膵臓癌のバイオマーカー並びにこれらの化合物を使用して膵臓癌を検出するための方法が記載される。本方法を使用して、患者の健康状態若しくは健康状態の変化を診断するか、又は膵臓癌を発症するリスク若しくはその存在を診断することができる。本方法は、患者由来の試料を分析して、１種又は２種以上の代謝産物マーカーの定量化データを得ることと、かかる定量化データを、１種又は２種以上の参照試料について得られた対応するデータと比較して、試料中の代謝産物マーカー（単数又は複数）のレベルの異常を同定することと、異常が観察される場合には診断を行うこととを含む。本方法を実施するための標準物質及びキットも記載される。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオマーカー並びに疾患及び生理学的状態を検出する方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、膵臓癌のバイオマーカー並びにこれらの化合物を使用して疾患及び生理学的状態、特に、膵臓癌を検出するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
膵臓癌の発生率は、過去数十年の間に世界中で増大し、北米及び欧州連合において、それぞれ癌の主な原因の第４位及び第６位である（Boyle, P., and J. Ferlay. 2005. Cancer incidence and mortality in Europe, 2004. Ann Oncol 16: 481-488）。この高い位置づけは、極めて悪い全生存（ＯＳ）率（４％未満）によるものであり、これは、死亡率とほぼ同一の膵臓癌の年間発生率によって示される。例えば、カナダでは、２００８年には、３８００の新規症例が診断されると予測され、この癌から３７００の死亡が見込まれた。
【０００３】
診断は、初期段階では目立った症状がなく、兆候が多数のその他の病気と共通しているために困難である。さらに、その他の臓器の後ろにある膵臓の位置が、そのイメージングをより困難にしている。診断は、普通、癌が既にその他の臓器に広まった時点で実施される。この遅い検出と相まって、膵臓癌は、従来使用されるような化学療法、放射線療法及び手術に対して反応が乏しい。進行した膵臓癌の患者については、ＯＳ率は、５年で１％未満であるのに対し、手術が可能である初期段階に診断された稀な患者については、摘出後のＯＳ率は、２０％に上る（Dabritz, J., R. Preston, J. Hanfler, and H. Oettle. 2009. Follow-up study of K-ras mutations in the plasma of patients with pancreatic cancer: correlation with clinical features and carbohydrate antigen 19-9. Pancreas 38: 534-541）。これらの数字は、膵臓癌の初期検出及び新規治療コンセプトの必要性を強調する。
【０００４】
本検出法は、大部分はイメージングによるものであり、表１に要約される。
【０００５】
【表１】

【０００６】
現在利用可能な、最も高感度の、特異的なスクリーニングツールは、内視鏡的超音波であると思われるが（Klapman, J., and M. P. Malafa. 2008. Early detection of pancreatic cancer: why, who, and how to screen. Cancer Control. 15: 280-287、Helmstaedter, L., and J. F. Riemann. 2008. Pancreatic cancer--EUS and early diagnosis. Langenbecks Arch Surg 393: 923-927）、その侵襲的特徴のために、ハイリスク集団、すなわち、最小で２人の冒された第一度親族を有するか、又は既知遺伝性膵臓癌を有する家系のスクリーニングへのその使用は制限される。内視鏡的超音波の別の不便さは、その使用が、コンピュータ断層撮影法及び内視鏡的逆行性胆管膵臓造影法（Gemmel, C., A. Eickhoff, L. Helmstadter, and J. F. Riemann. 2009. Pancreatic cancer screening: state of the art. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 3: 89-96）などのその他の方法と関連付けられることが推奨されるということである。診断は、もっぱら、生検の分析で確認される。したがって、侵襲性であることに加え、この多段階検出及び診断プロセスは、既に発生した腫瘍の存在を立証するだけであって、癌を発生するリスクを同定するものではない。
【０００７】
血液ベースの腫瘍マーカーの検索では、ゲノミクス、プロテオミクス、メタボロミクス及びグライコミクスなどの新規技術が使用されており、すべての種類の癌における主要な腫瘍マーカーとして、糖タンパク質、より詳しくは、高度にグリコシル化されたムチンが同定されている（Peracaula, R., S. Barrabes, A. Sarrats, P. M. Rudd, and R. de Llorens. 2008. Altered glycosylation in tumours focused to cancer diagnosis. Dis Markers 25: 207-218）。特異的モノクローナル抗体によって検出され得るこれらの高度にグリコシル化されたムチンの中でも、癌抗原１９−９（ＣＡ１９−９）は、主に、膵臓癌及び胆道癌において存在するが、その他の悪性腫瘍（例えば、結腸直腸癌）並びに硬変及び膵炎などの良性状態の患者においても存在する。ＣＡ１９−９は、ほとんどの膵臓癌血清試料におけるプロテオミクス研究において検出されている（Ehmann, M., K. Felix, D. Hartmann, M. Schnolzer, M. Nees, S. Vorderwulbecke, R. Bogumil, M. W. Buchler, and H. Friess. 2007. Identification of potential markers for the detection of pancreatic cancer through comparative serum protein expression profiling. Pancreas 34: 205-214など）が、その低い特異性のために、それは膵臓癌バイオマーカーとしては推奨されない。逸話的には、今までのところ、膵臓癌の別のグリコシル化関連潜在的バイオマーカーが、ＲＮアーゼＩの二分岐グリカンのコアフコシル化（core fusylation）であり、これは、２人の膵臓癌患者の血清において、２人の健常な対照に対して４０％の増大を示した（Barrabes, S., L. Pages-Pons, C. M. Radcliffe, G. Tabares, E. Fort, L. Royle, D. J. Harvey, M. Moenner, R. A. Dwek, P. M. Rudd, R. De Llorens, and R. Peracaula. 2008. Glycosylation of serum ribonuclease 1 indicates a major endothelial origin and reveals an increase in core fucosylation in pancreatic cancer. Glycobiology 17: 388-400）。
【０００８】
膵臓癌の別の周知の血清マーカーとして、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）があり、平均の報告される感度及び特異性が両方とも６５％である（Ehmann, M., K. Felix, D. Hartmann, M. Schnolzer, M. Nees, S. Vorderwulbecke, R. Bogumil, M. W. Buchler, and H. Friess. 2007. Identification of potential markers for the detection of pancreatic cancer through comparative serum protein expression profiling. Pancreas 34: 205-214）。ＨＩＰ／ＰＡＰ−Ｉ及びＭＩＣ−１（マクロファージ阻害性サイトカインＩ）もまた、古典的な血清マーカーである（Koopmann, J., C. N. White Rosenzweig, Z. Zhang, M. I. Canto, D. A. Brown, M. Hunter, C. Yeo, D. W. Chan, S. N. Breit, and M. Goggins. 2006. Serum Markers in Patients with Resectable Pancreatic Adenocarcinoma: Macrophage Inhibitory Cytokine 1 versus CA19-9 Clinical Cancer Research 12: 442-446、Rosty, C., L. Christa, S. Kuzdzal, B. W.M., M. L. Zahurak, F. Carnot, D. W. Chan, M. Canto, K. D. Lillemoe, J. L. Cameron, C. J. Yeo, R. H. Hruban, and M. Goggins. 2002. Identification of hepatocarcinoma-intestine-pancreas/pancreatitis-associated protein I as a biomarker for pancreatic ductal adenocarcinoma by protein biochip technology. Cancer research 62: 1868-1875）。ある研究によれば、ＭＩＣ−１及びＣＡ１９−９は、オステオポンチン、ＴＩＭＰ−１及びＨＩＰ／ＰＡＰ−Ｉと比較して、慢性膵炎に対する特異性の点で、（例えば、結腸癌に対してではなく）最高の感度及び特異性を有するマーカーと思われる（Koopmann, J., C. N. White Rosenzweig, Z. Zhang, M. I. Canto, D. A. Brown, M. Hunter, C. Yeo, D. W. Chan, S. N. Breit, and M. Goggins. 2006. Serum Markers in Patients with Resectable Pancreatic Adenocarcinoma: Macrophage Inhibitory Cytokine 1 versus CA19-9 Clinical Cancer Research 12: 442-446）。
【０００９】
マーカーとしてのＣＡ１９−９の使用は、膵臓癌の突然変異状態−Ｋ−ｒａｓのような関連癌遺伝子などのその他のマーカーと組み合わせて現在推奨されている（Dabritz, J., R. Preston, J. Hanfler, and H. Oettle. 2009. Follow-up study of K-ras mutations in the plasma of patients with pancreatic cancer: correlation with clinical features and carbohydrate antigen 19-9. Pancreas 38: 534-541）。Ｋ−ｒａｓは、膵臓腺癌の７８％において突然変異されていると報告されている（Janardhan, S., P. Srivani, and G. N. Sastry. 2006. Choline kinase: an important target for cancer. Curr Med Chem 13: 1169-1186）。膵臓の発癌における分子現象は、広く研究されており（Garcea, G., C. P. Neal, C. J. Pattenden, W. P. Steward, and D. P. Berry. 2005. Molecular prognostic markers in pancreatic cancer: a systematic review. Eur J Cancer 41: 2213-2236）、Ｋ−ｒａｓに加えて、ｐ５３、ｐ２１、ｐ１６、ｐ２７、ＳＭＡＤ４及びサイクリンＤ１が、その突然変異又は発現における変更が膵臓癌と関連しているこれらの遺伝子のいくつかである（Garcea, G., C. P. Neal, C. J. Pattenden, W. P. Steward, and D. P. Berry. 2005. Molecular prognostic markers in pancreatic cancer: a systematic review. Eur J Cancer 41: 2213-2236）。しかし、予後指標としてのその適用に関する証拠は、矛盾している。例えば、ｐ５３における突然変異と生存率の低下の間の関係に関しては意見の一致はない（Garcea, G., C. P. Neal, C. J. Pattenden, W. P. Steward, and D. P. Berry. 2005. Molecular prognostic markers in pancreatic cancer: a systematic review. Eur J Cancer 41: 2213-2236）。
【００１０】
膵臓癌のマイクロＲＮＡプロファイリングも実施されており、特異的に変更されるいくつかの共通のマイクロＲＮＡが同定されている（Bloomston, M., W. L. Frankel, F. Petrocca, S. Volinia, H. Alder, J. P. Hagan, C. G. Liu, D. Bhatt, C. Taccioli, and C. M. Croce. 2007. MicroRNA expression patterns to differentiate pancreatic adenocarcinoma from normal pancreas and chronic pancreatitis. JAMA 297: 1901-1908、Szafranska, A. E., T. S. Davison, J. John, T. Cannon, B. Sipos, A. Maghnouj, E. Labourier, and S. A. Hahn. 2007. MicroRNA expression alterations are linked to tumorigenesis and non-neoplastic processes in pancreatic ductal adenocarcinoma. Oncogene 26: 4442-4452、Lee, E. J., Y. Gusev, J. Jiang, G. J. Nuovo, M. R. Lerner, W. L. Frankel, D. L. Morgan, R. G. Postier, D. J. Brackett, and T. D. Schmittgen. 2007. Expression profiling identifies microRNA signature in pancreatic cancer. Int J Cancer 120: 1046-1054）。
【００１１】
タンパク質マーカーは、ＥＬＩＳＡ（Enzｙme-linked immunosorbent assay）（酵素結合免疫吸着測定）法による簡単なスクリーニングの利点を示すので、この分野における研究は、極めて激しい。より新しいプロテオミクス研究によって、膵臓癌患者の血清においてすべて減少した、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ及びＡ−II及びトランスサイレチン（Ehmann, M., K. Felix, D. Hartmann, M. Schnolzer, M. Nees, S. Vorderwulbecke, R. Bogumil, M. W. Buchler, and H. Friess. 2007. Identification of potential markers for the detection of pancreatic cancer through comparative serum protein expression profiling. Pancreas 34: 205-214）並びに各々、癌患者由来の膵液において過剰発現されるＭＭＰ−９、ＤＪ−１及びＡ１ＢＧなどのさらなるタンパク質マーカーが同定された（Tian, M., Y. Z. Cui, G. H. Song, M. J. Zong, X. Y. Zhou, Y. R. Chen, and J. X. Han. 2008. Proteomic analysis identifies MMP-9, DJ-1 and A1BG as overexpressed proteins in pancreatic juice from pancreatic ductal adenocarcinoma patients BMC Cancer 8: 241）。
【００１２】
アポリポタンパク質の関与は、それらが脂質代謝に関与し（Warden, C. H., A. Daluiski, X. Bu, D. A. Purcell-Huynh, C. De Meester, B. H. Shieh, D. L. Puppione, R. M. Gray, G. M. Reaven, Y. D. Chen, and e. al. 1993. Evidence for linkage of the apolipoprotein A-II locus to plasma apolipoprotein A-II and free fatty acid levels in mice and humans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 90: 10886-10890）、このファミリーの他のメンバーが癌と関連しているので（Trougakos, I. P., and E. S. Gonos. 2002. Clusterin/apolipoprotein J in human aging and cancer. The international journal of biochemistry & cell biology 34: 1430-1448）、興味深い。
【００１３】
膵臓癌の患者由来の血漿及び胆汁中の脂質の脂肪酸組成も分析されているが（Zuijdgeest-van Leeuwen, S. D., M. S. van der Heijden, T. Rietveld, J. W. van den Berg, H. W. Tilanus, J. A. Burgers, J. H. Wilson, and P. C. Dagnelie. 2002. Fatty acid composition of plasma lipids in patients with pancreatic, lung and oesophageal cancer in comparison with healthy subjects. Clinical Nutrition 21: 225-230、Khan, S. A., I. J. Cox, A. V. Thillainayagam, D. S. Bansi, H. C. Thomas, and S. D. Taylor-Robinson. 2005. Proton and phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy of human bile in hepatopancreaticobiliary cancer. Eur J Gastroenterol Hepatol 17: 733-738）、これらの研究のいずれも、変更された脂質の化学的サブファミリーを詳述していない。膵臓患者由来の血漿は、脂質クラスの区別なく、側鎖１８：２（ω６）、２０：５（ω３）又は２２：５（ω３）を含有する大幅に低いレベルのリン脂質を示した（Zuijdgeest-van Leeuwen, S. D., M. S. van der Heijden, T. Rietveld, J. W. van den Berg, H. W. Tilanus, J. A. Burgers, J. H. Wilson, and P. C. Dagnelie. 2002. Fatty acid composition of plasma lipids in patients with pancreatic, lung and oesophageal cancer in comparison with healthy subjects. Clinical Nutrition 21: 225-230）。肝膵胆管（hepatopancreaticobiliary）癌患者由来の胆汁は、側鎖の区別なく、かなり低いレベルのホスファチジルコリンを含有することを見い出した（Khan, S. A., I. J. Cox, A. V. Thillainayagam, D. S. Bansi, H. C. Thomas, and S. D. Taylor-Robinson. 2005. Proton and phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy of human bile in hepatopancreaticobiliary cancer. Eur J Gastroenterol Hepatol 17: 733-738）。
【００１４】
膵臓癌患者では、真性糖尿病（ＤＭ）が高い有病率を有し、頻繁に新規発生するので、研究は、ＤＭを初期膵臓癌マーカーとして利用できるかどうかを決定することを目的としてきた（Kolb, A., S. Rieder, D. Born, N. A. Giese, T. Giese, G. Rudofsky, J. Werner, M. W. Buchler, H. Friess, I. Esposito, and J. Kleeff. 2009. Glucagon/insulin ratio as a potential biomarker for pancreatic cancer in patients with new-onset diabetes mellitus. Cancer Biol Ther 8）。膵臓癌患者の血液において、健常な対照と比較して、グルカゴン／インスリン比の２倍の増大が見られ、７．４ｎｇ／ｍＵグルカゴン／インスリンのカットオフで、膵臓癌誘発性新規発症ＤＭは、７７％感度及び６９％特異性で２型ＤＭと区別できた（Kolb, A., S. Rieder, D. Born, N. A. Giese, T. Giese, G. Rudofsky, J. Werner, M. W. Buchler, H. Friess, I. Esposito, and J. Kleeff. 2009. Glucagon/insulin ratio as a potential biomarker for pancreatic cancer in patients with new-onset diabetes mellitus. Cancer Biol Ther 8）。
【００１５】
全体的に、上記の方法は、大規模集団スクリーニングに理想的には適しておらず（複数の方法の組合せをなお最適化する場合を除いて、低いコンプライアンス又は低い感度及び特異性のいずれかのために）、ほとんどは腫瘍の形成後にのみ膵臓癌を検出できる。結果として、精密な検出方法、特に、疾患の初期段階を検出するための方法が依然として必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Boyle, P., and J. Ferlay. 2005. Cancer incidence and mortality in Europe, 2004. Ann Oncol 16: 481-488
【非特許文献２】Dabritz, J., R. Preston, J. Hanfler, and H. Oettle. 2009. Follow-up study of K-ras mutations in the plasma of patients with pancreatic cancer: correlation with clinical features and carbohydrate antigen 19-9. Pancreas 38: 534-541
【非特許文献３】Klapman, J., and M. P. Malafa. 2008. Early detection of pancreatic cancer: why, who, and how to screen. Cancer Control. 15: 280-287
【非特許文献４】Helmstaedter, L., and J. F. Riemann. 2008. Pancreatic cancer--EUS and early diagnosis. Langenbecks Arch Surg 393: 923-927
【非特許文献５】Gemmel, C., A. Eickhoff, L. Helmstadter, and J. F. Riemann. 2009. Pancreatic cancer screening: state of the art. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 3: 89-96
【非特許文献６】Peracaula, R., S. Barrabes, A. Sarrats, P. M. Rudd, and R. de Llorens. 2008. Altered glycosylation in tumours focused to cancer diagnosis. Dis Markers 25: 207-218
【非特許文献７】Ehmann, M., K. Felix, D. Hartmann, M. Schnolzer, M. Nees, S. Vorderwulbecke, R. Bogumil, M. W. Buchler, and H. Friess. 2007. Identification of potential markers for the detection of pancreatic cancer through comparative serum protein expression profiling. Pancreas 34: 205-214
【非特許文献８】Barrabes, S., L. Pages-Pons, C. M. Radcliffe, G. Tabares, E. Fort, L. Royle, D. J. Harvey, M. Moenner, R. A. Dwek, P. M. Rudd, R. De Llorens, and R. Peracaula. 2008. Glycosylation of serum ribonuclease 1 indicates a major endothelial origin and reveals an increase in core fucosylation in pancreatic cancer. Glycobiology 17: 388-400
【非特許文献９】Koopmann, J., C. N. White Rosenzweig, Z. Zhang, M. I. Canto, D. A. Brown, M. Hunter, C. Yeo, D. W. Chan, S. N. Breit, and M. Goggins. 2006. Serum Markers in Patients with Resectable Pancreatic Adenocarcinoma: Macrophage Inhibitory Cytokine 1 versus CA19-9 Clinical Cancer Research 12: 442-446
【非特許文献１０】Rosty, C., L. Christa, S. Kuzdzal, B. W.M., M. L. Zahurak, F. Carnot, D. W. Chan, M. Canto, K. D. Lillemoe, J. L. Cameron, C. J. Yeo, R. H. Hruban, and M. Goggins. 2002. Identification of hepatocarcinoma-intestine-pancreas/pancreatitis-associated protein I as a biomarker for pancreatic ductal adenocarcinoma by protein biochip technology. Cancer research 62: 1868-1875
【非特許文献１１】Janardhan, S., P. Srivani, and G. N. Sastry. 2006. Choline kinase: an important target for cancer. Curr Med Chem 13: 1169-1186
【非特許文献１２】Garcea, G., C. P. Neal, C. J. Pattenden, W. P. Steward, and D. P. Berry. 2005. Molecular prognostic markers in pancreatic cancer: a systematic review. Eur J Cancer 41: 2213-2236
【非特許文献１３】Bloomston, M., W. L. Frankel, F. Petrocca, S. Volinia, H. Alder, J. P. Hagan, C. G. Liu, D. Bhatt, C. Taccioli, and C. M. Croce. 2007. MicroRNA expression patterns to differentiate pancreatic adenocarcinoma from normal pancreas and chronic pancreatitis. JAMA 297: 1901-1908
【非特許文献１４】Szafranska, A. E., T. S. Davison, J. John, T. Cannon, B. Sipos, A. Maghnouj, E. Labourier, and S. A. Hahn. 2007. MicroRNA expression alterations are linked to tumorigenesis and non-neoplastic processes in pancreatic ductal adenocarcinoma. Oncogene 26: 4442-4452
【非特許文献１５】Lee, E. J., Y. Gusev, J. Jiang, G. J. Nuovo, M. R. Lerner, W. L. Frankel, D. L. Morgan, R. G. Postier, D. J. Brackett, and T. D. Schmittgen. 2007. Expression profiling identifies microRNA signature in pancreatic cancer. Int J Cancer 120: 1046-1054
【非特許文献１６】Tian, M., Y. Z. Cui, G. H. Song, M. J. Zong, X. Y. Zhou, Y. R. Chen, and J. X. Han. 2008. Proteomic analysis identifies MMP-9, DJ-1 and A1BG as overexpressed proteins in pancreatic juice from pancreatic ductal adenocarcinoma patientsBMC Cancer 8: 241
【非特許文献１７】Warden, C. H., A. Daluiski, X. Bu, D. A. Purcell-Huynh, C. De Meester, B. H. Shieh, D. L. Puppione, R. M. Gray, G. M. Reaven, Y. D. Chen, and e. al. 1993. Evidence for linkage of the apolipoprotein A-II locus to plasma apolipoprotein A-II and free fatty acid levels in mice and humans. Proceedings of the NationalAcademy of Sciences of the United States of America90: 10886-10890
【非特許文献１８】Trougakos, I. P., and E. S. Gonos. 2002. Clusterin/apolipoprotein J in human aging and cancer. The international journal of biochemistry & cell biology 34: 1430-1448
【非特許文献１９】Zuijdgeest-van Leeuwen, S. D., M. S. van der Heijden, T. Rietveld, J. W. van den Berg, H. W. Tilanus, J. A. Burgers, J. H. Wilson, and P. C. Dagnelie. 2002. Fatty acid composition of plasma lipids in patients with pancreatic, lung and oesophageal cancer in comparison with healthy subjects. Clinical Nutrition 21: 225-230
【非特許文献２０】Khan, S. A., I. J. Cox, A. V. Thillainayagam, D. S. Bansi, H. C. Thomas, and S. D. Taylor-Robinson. 2005. Proton and phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy of human bile in hepatopancreaticobiliary cancer. Eur J Gastroenterol Hepatol 17: 733-738
【非特許文献２１】Kolb, A., S. Rieder, D. Born, N. A. Giese, T. Giese, G. Rudofsky, J. Werner, M. W. Buchler, H. Friess, I. Esposito, and J. Kleeff. 2009. Glucagon/insulin ratio as a potential biomarker for pancreatic cancer in patients with new-onset diabetes mellitus. Cancer Biol Ther 8
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、対象において癌を検出するために有用な診断方法及び診断マーカーを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
したがって、本発明は、癌を検出又は診断するための方法及び診断マーカーに関する。このような方法及び診断マーカーは、膵臓癌を検出するのに特に有用である。
【００１９】
本発明の一態様として、対象の膵臓癌健康状態若しくは健康状態の変化を診断するか、又は対象において膵臓癌若しくは膵臓癌のリスクを診断する方法であって、
ａ）患者由来の試料を、高分解能質量分析によって分析して、精密質量強度データを得るステップと、
ｂ）精密質量強度データを、１種又は２種以上の参照試料から得た対応するデータと比較して、精密質量強度の増大又は減少を同定するステップと、
ｃ）精密質量強度の増大又は減少を使用して、前記患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断するステップと
を含み、
精密質量強度が、本明細書、例えば表５にさらに詳細に記載されるように、ダルトンで表示される水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量で、又はそれと実質的に同等な質量で測定される、方法が提供される。
【００２０】
一実施形態では、精密質量強度は、以下の質量のうち１又は２以上で測定される：７８．０５１６；８４．０５７５；１１２．０９７４；１１６．５６９６；１９１．５０５５；１９７．０８９６；２００．１３８９；２０２．０４５；２０３．１１５５；２１４．１２０４；２１４．１２０５；２３２．１３０９；２３３．１３４５；２４０．０９９７；２４３．０７１４；２４４．０５５４；２５４．１１２７；２５５．１１６１；２５６．２４０３；２６０．００３３；２６２．０８１４；２６８．１２８４；２７０．０３２３；２７０．０８６７；２７６．０９４８；２８０．２４０３；２８０．２４０４；２８１．２４３２；２８１．２４３５；２８２．２５５８；２８２．２５５９；２８３．２５９１；２８３．２５９５；２８４．９２５９；３００．１１８６；３００．２０６７；３０２．０９４５；３０２．２２２；３０２．２４５７；３０４．２３７５；３０４．２４０７；３１７．９６１３；３１８．０９３１；３２６．２０４８；３２６．２４５８；３２７．９９０２；３２８．２４０３；３２８．２４０８；３２８．２６２７；３２９．２４３９；３２９．２６５８；３３０．２５５９；３３２．１４７３；３３８．０１８９；３４８．１１９１；３５０．２２２２；３６０．１７８２；３６０．１７９２；３６１．１８２８；３６６．３５９３；３６８．１０５７；３８２．１０８３；３８２．１６０１；４１８．２２０４；４２８．２４０４；４２８．３６４７；４４６．２５２６；４４６．３３９５；４６８．２３３６；４６８．３５８１；４６８．３８０７；４６９．２３７；４６９．３６１６；４８１．３１５；４８４．３５２７；４８５．９０４；４９４．４３２１；４９５．３３２５；４９６．３３７３；５０５．３１４６；５０８．２２５６；５１７．３１４１；５１８．３２１；５１９．３２９５；５２０．４４８；５２２．４６３８；５２２．４６３９；５２３．３６６１；５２３．４６７５；５３８．４２３７；５４０．４３８１；５４１．３１３４；５４１．３３６１；５４２．３３９４；５４５．３４５４；５６２．４９６２；５６４．５１２１；５６５．３３７３；５６６．３４０３；５６９．３６８２；５７０．３７２；５７２．４７９８；５７３．４８３３；５７４．４９５２；５７５．４９８５；５７６．４７５１；５７６．５１１３；５７７．５１４９；５７８．５１６９；５７８．５２８４；５７９．５３１３；５８７．３２１４；５８８．３２６９；５８９．３３６８；５９０．３４０８；５９２．４７０９；５９４．４８５２；５９４．４８６３；５９５．４８９２；５９５．４８９７；５９６．５０１７；５９６．５０２７；５９７．５０６６；５９８．４９５５；５９９．４９９３；６００．５１１７；６０１．５１５１；６０２．５２６９；６０３．５２９７；６０６．５５９１；６０９．３２５９；６１３．３３７９；６１５．３５３５；６２７．５６５６；６２８．５４３８；６３０．７９９；６３１．７９８；６３３．３２４５；６３５．７５２５；６３６．７５３２；６４５．７９５８；６５７．７３３７；６５８．７３７２；６７０．５６９６；６７１．５７３１；６８１．５８５８；７０２．５７０９；７１５．６９５９；７１９．６２５６；７２０．６２７２；７２１．５０３５；７２３．５２０３；７２３．５２１；７２４．５２５２；７２４．５４７７；７２５．７２２８；７３３．５０５４；７３５．６５８２；７４３．５３９６；７４４．５４２５；７４５．５６３１；７４６．５１２８；７４６．５７０５；７４８．５２７；７４９．５３７４；７４９．５３８８；７５０．５４２５；７５１．５５１１；７５１．５５３９；７５２．５５７４；７５５．５４９７；７５７．５５６；７５７．５５８７；７５８．５６２；７５８．５６２６；７５９．５３８３；７５９．５７３３；７６０．５７９２；７６３．５５７８；７６５．５６７８；７６６．４７９２；７７１．５６９９；７７３．５２７６；７７４．５４１９；７７５．５５２２；７７５．５５３２；７７５．５５３２；７７７．０４０２；７７７．５７０９；７７９．５４０５；７７９．５４１６；７８０．５４５２；７８０．５４５４；７８１．５０２９；７８１．５５６６；７８２．５６１２；７８３．５６９；７８３．５７５５；７８４．５７４２；７８４．５８０６；７８５．５９１３；７８５．５９２９；７８５．５９３１；７８６．５９３；７８６．５９７２；７８７．５９８９；７９１．５８４１；７９３．７０９１；７９５．５１８１；７９６．５２１２；８０１．５１４７；８０１．５２６２；８０１．５５２３；８０２．５２９１；８０３．５３７３；８０３．５４１４；８０３．５６７７；８０４．５４２２；８０４．５４５６；８０４．５７１４；８０４．７２０８；８０５．５５４９；８０６．５６３２；８０７．５７３４；８０７．５７３９；８０７．５７６４；８０８．５７８３；８０８．５７９１；８０９．５７９６；８１０．５８６７；８１１．５７２９；８１１．６０８；８１２．６７７４；８１３．５８８８；８１９．５１７７；８２３．５４１１；８２４．６９；８２５．５５２２；８２６．５５６１；８２６．７０４７；８２７．５４０１；８２７．５６７８；８２７．７０８２；８２８．５３９７；８２８．５７２１；８２９．５５１６；８２９．５５３２；８２９．５８４３；８３０．５５９１；８３０．５８７９；８３１．５６５２；８３１．５７２；８３１．５９９７；８３２．６０３１；８３３．５８６４；８３４．５８６８；８３５．５９８；８３７．７２０９；８３８．７２８４；８３８．７４３５；８３９．７４６４；８４７．５３１；８５０．７０６１；８５０．７３２６；８５１．６６９４；８５１．７１０７；８５１．７３３７；８５２．７３６８；８５３．５７３；８５４．７３５８；８５４．７３９７；８５５．５７２１；８５５．７３９２；８５５．７４３６；８５６．７５０５；８５６．７５４；８５７．６９２３；８５７．７５４３；８５７．７５７４；８５８．７６４４；８６１．７４９；８６５．７５２；８６６．７５８５；８６７．７６４９；８６８．７７０４；８７１．５５４７；８７３．７８１９；８７４．７０６６；８７４．７８７；８７５．７１０８；８７９．７６２９；８８９．７５３７；８８９．８１４７；８９４．７９１１；８９８．７０４３；８９８．７３２５；９０２．７６２９；９０３．７６３６；９０７．７８４７；９０８．７９０７；９０９．７８８２；９１０．７２７２；９１６．７７３５；９１９．６４９６；９２１．８１３；９２２．７０８１；９２２．７２８５；９２２．８２２２；９２３．７２９５；９２４．７２３３；９２５．７２７；９３３．８１３７；９３７．７５４２；９４６．８１９４；９４７．８２６３；９４８．８３６；９５０．７３６４；９６０．７４３２；９７０．７３３；９７２．７４８１；９７３．７４８２；９８４．７４０６；９８６．７５６８；９９６．７５１８；９９７．７３９７；９９８．７５６６；９９９．７６３２；１０１０．７６５；１０１１．６６９；１０１１．７７；１０１２．７８１；１０１６．９３１；１０１７．９３５；１０１８．９４４；１０１９．９５１；１０２０．９５７；１０３８．９１５；１０３９．７０５；１０３９．９２１；１０４０．９３３；１０４１．９３５；１１９９．０８４；１２００．０８８；１２０１．０９；１２０２．０９８；１２２３．０９；１２２４．０９６；１２２５．０９６；１２２６．５９９；１２２７．１１２；１２２８．１１７；１２２９．１２；１２３０．１２５；１２４７．０８４；１２４９．１０５；１２５０．１０８；１２５１．１１９；１２５２．１２；１２５３．１２３；１２５３．１３４；１２５４．１３７及び１２５５．１５３。
【００２１】
本発明のさらなる限定されない実施形態では、精密質量強度は、５１９．３２９５、５２３．３６６１、５４１．３１３４、７０２．５７０９、７２４．５４７７、７５７．５５６、７７９．５４０５、７８３．５６９、７８５．５９１３、８０３．５３７３、８０５．５５４９、８０７．５７３４、８０９．５７９６、８１２．６７７４、８２９．５５１６、８３３．５８６４、５７６．４７５１、５９４．４８６３、５９６．５０１７又はその組合せの精密質量で測定される。このような実施形態では、比較ステップ（ｂ）において、精密質量強度の低下が一般的に同定される。
【００２２】
さらなる例示的な実施形態では、精密質量は、６００．５１１７の精密質量で測定される。このような実施形態では、比較ステップ（ｂ）において、精密質量強度の増大が同定される。
【００２３】
上記の方法では、用語「実質的に同等」とは、特定の限定されない実施形態では、水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量の±５ｐｐｍを指し、さらなる実施形態では、水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量の±１ｐｐｍを意味し得る。
【００２４】
本発明のさらなる態様として、患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断する方法であって、
ａ）患者由来の試料を分析して、１種又は２種以上の代謝産物マーカーの定量化データを得るステップと、
ｂ）１種又は２種以上の代謝産物マーカーの定量化データを、１種又は２種以上の参照試料について得られた対応するデータと比較して、試料における１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの増大又は減少を同定するステップと、
ｃ）試料における、１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの増大又は減少を使用して、患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断するステップと
を含み、
１種又は２種以上の代謝産物マーカーは、本明細書に記載されるとおりである方法が提供される。
【００２５】
一実施形態では、１種又は２種以上の代謝産物マーカーは、その組合せを含めた、以下の分子式：Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_４、Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_６、Ｃ_３６Ｈ_６８Ｏ_６、Ｃ_２２Ｈ_４６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２２Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２４Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２４Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２４Ｈ_４６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_５２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_４６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３２Ｈ_５８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３２Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３８Ｈ_７６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_７８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_７０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_３９Ｈ_８０Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４１Ｈ_８２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４１Ｈ_８４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４７Ｈ_９４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４７Ｈ_９６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）を有する１種又は２種以上の分子を含む。
【００２６】
さらなる限定されない実施形態では、代謝産物マーカーは、その付加物又は塩を含めた、下記式（Ｉ）において定義されるジアシルホスファチジルコリン、プラスマニルホスホコリン又はプラスメニルホスホコリンであり得る：
【００２７】
【化１】


(I)
【００２８】
［式中、
Ｒ_１は、グリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸又はアルコール部分であり、結合は、代謝産物マーカーがジアシルホスファチジルコリンである場合はアシル結合、代謝産物マーカーがプラスマニルホスホコリンである場合はエーテル結合、又は代謝産物マーカーがプラスメニルホスホコリンである場合はビニル−エーテル結合であり；
Ｒ_２は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸部分である］。
【００２９】
さらなる実施形態では、代謝産物マーカーは、その付加物又は塩を含めた、下記式（II）において定義される２−リゾホスファチジルコリン又は下記式（III）において定義される１−リゾホスファチジルコリンであり得る：
【００３０】
【化２】


(II)

【化３】


(III)
【００３１】
［式中、
Ｒ_１は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１４：０、１４：１、１６：０、１６：１、１６：２、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：２、２０：３、２０：４、２０：５、２０：６、２２：３、２２：４、２２：５、２２：６、２４：４、２４：６、３０：１、３２：０、３２：１、３２：２又は３２：６脂肪酸部分である］。
【００３２】
その他の限定されない実施形態では、代謝産物マーカーは、その付加物又は塩を含めた、下記式（IV）において定義されるスフィンゴミエリンであり得る：
【００３３】
【化４】


(IV)
【００３４】
［式中、破線は、任意選択の二重結合を表し、
Ｒ_１は、Ｃ_１３アルキル基であり、
Ｒ_２は、Ｃ_１１−Ｃ_２５アルキル又はアルケニル基であり、アルケニル基は、１〜３の二重結合を有する］。
【００３５】
特定の限定されない実施形態では、式（IV）のスフィンゴミエリンのＲ_２は、Ｃ_１１アルキル基、Ｃ_１３アルキル基、Ｃ_１５アルキル基、Ｃ_１７アルキル基、３つの二重結合を含むＣ_１７アルケニル基、Ｃ_１９アルキル基、Ｃ_２１アルキル基、１つの二重結合を含むＣ_２３アルケニル基、Ｃ_２３アルキル基、Ｃ_２４アルキル基、１つの二重結合を含むＣ_２５アルケニル基、Ｃ_２５アルキル基であり得る。
【００３６】
上記の方法は、１種又は２種以上の内部標準分子について、患者由来の試料を分析して、定量化データを得るステップと、１種又は２種以上の内部標準分子について得られたレベルに対する、１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの各々の比を得るステップとをさらに含み得、比較ステップ（ｂ）は、各比を、１種又は２種以上の参照試料について得られた１又は２以上の対応する比と比較するステップを含む。
【００３７】
決して制限しようとするものではないが、上記の方法は、少なくとも一部は、コンピュータの助けを借りて実施してもよいことが理解されよう。このような実施形態では、コンピュータは、分析を実施するために使用される機器と一体化されていてもよく、又は当業者の知識及び技術に従って機器からデータ出力を受け取るよう適応している別個のコンピュータであってもよい。分析ステップ（ａ）は、通常、機器、例えば、それだけには限らないが、質量分析計を使用して実施され、比較ステップ（ｂ）は、機器から精密質量強度データ又は定量化データを受け取り、試料中の１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの増大又は減少を同定するのに必要な計算を実行するようプログラムされたコンピュータ又はその他の処理手段を使用して実施される。ステップ（ｂ）からのこのデータは、顕著な増大又は減少を同定し、ステップ（ｃ）の診断を行うよう訓練された個人による使用のための出力である場合もあり、或いは、コンピュータ又は処理手段を、診断の出力を作成するようさらにプログラムしてもよい。後者の場合には、出力は、正又は負の診断因子を含み得、所望により、それだけには限らないが、統計データ、閾値データ、患者データ及びその他の詳細をはじめとするさらなる詳細を含んでもよい。データは、モニターなどのディスプレイへの、診断の詳細のコピーを作製するためにプリンターへの、データ受け取りセンターへの、又は直接、サービスプロバイダーへの、又は当業者によって理解されるいかなるその他の方法での出力であってもよい。
【００３８】
特定の実施形態では、代謝産物は、ＬｙｓｏＰＣ １４：０、ＬｙｓｏＰＣ １４：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：０、ＬｙｓｏＰＣ １６：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：０、ＬｙｓｏＰＣ １８：１、ＬｙｓｏＰＣ １８：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：１、ＬｙｓｏＰＣ ２０：２、ＬｙｓｏＰＣ ２０：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：４、ＬｙｓｏＰＣ ２０：５、ＬｙｓｏＰＣ ２０：６、ＬｙｓｏＰＣ ２２：３、ＬｙｓｏＰＣ ２２：４、ＬｙｓｏＰＣ ２２：５、ＬｙｓｏＰＣ ２２：６、ＬｙｓｏＰＣ ２４：４、ＬｙｓｏＰＣ ２４：６、ＬｙｓｏＰＣ ３０：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：０、ＬｙｓｏＰＣ ３２：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：２、ＬｙｓｏＰＣ ３２：６、又はその組合せを含めたリゾホスファチジルコリン（ＬｙｓｏＰＣ）であり得る。
【００３９】
その他の実施形態では、代謝産物は、Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐの分子式を有するホスファチジルコリン分子又はその組合せを含めたホスファチジルコリンであり得る。
【００４０】
その他の実施形態では、代謝産物は、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐの分子式を有するプラスメニルホスホコリン分子又はその組合せを含めたプラスメニルホスホコリンであり得る。
【００４１】
なおさらなる実施形態では、代謝産物は、Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_３９Ｈ_８０Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４１Ｈ_８２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４１Ｈ_８４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４７Ｈ_９４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）、又はＣ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐ（又はＣ_４７Ｈ_９６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋）の分子式を有するスフィンゴミエリン分子又はその組合せを含めたスフィンゴミエリンであり得る。
【００４２】
本明細書に記載されるように、代謝産物マーカーのレベルの変更は、ＭＳ／ＭＳ遷移によって検出され得る。例えば、分子式Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_５の代謝産物マーカーは、５７５．５／５１３．５、５７５．５／５５７．５、５７５．５／５３９．５、５７５．５／５３１．５、５７５．５／４９９．５、５７５．５／４９５．５、５７５．５／４５９．４、５７５．５／４１７．４、５７５．５／４１５．３、５７５．５／４１３．３、５７５．５／４０３．３、５７５．５／２９５．２、５７５．５／２７９．２、５７５．５／２６０．２、５７５．５／２５１．２、５７５．５／１９７．９、５７５．５／１１９．４、５７５．５／１１３．１、及び５７５．５／９７．０又はその組合せのＭＳ／ＭＳ遷移で負のイオン化モード（大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ，atmospheric pressure chemical ionization）など）において、有機抽出物のレベル変動についてモニタリングされ得る。
【００４３】
本明細書に記載される代謝産物マーカーの、負のイオン化モード（例えば、ＡＰＣＩモード）における有機抽出物のその他の有用なＭＳ／ＭＳ遷移として、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_６については５９３．５／５５７．５、５９３．５／５７５．４、５９３．５／５４９．４、５９３．５／５３１．５、５９３．５／５１３．４、５９３．５／４９５．４、５９３．５／４３３．３、５９３．５／４２１．４、５９３．５／４１５．２、５９３．５／３９１．４、５９３．５／３７１．３、５９３．５／３１５．３、５９３．５／３１１．１、５９３．５／２９７．２、５９３．５／２８１．２、５９３．５／２７７．２、５９３．５／２５１．２、５９３．５／２０１．１、５９３．５／１９５．３、５９３．５／１７１．１、５９３．５／１３９．１及び５９３．５／１３３．５、又はその組合せ；Ｃ_３６Ｈ_６８Ｏ_６については５９５．５／５５９．５、５９５．５／５７７．４、５９５．５／５５１．４、５９５．５／５３３．４、５９５．５／５１５．５、５９５．５／４９７．４、５９５．５／４７８．４、５９５．５／４３３．３、５９５．５／４２３．４、５９５．５／３９１．３、５９５．５／３７２．３、５９５．５／５９５．５／３１５．３、５９５．５／３１３．２、５９５．５／２９８．２、５９５．５／２９７．２、５９５．５／２８１．２、５９５．５／２７９．２、５９５．５／２３９．２、５９５．５／２３２．９、５９５．５／１７１．１、５９５．５／１６９．１及び５９５．５／１４１．１、又はその組合せ；Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_４については５５７．４／４９５．４、５５７．４／５３９．４、５５７．４／５１３．３、５５７．４／２７９．２、５５７．４／２７７．２、５５７．４／２２０．７及び５５７．４／１１１．２、又はその組合せ；Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５については５７３．５／５１１．４、５７３．５／５５５．３、５７３．５／５３７．４、５７３．５／５２９．４、５７３．５／５１９．４、５７３．５／４９３．３、５７３．５／４５７．４、５７３．５／４５５．３、５７３．５／４４３．４、５７３．５／４１５．４、５７３．５／４１３．３、５７３．５／４１１．３、５７３．５／３９９．３、５７３．５／３９７．３、５７３．５／３８９．７、５７３．５／２９５．２、５７３．５／２７９．２、５７３．５／２７７．２、５７３．５／２５１．２、５７３．５／２３１．１、５７３．５／２２３．１、５７３．５／２０１．１、５７３．５／１７１．１、５７３．５／１６９．１、５７３．５／１２５．１及び５７３．５／１１３．１、又はその組合せ；Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５については５７７．５／５１５．４、５７７．５／５５９．４、５７７．５／５４６．５、５７７．５／５３３．５、５７７．５／４９７．４、５７７．５／４１９．４、５７７．５／４０５．５、５７７．５／２９７．２及び５７７．５／２８１．２、又はその組合せ；Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６については５９１．５／５７３．４、５９１．５／５５５．４、５９１．５／５２８．３、５９１．５／５１１．２、５９１．５／４７６．１、５９１．５／４１９．３、５９１．５／４０３．１、５９１．５／３８７．３、５９１．５／２９７．２、５９１．５／２９５．２、５９１．５／２７４．０、５９１．５／２５５．３、５９１．５／２２３．６、５９１．５／２０３．５、５９１．５／２０１．１、５９１．５／１７１．０及び５９１．５／１２５．３、又はその組合せが挙げられる。
【００４４】
本明細書に記載される代謝産物マーカーの、正のイオン化モード（例えば、正のエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ，Electrospray Ionization））における水性抽出物のその他の有用なＭＳ／ＭＳ遷移として、Ｃ_２６Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐについては５２０．３／１８４．２；Ｃ_２６Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐについては５２４．３／１８４．２；Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐについては５４２．３／１８４．２；Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐについては７５８．６／１８４．２；Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐについては７８４．６／１８４．２；Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐについては７８６．６／１８４．２；Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐについては７８８．６／１８４．２；Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐについては７９０．６／１８４．２；Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐについては８０６．６／１８４．２；Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐについては８０８．６／１８４．２；Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐについては８１０．６／１８４．２；Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐについては８３４．６／１８４．２；Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐについては８３６．６／１８４．２；Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては７０３．６／Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては１８４．２；７２９．６／１８４．２；Ｃ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては７３１．６／１８４．２；Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては８１３．６／１８４．２；又はＣ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては８１５．６／１８４．２が挙げられる。本明細書に記載される代謝産物のさらなるＭＳ／ＭＳ遷移の詳細及びその他の特徴は、以下の発明の詳細な説明から明らかであり、本発明のさらなる限定されない実施形態においても使用され得る。
【００４５】
本明細書に記載される代謝産物マーカーの負のイオン化モード（例えば、負のＥＳＩ）における水性抽出物のその他の有用なＭＳ／ＭＳ遷移として、Ｃ_２６Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐについては５６４．３／５０４．３／２７９．３；Ｃ_２６Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐについては５６８．３／５０８．４／２８３．３；Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐについては５８６．３／５２６．３／３０１．２；Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐについては８０２．６／７４２．６／２７９．２、８０２．６／７４２．６／２８１．２、８０２．６／７４２．６／２５３．２又は８０２．６／７４２．６／２５５．２；Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐについては８２８．６／７６８．６／３０５．３、８２８．６／７６８．６／２７９．２、８２８．６／７６８．６／２８１．２又は８２８．６／７６８．６／２５５．２；Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐについては８３０．６／７７０．６／２７９．２、８３０．６／７７０．６／２８１．２又は８３０．６／７７０．６／２８３．２；Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐについては８３２．６／７７２．６／２８１．２又は８３２．６／７７２．６／２８３．２；Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐについては８３４．６／７７４．６／２８３．２；Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐについては８５０．６／７９０．６／３２７．３、８５０．６／７９０．６／２７９．２、８５０．６／７９０．６／３０３．２又は８５０．６／７９０．６／２５５．２；Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐについては８５２．６／７９２．６／３２９．３、８５２．６／７９２．６／３０１．３、８５２．６／７９２．６／３０３．２、８５２．６／７９２．６／２８１．２、８５２．６／７９２．６／２８３．２又は８５２．６／７９２．６／２５５．２；Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐについては８５４．６／７９４．６／３３１．３、８５４．６／７９４．６／３０３．２、８５４．６／７９４．６／２８３．２又は８５４．６／７９４．６／２５５．２；Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐについては８７８．６／８１８．６／３２７．３又は８７８．６／８１８．６／２８３．２；Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐについては８８０．６／８２０．６／３２９．３又は８８０．６／８２０．６／２８３．２；Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては７４７．６／６８７．６／１６８．１；Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては７７３．６／７１３．６／１６８．１；Ｃ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては７７５．６／７１５．６／１６８．１；Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては８５７．６／７９７．６／１６８．１；又はＣ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐについては８５９．６／７９９．６／１６８．１が挙げられる。本明細書に記載される代謝産物のさらなるＭＳ／ＭＳ遷移の詳細及びその他の特徴は、以下の発明の詳細な説明から明らかであり、本発明のさらなる限定されない実施形態においても使用され得る。
【００４６】
上記の方法では、精密質量強度データを、参照データと比較して、精密質量強度の増大又は減少を同定するステップ；又は代謝産物マーカーの定量化データを、参照データと比較して、代謝産物マーカーのレベルの増大又は減少を同定するステップは、特定の限定されない実施形態では、精密質量強度の変化を決定することによってか、その他の分析手段によってのいずれかで、特定のマーカー、代謝産物又は分子のレベルを決定するステップを含み得るか、そうでなければ、それと関連し得る。
【００４７】
本発明はさらに、検出剤で標識された本明細書に記載される代謝産物マーカーを含むアッセイ標準物質に関する。標準物質は、本明細書に記載される診断法を実施するのに有用であり、以下の限定されない検出剤：インビトロでの検出を可能にする安定同位体、酵素又はタンパク質のうち１種又は２種以上を含み得る。
【００４８】
特定の限定されない実施形態では、アッセイ標準物質は、代謝産物マーカーとして、その付加物又は塩を含めた、下記式（Ｉ）において定義されるジアシルホスファチジルコリン、プラスマニルホスホコリン又はプラスメニルホスホコリン：
【００４９】
【化５】


(I)
【００５０】
［式中、
Ｒ_１は、グリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸又はアルコール部分であり、結合は、代謝産物マーカーがジアシルホスファチジルコリンである場合はアシル結合、代謝産物マーカーがプラスマニルホスホコリンである場合はエーテル結合、又は代謝産物マーカーがプラスメニルホスホコリンである場合はビニル−エーテル結合であり、
Ｒ_２は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸部分である］
を含み得る。
【００５１】
さらなる実施形態では、アッセイ標準物質、代謝産物マーカーとして、その付加物又は塩を含めた、下記式（II）において定義される２−リゾホスファチジルコリン：
【００５２】
【化６】


(II)
【００５３】
及び下記式（III）において定義される１−リゾホスファチジルコリン：
【００５４】
【化７】


(III)
【００５５】
［式中、
Ｒ_１は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１４：０、１４：１、１６：０、１６：１、１６：２、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：２、２０：３、２０：４、２０：５、２０：６、２２：３、２２：４、２２：５、２２：６、２４：４、２４：６、３０：１、３２：０、３２：１、３２：２又は３２：６脂肪酸部分である］
を含み得る。
【００５６】
その他の限定されない実施形態では、アッセイ標準物質は、代謝産物マーカーとして、その付加物又は塩を含めた、下記式（IV）において定義されるスフィンゴミエリン：
【００５７】
【化８】


(IV)
【００５８】
［式中、破線は、任意選択の二重結合を表し、
Ｒ_１は、Ｃ_１３アルキル基であり、
Ｒ_２は、Ｃ_１１−Ｃ_２５アルキル又はアルケニル基であり、アルケニル基は、１〜３の二重結合を有する］
を含み得る。
【００５９】
特定の限定されない実施形態では、式（IV）のスフィンゴミエリンのＲ_２は、Ｃ_１１アルキル基、Ｃ_１３アルキル基、Ｃ_１５アルキル基、Ｃ_１７アルキル基、３つの二重結合を含むＣ_１７アルケニル基、Ｃ_１９アルキル基、Ｃ_２１アルキル基、１つの二重結合を含むＣ_２３アルケニル基、Ｃ_２３アルキル基、Ｃ_２４アルキル基、１つの二重結合を含むＣ_２５アルケニル基、又はＣ_２５アルキル基であり得る。
【００６０】
同様に限定されないものであると考えられる標準物質のさらなる実施形態では、アッセイ標準物質は、代謝産物マーカーとして、ＬｙｓｏＰＣ １４：０、ＬｙｓｏＰＣ １４：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：０、ＬｙｓｏＰＣ １６：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：０、ＬｙｓｏＰＣ １８：１、ＬｙｓｏＰＣ １８：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：１、ＬｙｓｏＰＣ ２０：２、ＬｙｓｏＰＣ ２０：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：４、ＬｙｓｏＰＣ ２０：５、ＬｙｓｏＰＣ ２０：６、ＬｙｓｏＰＣ ２２：３、ＬｙｓｏＰＣ ２２：４、ＬｙｓｏＰＣ ２２：５、ＬｙｓｏＰＣ ２２：６、ＬｙｓｏＰＣ ２４：４、ＬｙｓｏＰＣ ２４：６、ＬｙｓｏＰＣ ３０：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：０、ＬｙｓｏＰＣ ３２：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：２、又はＬｙｓｏＰＣ ３２：６を含めたリゾホスファチジルコリン（ＬｙｓｏＰＣ、１−ＬｙｓｏＰＣ又は２−ＬｙｓｏＰＣのいずれか）を含み得る。
【００６１】
本発明はさらに、分析物を定量化するか、又は本明細書に記載される診断試験を実施するための上記の標準物質及び使用説明書を含むキット又は市販のパッケージに関する。
【００６２】
本発明のこれら及びその他の特徴は、以下の図面について言及する以下の説明からより明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】実施した研究の概略的説明を提供する図である。
【図２】膵臓癌を対照から区別するすべての質量に関する主成分分析を示す図であり、ｐ値０．０５未満であり、膵臓癌試料（灰色）及び対照（黒色）間の明確な分離を示す。
【図３】２０種の最良のバイオマーカーに関する主成分分析を示す図であり、膵臓癌試料（灰色）及び対照（黒色）間の明確な分離を示し（ａ）、膵臓癌患者の血清における、対照に対するこれら２０種のバイオマーカーの相対レベル強度（ｂ）を示す。
【図４】ＦＴＩＣＲによる最初の６種の最良のバイオマーカーのＲＯＣ及び変動性チャート、すなわち、５９４．４８６３（ＡＵＣ＝０．９６）（ａ）、７８５．５９１３（ＡＵＣ＝０．９３）（ｂ）、７０２．５７０９（ＡＵＣ＝０．９１）（ｃ）、８０７．５７３４（ＡＵＣ＝０．９３）（ｄ）、５７６．４７５１（ＡＵＣ＝０．９３）（ｅ）及び５４１．３１３４（ＡＵＣ＝０．９２）（ｆ）を示す図である。
【図５】６種のＦＴＩＣＲ最良バイオマーカーの組合せのロジスティック回帰分析を示す図でありＲＯＣ曲線（ａ）及び分類表（ｂ）を含む。
【図６】Ｃ３６化合物「５７６」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図７】Ｃ３６化合物「５９４」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図８】Ｃ３６化合物「５９６」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図９】Ｃ３６化合物「５５８」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図１０】Ｃ３６化合物「５７４」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図１１】Ｃ３６化合物「５７８」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図１２】Ｃ３６化合物「５９２」のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図１３】Ｃ３６マーカー「５９４」及び「５９６」が豊富な画分の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１４】正の水性ＥＳＩモードにおける５１９．３のフラグメンテーションパターンを示す図であり、（ａ）及び（ｂ）は、異なる保持時間でのフラグメンテーションパターンに対応する。
【図１５】正の水性ＥＳＩモードにおける５２３．３のフラグメンテーションパターンを示す図であり、（ａ）及び（ｂ）は、異なる保持時間でのフラグメンテーションパターンに対応する。
【図１６】正の水性ＥＳＩモードにおける５４１．３のフラグメンテーションパターンを示す図であり、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）は、異なる保持時間でのフラグメンテーションパターンに対応する。
【図１７】正の水性ＥＳＩモードにおける７５７．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図１８】正の水性ＥＳＩモードにおける７７９．５のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図１９】正の水性ＥＳＩモードにおける７８３．６のフラグメンテーションパターンを示す図であり、コリンフラグメント（ａ）、（ｂ）、（ｃ）を有する３種の保持時間を示す。
【図２０】正の水性ＥＳＩモードにおける７８５．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図２１】正の水性ＥＳＩモードにおける８０３．５のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図２２】正の水性ＥＳＩモードにおける８０５．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図２３】正の水性ＥＳＩモードにおける８０７．６のフラグメンテーションパターンを示す図であり、コリンフラグメント（ａ）、（ｂ）を有する２種の保持時間を示す。
【図２４】正の水性ＥＳＩモードにおける８０９．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図２５】正の水性ＥＳＩモードにおける８２９．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図２６】正の水性ＥＳＩモードにおける８３３．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図２７】負の水性ＥＳＩモードにおけるギ酸付加物としての「７５７．６」のフラグメンテーションパターンを示す図であり、２つの主な側鎖１６：０（ｍ／ｚ２５５．２）及び１８：２（ｍ／ｚ２７９．２）を示す。したがって、「７５７．６」は、ＰｔｄＣｈｏ １６：０／１８：２及びＰｔｄＣｈｏ １８：２／１６：０である。
【図２８】負の水性ＥＳＩモードにおけるギ酸付加物としての「７７９．６」のフラグメンテーションパターンを示す図であり、最も豊富なものとして側鎖１６：０（ｍ／ｚ２５５．２）、２０：５（ｍ／ｚ３０１．２）及び２０：４（ｍ／ｚ３０３．２）を示す。したがって、「７７９．６」は、ほとんどＰｔｄＣｈｏ １６：０／２０：５、ＰｔｄＣｈｏ ２０：５／１６：０及びＰｔｄＣｈｏ １８：２／２０：４である。
【図２９】負のＥＳＩ水性モードにおけるギ酸付加物としての「７８３．６」のフラグメンテーションパターンを示す図であり、最も豊富なものとして側鎖２０：３（ｍ／ｚ３０５．２）、１８：２（ｍ／ｚ２７９．２）、１８：１（ｍ／ｚ２８１．２）及び１６：０（ｍ／ｚ２５５．２）を示す。したがって、「７８３．６」は、ほとんどＰｔｄＣｈｏ １６：０／２０：３及びＰｔｄＣｈｏ １８：１／１８：２である。
【図３０】負の水性ＥＳＩモードにおけるギ酸付加物としての「７８５．６」のフラグメンテーションパターンを示す図であり、１つのパターン（ａ）では２つの側鎖１８：０（ｍ／ｚ２８３．３）及び１８：２（ｍ／ｚ２７９．２）を示し、もう１つのパターン（ｂ）では１つの主な側鎖１８：１（ｍ／ｚ２８１．２）を示す。したがって、「７８５．６」は、ＰｔｄＣｈｏ １８：０／１８：２及びＰｔｄＣｈｏ １８：１／１８：１である。
【図３１】種々の保持時間（ａ〜ｄ）で、負の水性ＥＳＩモードにおけるギ酸付加物としての「８０５．６」のフラグメンテーションパターンを示す図である。種々の側鎖、１６：０（ｍ／ｚ２５５．２）、２２：６（ｍ／ｚ３２７．３）、１８：２（ｍ／ｚ２７９．３）及び２０：４（ｍ／ｚ３０３．２）によって、「８０５．６」は、ＰｔｄＣｈｏ ２２：６／１６：０及びＰｔｄＣｈｏ ２０：４／１８：２）と同定される。
【図３２】種々の保持時間（ａ〜ｃ）で、負の水性ＥＳＩモードにおけるギ酸付加物としての「８０７．６」のフラグメンテーションパターンを示す図である。種々の側鎖、１８：０（ｍ／ｚ２８３．２）、２０：５（ｍ／ｚ３０１．２）、１６：０（ｍ／ｚ２５５．２）、２２：５（ｍ／ｚ３２９．３）、１８：１（ｍ／ｚ２８１．３）及び２０：４（ｍ／ｚ３０３．２）によって、「８０７．６」は、ＰｔｄＣｈｏ １８：０／２０：５、ＰｔｄＣｈｏ １６：０／２２：５、ＰｔｄＣｈｏ ２２：５／１６：０及びＰｔｄＣｈｏ １８：１／２０：４と同定される。
【図３３】正の水性ＥＳＩモードにおける７０２．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図３４】正の水性ＥＳＩモードにおける８１２．７のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図３５】正の水性ＥＳＩモードにおける７２４．６のフラグメンテーションパターンを示す図である。
【図３６】対照試料水性抽出物における負のＥＳＩ分析モードにおけるギ酸付加物としての７０２．６のフラグメンテーションパターンを示す図である（ｍ／ｚ７４７．６）。
【図３７】負のＥＳＩ分析モードにおけるギ酸付加物としての合成ＳＭ（ｄ１８：１／１６：０）（Avanti Polar Lipids社製、カタログ８６０５８４）のフラグメンテーションパターンを示す図である（ｍ／ｚ７４７．６）。
【図３８】対照試料水性抽出物における負のＥＳＩ分析モードにおけるギ酸付加物としての８１２．７のフラグメンテーションパターンを示す図である（ｍ／ｚ８５７．７）。
【図３９】負のＥＳＩ分析モードにおけるギ酸付加物としての合成ＳＭ（ｄ１８：１／２４：１（１５Ｚ））（Avanti Polar Lipids社製、カタログ８６０５９３）のフラグメンテーションパターンを示す図である（ｍ／ｚ８５７．７）。
【図４０】正のＡＰＣＩにおける６００．５１１７有機抽出物のフラグメンテーションを示す図である。
【図４１】エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）分析による、対照に対する、膵臓癌患者の血清中のＬｙｓｏＰＣ１８：０（質量５２３．４）、ＬｙｓｏＰＣ１８：２（質量５１９．３）及びＬｙｓｏＰＣ２０：５（質量５４１．３）及びさらなるＬｙｓｏＰＣの相対レベルを示す図である。（ａ）側鎖に１４、１６及び１８個の炭素を有するＬｙｓｏＰＣ、（ｂ）側鎖に２０、２２及び２４個の炭素を有するＬｙｓｏＰＣ、（ｃ）側鎖に３０及び３２個の炭素を有するＬｙｓｏＰＣ、及び（ｄ）側鎖に１４、１６、１８、２０及び２２個の炭素を有するＬｙｓｏＰＣ。正のＥＳＩ分析モードにおける（ａ）〜（ｃ）及び負のＥＳＩ分析モードにおける（ｄ）。
【図４２】対照に対する、膵臓癌患者の血清における、正のＥＳＩ分析モードにおけるその親質量によって名づけられた１３種のＰｔｄＣｈｏ（ａ）、負のＥＳＩモードにおける２７種のＰｔｄＣｈｏ（ｂ）、及び正のＥＳＩモードにおけるその親質量によって名づけられた１２種のＰｌｓＣｈｏ（ｃ）の相対ＭＲＭレベルを示す図である。
【図４３】対照に対する、膵臓癌患者の血清における、５種のスフィンゴミエリンの相対ＭＲＭレベルを示す図である。
【図４４】対照に対する、膵臓癌患者の血清における、Ｃ３６マーカーの相対レベルを示す図である。
【図４５】３種のＬｙｓｏＰＣ（ａ）、７種のＰｔｄＣｈｏ（ｂ）、５種のスフィンゴミエリン（ｃ）及び３種のＣ３６マーカー（ｄ）における種々の段階での膵臓癌のバイオマーカーの相対強度を示す図である。
【図４６】３種のＬｙｓｏＰＣ（ａ）、７種のＰｔｄＣｈｏ（ｂ）、５種のスフィンゴミエリン（ｃ）及び３種のＣ３６マーカー（ｄ）における、膵臓癌化学放射線療法状態のバイオマーカーの相対強度を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
本発明者らは、ヒト血清において癌特異的バイオマーカーを同定し、したがって、本明細書において、疾患に対する個体の感受性をモニタリングするのに有用であり、単独又はその他の既知診断法と組み合わせてのいずれかで使用してもよい、非侵襲性の癌検出法を示す。記載される方法は、膵臓癌の検出又は診断にとって特に有用である。
【００６５】
膵臓癌に特異的なバイオマーカーの同定のための「的を絞らない」アプローチを開発した。この発見プラットフォームは、１００万分の１（ｐｐｍ）未満の質量正確度でイオンを検出できる、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析（ＦＴＩＣＲ−ＭＳ，Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectormetry）の使用を組み込んだ。この方法を使用して、液体試料抽出物を、例えば、クロマトグラフィー分離を行うことなく、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）及び大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）を使用して直接注入できる。次いで、異なる質量対電荷（Ｍ／Ｚ）比を有するイオンを、フーリエ変換を使用して同時に分解する。液体抽出、フローインジェクション、高分解能及びインフォマティクスのこの組合せによって、先験的な知識なしに試料の生化学的組成を広く特性決定するためのまたとない機会が得られる。
【００６６】
それらの研究に含まれる膵臓癌患者及び健常な無症候性対象の血清メタボロミックプロフィール（metabolomic profiles）を分析すると、本発明者らは、９０試料のセットにおいて対照と比較して、膵臓癌患者において大幅に変更した血清レベルを有する特異的バイオマーカーを同定した。ＭＳ／ＭＳ技術によって、構造的特性決定を実施し、マーカーの一部は、コリン関連化合物であることがわかった。これらのバイオマーカーの血清レベルの変更は、同じ試料で、的を絞ったハイスループットトリプル四重極ＭＲＭ（ＴＱ−ＭＲＭ，triple-quadrupole MRM）法を使用する、的を絞った質量分析によって確認した。
【００６７】
したがって、本発明者らは、特異的な、高感度の方法で対象におけるこれらのバイオマーカーのレベルをモニタリングする方法及び膵臓癌の早期検出及びスクリーニングのための有用なツールとしてこの情報を使用する方法を開発した。
【００６８】
したがって、本発明は、ヒト血清中に存在する特異的バイオマーカーのレベルを測定することと、それらを、「正常な」参照レベルと比較することによって癌を診断する方法に関する。記載された方法を、癌の早期検出及び診断に、並びに癌患者に対する治療の効果をモニタリングするために使用してもよい。
【００６９】
本方法はまた、多数の個体を試験するためにハイスループットスクリーニング法に組み込んでもよく、リスクを評価し、疾患を早期に検出するための対象の寿命を通した長期縦断的スクリーニングをさらに可能にする。したがって、本方法は、従来法によって検出可能なものよりも先に疾患進行を検出する可能性を有し、これは陽性の治療結果にとって重大である。
【００７０】
記載される方法に従って、特定の健康状態カテゴリーの１人又は２人以上の対象から採取した生体試料を、正常な集団から採取した同じ試料と比較して、記載されたバイオマーカーのレベルの相違を同定する。試料を抽出し、それだけには限らないが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析（ＦＴＭＳ，Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry）及び液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ，liquid chromatography mass spectrometry）をはじめとする種々の分析プラットフォームを使用して分析する。
【００７１】
生体試料は、体内のいかなる場所に由来するもの、例えば、それだけには限らないが、血液（血清／血漿）、脳脊髄液（ＣＳＦ，cerebral spinal fluid）、胆汁、尿、便、息、唾液又は腫瘍、隣接する正常な平滑筋及び骨格筋、脂肪組織、肝臓、皮膚、毛髪、脳、腎臓、膵臓、肺、結腸、胃をはじめとする任意の固体組織の生検又はその他のものであってもよい。特に所望のものとして、血清又はＣＳＦである試料がある。本明細書において、用語「血清」が使用されるが、血漿又は全血又は全血の細画分を使用してもよいことは当業者ならば認識するであろう。
【００７２】
血液試料が患者から採取される場合には、試料を処理できるいくつかの方法がある。処理の範囲は、何もないほどである場合も（すなわち、凍結全血）、特定の細胞種の単離ほどに複雑である場合もある。最も一般的で、日常的な手順は、全血からの血清又は血漿いずれかの調製を含む。血液試料を、フィルターペーパー又はその他の固定された材料などの固相支持体上に血液試料をスポッティングすることを含めたすべての血液試料処理法もまた、本発明によって考慮される。
【００７３】
制限されようとは思わないが、上記の処理された血液又は血漿試料を次いで、処理された血液試料内に含有される代謝産物の検出及び測定において使用される系統的分析技術と適合するようにするよう、さらに処理してもよい。処理の種類は、さらなる処理がないほどから、示差抽出（differential extraction）及び化学的誘導体化ほどの複雑なものに及び得る。抽出法は、音波処理、ソックスレー抽出、マイクロ波補助抽出（ＭＡＥ，microwave assisted extraction）、超臨界抽出（ＳＦＥ，supercritical fluid extraction）、高速溶媒抽出（ＡＳＥ，accelerated solvent extraction）、加圧液体抽出（ＰＬＥ，pressurized liquid extraction）、加圧熱水抽出（ＰＨＷＥ，pressurized hot water extraction）及び／又はメタノール、エタノール、アルコール及び水の混合物又は酢酸エチル若しくはヘキサンなどの有機溶媒といった一般的な溶媒中での界面活性剤補助抽出（ＰＨＷＥ）を含み得る。ＦＴＭＳの的を絞らない分析のため、及びフローインジェクションＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析のために代謝産物を抽出するための特に所望の方法として、液液抽出を実施することがあり、それによって、非極性代謝産物が有機溶媒に溶解し、極性代謝産物が水性溶媒に溶解する。
【００７４】
抽出された試料は、当技術分野で公知のものをはじめとする任意の適した方法を使用して分析してよい。例えば、限定されようとは思わないが、生体試料の抽出物は、直接注入によるか、又はクロマトグラフィー分離後のいずれかの、本質的に任意の質量分析プラットフォームでの分析を受け入れられる。通常の質量分析計は、試料内の分子をイオン化する供給源と、イオン化された分子又は分子のフラグメントを検出するための検出器からなる。一般的な供給源の限定されない例として、電子衝撃、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）、大気圧光イオン化法（ＡＰＰＩ，atmospheric pressure photo ionization）、マトリックス支援レーザー脱離法イオン化法（ＭＡＬＤＩ，matrix assisted lazer desorption ionization）、表面増強レーザー脱離イオン化法（ＳＥＬＤＩ，surface enhanced laser desorption ionization）及びそれらの派生物が挙げられる。一般的な質量分離及び検出システムとして、四重極、四重極イオントラップ、線形イオントラップ、飛行時間型（ＴＯＦ）、磁場、イオンサイクロトロン（ＦＴＭＳ）、オービトラップ（Orbitrap）及びその派生物及び組合せを挙げることができる。その他のＭＳベースのプラットフォームを上回るＦＴＭＳの利点は、低分解能機器によってその多くが見逃されるわずか１００分の１ダルトン異なる代謝産物の分離を可能にする、その高い分解能である。
【００７５】
用語「代謝産物」とは、試料中のそのレベル又は強度が測定され、疾患状態を診断するためのマーカーとして使用され得る特定の小分子を意味する。これらの小分子はまた、本明細書において、「代謝産物マーカー」、「代謝産物成分」、「バイオマーカー」又は「生化学的マーカー」と呼ばれることもある。
【００７６】
代謝産物は、通常、質量分析技術によって測定されるようなその精密質量によって特性決定される。精密質量はまた、「精密中性質量」又は「中性質量」と呼ばれることもある。代謝産物の精密質量は、本明細書では、ダルトン（Ｄａ）又はそれと実質的に同等な質量で示される。「それと実質的に同等な」とは、精密質量から±５ｐｐｍの相違は、同一の代謝産物を示すことを意味する。精密質量は、中性の代謝産物の質量として示される。試料の分析の際に生じる代謝産物のイオン化の際に、代謝産物は、１個又は２個以上の水素原子の喪失若しくは獲得及び電子の喪失若しくは獲得のいずれかを引き起こす。それにより、精密質量は「イオン化された質量」に変わり、この質量は、イオン化の際に喪失又は獲得された水素原子及び電子の質量だけ、精密質量とは異なる。特に断りのない限り、本明細書において、精密中性質量に言及する。
【００７７】
同様に、代謝産物が、その分子式によって表される場合には、中性の代謝産物の分子式が示される。当然ながら、イオン化された代謝産物の分子式は、中性の分子式とは、イオン化の際か、又は非水素付加物イオンの付加のために、喪失若しくは獲得された水素原子の数だけ異なる。
【００７８】
分析の際にデータを集め、１種又は２種以上の代謝産物の定量化データを得る。「定量化データ」は、試料中に存在する特定の代謝産物のレベル又は強度を測定することによって得る。
【００７９】
定量化データを、１種又は２種以上の参照試料から得た対応するデータと比較する。「参照試料」とは、特定の疾患状態の任意の適した参照試料である。例えば、決して限定されようとは思わないが、参照試料は、対照個体、すなわち、癌の家族歴を有するか又は有さない癌を患っていないヒト（本明細書において「『正常な』対応物」とも呼ばれる）から得た試料であり得る。参照試料はまた、癌を有すると臨床的に診断された患者から得られた試料であり得る。当業者には理解されるように、定量化データとの比較のために２種以上の参照試料を使用してもよい。例えば、限定されようとは思わないが、１種又は２種以上の参照試料は、非癌対照個体から得られた第１の参照試料であり得る。対象の疾患状態の変化をモニタリングする場合には、参照試料は、治療の結果としての疾患状態の変化を比較するために、治療前又は治療の間いずれかの、より早い時間に得られた試料を含み得る。
【００８０】
「内部対照代謝産物」とは、患者中に天然に存在する内因性代謝産物を指す。疾患状態を通して変わらない任意の適した内因性代謝産物を、内部対照代謝産物として使用できる。
【００８１】
内部対照代謝産物に対する代謝産物マーカーの比の使用は、代謝産物マーカーの絶対レベルの測定よりも、安定しており、再現性がある測定を提供する。内部対照代謝産物は、すべての試料中に天然に存在し、疾患状態を通じて大幅には変わらないと思われるので、試料対試料可変性（取り扱い、抽出などによる）が最小化される。
【００８２】
上記で論じられるように、本明細書に記載されるバイオマーカーを、的を絞らない分析として知られる方法によって同定した。的を絞らない分析は、いかなる予備知識又は分析に先立つ化合物の選択も行わない、試料中のできるだけ多数の分子の測定を含む。（２００１年８月９日に公開された国際公開第０１／５７５１８号パンフレット参照のこと。）したがって、新規代謝産物バイオマーカーを発見するための的を絞らない分析の可能性は、分子の所定のリストを検出する、的を絞った方法に対して高い。本発明者らは、的を絞らない方法を使用して、癌陽性及び健常個体間で異なる代謝産物成分を同定し、続いて、的を絞らない分析から同定された代謝産物のサブセットのためのハイスループットの的を絞ったアッセイを開発した。
【００８３】
この分析にしたがって、癌陽性血清及び正常血清間で存在量の差を有する、小分子、代謝産物又は代謝産物断片を同定した。表５に列挙されるように、本発明者らは、３６２種の代謝産物の集団が、癌陽性血清及び正常血清間で統計上有意な存在量の差を有することを見い出した。２つの集団間で統計上異なるこれらの特徴のすべてが、診断的有用性の可能性を有する。しかし、市販の診断アッセイに３６２種のシグナルを組み込むことは、多くの場合、実際的ではなく、そのため、例えば、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ，high-throughput screening）アッセイのためのパネルでは、マーカー又は代謝産物の最適な診断セットを選択してもよい。
【００８４】
検出されている分子に応じて、現在利用可能な、複数の種類のＨＴＳアッセイプラットフォーム選択肢がある。これらとして、それだけには限らないが、比色分析化学アッセイ（ＵＶ又はその他の波長）、抗体ベースの酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、核酸検出アッセイのための、チップベースの、ポリメラーゼ連鎖反応、ビーズベースの核酸検出法、尿試験紙化学アッセイ、ＭＲＩ、ｐｅｔスキャン、ＣＴスキャンなどの画像解析及び種々の質量分析ベースのシステムが挙げられる。
【００８５】
限定されない実施形態では、ＨＴＳアッセイは、従来のトリプル四重極質量分析技術に基づいている。ＨＴＳアッセイは、血清抽出物をトリプル−クアッド（triple-quad）質量分析計に直接注入し、次いで、これが、シングルイオンモニタリング（ＳＩＭ，single-ion monitoring）によって親分子の各々を個々に単離することによって働く。これに、不活性ガス（衝突ガスと呼ばれる、衝突誘導解離又はＣＩＤとまとめて呼ばれる）を使用する各分子のフラグメンテーションが続く。次いで、多重反応モニタリング（ＭＲＭ，multiple-reaction monitoring）と呼ばれるプロセスによって、各親バイオマーカーに由来する特定のフラグメントの強度を測定し、記録する。さらに、各試料に内部標準分子も加え、同様にフラグメンテーションに付す。この内部標準フラグメントは、方法及び機器が正しく動いている場合には、各試料において同一の強度を有するはずである。すべてのバイオマーカーフラグメント強度並びに内部標準フラグメント強度を集めた時点で、バイオマーカー対ＩＳフラグメント強度の比を算出し、比を対数変換する。次いで、各患者試料の値を、疾患陽性及び対照のこれまでに決定された分布と比較して、ヒトが疾患について陽性又は陰性である相対的確率を決定する。
【００８６】
記載されたアッセイ法を使用して、癌について患者をスクリーニングするための市販の方法も想定される。世界的なアッセイの展開のためには多数の選択肢がある。これとして、それだけには限らないが：１、世界中の多数の実験室に容易に配置される、現在の実験室機器及びトリプル四重極質量分析計に適合するＭＳ／ＭＳ法の開発及び／又は２、１つの場所で、試料を送り、分析でき、結果を患者又は患者の主治医に送り返す、試験施設の設立が挙げられる。
【００８７】
一連の物理的及び化学的特性調査を使用して、同定された代謝産物の構造的解明を実施した。この同定に通常使用される主な特徴は、精密質量及び分子式決定、極性、酸性／塩基性特性、ＮＭＲスペクトル及びＭＳ／ＭＳ又はＭＳｎスペクトルである。
【００８８】
本明細書において、Ｃ３６マーカー（５５８．４、５７４．５、５７６．５、５７８．５、５９２．５、５９４．５、５９６．５）と呼ばれる診断的バイオマーカーの１つの群は、それぞれ、以下の分子式を有すると決定した：Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_４、Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_６及びＣ_３６Ｈ_６８Ｏ_６。負のＡＰＣＩにおける有機抽出物についてのこれらのバイオマーカー各々のＭＳ／ＭＳ遷移は、以下のとおりに観察された：Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_４：５５７．４／４９５．４、５５７．４／５３９．４、５５７．４／５１３．３、５５７．４／２７９．２、５５７．４／２７７．２、５５７．４／２２０．７及び５５７．４／１１１．２；Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５：５７３．５／５１１．４、５７３．５／５５５．３、５７３．５／５３７．４、５７３．５／５２９．４、５７３．５／５１９．４、５７３．５／４９３．３、５７３．５／４５７．４、５７３．５／４５５．３、５７３．５／４４３．４、５７３．５／４１５．４、５７３．５／４１３．３、５７３．５／４１１．３、５７３．５／３９９．３、５７３．５／３９７．３、５７３．５／３８９．７、５７３．５／２９５．２、５７３．５／２７９．２、５７３．５／２７７．２、５７３．５／２５１．２、５７３．５／２３１．１、５７３．５／２２３．１、５７３．５／２０１．１、５７３．５／１７１．１、５７３．５／１６９．１、５７３．５／１２５．１及び５７３．５／１１３．１；Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_５：５７５．５／５１３．５、５７５．５／５５７．５、５７５．５／５３１．５、５７５．５／４９９．５、５７５．５／４９５．４、５７５．５／４４７．３、５７５．５／４１７．４、５７５．５／４１５．４、５７５．５／４１３．３、５７５．５／３７１．３、５７５．５／２９５．２、５７５．５／２７９．２、５７５．５／２６０．２、５７５．５／２５１．２、５７５．５／４５９．４、５７５．５／４０３．３、５７５．５／１９７．９、５７５．５／１１９．４、５７５．５／１１３．１、５７５．５／９７．０及び５７５．５／５３９．５；Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５：５７７．５／５１５．４、５７７．５／５５９．４、５７７．５／５４６．５、５７７．５／５３３．５、５７７．５／４９７．４、５７７．５／４１９．４、５７７．５／４０５．５、５７７．５／２９７．２及び５７７．５／２８１．２；Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６：５９１．５／５７３．４、５９１．５／５５５．４、５９１．５／５２８．３、５９１．５／５１１．２、５９１．５／４７６．１、５９１．５／４１９．３、５９１．５／４０３．１、５９１．５／３８７．３、５９１．５／２９７．２、５９１．５／２９５．２、５９１．５／２７４．０、５９１．５／２５５．３、５９１．５／２２３．６、５９１．５／２０３．５、５９１．５／２０１．１、５９１．５／１７１．０及び５９１．５／１２５．３；Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_６：５９３．５／５５７．５、５９３．５／５１３．４、５９３．５／４９５．４、５９３．５／３７１．３、５９３．５／３１５．３、及び５９３．５／２７７．２；Ｃ_３６Ｈ_６８Ｏ_６：５９５．５／５７７．５、５９５．５／５５９．５、５９５．５／５５１．５、５９５．５／５４９．７、５９５．５／５３３．５、５９５．５／２７９．２、５９５．５／３９１．３、５９５．５／５１５．４、５９５．５／４７８．４、５９５．５／４２３．４、５９５．５／３７２．５、５９５．５／３１５．３、５９５．５／３１３．２、５９５．５／４３３．３、５９５．５／２９８．２、５９５．５／２３９．２、５９５．５／２３２．９、５９５．５／１７１．１、５９５．５／１６９．１、５９５．５／１４１．１及び５９５．５／４９７．４。
【００８９】
リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン及びスフィンゴミエリンを含めたコリン関連診断的バイオマーカーの第２の群も同定した。リゾホスファチジルコリンとして、ＬｙｓｏＰＣ １４：０；ＬｙｓｏＰＣ １４：１；ＬｙｓｏＰＣ １６：０；ＬｙｓｏＰＣ １６：１；ＬｙｓｏＰＣ １６：２；ＬｙｓｏＰＣ １８：０；ＬｙｓｏＰＣ １８：１；ＬｙｓｏＰＣ １８：２；ＬｙｓｏＰＣ １８：３；ＬｙｓｏＰＣ ２０：１；ＬｙｓｏＰＣ ２０：２；ＬｙｓｏＰＣ ２０：３；ＬｙｓｏＰＣ ２０：４；ＬｙｓｏＰＣ ２０：５；ＬｙｓｏＰＣ ２０：６；ＬｙｓｏＰＣ ２２：３；ＬｙｓｏＰＣ ２２：４；ＬｙｓｏＰＣ ２２：５；ＬｙｓｏＰＣ ２２：６；ＬｙｓｏＰＣ ２４：４；ＬｙｓｏＰＣ ２４：６；ＬｙｓｏＰＣ ３０：１；ＬｙｓｏＰＣ ３２：０；ＬｙｓｏＰＣ ３２：１；ＬｙｓｏＰＣ ３２：２；及びＬｙｓｏＰＣ ３２：６が挙げられる。これらのバイオマーカーの各々の分子量、分子式及びＭＳ／ＭＳ遷移は、以下にさらに詳細に記載される。
【００９０】
ホスファチジルコリン（７５５．５５；７５７．５６；７５９．５８；７６１．５９；７７９．５４；７８１．５６；７８３．５８；７８５．５９；７８７．６１；８０３．５４；８０５．５６；８０７．５８；８０９．５９；８２９．５５；８３１．５８；及び８３３．５９）は、それぞれ、以下の分子式を有すると決定した：Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ；Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ；及びＣ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ。これらのバイオマーカーの各々の分子量、分子式及びＭＳ／ＭＳ遷移は、以下にさらに詳細に記載される。
【００９１】
スフィンゴミエリン７０２．５７及び８１２．６８は、それぞれの式Ｃ_３９Ｈ_７２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ及びＣ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐを有すると決定した。これらのバイオマーカーの各々の分子量、分子式及びＭＳ／ＭＳ遷移は、以下にさらに詳細に記載される。
【００９２】
本発明は、限定と解釈されるべきではない以下の実施例を参照してさらに定義される。
［実施例］
材料＆方法：
１．患者試料選択
臨床試料は、大阪医科大学、日本から得た。試料は、医師のチームによって一定の方法で集められ、処理され、保存された。すべての試料は、適切に同意され、詳細な病理報告書が添付されていた。
【００９３】
試料には、５０人の対照及び４０人の膵臓癌患者を含め、それらの中で、２０人が、化学放射線療法（ＣＲＴ）を受けており、２０人がサンプリングの時点では受けていなかった。４人の患者は、ステージＩであり、４人がステージIIであり、５人がステージIIIであり、１６人がステージIVａであり、１１人がステージIVｂであった（表２）。
【００９４】
【表２】

【００９５】
すべての試料を、無作為化された方法で処理し、分析し、分析後に結果を非盲検化した。
【００９６】
２．試料抽出
血清試料は、分析のために解凍するまで−８０℃で保存した。１回のみ解凍した。すべての抽出は、氷上で実施した。血清試料は、ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析のために、最初に、１％水酸化アンモニウム及び酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を、それぞれ１：１：５の比で用いて、３回、等量の血清を連続抽出することによって調製した。試料を、抽出の間に、３５００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離し、有機層を回収し、新しい試験管に移した（抽出物Ａ）。３回目ＥｔＯＡｃ抽出後、０．３３％のギ酸を加え、続いて、さらに２回ＥｔＯＡｃ抽出した。最後の有機抽出後、残りの水性成分を、水で２回さらに抽出し、３：１アセトニトリルを用いる沈殿によってタンパク質を回収した（抽出物Ｂ）。次いで、１：５比のＥｔＯＡｃ対ブタノール（ＢｕＯＨ）を窒素下で蒸発させて、元のＢｕＯＨ出発容量（抽出物Ｃ）にした。すべての抽出物は、ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析まで−８０℃で保存した。
【００９７】
３．ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析
抽出物を、負のイオン化モードのためにメタノール：０．１％（ｖ／ｖ）水酸化アンモニウム（５０：５０、ｖ／ｖ）に、又は正のイオン化モードのためにメタノール：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸（５０：５０、ｖ／ｖ）に３倍又は６倍希釈した。ＡＰＣＩには、試料抽出物を希釈せずに直接注入した。すべての分析は、７．０Ｔアクティブシールド型超伝導磁石（Bruker Daltonics社、Billerica、MA）を備えたBruker Daltonics APEX IIIフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析計で実施した。試料は、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）及び大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）を１時間あたり６００μＬの流速で使用して直接注入した。機器同調及び較正条件の詳細は、これまでに報告されている（Gray, G. R., and D. Heath. 2005. A global reorganization of the metabolome in Arabidopsis during cold acclimation is revealed by metabolic fingerprinting. Physiologia Plantarum 124: 236-248）。種々の試料抽出物を別個に分析したが、各試料の質量スペクトルデータを、スペクトル処理後に組み合わせた。すべての試料ピークを、各内部標準質量ピークが、理論的質量に対して１ｐｐｍ未満の質量誤差を有するように内部標準物質を使用して較正した。
【００９８】
４．フルスキャンＱ−ＴＯＦ及びＨＰＬＣ連結型タンデム質量分析
４．１有機抽出物
５種の膵臓癌試料及び５種の正常試料から得た５００μＬの血清の酢酸エチル抽出物を、窒素ガス下で別個に蒸発させ、５０μＬのイソプロパノール：メタノール：ギ酸（１０：８９．９：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）で各々再構成した。ＬＣ／ＭＳフルスキャン及びＭＳ／ＭＳの両方のために、２０μＬの再構成された試料をHypersil ODSカラム（５μｍ、１５０×４．６ｍｍ）、移動相：溶媒Ａ：９４．９％ Ｈ_２Ｏ、５％ ＭｅＯＨ及び０．１％ギ酸、溶媒Ｂ：１００％ ＭｅＯＨ、１ｍＬ／分の流速で勾配 １５分で１００％ Ａから７９％ Ａ及び２１％ Ｂ、次いで、２５分で、１００％ Ｂへ、次いで、３０分まで維持を用いるＨＰＬＣ（Agilent 1100、Agilent Technologies社）分析に付した。ＨＰＬＣからの溶出液を、ＡＰＣＩ供給源が取り付けられたABI QSTAR（登録商標）ＸＬ質量分析計を使用して分析し、負のモードでデータを集めた。フルスキャンモードでのスキャンの種類は、１．００００秒のスキャン時間、５０〜１５００Ｄａの質量範囲及び３０分の期間を有する飛行時間型（ＴＯＦ−ＭＳ）とした。供給源パラメータは以下のとおりとした：イオン供給源ガス１（ＧＳ１）８０；イオン供給源ガス２（ＧＳ２）１０；カーテンガス（ＣＵＲ）３０；ネブライザー電流（ＮＣ）−３．０；温度４００℃；デクラスタリングポテンシャル（ＤＰ）−６０；フォーカシングポテンシャル（ＦＰ）−２６５；デクラスタリングポテンシャル２（ＤＰ２）−１５。ＭＳ／ＭＳモードでは、スキャンの種類は、プロダクトイオンとし、スキャン時間は、１．００００秒とし、スキャン範囲は、５０〜１５００Ｄａとし、期間は、３０分とした。すべての供給源パラメータは、上記と同一であり、−３５Ｖの衝突エネルギー（ＣＥ）及び５の衝突ガス（ＣＡＤ、窒素）を有していた。
【００９９】
４．２水性抽出物
５種の膵臓癌試料及び５種の正常試料から得た１０μＬのＣ−ＡＣＮ画分（水性抽出物）の血清を、０．１８ｍＬ／分の流速でフルスキャン及びプロダクトイオンスキャン（ＭＳ／ＭＳ）のためにMeta Sil AQカラム（３μｍ、１００×２．０ｍｍ、Varian社）を備えたＨＰＬＣ（Agilent 1100）に直接注入した。溶媒Ａ：Ｈ_２Ｏ−ＭｅＯＨ−ギ酸（９４．９：５：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）及び溶媒Ｂ：ＭｅＯＨ−ギ酸（９９．９：０．１、ｖ／ｖ）を移動相として使用し；１００％のＡから出発し、１１分で８０％のＢ及び２０％のＡ、２０分まで維持、次いで、３０分で１００％のＢ、次いで、４５分まで維持の勾配溶媒プログラムを適用した。ＨＰＬＣからの溶出液を、ＥＳＩ供給源を取り付けたApplied Biosystem (AB) QSTAR（登録商標）ＸＬ質量分析計を使用して負及び正のモードで分析した。フルスキャンモードでのスキャンの種類は、１．００００秒のスキャン時間、５０から１５００Ｄａ間の質量範囲及び６０分の期間を有する飛行時間型（ＴＯＦ−ＭＳ）とした。供給源パラメータは以下のとおりである：イオン供給源ガス１（ＧＳ１）、６５；イオン供給源ガス２（ＧＳ２）、７５；カーテンガス（ＣＵＲ）、３０；温度４２５℃；負のモードのために：イオンスプレー（ＩＳ）、−４２００Ｖ；デクラスタリングポテンシャル（ＤＰ）、−６０；フォーカシングポテンシャル（ＦＰ）、−２６５；デクラスタリングポテンシャル２（ＤＰ２）、−１５；また、正のモードのために：イオンスプレー（ＩＳ）、５５００Ｖ；デクラスタリングポテンシャル（ＤＰ）、６０；フォーカシングポテンシャル（ＦＰ）、２６５；デクラスタリングポテンシャル２（ＤＰ２）、１５。ＭＳ／ＭＳモードでは、スキャンの種類は、プロダクトイオンとして、スキャン時間は、１．００００秒として設定し、スキャン範囲は、５０〜１５００Ｄａとし、期間は、６０分とした。すべての供給源パラメータは、上記と同じであり、それぞれ、−３０Ｖ及び＋３０Ｖの衝突エネルギー（ＣＥ）及び５の衝突ガス（ＣＡＤ、窒素）を有していた。
【０１００】
５．ＬＣ−ＭＳ／ＭＳフローインジェクション分析
すべてのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析は、（Goodenowe, D. B., L. L. Cook, J. Liu, Y. Lu, D. A. Jayasinghe, P. W. Ahiahonu, D. Heath, Y. Yamazaki, J. Flax, K. F. Krenitsky, D. L. Sparks, A. Lerner, R. P. Friedland, T. Kudo, K. Kamino, T. Morihara, M. Takeda, and P. L. Wood. 2007. Peripheral ethanolamine plasmalogen deficiency: a logical causative factor in Alzheimer's disease and dementia. Journal of lipid research 48: 2485-2498）に従い、以下の改変を施して実施した。具体的には、分析は、Agilent 1100 ＬＣシステムと連結させたトリプル四重極質量分析計（4000Q TRAP、Applied Biosystems社）を使用して実施した。
【０１０１】
５．１ Ｃ３６マーカーのＭＲＭ
試料は、各試料の１２０μＬの酢酸エチル画分に１５μＬの内部標準物質（メタノール中、０．１μｇ／ｍＬの（２４−^１３Ｃ）−コール酸（Cambridge Isotope Laboratories社、Andover、MA））を加えることによって調製した。１００μＬの試料をフローインジェクション分析（ＦＩＡ）によって注入し、負の大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）モード下でモニタリングした。方法は、各代謝産物及び（２４−^１３Ｃ）−コール酸の１種の親／フラグメント遷移の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）をベースとした（表３）。
【０１０２】
【表３】

【０１０３】
各遷移を、７０ミリ秒間スキャンした。１００％ ＭｅＯＨを３６０μＬ／分の流速で、移動相として使用した。供給源パラメータは以下のとおり設定した：ＣＵＲ：１０．０、ＣＡＤ：８．０、ＮＣ：−４．０、ＴＥＭ：４００、ＧＳ１：３０、ＧＳ２：５０、インターフェースヒーター オン。（２４−^１３Ｃ）−コール酸を抽出された市販の血清マトリックス（酢酸エチル画分）に段階希釈することによって、すべての分析物の標準曲線を作成して、機器の線形性を確認した。すべての試料を無作為化盲検法で分析し、既知血清標準希釈物によってブラケットした。すべての標準曲線は、０．９８を超えるｒ^２値を有していた。
【０１０４】
５．２ コリン関連化合物のＭＲＭ
１２μＬのＣ−ＡＣＮ画分を、１０８μＬの移動相及び内部標準物質としての１５μＬのレセルピンと混合した。移動相は、７５％アセトニトリル及び２５％のｄｄＨ_２Ｏ中、１％ギ酸からなる。１００μＬの試料を、フローインジェクション分析（ＦＩＡ）によって注入し、正又は負のイオンエレクトロスプレー（ＥＳＩ）モード下でモニタリングした。方法は、各代謝産物及びレセルピンの１種の親／フラグメント遷移の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）をベースとした（表４）。ホスファチジルコリンの負のＥＳＩモード遷移は、以下のとおりに選択された：ギ酸塩付加物及び修飾子（qualifier）（両方とも、同一質量ホスファチジルコリンに共通している）及びｓｎ−２脂肪酸（個々のホスファチジルコリンに対して特異的である）。
【０１０５】
【表４】







【０１０６】
各遷移を７０ミリ秒間スキャンした。６０μＬ／分の流速で移動相を使用した。供給源パラメータは以下のとおり設定した：ＣＵＲ：１０．０、ＩＳ：５５００．０、ＣＡＤ：１０．０、ＴＥＭ：５００、ＧＳ１：３０、ＧＳ２：５０、インターフェースヒーター オン。一定濃度のレセルピンを含むＲａｎｄｏｘのＣ−ＡＣＮ画分（ヒト血清精度制御レベルII）を段階希釈することによって、すべての分析物の標準曲線を作成して、機器の線形性を確認した。すべての試料を無作為化盲検法で分析し、既知血清標準希釈物によってブラケットした。すべての標準曲線は、０．９８を超えるｒ^２値を有していた。スフィンゴミエリンについて、両ＭＲＭ遷移を実施し、同様に確認し；ｍ／ｚ１６８を有するＭＲＭ遷移を、報告されたグラフのために選択した。
【０１０７】
６．統計分析
DISCOVAmetrics（商標）（Phenomenome Discoveries社、Saskatoon）を使用して、ＦＴＩＣＲ−ＭＳ精密質量アレイアラインメントを実施した。Microsoft Office Excel 2007を使用して、ＦＴＩＣＲ−ＭＳデータの初期統計分析及びグラフを実施した。膵臓癌及び対照間の有意差の決定のために、両側独立スチューデントｔ検定を使用した。０．０５未満のＰ値を、有意と考えた。ロジスティック回帰分析からSAS Enterprise Guide 4.2を使用してＲＯＣ曲線を作成した。
【０１０８】
結果
ＦＴＩＣＲメタボノミクスプロファイリング
１Ａ．ＦＴＩＣＲデータ分析
本明細書に記載された研究で作成された実験ワークフローは、図１に要約されている。
【０１０９】
血清代謝産物を、液体抽出プロセス（方法を参照のこと）によって捕獲し、抽出物を、ＦＴＩＣＲ質量分析計でエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）又は大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）によって直接注入した。各試料について、抽出物及びイオン化モード組合せを含む合計６種の別個の分析が得られた：
水性抽出物
１．正のＥＳＩ（分析モード１１０１）
２．負のＥＳＩ（分析モード１１０２）
有機抽出物
３．正のＥＳＩ（分析モード１２０１）
４．負のＥＳＩ（分析モード１２０２）
５．正のＡＰＣＩ（分析モー１２０３）
６．負のＡＰＣＩ（分析モード１２０４）
【０１１０】
各プロジェクトのために別個に、すべての対象の得られたスペクトルデータを、１ｐｐｍの質量正確度でアラインし、バックグラウンドピークを差し引き、試料特異的スペクトルピークの各々の強度を含む二次元アレイ表を、カスタムインフォマティクスソフトウェアDISCOVAmetrics（商標）を使用して作成した。
【０１１１】
このように作成したメタボロミックプロフィールでは、ブーリアンフィルタリングによって、「膵臓癌」状態を「対照」状態から区別する質量を選別した。表５には、０．０５より低いｐ値で、膵臓癌試料を対照試料と区別する３６２種の質量が列挙されている。
【０１１２】
【表５】















【０１１３】
次いで、DISCOVAmetrics（商標）によって３６２種のマーカーに関して全集団（９０試料）で主成分分析を実施した。図２は、膵臓癌（灰色の個々の試料を含む）及び対照（黒色）間のこの教師なし分類に起因する分離を示す。
【０１１４】
それぞれ、第４及び第３のマーカー、７８５．５９１３及び５９４．４８６３の同位体ピークである、最初の２つのマーカー、７８６．５９３及び５９５．４８９７などの^１３Ｃ同位体ピークを同定した。表６には、^１３Ｃ同位体ピークを含まない２０種の最良のバイオマーカーが列挙されている。６００．５１１７を除くこれらのマーカーのすべてはレベルが、対照に対して膵臓癌コホートにおいて低下していた。
【０１１５】
【表６】

【０１１６】
次いで、DISCOVAmetrics（商標）によってこれらの２０種のマーカーに関して全集団で主成分分析を実施した。図３は、（ａ）膵臓癌（灰色の個々の試料を含む）及び対照（黒色）間のこの教師なし分類に起因する分離並びに（ｂ）両集団におけるこれらの２０種のバイオマーカーの相対強度を示す。
【０１１７】
１Ｂ．ロジスティック回帰分析
これら２０種の最良のＦＴＩＣＲバイオマーカーで受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を実施した。表７には、得られた曲線下面積（ＡＵＣ）が要約されている。
【０１１８】
【表７】

【０１１９】
少なくとも９種のマーカーが、０．９０を超えるＡＵＣを示し、これは優れた特異性及び感度を示す。図４は、最初の６種の最良のバイオマーカーの試料値の分布とともに各ＲＯＣを示す（ｐ値Ｅ−１２未満）。
【０１２０】
極めて高い感度及び特異性を得るという視点で最良のバイオマーカーを、それらのうちいくつかと組み合わせる複数の方法がある。例えば、ｐ値によって分類される６種の最良のバイオマーカーの組合せは、０．９８５のＡＵＣを示し（図５）、それぞれ９２．５％及び８８％である最適の特異性及び感度の対を有する。
【０１２１】
１Ｃ．式予測
妥当な分子式のコンピュータによる割り当てを２０種の最良のバイオマーカーに実施した。割り当ては、精密な予測のために高い質量正確度を頼りにする、これまでに記載された（Aharoni, A., C. H. Ric de Vos, H. A. Verhoeven, C. A. Maliepaard, G. Kruppa, R. Bino, and D. B. Goodenowe. 2002. Nontargeted metabolome analysis by use of Fourier Transform Ion Cyclotron Mass Spectrometry. Omics 6: 217-234）、一連の数学的及びケモメトリックスルールに基づいていた。アルゴリズムは、その厳密な質量に基づいて、規定の制約内で検出された精密質量に割り当てられ得る炭素、水素、酸素及びその他の元素の数をコンピュータで計算する。表８では、論理的に推定される分子式がコンピュータによって計算された。
【０１２２】
【表８】

【０１２３】
４つの主なファミリーが現れるように思われる。１１０１分析モードにおいて３種及び１２０２分析モードにおいて１種。１１０１モードでは、それらは、コリン関連化合物、すなわち、ＮＯ_７Ｐにおける化合物についてリゾホスファチジルコリン、ＮＯ_８Ｐにおける化合物についてホスファチジルコリン及びＮ_２Ｏ_６Ｐにおける化合物についてスフィンゴミエリンを連想させる。次のステップは、これら１６種の推定コリン関連化合物、Ｃ３６において３種の化合物、１２０３モードにおいてさらなる化合物の構造確認であった。
【０１２４】
ＨＰＬＣ連結型タンデム質量分析
タンデム質量分析フラグメンテーションフィンガープリントを、上記のマーカーについて作成した。
【０１２５】
２Ａ．Ｃ３６における１２０２／１２０４化合物
ＦＴＩＣＲ−ＭＳ研究に使用した対照コホートから得た血清の選択された酢酸エチル抽出物を、３種のＣ３６バイオマーカー、「５７６」、「５９４」及び「５９６」について、ＡＰＣＩ負のイオンモード（１２０２モード）において四重極飛行時間型（Ｑ−ＴＯＦ）質量分析計に連結されたＨＰＬＣを使用して再分析した。２５〜２７分あたりの保持時間については、ＭＳ／ＭＳ及びＭＳ３フラグメンテーションデータは、Ｈ_２Ｏの喪失（それぞれ、ｍ／ｚ５５７、５７５及び５７７）及び２分子のＨ_２Ｏの喪失（それぞれ、ｍ／ｚ５３９、５５７及び５５９）に起因するピーク並びにＣＯ_２の喪失（それぞれ、ｍ／ｚ５３１、５４９及び５５１）並びにＣＯ_２及びＨ_２Ｏの喪失（ｍ／ｚ５１３、５３１及び５３３）に対応するより小さいピークに支配されていた（表９；図６〜１２）。
【０１２６】
【表９】





【０１２７】
表５中のＦＴＩＣＲバイオマーカーの中で、上記の質量と、２又は４だけ異なっている質量を有する、１２０２モードにおけるその他の化合物の存在は、全ファミリーが、膵臓癌において変更されている可能性があるということを示唆した。したがって、本発明者らは、Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６及びＣ_３６Ｈ_６２Ｏ_４の式を有するとそれぞれ予測される５７４．５、５７８．５、５９２．５及び５５８．４について、上記と同じ分析を実施した（表１０；図９〜１２）。
【０１２８】
【表１０】



【０１２９】
ステロイド（又は胆汁酸）、脂肪酸及び脂溶性ビタミンの種々の形態をはじめとするいくつかのクラスの代謝産物は、これらの元素組成に理論的に適合する。
【０１３０】
Ｃ３６マーカー及びＮＭＲ分析の予備単離
ステップ勾配溶出；アセトニトリル−水２５：７５〜１００％アセトニトリルを用いる逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーに付された、市販の血清の酢酸エチル抽出物は、ＬＣ／ＭＳ及びＭＳ／ＭＳによって分析された場合に、２種の膵臓癌Ｃ３６マーカー（ｍ／ｚ５９４及び５９６）が極めて豊富であると見い出された画分をもたらした。この画分のプロトン核磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）スペクトル（図１３）は、プレグナン環であると考えられる縮合環系を有する化合物の特徴的な共鳴を示した。これらの２種のマーカーは、ステロイド系骨格を有すると考えられ、恐らくは、胆汁酸として知られる化合物のクラスに属する可能性がある。
【０１３１】
２Ｂ．推定コリン関連化合物
表６では、１６種の化合物が、３種のコリン関連ファミリーに属する推定式を示した。すなわち、５１９．３、５２３．３及び５４１．３に対するリゾホスファチジルコリン（ＬｙｓｏＰＣ）、７５７．６、７７９．５、７８３．６、７８５．６、８０３．５、８０５．６、８０７．６、８０９．６、８２９．６及び８３３．６に対するホスファチジルコリン（ＰｔｄＣｈｏ）並びに７０２．６、７２４．５及び８１２．７に対するスフィンゴミエリン。
【０１３２】
ＦＴＩＣＲ−ＭＳ研究に使用した対照コホートから得た血清の選択された水性抽出物を、ＥＳＩ正のイオンモード（１１０１モード）において四重極飛行時間型（Ｑ−ＴＯＦ）質量分析計に連結されたＨＰＬＣを使用して再分析した。３種の推定リゾホスファチジルコリンについて複数のフラグメンテーションパターンが観察された（図１４〜１６）。
【０１３３】
【表１１】

【０１３４】
５１９．３の質量を有する化合物は、Ｃ１８：２の脂肪酸部分を有するリゾホスファチジルコリンであると確認され、２つの異なる保持時間は、２つの異なる亜種に対応し：短いほうの時間は、１−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（図１４ａ）のフラグメンテーションパターンを示すのに対し、長いほうは、２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（図１４ｂ）のフラグメンテーションパターンを示す。
【０１３５】
５２３．３の質量を有する化合物は、Ｃ１８：０の脂肪酸部分を有するリゾホスファチジルコリンであることが確認され、異なる保持時間は、２種の異なる亜種に対応し：短いほうの時間は、２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（図１５ａ）のフラグメンテーションパターンを示すのに対し、長いほうは、１−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（図１５ｂ）のフラグメンテーションパターンを示す。
【０１３６】
５４１．３の質量を有する化合物は、Ｃ２０：５の脂肪酸部分を有するリゾホスファチジルコリンと、上記の５１９．３の質量を有する化合物のナトリウム付加物の（図１６）の混合物であると思われる。最短の保持時間は、１−エイコサペンタエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（図１６ａ）及び２−エイコサペンタエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（図１６ｂ）に対応する実際に２種のフラグメンテーションパターンを示す。観察された２種の長い保持時間は、５１９．３について観察された２種の保持時間を反映し、短いほうは、１−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンのナトリウム付加物のフラグメンテーションパターン（図１６ｃ）に対応し、長いほうは、２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンのナトリウム付加物のフラグメンテーションパターンに対応する（図１６ｄ）。
【０１３７】
これらの推定リゾホスファチジルコリンの化学ファミリーをさらに確認するために、同一試料を、水性の負のＥＳＩモードで実施した（表１２）。
【０１３８】
【表１２】

【０１３９】
ＦＴＩＣＲ−ＭＳ研究に使用した対照コホートから得た血清の選択された水性抽出物を、推定ＰｔｄＣｈｏについて、ＥＳＩ正のイオンモード（１１０１モード）においてＱ−ＴＯＦ質量分析計に連結されたＨＰＬＣを使用して再分析した（表１３）。
【０１４０】
【表１３】

【０１４１】
すべての化合物のフラグメンテーションパターンは、すべての質量について、１つの主なフラグメント（ｍ／ｚ１８４）に限定されるようであり、これは、８０３．５（図２１）を除いて、恐らくはコリンリン酸塩に対応する（図１７〜２０、２２〜２６）。８０３．５のフラグメンテーションパターンは、むしろ、この質量の化合物の大部分が、７８１．５５６６のナトリウム付加物であることを示唆する。
【０１４２】
これらの推定ホスファチジルコリンの化学ファミリーを確認するために、同一試料を、水性の負のＥＳＩモードにおいて実施した（表１４）。フラグメンテーションパターンは、図２７〜３２に示されており、これはＰｔｄＣｈｏ側鎖を決定する方法を示す。
【０１４３】
【表１４】

【０１４４】
側鎖の組合せは、ＰｔｄＣｈｏ１６：０／１８：２及びＰｔｄＣｈｏ１８：２／１６：０（図２７）の両方に対応する７５７．６においてなど、唯一である場合も、ＰｔｄＣｈｏ１８：０／２０：５、ＰｔｄＣｈｏ１６：０／２２：５及びＰｔｄＣｈｏ１８：１／２０：４に対応する８０７．６においてなど、複数である場合もあり、すべてが同一の化学式Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐを有する（図３２）。すべてのＰｔｄＣｈｏバイオマーカーの確認された側鎖が、表１５に報告されている。
【０１４５】
【表１５】

【０１４６】
推定スフィンゴミエリンのフラグメンテーションパターンによって、７０２．６及び８１２．７の主要なピークとしてコリンリン酸塩フラグメントの存在が確認され、これは、２種の化合物がそれぞれ、スフィンゴイド塩基としてスフィンゴシン（１８：１）を有する一般的なスフィンゴミエリンＳＭ（ｄ１８：１／１６：０）及びＳＭ（ｄ１８：１／２４：１（１５Ｚ））であることを示唆する（図３３及び３４）。７２４．５のフラグメンテーションパターンは、化合物が、上記の７０２．６のナトリウム付加物であることを示唆する（図３５）。
【０１４７】
これら２種の化合物のスフィンゴミエリン同一性は、７０２．６及び８１２．７の質量を有する血清化合物及び市販のスフィンゴミエリンＳＭ（ｄ１８：１／１６：０）及びＳＭ（ｄ１８：１／２４：１（１５Ｚ））間の比較による水性の負のＥＳＩモードにおけるさらなる分析によって確認した。負のＥＳＩモードにおいてギ酸付加物として検出された、７０２．６の質量を有する血清化合物のフラグメンテーションパターン（図３６）は、実際、合成ＳＭ（ｄ１８：１／１６：０）のフラグメンテーションパターン（図３７）と同一である。同様に、負のＥＳＩモードにおいてギ酸付加物として検出された８１２．７の質量を有する血清化合物のフラグメンテーションパターン（図３８）は、合成ＳＭ（ｄ１８：１／２４：１（１５Ｚ））のフラグメンテーションパターン（図３９）と同一である。
【０１４８】
２Ｃ．その他の化合物
１２０３分析モードにおける６００．５１１７化合物を、タンデム質量分析マスフラグメンテーションによってさらに分析した。５４５．５、５２７．５及び２６３．３のピークによって支配されているフラグメンテーションパターンによって、表６に示される分子式を有する化合物が存在し、両側鎖で１８：２を有する１−アルケニル−２−アシルグリセロールとして分類され得ることが確認される（図４０）。
【０１４９】
多重反応モニタリング方法論を使用する確認
膵臓癌患者の血液におけるコリン関連化合物及びＣ３６バイオマーカーのレベルの低下を、同一集団においてタンデム質量分析アプローチ（方法を参照のこと）を使用してさらに確認した。アプローチは、分析物を定量化するための、親−娘フラグメントイオン組合せの測定（多重反応モニタリング；ＭＲＭと呼ばれる）に基づいている。
【０１５０】
３Ａ．リゾホスファチジルコリンのＭＲＭ
正及び負両方のエレクトロスプレーイオン化法モードにおいて、多重反応モニタリングに基づくタンデムＭＳアプローチを使用して、ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析のためと同一の水性抽出物を使用して、患者と対照間でのＬｙｓｏＰＣレベルの相違を確認した（式及び遷移については方法参照のこと）。図４１には、表６に列挙される３種のリゾホスファチジルコリン及び２０種のさらなるＬｙｓｏＰＣのレベルは、対照に対して膵臓癌患者において大幅に低下することの確認が報告されている。予想され得るように、２０種の最良のＦＴＩＣＲバイオマーカー中に存在するＬｙｓｏＰＣについて、ＭＲＭによって試験されたすべてのＬｙｓｏＰＣの中で最低のｐ値が得られ、正のＥＳＩ分析モードにおける最小の値、２．６９Ｅ−１５は、ＬｙｓｏＰＣ１８：２、ＦＴＩＣＲによる第２の最良の推定ＬｙｓｏＰＣについて得られる。全体として、２３種のＬｙｓｏＰＣにおいて観察された大幅な低下は、膵臓癌血清においては、全ファミリーがダウンレギュレートされることを示唆する。
【０１５１】
３Ｂ． ＰｔｄＣｈｏ及びプラスメニルホスホコリン（ＰｌｓＣｈｏ）のＭＲＭ
ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析のためと同一の水性抽出物を、正の分析モードにおいて、表６に列挙された１０種のうち７種のＰｔｄＣｈｏ及び６種のさらなるＰｔｄＣｈｏについて、並びに負の分析モードにおいて、表６に列挙された１０種のうち９種のＰｔｄＣｈｏ及び多数のさらなるＰｔｄＣｈｏについて、的を絞った方法によって分析した。図４２ａ及び４２ｂには、正及び負両方のＥＳＩ分析モードにおいて試験したすべてのＰｔｄＣｈｏの血清レベルが、対照に対して膵臓癌患者において大幅に低下していることの確認が報告されている。ＦＴＩＣＲの最良のバイオマーカーの中で最良の推定ＰｔｄＣｈｏ、「７８５．６」はまた、正のＥＳＩ分析モードにおけるＭＲＭによって試験されたすべての中でも最良のＰｔｄＣｈｏであり、５．７７Ｅ−１８のｐ値を有する。試験されたすべてのＰｔｄＣｈｏが、その側鎖とは無関係に膵臓癌血清において低下しており、正のＥＳＩ分析モードにおいて５．３１Ｅ−１０の最大ｐ値を有し、このことが、全ホスファチジルコリンファミリーは、膵臓癌血清において集合的にダウンレギュレートされることを実証することは興味深い。
【０１５２】
ＰｔｄＣｈｏファミリーにおける低下は、本発明者らを、同一試料中のそのビニルエーテル対応物、プラスメニルホスホコリン（ＰｌｓＣｈｏ）のレベルの評価に駆り立てた。図４２ｃには、正のエレクトロスプレーイオン化法分析モードにおいて試験されたすべてのＰｌｓＣｈｏの血清レベルが、対照と比較して膵臓癌患者において極めて大幅に低下していることが報告されている。７９３．６の質量を有するＰｌｓＣｈｏは、ＰｌｓＣｈｏ１８：０／２０：４の可能性が高く、最低のｐ値、３．９Ｅ−１７を示す。
【０１５３】
３Ｄ．スフィンゴミエリンのＭＲＭ
ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析のためと同一の水性抽出物を使用して、患者及び対照間のスフィンゴミエリンレベルの相違を確認するために、多重反応モニタリングをベースとするタンデムＭＳアプローチを開発した。図４３には、試験された５種のスフィンゴミエリン（ＦＴＩＣＲ分析によって同定された２種、ＳＭ（ｄ１８：１／１６：０）及びＳＭ（ｄ１８：１／２４：１（１５Ｚ）を含む）の血清レベルが、対照に対して膵臓癌患者において極めて大幅に低下していることが報告されている。ＦＴＩＣＲによって検出されなかったＳＭ（ｄ１８：１／２４：０）が、最強の低下を示し、７．８１Ｅ−１５のｐ値を有する。
【０１５４】
３Ｄ．Ｃ３６バイオマーカーのＭＲＭ
ＦＴＩＣＲ−ＭＳ分析のためと同一の酢酸エチル抽出物を使用して、患者及び対照間のＣ３６バイオマーカーレベルの相違を確認するために、多重反応モニタリングをベースとするタンデムＭＳアプローチを開発した。２Ａにおいて説明されるように、表５に列挙されるすべての質量の中で、いくつかは、Ｈ_２Ｏ分子又はいくつかの不飽和だけ異なり、Ｃ３６において同一のファミリーに属すると思われ、タンデムＭＳ法を、全「Ｃ３６ファミリー」（式及び遷移については方法参照のこと）に広げた。
【０１５５】
図４４には、試験された７種のＣ３６マーカーのレベルが、対照に対して膵臓癌患者において大幅に低下していることの確認が報告されている。すべてのＦＴＩＣＲバイオマーカーの中の最良の推定Ｃ３６マーカー（また、膵臓癌の最良のバイオマーカーでもある）、「５９４」はまた、ＭＲＭによって試験されたすべてのＣ３６の中で最良のバイオマーカーであり、１．４２Ｅ−１１のｐ値を有する。やはり、全ファミリーと同様に、Ｃ３６マーカーも膵臓癌血清においてダウンレギュレートされると思われることは興味深い。
【０１５６】
病期分析
疾患進行状態に関する情報を含めた。したがって、疾患進行とバイオマーカー低下の間に相関があるかどうかを決定した。所望の３種のＬｙｓｏＰＣ、７種のＰｔｄＣｈｏ及び３種のＣ３６マーカーのＭＲＭデータを、癌ステージに従って再分析した（図４５）。ステージあたり少量の患者でのこの予備研究は、いかなる傾向も示さないと思われる。
【０１５７】
バイオマーカーに対する化学放射線療法効果
化学放射線療法状態に関する情報を含めた。したがって、この種類の治療とバイオマーカー低下の間に相関があるかどうかを決定した。所望の３種のＬｙｓｏＰＣ、７種のＰｔｄＣｈｏ及び３種のＣ３６マーカーのＭＲＭデータを、治療状態に従って再分析した（図４６）。少量の患者でのこの予備研究は、バイオマーカーに対して化学放射線療法の効果がないことを示すと思われる。
【０１５８】
考察
本発明者らは、膵臓癌血清試料の包括的な的を絞らないメタボロミックプロファイリングを実施し、０．９０を上回るほとんどのＡＵＣによって示されるような、この癌の極めて強力な特徴を同定した。識別力があるとＦＴＩＣＲによって同定されたマーカーのファミリーを、的を絞った分析によって検証した。その低下が膵臓癌と関連している４種のファミリーが同定された：ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン及びステロイド様化合物であり得るＣ３６マーカー。
【０１５９】
リゾホスファチジルコリン１８：２、１８：３及び２０：５は、試験されたすべてのＬｙｓｏＰＣのうち最大の低下を示す。試験された２７種のＰｔｄＣｈｏのすべて（９種が、表６の上位リストに含まれる）が、対照に対して膵臓癌患者において大幅に低下したレベルを示す（図４２ａ、ｂ）。表８中の１０種のＰｔｄＣｈｏのほとんどが、表１５に見られるように、２種の側鎖のうち一方として、１８：２、２０：５又は２２：５を有すると予測されるか、又は示されている。要約すれば、１８：２、１８：３、２０：５を、また、より少ない程度に、２２：５を含有するホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリンは、最大の低下を示す。
【０１６０】
最良のバイオマーカーの中のスフィンゴミエリンの存在は、極めて興味深い。細胞死、成長及び分化における、ひいては、癌におけるスフィンゴミエリンの役割は、十分に実証されており（Dyatlovitskaya, E. V., and A. G. Kandyba. 2006. Role of biologically active sphingolipids in tumor growth. Biochemistry (Mosc). 71: 10-17、Claria, J. 2006. Regulation of cell proliferation and apoptosis by bioactive lipid mediators. Recent Pat Anticancer Drug Discov. 1: 369-382）、そのシグナル伝達経路を標的とする癌治療から、極めて有望な予備結果が得られる（Billich, A., and T. Baumruker. 2008. Sphingolipid metabolizing enzymes as novel therapeutic targets. Subcell Biochem 49: 487-522、Modrak, D. E., D. V. Gold, and D. M. Goldenberg. 2006. Sphingolipid targets in cancer therapy. Mol Cancer Ther 5: 200-208）。例えば、膵臓癌細胞株へのスフィンゴミエリンの添加は、恐らくは、細胞をアポトーシス経路に入るよう向け直すことによって、抗癌薬に対する化学受容性を大幅に増強することがわかっている（Modrak, D. E., E. Leon, D. M. Goldenberg, and D. V. Gold. 2009. Ceramide regulates gemcitabine-induced senescence and apoptosis in human pancreatic cancer cell lines. Mol Cancer Res 7: 890-896）。
【０１６１】
決して理論に拘束されようとは思わないが、ホスファチジルコリン及びスフィンゴミエリン両方において観察された変化は、コリンキナーゼの役割を示唆し；この細胞質酵素は、両種の生成にとって、続いて、細胞分裂にとって実際に重要である（Janardhan, S., P. Srivani, and G. N. Sastry. 2006. Choline kinase: an important target for cancer. Curr Med Chem 13: 1169-1186）。腫瘍形成の際のコリンキナーゼの関与（Ｒａｓエフェクターセリン／トレオニンキナーゼ（Ｒａｆ−１）、Ｒａｌ−ＧＤＳ及びＰＩ３Ｋによって媒介される）及び抗腫瘍活性におけるその特異的阻害剤の成功によって、このキナーゼは癌における極めて魅力的な標的となる（Janardhan, S., P. Srivani, and G. N. Sastry. 2006. Choline kinase: an important target for cancer. Curr Med Chem 13: 1169-1186、Ramirez de Molina, A., D. Gallego-Ortega, J. Sarmentero-Estrada, D. Lagares, T. Gomez Del Pulgar, E. Bandres, J. Garcia-Foncillas, and J. C. Lacal. 2008. Choline kinase as a link connecting phospholipid metabolism and cell cycle regulation: implications in cancer therapy. The international journal of biochemistry & cell biology 40: 1753-1763）。したがって、本結果は、膵臓の発癌におけるコリンキナーゼの関与を示唆する。
【０１６２】
本明細書に記載されるＣ３６マーカーは、本発明者らの知る限り、まだ、膵臓癌と関連していない。予備ＮＭＲ研究によって、これらの化合物は、ステロイド様又は抱合胆汁酸であり得るということが示唆されている。胆汁酸は、消化管の癌において重要なファミリーとして浮上しているので（Bernstein, H., C. Bernstein, C. M. Payne, and K. Dvorak. 2009. Bile acids as endogenous etiologic agents in gastrointestinal cancer. World J Gastroenterol 15: 3329-3340）、これは極めて興味深い。機序的に言えば、理論に拘束されようとは思わないが、胆汁には、胆汁酸塩及びリン脂質間の複雑なバランスがあり；膵臓癌において観察されたホスファチジルコリンにおけるレベルの低下は、胆汁への排出の低下によって引き起こされる可能性があり、これは、ＭＤＲ３遺伝子多形を反映するものであり得る（Khan, S. A., I. J. Cox, A. V. Thillainayagam, D. S. Bansi, H. C. Thomas, and S. D. Taylor-Robinson. 2005. Proton and phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy of human bile in hepatopancreaticobiliary cancer. Eur J Gastroenterol Hepatol 17: 733-738）。したがって、ホスファチジルコリン及び胆汁酸間に観察された不均衡は、発癌の根底にあるいくらかの遺伝子変化を反映するものであり得る。
【０１６３】
バイオマーカーの変化に対する臨床的変数の主要な効果は、全膵臓癌集団に関して同定されなかった。病期は、バイオマーカーの低下に影響を及ぼさないと思われる。ステージ効果がないという知見は、代謝欠陥が膵臓癌の発生に先行し得ることを示唆し、したがって、早期検出リスクスクリーニング法としての有用性を支持する。バイオマーカーに対する化学放射線療法効果も観察されず、これは、この治療が、膵臓癌の根底にある機序に影響を及ぼさないことを示唆し；治療後のバイオマーカーの正常化は、新規治療薬の良好な有効性指標となろう。
【０１６４】
統計分析によって、いくつかのバイオマーカーが膵臓癌及び健常な対照間をどのように識別するかが示された。例えば、６種のＦＴＩＣＲの最良バイオマーカーはすべて、１Ｅ−１２未満のｐ値及び０．９０を上回る個々のＡＵＣを示す。それらは、後に、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、２種のホスファチジルコリン及び２種のＣ３６マーカーである可能性が最も高いと同定された（１種は、ｐ＝９．９Ｅ−１４及び最高のＡＵＣを有する最良のバイオマーカー、「５９４」である）。これらのマーカーを組み合わせると、ＡＵＣは０．９８５に達し、９２．５％の特異性及び８８％の感度を有し、膵臓癌では、採血が如何に強力な診断ツールであり得るかを示す。
【０１６５】
要約すれば、本発明者らは、膵臓癌に特異的な代謝調節不全を同定した。２種の主な代謝産物ファミリー、グリセロホスホコリン関連化合物（３種のサブファミリーにサブグループ化される）及びこれまでに特性決定されていないＣ３６マーカーにおける特徴的な低下。これらの代謝産物は、その極めて低い生存率のために、最も恐ろしい癌のままである膵臓癌の高感度の、特異的な検出のための有用なバイオマーカーに相当する。記載される診断法は、治療最適化ステップと併せて実施される場合には、疾患に対するより有効な薬物治療を設計するために使用され得る。
【０１６６】
１つ又は２以上の現在好ましい実施形態を例として記載した。特許請求の範囲に定義される本発明の範囲から逸脱することなく、いくつかの変法及び改変を行ってもよいことは当業者には明らかであろう。
【０１６７】
（参考文献）
1. Boyle, P., and J. Ferlay. 2005. Cancer incidence and mortality in Europe, 2004. Ann Oncol 16: 481-488
2. Dabritz, J., R. Preston, J. Hanfler, and H. Oettle. 2009. Follow-up study of K-ras mutations in the plasma of patients with pancreatic cancer: correlation with clinical features and carbohydrate antigen 19-9. Pancreas 38: 534-541
3. Klapman, J., and M. P. Malafa. 2008. Early detection of pancreatic cancer: why, who, and how to screen. Cancer Control. 15: 280-287
4. Helmstaedter, L., and J. F. Riemann. 2008. Pancreatic cancer--EUS and early diagnosis. Langenbecks Arch Surg 393: 923-927
5. Gemmel, C., A. Eickhoff, L. Helmstadter, and J. F. Riemann. 2009. Pancreatic cancer screening: state of the art. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 3: 89-96
6. Peracaula, R., S. Barrabes, A. Sarrats, P. M. Rudd, and R. de Llorens. 2008. Altered glycosylation in tumours focused to cancer diagnosis. Dis Markers 25: 207-218
7. Ehmann, M., K. Felix, D. Hartmann, M. Schnolzer, M. Nees, S. Vorderwulbecke, R. Bogumil, M. W. Buchler, and H. Friess. 2007. Identification of potential markers for the detection of pancreatic cancer through comparative serum protein expression profiling. Pancreas 34: 205-214
8. Barrabes, S., L. Pages-Pons, C. M. Radcliffe, G. Tabares, E. Fort, L. Royle, D. J. Harvey, M. Moenner, R. A. Dwek, P. M. Rudd, R. De Llorens, and R. Peracaula. 2008. Glycosylation of serum ribonuclease 1 indicates a major endothelial origin and reveals an increase in core fucosylation in pancreatic cancer. Glycobiology 17: 388-400
9. Koopmann, J., C. N. White Rosenzweig, Z. Zhang, M. I. Canto, D. A. Brown, M. Hunter, C. Yeo, D. W. Chan, S. N. Breit, and M. Goggins. 2006. Serum Markers in Patients with Resectable Pancreatic Adenocarcinoma: Macrophage Inhibitory Cytokine 1 versus CA19-9 Clinical Cancer Research 12: 442-446
10. Rosty, C., L. Christa, S. Kuzdzal, B. W.M., M. L. Zahurak, F. Carnot, D. W. Chan, M. Canto, K. D. Lillemoe, J. L. Cameron, C. J. Yeo, R. H. Hruban, and M. Goggins. 2002. Identification of hepatocarcinoma-intestine-pancreas/pancreatitis-associated protein I as a biomarker for pancreatic ductal adenocarcinoma by protein biochip technology. Cancer research 62: 1868-1875
11. Janardhan, S., P. Srivani, and G. N. Sastry. 2006. Choline kinase: an important target for cancer. Curr Med Chem 13: 1169-1186
12. Garcea, G., C. P. Neal, C. J. Pattenden, W. P. Steward, and D. P. Berry. 2005. Molecular prognostic markers in pancreatic cancer: a systematic review. Eur J Cancer 41: 2213-2236
13. Bloomston, M., W. L. Frankel, F. Petrocca, S. Volinia, H. Alder, J. P. Hagan, C. G. Liu, D. Bhatt, C. Taccioli, and C. M. Croce. 2007. MicroRNA expression patterns to differentiate pancreatic adenocarcinoma from normal pancreas and chronic pancreatitis. JAMA 297: 1901-1908
14. Szafranska, A. E., T. S. Davison, J. John, T. Cannon, B. Sipos, A. Maghnouj, E. Labourier, and S. A. Hahn. 2007. MicroRNA expression alterations are linked to tumorigenesis and non-neoplastic processes in pancreatic ductal adenocarcinoma. Oncogene 26: 4442-4452
15. Lee, E. J., Y. Gusev, J. Jiang, G. J. Nuovo, M. R. Lerner, W. L. Frankel, D. L. Morgan, R. G. Postier, D. J. Brackett, and T. D. Schmittgen. 2007. Expression profiling identifies microRNA signature in pancreatic cancer. Int J Cancer 120: 1046-1054
16. Tian, M., Y. Z. Cui, G. H. Song, M. J. Zong, X. Y. Zhou, Y. R. Chen, and J. X. Han. 2008. Proteomic analysis identifies MMP-9, DJ-1 and A1BG as overexpressed proteins in pancreatic juice from pancreatic ductal adenocarcinoma patients BMC Cancer 8: 241
17. Warden, C. H., A. Daluiski, X. Bu, D. A. Purcell-Huynh, C. De Meester, B. H. Shieh, D. L. Puppione, R. M. Gray, G. M. Reaven, Y. D. Chen, and e. al. 1993. Evidence for linkage of the apolipoprotein A-II locus to plasma apolipoprotein A-II and free fatty acid levels in mice and humans. Proceedings of the National Academyof Sciences of the United States of America 90: 10886-10890
18. Trougakos, I. P., and E. S. Gonos. 2002. Clusterin/apolipoprotein J in human aging and cancer. The international journal of biochemistry & cell biology 34: 1430-1448
19. Zuijdgeest-van Leeuwen, S. D., M. S. van der Heijden, T. Rietveld, J. W. van den Berg, H. W. Tilanus, J. A. Burgers, J. H. Wilson, and P. C. Dagnelie. 2002. Fatty acid composition of plasma lipids in patients with pancreatic, lung and oesophageal cancer in comparison with healthy subjects. Clinical Nutrition 21: 225-230
20. Khan, S. A., I. J. Cox, A. V. Thillainayagam, D. S. Bansi, H. C. Thomas, and S. D. Taylor-Robinson. 2005. Proton and phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectroscopy of human bile in hepatopancreaticobiliary cancer. Eur J Gastroenterol Hepatol 17: 733-738
21. Kolb, A., S. Rieder, D. Born, N. A. Giese, T. Giese, G. Rudofsky, J. Werner, M. W. Buchler, H. Friess, I. Esposito, and J. Kleeff. 2009. Glucagon/insulin ratio as a potential biomarker for pancreatic cancer in patients with new-onset diabetes mellitus. Cancer Biol Ther 8
22. Gray, G. R., and D. Heath. 2005. A global reorganization of the metabolome in Arabidopsis during cold acclimation is revealed by metabolic fingerprinting. Physiologia Plantarum 124: 236-248
23. Goodenowe, D. B., L. L. Cook, J. Liu, Y. Lu, D. A. Jayasinghe, P. W. Ahiahonu, D. Heath, Y. Yamazaki, J. Flax, K. F. Krenitsky, D. L. Sparks, A. Lerner, R. P. Friedland, T. Kudo, K. Kamino, T. Morihara, M. Takeda, and P. L. Wood. 2007. Peripheral ethanolamine plasmalogen deficiency: a logical causative factor in Alzheimer's disease and dementia. Journal of lipid research 48: 2485-2498
24. Aharoni, A., C. H. Ric de Vos, H. A. Verhoeven, C. A. Maliepaard, G. Kruppa, R. Bino, and D. B. Goodenowe. 2002. Nontargeted metabolome analysis by use of Fourier Transform Ion Cyclotron Mass Spectrometry. Omics 6: 217-234
25. Dyatlovitskaya, E. V., and A. G. Kandyba. 2006. Role of biologically active sphingolipids in tumor growth. Biochemistry (Mosc). 71: 10-17
26. Claria, J. 2006. Regulation of cell proliferation and apoptosis by bioactive lipid mediators. Recent Pat Anticancer Drug Discov. 1: 369-382
27. Billich, A., and T. Baumruker. 2008. Sphingolipid metabolizing enzymes as novel therapeutic targets. Subcell Biochem 49: 487-522
28. Modrak, D. E., D. V. Gold, and D. M. Goldenberg. 2006. Sphingolipid targets in cancer therapy. Mol Cancer Ther 5: 200-208
29. Modrak, D. E., E. Leon, D. M. Goldenberg, and D. V. Gold. 2009. Ceramide regulates gemcitabine-induced senescence and apoptosis in human pancreatic cancer cell lines. Mol Cancer Res 7: 890-896
30. Ramirez de Molina, A., D. Gallego-Ortega, J. Sarmentero-Estrada, D. Lagares, T. Gomez Del Pulgar, E. Bandres, J. Garcia-Foncillas, and J. C. Lacal. 2008. Choline kinase as a link connecting phospholipid metabolism and cell cycle regulation: implications in cancer therapy. The international journal of biochemistry & cell biology 40: 1753-1763
31. Bernstein, H., C. Bernstein, C. M. Payne, and K. Dvorak. 2009. Bile acids as endogenous etiologic agents in gastrointestinal cancer. World J Gastroenterol 15: 3329-3340

【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断する方法であって、
ａ）前記患者由来の試料を高分解能質量分析によって分析して、精密質量強度データを得るステップと、
ｂ）前記精密質量強度データを、１種又は２種以上の参照試料から得た対応するデータと比較して、精密質量強度の増大又は減少を同定するステップと、
ｃ）前記精密質量強度の増大又は減少を使用して、前記患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は前記患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断するステップと
を含み、
前記精密質量強度が、７８．０５１６；８４．０５７５；１１２．０９７４；１１６．５６９６；１９１．５０５５；１９７．０８９６；２００．１３８９；２０２．０４５；２０３．１１５５；２１４．１２０４；２１４．１２０５；２３２．１３０９；２３３．１３４５；２４０．０９９７；２４３．０７１４；２４４．０５５４；２５４．１１２７；２５５．１１６１；２５６．２４０３；２６０．００３３；２６２．０８１４；２６８．１２８４；２７０．０３２３；２７０．０８６７；２７６．０９４８；２８０．２４０３；２８０．２４０４；２８１．２４３２；２８１．２４３５；２８２．２５５８；２８２．２５５９；２８３．２５９１；２８３．２５９５；２８４．９２５９；３００．１１８６；３００．２０６７；３０２．０９４５；３０２．２２２；３０２．２４５７；３０４．２３７５；３０４．２４０７；３１７．９６１３；３１８．０９３１；３２６．２０４８；３２６．２４５８；３２７．９９０２；３２８．２４０３；３２８．２４０８；３２８．２６２７；３２９．２４３９；３２９．２６５８；３３０．２５５９；３３２．１４７３；３３８．０１８９；３４８．１１９１；３５０．２２２２；３６０．１７８２；３６０．１７９２；３６１．１８２８；３６６．３５９３；３６８．１０５７；３８２．１０８３；３８２．１６０１；４１８．２２０４；４２８．２４０４；４２８．３６４７；４４６．２５２６；４４６．３３９５；４６８．２３３６；４６８．３５８１；４６８．３８０７；４６９．２３７；４６９．３６１６；４８１．３１５；４８４．３５２７；４８５．９０４；４９４．４３２１；４９５．３３２５；４９６．３３７３；５０５．３１４６；５０８．２２５６；５１７．３１４１；５１８．３２１；５１９．３２９５；５２０．４４８；５２２．４６３８；５２２．４６３９；５２３．３６６１；５２３．４６７５；５３８．４２３７；５４０．４３８１；５４１．３１３４；５４１．３３６１；５４２．３３９４；５４５．３４５４；５６２．４９６２；５６４．５１２１；５６５．３３７３；５６６．３４０３；５６９．３６８２；５７０．３７２；５７２．４７９８；５７３．４８３３；５７４．４９５２；５７５．４９８５；５７６．４７５１；５７６．５１１３；５７７．５１４９；５７８．５１６９；５７８．５２８４；５７９．５３１３；５８７．３２１４；５８８．３２６９；５８９．３３６８；５９０．３４０８；５９２．４７０９；５９４．４８５２；５９４．４８６３；５９５．４８９２；５９５．４８９７；５９６．５０１７；５９６．５０２７；５９７．５０６６；５９８．４９５５；５９９．４９９３；６００．５１１７；６０１．５１５１；６０２．５２６９；６０３．５２９７；６０６．５５９１；６０９．３２５９；６１３．３３７９；６１５．３５３５；６２７．５６５６；６２８．５４３８；６３０．７９９；６３１．７９８；６３３．３２４５；６３５．７５２５；６３６．７５３２；６４５．７９５８；６５７．７３３７；６５８．７３７２；６７０．５６９６；６７１．５７３１；６８１．５８５８；７０２．５７０９；７１５．６９５９；７１９．６２５６；７２０．６２７２；７２１．５０３５；７２３．５２０３；７２３．５２１；７２４．５２５２；７２４．５４７７；７２５．７２２８；７３３．５０５４；７３５．６５８２；７４３．５３９６；７４４．５４２５；７４５．５６３１；７４６．５１２８；７４６．５７０５；７４８．５２７；７４９．５３７４；７４９．５３８８；７５０．５４２５；７５１．５５１１；７５１．５５３９；７５２．５５７４；７５５．５４９７；７５７．５５６；７５７．５５８７；７５８．５６２；７５８．５６２６；７５９．５３８３；７５９．５７３３；７６０．５７９２；７６３．５５７８；７６５．５６７８；７６６．４７９２；７７１．５６９９；７７３．５２７６；７７４．５４１９；７７５．５５２２；７７５．５５３２；７７５．５５３２；７７７．０４０２；７７７．５７０９；７７９．５４０５；７７９．５４１６；７８０．５４５２；７８０．５４５４；７８１．５０２９；７８１．５５６６；７８２．５６１２；７８３．５６９；７８３．５７５５；７８４．５７４２；７８４．５８０６；７８５．５９１３；７８５．５９２９；７８５．５９３１；７８６．５９３；７８６．５９７２；７８７．５９８９；７９１．５８４１；７９３．７０９１；７９５．５１８１；７９６．５２１２；８０１．５１４７；８０１．５２６２；８０１．５５２３；８０２．５２９１；８０３．５３７３；８０３．５４１４；８０３．５６７７；８０４．５４２２；８０４．５４５６；８０４．５７１４；８０４．７２０８；８０５．５５４９；８０６．５６３２；８０７．５７３４；８０７．５７３９；８０７．５７６４；８０８．５７８３；８０８．５７９１；８０９．５７９６；８１０．５８６７；８１１．５７２９；８１１．６０８；８１２．６７７４；８１３．５８８８；８１９．５１７７；８２３．５４１１；８２４．６９；８２５．５５２２；８２６．５５６１；８２６．７０４７；８２７．５４０１；８２７．５６７８；８２７．７０８２；８２８．５３９７；８２８．５７２１；８２９．５５１６；８２９．５５３２；８２９．５８４３；８３０．５５９１；８３０．５８７９；８３１．５６５２；８３１．５７２；８３１．５９９７；８３２．６０３１；８３３．５８６４；８３４．５８６８；８３５．５９８；８３７．７２０９；８３８．７２８４；８３８．７４３５；８３９．７４６４；８４７．５３１；８５０．７０６１；８５０．７３２６；８５１．６６９４；８５１．７１０７；８５１．７３３７；８５２．７３６８；８５３．５７３；８５４．７３５８；８５４．７３９７；８５５．５７２１；８５５．７３９２；８５５．７４３６；８５６．７５０５；８５６．７５４；８５７．６９２３；８５７．７５４３；８５７．７５７４；８５８．７６４４；８６１．７４９；８６５．７５２；８６６．７５８５；８６７．７６４９；８６８．７７０４；８７１．５５４７；８７３．７８１９；８７４．７０６６；８７４．７８７；８７５．７１０８；８７９．７６２９；８８９．７５３７；８８９．８１４７；８９４．７９１１；８９８．７０４３；８９８．７３２５；９０２．７６２９；９０３．７６３６；９０７．７８４７；９０８．７９０７；９０９．７８８２；９１０．７２７２；９１６．７７３５；９１９．６４９６；９２１．８１３；９２２．７０８１；９２２．７２８５；９２２．８２２２；９２３．７２９５；９２４．７２３３；９２５．７２７；９３３．８１３７；９３７．７５４２；９４６．８１９４；９４７．８２６３；９４８．８３６；９５０．７３６４；９６０．７４３２；９７０．７３３；９７２．７４８１；９７３．７４８２；９８４．７４０６；９８６．７５６８；９９６．７５１８；９９７．７３９７；９９８．７５６６；９９９．７６３２；１０１０．７６５；１０１１．６６９；１０１１．７７；１０１２．７８１；１０１６．９３１；１０１７．９３５；１０１８．９４４；１０１９．９５１；１０２０．９５７；１０３８．９１５；１０３９．７０５；１０３９．９２１；１０４０．９３３；１０４１．９３５；１１９９．０８４；１２００．０８８；１２０１．０９；１２０２．０９８；１２２３．０９；１２２４．０９６；１２２５．０９６；１２２６．５９９；１２２７．１１２；１２２８．１１７；１２２９．１２；１２３０．１２５；１２４７．０８４；１２４９．１０５；１２５０．１０８；１２５１．１１９；１２５２．１２；１２５３．１２３；１２５３．１３４；１２５４．１３７；１２５５．１５３及びその組合せからなる群から選択される、ダルトンで表示される水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量、又はそれと実質的に同等な質量で測定される方法。
【請求項２】
定量化データが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴、飛行時間型、磁場、四重極又はトリプル四重極質量分析計を使用して得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
試料が、血液試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
試料が、血清試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
試料が、脳脊髄液試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
精密質量強度が、イオン化代謝産物を表す、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
試料に対して液液抽出を実施し、それによって、非極性代謝産物が有機溶媒に溶解し、極性代謝産物が水性溶媒に溶解する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
精密質量強度が、抽出された試料を、正のエレクトロスプレーイオン化法、負のエレクトロスプレーイオン化法、正の大気圧化学イオン化法、負の大気圧化学イオン化法及びそれらの組合せからなる群から選択されるイオン化法を使用してイオン化することによって得られる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
定量化データが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析計を使用して得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
１種又は２種以上の参照試料が、１人又は２人以上の膵臓癌陰性のヒトに由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
患者由来の試料を質量分析によって分析して、１種又は２種以上の内部標準分子の精密質量強度データを得るステップと、
前記１種又は２種以上の内部標準分子について得られた前記精密質量強度に対する、ステップ（ａ）において得られた精密質量強度の各々の比を算出するステップと
をさらに含み、
比較ステップ（ｂ）が、各比を、１種又は２種以上の参照試料について得られた１又は２以上の対応する比と比較するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量が、５１９．３２９５；５２３．３６６１；５４１．３１３４；７０２．５７０９；７２４．５４７７；７５７．５５６；７７９．５４０５；７８３．５６９；７８５．５９１３；８０３．５３７３；８０５．５５４９；８０７．５７３４；８０９．５７９６；８１２．６７７４；８２９．５５１６；８３３．５８６４；５７６．４７５１；５９４．４８６３；５９６．５０１７；及びその組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
比較ステップ（ｂ）において、精密質量強度の低下が同定される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量が、６００．５１１７である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
比較ステップ（ｂ）において、精密質量強度の増大が同定される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
実質的に同等であるということが、水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量の±５ｐｐｍを意味する、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
実質的に同等であるということが、水素及び電子で調整された精密質量又は中性の精密質量の±１ｐｐｍを意味する、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断する方法であって、
ａ）前記患者由来の試料を分析して、１種又は２種以上の代謝産物マーカーの定量化データを得るステップと、
ｂ）前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーの前記定量化データを、１種又は２種以上の参照試料について得られた対応するデータと比較して、前記試料における前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの増大又は減少を同定するステップと、
ｃ）前記試料における、前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの前記増大又は減少を使用して、前記患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は前記患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断するステップと
を含み、
前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーが、Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_４、Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５、Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６、Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_６、Ｃ_３６Ｈ_６８Ｏ_６、Ｃ_２２Ｈ_４６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２２Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２４Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２４Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２４Ｈ_４６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_５２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２６Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_２８Ｈ_４６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３０Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３２Ｈ_５８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３２Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３８Ｈ_７６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_７８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４０Ｈ_７０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_３９Ｈ_８０Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、及びその組合せからなる分子式から選択される１種又は２種以上の分子を含む、方法。
【請求項１９】
定量化データが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴、飛行時間型、磁場、四重極又はトリプル四重極質量分析計を使用して得られる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
定量化データが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析計を使用して得られる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
質量分析計が、クロマトグラフィーシステムを備えている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
試料が、血液試料である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
試料が、血清試料である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
試料が、脳脊髄液試料である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
試料に対して液液抽出を実施し、それによって、非極性代謝産物が有機溶媒に溶解し、極性代謝産物が水性溶媒に溶解する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
抽出された試料を、正又は負のエレクトロスプレーイオン化法、正又は負の大気圧化学イオン化法又はその組合せによって分析する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抽出された試料をＭＳ／ＭＳ遷移によって分析する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
抽出された試料を、抽出イオン電流（ＥＩＣ）クロマトグラフィー及びＭＳ／ＭＳ遷移によって分析する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
１種又は２種以上の参照試料が、１人又は２人以上の膵臓癌陰性のヒトに由来する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３０】
患者に由来する試料を分析して、１種又は２種以上の内部標準分子の定量化データを得るステップと、
前記１種又は２種以上の内部標準分子について得られたレベルに対する、１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの各々の比を得るステップと
をさらに含み、
比較ステップ（ｂ）が、各比を、１種又は２種以上の参照試料について得られた１又は２以上の対応する比と比較するステップを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
比較ステップ（ｂ）において、試料中の１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの低下が同定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３２】
代謝産物が、ＬｙｓｏＰＣ １４：０、ＬｙｓｏＰＣ １４：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：０、ＬｙｓｏＰＣ １６：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：０、ＬｙｓｏＰＣ １８：１、ＬｙｓｏＰＣ １８：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：１、ＬｙｓｏＰＣ ２０：２、ＬｙｓｏＰＣ ２０：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：４、ＬｙｓｏＰＣ ２０：５、ＬｙｓｏＰＣ ２０：６、ＬｙｓｏＰＣ ２２：３、ＬｙｓｏＰＣ ２２：４、ＬｙｓｏＰＣ ２２：５、ＬｙｓｏＰＣ ２２：６、ＬｙｓｏＰＣ ２４：４、ＬｙｓｏＰＣ ２４：６、ＬｙｓｏＰＣ ３０：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：０、ＬｙｓｏＰＣ ３２：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：２、ＬｙｓｏＰＣ ３２：６及びその組合せからなる群から選択されるリゾホスファチジルコリン（ＬｙｓｏＰＣ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
代謝産物が、Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、及びその組合せからなる群から選択される分子式を有するホスファチジルコリンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項３４】
代謝産物が、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、及びその組合せからなる群から選択される分子式を有するプラスメニルホスホコリンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項３５】
代謝産物が、Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_３９Ｈ_８０Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、及びその組合せからなる群から選択される分子式を有するスフィンゴミエリンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項３６】
Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_４の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５５７．４／４９５．４、５５７．４／５３９．４、５５７．４／５１３．３、５５７．４／２７９．２、５５７．４／２７７．２、５５７．４／２２０．７及び５５７．４／１１１．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
Ｃ_３６Ｈ_６２Ｏ_５の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５７３．５／５１１．４、５７３．５／５５５．３、５７３．５／５３７．４、５７３．５／５２９．４、５７３．５／５１９．４、５７３．５／４９３．３、５７３．５／４５７．４、５７３．５／４５５．３、５７３．５／４４３．４、５７３．５／４１５．４、５７３．５／４１３．３、５７３．５／４１１．３、５７３．５／３９９．３、５７３．５／３９７．３、５７３．５／３８９．７、５７３．５／２９５．２、５７３．５／２７９．２、５７３．５／２７７．２、５７３．５／２５１．２、５７３．５／２３１．１、５７３．５／２２３．１、５７３．５／２０１．１、５７３．５／１７１．１、５７３．５／１６９．１、５７３．５／１２５．１及び５７３．５／１１３．１、及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_５の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５７５．５／５１３．５、５７５．５／５５７．５、５７５．５／５３９．５、５７５．５／５３１．５、５７５．５／４９９．５、５７５．５／４９５．５、５７５．５／４５９．４、５７５．５／４１７．４、５７５．５／４１５．３、５７５．５／４１３．３、５７５．５／４０３．３、５７５．５／２９５．２、５７５．５／２７９．２、５７５．５／２６０．２、５７５．５／２５１．２、５７５．５／１９７．９、５７５．５／１１９．４、５７５．５／１１３．１、及び５７５．５／９７．０、及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_５の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５７７．５／５１５．４、５７７．５／５５９．４、５７７．５／５４６．５、５７７．５／５３３．５、５７７．５／４９７．４、５７７．５／４１９．４、５７７．５／４０５．５、５７７．５／２９７．２及び５７７．５／２８１．２、及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４０】
Ｃ_３６Ｈ_６４Ｏ_６の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５９１．５／５７３．４、５９１．５／５５５．４、５９１．５／５２８．３、５９１．５／５１１．２、５９１．５／４７６．１、５９１．５／４１９．３、５９１．５／４０３．１、５９１．５／３８７．３、５９１．５／２９７．２、５９１．５／２９５．２、５９１．５／２７４．０、５９１．５／２５５．３、５９１．５／２２３．６、５９１．５／２０３．５、５９１．５／２０１．１、５９１．５／１７１．０及び５９１．５／１２５．３、及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４１】
Ｃ_３６Ｈ_６６Ｏ_６の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５９３．５／５５７．５、５９３．５／５７５．４、５９３．５／５４９．４、５９３．５／５３１．５、５９３．５／５１３．４、５９３．５／４９５．４、５９３．５／４３３．３、５９３．５／４２１．４、５９３．５／４１５．２、５９３．５／３９１．４、５９３．５／３７１．３、５９３．５／３１５．３、５９３．５／３１１．１、５９３．５／２９７．２、５９３．５／２８１．２、５９３．５／２７７．２、５９３．５／２５１．２、５９３．５／２０１．１、５９３．５／１９５．３、５９３．５／１７１．１、５９３．５／１３９．１及び５９３．５／１３３．５、及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
Ｃ_３６Ｈ_６８Ｏ_６の分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、負のイオン化モードにおいて前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、５９５．５／５５９．５、５９５．５／５７７．４、５９５．５／５５１．４、５９５．５／５３３．４、５９５．５／５１５．５、５９５．５／４９７．４、５９５．５／４７８．４、５９５．５／４３３．３、５９５．５／４２３．４、５９５．５／３９１．３、５９５．５／３７２．３、５９５．５／３１５．３、５９５．５／３１３．２、５９５．５／２９８．２、５９５．５／２９７．２、５９５．５／２８１．２、５９５．５／２７９．２、５９５．５／２３９．２、５９５．５／２３２．９、５９５．５／１７１．１、５９５．５／１６９．１及び５９５．５／１４１．１、及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４３】
Ｃ_２６Ｈ_５０ＮＯ_７Ｐの分子式を有するリゾホスファチジルコリン代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける５２０．３／１８４．２、負のイオン化モードにおける５６４．３／５０４．３、負のイオン化モードにおける５６４．３／２７９．３及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４４】
Ｃ_２６Ｈ_５４ＮＯ_７Ｐの分子式を有するリゾホスファチジルコリン代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける５２４．３／１８４．２、負のイオン化モードにおける５６８．３／５０８．４、負のイオン化モードにおける５６８．３／２８３．３及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４５】
Ｃ_２８Ｈ_４８ＮＯ_７Ｐの分子式を有するリゾホスファチジルコリン代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける５４２．３／１８４．２、負のイオン化モードにおける５８６．３／５２６．３、負のイオン化モードにおける５８６．３／３０１．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４６】
Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける７５８．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：０／１８：２の８０２．６／７４２．６又は８０２．６／２７９．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／１６：０の８０２．６／７４２．６又は８０２．６／２５５．３、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：１／１８：１の８０２．６／７４２．６又は８０２．６／２８１．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：１／１６：１の８０２．６／７４２．６又は８０２．６／２５３．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４７】
Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける７８０．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／１８：３の８２４．６／７６４．６又は８２４．６／２７９．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：０／２０：５の８２４．６／７６４．６又は８２４．６／３０１．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２０：５／１６：０の８２４．６／７６４．６又は８２４．６／２５５．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４８】
Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける７８４．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：０／２０：３の８２８．６／７６８．６又は８２８．６／３０５．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２０：３／１６：０の８２８．６／７６８．６又は８２８．６／２５５．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：１／１８：２の８２８．６／７６８．６又は８２８．６／２７９．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／１８：１の８２８．６／７６８．６又は８２８．６／２８１．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４９】
Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける７８６．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：０／１８：２の８３０．６／７７０．６又は８３０．６／２７９．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／１８：０の８３０．６／７７０．６又は８３０．６／２８３．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：１／１８：１の８３０．６／７７０．６又は８３０．６／２８１．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５０】
Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８０４．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／２０：５の８４８．６／７８８．６又は８４８．６／３０１．３、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２０：５／１８：２の８４８．６／７８８．６又は８４８．６／２７９．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：１／２２：６の８４８．６／７８８．６又は８４８．６／３２７．６及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５１】
Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８０６．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２２：６／１６：０の８５０．６／２５５．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／２０：４の８５０．６／３０３．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５２】
Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８０８．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：０／２０：５の８５２．６／７９２．６又は８５２．６／３０１．３、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：０／２２：５の８５２．６／７９２．６又は８５２．６／３２９．３、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：１／２０：４の８５２．６／７９２．６又は８５２．６／３０３．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２２：５／１６：０の８５２．６／７９２．６又は８５２．６／２５５．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５３】
Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８１０．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：０／２０：４の８５４．６／７９４．６又は８５４．６／３０３．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２０：４／１８：０の８５４．６／７９４．６又は８５４．６／２８３．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：１／２０：３の８５４．６／７９４．６又は８５４．６／３０５．３、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／２０：２の８５４．６／７９４．６又は８５４．６／３０７．３、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１６：０／２２：４の８５２．６／７９４．６又は８５２．６／３３１．３及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５４】
Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８３０．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ１８：２／２２：６の８７４．６／８１４．６又は８７４．６／３２７．３及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５５】
Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８３２．６／１８４．２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項５６】
Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８３４．６／１８４．２、負のイオン化モードにおけるＰｔｄＣｈｏ２２：６／１８：０の８７８．６／８１８．６又は８７８．６／２８３．２及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５７】
Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける７０３．６／１８４．２、負のイオン化モードにおける７４７．６／６８７．６又は７４７．６／１６８．１及びその組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項５８】
Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐの分子式を有する代謝産物について、少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が同定され、前記少なくとも１つのＭＳ／ＭＳ遷移が、正のイオン化モードにおける８１３．７／１８４．２、負のイオン化モードにおける８５７．６／７９７．６又は８５７．６／１６８．１及びその組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項５９】
患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断する方法であって、
ａ）前記患者由来の試料を分析して、１種又は２種以上の代謝産物マーカーの定量化データを得るステップと、
ｂ）前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーの定量化データを、１種又は２種以上の参照試料について得られた対応するデータと比較して、前記試料における前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの増大又は減少を同定するステップと、
ｃ）前記試料における、前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの前記増大又は減少を使用して、前記患者の膵臓癌健康状態若しくは膵臓癌健康状態の変化を診断するか、又は前記患者において膵臓癌を発症するリスク若しくは膵臓癌の存在を診断するステップと
を含み、
前記１種又は２種以上の代謝産物マーカーが、
（ｉ）その付加物又は塩を含めた、下記式（Ｉ）のジアシルホスファチジルコリン、プラスマニルホスホコリン又はプラスメニルホスホコリン：
【化１】


(I)
［式中、
Ｒ_１は、グリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸又はアルコール部分であり、前記結合は、前記代謝産物マーカーがジアシルホスファチジルコリンを含む場合はアシル結合、前記代謝産物マーカーがプラスマニルホスホコリンを含む場合はエーテル結合、又は前記代謝産物マーカーがプラスメニルホスホコリンを含む場合はビニル−エーテル結合であり、
Ｒ_２は、アシル結合によって前記グリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸部分である］、
（ii）その付加物又は塩を含めた、下記式（II）の２−リゾホスファチジルコリン又は下記式（III）の１−リゾホスファチジルコリン：
【化２】


(II)
【化３】


(III)
［式中、
Ｒ_１は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１４：０、１４：１、１６：０、１６：１、１６：２、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：２、２０：３、２０：４、２０：５、２０：６、２２：３、２２：４、２２：５、２２：６、２４：４、２４：６、３０：１、３２：０、３２：１、３２：２又は３２：６脂肪酸部分である］、又は
（iii）その付加物又は塩を含めた、下記式（IV）に定義されたスフィンゴミエリン：
【化４】


(IV)
［式中、破線は、任意選択の二重結合を表し、
Ｒ_１は、Ｃ_１３アルキル基であり、
Ｒ_２は、Ｃ_１１−Ｃ_２５アルキル又はアルケニル基であり、前記アルケニル基は、１〜３の二重結合を有する］
を含む方法。
【請求項６０】
定量化データが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴、飛行時間型、磁場、四重極又はトリプル四重極質量分析計を使用して得られる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
定量化データが、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析計を使用して得られる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
質量分析計が、クロマトグラフィーシステムを備えている、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
試料が、血液試料である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６４】
試料が、血清試料である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６５】
試料が、脳脊髄液試料である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６６】
試料に対して液液抽出を実施し、それによって、非極性代謝産物が有機溶媒に溶解し、極性代謝産物が水性溶媒に溶解する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６７】
抽出された試料を、正又は負のエレクトロスプレーイオン化法、正又は負の大気圧化学イオン化法又はその組合せによって分析する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
抽出された試料をＭＳ／ＭＳ遷移によって分析する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
抽出された試料を、抽出イオン電流（ＥＩＣ）クロマトグラフィー及びＭＳ／ＭＳ遷移によって分析する、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
１種又は２種以上の参照試料が、１人又は２人以上の膵臓癌陰性のヒトに由来する、請求項５９に記載の方法。
【請求項７１】
患者に由来する試料を分析して、１種又は２種以上の内部標準分子の定量化データを得るステップと、
前記１種又は２種以上の内部標準分子について得られたレベルに対する、１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの各々の比を得るステップと
をさらに含み、
比較ステップ（ｂ）が、各比を、１種又は２種以上の参照試料について得られた１又は２以上の対応する比と比較するステップを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項７２】
比較ステップ（ｂ）において、試料中の１種又は２種以上の代謝産物マーカーのレベルの低下が同定される、請求項５９に記載の方法。
【請求項７３】
代謝産物が、ＬｙｓｏＰＣ １４：０、ＬｙｓｏＰＣ １４：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：０、ＬｙｓｏＰＣ １６：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：０、ＬｙｓｏＰＣ １８：１、ＬｙｓｏＰＣ １８：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：１、ＬｙｓｏＰＣ ２０：２、ＬｙｓｏＰＣ ２０：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：４、ＬｙｓｏＰＣ ２０：５、ＬｙｓｏＰＣ ２０：６、ＬｙｓｏＰＣ ２２：３、ＬｙｓｏＰＣ ２２：４、ＬｙｓｏＰＣ ２２：５、ＬｙｓｏＰＣ ２２：６、ＬｙｓｏＰＣ ２４：４、ＬｙｓｏＰＣ ２４：６、ＬｙｓｏＰＣ ３０：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：０、ＬｙｓｏＰＣ ３２：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：２、ＬｙｓｏＰＣ ３２：６及びその組合せからなる群から選択されるリゾホスファチジルコリン（ＬｙｓｏＰＣ）である、請求項５９に記載の方法。
【請求項７４】
代謝産物が、Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ及びその組合せからなる群から選択される分子式を有するホスファチジルコリンである、請求項５９に記載の方法。
【請求項７５】
代謝産物が、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、及びその組合せからなる群から選択される分子式を有するプラスメニルホスホコリンである、請求項５９に記載の方法。
【請求項７６】
代謝産物が、Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_３９Ｈ_８０Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、及びその組合せからなる群から選択される分子式を有するスフィンゴミエリンである、請求項５９に記載の方法。
【請求項７７】
（ｉ）その付加物又は塩を含めた、下記式（Ｉ）のジアシルホスファチジルコリン、プラスマニルホスホコリン又はプラスメニルホスホコリン：
【化５】


(I)
［式中、
Ｒ_１は、グリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、又は２２：５脂肪酸又はアルコール部分であり、前記結合は、標準物質がジアシルホスファチジルコリンを含む場合はアシル結合、前記標準物質がプラスマニルホスホコリンを含む場合はエーテル結合、又は前記標準物質がプラスメニルホスホコリンを含む場合はビニル−エーテル結合であり、
Ｒ_２は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１６：０、１６：１、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：３、２０：４、２０：５、２２：５又は２２：６脂肪酸部分である］
（ii）その付加物又は塩を含めた、下記式（II）の２−リゾホスファチジルコリン又は下記式（III）の１−リゾホスファチジルコリン：
【化６】


(II)
【化７】


(III)
［式中、
Ｒ_１は、アシル結合によってグリセロール骨格と結合している１４：０、１４：１、１６：０、１６：１、１６：２、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：２、２０：３、２０：４、２０：５、２０：６、２２：３、２２：４、２２：５、２２：６、２４：４、２４：６、３０：１、３２：０、３２：１、３２：２又は３２：６脂肪酸部分である］
（iii）その付加物又は塩を含めた、下記式（IV）で定義されたスフィンゴミエリン：
【化８】


(IV)
［式中、破線は、任意選択の二重結合を表し、
Ｒ_１は、Ｃ_１３アルキル基であり、
Ｒ_２は、Ｃ_１１−Ｃ_２５アルキル又はアルケニル基であり、前記アルケニル基は、１〜３の二重結合を有する］
を含む標準物質であって、
前記ジアシルホスファチジルコリン、プラスマニルホスホコリン、プラスメニルホスホコリン、リゾホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリンが検出可能なマーカーで標識されている標準物質。
【請求項７８】
スフィンゴミエリンのＲ_２が、Ｃ_１１アルキル基、Ｃ_１３アルキル基、Ｃ_１５アルキル基、Ｃ_１７アルキル基、３つの二重結合を含むＣ_１７アルケニル基、Ｃ_１９アルキル基、Ｃ_２１アルキル基、１つの二重結合を含むＣ_２３アルケニル基、Ｃ_２３アルキル基、Ｃ_２４アルキル基、１つの二重結合を含むＣ_２５アルケニル基又はＣ_２５アルキル基である、請求項７７に記載の標準物質。
【請求項７９】
リゾホスファチジルコリンが、ＬｙｓｏＰＣ １４：０、ＬｙｓｏＰＣ １４：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：０、ＬｙｓｏＰＣ １６：１、ＬｙｓｏＰＣ １６：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：０、ＬｙｓｏＰＣ １８：１、ＬｙｓｏＰＣ １８：２、ＬｙｓｏＰＣ １８：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：１、ＬｙｓｏＰＣ ２０：２、ＬｙｓｏＰＣ ２０：３、ＬｙｓｏＰＣ ２０：４、ＬｙｓｏＰＣ ２０：５、ＬｙｓｏＰＣ ２０：６、ＬｙｓｏＰＣ ２２：３、ＬｙｓｏＰＣ ２２：４、ＬｙｓｏＰＣ ２２：５、ＬｙｓｏＰＣ ２２：６、ＬｙｓｏＰＣ ２４：４、ＬｙｓｏＰＣ ２４：６、ＬｙｓｏＰＣ ３０：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：０、ＬｙｓｏＰＣ ３２：１、ＬｙｓｏＰＣ ３２：２、及びＬｙｓｏＰＣ ３２：６からなる群から選択される、請求項７７に記載の標準物質。
【請求項８０】
ジアシルホスファチジルコリンが、Ｃ_４２Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_７８ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８０ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８２ＮＯ_８Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_８Ｐ及びＣ_４８Ｈ_８６ＮＯ_８Ｐからなる群から選択される分子式を有する、請求項７７に記載の標準物質。
【請求項８１】
プラスメニルホスホコリンが、Ｃ_４２Ｈ_８０ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４２Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４４Ｈ_８８ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８２ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４６Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐ、Ｃ_４８Ｈ_８４ＮＯ_７Ｐ、及びＣ_４８Ｈ_８６ＮＯ_７Ｐからなる群から選択される分子式を有する、請求項７７に記載の標準物質。
【請求項８２】
スフィンゴミエリンが、Ｃ_３９Ｈ_７９Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_３９Ｈ_８０Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８１Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８２Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４１Ｈ_８３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４１Ｈ_８４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９３Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、Ｃ_４７Ｈ_９４Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋、Ｃ_４７Ｈ_９５Ｎ_２Ｏ_６Ｐ、及びＣ_４７Ｈ_９６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ^＋からなる群から選択される分子式を有する、請求項７７に記載の標準物質。
【請求項８３】
検出可能なマーカーが、インビトロでの検出を可能にする安定同位体、酵素又はタンパク質である、請求項７７に記載の標準物質。
【請求項８４】
請求項７７に記載の標準物質と、分析物を定量化するか、又は診断試験を実施するための使用説明書とを含むキット。

【図１】

【図２】

【図３ａ】

【図３ｂ】

【図４ａ】

【図４ｂ】

【図４ｃ】

【図４ｄ】

【図４ｅ】

【図４ｆ】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４ａ】

【図１４ｂ】

【図１５ａ】

【図１５ｂ】

【図１６ａ】

【図１６ｂ】

【図１６ｃ】

【図１６ｄ】

【図１７】

【図１８】

【図１９ａ】

【図１９ｂ】

【図１９ｃ】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３ａ】

【図２３ｂ】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０ａ】

【図３０ｂ】

【図３１ａ】

【図３１ｂ】

【図３１ｃ】

【図３１ｄ】

【図３２ａ】

【図３２ｂ】

【図３２ｃ】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１ａ】

【図４１ｂ】

【図４１ｃ】

【図４１ｄ】

【図４２ａ】

【図４２ｂ】

【図４２ｃ】

【図４３】

【図４４】

【図４５ａ−ｂ】

【図４５ｃ−ｄ】

【図４６ａ−ｂ】

【図４６ｃ−ｄ】

【公表番号】特表２０１３−５０６１４２（Ｐ２０１３−５０６１４２Ａ）
【公表日】平成２５年２月２１日（２０１３．２．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３１１９８（Ｐ２０１２−５３１１９８）
【出願日】平成２２年１０月１日（２０１０．１０．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２０１０／００１５６５
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０３８５０９
【国際公開日】平成２３年４月７日（２０１１．４．７）
【出願人】（５０４３５３７３０）フェノメノーム　ディスカバリーズ　インク (16)
【Ｆターム（参考）】