臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材
【課題】濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能な臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材を提供することにある。
【解決手段】臨床検査システムは、生体試料から測定対象成分を抽出する前処理部１００と、前処理部により抽出された測定対象成分を質量分析する質量分析部２００とを有する。前処理部１００において、カートリッジテーブル１２０には、上流側のフィルター部を有するフィルターユニット１１２と下流側の固相抽出剤を有する固相抽出ユニット１１４が連結した前処理用器材１１０を、複数の設置される。分注機構１３２は、カートリッジテーブルに設置された前処理用器材に対して所定の溶液を供給する。圧力付加機構１３４は、カートリッジテーブルに設置された前処理用器材の内部の溶液に圧力を付加する。撹拌機構１３６は、カートリッジテーブルに設置された前処理用器材の内部の溶液を撹拌する。
【解決手段】臨床検査システムは、生体試料から測定対象成分を抽出する前処理部１００と、前処理部により抽出された測定対象成分を質量分析する質量分析部２００とを有する。前処理部１００において、カートリッジテーブル１２０には、上流側のフィルター部を有するフィルターユニット１１２と下流側の固相抽出剤を有する固相抽出ユニット１１４が連結した前処理用器材１１０を、複数の設置される。分注機構１３２は、カートリッジテーブルに設置された前処理用器材に対して所定の溶液を供給する。圧力付加機構１３４は、カートリッジテーブルに設置された前処理用器材の内部の溶液に圧力を付加する。撹拌機構１３６は、カートリッジテーブルに設置された前処理用器材の内部の溶液を撹拌する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材に係り、特に、臨床検査向けの検体前処理に好適な臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材に関する。
【背景技術】
【０００２】
混合試料からの目的成分抽出には、目的成分のサイズ、重量、形状のような物理的性質や、溶解性、親和性のような生化学的な性質を指標とした様々な技術が知られている。特に、血液のような生体試料中の微量成分の抽出に関しては、クロマトグラフィーによる分離技術が発達しており、目的成分に適した充填剤の開発やメソッドの至適化がなされている。しかしながら、このような高度な分離技術を用いる場合であっても、様々な細胞や異なった諸性質を示す多成分で構成される血液から目的の微量成分を効率良く抽出するためには、抽出可能な状態にするための試料調製や粗精製が必須となる。
【０００３】
血液中の微量成分を測定する臨床検査方法として、血中治療薬物モニタリング（ＴＤＭ：Therapeutic Drug Monitoring）が挙げられる。ＴＤＭは、薬効を示す治療域が狭い薬剤等に適用され、投薬後の患者血液中の薬剤濃度を経時的に確認することにより、患者ごとに適正な投与設計を実践するために必要な検査である。
【０００４】
ＴＤＭの対象薬剤として、抗てんかん剤、抗菌剤、免疫抑制剤、抗不整脈剤、抗精神剤等が挙げられる。多くの薬剤は血清中に分布するが、例えば臓器移植患者等に投与される免疫抑制剤は脂溶性が高く、血球移行性があるため、その血中濃度を測定する場合には、全血を用いて、その全血を溶血させて血球内容物を取り出した後にタンパク質等に吸着している薬剤を抽出する前処理が必要となる。
【０００５】
溶血には、化学的、物理的、生物学的な原理を応用して実施することができる。例えば、化学的な方法としては、各種溶媒や界面活性剤により細胞膜を構成する脂質を溶解あるいは損傷させることにより溶血を引き起こす方法がある。物理学的な方法としては、圧力、遠心力、撹拌、凍結融解、低張化等がある。生物学的な方法としては、血球への抗体や補体結合に起因する膜貫通タンパク質複合体形成や病原性細菌が産生する溶血素（ヘモリジン）による血球細胞膜への孔形成等がある。
【０００６】
特に、低張化による血球バーストは原理的に単純であり、血液の塩濃度をＨ２Ｏ等で希釈することにより血球周囲の浸透圧を下げ、血球内に過剰に水分を取り込ませることにより細胞膜を破裂させる方法である。一般的な生理食塩水濃度は、０．９％ＮａＣｌ相当であるが、０．５〜０．３５％ＮａＣｌ相当まで希釈すると溶血現象を起こすことが知られている。
【０００７】
例えば、臨床現場では検体ごとに血液の組成が異なり、高脂血症患者のように粘性が著しく高い検体も存在する。血液をＨ２Ｏで希釈することは、溶血効果だけでなく、検体の粘性を緩和する効果もあり、溶血後の成分抽出プロセスを容易にすることにも有効である。
【０００８】
また、亜鉛のキレーティング効果を応用することにより、γグロブリンのような血液中に多量に存在する主要タンパク質を凝集させ、沈殿させることができる。この目的のため、Ｈ２Ｏの代わりにＺＴＴ検査（Zinc sulfate Turbidity Test，：硫酸亜鉛混濁試験）にも用いられている硫酸亜鉛水溶液を血液に添加することにより、溶血と同時に除タンパク質をも合わせて行う方法も一般的に行われている。
【０００９】
一方、血液中のタンパク質に吸着している目的成分を回収する方法として、除タンパク質処理あるいは液／液抽出がある。溶血処理したサンプルに有機溶媒を添加することにより、目的成分を有機溶媒側に抽出するとともに、タンパク質を変性させ、一般的には遠心分離することによって凝集タンパク質と上清を分離した後、上清分を回収している。除タンパク質処理は、血中に多種多様かつ大量に含まれているタンパク質を凝集させることによって除去する工程であり、このような処理を施すことによってはじめて全血由来の試料を血清あるいは血漿検体と同等に扱える状態になる。
【００１０】
有機溶媒は、前述のように溶血効果もあるため、直接血液に添加して溶血、液／液抽出、除タンパク質を行う方法もある。また、そのときに除タンパク質効果を補足するため、前述の硫酸亜鉛を添加する方法もある。
【００１１】
全血検体に前記のような処理を施すことによって、血球移行性の薬剤を溶液状態で回収することができるため、例えば、固相抽出処理や液体クロマトグラフィー分離等のような精製操作に供試することが可能となる。一般的には、液／液抽出後の回収上清はドライアップした後、適切な容量の溶解液で再溶解することにより、液量の低減と目的成分の濃縮を行う。その後、例えば、再溶解物を液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣＭＳ：Liquid Chromatograph Mass Spectrometer）等に供試することにより、濃縮後の目的成分の分離精製と検出を行い、目的成分の同定や定量解析を実施する。
【００１２】
このような全血検体を対象とした溶血処理や除タンパク質処理は、従来より用手方法で一般的に行われているが、自動化した装置は知られていない。特に、ＴＤＭに関しては、患者個別に治療域の狭い薬剤の投与設計を行うために、試料調製は高い再現性で実現できることが求められる。
【００１３】
ここで、従来、複数の多孔性支持層と固相抽出媒体とを含む、固相抽出に使用する一体型多層品を用い、多孔性支持層が熱機械的取り付け場所に熱機械的に取り付けられ、多孔性支持層の少なくとも一方は前置フィルター層にすることができるものが知られている（例えば、特許文献１参照）。これは、固相抽出ディスクに相当するものであり、例えば、固相抽出媒体としては、ＰＴＦＥ（Polytetrafluoroethylene）ウェッブ内に逆相シリカ粒子を導入したメンブレン状固相抽出剤が用いている。
【００１４】
また、固相抽出カラムとしては、例えばシリンジ状の容器に固相抽出剤を充填したものであり、その充填剤を保持するために充填剤の上流と下流をフィルター（フリット）で挟んだ構造のものが知られている（例えば、特許文献２参照）。
【００１５】
さらに、生体試料中の夾雑物や微細成分を濾過するフィルターが知られている（例えば、特許文献３参照）。
【００１６】
また、ＬＣに用いる分離あるいは分取カラムも、固相抽出カラムと同様に充填剤をフリット（フィルター部を有する部品）で挟み込んだ構造であることが知られている（例えば、特許文献４参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】特表２００２−５２４２４３号公報
【特許文献２】特許第４０６２６３７号公報
【特許文献３】特開２００７−１９９０５０号公報
【特許文献４】特許第４２１９５６４号号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
しかしながら、特許文献１記載のものは、固相抽出媒体が平面状になるため、微容量試料中の微量成分の抽出には適さない構造である。すなわち、このような微量成分を微量な充填剤を用いて効率良く抽出するためには、微量成分と固相抽出媒体との接触効率を高める必要があり、平面状ではなく細管状に充填した固相抽出媒体に供試することが望ましい。その場合、多孔性支持層が熱機械的取り付け場所に熱機械的に取り付けることを実現することは構造的に困難である。
【００１９】
また、特許文献２記載のものは、構成的には、試料はフィルターを介して固相抽出剤に移行するため、血液等の夾雑物を多量に含んだ試料や除タンパク質処理後の凝集タンパク質を含んだ試料を直接固相抽出に供試しても、フィルターは目詰まりを起こし、目的の上清成分を回収することはできないものである。
【００２０】
さらに、特許文献３記載のフィルターでは、濾液を一時回収する工程が必要となる。濾液を一時回収する場合には、回収した溶液から再度試料を分注する工程が必要となり、その際、回収した溶液を１００％は分注できないため、試料のロスが発生し、試料の微量化を図ることができないものである。
【００２１】
また、特許文献４に記載のようなＬＣに用いる分離あるいは分取カラムの場合は流路が細いため、前処理なしに生体試料を直接供試することは原理的に不可能である。
【００２２】
本発明の目的は、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能な臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
（１）上記目的を達成するために、本発明は、生体試料から測定対象成分を抽出する前処理部と、該前処理部により抽出された測定対象成分を質量分析する質量分析部とを有する臨床検査システムであって、前記前処理部は、上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと下流側の固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を、複数設置するカートリッジテーブルと、該カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材に対して所定の溶液を供給する複数の分注機構と、前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液に圧力を付加する複数の圧力付加機構と、前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液を撹拌する複数の撹拌機構とを備えるようにしたものである。
かかる構成により、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【００２４】
（２）上記（１）において、好ましくは、前記前処理用器材の前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されており、前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理容器材の前記フィルターユニットを取り外す前処理用器材移動機構を備えるようにしたものである。
【００２５】
（３）また、上記目的を達成するために、本発明は、生体試料から測定対象成分を抽出し、分析する臨床検査方法であって、上流側に位置し、フィルター部を有するフィルターユニットと下流側に位置し、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を用い、前記フィルターユニット内で試料と試薬を反応させ、反応産物を前記フィルター部による濾過処理により濾液と残渣に分別し、残渣をフィルターユニット側に残した状態を保ちながら、濾液の一時回収操作なしに直接濾液を固相抽出ユニットに供給し、測定対象成分を前記固相抽出ニットの固相抽出充填剤に捕捉させるとともに非吸着成分を固相抽出充填剤から素通りさせることで廃棄し、前記固相抽出充填剤に非特異的あるいは弱く吸着した前記測定対象成分とは異なる不要な夾雑成分を洗浄除去し、最後に前記測定対象成分を特異的に前記固相抽出充填剤から溶出可能な条件下で回収し、回収した前記測定対象成分を質量分析するようにしたものである。
かかる方法により、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【００２６】
（４）上記（３）において、好ましくは、前記生体試料は全血であり、前記フィルター部における濾過処理時の除タンパク質処理に用いる溶液，前記固相抽出剤による固相抽出時に用いる溶液として、濃度５０％以上のメタノールを用いるようにしたものである。
【００２７】
（５）上記（３）において、好ましくは、前記測定対象成分は、免疫抑制剤成分である。
【００２８】
（６）さらに、上記目的を達成するために、本発明は、臨床検査システムの前処理に用いられる前処理用器材であって、上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと、該フィルターユニットに連結され、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットとを備えるようにしたものである。
かかる構成により、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【００２９】
（７）上記（６）において、好ましくは、前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されているものである。
【００３０】
（８）上記（６）において、好ましくは、前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、一体的に連結されているとともに、前記フィルターユニットの前記フィルター材は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットを兼用するようにしたものである。
【００３１】
（９）上記（６）において、好ましくは、前記フィルターユニットの前記フィルター材の面積は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリット以上の面積を有するものである。
【００３２】
（１０）上記（６）において、好ましくは、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の充填高が、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットの直径以上である。
【発明の効果】
【００３３】
本発明によれば、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの全体構成を示すブロック図である。
【図２】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【図３】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容の説明図である。
【図４】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムで分析する免疫抑制剤のメタノール溶解性の説明図である。
【図５】本発明の第２の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【図６】本発明の第３の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以下、図１〜図４を用いて、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの構成及び動作について説明する。
【００３６】
最初に、図１を用いて、本実施形態による臨床分析システムの全体構成について説明する。
【００３７】
図１は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの全体構成を示すブロック図である。
【００３８】
図１に示す本実施形態の臨床分析システムは、血液成分の臨床分析システムであって、全血および血清・血漿の前処理を行う前処理部１００と、前処理のされたサンプルを質量分析する質量分析部２００と、制御部３００とからなる。なお、本実施例でいう前処理は、質量分析部へ導入する前段までの工程またはその工程の各要素のことである。
【００３９】
最初に、前処理部１００の構成について説明する。前処理部１００は、カートリッジテーブル１２０と、カートリッジテーブル１２０の周囲に配置された２カ所のカートリッジ移動機構１３０，１３０Ｂと、８カ所の分注機構１３２Ａ，…，１３２Ｈと、６カ所の圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆと、３カ所の撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃとから構成される。
【００４０】
質量分析部２００は、質量分析装置２０２と、イオン化部２０４と、前処理サンプル導入機構２０６とから構成される。
【００４１】
制御部３００は、前処理部１００の各部及び質量分析部２００の各部を制御する。
【００４２】
カートリッジテーブル１２０は、無限軌道上に１９個のカートリッジ（前処理器材）１１０を設置できる。カートリッジテーブル１２０は、無限軌道上を一定のピッチで回転することで、各工程の作業位置にカートリッジ１１０を移送し効率良く前処理を行うことができる。本例では、カートリッジテーブル１２０は、円形であり、一定時間毎に、時計回りに約１９度（＝３６０度／１９）の角度回転する。カートリッジテーブル１２０が約１９度回転すると、その位置で暫く停止し、一定時間経過すると、さらに、約１９度回転する動作を繰り返す。
【００４３】
なお、本例ではカートリッジ間の間隔は一定でなくてもよく、その場合にはピッチのスピードを調整することになる。
【００４４】
カートリッジ１１０は、図２を用いて後述するように、フィルターユニットと固相抽出ユニットが連結された構成である。
【００４５】
カートリッジ移動機構１３０は、カートリッジテーブル１２０の位置Ａにおいて、新しいカートリッジ１１０をカートリッジテーブル１２０に設置し、また、使用済みのカートリッジ１１０を除去して廃棄する。
【００４６】
分注機構１３２Ａ，…，１３２Ｈは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｂ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｐ，Ｒに配置されている。位置Ｂにおいて、分注機構１３２Ａは、カートリッジ１１０に有機溶媒（メタノール等）を分注する。位置Ｄにおいて、分注機構１３２Ｂは、カートリッジ１１０に水を分注する。位置Ｆにおいて、分注機構１３２Ｃは、カートリッジ１１０に全血の検体を分注する。位置Ｇにおいて、分注機構１３２Ｄは、カートリッジ１１０に溶血処理液（硫酸亜鉛水溶液等）を分注する。位置Ｉにおいて、分注機構１３２Ｅは、カートリッジ１１０に除タンパク質液（メタノール等）を分注する。位置Ｍにおいて、分注機構１３２Ｆは、カートリッジ１１０に内部標準物質を分注する。位置Ｐにおいて、分注機構１３２Ｇは、カートリッジ１１０に洗浄液（水等）を分注する。位置Ｒにおいて、分注機構１３２Ｈは、カートリッジ１１０に溶出液（メタノール等）を分注する。必要に応じて、分注機構１３２Ｆは、分注機構１３２Ｃに併設してもよいものである。
【００４７】
圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｏ，Ｑ，Ｓに配置されている。それぞれの位置で、圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆは、圧力付加時にはカートリッジ１１０の上部と密着し、圧力を印加する。圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆは、シリンジのように空気を圧縮することで加圧を行うが、油圧式のように液体を圧縮してもよいものである。あるいは、必要に応じて、加圧式ではなく、カートリッジ下端を陰圧にすることでカートリッジ内の溶液を移送させてもよいものである。
【００４８】
撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｈ，Ｊ，Ｎに配置されている。撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｈ，Ｊ，Ｎに保持されているカートリッジ１１０の内部の溶液を撹拌する。撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、本例では撹拌棒で撹拌を行うものである。なお、撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、としては、超音波で撹拌を行うものや、撹拌子を超音波で回転させて撹拌を行うものや、ピペッティングにより攪拌を行うものや、カートリッジ自体を振動させ撹拌を行うものを用いることもできる。
【００４９】
次に、質量分析部２００について説明する。
【００５０】
質量分析装置２０２は、検査対象物質を質量分析する。本例では、質量分析装置として三連四重極質型量分析計を用いている。なお、質量分析装置として、四重極型質量分析計、イオントラップ型質量分析計、飛行時間型質量分析計およびフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型質量分析計やそれらを２段に組合わせＭＳ／ＭＳを行う質量分析計を用いてもよいものである。なお、質量分析計の他に、高速液体クロマトフィー（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトフィー、ガスクロマトグラフィーまたはキャピラリー電気泳動等の検出技術を用いることもできる。
【００５１】
イオン源２０４は、電圧を付加することでサンプルのイオン化を行う。サンプルは液体状態でイオン源２０４に供給される。イオン源２０４としては、ＬＣ−ＭＳに用いられるイオン化方式を用いることができる。
【００５２】
前処理サンプル導入機構２０６は、カートリッジテーブル１２０の位置Ｓにおいてカートリッジ１１０から抽出された、前処理の行われたサンプルを吸引し、イオン源２０４に導入する。前処理サンプル導入機構２０６は、ポンプにより押し出された液体中に、カップから吸引された液体を導入するものであり、オートサンプラーの機構を用いることができる。あるいは、吸引した前処理済みのサンプルを直接イオン源２０４にスプレーする方式でもよいものである。
【００５３】
制御部３００は、カートリッジテーブル１２０の回転動作、カートリッジ移動機構１３０及び後述するカートリッジ移動機構１３０Ｂの移動動作と、分注機構１３２Ａ，…，１３２Ｈの分注動作と、圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆの圧力付加動作、撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃの撹拌動作、質量分析装置２００の分析動作、イオン源２０４のイオン化動作、前処理サンプル導入機構２０６のサンプル導入動作を制御する。
【００５４】
次に、図２を用いて、本実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジ１１０の構成について説明する。
【００５５】
図２は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【００５６】
カートリッジ１１０は、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４が連結され、一体化された構造を有している。カートリッジ１１０は、上流側にフィルターユニット１１２、下流側に固相抽出ユニット１１４が配置され、フィルターユニット１１２からの濾液を一時回収することなしに直接固相抽出ユニット１１４に供試する構成となっている。
【００５７】
樹脂製のホルダ１１６は、円筒形状であり、上部の直径Ｒ１が、下部の直径Ｒ２に比べて大きくなっている。フィルターユニット１１２は、ホルダ１１６の内部に固定されたフィルター部１１２Ａと、ホルダ１１６の内部であり、フィルター部１１２Ａの上部の空間であるフィルターリザーバー１１２Ｂとで構成される。ここで、ホルダ１１６の上部の直径Ｒ１を大きくすることで、フィルター部１１２Ａの直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【００５８】
また、固相抽出ユニット１１４は、ホルダ１１６の内部であって、フィルター部１１２Ａの下方の直径の大きな部分に形成される固相抽出リザーバー１１４Ｄと、固相抽出充填剤１１４Ａと、固相抽出充填剤１１４Ａを固相抽出ユニット１１４の内部に保持する上流側フリット１１４Ｂ及び下流側フリット１１４Ｃで構成される。
【００５９】
フィルターユニット１１２におけるフィルター部１１２Ａの素材は、濾過機能を有するものであり、生体試料の前処理等で使用されるものを適用している。フィルターユニット１１２内における反応で生成される凝集物量は、検体の種類、由来、量等に大きく依存するが、フィルター部の目詰まりを避けるために、固相抽出ユニット１１４における上流側フリット底面積１１３よりもフィルター部上流側底面積１１１は大きくしている。また、フィルター部１１２Ａのポアサイズは生体試料中の夾雑微細成分を捕捉するために、ポアサイズ（フィルタ径）０．２２〜２．０μｍ程度であるものが使用可能であるが、０．４５〜１．０μｍ程度であるものが望ましい。フィルター部１１２Ａの上部には、凝集したたんぱく質を含む懸濁液が保持されている。懸濁液は、懸濁体と溶存体との混合物であるが、ここで、懸濁体の径は０．４５μｍ以上である。そこで、フィルター部１１２Ａのフィルタ径は、０．４５μｍ以上とする。一方、フィルター部１１２Ａのフィルタ径が大きすぎると、懸濁体がフィルター部１１２Ａにより捕捉されず、透過するため、例えば、フィルター部１１２Ａのフィルタ径は、２．０μｍ以下とする。なお、フィルタ径０．２２〜２．０μｍの範囲でも、０．２２μｍに近いと、フィルタが目詰まりしやすく、２．０μｍに近いと透過する懸濁体が増えやすいので、その点から、０．４５〜１．０μｍ程度が好ましい。
【００６０】
フィルターユニット１１２におけるフィルターリザーバー１１２Ｂは、添加する試薬分の容量を満たすために、少なくとも供試するサンプル量の８倍以上の許容量を有することが望ましい。これは、後述するように、サンプルである全血を５０μｌとすると、溶血のために用いる硫酸亜鉛溶液の量は１５０μｌであり、除タンパク質処理に用いるメタノールの量が２００μｌであるため、全量の４００μｌは、サンプル量の８倍となるからである。
【００６１】
ホルダ１１６の素材としては、樹脂の他に、生体試料の前処理等で使用される金属を用いることができる。なお、図１に示す例では、ホルダ１１６は一体構成のものであるが、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４とのホルダを別体とした上で、樹脂製のホルダの場合には接着剤により接着固定し、金属製のホルダの場合には溶接等により固定して、一体化してもよいものである。
【００６２】
固相抽出ユニット１１４における固相抽出充填剤１１４Ａは、対象成分の抽出に適した性能を有するものを適用する。固相抽出充填剤１１４Ａとしては、疎水性相互作用により血液試料溶液中の免役抑制剤を吸着する作用がある、一般に逆相系と呼ばれる充填剤を用いることができる。例えば、日立ハイテクノロジーズ社製ＮＯＢＩＡＳ ＲＰ−ＯＤ１のような有機高分子表面にオクタデシル基を付加した微小粒子を用いることができる。固相抽出充填剤１１４Ａの充填形状は、例えば細管状円柱状としているが、円錐状であってもよいものである。充填部の構造は、充填する固相抽出充填剤の性能や仕様に大きく依存するが、微容量試料中の微量成分の抽出効率を保つために、充填高Ｈ１は、上流側フリット１１４Ｂの底面１１３の直径Ｒ２と同等以上としている。
【００６３】
固相抽出ユニット１１４における上流側フリット１１４Ｂ及び下流側フリット１１４Ｃは、濾過機能を有するものであり、生体試料の前処理等で使用されるものを適用している。なお、上流側フリット１１４Ｂの底面積と下流側フリット１１４Ｃの底面積の大きさは必ずしも同一である必要はないものである。
【００６４】
固相抽出ユニット１１４における固相抽出リザーバー１１４Ｄの容量は、添加する試薬分の容量を満たすために、少なくとも供試するサンプル量と同等以上の許容量を有している。
【００６５】
次に、図３及び図４を用いて、本実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容について説明する。
【００６６】
図３は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容の説明図である。図４は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムで分析する免疫抑制剤のメタノール溶解性の説明図である。
【００６７】
最初に、全血を用いた免疫抑制剤の固相抽出処理について説明する。臓器移植患者に対して投与する免疫抑制剤の血中濃度測定は、全血を用いて行われる。
【００６８】
例えば、タクロリムス、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、シクロスポリンのような免疫抑制剤は疎水性が高く、水系の溶液には溶解し難い性質を有する。これら薬剤のメタノールに対する溶解性を検討したところ、５０％以上のメタノール存在下でなければ安定して溶解しない傾向が認められた。
【００６９】
ここで、図４を用いて、エベロリムス（図４の実線Ｘ１）およびシクロスポリン（図４の実線Ｘ２）のメタノール溶解性について説明する。図４から理解されるように、これら薬剤を抽出対象とする場合は、除タンパク質処理時および固相抽出充填剤１１４Ａへの試料供試時の有機溶媒の終濃度に注意する必要があり、少なくともメタノールを用いる場合は５０％以上であることが望ましいことを示している。
【００７０】
従って、濃度５０％以上のメタノールを用いることで、除タンパク質処理用のフィルターユニットと固相抽出用の固相抽出ユニットを連結した構成とした場合もで、除タンパク質処理と固相抽出処理とを連続して行うことができる。
【００７１】
評価用の試料として患者全血検体がない場合、擬似的な患者全血検体を調製して用いることが可能である。擬似患者全血検体は、健常人から採血した全血検体に対して、例えば５０％メタノールで溶解した免疫抑制剤標品を終濃度が各免疫抑制剤の治療域濃度程度になるように添加することで調製できる。さらに、調製した擬似患者全血検体を３７℃で緩やかに転倒混和しながら３０ｍｉｎインキュベートすることにより、各免疫抑制剤の血球移行を再現することも可能である。
【００７２】
以下、図３を用いて、擬似患者全血検体中の免疫抑制剤の抽出および定量について示す。
【００７３】
従来は、全血に対して溶血し、タンパク質を除去する第１の工程の後、第１の工程の回収産物を、改めて固相抽出処理する第２の工程が必要であり、２段階の作業が必要であった。それに対して、本実施形態では、フィルターユニットと固相抽出ユニットを連結した構成のカートリッジを用いることで、両操作を一括して実施することができる。
【００７４】
最初に、工程１において、図１に示したカートリッジテーブル１２０の位置Ａに、カートリッジ移動機構１３０を用いて、未使用のカートリッジ１１０を設置する。その後、位置Ｂまでカートリッジテーブル１２０が回転する。
【００７５】
次に、固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングについて説明する。この場合、固相抽出充填剤１１４Ａは逆相モードとする。
【００７６】
工程２において、図１に示したカートリッジテーブル１２０の位置Ｂにおいて、分注機構１３２Ａを用いて、カートリッジ１１０のフィルターユニット１１２に１００％メタノールを１００μｌ添加する。その後、位置Ｃまでカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程３において、図１に示した圧力付加機構１３４Ａを用いた圧力付加操作により、メタノールを固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａの全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。その後、位置Ｄまでカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００７７】
次に、工程４において、図１に示した分注機構１３２Ｂを用いて、フィルターユニット１１２にＨ２Ｏを１００μｌ添加し、その後、位置Ｅまでカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程５において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｂを用いた圧力付加操作により、水を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａの全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。その後、位置Ｆまでカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００７８】
この一連の操作により、固相抽出ユニット１１４に充填した固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングが行なわれる。
【００７９】
次に、溶血後の除タンパク質処理について説明する。
【００８０】
工程６において、図１に示した分注機構１３２Ｃを用いて、フィルターユニット１１２に前述のように調製した擬似患者全血検体を５０μｌ添加する。その後、位置Ｇまでカートリッジテーブル１２０が移動する。そして、工程７において、図１に示した分注機構１３２Ｄを用いて、溶血処理液である０．５Ｍ硫酸亜鉛水溶液を１５０μｌ添加し、その後、位置Ｈまでカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程８において、図１に示した撹拌機構１３６Ａを用いて、十分に撹拌することにより、溶血処理を促す。この操作により、血球中に移行した免疫抑制剤を取り出すことができる。その後、位置Ｉまでカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８１】
次に、工程９において、図１に示した分注機構１３２Ｅを用いて、溶血処理後の試料に１００％メタノールを２００μｌ添加し、その後、位置Ｊにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１０において、図１に示した撹拌機構１３６Ｂを用いて、十分に撹拌することにより、除タンパク質処理を行う。この操作により全血由来のタンパク質が凝集し、免疫抑制剤は上清側に抽出された状態になる。その後、位置Ｋに、カートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８２】
次に、工程１１において、凝集したタンパク質を取り除くため、図１に示した圧力付加機構１３４Ｃを用いて圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。この操作により、濾液を一時回収することなしに直接固相抽出充填剤１１４Ａに供試でき、免疫抑制剤を固相抽出充填剤１１４Ａに吸着させる操作までを一括して完了させることができる。その後、位置Ｌにカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８３】
なお、位置Ｌに設けたカートリッジ移動機構１３０Ｂについては、後述する。
【００８４】
次に、固相抽出処理について説明する。
【００８５】
工程１２において、位置Ｍにおいて、図１に示した分注機構１３２Ｆを用いて、試料に内部標準物質を添加し、その後、位置Ｎにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１３において、図１に示した撹拌機構１３６Ｃを用いて、十分に撹拌する。その後、位置Ｏに、カートリッジテーブル１２０が移動する。そして、工程１４において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｄを用いて圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。
【００８６】
次に、工程１５において、位置Ｐで、図１に示した分注機構１３２Ｇを用いて、フィルターユニット１１２に固相抽出充填剤洗浄用の洗浄液，例えば、Ｈ２Ｏや５％メタノール等を５０μｌ添加し、その後、位置Ｑにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１６において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｅの圧力付加操作により同洗浄液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに免疫抑制剤を吸着させたまま、その他の夾雑成分を除去する。その後、位置Ｒにカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８７】
次に、工程１７において、図１に示した分注機構１３２Ｈを用いて、フィルターユニット１１２に溶出液，例えば、１００％メタノール等を５０μｌ添加し、その後位置Ｓにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１８において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｆの圧力付加操作により、溶出液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに吸着した免疫抑制剤を溶出回収する。
【００８８】
位置Ｒで回収された抽出物は、前処理サンプル導入機構２０６を用いて、質量分析部２００のイオン源２０４から質量分析装置２０２に導入され、目的成分の定量データを出力する。質量分析装置２０２は、例えば三連四重極型の質量分析装置で、ＭＲＭ（Multiple Reaction Monitoring）分析することにより、免疫抑制剤の分離およびピーク面積値からの定量を行う。その際、検体に対して内部標準物質を一定量添加しておくことにより、前処理を含めた精度管理や比率計算から定量値を割り出すことができる。
【００８９】
次に、血清や尿等の全血以外の血清・血漿などの生体試料を対象としたときの実施例について説明する。この場合、生体試料の除タンパク質を行った後、測定対象成分の固相抽出を行うため、図３に示した工程のうち、溶血工程（図３の工程７，８：溶血処理液添加および撹拌）を省略することになる。ただし、除タンパク質効果を高めるために硫酸亜鉛水溶液を添加する工程７を実施してもよいものである。
【００９０】
まず、固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングについて示す。この場合、固相抽出充填剤１１４Ａは逆相モードとする。カートリッジ１１０のフィルターユニット１１２に１００％メタノールを１００μｌ添加し、圧力付加操作によりメタノールを固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。引き続いて、同様にフィルターユニット１１２にＨ２Ｏを同量添加し、同操作により固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。この一連の操作により、固相抽出ユニット１１４に充填した固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングを行う。
【００９１】
次に、フィルターユニット１１４に生体試料を５０μｌ添加する。これに対して、除タンパク質用の１００％メタノールを５０μｌ添加した後、十分に撹拌することにより、除タンパク質処理を行う。この操作により生体試料由来のタンパク質が凝集し、測定対象成分は上清側に抽出された状態になる。
【００９２】
タンパク質凝集後の試料に対して、必要に応じてメタノールを希釈する。例えば、親水性が高い測定対象成分の抽出については、有機溶媒濃度が高いと固相抽出充填剤への吸着効率が低下するため、濾過処理前に希釈しておくことが望ましい。
【００９３】
凝集したタンパク質を取り除くため、圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。この操作により、濾液を一時回収することなしに直接固相抽出充填剤１１４Ａに供試でき、測定対象成分を充填剤に吸着させる操作までを一括して完了させることができる。
【００９４】
次に、試料に内部標準物質を添加し、十分に撹拌する。そして、圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。
【００９５】
次に、フィルターユニット１１２に固相抽出充填剤洗浄用の洗浄液，例えば、Ｈ２Ｏ等を５０μｌ添加し、圧力付加操作により同洗浄液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに薬剤成分を吸着させたまま、その他の夾雑成分を除去する。
【００９６】
次に、フィルターユニット１１２に溶出液，例えば、１００％メタノール等測定対象成分の物性に応じて設定を５０μｌ添加し、圧力付加操作により同溶出液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに吸着した測定対象成分を溶出回収する。
【００９７】
以上の前処理で得られた抽出物は、例えば三連四重極型の質量分析装置でＭＲＭ分析することにより、測定対象成分の分離およびピーク面積値からの定量を行う。その際、検体に対して内部標準物質を一定量添加しておくことにより、前処理を含めた精度管理や比率計算から定量値を割り出すことができる。
【００９８】
以上説明したように、本実施形態によれば、免疫抑制剤のような脂溶性の高い薬剤の全血処理と固相抽出処理を行う際に、薬剤の物性溶解性を活かし、全血処理産物の一時回収なしに直接固相抽出処理に移行できる凝集タンパク質除去と固相抽出カラムへのサンプルロードを一括して実施できる。
【００９９】
また、血清や尿等の生体試料中の測定対象成分を粗精製するため、除タンパク質処理と固相抽出処理を１個の前処理用器材カートリッジで実現し、除タンパク質処理後の濾液を一時回収なしに直接固相抽出ユニットに供試できる。
【０１００】
さらに、血液のような夾雑成分の多い生体試料を前処理なしに直接同器材に供試することが可能であり、同器材で処理して得られた抽出物を直接ＭＳ等の分析装置に供試することができる。
【０１０１】
これらにより、濾液の一時回収工程の省略により、工程およびＴＡＴの短縮化が図れる。
【０１０２】
また、濾液の一時回収および一時回収した濾液の固相抽出ユニットへの供試に関わる機構の省略を図ることが可能となり、同前処理用器材カートリッジを用いて自動処理するシステムの簡素化および低コスト化が実現できる。
【０１０３】
さらに、一時回収工程の省略により、一時回収用の容器が不要となるため、消耗品点数およびそのコストを削減することが可能となるとともに、一時回収工程で生じるサンプルロスおよびキャリーオーバーを回避できる。
【０１０４】
固相抽出ターンテーブル上でランダムに多種多数の検査項目に対して自動処理全血向け、血清向けを実現できる。
【０１０５】
また、ホルダの上部の直径を大きくすることで、フィルターユニットフィルター部の直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【０１０６】
次に、図５を用いて、本発明の第２の実施形態による臨床分析システムの構成及び動作について説明する。なお、本実施形態による臨床分析システムの全体構成は、図１に示したものと同様である。また、本実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容は、図３に示したものと同様である。
【０１０７】
図５は、本発明の第２の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【０１０８】
カートリッジ１１０Ａは、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４が連結され、脱着可能な構造を有している。カートリッジ１１０Ａは、上流側にフィルターユニット１１２、下流側に固相抽出ユニット１１４が配置され、フィルターユニット１１２からの濾液を一時回収することなしに直接固相抽出ユニット１１４に供試する構成となっている。
【０１０９】
フィルターユニット１１２のホルダ１１６Ａと、固相抽出ユニット１１４のホルダ１１６Ｂとは、別体であり、連結部１１６Ｃにより脱着可能に連結されている。連結部１１６は、図示にように、ホルダ１１６Ａに形成された雄ねじと、ホルダ１１６Ｂに形成された雌ねじとにより形成されている。なお、雄雌ねじにより結合に代わりに、一方を他方に挿入した後、ねじ込んでロックできるルアーロックなどを用いることもできる。
【０１１０】
樹脂製のホルダ１１６Ａ、１１６Ｂは、円筒形状である。ホルダ１１６Ｂの上部の直径Ｒ１は、ホルダ１１６Ａの直径と等しく、下部の直径Ｒ２に比べて大きくなっている。フィルターユニット１１２は、ホルダ１１６Ａの内部に固定されたフィルター部１１２Ａと、ホルダ１１６Ａの内部であり、フィルター部１１２Ａの上部の空間であるフィルターリザーバー１１２Ｂとで構成される。ここで、ホルダ１１６Ａの直径Ｒ１を大きくすることで、フィルター部１１２Ａの直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【０１１１】
また、固相抽出ユニット１１４は、ホルダ１１６Ｂの内部であって、フィルター部１１２Ａの下方の直径の大きな部分に形成される固相抽出リザーバー１１４Ｄと、固相抽出充填剤１１４Ａと、固相抽出充填剤１１４Ａを固相抽出ユニット１１４の内部に保持する上流側フリット１１４Ｂ及び下流側フリット１１４Ｃで構成される。
【０１１２】
その他の構成は、図２に示したものと同様である。
【０１１３】
図３の説明では、カートリッジ１１０Ａのフィルターユニット１１２のリザーバー１１２Ｂには、凝集したタンパク質ＰＲＴが残留したまま、その後の処理が進められているが、固相抽出処理によって使用される溶剤によって、凝集したタンパク質に吸着している夾雑成分が溶解し、フィルターユニット１１２のフィルター部１１２Ａを透過する恐れがある場合には、除タンパク質処理後に、カートリッジ１１０Ａの上部のフィルターユニット１１２を取り外すようにできる。
【０１１４】
そのため、図１に示した位置Ｌにおいて、カートリッジ移動機構１３０Ｂは、上部のフィルターユニットを取り外すために備えられている。
【０１１５】
以上説明したように、本実施形態によっても、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【０１１６】
次に、図６を用いて、本発明の第３の実施形態による臨床分析システムの構成及び動作について説明する。なお、本実施形態による臨床分析システムの全体構成は、図１に示したものと同様である。また、本実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容は、図３に示したものと同様である。
【０１１７】
図６は、本発明の第３の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【０１１８】
カートリッジ１１０Ｂは、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４が連結され、一体化された構造を有している。カートリッジ１１０Ｂは、上流側にフィルターユニット１１２、下流側に固相抽出ユニット１１４が配置され、フィルターユニット１１２からの濾液を一時回収することなしに直接固相抽出ユニット１１４に供試する構成となっている。
【０１１９】
樹脂製のホルダ１１６は、円筒形状であり、上部の直径Ｒ１が、下部の直径Ｒ２に比べて大きくなっている。フィルターユニット１１２は、ホルダ１１６の内部に固定されたフィルター部１１２Ａと、ホルダ１１６の内部であり、フィルター部１１２Ａの上部の空間であるフィルターリザーバー１１２Ｂとで構成される。ここで、ホルダ１１６の上部の直径Ｒ１を大きくすることで、フィルター部１１２Ａの直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【０１２０】
また、固相抽出ユニット１１４は、固相抽出充填剤１１４Ａと、固相抽出充填剤１１４Ａを固相抽出ユニット１１４の内部に保持する下流側フリット１１４Ｃで構成される。なお、図２に示した上流側フリット１１４Ｂは、フィルター部１１２Ａが兼用している。したがって、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４は互いに切り離せないように接合された構造を取るため、両ユニットを脱着できないものである。フィルター部１１２Ａの構造は、固相抽出充填剤１１４Ａに接する下流側に向かってテーパー状になっていてもよいものである。
【０１２１】
その他の構成は、図２に示したものと同様である。
【０１２２】
以上説明したように、本実施形態によっても、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【０１２３】
なお、本発明は、臨床検査分野だけでなく、目的成分検出に夾雑成分からの精製を要する分析分野に幅広く応用可能である。例えば、環境、食品、医用、公安テロ対策／違法薬物等の分野への実用およびそのための基礎／応用研究に利用可能である。
【符号の説明】
【０１２４】
１００…前処理部
１１０…カートリッジ
１１２…フィルターユニット
１１２Ａ…フィルター部
１１２Ｂ…フィルターリザーバー
１１４…固相抽出ユニット
１１４Ａ…固相抽出充填剤
１１４Ｂ…上流側フリット
１１４Ｃ…下流側フリット
１１４Ｄ…固相抽出リザーバー
１１６…ホルダ
１２０…カートリッジテーブル
１３０…カートリッジ移動機構
１３２…分注機構
１３４…圧力付加機構
１３６…撹拌機構
２００…質量分析部
２０２…質量分析装置
２０４…イオン化部
２０６…前処理サンプル導入機構
３００…制御演算部
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材に係り、特に、臨床検査向けの検体前処理に好適な臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材に関する。
【背景技術】
【０００２】
混合試料からの目的成分抽出には、目的成分のサイズ、重量、形状のような物理的性質や、溶解性、親和性のような生化学的な性質を指標とした様々な技術が知られている。特に、血液のような生体試料中の微量成分の抽出に関しては、クロマトグラフィーによる分離技術が発達しており、目的成分に適した充填剤の開発やメソッドの至適化がなされている。しかしながら、このような高度な分離技術を用いる場合であっても、様々な細胞や異なった諸性質を示す多成分で構成される血液から目的の微量成分を効率良く抽出するためには、抽出可能な状態にするための試料調製や粗精製が必須となる。
【０００３】
血液中の微量成分を測定する臨床検査方法として、血中治療薬物モニタリング（ＴＤＭ：Therapeutic Drug Monitoring）が挙げられる。ＴＤＭは、薬効を示す治療域が狭い薬剤等に適用され、投薬後の患者血液中の薬剤濃度を経時的に確認することにより、患者ごとに適正な投与設計を実践するために必要な検査である。
【０００４】
ＴＤＭの対象薬剤として、抗てんかん剤、抗菌剤、免疫抑制剤、抗不整脈剤、抗精神剤等が挙げられる。多くの薬剤は血清中に分布するが、例えば臓器移植患者等に投与される免疫抑制剤は脂溶性が高く、血球移行性があるため、その血中濃度を測定する場合には、全血を用いて、その全血を溶血させて血球内容物を取り出した後にタンパク質等に吸着している薬剤を抽出する前処理が必要となる。
【０００５】
溶血には、化学的、物理的、生物学的な原理を応用して実施することができる。例えば、化学的な方法としては、各種溶媒や界面活性剤により細胞膜を構成する脂質を溶解あるいは損傷させることにより溶血を引き起こす方法がある。物理学的な方法としては、圧力、遠心力、撹拌、凍結融解、低張化等がある。生物学的な方法としては、血球への抗体や補体結合に起因する膜貫通タンパク質複合体形成や病原性細菌が産生する溶血素（ヘモリジン）による血球細胞膜への孔形成等がある。
【０００６】
特に、低張化による血球バーストは原理的に単純であり、血液の塩濃度をＨ２Ｏ等で希釈することにより血球周囲の浸透圧を下げ、血球内に過剰に水分を取り込ませることにより細胞膜を破裂させる方法である。一般的な生理食塩水濃度は、０．９％ＮａＣｌ相当であるが、０．５〜０．３５％ＮａＣｌ相当まで希釈すると溶血現象を起こすことが知られている。
【０００７】
例えば、臨床現場では検体ごとに血液の組成が異なり、高脂血症患者のように粘性が著しく高い検体も存在する。血液をＨ２Ｏで希釈することは、溶血効果だけでなく、検体の粘性を緩和する効果もあり、溶血後の成分抽出プロセスを容易にすることにも有効である。
【０００８】
また、亜鉛のキレーティング効果を応用することにより、γグロブリンのような血液中に多量に存在する主要タンパク質を凝集させ、沈殿させることができる。この目的のため、Ｈ２Ｏの代わりにＺＴＴ検査（Zinc sulfate Turbidity Test，：硫酸亜鉛混濁試験）にも用いられている硫酸亜鉛水溶液を血液に添加することにより、溶血と同時に除タンパク質をも合わせて行う方法も一般的に行われている。
【０００９】
一方、血液中のタンパク質に吸着している目的成分を回収する方法として、除タンパク質処理あるいは液／液抽出がある。溶血処理したサンプルに有機溶媒を添加することにより、目的成分を有機溶媒側に抽出するとともに、タンパク質を変性させ、一般的には遠心分離することによって凝集タンパク質と上清を分離した後、上清分を回収している。除タンパク質処理は、血中に多種多様かつ大量に含まれているタンパク質を凝集させることによって除去する工程であり、このような処理を施すことによってはじめて全血由来の試料を血清あるいは血漿検体と同等に扱える状態になる。
【００１０】
有機溶媒は、前述のように溶血効果もあるため、直接血液に添加して溶血、液／液抽出、除タンパク質を行う方法もある。また、そのときに除タンパク質効果を補足するため、前述の硫酸亜鉛を添加する方法もある。
【００１１】
全血検体に前記のような処理を施すことによって、血球移行性の薬剤を溶液状態で回収することができるため、例えば、固相抽出処理や液体クロマトグラフィー分離等のような精製操作に供試することが可能となる。一般的には、液／液抽出後の回収上清はドライアップした後、適切な容量の溶解液で再溶解することにより、液量の低減と目的成分の濃縮を行う。その後、例えば、再溶解物を液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣＭＳ：Liquid Chromatograph Mass Spectrometer）等に供試することにより、濃縮後の目的成分の分離精製と検出を行い、目的成分の同定や定量解析を実施する。
【００１２】
このような全血検体を対象とした溶血処理や除タンパク質処理は、従来より用手方法で一般的に行われているが、自動化した装置は知られていない。特に、ＴＤＭに関しては、患者個別に治療域の狭い薬剤の投与設計を行うために、試料調製は高い再現性で実現できることが求められる。
【００１３】
ここで、従来、複数の多孔性支持層と固相抽出媒体とを含む、固相抽出に使用する一体型多層品を用い、多孔性支持層が熱機械的取り付け場所に熱機械的に取り付けられ、多孔性支持層の少なくとも一方は前置フィルター層にすることができるものが知られている（例えば、特許文献１参照）。これは、固相抽出ディスクに相当するものであり、例えば、固相抽出媒体としては、ＰＴＦＥ（Polytetrafluoroethylene）ウェッブ内に逆相シリカ粒子を導入したメンブレン状固相抽出剤が用いている。
【００１４】
また、固相抽出カラムとしては、例えばシリンジ状の容器に固相抽出剤を充填したものであり、その充填剤を保持するために充填剤の上流と下流をフィルター（フリット）で挟んだ構造のものが知られている（例えば、特許文献２参照）。
【００１５】
さらに、生体試料中の夾雑物や微細成分を濾過するフィルターが知られている（例えば、特許文献３参照）。
【００１６】
また、ＬＣに用いる分離あるいは分取カラムも、固相抽出カラムと同様に充填剤をフリット（フィルター部を有する部品）で挟み込んだ構造であることが知られている（例えば、特許文献４参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】特表２００２−５２４２４３号公報
【特許文献２】特許第４０６２６３７号公報
【特許文献３】特開２００７−１９９０５０号公報
【特許文献４】特許第４２１９５６４号号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
しかしながら、特許文献１記載のものは、固相抽出媒体が平面状になるため、微容量試料中の微量成分の抽出には適さない構造である。すなわち、このような微量成分を微量な充填剤を用いて効率良く抽出するためには、微量成分と固相抽出媒体との接触効率を高める必要があり、平面状ではなく細管状に充填した固相抽出媒体に供試することが望ましい。その場合、多孔性支持層が熱機械的取り付け場所に熱機械的に取り付けることを実現することは構造的に困難である。
【００１９】
また、特許文献２記載のものは、構成的には、試料はフィルターを介して固相抽出剤に移行するため、血液等の夾雑物を多量に含んだ試料や除タンパク質処理後の凝集タンパク質を含んだ試料を直接固相抽出に供試しても、フィルターは目詰まりを起こし、目的の上清成分を回収することはできないものである。
【００２０】
さらに、特許文献３記載のフィルターでは、濾液を一時回収する工程が必要となる。濾液を一時回収する場合には、回収した溶液から再度試料を分注する工程が必要となり、その際、回収した溶液を１００％は分注できないため、試料のロスが発生し、試料の微量化を図ることができないものである。
【００２１】
また、特許文献４に記載のようなＬＣに用いる分離あるいは分取カラムの場合は流路が細いため、前処理なしに生体試料を直接供試することは原理的に不可能である。
【００２２】
本発明の目的は、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能な臨床検査システム，臨床検査法方法及び前処理用器材を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
（１）上記目的を達成するために、本発明は、生体試料から測定対象成分を抽出する前処理部と、該前処理部により抽出された測定対象成分を質量分析する質量分析部とを有する臨床検査システムであって、前記前処理部は、上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと下流側の固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を、複数設置するカートリッジテーブルと、該カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材に対して所定の溶液を供給する複数の分注機構と、前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液に圧力を付加する複数の圧力付加機構と、前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液を撹拌する複数の撹拌機構とを備えるようにしたものである。
かかる構成により、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【００２４】
（２）上記（１）において、好ましくは、前記前処理用器材の前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されており、前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理容器材の前記フィルターユニットを取り外す前処理用器材移動機構を備えるようにしたものである。
【００２５】
（３）また、上記目的を達成するために、本発明は、生体試料から測定対象成分を抽出し、分析する臨床検査方法であって、上流側に位置し、フィルター部を有するフィルターユニットと下流側に位置し、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を用い、前記フィルターユニット内で試料と試薬を反応させ、反応産物を前記フィルター部による濾過処理により濾液と残渣に分別し、残渣をフィルターユニット側に残した状態を保ちながら、濾液の一時回収操作なしに直接濾液を固相抽出ユニットに供給し、測定対象成分を前記固相抽出ニットの固相抽出充填剤に捕捉させるとともに非吸着成分を固相抽出充填剤から素通りさせることで廃棄し、前記固相抽出充填剤に非特異的あるいは弱く吸着した前記測定対象成分とは異なる不要な夾雑成分を洗浄除去し、最後に前記測定対象成分を特異的に前記固相抽出充填剤から溶出可能な条件下で回収し、回収した前記測定対象成分を質量分析するようにしたものである。
かかる方法により、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【００２６】
（４）上記（３）において、好ましくは、前記生体試料は全血であり、前記フィルター部における濾過処理時の除タンパク質処理に用いる溶液，前記固相抽出剤による固相抽出時に用いる溶液として、濃度５０％以上のメタノールを用いるようにしたものである。
【００２７】
（５）上記（３）において、好ましくは、前記測定対象成分は、免疫抑制剤成分である。
【００２８】
（６）さらに、上記目的を達成するために、本発明は、臨床検査システムの前処理に用いられる前処理用器材であって、上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと、該フィルターユニットに連結され、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットとを備えるようにしたものである。
かかる構成により、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【００２９】
（７）上記（６）において、好ましくは、前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されているものである。
【００３０】
（８）上記（６）において、好ましくは、前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、一体的に連結されているとともに、前記フィルターユニットの前記フィルター材は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットを兼用するようにしたものである。
【００３１】
（９）上記（６）において、好ましくは、前記フィルターユニットの前記フィルター材の面積は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリット以上の面積を有するものである。
【００３２】
（１０）上記（６）において、好ましくは、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の充填高が、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットの直径以上である。
【発明の効果】
【００３３】
本発明によれば、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの全体構成を示すブロック図である。
【図２】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【図３】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容の説明図である。
【図４】本発明の第１の実施形態による臨床分析システムで分析する免疫抑制剤のメタノール溶解性の説明図である。
【図５】本発明の第２の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【図６】本発明の第３の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以下、図１〜図４を用いて、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの構成及び動作について説明する。
【００３６】
最初に、図１を用いて、本実施形態による臨床分析システムの全体構成について説明する。
【００３７】
図１は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの全体構成を示すブロック図である。
【００３８】
図１に示す本実施形態の臨床分析システムは、血液成分の臨床分析システムであって、全血および血清・血漿の前処理を行う前処理部１００と、前処理のされたサンプルを質量分析する質量分析部２００と、制御部３００とからなる。なお、本実施例でいう前処理は、質量分析部へ導入する前段までの工程またはその工程の各要素のことである。
【００３９】
最初に、前処理部１００の構成について説明する。前処理部１００は、カートリッジテーブル１２０と、カートリッジテーブル１２０の周囲に配置された２カ所のカートリッジ移動機構１３０，１３０Ｂと、８カ所の分注機構１３２Ａ，…，１３２Ｈと、６カ所の圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆと、３カ所の撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃとから構成される。
【００４０】
質量分析部２００は、質量分析装置２０２と、イオン化部２０４と、前処理サンプル導入機構２０６とから構成される。
【００４１】
制御部３００は、前処理部１００の各部及び質量分析部２００の各部を制御する。
【００４２】
カートリッジテーブル１２０は、無限軌道上に１９個のカートリッジ（前処理器材）１１０を設置できる。カートリッジテーブル１２０は、無限軌道上を一定のピッチで回転することで、各工程の作業位置にカートリッジ１１０を移送し効率良く前処理を行うことができる。本例では、カートリッジテーブル１２０は、円形であり、一定時間毎に、時計回りに約１９度（＝３６０度／１９）の角度回転する。カートリッジテーブル１２０が約１９度回転すると、その位置で暫く停止し、一定時間経過すると、さらに、約１９度回転する動作を繰り返す。
【００４３】
なお、本例ではカートリッジ間の間隔は一定でなくてもよく、その場合にはピッチのスピードを調整することになる。
【００４４】
カートリッジ１１０は、図２を用いて後述するように、フィルターユニットと固相抽出ユニットが連結された構成である。
【００４５】
カートリッジ移動機構１３０は、カートリッジテーブル１２０の位置Ａにおいて、新しいカートリッジ１１０をカートリッジテーブル１２０に設置し、また、使用済みのカートリッジ１１０を除去して廃棄する。
【００４６】
分注機構１３２Ａ，…，１３２Ｈは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｂ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｐ，Ｒに配置されている。位置Ｂにおいて、分注機構１３２Ａは、カートリッジ１１０に有機溶媒（メタノール等）を分注する。位置Ｄにおいて、分注機構１３２Ｂは、カートリッジ１１０に水を分注する。位置Ｆにおいて、分注機構１３２Ｃは、カートリッジ１１０に全血の検体を分注する。位置Ｇにおいて、分注機構１３２Ｄは、カートリッジ１１０に溶血処理液（硫酸亜鉛水溶液等）を分注する。位置Ｉにおいて、分注機構１３２Ｅは、カートリッジ１１０に除タンパク質液（メタノール等）を分注する。位置Ｍにおいて、分注機構１３２Ｆは、カートリッジ１１０に内部標準物質を分注する。位置Ｐにおいて、分注機構１３２Ｇは、カートリッジ１１０に洗浄液（水等）を分注する。位置Ｒにおいて、分注機構１３２Ｈは、カートリッジ１１０に溶出液（メタノール等）を分注する。必要に応じて、分注機構１３２Ｆは、分注機構１３２Ｃに併設してもよいものである。
【００４７】
圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｏ，Ｑ，Ｓに配置されている。それぞれの位置で、圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆは、圧力付加時にはカートリッジ１１０の上部と密着し、圧力を印加する。圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆは、シリンジのように空気を圧縮することで加圧を行うが、油圧式のように液体を圧縮してもよいものである。あるいは、必要に応じて、加圧式ではなく、カートリッジ下端を陰圧にすることでカートリッジ内の溶液を移送させてもよいものである。
【００４８】
撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｈ，Ｊ，Ｎに配置されている。撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、カートリッジテーブル１２０の位置Ｈ，Ｊ，Ｎに保持されているカートリッジ１１０の内部の溶液を撹拌する。撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、本例では撹拌棒で撹拌を行うものである。なお、撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃは、としては、超音波で撹拌を行うものや、撹拌子を超音波で回転させて撹拌を行うものや、ピペッティングにより攪拌を行うものや、カートリッジ自体を振動させ撹拌を行うものを用いることもできる。
【００４９】
次に、質量分析部２００について説明する。
【００５０】
質量分析装置２０２は、検査対象物質を質量分析する。本例では、質量分析装置として三連四重極質型量分析計を用いている。なお、質量分析装置として、四重極型質量分析計、イオントラップ型質量分析計、飛行時間型質量分析計およびフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型質量分析計やそれらを２段に組合わせＭＳ／ＭＳを行う質量分析計を用いてもよいものである。なお、質量分析計の他に、高速液体クロマトフィー（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトフィー、ガスクロマトグラフィーまたはキャピラリー電気泳動等の検出技術を用いることもできる。
【００５１】
イオン源２０４は、電圧を付加することでサンプルのイオン化を行う。サンプルは液体状態でイオン源２０４に供給される。イオン源２０４としては、ＬＣ−ＭＳに用いられるイオン化方式を用いることができる。
【００５２】
前処理サンプル導入機構２０６は、カートリッジテーブル１２０の位置Ｓにおいてカートリッジ１１０から抽出された、前処理の行われたサンプルを吸引し、イオン源２０４に導入する。前処理サンプル導入機構２０６は、ポンプにより押し出された液体中に、カップから吸引された液体を導入するものであり、オートサンプラーの機構を用いることができる。あるいは、吸引した前処理済みのサンプルを直接イオン源２０４にスプレーする方式でもよいものである。
【００５３】
制御部３００は、カートリッジテーブル１２０の回転動作、カートリッジ移動機構１３０及び後述するカートリッジ移動機構１３０Ｂの移動動作と、分注機構１３２Ａ，…，１３２Ｈの分注動作と、圧力付加機構１３４Ａ，…，１３４Ｆの圧力付加動作、撹拌機構１３６Ａ，１３６Ｂ，１３６Ｃの撹拌動作、質量分析装置２００の分析動作、イオン源２０４のイオン化動作、前処理サンプル導入機構２０６のサンプル導入動作を制御する。
【００５４】
次に、図２を用いて、本実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジ１１０の構成について説明する。
【００５５】
図２は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【００５６】
カートリッジ１１０は、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４が連結され、一体化された構造を有している。カートリッジ１１０は、上流側にフィルターユニット１１２、下流側に固相抽出ユニット１１４が配置され、フィルターユニット１１２からの濾液を一時回収することなしに直接固相抽出ユニット１１４に供試する構成となっている。
【００５７】
樹脂製のホルダ１１６は、円筒形状であり、上部の直径Ｒ１が、下部の直径Ｒ２に比べて大きくなっている。フィルターユニット１１２は、ホルダ１１６の内部に固定されたフィルター部１１２Ａと、ホルダ１１６の内部であり、フィルター部１１２Ａの上部の空間であるフィルターリザーバー１１２Ｂとで構成される。ここで、ホルダ１１６の上部の直径Ｒ１を大きくすることで、フィルター部１１２Ａの直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【００５８】
また、固相抽出ユニット１１４は、ホルダ１１６の内部であって、フィルター部１１２Ａの下方の直径の大きな部分に形成される固相抽出リザーバー１１４Ｄと、固相抽出充填剤１１４Ａと、固相抽出充填剤１１４Ａを固相抽出ユニット１１４の内部に保持する上流側フリット１１４Ｂ及び下流側フリット１１４Ｃで構成される。
【００５９】
フィルターユニット１１２におけるフィルター部１１２Ａの素材は、濾過機能を有するものであり、生体試料の前処理等で使用されるものを適用している。フィルターユニット１１２内における反応で生成される凝集物量は、検体の種類、由来、量等に大きく依存するが、フィルター部の目詰まりを避けるために、固相抽出ユニット１１４における上流側フリット底面積１１３よりもフィルター部上流側底面積１１１は大きくしている。また、フィルター部１１２Ａのポアサイズは生体試料中の夾雑微細成分を捕捉するために、ポアサイズ（フィルタ径）０．２２〜２．０μｍ程度であるものが使用可能であるが、０．４５〜１．０μｍ程度であるものが望ましい。フィルター部１１２Ａの上部には、凝集したたんぱく質を含む懸濁液が保持されている。懸濁液は、懸濁体と溶存体との混合物であるが、ここで、懸濁体の径は０．４５μｍ以上である。そこで、フィルター部１１２Ａのフィルタ径は、０．４５μｍ以上とする。一方、フィルター部１１２Ａのフィルタ径が大きすぎると、懸濁体がフィルター部１１２Ａにより捕捉されず、透過するため、例えば、フィルター部１１２Ａのフィルタ径は、２．０μｍ以下とする。なお、フィルタ径０．２２〜２．０μｍの範囲でも、０．２２μｍに近いと、フィルタが目詰まりしやすく、２．０μｍに近いと透過する懸濁体が増えやすいので、その点から、０．４５〜１．０μｍ程度が好ましい。
【００６０】
フィルターユニット１１２におけるフィルターリザーバー１１２Ｂは、添加する試薬分の容量を満たすために、少なくとも供試するサンプル量の８倍以上の許容量を有することが望ましい。これは、後述するように、サンプルである全血を５０μｌとすると、溶血のために用いる硫酸亜鉛溶液の量は１５０μｌであり、除タンパク質処理に用いるメタノールの量が２００μｌであるため、全量の４００μｌは、サンプル量の８倍となるからである。
【００６１】
ホルダ１１６の素材としては、樹脂の他に、生体試料の前処理等で使用される金属を用いることができる。なお、図１に示す例では、ホルダ１１６は一体構成のものであるが、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４とのホルダを別体とした上で、樹脂製のホルダの場合には接着剤により接着固定し、金属製のホルダの場合には溶接等により固定して、一体化してもよいものである。
【００６２】
固相抽出ユニット１１４における固相抽出充填剤１１４Ａは、対象成分の抽出に適した性能を有するものを適用する。固相抽出充填剤１１４Ａとしては、疎水性相互作用により血液試料溶液中の免役抑制剤を吸着する作用がある、一般に逆相系と呼ばれる充填剤を用いることができる。例えば、日立ハイテクノロジーズ社製ＮＯＢＩＡＳ ＲＰ−ＯＤ１のような有機高分子表面にオクタデシル基を付加した微小粒子を用いることができる。固相抽出充填剤１１４Ａの充填形状は、例えば細管状円柱状としているが、円錐状であってもよいものである。充填部の構造は、充填する固相抽出充填剤の性能や仕様に大きく依存するが、微容量試料中の微量成分の抽出効率を保つために、充填高Ｈ１は、上流側フリット１１４Ｂの底面１１３の直径Ｒ２と同等以上としている。
【００６３】
固相抽出ユニット１１４における上流側フリット１１４Ｂ及び下流側フリット１１４Ｃは、濾過機能を有するものであり、生体試料の前処理等で使用されるものを適用している。なお、上流側フリット１１４Ｂの底面積と下流側フリット１１４Ｃの底面積の大きさは必ずしも同一である必要はないものである。
【００６４】
固相抽出ユニット１１４における固相抽出リザーバー１１４Ｄの容量は、添加する試薬分の容量を満たすために、少なくとも供試するサンプル量と同等以上の許容量を有している。
【００６５】
次に、図３及び図４を用いて、本実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容について説明する。
【００６６】
図３は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容の説明図である。図４は、本発明の第１の実施形態による臨床分析システムで分析する免疫抑制剤のメタノール溶解性の説明図である。
【００６７】
最初に、全血を用いた免疫抑制剤の固相抽出処理について説明する。臓器移植患者に対して投与する免疫抑制剤の血中濃度測定は、全血を用いて行われる。
【００６８】
例えば、タクロリムス、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、シクロスポリンのような免疫抑制剤は疎水性が高く、水系の溶液には溶解し難い性質を有する。これら薬剤のメタノールに対する溶解性を検討したところ、５０％以上のメタノール存在下でなければ安定して溶解しない傾向が認められた。
【００６９】
ここで、図４を用いて、エベロリムス（図４の実線Ｘ１）およびシクロスポリン（図４の実線Ｘ２）のメタノール溶解性について説明する。図４から理解されるように、これら薬剤を抽出対象とする場合は、除タンパク質処理時および固相抽出充填剤１１４Ａへの試料供試時の有機溶媒の終濃度に注意する必要があり、少なくともメタノールを用いる場合は５０％以上であることが望ましいことを示している。
【００７０】
従って、濃度５０％以上のメタノールを用いることで、除タンパク質処理用のフィルターユニットと固相抽出用の固相抽出ユニットを連結した構成とした場合もで、除タンパク質処理と固相抽出処理とを連続して行うことができる。
【００７１】
評価用の試料として患者全血検体がない場合、擬似的な患者全血検体を調製して用いることが可能である。擬似患者全血検体は、健常人から採血した全血検体に対して、例えば５０％メタノールで溶解した免疫抑制剤標品を終濃度が各免疫抑制剤の治療域濃度程度になるように添加することで調製できる。さらに、調製した擬似患者全血検体を３７℃で緩やかに転倒混和しながら３０ｍｉｎインキュベートすることにより、各免疫抑制剤の血球移行を再現することも可能である。
【００７２】
以下、図３を用いて、擬似患者全血検体中の免疫抑制剤の抽出および定量について示す。
【００７３】
従来は、全血に対して溶血し、タンパク質を除去する第１の工程の後、第１の工程の回収産物を、改めて固相抽出処理する第２の工程が必要であり、２段階の作業が必要であった。それに対して、本実施形態では、フィルターユニットと固相抽出ユニットを連結した構成のカートリッジを用いることで、両操作を一括して実施することができる。
【００７４】
最初に、工程１において、図１に示したカートリッジテーブル１２０の位置Ａに、カートリッジ移動機構１３０を用いて、未使用のカートリッジ１１０を設置する。その後、位置Ｂまでカートリッジテーブル１２０が回転する。
【００７５】
次に、固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングについて説明する。この場合、固相抽出充填剤１１４Ａは逆相モードとする。
【００７６】
工程２において、図１に示したカートリッジテーブル１２０の位置Ｂにおいて、分注機構１３２Ａを用いて、カートリッジ１１０のフィルターユニット１１２に１００％メタノールを１００μｌ添加する。その後、位置Ｃまでカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程３において、図１に示した圧力付加機構１３４Ａを用いた圧力付加操作により、メタノールを固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａの全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。その後、位置Ｄまでカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００７７】
次に、工程４において、図１に示した分注機構１３２Ｂを用いて、フィルターユニット１１２にＨ２Ｏを１００μｌ添加し、その後、位置Ｅまでカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程５において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｂを用いた圧力付加操作により、水を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａの全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。その後、位置Ｆまでカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００７８】
この一連の操作により、固相抽出ユニット１１４に充填した固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングが行なわれる。
【００７９】
次に、溶血後の除タンパク質処理について説明する。
【００８０】
工程６において、図１に示した分注機構１３２Ｃを用いて、フィルターユニット１１２に前述のように調製した擬似患者全血検体を５０μｌ添加する。その後、位置Ｇまでカートリッジテーブル１２０が移動する。そして、工程７において、図１に示した分注機構１３２Ｄを用いて、溶血処理液である０．５Ｍ硫酸亜鉛水溶液を１５０μｌ添加し、その後、位置Ｈまでカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程８において、図１に示した撹拌機構１３６Ａを用いて、十分に撹拌することにより、溶血処理を促す。この操作により、血球中に移行した免疫抑制剤を取り出すことができる。その後、位置Ｉまでカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８１】
次に、工程９において、図１に示した分注機構１３２Ｅを用いて、溶血処理後の試料に１００％メタノールを２００μｌ添加し、その後、位置Ｊにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１０において、図１に示した撹拌機構１３６Ｂを用いて、十分に撹拌することにより、除タンパク質処理を行う。この操作により全血由来のタンパク質が凝集し、免疫抑制剤は上清側に抽出された状態になる。その後、位置Ｋに、カートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８２】
次に、工程１１において、凝集したタンパク質を取り除くため、図１に示した圧力付加機構１３４Ｃを用いて圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。この操作により、濾液を一時回収することなしに直接固相抽出充填剤１１４Ａに供試でき、免疫抑制剤を固相抽出充填剤１１４Ａに吸着させる操作までを一括して完了させることができる。その後、位置Ｌにカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８３】
なお、位置Ｌに設けたカートリッジ移動機構１３０Ｂについては、後述する。
【００８４】
次に、固相抽出処理について説明する。
【００８５】
工程１２において、位置Ｍにおいて、図１に示した分注機構１３２Ｆを用いて、試料に内部標準物質を添加し、その後、位置Ｎにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１３において、図１に示した撹拌機構１３６Ｃを用いて、十分に撹拌する。その後、位置Ｏに、カートリッジテーブル１２０が移動する。そして、工程１４において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｄを用いて圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。
【００８６】
次に、工程１５において、位置Ｐで、図１に示した分注機構１３２Ｇを用いて、フィルターユニット１１２に固相抽出充填剤洗浄用の洗浄液，例えば、Ｈ２Ｏや５％メタノール等を５０μｌ添加し、その後、位置Ｑにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１６において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｅの圧力付加操作により同洗浄液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに免疫抑制剤を吸着させたまま、その他の夾雑成分を除去する。その後、位置Ｒにカートリッジテーブル１２０が移動する。
【００８７】
次に、工程１７において、図１に示した分注機構１３２Ｈを用いて、フィルターユニット１１２に溶出液，例えば、１００％メタノール等を５０μｌ添加し、その後位置Ｓにカートリッジテーブル１２０が移動する。次に、工程１８において、図１に示した圧力付加機構１３４Ｆの圧力付加操作により、溶出液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに吸着した免疫抑制剤を溶出回収する。
【００８８】
位置Ｒで回収された抽出物は、前処理サンプル導入機構２０６を用いて、質量分析部２００のイオン源２０４から質量分析装置２０２に導入され、目的成分の定量データを出力する。質量分析装置２０２は、例えば三連四重極型の質量分析装置で、ＭＲＭ（Multiple Reaction Monitoring）分析することにより、免疫抑制剤の分離およびピーク面積値からの定量を行う。その際、検体に対して内部標準物質を一定量添加しておくことにより、前処理を含めた精度管理や比率計算から定量値を割り出すことができる。
【００８９】
次に、血清や尿等の全血以外の血清・血漿などの生体試料を対象としたときの実施例について説明する。この場合、生体試料の除タンパク質を行った後、測定対象成分の固相抽出を行うため、図３に示した工程のうち、溶血工程（図３の工程７，８：溶血処理液添加および撹拌）を省略することになる。ただし、除タンパク質効果を高めるために硫酸亜鉛水溶液を添加する工程７を実施してもよいものである。
【００９０】
まず、固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングについて示す。この場合、固相抽出充填剤１１４Ａは逆相モードとする。カートリッジ１１０のフィルターユニット１１２に１００％メタノールを１００μｌ添加し、圧力付加操作によりメタノールを固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。引き続いて、同様にフィルターユニット１１２にＨ２Ｏを同量添加し、同操作により固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。この一連の操作により、固相抽出ユニット１１４に充填した固相抽出充填剤１１４Ａのコンディショニングを行う。
【００９１】
次に、フィルターユニット１１４に生体試料を５０μｌ添加する。これに対して、除タンパク質用の１００％メタノールを５０μｌ添加した後、十分に撹拌することにより、除タンパク質処理を行う。この操作により生体試料由来のタンパク質が凝集し、測定対象成分は上清側に抽出された状態になる。
【００９２】
タンパク質凝集後の試料に対して、必要に応じてメタノールを希釈する。例えば、親水性が高い測定対象成分の抽出については、有機溶媒濃度が高いと固相抽出充填剤への吸着効率が低下するため、濾過処理前に希釈しておくことが望ましい。
【００９３】
凝集したタンパク質を取り除くため、圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。この操作により、濾液を一時回収することなしに直接固相抽出充填剤１１４Ａに供試でき、測定対象成分を充填剤に吸着させる操作までを一括して完了させることができる。
【００９４】
次に、試料に内部標準物質を添加し、十分に撹拌する。そして、圧力付加操作を行い、濾液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。
【００９５】
次に、フィルターユニット１１２に固相抽出充填剤洗浄用の洗浄液，例えば、Ｈ２Ｏ等を５０μｌ添加し、圧力付加操作により同洗浄液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに薬剤成分を吸着させたまま、その他の夾雑成分を除去する。
【００９６】
次に、フィルターユニット１１２に溶出液，例えば、１００％メタノール等測定対象成分の物性に応じて設定を５０μｌ添加し、圧力付加操作により同溶出液を固相抽出ユニット１１４に移行させ、さらに固相抽出充填剤１１４Ａ全体を経由させた後、固相抽出ユニット１１４から排出させる。これにより、固相抽出充填剤１１４Ａに吸着した測定対象成分を溶出回収する。
【００９７】
以上の前処理で得られた抽出物は、例えば三連四重極型の質量分析装置でＭＲＭ分析することにより、測定対象成分の分離およびピーク面積値からの定量を行う。その際、検体に対して内部標準物質を一定量添加しておくことにより、前処理を含めた精度管理や比率計算から定量値を割り出すことができる。
【００９８】
以上説明したように、本実施形態によれば、免疫抑制剤のような脂溶性の高い薬剤の全血処理と固相抽出処理を行う際に、薬剤の物性溶解性を活かし、全血処理産物の一時回収なしに直接固相抽出処理に移行できる凝集タンパク質除去と固相抽出カラムへのサンプルロードを一括して実施できる。
【００９９】
また、血清や尿等の生体試料中の測定対象成分を粗精製するため、除タンパク質処理と固相抽出処理を１個の前処理用器材カートリッジで実現し、除タンパク質処理後の濾液を一時回収なしに直接固相抽出ユニットに供試できる。
【０１００】
さらに、血液のような夾雑成分の多い生体試料を前処理なしに直接同器材に供試することが可能であり、同器材で処理して得られた抽出物を直接ＭＳ等の分析装置に供試することができる。
【０１０１】
これらにより、濾液の一時回収工程の省略により、工程およびＴＡＴの短縮化が図れる。
【０１０２】
また、濾液の一時回収および一時回収した濾液の固相抽出ユニットへの供試に関わる機構の省略を図ることが可能となり、同前処理用器材カートリッジを用いて自動処理するシステムの簡素化および低コスト化が実現できる。
【０１０３】
さらに、一時回収工程の省略により、一時回収用の容器が不要となるため、消耗品点数およびそのコストを削減することが可能となるとともに、一時回収工程で生じるサンプルロスおよびキャリーオーバーを回避できる。
【０１０４】
固相抽出ターンテーブル上でランダムに多種多数の検査項目に対して自動処理全血向け、血清向けを実現できる。
【０１０５】
また、ホルダの上部の直径を大きくすることで、フィルターユニットフィルター部の直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【０１０６】
次に、図５を用いて、本発明の第２の実施形態による臨床分析システムの構成及び動作について説明する。なお、本実施形態による臨床分析システムの全体構成は、図１に示したものと同様である。また、本実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容は、図３に示したものと同様である。
【０１０７】
図５は、本発明の第２の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【０１０８】
カートリッジ１１０Ａは、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４が連結され、脱着可能な構造を有している。カートリッジ１１０Ａは、上流側にフィルターユニット１１２、下流側に固相抽出ユニット１１４が配置され、フィルターユニット１１２からの濾液を一時回収することなしに直接固相抽出ユニット１１４に供試する構成となっている。
【０１０９】
フィルターユニット１１２のホルダ１１６Ａと、固相抽出ユニット１１４のホルダ１１６Ｂとは、別体であり、連結部１１６Ｃにより脱着可能に連結されている。連結部１１６は、図示にように、ホルダ１１６Ａに形成された雄ねじと、ホルダ１１６Ｂに形成された雌ねじとにより形成されている。なお、雄雌ねじにより結合に代わりに、一方を他方に挿入した後、ねじ込んでロックできるルアーロックなどを用いることもできる。
【０１１０】
樹脂製のホルダ１１６Ａ、１１６Ｂは、円筒形状である。ホルダ１１６Ｂの上部の直径Ｒ１は、ホルダ１１６Ａの直径と等しく、下部の直径Ｒ２に比べて大きくなっている。フィルターユニット１１２は、ホルダ１１６Ａの内部に固定されたフィルター部１１２Ａと、ホルダ１１６Ａの内部であり、フィルター部１１２Ａの上部の空間であるフィルターリザーバー１１２Ｂとで構成される。ここで、ホルダ１１６Ａの直径Ｒ１を大きくすることで、フィルター部１１２Ａの直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【０１１１】
また、固相抽出ユニット１１４は、ホルダ１１６Ｂの内部であって、フィルター部１１２Ａの下方の直径の大きな部分に形成される固相抽出リザーバー１１４Ｄと、固相抽出充填剤１１４Ａと、固相抽出充填剤１１４Ａを固相抽出ユニット１１４の内部に保持する上流側フリット１１４Ｂ及び下流側フリット１１４Ｃで構成される。
【０１１２】
その他の構成は、図２に示したものと同様である。
【０１１３】
図３の説明では、カートリッジ１１０Ａのフィルターユニット１１２のリザーバー１１２Ｂには、凝集したタンパク質ＰＲＴが残留したまま、その後の処理が進められているが、固相抽出処理によって使用される溶剤によって、凝集したタンパク質に吸着している夾雑成分が溶解し、フィルターユニット１１２のフィルター部１１２Ａを透過する恐れがある場合には、除タンパク質処理後に、カートリッジ１１０Ａの上部のフィルターユニット１１２を取り外すようにできる。
【０１１４】
そのため、図１に示した位置Ｌにおいて、カートリッジ移動機構１３０Ｂは、上部のフィルターユニットを取り外すために備えられている。
【０１１５】
以上説明したように、本実施形態によっても、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【０１１６】
次に、図６を用いて、本発明の第３の実施形態による臨床分析システムの構成及び動作について説明する。なお、本実施形態による臨床分析システムの全体構成は、図１に示したものと同様である。また、本実施形態による臨床分析システムの分析処理の内容は、図３に示したものと同様である。
【０１１７】
図６は、本発明の第３の実施形態による臨床分析システムに用いるカートリッジの構成を示す断面図である。
【０１１８】
カートリッジ１１０Ｂは、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４が連結され、一体化された構造を有している。カートリッジ１１０Ｂは、上流側にフィルターユニット１１２、下流側に固相抽出ユニット１１４が配置され、フィルターユニット１１２からの濾液を一時回収することなしに直接固相抽出ユニット１１４に供試する構成となっている。
【０１１９】
樹脂製のホルダ１１６は、円筒形状であり、上部の直径Ｒ１が、下部の直径Ｒ２に比べて大きくなっている。フィルターユニット１１２は、ホルダ１１６の内部に固定されたフィルター部１１２Ａと、ホルダ１１６の内部であり、フィルター部１１２Ａの上部の空間であるフィルターリザーバー１１２Ｂとで構成される。ここで、ホルダ１１６の上部の直径Ｒ１を大きくすることで、フィルター部１１２Ａの直径を大きくでき、夾雑成分の目詰まりを回避できる。
【０１２０】
また、固相抽出ユニット１１４は、固相抽出充填剤１１４Ａと、固相抽出充填剤１１４Ａを固相抽出ユニット１１４の内部に保持する下流側フリット１１４Ｃで構成される。なお、図２に示した上流側フリット１１４Ｂは、フィルター部１１２Ａが兼用している。したがって、フィルターユニット１１２と固相抽出ユニット１１４は互いに切り離せないように接合された構造を取るため、両ユニットを脱着できないものである。フィルター部１１２Ａの構造は、固相抽出充填剤１１４Ａに接する下流側に向かってテーパー状になっていてもよいものである。
【０１２１】
その他の構成は、図２に示したものと同様である。
【０１２２】
以上説明したように、本実施形態によっても、濾液を一時回収することなく固相の抽出が可能となる。
【０１２３】
なお、本発明は、臨床検査分野だけでなく、目的成分検出に夾雑成分からの精製を要する分析分野に幅広く応用可能である。例えば、環境、食品、医用、公安テロ対策／違法薬物等の分野への実用およびそのための基礎／応用研究に利用可能である。
【符号の説明】
【０１２４】
１００…前処理部
１１０…カートリッジ
１１２…フィルターユニット
１１２Ａ…フィルター部
１１２Ｂ…フィルターリザーバー
１１４…固相抽出ユニット
１１４Ａ…固相抽出充填剤
１１４Ｂ…上流側フリット
１１４Ｃ…下流側フリット
１１４Ｄ…固相抽出リザーバー
１１６…ホルダ
１２０…カートリッジテーブル
１３０…カートリッジ移動機構
１３２…分注機構
１３４…圧力付加機構
１３６…撹拌機構
２００…質量分析部
２０２…質量分析装置
２０４…イオン化部
２０６…前処理サンプル導入機構
３００…制御演算部
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料から測定対象成分を抽出する前処理部と、該前処理部により抽出された測定対象成分を質量分析する質量分析部とを有する臨床検査システムであって、
前記前処理部は、
上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと下流側の固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を、複数設置するカートリッジテーブルと、
該カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材に対して所定の溶液を供給する複数の分注機構と、
前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液に圧力を付加する複数の圧力付加機構と、
前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液を撹拌する複数の撹拌機構とを備えることを特徴とする臨床検査システム。
【請求項２】
請求項1記載の臨床検査システムにおいて、
前記前処理用器材の前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されており、
前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理容器材の前記フィルターユニットを取り外す前処理用器材移動機構を備えることを特徴とする前処理用器材。
【請求項３】
生体試料から測定対象成分を抽出し、分析する臨床検査方法であって、
上流側に位置し、フィルター部を有するフィルターユニットと下流側に位置し、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を用い、
前記フィルターユニット内で試料と試薬を反応させ、反応産物を前記フィルター部による濾過処理により濾液と残渣に分別し、残渣をフィルターユニット側に残した状態を保ちながら、濾液の一時回収操作なしに直接濾液を固相抽出ユニットに供給し、
測定対象成分を前記固相抽出ニットの固相抽出充填剤に捕捉させるとともに非吸着成分を固相抽出充填剤から素通りさせることで廃棄し、
前記固相抽出充填剤に非特異的あるいは弱く吸着した前記測定対象成分とは異なる不要な夾雑成分を洗浄除去し、
最後に前記測定対象成分を特異的に前記固相抽出充填剤から溶出可能な条件下で回収し、
回収した前記測定対象成分を質量分析することを特徴とする臨床検査方法。
【請求項４】
請求項３記載の臨床検査方法において、
前記生体試料は全血であり、
前記フィルター部における濾過処理時の除タンパク質処理に用いる溶液，前記固相抽出剤による固相抽出時に用いる溶液として、濃度５０％以上のメタノールを用いることを特徴とする臨床検査方法。
【請求項５】
請求項３記載の臨床検査方法において、
前記測定対象成分は、免疫抑制剤成分であることを特徴とする臨床検査方法。
【請求項６】
臨床検査システムの前処理に用いられる前処理用器材であって、
上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと、
該フィルターユニットに連結され、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットとを備えることを特徴とする前処理用器材。
【請求項７】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されていることを特徴とする前処理用器材。
【請求項８】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、一体的に連結されているとともに、
前記フィルターユニットの前記フィルター材は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットを兼用することを特徴とする前処理用器材。
【請求項９】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記フィルターユニットの前記フィルター材の面積は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリット以上の面積を有することを特徴とする前処理用器材。
【請求項１０】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の充填高が、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットの直径以上であることを特徴とする前処理用器材。
【請求項１】
生体試料から測定対象成分を抽出する前処理部と、該前処理部により抽出された測定対象成分を質量分析する質量分析部とを有する臨床検査システムであって、
前記前処理部は、
上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと下流側の固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を、複数設置するカートリッジテーブルと、
該カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材に対して所定の溶液を供給する複数の分注機構と、
前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液に圧力を付加する複数の圧力付加機構と、
前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理用器材の内部の溶液を撹拌する複数の撹拌機構とを備えることを特徴とする臨床検査システム。
【請求項２】
請求項1記載の臨床検査システムにおいて、
前記前処理用器材の前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されており、
前記カートリッジテーブルに設置された前記前処理容器材の前記フィルターユニットを取り外す前処理用器材移動機構を備えることを特徴とする前処理用器材。
【請求項３】
生体試料から測定対象成分を抽出し、分析する臨床検査方法であって、
上流側に位置し、フィルター部を有するフィルターユニットと下流側に位置し、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットが連結した前処理用器材を用い、
前記フィルターユニット内で試料と試薬を反応させ、反応産物を前記フィルター部による濾過処理により濾液と残渣に分別し、残渣をフィルターユニット側に残した状態を保ちながら、濾液の一時回収操作なしに直接濾液を固相抽出ユニットに供給し、
測定対象成分を前記固相抽出ニットの固相抽出充填剤に捕捉させるとともに非吸着成分を固相抽出充填剤から素通りさせることで廃棄し、
前記固相抽出充填剤に非特異的あるいは弱く吸着した前記測定対象成分とは異なる不要な夾雑成分を洗浄除去し、
最後に前記測定対象成分を特異的に前記固相抽出充填剤から溶出可能な条件下で回収し、
回収した前記測定対象成分を質量分析することを特徴とする臨床検査方法。
【請求項４】
請求項３記載の臨床検査方法において、
前記生体試料は全血であり、
前記フィルター部における濾過処理時の除タンパク質処理に用いる溶液，前記固相抽出剤による固相抽出時に用いる溶液として、濃度５０％以上のメタノールを用いることを特徴とする臨床検査方法。
【請求項５】
請求項３記載の臨床検査方法において、
前記測定対象成分は、免疫抑制剤成分であることを特徴とする臨床検査方法。
【請求項６】
臨床検査システムの前処理に用いられる前処理用器材であって、
上流側のフィルター部を有するフィルターユニットと、
該フィルターユニットに連結され、固相抽出剤を有する固相抽出ユニットとを備えることを特徴とする前処理用器材。
【請求項７】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、脱着可能に連結されていることを特徴とする前処理用器材。
【請求項８】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記フィルターユニットと前記固相抽出ユニットとは、一体的に連結されているとともに、
前記フィルターユニットの前記フィルター材は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットを兼用することを特徴とする前処理用器材。
【請求項９】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記フィルターユニットの前記フィルター材の面積は、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリット以上の面積を有することを特徴とする前処理用器材。
【請求項１０】
請求項６記載の前処理用器材において、
前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の充填高が、前記固相抽出ユニットの前記固相抽出剤の上流側のフリットの直径以上であることを特徴とする前処理用器材。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２０１１−９５０６９（Ｐ２０１１−９５０６９Ａ）
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２４８３６４（Ｐ２００９−２４８３６４）
【出願日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
【Ｆターム（参考）】
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