薬物及びｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物
本発明は、概して、分子生物学、医学、腫瘍学、及び治療化合物の送達の分野に関する。特に、本発明は、単一の薬物送達系における、疎水性薬物物質及び低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）などの阻害核酸分子を含有する医薬組成物、並びに当該医薬組成物を作製するためのプロセス及び当該医薬組成物を投与するためのプロセスに関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、分子生物学、医学、腫瘍学、及び治療化合物の送達の分野に関する。特に、本発明は、単一の薬物送達系における、疎水性薬物物質（原薬）（drug substance）及び低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）などの阻害核酸分子を含有する医薬組成物、並びに当該医薬組成物を作製するためのプロセス及び当該医薬組成物を投与するためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
水に難溶性であるが、有機溶媒に非常に溶解しやすい薬物物質の数は増え続けている。ＥＰＯ９０６（エポチロンＢ）は、そのような分類に入るパツピロン（patupilone）であり、水に難溶性である（０．１ｍｇ／ｌ未満）が、例えばエタノール、酢酸エチル、ジクロロメタンなどの有機溶媒に溶解しやすい。水に難溶性である、すなわち、疎水性の薬物物質は、非経口による投与などの注射剤形における送達についての課題を与える。これらの薬物を含む製剤は、吸収性の形態で所望の吸収部位にその薬物の治療有効量を提供できなければならない。難溶性薬物を送達するための医薬組成物は、その薬物を吸収性の形態に維持しながら、かつ、生理学的に有害な溶媒又は賦形剤の使用を回避しながら、水性環境を通して薬物を運搬しなければならない。経口送達用又は非経口送達用に疎水性薬物を製剤化するためのいくつの手法として、薬物が水中油型エマルション、マイクロエマルション、又はミセル、リポソーム、若しくは他の多層担体粒子の溶液に存在する製剤などが知られている。リポソームは、疎水性領域及び親水性領域の両方を含む脂質などの両親媒性分子からなる微細小胞であり、水性容積を取り囲むことができる。
【０００３】
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、長さが１９〜２７塩基対の二本鎖リボヌクレオチド配列であり、強い負電荷を持ち、主に水に溶解性である。ｓｉＲＮＡは、動物及び植物におけるＲＮＡ干渉、配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスに関与する。ｓｉＲＮＡは、サイレンシングされた遺伝子と相同の、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）からリボヌクレアーゼＩＩＩによる切断によって生成されるか、又は合成ＲＮＡを細胞に送達することによって生成される。インビボでのｓｉＲＮＡの送達は非常に困難であることが知られているので、ｓｉＲＮＡの治療可能性は限定されている。例えば、他の種類の核酸分子に有効である送達法は、必ずしもｓｉＲＮＡに有効ではない。インビボにおいてｓｉＲＮＡを用いるほとんどの研究は、動物モデルへの導入又はｓｉＲＮＡのウイルスベクターへの組込みの前に細胞株における遺伝子発現の操作を含む。インビボでの「裸の」ｓｉＲＮＡの送達は、部位特異的注入に制限されているか、又は臨床的に実用的でない高圧手段を介する。更に、全身投与されたｓｉＲＮＡは、その高い水溶性及び負電荷によって腎臓又は肝臓によって迅速に除去される。したがって、身体においてその循環時間を高め、細胞外ヌクレアーゼによる分解を防ぐ薬物送達系（ＤＤＳ）にｓｉＲＮＡを封入することが好ましい。
【０００４】
癌を治療するための従来の併用法は、２つの活性薬物物質を送達するために２つの個別の製剤様式を用いる、２つの相乗作用する薬物を個別に投与することを含む。例えば、ＷＯ２００６１１３６７９は、第１の投与のために中性リポソーム内に製剤化されたｓｉＲＮＡと、第１の投与の前、第１の投与と同時、又は第１の投与の後に実施しうる第２の化学療法剤（例えばドキソルビシンなど）の個別の投与を開示している。既存の従来技術は、不便な、薬物物質の複数段階投与をもたらす、各薬物物質について個別に調整されるＤＤＳの使用を記載している。
【０００５】
したがって、簡便な、ｓｉＲＮＡ及び疎水性薬物物質を含む単一の薬物送達系に関する必要性が存在している。本発明は、少なくとも２つの薬物物質であるｓｉＲＮＡなどの核酸分子及び疎水性薬物を含む小胞薬物送達系（vesicular drug delivery system）（ＶＤＤＳ）を提供することによって、この必要性を満たす。本発明は、ＶＤＤＳを作製するプロセス及びＶＤＤＳを投与するためのプロセスを更に提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】核酸ｓｉＲＮＡ及び疎水性薬物物質、ＥＰＯ９０６を含むリポソームを合成するための合成反応スキームを図示する。
【図２】脂質二重層に組み込まれた疎水性薬物ＥＰＯ９０６及び任意選択の標的化部分である、薬物送達系に結合された葉酸−ＰＥＧ−脂質を有する水性封入物中のリポソームによって封入された核酸ｓｉＲＮＡを示す小胞薬物送達系の配置を図示する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む、小胞薬物送達系（ＶＤＤＳ）である。本発明によれば、脂質二重層はホスファチジルコリンである中性脂質を含む。本発明は、脂質二重層が、ホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む、実施形態を更に含む。
【０００８】
本発明は、ＶＤＤＳによって送達される薬物物質の細胞内送達を改良するために、標的組織を認識するために「標的化部分」又はリガンドがＶＤＤＳに結合されている実施形態を更に含む。その標的化部分は親水性ポリマー（例えばＰＥＧ）に結合されてもよい。
【０００９】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、その脂質はホスファチジルコリンを含む、少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含むＶＤＤＳを作製する方法を提供する。その方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００１０】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、その脂質は中性脂質のホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む、少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含むＶＤＤＳを作製する方法を更に提供する。その方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、更なる中性脂質（複数可）又は陽イオン性脂質（複数可）又は陰イオン性脂質（複数可）、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００１１】
本発明は更に、少なくとも１つの疎水性薬物物質及び少なくとも１つのｓｉＲＮＡを対象に同時に両方送達する方法であって、前記方法は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む小胞薬物送達系を対象に投与する工程を含む方法を提供する。本発明によれば、１つ又は複数の脂質二重層は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、並びに、任意選択で、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質によって形成される。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、単一の薬物送達系（ＤＤＳ）中に疎水性薬物物質及び低分子干渉ＲＮA（ｓｉＲＮＡ）などの阻害核酸分子を含有する医薬組成物に関する。本発明のＤＤＳは、疎水性薬物及びｓｉＲＮＡなどの阻害核酸分子の個別投与の必要性をなくし、治療計画に対する患者のコンプライアンスの向上をもたらす。
【００１３】
本明細書で使用する場合、用語「薬物送達系」又は「ＤＤＳ」とは、哺乳動物、例えばヒトに投与されるべき少なくとも１つの治療薬物物質又は核酸分子を含有する医薬組成物を意味する。医薬組成物は「医薬上許容される」ものであり、この「医薬上許容される」とは、正しい医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、炎症、アレルギー反応及び妥当な有益性／危険性に相関する他の問題のある合併症を有することなく、哺乳動物、特にヒトの組織と接触するのに適している医薬組成物の化合物、物質、組成物及び／又は剤形を指す。
【００１４】
本明細書で使用する場合、用語「薬物物質」とは、任意の化合物、物質、医薬、核酸若しくはアミノ酸配列、又は治療的若しくは薬理学的作用を有する活性成分を意味し、その薬物物質は、哺乳動物に対する投与に適している。この用語は、低分子干渉リボ核酸（「ｓｉＲＮＡ」）及び疎水性薬物のいずれか又は両方を指してもよい。
【００１５】
本明細書で使用する場合、用語「低分子干渉ＲＮＡ」又は「ｓｉＲＮＡ」とは、典型的に、強い負電荷を持ち、主に水に溶解性である、長さが１５〜５０塩基対及び好ましくは１９〜２７塩基対の二本鎖リボヌクレオチド配列を意味する。ｓｉＲＮＡは、２つのアニールされたリボヌクレオチド配列又はヘアピン構造を形成する単一のリボヌクレオチド配列のいずれかから構成され得る。当業者は、ｓｉＲＮＡが、動物及び植物において、配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスであるＲＮＡ干渉に関与することを理解するであろう。ｓｉＲＮＡは、サイレンシングされた遺伝子と相同である、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）からリボヌクレアーゼＩＩＩによる切断によって生成されるか、又は合成ＲＮＡを細胞に送達することによって生成される。遺伝子発現の標的化された阻害に使用するためのこのような分子の設計のための技術は当業者に周知である。
【００１６】
本発明の薬物送達系は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む小胞薬物送達系（「ＶＤＤＳ」）である。本発明の１つ又は複数の脂質二重層は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、並びに、任意選択で、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質によって形成される。
【００１７】
本発明の一実施形態において、ＶＤＤＳは、（ａ）１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、その脂質は、中性脂質のホスファチジルコリン、並びに、任意選択で、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質からなる、少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）１つの水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）脂質二重層に埋め込まれている疎水性薬物物質とを含む。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、ＶＤＤＳは、（ａ）いくつかの水性キャビティを取り囲むいくつかの脂質二重層であって、その脂質は、中性脂質のホスファチジルコリン又は中性脂質のホスファチジルコリンと少なくとも１つの更なる中性脂質との組み合わせからなる、脂質二重層と、（ｂ）各々の水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）いくつかの脂質二重層に埋め込まれている疎水性薬物物質とを含む多層小胞（すなわち、多数の二重層を有するリポソーム）から構成される。
【００１９】
上述の実施形態のいずれかにおいて、利便性及び必要性に従って種々の成分を決めてもよい。例えば、特定のヌクレオチド配列を有するｓｉＲＮＡをＶＤＤＳの水性キャビティに封入していてもよい。代替として、異なるヌクレオチド配列を有する種々のｓｉＲＮＡ分子をＶＤＤＳの１又は複数の水性キャビティに封入してもよい。同様に、１つの特定の疎水性薬物が脂質二重層に埋め込まれていてもよく、又は、種々の異なる疎水性薬物が脂質二重層に埋め込まれていてもよい。
【００２０】
本発明のＶＤＤＳは、リポソームを形成する、好ましくは、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む脂質の１つ又は複数の脂質の二重層を含む。例としては、単層小胞薬物送達系（ＵＬＶＤＤｓ）又は多層小胞薬物送達系（ＭＬＶＤＤＳ）が挙げられる。ＵＬＶＤＤＳは水性キャビティを包囲する１つの単一の脂質二重層を含有するが、一方、ＭＬＶＤＤは多数の水性区画と二重層を含有する。二重層の間の水性流体に捕捉された疎水性薬物物質及び／又は二重層に組み込まれた疎水性薬物物質は、各々の二重層が分解して放出されると薬物物質の持続放出を提供するように、本発明の薬物物質はＭＬＶＤＤＳに含まれてもよい。本発明のＶＤＤＳは、５０から２５０ｎｍの間、好ましくは５０から１５０ｎｍの間、及び最も好ましくは５０から１００ｎｍの間の範囲の粒径を有することが望まれる。
【００２１】
リポソームを形成する脂質は周知であり、一般に、正味中性であるか又は負電荷を有するリン脂質を含む。用語「リン脂質」とは、天然であっても又は合成であってもよい、少なくとも１つのリン基を含む疎水性分子を指す。例えば、リン脂質は、リン含有基及びＯＨ、ＣＯＯＨ、オキソ、アミンで任意選択に置換された飽和若しくは不飽和アルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基を含んでもよい。リン脂質は、それらのアシル(acylic)鎖の長さ及び飽和度が互いに異なる。当業者は、リン脂質が所望の最終的なＶＤＤＳのサイズに基づいて選択され得ることを理解するだろう。
【００２２】
陽イオン性リポソームは、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０２／１００４３５Ａ１、ＷＯ０３／０１５７５７Ａ１、及びＷＯ０４０２９２１３Ａ２；米国特許第５，９６２，０１６号、米国特許第５，０３０，４５３号、及び米国特許第６，６８０，０６８号；並びに米国特許出願公開第２００４／０２０８９２１号に記載されている。更に、中性脂質が、ｓｉＲＮＡを種々の細胞種類に送達するために使用されている陽イオン性リポソームに組み込まれている。
【００２３】
本発明に使用されるリポソームを形成する１つ又は複数の脂質は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む。本明細書に使用される用語「ホスファチジルコリン」とは、ホスファチジルコリン及びその誘導体の両方を指す。本発明における使用に適切なホスファチジルコリンの例としては、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（palmitoyloeoyl phosphatidylcholine）（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２４】
最も好ましい実施形態において、本発明において使用されるホスファチジルコリンは、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、及びジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）からなる群から選択される。
【００２５】
本発明は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質、及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせが、本発明のＶＤＤＳにおいて脂質二重層を形成するために使用される実施形態を含む。
【００２６】
好ましくは、中性脂質は、本発明のＶＤＤＳにおいてホスファチジルコリンと組み合わされる。本発明に使用され得る中性脂質の例としては、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（palmitoyloeoyl phosphatidylethanolamine）（ＰＯＰＥ）、リソホスファチジルエタノールアミン又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２７】
本発明のＶＤＤＳにおいてホスファチジルコリンと組み合わされる中性脂質としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が結合した脂質が挙げられ得る。本発明において使用され得るポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が結合した脂質の例としては、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＭＰＥ）及びそれの誘導体が挙げられる。
【００２８】
最も好ましい実施形態において、中性脂質は、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、及びｍＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥからなる群から選択される。
【００２９】
本発明のための適切な陽イオン性脂質としては、例えば、Ｎ−１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（４’−トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル（ＤＯＳＣ）、コレステリル（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノエート（ＣｈｏＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド ＤＯＲＩ、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｏ，Ｏ’−ジドデシル−Ｎ−ｐ−（２−トリメチルアンモニオエチルオキシ）ベンゾイル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、リポスペルミン、ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３ａ−Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’’−ジメチルアミノエタン）カルボニルコレステロール）、リポポリ（Ｌ−リシン）、Ｎ−（ａ−トリメチルアンモニオアセチル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＴＭＡＧ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３０】
本発明のための適切な陰イオン性脂質としては、例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、脳ホスファチジルセリン（ＢＰＳ）、ジラウリルオイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３１】
医薬上許容される賦形剤が、本発明のＶＤＤＳに更に使用されてもよい。本発明に使用され得る医薬上許容される賦形剤の例としては、脂質酸化阻害剤（米国特許第５，６０５，７０３号及びＷＯ９２０２２０８）、ステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールなどの安定剤、α−トコフェロール又はその酢酸塩などの抗酸化剤；ビタミンＥ；β−カロテン；α−カロテン、リコピン、ルテイン、ゼアキサンチンなどのカロテノイド；及びクエン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、リン酸緩衝剤などの緩衝剤；又はクエン酸、マレイン酸、シュウ酸、コハク酸、酒石酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸などの酸性化剤が挙げられる。
【００３２】
疎水性、すなわち水に不溶の薬物又は少なくとも１つの疎水性薬物を含む薬物の組み合わせが本発明において使用されてもよい。適切な薬物としては、抗高血圧剤、抗生物質剤、及び抗癌剤又は抗腫瘍剤が挙げられる。本発明のＶＤＤＳのリン脂質二重層（複数可）に組み込まれ得る疎水性薬物の例としては、限定されないが、窒素化マスタード類似体系のシクロホスファミド；メルファラン；イホスファミド；又はトロホスファミド；チオテパなどのエチレンイミン；ニトロソウレア系のカルムスチン；テモゾロマイドなどの専用剤（leased agent）；又はダカルバジン；メトトレキサート又はラルチトレキセドなどの葉酸の類似代謝拮抗物質；チオグアニン、クラドリビン又はフルダラビンなどのプリン類似体；ピリミジン類似体系のフルオロウラシル、テガフール又はゲムシタビン；ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビノレルビンなどのビンカアルカロイド及び類似体；エトポシドなどのポドフィロトキシン誘導体、ドセタキセル又はパクリタキセルなどのタキサン；アントラサイクリン並びにドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトキサントロンなど；ブレオマイシン及びマイトマイシンなどの他の細胞毒性抗生物質；シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンなどの白金化合物；リツキシマブなどのモノクローナル抗体；ペントスタチン、ミルテホシン、エストラムスチン、トポテカン、イリノテカン、ビカルタミド、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、タキソイド、カンプトテシン、ドキソルビシン、ミケラミンＢ及びビンクリスチンなどの他の抗悪性腫瘍薬、又はそれらの組み合わせが挙げられる。用語「タキソイド」とは、パクリタキセル、セファロマンニン、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ、デアセチルパクリタキセル及びデアセチル−７−エピパクリタキセル並びにそれらの誘導体及び前駆体を指す。
【００３３】
本発明の一実施形態において、疎水性薬物物質は、水に難溶性である（０．１ｍｇ／ｌ未満）が、有機溶媒（エタノール、エチルアセテート、ジクロロメタンなど）に溶解しやすいＥＰＯ９０６（エポチロンＢ）である。したがって、投与の間の有効濃度を高めるために、ＶＤＤＳ、好ましくはリポソームＶＤＤＳにＥＰＯ９９０６を組み込むことは利点がある。
【００３４】
機構的に、ｓｉＲＮＡ及びＥＰＯ９０６はそれらの作用機序が異なる。ＥＰＯ９０６は、細胞死を導く細胞のチューブリン構造を破壊するが、一方、ｓｉＲＮＡは、対象の遺伝子（「標的遺伝子」）のｍＲＮＡの相補的核酸配列を用いることによって対象の特異的遺伝子配列を標的とすることができる。このようなｓｉＲＮＡの方向付けは、ＲＩＳＣ（RNA induced silencing complex：ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）と呼ばれている多タンパク質複合体による標的ｍＲＮＡの触媒分解、及びそれによるこのｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の下方制御を導く。
【００３５】
本発明は、高分子構造のリポソーム又は多層小胞に組み込むことによって、ＥＰＯ９０６及び他の水に難溶性の薬物の溶解性の問題を克服する。本発明はまた、ｓｉＲＮＡを、リポソーム又は多層小胞の水溶性内部ケージに組み込むことによって、急速に分解され、排泄されるｓｉＲＮＡの欠点を克服することに加えて、細胞取り込みを媒介することによって両方の薬物物質の薬物動態及び薬力学プロファイルを同時に上昇させる。２つの物理化学的に異なる医薬上活性な薬物物質を１つの薬物送達に組み込む、このいわゆる「組み合わせ」アプローチは、個々の２つの薬物物質の一連の欠点を克服する。例えば、（ｉ）水に難溶性の薬物の有効な局所濃度を高め、（ｉｉ）疎水性薬物及びｓｉＲＮＡの両方の加水分解及び／又は特定の酵素（エステラーゼ、ヌクレアーゼ）による分解からの保護を増加させ、（ｉｉｉ）両方の薬物物質の薬物動態及び薬力学プロファイルを高め、並びに（ｉｖ）２つの別個の分子経路から標的細胞を攻撃すること（例えば、ＥＰＯ９０６の場合のチューブリン阻害及びｍＲＮＡの標的特異的分解）による相乗効果を生じる。
【００３６】
ｓｉＲＮＡの使用は当該技術分野において周知である。本発明のＶＤＤＳを設計する際に、少なくとも１つのｓｉＲＮＡは、このｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の下方制御を導く対象の特異的遺伝子配列を標的とする。対象の任意の新薬の開発につながるような（drugable）遺伝子、又は新薬の開発につながらないような遺伝子は、対象のｍＲＮＡに相同なｓｉＲＮＡ配列を設計することによって標的とされ得る。現在配列決定されている全ヒトゲノムについて、それらの任意の部分が、本発明のＶＤＤＳに使用するためのｓｉＲＮＡを設計する際の標的配列として役立ち得る。例えば、ｓｉＲＮＡは、ＢＣｌ−２などの癌遺伝子を標的とするように設計されてもよく、これにより、癌細胞増殖の下方制御及び防止を生じる。多くの癌遺伝子の配列は、公知であり、容易に入手可能である。例としては、ＥｐｈＡ２、接着斑キナーゼ（focal adhesion kinase）（ＦＡＫ）、β２−アドレナリン受容体（β２ＡＲ）、ＥＳＲ１、腫瘍抑制タンパク質ｐＲＢ、ＭＤＲ−１、ＮＫカッパＢ及びＮｅｋ２が挙げられる。
【００３７】
このように、本発明における使用のためのｓｉＲＮＡのための配列は、血漿ＤＮＡ又はヒトゲノムから得られ得る。ｓｉＲＮＡは、サイレンシングされた遺伝子と相同である、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）からリボヌクレアーゼＩＩＩによる切断によって生成されても、又は合成ＲＮＡを細胞に送達することによって生成されてもよい。標的遺伝子配列は、新薬の開発につながってもよく、又は新薬の開発につながらなくてもよい。本発明のＶＤＤＳに使用するためのｓｉＲＮＡはまた、公知のアンチセンス配列から誘導されてもよい。
【００３８】
本発明に使用するためのｓｉＲＮＡは、典型的に、強い負電荷を持ち、主に水溶性である、長さが１５〜５０塩基対の二本鎖リボヌクレアーゼ配列である。好ましくは、本発明のｓｉＲＮＡ配列は、長さが約１９〜約２７塩基対の範囲であり、標的配列と高度の相同性があるか、又は１００％相同である。ｓｉＲＮＡは、平滑末端とされてもよく、又は塩基対オーバーハングを有してもよい。ｓｉＲＮＡは、更に、セリン−アスパラギン酸−トレオニンからなる繰り返しアミノ酸配列及び／又はホスホロチオエート骨格修飾を含んでもよい。
【００３９】
種々のタイプのＲＮＡは、本発明のＶＤＤＳに使用するためのｓｉＲＮＡとして機能し得る。例えば、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）又はそれらの組み合わせが使用されてもよい。
【００４０】
本発明に使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、１０：１（質量）〜２０：１（質量）の範囲であってもよい。好ましくは、本発明に使用される脂質：ｓｉＲＮＡの比は約１４：１である。
【００４１】
本発明の一実施形態において、本発明のＶＤＤＳ及び本発明のＶＤＤＳを含む医薬組成物は、種々の適切な製剤に製剤化されてもよく、エアロゾル形態で経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内（intraperitoneally）、腹腔内（interperitoneally）、直腸、局所的、及び経膣的に投与されてもよい。
【００４２】
好ましくは、ＶＤＤＳは医薬上許容される担体と混合され、静脈内（ｉｖ）、腹腔内（ｉｐ）又は局所的（ｔｐ）に投与される。ｉｖ又はｉｐによる投与は、注入部位の炎症などの副作用の危険性の減少をもたらす。
【００４３】
本発明によれば、標的組織を認識するために「標的化部分」又はリガンドがＶＤＤＳに結合されてもよく、これにより、ＶＤＤＳよって送達される薬物物質、例えば、抗体、抗体フラグメント、多糖、糖、及び他のリガンド若しくは他の薬剤の細胞内送達並びに／又は当業者に公知の他の方法（Ｋｌｉｂａｎｏｖら，Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．，２（３）：３２１（１９９２））が改良される。ガングリオシド、多糖及びポリエチレングリコールなどのポリマーをＶＤＤＳに結合させて、インビボでの網内系によるそれらの非特異的取り込みを減少させてもよい。種々の細胞タンパク質及びウイルスタンパク質もまた、標的化の目的のため、及びそれらの融合特性のために、リポソーム内に組み込まれている。本発明の一実施形態によれば、標的化特性を修飾するために、標的化部分が親水性ポリマー（例えばＰＥＧ）に結合される。本発明の一実施形態によれば、標的化部分は、葉酸−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥトランスフェリン、アルファ−トコフェロール、レチノイン酸又はＲＧＤペプチドである。
【００４４】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む中性脂質のホスファチジルコリンを含む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質を含むＶＤＤＳを作製する方法を提供する。その方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００４５】
本発明のＶＤＤＳを作製するために使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、１０：１（質量）〜２０：１（質量）の範囲であってもよい。好ましくは、本発明に使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、約１４：１である。
【００４６】
本発明に使用される「水混和性有機溶媒」は、溶媒中の疎水性薬物の溶解性、溶媒が水に混和する程度、及び溶媒の毒性に応じて選択される。使用され得る溶媒の例としては、限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルホルムアミド、エタノール、グリコール、グリセリン、プロピレングリコール、及び種々のポリエチレングリコールなどの種々のアルコールが挙げられる。本発明の一実施形態によれば、ＶＤＤＳを作製する方法は、水混和性有機溶媒としてエタノールを使用して、少なくとも１つのリン脂質及び少なくとも１つの疎水性薬物を含む混合物を形成し、それを、少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を含む水溶液と更に混合して、ＶＤＤＳを形成する。
【００４７】
ｓｉＲＮＡを含有する第２の溶液を形成するために使用される水溶液は、３〜６の間のｐＨ、好ましくは４のｐＨの緩衝剤及び金属塩の両方を含む。この水溶液は、ｓｉＲＮＡの溶解度に応じて選択される。当業者は、本発明における水溶液のための緩衝剤及び金属塩を選択する方法を理解しているだろう。適切な緩衝剤の例としては、酢酸ナトリウム及び酢酸カリウムを含む、酢酸のいずれかの塩、コハク酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、ＨＥＰＥＳ、ＰＢＳ及び当該技術分野において公知の任意の他の緩衝剤が挙げられる。適切な金属塩の例としては、塩化カルシウム、塩化亜鉛及び塩化マグネシウムが挙げられる。
【００４８】
薬物物質の安定性を高めるか、又は毒性を減少させる、ＶＤＤＳに対する添加剤、例えば脂質酸化阻害剤（米国特許第５，６０５，７０３号及びＷＯ９２０２２０８）及びステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールなどの安定剤が添加されてもよい。ＶＤＤＳに含まれる場合、コレステロールなどのステロールは、低分子及びイオンをほとんど透過させない二重層（複数可）を作製し、その二重層の間のタンパク質の輸送を減少させることによって安定性を促進する。
【００４９】
標的組織を認識するための「標的化部分」又はリガンドは、当業者に公知の方法（Ｋｌｉｂａｎｏｖら，Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．，２（３）：３２１（１９９２））を用いてＶＤＤＳに結合され得る。これらの公知の方法は本明細書に参照として組み込まれる。
【００５０】
遊離した非リポソーム薬物及びｓｉＲＮＡの除去は、タンジェンシャル（膜）フロー濾過（ＴＦＦ）システム又は透析を用いて達成され得る。
【００５１】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む、中性脂質のホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含むＶＤＤＳを作製する方法を更に提供する。この方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、更なる中性脂質（複数可）又は陽イオン性脂質（複数可）又は陰イオン性脂質（複数可）、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性の有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００５２】
本発明のＶＤＤＳを作製するために使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、１０：１（質量）〜２０：１（質量）の範囲であってもよい。好ましくは、本発明に使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は約１４：１である。
【００５３】
本発明のＶＤＤＳの好ましい製剤は、８１．９：１５．４：２：０．７（モル濃度）のＰＣ：ｃｈｏｌ：ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００：Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール（ビタミンＥ）の比を有し、ここで、「ＰＣ」はホスファチジルコリンであり、「ｃｈｏｌ」はコレステロールであり、「ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００」はジミリスチルホスファチジルエタノールアミン−ポリエチレングリコール２０００である。脂質対ｓｉＲＮＡの好ましい比は１４：１（質量）である。リポソーム二重層内に挿入する薬物の量は特定の薬物に応じる。ＥＰＯ９０６の場合、０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度を脂質二重層に挿入することが好ましい。リポソームの水性内部におけるｓｉＲＮＡ蓄積は、好ましくは、約１〜１．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度である。
【００５４】
本発明は、少なくとも１つの疎水性薬物物質及び少なくとも１つのｓｉＲＮＡを対象に同時に両方送達する方法を更に提供し、前記方法は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む小胞薬物送達系を対象に投与する工程を含む。本発明によれば、脂質二重層はホスファチジルコリンである中性脂質を含む。本発明は更に、脂質二重層が、ホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む、実施形態を含む。
【００５５】
本発明のＶＤＤＳは、種々の疾患の治療、特に腫瘍への適用に有用である。例えば、ＥＰＯ９０６及びｓｉＲＮＡを含むＶＤＤＳは、卵巣癌を治療するために使用されてもよく、その治療において、投与は、好ましくは、腹腔内又は全身／非経口投与である。ＥＰＯ９０６及びｓｉＲＮＡを含む本発明のＶＤＤＳはまた、乳癌、肺癌、黒色腫、腹膜癌、卵管癌、及び結腸直腸癌の治療に使用してもよい。好ましい用量範囲は、個々の適用当たり０．１〜１０ｍｇ／ｋｇのｓｉＲＮＡであり、これは、個々の適用当たり０．０５〜５ｍｇ／ｋｇのＥＰＯ９０６と一致する。
【００５６】
以下に実施例を示すが、本明細書に記載されている本発明の範囲を限定するために与えるものではない。この実施例は、本発明を実施する方法を示唆することのみを意図する。
【実施例１】
【００５７】
標的化部分を有さない脂質薄膜の調製：
ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ、１０４．４ｍｇ）、コレステロール（１０ｍｇ）、ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ（９ｍｇ）、及びＤ，Ｌ−α−トコフェロール（０．４９ｍｇ）を、２ｍＬのエタノールに溶解して、６２．０１ｍｇ／ｍＬ（又は０．０８４０ｍｍｏｌ／ｍＬ）を得る。ＥＰＯ９０６（２２．１４ｍｇ）を加えて、完全に溶解する。この溶液から、１１２９μＬを別の丸底フラスコにピペットで取り、全てのエタノールを蒸発させて、脂質薄膜を生成する。
【００５８】
標的化部分を有する脂質薄膜の調製：
この実施例に使用する標的化部分は、ＦＡ−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥである。ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ、１０４．１ｍｇ）、コレステロール（１０．２２ｍｇ）、ｍＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ（９ｍｇ）、ＦＡ−ＰＥＧ３０００−ＤＳＰＥ（２．２ｍｇ）及びＤ，Ｌ−α−トコフェロール（０．５２ｍｇ）を、２ｍＬのエタノールに溶解して、６２．９２ｍｇ／ｍＬ（又は０．０８４ｍｍｏｌ／ｍＬ）を得る。ＥＰＯ９０６（２２．４６ｍｇ）を加え、完全に溶解する。この溶液から、１１１３μＬを別の丸底フラスコにピペットで取り、エタノールを蒸発させて、脂質薄膜を生成する。
【００５９】
ｓｉＲＮＡ水溶液の調製：
この実施例において、ルシフェラーゼ遺伝子特異的ｓｉＲＮＡを使用する。１０００μＬのｓｉＲＮＡストック（５ｍｇ／ｍＬ）、１２５μＬのＣａＣｌ２（０．１Ｍ）、１２５μＬの酢酸緩衝溶液（ｐＨ４、１Ｍ）及び２５０μＬの水のｓｉＲＮＡ溶液を、混合することによって調製する。そのｓｉＲＮＡ溶液を４５℃の水浴中で加温する。
【００６０】
ＶＤＤＳの調製：
特定の脂質薄膜を混合し、ｓｉＲＮＡ水溶液で水和して、リポプレックス溶液を形成する。そのリポプレックス溶液を、４５℃の温水浴中に３０分間置いておき、その後、１０００μＬのエタノールを加える。リポプレックス溶液を、液体窒素を用いて凍結させ、４５℃の温水浴中で加温する。水溶性薬物物質についての捕集効率を増加させるために、凍結し、加温する工程を３回繰り返し、本発明のＶＤＤＳを得る。粒子の分析により、ゲル電気泳動によって測定すると、８０％のカプセル化効率を有し、１４０±５６ｎｍの平均サイズ及び０．５のＰＤＩが示される。
【００６１】
遊離した非リポソームＥＰＯ９０６及びｓｉＲＮＡの除去は、タンジェンシャル（膜）フロー濾過（ＴＦＦ）システムを用いて達成する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、分子生物学、医学、腫瘍学、及び治療化合物の送達の分野に関する。特に、本発明は、単一の薬物送達系における、疎水性薬物物質（原薬）（drug substance）及び低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）などの阻害核酸分子を含有する医薬組成物、並びに当該医薬組成物を作製するためのプロセス及び当該医薬組成物を投与するためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
水に難溶性であるが、有機溶媒に非常に溶解しやすい薬物物質の数は増え続けている。ＥＰＯ９０６（エポチロンＢ）は、そのような分類に入るパツピロン（patupilone）であり、水に難溶性である（０．１ｍｇ／ｌ未満）が、例えばエタノール、酢酸エチル、ジクロロメタンなどの有機溶媒に溶解しやすい。水に難溶性である、すなわち、疎水性の薬物物質は、非経口による投与などの注射剤形における送達についての課題を与える。これらの薬物を含む製剤は、吸収性の形態で所望の吸収部位にその薬物の治療有効量を提供できなければならない。難溶性薬物を送達するための医薬組成物は、その薬物を吸収性の形態に維持しながら、かつ、生理学的に有害な溶媒又は賦形剤の使用を回避しながら、水性環境を通して薬物を運搬しなければならない。経口送達用又は非経口送達用に疎水性薬物を製剤化するためのいくつの手法として、薬物が水中油型エマルション、マイクロエマルション、又はミセル、リポソーム、若しくは他の多層担体粒子の溶液に存在する製剤などが知られている。リポソームは、疎水性領域及び親水性領域の両方を含む脂質などの両親媒性分子からなる微細小胞であり、水性容積を取り囲むことができる。
【０００３】
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、長さが１９〜２７塩基対の二本鎖リボヌクレオチド配列であり、強い負電荷を持ち、主に水に溶解性である。ｓｉＲＮＡは、動物及び植物におけるＲＮＡ干渉、配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスに関与する。ｓｉＲＮＡは、サイレンシングされた遺伝子と相同の、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）からリボヌクレアーゼＩＩＩによる切断によって生成されるか、又は合成ＲＮＡを細胞に送達することによって生成される。インビボでのｓｉＲＮＡの送達は非常に困難であることが知られているので、ｓｉＲＮＡの治療可能性は限定されている。例えば、他の種類の核酸分子に有効である送達法は、必ずしもｓｉＲＮＡに有効ではない。インビボにおいてｓｉＲＮＡを用いるほとんどの研究は、動物モデルへの導入又はｓｉＲＮＡのウイルスベクターへの組込みの前に細胞株における遺伝子発現の操作を含む。インビボでの「裸の」ｓｉＲＮＡの送達は、部位特異的注入に制限されているか、又は臨床的に実用的でない高圧手段を介する。更に、全身投与されたｓｉＲＮＡは、その高い水溶性及び負電荷によって腎臓又は肝臓によって迅速に除去される。したがって、身体においてその循環時間を高め、細胞外ヌクレアーゼによる分解を防ぐ薬物送達系（ＤＤＳ）にｓｉＲＮＡを封入することが好ましい。
【０００４】
癌を治療するための従来の併用法は、２つの活性薬物物質を送達するために２つの個別の製剤様式を用いる、２つの相乗作用する薬物を個別に投与することを含む。例えば、ＷＯ２００６１１３６７９は、第１の投与のために中性リポソーム内に製剤化されたｓｉＲＮＡと、第１の投与の前、第１の投与と同時、又は第１の投与の後に実施しうる第２の化学療法剤（例えばドキソルビシンなど）の個別の投与を開示している。既存の従来技術は、不便な、薬物物質の複数段階投与をもたらす、各薬物物質について個別に調整されるＤＤＳの使用を記載している。
【０００５】
したがって、簡便な、ｓｉＲＮＡ及び疎水性薬物物質を含む単一の薬物送達系に関する必要性が存在している。本発明は、少なくとも２つの薬物物質であるｓｉＲＮＡなどの核酸分子及び疎水性薬物を含む小胞薬物送達系（vesicular drug delivery system）（ＶＤＤＳ）を提供することによって、この必要性を満たす。本発明は、ＶＤＤＳを作製するプロセス及びＶＤＤＳを投与するためのプロセスを更に提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】核酸ｓｉＲＮＡ及び疎水性薬物物質、ＥＰＯ９０６を含むリポソームを合成するための合成反応スキームを図示する。
【図２】脂質二重層に組み込まれた疎水性薬物ＥＰＯ９０６及び任意選択の標的化部分である、薬物送達系に結合された葉酸−ＰＥＧ−脂質を有する水性封入物中のリポソームによって封入された核酸ｓｉＲＮＡを示す小胞薬物送達系の配置を図示する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む、小胞薬物送達系（ＶＤＤＳ）である。本発明によれば、脂質二重層はホスファチジルコリンである中性脂質を含む。本発明は、脂質二重層が、ホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む、実施形態を更に含む。
【０００８】
本発明は、ＶＤＤＳによって送達される薬物物質の細胞内送達を改良するために、標的組織を認識するために「標的化部分」又はリガンドがＶＤＤＳに結合されている実施形態を更に含む。その標的化部分は親水性ポリマー（例えばＰＥＧ）に結合されてもよい。
【０００９】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、その脂質はホスファチジルコリンを含む、少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含むＶＤＤＳを作製する方法を提供する。その方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００１０】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、その脂質は中性脂質のホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む、少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含むＶＤＤＳを作製する方法を更に提供する。その方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、更なる中性脂質（複数可）又は陽イオン性脂質（複数可）又は陰イオン性脂質（複数可）、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００１１】
本発明は更に、少なくとも１つの疎水性薬物物質及び少なくとも１つのｓｉＲＮＡを対象に同時に両方送達する方法であって、前記方法は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む小胞薬物送達系を対象に投与する工程を含む方法を提供する。本発明によれば、１つ又は複数の脂質二重層は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、並びに、任意選択で、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質によって形成される。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、単一の薬物送達系（ＤＤＳ）中に疎水性薬物物質及び低分子干渉ＲＮA（ｓｉＲＮＡ）などの阻害核酸分子を含有する医薬組成物に関する。本発明のＤＤＳは、疎水性薬物及びｓｉＲＮＡなどの阻害核酸分子の個別投与の必要性をなくし、治療計画に対する患者のコンプライアンスの向上をもたらす。
【００１３】
本明細書で使用する場合、用語「薬物送達系」又は「ＤＤＳ」とは、哺乳動物、例えばヒトに投与されるべき少なくとも１つの治療薬物物質又は核酸分子を含有する医薬組成物を意味する。医薬組成物は「医薬上許容される」ものであり、この「医薬上許容される」とは、正しい医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、炎症、アレルギー反応及び妥当な有益性／危険性に相関する他の問題のある合併症を有することなく、哺乳動物、特にヒトの組織と接触するのに適している医薬組成物の化合物、物質、組成物及び／又は剤形を指す。
【００１４】
本明細書で使用する場合、用語「薬物物質」とは、任意の化合物、物質、医薬、核酸若しくはアミノ酸配列、又は治療的若しくは薬理学的作用を有する活性成分を意味し、その薬物物質は、哺乳動物に対する投与に適している。この用語は、低分子干渉リボ核酸（「ｓｉＲＮＡ」）及び疎水性薬物のいずれか又は両方を指してもよい。
【００１５】
本明細書で使用する場合、用語「低分子干渉ＲＮＡ」又は「ｓｉＲＮＡ」とは、典型的に、強い負電荷を持ち、主に水に溶解性である、長さが１５〜５０塩基対及び好ましくは１９〜２７塩基対の二本鎖リボヌクレオチド配列を意味する。ｓｉＲＮＡは、２つのアニールされたリボヌクレオチド配列又はヘアピン構造を形成する単一のリボヌクレオチド配列のいずれかから構成され得る。当業者は、ｓｉＲＮＡが、動物及び植物において、配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスであるＲＮＡ干渉に関与することを理解するであろう。ｓｉＲＮＡは、サイレンシングされた遺伝子と相同である、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）からリボヌクレアーゼＩＩＩによる切断によって生成されるか、又は合成ＲＮＡを細胞に送達することによって生成される。遺伝子発現の標的化された阻害に使用するためのこのような分子の設計のための技術は当業者に周知である。
【００１６】
本発明の薬物送達系は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む小胞薬物送達系（「ＶＤＤＳ」）である。本発明の１つ又は複数の脂質二重層は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、並びに、任意選択で、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質によって形成される。
【００１７】
本発明の一実施形態において、ＶＤＤＳは、（ａ）１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、その脂質は、中性脂質のホスファチジルコリン、並びに、任意選択で、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質からなる、少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）１つの水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）脂質二重層に埋め込まれている疎水性薬物物質とを含む。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、ＶＤＤＳは、（ａ）いくつかの水性キャビティを取り囲むいくつかの脂質二重層であって、その脂質は、中性脂質のホスファチジルコリン又は中性脂質のホスファチジルコリンと少なくとも１つの更なる中性脂質との組み合わせからなる、脂質二重層と、（ｂ）各々の水性キャビティ内に含有される低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子と、（ｃ）いくつかの脂質二重層に埋め込まれている疎水性薬物物質とを含む多層小胞（すなわち、多数の二重層を有するリポソーム）から構成される。
【００１９】
上述の実施形態のいずれかにおいて、利便性及び必要性に従って種々の成分を決めてもよい。例えば、特定のヌクレオチド配列を有するｓｉＲＮＡをＶＤＤＳの水性キャビティに封入していてもよい。代替として、異なるヌクレオチド配列を有する種々のｓｉＲＮＡ分子をＶＤＤＳの１又は複数の水性キャビティに封入してもよい。同様に、１つの特定の疎水性薬物が脂質二重層に埋め込まれていてもよく、又は、種々の異なる疎水性薬物が脂質二重層に埋め込まれていてもよい。
【００２０】
本発明のＶＤＤＳは、リポソームを形成する、好ましくは、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む脂質の１つ又は複数の脂質の二重層を含む。例としては、単層小胞薬物送達系（ＵＬＶＤＤｓ）又は多層小胞薬物送達系（ＭＬＶＤＤＳ）が挙げられる。ＵＬＶＤＤＳは水性キャビティを包囲する１つの単一の脂質二重層を含有するが、一方、ＭＬＶＤＤは多数の水性区画と二重層を含有する。二重層の間の水性流体に捕捉された疎水性薬物物質及び／又は二重層に組み込まれた疎水性薬物物質は、各々の二重層が分解して放出されると薬物物質の持続放出を提供するように、本発明の薬物物質はＭＬＶＤＤＳに含まれてもよい。本発明のＶＤＤＳは、５０から２５０ｎｍの間、好ましくは５０から１５０ｎｍの間、及び最も好ましくは５０から１００ｎｍの間の範囲の粒径を有することが望まれる。
【００２１】
リポソームを形成する脂質は周知であり、一般に、正味中性であるか又は負電荷を有するリン脂質を含む。用語「リン脂質」とは、天然であっても又は合成であってもよい、少なくとも１つのリン基を含む疎水性分子を指す。例えば、リン脂質は、リン含有基及びＯＨ、ＣＯＯＨ、オキソ、アミンで任意選択に置換された飽和若しくは不飽和アルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基を含んでもよい。リン脂質は、それらのアシル(acylic)鎖の長さ及び飽和度が互いに異なる。当業者は、リン脂質が所望の最終的なＶＤＤＳのサイズに基づいて選択され得ることを理解するだろう。
【００２２】
陽イオン性リポソームは、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０２／１００４３５Ａ１、ＷＯ０３／０１５７５７Ａ１、及びＷＯ０４０２９２１３Ａ２；米国特許第５，９６２，０１６号、米国特許第５，０３０，４５３号、及び米国特許第６，６８０，０６８号；並びに米国特許出願公開第２００４／０２０８９２１号に記載されている。更に、中性脂質が、ｓｉＲＮＡを種々の細胞種類に送達するために使用されている陽イオン性リポソームに組み込まれている。
【００２３】
本発明に使用されるリポソームを形成する１つ又は複数の脂質は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む。本明細書に使用される用語「ホスファチジルコリン」とは、ホスファチジルコリン及びその誘導体の両方を指す。本発明における使用に適切なホスファチジルコリンの例としては、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（palmitoyloeoyl phosphatidylcholine）（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２４】
最も好ましい実施形態において、本発明において使用されるホスファチジルコリンは、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、及びジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）からなる群から選択される。
【００２５】
本発明は、ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質、及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせが、本発明のＶＤＤＳにおいて脂質二重層を形成するために使用される実施形態を含む。
【００２６】
好ましくは、中性脂質は、本発明のＶＤＤＳにおいてホスファチジルコリンと組み合わされる。本発明に使用され得る中性脂質の例としては、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（palmitoyloeoyl phosphatidylethanolamine）（ＰＯＰＥ）、リソホスファチジルエタノールアミン又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２７】
本発明のＶＤＤＳにおいてホスファチジルコリンと組み合わされる中性脂質としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が結合した脂質が挙げられ得る。本発明において使用され得るポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が結合した脂質の例としては、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＭＰＥ）及びそれの誘導体が挙げられる。
【００２８】
最も好ましい実施形態において、中性脂質は、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、及びｍＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥからなる群から選択される。
【００２９】
本発明のための適切な陽イオン性脂質としては、例えば、Ｎ−１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（４’−トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル（ＤＯＳＣ）、コレステリル（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノエート（ＣｈｏＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド ＤＯＲＩ、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｏ，Ｏ’−ジドデシル−Ｎ−ｐ−（２−トリメチルアンモニオエチルオキシ）ベンゾイル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、リポスペルミン、ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３ａ−Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’’−ジメチルアミノエタン）カルボニルコレステロール）、リポポリ（Ｌ−リシン）、Ｎ−（ａ−トリメチルアンモニオアセチル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＴＭＡＧ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３０】
本発明のための適切な陰イオン性脂質としては、例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、脳ホスファチジルセリン（ＢＰＳ）、ジラウリルオイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３１】
医薬上許容される賦形剤が、本発明のＶＤＤＳに更に使用されてもよい。本発明に使用され得る医薬上許容される賦形剤の例としては、脂質酸化阻害剤（米国特許第５，６０５，７０３号及びＷＯ９２０２２０８）、ステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールなどの安定剤、α−トコフェロール又はその酢酸塩などの抗酸化剤；ビタミンＥ；β−カロテン；α−カロテン、リコピン、ルテイン、ゼアキサンチンなどのカロテノイド；及びクエン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、リン酸緩衝剤などの緩衝剤；又はクエン酸、マレイン酸、シュウ酸、コハク酸、酒石酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸などの酸性化剤が挙げられる。
【００３２】
疎水性、すなわち水に不溶の薬物又は少なくとも１つの疎水性薬物を含む薬物の組み合わせが本発明において使用されてもよい。適切な薬物としては、抗高血圧剤、抗生物質剤、及び抗癌剤又は抗腫瘍剤が挙げられる。本発明のＶＤＤＳのリン脂質二重層（複数可）に組み込まれ得る疎水性薬物の例としては、限定されないが、窒素化マスタード類似体系のシクロホスファミド；メルファラン；イホスファミド；又はトロホスファミド；チオテパなどのエチレンイミン；ニトロソウレア系のカルムスチン；テモゾロマイドなどの専用剤（leased agent）；又はダカルバジン；メトトレキサート又はラルチトレキセドなどの葉酸の類似代謝拮抗物質；チオグアニン、クラドリビン又はフルダラビンなどのプリン類似体；ピリミジン類似体系のフルオロウラシル、テガフール又はゲムシタビン；ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビノレルビンなどのビンカアルカロイド及び類似体；エトポシドなどのポドフィロトキシン誘導体、ドセタキセル又はパクリタキセルなどのタキサン；アントラサイクリン並びにドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトキサントロンなど；ブレオマイシン及びマイトマイシンなどの他の細胞毒性抗生物質；シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンなどの白金化合物；リツキシマブなどのモノクローナル抗体；ペントスタチン、ミルテホシン、エストラムスチン、トポテカン、イリノテカン、ビカルタミド、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、タキソイド、カンプトテシン、ドキソルビシン、ミケラミンＢ及びビンクリスチンなどの他の抗悪性腫瘍薬、又はそれらの組み合わせが挙げられる。用語「タキソイド」とは、パクリタキセル、セファロマンニン、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ、デアセチルパクリタキセル及びデアセチル−７−エピパクリタキセル並びにそれらの誘導体及び前駆体を指す。
【００３３】
本発明の一実施形態において、疎水性薬物物質は、水に難溶性である（０．１ｍｇ／ｌ未満）が、有機溶媒（エタノール、エチルアセテート、ジクロロメタンなど）に溶解しやすいＥＰＯ９０６（エポチロンＢ）である。したがって、投与の間の有効濃度を高めるために、ＶＤＤＳ、好ましくはリポソームＶＤＤＳにＥＰＯ９９０６を組み込むことは利点がある。
【００３４】
機構的に、ｓｉＲＮＡ及びＥＰＯ９０６はそれらの作用機序が異なる。ＥＰＯ９０６は、細胞死を導く細胞のチューブリン構造を破壊するが、一方、ｓｉＲＮＡは、対象の遺伝子（「標的遺伝子」）のｍＲＮＡの相補的核酸配列を用いることによって対象の特異的遺伝子配列を標的とすることができる。このようなｓｉＲＮＡの方向付けは、ＲＩＳＣ（RNA induced silencing complex：ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）と呼ばれている多タンパク質複合体による標的ｍＲＮＡの触媒分解、及びそれによるこのｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の下方制御を導く。
【００３５】
本発明は、高分子構造のリポソーム又は多層小胞に組み込むことによって、ＥＰＯ９０６及び他の水に難溶性の薬物の溶解性の問題を克服する。本発明はまた、ｓｉＲＮＡを、リポソーム又は多層小胞の水溶性内部ケージに組み込むことによって、急速に分解され、排泄されるｓｉＲＮＡの欠点を克服することに加えて、細胞取り込みを媒介することによって両方の薬物物質の薬物動態及び薬力学プロファイルを同時に上昇させる。２つの物理化学的に異なる医薬上活性な薬物物質を１つの薬物送達に組み込む、このいわゆる「組み合わせ」アプローチは、個々の２つの薬物物質の一連の欠点を克服する。例えば、（ｉ）水に難溶性の薬物の有効な局所濃度を高め、（ｉｉ）疎水性薬物及びｓｉＲＮＡの両方の加水分解及び／又は特定の酵素（エステラーゼ、ヌクレアーゼ）による分解からの保護を増加させ、（ｉｉｉ）両方の薬物物質の薬物動態及び薬力学プロファイルを高め、並びに（ｉｖ）２つの別個の分子経路から標的細胞を攻撃すること（例えば、ＥＰＯ９０６の場合のチューブリン阻害及びｍＲＮＡの標的特異的分解）による相乗効果を生じる。
【００３６】
ｓｉＲＮＡの使用は当該技術分野において周知である。本発明のＶＤＤＳを設計する際に、少なくとも１つのｓｉＲＮＡは、このｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の下方制御を導く対象の特異的遺伝子配列を標的とする。対象の任意の新薬の開発につながるような（drugable）遺伝子、又は新薬の開発につながらないような遺伝子は、対象のｍＲＮＡに相同なｓｉＲＮＡ配列を設計することによって標的とされ得る。現在配列決定されている全ヒトゲノムについて、それらの任意の部分が、本発明のＶＤＤＳに使用するためのｓｉＲＮＡを設計する際の標的配列として役立ち得る。例えば、ｓｉＲＮＡは、ＢＣｌ−２などの癌遺伝子を標的とするように設計されてもよく、これにより、癌細胞増殖の下方制御及び防止を生じる。多くの癌遺伝子の配列は、公知であり、容易に入手可能である。例としては、ＥｐｈＡ２、接着斑キナーゼ（focal adhesion kinase）（ＦＡＫ）、β２−アドレナリン受容体（β２ＡＲ）、ＥＳＲ１、腫瘍抑制タンパク質ｐＲＢ、ＭＤＲ−１、ＮＫカッパＢ及びＮｅｋ２が挙げられる。
【００３７】
このように、本発明における使用のためのｓｉＲＮＡのための配列は、血漿ＤＮＡ又はヒトゲノムから得られ得る。ｓｉＲＮＡは、サイレンシングされた遺伝子と相同である、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）からリボヌクレアーゼＩＩＩによる切断によって生成されても、又は合成ＲＮＡを細胞に送達することによって生成されてもよい。標的遺伝子配列は、新薬の開発につながってもよく、又は新薬の開発につながらなくてもよい。本発明のＶＤＤＳに使用するためのｓｉＲＮＡはまた、公知のアンチセンス配列から誘導されてもよい。
【００３８】
本発明に使用するためのｓｉＲＮＡは、典型的に、強い負電荷を持ち、主に水溶性である、長さが１５〜５０塩基対の二本鎖リボヌクレアーゼ配列である。好ましくは、本発明のｓｉＲＮＡ配列は、長さが約１９〜約２７塩基対の範囲であり、標的配列と高度の相同性があるか、又は１００％相同である。ｓｉＲＮＡは、平滑末端とされてもよく、又は塩基対オーバーハングを有してもよい。ｓｉＲＮＡは、更に、セリン−アスパラギン酸−トレオニンからなる繰り返しアミノ酸配列及び／又はホスホロチオエート骨格修飾を含んでもよい。
【００３９】
種々のタイプのＲＮＡは、本発明のＶＤＤＳに使用するためのｓｉＲＮＡとして機能し得る。例えば、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）又はそれらの組み合わせが使用されてもよい。
【００４０】
本発明に使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、１０：１（質量）〜２０：１（質量）の範囲であってもよい。好ましくは、本発明に使用される脂質：ｓｉＲＮＡの比は約１４：１である。
【００４１】
本発明の一実施形態において、本発明のＶＤＤＳ及び本発明のＶＤＤＳを含む医薬組成物は、種々の適切な製剤に製剤化されてもよく、エアロゾル形態で経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内（intraperitoneally）、腹腔内（interperitoneally）、直腸、局所的、及び経膣的に投与されてもよい。
【００４２】
好ましくは、ＶＤＤＳは医薬上許容される担体と混合され、静脈内（ｉｖ）、腹腔内（ｉｐ）又は局所的（ｔｐ）に投与される。ｉｖ又はｉｐによる投与は、注入部位の炎症などの副作用の危険性の減少をもたらす。
【００４３】
本発明によれば、標的組織を認識するために「標的化部分」又はリガンドがＶＤＤＳに結合されてもよく、これにより、ＶＤＤＳよって送達される薬物物質、例えば、抗体、抗体フラグメント、多糖、糖、及び他のリガンド若しくは他の薬剤の細胞内送達並びに／又は当業者に公知の他の方法（Ｋｌｉｂａｎｏｖら，Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．，２（３）：３２１（１９９２））が改良される。ガングリオシド、多糖及びポリエチレングリコールなどのポリマーをＶＤＤＳに結合させて、インビボでの網内系によるそれらの非特異的取り込みを減少させてもよい。種々の細胞タンパク質及びウイルスタンパク質もまた、標的化の目的のため、及びそれらの融合特性のために、リポソーム内に組み込まれている。本発明の一実施形態によれば、標的化特性を修飾するために、標的化部分が親水性ポリマー（例えばＰＥＧ）に結合される。本発明の一実施形態によれば、標的化部分は、葉酸−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥトランスフェリン、アルファ−トコフェロール、レチノイン酸又はＲＧＤペプチドである。
【００４４】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む中性脂質のホスファチジルコリンを含む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質を含むＶＤＤＳを作製する方法を提供する。その方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００４５】
本発明のＶＤＤＳを作製するために使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、１０：１（質量）〜２０：１（質量）の範囲であってもよい。好ましくは、本発明に使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、約１４：１である。
【００４６】
本発明に使用される「水混和性有機溶媒」は、溶媒中の疎水性薬物の溶解性、溶媒が水に混和する程度、及び溶媒の毒性に応じて選択される。使用され得る溶媒の例としては、限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルホルムアミド、エタノール、グリコール、グリセリン、プロピレングリコール、及び種々のポリエチレングリコールなどの種々のアルコールが挙げられる。本発明の一実施形態によれば、ＶＤＤＳを作製する方法は、水混和性有機溶媒としてエタノールを使用して、少なくとも１つのリン脂質及び少なくとも１つの疎水性薬物を含む混合物を形成し、それを、少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を含む水溶液と更に混合して、ＶＤＤＳを形成する。
【００４７】
ｓｉＲＮＡを含有する第２の溶液を形成するために使用される水溶液は、３〜６の間のｐＨ、好ましくは４のｐＨの緩衝剤及び金属塩の両方を含む。この水溶液は、ｓｉＲＮＡの溶解度に応じて選択される。当業者は、本発明における水溶液のための緩衝剤及び金属塩を選択する方法を理解しているだろう。適切な緩衝剤の例としては、酢酸ナトリウム及び酢酸カリウムを含む、酢酸のいずれかの塩、コハク酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、ＨＥＰＥＳ、ＰＢＳ及び当該技術分野において公知の任意の他の緩衝剤が挙げられる。適切な金属塩の例としては、塩化カルシウム、塩化亜鉛及び塩化マグネシウムが挙げられる。
【００４８】
薬物物質の安定性を高めるか、又は毒性を減少させる、ＶＤＤＳに対する添加剤、例えば脂質酸化阻害剤（米国特許第５，６０５，７０３号及びＷＯ９２０２２０８）及びステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールなどの安定剤が添加されてもよい。ＶＤＤＳに含まれる場合、コレステロールなどのステロールは、低分子及びイオンをほとんど透過させない二重層（複数可）を作製し、その二重層の間のタンパク質の輸送を減少させることによって安定性を促進する。
【００４９】
標的組織を認識するための「標的化部分」又はリガンドは、当業者に公知の方法（Ｋｌｉｂａｎｏｖら，Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．，２（３）：３２１（１９９２））を用いてＶＤＤＳに結合され得る。これらの公知の方法は本明細書に参照として組み込まれる。
【００５０】
遊離した非リポソーム薬物及びｓｉＲＮＡの除去は、タンジェンシャル（膜）フロー濾過（ＴＦＦ）システム又は透析を用いて達成され得る。
【００５１】
本発明は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む、中性脂質のホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含むＶＤＤＳを作製する方法を更に提供する。この方法は、（ｉ）中性脂質のホスファチジルコリン、更なる中性脂質（複数可）又は陽イオン性脂質（複数可）又は陰イオン性脂質（複数可）、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性の有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、（ｉｉ）第１の溶液から水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、（ｉｉｉ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、（ｉｖ）（ｉｉ）の脂質薄膜と（ｉｉｉ）の第２の溶液とを混合して、ＶＤＤＳを形成する工程とを含む。
【００５２】
本発明のＶＤＤＳを作製するために使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は、１０：１（質量）〜２０：１（質量）の範囲であってもよい。好ましくは、本発明に使用される脂質対ｓｉＲＮＡの比は約１４：１である。
【００５３】
本発明のＶＤＤＳの好ましい製剤は、８１．９：１５．４：２：０．７（モル濃度）のＰＣ：ｃｈｏｌ：ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００：Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール（ビタミンＥ）の比を有し、ここで、「ＰＣ」はホスファチジルコリンであり、「ｃｈｏｌ」はコレステロールであり、「ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００」はジミリスチルホスファチジルエタノールアミン−ポリエチレングリコール２０００である。脂質対ｓｉＲＮＡの好ましい比は１４：１（質量）である。リポソーム二重層内に挿入する薬物の量は特定の薬物に応じる。ＥＰＯ９０６の場合、０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度を脂質二重層に挿入することが好ましい。リポソームの水性内部におけるｓｉＲＮＡ蓄積は、好ましくは、約１〜１．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度である。
【００５４】
本発明は、少なくとも１つの疎水性薬物物質及び少なくとも１つのｓｉＲＮＡを対象に同時に両方送達する方法を更に提供し、前記方法は、（ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層と、（ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、（ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質とを含む小胞薬物送達系を対象に投与する工程を含む。本発明によれば、脂質二重層はホスファチジルコリンである中性脂質を含む。本発明は更に、脂質二重層が、ホスファチジルコリン並びに少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質及び／又は陰イオン性脂質の組み合わせを含む、実施形態を含む。
【００５５】
本発明のＶＤＤＳは、種々の疾患の治療、特に腫瘍への適用に有用である。例えば、ＥＰＯ９０６及びｓｉＲＮＡを含むＶＤＤＳは、卵巣癌を治療するために使用されてもよく、その治療において、投与は、好ましくは、腹腔内又は全身／非経口投与である。ＥＰＯ９０６及びｓｉＲＮＡを含む本発明のＶＤＤＳはまた、乳癌、肺癌、黒色腫、腹膜癌、卵管癌、及び結腸直腸癌の治療に使用してもよい。好ましい用量範囲は、個々の適用当たり０．１〜１０ｍｇ／ｋｇのｓｉＲＮＡであり、これは、個々の適用当たり０．０５〜５ｍｇ／ｋｇのＥＰＯ９０６と一致する。
【００５６】
以下に実施例を示すが、本明細書に記載されている本発明の範囲を限定するために与えるものではない。この実施例は、本発明を実施する方法を示唆することのみを意図する。
【実施例１】
【００５７】
標的化部分を有さない脂質薄膜の調製：
ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ、１０４．４ｍｇ）、コレステロール（１０ｍｇ）、ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ（９ｍｇ）、及びＤ，Ｌ−α−トコフェロール（０．４９ｍｇ）を、２ｍＬのエタノールに溶解して、６２．０１ｍｇ／ｍＬ（又は０．０８４０ｍｍｏｌ／ｍＬ）を得る。ＥＰＯ９０６（２２．１４ｍｇ）を加えて、完全に溶解する。この溶液から、１１２９μＬを別の丸底フラスコにピペットで取り、全てのエタノールを蒸発させて、脂質薄膜を生成する。
【００５８】
標的化部分を有する脂質薄膜の調製：
この実施例に使用する標的化部分は、ＦＡ−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥである。ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ、１０４．１ｍｇ）、コレステロール（１０．２２ｍｇ）、ｍＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ（９ｍｇ）、ＦＡ−ＰＥＧ３０００−ＤＳＰＥ（２．２ｍｇ）及びＤ，Ｌ−α−トコフェロール（０．５２ｍｇ）を、２ｍＬのエタノールに溶解して、６２．９２ｍｇ／ｍＬ（又は０．０８４ｍｍｏｌ／ｍＬ）を得る。ＥＰＯ９０６（２２．４６ｍｇ）を加え、完全に溶解する。この溶液から、１１１３μＬを別の丸底フラスコにピペットで取り、エタノールを蒸発させて、脂質薄膜を生成する。
【００５９】
ｓｉＲＮＡ水溶液の調製：
この実施例において、ルシフェラーゼ遺伝子特異的ｓｉＲＮＡを使用する。１０００μＬのｓｉＲＮＡストック（５ｍｇ／ｍＬ）、１２５μＬのＣａＣｌ２（０．１Ｍ）、１２５μＬの酢酸緩衝溶液（ｐＨ４、１Ｍ）及び２５０μＬの水のｓｉＲＮＡ溶液を、混合することによって調製する。そのｓｉＲＮＡ溶液を４５℃の水浴中で加温する。
【００６０】
ＶＤＤＳの調製：
特定の脂質薄膜を混合し、ｓｉＲＮＡ水溶液で水和して、リポプレックス溶液を形成する。そのリポプレックス溶液を、４５℃の温水浴中に３０分間置いておき、その後、１０００μＬのエタノールを加える。リポプレックス溶液を、液体窒素を用いて凍結させ、４５℃の温水浴中で加温する。水溶性薬物物質についての捕集効率を増加させるために、凍結し、加温する工程を３回繰り返し、本発明のＶＤＤＳを得る。粒子の分析により、ゲル電気泳動によって測定すると、８０％のカプセル化効率を有し、１４０±５６ｎｍの平均サイズ及び０．５のＰＤＩが示される。
【００６１】
遊離した非リポソームＥＰＯ９０６及びｓｉＲＮＡの除去は、タンジェンシャル（膜）フロー濾過（ＴＦＦ）システムを用いて達成する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、前記脂質はホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む、少なくとも１つの脂質二重層と、
ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、
ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質と、
を含む、小胞薬物送達系。
【請求項２】
前記脂質が、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質を更に含む、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項３】
前記少なくとも１つのｓｉＲＮＡが、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項４】
前記ｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、血漿ＤＮＡ又はヒトゲノムに由来する、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項５】
前記疎水性薬物が、タキソイド、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミケラミンＢ、ブリオスタチン−１、ハロモン、シスプラチン、ＥＰＯ９０６又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項６】
前記疎水性薬物がＥＰＯ９０６である、請求項５に記載の小胞薬物送達系。
【請求項７】
前記少なくとも１つの更なる中性脂質が、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、リソホスファチジルエタノールアミン、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＭＰＥ）又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項８】
前記中性脂質が、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＣ、ＰＬＰＣ、ＰＥ、ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ又はそれらの組み合わせである、請求項７に記載の小胞薬物送達系。
【請求項９】
前記少なくとも１つの更なる陽イオン性脂質が、Ｎ−１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（４’−トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル（ＤＯＳＣ）、コレステリル（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノエート（ＣｈｏＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド ＤＯＲＩ、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｏ，Ｏ’−ジドデシル−Ｎ−ｐ−（２−トリメチルアンモニオエチルオキシ）ベンゾイル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、リポスペルミン、ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３ａ−Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’’−ジメチルアミノエタン）カルボニルコレステロール）、リポポリ（Ｌ−リシン）、Ｎ−（ａ−トリメチルアンモニオアセチル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＴＭＡＧ）、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの更なる陰イオン性脂質が、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、脳ホスファチジルセリン（ＢＰＳ）、ジラウリルオイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１１】
更なる医薬上許容される賦形剤を更に含む、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１２】
前記更なる医薬上許容される賦形剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はトコフェロールからなる群から選択される、安定剤である、請求項１１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１３】
前記ｓｉＲＮＡが、過形成細胞又は癌性細胞の増殖を促進する遺伝子の翻訳を阻害する、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１４】
前記ｓｉＲＮＡが１５〜５０個の核酸塩基である、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１５】
前記遺伝子が、ＥｐｈＡ２、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）、［ベータ］２−アドレナリン受容体（［ベータ］２ＡＲ）、ＥＳＲ１、腫瘍抑制タンパク質ｐＲＢ、ＭＤＲ−１、ＮＫカッパＢ及びＮｅｋ２からなる群から選択される、請求項１３に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１６】
標的化部分を更に含む、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１７】
前記標的化部分が、葉酸−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥトランスフェリン、アルファ−トコフェロール、レチノイン酸及びＲＧＤペプチドからなる群から選択される、請求項１６に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１８】
コレステロール、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００）及びトコフェロールを更に含む、請求項９に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１９】
ＰＣ：コレステロール：ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００：トコフェロールの比が、約８１．９：１５．４：２：０．７（モル濃度）である、請求項１８に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２０】
脂質：ｓｉＲＮＡの比が、１０：１（質量）から２０：１（質量）の間の範囲である、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２１】
リン脂質：ｓｉＲＮＡの比が、１４：１（質量）である、請求項２０に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２２】
前記疎水性薬物の濃度が少なくとも約０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２３】
前記ｓｉＲＮＡの濃度が約１〜１．２ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２４】
請求項１に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、
ｂ）前記第１の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
ｃ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、
ｄ）前記（ｂ）の脂質薄膜と前記（ｃ）の第２の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。
【請求項２５】
請求項２に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質；少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質；少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、
ｂ）前記第１の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
ｃ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、
ｄ）前記（ｂ）の脂質薄膜と前記（ｃ）の第２の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。
【請求項２６】
標的化部分が前記（ａ）の第１の溶液に加えられる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疎水性薬物が、タキソイド、カンプトテシン、ドキソルビシン、ミケラミンＢ、ビンクリスチン、ブリオスタチン−１、ハロモン、シスプラチン、ＥＰＯ９０６、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、及びシクロスポリン、又はそれらの組み合わせである、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記水混和性有機溶媒が、アルコール、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド又はポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記水混和性有機溶媒が、メタノール、グリコール、グリセロール、プロピレングリコール又はエタノールからなる群から選択されるアルコールである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記少なくとも１つの更なる中性脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、及びリソホスファチジルエタノールアミン又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項３１】
安定剤が前記（ａ）の第１の溶液に加えられる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記安定剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
疎水性薬物物質及びｓｉＲＮＡを対象に同時に両方送達する方法であって、前記方法は、請求項１に記載の小胞薬物送達系を前記対象に投与する工程を含む、方法。
【請求項１】
ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、前記脂質はホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む、少なくとも１つの脂質二重層と、
ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、
ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質と、
を含む、小胞薬物送達系。
【請求項２】
前記脂質が、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質を更に含む、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項３】
前記少なくとも１つのｓｉＲＮＡが、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項４】
前記ｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、血漿ＤＮＡ又はヒトゲノムに由来する、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項５】
前記疎水性薬物が、タキソイド、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミケラミンＢ、ブリオスタチン−１、ハロモン、シスプラチン、ＥＰＯ９０６又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項６】
前記疎水性薬物がＥＰＯ９０６である、請求項５に記載の小胞薬物送達系。
【請求項７】
前記少なくとも１つの更なる中性脂質が、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、リソホスファチジルエタノールアミン、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＭＰＥ）又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項８】
前記中性脂質が、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＣ、ＰＬＰＣ、ＰＥ、ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ又はそれらの組み合わせである、請求項７に記載の小胞薬物送達系。
【請求項９】
前記少なくとも１つの更なる陽イオン性脂質が、Ｎ−１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（４’−トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル（ＤＯＳＣ）、コレステリル（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノエート（ＣｈｏＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド ＤＯＲＩ、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｏ，Ｏ’−ジドデシル−Ｎ−ｐ−（２−トリメチルアンモニオエチルオキシ）ベンゾイル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、リポスペルミン、ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３ａ−Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’’−ジメチルアミノエタン）カルボニルコレステロール）、リポポリ（Ｌ−リシン）、Ｎ−（ａ−トリメチルアンモニオアセチル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＴＭＡＧ）、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの更なる陰イオン性脂質が、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、脳ホスファチジルセリン（ＢＰＳ）、ジラウリルオイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１１】
更なる医薬上許容される賦形剤を更に含む、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１２】
前記更なる医薬上許容される賦形剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はトコフェロールからなる群から選択される、安定剤である、請求項１１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１３】
前記ｓｉＲＮＡが、過形成細胞又は癌性細胞の増殖を促進する遺伝子の翻訳を阻害する、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１４】
前記ｓｉＲＮＡが１５〜５０個の核酸塩基である、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１５】
前記遺伝子が、ＥｐｈＡ２、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）、［ベータ］２−アドレナリン受容体（［ベータ］２ＡＲ）、ＥＳＲ１、腫瘍抑制タンパク質ｐＲＢ、ＭＤＲ−１、ＮＫカッパＢ及びＮｅｋ２からなる群から選択される、請求項１３に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１６】
標的化部分を更に含む、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１７】
前記標的化部分が、葉酸−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥトランスフェリン、アルファ−トコフェロール、レチノイン酸及びＲＧＤペプチドからなる群から選択される、請求項１６に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１８】
コレステロール、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００）及びトコフェロールを更に含む、請求項９に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１９】
ＰＣ：コレステロール：ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００：トコフェロールの比が、約８１．９：１５．４：２：０．７（モル濃度）である、請求項１８に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２０】
脂質：ｓｉＲＮＡの比が、１０：１（質量）から２０：１（質量）の間の範囲である、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２１】
リン脂質：ｓｉＲＮＡの比が、１４：１（質量）である、請求項２０に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２２】
前記疎水性薬物の濃度が少なくとも約０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２３】
前記ｓｉＲＮＡの濃度が約１〜１．２ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２４】
請求項１に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、
ｂ）前記第１の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
ｃ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、
ｄ）前記（ｂ）の脂質薄膜と前記（ｃ）の第２の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。
【請求項２５】
請求項２に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質；少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質；少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、
ｂ）前記第１の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
ｃ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、
ｄ）前記（ｂ）の脂質薄膜と前記（ｃ）の第２の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。
【請求項２６】
標的化部分が前記（ａ）の第１の溶液に加えられる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疎水性薬物が、タキソイド、カンプトテシン、ドキソルビシン、ミケラミンＢ、ビンクリスチン、ブリオスタチン−１、ハロモン、シスプラチン、ＥＰＯ９０６、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、及びシクロスポリン、又はそれらの組み合わせである、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記水混和性有機溶媒が、アルコール、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド又はポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記水混和性有機溶媒が、メタノール、グリコール、グリセロール、プロピレングリコール又はエタノールからなる群から選択されるアルコールである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記少なくとも１つの更なる中性脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、及びリソホスファチジルエタノールアミン又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項３１】
安定剤が前記（ａ）の第１の溶液に加えられる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記安定剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
疎水性薬物物質及びｓｉＲＮＡを対象に同時に両方送達する方法であって、前記方法は、請求項１に記載の小胞薬物送達系を前記対象に投与する工程を含む、方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５２１３８９（Ｐ２０１２−５２１３８９Ａ）
【公表日】平成２４年９月１３日（２０１２．９．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０１２８８（Ｐ２０１２−５０１２８８）
【出願日】平成２２年３月２４日（２０１０．３．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５３８０２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０８９３４
【国際公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月１３日（２０１２．９．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月２４日（２０１０．３．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５３８０２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０８９３４
【国際公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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