腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品
【課題】動物由来の乳酸菌に比べて腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用が十分な植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品を提供することである。
【解決手段】植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする腸管免疫活性化剤である。
【解決手段】植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする腸管免疫活性化剤である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
人体の中で、口腔、鼻腔、呼吸器官、消化管などの体の内側で外界に接している部分は、粘膜と呼ばれるバリアーで保護され、その粘膜は、外部より取り込まれた異物抗原を排除する機能を有する。特に、消化器官である腸管は、人間の食事や飲水といった生命活動により、常に病原菌、アレルギー物質及び環境ホルモンなどの有害物質に暴露されている。近年、食生活の変化、ストレス又は加齢による腸内細菌叢の悪化などの原因によって、腸管免疫が低下し、感染症、アレルギー、潰瘍又は癌などの疾患を引き起こす人が増加している。
【０００３】
多くの感染症の場合、抗原となる細菌やウィルスなどが粘膜上皮に定着し、さらに上皮細胞内に侵入することにより、疾患が引き起こされる。粘膜上では病原体の侵入を防止するため、特別な種類の抗体であるイムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）が分泌される。ＩｇＡ抗体は、パイエル板やリンパ小節の細胞により誘導・生産される２量体又は多量体の抗体で、ポリＩｇレセプター（ｐＩｇＲ）で分泌成分（ＳＣ）と結合し分泌型ＩｇＡとなり上皮細胞により粘膜分泌物中に運ばれ、病原体を架橋、被覆し細胞内への侵入を阻止する。ＩｇＡ抗体を粘膜分泌物中に分泌するには、ＳＣと結合する必要があるが、このＳＣを誘導するのが、Ｉ型ヘルパーＴ細胞が生産するインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）である。したがって、病原体を効率良く除去するには、ＩｇＡの産生を増加させるとともに、ＳＣの産生も増加させる必要がある。
【０００４】
ところで、乳酸菌の免疫調節機能については、近年、人腸内の乳酸菌や発酵乳由来のいわゆる動物性乳酸菌について、様々な研究が行われている。例えば、乳製品由来のLactobacillus paracaseiの抗アレルギー作用（特許文献１）やラクトコッカス・ラクティスの抗アレルギー作用（特許文献２）、エンテロコッカス・フェカリス及びラクトバチルス・ロイテリーの抗アレルギー作用（特許文献３）、ラクトバチルス・アシドフィルスの免疫機能調節効果（特許文献４）、ラクトバリルス・ラムノサスの免疫増強作用（特許文献５）等が知られている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１３９１６０号公報
【特許文献２】特開２００４−１８４６９号公報
【特許文献３】特開２０００−９５６９７号公報
【特許文献４】特開２００４−２７７３８１号公報
【特許文献５】特表２００１−５１３９９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、動物由来の乳酸菌は、生物活性が十分でないという問題がある。一方、植物由来の乳酸菌の分離や生理機能についての研究は、ほとんどされていない。
【０００７】
そこで、本発明は、動物由来の乳酸菌に比べて腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用が十分な植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
以上の目的を達成するため、本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物が、動物由来の動物性乳酸菌に比べて十分な腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用を有することを見出した。すなわち、本発明は、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする腸管免疫活性化剤である。また、本発明は、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とし、前記乳酸菌がパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用を有するＩｇＡ抗体産生促進剤である。さらに、本発明は、これら腸管免疫活性化剤又はＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品、動物飼料及び医薬品である。
【発明の効果】
【０００９】
以上のように本発明によれば、動物由来の乳酸菌に比べて腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用が十分な植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
植物由来の植物性乳酸菌は、動物性乳酸菌に比べ貧栄養状態での生育が可能で、生育温度やｐＨ等の環境要因もより過酷な条件で増殖できる。また、動物性乳酸菌が乳や畜肉のみを発酵するのに対し、植物性乳酸菌は、野菜、果実類、穀物、豆類、海藻類等幅広い食物を発酵させることが可能である。
【００１１】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤に含まれる植物性乳酸菌は、すんき漬から分離されていることが好ましい。すんき漬とは、長野県の木曽地方で生産・食されている漬物のことをいい、その製造においては、塩を一切使用せず、乳酸発酵によってのみ味付けを行い、日持ちを向上させるという特徴を有する。すんき漬から植物性乳酸菌は、既知の方法により分離することができる。例えば、漬け汁中に遊離している乳酸菌を乳酸菌分離用培地で分離する方法、または、漬け汁を集積培養後に乳酸菌分離用培地で分離する方法、漬物を集積培養し乳酸菌分離用培地で分離する方法、漬物に付着した乳酸菌を攪拌やホモジナイズ、超音波等で処理後、乳酸菌分離用培地で分離する方法、すんき漬の漬け種から分離する方法等である。
【００１２】
本発明に係る腸管免疫活性化剤において、腸管免疫活性化作用には、腸管免疫組織、例えばパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用や、ＩｇＡの分泌を担う分泌成分の産生を誘導するＩＦＮ−γの産生を増強する腸管免疫活性化作用などがあり、従来の動物性乳酸菌と比べると、これらの生理活性が高いという特徴を有する。
【００１３】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤において、植物性乳酸菌の生菌とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌を培養した培養液、その集菌物、凍結乾燥やスプレードライ等により乾燥させた植物性乳酸菌の粉末、顆粒、タブレット状の物で、乳酸菌増殖用の培地に接種した時、増殖する能力を有する物をいい、死菌とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌を培養した培養液を加熱、抗菌剤等の薬剤処理、電子線、紫外線、放射線等の物理的処理で殺菌したものをいい、菌体処理物とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌の菌体を、酵素処理やホモジナイズ、超音波処理等の方法で破壊した破砕物、または免疫機能調節活性や抗アレルギー活性のある細胞壁画分を分取したものをいう。
【００１４】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤において、前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、ラクトバチルス・サケイに属する乳酸菌及びラクトバチルス・クリアタスに属する乳酸菌のうち少なくとも１以上、並びに前記植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌がペディオコッカス・ペントサセウスに属する乳酸菌であることが好ましい。
【００１５】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤の形態としては、すんき漬などの植物からの分離物を液体状、粉末状、顆粒状及びタブレット状などに加工されたものの他、すんき漬などの植物から分離せずに、その植物そのものを加工したものであっても良い。特に、すんき漬の発酵条件により多くの腸管免疫活性化機能やＩｇＡ抗体産生促進機能を得ることができる。植物そのものを加工したものとして、例えば乾燥させて切断されたものや、粉末化されたものがある。
【００１６】
本発明に係る食品として、菌株又はそれを含む発酵物を種菌として食物を発酵させたものがある。これら発酵食品として、例えばヨーグルトや漬物、発酵飲料などがある。また、本発明に係る食品としては、これらの他に錠剤状又はカプセル状の健康食品、アメやガムなどの菓子類、飲料、パン又は麺など多くの用途に用いることができる。さらに、動物飼料としては、家畜飼料やペットフードなどに用いることができ、医薬品として、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤などに用いることができる医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤である。
【実施例】
【００１７】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤の実施例について、説明する。すんき漬の一部を乳酸菌用集積培地で集積培養後、滅菌生理食塩水で任意に希釈し、薬剤を添加した乳酸菌分離用寒天培地（ＧＹＰ白亜寒天培地）で培養して乳酸菌の分離を行った。乳酸菌分離用寒天培地上に検出されたコロニーを個々に純培養し、常法によりグラム染色や顕微鏡による形態観察を行った後、細菌同定検査キット（アピ５０ＣＨＬ（日本ビオメリュー（株））で乳酸菌の確認を行った。さらに、１６ＳｒＲＮＡをコードするＳＳＵ ｒＤＮＡのＰＣＲ産物のシークエンスを行い、その塩基配列より乳酸菌の同定を行った。以上の方法ですんき漬より分離、同定した乳酸菌５５菌株を表１及び２に示す。また、分離した乳酸菌をＭＲＳ培地（ＯＸＩＯＩＤ）でそれぞれ純培養し、集菌、洗浄、殺菌後凍結乾燥により実施例１乃至５５に係る乳酸菌粉末を作製した。
【００１８】
【表１】
【００１９】
【表２】
【００２０】
実験例１
次に、１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの解剖を行い、パイエル板細胞を単離・調整した。調整したマウスパイエル板細胞に、実施例１乃至５５に係る乳酸菌粉末をそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ培地で培養を行った。培養７日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＡの抗体産生量をＥＬＩＳＡ法によって測定した。比較例として、乳酸菌無添加のものを比較例１とし、乳酸菌の替わりにＬＰＳ（グラム陰性菌細胞壁のリポ多糖）を添加したものを比較例２とし、ＣｏｎＡ（ナタ豆レクチン、コンカナバリンＡ）を添加したものを比較例３とした。その結果を表３及び４に示す。
【００２１】
【表３】
【００２２】
【表４】
【００２３】
表３及び４に示されるように、実施例１乃至５５に係る乳酸菌は、ＩｇＡの産生を促進した。
【００２４】
実験例２
次に、１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの解剖を行い、腸管からバイエル板細胞を単離・調整した。調整したマウスバイエル板細胞に、実施例１乃至５５に係る乳酸菌粉末をそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ培地で培養を行った。培養３日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＡの腸管への分泌を促すＩＦＮ−γの産生量をＥＬＩＳＡ法にて測定した。比較例として、乳酸菌無添加のものを比較例１とし、乳酸菌の替わりにＬＰＳ（グラム陰性菌細胞壁のリポ多糖）を添加したものを比較例２とし、ＣｏｎＡ（ナタ豆レクチン、コンカナバリンＡ）を添加したものを比較例３とした。その結果を表５及び６に示す。
【００２５】
【表５】
【００２６】
【表６】
【００２７】
表５及び６に示されるように、実施例１乃至５５に係る乳酸菌は、ＩＦＮ−γの産生量を促進した。
【００２８】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品として植物乳酸菌ヨーグルトを作製した。先ず、原材料となる牛乳１００部、脱脂粉乳２０部及び水５０部を均一に混合・溶解し、１１０℃、３０秒の加熱殺菌を行い、４５℃まで冷却後、実施例２に係るラクトバチルス・デルブルッキーと実施例１４に係るラクトバチルス・ブレビスの混合スタータを２０部添加し、容器に充填した後、３７℃で発酵させた。約１６時間後に発酵を終了させ、１０℃に冷却した。発酵終了時のｐＨは４．１であり、乳タンパクのゲル化によるカード（ヨーグルト）を形成していた。
【００２９】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品としてカプセル状健康食品を作製した。先ず、実施例３３に係るベディオコッカス・ペントサセウスの凍結乾燥菌体粉末１００部にデキストリン５０部を混合し、均質化した後、ゼラチンとグリセリンを主成分とするハードカプセルに充填し、封入した健康食品を得た。１カプセル当たりの乳酸菌数は１×１０１１個であった。
【００３０】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品として、乳酸発酵させた発酵茶を作製した。先ず、お茶の葉１００部を３０分間蒸煮した。蒸煮茶葉を作製し、室温まで冷却後実施例２２に係るラクトバチルス・プランタラムのスタータを１部添加し良く混合し、桶に入れ加圧密封して１０日間発酵させた。桶出し後に葉を細断乾燥することによって発酵茶を得た。一方、比較例に係るラクトバチルス・ラムノサスのスタータを使用し、同様に処理した。実施例２２に係るラクトバチルス・プランタラムが使用された発酵茶は、１ｇ当り１０×１０６個の乳酸菌を得たが、比較例として動物性乳酸菌ラクトバチルス・ラムノサス使用の発酵茶は、１ｇ当りの乳酸菌が４．０×１０２個であった。
【００３１】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた動物飼料を作製した。先ず、脱脂粉乳１０重量部とシュクロース５重量部を水１００重量部に溶解し加熱殺菌後、実施例１４に係るラクトバチルス・ブレビスのスタータを１重量部添加し、３０℃で４８時間培養した。培養液を凍結乾燥させ、２０重量部の乳酸菌発酵物を得た。この乳酸菌発酵物２０重量部に脱脂粉乳２０重量部、トウモロコシデンプン３０重量部、ビタミン剤１０重量部、固形油脂５重量部、セルロース５重量部、ミネラル剤５重量部、食塩３重量部、及び第二リン酸カルシウム２重量部を混合し、その後、成型、乾燥することによって、動物飼料を得た。この動物飼料１ｇに含まれる乳酸菌の生菌数は、２．４×１０７個であった。
【００３２】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤を作製した。先ず、脱脂粉乳１０重量部とシュクロース５重量部を水１００重量部に溶解し加熱殺菌後、実施例３５に係るラクトバチルス・サケイのスタータを１重量部添加し、３０℃で４８時間培養した。培養液を１０％の炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ６．０に中和後、凍結乾燥し、２０重量部の乳酸菌発酵物を得た。第１３改定日本薬局方解説書製剤総則「錠剤」の規定に準じ、この乳酸発酵物１０重量部に乳糖（局方）５０重両部、結晶セルロース（局方）３０重量部、コーンスターチ（局方）１０重量部、ステアリン酸マグネシウム（局方）０．３重量部を混合し、その後打錠機によって打錠することによって、錠剤状の医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤を得た。この錠剤状の医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤の１錠（０．２５ｇ）中には、６．３×１０８個の乳酸菌の生菌が含まれていた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
人体の中で、口腔、鼻腔、呼吸器官、消化管などの体の内側で外界に接している部分は、粘膜と呼ばれるバリアーで保護され、その粘膜は、外部より取り込まれた異物抗原を排除する機能を有する。特に、消化器官である腸管は、人間の食事や飲水といった生命活動により、常に病原菌、アレルギー物質及び環境ホルモンなどの有害物質に暴露されている。近年、食生活の変化、ストレス又は加齢による腸内細菌叢の悪化などの原因によって、腸管免疫が低下し、感染症、アレルギー、潰瘍又は癌などの疾患を引き起こす人が増加している。
【０００３】
多くの感染症の場合、抗原となる細菌やウィルスなどが粘膜上皮に定着し、さらに上皮細胞内に侵入することにより、疾患が引き起こされる。粘膜上では病原体の侵入を防止するため、特別な種類の抗体であるイムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）が分泌される。ＩｇＡ抗体は、パイエル板やリンパ小節の細胞により誘導・生産される２量体又は多量体の抗体で、ポリＩｇレセプター（ｐＩｇＲ）で分泌成分（ＳＣ）と結合し分泌型ＩｇＡとなり上皮細胞により粘膜分泌物中に運ばれ、病原体を架橋、被覆し細胞内への侵入を阻止する。ＩｇＡ抗体を粘膜分泌物中に分泌するには、ＳＣと結合する必要があるが、このＳＣを誘導するのが、Ｉ型ヘルパーＴ細胞が生産するインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）である。したがって、病原体を効率良く除去するには、ＩｇＡの産生を増加させるとともに、ＳＣの産生も増加させる必要がある。
【０００４】
ところで、乳酸菌の免疫調節機能については、近年、人腸内の乳酸菌や発酵乳由来のいわゆる動物性乳酸菌について、様々な研究が行われている。例えば、乳製品由来のLactobacillus paracaseiの抗アレルギー作用（特許文献１）やラクトコッカス・ラクティスの抗アレルギー作用（特許文献２）、エンテロコッカス・フェカリス及びラクトバチルス・ロイテリーの抗アレルギー作用（特許文献３）、ラクトバチルス・アシドフィルスの免疫機能調節効果（特許文献４）、ラクトバリルス・ラムノサスの免疫増強作用（特許文献５）等が知られている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１３９１６０号公報
【特許文献２】特開２００４−１８４６９号公報
【特許文献３】特開２０００−９５６９７号公報
【特許文献４】特開２００４−２７７３８１号公報
【特許文献５】特表２００１−５１３９９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、動物由来の乳酸菌は、生物活性が十分でないという問題がある。一方、植物由来の乳酸菌の分離や生理機能についての研究は、ほとんどされていない。
【０００７】
そこで、本発明は、動物由来の乳酸菌に比べて腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用が十分な植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
以上の目的を達成するため、本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物が、動物由来の動物性乳酸菌に比べて十分な腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用を有することを見出した。すなわち、本発明は、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする腸管免疫活性化剤である。また、本発明は、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とし、前記乳酸菌がパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用を有するＩｇＡ抗体産生促進剤である。さらに、本発明は、これら腸管免疫活性化剤又はＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品、動物飼料及び医薬品である。
【発明の効果】
【０００９】
以上のように本発明によれば、動物由来の乳酸菌に比べて腸管免疫活性化作用やパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用が十分な植物由来の乳酸菌を有効成分とする腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤、並びにこれらが含まれた食品、動物飼料及び医薬品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
植物由来の植物性乳酸菌は、動物性乳酸菌に比べ貧栄養状態での生育が可能で、生育温度やｐＨ等の環境要因もより過酷な条件で増殖できる。また、動物性乳酸菌が乳や畜肉のみを発酵するのに対し、植物性乳酸菌は、野菜、果実類、穀物、豆類、海藻類等幅広い食物を発酵させることが可能である。
【００１１】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤に含まれる植物性乳酸菌は、すんき漬から分離されていることが好ましい。すんき漬とは、長野県の木曽地方で生産・食されている漬物のことをいい、その製造においては、塩を一切使用せず、乳酸発酵によってのみ味付けを行い、日持ちを向上させるという特徴を有する。すんき漬から植物性乳酸菌は、既知の方法により分離することができる。例えば、漬け汁中に遊離している乳酸菌を乳酸菌分離用培地で分離する方法、または、漬け汁を集積培養後に乳酸菌分離用培地で分離する方法、漬物を集積培養し乳酸菌分離用培地で分離する方法、漬物に付着した乳酸菌を攪拌やホモジナイズ、超音波等で処理後、乳酸菌分離用培地で分離する方法、すんき漬の漬け種から分離する方法等である。
【００１２】
本発明に係る腸管免疫活性化剤において、腸管免疫活性化作用には、腸管免疫組織、例えばパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用や、ＩｇＡの分泌を担う分泌成分の産生を誘導するＩＦＮ−γの産生を増強する腸管免疫活性化作用などがあり、従来の動物性乳酸菌と比べると、これらの生理活性が高いという特徴を有する。
【００１３】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤において、植物性乳酸菌の生菌とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌を培養した培養液、その集菌物、凍結乾燥やスプレードライ等により乾燥させた植物性乳酸菌の粉末、顆粒、タブレット状の物で、乳酸菌増殖用の培地に接種した時、増殖する能力を有する物をいい、死菌とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌を培養した培養液を加熱、抗菌剤等の薬剤処理、電子線、紫外線、放射線等の物理的処理で殺菌したものをいい、菌体処理物とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌の菌体を、酵素処理やホモジナイズ、超音波処理等の方法で破壊した破砕物、または免疫機能調節活性や抗アレルギー活性のある細胞壁画分を分取したものをいう。
【００１４】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤において、前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、ラクトバチルス・サケイに属する乳酸菌及びラクトバチルス・クリアタスに属する乳酸菌のうち少なくとも１以上、並びに前記植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌がペディオコッカス・ペントサセウスに属する乳酸菌であることが好ましい。
【００１５】
本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤の形態としては、すんき漬などの植物からの分離物を液体状、粉末状、顆粒状及びタブレット状などに加工されたものの他、すんき漬などの植物から分離せずに、その植物そのものを加工したものであっても良い。特に、すんき漬の発酵条件により多くの腸管免疫活性化機能やＩｇＡ抗体産生促進機能を得ることができる。植物そのものを加工したものとして、例えば乾燥させて切断されたものや、粉末化されたものがある。
【００１６】
本発明に係る食品として、菌株又はそれを含む発酵物を種菌として食物を発酵させたものがある。これら発酵食品として、例えばヨーグルトや漬物、発酵飲料などがある。また、本発明に係る食品としては、これらの他に錠剤状又はカプセル状の健康食品、アメやガムなどの菓子類、飲料、パン又は麺など多くの用途に用いることができる。さらに、動物飼料としては、家畜飼料やペットフードなどに用いることができ、医薬品として、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤などに用いることができる医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤である。
【実施例】
【００１７】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤の実施例について、説明する。すんき漬の一部を乳酸菌用集積培地で集積培養後、滅菌生理食塩水で任意に希釈し、薬剤を添加した乳酸菌分離用寒天培地（ＧＹＰ白亜寒天培地）で培養して乳酸菌の分離を行った。乳酸菌分離用寒天培地上に検出されたコロニーを個々に純培養し、常法によりグラム染色や顕微鏡による形態観察を行った後、細菌同定検査キット（アピ５０ＣＨＬ（日本ビオメリュー（株））で乳酸菌の確認を行った。さらに、１６ＳｒＲＮＡをコードするＳＳＵ ｒＤＮＡのＰＣＲ産物のシークエンスを行い、その塩基配列より乳酸菌の同定を行った。以上の方法ですんき漬より分離、同定した乳酸菌５５菌株を表１及び２に示す。また、分離した乳酸菌をＭＲＳ培地（ＯＸＩＯＩＤ）でそれぞれ純培養し、集菌、洗浄、殺菌後凍結乾燥により実施例１乃至５５に係る乳酸菌粉末を作製した。
【００１８】
【表１】
【００１９】
【表２】
【００２０】
実験例１
次に、１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの解剖を行い、パイエル板細胞を単離・調整した。調整したマウスパイエル板細胞に、実施例１乃至５５に係る乳酸菌粉末をそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ培地で培養を行った。培養７日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＡの抗体産生量をＥＬＩＳＡ法によって測定した。比較例として、乳酸菌無添加のものを比較例１とし、乳酸菌の替わりにＬＰＳ（グラム陰性菌細胞壁のリポ多糖）を添加したものを比較例２とし、ＣｏｎＡ（ナタ豆レクチン、コンカナバリンＡ）を添加したものを比較例３とした。その結果を表３及び４に示す。
【００２１】
【表３】
【００２２】
【表４】
【００２３】
表３及び４に示されるように、実施例１乃至５５に係る乳酸菌は、ＩｇＡの産生を促進した。
【００２４】
実験例２
次に、１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの解剖を行い、腸管からバイエル板細胞を単離・調整した。調整したマウスバイエル板細胞に、実施例１乃至５５に係る乳酸菌粉末をそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ培地で培養を行った。培養３日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＡの腸管への分泌を促すＩＦＮ−γの産生量をＥＬＩＳＡ法にて測定した。比較例として、乳酸菌無添加のものを比較例１とし、乳酸菌の替わりにＬＰＳ（グラム陰性菌細胞壁のリポ多糖）を添加したものを比較例２とし、ＣｏｎＡ（ナタ豆レクチン、コンカナバリンＡ）を添加したものを比較例３とした。その結果を表５及び６に示す。
【００２５】
【表５】
【００２６】
【表６】
【００２７】
表５及び６に示されるように、実施例１乃至５５に係る乳酸菌は、ＩＦＮ−γの産生量を促進した。
【００２８】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品として植物乳酸菌ヨーグルトを作製した。先ず、原材料となる牛乳１００部、脱脂粉乳２０部及び水５０部を均一に混合・溶解し、１１０℃、３０秒の加熱殺菌を行い、４５℃まで冷却後、実施例２に係るラクトバチルス・デルブルッキーと実施例１４に係るラクトバチルス・ブレビスの混合スタータを２０部添加し、容器に充填した後、３７℃で発酵させた。約１６時間後に発酵を終了させ、１０℃に冷却した。発酵終了時のｐＨは４．１であり、乳タンパクのゲル化によるカード（ヨーグルト）を形成していた。
【００２９】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品としてカプセル状健康食品を作製した。先ず、実施例３３に係るベディオコッカス・ペントサセウスの凍結乾燥菌体粉末１００部にデキストリン５０部を混合し、均質化した後、ゼラチンとグリセリンを主成分とするハードカプセルに充填し、封入した健康食品を得た。１カプセル当たりの乳酸菌数は１×１０１１個であった。
【００３０】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた食品として、乳酸発酵させた発酵茶を作製した。先ず、お茶の葉１００部を３０分間蒸煮した。蒸煮茶葉を作製し、室温まで冷却後実施例２２に係るラクトバチルス・プランタラムのスタータを１部添加し良く混合し、桶に入れ加圧密封して１０日間発酵させた。桶出し後に葉を細断乾燥することによって発酵茶を得た。一方、比較例に係るラクトバチルス・ラムノサスのスタータを使用し、同様に処理した。実施例２２に係るラクトバチルス・プランタラムが使用された発酵茶は、１ｇ当り１０×１０６個の乳酸菌を得たが、比較例として動物性乳酸菌ラクトバチルス・ラムノサス使用の発酵茶は、１ｇ当りの乳酸菌が４．０×１０２個であった。
【００３１】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた動物飼料を作製した。先ず、脱脂粉乳１０重量部とシュクロース５重量部を水１００重量部に溶解し加熱殺菌後、実施例１４に係るラクトバチルス・ブレビスのスタータを１重量部添加し、３０℃で４８時間培養した。培養液を凍結乾燥させ、２０重量部の乳酸菌発酵物を得た。この乳酸菌発酵物２０重量部に脱脂粉乳２０重量部、トウモロコシデンプン３０重量部、ビタミン剤１０重量部、固形油脂５重量部、セルロース５重量部、ミネラル剤５重量部、食塩３重量部、及び第二リン酸カルシウム２重量部を混合し、その後、成型、乾燥することによって、動物飼料を得た。この動物飼料１ｇに含まれる乳酸菌の生菌数は、２．４×１０７個であった。
【００３２】
次に、本発明に係る腸管免疫活性化剤及びＩｇＡ抗体産生促進剤が含まれた医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤を作製した。先ず、脱脂粉乳１０重量部とシュクロース５重量部を水１００重量部に溶解し加熱殺菌後、実施例３５に係るラクトバチルス・サケイのスタータを１重量部添加し、３０℃で４８時間培養した。培養液を１０％の炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ６．０に中和後、凍結乾燥し、２０重量部の乳酸菌発酵物を得た。第１３改定日本薬局方解説書製剤総則「錠剤」の規定に準じ、この乳酸発酵物１０重量部に乳糖（局方）５０重両部、結晶セルロース（局方）３０重量部、コーンスターチ（局方）１０重量部、ステアリン酸マグネシウム（局方）０．３重量部を混合し、その後打錠機によって打錠することによって、錠剤状の医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤を得た。この錠剤状の医療用腸管免疫活性化剤及び医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤の１錠（０．２５ｇ）中には、６．３×１０８個の乳酸菌の生菌が含まれていた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする腸管免疫活性化剤。
【請求項２】
前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、ラクトバチルス・サケイに属する乳酸菌及びラクトバチルス・クリアタスに属する乳酸菌のうち少なくとも１以上、並びに前記植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌がペディオコッカス・ペントサセウスに属する乳酸菌であることを特徴とする請求項１記載の腸管免疫活性化剤。
【請求項３】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とし、前記乳酸菌がパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用を有するＩｇＡ抗体産生促進剤。
【請求項４】
前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、ラクトバチルス・サケイに属する乳酸菌及びラクトバチルス・クリアタスに属する乳酸菌のうち少なくとも１以上、並びに前記植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌がペディオコッカス・ペントサセウスに属する乳酸菌であることを特徴とする請求項３記載のＩｇＡ抗体産生促進剤。
【請求項５】
請求項１若しくは２記載の腸管免疫活性化剤、又は請求項３若しくは４記載のＩｇＡ抗体産生促進剤を含むことを特徴とする食品。
【請求項６】
請求項１若しくは２記載の腸管免疫活性化剤、又は請求項３若しくは４記載のＩｇＡ抗体産生促進剤を含むことを特徴とする動物飼料。
【請求項７】
請求項１若しくは２記載の腸管免疫活性化剤を含むことを特徴とする医療用腸管免疫活性化剤。
【請求項８】
請求項３若しくは４記載のＩｇＡ抗体産生促進剤を含むことを特徴とする医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤。
【請求項１】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする腸管免疫活性化剤。
【請求項２】
前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、ラクトバチルス・サケイに属する乳酸菌及びラクトバチルス・クリアタスに属する乳酸菌のうち少なくとも１以上、並びに前記植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌がペディオコッカス・ペントサセウスに属する乳酸菌であることを特徴とする請求項１記載の腸管免疫活性化剤。
【請求項３】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とし、前記乳酸菌がパイエル板細胞のＩｇＡ抗体産生促進作用を有するＩｇＡ抗体産生促進剤。
【請求項４】
前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、ラクトバチルス・サケイに属する乳酸菌及びラクトバチルス・クリアタスに属する乳酸菌のうち少なくとも１以上、並びに前記植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌がペディオコッカス・ペントサセウスに属する乳酸菌であることを特徴とする請求項３記載のＩｇＡ抗体産生促進剤。
【請求項５】
請求項１若しくは２記載の腸管免疫活性化剤、又は請求項３若しくは４記載のＩｇＡ抗体産生促進剤を含むことを特徴とする食品。
【請求項６】
請求項１若しくは２記載の腸管免疫活性化剤、又は請求項３若しくは４記載のＩｇＡ抗体産生促進剤を含むことを特徴とする動物飼料。
【請求項７】
請求項１若しくは２記載の腸管免疫活性化剤を含むことを特徴とする医療用腸管免疫活性化剤。
【請求項８】
請求項３若しくは４記載のＩｇＡ抗体産生促進剤を含むことを特徴とする医療用ＩｇＡ抗体産生促進剤。
【公開番号】特開２００７−３０８４１９（Ｐ２００７−３０８４１９Ａ）
【公開日】平成１９年１１月２９日（２００７．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１３８８３２（Ｐ２００６−１３８８３２）
【出願日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【出願人】（５０４１８０２３９）国立大学法人信州大学 (759)
【出願人】（０００１１８６１５）伊那食品工業株式会社 (95)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１１月２９日（２００７．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【出願人】（５０４１８０２３９）国立大学法人信州大学 (759)
【出願人】（０００１１８６１５）伊那食品工業株式会社 (95)
【Ｆターム（参考）】
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