しては増殖抑制を示さないことから、安全性の高い飲料である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の実施例１における、ビルベリーの濃度と各種腫瘍由来ガン細胞に対する効果確認試験した結果を示す図である。
【図２】本発明の実施例２における、ビルベリーエキスにさらに添加物を加えた場合の各種腫瘍由来がん細胞に対する相乗効果確認試験の結果を示す図であり、（ａ）は２４ｈｒ培養後の細胞生存率、（ｂ）は４８ｈｒ後の細胞生存率を示す。
【符号の説明】
【００２３】
ＨＣＦ ヒト子宮頸管繊維芽細胞（正常細胞）、ＨＵＶ 正常内皮細胞、ＣＯＬＯ 大腸がん細胞、ＫＡＴＯ−III 胃印環がん細胞、Ｕ９３７ 単核球由来白血病細胞、Ａ３およびＩ９．１はＴリンパ球由来白血病細胞。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有することを特徴とする腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項２】
ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および添加物を配合したビルベリー飲料である請求項１に記載の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項３】
前記酸味料がクエン酸であり、糖類が少なくともブドウ糖、果糖、麦芽糖から選ばれた糖類であることを特徴とする請求項２に記載の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項４】
前記添加物が、腫瘍細胞増殖抑制作用に相乗効果が期待できる少なくともビタミン類、または／およびアミノ酸を加えたビルベリー飲料であることを特徴とする請求項２または３に記載の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項５】
ビルベリー果実を圧縮粉砕する第１工程と、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して２５％以上のアントシアニジンを含む粉体のビルベリーエキスを生成する第２工程と、該粉体のビルベリーエキスを８５〜１００℃の高温水にて攪拌、溶解しビルベリーエキスを１００ｍｌ当たり１０，０００ｍｇ以上含有するビルベリーエキスラクト（原液）とする第３工程と、該ビルベリーエキスラクト（原液）にビルベリー調合香料、糖類、酸味料および少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を添加物として加えてビルベリー飲料原液とする第４工程と、該ビルベリー飲料原液を、最終アントシアニジンを０．０２５〜０．２５μｇ／ｍｌ含有するように混合添加してビルベリー配合飲料とする第５工程を有することを特徴とする腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品の製造方法。
【請求項１】
ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有することを特徴とする腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項２】
ビルベリー果実より抽出標準化された、アントシアニジンを２５％以上含有するビルベリーエキスを１ｍｌ当たり０．１〜１．０μｇ含有し、さらに少なくともビルベリー調合香料と、糖類、酸味料、および添加物を配合したビルベリー飲料である請求項１に記載の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項３】
前記酸味料がクエン酸であり、糖類が少なくともブドウ糖、果糖、麦芽糖から選ばれた糖類であることを特徴とする請求項２に記載の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項４】
前記添加物が、腫瘍細胞増殖抑制作用に相乗効果が期待できる少なくともビタミン類、または／およびアミノ酸を加えたビルベリー飲料であることを特徴とする請求項２または３に記載の腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品。
【請求項５】
ビルベリー果実を圧縮粉砕する第１工程と、該圧縮粉砕されたビルベリー砕体より抽出、標準化して２５％以上のアントシアニジンを含む粉体のビルベリーエキスを生成する第２工程と、該粉体のビルベリーエキスを８５〜１００℃の高温水にて攪拌、溶解しビルベリーエキスを１００ｍｌ当たり１０，０００ｍｇ以上含有するビルベリーエキスラクト（原液）とする第３工程と、該ビルベリーエキスラクト（原液）にビルベリー調合香料、糖類、酸味料および少なくとも種々のビタミン類、又は／およびアミノ酸を添加物として加えてビルベリー飲料原液とする第４工程と、該ビルベリー飲料原液を、最終アントシアニジンを０．０２５〜０．２５μｇ／ｍｌ含有するように混合添加してビルベリー配合飲料とする第５工程を有することを特徴とする腫瘍細胞増殖抑制効果をもつビルベリー配合食品の製造方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００６−２８０３００（Ｐ２００６−２８０３００Ａ）
【公開日】平成１８年１０月１９日（２００６．１０．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１０６２３２（Ｐ２００５−１０６２３２）
【出願日】平成１７年４月１日（２００５．４．１）
【出願人】（５０２３１７９０９）グローブサイエンス株式会社 (2)
【出願人】（５９２０６８２００）学校法人東京薬科大学 (32)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１０月１９日（２００６．１０．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月１日（２００５．４．１）
【出願人】（５０２３１７９０９）グローブサイエンス株式会社 (2)
【出願人】（５９２０６８２００）学校法人東京薬科大学 (32)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]