自律神経調節剤
【課題】酒粕加工物などの、清酒の製造工程にて生み出される中間体、最終産物、およびこれらの加工物を利用した自律神経調節剤の提供。
【解決手段】清酒の液化仕込みによって生じる酒粕加工物を含有する自律神経調節剤。該粕加工物は、酒粕に対して以下の１）〜３）からなる群より選択される少なくとも１つの処理が施されたもの。１）プロテアーゼ処理２）セルラーゼ処理３）乳酸菌発酵処理該プロテアーゼ処理では、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼが、該セルラーゼ処理では、エンドグルカナーゼまたはセロビオヒドロラーゼが、該乳酸発酵処理では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ等が用いられることが好ましい。
【解決手段】清酒の液化仕込みによって生じる酒粕加工物を含有する自律神経調節剤。該粕加工物は、酒粕に対して以下の１）〜３）からなる群より選択される少なくとも１つの処理が施されたもの。１）プロテアーゼ処理２）セルラーゼ処理３）乳酸菌発酵処理該プロテアーゼ処理では、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼが、該セルラーゼ処理では、エンドグルカナーゼまたはセロビオヒドロラーゼが、該乳酸発酵処理では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ等が用いられることが好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自律神経を調節することが可能な自律神経調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
自律神経系には、交感神経系と副交感神経系との二系統が存在し、両者の活動のバランスによって自律神経系全体が制御されている。例えば、身体が活動しているときには交感神経の活動が優位となり、全身が緊張した状態となる。逆に、副交感神経の活動が優位なときは身体の緊張がとれ、くつろいでいる状態となる。
【０００３】
近年、自律神経系を積極的に制御することによって、健康を維持したり、各種疾患を治療したりしようとする多くの試みがなされている。
【０００４】
例えば、特許文献１には、脂質とタンパク質（例えば、乳タンパク質または大豆タンパク質）とを含有し、胃腸管を介して副交感神経に作用して炎症反応を軽減する組成物が記載されている。特許文献２には、合成ペプチドを含有し、副交感神経に作用して涙液の分泌を促進する組成物が開示されている。特許文献３には、植物（例えば、ブドウまたはオオムギ）由来の成分とオーク材から抽出された成分とを含有し、嗅覚を介して自律神経に作用する組成物が記載されている。特許文献４には、カルシノンを含有し、経口投与などによって体内に取り込まれることによって自律神経に作用する組成物が記載されている。
【０００５】
ところで、「酒は百薬の長」といわれるように、適量の酒を摂取することによって生体に対して様々な有益な効果をもたらし得ることが昔から知られており、近年、これらの効果に注目が集まっている。
【０００６】
酒には様々な種類が存在し、これらの種類としては、例えば醸造酒（例えば、清酒、果実酒など）および蒸留酒（例えば、焼酎、ウイスキー、ブランデーなど）などを挙げることができる。これらの酒は、原料および製造方法などが異なるために、含有成分が大きく異なっている。それ故に、酒の種類ごとに、様々な異なる効果を示すことが期待される。
【０００７】
清酒は、米を主原料にして製造される醸造酒であるが、製造工程において生み出される中間体、最終産物、およびこれらを更に加工した加工物が、生体に対して様々な有益な効果を示すことが近年明らかになりつつある。例えば、本出願人は、これまで高血圧の予防および治療効果、肝機能障害抑制効果、抗酸化効果、脈波伝播速度降下効果、体重増加抑制効果、腹腔内白色脂肪組織の蓄積抑制効果、血中脂質（中性脂肪）改善効果、健忘症抑制効果および脱毛抑制効果などを報告している（例えば、特許文献５〜１２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００８−５１９８３１号公報（公表日：２００８年６月１２日）
【特許文献２】特開２００５−２７２４４５号公報（公開日：２００５年１０月６日）
【特許文献３】特開２００６−１０４０６７号公報（公開日：２００６年４月２０日）
【特許文献４】ＷＯ０２／０７６４５５（国際公開日：２００２年１０月３日）
【特許文献５】特開平４−２７９５２９号公報（公開日：１９９２年１０月５日）
【特許文献６】特開平５−２９４８４４号公報（公開日：１９９３年１１月９日）
【特許文献７】特開２００８−３０８４４５号公報（公開日：２００８年１２月２５日）
【特許文献８】特開２００９−１９６９４９号公報（公開日：２００９年９月３日）
【特許文献９】特開２００９−２２１１９３号公報（公開日：２００９年１０月１日）
【特許文献１０】特開２００９−１６７１２７号公報（公開日：２００９年７月３０日）
【特許文献１１】特開２００７−９９７３１号公報（公開日：２００７年４月１９日）
【特許文献１２】特開２００８−５０２６９号公報（公開日：２００８年３月６日）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、清酒の製造工程にて生み出される中間体、最終産物、およびこれらの加工物（特に、酒粕加工物）の機能が全て明らかにされたわけではない。
【００１０】
本発明の目的は、酒粕加工物などの、清酒の製造工程にて生み出される中間体、最終産物、およびこれらの加工物のさらなる機能を見出し、その機能を利用した自律神経調節剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、酒粕加工物が自律神経を調節する効果を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
本発明の自律神経調節剤は、上記課題を解決するために、酒粕加工物を含有することを特徴としている。
【００１３】
本発明の自律神経調節剤では、上記酒粕加工物は、酒粕に対して１）プロテアーゼ処理、２）セルラーゼ処理、および３）乳酸菌発酵処理からなる群より選択される少なくとも１つの処理が施されたものであることが好ましい。
【００１４】
本発明の自律神経調節剤では、上記酒粕加工物は、清酒の液化仕込みによって生じる酒粕から作製されるものであることが好ましい。
【００１５】
本発明の自律神経調節剤は、覚醒度を調節するものであることが好ましい。
【００１６】
本発明の自律神経調節剤は、副交感神経を調節するものであることが好ましい。
【００１７】
本発明の自律神経調節剤は、上記プロテアーゼ処理では、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼが用いられていることが好ましい。
【００１８】
本発明の自律神経調節剤は、上記セルラーゼ処理では、エンドグルカナーゼまたはセロビオヒドロラーゼが用いられていることが好ましい。
【００１９】
本発明の自律神経調節剤は、上記乳酸発酵処理では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍが用いられていることが好ましい。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、自律神経を調節することで、覚醒あるいは沈静効果を得る、または食物の消化・吸収を促進させることができる。また、本発明は酒の製造工程で生じる酒粕を加工して得られる酒粕加工物を原料として用いているため、生体にとって安全であり、かつ安価な自律神経調節剤を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】（ａ）〜（ｄ）は、本発明の実施例における、各試料（酒粕ペプチド１、１／２量の酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または、乳酸菌発酵酒粕）をマウスに経口投与した場合の、マウスの総行動量を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例における、酒粕ペプチド１をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図３】本発明の実施例における、１／２量の酒粕ペプチド１をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図４】本発明の実施例における、酒粕ペプチド２をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図５】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図６】図２〜図５のデータを１つにまとめたグラフである。
【図７】本発明の実施例における、各試料（清酒、１／２量の清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与した場合の、マウスの総行動量を示すグラフである。
【図８】本発明の実施例における、各試料（清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである。
【図９】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１０】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの相対比を示すグラフである。
【図１１】本発明の実施例における、米麹をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１２】本発明の実施例における、米麹をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの相対比を示すグラフである。
【図１３】本発明の実施例における、水をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１４】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕（１０ｍｇ／ｍＬ）をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１５】本発明の実施例における、米麹（１０ｍｇ／ｍＬ）をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１６】本発明の実施例における、水を投与した場合のＧＶＮＡと、乳酸菌発酵酒粕（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した場合のＧＶＮＡとを比較したグラフである。
【図１７】本発明の実施例における、水を投与した場合のＧＶＮＡと、米麹（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した場合のＧＶＮＡとを比較したグラフである。
【図１８】図１６および図１７に示したグラフを１つに図面化したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の一実施形態について説明すると以下の通りであるが、本発明はこれに限定されるものではない。また、本明細書において「Ａ〜Ｂ」と記載した場合には、「Ａ以上Ｂ以下」を意図する。
【００２３】
本実施の形態の自律神経調節剤は、酒粕加工物を含有しているものであればよく、その他の成分、剤型等については特に限定されるものではない。以下の説明では、まず特徴的な「酒粕加工物」に関して説明し、次いで「その他の成分」、「その他の有効成分」について説明する。
【００２４】
〔１．酒粕加工物〕
本明細書において「酒粕」とは、酒類のアルコール発酵工程後に得られる固体画分を意図し、その具体的な構成としては特に限定されないが、清酒の製造工程で生じる酒粕であることが好ましい。上述の清酒の製造工程で生じる酒粕は特に限定されないが、たんぱく質を多く含むという点で液化仕込みと呼ばれる清酒の製造方法によって生じた酒粕が更に好ましい。
【００２５】
本明細書において「酒粕加工物」とは、酒粕に対して何らかの加工処理を施したものを意図し、加工処理の具体的な内容は特に限定されない。当該加工処理は、原料の形状・形態を変化させる処理であっても良いし、被加工物（原料）中に含まれる成分の種類および／または量を変化させる処理であってもよい。
【００２６】
上記加工処理としては、例えば、酒粕に対して１）プロテアーゼ処理、２）セルラーゼ処理、および３）乳酸菌発酵処理からなる群より選択される少なくとも１つの処理を行うことが好ましい。
【００２７】
上述の２）セルラーゼ処理は、１）プロテアーゼ処理または３）乳酸菌処理と共に行うことが好ましく、１）プロテアーゼ処理と共に行うことが更に好ましい。また、２）セルラーゼ処理は、他の処理を行う前の前処理として行うことが好ましい。以下に、上述した１）〜３）の各処理の一例について更に詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されない。
【００２８】
＜１−１．セルラーゼ処理＞
セルラーゼ処理は、原料（例えば、酒粕、または酒粕に他の処理を施して生じる産物など）に対してセルラーゼを作用させる工程である。
【００２９】
セルラーゼとしては特に限定されず、適宜公知のセルラーゼを用いることが可能である。セルラーゼは様々なサブファミリーに分類されるが、本実施の形態では、セルロース鎖をランダムに切断するエンドグルカナーゼ、または、セルロースを還元末端から切断してセロビオースを生成するセロビオヒドロラーゼを用いることが好ましい。両者を併用すれば、更に好ましい。また、セルラーゼの由来は特に限定されないが、原料に対して作用し易いという観点から、トリコデルマ属菌由来のセルラーゼが好ましい。セルラーゼ処理を行うことにより原料のセルロースを分解することができ、また他の処理と併用した場合に、他の処理の効果を増強することができる。
【００３０】
セルラーゼの使用量は特に限定されないが、原料に対して約０．００５重量％〜０．２重量％を用いることが好ましく、約０．０５重量％〜０．１重量％を用いることが更に好ましい。上記構成であれば、実用的な時間内にセルロースが十分に分解されて、原料を液体状に可溶化することができる。
【００３１】
反応温度および反応時間は、使用する原料およびセルラーゼの種類に応じて異なるが、反応温度は約３０℃〜７０℃であることが好ましく、約４０℃〜６０℃であることが更に好ましい。反応時間は約２時間〜２０時間であることが好ましい。
【００３２】
反応時のｐＨは、セルラーゼの種類に応じて異なるが、セルラーゼが機能し易い約３．５〜６．０が好ましい。上記範囲であれば、セルラーゼが失活することなく、かつその機能を十分に発揮できる。セルラーゼによる反応は、必ずしも停止させる必要はないが、反応混合物を例えば約８０℃〜１００℃で約１０分間〜６０分間加熱することにより停止させることができる。
【００３３】
セルラーゼ処理では、夾雑物である糖質を除去するために、更にアミラーゼ処理を行うことが好ましい。なお、アミラーゼとはデンプンを加水分解する酵素の総称であり、具体的には、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼなどが挙げられ、これらを用いることが可能である。
【００３４】
アミラーゼは、１種のみを使用しても良く、２種以上を組み合わせて使用しても良い。第１工程では、上述したアミラーゼの中でも、β−アミラーゼ、α−アミラーゼまたはα−グルコシダーゼを用いることが好ましく、β−アミラーゼを用いることが更に好ましく、麦芽由来のβ−アミラーゼを用いることが最も好ましい。
【００３５】
アミラーゼの使用量は特に限定されないが、原料（例えば、酒粕など）に対して約０．００５重量％〜０．２重量％を用いることが好ましく、約０．０５重量％〜０．１重量％を用いることが更に好ましい。上記構成であれば、実用的な時間内に糖質を十分に可溶化することができる。
【００３６】
アミラーゼ処理における反応温度および反応時間は、使用する原料およびアミラーゼの種類に応じて異なるが、反応温度は約３０℃〜６０℃であることが好ましく、約５０℃〜６０℃であることが更に好ましい。反応時間は約５時間〜２０時間であることが好ましい。
【００３７】
アミラーゼによる反応は、必ずしも停止させる必要はないが、反応混合物を例えば約８０℃〜１００℃で約１０〜６０分間加熱することにより停止させることができる。反応時のｐＨは特に限定されず、アミラーゼの種類に応じて異なるが、アミラーゼが機能し易い約５〜６であることが好ましい。
【００３８】
＜１−２．プロテアーゼ処理＞
プロテアーゼ処理は、原料（例えば、酒粕または酒粕に他の処理を施して生じる産物）に対してプロテアーゼを作用させる工程である。例えば、当該原料は、酒粕であっても良いし、酒粕をセルラーゼ処理した後の産物であってもよい。
【００３９】
他の処理（例えば、セルラーゼ処理）後の産物をプロテアーゼ処理する場合には、他の処理によって得られる混合物から液体画分を除去して固体画分を得、当該固体画分に対してプロテアーゼ処理を行うことが好ましい。なお、固体画分と液体画分とを分離する方法としては特に限定されないが、例えば、圧搾、濾過、遠心分離などの方法を用いることが好ましい。当該構成であれば、夾雑物（例えば、低分子化された糖質などに代表される水溶性成分など）を除去することができる。
【００４０】
プロテアーゼとしては特に限定されず、公知のプロテアーゼを用いることが可能である。例えば、プロテアーゼとしては、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼを用いることが好ましく、これらを併用することが更に好ましい。また、中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼの各々についても、１種類のプロテアーゼであっても良いし、２種類以上のプロテアーゼの混合物であってもよい。更に具体的には、例えば、コクラーゼ（登録商標）、サモアーゼ（登録商標）、レンネット（登録商標）、プロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ（登録商標）、プロテアーゼＭ「アマノ」Ｇ（登録商標）、プロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ（登録商標）、ニューラーゼＦ３Ｇ（登録商標）、パパインＷ−４０（登録商標）、ウマミザイムＧ（登録商標）、プロメラインＦ（登録商標）、サモアーゼＰＣ１０Ｆ（登録商標）、ペプチダーゼＲ（登録商標）、サーモリシン（登録商標）、モルシンＦ（登録商標）、スミチームＡＰ（登録商標）、ニュートラーゼ（登録商標）、またはアクチナーゼＡＳ（登録商標）などの市販の食品工業用酵素を使用できる。
【００４１】
プロテアーゼの由来は特に限定されないが、例えば、バチルス属細菌由来、アスペルギルス属菌由来またはリゾプス属菌由来のプロテアーゼを用いることが好ましく、中でも、バチルス属細菌由来の中性プロテアーゼまたはアスペルギルス属菌由来の酸性プロテアーゼを用いることが更に好ましい。
【００４２】
プロテアーゼはエンド型でもエキソ型でもどちらでも良いが、目的とするペプチドが必要以上に断片化されないためにはエンド型であることが好ましい。
【００４３】
プロテアーゼの使用量は特に限定されないが、中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼの各々が、原料に対して約０．１重量％〜０．８重量％であることが好ましく、約０．３重量％〜０．６重量％であることが更に好ましい。上記構成であれば、実用的な時間内に原料中のタンパク質を十分に分解できる。
【００４４】
反応温度および反応時間は、使用するプロテアーゼの種類によって異なるが、中性プロテアーゼの場合には、反応温度は約４０℃〜６５℃であることが好ましく、約４５℃〜６０℃であることが更に好ましい。反応時間は約５時間〜２０時間であることが好ましい。また、酸性プロテアーゼの場合には、反応温度は約４５℃〜７０℃であることが好ましく、約５０℃〜６５℃であることが更に好ましい。反応時間は約５時間〜２０時間であることが好ましい。
【００４５】
プロテアーゼによる反応は、反応混合物を例えば約８０℃〜１００℃で約１０分間〜６０分間加熱することにより停止させることが可能である。プロテアーゼによる反応を停止させることによって、ペプチドがさらに分解されて生理活性が低下することを防止することができる。更には、生理活性を示さない夾雑ペプチドが切り出されることによる、不純物の増加を抑制することができる。
【００４６】
プロテアーゼ処理における反応時のｐＨは、中性プロテアーゼの場合には、約６．０〜９．０であることが好ましく、酸性プロテアーゼの場合には、約３．０〜５．０であることが好ましい。上記構成であれば、各プロテアーゼの機能を最大限に発揮させることができる。
【００４７】
上述したように中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼは、それぞれ単独で用いられても良く、併用されても良い。併用する場合には、何れを先に反応させてもよいが、より生理活性の強いペプチド混合物を得ることができる点で、中性プロテアーゼを先に反応させる方が好ましい。また、プロテアーゼが機能するｐＨが重複する場合には、複数のプロテアーゼを同時に反応させることも可能である。
【００４８】
プロテアーゼ処理で得られた混合物からは、更に固形画分が除去されてもよい。これにより、固体状の夾雑物が除去されて、生理活性を有するペプチドが溶解した液体画分を得ることができる。
【００４９】
固体画分の除去は、例えば圧搾、濾過、遠心分離等により行うことができる。得られた液体画分は、そのまま酒粕加工物として用いることも可能であるし、当該液体画分を濃縮したり、乾燥させて粉末化したりして酒粕加工物として用いることも可能である。上記構成によれば、より長期間の保存が可能であり、しかも、更なる加工が施し易い酒粕加工物を得ることが可能となる。
【００５０】
＜１−３．乳酸菌発酵処理＞
乳酸菌発酵処理では、原料（例えば、酒粕または酒粕に他の処理を施して生じる産物など）に対して乳酸菌を作用させる。
【００５１】
上述した原料に酒粕以外の物質を添加することも可能であって、当該添加物の種類および量は特に限定されない。例えば、米糠を添加する場合は、酒粕の０．１重量％〜５０重量％の米糠であることが好ましく、２重量％〜２０重量％であることが更に好ましい。水を添加する場合は、酒粕の０．５倍〜１０倍の重量の水を添加すること好ましく、１倍〜５倍の重量の水を添加することが更に好ましい。
【００５２】
また、原料中には、乳酸菌の良好な生育のためにグルコースを添加することが好ましい。グルコースの添加量は特に限定されないが、酒粕の０．１重量％〜１０重量％であることが好ましく、酒粕の０．５重量％〜５重量％であることが更に好ましい。
【００５３】
原料に対して添加物を加えた後、ミキサーまたはグラインダーを用いて原料を粉砕懸濁して混合物を得る。そして、当該混合物に対して、前培養をしておいた乳酸菌を添加する。添加される乳酸菌の量は特に限定されない。例えば、培養液中の乳酸菌の濃度が、１×１０５〜１×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように添加されることが好ましく、１×１０６〜１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように添加されることが更に好ましい。
【００５４】
上記乳酸菌としては特に限定されないが、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、または、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等に属する乳酸菌を用いることが好ましく、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する乳酸菌を用いることが更に好ましい。
【００５５】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する乳酸菌としては特に限定されないが、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、またはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍを用いることが好ましい。これらの中では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓを用いることが更に好ましい。
【００５６】
発酵温度は乳酸菌の種類に応じて適宜設定することが可能であるが、例えば、１５℃〜４５℃であることが好ましく、３０℃〜４０℃であることが更に好ましい。また、発酵時間も特に限定されないが、例えば、１６時間〜７２時間であることが好ましく、２０時間〜５０時間であることが更に好ましい。
【００５７】
乳酸菌発酵処理を行うときには、発酵物の香気・味覚を良好にするために、発酵条件を好気条件にすることが好ましい。例えば、発酵容器の蓋に複数の小さな通気孔を設けることにより、乳酸菌発酵処理を好気条件下にて行うことができ、その結果、良好な香気を有し、味覚にも優れた発酵物を得ることができる。
【００５８】
このようにして得られた発酵物をそのまま酒粕加工物として用いることも可能であるし、更なる分離操作を行うことも可能である。例えば、遠心分離、フィルター濾過などの方法により固体と液体とを分離し、液体画分を凍結乾燥またはスプレードライなどの方法によって乾燥させて粉末を得、当該粉末を酒粕加工物として用いることも可能である。
【００５９】
以下では、各酒粕加工物の作用・含有量等について説明する。
【００６０】
例えば、酒粕に対してプロテアーゼ処理（またはセルラーゼ処理およびプロテアーゼ処理）が施された酒粕加工物を含有する自律神経調節剤は、後述する実施例に示すように、投与対象の行動量を増加させることができる。換言すれば、当該自律神経調節剤は、自律神経に作用し、投与対象を覚醒（興奮）させる作用を有するといえる。
【００６１】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は特に限定されないが、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．１ｇ〜１００ｇを投与できるよう配合されることが好ましく、１ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜５０ｇが更に好ましい。
【００６２】
また、酒粕に対して乳酸菌処理が施された酒粕加工物を含有する自律神経調節剤は、後述する実施例に示すように、投与対象の行動量を減少させることができる。換言すれば、当該自律神経調節剤は、自律神経に作用し、投与対象を沈静（抑制）させる作用を有するといえる。
【００６３】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は特に限定されないが、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．１ｇ〜１００ｇを投与できるように配合することが好ましく、１ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜５０ｇが更に好ましい。
【００６４】
また、酒粕に対して乳酸菌処理が施された酒粕加工物を含有する自律神経調節剤は、副交感神経の活動を活性化させることが可能である。
【００６５】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり３０ｍｇ〜３３０ｍｇであることが好ましく、３０ｍｇ〜１８０ｍｇが更に好ましく、３０ｍｇであることが最も好ましい。
【００６６】
本実施の形態の自律神経調節剤は、健康機能食品、飲料水、薬、家畜用飼料などとして利用することができる。そして、それ故に、本実施の形態の自律神経調節剤は、様々な形態をとり得る。
【００６７】
例えば、薬として利用する場合には、本実施の形態の自律神経調節剤は、経口投与剤（例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤など）、非経口投与剤（例えば、注射剤、点滴剤、外用剤、座剤など）などの形態をとることが可能である。投与の容易性などを考慮すれば、経口投与剤の形態であることが好ましいといえる。実施例からも明らかなように、経口投与剤としての形態であっても、本実施の形態の自律神経調節剤は、十分に効果を発揮することができる。
【００６８】
また、健康機能食品または飲料水として利用する場合には、本実施の形態の自律神経調節剤は、汁物（味噌汁、吸い物、コーンスープ、ポテトスープ、コンソメスープ、たまごスープ、野菜スープ、カレー、またはシチューなど）、飲料（スポーツ飲料、ドリンク剤、乳飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、炭酸飲料、野菜飲料、または茶飲料など）、菓子類（クッキー等の焼き菓子、ゼリー、ガム、グミ、飴、ヨーグルト、アイスクリーム、またはプリンなど）などの形態をとることが可能である。中でも、毎日の食生活で無理なく摂取できるという点で汁物の形態であることが好ましく、食習慣が確立しているという観点から、味噌汁の形態であることが更に好ましい。
【００６９】
〔２．その他の成分〕
本実施の形態の自律神経調節剤は、上述した成分以外にも様々な成分を含有させることが可能である。例えば、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、付湿剤、着色剤、矯味矯臭剤などを含有することが可能であるが、これらに限定されない。なお、自律神経調節剤中のこれら成分の含有量は特に限定されず、所望の量だけ含有させることが可能である。
【００７０】
上記賦形剤としては特に限定されず、適宜公知の賦形剤を用いることが可能である。例えば、糖（例えば、乳糖、ショ糖またはブドウ糖など）、デンプン（例えば、バレイショデンプン、コムギデンプンまたはトウモロコシデンプンなど）、セルロース（例えば、結晶セルロースなど）、または、無機塩類（例えば、無水リン酸水素カルシウムまたは炭酸カルシウムなど）を用いることが好ましい。
【００７１】
上記結合剤としては特に限定されず、適宜公知の結合剤を用いることが可能である。例えば、結晶セルロース、プルラン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、またはマクロゴールなどを用いることが好ましい。
【００７２】
上記崩壊剤としては特に限定されず、適宜公知の崩壊剤を用いることが可能である。例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、デンプン、またはアルギン酸ナトリウムなどを用いることが好ましい。
【００７３】
上記潤沢剤としては特に限定されず、適宜公知の潤沢剤を用いることが可能である。例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、または硬化油などを用いることが好ましい。
【００７４】
上記付湿剤としては特に限定されず、適宜公知の付湿剤を用いることが可能である。例えば、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、大豆リン脂質、グリセリン、またはソルビトールなどを用いることが好ましい。
【００７５】
上記矯味矯臭剤としては特に限定されず、適宜公知の矯味矯臭剤を用いることが可能である。例えば、通常使用される甘味料、酸味料、または香料などを用いることが可能である。更に具体的には、白糖、グルコース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ケイヒ油、ハッカ油、またはメントールなどを用いることが好ましい。
【００７６】
〔３．その他の有効成分〕
本実施の形態の自律神経調節剤には、上述した酒粕加工物以外にも、自律神経を調節するための有効成分として様々な物質を含有させることができる。
【００７７】
例えば、清酒の製造過程で生じる様々な中間体（例えば、米麹など）、最終産物（例えば、酒粕または清酒など）、またはこれらの加工物も本実施の形態の自律神経調節剤中に、有効成分として含有され得る。
【００７８】
例えば、実施例からも明らかなように、米麹を含有する自律神経調節剤は、副交感神経の活動を活性化させることができる。
【００７９】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．０３ｍｇ〜３０ｍｇであることが好ましく、３ｍｇ〜３０ｍｇが更に好ましく、３０ｍｇであることが最も好ましい。
【００８０】
また、清酒を含有する自律神経調節剤は、当該自律神経調節剤の投与対象の行動量を減少させることができる。換言すれば、当該自律神経調節剤は、自律神経に作用し、投与対象を沈静（抑制）させる作用を有するといえる。
【００８１】
この場合、自律神経調節剤中に含有される清酒の量は限定されないが、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．１ｍＬ〜１００ｍＬを投与できることが好ましく、１ｍＬ〜１００ｍＬを投与できることが更に好ましく、５ｍＬ〜５０ｍＬを投与できることが更に好ましく、１０ｍＬ〜３０ｍＬを投与できることが更に好ましい。
【００８２】
なお、特開平０４−２７９５２９号公報、特開平０５−２９４８４４号公報、特開２００９−１６７１２７号公報、特開２００８−３０８４４５号公報、特開２００９−１９６９４９号公報、特開２００９−２２１１９３号公報、特開２００７−９９７３１号公報、特開２００８−５０２６９号公報、および特開昭５９−６６８７５号公報に記載されている事項は全て、本明細書中に参考として援用される。
【実施例】
【００８３】
＜１．試料作製＞
＜１−１．米麹および酒粕の作製＞
本実施例に用いた米麹は、公知の製造方法（特開２００８−２４７８８８号公報）に基づいて作製した。すなわち、精米歩合７０％の粳米６ｋｇを井戸水に浸漬して一晩置いた後、これを蒸米器で１時間蒸きょうし、３０℃まで冷却した。
【００８４】
市販酒造用種麹（菱六社製 醪用）を、蒸米５００ｇにつき０．５ｇずつ塗布して蒸米を攪拌し、これを固体培養装置（ヤエガキ社製）に入れた。固体培養装置内の温度を３５℃に調節し、１０時間後から３０時間後まで時々米麹をかき混ぜた。その後、固体培養装置内の温度を４０℃に調節し、種麹が塗布された蒸米を固体培養装置に入れてから４８時間後に、当該蒸米を固体培養装置から出して通風乾燥し、製麹を終えた。
【００８５】
本実施例に用いた酒粕は、基本的に、液化酵素で液化した原料米をアルコール発酵させるという公知の清酒製造方法（今安 聰ら：日本農芸化学会誌、第６３号、第９７１頁、１９８９年、特開昭５９−６６８７５号公報）に基づいて作製した。
【００８６】
簡単に言えば、まず、精白米に水を加えて、当該精白米に十分に水を吸収させた。当該混合液にα−アミラーゼを加えた後、ミキサーを用いて精白米を破砕して懸濁液を得た。当該懸濁液を６０℃〜９０℃に加温して、米澱粉の糊化液を得た。
【００８７】
上記糊化液に対して麹菌を加えて、糖化反応を促進した。
【００８８】
上記糊化液に対して更に酵母を加えて、アルコール発酵反応を促進した。当該発酵反応後の発酵物を圧搾し、得られた固体を本実施例の酒粕として用いた。
【００８９】
＜１−２．酒粕ペプチド１の作製＞
酒粕６０ｇ（湿重量、固形分５８．４％）を１０分間沸騰した後、１２０００ｒｐｍ、１５分間の条件下で遠心分離した。得られた沈殿物４２ｇに水１８０ｍｌを加え、更に、中性プロテアーゼ（バチルス属細菌由来、プロテアーゼＮアマノＧ：天野エンザイム社製）２１０ｍｇを添加し、５０℃で６時間分解した。
【００９０】
続いて、酸性プロテアーゼ（アスペルギルス属菌由来、スミチームＡＰ：新日本化学工業社製）２５０ｍｇを添加して６０℃で１６時間分解した。
【００９１】
得られた分解物を、１２０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離し、得られた上清を、孔径０．４５μｍおよび０．２２μｍのメンブレンフィルター（東洋濾紙株式会社製）を用いて濾過した。
【００９２】
得られた濾過液を減圧濃縮法によって濃縮し、さらにフリーズドライ法によって粉末化した。減圧濃縮は、ロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ株式会社製ＲＥ１２１ Ｒｏｔａｖａｐｏｒ：湯浴温度５０℃、１００ｒｐｍ）とアスピレーター（ヤマト科学製Ｎｅｏｃｏｏｌ Ａｓｐｉｒａｔｏｒ ＢＰ−５１：冷却温度５℃）とを用いて行った。フリーズドライは、凍結乾燥機（ＥＹＥＬＡ東京理化器械株式会社製 ＦＤＵ−２１００）を用いてマイナス８０℃、真空度０．４Ｐａにて、粉末になるまで除湿乾燥させることにより、行った。このようにして得た粉末物を酒粕ペプチド１として以下の試験に用いた。
【００９３】
＜１−３．酒粕ペプチド２の作製＞
酒粕６０ｋｇ（湿重量、固形分５８．４％）に水１２０Ｌを添加し十分に攪拌した。この混合物を５０℃に保温した状態で、当該混合物に対してセルラーゼ（セルロイシンＴ２：エイチビィアイ社製）３０ｇとβ−アミラーゼ（ビオザイムＭ：天野エンザイム社製）３０ｇとを添加し、５０℃で１６時間分解した。分解終了後、９０℃で１０分間加熱して分解反応を停止した。当該分解物を、圧搾機（ＮＳＫエンジニアリング（株）：ＯＮＳ自動圧濾圧搾機５００型）によって５ｋｇ／ｃｍ２にて３時間圧搾し、アミラーゼ分解酒粕４１．９ｋｇ（湿重量、固形分５６．８％）を得た。
【００９４】
次いで、得られたアミラーゼ分解酒粕４１．９ｋｇに水１８０Ｌを加え、ＫＯＨでｐＨを６．８に調製し、よく攪拌した。５０℃に保温した状態で、中性プロテアーゼ（バチルス属細菌由来、プロテアーゼＮアマノＧ：天野エンザイム社製）２１０ｇを添加し、５０℃で１６時間分解した。
【００９５】
さらに、ＨＣｌでｐＨ４．２に調製し、よく攪拌した後、酸性プロテアーゼ（アスペルギルス属菌由来、スミチームＡＰ：新日本化学工業社製）２５０ｇを添加して６０℃で２２時間分解した。分解終了後、９０℃で１０分間加熱して分解反応を停止した。分解物を、圧搾機（ＮＳＫエンジニアリング（株）、ＯＮＳ自動圧濾圧搾機５００型）によって５ｋｇ／ｃｍ２にて３時間圧搾し、２００Ｌのペプチド含有液を得た。
【００９６】
得られたペプチド含有液を減圧濃縮法によって濃縮し、さらにフリーズドライ法によって粉末化した。減圧濃縮は、ロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ株式会社製ＲＥ１２１ Ｒｏｔａｖａｐｏｒ：湯浴温度５０℃、１００ｒｐｍ）とアスピレーター（ヤマト科学製Ｎｅｏｃｏｏｌ Ａｓｐｉｒａｔｏｒ ＢＰ−５１：冷却温度５℃）とを用いて行った。フリーズドライは、凍結乾燥機（ＥＹＥＬＡ東京理化器械株式会社製 ＦＤＵ−２１００）を用いてマイナス８０℃、真空度０．４Ｐａにて、粉末になるまで除湿乾燥させることにより、行った。このようにして得た粉末物を酒粕ペプチド２として以下の試験に用いた。
【００９７】
＜１−４．乳酸菌発酵酒粕の作製＞
酒粕３００ｇに対して、米糠１５ｇ、グルコース６ｇおよび水７５０ｍｌを加えて、ミキサーにて粉砕懸濁した。当該懸濁物に、前培養しておいた乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓの培養液（１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）を１０ｍＬ接種した。その後、３６℃にて４８時間、乳酸発酵させた。この時、嫌気条件下での乳酸発酵を避けるために、発酵容器の蓋に通気孔を設けた。そして、好気条件下にて乳酸発酵を行うことによって、香気が良好で、しかも味覚も優れた乳酸発酵物を得ることができた。
【００９８】
乳酸発酵物を３０００ｇにて１５分間遠心分離し、その上清を凍結乾燥して、約５０ｇの粉末物を得た。このようにして得た粉末物を、乳酸菌発酵酒粕として、以下の試験に用いた。
【００９９】
＜２．行動量試験（ロコモーター試験）＞
自律神経の活動は、生物の行動量に影響を与えることが知られている。逆に言えば、行動量を測定することによって、自立神経の活動を測定することが可能となる。そこで、本実施例では、マウスの行動量を測定することによって、自律神経の活動を測定することとした。
【０１００】
具体的には、市販の清酒（アルコール分：約１６％）、市販の米焼酎（アルコール分：約１６％）、清酒乾燥エキス、上述した酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、乳酸菌発酵酒粕の各々について、マウスの行動量に及ぼす影響を検討した。なお、水（イオン交換水）を用いたコントロール実験も行った。まず、実験方法について説明する。
【０１０１】
まず、各試料について検討する前に、実験に用いるマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄８週齢））に対して水を投与してネガティブコントロールとすべき実験データを取得した。具体的には、実験に用いるマウスに対して、水を、２０ｍＬ／ｋｇｂ．ｗｔとなるように１回だけ投与した。その後、マウスの行動量を１４時間計測し続けた。そして、当該１４時間で得られた実験データをネガティブコントロールとした。
【０１０２】
ネガティブコントロールとなる実験データを得た後のマウスは、その後、１週間飼育した（１０匹マウス／１ケージ）。そして、週間の飼育の後、固体試料または液体試料を投与する本実験を行った。以下に、本実験について説明する。
【０１０３】
固形試料（清酒乾燥エキス、酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または乳酸菌発酵酒粕）の各々を、イオン交換水に１０ｇ（固形試料）／２０ｍＬ（イオン交換水）となるように溶解した。当該溶解物を、マウスに対して、１０ｇ／２０ｍＬ／ｋｇｂ．ｗｔとなるように１回だけゾンデにて投与した。なお、１ケージあたり１０匹のマウスを飼育し、１種類の固形試料に関して、１ケージのマウス（マウス１０匹）の行動量を検討した。行動量測定時は１匹マウス／１ケージとし、行動量は、投与してから１４時間計測し続けた。
【０１０４】
液体試料（清酒、または焼酎）の各々を、マウスに対して、２０ｍＬ／ｋｇｂ．ｗｔとなるように１回だけゾンデにて投与した。なお、１ケージあたり１０匹のマウスを飼育し、１種類の液体試料に関して、１ケージのマウス（マウス１０匹）の行動量を検討した。なお、水に関しては、４ケージのマウス（マウス４０匹）の行動量を検討した。行動量測定時は１匹マウス／１ケージとし、行動量は、投与してから１４時間計測し続けた。
【０１０５】
マウスの行動量は、周知の技術（Nakamura et al., In vivo monitoring of circadian timing in freely moving mice, Current Biology 2008, 18:381-385）を用いて計測した。簡潔に言えば、ケージに設けられた赤外線センサー（Ｂｉｏｔｅｘ Ｊａｐａｎ社製）と、ソフトウエアＢｉｏｔｅｘ １６ＣＨ Ａｃｔ Ｍｏｎｉｔｏｒ ＢＡＩ２２１６（Ｂｉｏｔｅｘ Ｊａｐａｎ社製）とを用いて、１分間ごとに、赤外線センサーの前を横切るマウスの行動回数を計測した。なお、当該計測方法では、赤外線センサーの前を横切る回数が多いほど、マウスの行動量が多いと判定される。
【０１０６】
また、マウスの飼育は、人工的に作り出された日周期（１日＝２４時間）および２４℃の恒温の環境下にて行った。つまり、基本的に暗室内にてマウスを飼育し、当該室内にて照明を点灯することによって１２時間の明期を生み出し、照明を消すことによって１２時間の暗期を生み出した。８：００〜２０：００を明期とし、２０：００〜８：００を暗期としている。そして、上述した各試料は、１８：００に、マウスに投与した。
【０１０７】
以下に実験結果について説明する。
【０１０８】
まず、図１（ａ）〜図１（ｄ）に、各試料（酒粕ペプチド１、１／２量の酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または、乳酸菌発酵酒粕）をマウスに経口投与後１４時間の、マウスの総行動量を示す。
【０１０９】
図１（ａ）に示すように、酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が増加する傾向を示した。また、図１（ｂ）に示すように、１／２量の酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合にも、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が増加する傾向を示した。また、図１（ｃ）に示すように、酒粕ペプチド２をマウスに投与した場合にも、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が増加する傾向を示した。なお、これらの試料の中では、酒粕ペプチド１を投与した場合が、最も有意な増加傾向を示した。一方、図１（ｄ）に示すように、乳酸菌発酵酒粕をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロールと比較して、マウスの総行動量が減少する傾向を示した。
【０１１０】
次いで、図２〜図５に、各試料（酒粕ペプチド１、１／２量の酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または、乳酸菌発酵酒粕）をマウスに経口投与した後の、マウスの行動量の経時変化を示す。なお、各図面における横軸は、時刻を示している。
【０１１１】
図２に示すように、酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから１〜４、６および９時間後にマウスの行動量が、特に有意に増加していた。
【０１１２】
また、図３に示すように、１／２量の酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから１〜６時間後にマウスの行動量が、特に有意に増加し、投与してから７、１１および１２時間後にマウスの行動量が、特に有意に減少していた。
【０１１３】
また、図４に示すように、酒粕ペプチド２をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから２、３、６、８および９時間後にマウスの行動量が、特に有意に増加していた。
【０１１４】
一方、図５に示すように、乳酸菌発酵酒粕をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから２および４時間後にマウスの行動量が、特に有意に減少していた。なお、図６に、図２〜図５のデータを一つにまとめたグラフを示す。
【０１１５】
次いで、図７に、各試料（清酒、１／２量の清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与後１４時間の、マウスの総行動量を示す。
【０１１６】
図７示すように、清酒をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が、特に有意に減少した。一方、１／２量の清酒、清酒乾燥エキス、または焼酎をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量に有意な差異はなかった。
【０１１７】
本実施例でマウスに投与した清酒および焼酎には、同量のアルコールが含有されている。このとき、清酒はマウスの行動量を減少させる効果を有するが、焼酎には当該効果が無いので、清酒が有する行動量を減少させる効果は、アルコールの効果ではないことが明らかである。また、清酒乾燥エキスにはマウスの行動量を減少させる効果が無いので、清酒が有する行動量を減少させる効果は、清酒に含まれる揮発性の物質に由来することが明らかである。
【０１１８】
以上の結果から、清酒自体も、自律神経調節剤（更に具体的には、摂取対象を沈静化させるための自律神経調節剤）として、好適に用いることが可能である。
【０１１９】
次いで、図８に、各試料（清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与した後の、マウスの行動量の経時変化を示す。なお、各図面における横軸は、時刻を示している。
【０１２０】
図８に示すように、清酒をマウスに投与した場合には、他の試料と比較して、マウスの行動量が有意に減少した。特に、投与してから０〜６時間後にマウスの行動量が有意に減少した。
【０１２１】
なお、図８の結果を周知の方法（Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較）にて統計解析した結果を下記表１に記載する。当該表１からも、他の試料と比較して、清酒がマウスの行動量を減少させる効果が高いことが明らかである。
【０１２２】
【表１】
【０１２３】
＜３．覚醒度の評価試験＞
酒粕ペプチド１を含有するカプセル剤を作製し、当該カプセル剤のヒトへの効果を検討した。
【０１２４】
具体的には、１ｇの酒粕ペプチド１を、透明なハードカプセル（松屋製、１号サイズ）６個に等量ずつ分注した。被験者１名につき、朝食後に上記６個のカプセル剤を投与した。被験者としては、健康な成人男女１０名（平均年齢：４４．６±４．９）を選択した。なお、当該被験者からは、薬を投与されている者、アレルギー症状を示す恐れのある者、妊娠・授乳中の者、および、重度の疾患を患っている者を除外した。
【０１２５】
被験者に対してアンケートを実施し、カプセル剤を摂取していない日の日中と比較して、カプセル剤を摂取している日の日中の覚醒度合を自己診断してもらった。なお、覚醒度合は１〜５にて評価した。「沈静効果を感じる場合」を覚醒度合１と判定し、「やや沈静効果を感じる場合」を覚醒度合２と判定し、「差異が無い場合」を覚醒度合３と判定し、「やや覚醒効果を感じる場合」を覚醒度合４と判定し、「覚醒効果を感じる場合」を覚醒度合５と判定した。
【０１２６】
その結果を表２に示す。
【０１２７】
【表２】
【０１２８】
表２から明らかなように、１０人中８人（８０％）の被験者が、何らかの覚醒効果があると判定した。また、覚醒度合の平均値は４．１であり、何も摂取していない場合（覚醒度３）と比較して、覚醒度合の大きな上昇が観察された。
＜４．胃副交感神経試験＞
０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの乳酸菌発酵酒粕と０．０１ｍｇ〜５００ｍｇの米麹とに関して、胃副交感神経活動（gastric vagal nerve activity：ＧＶＮＡ）への影響を検討した。以下に、まず実験方法について説明する。
【０１２９】
実験には、人工的に作り出された日周期（１日＝２４時間、８：００〜２０：００が明期）および２４℃の恒温の環境下で１週間以上飼育された体重約３００ｇのＷｉｓｔａｒ系ラット（雄）を用いた。なお、餌（オリエンタル酵母：ＭＦ）および水は、自由に摂取させた。
【０１３０】
胃副交感神経活動の測定にあたっては、ラットを、３時間絶食させた後で、明期の中間期にウレタン（ｕｒｅｔｈａｎｅ）にて麻酔をかけた。その後、当該ラットを開腹し、胃を制御する副交換神経を銀電極によって吊り上げ、周知の方法（例えば、Tanida M et al., Neurosci. Lett. 389:109（2005）参照）に基づいて神経活動を測定した。
【０１３１】
開復手術開始時から測定終了時まで、ラットの気管にチューブを挿入して気道を確保するとともに、保温装置を用いて、ラットの体温（直腸温）を３５．０±０．５℃に維持した。
【０１３２】
胃副交感神経活動が落ち着いた時（１３：００頃）に、乳酸菌発酵酒粕または米麹をラットの胃の中へ注入し、胃副交感神経の電気活動の変化を測定した。なお、各試料の胃への注入には、胃内投与用の注射針および注射筒を使用し、各試料を１ｍＬの水に溶解または懸濁したものを注入した。
【０１３３】
以下の実験では、まず、胃副交感神経活動を活性化させるための投与量を決定し、その後、１種類の試料につき３匹のラットを用いて、当該投与量が胃副交感神経活動に及ぼす影響を詳細に検討することにした。なお、ネガティブコントロールとしては、１ｍＬの水を用いた。
【０１３４】
神経活動は、５分毎の５秒あたりの発火頻度（ｐｕｌｓｅ／５ｓ）の平均値に基づいて解析し、試料投与前の値を１００％として算出した。なお、データは、平均値±標準誤差にて示した。また、分散分析法（ＡＮＯＶＡ ｗｉｔｈ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ）およびＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ−ｔｅｓｔに基づいて、統計解析を行った。
【０１３５】
以下に、実験結果について説明する。
【０１３６】
図９に、各量（０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、または、１００ｍｇ）の乳酸菌発酵酒粕を投与した場合のＧＶＮＡの実測データを示し、図１０に、各量の乳酸菌発酵酒粕を投与した場合のＧＶＮＡの相対比を示す。
【０１３７】
図９および図１０に示すように、乳酸菌発酵酒粕はＧＶＮＡを変化させた。具体的には、０．０１ｍｇまたは１ｍｇの乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡの若干の低下が見られた。一方、１０ｍｇまたは１００ｍｇの乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡを上昇させることができた。また、ＧＶＮＡを上昇させる効果は、１００ｍｇ投与した場合よりも、１０ｍｇ投与した場合の方が高かった。ＧＶＮＡが上昇すれば、消化管の蠕動が促進され、これによって、食物の消化・吸収能が高められることが期待できる。なお、乳酸菌発酵酒粕を投与後０〜５分に観察されるＧＶＮＡの変動は、胃内投与の際の注射針による機械的刺激によって引き起こされたものと考えられる。
【０１３８】
図１１に、各量（０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、または、５００ｍｇ）の米麹を投与した場合のＧＶＮＡの実測データを示し、図１２に、各量の米麹を投与した場合のＧＶＮＡの相対比を示す。
【０１３９】
図１１および図１２に示すように、米麹は、ＧＶＮＡを変化させた。具体的には、１００ｍｇまたは５００ｍｇの米麹をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡの若干の低下が見られた。一方、０．０１ｍｇ、１ｍｇまたは１００ｍｇの米麹をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡを上昇させることができた。また、ＧＶＮＡを上昇させる効果は、１０ｍｇ投与した場合が、最も高かった。ＧＶＮＡが上昇すれば、消化管の蠕動が促進され、これによって、食物の消化・吸収能が高められることが期待できる。なお、米麹を投与後０〜５分に観察されるＧＶＮＡの変動は、胃内投与の際の注射針による機械的刺激によって引き起こされたものと考えられる。
【０１４０】
上述した実験により、１０ｍｇの乳酸菌発酵酒粕、または、１０ｍｇの米麹を投与した場合に最も効果的にＧＶＮＡを上昇させ得ることが明らかになった。そこで、更に詳細に検討するために、再度、１０ｍｇの乳酸菌発酵酒粕、１０ｍｇの米麹、または、水（ネガティブコントロール）をラットに投与してＧＶＮＡの実測データを計測するとともに、当該実測データに基づいて、各試料を投与した場合のＧＶＮＡの相対比を算出した。
【０１４１】
まず、図１３、図１４および図１５に、それぞれ、水、乳酸菌発酵酒粕（１０ｍｇ／ｍＬ）、および、米麹（１０ｍｇ／ｍＬ）をラットに投与した場合のＧＶＮＡの実測データを示す。また、図１６および図１７に、それぞれ、水を投与した場合と乳酸菌発酵酒粕を投与した場合とのＧＶＮＡの比較、および、水を投与した場合と米麹を投与した場合とのＧＶＮＡの比較を示す。なお、図１８は、図１６および図１７を１つのグラフとして記載したグラフである。
【０１４２】
図１６〜図１８から明らかなように、水は、ＧＶＮＡをほとんど変化させなかった。一方、乳酸菌発酵酒粕および米麹は、水と比較して、有意にＧＶＮＡを変化させることができた。なお、乳酸菌発酵酒粕および米麹は、６０分間の間、ＧＶＮＡを徐々に上昇させ続けた。
【０１４３】
本発明は、以上説示した各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態や実施例にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態や実施例についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１４４】
本発明は、自律神経の活動を調節することができるので、健康機能食品、飲料水、薬、家畜用飼料などとして好適に利用できる。健康機能食品または飲料水として利用する場合には、汁物（味噌汁、吸い物、コーンスープ、ポテトスープ、コンソメスープ、たまごスープ、野菜スープ、カレー、またはシチューなど）、飲料（スポーツ飲料、ドリンク剤、乳飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、炭酸飲料、野菜飲料、または茶飲料など）、菓子類（クッキー等の焼き菓子、ゼリー、ガム、グミ、飴、ヨーグルト、アイスクリーム、またはプリンなど）などの一成分とし利用することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自律神経を調節することが可能な自律神経調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
自律神経系には、交感神経系と副交感神経系との二系統が存在し、両者の活動のバランスによって自律神経系全体が制御されている。例えば、身体が活動しているときには交感神経の活動が優位となり、全身が緊張した状態となる。逆に、副交感神経の活動が優位なときは身体の緊張がとれ、くつろいでいる状態となる。
【０００３】
近年、自律神経系を積極的に制御することによって、健康を維持したり、各種疾患を治療したりしようとする多くの試みがなされている。
【０００４】
例えば、特許文献１には、脂質とタンパク質（例えば、乳タンパク質または大豆タンパク質）とを含有し、胃腸管を介して副交感神経に作用して炎症反応を軽減する組成物が記載されている。特許文献２には、合成ペプチドを含有し、副交感神経に作用して涙液の分泌を促進する組成物が開示されている。特許文献３には、植物（例えば、ブドウまたはオオムギ）由来の成分とオーク材から抽出された成分とを含有し、嗅覚を介して自律神経に作用する組成物が記載されている。特許文献４には、カルシノンを含有し、経口投与などによって体内に取り込まれることによって自律神経に作用する組成物が記載されている。
【０００５】
ところで、「酒は百薬の長」といわれるように、適量の酒を摂取することによって生体に対して様々な有益な効果をもたらし得ることが昔から知られており、近年、これらの効果に注目が集まっている。
【０００６】
酒には様々な種類が存在し、これらの種類としては、例えば醸造酒（例えば、清酒、果実酒など）および蒸留酒（例えば、焼酎、ウイスキー、ブランデーなど）などを挙げることができる。これらの酒は、原料および製造方法などが異なるために、含有成分が大きく異なっている。それ故に、酒の種類ごとに、様々な異なる効果を示すことが期待される。
【０００７】
清酒は、米を主原料にして製造される醸造酒であるが、製造工程において生み出される中間体、最終産物、およびこれらを更に加工した加工物が、生体に対して様々な有益な効果を示すことが近年明らかになりつつある。例えば、本出願人は、これまで高血圧の予防および治療効果、肝機能障害抑制効果、抗酸化効果、脈波伝播速度降下効果、体重増加抑制効果、腹腔内白色脂肪組織の蓄積抑制効果、血中脂質（中性脂肪）改善効果、健忘症抑制効果および脱毛抑制効果などを報告している（例えば、特許文献５〜１２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００８−５１９８３１号公報（公表日：２００８年６月１２日）
【特許文献２】特開２００５−２７２４４５号公報（公開日：２００５年１０月６日）
【特許文献３】特開２００６−１０４０６７号公報（公開日：２００６年４月２０日）
【特許文献４】ＷＯ０２／０７６４５５（国際公開日：２００２年１０月３日）
【特許文献５】特開平４−２７９５２９号公報（公開日：１９９２年１０月５日）
【特許文献６】特開平５−２９４８４４号公報（公開日：１９９３年１１月９日）
【特許文献７】特開２００８−３０８４４５号公報（公開日：２００８年１２月２５日）
【特許文献８】特開２００９−１９６９４９号公報（公開日：２００９年９月３日）
【特許文献９】特開２００９−２２１１９３号公報（公開日：２００９年１０月１日）
【特許文献１０】特開２００９−１６７１２７号公報（公開日：２００９年７月３０日）
【特許文献１１】特開２００７−９９７３１号公報（公開日：２００７年４月１９日）
【特許文献１２】特開２００８−５０２６９号公報（公開日：２００８年３月６日）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、清酒の製造工程にて生み出される中間体、最終産物、およびこれらの加工物（特に、酒粕加工物）の機能が全て明らかにされたわけではない。
【００１０】
本発明の目的は、酒粕加工物などの、清酒の製造工程にて生み出される中間体、最終産物、およびこれらの加工物のさらなる機能を見出し、その機能を利用した自律神経調節剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、酒粕加工物が自律神経を調節する効果を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
本発明の自律神経調節剤は、上記課題を解決するために、酒粕加工物を含有することを特徴としている。
【００１３】
本発明の自律神経調節剤では、上記酒粕加工物は、酒粕に対して１）プロテアーゼ処理、２）セルラーゼ処理、および３）乳酸菌発酵処理からなる群より選択される少なくとも１つの処理が施されたものであることが好ましい。
【００１４】
本発明の自律神経調節剤では、上記酒粕加工物は、清酒の液化仕込みによって生じる酒粕から作製されるものであることが好ましい。
【００１５】
本発明の自律神経調節剤は、覚醒度を調節するものであることが好ましい。
【００１６】
本発明の自律神経調節剤は、副交感神経を調節するものであることが好ましい。
【００１７】
本発明の自律神経調節剤は、上記プロテアーゼ処理では、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼが用いられていることが好ましい。
【００１８】
本発明の自律神経調節剤は、上記セルラーゼ処理では、エンドグルカナーゼまたはセロビオヒドロラーゼが用いられていることが好ましい。
【００１９】
本発明の自律神経調節剤は、上記乳酸発酵処理では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍが用いられていることが好ましい。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、自律神経を調節することで、覚醒あるいは沈静効果を得る、または食物の消化・吸収を促進させることができる。また、本発明は酒の製造工程で生じる酒粕を加工して得られる酒粕加工物を原料として用いているため、生体にとって安全であり、かつ安価な自律神経調節剤を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】（ａ）〜（ｄ）は、本発明の実施例における、各試料（酒粕ペプチド１、１／２量の酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または、乳酸菌発酵酒粕）をマウスに経口投与した場合の、マウスの総行動量を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例における、酒粕ペプチド１をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図３】本発明の実施例における、１／２量の酒粕ペプチド１をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図４】本発明の実施例における、酒粕ペプチド２をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図５】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである（片側検定）。
【図６】図２〜図５のデータを１つにまとめたグラフである。
【図７】本発明の実施例における、各試料（清酒、１／２量の清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与した場合の、マウスの総行動量を示すグラフである。
【図８】本発明の実施例における、各試料（清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与した場合の、マウスの行動量の経時変化を示すグラフである。
【図９】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１０】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの相対比を示すグラフである。
【図１１】本発明の実施例における、米麹をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１２】本発明の実施例における、米麹をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの相対比を示すグラフである。
【図１３】本発明の実施例における、水をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１４】本発明の実施例における、乳酸菌発酵酒粕（１０ｍｇ／ｍＬ）をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１５】本発明の実施例における、米麹（１０ｍｇ／ｍＬ）をラットに投与した場合の、ＧＶＮＡの実測データを示すグラフである。
【図１６】本発明の実施例における、水を投与した場合のＧＶＮＡと、乳酸菌発酵酒粕（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した場合のＧＶＮＡとを比較したグラフである。
【図１７】本発明の実施例における、水を投与した場合のＧＶＮＡと、米麹（１０ｍｇ／ｍＬ）を投与した場合のＧＶＮＡとを比較したグラフである。
【図１８】図１６および図１７に示したグラフを１つに図面化したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の一実施形態について説明すると以下の通りであるが、本発明はこれに限定されるものではない。また、本明細書において「Ａ〜Ｂ」と記載した場合には、「Ａ以上Ｂ以下」を意図する。
【００２３】
本実施の形態の自律神経調節剤は、酒粕加工物を含有しているものであればよく、その他の成分、剤型等については特に限定されるものではない。以下の説明では、まず特徴的な「酒粕加工物」に関して説明し、次いで「その他の成分」、「その他の有効成分」について説明する。
【００２４】
〔１．酒粕加工物〕
本明細書において「酒粕」とは、酒類のアルコール発酵工程後に得られる固体画分を意図し、その具体的な構成としては特に限定されないが、清酒の製造工程で生じる酒粕であることが好ましい。上述の清酒の製造工程で生じる酒粕は特に限定されないが、たんぱく質を多く含むという点で液化仕込みと呼ばれる清酒の製造方法によって生じた酒粕が更に好ましい。
【００２５】
本明細書において「酒粕加工物」とは、酒粕に対して何らかの加工処理を施したものを意図し、加工処理の具体的な内容は特に限定されない。当該加工処理は、原料の形状・形態を変化させる処理であっても良いし、被加工物（原料）中に含まれる成分の種類および／または量を変化させる処理であってもよい。
【００２６】
上記加工処理としては、例えば、酒粕に対して１）プロテアーゼ処理、２）セルラーゼ処理、および３）乳酸菌発酵処理からなる群より選択される少なくとも１つの処理を行うことが好ましい。
【００２７】
上述の２）セルラーゼ処理は、１）プロテアーゼ処理または３）乳酸菌処理と共に行うことが好ましく、１）プロテアーゼ処理と共に行うことが更に好ましい。また、２）セルラーゼ処理は、他の処理を行う前の前処理として行うことが好ましい。以下に、上述した１）〜３）の各処理の一例について更に詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されない。
【００２８】
＜１−１．セルラーゼ処理＞
セルラーゼ処理は、原料（例えば、酒粕、または酒粕に他の処理を施して生じる産物など）に対してセルラーゼを作用させる工程である。
【００２９】
セルラーゼとしては特に限定されず、適宜公知のセルラーゼを用いることが可能である。セルラーゼは様々なサブファミリーに分類されるが、本実施の形態では、セルロース鎖をランダムに切断するエンドグルカナーゼ、または、セルロースを還元末端から切断してセロビオースを生成するセロビオヒドロラーゼを用いることが好ましい。両者を併用すれば、更に好ましい。また、セルラーゼの由来は特に限定されないが、原料に対して作用し易いという観点から、トリコデルマ属菌由来のセルラーゼが好ましい。セルラーゼ処理を行うことにより原料のセルロースを分解することができ、また他の処理と併用した場合に、他の処理の効果を増強することができる。
【００３０】
セルラーゼの使用量は特に限定されないが、原料に対して約０．００５重量％〜０．２重量％を用いることが好ましく、約０．０５重量％〜０．１重量％を用いることが更に好ましい。上記構成であれば、実用的な時間内にセルロースが十分に分解されて、原料を液体状に可溶化することができる。
【００３１】
反応温度および反応時間は、使用する原料およびセルラーゼの種類に応じて異なるが、反応温度は約３０℃〜７０℃であることが好ましく、約４０℃〜６０℃であることが更に好ましい。反応時間は約２時間〜２０時間であることが好ましい。
【００３２】
反応時のｐＨは、セルラーゼの種類に応じて異なるが、セルラーゼが機能し易い約３．５〜６．０が好ましい。上記範囲であれば、セルラーゼが失活することなく、かつその機能を十分に発揮できる。セルラーゼによる反応は、必ずしも停止させる必要はないが、反応混合物を例えば約８０℃〜１００℃で約１０分間〜６０分間加熱することにより停止させることができる。
【００３３】
セルラーゼ処理では、夾雑物である糖質を除去するために、更にアミラーゼ処理を行うことが好ましい。なお、アミラーゼとはデンプンを加水分解する酵素の総称であり、具体的には、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼなどが挙げられ、これらを用いることが可能である。
【００３４】
アミラーゼは、１種のみを使用しても良く、２種以上を組み合わせて使用しても良い。第１工程では、上述したアミラーゼの中でも、β−アミラーゼ、α−アミラーゼまたはα−グルコシダーゼを用いることが好ましく、β−アミラーゼを用いることが更に好ましく、麦芽由来のβ−アミラーゼを用いることが最も好ましい。
【００３５】
アミラーゼの使用量は特に限定されないが、原料（例えば、酒粕など）に対して約０．００５重量％〜０．２重量％を用いることが好ましく、約０．０５重量％〜０．１重量％を用いることが更に好ましい。上記構成であれば、実用的な時間内に糖質を十分に可溶化することができる。
【００３６】
アミラーゼ処理における反応温度および反応時間は、使用する原料およびアミラーゼの種類に応じて異なるが、反応温度は約３０℃〜６０℃であることが好ましく、約５０℃〜６０℃であることが更に好ましい。反応時間は約５時間〜２０時間であることが好ましい。
【００３７】
アミラーゼによる反応は、必ずしも停止させる必要はないが、反応混合物を例えば約８０℃〜１００℃で約１０〜６０分間加熱することにより停止させることができる。反応時のｐＨは特に限定されず、アミラーゼの種類に応じて異なるが、アミラーゼが機能し易い約５〜６であることが好ましい。
【００３８】
＜１−２．プロテアーゼ処理＞
プロテアーゼ処理は、原料（例えば、酒粕または酒粕に他の処理を施して生じる産物）に対してプロテアーゼを作用させる工程である。例えば、当該原料は、酒粕であっても良いし、酒粕をセルラーゼ処理した後の産物であってもよい。
【００３９】
他の処理（例えば、セルラーゼ処理）後の産物をプロテアーゼ処理する場合には、他の処理によって得られる混合物から液体画分を除去して固体画分を得、当該固体画分に対してプロテアーゼ処理を行うことが好ましい。なお、固体画分と液体画分とを分離する方法としては特に限定されないが、例えば、圧搾、濾過、遠心分離などの方法を用いることが好ましい。当該構成であれば、夾雑物（例えば、低分子化された糖質などに代表される水溶性成分など）を除去することができる。
【００４０】
プロテアーゼとしては特に限定されず、公知のプロテアーゼを用いることが可能である。例えば、プロテアーゼとしては、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼを用いることが好ましく、これらを併用することが更に好ましい。また、中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼの各々についても、１種類のプロテアーゼであっても良いし、２種類以上のプロテアーゼの混合物であってもよい。更に具体的には、例えば、コクラーゼ（登録商標）、サモアーゼ（登録商標）、レンネット（登録商標）、プロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ（登録商標）、プロテアーゼＭ「アマノ」Ｇ（登録商標）、プロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ（登録商標）、ニューラーゼＦ３Ｇ（登録商標）、パパインＷ−４０（登録商標）、ウマミザイムＧ（登録商標）、プロメラインＦ（登録商標）、サモアーゼＰＣ１０Ｆ（登録商標）、ペプチダーゼＲ（登録商標）、サーモリシン（登録商標）、モルシンＦ（登録商標）、スミチームＡＰ（登録商標）、ニュートラーゼ（登録商標）、またはアクチナーゼＡＳ（登録商標）などの市販の食品工業用酵素を使用できる。
【００４１】
プロテアーゼの由来は特に限定されないが、例えば、バチルス属細菌由来、アスペルギルス属菌由来またはリゾプス属菌由来のプロテアーゼを用いることが好ましく、中でも、バチルス属細菌由来の中性プロテアーゼまたはアスペルギルス属菌由来の酸性プロテアーゼを用いることが更に好ましい。
【００４２】
プロテアーゼはエンド型でもエキソ型でもどちらでも良いが、目的とするペプチドが必要以上に断片化されないためにはエンド型であることが好ましい。
【００４３】
プロテアーゼの使用量は特に限定されないが、中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼの各々が、原料に対して約０．１重量％〜０．８重量％であることが好ましく、約０．３重量％〜０．６重量％であることが更に好ましい。上記構成であれば、実用的な時間内に原料中のタンパク質を十分に分解できる。
【００４４】
反応温度および反応時間は、使用するプロテアーゼの種類によって異なるが、中性プロテアーゼの場合には、反応温度は約４０℃〜６５℃であることが好ましく、約４５℃〜６０℃であることが更に好ましい。反応時間は約５時間〜２０時間であることが好ましい。また、酸性プロテアーゼの場合には、反応温度は約４５℃〜７０℃であることが好ましく、約５０℃〜６５℃であることが更に好ましい。反応時間は約５時間〜２０時間であることが好ましい。
【００４５】
プロテアーゼによる反応は、反応混合物を例えば約８０℃〜１００℃で約１０分間〜６０分間加熱することにより停止させることが可能である。プロテアーゼによる反応を停止させることによって、ペプチドがさらに分解されて生理活性が低下することを防止することができる。更には、生理活性を示さない夾雑ペプチドが切り出されることによる、不純物の増加を抑制することができる。
【００４６】
プロテアーゼ処理における反応時のｐＨは、中性プロテアーゼの場合には、約６．０〜９．０であることが好ましく、酸性プロテアーゼの場合には、約３．０〜５．０であることが好ましい。上記構成であれば、各プロテアーゼの機能を最大限に発揮させることができる。
【００４７】
上述したように中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼは、それぞれ単独で用いられても良く、併用されても良い。併用する場合には、何れを先に反応させてもよいが、より生理活性の強いペプチド混合物を得ることができる点で、中性プロテアーゼを先に反応させる方が好ましい。また、プロテアーゼが機能するｐＨが重複する場合には、複数のプロテアーゼを同時に反応させることも可能である。
【００４８】
プロテアーゼ処理で得られた混合物からは、更に固形画分が除去されてもよい。これにより、固体状の夾雑物が除去されて、生理活性を有するペプチドが溶解した液体画分を得ることができる。
【００４９】
固体画分の除去は、例えば圧搾、濾過、遠心分離等により行うことができる。得られた液体画分は、そのまま酒粕加工物として用いることも可能であるし、当該液体画分を濃縮したり、乾燥させて粉末化したりして酒粕加工物として用いることも可能である。上記構成によれば、より長期間の保存が可能であり、しかも、更なる加工が施し易い酒粕加工物を得ることが可能となる。
【００５０】
＜１−３．乳酸菌発酵処理＞
乳酸菌発酵処理では、原料（例えば、酒粕または酒粕に他の処理を施して生じる産物など）に対して乳酸菌を作用させる。
【００５１】
上述した原料に酒粕以外の物質を添加することも可能であって、当該添加物の種類および量は特に限定されない。例えば、米糠を添加する場合は、酒粕の０．１重量％〜５０重量％の米糠であることが好ましく、２重量％〜２０重量％であることが更に好ましい。水を添加する場合は、酒粕の０．５倍〜１０倍の重量の水を添加すること好ましく、１倍〜５倍の重量の水を添加することが更に好ましい。
【００５２】
また、原料中には、乳酸菌の良好な生育のためにグルコースを添加することが好ましい。グルコースの添加量は特に限定されないが、酒粕の０．１重量％〜１０重量％であることが好ましく、酒粕の０．５重量％〜５重量％であることが更に好ましい。
【００５３】
原料に対して添加物を加えた後、ミキサーまたはグラインダーを用いて原料を粉砕懸濁して混合物を得る。そして、当該混合物に対して、前培養をしておいた乳酸菌を添加する。添加される乳酸菌の量は特に限定されない。例えば、培養液中の乳酸菌の濃度が、１×１０５〜１×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように添加されることが好ましく、１×１０６〜１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように添加されることが更に好ましい。
【００５４】
上記乳酸菌としては特に限定されないが、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、または、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等に属する乳酸菌を用いることが好ましく、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する乳酸菌を用いることが更に好ましい。
【００５５】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する乳酸菌としては特に限定されないが、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、またはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍを用いることが好ましい。これらの中では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓを用いることが更に好ましい。
【００５６】
発酵温度は乳酸菌の種類に応じて適宜設定することが可能であるが、例えば、１５℃〜４５℃であることが好ましく、３０℃〜４０℃であることが更に好ましい。また、発酵時間も特に限定されないが、例えば、１６時間〜７２時間であることが好ましく、２０時間〜５０時間であることが更に好ましい。
【００５７】
乳酸菌発酵処理を行うときには、発酵物の香気・味覚を良好にするために、発酵条件を好気条件にすることが好ましい。例えば、発酵容器の蓋に複数の小さな通気孔を設けることにより、乳酸菌発酵処理を好気条件下にて行うことができ、その結果、良好な香気を有し、味覚にも優れた発酵物を得ることができる。
【００５８】
このようにして得られた発酵物をそのまま酒粕加工物として用いることも可能であるし、更なる分離操作を行うことも可能である。例えば、遠心分離、フィルター濾過などの方法により固体と液体とを分離し、液体画分を凍結乾燥またはスプレードライなどの方法によって乾燥させて粉末を得、当該粉末を酒粕加工物として用いることも可能である。
【００５９】
以下では、各酒粕加工物の作用・含有量等について説明する。
【００６０】
例えば、酒粕に対してプロテアーゼ処理（またはセルラーゼ処理およびプロテアーゼ処理）が施された酒粕加工物を含有する自律神経調節剤は、後述する実施例に示すように、投与対象の行動量を増加させることができる。換言すれば、当該自律神経調節剤は、自律神経に作用し、投与対象を覚醒（興奮）させる作用を有するといえる。
【００６１】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は特に限定されないが、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．１ｇ〜１００ｇを投与できるよう配合されることが好ましく、１ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜５０ｇが更に好ましい。
【００６２】
また、酒粕に対して乳酸菌処理が施された酒粕加工物を含有する自律神経調節剤は、後述する実施例に示すように、投与対象の行動量を減少させることができる。換言すれば、当該自律神経調節剤は、自律神経に作用し、投与対象を沈静（抑制）させる作用を有するといえる。
【００６３】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は特に限定されないが、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．１ｇ〜１００ｇを投与できるように配合することが好ましく、１ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜１００ｇが更に好ましく、１０ｇ〜５０ｇが更に好ましい。
【００６４】
また、酒粕に対して乳酸菌処理が施された酒粕加工物を含有する自律神経調節剤は、副交感神経の活動を活性化させることが可能である。
【００６５】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり３０ｍｇ〜３３０ｍｇであることが好ましく、３０ｍｇ〜１８０ｍｇが更に好ましく、３０ｍｇであることが最も好ましい。
【００６６】
本実施の形態の自律神経調節剤は、健康機能食品、飲料水、薬、家畜用飼料などとして利用することができる。そして、それ故に、本実施の形態の自律神経調節剤は、様々な形態をとり得る。
【００６７】
例えば、薬として利用する場合には、本実施の形態の自律神経調節剤は、経口投与剤（例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤など）、非経口投与剤（例えば、注射剤、点滴剤、外用剤、座剤など）などの形態をとることが可能である。投与の容易性などを考慮すれば、経口投与剤の形態であることが好ましいといえる。実施例からも明らかなように、経口投与剤としての形態であっても、本実施の形態の自律神経調節剤は、十分に効果を発揮することができる。
【００６８】
また、健康機能食品または飲料水として利用する場合には、本実施の形態の自律神経調節剤は、汁物（味噌汁、吸い物、コーンスープ、ポテトスープ、コンソメスープ、たまごスープ、野菜スープ、カレー、またはシチューなど）、飲料（スポーツ飲料、ドリンク剤、乳飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、炭酸飲料、野菜飲料、または茶飲料など）、菓子類（クッキー等の焼き菓子、ゼリー、ガム、グミ、飴、ヨーグルト、アイスクリーム、またはプリンなど）などの形態をとることが可能である。中でも、毎日の食生活で無理なく摂取できるという点で汁物の形態であることが好ましく、食習慣が確立しているという観点から、味噌汁の形態であることが更に好ましい。
【００６９】
〔２．その他の成分〕
本実施の形態の自律神経調節剤は、上述した成分以外にも様々な成分を含有させることが可能である。例えば、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、付湿剤、着色剤、矯味矯臭剤などを含有することが可能であるが、これらに限定されない。なお、自律神経調節剤中のこれら成分の含有量は特に限定されず、所望の量だけ含有させることが可能である。
【００７０】
上記賦形剤としては特に限定されず、適宜公知の賦形剤を用いることが可能である。例えば、糖（例えば、乳糖、ショ糖またはブドウ糖など）、デンプン（例えば、バレイショデンプン、コムギデンプンまたはトウモロコシデンプンなど）、セルロース（例えば、結晶セルロースなど）、または、無機塩類（例えば、無水リン酸水素カルシウムまたは炭酸カルシウムなど）を用いることが好ましい。
【００７１】
上記結合剤としては特に限定されず、適宜公知の結合剤を用いることが可能である。例えば、結晶セルロース、プルラン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、またはマクロゴールなどを用いることが好ましい。
【００７２】
上記崩壊剤としては特に限定されず、適宜公知の崩壊剤を用いることが可能である。例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、デンプン、またはアルギン酸ナトリウムなどを用いることが好ましい。
【００７３】
上記潤沢剤としては特に限定されず、適宜公知の潤沢剤を用いることが可能である。例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、または硬化油などを用いることが好ましい。
【００７４】
上記付湿剤としては特に限定されず、適宜公知の付湿剤を用いることが可能である。例えば、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、大豆リン脂質、グリセリン、またはソルビトールなどを用いることが好ましい。
【００７５】
上記矯味矯臭剤としては特に限定されず、適宜公知の矯味矯臭剤を用いることが可能である。例えば、通常使用される甘味料、酸味料、または香料などを用いることが可能である。更に具体的には、白糖、グルコース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ケイヒ油、ハッカ油、またはメントールなどを用いることが好ましい。
【００７６】
〔３．その他の有効成分〕
本実施の形態の自律神経調節剤には、上述した酒粕加工物以外にも、自律神経を調節するための有効成分として様々な物質を含有させることができる。
【００７７】
例えば、清酒の製造過程で生じる様々な中間体（例えば、米麹など）、最終産物（例えば、酒粕または清酒など）、またはこれらの加工物も本実施の形態の自律神経調節剤中に、有効成分として含有され得る。
【００７８】
例えば、実施例からも明らかなように、米麹を含有する自律神経調節剤は、副交感神経の活動を活性化させることができる。
【００７９】
この場合、自律神経調節剤中に含まれる酒粕加工物の量は、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．０３ｍｇ〜３０ｍｇであることが好ましく、３ｍｇ〜３０ｍｇが更に好ましく、３０ｍｇであることが最も好ましい。
【００８０】
また、清酒を含有する自律神経調節剤は、当該自律神経調節剤の投与対象の行動量を減少させることができる。換言すれば、当該自律神経調節剤は、自律神経に作用し、投与対象を沈静（抑制）させる作用を有するといえる。
【００８１】
この場合、自律神経調節剤中に含有される清酒の量は限定されないが、１回の投与あたり、投与対象の体重１ｋｇあたり０．１ｍＬ〜１００ｍＬを投与できることが好ましく、１ｍＬ〜１００ｍＬを投与できることが更に好ましく、５ｍＬ〜５０ｍＬを投与できることが更に好ましく、１０ｍＬ〜３０ｍＬを投与できることが更に好ましい。
【００８２】
なお、特開平０４−２７９５２９号公報、特開平０５−２９４８４４号公報、特開２００９−１６７１２７号公報、特開２００８−３０８４４５号公報、特開２００９−１９６９４９号公報、特開２００９−２２１１９３号公報、特開２００７−９９７３１号公報、特開２００８−５０２６９号公報、および特開昭５９−６６８７５号公報に記載されている事項は全て、本明細書中に参考として援用される。
【実施例】
【００８３】
＜１．試料作製＞
＜１−１．米麹および酒粕の作製＞
本実施例に用いた米麹は、公知の製造方法（特開２００８−２４７８８８号公報）に基づいて作製した。すなわち、精米歩合７０％の粳米６ｋｇを井戸水に浸漬して一晩置いた後、これを蒸米器で１時間蒸きょうし、３０℃まで冷却した。
【００８４】
市販酒造用種麹（菱六社製 醪用）を、蒸米５００ｇにつき０．５ｇずつ塗布して蒸米を攪拌し、これを固体培養装置（ヤエガキ社製）に入れた。固体培養装置内の温度を３５℃に調節し、１０時間後から３０時間後まで時々米麹をかき混ぜた。その後、固体培養装置内の温度を４０℃に調節し、種麹が塗布された蒸米を固体培養装置に入れてから４８時間後に、当該蒸米を固体培養装置から出して通風乾燥し、製麹を終えた。
【００８５】
本実施例に用いた酒粕は、基本的に、液化酵素で液化した原料米をアルコール発酵させるという公知の清酒製造方法（今安 聰ら：日本農芸化学会誌、第６３号、第９７１頁、１９８９年、特開昭５９−６６８７５号公報）に基づいて作製した。
【００８６】
簡単に言えば、まず、精白米に水を加えて、当該精白米に十分に水を吸収させた。当該混合液にα−アミラーゼを加えた後、ミキサーを用いて精白米を破砕して懸濁液を得た。当該懸濁液を６０℃〜９０℃に加温して、米澱粉の糊化液を得た。
【００８７】
上記糊化液に対して麹菌を加えて、糖化反応を促進した。
【００８８】
上記糊化液に対して更に酵母を加えて、アルコール発酵反応を促進した。当該発酵反応後の発酵物を圧搾し、得られた固体を本実施例の酒粕として用いた。
【００８９】
＜１−２．酒粕ペプチド１の作製＞
酒粕６０ｇ（湿重量、固形分５８．４％）を１０分間沸騰した後、１２０００ｒｐｍ、１５分間の条件下で遠心分離した。得られた沈殿物４２ｇに水１８０ｍｌを加え、更に、中性プロテアーゼ（バチルス属細菌由来、プロテアーゼＮアマノＧ：天野エンザイム社製）２１０ｍｇを添加し、５０℃で６時間分解した。
【００９０】
続いて、酸性プロテアーゼ（アスペルギルス属菌由来、スミチームＡＰ：新日本化学工業社製）２５０ｍｇを添加して６０℃で１６時間分解した。
【００９１】
得られた分解物を、１２０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離し、得られた上清を、孔径０．４５μｍおよび０．２２μｍのメンブレンフィルター（東洋濾紙株式会社製）を用いて濾過した。
【００９２】
得られた濾過液を減圧濃縮法によって濃縮し、さらにフリーズドライ法によって粉末化した。減圧濃縮は、ロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ株式会社製ＲＥ１２１ Ｒｏｔａｖａｐｏｒ：湯浴温度５０℃、１００ｒｐｍ）とアスピレーター（ヤマト科学製Ｎｅｏｃｏｏｌ Ａｓｐｉｒａｔｏｒ ＢＰ−５１：冷却温度５℃）とを用いて行った。フリーズドライは、凍結乾燥機（ＥＹＥＬＡ東京理化器械株式会社製 ＦＤＵ−２１００）を用いてマイナス８０℃、真空度０．４Ｐａにて、粉末になるまで除湿乾燥させることにより、行った。このようにして得た粉末物を酒粕ペプチド１として以下の試験に用いた。
【００９３】
＜１−３．酒粕ペプチド２の作製＞
酒粕６０ｋｇ（湿重量、固形分５８．４％）に水１２０Ｌを添加し十分に攪拌した。この混合物を５０℃に保温した状態で、当該混合物に対してセルラーゼ（セルロイシンＴ２：エイチビィアイ社製）３０ｇとβ−アミラーゼ（ビオザイムＭ：天野エンザイム社製）３０ｇとを添加し、５０℃で１６時間分解した。分解終了後、９０℃で１０分間加熱して分解反応を停止した。当該分解物を、圧搾機（ＮＳＫエンジニアリング（株）：ＯＮＳ自動圧濾圧搾機５００型）によって５ｋｇ／ｃｍ２にて３時間圧搾し、アミラーゼ分解酒粕４１．９ｋｇ（湿重量、固形分５６．８％）を得た。
【００９４】
次いで、得られたアミラーゼ分解酒粕４１．９ｋｇに水１８０Ｌを加え、ＫＯＨでｐＨを６．８に調製し、よく攪拌した。５０℃に保温した状態で、中性プロテアーゼ（バチルス属細菌由来、プロテアーゼＮアマノＧ：天野エンザイム社製）２１０ｇを添加し、５０℃で１６時間分解した。
【００９５】
さらに、ＨＣｌでｐＨ４．２に調製し、よく攪拌した後、酸性プロテアーゼ（アスペルギルス属菌由来、スミチームＡＰ：新日本化学工業社製）２５０ｇを添加して６０℃で２２時間分解した。分解終了後、９０℃で１０分間加熱して分解反応を停止した。分解物を、圧搾機（ＮＳＫエンジニアリング（株）、ＯＮＳ自動圧濾圧搾機５００型）によって５ｋｇ／ｃｍ２にて３時間圧搾し、２００Ｌのペプチド含有液を得た。
【００９６】
得られたペプチド含有液を減圧濃縮法によって濃縮し、さらにフリーズドライ法によって粉末化した。減圧濃縮は、ロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ株式会社製ＲＥ１２１ Ｒｏｔａｖａｐｏｒ：湯浴温度５０℃、１００ｒｐｍ）とアスピレーター（ヤマト科学製Ｎｅｏｃｏｏｌ Ａｓｐｉｒａｔｏｒ ＢＰ−５１：冷却温度５℃）とを用いて行った。フリーズドライは、凍結乾燥機（ＥＹＥＬＡ東京理化器械株式会社製 ＦＤＵ−２１００）を用いてマイナス８０℃、真空度０．４Ｐａにて、粉末になるまで除湿乾燥させることにより、行った。このようにして得た粉末物を酒粕ペプチド２として以下の試験に用いた。
【００９７】
＜１−４．乳酸菌発酵酒粕の作製＞
酒粕３００ｇに対して、米糠１５ｇ、グルコース６ｇおよび水７５０ｍｌを加えて、ミキサーにて粉砕懸濁した。当該懸濁物に、前培養しておいた乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓの培養液（１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）を１０ｍＬ接種した。その後、３６℃にて４８時間、乳酸発酵させた。この時、嫌気条件下での乳酸発酵を避けるために、発酵容器の蓋に通気孔を設けた。そして、好気条件下にて乳酸発酵を行うことによって、香気が良好で、しかも味覚も優れた乳酸発酵物を得ることができた。
【００９８】
乳酸発酵物を３０００ｇにて１５分間遠心分離し、その上清を凍結乾燥して、約５０ｇの粉末物を得た。このようにして得た粉末物を、乳酸菌発酵酒粕として、以下の試験に用いた。
【００９９】
＜２．行動量試験（ロコモーター試験）＞
自律神経の活動は、生物の行動量に影響を与えることが知られている。逆に言えば、行動量を測定することによって、自立神経の活動を測定することが可能となる。そこで、本実施例では、マウスの行動量を測定することによって、自律神経の活動を測定することとした。
【０１００】
具体的には、市販の清酒（アルコール分：約１６％）、市販の米焼酎（アルコール分：約１６％）、清酒乾燥エキス、上述した酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、乳酸菌発酵酒粕の各々について、マウスの行動量に及ぼす影響を検討した。なお、水（イオン交換水）を用いたコントロール実験も行った。まず、実験方法について説明する。
【０１０１】
まず、各試料について検討する前に、実験に用いるマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄８週齢））に対して水を投与してネガティブコントロールとすべき実験データを取得した。具体的には、実験に用いるマウスに対して、水を、２０ｍＬ／ｋｇｂ．ｗｔとなるように１回だけ投与した。その後、マウスの行動量を１４時間計測し続けた。そして、当該１４時間で得られた実験データをネガティブコントロールとした。
【０１０２】
ネガティブコントロールとなる実験データを得た後のマウスは、その後、１週間飼育した（１０匹マウス／１ケージ）。そして、週間の飼育の後、固体試料または液体試料を投与する本実験を行った。以下に、本実験について説明する。
【０１０３】
固形試料（清酒乾燥エキス、酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または乳酸菌発酵酒粕）の各々を、イオン交換水に１０ｇ（固形試料）／２０ｍＬ（イオン交換水）となるように溶解した。当該溶解物を、マウスに対して、１０ｇ／２０ｍＬ／ｋｇｂ．ｗｔとなるように１回だけゾンデにて投与した。なお、１ケージあたり１０匹のマウスを飼育し、１種類の固形試料に関して、１ケージのマウス（マウス１０匹）の行動量を検討した。行動量測定時は１匹マウス／１ケージとし、行動量は、投与してから１４時間計測し続けた。
【０１０４】
液体試料（清酒、または焼酎）の各々を、マウスに対して、２０ｍＬ／ｋｇｂ．ｗｔとなるように１回だけゾンデにて投与した。なお、１ケージあたり１０匹のマウスを飼育し、１種類の液体試料に関して、１ケージのマウス（マウス１０匹）の行動量を検討した。なお、水に関しては、４ケージのマウス（マウス４０匹）の行動量を検討した。行動量測定時は１匹マウス／１ケージとし、行動量は、投与してから１４時間計測し続けた。
【０１０５】
マウスの行動量は、周知の技術（Nakamura et al., In vivo monitoring of circadian timing in freely moving mice, Current Biology 2008, 18:381-385）を用いて計測した。簡潔に言えば、ケージに設けられた赤外線センサー（Ｂｉｏｔｅｘ Ｊａｐａｎ社製）と、ソフトウエアＢｉｏｔｅｘ １６ＣＨ Ａｃｔ Ｍｏｎｉｔｏｒ ＢＡＩ２２１６（Ｂｉｏｔｅｘ Ｊａｐａｎ社製）とを用いて、１分間ごとに、赤外線センサーの前を横切るマウスの行動回数を計測した。なお、当該計測方法では、赤外線センサーの前を横切る回数が多いほど、マウスの行動量が多いと判定される。
【０１０６】
また、マウスの飼育は、人工的に作り出された日周期（１日＝２４時間）および２４℃の恒温の環境下にて行った。つまり、基本的に暗室内にてマウスを飼育し、当該室内にて照明を点灯することによって１２時間の明期を生み出し、照明を消すことによって１２時間の暗期を生み出した。８：００〜２０：００を明期とし、２０：００〜８：００を暗期としている。そして、上述した各試料は、１８：００に、マウスに投与した。
【０１０７】
以下に実験結果について説明する。
【０１０８】
まず、図１（ａ）〜図１（ｄ）に、各試料（酒粕ペプチド１、１／２量の酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または、乳酸菌発酵酒粕）をマウスに経口投与後１４時間の、マウスの総行動量を示す。
【０１０９】
図１（ａ）に示すように、酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が増加する傾向を示した。また、図１（ｂ）に示すように、１／２量の酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合にも、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が増加する傾向を示した。また、図１（ｃ）に示すように、酒粕ペプチド２をマウスに投与した場合にも、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が増加する傾向を示した。なお、これらの試料の中では、酒粕ペプチド１を投与した場合が、最も有意な増加傾向を示した。一方、図１（ｄ）に示すように、乳酸菌発酵酒粕をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロールと比較して、マウスの総行動量が減少する傾向を示した。
【０１１０】
次いで、図２〜図５に、各試料（酒粕ペプチド１、１／２量の酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、または、乳酸菌発酵酒粕）をマウスに経口投与した後の、マウスの行動量の経時変化を示す。なお、各図面における横軸は、時刻を示している。
【０１１１】
図２に示すように、酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから１〜４、６および９時間後にマウスの行動量が、特に有意に増加していた。
【０１１２】
また、図３に示すように、１／２量の酒粕ペプチド１をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから１〜６時間後にマウスの行動量が、特に有意に増加し、投与してから７、１１および１２時間後にマウスの行動量が、特に有意に減少していた。
【０１１３】
また、図４に示すように、酒粕ペプチド２をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから２、３、６、８および９時間後にマウスの行動量が、特に有意に増加していた。
【０１１４】
一方、図５に示すように、乳酸菌発酵酒粕をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、投与してから２および４時間後にマウスの行動量が、特に有意に減少していた。なお、図６に、図２〜図５のデータを一つにまとめたグラフを示す。
【０１１５】
次いで、図７に、各試料（清酒、１／２量の清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与後１４時間の、マウスの総行動量を示す。
【０１１６】
図７示すように、清酒をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量が、特に有意に減少した。一方、１／２量の清酒、清酒乾燥エキス、または焼酎をマウスに投与した場合には、ネガティブコントロール（水）と比較して、マウスの総行動量に有意な差異はなかった。
【０１１７】
本実施例でマウスに投与した清酒および焼酎には、同量のアルコールが含有されている。このとき、清酒はマウスの行動量を減少させる効果を有するが、焼酎には当該効果が無いので、清酒が有する行動量を減少させる効果は、アルコールの効果ではないことが明らかである。また、清酒乾燥エキスにはマウスの行動量を減少させる効果が無いので、清酒が有する行動量を減少させる効果は、清酒に含まれる揮発性の物質に由来することが明らかである。
【０１１８】
以上の結果から、清酒自体も、自律神経調節剤（更に具体的には、摂取対象を沈静化させるための自律神経調節剤）として、好適に用いることが可能である。
【０１１９】
次いで、図８に、各試料（清酒、清酒乾燥エキス、または、焼酎）をマウスに経口投与した後の、マウスの行動量の経時変化を示す。なお、各図面における横軸は、時刻を示している。
【０１２０】
図８に示すように、清酒をマウスに投与した場合には、他の試料と比較して、マウスの行動量が有意に減少した。特に、投与してから０〜６時間後にマウスの行動量が有意に減少した。
【０１２１】
なお、図８の結果を周知の方法（Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較）にて統計解析した結果を下記表１に記載する。当該表１からも、他の試料と比較して、清酒がマウスの行動量を減少させる効果が高いことが明らかである。
【０１２２】
【表１】
【０１２３】
＜３．覚醒度の評価試験＞
酒粕ペプチド１を含有するカプセル剤を作製し、当該カプセル剤のヒトへの効果を検討した。
【０１２４】
具体的には、１ｇの酒粕ペプチド１を、透明なハードカプセル（松屋製、１号サイズ）６個に等量ずつ分注した。被験者１名につき、朝食後に上記６個のカプセル剤を投与した。被験者としては、健康な成人男女１０名（平均年齢：４４．６±４．９）を選択した。なお、当該被験者からは、薬を投与されている者、アレルギー症状を示す恐れのある者、妊娠・授乳中の者、および、重度の疾患を患っている者を除外した。
【０１２５】
被験者に対してアンケートを実施し、カプセル剤を摂取していない日の日中と比較して、カプセル剤を摂取している日の日中の覚醒度合を自己診断してもらった。なお、覚醒度合は１〜５にて評価した。「沈静効果を感じる場合」を覚醒度合１と判定し、「やや沈静効果を感じる場合」を覚醒度合２と判定し、「差異が無い場合」を覚醒度合３と判定し、「やや覚醒効果を感じる場合」を覚醒度合４と判定し、「覚醒効果を感じる場合」を覚醒度合５と判定した。
【０１２６】
その結果を表２に示す。
【０１２７】
【表２】
【０１２８】
表２から明らかなように、１０人中８人（８０％）の被験者が、何らかの覚醒効果があると判定した。また、覚醒度合の平均値は４．１であり、何も摂取していない場合（覚醒度３）と比較して、覚醒度合の大きな上昇が観察された。
＜４．胃副交感神経試験＞
０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの乳酸菌発酵酒粕と０．０１ｍｇ〜５００ｍｇの米麹とに関して、胃副交感神経活動（gastric vagal nerve activity：ＧＶＮＡ）への影響を検討した。以下に、まず実験方法について説明する。
【０１２９】
実験には、人工的に作り出された日周期（１日＝２４時間、８：００〜２０：００が明期）および２４℃の恒温の環境下で１週間以上飼育された体重約３００ｇのＷｉｓｔａｒ系ラット（雄）を用いた。なお、餌（オリエンタル酵母：ＭＦ）および水は、自由に摂取させた。
【０１３０】
胃副交感神経活動の測定にあたっては、ラットを、３時間絶食させた後で、明期の中間期にウレタン（ｕｒｅｔｈａｎｅ）にて麻酔をかけた。その後、当該ラットを開腹し、胃を制御する副交換神経を銀電極によって吊り上げ、周知の方法（例えば、Tanida M et al., Neurosci. Lett. 389:109（2005）参照）に基づいて神経活動を測定した。
【０１３１】
開復手術開始時から測定終了時まで、ラットの気管にチューブを挿入して気道を確保するとともに、保温装置を用いて、ラットの体温（直腸温）を３５．０±０．５℃に維持した。
【０１３２】
胃副交感神経活動が落ち着いた時（１３：００頃）に、乳酸菌発酵酒粕または米麹をラットの胃の中へ注入し、胃副交感神経の電気活動の変化を測定した。なお、各試料の胃への注入には、胃内投与用の注射針および注射筒を使用し、各試料を１ｍＬの水に溶解または懸濁したものを注入した。
【０１３３】
以下の実験では、まず、胃副交感神経活動を活性化させるための投与量を決定し、その後、１種類の試料につき３匹のラットを用いて、当該投与量が胃副交感神経活動に及ぼす影響を詳細に検討することにした。なお、ネガティブコントロールとしては、１ｍＬの水を用いた。
【０１３４】
神経活動は、５分毎の５秒あたりの発火頻度（ｐｕｌｓｅ／５ｓ）の平均値に基づいて解析し、試料投与前の値を１００％として算出した。なお、データは、平均値±標準誤差にて示した。また、分散分析法（ＡＮＯＶＡ ｗｉｔｈ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ）およびＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ−ｔｅｓｔに基づいて、統計解析を行った。
【０１３５】
以下に、実験結果について説明する。
【０１３６】
図９に、各量（０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、または、１００ｍｇ）の乳酸菌発酵酒粕を投与した場合のＧＶＮＡの実測データを示し、図１０に、各量の乳酸菌発酵酒粕を投与した場合のＧＶＮＡの相対比を示す。
【０１３７】
図９および図１０に示すように、乳酸菌発酵酒粕はＧＶＮＡを変化させた。具体的には、０．０１ｍｇまたは１ｍｇの乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡの若干の低下が見られた。一方、１０ｍｇまたは１００ｍｇの乳酸菌発酵酒粕をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡを上昇させることができた。また、ＧＶＮＡを上昇させる効果は、１００ｍｇ投与した場合よりも、１０ｍｇ投与した場合の方が高かった。ＧＶＮＡが上昇すれば、消化管の蠕動が促進され、これによって、食物の消化・吸収能が高められることが期待できる。なお、乳酸菌発酵酒粕を投与後０〜５分に観察されるＧＶＮＡの変動は、胃内投与の際の注射針による機械的刺激によって引き起こされたものと考えられる。
【０１３８】
図１１に、各量（０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、または、５００ｍｇ）の米麹を投与した場合のＧＶＮＡの実測データを示し、図１２に、各量の米麹を投与した場合のＧＶＮＡの相対比を示す。
【０１３９】
図１１および図１２に示すように、米麹は、ＧＶＮＡを変化させた。具体的には、１００ｍｇまたは５００ｍｇの米麹をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡの若干の低下が見られた。一方、０．０１ｍｇ、１ｍｇまたは１００ｍｇの米麹をラットに投与した場合に、ＧＶＮＡを上昇させることができた。また、ＧＶＮＡを上昇させる効果は、１０ｍｇ投与した場合が、最も高かった。ＧＶＮＡが上昇すれば、消化管の蠕動が促進され、これによって、食物の消化・吸収能が高められることが期待できる。なお、米麹を投与後０〜５分に観察されるＧＶＮＡの変動は、胃内投与の際の注射針による機械的刺激によって引き起こされたものと考えられる。
【０１４０】
上述した実験により、１０ｍｇの乳酸菌発酵酒粕、または、１０ｍｇの米麹を投与した場合に最も効果的にＧＶＮＡを上昇させ得ることが明らかになった。そこで、更に詳細に検討するために、再度、１０ｍｇの乳酸菌発酵酒粕、１０ｍｇの米麹、または、水（ネガティブコントロール）をラットに投与してＧＶＮＡの実測データを計測するとともに、当該実測データに基づいて、各試料を投与した場合のＧＶＮＡの相対比を算出した。
【０１４１】
まず、図１３、図１４および図１５に、それぞれ、水、乳酸菌発酵酒粕（１０ｍｇ／ｍＬ）、および、米麹（１０ｍｇ／ｍＬ）をラットに投与した場合のＧＶＮＡの実測データを示す。また、図１６および図１７に、それぞれ、水を投与した場合と乳酸菌発酵酒粕を投与した場合とのＧＶＮＡの比較、および、水を投与した場合と米麹を投与した場合とのＧＶＮＡの比較を示す。なお、図１８は、図１６および図１７を１つのグラフとして記載したグラフである。
【０１４２】
図１６〜図１８から明らかなように、水は、ＧＶＮＡをほとんど変化させなかった。一方、乳酸菌発酵酒粕および米麹は、水と比較して、有意にＧＶＮＡを変化させることができた。なお、乳酸菌発酵酒粕および米麹は、６０分間の間、ＧＶＮＡを徐々に上昇させ続けた。
【０１４３】
本発明は、以上説示した各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態や実施例にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態や実施例についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１４４】
本発明は、自律神経の活動を調節することができるので、健康機能食品、飲料水、薬、家畜用飼料などとして好適に利用できる。健康機能食品または飲料水として利用する場合には、汁物（味噌汁、吸い物、コーンスープ、ポテトスープ、コンソメスープ、たまごスープ、野菜スープ、カレー、またはシチューなど）、飲料（スポーツ飲料、ドリンク剤、乳飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、炭酸飲料、野菜飲料、または茶飲料など）、菓子類（クッキー等の焼き菓子、ゼリー、ガム、グミ、飴、ヨーグルト、アイスクリーム、またはプリンなど）などの一成分とし利用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酒粕加工物を含有することを特徴とする自律神経調節剤。
【請求項２】
上記酒粕加工物は、酒粕に対して以下の１）〜３）からなる群より選択される少なくとも１つの処理が施されたものであることを特徴とする請求項１に記載の自律神経調節剤。
１）プロテアーゼ処理
２）セルラーゼ処理
３）乳酸菌発酵処理
【請求項３】
上記酒粕加工物は、清酒の液化仕込みによって生じる酒粕から作製されるものであることを特徴とする請求項１または２に記載の自律神経調節剤。
【請求項４】
覚醒度を調節するものであることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項５】
副交感神経を調節するものであることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項６】
上記プロテアーゼ処理では、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼが用いられていることを特徴とする請求項２〜５の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項７】
上記セルラーゼ処理では、エンドグルカナーゼまたはセロビオヒドロラーゼが用いられていることを特徴とする請求項２〜６の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項８】
上記乳酸発酵処理では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍが用いられていることを特徴とする請求項２〜７の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項１】
酒粕加工物を含有することを特徴とする自律神経調節剤。
【請求項２】
上記酒粕加工物は、酒粕に対して以下の１）〜３）からなる群より選択される少なくとも１つの処理が施されたものであることを特徴とする請求項１に記載の自律神経調節剤。
１）プロテアーゼ処理
２）セルラーゼ処理
３）乳酸菌発酵処理
【請求項３】
上記酒粕加工物は、清酒の液化仕込みによって生じる酒粕から作製されるものであることを特徴とする請求項１または２に記載の自律神経調節剤。
【請求項４】
覚醒度を調節するものであることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項５】
副交感神経を調節するものであることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項６】
上記プロテアーゼ処理では、中性プロテアーゼまたは酸性プロテアーゼが用いられていることを特徴とする請求項２〜５の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項７】
上記セルラーゼ処理では、エンドグルカナーゼまたはセロビオヒドロラーゼが用いられていることを特徴とする請求項２〜６の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【請求項８】
上記乳酸発酵処理では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍが用いられていることを特徴とする請求項２〜７の何れか１項に記載の自律神経調節剤。
【図１】
【図２】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１１−１２６８３３（Ｐ２０１１−１２６８３３Ａ）
【公開日】平成２３年６月３０日（２０１１．６．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２８８３０５（Ｐ２００９−２８８３０５）
【出願日】平成２１年１２月１８日（２００９．１２．１８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 「平成２１年度 日本醸造学会大会講演要旨集」 発行日 平成２１年８月２０日 発行所 日本醸造学会
【出願人】（０００１６５２５１）月桂冠株式会社 (88)
【出願人】（３９００００７４５）財団法人大阪バイオサイエンス研究所 (32)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月３０日（２０１１．６．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月１８日（２００９．１２．１８）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 「平成２１年度 日本醸造学会大会講演要旨集」 発行日 平成２１年８月２０日 発行所 日本醸造学会
【出願人】（０００１６５２５１）月桂冠株式会社 (88)
【出願人】（３９００００７４５）財団法人大阪バイオサイエンス研究所 (32)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]