自己免疫障害を治療する方法
本発明は、自己免疫疾患を治療するための方法に関する。ある具体例において、本発明は、ＴＣＣＲアゴニストを投与することを含む自己免疫疾患を治療する方法に向けられる。ある具体例において、該自己免疫疾患はＴｈ１応答によって少なくとも部分的に媒介される。ある具体例において、該自己免疫疾患はＣＤ８＋Ｔ−細胞増殖によって少なくとも部分的に媒介される。本発明は、ＩＬ−２７のようなＩＬ２７Ｒ（ＴＣＣＲ）のアゴニストを投与することによって、多発性硬化症（ＭＳ）および慢性関節リウマチ（ＲＡ）を含めた自己免疫疾患を治療する方法を提供する。ＴＣＣＲの有用なアゴニストは、ＩＬ２７Ｒの改変体および断片、ＩＬ−２７のようなＩＬ２７Ｒリガンド、およびその改変体および断片ならびにＩＬ２７ＲまたはＩＬ２７Ｒリガンドに結合し、ＩＬ２７−媒介応答を刺激し、誘導し、または増強するアゴニスト抗体を含む。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
自己免疫疾患は、複雑な相互に関連する生物学的経路の発現または結果である。正常な生理学においては、これらの生物学的経路は、傷害または負傷に応答し、傷害または負傷からの修復を開始し、外来性生物に対する先天的および獲得された防御を設置するのに臨界的である。これらの正常な生理学的経路がさらなる傷害または負傷を、応答の強度に関するものとして、異常な調節または過剰な刺激の結果として、自己に対する反応として、またはこれらの組合せとしてのいずれかで引き起こす場合、病気または病理が起こり得る。
【０００２】
これらの病気の発生はしばしば多工程経路を含み、しばしば、複数の異なる生物学的系／経路に関係するが、これらの経路の１以上における臨界点での介入は軽減または治療効果を有し得る。治療的介入は有害プロセス／経路の拮抗作用または細菌プロセス／経路の組み合わせによって起こり得る。
【０００３】
哺乳動物の免疫系は、細菌、ウイルス、トキシンおよび他の非−宿主物質の侵入から宿主を防御するのに協調して作用する多数のユニークな細胞よりなる。リンパ球、ＴおよびＢ細胞双方は、免疫系の特異性を大いに担っている。Ｔ細胞は胸腺において発生することから命名され、他方、Ｂ細胞は骨髄において発生する。
【０００４】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は哺乳動物免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によってコードされる自己−分子に関連する抗原を認識する。抗原は抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面にＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、健康の脅威が宿主哺乳動物に曝されるこれらの改変された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）および細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＤ８＋）を含む。ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体の認識に続いてかなり増殖する。ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ−リンパ球、および免疫応答に参加する種々の他の細胞の活性化において中枢的な役割を演じるリンホカインのような種々のサイトカインも分泌する。細胞傷害性Ｔ−リンパ球は他の細胞の破壊を引き起こすことができる。
【０００５】
液性および細胞媒介免応答双方における中枢的な事象はヘルパーＴ細胞の活性化およびクローン拡大である。ヘルパーＴ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）−ＣＤ３複合体の、抗原提示細胞の表面での抗原−ＭＨＣとの相互作用によって開始される。この相互作用は、休止ヘルパーＴ細胞が細胞周期に入るのを誘導し（Ｇ０ないしＧ１転移）、その結果、ＩＬ−２に対する高親和性受容体の発現をもたらす生化学的事象のカスケードを媒介する。活性化されたＴ細胞は、周期増殖および分化を介して記憶細胞またはエフェクター細胞を通じて進行する。
【０００６】
Ｔ−ヘルパー細胞サブセット（Ｔｈ１およびＴｈ２）は免疫の２つの経路を定義する：細胞−媒介免疫性および液性免疫性。Ｔｈ１およびＴｈ２サブタイプについてのサイトカインの放出プロフィールはエフェクターメカニズムおよび細胞傷害性細胞の選択に影響する（非特許文献１；非特許文献２）。Ｔｈ１細胞、ＣＤ４＋細胞の機能的サブセットは、細胞−媒介免疫性を増強し、Ｉｌ−２、インターフェロン−ガンマ、リンホカインべータを含めたサイトカインを生産するそれらの能力によって特徴付けられる（非特許文献１；非特許文献２）。Ｔｈ１細胞によって分泌されるＩｌ−２およびインターフェロン−ガンマはマクロファージおよび細胞傷害性細胞を活性化する。Ｔｈ２細胞はＣＤ４＋細胞でもあるが、Ｔｈ１細胞から区別される。Ｔｈ２細胞は、抗体生産のような液性免疫性を増強するそれらの能力によって特徴付けられる。Ｔｈ２細胞はＩｌ−４、Ｉｌ−５、およびＩｌ−１０を含めたサイトカインを生産する（非特許文献１；非特許文献２）。Ｔｈ２細胞によって分泌されるＩｌ−４、Ｉｌ−５、およびＩｌ−１０は好酸球および肥満細胞の生産を増殖させ、ならびにＩｇＥを含めた抗体の生産を増強し、細胞傷害性細胞の機能を減少させる（非特許文献３）。
【０００７】
Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカイン放出は、相互に抑制性のＴｈ１およびＴｈ２応答を変更する。例えば、ＩＬ−４はＴｈ１細胞からのインターフェロン−ガンマの発現を阻害し、他方、インターフェロン−ガンマはＴｈ２細胞からのＩＬ−４の発現を阻害する（非特許文献１）。
【０００８】
４つのラセン束サイトカインファミリーのメンバー（非特許文献４）は、共通の前駆体からのＴヘルパー細胞のＴｈ１およびＴｈ２エフェクター細胞の区別される集団への増殖および最後の分化を変調する（非特許文献５）。および、ＩＬ−４はＴｈ２細胞の発生に影響し、他方、ＩＬ−１２はＴｈ１細胞の分化に関与する（非特許文献６；非特許文献７）。
【０００９】
ＴＣＣＲ（Ｔ−細胞サイトカイン受容体）は、ＩＬ−１２ β−２受容体、Ｇ−ＣＳＦＲ、およびＩＬ−６受容体に対する相同性を持つサイトカイン受容体のＷＳ（Ｇ）ＸＷＳクラスである。これらの受容体は、細胞、特に、血液細胞の増殖および分化に関与する細胞の増殖および分化を制御できるシグナルを変換する。ＴＣＣＲは、Ｔ＝ヘルパー細胞応答に関与することが示唆されている。特に、ＴＣＣＲおよびそのリガンドＩＬ−２７はＴｈ１応答を促進することが仮定されている（非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。
【００１０】
Ｔｈ１およびＴｈ２細胞のいずれかまたは双方によって生産されるサイトカインの過剰生産は、医学的障害の宿主にインパクトを与える。例えば、Ｔｈ１サイトカインの過剰生産は、多発性硬化症および慢性関節リウマチのような種々の自己免疫疾患の病因に寄与する。Ｔｈ２サイトカインの過剰生産はアレルギー疾患の病因に寄与する。
【００１１】
ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）は、いくつかの自己免疫疾患において組織の病原体破壊に関与する。例えば、ＣＴＬは、自己免疫Ｉ型糖尿病のクールの間に膵臓β細胞の破壊に関連する（非特許文献１１）。ＣＴＬは実験的自己免疫脳脊髄炎にも関連する（非特許文献１２）。ＣＴＬは移植片（ＧＶＨＤ）−対宿主病に関連する組織損傷を媒介する（非特許文献１３）。
【００１２】
多発性硬化症（ＭＳ）は、脳および脊髄に影響する中枢神経系の障害である。ＭＳの共通の兆候および症状は、１以上の四肢において、体幹において、または顔の一方側における感覚異常；脚または手の弱化またはぎこちなさ；または（部分的な盲目および１つの目における痛みのような）目に見える乱れ、視覚のかすみ、または暗点を含む。他の共通の初期の兆候は、二重視（複視）をもたらす目の麻痺、１以上の四肢の一過的弱化、四肢のわずかな硬直または異常な脆性、わずかな歩行の乱れ、膀胱制御の困難、眩暈、および軽い情緒的乱れ（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ：第１７版（ＭＳ）についての現在の治療は、コルチコステロイド、バーターインターフェロン（Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ，Ａｖｏｎｅｘ，Ｒｅｂｉｆ）、グラチラメール酢酸（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）、メトトリキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、クラドリビン、バクロフェン、チザニジン、アミトリプチリン、カルバマゼピン（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，ｓｕｐｒａ）を含む。
【００１３】
慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、典型的には小さなおよび大きな関節に影響する関節の滑膜炎によって特徴付けられる慢性自己免疫疾患であり、それらの進行性破壊に至る（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，ｓｕｐｒａ）。ＲＡの兆候は硬直、圧痛、滑膜厚化、反射梗縮、内臓小節、脚潰瘍または多発性単神経炎、胸膜または心臓周囲滲出、および発熱を含むことができる（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，ｓｕｐｒａ）。
【００１４】
ＲＡのための現在の治療は（サリシレートを含めた）非−ステロイド、抗−炎症薬物、金化合物、メトトレキセート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、ペニシラミン、コルチコステロイド、および細胞傷害性または免疫抑制薬物（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ：第１７版）を含む。
【非特許文献１】Ｍｏｓｍａｍｍら、Ａｄｖ．Ｉｍｎｕｎｏｌ．（１９８９）４５：１１１−１４７
【非特許文献２】Ｍｏｓｍａｎｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ（１９９６）１７：１３８−１４６
【非特許文献３】Ｐｏｗｒｉｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，（１９９３）１４：２７０
【非特許文献４】Ｂａｚａｎ，ＰＮＡＳ，（１９９０）８７：６９３４
【非特許文献５】Ｏ’Ｇａｒｒａ，Ａ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９８）８：２７５−８３
【非特許文献６】Ｈｓｉｅｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９３）２６０：５４７−９
【非特許文献７】Ｓｅｄｅｒら、ＰＮＡＳ，（１９９３）９０：１０１８８−９２
【非特許文献８】Ｃｈｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ，（２０００）４０９：９１６−９２０
【非特許文献９】Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，（２００１）１５：５６９−５７８
【非特許文献１０】Ｐｆｌａｎｚら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，（２００２）１６：７７９−７９０
【非特許文献１１】Ｋａｇｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９７）１８６：９８９−９９７
【非特許文献１２】Ｈｕｓｅｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，（２００１）１９４（５）：６６９−６７６
【非特許文献１３】Ｇｒａｕｂｅｒｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９７）１００：９０４−９１１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
自己免疫疾患に対する現存の療法のいずれも、限定された効率および／または有意な毒性のため満足することが判明していない。かくして、ＭＳおよびＲＡのような自己免疫疾患を治療するための新しい方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
ナイーブな未分化Ｔ細胞（Ｔｈ−０）は、成熟なＴ−ヘルパー細胞へのＴｈ−０細胞の分化を誘導する異なるシグナルに応答する。今日、例えば、ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲのアゴニストを投与することによって、細胞受容体ＴＣＣＲの活性化がＴ−リンパ球増殖を低下させるのに効果的であることが発見されている。Ｔ−リンパ球増殖の低下は、ＩＬ−１０およびＳＯＣＳ−３の増大した発現に相関した。ＴＣＣＲを発現する動物は、自己免疫疾患に対して感受性が低いことが判明した。
【００１７】
ＥＡＥ病気モデルにおけるさらなる実験は、ＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）−欠乏マウスは自己免疫疾患に対して過敏であることを示した。Ｔｈ−細胞分化における、および免疫障害におけるＩＬ−２７の役割の研究は、ＩＬ−２７が免疫抑制性であり、Ｔｈ発生において複数レベルで作用するという驚くべき発見に導いた。ＩＬ−２７はＴｈ−ＩＬ１７細胞の生産を抑制し、ＩＬ−６の生産を阻害し、ＩＬ−６を含めたＴｈＩＬ１７サイトカインの生産を阻害する。ＩＬ−２７はＩＬ−１０の、およびＩＬ−４の、さらにＴｈ−ＩＬ１７細胞の阻害剤の生産を誘導し、ＩＬ１２受容体の生産およびＴｈ−１細胞の分化を刺激する。本明細書中に開示されたデータは、ＩＬ−２７が、Ｔｈ−１、Ｔｈ−２およびＴｈ−１７細胞にわたる重要な阻害活性を含めた重要な免疫抑制機能を有することを示す。
【００１８】
本発明は、ＩＬ−２７のようなＩＬ２７Ｒ（ＴＣＣＲ）のアゴニストを投与することによって、多発性硬化症（ＭＳ）および慢性関節リウマチ（ＲＡ）を含めた自己免疫疾患を治療する方法を提供する。ＴＣＣＲの有用なアゴニストは、ＩＬ２７Ｒの改変体および断片、ＩＬ−２７のようなＩＬ２７Ｒリガンド、およびその改変体および断片ならびにＩＬ２７ＲまたはＩＬ２７Ｒリガンドに結合し、ＩＬ２７−媒介応答を刺激し、誘導し、または増強するアゴニスト抗体を含む。また、本発明は、Ｔｈ−ＩＬＩ７細胞を含めた、Ｔ−リンパ球および／または細胞傷害性Ｔ−リンパ球の増殖を阻害する方法を提供し、該方法はＩＬ２７／ＩＬ２７Ｒ応答を刺激し、誘導し、または増強するアゴニストを投与することを含む。
【００１９】
【表１】
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（詳細な説明）
Ｔ−リンパ球の過剰増殖またはＴｈ１またはＴｈ２細胞によって生産されたサイトカインの過剰生産は、医学的障害の主に導く。例えば、Ｔｈ１応答に関連するサイトカインの過剰生産、またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球の過剰生産は同種異系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状線炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、海洋性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫性腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患、インスリン−依存性新生糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リュウマチ、サルコイドーシス、強皮症、全身エリテマトーデスを含めた自己免疫疾患に導き得る。
【００２１】
以下の実施例に詳細に説明する実験は、非−特異的Ｔ細胞刺激に応答してＴＣＣＲを発現するＴ細胞よりもＴＣＣＲを欠くＴ細胞のより大きな増殖を示す（図１参照）。以前、ＴＣＣＲおよびそのリガンドＩＬ−２７がＴｈ１応答を促進することが示唆された（Ｃｈｅｎら、２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０７：９１６−９２０；Ｙｏｓｈｉｄａら、２００１，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１５：５６９−５７８；Ｐｆｌａｎｚら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１６：７７９−７９０）。しかしながら、驚くべきことに、ＴＣＣＲを発現するマウスは、ＴＣＣＲを欠くマウスよりも、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のようなＴｈ１応答によって部分的に特徴付けられる自己免疫疾患に対して感受性が低いことが発見された（実施例２参照）。
【００２２】
以下の実施例に示すように、Ｔリンパ球の増殖は、細胞へのＴＣＣＲアゴニストの投与によって阻害される。また、自己免疫炎症性疾患の低下した臨床的進行およびよりひどくない兆候がＴＣＣＲ（−／−）動物におけるよりもＴＣＣＲ（＋／＋）を発現する動物に存在することが示された。
【００２３】
これらのデータは、ＴＣＣＲのアゴニストを用いて、Ｔ−細胞増殖を低下させることを示す。特に、データは、ＴＣＣＲのアゴニストが、多発性硬化症（ＭＳ）および慢性関節リュウマチ（ＲＡ）のような自己免疫媒介障害を治療するのに有用であることを示す。
【００２４】
（定義）
用語「自己免疫」とは、それを生産する生物の分子、細胞、または組織を抗体またはリンパ球のような免疫系の成分が攻撃し、または害するプロセスをいう。
【００２５】
用語「自己免疫障害」は、組織損傷、または病因のような損傷が少なくとも部分的には自己免疫プロセスの結果である病気をいう。その例として、用語「自己免疫疾患」は、Ｔｈ１応答またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球によって少なくとも部分的に媒介される病気を［含む。自己免疫疾患は同種異系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状線炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ膜網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、潰瘍性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎、および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患、インスリン−依存性真性糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、および全身エリテマトーデスを含む。
【００２６】
用語「Ｔｈ１応答」とは、Ｔｈ１エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化をいい、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、およびＴＮＦ−ベータのようなＴｈ１細胞からのサイトカインの分泌を含む。用語「Ｔｈ１バイアシング疾患」とは、Ｔｈ１エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化に好都合な疾患をいう。
【００２７】
用語「Ｔｈ１サイトカイン」とは、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、およびＴＮＦ−ベータを含めたＴｈ１応答において発現されるサイトカインをいう（Ｐｏｗｒｉｅら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１４：２７０）。
【００２８】
用語「Ｔｈ１媒介障害」とは、Ｔｈ１サイトカインの過剰生産によって圧倒的にまたは部分的に媒介される障害をいう。用語「Ｔｈ１媒介障害」は、Ｔ−細胞のＴｈ１サブタイプの分化における過剰生産または偏りに由来し得る障害を含む。そのような傷害は、自己免疫ショウガイ、例えば、ＲＡおよびＭＳを含む。
【００２９】
用語「Ｔｈ２応答」とは、Ｔｈ２エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化をいい、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３のようなＴｈ２細胞からのサイトカインの分泌を含む（Ｐｏｗｒｉｅら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１４：２７０）。用語「Ｔｈ２バイアシング条件」とは、Ｔｈ２エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化に好都合な条件をいう。
【００３０】
用語「ＴＣＣＲペプチド」「ＴＣＣＲ蛋白質」および「ＴＣＣＲ」は、本明細書中において用いる場合、天然配列ＴＣＣＲおよびＴＣＣＲペプチド改変体を含む。ＴＣＣＲペプチドはヒト組織またはもう１つの源のような種々の源から単離することができ、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ＴＣＣＲ」は、天然に由来するＴＣＣＲペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドである。そのような天然配列ＴＣＣＲは、天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ＴＣＣＲ」は（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形および分泌形態、（交互にスプライスされた形態のような）天然に生じる切形形態、およびＴＣＣＲの天然に生じる対立遺伝子改変体を具体的には含む。１つの具体例において、天然配列ヒトＴＣＣＲは、配列番号：１のアミノ酸１ないし６３６を含む成熟または全長天然配列ＴＣＣＲである。同様に、天然配列マウスＴＣＣＲは、配列番号：２のアミノ酸１ないし６２３を含む成熟または全長天然配列ＴＣＣＲである。配列番号：１および配列番号：２は、アミノ酸位置１としてここでは示されるメチオニン残基で始まることが示されるが、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸位置１から上流または下流いずれかに位置するもう１つのメチオニン残基は、ＴＣＣＲペプチドについての出発アミノ酸残基として使用することができると考えることができ、またそれが可能である。
【００３１】
「ＴＣＣＲペプチド細胞外ドメイン」または「ＴＣＣＲ ＥＣＤ」とは、膜貫通および細胞質ドメインを実質的に含まないＴＣＣＲペプチドの形態をいう。通常は、ＴＣＣＲペプチドＥＣＤはそのような膜貫通および／または細胞質ドメインの約１％未満を有し、好ましくは、好ましくは、そのようなドメインの約０．５％未満を有する。本発明のＴＣＣＲペプチドについて同定されるいずれの膜貫通ドメインも、疎水性ドメインのそのタイプを同定するためにルーチン的に使用される基準に従って同定されると理解される。膜貫通ドメインの正確な境界は変化し得るが、最もありそうには、最初に同定されたドメインのいずれかの末端における約５以下のアミノ酸であり得る。それ自体、１つの具体例において、ヒトＴＣＣＲペプチドの細胞外ドメインはアミノ酸１または約３３ないしＸ１を含ミリモル、ここに、Ｘ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基である。同様に、マウスＴＣＣＲペプチドの細胞外ドメインはアミノ酸１または約２５ないしＸ２を含ミリモル、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし残基５１９からのいずれかのアミノ酸残基である。
【００３２】
用語「ＴＣＣＲ改変体ペプチド」は、ＴＣＣＲペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を有し、かつ：
（ａ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドの残基１または約３３ないし６３６；
（ａ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドの残基１または約２５ないし６２３；
（ｂ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドのＸ３ないし６３６、ここに、Ｘ３は配列番号：１のいずれかのアミノ酸残基２７ないし３７；
（ｂ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドのＸ４ないし６２３、ここに、Ｘ４は配列番号：２の２０ないし３０からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ１）１または約３３ないしＸ１、ここに、Ｘ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ２）１または約２５ないしＸ２、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし５１９のいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｄ１）Ｘ５ないし６３６、ここに、Ｘ５は配列番号：１の残基５３３ないし５４３からのいずれかのアミノ酸であり；
（ｄ２）Ｘ６ないし６２３、ここに、Ｘ６は配列番号：２の残基５２７ないし５３７からのいずれかのアミノ酸であり；または
（ｅ）配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸配列のもう１つの特異的に誘導された断片；
のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％アミノ酸配列同一性を有するペプチドを意味する。
【００３３】
そのようなＴＣＣＲ改変体ペプチドは、例えば、配列番号：１および配列番号：２の配列のＮ−および／またはＣ−末端において、ならびに１以上の内部ドメイン内において１以上のアミノ酸残基が付加され、または欠失されたＴＣＣＲペプチドを含む。通常、ＴＣＣＲ改変体ペプチドは少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有し、
（ａ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドの残基１または約３３ないし６３６；
（ａ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドの残基１または約２５ないし６２３；
（ｂ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドのＸ３ないし６３６、ここに、Ｘ３は配列番号：１のいずれかのアミノ酸残基２７ないし３７；
（ｂ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドのＸ４ないし６２３、ここに、Ｘ４は配列番号：２の２０ないし３０からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ１）１または約３３ないしＸ１、ここに、Ｘ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ２）１または約２５ないしＸ２、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし５１９のいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｄ１）Ｘ５ないし６３６、ここに、Ｘ５は配列番号：１の残基５３３ないし５４３からのいずれかのアミノ酸であり；
（ｄ２）Ｘ６ないし６２３、ここに、Ｘ６は配列番号：２の残基５２７ないし５３７からのいずれかのアミノ酸であり；または
（ｅ）配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸配列のもう１つの特異的に誘導された断片；
に対して少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％アミノ酸配列同一性であり得る。
【００３４】
用語「ＩＬ−２７」は、本明細書中で用いる場合、天然の配列ＩＬ−２７ヘテロダイマー、天然の配列ＩＬ−２７成分ＥＢＩ３およびｐ２８、ＩＬ−２７ヘテロダイマー改変体（本明細書中でさらに定義する、およびＥＢＩ３およびｐ２８の改変体を含む。ＩＬ−２７ヘテロダイマーおよびその成分はヒト組織タイプから、またはもう１つの源からのような種々の源から単離することができ、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ＩＬ−２７」は、天然に由来するＩＬ−２７ヘテロダイマーと同一のアミノ酸配列を有するヘテロダイマーを含む。そのような天然配列ＩＬ−２７ヘテロダイマーは天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ＩＬ−２７」は、具体的には、（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形され、かつ分泌された形態、（交互にスプライシングされた形態のような）天然に生じる切形された形態、およびＩＬ−２７ヘテロダイマーの天然に生じる対立遺伝子改変体を含む。
【００３５】
用語「ＩＬ−２７改変体」とは、ＴＣＣＲを活性化することができる、天然配列ＩＬ−２７成分ＥＢＩ３およびｐ２８を含めた、天然配列ＩＬ−２７に対して相同性を有するペプチドをいう。ＩＬ−２７改変体は、ＥＢＩ３改変体およびｐ２８改変体から形成されるものを含むことができる。ＩＬ−２７改変体は、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０を共にかみ合わせることができるものも含むことができる。ＩＬ−２７改変体は、ＴＣＣＲホモダイマーを形成することができるものを含むことができる。ＩＬ−２７改変体はＰＥＧ化ＩＬ−２７を含む。
【００３６】
用語「ｐ２８」は、本明細書中で用いる場合、天然配列ｐ２８およびｐ２８ペプチド改変体を含む。ｐ２８はヒト組織タイプから、またはもう１つの源からのように種々の源から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ｐ２８」は、天然に由来するｐ２８ペプチドを同一のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。そのような天然配列ｐ２８は天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ｐ２８」は、具体的には、（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形され、または分泌された形態、（交互にスプライシングされた形態のような）天然に生じる切形形態、およびｐ２８の天然に生じる対立遺伝子改変体を含む。
【００３７】
用語「ｐ２８ペプチド改変体」は、天然配列ヒトｐ２８（配列番号：３）またはマウスｐ２８（配列番号：４）に対して少なくとも７３％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有するペプチドを含む。ｐ２８ペプチド改変体は、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０に結合することができるｐ２８の部分を含む。ｐ２８ペプチド改変体は、ＴＣＣＲを活性化することができるｐ２８の部分を含む。ｐ２８ペプチド改変体は、ＴＣＣＲ上に見出されるサイトカイン受容体相同性ドメインの領域においてＴＣＣＲに結合すると考えられる、ｐ２８の第一および第三のアルファラセンからの残基、およびｇｐ１３０上に見出されるＩＧドメインに結合すると考えられる、第一のラセンの最後において、および第四のラセンの始まりにおける残基を含む。
【００３８】
用語「ＥＢＩ３」は、本明細書中で用いる場合、天然配列ＥＢＩ３およびＥＢＩ３ペプチド改変体を含む。ＥＢＩ３ペプチドはヒト組織タイプから、またはもう１つの源からのように種々の源から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ＥＢＩ３」は、天然に由来するＥＢＩ３ペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。そのような天然配列ＥＢＩ３は天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ＥＢＩ３」は、具体的には、（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形され、および分泌された形態、（交互にスプライシングされた形態のような）天然に生じる切形された形態、およびＥＢＩ３の天然に生じる対立遺伝子改変体を含む。
【００３９】
用語「融合蛋白質」とは、例えば、２つの異なる蛋白質をコードする２つの遺伝子の融合から得られる発現産物をいう。該用語は、２つの異なる蛋白質の部分をコードする２つの遺伝子の部分の融合に由来する発現産物も含む。該用語は、翻訳後に起こる融合に由来する蛋白質を含む。本明細書で用いるように、該用語は、異種ペプチドに融合した、ＩＬ−２７、その成分（ＥＢＩ３およびｐ２８）またはその部分を含むであろう。該用語は、異種ペプチドに融合したＴＣＣＲまたはその部分も含むであろう。該用語は、機能的な１つの鎖サイトカインを形成するためのｐ２８に融合したＥＢＩ３も含むであろう（Ｐｆｌａｎｚら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１６：７７９−７９０）。該用語は、ヒトＦｃタグにコンジュゲートしたＩＬ−２７を含む。
【００４０】
本明細書中で用いるように、与えられたペプチドに関しては、「異種ペプチド」とは、起源に関わらず異なる配列を持つペプチドをいう。例えば、天然配列ＴＣＣＲに関しては、異種ペプチドとは、天然配列ＴＣＣＲのそれ以外の配列を有するペプチドをいう。天然配列ＩＬ−２７に関しては、異種ペプチドとは、天然配列ＩＬ−２７のそれ以外の配列を有するペプチドをいう。
【００４１】
用語「アゴニスト」は、天然配列ペプチドの生物学的活性を増強する、または刺激するいずれの分子も含む。適当なアゴニストは、具体的には、アゴニストペプチド、アゴニスト抗体または抗体断片、本発明の天然ペプチドの断片またはアミノ酸配列改変体等を含む。ＴＣＣＲのアゴニストを同定するための方法は、例えば、ＴＣＣＲペプチドまたはＴＣＣＲペプチド−発現細胞を候補アゴニスト分子と接触させ、１以上のＴＣＣＲ生物学的活性の検出可能な変化を測定することを含む。
【００４２】
「ＴＣＣＲ生物学的活性」とは、本明細書中で用いるように、Ｔ−細胞増殖の減衰または抑制のようなＴＣＣＲ媒介応答をいう。ＴＣＣＲ生物学的活性は、Ｔｈ１応答またはＴｈ１媒介障害の減衰または抑制を含む。ＴＣＣＲ生物学的活性はＩＬ−１０およびＳＯＣＳ−３の発現の増加を含む。ＴＣＣＲ生物学的活性は、ＴＣＣＲの活性化に関連するシグナリング、例えば、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ４、およびＳｔａｔ５のようなシグナル変換および転写因子のリン酸化も含む（Ｌｕｃａｓら、２００３，ＰＮＡＳ，１００（２５）：１５０４７−５２）。
【００４３】
用語「抗体」および「免疫グロブリン」は最も広い意味で用いられ、具体的には、ポリクローナル抗体、（アゴニストおよびアンタゴニスト抗体を含めた）モノクローナル抗体、（二価抗体のような）多価抗体、（所望の生物学的活性を呈する二特異的抗体のような）多特異的抗体、ポリエピトープ特異性を持つ抗体組成物、アフィニティー成熟化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ならびに所望の生物学的活性を呈する（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、およびＦｖのような）抗原結合断片を含む。天然に生じる抗体は、ジスルフィド結合によって相互連結した４つのペプチド鎖、２つの同一の重（Ｈ）鎖および２つの同一の軽（Ｌ）鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域ドメイン（ＶＨ）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域ドメイン（ＶＬ）および軽鎖定常領域ドメインを含む。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬを含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、さらに、配列によって規定される相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｋａｂａｔら、１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、またはフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する三次元構造によって規定される超可変ループ（ＨＶＬ）（Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７）に細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは典型的には、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１（ＨＶＬ１）、ＦＲ２、ＣＤＲ２（ＨＶＬ２）、ＦＲ３、ＣＤＲ３（ＨＶＬ３）、ＦＲ４にてアミノ−末端ないしカルボキシ−末端に配置された３つのＣＤＲ（またはＨＶＬ）および４つのＦＲから構成される。
【００４４】
抗体（免疫グロブリン）は、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して異なるクラスに帰属される。免疫グロブリンの５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２等のようなサブクラス（イソタイプ）にさらに分割される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインが、各々、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置はよく知られており、一般に、例えば、Ａｂｂａｓら、２０００，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄに記載されている。抗体は、１以上の他の蛋白質またはペプチドと抗体との共有結合または非共有結合開放によって形成されるより大きな融合分子の一部であり得る。
【００４５】
用語「全長抗体」とは、少なくとも２つの重鎖および２つの軽鎖を含めたその実質的に無傷の形態の抗体をいい、以下に定義する抗体断片をいわない。該用語は、特に、Ｆｃ領域を含有する重鎖を持つ抗体をいう。全長抗体は天然配列抗体または組換え抗体であり得る。全長抗体はヒト、ヒト化、および／またはアフィニティー成熟化であり得る。
【００４６】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書中で用いるように、実質的に相同な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわち、該集団を含む個々の抗体は、該抗体の生産の間に生起し得る改変体を除いて実質的に同一である。
【００４７】
本明細書中に記載されたモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一である、または相同であり、他方、鎖の残りはもう１つの種に由来し、またはもう１つの抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一である、または相同である「キメラ」抗体、ならびに所望の生物学的活性を呈する限りそのような抗体の断片を含む（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４，ＰＮＡＳ，８１：６８５１−６８５５）。
【００４８】
非−ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非−ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原−結合サブ配列のような）キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、受容体の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変ループ（ＨＶＬ）からの残基が、マウス、ラットまたはウサギのような非−ヒト種（ドナー抗体）の１以上のＣＤＲまたはＨＶＬからの残基で置き換えられ、所望の抗原特異性、アフィニティーおよび能力を有するヒト免疫グロブリン（受容体抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンの特異的Ｆｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は対応する非−ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、受容体抗体においても、または輸入されたＣＤＲ（またはＨＶＬ）においても、あるいはフレームワーク配列においても見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに改良し、最大化するように成される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここに、ＣＤＲまたはＨＶＬの全てまたは実質的に全ては非−ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のそれである。
【００４９】
ヒト可変ドメイン、軽鎖および重鎖双方の選択は、ヒト化抗体を作成するにおいて用いることができる。「ベストフィット」方法に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、例えば、公知のヒト可変−ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。げっ歯類のそれに最も近いヒト配列は、ヒト化抗体についてのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として用いられる（Ｓｉｍｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６）。別法として、受容体フレームワーク領域は軽鎖または重鎖の特定のサブグループについてのヒト抗体コンセンサス配列に由来することができる。同一フレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体を生産するのに用い、または修飾し、および用いることができる（Ｃａｒｔｅｒら、１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３）。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６参照。ヒト化抗体はＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体とすることもでき、ここに、抗体の抗原−結合領域は、注目する抗原でアカゲザルを免疫化することによって生産される抗体に由来する。
【００５０】
免疫化に際して、内因性免疫グロブリンの生産の不存在下でヒト抗体の十分なレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生産することができる。例えば、キメラおよび生殖系突然変異体マウスにおける抗体重鎖接合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失の結果、内因性抗体生産の完全な阻害がもたらされる。そのような生殖系突然変異体マウスへのヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイの導入の結果、抗原攻撃に際してヒト抗体の生産がもたらされる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、１９９３，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３参照。ヒト抗体は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１；またはＭａｒｋｓら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載されているようにファージ−ディスプレイライブラリーに由来することもできる。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒトによって生産された抗体のそれに対応するアミノ酸配列を保有し、および／または本明細書中に開示されたヒト抗体を作成するための技術のいずれかを用いて作成されたものである。
【００５２】
「アフィニティー突然変異した」抗体は、それらの改変を保有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体のアフィニティーの改良をもたらす１以上の超可変領域において１以上の改変を有するものである。好ましいアフィニティー成熟化抗体は、標的抗原に対してナノモラーまたはピコモラーさえのアフィニティーを有するであろう。アフィニティー突然変異した抗体は公知の手法によって生産される。例えば、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによるアフィニティー成熟化を記載するＭａｒｋｓら、１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３参照。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発はＢａｒｂａｓら、１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｉｅｒら、１９９５，Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎら、１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら、１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；およびＨａｗｋｉｎｓら、１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６に記載されている。
【００５３】
「抗体断片」は、一般には、無傷抗体の抗原結合部位を含み、かつ、かくして、抗原を結合する能力を保有する無傷抗体の一部のみを含む。本定義に含まれる抗体断片の例は：
（ｉ）重鎖および軽鎖の間に１つの鎖間ジスルフィド結合を有するＶＬ、ＣＬ、ＣＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦａｂ断片；
（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ−末端において１以上のシステイン残基を有するＦａｂ断片であるＦａｂ’断片；
（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片；
（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメイン、および該ＣＨ１ドメインのＣ−末端に１以上のシステイン残基を有するＦｄ’断片；
（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖ断片；
（ｖｉ）ＶＨドメインよりなるｄＡｂ断片：
（ｖｉｉ）少なくともＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、ＣＨ１ドメインを含み、かつヒンジ領域を欠如する無ヒンジ抗体；
（ｖｉｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィドブリッジによって連結された２つのＦａｂ’断片を含む二価断片である（Ｆａｂ’）２断片：
（ｉｘ）単一鎖抗体分子（例えば、単一鎖Ｆｖ’ｓｃＦｖ）；
（ｘ）同一ペプチド鎖中の軽鎖可変ドメイン（ＶＨ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む２つの抗原結合部位を持つ「ダイアボディー」；
（ｘｉ）単一アーム抗原結合ドメインの半減期を増大させることができるＦｃ領域を形成するのに十分な、軽鎖、重鎖およびＮ−末端切形重鎖定常領域を含む単一アーム抗原結合分子；
（ｘｉｉ）相補性軽鎖ペプチドと一緒になって、抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む「線状抗体」；
を含む。
【００５４】
本明細書中で用いるように、「治療」とは、治療すべき個体または細胞の天然コースを改変させる試みにおける臨床的介入をいい、予防のために、または臨床的病理学のコースの間に行うことができる。治療の望ましい効果は、病気の発生または再発の予防、兆候の軽減、障害のいずれかの直接的または間接的病理学的結果の減少、転移の予防、病気進行速度の減少、病気状態の軽減または緩和、および緩解または改良された予後を含む。
【００５５】
ＴＣＣＲ
ＴＣＣＲ（ＷＳＸ−１）は、ＩＬ−１２ β−２受容体、Ｇ−ＣＳＦＲおよびＩＬ−６受容体に対する相同性を持つサイトカイン受容体のＷＳ（Ｇ）ＸＷＳクラスのものである。最高の相同性は、ＩＬ−１２ β―２受容体（２６％同一性）。これらの受容体は、細胞、特に、血液細胞の増殖および分化に関与する細胞の増殖および分化を制御するシグナルを変換する。後の実施例に示されるデータは、ＴＣＣＲの活性化が、直接的にまたは間接的に、ＣＤ８＋Ｔ−リンパ球またはＴｈ１応答の増殖を含めた、自己免疫プロセスの抑制を含むことを示唆する。
【００５６】
自己免疫プロセスの抑制は、Ｔ−細胞を他のマイトジェン刺激に対して非−応答性とすることができるサイトカインシグナリング（ＳＯＣＳ）蛋白質ファミリーメンバーのサプレッサーの誘導を介して起こり得る（Ａｌｅｘａｎｄｅｒら、．２００４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｕｌ．，２２：５０３）。特に、ＳＯＣＳ−３は、ヤヌスキナーゼの活性化ループに結合し、キナーゼ活性を阻害し、それにより、サイトカインシグナリングを抑制する蛋白質である（Ｍａｓｕｈａｒａら、１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２３９：４３９−４４６）。ペルオキシソームプロリファレーター−活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマアゴニスト（例えば、ロシグリタゾン）のようないくつかの剤の抗−炎症効果は、ＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ３の転写を誘導することによって機能する（Ｐａｒｋら、２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：１４７４７−１４７５２）。後の実施例に示したデータは、ＴＣＣＲ活性化がＳＯＣＳ３の発現を直接的にまたは間接的に誘導することを示す。
【００５７】
自己免疫抑制は、ＩＬ−１０の誘導を介しても起こる。ＩＬ−１０は活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、単球およびケラチノサイトによって生産されるサイトカインである。ＩＬ−１０は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＮＦを含めた多数のサイトカインの生産を阻害する。ＩＬ−１０は、炎症応答を制限し、終止させるにおいて主な役割を演じる（Ｍｏｏｒｅら、２００１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：６８３）。後の実施例に示されるデータは、ＴＣＣＲ活性化がＩＬ−１０の発現を直接的にまたは間接的に誘導することを示す。
【００５８】
ヒトＴＣＣＲのアミノ酸配列は公開されており（１９９６年５月２３日に出願されたＷＯ９７／４４４５５）、受託番号４７５９３２７下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。この配列はＳｐｒｅｃｈｅｒら、１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４６（１）：８２−９０にも記載されている。ヒトＴＣＣＲ（ｈＴＣＣＲ）の配列は長さが６３６アミノ酸であって、表１にて後に示される（配列番号：１）。単一ペプチドがアミノ酸残基１ないし３２から同定されており、膜貫通ドメインが配列番号：１のアミノ酸残基５１７ないし５３８から同定されている。Ｎ−グリコシル化部位が残基５１ないし５４、７６ないし７９、３０２ないし３０５、３１１ないし３１４、３７４ないし３７７、３８２ないし３８５、４６７ないし４７０、５６３ないし５６６において同定されており、Ｎ−ミリストイル化部位が残基１０７ないし１１２、２４０ないし２４５、２４４ないし２４９、２８１ないし２８６、２９２ないし２９７、３７７ないし３７８、４００ないし４０５、４５９ないし４６４、４７０ないし４７５、５３１ないし５３６および５３３ないし５３８において同定されている。原核生物膜リポ蛋白質脂質付着部位は残基５２２ないし５３２に存在し、成長因子およびサイトカイン受容体ファミリーシグニチャー１は残基４１ないし５４に存在する。また、残基１８３ないし１９１には、ヒト顆粒球−マクロファージコロニー−刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）に対する受容体の第二のサブユニットに対する有意な相同性の領域もある。ＴＣＣＲは、配列番号：１の残基４１ないし２３０におけるＴＣＣＲ上のサイトカイン受容体相同性ドメインにてＩＬ−２７サブユニットｐ２８に結合する。記載された全てのｈＴＣＣＲ残基は配列番号：１の配列に従ってナンバリングされる。
【００５９】
成人において、ｈＴＣＣＲは胸腺で最も高度に発現されるが、発現は、末梢血液白血球（ＰＢＬ）、脾臓においても観察され、および弱い発現が肺においても観察される。胎児組織は肺および腎臓において弱いＴＣＣＲ発現を呈する。
【００６０】
マウスＴＣＣＲ（ｍＴＣＣＲ）のアミノ酸配列は公開されており（１９９６年５月２３日に出願されたＷＯ９７／４４４５５）、受託番号７７１０１０９の下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。この配列はＳｐｒｅｃｈｅｒら、１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４６（１）：８２−９０にも記載されている。ｍＴＣＣＲに対する配列は、長さが６２３アミノ酸であって、表１において後に示される（配列番号：２）。単一ペプチドがアミノ酸残基１ないし２４において同定され、膜貫通ドメインは配列番号：２のアミノ酸残基５１４ないし５３２において同定されている。Ｎ−グリコシル化部位は残基４６ないし４９、２９６ないし２９９、３０５ないし３０８、３６０ないし３６１、３６８ないし３７１、および４６１ないし４６４において同定されている。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は残基１０ないし１３、９３ないし９６、１３０ないし１３３、１７２ないし１７５、１８４ないし１８７、２３５ないし２３８、２７１ないし２７４、２７２ないし２７５、３２３ないし３２６、６０６ないし６０９、６１５ないし６１８において同定されている。チロシンキナーゼリン酸化部位は約残基２０２ないし２０９において同定されている。Ｎ−ミリストイル化部位は約残基４３ないし４８、１０２ないし１０７、２９５ないし３００、３２１ないし３２６、３３０ないし３３５、３６７ないし３４４、３９３ないし３９８、５２５ないし５３０および５２７ないし５３２において同定されており、アミド化部位は約残基２４０ないし２４３において同定されている。原核生物膜リポ蛋白質脂質付着は約残基５１６ないし５２６に存在し、成長因子およびサイトカイン受容体ファミリーシグニチャー１は約残基３６ないし４９に存在する。有意な相同性の領域は約残基１４ないし５１においてヒトエリスロポエチンと共に存在し、マウスインターロイキン−５受容体は残基２１１ないし２１９に存在する。記載された全てのｍＴＣＣＲ残基は配列番号：２の配列に従ってナンバリングされる。
【００６１】
【化１】
【００６２】
【化２】
ＩＬ−２７
ＩＬ−２７はＴＣＣＲに対するリガンドである（Ｐｆｌａｎｚら、２００２Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６（６）：７７９−７９０）。ＩＬ−２７はＥＢＩ３（エプスタイン−バールウィルス誘導遺伝子３）およびｐ２８蛋白質サブユニットから構成されるヘテロダイマーサイトカインである。ｐ２８は３つの接触表面を持つ４つのラセン束サイトカインである。第一の接触表面はＥＢＩ３に結合し、第二および第四のαラセンの残基から構成される。第二の接触表面はサイトカイン受容体相同性ドメインの領域においてＴＣＣＲに結合し、第一および第三のアルファラセンの残基よりなる。第三の接触表面はｇｐ１３０上で見出されるＩＧドメインのようなＩＧドメインに結合し、第一のラセンの最後および第四のラセンの始まりにおける残基を含む。
【００６３】
ヒトｐ２８のペプチド配列（配列番号：３）は２４３アミノ酸の長さであり、他方、マウスｐ２８のペプチド配列（配列番号：４）は長さが２３４アミノ酸である（Ｐｆｌａｎｚ，ＮＣＢＩ受託番号ＡＡＭ３４４９９）。表２にて以下に示されるこれらの配列は７３％配列同一性を有する。
【００６４】
【化３】
ＥＢＩ３は可溶性サイトカイン受容体の構造を有し、ｐ２８上の特異的結合部位に結合する。ヒトＥＢＩ３は長さが２２９アミノ酸であり（Ｄｅｖｅｒｇｎｅら、１９９６，Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７０（２）：１１４３−１１５３）、表３にて以下に示されるペプチド配列（配列番号：５）を有する。
【００６５】
【化４】
ＴＣＣＲ／ＩＬ−２７受容体複合体
図１はＴＣＣＲ／ＩＬ−２７受容体複合体の人工物を示す。ＩＬ−２７に対する完全な受容体はｇｐ１３０およびＴＣＣＲサブユニットを含有する。サイトカイン受容体相同性ドメインは配列番号：６の約残基１２６ないし３２３におけるｇｐ１３０に存在する。ｇｐ１３０に存在する他の相同性ドメインは配列番号：６の約残基３２４ないし４２３、４２４ないし５１８、および５１９ないし６１４に位置する３つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、および約残基２２ないし１２２における免疫グロブリンドメインを含む。ｇｐ１３０はＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＣＴ１、およびＣＬＣに対する受容体の成分であることも知られている（Ｈｉｂｉら、１９９０，Ｃｅｌｌ，６３（６）：１１４９−１１５７）。ｇｐ１３０のアミノ酸配列（配列番号：６）を表４にて以下に示す。
【００６６】
【化５】
【００６７】
【化６】
ＴＣＣＲのＩＬ−２７活性化が、主なＴｈ１−特異的転写因子、Ｔ−ｂｅｔの発現を誘導する（Ｌｕｃａｓら、２００３，ＰＮＡＳ，１００：１５０４７−５２）。ＴＣＣＲ活性化の効果はＳｔａｔｓ（転写のシグナルトランスジューサーおよびアクチベーター）によって媒介される。具体的には、ＴＣＣＲ活性化はＳｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ４、およびＳｔａｔ５のリン酸化に導く（Ｌｕｃａｓら、２００３，ｓｕｐｒａ）。後の実施例に示すデータは、ＴＣＣＲ活性化がＣＤ８＋Ｔ−リンパ球の増殖、またはＴｈ１応答を含めた、自己免疫プロセスの発現を直接的または間接的に誘導することを示唆する。
ＴＣＣＲおよびＴ−リンパ球サブタイプ
前記したように、４つのラセン束サイトカインファミリーのメンバー（Ｂａｚａｎ，Ｊ．Ｆ．，１９９０，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８７：６９３４−８）は、Ｔｈ１およびＴｈ２エフェクター細胞の区別される集団への共通の前駆体からのＴヘルパー細胞の増殖および最後の分化において役割を演じる（Ｏ’Ｇａｒｒａ．，１９９８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，８：２７５−８３５）。ＩＬ−４はＴｈ２細胞の発生に支配的に影響し、他方、ＩＬ−１２はＴｈ１細胞の分化における主な因子である。（Ｈｓｉｅｈら、１９９３，Ｓｉｅｎｃｅ，２６０：５４７−９；Ｓｅｄｅｒら、１９９３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９０：１０１８８−９２；Ｌｅ Ｇｒｏｓら、１９９０，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１７２：９２１−９；Ｓｗａｉｎら、１９９１，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ，１２３：１１５−４４）。したがって、ＩＬ−４が欠乏したマウス（Ｋｕｈｎら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４，７０７−１０）、ＩＬ−４受容体α鎖（Ｎｏｂｅｎ−Ｔｒａｕｔｈら、１９９７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９４：１０８３８−４３）、またはＩＬ−４特異的転写因子ＳＴＡＴ６（Ｓｈｉｍｏｄａら、１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８０：６３０−３）はＴｈ２応答が欠乏し、他方、ＩＬ−１２が欠乏したマウス（Ｍａｇｒａｍら、１９９６，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ４：４７１−８１）ＩＬ−１２受容体（ＩＬ−１２Ｒ）β１鎖（Ｗｕら、１９９７，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５９：１６５８−６５）、またはＩＬ−１２特異的転写因子ＳＴＡＴ４（Ｋａｐｌａｎら、１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８２：１７４−７）は損なわれたＴｈ１応答を有する。
【００６８】
Ｔｈ１およびＴｈ２細胞サブタイプは共通の前駆体Ｔｈ−０細胞に由来する。Ｔｈ１およびＴｈ２細胞からのサイトカイン放出プロフィールはエフェクターメカニズムおよび細胞傷害性細胞の選択に影響する。Ｔｈ１細胞によって分泌されるＩｌ−２およびインターフェロンガンマはマクロファージュおよび細胞傷害性細胞を活性化し、他方、Ｔｈ２細胞によって分泌されるＩｌ−４、Ｉｌ−５、Ｉｌ−６、およびＩｌ−１０は好酸球および肥満細胞の生産を増大させ、ならびにＩｇｅを含めた抗体の生産を促進し、細胞傷害性細胞の機能を減少させる傾向がある（Ｐｏｗｒｉｅら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１４：２７０）。一旦樹立されれば、Ｔｈ１またはＴｈ２応答パターンは、他のサブセットの細胞によるサイトカイン生産を一般的には阻害するサイトカインの生産によって維持される。例えば、ＩＬ−４はＴｈ１クローンからのインターフェロン−ガンマの生産を阻害し、他方、インターフェロン−ガンマはＴｈ２クローンからのＩｌ−４からの生産を阻害する（Ｍｏｓｍａｎｎら、１９８９，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６：１１１−１４７；Ｍｏｓｍａｎｎら、１９８９，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：１４５−１７３）。この負のフィードバックループは、多くの免疫応答の間における極性化サイトカインプロフィールの生産を加速する。
【００６９】
細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＤ８＋）は迅速に他の細胞を破壊することができる。細胞傷害性Ｔ−リンパ球は２つの主な細胞溶解経路を用いる：ペルフォリン−依存性エクソサイドーシス経路およびＦａｓリガンド／Ｆａｓｋを用いる。細胞傷害性Ｔ−リンパ球はインターフェロン−ガンマのようなプロ−炎症サイトカインのプロジューサーでもある。
【００７０】
Ｔｈ１応答に関連するサイトカインの過剰生産またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球の過剰増殖は、同種異系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状腺炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ膜網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、潰瘍性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫性腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎、および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患インスリン依存性新生糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、および全身エリテマトーデスに至りかねない。
【００７１】
後の実施例に詳細に記載された実験は、非−特異的Ｔ−リンパ球刺激に応答しての、ＴＣＣＲを発現するＴ−リンパ球と比較して、ＴＣＣＲを欠如するＴ−リンパ球のより大きな増殖を示す（実施例１参照）。さらに、驚くべきことに、ＴＣＣＲを発現するマウスは、ＴＣＣＲを欠如するマウスよりも、多発性硬化症についての動物モデルにおいて、実験的アレルギー脳脊髄炎（ＥＡＥ）のような自己免疫障害に対して感受性が低いことが見出された（実施例２）。
【００７２】
これらのデータは、Ｔ−リンパ球増殖およびＴｈ１媒介生物学的活性のＴＣＣＲ−媒介直接的または間接的抑制を示唆する。従って、ＴＣＣＲのアゴニストを用いて、Ｔ−細胞増殖を阻害し、および／または多発性硬化症および慢性関節リウマチを含めた自己免疫障害を治療することができる。
【００７３】
自己免疫障害
前記したように、Ｔ−リンパ球の過剰増殖またはＴｈ１またはＴｈ２細胞によって生産されたサイトカインの過剰生産は医学的障害の保有者に導く。例えば、Ｔｈ１応答に関連するサイトカインの過剰生産またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球の過剰増殖は異種同系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状腺炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ膜網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、潰瘍性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫性炎腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎、および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患、インスリン−依存性真正糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症および全身エリテマトーデスを含めた自己免疫障害に至り得る。
【００７４】
多発性硬化症は、Ｔリンパ球依存性であると考えられる自己免疫脱髄障害である。ＭＳは、一般には、再発−緩解コースまたは慢性進行コースを呈する。ＭＳの病因は知られていないが、ウイルス感染、遺伝的素因、環境、および自己免疫は全て該障害に寄与しているように見える。ＭＳ患者における病巣は、圧倒的にＴ−リンパ球に媒介されるミクロ神経膠細胞および浸潤性マクロファージの浸潤物を含有する。ＣＤ４＋Ｔリンパ球はこれらの病巣に存在する支配的な細胞型である。ＭＳ病巣のホールマークはプラーク、すなわち、ＭＲＩスキャンで見られる通常の白色物質から鋭く区別される脱髄の領域である。ＭＳプラークの組織学的外観は病気の異なる段階で変化する。活性な病巣において、血液−脳関門は損傷されており、それにより、細胞外空間への血清蛋白質の血管外遊出を可能とする。炎症細胞は血管周囲カフにおいて、および白色物質全体に観察することができる。ＣＤ４＋Ｔ−細胞、特にＴｈ１はプラークのエッジにおいて毛細血管後細静脈の周りに蓄積し、白色物質にも散らばる。活性な病巣において、接着分子およびリンパ球のマーカーのアップレギュレーションおよびＩＬ−２ＲおよびＲおよびＣＤ２６のような単球活性化も観察された。活性病巣における脱髄には稀神経突起膠細胞の破壊は伴わない。対照的に、該病気の慢性相の間では、病巣は稀神経突起膠細胞の喪失およびしたがって、血液中のミエリン稀神経突起膠細胞糖蛋白質（ＭＯＧ）抗体の存在によって特徴付けられる。
【００７５】
種々のよく許容された動物モデルが、自己免疫障害について存在する。その例として、ＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）は、Ｔ細胞および単核細胞炎症、および中枢神経系における軸索の引き続いての脱髄によって特徴付けられるＴ細胞媒介自己免疫障害である。ＥＡＥは、一般的にヒトにおけるＭＳの関連動物モデルであると考えられている。（例えば、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｃ．１９９５，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１４３参照）。候補ＴＣＣＲアゴニストのような剤は、例えば、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｌｓ，Ｉｎｃ．によって発行され、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって編集されたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｕｎｉｔｓ１５．１および１５．２に記載されたプロトコルを用い、免疫媒介脱髄障害に対するＴ細胞刺激または阻害活性について分析することができる。また、稀突起神経膠細胞またはシュワン細胞が、例えば、Ｄｕｎｃａｎら、１９９７，Ｍｏｌｅｃ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ，５５４−５６１に記載されたように、中枢神経系にグラフトされたミエリン病についてのモデルも参照。
【００７６】
関節炎についての動物モデルはコラーゲン−誘導関節炎である。例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：２２１０−２２１４参照。このモデルはヒト自己免疫慢性関節リウマチの臨床的、組織学的および免疫学的特徴を有し、ヒト自己免疫関節炎についての許容できるモデルである。マウスおよびラットモデルは滑膜炎、軟骨の侵食、および肋軟骨下骨によって特徴付けられる。コラーゲン−誘導関節炎は、リンパ球浸潤および滑膜肥大を含めたヒトにおける慢性関節リウマチでの多くの特徴を有する。例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：２２１０−２２１４参照。ＴＣＣＲの潜在的アゴニストは、例えば、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｌｓ，Ｉｎｃ．によって発行され、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって編集されたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｕｎｉｔｓ １５．５に記載されたプロトコルを用い、これらのモデルを用いて自己免疫関節炎に対する活性について分析することができる。また、Ｉｓｓｅｋｕｔｚ，Ａ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９６）８８：５６９に記載されたＣＤ１８に対するモノクローナル抗体およびＶＬＡ−４インテグリンを用いるモデルも参照されたし。
【００７７】
皮膚異種同系移植片拒絶についての動物モデルは、抗−ウイルスおよび腫瘍免疫性におけるそれらの役割を示す、およびその尺度を示すイン・ビボ組織破壊を媒介するＴ細胞の能力をテストする手段である。ほとんどの通常かつ許容されたモデルは、マウス尾−皮膚移植片を用いる。報告された実験は、皮膚異種同系移植片拒絶はＴ細胞、ヘルパーＴ細胞およびキラー−エフェクタ−Ｔ細胞によって媒介され、抗体によっては媒介されないことを示している。例えば、Ａｕｃｈｉｎｃｌｏｓｓ ａｎｄ Ｓａｃｈｓ，１９９８，Ｉｎ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｐａｇｅ８８９−９９２参照。適当な手法は、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｌｓ，Ｉｎｃ．によって発行され、Ｃｏｌｉｇａｎら、 １９９５，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって編集されたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｕｎｉｔ ４．４に詳細に記載されている。他の候補ＴＣＣＲアゴニストをスクリーニングするのに用いることができるトランスプラント拒絶モデルは、例えば、Ｔａｎａｂｅら、 １９９４，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，５８：２３およびＴｉｎｕｂｕら、１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４３３０−４３３８によって記載された同種異系心臓トランスプラントモデルを含む。
【００７８】
ＴＣＣＲのアゴニスト
ＴＣＣＲのアゴニストは、本明細書中際書中に開示された天然配列ＴＣＣＲペプチドの生物学的活性を増強し、または刺激する分子である。適当なアゴニスト分子は、具体的には、ヒト化抗体を含めたアゴニスト抗体、またはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、Ａｂ、無ヒンジ抗体、Ｆ（ａｂ’）２断片、単一鎖抗体分子、ダイアボディー、単一アーム抗原結合分子、および線状抗体を含めたアゴニスト抗体の断片、アミノ酸配列改変体または天然ポリペプチド、ペプチド、小分子の断片などを含む。
【００７９】
ＴＣＣＲの適当なアゴニストは、ＴＣＣＲのペプチド断片、ＴＣＣＲ細胞外メイン、および：
（ａ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドの残基１または約３３ないし６３６；
（ａ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドの残基１または約２５ないし６２３；
（ｂ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドのＸ３ないし６３６、ここに、Ｘ３は配列番号：１のいずれかのアミノ酸残基２７ないし３７；
（ｂ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドＸ４ないし６２３、ここに、Ｘ４は配列番号：２の２０ないし３０からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ１）１または約３３ないしＸ１、ここにＸ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ２）１または約２５ないしＸ２、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし５１９からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｄ１）Ｘ５ないし６３６、ここに、Ｘ５は配列番号：１の残基５３３ないし５４３からのいずれかのアミノ酸であり；
（ｄ２）Ｘ６ないし６２３、ここに、Ｘ６は配列番号：２の残基５２７ないし５３７からのいずれかのアミノ酸であり；または
（ｅ）配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸配列のもう１つの特異的に誘導された断片；
のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するＴＣＣＲ改変体も含む。
【００８０】
ＴＣＣＲのアゴニストは、例えば、配列番号：１および配列番号：２の配列の、Ｎ−およびＣ−末端において、または１以上の内部ドメイン内で１以上のアミノ酸残基が付加され、または欠失されたＴＣＣＲペプチドを含む。
【００８１】
ＴＣＣＲのアゴニストは、天然配列ＩＬ−２７、ＥＢＩ３、ｐ２８、改変体、およびＩＬ−２７ヘテロダイマーに通常は関連する生物学的活性を有するその断片を含む。例えば、ＴＣＣＲのアゴニストは、ＩＬ−２７の天然配列成分に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有するＩＬ−２７改変体を含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、天然配列ヒトｐ２８（配列番号：３）またはマウスｐ２８（配列番号：４）に対して少なくとも７３％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有するｐ２８改変体も含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲに結合することができるｐ２８、およびｇｐ１３０の部分を含む。その例として、ＴＣＣＲのアゴニストは、天然配列ヒトｐ２８（配列番号：３）またはマウスｐ２８（配列番号：４）に対して少なくとも７３％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有し、かつＴＣＣＲおよびｇｐ１３０に結合することができるｐ２８改変体を含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲ上に見出されるサイトカイン受容体相同性ドメインの領域においてＴＣＣＲに結合すると考えられる、ｐ２８の第一および第三のαラセンからの残基、およびｇｐ１３０上に見出されるＩＧドメインに結合すると考えら得る、第一のラセンの最後および第４のラセンの始まりにおける残基を含有するｐ２８ペプチド改変体を含む。
【００８２】
ＴＣＣＲのアゴニストは、例えば、ＴＣＣＲに結合し、それを活性化することができる分子を含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲがホモダイマーを形成できるようにする分子、および／またはＴＣＣＲおよびｇｐ１３０がヘテロダイマーを形成することができるようにする分子も含む。例えば、ＴＣＣＲに対する抗体はＴＣＣＲがホモダイマーを形成できるようにすることができる。さらなる例として、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０双方に対して特異的な二価抗体はＴＣＣＲおよびｇｐ１３０がヘテロダイマーを形成するようにすることができる。
【００８３】
ＴＣＣＲペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するための方法は、ＴＣＣＲペプチドを候補アゴニストまたはアンタゴニスト分子と接触し、次いで、ＴＣＣＲに関連する１以上の生物学的活性のケン質可能な変化を測定すること含むことができる。例えば、アゴニストは、ＴＣＣＲペプチドを発現する細胞を候補と接触させ、次いで、ウェスタン−ブロットまたはもう１つの適当なアッセイを用いて、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ４、またはＳｔａｔ５のリン酸化のようなＴＣＣＲの生物学的活性について接触された細胞を分析することによって同定される。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲペプチドを発現するように作成されたＢａ／Ｆ３細胞のような細胞を候補アゴニストと接触させ、次いで、例えば、［３Ｈ］標識チミジン取込みまたはもう１つの適当なアッセイを測定することによって増殖について接触された細胞を分析することによって同定することもできる。
【００８４】
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体を生産するための多くの技術が知られている。１つの方法において、例えば、Ｂａｌｂ／ｃのようなマウスは、フロイント完全アジュバントに乳化した免疫原としてのＴＣＣＲまたはその部分で免疫化し、１ないし１００マイクログラムの量にて皮下または腹腔内注射される。別法として、該免疫原はＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）に乳化し、動物の後足肉趾に注射される。次いで、選択されたアジュバントに乳化されたさらなる免疫原で、免疫化されたマウスを１０ないし１２日後にブースター注射する。しかる後、数週間の間、マウスにさらなる免疫化注射をブースター注射することもできる。血清試料は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてテストして、抗−ＴＣＣＲ抗体を検出するために眼窩後出血によってマウスから周期的に得ることができる。
【００８５】
適当な抗体力価が検出された後、抗−ＴＣＣＲ抗体について「陽性」の動物に、免疫原の最終静脈内注射を注射することができる。３ないし４日後に、マウスを犠牲にし、脾臓細胞を収穫する。脾臓細胞を、次いで、（３５％ポリエチレングリコールを用いて）ＡＴＣＣ、Ｎｏ．ＣＲＬ １５９７から入手可能な、Ｐ３Ｘ６３ＡｇＵ．１のような選択されたマウス骨髄腫細胞系に融合させる。該癒合によりハイブリドーマ細胞が生じ、次いで、これを、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン）を含有する９６ウェル組織培養プレートに平板培養して、非−融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害することができる。
【００８６】
選択されたハイブリドーマ細胞は、ＴＣＣＲに対する反応性について、ＥＬＩＳＡ、または他の適当なアッセイでスクリーニングすることができる。陽性ハイブリドーマ細胞は、例えば、同系Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射して、抗−ＴＣＣＲモノクローナル抗体を含有する腹水液を生じさせることができる。別法としてハイブリドーマ細胞は、例えば、組織培養フラスコまたはローラーボトル中で増殖させることができる。腹水液中で生産されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈殿、続いて、ゲル排除クロマトグラフィーまたは他の適当な方法を用いて達成することができる。別法として、抗体のプロテインＡまたはプロテインＧへの結合に基づくアフィニティークロマトグラフィーを使用することができる。
【００８７】
ＴＣＣＲ−／−マウス
ＴＣＣＲを発現しない「ノックアウト」マウスが構築されている（ＴＣＣＲ−／−）。そのようなマウスは、例えば、ＴＣＣＲをコードする内因性遺伝子、および動物の胚細胞に導入された同一ペプチドをコードする改変されたゲノムＤＮＡの間の相同組換えを介して調製することができる。
【００８８】
例えば、特定のペプチドをコードするｃＤＮＡを用いて、確立された技術に従ってそのペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローン化することができる。特定のペプチドをコードするゲノムＤＮＡの部分を、欠失することができるか、あるいは取り込みをモニターするのに用いることができる選択マーカーをコードする遺伝子のようなもう１つの遺伝子を置き換えることができる。典型的には、（５’および３’末端双方における）未改変フランキングＤＮＡの数キロベースがベクターに含まれる（相同組換えベクターの記載については、Ｔｈｏｍａｓら、１９８７，Ｃｅｌｌ，５１：５０３参照）。ベクターは（エレクトロポレーションによるなどして）胚性幹細胞系に導入し、導入されたＤＮＡが内因性ＤＮＡを相同組換えされている細胞を選択する。例えば、Ｌｉら、１９９２，Ｃｅｌｌ，６９：９５１参照。次いで、例えば、Ｂｒａｄｅｒｙら、１９８７，Ｉｎ：Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｅｏｎ，ｅｄ．（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ），ｐｐ．１１３−１５２に記載されているように、選択された細胞を（マウスまたはラットのような）動物の胚盤胞に注射して、同種キメラを形成させる。次いで、キメラ胚を適当な偽妊娠雌仮腹動物に移植し、該胚を出産させて、「ノックアウト」動物を生じさせることができる。それらの生殖細胞に相同組換えＤＮＡを保有する子孫は標準的な技術によって同定し、それを用いて、動物の全ての細胞は相同組換えＤＮＡを含有する動物を育種することができる。
【００８９】
後の実施例で用いるＴＣＣＲ−／−マウスの作成の記載は、その内容がここに引用して援用されるＷＯ ０１２９０７０ （ｄｅ Ｓａｕｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．）およびＣｈｅｎら、２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０７：９１６に見出される。
【００９０】
組成物および治療
自己免疫障害の治療でいうようなＴＣＣＲのアゴニストは、限定されるものではないが、免疫機能、例えば、Ｔ細胞増殖／活性化、リンホカイン放出、または免疫細胞浸潤を変調する、蛋白質、抗体、断片および改変体、小さな有機分子、ペプチド、リンペプチドなどを含む。特に、本発明中で記載されるＴＣＣＲのアゴニストは、Ｔ−リンパ球の増殖、Ｔ−リンパ球サイトカイン放出、および自己免疫障害を抑制し、減少させ、または低下させるのに有用である。
【００９１】
ＴＣＣＲアゴニストは、前記したスクリーニングアッセイのいずれかによって、および／またはいずれかの他の公知のスクリーニング技術によって同定することができる。
【００９２】
本発明のＴＣＣＲアゴニストを公知の方法に従って処方して有用な組成物を調製し、それにより、ＴＣＣＲアゴニストを許容される担体と組み合わせる。処方は、所望の程度の純度を有するＴＣＣＲアゴニストを、凍結乾燥された処方または水性溶液の形態の、任意の許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することによって貯蔵のために調製される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ ｅｄ．Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．（２０００）参照。適当な担体、賦形剤または安定化剤は使用する用量および濃度において受容者に対して非毒性であり、それは、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸を含めた抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ペプチド血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グログリンのような蛋白質；ポリビニルピヨリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシンのようなアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含めた単糖、二糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような塩−形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）ＰＥＧのようなノニオン界面活性剤を含む。
【００９３】
イン・ビボ投与で用いるべき処方は滅菌されていなければならない。これは、凍結乾燥および復元に先立ってまたはそれに続いて、滅菌濾過膜を通しての濾過によって容易に達成される。
【００９４】
本発明中において、組成物は、一般には、滅菌アクセスポート、例えば、皮下注射針によって刺すことができるストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルを有する容器に入れられる。
【００９５】
投与経路は、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、または病巣内経路、局所投与による、または徐放系による注射または注入のような公知の方法に従う。投与の経路は、アデノウィルスベクターのような適当なベクターでのトランスフェクションの結果としてのイン・ビボ発現を含むことができる。
【００９６】
本発明の医薬組成物の量および所望の濃度は、考えられる特定のしように応じて変化させることができる。投与の適当な用量または経路の決定は、十分に、通常の技師の技量内にある。動物実験は、ヒト療法のための有効量の決定のための信頼できるガイダンスを提供する。効果的な用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．”Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｓｃａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ” ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９，ｐｐ．４２−９６によって主張された原理に従って行うことができる。
【００９７】
ＴＣＣＲアゴニストのイン・ビボ投与を使用する場合、正常な用量は、投与経路に応じて、１日当たり約１０ｎｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇ哺乳動物体重以上、例えば、約１mｇ／ｋｇ／日ないし１０ｍｇ／ｋｇ／日で変化させることができる。特定の用量および送達の方法に関するガイダンスは文献中に供される；例えば、米国特許代４，６５７，７６０；第５，２０６，３４４；または第５，２２５，２１２号参照。異なる処方は異なる治療および異なる障害で効果的であり、および特異的器官または組織を治療することを意図した投与は、もう１つの器官または組織に対するものとはことなる送達を必要とするであろうと予測される。
【００９８】
ＴＣＣＲアゴニストの徐放投与がＴＣＣＲアゴニストの投与を必要とするいずれかの病気または障害の治療に適した放出特徴を持つ処方で望まれる場合、ＴＣＣＲアゴニストのマイクロカプセル化が考えられる。徐放のための組換え蛋白質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン−アルファ、−ベータ、−ガンマ、インターロイキン−２、およびＭＮ ｒｇｐ１２０で首尾よく行われている。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９９６，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：７９５−１９９；Ｙａｓｕｄａ，１９９３，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．，１２２１−１２２３；Ｈｏｒａら、１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７５５−７５８；Ｃｌｅｌａｎｄ，１９９５，”Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ” ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｇｓｉｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，ｅｄｓ．，（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．４３９−４６２；ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２，ＷＯ９６／０７３９９および米国特許第５，６５４，０１０参照。
【００９９】
ＴＣＣＲアゴニストの徐放処方は、ポリ−乳酸−コグリコール酸（ＰＬＧＡ）、かなりの程度の生体適合性、および広い範囲の生分解性特性を呈するポリマーを用いて開発することができる。ＰＬＧＡ、乳酸およびグリコール酸の分解生成物はヒト身体から迅速に除去される。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成に応じて数ヶ月ないし数年に調整することができる。さらなる情報については、Ｌｅｗｓ，”Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｌａｃｔｉｄｅ／Ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ ｐｏｌｙｍｅｒ”ｉｎ Ｂｉｏｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ ａｎｄ Ｒ．Ｌａｎｇｄｅｅｒ，ｅｄｉｔｅｒｓ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９０），ｐｐ．１−４１参照。
【実施例】
【０１００】
本発明は、以下の実施例を参照して良好に理解することができる。これらの実施例は本発明の特別な具体例の代表であることが意図され、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１０１】
実施例１
Ｔ−細胞応答のＴＣＣＲ−媒介抑制
Ｔ−細胞応答に対するＴＣＣＲ活性の効果は、野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）脾臓細胞の誘導されたＴ−細胞の増殖の分析によってテストした。Ｔ−細胞受容体はＣＤ３と会合してＴ−細胞受容体複合体を形成する。異なる用量の抗−ＣＤ３抗体は、Ｔ−細胞受容体複合体および抗原−提示細胞（ＡＰＣ）のＭＨＣクラスＩＩ分子（ＣＤ４）の相互作用に通常は関連するＴ−細胞の増殖を非特異的に刺激する。
【０１０２】
野生型（ＴＣＣＲ＋・＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）混合リンパ球、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および、単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖は、抗−ＣＤ３抗体によって刺激した（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｇｏ，ＣＡ，ｃｌｏｎｅ １４５−２ｃ１１）。細胞を湿潤化ＣＯ２インキュベータ中で３日間増殖し、増殖はアッセイの最後の８ないし１６時間に測定された［３Ｈ］チミジン取り込みによって測定した。驚くべきことに、ノックアウトマウス（ＴＣＣＲ−／−）から得られた混合リンパ球の抗−ＣＤ３抗体誘導増殖は、表５において、および図５に示されたように、最大下用量の抗−ＣＤ３において野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）リンパ球から得られたリンパ球のそれよりも有意に大きかった。このデータは、例えば、刺激されたＴ−細胞の増殖を抑制するＴＣＣＲ活性の保護効果を示唆し、およびアゴニストでのＴＣＣＲの刺激は、Ｔ−細胞増殖のようなＴ−細胞応答を直接的にまたは間接的に抑制するのに有用であろう。
【０１０３】
【化７】
しかしながら、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞の抗−ＣＤ３抗体誘導増殖は、各々、図６（表６）および図７（表７）に示されたように、野生型およびノックアウト細胞の間で有意には異ならなかった。このデータは、ＴＣＣＲに対するリガンドであるＩＬ−２７が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞以外のリンパ球によって生産されることを示唆する。
【０１０４】
【化８】
次に、抗−ＣＤ３抗体刺激に応答してのＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の増殖は、ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインジアセテート、スクシンイミジドエステル）標識アッセイで測定した。標識された細胞は、各細胞分裂後にそれらの蛍光強度の５０％を喪失するので、ＣＦＳＥ標識は、細胞分裂の数がモニターされるのを可能とする。野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）混合リンパ球細胞懸濁液をＣＦＳＥで標識して、細胞懸濁液中に０．５μＭ ＣＦＳＥ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の濃度を作り出した。次いで、細胞懸濁液を３７℃で１０分間インキュベートした。標識の後、ＦＣＳを５％最終濃度まで加え、細胞を直ちに遠心し、氷冷ＰＢＳで洗浄した。野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）混合リンパ球細胞の増殖は、２．５μｇ／ｍｌの濃度において抗−ＣＤ３抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｐｉｅｇｏ，Ｃａ，ｃｌｏｎｅ １４５−２ｃ１１）によって刺激した。
【０１０５】
次いで、細胞を３７℃にて２日間インキュベートした。その時点において、細胞をＣＤ４＋およびＣＤ８＋に対するマーカー（ＣＤ４−ＣｙｃｈｒｏｍｅまたはＣＤ８−Ｃｙｃｈｒｏｍｅ）で標識し、フローサイトメトリーによって分析した。
【０１０６】
以下のデータは、ＣＤ４＋ならびにＣＤ８＋の双方の陽性Ｔ細胞がＴＣＣＲノックアウト細胞において過剰増殖性であることを示す（表８参照）。図１０および１１は、インキュベーション時間の間において０、１、２、３、４または５回の細胞分裂を受けた細胞の数を示す。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞双方について、より多くの細胞が、野生型におけるよりもノックアウトにおいて３、４、５回の分裂を受けた（すなわち、ノックアウト細胞についての系はＣＤ４＋細胞（図１４）およびＣＤ８＋細胞（図１５）双方において右側にシフトする）。
【０１０７】
【化９】
実施例２
ＴＣＣＲを発現するマウスはＥＡＥに対して感受性が低い。
【０１０８】
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）についての動物モデルとして働くＣＮＳの自己免疫障害である。ＭＳと同様に、ＥＡＥは、ミエリンに対する免疫−媒介損傷が観察可能な兆候をもたらす脱髄障害である。ＥＡＥはＣＤ４＋Ｔｈ１細胞（Ｆｉｆｅら、２００１，Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．，１６６：７６１７−７６２４）およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）（Ｈｕｓｅｂｙ，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９４（５）：６６９−６７６）双方によって媒介されると考えられる。ＥＡＥに対するＴＣＣＲの効果を調べるために、ＥＡＥの臨床的進行をＴＣＣＲを発現する野生型マウス（ＴＣＣＲ＋／＋）およびＴＣＣＲを欠如するノックアウトマウス（ＴＣＣＲ−／−）において調べた。以下に示すように、ＴＣＣＲを発現するマウスは、ＴＣＣＲを欠如するマウスよりもＣＤ４＋ＴｈおよびＣＤ８＋媒介傷害ＥＡＥに対して感受性が低い。
【０１０９】
ノックアウトＴＣＣＲ−／−マウスはＷＯ ０１２９０７０（ｄｅ Ｓａｕｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．）に記載されたように創製し、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに逆−交配させ、Ｎ１２創始細胞から育種した。野生型ＴＣＣＲ＋／＋対照はＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ （Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入したＣ５７Ｂｌ／６マウスであった。
【０１１０】
ＭＯＧ誘導ＥＡＥ
ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫのアミノ酸配列（配列番号：７）を有するＭＯＧ３５−５５ペプチドは、Ｒａｉｎｉｎ Ｑｕａｒｔｅｔ自動ペプチド合成器（Ｒａｉｎｉｎ，Ｏａｋｌａｎｅ，ＣＡ）での９−フルオレニルメトキシカルボニル化学を用いて合成した。ペプチドを樹脂から切断し、移動相において水／アセトニトリル／０．１％ＴＦＡグラジエントを持つ分取用逆相ＨＰＬＣを用いて精製した。ペプチドの同一性は、電子スプレーマススペクトロメトリーによって確認した。
【０１１１】
野生型ＴＣＣＲ＋／＋およびノックアウトＴＣＣＲ−／―マウスを、１００μｌのＴＢＳおよび１００μｌのＣＦＡ（フロイントの完全アジュバント）中の２００μｇのＭＯＧ３５−５５ペプチドを含有する２００μｌのエマルジョンで皮内免疫化して、０日にＥＡＥを誘導した。ＣＡＦは、ＩＦＡ（フロイントの不完全アジュバント）（Ｄｉｆｃｏ−ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を死滅し、乾燥したＭ，ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ａ（Ｄｉｆｃｏ−ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）と８ｍｇ／ｍｌ Ｍ．ｔｕｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの濃度まで混合することによって調製した（各マウスはＣＦＡの成分としての８００μｇの死滅したＭ．ｔｕｔｕｂｅｒｓｕｌｏｓｉｓを受けた）。０日に、および２日に再度、各マウスに１００μｌのＰＢＳ中の２００ｎｇの百日咳トキシン（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ＣＡ）で腹腔内注射して、血液の関門に入るのを助けた。受けた成分の用量は以下の表９にまとめる。
【０１１２】
【化１０】
ＭＢＰ誘導ＥＡＥ
ＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧ（配列番号：８）のアミノ酸配列を有するＡｃ １−１１ペプチドは、Ｒａｉｎｉｎ Ｑｕａｒｔａｔ自動ペプチド合成器（Ｒａｉｎｉｎ，Ｏａｋｌａｎｄ，ＣＡ）にて９−フルオレニルメトキシカルボニル化学を用いて合成した。該ペプチドを樹脂から切断し、移動相における水／アセトニトリル／０．１％ＴＦＡグラジエントでの分取用逆相ＨＰＬＣを用いることによって精製した。ペプチドの同一性は、電子スプレーマススペクトロメトリーによって確認した。
【０１１３】
野生型ＴＣＣＲ＋／＋およびノックアウトＴＣＣＲ−／−マウスは、１００μｌのＣＦＡ（フロイントの完全アジュバント）中の１０μｇのＡｃ １−１１ペプチド（ＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧ）、ミエリン塩基性蛋白質の成分を皮内免疫化して、０日にＥＡＥを誘導した。ＭＯＢ−誘導ＥＡＥについて前記したように、ＣＦＡは、ＩＦＡ（フロイントの不完全アジュバント）を、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ａ（死滅しおよび乾燥した）と８ｍｇ／ｍｌ Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの濃度まで混合することによって調製した（各マウスは、ＣＦＡの成分として、８００μｇの死滅したＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを受けた）。２日、および３日に再度、各マウスに、１００μｌのＰＢＳ中の２００ｎｇの百日咳トキシンで腹腔内注射して、血液の関門に入るのを助けた。受けた成分に用量を以下の表１０にまとめる。
【０１１４】
【化１１】
全てのマウスは、１日で出発し、１週間当たり３回臨床的疾患について評価した。病気グレード４に到達したマウスを毎日評価した。グレード５におけるいずれの動物も安楽死させた。５日以内にグレード３以下まで改良されなかったものを安楽死させた。用いた臨床的グレーディングシステムを以下の表１１に示す。
【０１１５】
【化１２】
４０日において、全ての残りの動物を犠牲にし、脳および脊髄を組織学的分析のために切開した。脳を切開し、（各脳についての４つのレベルの各々からの１つの切片）、Ｈ＆Ｅ（ヘマトキシリンおよびエオシン染色、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で染色して、炎症を評価した。脊髄を切片化し（各脊髄について３つの異なるレベルの各々から４つの切片）、Ｈ＆Ｅで染色して、炎症を評価し、ルキソールファストブルー（Ｌｕｘｏｌ Ｆａｓｔ Ｂｌｕｅ）（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）で染色して、脱髄を評価した。各スライドについて、最高炎症および脱髄双方についての最高スコアおよび平均スコア（各スライドでの全ての切片の平均）を報告した。用いた炎症グレーディングシステムを以下の表１２に示す。
【０１１６】
【化１３】
用いた脱髄グレーディングシステムを以下の表１３に示す。
【０１１７】
【化１４】
野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）におけるＭＯＧ（ミエリン稀突起神経膠細胞糖蛋白質）誘導ＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）の臨床的進行は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）マウスにおける誘導されたＥＡＥよりもひどくはなかった（図８参照）。同様に、野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスにおけるＭＢＰ（ミエリン塩基性蛋白質）誘導ＥＡＥの臨床的進行は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）マウスにおける誘導されたＥＡＥよりひどくはなかった（図９参照）。
【０１１８】
図８および９に示すように、ＴＣＣＲを欠如する動物（ＴＣＣＲ−／−）はＥＡＥのよりひどい臨床的兆候を示し、他方、ＴＣＣＲを発現するマウス（ｗｔ）はよりひどくない兆候および進行を示し、これは、ＥＡＥのような、自己免疫障害に対するＴＣＣＲ活性の保護効果を示唆する。
【０１１９】
臨床データは、図１０ないし１３に示したように、組織学的分析によってさらに支持される。ＴＣＣＲ−／−マウスは、ＷＴマウスよりも高い炎症および高い脱髄スコアを有し、ＴＣＣＲを発現するマウス（ｗｔ）は、ＴＣＣＲを欠如するマウス（−／−）よりもＣＤ４＋Ｔｈ１およびＣＤ８＋媒介障害ＥＡＥに対して感受性が低かったことを示す。
【０１２０】
まとめると、データは、ＥＡＥのような、自己免疫障害に対するＴＣＣＲ活性の保護的、弱める、または抑制的効果を示唆する。
【０１２１】
実施例３
ＴＣＣＲアゴニストでの自己免疫障害の治療
実施例２について記載したように、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）に対する動物モデルとして働くＳＭＳのＣＤ４＋Ｔｈ１またはＣＤ＋８媒介自己免疫障害である。自己免疫障害の進行およびコースに対する投与されたＴＣＣＲアゴニストの効果を調べるために、ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストを、誘導されたＥＡＥのようなＭＳの実験的モデル系において投与する。ＥＡＥは、例えば、実施例２について前記したようにマウスにおいて開始させる。ＥＡＥの臨床的進行は、ＴＣＣＲを発現し（ＴＣＣＲ＋／＋）、ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストを受けるマウスにおいて評価する。ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストで処理したマウスは、病気の低下した臨床的兆候または進行を示し、および／または未処理ＴＣＣＲ＋／＋対照よりも自己免疫障害に対して感受性が低いと予測される。
【０１２２】
実施例４
ＴＣＣＲアゴニストでの動物モデルにおける関節炎の治療
自己免疫障害に対するＴＣＣＲアゴニストの抑制的および／または保護的効果は、数個の利用可能な動物モデル系のうちの１つでテストすることができる。マウスにおけるコラーゲン−誘導関節炎は、自己免疫障害、慢性関節リウマチに対する１つのモデルである。このモデルは、例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、１９９９，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９６：２２１０−２２１４に記載されている。マウスにおけるコラーゲン−誘導関節炎は、リンパ球浸潤および滑膜肥大を含めたヒト慢性関節リウマチでの多くの特徴を共有する。
【０１２３】
コラーゲン−誘導関節炎の臨床的進行は、マウス、例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたは他の適当な実験室動物において調べる。関節炎は、例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、ｓｕｐｒａで引用された方法、または他の公知の方法によってテスト動物において誘導される。一般に、モデル動物は、異なる動物種に由来するＩＩ型コラーゲンをテスト動物に注射することによって、例えば、ウシＩＩ型コラーゲンをマウスに注射することによって創生する。該コラーゲンはフロイントの完全アジュバントのようなアジュバントと組み合わせることができる。
【０１２４】
ＴＣＣＲリガンドＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストは、例えば、関節炎−誘導剤の投与に先立って、投与の間に、および／または投与の後に、あるいは関節炎兆候の開始に先立って、開始の間に、および／または開始後にテスト動物に投与される。投与および用量の方法は変化させることができ、例えば、１プレおよび／またはポスト用量における、２以上のプレおよび／またはポスト用量の期間にわたっての毎日の１日当たり複数用量における用量、またはＴＣＣＲ受容体を発現する細胞へペプチド剤を投与するために知られた他の適当な用量における、単体中のＩＬ−２７のようなペプチドリガンドの投与を含むことができる。代替方法は、例えば、ＩＬ−２７の双方のサブユニット、または連結されたＩＬ−２７サイトカインを発現する組換えアデノウイルスからのペプチドを発現させることによるＩＬ−２７のようなペプチドリガンドの送達を含む。
【０１２５】
臨床的疾患の進行は、例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、ｓｕｐｒａに記載されたように、テストおよび対照動物においてモニターされる。例えば、該疾患の物理的および化学的特徴をモニターし、経時的にスコア取りする。動物は、主な関節のリンパ球浸潤、滑膜肥大、滑膜液サイトカイン含有量等について分析することができる。これらのパラメータを、テスト動物および対照の間で比較する。実施例１および２に示されたＴＣＣＲの保護的／抑制的効果を保つために、ＴＣＣＲアゴニストでの動物における誘導された関節炎の治療は、未処理対照と比較して、よりひどくない臨床的兆候、結果、および／または物理的または化学的特徴で証明された、抑制的および／または保護的効果を供すると予測される。
【０１２６】
実施例５
ＴＣＣＲに対するモノクローナル抗体の調製
ｈＴＣＣＲに対するモノクローナル抗体は、ｈＴＣＣＲの細胞外ドメインを用いて調製した。免疫原は、精製目的でカルボキシ−末端に付加された８つのヒスチジン残基をタグとして加えた膜貫通部分（配列番号：１の残基５１７ないし５３８）を欠如するｈＴＣＣＲ（配列番号：１）であった。ｈＴＣＣＲ（ＥＣＤ）−（Ｈｉｓ）８ペプチドは、ニッケルＮＴＡアフィニティークロマトグラフィーを介して精製した。
【０１２７】
ｈＴＣＣＲ（ＥＣＤ）−（Ｈｉｓ）８ペプチド（１ないし２マイクログラム）を２５マイクロリットルのＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）と組み合わせ、合計１２回の注射のために毎週２回、野生型ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）の肉趾に注射した。
【０１２８】
４２日に、マウスを犠牲にし、脾臓細胞を収穫した。脾臓細胞を（３５％ポリエチレングリコールを用いて）マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，Ｎｏ．ＣＲＬ１５９７から入手可能なＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１）に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が創製され、これを、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン）培地を含有する９６ウェル組織培養プレート中で平板培養して、非−融合細胞、骨髄腫ハイブリットおよび脾臓細胞ハイブリットの増殖を阻害した。
【０１２９】
次いで、ハイブリドーマ細胞を、ＴＣＣＲへの抗体結合についてＥＬＩＳＡアッセイにおいてスクリーニングした。ＴＣＣＲに対する反応性を有する同定されたハイブリドーマ培養は培養：２６８５、２６８６、および２６８８を含んだ。ハイブリドーマ培養２６８６（抗体２６８６）は、２００４年１２月１５日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．に寄託し、受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７を有する。
【０１３０】
実施例６
モノクローナルＡｂ２６８６はヒトＴＣＣＲを活性化する。
【０１３１】
組換えＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞を用いて、ＴＣＣＲを活性化する抗−ＴＣＣＲ抗体の能力を分析した。Ｂａ／Ｆ３細胞はマウスＩＬ−３依存性細胞系である。ＴＣＣＲの候補アゴニストは、該候補アゴニストに応答してのＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を測定することによって評価することができる。細胞増殖の結果、ポリヌクレオチドの増大した合成のため増大した［３Ｈ］―チミジンの取込がもたらされる。細胞増殖は、例えば、［３Ｈ］―チミジン接種を測定することによってモニターされる。以下に示すように、モノクローナルＡＢ２６８６は、ＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を誘導することによってＴＣＣＲアゴニスト活性を示した。
【０１３２】
Ｂａ／Ｆ３細胞（Ｐａｌａｃｉｏｓら、１９８５、Ｃｅｌｌ，４１：７２７−７３４）は、増殖および生存双方に対してＩＬ−３を必要とするマウス造血系因子−依存性細胞系である。Ｂａ／Ｆ３細胞を、１０％胎児子牛血清（ＧＩＢＣＯ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）および１００ｐｇ／ｍＬマウスＩＬ−３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を補足したＲＰＭＩ−１６４０倍値（ＧＩＢＣＯ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で培養した。
【０１３３】
ネオマイシン耐性遺伝子を持ち、ヒトまたはマウスＴＣＣＲをコードするポリヌクレオチド配列いずれかを含有するｐＭＳＣＶベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）をエレクトロポレーションによってＢａ／Ｆ３細胞にトランスフェクトした。安定なトランスフェクタントを１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）で処理して、ネオマイシン耐性に対する遺伝子を含有するベクターでトランスフェクトされている安定な真核生物細胞系を選択した。次いで、ＴＣＣＲを認識するフィコ−エリスリン標識モノクローナル抗体で細胞を処理した。ＴＣＣＲを発現する標識されたクローンをＦＡＣＳによって選択した。
【０１３４】
ＴＣＣＲ発現細胞を、ＩＬ−３を加えていない１０％胎児子牛血清を補足したＲＰＭＩ−１６４０倍値で洗浄した。次いで、細胞を、１０％胎児子牛血清を補足した１００μｌのＲＰＭＩ−１６４０倍値中にてウェル当たり５×１０３細胞にて二連で平板培養した。精製された組換えマウスＩＬ−３（陽性対照）または精製された抗−ＴＣＣＲ（ヒト）モノクローナル抗体：２６８５−ＩｇＧ２ａ、２６８６−ＩｇＧ１、２６８８−ＩｇＧ１、対照イソタイプＩｇＧ２ａ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または対照イソタイプＩｇＧ１（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を、４：１希釈シリーズとして、表１４にて以下に示す濃度で加えた。
【０１３５】
【化１５】
４８時間後、１μＣｉの［３Ｈ］―チミジン（Ａｍｅｒｓｃｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を各ウェルに加えた。さらに６時間後、［３Ｈ］―チミジンの細胞への取り込みを、β−カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｔｏｐｃｏｕｎｔ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で測定した。
【０１３６】
結果を図２ないし４に示す。モノクローナル抗体２６８５−ＩｇＧ２ａ、２６８６−ＩｇＧ１、２６８８−ＩｇＧ１、および対照イソタイプＩｇＧ２ａまたは対照イソタイプＩｇＧ１に応答してのヒトＴＣＣＲの発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を図２に示す。抗体２６８６は、テストした他の抗体のいずれよりも［３Ｈ］―チミジンの有意により大きな取り込みを誘導し、これは、抗体２６８６が、Ｂａ／Ｆ３細胞において発現されたヒトＴＣＣＲの効果的なアゴニストであることを示す。
【０１３７】
マウスＩＬ−３（陽性対照）または抗体２６８６いずれかに応答してのヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を図３に示す。示されたように、抗体２６８６は、陽性対照ＩＬ−３のそれよりも小さいに拘らず、ヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞においてＴＣＣＲ応答を生じさせるのに効果的であった。
【０１３８】
ヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞は、図４に示すように、マウスＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞よりも抗体２６８６での処理に応答しての有意により大きな量の［３Ｈ］―チミジンを取り込んだ。このデータは、抗体２６８６がヒトＴＣＣＲの特異的アゴニストであることを示し、マウスＴＣＣＲに対して交差反応性を示さない。
【０１３９】
これらの研究は、示されたアゴニスト抗体のようなＴＣＣＲのアゴニストがＴＣＣＲ受容体に結合し、それを刺激して、ＴＣＣＲ−媒介生物学的活性、ここでは、Ｂａ／Ｆ３細胞の増殖を誘導することができるのを示す。したがって、データは、ＴＣＣＲアゴニストがイン・ビボにてＴＣＣＲ−媒介活性を直接的にまたは間接的に誘導するのに有用であることを示唆する。
【０１４０】
実施例７
他のＴＣＣＲアゴニストの同定
ＴＣＣＲアゴニスト活性を有する剤を同定し、確認するために、ＩＬ−２７の断片およびＴＣＣＲの改変体を含めた推定ＴＣＣＲアゴニストをＴＣＣＲ結合にて分析した。ＴＣＣＲの結合はイン・ビトロまたはイン・ビボ結合にて分析することができる。例えば、潜在的アゴニストを、実施例３にて前記したように、組換えＴＣＣＲを発現するように作成されたＣＯＳ細胞またはＢａ／Ｆ３細胞のような、ＴＣＣＲを発現する細胞に投与し、潜在的アゴニストに対する細胞応答を測定する。
【０１４１】
受容体結合は、融合蛋白質、例えば、ヒトＩｇＧのＦｃドメインを含有するイムノアドヘシンとして潜在的にペプチドアゴニストを発現させることによって分析することもできる。受容体−リンガンド結合は、例えば、該イムノアドヘシンをＴＣＣＲ発現細胞と相互作用させることによって検出される。結合したイムノアドヘシンは、Ｆｃ融合ドメインを認識する蛍光試薬を用い、微視的に可視化することができる。結合は蛍光の分析によって、または他の公知の方法によって定量することができる。
【０１４２】
ＴＣＣＲのアゴニストは、ＩＬ−１０またはＳＯＣＳ−３の発現のようなＴＣＣＲ媒介活性を刺激する候補アゴニストの能力を分析することによってスクリーニングすることができる。例えば、ＴＣＣＲを発現するＴ−リンパ球を候補アゴニストと接触させることができる。ＩＬ−１０および／またはＳＯＣＳ−３の発現は、例えば、ＥＬＩＳＡ、定量的ＰＣＲ、および同様な方法によって測定することができる。対照、例えば、基礎ＩＬ−１０および／またはＳＯＣＳ−３レベルに対するＩＬ−１０および／またはＳＯＣＳ−３の発現の増加はＴＣＣＲ刺激に相関し、これは有用なＴＣＣＲアゴニストの指標となる。
【０１４３】
実施例８
ＩＬ−２７媒介細胞増殖、およびサイトカインの誘導および抑制
野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）ＣＤ４＋細胞双方におけるサイトカイン誘導に対するＩＬ−２７の効果を中性のＴｈ１またはＴｈ２誘導条件下で調べた。野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）ＣＤ４＋細胞双方における細胞リコール増殖に対するＩＬ−２７の効果を、中性のＴｈ１またはＴｈ２誘導条件下で調べた。
【０１４４】
０日に、アゴニスト抗−ＣＤ３モノクローナル抗体（１４５−２Ｃ１１，ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＰＢＳ ｏ／ｎ中５ｕｇ／ｍｌ）で予めコートされた２４ウェルプレート中で、野生型ＣＤ４＋またはＴＣＣＲノックアウトＣＤ４＋細胞をウェル当たり２×１０５細胞にて平板培養した。次いで、個々のウェルにおける増殖を中性、Ｔｈ１バイアシング、またはＴｈ２バイアシング条件下で誘導した。中性条件はＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、抗−ＩＬ−１２抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、抗−ＩＦＮ−γ抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、抗−ＩＬ−４抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびＣＤ−２８（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の添加によって作り出した。Ｔｈ１バイアシング条件は、ＩＬ−２、ＩＬ−１２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、抗−ＩＬ−４抗体、およびＣＤ−２８の添加によって作り出した。Ｔｈ２バイアシング条件は、ＩＬ−２、ＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、抗−ＩＬ−１２抗体、抗−ＩＦＮ−γ抗体、およびＣＤ２８の添加によって作り出した。これらの個々のウェルにおける処理は表１５にて以下に示す。
【０１４５】
【化１６−１】
【０１４６】
【化１６−２】
細胞を３７℃で培養した。上清の試料は２４時間、４８時間、および／または７２時間に採取した。ＥＬＩＳＡを、ＴＮＦ−α、ＩＬ−５、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦに対するプローブ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入したキット）にて上清試料で行った。以下の表１６は、ＩＬ−２７依存性誘導倍数としてのＥＬＩＳＡデータを示す。図１６ＡないしＣは、中性（１６Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１６Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング条件（１６Ｃ）下でのＩＬ−２のＩＬ−２７依存性誘導を示す。図１７ＡないしＣは、中性（１７Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１７Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング条件（１７Ｃ）下でのＩＬ−１０のＩＬ−２７依存性誘導を示す。
【０１４７】
データは、ＩＬ−２７に応答してのＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、およびＩＬ−４の誘導を示す。データはＩＬ−２７に応答してのＩＬ−２、ＩＬ−６、およびＧＭ−ＣＳＦの抑制も示す。データは、ＩＬ−１０が、中性、Ｔｈ１バイアシング、およびＴｈ２バイアシング条件下でＩＬ−２７によって誘導されることを示す。前記したように、ＩＬ−１０は、限定的かつ終了する炎症応答において主な役割を演じる。ＩＬ−１０はＩＬ−２７によって誘導されるので、データは、ＩＬ−２７を用いて、免疫−媒介疾患を治療できることを示唆する。
【０１４８】
【化１７】
ＲＮＡを２４時間、４８時間、および／または７２時間に採取した細胞試料から抽出し、次いで、以下の図１７に示すように、ＳＯＣＳ−１、ＳＯＣＳ−３、ＰＩＡＳ−１、およびＰＩＡＳ−３に対して特異的なプローブで、定量的ＰＣＲ（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標））を行った。
【０１４９】
【化１８】
以下の表１８は、ＩＬ−２７依存性誘導倍数としての定量的ＰＣＲデータを示す。図１８ＡないしＣは、中性（１８Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１８Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング条件（１８Ｃ）下でのＳＯＣＳ−３のＩＬ−２７依存性誘導を示す。
【０１５０】
データは、ＳＯＣＳ−３が中性、Ｔｈ１バイアシング、およびＴｈ２バイアシング条件下でＩＬ−２７によって誘導されることを示す。前記したように、ＳＯＣＳ−３はサイトカインシグナリングを抑制することが知られており、いくつかの剤の抗−炎症効果のメディエーターであることが報告されている。ＳＯＣＳ−３はＩＬ−２７によって誘導されるので、データは、ＩＬ−２７を用いて免疫−媒介疾患を治療することができるのを示唆する。
【０１５１】
【化１９】
中性条件下で処理した前記細胞の試料を７２時間に採取し、ＲＮＡを抽出した。次いで、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ， Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を用いて誘導された発現につき該ＲＮＡを分析した。以下の表１９は、選択された遺伝子についての未処理対照に対する誘導（抑制）倍数としてのＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）データを示す。
【０１５２】
ここに、データは、再度、ＩＬ−１０が中性条件下でＩＬ−２７によって誘導されることを示す。前記したように、ＩＬ−１０は、炎症応答を制限し、および終了させるにおいて主な役割を演じる。ＩＬ−１０はＩＬ−２７によって誘導されるので、データは、ＩＬ−２７を用いて、免疫−媒介疾患を治療することができることを示唆する。
【０１５３】
【化２０】
３日に、細胞をＩＬ−２の存在下であって、およびＩＬ−２７の存在下または不存在下で細胞を増殖させた。具体的には、ＩＬ−２７に予め暴露した２４ウェルプレートからの細胞を１ｍｌの培地中に取り、次いで、２×１０−４ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２７および１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２を含有する３ｍｌの培地と共に６ウェルプレートに沈積させた。ＩＬ−２７に予め暴露されていない細胞を１ｍｌの培地中に取り、次いで、１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２を含有する３ｍｌの培地と共に６ウェルプレートに沈積させた。
【０１５４】
５日に、２×１０−４ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２７および１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２の濃度を有する４ｍｌの培地（ＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）ｗ／１０％ＨｙＣｌｏｎｅ血清）を、ＩＬ−２７に予め暴露した細胞を含有するウェルに加えた。１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２の濃度を有する４ｍｌの培地を、ＩＬ−２７に予め暴露していない細胞を含有するウェルに加えた。
【０１５５】
６日に、細胞を遠心し、次いで、培地（前記したのと同一培地）中にペレットを再度懸濁させ、カウントした。種々のウェルからの細胞カウントを表２０にて以下に示し、図１９に反映させる。
【０１５６】
データは、Ｔｈ１またはＴｈ２バイアシング条件の間に添加されたＩＬ−２７はＣＤ４＋細胞の増殖を低下させることを示し、ＩＬ−２７は、多発性硬化症および慢性関節リウマチのような自己免疫疾患を含めたＣＤ４＋細胞の増殖によって特徴付けられる疾患を治療するのに有用であることを示唆する。
【０１５７】
【化２１】
実施例９
ＩＬ−６誘導増殖のＩＬ−２７抑制
野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）ＣＤ４＋細胞のＩＬ−６誘導増殖に対するＩＬ−２７の効果を、抗−ＩＬ−２抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の存在下および不存在下で調べた。
【０１５８】
野生型マウスからの混合脾臓細胞（４×１０５）を９６−ウェルプレート上のウェルに入れた。ノックアウトマウスからの混合脾臓細胞（４×１０５）をプレート上の別々のウェルに入れた。全てのウェルをＰＢＳ ｏ／ｎ中の１００μｌの２ｕｇ／ｍｌ 抗−ＣＤ３でコートした。ウェルを、表２１にて以下に示した実験群に従って処理した。
【０１５９】
【化２２】
細胞３７℃にて培養した。４８時間後、［３Ｈ］−チミジンをもう一晩の間加え、増殖を［３Ｈ］−チミジン取込みによって測定した。各群についての平均ＣＰＭを表２２にて以下に示す。ＩＬ−２中和なくしての増殖を図２０Ａに示す。ＩＬ−２中和有りでの増殖を図２０Ｂに示す。
【０１６０】
【化２３】
データは、抗−ＩＬ−２抗体が存在するか否かに拘らず、ＩＬ−２７が、抗−ＣＤ３によって刺激され、かつＩＬ−６によって増強された増殖を抑制することを示す。抗−ｉｌ−２抗体が存在しない場合、ＩＬ−２７が、抗−ＣＤ３抗体によって刺激される増殖を抑制する。抗−ＩＬ−２抗体は、抗−ＣＤ３抗体によって刺激される増殖を低下させる。しかしながら、ＩＬ−２７の添加は、この効果を部分的に和らげる。
【０１６１】
実施例１０
ＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）欠乏マウスはＥＡＥ超感受性である。
【０１６２】
ＩＬ−２７は、活性化された抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって生産されるリガンドである。ＩＬ−２７は、特異的サブユニット、ＩＬ−２７、およびＩＬ−６Ｒを含めた、多数の他の受容体によって共有されるｇｐ１３０よりなるヘテロダイマー受容体を通じてシグナリングを行う。本明細書中で議論するように、ＩＬ−２７は種々のＳＴＡＴおよびＪａｋ−１を通じてシグナルを活性化するが、支配的なシグナリング事象はＳＴＡＴ−１の活性化であるように見える。ＳＴＡＴ−１の活性化およびＴＨ−１特異的転写因子Ｔ−ｂｅｔの下流誘導を介して、ＩＬ−１２ＲＢ２鎖およびＩＦＮ−ガンマの発現は促進される。Ｉｌ−２７リガンドおよび受容体は図２１にダイアグラムにより示される。
【０１６３】
ＩＬ−２７はＩＬ−１２ファミリーのメンバーであり、サイトカインのＩＬ−６クラスターに属する。図２２参照。ＩＬ−２７、ＥＢＩ３およびｐ２８の２つの成分はＩＬ−１２サブユニットに対する密接な相同性を有する。ＴＣＣＲともいわれるＩＬ−２７受容体（ＩＬ−２７Ｒ）の双方のサブユニットは、種々の白血球にて協調して発現される。最高の発現はＴ細胞およびＮＫ細胞におけるものであるように見える。
【０１６４】
ナイーブな未分化Ｔ細胞（Ｔｈ−０）は、ナイーブなＴｈ−０細胞の成熟Ｔ−ヘルパー細胞への分化を誘導する異なるシグナルに応答する。一般に、２つのタイプのＴ−ヘルパー細胞が知られている；Ｔｈ−１およびＴｈ−２細胞。図２３に図示されるように、ＩＬ−４によるＴｈ−０細胞の刺激はＴｈ−２細胞の発生に導き、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３を生産する。Ｔｈ−２細胞およびサイトカイン産物は液性免疫および抗−蠕虫応答にインパクトを与える。ＩＬ−２７および／またはＩＦＮ−ガンマによるＴｈ−０細胞の刺激は、Ｔ−細胞におけるＩＬ−１２応答性の状態を誘導し、従って、それらはＩＬ−１２の制御下で成熟ＴＨ−１細胞に分化し、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、およびリンホトキシン（ＬＴ）を生産することができる。Ｔｈ−１細胞およびそれらのサイトカイン産物は、細胞−媒介免疫性およびマクロファージ活性化に関与する。
【０１６５】
Ｔｈ−０細胞のＴｈ−１およびＴｈ−２ヘルパー細胞への分化におけるＩＬ−２７の役割のさらなる我々の理解のため、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウス（ＴＣＣＲノックアウト）を前記実施例に記載したように生産した。自己免疫疾患の間におけるＩＬ−２７についての潜在的役割を、実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症についてのマウスモデルを用いて調べた。ＥＡＥを持つマウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞のみの移動がナイーブな受容体マウスにおいてＥＡＥを引き起こしかねないので、ＥＡＥはＴ細胞媒介される。
【０１６６】
実験的ＥＡＥを誘導するために、マウスを、フロイントの完全アジュバント中のミエリン稀突起神経膠細胞糖蛋白質（ＭＯＧ）３５ないし５５ペプチドで免疫化した。野生型（ＷＴ）およびＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）ノックアウトマウスをＭＯＧで免疫化し、前記実施例に記載したようにＥＡＥの証拠について調べた。臨床ＥＡＥスコアを処理後２５日にわたって評価した。
【０１６７】
図２４に示されたデータは、ＩＬ−２７刺激を除去することによって引き起こされたＥＡＥ疾患における仮定された低下の代わりに、ＥＡＥはＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおいて亢進されたことを示す。該マウスはＥＡＥ過剰感受性であるように見え、酷いＥＡＥ疾患を発生した。ＥＡＥ表現型を発現する受容体欠乏マウスから採取された脊髄組織の組織学的分析を図２５に示し、これは、ＥＡＥを持つＩＬ−２７受容体ノックアウトマウスにおける増強された炎症および脱髄を示す。
【０１６８】
この実験に加えて、種々の病原体でのＩＬ−２７受容体欠乏マウスの刺激、ならびに誘導された喘息および肝炎モデルの結果、Ｔｈ−１およびＴｈ−２媒介応答双方が亢進された。これらのデータは、ＩＬ−２７が重要な免疫抑制機能を有することを示す。
【０１６９】
【化２４】
ＩＬ−２７、およびＴ−細胞の分化におけるその可能な役割をさらに研究するために、図２７に図示した手法に従い、ナイーブなＣＤ４＋細胞をＮＡＣＳ−精製し、ＩＬ−２７と共にまたはそれなくして抗−ＣＤ３＋抗体で処理した。ＩＬ−２７でのＴ細胞の刺激は、Ｔｈ−０、Ｔｈ−１またはＴｈ−２へのＴ細胞分極を促進する条件下でなされた。
【０１７０】
簡単に述べると、２４ウェル皿を５μｇ／ｍｌ抗−ＣＤ３（ＢＤ Ｐｈａｒｎｉｎｇｅｎ）で一晩コートした。１．８×１０６ＣＤ４＋Ｔ−細胞の容量を、ＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍｌ）および抗−ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ）の存在下でウェル当たり撒いた。分化のために、以下のサイトカインおよび抗体を加えた：ＴＨ−０（各々５μｇ／ｍｌの抗−ＩＬ−１２、抗−ＩＦＮ−ガンマ、抗−ＩＬ−４）、ＴＨ−１（３．５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１２、５μｇ／ｍｌの抗−ＩＬ−４）、ＴＨ−２（３．５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４、５μｇ／ｍｌの抗−ＩＦＮｇおよび抗−ＩＬ−１２）。ＩＬ−２７を２００ｎｇ／ｍｌの濃度にていくつかの培養に加えた。７２時間後、上清ならびにＲＮＡを単離し、Ｃｈｉｐ、ＲＴ−ＰＣＲ、および／またはＥＬＩＳＡ分析によって特異的サイトカインの生産について分析した。得られたデータを図２８に示し、これは、ＩＬ−２７がＴ−細胞発生に対して顕著な効果を有することを示す。
【０１７１】
ＩＬ−２７は調べたほとんどのサイトカインに対して顕著な効果を有し、この効果は、細胞が分化した条件とは一般には独立していた。ＩＬ−２７は、Ｔｈ−２誘導条件下でＴＮＦαおよびＩＬ−１０、ならびにＩＬ−４を誘導した。同時に、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１７の生産はＩＬ−２７によってかなり抑制された。
【０１７２】
これらの効果のいずれかが良く知られ、かつ優れた免疫抑制サイトカインＩＬ−１０の誘導に対して二次的であるか否かを判断するために、ＩＬ−２７の効果もＩＬ−１０欠乏Ｔ−細胞で調べた。図２９に示すように、サイトカイン生産のＩＬ−２７誘導変調はＩＬ−１０とは独立していた。というのは、ＷＴおよびＩＬ−１０欠乏Ｔ−細胞を比較して、ＩＬ−２またはＧＭ−ＣＳＦ生産においてほとんど差は見られなかったからである。
【０１７３】
イン・ビトロで見られたＩＬ−２７による免疫抑制性ＩＬ−１０の強い誘導にも拘らず（図２８）、ＥＡＥを持つＩＬ−２７Ｒ−／−マウスからのＴ−細胞においてＩＬ−１０の僅かな低下が見られたに過ぎない（図３０）。しかしながら、この人工的なイン・ビトロ観察は、ＩＬ−２７媒介ＩＬ−１０誘導がＥＡＥの間の重要な生物学的プロセスであるという解釈を断じて排除しない。対照的に、それは、ＩＬ−２７誘導ＩＬ−１０誘導をイン・ビボで研究するための我々の自由な実験技術の限界を最も反映するようである。
【０１７４】
実施例１１
ＥＡＥはＴＨ−１７依存性である。
【０１７５】
最近の証拠は、ヘルパーＴ−細胞の新しいサブタイプ、いわゆるＴＨ−１７細胞が、ＥＡＥを含めた多くのプロ−炎症プロセスの鍵となるメディエーターであることを示唆する。これらのＴｈ−１７細胞はＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−６、ＴＮＦ、およびＧＭ−ＣＳＦを生じると報告された。図３１に供されるダイアグラム参照。ＴＨ−１７細胞の発生は貧弱にしか理解されていないが、それは、ＩＬ−１２に対して同様性を持つもう１つのヘテロダイマーサイトカインであるＩＬ−２３に依存すると考えられる。ＩＬ−２３欠乏動物はこのＴ−細胞表現型を効果的に発生させることができず、ＥＡＥおよびＣＩＡに対して抵抗性である。しかしながら、ＩＬ−２３は必要であるように見えるが、ＴＨ−１７細胞分化でイン・ビトロでそれは十分ではない。
【０１７６】
前記で議論したように、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスはＷＴ同腹子と比較してより酷いＥＡＥ疾患を発生させた。ＩＬ−２７シグナリングに対して下流の事象を分析して、ＥＡＥの酷さに対するこの限定的効果で重要な因子を決定した。ＩＬ−２７に応答しての種々のサイトカインの発現を活性化の間に調べた。
【０１７７】
ＩＬ−２７はＩＦＮ−ガンマの生産を促進し、ＩＦＮ−ガンマはＩＬ−１７を阻害することが知られている。データは、ＩＬ−２７が、ＩＦＮ−ガンマよりもより効果的にＩＬ−１７および他のＴｈ−１７サイトカインＩＬ−６およびＧＭ−ＣＳＦの生産を抑制したことを示す（図３３および３４）。さらに、ＥＡＥを持つＴＣＣＲ−／−マウスからのリンパ節細胞は、ＷＴよりもイン・ビトロでの再度の刺激に際してＴｈ−１７サイトカインをより多く分泌した（図３７）。
【０１７８】
ＩＬ−１７生産のＩＬ−２７媒介抑制はＩＦＮ−ガンマとは独立していた。なぜならば、ＩＮＦ−ガンマに対して非応答性とされたＴ−細胞は、以前として、ＩＬ−２７での刺激に際してＩＬ−１７生産を抑制したからである。（図３５）。ＩＦＮ−ガンマシグナリングの不存在下において、基礎ＩＬ−１７生産はより高かった。この理由は不明瞭である。なぜならば、ＷＴ培養においてさえ、ＦＮ−ガンマシグナリングはＩＦＮ−ガンマ中和抗体の添加によってブロックされるからである。かくして、ＩＦＮ−ガンマＲ欠乏マウスにおける高いＩＦ−１７発現は発生段階の改変を反映し（すなわち、ＩＦＮｇＲ欠乏Ｔ−細胞はＩＦＮｇＲの発現よりもＷＴ−細胞とはより多くにおいて異なり）、あるいは細胞内ＩＦＮｇループを反映できるであろう。リガンドおよび受容体が共発現される細胞において、シグナリングは後期分泌経路内で起こり得るが、そのようなシグナリングは細胞内のものであり、中和抗体によってブロックされないであろう。
【０１７９】
Ｔｈ−１７細胞はＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおいて調節不調であるかを判断するために、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスをＣＦＡにおけるＭＯＧで免疫化した。リンパ節の排出を１４日において排除し、Ｘ・ビボにてＭＯＧで再度刺激した。ＩＬ−２７Ｒ欠乏Ｔ細胞を含有するリンパ節上清は、有意に増大したレベルのＩＬ−１７を発現した（図３７および３８）。
【０１８０】
さらに、脳および脊髄（ＥＡＥにおける炎症の現実の部位）の免疫浸潤物は、より多くの細胞がＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおいて浸潤することを明らかとした。さらに、これらの細胞のより高いパーセンテージは、細胞内染色によって分析した場合にＩＬ−１７陽性であった。一緒に考え合わせると、これらの２つの観察は脊髄におけるＩＬ−１７の概略２倍発現に翻訳される（図３９参照）。
【０１８１】
ＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−２７双方はＳＴＡＴ−１を活性化し、ＳＴＡＴ−１ノックアウトは増大したＩＬ−１７を生じさせる。従って、ＩＬ−２７は、ＳＴＡＴ−１を活性化することによってＩＬ−１７を抑制することができる。この関係は、ＳＴＡＴ−１ノックアウトマウスから得られた細胞におけるＩＬ−１７のＩＬ−２７媒介抑制を分析することによって調べた。ＳＴＡＴ−１の不存在下においては、ＩＬ−２７はＩＬ−１７を抑制せず、これは、該抑制がＳＴＡＴ−１によって媒介されることを示す。ＳＴＡＴ−１の不存在下においては、ＩＬ−２７はＩＬ−１７のインデューサーとなる。この逆行に対するメカニズムの基礎は知られていないが、ＩＬ−２７によるＳＴＡＴ−３の活性化はこの効果において役割を演じると推定するのは公正である。なぜならば、他のＩＬ−１７誘導サイトカイン（顕著には、ＩＬ−２３）は、ＳＴＡＴ−１を活性化せずにＳＴＡＴ−３を通じてシグナリングを行うからである（図３６参照）。
【０１８２】
まとめると、ＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）欠乏マウスはＥＡＥ−過剰感受性である。ＩＬ−２７はイン・ビトロにてＴｈ−１７サイトカインＩＬ−１７、ＩＬ−６、およびＧＭ−ＣＳＦを効果的に抑制した。さらに、ＥＡＥを持つＩＬ−２７受容体欠乏マウスは野生型よりも多くＴｈ−１７サイトカインを生産する。ＩＬ−２７は、Ｔｈ−１７から免疫応答を外すことによってＥＡＥを抑制することができる。
【０１８３】
実施例１２
ＩＬ−６はＴｈ−１７細胞を誘導する。
【０１８４】
図４１に図示されたように、ＩＬ−２３は必要であるが、サイトカインＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＮＦを生じるＴｈ−１７細胞へのＴｈ−０細胞の分化には十分ではない。ＩＬ−２３が十分でない１つのありそうな理由は、Ｔｈ−０細胞はＩＬ−２３受容体を発現せず、従って、ＩＬ−２３非応答性であることである。従って、Ｔｈ−０細胞においてＩＬ−２３Ｒを誘導することができる因子は、ＴＨ−１７分化経路の絶対的成分である。
【０１８５】
Ｔｈ−１（ＩＦＮ−ｇ）およびＴＨ−２（ＩＬ−４）細胞のエフェクターサイトカインもまたこれらの細胞の発生に参画し、よって、フィードバックループの安定化を供するので、我々は、ＴＨ−１７エフェクターサイトカインの１つは、同様に、ＴＨ−１７発生に参画しなければならないと理由づけた。ＴＨ−１７エフェクターサイトカインの中では、ＩＬ−６は最も有望に見える。なぜならば、その受容体はナイーブなＴ−細胞で発現されるからであり、および最後に分化されたＴ−細胞よりもＩＬ−６の他の源（最も顕著には抗原提示細胞）があるからである。加えて、ＩＬ−６ノックアウトマウスはＥＡＥ耐性である（図４２参照）。
【０１８６】
野生型およびＩＬ−２７受容体ノックアウトマウスは、単独で、またはＩＬ−２７およびＩＬ−２３と組み合わせて、ＩＬ−６への応答性について調べた。図４３に示すように、ＩＬ−６はＴｈ−１７軸を誘導した。ＩＬ−６単独での処理はＩＬ−２３受容体を刺激し、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ生産も刺激した。興味深いことには、共投与されたＩＬ−２７はＩＬ−２３受容体およびＩＬ−１７の生産のＩＬ−６刺激増加を低下させ、または排除した（図４３）。ＩＬ−２３はＩＬ−２３受容体およびＩｌ−１７生産の刺激に対する僅かな効果を有し、これは、ＩＬ−６単独で示された大きな刺激に対して付加的であるように見えた。この組合せへのＩＬ−２７の添加もまた、該応答を低下させ、または排除した。再度刺激したリンパ節細胞から採取したｍＲＮＡは、野生型対照と比較してＩＬ−２３受容体ノックアウトにおけるＩＬ−２３受容体の誘導を示した（図４３参照）。
【０１８７】
増殖アッセイにおけるＩＬ−６の効果をさらに比較し、ＩＬ−６は野生型およびＴＣＣＲノックアウトマウス双方において精製されたＴ−細胞の増強された増殖を大いに刺激した。ＩＬ−２７の添加は、野生型細胞においてＩＬ−６誘導増殖を完全に中和した。しかしながら、この低下はＴＣＣＲノックアウトマウスでは見られず、これは、ＩＬ−２７がＩＬ−６の優れた増殖効果に拮抗することを示す。図４４参照。従って、ＩＬ−６駆動ＴＨ−１７分化を含めた、ＩＬ−２７はいくつかのレベルでのＩＬ−６アンタゴニストであるように見える。
【０１８８】
実施例１３
Ｉｌ−２７の役割
図４６に示すように、ＩＬ−２７はＴ細胞の分化、特に、複数レベルにおけるＴｈ−１７細胞の発生にインパクトを与える。ＩＬ−２７はＩＬ−１０、ＩＬ−４の生産、およびＴｈ−１細胞の発生を刺激するが、それは、Ｔｈ−１７細胞の生産、Ｔｈ−１７細胞サイトカインＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦの生産も抑制する。
【０１８９】
本明細書における全ての刊行物および特許出願は、本発明が関係する分野における通常の技量のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、あたかも各個々の刊行物および特許出願が参照により具体的かつ個々に示されるようなのと同一程度に参照により一体化される。
【０１９０】
本発明を、種々の特別なおよび好ましい具体例および技術を参照して記載した。しかしながら、本発明の精神および範囲内にありつつ、多くの変形および修飾をなすことができることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１９１】
【図１】図１は、ＴＣＣＲ／ＩＬ−２７受容体複合体の人工物の模式図である。
【図２】図２は、モノクローナル抗体：２６８５−ＩｇＧ２ａ、２６８６−ＩｇＧ１、２６８８−ＩｇＧ１、対照イソタイプＩｇＧ２ａ、および対照イソタイプＩｇＧ１に応答してヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を示すグラフである。
【図３】図３は、マウスＩＬ−３（陽性対照）および抗体２６８６に応答してのヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を示すグラフである。
【図４】図４は、抗体２６８６に応答しての、ヒトＴＣＣＲ、マウスＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞、およびいずれも発現しない対照細胞の増殖を示すグラフである。
【図５】図５は、ＴＣＣＲを発現しない脾臓細胞の増殖と比較した、抗―ＣＤ３刺激に応答してＴＣＣＲを発現する脾臓細胞の増殖を示すグラフである。
【図６】図６は、ＴＣＣＲを発現しないＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖と比較した、抗−ＣＤ３刺激に応答してＴＣＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図７】図７は、ＴＣＣＲを発現しないＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較した、抗−ＣＤ３刺激と応答してＴＣＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図８】図８は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスにおけるＭＯＧ誘導ＥＡＥの臨床的進行を示すグラフである。
【図９】図９は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスにおけるＭＢＰ誘導ＥＡＥの臨床的進行を示すグラフである。
【図１０】図１０は、ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスのための脳および脊髄切片についての平均組織学的炎症スコアを示すグラフである。
【図１１】図１１は，ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスについての脳および脊髄切片についての平均組織学的脱髄スコアを示すグラフである。
【図１２】図１２は、ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスについての脳および脊髄切片での最大組織学的炎症スコアを示すグラフである。
【図１３】図１３は、ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスについての脳および脊髄切片での最大組織学的脱髄スコアを示すグラフである。
【図１４】図１４は、ＣＦＳＥ標識アッセイにおいてＴＣＣＲを発現しないＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖と比較した、抗−ＣＤ３刺激に応答してのＴＣＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図１５】図１５は、ＣＦＳＥ標識アッセイにおいてＴＣＣＲを発現しないＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較して、抗−ＣＤ３刺激に応答してＴＣＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図１６】図１６ＡないしＣは、中性（１６Ａ）Ｔｈ１バイアシング（１６Ｂ）およびＴｈ２バイアシング（１６Ｃ）条件下での、種々の時点における、ＩＬ−２７での処理に応答してのＩＬ−２の誘導を示すグラフである。
【図１７】図１７は、中性（１７Ａ）、Ｔ５１バイアシング（１７Ｂ）およびＴｈ２バイアシング（１７Ｃ）条件下での、種々の時点における、ＩＬ−２７での処理に応答しての、ＩＬ−１０の誘導を示すグラフである。データはＬ−２７依存性誘導の倍数として表される。
【図１８】図１８ＡないしＣは、中性（１８Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１８Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング（１８Ｃ）条件下での、種々の時点における、ＩＬ−２７での処理に応答してのＳＯＣＳ−３の誘導を示すグラフである。データはＬ−２７依存性誘導の倍数として表される。
【図１９】図１９は、中性、Ｔｈ１バイアシング、およびＴｈ２バイアシング条件下での、ＩＬ−２７処理に応答してのＣＤ４＋細胞の増殖を示すグラフである。
【図２０】図２０ＡないしＢは、抗−ＩＬ−２抗体の不存在（２０Ａ）または存在（２０Ｂ）におけるＩＬ−２７および／またはＩＬ−６処理に応答しての脾臓細胞の増殖を示すグラフである。
【図２１】図２１は、ＩＬ−２７およびその受容体ＩＬ−２７Ｒ（ＴＣＣＲ）のダイアグラムである。
【図２２】図２２は、ＩＬ−１２サイトカイン群内で、サイトカインのＩＬ−２７ないしＩＬ−６クラスターの関係を示すダイアグラムである。
【図２３】図２３は、ヘルパーＴ−細胞の分化を示すダイアグラムである。
【図２４】図２４は、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおけるＥＡＥに対する過敏を示すグラフである。
【図２５】図２５は、野生型およびＩＬ−２７ＲノックアウトマウスにおけるＥＡＥ表現型の組織学的分析を示す。
【図２６】図２６は、Ｔ−細胞におけるＩＬ−２７の関係をテストするプロトコルの模式図である。
【図２７】図２７は、Ｔ−細胞発生に対するＩＬ−２７の効果のテストの結果を示す。ＩＬ−２７に応答してのサイトカイン低下を、以下のサイトカイン：ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、ＴＦＮ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＫ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１７についての野生型対照と比較する。
【図２８】図２８は、ＩＬ−１０、ＩＬ−２７、およびＩＬ−１０およびＩＬ−２７の組み合わせにおけるＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦ生産の結果をグラフで示す。
【図２９】図２９は、ＩＬ−２７に応答してのＩＬ−１０の強力な誘導、ＩＬ−１０ノックアウトマウスにおけるＥＡＥの重症度をグラフで示す。
【図３０】図３０は、ＥＡＥにおけるＴＨ−１７の役割を示すグラフである。
【図３１】図３１は、ＥＡＥ病についてのＩＬ−２３およびＴＨ−ＩＬ−１７細胞の要件をグラフで示す。
【図３２】図３２は、ＩＬ−２７によるＴＨ−ＩＬ−１７サイトカインの抑制をグラフで示す。
【図３３】図３３は、ＩＬ−２７によるＩＬ−１７の抑制をグラフで示す。
【図３４】図３４は、ＩＬ−２７によって媒介されるＩＬ−１７の抑制がＩＦＮｇが非依存性であることをグラフで示す。
【図３５】図３５は、ＩＬ−２７によるＩＬ−１７の抑制がＳＴＡＴ−１によって媒介されることをグラフで示す。
【図３６】図３６は、ＩＬ−１７−Ｒノックアウトマウスの再度刺激されたリンパ球からのＩＬ−１７−ＲノックアウトマウスからのＴＨ−ＩＬ−１７サイトカインの分泌をグラフで示す。
【図３７】図３７は、ＩＬ−２７−Ｒ欠乏マウスにおいてＭＯＧまたはＫＬＨを誘導する病気に応答してのＩＬ−１７の生産を示す。
【図３８】図３８は、ＣＮＳに浸潤するＣＤ４Ｔ細胞によるＩＬ−１７発現をグラフで示す。
【図３９】図３９は、Ｔヘルパー分化に対する種々のサイトカインの関係を示すグラフである。
【図４０】図４０は、ＩＬ−６ノックアウトマウスにおけるＥＡＥ耐性を示すグラフである。
【図４１】図４１は、ＴＨ−ＩＬ−１７サイトカインの誘導およびＩＬ−６による応答をグラフで示す。
【図４２】図４２は、ＩＬ−２７によるＩＬ−６増殖効果の拮抗作用を示すグラフである。
【図４３】図４３は、ＩＬ−２７およびＩＬ−６およびＴＨ−ＩＬ−１７発生の役割を示すグラフである。
【図４４】図４４は、ＩＬ−２７の作用の複数レベルを示すグラフである。
【図４５】図４５は、サイトカイン発現の変化を誘導するにおけるＩＬ−２７の役割をグラフで示す。
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
自己免疫疾患は、複雑な相互に関連する生物学的経路の発現または結果である。正常な生理学においては、これらの生物学的経路は、傷害または負傷に応答し、傷害または負傷からの修復を開始し、外来性生物に対する先天的および獲得された防御を設置するのに臨界的である。これらの正常な生理学的経路がさらなる傷害または負傷を、応答の強度に関するものとして、異常な調節または過剰な刺激の結果として、自己に対する反応として、またはこれらの組合せとしてのいずれかで引き起こす場合、病気または病理が起こり得る。
【０００２】
これらの病気の発生はしばしば多工程経路を含み、しばしば、複数の異なる生物学的系／経路に関係するが、これらの経路の１以上における臨界点での介入は軽減または治療効果を有し得る。治療的介入は有害プロセス／経路の拮抗作用または細菌プロセス／経路の組み合わせによって起こり得る。
【０００３】
哺乳動物の免疫系は、細菌、ウイルス、トキシンおよび他の非−宿主物質の侵入から宿主を防御するのに協調して作用する多数のユニークな細胞よりなる。リンパ球、ＴおよびＢ細胞双方は、免疫系の特異性を大いに担っている。Ｔ細胞は胸腺において発生することから命名され、他方、Ｂ細胞は骨髄において発生する。
【０００４】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は哺乳動物免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によってコードされる自己−分子に関連する抗原を認識する。抗原は抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面にＭＨＣ分子と共に提示され得る。Ｔ細胞系は、健康の脅威が宿主哺乳動物に曝されるこれらの改変された細胞を排除する。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）および細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＤ８＋）を含む。ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体の認識に続いてかなり増殖する。ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ−リンパ球、および免疫応答に参加する種々の他の細胞の活性化において中枢的な役割を演じるリンホカインのような種々のサイトカインも分泌する。細胞傷害性Ｔ−リンパ球は他の細胞の破壊を引き起こすことができる。
【０００５】
液性および細胞媒介免応答双方における中枢的な事象はヘルパーＴ細胞の活性化およびクローン拡大である。ヘルパーＴ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）−ＣＤ３複合体の、抗原提示細胞の表面での抗原−ＭＨＣとの相互作用によって開始される。この相互作用は、休止ヘルパーＴ細胞が細胞周期に入るのを誘導し（Ｇ０ないしＧ１転移）、その結果、ＩＬ−２に対する高親和性受容体の発現をもたらす生化学的事象のカスケードを媒介する。活性化されたＴ細胞は、周期増殖および分化を介して記憶細胞またはエフェクター細胞を通じて進行する。
【０００６】
Ｔ−ヘルパー細胞サブセット（Ｔｈ１およびＴｈ２）は免疫の２つの経路を定義する：細胞−媒介免疫性および液性免疫性。Ｔｈ１およびＴｈ２サブタイプについてのサイトカインの放出プロフィールはエフェクターメカニズムおよび細胞傷害性細胞の選択に影響する（非特許文献１；非特許文献２）。Ｔｈ１細胞、ＣＤ４＋細胞の機能的サブセットは、細胞−媒介免疫性を増強し、Ｉｌ−２、インターフェロン−ガンマ、リンホカインべータを含めたサイトカインを生産するそれらの能力によって特徴付けられる（非特許文献１；非特許文献２）。Ｔｈ１細胞によって分泌されるＩｌ−２およびインターフェロン−ガンマはマクロファージおよび細胞傷害性細胞を活性化する。Ｔｈ２細胞はＣＤ４＋細胞でもあるが、Ｔｈ１細胞から区別される。Ｔｈ２細胞は、抗体生産のような液性免疫性を増強するそれらの能力によって特徴付けられる。Ｔｈ２細胞はＩｌ−４、Ｉｌ−５、およびＩｌ−１０を含めたサイトカインを生産する（非特許文献１；非特許文献２）。Ｔｈ２細胞によって分泌されるＩｌ−４、Ｉｌ−５、およびＩｌ−１０は好酸球および肥満細胞の生産を増殖させ、ならびにＩｇＥを含めた抗体の生産を増強し、細胞傷害性細胞の機能を減少させる（非特許文献３）。
【０００７】
Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカイン放出は、相互に抑制性のＴｈ１およびＴｈ２応答を変更する。例えば、ＩＬ−４はＴｈ１細胞からのインターフェロン−ガンマの発現を阻害し、他方、インターフェロン−ガンマはＴｈ２細胞からのＩＬ−４の発現を阻害する（非特許文献１）。
【０００８】
４つのラセン束サイトカインファミリーのメンバー（非特許文献４）は、共通の前駆体からのＴヘルパー細胞のＴｈ１およびＴｈ２エフェクター細胞の区別される集団への増殖および最後の分化を変調する（非特許文献５）。および、ＩＬ−４はＴｈ２細胞の発生に影響し、他方、ＩＬ−１２はＴｈ１細胞の分化に関与する（非特許文献６；非特許文献７）。
【０００９】
ＴＣＣＲ（Ｔ−細胞サイトカイン受容体）は、ＩＬ−１２ β−２受容体、Ｇ−ＣＳＦＲ、およびＩＬ−６受容体に対する相同性を持つサイトカイン受容体のＷＳ（Ｇ）ＸＷＳクラスである。これらの受容体は、細胞、特に、血液細胞の増殖および分化に関与する細胞の増殖および分化を制御できるシグナルを変換する。ＴＣＣＲは、Ｔ＝ヘルパー細胞応答に関与することが示唆されている。特に、ＴＣＣＲおよびそのリガンドＩＬ−２７はＴｈ１応答を促進することが仮定されている（非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。
【００１０】
Ｔｈ１およびＴｈ２細胞のいずれかまたは双方によって生産されるサイトカインの過剰生産は、医学的障害の宿主にインパクトを与える。例えば、Ｔｈ１サイトカインの過剰生産は、多発性硬化症および慢性関節リウマチのような種々の自己免疫疾患の病因に寄与する。Ｔｈ２サイトカインの過剰生産はアレルギー疾患の病因に寄与する。
【００１１】
ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）は、いくつかの自己免疫疾患において組織の病原体破壊に関与する。例えば、ＣＴＬは、自己免疫Ｉ型糖尿病のクールの間に膵臓β細胞の破壊に関連する（非特許文献１１）。ＣＴＬは実験的自己免疫脳脊髄炎にも関連する（非特許文献１２）。ＣＴＬは移植片（ＧＶＨＤ）−対宿主病に関連する組織損傷を媒介する（非特許文献１３）。
【００１２】
多発性硬化症（ＭＳ）は、脳および脊髄に影響する中枢神経系の障害である。ＭＳの共通の兆候および症状は、１以上の四肢において、体幹において、または顔の一方側における感覚異常；脚または手の弱化またはぎこちなさ；または（部分的な盲目および１つの目における痛みのような）目に見える乱れ、視覚のかすみ、または暗点を含む。他の共通の初期の兆候は、二重視（複視）をもたらす目の麻痺、１以上の四肢の一過的弱化、四肢のわずかな硬直または異常な脆性、わずかな歩行の乱れ、膀胱制御の困難、眩暈、および軽い情緒的乱れ（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ：第１７版（ＭＳ）についての現在の治療は、コルチコステロイド、バーターインターフェロン（Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ，Ａｖｏｎｅｘ，Ｒｅｂｉｆ）、グラチラメール酢酸（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）、メトトリキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、クラドリビン、バクロフェン、チザニジン、アミトリプチリン、カルバマゼピン（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，ｓｕｐｒａ）を含む。
【００１３】
慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、典型的には小さなおよび大きな関節に影響する関節の滑膜炎によって特徴付けられる慢性自己免疫疾患であり、それらの進行性破壊に至る（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，ｓｕｐｒａ）。ＲＡの兆候は硬直、圧痛、滑膜厚化、反射梗縮、内臓小節、脚潰瘍または多発性単神経炎、胸膜または心臓周囲滲出、および発熱を含むことができる（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，ｓｕｐｒａ）。
【００１４】
ＲＡのための現在の治療は（サリシレートを含めた）非−ステロイド、抗−炎症薬物、金化合物、メトトレキセート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、ペニシラミン、コルチコステロイド、および細胞傷害性または免疫抑制薬物（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．（編），１９９９，Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ：第１７版）を含む。
【非特許文献１】Ｍｏｓｍａｍｍら、Ａｄｖ．Ｉｍｎｕｎｏｌ．（１９８９）４５：１１１−１４７
【非特許文献２】Ｍｏｓｍａｎｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ（１９９６）１７：１３８−１４６
【非特許文献３】Ｐｏｗｒｉｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，（１９９３）１４：２７０
【非特許文献４】Ｂａｚａｎ，ＰＮＡＳ，（１９９０）８７：６９３４
【非特許文献５】Ｏ’Ｇａｒｒａ，Ａ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９８）８：２７５−８３
【非特許文献６】Ｈｓｉｅｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９３）２６０：５４７−９
【非特許文献７】Ｓｅｄｅｒら、ＰＮＡＳ，（１９９３）９０：１０１８８−９２
【非特許文献８】Ｃｈｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ，（２０００）４０９：９１６−９２０
【非特許文献９】Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，（２００１）１５：５６９−５７８
【非特許文献１０】Ｐｆｌａｎｚら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，（２００２）１６：７７９−７９０
【非特許文献１１】Ｋａｇｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９７）１８６：９８９−９９７
【非特許文献１２】Ｈｕｓｅｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，（２００１）１９４（５）：６６９−６７６
【非特許文献１３】Ｇｒａｕｂｅｒｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９７）１００：９０４−９１１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
自己免疫疾患に対する現存の療法のいずれも、限定された効率および／または有意な毒性のため満足することが判明していない。かくして、ＭＳおよびＲＡのような自己免疫疾患を治療するための新しい方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
ナイーブな未分化Ｔ細胞（Ｔｈ−０）は、成熟なＴ−ヘルパー細胞へのＴｈ−０細胞の分化を誘導する異なるシグナルに応答する。今日、例えば、ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲのアゴニストを投与することによって、細胞受容体ＴＣＣＲの活性化がＴ−リンパ球増殖を低下させるのに効果的であることが発見されている。Ｔ−リンパ球増殖の低下は、ＩＬ−１０およびＳＯＣＳ−３の増大した発現に相関した。ＴＣＣＲを発現する動物は、自己免疫疾患に対して感受性が低いことが判明した。
【００１７】
ＥＡＥ病気モデルにおけるさらなる実験は、ＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）−欠乏マウスは自己免疫疾患に対して過敏であることを示した。Ｔｈ−細胞分化における、および免疫障害におけるＩＬ−２７の役割の研究は、ＩＬ−２７が免疫抑制性であり、Ｔｈ発生において複数レベルで作用するという驚くべき発見に導いた。ＩＬ−２７はＴｈ−ＩＬ１７細胞の生産を抑制し、ＩＬ−６の生産を阻害し、ＩＬ−６を含めたＴｈＩＬ１７サイトカインの生産を阻害する。ＩＬ−２７はＩＬ−１０の、およびＩＬ−４の、さらにＴｈ−ＩＬ１７細胞の阻害剤の生産を誘導し、ＩＬ１２受容体の生産およびＴｈ−１細胞の分化を刺激する。本明細書中に開示されたデータは、ＩＬ−２７が、Ｔｈ−１、Ｔｈ−２およびＴｈ−１７細胞にわたる重要な阻害活性を含めた重要な免疫抑制機能を有することを示す。
【００１８】
本発明は、ＩＬ−２７のようなＩＬ２７Ｒ（ＴＣＣＲ）のアゴニストを投与することによって、多発性硬化症（ＭＳ）および慢性関節リウマチ（ＲＡ）を含めた自己免疫疾患を治療する方法を提供する。ＴＣＣＲの有用なアゴニストは、ＩＬ２７Ｒの改変体および断片、ＩＬ−２７のようなＩＬ２７Ｒリガンド、およびその改変体および断片ならびにＩＬ２７ＲまたはＩＬ２７Ｒリガンドに結合し、ＩＬ２７−媒介応答を刺激し、誘導し、または増強するアゴニスト抗体を含む。また、本発明は、Ｔｈ−ＩＬＩ７細胞を含めた、Ｔ−リンパ球および／または細胞傷害性Ｔ−リンパ球の増殖を阻害する方法を提供し、該方法はＩＬ２７／ＩＬ２７Ｒ応答を刺激し、誘導し、または増強するアゴニストを投与することを含む。
【００１９】
【表１】
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（詳細な説明）
Ｔ−リンパ球の過剰増殖またはＴｈ１またはＴｈ２細胞によって生産されたサイトカインの過剰生産は、医学的障害の主に導く。例えば、Ｔｈ１応答に関連するサイトカインの過剰生産、またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球の過剰生産は同種異系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状線炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、海洋性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫性腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患、インスリン−依存性新生糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リュウマチ、サルコイドーシス、強皮症、全身エリテマトーデスを含めた自己免疫疾患に導き得る。
【００２１】
以下の実施例に詳細に説明する実験は、非−特異的Ｔ細胞刺激に応答してＴＣＣＲを発現するＴ細胞よりもＴＣＣＲを欠くＴ細胞のより大きな増殖を示す（図１参照）。以前、ＴＣＣＲおよびそのリガンドＩＬ−２７がＴｈ１応答を促進することが示唆された（Ｃｈｅｎら、２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０７：９１６−９２０；Ｙｏｓｈｉｄａら、２００１，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１５：５６９−５７８；Ｐｆｌａｎｚら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１６：７７９−７９０）。しかしながら、驚くべきことに、ＴＣＣＲを発現するマウスは、ＴＣＣＲを欠くマウスよりも、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のようなＴｈ１応答によって部分的に特徴付けられる自己免疫疾患に対して感受性が低いことが発見された（実施例２参照）。
【００２２】
以下の実施例に示すように、Ｔリンパ球の増殖は、細胞へのＴＣＣＲアゴニストの投与によって阻害される。また、自己免疫炎症性疾患の低下した臨床的進行およびよりひどくない兆候がＴＣＣＲ（−／−）動物におけるよりもＴＣＣＲ（＋／＋）を発現する動物に存在することが示された。
【００２３】
これらのデータは、ＴＣＣＲのアゴニストを用いて、Ｔ−細胞増殖を低下させることを示す。特に、データは、ＴＣＣＲのアゴニストが、多発性硬化症（ＭＳ）および慢性関節リュウマチ（ＲＡ）のような自己免疫媒介障害を治療するのに有用であることを示す。
【００２４】
（定義）
用語「自己免疫」とは、それを生産する生物の分子、細胞、または組織を抗体またはリンパ球のような免疫系の成分が攻撃し、または害するプロセスをいう。
【００２５】
用語「自己免疫障害」は、組織損傷、または病因のような損傷が少なくとも部分的には自己免疫プロセスの結果である病気をいう。その例として、用語「自己免疫疾患」は、Ｔｈ１応答またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球によって少なくとも部分的に媒介される病気を［含む。自己免疫疾患は同種異系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状線炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ膜網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、潰瘍性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎、および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患、インスリン−依存性真性糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、および全身エリテマトーデスを含む。
【００２６】
用語「Ｔｈ１応答」とは、Ｔｈ１エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化をいい、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、およびＴＮＦ−ベータのようなＴｈ１細胞からのサイトカインの分泌を含む。用語「Ｔｈ１バイアシング疾患」とは、Ｔｈ１エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化に好都合な疾患をいう。
【００２７】
用語「Ｔｈ１サイトカイン」とは、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、およびＴＮＦ−ベータを含めたＴｈ１応答において発現されるサイトカインをいう（Ｐｏｗｒｉｅら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１４：２７０）。
【００２８】
用語「Ｔｈ１媒介障害」とは、Ｔｈ１サイトカインの過剰生産によって圧倒的にまたは部分的に媒介される障害をいう。用語「Ｔｈ１媒介障害」は、Ｔ−細胞のＴｈ１サブタイプの分化における過剰生産または偏りに由来し得る障害を含む。そのような傷害は、自己免疫ショウガイ、例えば、ＲＡおよびＭＳを含む。
【００２９】
用語「Ｔｈ２応答」とは、Ｔｈ２エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化をいい、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３のようなＴｈ２細胞からのサイトカインの分泌を含む（Ｐｏｗｒｉｅら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１４：２７０）。用語「Ｔｈ２バイアシング条件」とは、Ｔｈ２エフェクター細胞の区別される集団への前駆体からのＴヘルパー細胞の分化に好都合な条件をいう。
【００３０】
用語「ＴＣＣＲペプチド」「ＴＣＣＲ蛋白質」および「ＴＣＣＲ」は、本明細書中において用いる場合、天然配列ＴＣＣＲおよびＴＣＣＲペプチド改変体を含む。ＴＣＣＲペプチドはヒト組織またはもう１つの源のような種々の源から単離することができ、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ＴＣＣＲ」は、天然に由来するＴＣＣＲペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドである。そのような天然配列ＴＣＣＲは、天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ＴＣＣＲ」は（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形および分泌形態、（交互にスプライスされた形態のような）天然に生じる切形形態、およびＴＣＣＲの天然に生じる対立遺伝子改変体を具体的には含む。１つの具体例において、天然配列ヒトＴＣＣＲは、配列番号：１のアミノ酸１ないし６３６を含む成熟または全長天然配列ＴＣＣＲである。同様に、天然配列マウスＴＣＣＲは、配列番号：２のアミノ酸１ないし６２３を含む成熟または全長天然配列ＴＣＣＲである。配列番号：１および配列番号：２は、アミノ酸位置１としてここでは示されるメチオニン残基で始まることが示されるが、配列番号：１または配列番号：２のアミノ酸位置１から上流または下流いずれかに位置するもう１つのメチオニン残基は、ＴＣＣＲペプチドについての出発アミノ酸残基として使用することができると考えることができ、またそれが可能である。
【００３１】
「ＴＣＣＲペプチド細胞外ドメイン」または「ＴＣＣＲ ＥＣＤ」とは、膜貫通および細胞質ドメインを実質的に含まないＴＣＣＲペプチドの形態をいう。通常は、ＴＣＣＲペプチドＥＣＤはそのような膜貫通および／または細胞質ドメインの約１％未満を有し、好ましくは、好ましくは、そのようなドメインの約０．５％未満を有する。本発明のＴＣＣＲペプチドについて同定されるいずれの膜貫通ドメインも、疎水性ドメインのそのタイプを同定するためにルーチン的に使用される基準に従って同定されると理解される。膜貫通ドメインの正確な境界は変化し得るが、最もありそうには、最初に同定されたドメインのいずれかの末端における約５以下のアミノ酸であり得る。それ自体、１つの具体例において、ヒトＴＣＣＲペプチドの細胞外ドメインはアミノ酸１または約３３ないしＸ１を含ミリモル、ここに、Ｘ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基である。同様に、マウスＴＣＣＲペプチドの細胞外ドメインはアミノ酸１または約２５ないしＸ２を含ミリモル、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし残基５１９からのいずれかのアミノ酸残基である。
【００３２】
用語「ＴＣＣＲ改変体ペプチド」は、ＴＣＣＲペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を有し、かつ：
（ａ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドの残基１または約３３ないし６３６；
（ａ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドの残基１または約２５ないし６２３；
（ｂ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドのＸ３ないし６３６、ここに、Ｘ３は配列番号：１のいずれかのアミノ酸残基２７ないし３７；
（ｂ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドのＸ４ないし６２３、ここに、Ｘ４は配列番号：２の２０ないし３０からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ１）１または約３３ないしＸ１、ここに、Ｘ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ２）１または約２５ないしＸ２、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし５１９のいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｄ１）Ｘ５ないし６３６、ここに、Ｘ５は配列番号：１の残基５３３ないし５４３からのいずれかのアミノ酸であり；
（ｄ２）Ｘ６ないし６２３、ここに、Ｘ６は配列番号：２の残基５２７ないし５３７からのいずれかのアミノ酸であり；または
（ｅ）配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸配列のもう１つの特異的に誘導された断片；
のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％アミノ酸配列同一性を有するペプチドを意味する。
【００３３】
そのようなＴＣＣＲ改変体ペプチドは、例えば、配列番号：１および配列番号：２の配列のＮ−および／またはＣ−末端において、ならびに１以上の内部ドメイン内において１以上のアミノ酸残基が付加され、または欠失されたＴＣＣＲペプチドを含む。通常、ＴＣＣＲ改変体ペプチドは少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有し、
（ａ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドの残基１または約３３ないし６３６；
（ａ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドの残基１または約２５ないし６２３；
（ｂ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドのＸ３ないし６３６、ここに、Ｘ３は配列番号：１のいずれかのアミノ酸残基２７ないし３７；
（ｂ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドのＸ４ないし６２３、ここに、Ｘ４は配列番号：２の２０ないし３０からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ１）１または約３３ないしＸ１、ここに、Ｘ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ２）１または約２５ないしＸ２、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし５１９のいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｄ１）Ｘ５ないし６３６、ここに、Ｘ５は配列番号：１の残基５３３ないし５４３からのいずれかのアミノ酸であり；
（ｄ２）Ｘ６ないし６２３、ここに、Ｘ６は配列番号：２の残基５２７ないし５３７からのいずれかのアミノ酸であり；または
（ｅ）配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸配列のもう１つの特異的に誘導された断片；
に対して少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％アミノ酸配列同一性であり得る。
【００３４】
用語「ＩＬ−２７」は、本明細書中で用いる場合、天然の配列ＩＬ−２７ヘテロダイマー、天然の配列ＩＬ−２７成分ＥＢＩ３およびｐ２８、ＩＬ−２７ヘテロダイマー改変体（本明細書中でさらに定義する、およびＥＢＩ３およびｐ２８の改変体を含む。ＩＬ−２７ヘテロダイマーおよびその成分はヒト組織タイプから、またはもう１つの源からのような種々の源から単離することができ、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ＩＬ−２７」は、天然に由来するＩＬ−２７ヘテロダイマーと同一のアミノ酸配列を有するヘテロダイマーを含む。そのような天然配列ＩＬ−２７ヘテロダイマーは天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ＩＬ−２７」は、具体的には、（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形され、かつ分泌された形態、（交互にスプライシングされた形態のような）天然に生じる切形された形態、およびＩＬ−２７ヘテロダイマーの天然に生じる対立遺伝子改変体を含む。
【００３５】
用語「ＩＬ−２７改変体」とは、ＴＣＣＲを活性化することができる、天然配列ＩＬ−２７成分ＥＢＩ３およびｐ２８を含めた、天然配列ＩＬ−２７に対して相同性を有するペプチドをいう。ＩＬ−２７改変体は、ＥＢＩ３改変体およびｐ２８改変体から形成されるものを含むことができる。ＩＬ−２７改変体は、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０を共にかみ合わせることができるものも含むことができる。ＩＬ−２７改変体は、ＴＣＣＲホモダイマーを形成することができるものを含むことができる。ＩＬ−２７改変体はＰＥＧ化ＩＬ−２７を含む。
【００３６】
用語「ｐ２８」は、本明細書中で用いる場合、天然配列ｐ２８およびｐ２８ペプチド改変体を含む。ｐ２８はヒト組織タイプから、またはもう１つの源からのように種々の源から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ｐ２８」は、天然に由来するｐ２８ペプチドを同一のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。そのような天然配列ｐ２８は天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ｐ２８」は、具体的には、（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形され、または分泌された形態、（交互にスプライシングされた形態のような）天然に生じる切形形態、およびｐ２８の天然に生じる対立遺伝子改変体を含む。
【００３７】
用語「ｐ２８ペプチド改変体」は、天然配列ヒトｐ２８（配列番号：３）またはマウスｐ２８（配列番号：４）に対して少なくとも７３％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有するペプチドを含む。ｐ２８ペプチド改変体は、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０に結合することができるｐ２８の部分を含む。ｐ２８ペプチド改変体は、ＴＣＣＲを活性化することができるｐ２８の部分を含む。ｐ２８ペプチド改変体は、ＴＣＣＲ上に見出されるサイトカイン受容体相同性ドメインの領域においてＴＣＣＲに結合すると考えられる、ｐ２８の第一および第三のアルファラセンからの残基、およびｇｐ１３０上に見出されるＩＧドメインに結合すると考えられる、第一のラセンの最後において、および第四のラセンの始まりにおける残基を含む。
【００３８】
用語「ＥＢＩ３」は、本明細書中で用いる場合、天然配列ＥＢＩ３およびＥＢＩ３ペプチド改変体を含む。ＥＢＩ３ペプチドはヒト組織タイプから、またはもう１つの源からのように種々の源から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成方法によって調製することができる。「天然配列ＥＢＩ３」は、天然に由来するＥＢＩ３ペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。そのような天然配列ＥＢＩ３は天然から単離することができるか、あるいは組換えおよび／または合成手段によって生産することができる。用語「天然配列ＥＢＩ３」は、具体的には、（細胞外ドメイン配列のような）天然に生じる切形され、および分泌された形態、（交互にスプライシングされた形態のような）天然に生じる切形された形態、およびＥＢＩ３の天然に生じる対立遺伝子改変体を含む。
【００３９】
用語「融合蛋白質」とは、例えば、２つの異なる蛋白質をコードする２つの遺伝子の融合から得られる発現産物をいう。該用語は、２つの異なる蛋白質の部分をコードする２つの遺伝子の部分の融合に由来する発現産物も含む。該用語は、翻訳後に起こる融合に由来する蛋白質を含む。本明細書で用いるように、該用語は、異種ペプチドに融合した、ＩＬ−２７、その成分（ＥＢＩ３およびｐ２８）またはその部分を含むであろう。該用語は、異種ペプチドに融合したＴＣＣＲまたはその部分も含むであろう。該用語は、機能的な１つの鎖サイトカインを形成するためのｐ２８に融合したＥＢＩ３も含むであろう（Ｐｆｌａｎｚら、２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１６：７７９−７９０）。該用語は、ヒトＦｃタグにコンジュゲートしたＩＬ−２７を含む。
【００４０】
本明細書中で用いるように、与えられたペプチドに関しては、「異種ペプチド」とは、起源に関わらず異なる配列を持つペプチドをいう。例えば、天然配列ＴＣＣＲに関しては、異種ペプチドとは、天然配列ＴＣＣＲのそれ以外の配列を有するペプチドをいう。天然配列ＩＬ−２７に関しては、異種ペプチドとは、天然配列ＩＬ−２７のそれ以外の配列を有するペプチドをいう。
【００４１】
用語「アゴニスト」は、天然配列ペプチドの生物学的活性を増強する、または刺激するいずれの分子も含む。適当なアゴニストは、具体的には、アゴニストペプチド、アゴニスト抗体または抗体断片、本発明の天然ペプチドの断片またはアミノ酸配列改変体等を含む。ＴＣＣＲのアゴニストを同定するための方法は、例えば、ＴＣＣＲペプチドまたはＴＣＣＲペプチド−発現細胞を候補アゴニスト分子と接触させ、１以上のＴＣＣＲ生物学的活性の検出可能な変化を測定することを含む。
【００４２】
「ＴＣＣＲ生物学的活性」とは、本明細書中で用いるように、Ｔ−細胞増殖の減衰または抑制のようなＴＣＣＲ媒介応答をいう。ＴＣＣＲ生物学的活性は、Ｔｈ１応答またはＴｈ１媒介障害の減衰または抑制を含む。ＴＣＣＲ生物学的活性はＩＬ−１０およびＳＯＣＳ−３の発現の増加を含む。ＴＣＣＲ生物学的活性は、ＴＣＣＲの活性化に関連するシグナリング、例えば、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ４、およびＳｔａｔ５のようなシグナル変換および転写因子のリン酸化も含む（Ｌｕｃａｓら、２００３，ＰＮＡＳ，１００（２５）：１５０４７−５２）。
【００４３】
用語「抗体」および「免疫グロブリン」は最も広い意味で用いられ、具体的には、ポリクローナル抗体、（アゴニストおよびアンタゴニスト抗体を含めた）モノクローナル抗体、（二価抗体のような）多価抗体、（所望の生物学的活性を呈する二特異的抗体のような）多特異的抗体、ポリエピトープ特異性を持つ抗体組成物、アフィニティー成熟化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ならびに所望の生物学的活性を呈する（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、およびＦｖのような）抗原結合断片を含む。天然に生じる抗体は、ジスルフィド結合によって相互連結した４つのペプチド鎖、２つの同一の重（Ｈ）鎖および２つの同一の軽（Ｌ）鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域ドメイン（ＶＨ）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域ドメイン（ＶＬ）および軽鎖定常領域ドメインを含む。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬを含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、さらに、配列によって規定される相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｋａｂａｔら、１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、またはフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する三次元構造によって規定される超可変ループ（ＨＶＬ）（Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７）に細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは典型的には、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１（ＨＶＬ１）、ＦＲ２、ＣＤＲ２（ＨＶＬ２）、ＦＲ３、ＣＤＲ３（ＨＶＬ３）、ＦＲ４にてアミノ−末端ないしカルボキシ−末端に配置された３つのＣＤＲ（またはＨＶＬ）および４つのＦＲから構成される。
【００４４】
抗体（免疫グロブリン）は、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して異なるクラスに帰属される。免疫グロブリンの５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２等のようなサブクラス（イソタイプ）にさらに分割される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインが、各々、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置はよく知られており、一般に、例えば、Ａｂｂａｓら、２０００，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄに記載されている。抗体は、１以上の他の蛋白質またはペプチドと抗体との共有結合または非共有結合開放によって形成されるより大きな融合分子の一部であり得る。
【００４５】
用語「全長抗体」とは、少なくとも２つの重鎖および２つの軽鎖を含めたその実質的に無傷の形態の抗体をいい、以下に定義する抗体断片をいわない。該用語は、特に、Ｆｃ領域を含有する重鎖を持つ抗体をいう。全長抗体は天然配列抗体または組換え抗体であり得る。全長抗体はヒト、ヒト化、および／またはアフィニティー成熟化であり得る。
【００４６】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書中で用いるように、実質的に相同な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわち、該集団を含む個々の抗体は、該抗体の生産の間に生起し得る改変体を除いて実質的に同一である。
【００４７】
本明細書中に記載されたモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一である、または相同であり、他方、鎖の残りはもう１つの種に由来し、またはもう１つの抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一である、または相同である「キメラ」抗体、ならびに所望の生物学的活性を呈する限りそのような抗体の断片を含む（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４，ＰＮＡＳ，８１：６８５１−６８５５）。
【００４８】
非−ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非−ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原−結合サブ配列のような）キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、受容体の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変ループ（ＨＶＬ）からの残基が、マウス、ラットまたはウサギのような非−ヒト種（ドナー抗体）の１以上のＣＤＲまたはＨＶＬからの残基で置き換えられ、所望の抗原特異性、アフィニティーおよび能力を有するヒト免疫グロブリン（受容体抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンの特異的Ｆｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は対応する非−ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、受容体抗体においても、または輸入されたＣＤＲ（またはＨＶＬ）においても、あるいはフレームワーク配列においても見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに改良し、最大化するように成される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここに、ＣＤＲまたはＨＶＬの全てまたは実質的に全ては非−ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のそれである。
【００４９】
ヒト可変ドメイン、軽鎖および重鎖双方の選択は、ヒト化抗体を作成するにおいて用いることができる。「ベストフィット」方法に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、例えば、公知のヒト可変−ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。げっ歯類のそれに最も近いヒト配列は、ヒト化抗体についてのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として用いられる（Ｓｉｍｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６）。別法として、受容体フレームワーク領域は軽鎖または重鎖の特定のサブグループについてのヒト抗体コンセンサス配列に由来することができる。同一フレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体を生産するのに用い、または修飾し、および用いることができる（Ｃａｒｔｅｒら、１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３）。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６参照。ヒト化抗体はＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体とすることもでき、ここに、抗体の抗原−結合領域は、注目する抗原でアカゲザルを免疫化することによって生産される抗体に由来する。
【００５０】
免疫化に際して、内因性免疫グロブリンの生産の不存在下でヒト抗体の十分なレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生産することができる。例えば、キメラおよび生殖系突然変異体マウスにおける抗体重鎖接合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失の結果、内因性抗体生産の完全な阻害がもたらされる。そのような生殖系突然変異体マウスへのヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイの導入の結果、抗原攻撃に際してヒト抗体の生産がもたらされる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、１９９３，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３参照。ヒト抗体は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１；またはＭａｒｋｓら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載されているようにファージ−ディスプレイライブラリーに由来することもできる。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒトによって生産された抗体のそれに対応するアミノ酸配列を保有し、および／または本明細書中に開示されたヒト抗体を作成するための技術のいずれかを用いて作成されたものである。
【００５２】
「アフィニティー突然変異した」抗体は、それらの改変を保有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体のアフィニティーの改良をもたらす１以上の超可変領域において１以上の改変を有するものである。好ましいアフィニティー成熟化抗体は、標的抗原に対してナノモラーまたはピコモラーさえのアフィニティーを有するであろう。アフィニティー突然変異した抗体は公知の手法によって生産される。例えば、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによるアフィニティー成熟化を記載するＭａｒｋｓら、１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３参照。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発はＢａｒｂａｓら、１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｉｅｒら、１９９５，Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎら、１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら、１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；およびＨａｗｋｉｎｓら、１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６に記載されている。
【００５３】
「抗体断片」は、一般には、無傷抗体の抗原結合部位を含み、かつ、かくして、抗原を結合する能力を保有する無傷抗体の一部のみを含む。本定義に含まれる抗体断片の例は：
（ｉ）重鎖および軽鎖の間に１つの鎖間ジスルフィド結合を有するＶＬ、ＣＬ、ＣＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦａｂ断片；
（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ−末端において１以上のシステイン残基を有するＦａｂ断片であるＦａｂ’断片；
（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片；
（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメイン、および該ＣＨ１ドメインのＣ−末端に１以上のシステイン残基を有するＦｄ’断片；
（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖ断片；
（ｖｉ）ＶＨドメインよりなるｄＡｂ断片：
（ｖｉｉ）少なくともＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、ＣＨ１ドメインを含み、かつヒンジ領域を欠如する無ヒンジ抗体；
（ｖｉｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィドブリッジによって連結された２つのＦａｂ’断片を含む二価断片である（Ｆａｂ’）２断片：
（ｉｘ）単一鎖抗体分子（例えば、単一鎖Ｆｖ’ｓｃＦｖ）；
（ｘ）同一ペプチド鎖中の軽鎖可変ドメイン（ＶＨ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む２つの抗原結合部位を持つ「ダイアボディー」；
（ｘｉ）単一アーム抗原結合ドメインの半減期を増大させることができるＦｃ領域を形成するのに十分な、軽鎖、重鎖およびＮ−末端切形重鎖定常領域を含む単一アーム抗原結合分子；
（ｘｉｉ）相補性軽鎖ペプチドと一緒になって、抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む「線状抗体」；
を含む。
【００５４】
本明細書中で用いるように、「治療」とは、治療すべき個体または細胞の天然コースを改変させる試みにおける臨床的介入をいい、予防のために、または臨床的病理学のコースの間に行うことができる。治療の望ましい効果は、病気の発生または再発の予防、兆候の軽減、障害のいずれかの直接的または間接的病理学的結果の減少、転移の予防、病気進行速度の減少、病気状態の軽減または緩和、および緩解または改良された予後を含む。
【００５５】
ＴＣＣＲ
ＴＣＣＲ（ＷＳＸ−１）は、ＩＬ−１２ β−２受容体、Ｇ−ＣＳＦＲおよびＩＬ−６受容体に対する相同性を持つサイトカイン受容体のＷＳ（Ｇ）ＸＷＳクラスのものである。最高の相同性は、ＩＬ−１２ β―２受容体（２６％同一性）。これらの受容体は、細胞、特に、血液細胞の増殖および分化に関与する細胞の増殖および分化を制御するシグナルを変換する。後の実施例に示されるデータは、ＴＣＣＲの活性化が、直接的にまたは間接的に、ＣＤ８＋Ｔ−リンパ球またはＴｈ１応答の増殖を含めた、自己免疫プロセスの抑制を含むことを示唆する。
【００５６】
自己免疫プロセスの抑制は、Ｔ−細胞を他のマイトジェン刺激に対して非−応答性とすることができるサイトカインシグナリング（ＳＯＣＳ）蛋白質ファミリーメンバーのサプレッサーの誘導を介して起こり得る（Ａｌｅｘａｎｄｅｒら、．２００４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｕｌ．，２２：５０３）。特に、ＳＯＣＳ−３は、ヤヌスキナーゼの活性化ループに結合し、キナーゼ活性を阻害し、それにより、サイトカインシグナリングを抑制する蛋白質である（Ｍａｓｕｈａｒａら、１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２３９：４３９−４４６）。ペルオキシソームプロリファレーター−活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマアゴニスト（例えば、ロシグリタゾン）のようないくつかの剤の抗−炎症効果は、ＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ３の転写を誘導することによって機能する（Ｐａｒｋら、２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：１４７４７−１４７５２）。後の実施例に示したデータは、ＴＣＣＲ活性化がＳＯＣＳ３の発現を直接的にまたは間接的に誘導することを示す。
【００５７】
自己免疫抑制は、ＩＬ−１０の誘導を介しても起こる。ＩＬ−１０は活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、単球およびケラチノサイトによって生産されるサイトカインである。ＩＬ−１０は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＮＦを含めた多数のサイトカインの生産を阻害する。ＩＬ−１０は、炎症応答を制限し、終止させるにおいて主な役割を演じる（Ｍｏｏｒｅら、２００１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：６８３）。後の実施例に示されるデータは、ＴＣＣＲ活性化がＩＬ−１０の発現を直接的にまたは間接的に誘導することを示す。
【００５８】
ヒトＴＣＣＲのアミノ酸配列は公開されており（１９９６年５月２３日に出願されたＷＯ９７／４４４５５）、受託番号４７５９３２７下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。この配列はＳｐｒｅｃｈｅｒら、１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４６（１）：８２−９０にも記載されている。ヒトＴＣＣＲ（ｈＴＣＣＲ）の配列は長さが６３６アミノ酸であって、表１にて後に示される（配列番号：１）。単一ペプチドがアミノ酸残基１ないし３２から同定されており、膜貫通ドメインが配列番号：１のアミノ酸残基５１７ないし５３８から同定されている。Ｎ−グリコシル化部位が残基５１ないし５４、７６ないし７９、３０２ないし３０５、３１１ないし３１４、３７４ないし３７７、３８２ないし３８５、４６７ないし４７０、５６３ないし５６６において同定されており、Ｎ−ミリストイル化部位が残基１０７ないし１１２、２４０ないし２４５、２４４ないし２４９、２８１ないし２８６、２９２ないし２９７、３７７ないし３７８、４００ないし４０５、４５９ないし４６４、４７０ないし４７５、５３１ないし５３６および５３３ないし５３８において同定されている。原核生物膜リポ蛋白質脂質付着部位は残基５２２ないし５３２に存在し、成長因子およびサイトカイン受容体ファミリーシグニチャー１は残基４１ないし５４に存在する。また、残基１８３ないし１９１には、ヒト顆粒球−マクロファージコロニー−刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）に対する受容体の第二のサブユニットに対する有意な相同性の領域もある。ＴＣＣＲは、配列番号：１の残基４１ないし２３０におけるＴＣＣＲ上のサイトカイン受容体相同性ドメインにてＩＬ−２７サブユニットｐ２８に結合する。記載された全てのｈＴＣＣＲ残基は配列番号：１の配列に従ってナンバリングされる。
【００５９】
成人において、ｈＴＣＣＲは胸腺で最も高度に発現されるが、発現は、末梢血液白血球（ＰＢＬ）、脾臓においても観察され、および弱い発現が肺においても観察される。胎児組織は肺および腎臓において弱いＴＣＣＲ発現を呈する。
【００６０】
マウスＴＣＣＲ（ｍＴＣＣＲ）のアミノ酸配列は公開されており（１９９６年５月２３日に出願されたＷＯ９７／４４４５５）、受託番号７７１０１０９の下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。この配列はＳｐｒｅｃｈｅｒら、１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４６（１）：８２−９０にも記載されている。ｍＴＣＣＲに対する配列は、長さが６２３アミノ酸であって、表１において後に示される（配列番号：２）。単一ペプチドがアミノ酸残基１ないし２４において同定され、膜貫通ドメインは配列番号：２のアミノ酸残基５１４ないし５３２において同定されている。Ｎ−グリコシル化部位は残基４６ないし４９、２９６ないし２９９、３０５ないし３０８、３６０ないし３６１、３６８ないし３７１、および４６１ないし４６４において同定されている。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は残基１０ないし１３、９３ないし９６、１３０ないし１３３、１７２ないし１７５、１８４ないし１８７、２３５ないし２３８、２７１ないし２７４、２７２ないし２７５、３２３ないし３２６、６０６ないし６０９、６１５ないし６１８において同定されている。チロシンキナーゼリン酸化部位は約残基２０２ないし２０９において同定されている。Ｎ−ミリストイル化部位は約残基４３ないし４８、１０２ないし１０７、２９５ないし３００、３２１ないし３２６、３３０ないし３３５、３６７ないし３４４、３９３ないし３９８、５２５ないし５３０および５２７ないし５３２において同定されており、アミド化部位は約残基２４０ないし２４３において同定されている。原核生物膜リポ蛋白質脂質付着は約残基５１６ないし５２６に存在し、成長因子およびサイトカイン受容体ファミリーシグニチャー１は約残基３６ないし４９に存在する。有意な相同性の領域は約残基１４ないし５１においてヒトエリスロポエチンと共に存在し、マウスインターロイキン−５受容体は残基２１１ないし２１９に存在する。記載された全てのｍＴＣＣＲ残基は配列番号：２の配列に従ってナンバリングされる。
【００６１】
【化１】
【００６２】
【化２】
ＩＬ−２７
ＩＬ−２７はＴＣＣＲに対するリガンドである（Ｐｆｌａｎｚら、２００２Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６（６）：７７９−７９０）。ＩＬ−２７はＥＢＩ３（エプスタイン−バールウィルス誘導遺伝子３）およびｐ２８蛋白質サブユニットから構成されるヘテロダイマーサイトカインである。ｐ２８は３つの接触表面を持つ４つのラセン束サイトカインである。第一の接触表面はＥＢＩ３に結合し、第二および第四のαラセンの残基から構成される。第二の接触表面はサイトカイン受容体相同性ドメインの領域においてＴＣＣＲに結合し、第一および第三のアルファラセンの残基よりなる。第三の接触表面はｇｐ１３０上で見出されるＩＧドメインのようなＩＧドメインに結合し、第一のラセンの最後および第四のラセンの始まりにおける残基を含む。
【００６３】
ヒトｐ２８のペプチド配列（配列番号：３）は２４３アミノ酸の長さであり、他方、マウスｐ２８のペプチド配列（配列番号：４）は長さが２３４アミノ酸である（Ｐｆｌａｎｚ，ＮＣＢＩ受託番号ＡＡＭ３４４９９）。表２にて以下に示されるこれらの配列は７３％配列同一性を有する。
【００６４】
【化３】
ＥＢＩ３は可溶性サイトカイン受容体の構造を有し、ｐ２８上の特異的結合部位に結合する。ヒトＥＢＩ３は長さが２２９アミノ酸であり（Ｄｅｖｅｒｇｎｅら、１９９６，Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７０（２）：１１４３−１１５３）、表３にて以下に示されるペプチド配列（配列番号：５）を有する。
【００６５】
【化４】
ＴＣＣＲ／ＩＬ−２７受容体複合体
図１はＴＣＣＲ／ＩＬ−２７受容体複合体の人工物を示す。ＩＬ−２７に対する完全な受容体はｇｐ１３０およびＴＣＣＲサブユニットを含有する。サイトカイン受容体相同性ドメインは配列番号：６の約残基１２６ないし３２３におけるｇｐ１３０に存在する。ｇｐ１３０に存在する他の相同性ドメインは配列番号：６の約残基３２４ないし４２３、４２４ないし５１８、および５１９ないし６１４に位置する３つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、および約残基２２ないし１２２における免疫グロブリンドメインを含む。ｇｐ１３０はＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＣＴ１、およびＣＬＣに対する受容体の成分であることも知られている（Ｈｉｂｉら、１９９０，Ｃｅｌｌ，６３（６）：１１４９−１１５７）。ｇｐ１３０のアミノ酸配列（配列番号：６）を表４にて以下に示す。
【００６６】
【化５】
【００６７】
【化６】
ＴＣＣＲのＩＬ−２７活性化が、主なＴｈ１−特異的転写因子、Ｔ−ｂｅｔの発現を誘導する（Ｌｕｃａｓら、２００３，ＰＮＡＳ，１００：１５０４７−５２）。ＴＣＣＲ活性化の効果はＳｔａｔｓ（転写のシグナルトランスジューサーおよびアクチベーター）によって媒介される。具体的には、ＴＣＣＲ活性化はＳｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ４、およびＳｔａｔ５のリン酸化に導く（Ｌｕｃａｓら、２００３，ｓｕｐｒａ）。後の実施例に示すデータは、ＴＣＣＲ活性化がＣＤ８＋Ｔ−リンパ球の増殖、またはＴｈ１応答を含めた、自己免疫プロセスの発現を直接的または間接的に誘導することを示唆する。
ＴＣＣＲおよびＴ−リンパ球サブタイプ
前記したように、４つのラセン束サイトカインファミリーのメンバー（Ｂａｚａｎ，Ｊ．Ｆ．，１９９０，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８７：６９３４−８）は、Ｔｈ１およびＴｈ２エフェクター細胞の区別される集団への共通の前駆体からのＴヘルパー細胞の増殖および最後の分化において役割を演じる（Ｏ’Ｇａｒｒａ．，１９９８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，８：２７５−８３５）。ＩＬ−４はＴｈ２細胞の発生に支配的に影響し、他方、ＩＬ−１２はＴｈ１細胞の分化における主な因子である。（Ｈｓｉｅｈら、１９９３，Ｓｉｅｎｃｅ，２６０：５４７−９；Ｓｅｄｅｒら、１９９３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９０：１０１８８−９２；Ｌｅ Ｇｒｏｓら、１９９０，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１７２：９２１−９；Ｓｗａｉｎら、１９９１，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ，１２３：１１５−４４）。したがって、ＩＬ−４が欠乏したマウス（Ｋｕｈｎら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４，７０７−１０）、ＩＬ−４受容体α鎖（Ｎｏｂｅｎ−Ｔｒａｕｔｈら、１９９７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９４：１０８３８−４３）、またはＩＬ−４特異的転写因子ＳＴＡＴ６（Ｓｈｉｍｏｄａら、１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８０：６３０−３）はＴｈ２応答が欠乏し、他方、ＩＬ−１２が欠乏したマウス（Ｍａｇｒａｍら、１９９６，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ４：４７１−８１）ＩＬ−１２受容体（ＩＬ−１２Ｒ）β１鎖（Ｗｕら、１９９７，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５９：１６５８−６５）、またはＩＬ−１２特異的転写因子ＳＴＡＴ４（Ｋａｐｌａｎら、１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８２：１７４−７）は損なわれたＴｈ１応答を有する。
【００６８】
Ｔｈ１およびＴｈ２細胞サブタイプは共通の前駆体Ｔｈ−０細胞に由来する。Ｔｈ１およびＴｈ２細胞からのサイトカイン放出プロフィールはエフェクターメカニズムおよび細胞傷害性細胞の選択に影響する。Ｔｈ１細胞によって分泌されるＩｌ−２およびインターフェロンガンマはマクロファージュおよび細胞傷害性細胞を活性化し、他方、Ｔｈ２細胞によって分泌されるＩｌ−４、Ｉｌ−５、Ｉｌ−６、およびＩｌ−１０は好酸球および肥満細胞の生産を増大させ、ならびにＩｇｅを含めた抗体の生産を促進し、細胞傷害性細胞の機能を減少させる傾向がある（Ｐｏｗｒｉｅら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１４：２７０）。一旦樹立されれば、Ｔｈ１またはＴｈ２応答パターンは、他のサブセットの細胞によるサイトカイン生産を一般的には阻害するサイトカインの生産によって維持される。例えば、ＩＬ−４はＴｈ１クローンからのインターフェロン−ガンマの生産を阻害し、他方、インターフェロン−ガンマはＴｈ２クローンからのＩｌ−４からの生産を阻害する（Ｍｏｓｍａｎｎら、１９８９，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６：１１１−１４７；Ｍｏｓｍａｎｎら、１９８９，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：１４５−１７３）。この負のフィードバックループは、多くの免疫応答の間における極性化サイトカインプロフィールの生産を加速する。
【００６９】
細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＤ８＋）は迅速に他の細胞を破壊することができる。細胞傷害性Ｔ−リンパ球は２つの主な細胞溶解経路を用いる：ペルフォリン−依存性エクソサイドーシス経路およびＦａｓリガンド／Ｆａｓｋを用いる。細胞傷害性Ｔ−リンパ球はインターフェロン−ガンマのようなプロ−炎症サイトカインのプロジューサーでもある。
【００７０】
Ｔｈ１応答に関連するサイトカインの過剰生産またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球の過剰増殖は、同種異系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状腺炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ膜網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、潰瘍性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫性腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎、および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患インスリン依存性新生糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、および全身エリテマトーデスに至りかねない。
【００７１】
後の実施例に詳細に記載された実験は、非−特異的Ｔ−リンパ球刺激に応答しての、ＴＣＣＲを発現するＴ−リンパ球と比較して、ＴＣＣＲを欠如するＴ−リンパ球のより大きな増殖を示す（実施例１参照）。さらに、驚くべきことに、ＴＣＣＲを発現するマウスは、ＴＣＣＲを欠如するマウスよりも、多発性硬化症についての動物モデルにおいて、実験的アレルギー脳脊髄炎（ＥＡＥ）のような自己免疫障害に対して感受性が低いことが見出された（実施例２）。
【００７２】
これらのデータは、Ｔ−リンパ球増殖およびＴｈ１媒介生物学的活性のＴＣＣＲ−媒介直接的または間接的抑制を示唆する。従って、ＴＣＣＲのアゴニストを用いて、Ｔ−細胞増殖を阻害し、および／または多発性硬化症および慢性関節リウマチを含めた自己免疫障害を治療することができる。
【００７３】
自己免疫障害
前記したように、Ｔ−リンパ球の過剰増殖またはＴｈ１またはＴｈ２細胞によって生産されたサイトカインの過剰生産は医学的障害の保有者に導く。例えば、Ｔｈ１応答に関連するサイトカインの過剰生産またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球の過剰増殖は異種同系移植片拒絶、（グレーヴス病および橋本甲状腺炎のような）自己免疫甲状腺病、自己免疫ブドウ膜網膜炎、巨細胞動脈炎、（クローン病、潰瘍性結腸炎、局所腸炎、肉芽腫性炎腸炎、末端回腸炎、局所回腸炎、および終末回腸炎を含めた）炎症性腸疾患、インスリン−依存性真正糖尿病、多発性硬化症、悪性貧血、乾癬、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症および全身エリテマトーデスを含めた自己免疫障害に至り得る。
【００７４】
多発性硬化症は、Ｔリンパ球依存性であると考えられる自己免疫脱髄障害である。ＭＳは、一般には、再発−緩解コースまたは慢性進行コースを呈する。ＭＳの病因は知られていないが、ウイルス感染、遺伝的素因、環境、および自己免疫は全て該障害に寄与しているように見える。ＭＳ患者における病巣は、圧倒的にＴ−リンパ球に媒介されるミクロ神経膠細胞および浸潤性マクロファージの浸潤物を含有する。ＣＤ４＋Ｔリンパ球はこれらの病巣に存在する支配的な細胞型である。ＭＳ病巣のホールマークはプラーク、すなわち、ＭＲＩスキャンで見られる通常の白色物質から鋭く区別される脱髄の領域である。ＭＳプラークの組織学的外観は病気の異なる段階で変化する。活性な病巣において、血液−脳関門は損傷されており、それにより、細胞外空間への血清蛋白質の血管外遊出を可能とする。炎症細胞は血管周囲カフにおいて、および白色物質全体に観察することができる。ＣＤ４＋Ｔ−細胞、特にＴｈ１はプラークのエッジにおいて毛細血管後細静脈の周りに蓄積し、白色物質にも散らばる。活性な病巣において、接着分子およびリンパ球のマーカーのアップレギュレーションおよびＩＬ−２ＲおよびＲおよびＣＤ２６のような単球活性化も観察された。活性病巣における脱髄には稀神経突起膠細胞の破壊は伴わない。対照的に、該病気の慢性相の間では、病巣は稀神経突起膠細胞の喪失およびしたがって、血液中のミエリン稀神経突起膠細胞糖蛋白質（ＭＯＧ）抗体の存在によって特徴付けられる。
【００７５】
種々のよく許容された動物モデルが、自己免疫障害について存在する。その例として、ＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）は、Ｔ細胞および単核細胞炎症、および中枢神経系における軸索の引き続いての脱髄によって特徴付けられるＴ細胞媒介自己免疫障害である。ＥＡＥは、一般的にヒトにおけるＭＳの関連動物モデルであると考えられている。（例えば、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｃ．１９９５，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１４３参照）。候補ＴＣＣＲアゴニストのような剤は、例えば、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｌｓ，Ｉｎｃ．によって発行され、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって編集されたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｕｎｉｔｓ１５．１および１５．２に記載されたプロトコルを用い、免疫媒介脱髄障害に対するＴ細胞刺激または阻害活性について分析することができる。また、稀突起神経膠細胞またはシュワン細胞が、例えば、Ｄｕｎｃａｎら、１９９７，Ｍｏｌｅｃ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ，５５４−５６１に記載されたように、中枢神経系にグラフトされたミエリン病についてのモデルも参照。
【００７６】
関節炎についての動物モデルはコラーゲン−誘導関節炎である。例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：２２１０−２２１４参照。このモデルはヒト自己免疫慢性関節リウマチの臨床的、組織学的および免疫学的特徴を有し、ヒト自己免疫関節炎についての許容できるモデルである。マウスおよびラットモデルは滑膜炎、軟骨の侵食、および肋軟骨下骨によって特徴付けられる。コラーゲン−誘導関節炎は、リンパ球浸潤および滑膜肥大を含めたヒトにおける慢性関節リウマチでの多くの特徴を有する。例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：２２１０−２２１４参照。ＴＣＣＲの潜在的アゴニストは、例えば、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｌｓ，Ｉｎｃ．によって発行され、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって編集されたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｕｎｉｔｓ １５．５に記載されたプロトコルを用い、これらのモデルを用いて自己免疫関節炎に対する活性について分析することができる。また、Ｉｓｓｅｋｕｔｚ，Ａ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９６）８８：５６９に記載されたＣＤ１８に対するモノクローナル抗体およびＶＬＡ−４インテグリンを用いるモデルも参照されたし。
【００７７】
皮膚異種同系移植片拒絶についての動物モデルは、抗−ウイルスおよび腫瘍免疫性におけるそれらの役割を示す、およびその尺度を示すイン・ビボ組織破壊を媒介するＴ細胞の能力をテストする手段である。ほとんどの通常かつ許容されたモデルは、マウス尾−皮膚移植片を用いる。報告された実験は、皮膚異種同系移植片拒絶はＴ細胞、ヘルパーＴ細胞およびキラー−エフェクタ−Ｔ細胞によって媒介され、抗体によっては媒介されないことを示している。例えば、Ａｕｃｈｉｎｃｌｏｓｓ ａｎｄ Ｓａｃｈｓ，１９９８，Ｉｎ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｐａｇｅ８８９−９９２参照。適当な手法は、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｌｓ，Ｉｎｃ．によって発行され、Ｃｏｌｉｇａｎら、 １９９５，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって編集されたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｕｎｉｔ ４．４に詳細に記載されている。他の候補ＴＣＣＲアゴニストをスクリーニングするのに用いることができるトランスプラント拒絶モデルは、例えば、Ｔａｎａｂｅら、 １９９４，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，５８：２３およびＴｉｎｕｂｕら、１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４３３０−４３３８によって記載された同種異系心臓トランスプラントモデルを含む。
【００７８】
ＴＣＣＲのアゴニスト
ＴＣＣＲのアゴニストは、本明細書中際書中に開示された天然配列ＴＣＣＲペプチドの生物学的活性を増強し、または刺激する分子である。適当なアゴニスト分子は、具体的には、ヒト化抗体を含めたアゴニスト抗体、またはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、Ａｂ、無ヒンジ抗体、Ｆ（ａｂ’）２断片、単一鎖抗体分子、ダイアボディー、単一アーム抗原結合分子、および線状抗体を含めたアゴニスト抗体の断片、アミノ酸配列改変体または天然ポリペプチド、ペプチド、小分子の断片などを含む。
【００７９】
ＴＣＣＲの適当なアゴニストは、ＴＣＣＲのペプチド断片、ＴＣＣＲ細胞外メイン、および：
（ａ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドの残基１または約３３ないし６３６；
（ａ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドの残基１または約２５ないし６２３；
（ｂ１）配列番号：１のヒトＴＣＣＲペプチドのＸ３ないし６３６、ここに、Ｘ３は配列番号：１のいずれかのアミノ酸残基２７ないし３７；
（ｂ２）配列番号：２のマウスＴＣＣＲペプチドＸ４ないし６２３、ここに、Ｘ４は配列番号：２の２０ないし３０からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ１）１または約３３ないしＸ１、ここにＸ１は配列番号：１の残基５１２ないし残基５２２からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｃ２）１または約２５ないしＸ２、ここに、Ｘ２は配列番号：２の残基５０９ないし５１９からのいずれかのアミノ酸残基であり；
（ｄ１）Ｘ５ないし６３６、ここに、Ｘ５は配列番号：１の残基５３３ないし５４３からのいずれかのアミノ酸であり；
（ｄ２）Ｘ６ないし６２３、ここに、Ｘ６は配列番号：２の残基５２７ないし５３７からのいずれかのアミノ酸であり；または
（ｅ）配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸配列のもう１つの特異的に誘導された断片；
のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するＴＣＣＲ改変体も含む。
【００８０】
ＴＣＣＲのアゴニストは、例えば、配列番号：１および配列番号：２の配列の、Ｎ−およびＣ−末端において、または１以上の内部ドメイン内で１以上のアミノ酸残基が付加され、または欠失されたＴＣＣＲペプチドを含む。
【００８１】
ＴＣＣＲのアゴニストは、天然配列ＩＬ−２７、ＥＢＩ３、ｐ２８、改変体、およびＩＬ−２７ヘテロダイマーに通常は関連する生物学的活性を有するその断片を含む。例えば、ＴＣＣＲのアゴニストは、ＩＬ−２７の天然配列成分に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有するＩＬ−２７改変体を含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、天然配列ヒトｐ２８（配列番号：３）またはマウスｐ２８（配列番号：４）に対して少なくとも７３％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有するｐ２８改変体も含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲに結合することができるｐ２８、およびｇｐ１３０の部分を含む。その例として、ＴＣＣＲのアゴニストは、天然配列ヒトｐ２８（配列番号：３）またはマウスｐ２８（配列番号：４）に対して少なくとも７３％、７５％、８０％、９０％、９５％、または９９％配列同一性を有し、かつＴＣＣＲおよびｇｐ１３０に結合することができるｐ２８改変体を含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲ上に見出されるサイトカイン受容体相同性ドメインの領域においてＴＣＣＲに結合すると考えられる、ｐ２８の第一および第三のαラセンからの残基、およびｇｐ１３０上に見出されるＩＧドメインに結合すると考えら得る、第一のラセンの最後および第４のラセンの始まりにおける残基を含有するｐ２８ペプチド改変体を含む。
【００８２】
ＴＣＣＲのアゴニストは、例えば、ＴＣＣＲに結合し、それを活性化することができる分子を含む。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲがホモダイマーを形成できるようにする分子、および／またはＴＣＣＲおよびｇｐ１３０がヘテロダイマーを形成することができるようにする分子も含む。例えば、ＴＣＣＲに対する抗体はＴＣＣＲがホモダイマーを形成できるようにすることができる。さらなる例として、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０双方に対して特異的な二価抗体はＴＣＣＲおよびｇｐ１３０がヘテロダイマーを形成するようにすることができる。
【００８３】
ＴＣＣＲペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するための方法は、ＴＣＣＲペプチドを候補アゴニストまたはアンタゴニスト分子と接触し、次いで、ＴＣＣＲに関連する１以上の生物学的活性のケン質可能な変化を測定すること含むことができる。例えば、アゴニストは、ＴＣＣＲペプチドを発現する細胞を候補と接触させ、次いで、ウェスタン−ブロットまたはもう１つの適当なアッセイを用いて、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ４、またはＳｔａｔ５のリン酸化のようなＴＣＣＲの生物学的活性について接触された細胞を分析することによって同定される。ＴＣＣＲのアゴニストは、ＴＣＣＲペプチドを発現するように作成されたＢａ／Ｆ３細胞のような細胞を候補アゴニストと接触させ、次いで、例えば、［３Ｈ］標識チミジン取込みまたはもう１つの適当なアッセイを測定することによって増殖について接触された細胞を分析することによって同定することもできる。
【００８４】
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体を生産するための多くの技術が知られている。１つの方法において、例えば、Ｂａｌｂ／ｃのようなマウスは、フロイント完全アジュバントに乳化した免疫原としてのＴＣＣＲまたはその部分で免疫化し、１ないし１００マイクログラムの量にて皮下または腹腔内注射される。別法として、該免疫原はＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）に乳化し、動物の後足肉趾に注射される。次いで、選択されたアジュバントに乳化されたさらなる免疫原で、免疫化されたマウスを１０ないし１２日後にブースター注射する。しかる後、数週間の間、マウスにさらなる免疫化注射をブースター注射することもできる。血清試料は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてテストして、抗−ＴＣＣＲ抗体を検出するために眼窩後出血によってマウスから周期的に得ることができる。
【００８５】
適当な抗体力価が検出された後、抗−ＴＣＣＲ抗体について「陽性」の動物に、免疫原の最終静脈内注射を注射することができる。３ないし４日後に、マウスを犠牲にし、脾臓細胞を収穫する。脾臓細胞を、次いで、（３５％ポリエチレングリコールを用いて）ＡＴＣＣ、Ｎｏ．ＣＲＬ １５９７から入手可能な、Ｐ３Ｘ６３ＡｇＵ．１のような選択されたマウス骨髄腫細胞系に融合させる。該癒合によりハイブリドーマ細胞が生じ、次いで、これを、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン）を含有する９６ウェル組織培養プレートに平板培養して、非−融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害することができる。
【００８６】
選択されたハイブリドーマ細胞は、ＴＣＣＲに対する反応性について、ＥＬＩＳＡ、または他の適当なアッセイでスクリーニングすることができる。陽性ハイブリドーマ細胞は、例えば、同系Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射して、抗−ＴＣＣＲモノクローナル抗体を含有する腹水液を生じさせることができる。別法としてハイブリドーマ細胞は、例えば、組織培養フラスコまたはローラーボトル中で増殖させることができる。腹水液中で生産されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈殿、続いて、ゲル排除クロマトグラフィーまたは他の適当な方法を用いて達成することができる。別法として、抗体のプロテインＡまたはプロテインＧへの結合に基づくアフィニティークロマトグラフィーを使用することができる。
【００８７】
ＴＣＣＲ−／−マウス
ＴＣＣＲを発現しない「ノックアウト」マウスが構築されている（ＴＣＣＲ−／−）。そのようなマウスは、例えば、ＴＣＣＲをコードする内因性遺伝子、および動物の胚細胞に導入された同一ペプチドをコードする改変されたゲノムＤＮＡの間の相同組換えを介して調製することができる。
【００８８】
例えば、特定のペプチドをコードするｃＤＮＡを用いて、確立された技術に従ってそのペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローン化することができる。特定のペプチドをコードするゲノムＤＮＡの部分を、欠失することができるか、あるいは取り込みをモニターするのに用いることができる選択マーカーをコードする遺伝子のようなもう１つの遺伝子を置き換えることができる。典型的には、（５’および３’末端双方における）未改変フランキングＤＮＡの数キロベースがベクターに含まれる（相同組換えベクターの記載については、Ｔｈｏｍａｓら、１９８７，Ｃｅｌｌ，５１：５０３参照）。ベクターは（エレクトロポレーションによるなどして）胚性幹細胞系に導入し、導入されたＤＮＡが内因性ＤＮＡを相同組換えされている細胞を選択する。例えば、Ｌｉら、１９９２，Ｃｅｌｌ，６９：９５１参照。次いで、例えば、Ｂｒａｄｅｒｙら、１９８７，Ｉｎ：Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｅｏｎ，ｅｄ．（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ），ｐｐ．１１３−１５２に記載されているように、選択された細胞を（マウスまたはラットのような）動物の胚盤胞に注射して、同種キメラを形成させる。次いで、キメラ胚を適当な偽妊娠雌仮腹動物に移植し、該胚を出産させて、「ノックアウト」動物を生じさせることができる。それらの生殖細胞に相同組換えＤＮＡを保有する子孫は標準的な技術によって同定し、それを用いて、動物の全ての細胞は相同組換えＤＮＡを含有する動物を育種することができる。
【００８９】
後の実施例で用いるＴＣＣＲ−／−マウスの作成の記載は、その内容がここに引用して援用されるＷＯ ０１２９０７０ （ｄｅ Ｓａｕｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．）およびＣｈｅｎら、２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０７：９１６に見出される。
【００９０】
組成物および治療
自己免疫障害の治療でいうようなＴＣＣＲのアゴニストは、限定されるものではないが、免疫機能、例えば、Ｔ細胞増殖／活性化、リンホカイン放出、または免疫細胞浸潤を変調する、蛋白質、抗体、断片および改変体、小さな有機分子、ペプチド、リンペプチドなどを含む。特に、本発明中で記載されるＴＣＣＲのアゴニストは、Ｔ−リンパ球の増殖、Ｔ−リンパ球サイトカイン放出、および自己免疫障害を抑制し、減少させ、または低下させるのに有用である。
【００９１】
ＴＣＣＲアゴニストは、前記したスクリーニングアッセイのいずれかによって、および／またはいずれかの他の公知のスクリーニング技術によって同定することができる。
【００９２】
本発明のＴＣＣＲアゴニストを公知の方法に従って処方して有用な組成物を調製し、それにより、ＴＣＣＲアゴニストを許容される担体と組み合わせる。処方は、所望の程度の純度を有するＴＣＣＲアゴニストを、凍結乾燥された処方または水性溶液の形態の、任意の許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することによって貯蔵のために調製される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ ｅｄ．Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．（２０００）参照。適当な担体、賦形剤または安定化剤は使用する用量および濃度において受容者に対して非毒性であり、それは、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸を含めた抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ペプチド血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グログリンのような蛋白質；ポリビニルピヨリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシンのようなアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含めた単糖、二糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような塩−形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）ＰＥＧのようなノニオン界面活性剤を含む。
【００９３】
イン・ビボ投与で用いるべき処方は滅菌されていなければならない。これは、凍結乾燥および復元に先立ってまたはそれに続いて、滅菌濾過膜を通しての濾過によって容易に達成される。
【００９４】
本発明中において、組成物は、一般には、滅菌アクセスポート、例えば、皮下注射針によって刺すことができるストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルを有する容器に入れられる。
【００９５】
投与経路は、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、または病巣内経路、局所投与による、または徐放系による注射または注入のような公知の方法に従う。投与の経路は、アデノウィルスベクターのような適当なベクターでのトランスフェクションの結果としてのイン・ビボ発現を含むことができる。
【００９６】
本発明の医薬組成物の量および所望の濃度は、考えられる特定のしように応じて変化させることができる。投与の適当な用量または経路の決定は、十分に、通常の技師の技量内にある。動物実験は、ヒト療法のための有効量の決定のための信頼できるガイダンスを提供する。効果的な用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．”Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｓｃａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ” ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９，ｐｐ．４２−９６によって主張された原理に従って行うことができる。
【００９７】
ＴＣＣＲアゴニストのイン・ビボ投与を使用する場合、正常な用量は、投与経路に応じて、１日当たり約１０ｎｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇ哺乳動物体重以上、例えば、約１mｇ／ｋｇ／日ないし１０ｍｇ／ｋｇ／日で変化させることができる。特定の用量および送達の方法に関するガイダンスは文献中に供される；例えば、米国特許代４，６５７，７６０；第５，２０６，３４４；または第５，２２５，２１２号参照。異なる処方は異なる治療および異なる障害で効果的であり、および特異的器官または組織を治療することを意図した投与は、もう１つの器官または組織に対するものとはことなる送達を必要とするであろうと予測される。
【００９８】
ＴＣＣＲアゴニストの徐放投与がＴＣＣＲアゴニストの投与を必要とするいずれかの病気または障害の治療に適した放出特徴を持つ処方で望まれる場合、ＴＣＣＲアゴニストのマイクロカプセル化が考えられる。徐放のための組換え蛋白質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン−アルファ、−ベータ、−ガンマ、インターロイキン−２、およびＭＮ ｒｇｐ１２０で首尾よく行われている。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９９６，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：７９５−１９９；Ｙａｓｕｄａ，１９９３，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．，１２２１−１２２３；Ｈｏｒａら、１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７５５−７５８；Ｃｌｅｌａｎｄ，１９９５，”Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ” ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｇｓｉｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，ｅｄｓ．，（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．４３９−４６２；ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２，ＷＯ９６／０７３９９および米国特許第５，６５４，０１０参照。
【００９９】
ＴＣＣＲアゴニストの徐放処方は、ポリ−乳酸−コグリコール酸（ＰＬＧＡ）、かなりの程度の生体適合性、および広い範囲の生分解性特性を呈するポリマーを用いて開発することができる。ＰＬＧＡ、乳酸およびグリコール酸の分解生成物はヒト身体から迅速に除去される。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成に応じて数ヶ月ないし数年に調整することができる。さらなる情報については、Ｌｅｗｓ，”Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｌａｃｔｉｄｅ／Ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ ｐｏｌｙｍｅｒ”ｉｎ Ｂｉｏｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ ａｎｄ Ｒ．Ｌａｎｇｄｅｅｒ，ｅｄｉｔｅｒｓ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９０），ｐｐ．１−４１参照。
【実施例】
【０１００】
本発明は、以下の実施例を参照して良好に理解することができる。これらの実施例は本発明の特別な具体例の代表であることが意図され、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１０１】
実施例１
Ｔ−細胞応答のＴＣＣＲ−媒介抑制
Ｔ−細胞応答に対するＴＣＣＲ活性の効果は、野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）脾臓細胞の誘導されたＴ−細胞の増殖の分析によってテストした。Ｔ−細胞受容体はＣＤ３と会合してＴ−細胞受容体複合体を形成する。異なる用量の抗−ＣＤ３抗体は、Ｔ−細胞受容体複合体および抗原−提示細胞（ＡＰＣ）のＭＨＣクラスＩＩ分子（ＣＤ４）の相互作用に通常は関連するＴ−細胞の増殖を非特異的に刺激する。
【０１０２】
野生型（ＴＣＣＲ＋・＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）混合リンパ球、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および、単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖は、抗−ＣＤ３抗体によって刺激した（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｇｏ，ＣＡ，ｃｌｏｎｅ １４５−２ｃ１１）。細胞を湿潤化ＣＯ２インキュベータ中で３日間増殖し、増殖はアッセイの最後の８ないし１６時間に測定された［３Ｈ］チミジン取り込みによって測定した。驚くべきことに、ノックアウトマウス（ＴＣＣＲ−／−）から得られた混合リンパ球の抗−ＣＤ３抗体誘導増殖は、表５において、および図５に示されたように、最大下用量の抗−ＣＤ３において野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）リンパ球から得られたリンパ球のそれよりも有意に大きかった。このデータは、例えば、刺激されたＴ−細胞の増殖を抑制するＴＣＣＲ活性の保護効果を示唆し、およびアゴニストでのＴＣＣＲの刺激は、Ｔ−細胞増殖のようなＴ−細胞応答を直接的にまたは間接的に抑制するのに有用であろう。
【０１０３】
【化７】
しかしながら、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞の抗−ＣＤ３抗体誘導増殖は、各々、図６（表６）および図７（表７）に示されたように、野生型およびノックアウト細胞の間で有意には異ならなかった。このデータは、ＴＣＣＲに対するリガンドであるＩＬ−２７が、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞以外のリンパ球によって生産されることを示唆する。
【０１０４】
【化８】
次に、抗−ＣＤ３抗体刺激に応答してのＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の増殖は、ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインジアセテート、スクシンイミジドエステル）標識アッセイで測定した。標識された細胞は、各細胞分裂後にそれらの蛍光強度の５０％を喪失するので、ＣＦＳＥ標識は、細胞分裂の数がモニターされるのを可能とする。野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）混合リンパ球細胞懸濁液をＣＦＳＥで標識して、細胞懸濁液中に０．５μＭ ＣＦＳＥ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の濃度を作り出した。次いで、細胞懸濁液を３７℃で１０分間インキュベートした。標識の後、ＦＣＳを５％最終濃度まで加え、細胞を直ちに遠心し、氷冷ＰＢＳで洗浄した。野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）混合リンパ球細胞の増殖は、２．５μｇ／ｍｌの濃度において抗−ＣＤ３抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｐｉｅｇｏ，Ｃａ，ｃｌｏｎｅ １４５−２ｃ１１）によって刺激した。
【０１０５】
次いで、細胞を３７℃にて２日間インキュベートした。その時点において、細胞をＣＤ４＋およびＣＤ８＋に対するマーカー（ＣＤ４−ＣｙｃｈｒｏｍｅまたはＣＤ８−Ｃｙｃｈｒｏｍｅ）で標識し、フローサイトメトリーによって分析した。
【０１０６】
以下のデータは、ＣＤ４＋ならびにＣＤ８＋の双方の陽性Ｔ細胞がＴＣＣＲノックアウト細胞において過剰増殖性であることを示す（表８参照）。図１０および１１は、インキュベーション時間の間において０、１、２、３、４または５回の細胞分裂を受けた細胞の数を示す。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞双方について、より多くの細胞が、野生型におけるよりもノックアウトにおいて３、４、５回の分裂を受けた（すなわち、ノックアウト細胞についての系はＣＤ４＋細胞（図１４）およびＣＤ８＋細胞（図１５）双方において右側にシフトする）。
【０１０７】
【化９】
実施例２
ＴＣＣＲを発現するマウスはＥＡＥに対して感受性が低い。
【０１０８】
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）についての動物モデルとして働くＣＮＳの自己免疫障害である。ＭＳと同様に、ＥＡＥは、ミエリンに対する免疫−媒介損傷が観察可能な兆候をもたらす脱髄障害である。ＥＡＥはＣＤ４＋Ｔｈ１細胞（Ｆｉｆｅら、２００１，Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．，１６６：７６１７−７６２４）およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）（Ｈｕｓｅｂｙ，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９４（５）：６６９−６７６）双方によって媒介されると考えられる。ＥＡＥに対するＴＣＣＲの効果を調べるために、ＥＡＥの臨床的進行をＴＣＣＲを発現する野生型マウス（ＴＣＣＲ＋／＋）およびＴＣＣＲを欠如するノックアウトマウス（ＴＣＣＲ−／−）において調べた。以下に示すように、ＴＣＣＲを発現するマウスは、ＴＣＣＲを欠如するマウスよりもＣＤ４＋ＴｈおよびＣＤ８＋媒介傷害ＥＡＥに対して感受性が低い。
【０１０９】
ノックアウトＴＣＣＲ−／−マウスはＷＯ ０１２９０７０（ｄｅ Ｓａｕｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．）に記載されたように創製し、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに逆−交配させ、Ｎ１２創始細胞から育種した。野生型ＴＣＣＲ＋／＋対照はＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ （Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入したＣ５７Ｂｌ／６マウスであった。
【０１１０】
ＭＯＧ誘導ＥＡＥ
ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫのアミノ酸配列（配列番号：７）を有するＭＯＧ３５−５５ペプチドは、Ｒａｉｎｉｎ Ｑｕａｒｔｅｔ自動ペプチド合成器（Ｒａｉｎｉｎ，Ｏａｋｌａｎｅ，ＣＡ）での９−フルオレニルメトキシカルボニル化学を用いて合成した。ペプチドを樹脂から切断し、移動相において水／アセトニトリル／０．１％ＴＦＡグラジエントを持つ分取用逆相ＨＰＬＣを用いて精製した。ペプチドの同一性は、電子スプレーマススペクトロメトリーによって確認した。
【０１１１】
野生型ＴＣＣＲ＋／＋およびノックアウトＴＣＣＲ−／―マウスを、１００μｌのＴＢＳおよび１００μｌのＣＦＡ（フロイントの完全アジュバント）中の２００μｇのＭＯＧ３５−５５ペプチドを含有する２００μｌのエマルジョンで皮内免疫化して、０日にＥＡＥを誘導した。ＣＡＦは、ＩＦＡ（フロイントの不完全アジュバント）（Ｄｉｆｃｏ−ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を死滅し、乾燥したＭ，ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ａ（Ｄｉｆｃｏ−ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）と８ｍｇ／ｍｌ Ｍ．ｔｕｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの濃度まで混合することによって調製した（各マウスはＣＦＡの成分としての８００μｇの死滅したＭ．ｔｕｔｕｂｅｒｓｕｌｏｓｉｓを受けた）。０日に、および２日に再度、各マウスに１００μｌのＰＢＳ中の２００ｎｇの百日咳トキシン（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ＣＡ）で腹腔内注射して、血液の関門に入るのを助けた。受けた成分の用量は以下の表９にまとめる。
【０１１２】
【化１０】
ＭＢＰ誘導ＥＡＥ
ＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧ（配列番号：８）のアミノ酸配列を有するＡｃ １−１１ペプチドは、Ｒａｉｎｉｎ Ｑｕａｒｔａｔ自動ペプチド合成器（Ｒａｉｎｉｎ，Ｏａｋｌａｎｄ，ＣＡ）にて９−フルオレニルメトキシカルボニル化学を用いて合成した。該ペプチドを樹脂から切断し、移動相における水／アセトニトリル／０．１％ＴＦＡグラジエントでの分取用逆相ＨＰＬＣを用いることによって精製した。ペプチドの同一性は、電子スプレーマススペクトロメトリーによって確認した。
【０１１３】
野生型ＴＣＣＲ＋／＋およびノックアウトＴＣＣＲ−／−マウスは、１００μｌのＣＦＡ（フロイントの完全アジュバント）中の１０μｇのＡｃ １−１１ペプチド（ＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧ）、ミエリン塩基性蛋白質の成分を皮内免疫化して、０日にＥＡＥを誘導した。ＭＯＢ−誘導ＥＡＥについて前記したように、ＣＦＡは、ＩＦＡ（フロイントの不完全アジュバント）を、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ａ（死滅しおよび乾燥した）と８ｍｇ／ｍｌ Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの濃度まで混合することによって調製した（各マウスは、ＣＦＡの成分として、８００μｇの死滅したＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを受けた）。２日、および３日に再度、各マウスに、１００μｌのＰＢＳ中の２００ｎｇの百日咳トキシンで腹腔内注射して、血液の関門に入るのを助けた。受けた成分に用量を以下の表１０にまとめる。
【０１１４】
【化１１】
全てのマウスは、１日で出発し、１週間当たり３回臨床的疾患について評価した。病気グレード４に到達したマウスを毎日評価した。グレード５におけるいずれの動物も安楽死させた。５日以内にグレード３以下まで改良されなかったものを安楽死させた。用いた臨床的グレーディングシステムを以下の表１１に示す。
【０１１５】
【化１２】
４０日において、全ての残りの動物を犠牲にし、脳および脊髄を組織学的分析のために切開した。脳を切開し、（各脳についての４つのレベルの各々からの１つの切片）、Ｈ＆Ｅ（ヘマトキシリンおよびエオシン染色、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で染色して、炎症を評価した。脊髄を切片化し（各脊髄について３つの異なるレベルの各々から４つの切片）、Ｈ＆Ｅで染色して、炎症を評価し、ルキソールファストブルー（Ｌｕｘｏｌ Ｆａｓｔ Ｂｌｕｅ）（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）で染色して、脱髄を評価した。各スライドについて、最高炎症および脱髄双方についての最高スコアおよび平均スコア（各スライドでの全ての切片の平均）を報告した。用いた炎症グレーディングシステムを以下の表１２に示す。
【０１１６】
【化１３】
用いた脱髄グレーディングシステムを以下の表１３に示す。
【０１１７】
【化１４】
野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）におけるＭＯＧ（ミエリン稀突起神経膠細胞糖蛋白質）誘導ＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）の臨床的進行は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）マウスにおける誘導されたＥＡＥよりもひどくはなかった（図８参照）。同様に、野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスにおけるＭＢＰ（ミエリン塩基性蛋白質）誘導ＥＡＥの臨床的進行は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）マウスにおける誘導されたＥＡＥよりひどくはなかった（図９参照）。
【０１１８】
図８および９に示すように、ＴＣＣＲを欠如する動物（ＴＣＣＲ−／−）はＥＡＥのよりひどい臨床的兆候を示し、他方、ＴＣＣＲを発現するマウス（ｗｔ）はよりひどくない兆候および進行を示し、これは、ＥＡＥのような、自己免疫障害に対するＴＣＣＲ活性の保護効果を示唆する。
【０１１９】
臨床データは、図１０ないし１３に示したように、組織学的分析によってさらに支持される。ＴＣＣＲ−／−マウスは、ＷＴマウスよりも高い炎症および高い脱髄スコアを有し、ＴＣＣＲを発現するマウス（ｗｔ）は、ＴＣＣＲを欠如するマウス（−／−）よりもＣＤ４＋Ｔｈ１およびＣＤ８＋媒介障害ＥＡＥに対して感受性が低かったことを示す。
【０１２０】
まとめると、データは、ＥＡＥのような、自己免疫障害に対するＴＣＣＲ活性の保護的、弱める、または抑制的効果を示唆する。
【０１２１】
実施例３
ＴＣＣＲアゴニストでの自己免疫障害の治療
実施例２について記載したように、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）に対する動物モデルとして働くＳＭＳのＣＤ４＋Ｔｈ１またはＣＤ＋８媒介自己免疫障害である。自己免疫障害の進行およびコースに対する投与されたＴＣＣＲアゴニストの効果を調べるために、ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストを、誘導されたＥＡＥのようなＭＳの実験的モデル系において投与する。ＥＡＥは、例えば、実施例２について前記したようにマウスにおいて開始させる。ＥＡＥの臨床的進行は、ＴＣＣＲを発現し（ＴＣＣＲ＋／＋）、ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストを受けるマウスにおいて評価する。ＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストで処理したマウスは、病気の低下した臨床的兆候または進行を示し、および／または未処理ＴＣＣＲ＋／＋対照よりも自己免疫障害に対して感受性が低いと予測される。
【０１２２】
実施例４
ＴＣＣＲアゴニストでの動物モデルにおける関節炎の治療
自己免疫障害に対するＴＣＣＲアゴニストの抑制的および／または保護的効果は、数個の利用可能な動物モデル系のうちの１つでテストすることができる。マウスにおけるコラーゲン−誘導関節炎は、自己免疫障害、慢性関節リウマチに対する１つのモデルである。このモデルは、例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、１９９９，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９６：２２１０−２２１４に記載されている。マウスにおけるコラーゲン−誘導関節炎は、リンパ球浸潤および滑膜肥大を含めたヒト慢性関節リウマチでの多くの特徴を共有する。
【０１２３】
コラーゲン−誘導関節炎の臨床的進行は、マウス、例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたは他の適当な実験室動物において調べる。関節炎は、例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、ｓｕｐｒａで引用された方法、または他の公知の方法によってテスト動物において誘導される。一般に、モデル動物は、異なる動物種に由来するＩＩ型コラーゲンをテスト動物に注射することによって、例えば、ウシＩＩ型コラーゲンをマウスに注射することによって創生する。該コラーゲンはフロイントの完全アジュバントのようなアジュバントと組み合わせることができる。
【０１２４】
ＴＣＣＲリガンドＩＬ−２７のようなＴＣＣＲアゴニストは、例えば、関節炎−誘導剤の投与に先立って、投与の間に、および／または投与の後に、あるいは関節炎兆候の開始に先立って、開始の間に、および／または開始後にテスト動物に投与される。投与および用量の方法は変化させることができ、例えば、１プレおよび／またはポスト用量における、２以上のプレおよび／またはポスト用量の期間にわたっての毎日の１日当たり複数用量における用量、またはＴＣＣＲ受容体を発現する細胞へペプチド剤を投与するために知られた他の適当な用量における、単体中のＩＬ−２７のようなペプチドリガンドの投与を含むことができる。代替方法は、例えば、ＩＬ−２７の双方のサブユニット、または連結されたＩＬ−２７サイトカインを発現する組換えアデノウイルスからのペプチドを発現させることによるＩＬ−２７のようなペプチドリガンドの送達を含む。
【０１２５】
臨床的疾患の進行は、例えば、ＭｃＩｎｄｏｅら、ｓｕｐｒａに記載されたように、テストおよび対照動物においてモニターされる。例えば、該疾患の物理的および化学的特徴をモニターし、経時的にスコア取りする。動物は、主な関節のリンパ球浸潤、滑膜肥大、滑膜液サイトカイン含有量等について分析することができる。これらのパラメータを、テスト動物および対照の間で比較する。実施例１および２に示されたＴＣＣＲの保護的／抑制的効果を保つために、ＴＣＣＲアゴニストでの動物における誘導された関節炎の治療は、未処理対照と比較して、よりひどくない臨床的兆候、結果、および／または物理的または化学的特徴で証明された、抑制的および／または保護的効果を供すると予測される。
【０１２６】
実施例５
ＴＣＣＲに対するモノクローナル抗体の調製
ｈＴＣＣＲに対するモノクローナル抗体は、ｈＴＣＣＲの細胞外ドメインを用いて調製した。免疫原は、精製目的でカルボキシ−末端に付加された８つのヒスチジン残基をタグとして加えた膜貫通部分（配列番号：１の残基５１７ないし５３８）を欠如するｈＴＣＣＲ（配列番号：１）であった。ｈＴＣＣＲ（ＥＣＤ）−（Ｈｉｓ）８ペプチドは、ニッケルＮＴＡアフィニティークロマトグラフィーを介して精製した。
【０１２７】
ｈＴＣＣＲ（ＥＣＤ）−（Ｈｉｓ）８ペプチド（１ないし２マイクログラム）を２５マイクロリットルのＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）と組み合わせ、合計１２回の注射のために毎週２回、野生型ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）の肉趾に注射した。
【０１２８】
４２日に、マウスを犠牲にし、脾臓細胞を収穫した。脾臓細胞を（３５％ポリエチレングリコールを用いて）マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，Ｎｏ．ＣＲＬ１５９７から入手可能なＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１）に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が創製され、これを、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン）培地を含有する９６ウェル組織培養プレート中で平板培養して、非−融合細胞、骨髄腫ハイブリットおよび脾臓細胞ハイブリットの増殖を阻害した。
【０１２９】
次いで、ハイブリドーマ細胞を、ＴＣＣＲへの抗体結合についてＥＬＩＳＡアッセイにおいてスクリーニングした。ＴＣＣＲに対する反応性を有する同定されたハイブリドーマ培養は培養：２６８５、２６８６、および２６８８を含んだ。ハイブリドーマ培養２６８６（抗体２６８６）は、２００４年１２月１５日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．に寄託し、受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７を有する。
【０１３０】
実施例６
モノクローナルＡｂ２６８６はヒトＴＣＣＲを活性化する。
【０１３１】
組換えＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞を用いて、ＴＣＣＲを活性化する抗−ＴＣＣＲ抗体の能力を分析した。Ｂａ／Ｆ３細胞はマウスＩＬ−３依存性細胞系である。ＴＣＣＲの候補アゴニストは、該候補アゴニストに応答してのＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を測定することによって評価することができる。細胞増殖の結果、ポリヌクレオチドの増大した合成のため増大した［３Ｈ］―チミジンの取込がもたらされる。細胞増殖は、例えば、［３Ｈ］―チミジン接種を測定することによってモニターされる。以下に示すように、モノクローナルＡＢ２６８６は、ＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を誘導することによってＴＣＣＲアゴニスト活性を示した。
【０１３２】
Ｂａ／Ｆ３細胞（Ｐａｌａｃｉｏｓら、１９８５、Ｃｅｌｌ，４１：７２７−７３４）は、増殖および生存双方に対してＩＬ−３を必要とするマウス造血系因子−依存性細胞系である。Ｂａ／Ｆ３細胞を、１０％胎児子牛血清（ＧＩＢＣＯ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）および１００ｐｇ／ｍＬマウスＩＬ−３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を補足したＲＰＭＩ−１６４０倍値（ＧＩＢＣＯ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で培養した。
【０１３３】
ネオマイシン耐性遺伝子を持ち、ヒトまたはマウスＴＣＣＲをコードするポリヌクレオチド配列いずれかを含有するｐＭＳＣＶベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）をエレクトロポレーションによってＢａ／Ｆ３細胞にトランスフェクトした。安定なトランスフェクタントを１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）で処理して、ネオマイシン耐性に対する遺伝子を含有するベクターでトランスフェクトされている安定な真核生物細胞系を選択した。次いで、ＴＣＣＲを認識するフィコ−エリスリン標識モノクローナル抗体で細胞を処理した。ＴＣＣＲを発現する標識されたクローンをＦＡＣＳによって選択した。
【０１３４】
ＴＣＣＲ発現細胞を、ＩＬ−３を加えていない１０％胎児子牛血清を補足したＲＰＭＩ−１６４０倍値で洗浄した。次いで、細胞を、１０％胎児子牛血清を補足した１００μｌのＲＰＭＩ−１６４０倍値中にてウェル当たり５×１０３細胞にて二連で平板培養した。精製された組換えマウスＩＬ−３（陽性対照）または精製された抗−ＴＣＣＲ（ヒト）モノクローナル抗体：２６８５−ＩｇＧ２ａ、２６８６−ＩｇＧ１、２６８８−ＩｇＧ１、対照イソタイプＩｇＧ２ａ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または対照イソタイプＩｇＧ１（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を、４：１希釈シリーズとして、表１４にて以下に示す濃度で加えた。
【０１３５】
【化１５】
４８時間後、１μＣｉの［３Ｈ］―チミジン（Ａｍｅｒｓｃｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を各ウェルに加えた。さらに６時間後、［３Ｈ］―チミジンの細胞への取り込みを、β−カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｔｏｐｃｏｕｎｔ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で測定した。
【０１３６】
結果を図２ないし４に示す。モノクローナル抗体２６８５−ＩｇＧ２ａ、２６８６−ＩｇＧ１、２６８８−ＩｇＧ１、および対照イソタイプＩｇＧ２ａまたは対照イソタイプＩｇＧ１に応答してのヒトＴＣＣＲの発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を図２に示す。抗体２６８６は、テストした他の抗体のいずれよりも［３Ｈ］―チミジンの有意により大きな取り込みを誘導し、これは、抗体２６８６が、Ｂａ／Ｆ３細胞において発現されたヒトＴＣＣＲの効果的なアゴニストであることを示す。
【０１３７】
マウスＩＬ−３（陽性対照）または抗体２６８６いずれかに応答してのヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を図３に示す。示されたように、抗体２６８６は、陽性対照ＩＬ−３のそれよりも小さいに拘らず、ヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞においてＴＣＣＲ応答を生じさせるのに効果的であった。
【０１３８】
ヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞は、図４に示すように、マウスＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞よりも抗体２６８６での処理に応答しての有意により大きな量の［３Ｈ］―チミジンを取り込んだ。このデータは、抗体２６８６がヒトＴＣＣＲの特異的アゴニストであることを示し、マウスＴＣＣＲに対して交差反応性を示さない。
【０１３９】
これらの研究は、示されたアゴニスト抗体のようなＴＣＣＲのアゴニストがＴＣＣＲ受容体に結合し、それを刺激して、ＴＣＣＲ−媒介生物学的活性、ここでは、Ｂａ／Ｆ３細胞の増殖を誘導することができるのを示す。したがって、データは、ＴＣＣＲアゴニストがイン・ビボにてＴＣＣＲ−媒介活性を直接的にまたは間接的に誘導するのに有用であることを示唆する。
【０１４０】
実施例７
他のＴＣＣＲアゴニストの同定
ＴＣＣＲアゴニスト活性を有する剤を同定し、確認するために、ＩＬ−２７の断片およびＴＣＣＲの改変体を含めた推定ＴＣＣＲアゴニストをＴＣＣＲ結合にて分析した。ＴＣＣＲの結合はイン・ビトロまたはイン・ビボ結合にて分析することができる。例えば、潜在的アゴニストを、実施例３にて前記したように、組換えＴＣＣＲを発現するように作成されたＣＯＳ細胞またはＢａ／Ｆ３細胞のような、ＴＣＣＲを発現する細胞に投与し、潜在的アゴニストに対する細胞応答を測定する。
【０１４１】
受容体結合は、融合蛋白質、例えば、ヒトＩｇＧのＦｃドメインを含有するイムノアドヘシンとして潜在的にペプチドアゴニストを発現させることによって分析することもできる。受容体−リンガンド結合は、例えば、該イムノアドヘシンをＴＣＣＲ発現細胞と相互作用させることによって検出される。結合したイムノアドヘシンは、Ｆｃ融合ドメインを認識する蛍光試薬を用い、微視的に可視化することができる。結合は蛍光の分析によって、または他の公知の方法によって定量することができる。
【０１４２】
ＴＣＣＲのアゴニストは、ＩＬ−１０またはＳＯＣＳ−３の発現のようなＴＣＣＲ媒介活性を刺激する候補アゴニストの能力を分析することによってスクリーニングすることができる。例えば、ＴＣＣＲを発現するＴ−リンパ球を候補アゴニストと接触させることができる。ＩＬ−１０および／またはＳＯＣＳ−３の発現は、例えば、ＥＬＩＳＡ、定量的ＰＣＲ、および同様な方法によって測定することができる。対照、例えば、基礎ＩＬ−１０および／またはＳＯＣＳ−３レベルに対するＩＬ−１０および／またはＳＯＣＳ−３の発現の増加はＴＣＣＲ刺激に相関し、これは有用なＴＣＣＲアゴニストの指標となる。
【０１４３】
実施例８
ＩＬ−２７媒介細胞増殖、およびサイトカインの誘導および抑制
野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）ＣＤ４＋細胞双方におけるサイトカイン誘導に対するＩＬ−２７の効果を中性のＴｈ１またはＴｈ２誘導条件下で調べた。野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）ＣＤ４＋細胞双方における細胞リコール増殖に対するＩＬ−２７の効果を、中性のＴｈ１またはＴｈ２誘導条件下で調べた。
【０１４４】
０日に、アゴニスト抗−ＣＤ３モノクローナル抗体（１４５−２Ｃ１１，ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＰＢＳ ｏ／ｎ中５ｕｇ／ｍｌ）で予めコートされた２４ウェルプレート中で、野生型ＣＤ４＋またはＴＣＣＲノックアウトＣＤ４＋細胞をウェル当たり２×１０５細胞にて平板培養した。次いで、個々のウェルにおける増殖を中性、Ｔｈ１バイアシング、またはＴｈ２バイアシング条件下で誘導した。中性条件はＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、抗−ＩＬ−１２抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、抗−ＩＦＮ−γ抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、抗−ＩＬ−４抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびＣＤ−２８（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の添加によって作り出した。Ｔｈ１バイアシング条件は、ＩＬ−２、ＩＬ−１２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、抗−ＩＬ−４抗体、およびＣＤ−２８の添加によって作り出した。Ｔｈ２バイアシング条件は、ＩＬ−２、ＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、抗−ＩＬ−１２抗体、抗−ＩＦＮ−γ抗体、およびＣＤ２８の添加によって作り出した。これらの個々のウェルにおける処理は表１５にて以下に示す。
【０１４５】
【化１６−１】
【０１４６】
【化１６−２】
細胞を３７℃で培養した。上清の試料は２４時間、４８時間、および／または７２時間に採取した。ＥＬＩＳＡを、ＴＮＦ−α、ＩＬ−５、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦに対するプローブ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入したキット）にて上清試料で行った。以下の表１６は、ＩＬ−２７依存性誘導倍数としてのＥＬＩＳＡデータを示す。図１６ＡないしＣは、中性（１６Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１６Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング条件（１６Ｃ）下でのＩＬ−２のＩＬ−２７依存性誘導を示す。図１７ＡないしＣは、中性（１７Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１７Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング条件（１７Ｃ）下でのＩＬ−１０のＩＬ−２７依存性誘導を示す。
【０１４７】
データは、ＩＬ−２７に応答してのＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、およびＩＬ−４の誘導を示す。データはＩＬ−２７に応答してのＩＬ−２、ＩＬ−６、およびＧＭ−ＣＳＦの抑制も示す。データは、ＩＬ−１０が、中性、Ｔｈ１バイアシング、およびＴｈ２バイアシング条件下でＩＬ−２７によって誘導されることを示す。前記したように、ＩＬ−１０は、限定的かつ終了する炎症応答において主な役割を演じる。ＩＬ−１０はＩＬ−２７によって誘導されるので、データは、ＩＬ−２７を用いて、免疫−媒介疾患を治療できることを示唆する。
【０１４８】
【化１７】
ＲＮＡを２４時間、４８時間、および／または７２時間に採取した細胞試料から抽出し、次いで、以下の図１７に示すように、ＳＯＣＳ−１、ＳＯＣＳ−３、ＰＩＡＳ−１、およびＰＩＡＳ−３に対して特異的なプローブで、定量的ＰＣＲ（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標））を行った。
【０１４９】
【化１８】
以下の表１８は、ＩＬ−２７依存性誘導倍数としての定量的ＰＣＲデータを示す。図１８ＡないしＣは、中性（１８Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１８Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング条件（１８Ｃ）下でのＳＯＣＳ−３のＩＬ−２７依存性誘導を示す。
【０１５０】
データは、ＳＯＣＳ−３が中性、Ｔｈ１バイアシング、およびＴｈ２バイアシング条件下でＩＬ−２７によって誘導されることを示す。前記したように、ＳＯＣＳ−３はサイトカインシグナリングを抑制することが知られており、いくつかの剤の抗−炎症効果のメディエーターであることが報告されている。ＳＯＣＳ−３はＩＬ−２７によって誘導されるので、データは、ＩＬ−２７を用いて免疫−媒介疾患を治療することができるのを示唆する。
【０１５１】
【化１９】
中性条件下で処理した前記細胞の試料を７２時間に採取し、ＲＮＡを抽出した。次いで、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ， Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を用いて誘導された発現につき該ＲＮＡを分析した。以下の表１９は、選択された遺伝子についての未処理対照に対する誘導（抑制）倍数としてのＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）データを示す。
【０１５２】
ここに、データは、再度、ＩＬ−１０が中性条件下でＩＬ−２７によって誘導されることを示す。前記したように、ＩＬ−１０は、炎症応答を制限し、および終了させるにおいて主な役割を演じる。ＩＬ−１０はＩＬ−２７によって誘導されるので、データは、ＩＬ−２７を用いて、免疫−媒介疾患を治療することができることを示唆する。
【０１５３】
【化２０】
３日に、細胞をＩＬ−２の存在下であって、およびＩＬ−２７の存在下または不存在下で細胞を増殖させた。具体的には、ＩＬ−２７に予め暴露した２４ウェルプレートからの細胞を１ｍｌの培地中に取り、次いで、２×１０−４ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２７および１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２を含有する３ｍｌの培地と共に６ウェルプレートに沈積させた。ＩＬ−２７に予め暴露されていない細胞を１ｍｌの培地中に取り、次いで、１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２を含有する３ｍｌの培地と共に６ウェルプレートに沈積させた。
【０１５４】
５日に、２×１０−４ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２７および１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２の濃度を有する４ｍｌの培地（ＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）ｗ／１０％ＨｙＣｌｏｎｅ血清）を、ＩＬ−２７に予め暴露した細胞を含有するウェルに加えた。１×１０−５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−２の濃度を有する４ｍｌの培地を、ＩＬ−２７に予め暴露していない細胞を含有するウェルに加えた。
【０１５５】
６日に、細胞を遠心し、次いで、培地（前記したのと同一培地）中にペレットを再度懸濁させ、カウントした。種々のウェルからの細胞カウントを表２０にて以下に示し、図１９に反映させる。
【０１５６】
データは、Ｔｈ１またはＴｈ２バイアシング条件の間に添加されたＩＬ−２７はＣＤ４＋細胞の増殖を低下させることを示し、ＩＬ−２７は、多発性硬化症および慢性関節リウマチのような自己免疫疾患を含めたＣＤ４＋細胞の増殖によって特徴付けられる疾患を治療するのに有用であることを示唆する。
【０１５７】
【化２１】
実施例９
ＩＬ−６誘導増殖のＩＬ−２７抑制
野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）およびノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）ＣＤ４＋細胞のＩＬ−６誘導増殖に対するＩＬ−２７の効果を、抗−ＩＬ−２抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の存在下および不存在下で調べた。
【０１５８】
野生型マウスからの混合脾臓細胞（４×１０５）を９６−ウェルプレート上のウェルに入れた。ノックアウトマウスからの混合脾臓細胞（４×１０５）をプレート上の別々のウェルに入れた。全てのウェルをＰＢＳ ｏ／ｎ中の１００μｌの２ｕｇ／ｍｌ 抗−ＣＤ３でコートした。ウェルを、表２１にて以下に示した実験群に従って処理した。
【０１５９】
【化２２】
細胞３７℃にて培養した。４８時間後、［３Ｈ］−チミジンをもう一晩の間加え、増殖を［３Ｈ］−チミジン取込みによって測定した。各群についての平均ＣＰＭを表２２にて以下に示す。ＩＬ−２中和なくしての増殖を図２０Ａに示す。ＩＬ−２中和有りでの増殖を図２０Ｂに示す。
【０１６０】
【化２３】
データは、抗−ＩＬ−２抗体が存在するか否かに拘らず、ＩＬ−２７が、抗−ＣＤ３によって刺激され、かつＩＬ−６によって増強された増殖を抑制することを示す。抗−ｉｌ−２抗体が存在しない場合、ＩＬ−２７が、抗−ＣＤ３抗体によって刺激される増殖を抑制する。抗−ＩＬ−２抗体は、抗−ＣＤ３抗体によって刺激される増殖を低下させる。しかしながら、ＩＬ−２７の添加は、この効果を部分的に和らげる。
【０１６１】
実施例１０
ＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）欠乏マウスはＥＡＥ超感受性である。
【０１６２】
ＩＬ−２７は、活性化された抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって生産されるリガンドである。ＩＬ−２７は、特異的サブユニット、ＩＬ−２７、およびＩＬ−６Ｒを含めた、多数の他の受容体によって共有されるｇｐ１３０よりなるヘテロダイマー受容体を通じてシグナリングを行う。本明細書中で議論するように、ＩＬ−２７は種々のＳＴＡＴおよびＪａｋ−１を通じてシグナルを活性化するが、支配的なシグナリング事象はＳＴＡＴ−１の活性化であるように見える。ＳＴＡＴ−１の活性化およびＴＨ−１特異的転写因子Ｔ−ｂｅｔの下流誘導を介して、ＩＬ−１２ＲＢ２鎖およびＩＦＮ−ガンマの発現は促進される。Ｉｌ−２７リガンドおよび受容体は図２１にダイアグラムにより示される。
【０１６３】
ＩＬ−２７はＩＬ−１２ファミリーのメンバーであり、サイトカインのＩＬ−６クラスターに属する。図２２参照。ＩＬ−２７、ＥＢＩ３およびｐ２８の２つの成分はＩＬ−１２サブユニットに対する密接な相同性を有する。ＴＣＣＲともいわれるＩＬ−２７受容体（ＩＬ−２７Ｒ）の双方のサブユニットは、種々の白血球にて協調して発現される。最高の発現はＴ細胞およびＮＫ細胞におけるものであるように見える。
【０１６４】
ナイーブな未分化Ｔ細胞（Ｔｈ−０）は、ナイーブなＴｈ−０細胞の成熟Ｔ−ヘルパー細胞への分化を誘導する異なるシグナルに応答する。一般に、２つのタイプのＴ−ヘルパー細胞が知られている；Ｔｈ−１およびＴｈ−２細胞。図２３に図示されるように、ＩＬ−４によるＴｈ−０細胞の刺激はＴｈ−２細胞の発生に導き、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３を生産する。Ｔｈ−２細胞およびサイトカイン産物は液性免疫および抗−蠕虫応答にインパクトを与える。ＩＬ−２７および／またはＩＦＮ−ガンマによるＴｈ−０細胞の刺激は、Ｔ−細胞におけるＩＬ−１２応答性の状態を誘導し、従って、それらはＩＬ−１２の制御下で成熟ＴＨ−１細胞に分化し、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、およびリンホトキシン（ＬＴ）を生産することができる。Ｔｈ−１細胞およびそれらのサイトカイン産物は、細胞−媒介免疫性およびマクロファージ活性化に関与する。
【０１６５】
Ｔｈ−０細胞のＴｈ−１およびＴｈ−２ヘルパー細胞への分化におけるＩＬ−２７の役割のさらなる我々の理解のため、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウス（ＴＣＣＲノックアウト）を前記実施例に記載したように生産した。自己免疫疾患の間におけるＩＬ−２７についての潜在的役割を、実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症についてのマウスモデルを用いて調べた。ＥＡＥを持つマウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞のみの移動がナイーブな受容体マウスにおいてＥＡＥを引き起こしかねないので、ＥＡＥはＴ細胞媒介される。
【０１６６】
実験的ＥＡＥを誘導するために、マウスを、フロイントの完全アジュバント中のミエリン稀突起神経膠細胞糖蛋白質（ＭＯＧ）３５ないし５５ペプチドで免疫化した。野生型（ＷＴ）およびＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）ノックアウトマウスをＭＯＧで免疫化し、前記実施例に記載したようにＥＡＥの証拠について調べた。臨床ＥＡＥスコアを処理後２５日にわたって評価した。
【０１６７】
図２４に示されたデータは、ＩＬ−２７刺激を除去することによって引き起こされたＥＡＥ疾患における仮定された低下の代わりに、ＥＡＥはＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおいて亢進されたことを示す。該マウスはＥＡＥ過剰感受性であるように見え、酷いＥＡＥ疾患を発生した。ＥＡＥ表現型を発現する受容体欠乏マウスから採取された脊髄組織の組織学的分析を図２５に示し、これは、ＥＡＥを持つＩＬ−２７受容体ノックアウトマウスにおける増強された炎症および脱髄を示す。
【０１６８】
この実験に加えて、種々の病原体でのＩＬ−２７受容体欠乏マウスの刺激、ならびに誘導された喘息および肝炎モデルの結果、Ｔｈ−１およびＴｈ−２媒介応答双方が亢進された。これらのデータは、ＩＬ−２７が重要な免疫抑制機能を有することを示す。
【０１６９】
【化２４】
ＩＬ−２７、およびＴ−細胞の分化におけるその可能な役割をさらに研究するために、図２７に図示した手法に従い、ナイーブなＣＤ４＋細胞をＮＡＣＳ−精製し、ＩＬ−２７と共にまたはそれなくして抗−ＣＤ３＋抗体で処理した。ＩＬ−２７でのＴ細胞の刺激は、Ｔｈ−０、Ｔｈ−１またはＴｈ−２へのＴ細胞分極を促進する条件下でなされた。
【０１７０】
簡単に述べると、２４ウェル皿を５μｇ／ｍｌ抗−ＣＤ３（ＢＤ Ｐｈａｒｎｉｎｇｅｎ）で一晩コートした。１．８×１０６ＣＤ４＋Ｔ−細胞の容量を、ＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍｌ）および抗−ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ）の存在下でウェル当たり撒いた。分化のために、以下のサイトカインおよび抗体を加えた：ＴＨ−０（各々５μｇ／ｍｌの抗−ＩＬ−１２、抗−ＩＦＮ−ガンマ、抗−ＩＬ−４）、ＴＨ−１（３．５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１２、５μｇ／ｍｌの抗−ＩＬ−４）、ＴＨ−２（３．５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４、５μｇ／ｍｌの抗−ＩＦＮｇおよび抗−ＩＬ−１２）。ＩＬ−２７を２００ｎｇ／ｍｌの濃度にていくつかの培養に加えた。７２時間後、上清ならびにＲＮＡを単離し、Ｃｈｉｐ、ＲＴ−ＰＣＲ、および／またはＥＬＩＳＡ分析によって特異的サイトカインの生産について分析した。得られたデータを図２８に示し、これは、ＩＬ−２７がＴ−細胞発生に対して顕著な効果を有することを示す。
【０１７１】
ＩＬ−２７は調べたほとんどのサイトカインに対して顕著な効果を有し、この効果は、細胞が分化した条件とは一般には独立していた。ＩＬ−２７は、Ｔｈ−２誘導条件下でＴＮＦαおよびＩＬ−１０、ならびにＩＬ−４を誘導した。同時に、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１７の生産はＩＬ−２７によってかなり抑制された。
【０１７２】
これらの効果のいずれかが良く知られ、かつ優れた免疫抑制サイトカインＩＬ−１０の誘導に対して二次的であるか否かを判断するために、ＩＬ−２７の効果もＩＬ−１０欠乏Ｔ−細胞で調べた。図２９に示すように、サイトカイン生産のＩＬ−２７誘導変調はＩＬ−１０とは独立していた。というのは、ＷＴおよびＩＬ−１０欠乏Ｔ−細胞を比較して、ＩＬ−２またはＧＭ−ＣＳＦ生産においてほとんど差は見られなかったからである。
【０１７３】
イン・ビトロで見られたＩＬ−２７による免疫抑制性ＩＬ−１０の強い誘導にも拘らず（図２８）、ＥＡＥを持つＩＬ−２７Ｒ−／−マウスからのＴ−細胞においてＩＬ−１０の僅かな低下が見られたに過ぎない（図３０）。しかしながら、この人工的なイン・ビトロ観察は、ＩＬ−２７媒介ＩＬ−１０誘導がＥＡＥの間の重要な生物学的プロセスであるという解釈を断じて排除しない。対照的に、それは、ＩＬ−２７誘導ＩＬ−１０誘導をイン・ビボで研究するための我々の自由な実験技術の限界を最も反映するようである。
【０１７４】
実施例１１
ＥＡＥはＴＨ−１７依存性である。
【０１７５】
最近の証拠は、ヘルパーＴ−細胞の新しいサブタイプ、いわゆるＴＨ−１７細胞が、ＥＡＥを含めた多くのプロ−炎症プロセスの鍵となるメディエーターであることを示唆する。これらのＴｈ−１７細胞はＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−６、ＴＮＦ、およびＧＭ−ＣＳＦを生じると報告された。図３１に供されるダイアグラム参照。ＴＨ−１７細胞の発生は貧弱にしか理解されていないが、それは、ＩＬ−１２に対して同様性を持つもう１つのヘテロダイマーサイトカインであるＩＬ−２３に依存すると考えられる。ＩＬ−２３欠乏動物はこのＴ−細胞表現型を効果的に発生させることができず、ＥＡＥおよびＣＩＡに対して抵抗性である。しかしながら、ＩＬ−２３は必要であるように見えるが、ＴＨ−１７細胞分化でイン・ビトロでそれは十分ではない。
【０１７６】
前記で議論したように、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスはＷＴ同腹子と比較してより酷いＥＡＥ疾患を発生させた。ＩＬ−２７シグナリングに対して下流の事象を分析して、ＥＡＥの酷さに対するこの限定的効果で重要な因子を決定した。ＩＬ−２７に応答しての種々のサイトカインの発現を活性化の間に調べた。
【０１７７】
ＩＬ−２７はＩＦＮ−ガンマの生産を促進し、ＩＦＮ−ガンマはＩＬ−１７を阻害することが知られている。データは、ＩＬ−２７が、ＩＦＮ−ガンマよりもより効果的にＩＬ−１７および他のＴｈ−１７サイトカインＩＬ−６およびＧＭ−ＣＳＦの生産を抑制したことを示す（図３３および３４）。さらに、ＥＡＥを持つＴＣＣＲ−／−マウスからのリンパ節細胞は、ＷＴよりもイン・ビトロでの再度の刺激に際してＴｈ−１７サイトカインをより多く分泌した（図３７）。
【０１７８】
ＩＬ−１７生産のＩＬ−２７媒介抑制はＩＦＮ−ガンマとは独立していた。なぜならば、ＩＮＦ−ガンマに対して非応答性とされたＴ−細胞は、以前として、ＩＬ−２７での刺激に際してＩＬ−１７生産を抑制したからである。（図３５）。ＩＦＮ−ガンマシグナリングの不存在下において、基礎ＩＬ−１７生産はより高かった。この理由は不明瞭である。なぜならば、ＷＴ培養においてさえ、ＦＮ−ガンマシグナリングはＩＦＮ−ガンマ中和抗体の添加によってブロックされるからである。かくして、ＩＦＮ−ガンマＲ欠乏マウスにおける高いＩＦ−１７発現は発生段階の改変を反映し（すなわち、ＩＦＮｇＲ欠乏Ｔ−細胞はＩＦＮｇＲの発現よりもＷＴ−細胞とはより多くにおいて異なり）、あるいは細胞内ＩＦＮｇループを反映できるであろう。リガンドおよび受容体が共発現される細胞において、シグナリングは後期分泌経路内で起こり得るが、そのようなシグナリングは細胞内のものであり、中和抗体によってブロックされないであろう。
【０１７９】
Ｔｈ−１７細胞はＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおいて調節不調であるかを判断するために、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスをＣＦＡにおけるＭＯＧで免疫化した。リンパ節の排出を１４日において排除し、Ｘ・ビボにてＭＯＧで再度刺激した。ＩＬ−２７Ｒ欠乏Ｔ細胞を含有するリンパ節上清は、有意に増大したレベルのＩＬ−１７を発現した（図３７および３８）。
【０１８０】
さらに、脳および脊髄（ＥＡＥにおける炎症の現実の部位）の免疫浸潤物は、より多くの細胞がＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおいて浸潤することを明らかとした。さらに、これらの細胞のより高いパーセンテージは、細胞内染色によって分析した場合にＩＬ−１７陽性であった。一緒に考え合わせると、これらの２つの観察は脊髄におけるＩＬ−１７の概略２倍発現に翻訳される（図３９参照）。
【０１８１】
ＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−２７双方はＳＴＡＴ−１を活性化し、ＳＴＡＴ−１ノックアウトは増大したＩＬ−１７を生じさせる。従って、ＩＬ−２７は、ＳＴＡＴ−１を活性化することによってＩＬ−１７を抑制することができる。この関係は、ＳＴＡＴ−１ノックアウトマウスから得られた細胞におけるＩＬ−１７のＩＬ−２７媒介抑制を分析することによって調べた。ＳＴＡＴ−１の不存在下においては、ＩＬ−２７はＩＬ−１７を抑制せず、これは、該抑制がＳＴＡＴ−１によって媒介されることを示す。ＳＴＡＴ−１の不存在下においては、ＩＬ−２７はＩＬ−１７のインデューサーとなる。この逆行に対するメカニズムの基礎は知られていないが、ＩＬ−２７によるＳＴＡＴ−３の活性化はこの効果において役割を演じると推定するのは公正である。なぜならば、他のＩＬ−１７誘導サイトカイン（顕著には、ＩＬ−２３）は、ＳＴＡＴ−１を活性化せずにＳＴＡＴ−３を通じてシグナリングを行うからである（図３６参照）。
【０１８２】
まとめると、ＩＬ−２７受容体（ＴＣＣＲ）欠乏マウスはＥＡＥ−過剰感受性である。ＩＬ−２７はイン・ビトロにてＴｈ−１７サイトカインＩＬ−１７、ＩＬ−６、およびＧＭ−ＣＳＦを効果的に抑制した。さらに、ＥＡＥを持つＩＬ−２７受容体欠乏マウスは野生型よりも多くＴｈ−１７サイトカインを生産する。ＩＬ−２７は、Ｔｈ−１７から免疫応答を外すことによってＥＡＥを抑制することができる。
【０１８３】
実施例１２
ＩＬ−６はＴｈ−１７細胞を誘導する。
【０１８４】
図４１に図示されたように、ＩＬ−２３は必要であるが、サイトカインＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＮＦを生じるＴｈ−１７細胞へのＴｈ−０細胞の分化には十分ではない。ＩＬ−２３が十分でない１つのありそうな理由は、Ｔｈ−０細胞はＩＬ−２３受容体を発現せず、従って、ＩＬ−２３非応答性であることである。従って、Ｔｈ−０細胞においてＩＬ−２３Ｒを誘導することができる因子は、ＴＨ−１７分化経路の絶対的成分である。
【０１８５】
Ｔｈ−１（ＩＦＮ−ｇ）およびＴＨ−２（ＩＬ−４）細胞のエフェクターサイトカインもまたこれらの細胞の発生に参画し、よって、フィードバックループの安定化を供するので、我々は、ＴＨ−１７エフェクターサイトカインの１つは、同様に、ＴＨ−１７発生に参画しなければならないと理由づけた。ＴＨ−１７エフェクターサイトカインの中では、ＩＬ−６は最も有望に見える。なぜならば、その受容体はナイーブなＴ−細胞で発現されるからであり、および最後に分化されたＴ−細胞よりもＩＬ−６の他の源（最も顕著には抗原提示細胞）があるからである。加えて、ＩＬ−６ノックアウトマウスはＥＡＥ耐性である（図４２参照）。
【０１８６】
野生型およびＩＬ−２７受容体ノックアウトマウスは、単独で、またはＩＬ−２７およびＩＬ−２３と組み合わせて、ＩＬ−６への応答性について調べた。図４３に示すように、ＩＬ−６はＴｈ−１７軸を誘導した。ＩＬ−６単独での処理はＩＬ−２３受容体を刺激し、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ生産も刺激した。興味深いことには、共投与されたＩＬ−２７はＩＬ−２３受容体およびＩＬ−１７の生産のＩＬ−６刺激増加を低下させ、または排除した（図４３）。ＩＬ−２３はＩＬ−２３受容体およびＩｌ−１７生産の刺激に対する僅かな効果を有し、これは、ＩＬ−６単独で示された大きな刺激に対して付加的であるように見えた。この組合せへのＩＬ−２７の添加もまた、該応答を低下させ、または排除した。再度刺激したリンパ節細胞から採取したｍＲＮＡは、野生型対照と比較してＩＬ−２３受容体ノックアウトにおけるＩＬ−２３受容体の誘導を示した（図４３参照）。
【０１８７】
増殖アッセイにおけるＩＬ−６の効果をさらに比較し、ＩＬ−６は野生型およびＴＣＣＲノックアウトマウス双方において精製されたＴ−細胞の増強された増殖を大いに刺激した。ＩＬ−２７の添加は、野生型細胞においてＩＬ−６誘導増殖を完全に中和した。しかしながら、この低下はＴＣＣＲノックアウトマウスでは見られず、これは、ＩＬ−２７がＩＬ−６の優れた増殖効果に拮抗することを示す。図４４参照。従って、ＩＬ−６駆動ＴＨ−１７分化を含めた、ＩＬ−２７はいくつかのレベルでのＩＬ−６アンタゴニストであるように見える。
【０１８８】
実施例１３
Ｉｌ−２７の役割
図４６に示すように、ＩＬ−２７はＴ細胞の分化、特に、複数レベルにおけるＴｈ−１７細胞の発生にインパクトを与える。ＩＬ−２７はＩＬ−１０、ＩＬ−４の生産、およびＴｈ−１細胞の発生を刺激するが、それは、Ｔｈ−１７細胞の生産、Ｔｈ−１７細胞サイトカインＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦの生産も抑制する。
【０１８９】
本明細書における全ての刊行物および特許出願は、本発明が関係する分野における通常の技量のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、あたかも各個々の刊行物および特許出願が参照により具体的かつ個々に示されるようなのと同一程度に参照により一体化される。
【０１９０】
本発明を、種々の特別なおよび好ましい具体例および技術を参照して記載した。しかしながら、本発明の精神および範囲内にありつつ、多くの変形および修飾をなすことができることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１９１】
【図１】図１は、ＴＣＣＲ／ＩＬ−２７受容体複合体の人工物の模式図である。
【図２】図２は、モノクローナル抗体：２６８５−ＩｇＧ２ａ、２６８６−ＩｇＧ１、２６８８−ＩｇＧ１、対照イソタイプＩｇＧ２ａ、および対照イソタイプＩｇＧ１に応答してヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を示すグラフである。
【図３】図３は、マウスＩＬ−３（陽性対照）および抗体２６８６に応答してのヒトＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞の増殖を示すグラフである。
【図４】図４は、抗体２６８６に応答しての、ヒトＴＣＣＲ、マウスＴＣＣＲを発現するＢａ／Ｆ３細胞、およびいずれも発現しない対照細胞の増殖を示すグラフである。
【図５】図５は、ＴＣＣＲを発現しない脾臓細胞の増殖と比較した、抗―ＣＤ３刺激に応答してＴＣＣＲを発現する脾臓細胞の増殖を示すグラフである。
【図６】図６は、ＴＣＣＲを発現しないＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖と比較した、抗−ＣＤ３刺激に応答してＴＣＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図７】図７は、ＴＣＣＲを発現しないＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較した、抗−ＣＤ３刺激と応答してＴＣＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図８】図８は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスにおけるＭＯＧ誘導ＥＡＥの臨床的進行を示すグラフである。
【図９】図９は、ノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスにおけるＭＢＰ誘導ＥＡＥの臨床的進行を示すグラフである。
【図１０】図１０は、ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスのための脳および脊髄切片についての平均組織学的炎症スコアを示すグラフである。
【図１１】図１１は，ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスについての脳および脊髄切片についての平均組織学的脱髄スコアを示すグラフである。
【図１２】図１２は、ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスについての脳および脊髄切片での最大組織学的炎症スコアを示すグラフである。
【図１３】図１３は、ＥＡＥモデルにおけるノックアウト（ＴＣＣＲ−／−）および野生型（ＴＣＣＲ＋／＋）マウスについての脳および脊髄切片での最大組織学的脱髄スコアを示すグラフである。
【図１４】図１４は、ＣＦＳＥ標識アッセイにおいてＴＣＣＲを発現しないＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖と比較した、抗−ＣＤ３刺激に応答してのＴＣＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図１５】図１５は、ＣＦＳＥ標識アッセイにおいてＴＣＣＲを発現しないＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較して、抗−ＣＤ３刺激に応答してＴＣＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
【図１６】図１６ＡないしＣは、中性（１６Ａ）Ｔｈ１バイアシング（１６Ｂ）およびＴｈ２バイアシング（１６Ｃ）条件下での、種々の時点における、ＩＬ−２７での処理に応答してのＩＬ−２の誘導を示すグラフである。
【図１７】図１７は、中性（１７Ａ）、Ｔ５１バイアシング（１７Ｂ）およびＴｈ２バイアシング（１７Ｃ）条件下での、種々の時点における、ＩＬ−２７での処理に応答しての、ＩＬ−１０の誘導を示すグラフである。データはＬ−２７依存性誘導の倍数として表される。
【図１８】図１８ＡないしＣは、中性（１８Ａ）、Ｔｈ１バイアシング（１８Ｂ）、およびＴｈ２バイアシング（１８Ｃ）条件下での、種々の時点における、ＩＬ−２７での処理に応答してのＳＯＣＳ−３の誘導を示すグラフである。データはＬ−２７依存性誘導の倍数として表される。
【図１９】図１９は、中性、Ｔｈ１バイアシング、およびＴｈ２バイアシング条件下での、ＩＬ−２７処理に応答してのＣＤ４＋細胞の増殖を示すグラフである。
【図２０】図２０ＡないしＢは、抗−ＩＬ−２抗体の不存在（２０Ａ）または存在（２０Ｂ）におけるＩＬ−２７および／またはＩＬ−６処理に応答しての脾臓細胞の増殖を示すグラフである。
【図２１】図２１は、ＩＬ−２７およびその受容体ＩＬ−２７Ｒ（ＴＣＣＲ）のダイアグラムである。
【図２２】図２２は、ＩＬ−１２サイトカイン群内で、サイトカインのＩＬ−２７ないしＩＬ−６クラスターの関係を示すダイアグラムである。
【図２３】図２３は、ヘルパーＴ−細胞の分化を示すダイアグラムである。
【図２４】図２４は、ＩＬ−２７Ｒ欠乏マウスにおけるＥＡＥに対する過敏を示すグラフである。
【図２５】図２５は、野生型およびＩＬ−２７ＲノックアウトマウスにおけるＥＡＥ表現型の組織学的分析を示す。
【図２６】図２６は、Ｔ−細胞におけるＩＬ−２７の関係をテストするプロトコルの模式図である。
【図２７】図２７は、Ｔ−細胞発生に対するＩＬ−２７の効果のテストの結果を示す。ＩＬ−２７に応答してのサイトカイン低下を、以下のサイトカイン：ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、ＴＦＮ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＫ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１７についての野生型対照と比較する。
【図２８】図２８は、ＩＬ−１０、ＩＬ−２７、およびＩＬ−１０およびＩＬ−２７の組み合わせにおけるＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦ生産の結果をグラフで示す。
【図２９】図２９は、ＩＬ−２７に応答してのＩＬ−１０の強力な誘導、ＩＬ−１０ノックアウトマウスにおけるＥＡＥの重症度をグラフで示す。
【図３０】図３０は、ＥＡＥにおけるＴＨ−１７の役割を示すグラフである。
【図３１】図３１は、ＥＡＥ病についてのＩＬ−２３およびＴＨ−ＩＬ−１７細胞の要件をグラフで示す。
【図３２】図３２は、ＩＬ−２７によるＴＨ−ＩＬ−１７サイトカインの抑制をグラフで示す。
【図３３】図３３は、ＩＬ−２７によるＩＬ−１７の抑制をグラフで示す。
【図３４】図３４は、ＩＬ−２７によって媒介されるＩＬ−１７の抑制がＩＦＮｇが非依存性であることをグラフで示す。
【図３５】図３５は、ＩＬ−２７によるＩＬ−１７の抑制がＳＴＡＴ−１によって媒介されることをグラフで示す。
【図３６】図３６は、ＩＬ−１７−Ｒノックアウトマウスの再度刺激されたリンパ球からのＩＬ−１７−ＲノックアウトマウスからのＴＨ−ＩＬ−１７サイトカインの分泌をグラフで示す。
【図３７】図３７は、ＩＬ−２７−Ｒ欠乏マウスにおいてＭＯＧまたはＫＬＨを誘導する病気に応答してのＩＬ−１７の生産を示す。
【図３８】図３８は、ＣＮＳに浸潤するＣＤ４Ｔ細胞によるＩＬ−１７発現をグラフで示す。
【図３９】図３９は、Ｔヘルパー分化に対する種々のサイトカインの関係を示すグラフである。
【図４０】図４０は、ＩＬ−６ノックアウトマウスにおけるＥＡＥ耐性を示すグラフである。
【図４１】図４１は、ＴＨ−ＩＬ−１７サイトカインの誘導およびＩＬ−６による応答をグラフで示す。
【図４２】図４２は、ＩＬ−２７によるＩＬ−６増殖効果の拮抗作用を示すグラフである。
【図４３】図４３は、ＩＬ−２７およびＩＬ−６およびＴＨ−ＩＬ−１７発生の役割を示すグラフである。
【図４４】図４４は、ＩＬ−２７の作用の複数レベルを示すグラフである。
【図４５】図４５は、サイトカイン発現の変化を誘導するにおけるＩＬ−２７の役割をグラフで示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＣＣＲアゴニストを投与することを含む自己免疫障害を治療する方法。
【請求項２】
自己免疫障害の治療用の医薬の製造のためのＴＣＣＲアゴニストの使用。
【請求項３】
ＴＣＣＲアゴニストをリンパ球に投与することを含むリンパ球においてＩＬ−１０発現を増加させる方法。
【請求項４】
ＴＣＣＲアゴニストをリンパ球に投与することを含むリンパ球においてＳＯＣＳ３発現を増加させる方法。
【請求項５】
前記ＴＣＣＲアゴニストが抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項６】
前記ＴＣＣＲアゴニストがモノクローナル抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項７】
前記モノクローナル抗体が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７下で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって生産される請求項６記載の方法または使用。
【請求項８】
前記ＴＣＣＲアゴニストがヒト化抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項９】
前記ＴＣＣＲアゴニストが、ＴＨ１応答を減少させ、または抑制することができるＴＣＣＲ改変体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１０】
前記ＴＣＣＲアゴニストが抗体断片または単一鎖抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１１】
前記アゴニストがＴＣＣＲ細胞外ドメインである請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１２】
前記アゴニストがＩＬ−２７またはその部分を含む請求項１ないし４いずれの１記載の方法または使用。
【請求項１３】
前記アゴニストがＩＬ−２７改変体を含む、請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１４】
前記アゴニストが、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０に結合することができるｐ２８の部分を含むＩＬ−２７改変体を含む、請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１５】
前記アゴニストが、ＴＨ１応答を減少または抑制することができるＩＬ−２７の部分、および異種ペプチドを含む融合蛋白質である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１６】
前記異種ペプチドが抗体のＦｃ部分を含む請求項１５記載の方法または使用。
【請求項１７】
前記自己免疫障害が同種異系移植片拒絶である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１８】
前記自己免疫障害が自己免疫甲状腺疾患である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１９】
前記自己免疫障害が自己免疫ブドウ膜網膜炎である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２０】
前記自己免疫障害が巨細胞動脈炎である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２１】
前記自己免疫障害が炎症性腸疾患である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２２】
前記自己免疫障害がインスリン−依存性真性糖尿病である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２３】
前記自己免疫疾患が多発性硬化症である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２４】
前記自己免疫障害が悪性貧血である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２５】
前記自己免疫障害が乾癬である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２６】
前記自己免疫障害が慢性関節リウマチである請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２７】
前記自己免疫障害がサルコイドーシスである請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２８】
前記自己免疫障害が強皮症である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２９】
前記自己免疫障害が全身エリテマトーデスである請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３０】
前記自己免疫障害がＴｈ１応答によって少なくとも部分的に媒介される請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３１】
前記自己免疫障害がＣＤ８＋Ｔ−細胞増殖によって少なくとも部分的に媒介される請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３２】
ＴＣＣＲアゴニストをスクリーニングする方法であって、
ＴＣＣＲを発現する細胞を候補ＴＣＣＲアゴニストと接触させる工程；
該候補ＴＣＣＲアゴニストに応答してＴＣＣＲ−活性化遺伝子の発現を分析する工程；そして、
該ＴＣＣＲ−活性化遺伝子の発現の増加を該候補ＴＣＣＲアゴニストの活性と相関させる工程；
を含む、方法。
【請求項３３】
前記ＴＣＣＲ−活性化遺伝子がＩＬ−１０、ＳＯＣＳ−３、または双方を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記ＴＣＣＲ−活性化遺伝子がＳＯＣＳ−３を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞がＴ−リンパ球である請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
前記分析が定量的ＰＣＲ分析を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３７】
前記分析がイムノアッセイ分析を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３８】
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７の下で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって生産されるモノクローナル抗体。
【請求項３９】
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７の下で寄託されたハイブリドーマ細胞株。
【請求項４０】
ＩＬ−２７またはそのアゴニストを投与することを含む免疫応答を治療または抑制する方法。
【請求項４１】
前記免疫応答がＴｈ−１７細胞によって媒介される請求項１記載の方法。
【請求項４２】
前記免疫応答がＴｈ−１またはＴｈ２媒介応答である請求項１記載の方法。
【請求項４３】
前記免疫応答が過剰炎症応答である請求項１記載の方法。
【請求項４４】
前記免疫応答が自己免疫応答である請求項１記載の方法。
【請求項４５】
前記ＩＬ−２７がＩＬ−１７生産を抑制する請求項１記載の方法。
【請求項４６】
ＩＬ−２７またはそのアゴニストを投与することを含むＩＬ−１７、ＩＬ−６、またはＧＭ−ＣＳＦ生産を阻害する方法。
【請求項４７】
ＩＬ−６のアンタゴニストまたはその受容体を投与することを含む免疫応答を治療または抑制する方法。
【請求項４８】
前記アンタゴニストが抗体、アプトマー、またはその受容体でＩＬ−６の活性化をブロックする小分子アンタゴニストである請求項４７記載の方法。
【請求項１】
ＴＣＣＲアゴニストを投与することを含む自己免疫障害を治療する方法。
【請求項２】
自己免疫障害の治療用の医薬の製造のためのＴＣＣＲアゴニストの使用。
【請求項３】
ＴＣＣＲアゴニストをリンパ球に投与することを含むリンパ球においてＩＬ−１０発現を増加させる方法。
【請求項４】
ＴＣＣＲアゴニストをリンパ球に投与することを含むリンパ球においてＳＯＣＳ３発現を増加させる方法。
【請求項５】
前記ＴＣＣＲアゴニストが抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項６】
前記ＴＣＣＲアゴニストがモノクローナル抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項７】
前記モノクローナル抗体が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７下で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって生産される請求項６記載の方法または使用。
【請求項８】
前記ＴＣＣＲアゴニストがヒト化抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項９】
前記ＴＣＣＲアゴニストが、ＴＨ１応答を減少させ、または抑制することができるＴＣＣＲ改変体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１０】
前記ＴＣＣＲアゴニストが抗体断片または単一鎖抗体である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１１】
前記アゴニストがＴＣＣＲ細胞外ドメインである請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１２】
前記アゴニストがＩＬ−２７またはその部分を含む請求項１ないし４いずれの１記載の方法または使用。
【請求項１３】
前記アゴニストがＩＬ−２７改変体を含む、請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１４】
前記アゴニストが、ＴＣＣＲおよびｇｐ１３０に結合することができるｐ２８の部分を含むＩＬ−２７改変体を含む、請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１５】
前記アゴニストが、ＴＨ１応答を減少または抑制することができるＩＬ−２７の部分、および異種ペプチドを含む融合蛋白質である請求項１ないし４いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１６】
前記異種ペプチドが抗体のＦｃ部分を含む請求項１５記載の方法または使用。
【請求項１７】
前記自己免疫障害が同種異系移植片拒絶である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１８】
前記自己免疫障害が自己免疫甲状腺疾患である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１９】
前記自己免疫障害が自己免疫ブドウ膜網膜炎である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２０】
前記自己免疫障害が巨細胞動脈炎である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２１】
前記自己免疫障害が炎症性腸疾患である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２２】
前記自己免疫障害がインスリン−依存性真性糖尿病である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２３】
前記自己免疫疾患が多発性硬化症である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２４】
前記自己免疫障害が悪性貧血である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２５】
前記自己免疫障害が乾癬である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２６】
前記自己免疫障害が慢性関節リウマチである請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２７】
前記自己免疫障害がサルコイドーシスである請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２８】
前記自己免疫障害が強皮症である請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２９】
前記自己免疫障害が全身エリテマトーデスである請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３０】
前記自己免疫障害がＴｈ１応答によって少なくとも部分的に媒介される請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３１】
前記自己免疫障害がＣＤ８＋Ｔ−細胞増殖によって少なくとも部分的に媒介される請求項１ないし２いずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３２】
ＴＣＣＲアゴニストをスクリーニングする方法であって、
ＴＣＣＲを発現する細胞を候補ＴＣＣＲアゴニストと接触させる工程；
該候補ＴＣＣＲアゴニストに応答してＴＣＣＲ−活性化遺伝子の発現を分析する工程；そして、
該ＴＣＣＲ−活性化遺伝子の発現の増加を該候補ＴＣＣＲアゴニストの活性と相関させる工程；
を含む、方法。
【請求項３３】
前記ＴＣＣＲ−活性化遺伝子がＩＬ−１０、ＳＯＣＳ−３、または双方を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記ＴＣＣＲ−活性化遺伝子がＳＯＣＳ−３を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞がＴ−リンパ球である請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
前記分析が定量的ＰＣＲ分析を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３７】
前記分析がイムノアッセイ分析を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３８】
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７の下で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって生産されるモノクローナル抗体。
【請求項３９】
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ受託番号ＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４４７の下で寄託されたハイブリドーマ細胞株。
【請求項４０】
ＩＬ−２７またはそのアゴニストを投与することを含む免疫応答を治療または抑制する方法。
【請求項４１】
前記免疫応答がＴｈ−１７細胞によって媒介される請求項１記載の方法。
【請求項４２】
前記免疫応答がＴｈ−１またはＴｈ２媒介応答である請求項１記載の方法。
【請求項４３】
前記免疫応答が過剰炎症応答である請求項１記載の方法。
【請求項４４】
前記免疫応答が自己免疫応答である請求項１記載の方法。
【請求項４５】
前記ＩＬ−２７がＩＬ−１７生産を抑制する請求項１記載の方法。
【請求項４６】
ＩＬ−２７またはそのアゴニストを投与することを含むＩＬ−１７、ＩＬ−６、またはＧＭ−ＣＳＦ生産を阻害する方法。
【請求項４７】
ＩＬ−６のアンタゴニストまたはその受容体を投与することを含む免疫応答を治療または抑制する方法。
【請求項４８】
前記アンタゴニストが抗体、アプトマー、またはその受容体でＩＬ−６の活性化をブロックする小分子アンタゴニストである請求項４７記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【公表番号】特表２００８−５２４２４２（Ｐ２００８−５２４２４２Ａ）
【公表日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４６９３５（Ｐ２００７−５４６９３５）
【出願日】平成１７年１２月１６日（２００５．１２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４５６０３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６６０８８
【国際公開日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１２月１６日（２００５．１２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４５６０３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６６０８８
【国際公開日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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