藻類及び藻類抽出物の栄養補助組成物
藍藻類のスピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）の乾燥バイオマスと、アスタキサンチンとを含むヒト用栄養補助組成物が開示される。本発明の組成物は、健康なヒト又は不健康なヒトの健全及び健康を支援するために安定で、効果的で、好都合である。さらに、ヒト対象のウイルス感染を、本発明の組成物を当該対象に投与することによって改善する方法が開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は栄養補助物に関し、より具体的には、植物材料に基づく当該補助物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然栄養補助物産業は３０００億ドルの世界市場である。多くの天然植物材料及び抽出物が数千年間にわたり健康目的のために人類に用いられている。世界のある地域では、天然健康製品は、宗教、文化、安全性、費用及び効能が証明されていることを理由に、化学製品又は医薬製品よりも好まれる。
【０００３】
ヒトの健康のサポートに用いられてきた歴史がある植物産物の１つが藻類である。ヒトの健康のサポートに用いられることが知られている２の藻類が、スピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）及びヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）である。
【０００４】
スピルリナ・プラテンシス
スピルリナ・プラテンシス・ゲイトラー（Ｇｅｉｔｌｅｒ）は運動性の多細胞の糸状藍藻類で、自然界ではアフリカ及びメキシコの高アルカリ性の火山湖に存在する。現在、アフリカ、インド、中国及びアメリカ合衆国のハワイ諸島をはじめとする世界の多くの国の培養池で生育する。
【０００５】
スピルリナは、免疫機能を高めることが示されており、特に、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ及び栄養失調に罹患した人々等の免疫が低下した人々に適用できる。免疫機能のこの自然促進は、藻類バイオマスにおける微量元素のセレンの量を増やすことでさらに高めることができる。一般的に、ＨＩＶ／ＡＩＤＳにはセレン欠乏が関連する（Patrick、1999;Baumら、1997）。研究者は、セレンの免疫系における機能及びセレンが抗酸化剤として機能するため、ＨＩＶ疾患で重要でありうると考える。
【０００６】
スピルリナの固有の形態は、環境汚染から保護された閉鎖制御系において製造される形態であり、この場合、藻類培養培地を、バイオマスの天然有機組成物を「調整する」ためにキレート化された微量元素を加えて修飾することができる。このようにして、スピルリナにおける微量元素の濃度を高めることができる。選択した微量元素をスピルリナの成長サイクルの特定の段階で無機キレートとして加える。当該元素はその後、藻類バイオマスを収集する前に生物体内で代謝されて有機複合体に変換される。例えば、セレンの最終的濃度レベルをバイオマス乾燥物１キログラムあたり少なくとも１００ｍｇに高めることができる。
【０００７】
Ｓａｅｋｉら（２０００）は、４０歳を過ぎた男性に４０％のスピルリナ熱水抽出物で２週間の処置をした後、ＩＦＮ−γ分泌活性及びＮＫ細胞損傷活性が共に著しく促進したことを示した。Ｅｖｅｔｓら（１９９４）は、１日あたり５グラムのスピルリナを４５日間使用すると、ロシアの高放射能地域のＩｇＥレベルが平均値を超えた子供のＩｇＥレベルを正常化するのに有効であることを開示する。
【０００８】
インビトロ研究（Ｑｕｅｒｅｓｈｉら、１９９５ａ；Ｑｕｅｒｅｓｈｉら、１９９５ｂ）により、スピルリナの水抽出物で処置したニワトリのマクロファージが、マクロファージ機能を促進し、抗体応答及び食作用で免疫刺激をもたらしたことが示されている。ニワトリ餌に１．６％までのレベルのスピルリナを与えた補足的な研究では、フィオヘマグルチニン−Ｐ（ＰＨＡ−Ｐ）を注射後で、皮膚好塩基球過敏症（ＣＢＨ）応答が対照よりもおよそ２倍高く、かつ、Ｔ細胞応答が対照よりも４倍近く高く誘発されたことが示された。Ａｌ−Ｂａｔｓｈａｎら（２００１）もニワトリを用いて研究しているが、スピルリナを与えると、一酸化窒素活性を促進させるマクロファージの食作用経路及び代謝経路がアップレギュレーションされることを示した。細菌、ウイルス及び原生動物を含む、様々な病原性微生物に対する、マクロファージによって産生される一酸化窒素の抗菌効果が詳しく報告されているため、スピルリナには正の免疫調節効果があることが知られている。
【０００９】
Ｈａｙａｓｈｉら（１９９６）は、Ｉ型単純ヘルペス、ヒトサイトメガロウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス及びＨＩＶ−１ウイルスを含むエンベロープで包まれたいくつかのウイルスのインビトロでの複製を阻害する新規な硫酸化多糖のカルシウムスピルラン（Ｃａ−ＳＰ）をスピルリナ・プラテンシスから単離した。
【００１０】
ラットに、５％のスピルリナを含む食餌を１００日間供与して、（スピルリナを供与しなかった対照群と比較すると）以下の点が明らかになった：１．盲腸の重量が１３％増加した；２．ラクトバチルス菌が３２７％増加した；３．盲腸内部のビタミンＢ１（チアミン）が４３％増加した。スピルリナは追加のＢ１を供給しなかったため、スピルリナが全体としてＢ１吸収を改善させた。本研究により、スピルリナの摂取により、ラクトバチルス菌が増加し、かつ、食餌全体からのビタミンＢ１及び他のビタミンの効率的な吸収が高められることが示唆される（Tokaiら、1997)。
【００１１】
藍藻類のスピルリナ・プラテンシスは、栄養学的プロフィールが優れていること及びカロテノイド含有量が高いため、ヒト及び動物の食物源として何百年間にもわたり用いられている。スピルリナはタンパク質が比較的多く、その値は５５％〜７０％に及び、また、必須アミノ酸の全て含む（Clementら、1967;Bourgesら、1971;Anusuya Deviら、1981;Biodelta、1994）。利用可能なエネルギーは２．５ｋｃａｌ／グラム〜４．３ｋｃａｌ／グラムと測定されており、リンの利用能が４１％である（Yoshida及びHoshii、1980;Biodelta、1994）。スピルリナの粉末は、青みのある緑色のものとして世の中に出回っており、実際、適切に培養及び加工された場合、いかなる天然食品源の中でも最高レベルのカロテノイドの１つを含有する（Matsunoら、1974;Tanakaら、1974;Nells及びDe Leenheer、1983;Mikiら、1986）。カロテノイドは、主として植物プランクトン、藻類及び植物で産生される、６００を超える天然の脂溶性色素の一群である。菌類種及び細菌種の一部もまた、カロテノイドを合成することができるものの、動物はカロテノイドをデノボで産生することができない。天然色素の様々なクラスの中で、カロテノイドは、非常に広範囲に及ぶ構造的に多様な着色剤である。カロテノイドは自然界の広範囲の様々な色に関わっており、最も注目すべきものが、植物の果実及び葉の輝く黄色〜赤色の色である。タンパク質との組合せによっては、カロテノイドは、魚、昆虫、鳥及び甲殻類の様々な種の広範囲の様々な青色、緑色、紫色、褐色及び赤みのある色にも関連する。当該天然色素は、細胞を光損傷から保護することに関連するが、当該色素は、ビタミンＡの前駆体としての様々な生物におけるより広範な機能、酸素ラジカルを消去する抗酸化活性、免疫強化、ホルモン調節並びに成長、生殖及び成熟化に機能する。スピルリナの主要なカロテノイドは、β−カロテン、β−クリプトキサンチン及びゼアキサンチンである。
【００１２】
スピルリナは乾燥粉末のバイオマス形態で従来から使用され、従来から体重１キログラムあたり約４５ｍｇの１日量で経口摂取されている。好ましい形態では、粉末が５００ｍｇ〜１０００ｍｇの錠剤として摂取されるか、又は、飲料物に分散される。
【００１３】
アスタキサンチン
アスタキサンチン（３，３’−ジヒドロキシ−β，β−カロテン−４，４’−ジオン）ＣＡＳ［４７１−５３−４］は、サケ、エビ、マダイ及びロブスター等の海洋動物、フラミンゴ等の鳥類で餌を介して自然に蓄積されるケトカロテノイド色素である。アスタキサンチンはまた、ヘマトコッカス・プルビアリス等のある種の微細藻類及びファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属種等の酵母にも存在する。乾燥物の４パーセントまでの最高濃度がヘマトコッカスに存在する。アスタキサンチンはまた化学合成することができるが、天然立体異性体形態だけは合成できない。
【００１４】
アスタキサンチンは、β−カロテン、ゼアキサンチン及びルテイン等の他のカロテノイドに関連する、より強力な抗酸化剤である。アスタキサンチンは、一重項酸素を消去することに特に有効で、α−トコフェロールとしての一重項酸素消去能の５００倍以上である。アスタキサンチンの当該抗酸化活性は、ＵＶ光による損傷からの皮膚及び眼の保護、抗炎症活性、免疫応答の調節又は促進、老化プロセスの軽減並びに心臓、肝臓、関節及び前立腺への利点を含めて、アスタキサンチンが示す広範囲の様々な健康増進特性に関与すると考えられる。アスタキサンチンの健康増進特性の優れた総説がＧｕｅｒｉｎら（２００３）によって示される。
【００１５】
Ｔｓｏら（１９９６）は、中枢神経系及び眼の損傷、特に、加齢性黄斑変性を遅延又は改善する方法としてのアスタキサンチンの使用を開示した。
【００１６】
スピルリナの場合のように、アスタキサンチンは著しい免疫応答修飾を示すものの、対照的に、親油性作用因子として作用する。
【００１７】
Ｌｏｒｅｎｚ（２００２）は、アフタ性口内炎を遅延させ、改善及び防止するための経口的治療又は局所的治療としてのアスタキサンチンの使用を開示する。
【００１８】
Ｌｉｇｎｅｌｌ及びＢｏｔｔｉｎｇｅｒ（２００４）は、クローン病のヒト患者で、過度なＴｈ１細胞媒介の免疫応答を抑制し、Ｔｈ２細胞媒介の免疫応答を刺激するアスタキサンチンの使用を開示する。クローン病のみが研究されたが、当該著者らは、「他の優勢的なＴｈ１細胞媒介の疾患に罹患した患者が、・・・利益を得るであろう」と推測している。残念ながら、Ｔｈ１又はＴｈ２が介在する応答は何ら測定されなかった。従って、当該開示では、アスタキサンチンに関する免疫媒介の役割は単なる推測にすぎない。
【００１９】
Ｃｈｅｗら（２００４）は、炎症を軽減すること、免疫性を強化すること、生存期間を延長すること及びそれらの組合せで伴侶動物に使用される、アスタキサンチンを含む組成物を開示する。この場合、著者らは、アスタキサンチンが被験体のイヌ及びネコで細胞媒介免疫応答及び体液性免疫応答共に関与したことを示した。
【００２０】
Ｃｈｅｗら（２００４）は、アスタキサンチンを用いた無作為プラセボ対照による用量増加の二重盲検ヒト試験を行ったが、東亜欺試験では、正常な被験者でヒトの免疫応答を刺激する場合のアスタキサンチンの役割が明確に実証された。
【００２１】
より近年の研究（Ｃｈｅｗ及びＰａｒｋ、２００５）は、アスタキサンチンがまた、正常なヒト被験者の細胞のＤＮＡに対する、特に、免疫細胞での非特異的な環境的損傷を効果的に軽減することを開示する。本研究では、アスタキサンチンはＨ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓの超臨界二酸化炭素抽出物の形態であった。
【００２２】
つい最近では、Ｋｏｔｗａｌ（２００６）が、小さいビーズ形態にカプセル化された、ヘマトコッカスから抽出されたアスタキサンチンエステルによる抗ウイルス活性を示す。
【００２３】
アスタキサンチンは、体重１キログラムあたり約０．０１ｍｇから体重１キログラムあたり約０．２０ｍｇの１日量で健康目的のために消費される。
【００２４】
下記の参考文献は本発明の背景をさらに例示する。
米国特許及び公開された出願
【表１】
【００２５】
技術的参考文献
【表２】
【表３】
【表４】
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
スピルリナ・プラテンシス及びアスタキサンチンが作用において相補的なある領域、並びに、それらが互いに補完するある領域が存在することが、スピルリナ・プラテンシス及びアスタキサンチンの広範囲の様々な健康増進特性から明らかである。例えば、両者の製造物は、スピルリナが主として水溶性成分により、アスタキサンチンが脂肪可溶性成分により、免疫系を調節するようである。あるいは、アスタキサンチンは細胞レベルで抗酸化的な保護を提供することが知られているが、スピルリナの当該性質は示されていない。さらに、スピルリナは疎油性成分により抗ウイルス活性を示すことが知られているのに対し、アスタキサンチンは、新規な親油性成分により抗ウイルス活性を示すことが本明細書中に開示される。
【００２７】
より広範囲の健康増進特性がある改善された栄養補助物を作製するために当該２つの補助物を組み合わせて製造物を配合することは明らかに望ましい。すなわち、各々免疫特性及び抗ウイルス特性がある疎油性成分及び親油性成分を組み合わせた製造物組成物であって、抗ウイルス活性、免疫系の支援及び細胞保護を同時に提供することができる製造物組成物である。当該組成物は、健康なヒト及び、特に、ＨＩＶ感染者等の不健康なヒトに著しく有益であると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
組成物で使用するための乾燥スピルリナバイオマスの好ましい形態は、閉鎖系で製造され、感受性成分に対する損傷を最小限に抑えるために低温乾燥したスピルリナに由来する。乾燥バイオマスの有機結合型セレンのレベルを、スピルリナの生育期間中にセレンを培養培地に加えて増加させることもまた望ましい。法律によりセレン補給されたスピルリナの販売が禁止されている特定の国では、セレンを配合時に直接に加えてもよい。
【００２９】
配合物で使用されるアスタキサンチンは、ヘマトコッカス属藻類、ファフィア属及び他の微生物等の天然アスタキサンチン含有供給源に由来し得るか、合成製造から得られる。合成体は、ヒトでの使用が認可されていないため（ＦＤＡ、米国）、あまり好ましくなく、また、完全な天然異性体からなることはない。
【００３０】
アスタキサンチンは、ヘマトコッカス属、ファフィア属又は他の天然物のアスタキサンチン含有乾燥バイオマス及び／又はアスタキサンチン含有抽出物の形態で用いられ得る。残念ながら、ヘマトコッカス又はファフィアの全細胞乾燥バイオマスが粉末に粉砕される場合、当該アスタキサンチンは、空気や生物自身のリパーゼ及び酸化剤の組合せに暴露されると急速に効力を失う。当該粉砕されたバイオマス粉末は、アスタキサンチンの損失を防ぐため、真空パックされた酸素不透過性バッグで貯蔵されるべきか、又は、冷凍すべきである。結果として、乾燥バイオマスの混合物を含む組成物はあまり好ましくない。
【００３１】
組成物で用いるアスタキサンチンの好ましい形態は、ヘマトコッカス・プルビアリス・フロトー（Ｆｌｏｔｏｗ）に由来する抽出物である。Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓを閉鎖系で培養することができ、開放池系で生じうる環境汚染なく製造することができる。Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓは乾燥物の４重量パーセントまでをアスタキサンチンとして産生し、つまりＨ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓが天然アスタキサンチンのための最も経済的な供給源である。Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓで産生されるアスタキサンチンの立体異性体は、自然界のサケに存在する立体異性体と同一で、従って、ヒトの食餌に存在する立体異性体と同一である。加えて、Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓは、アスタキサンチンを主として（９０％超）、遊離体よりもはるかに安定であるエステル体で産生する。
【００３２】
Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓを乾燥し、粉砕し、超臨界の二酸化炭素で抽出する場合、アスタキサンチンのエステルが、適切な貯蔵条件では２年間を超えて安定である油状の粘性の暗赤色の抽出物として得られる。つまり、当該抽出物は、組成物に含めるためのアスタキサンチンの好ましい形態である。特に錠剤送達系で安定性をさらに高めるために、Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓのアスタキサンチン含有抽出物は、噴霧乾燥等の周知のプロセスにより、マルトデキストリン、ゼラチン等でカプセル化することができる。
【００３３】
本明細書で開示される組成物（ＳｐｉｒｕＺａｎ（商標））は、スピルリナ・プラテンシスの乾燥粉末バイオマスをアスタキサンチンの好適な形態と混合した物を含む。アスタキサンチンは、好ましくは、安定性を高めるために、好適なキャリアマトリックスでカプセル化される。十分に混合した組成物はその後、標準的な錠剤化装置で錠剤に変換される。組成物は、約０．０２５重量パーセントのアスタキサンチン〜約２．５重量パーセントのアスタキサンチンを含有するように設計される。好ましい錠剤重量は５００ｍｇであり、その結果、好ましい１日摂取量は、１日あたり３回服用され、約３グラムの乾燥スピルリナバイオマスを４ｍｇ〜５ｍｇの天然アスタキサンチンと共に与える２錠である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
本発明の１の態様では、藍藻類（スピルリナ・プラテンシス）の乾燥バイオマスをアスタキサンチンの好適な形態と組み合わせる栄養補助組成物が開示される。本発明の好ましい形態では、アスタキサンチンはヘマトコッカス・プルビアリスのアスタキサンチン含有抽出物の形態である。本発明の組成物では、重量比で約０．０２５パーセントのアスタキサンチンから約２．５パーセントのアスタキサンチンまでの、乾燥スピルリナバイオマスへのアスタキサンチン含有抽出物の添加のための範囲が開示される。
【００３５】
本発明の別の態様では、アスタキサンチンは、好ましくは、乾燥スピルリナバイオマスと接触しているアスタキサンチンの酸化的劣化を最小限を抑えるために、組成物への配合の前にカプセル化剤でカプセル化することができる。典型的なカプセル化剤としては、例えば、デンプン、マルトデキストリン、ゼラチン、タンパク質、ポリマー、糖及び多糖があげられる。そのような開示された栄養補助組成物は、優れた酸化安定性を示し、経口投与を容易にする錠剤、カプセル及び粉末に都合よく加工することができる。ヒト又は動物によって摂取された場合、そのような１つの組成物は、効果的及び便利な単回服用の概念でそれら２つの別個の藻類に関連した健全及び健康を支援する。通常の１日摂取量は体重１キログラムあたり約４５ｍｇの組成物の好ましい範囲にある。平均的な成人について、これは１日あたり約３グラムの組成物に等しく、これは、１日あたり３回で、２つの５００ｍｇ用量として都合よく摂取される。当業者であれは、５００ｍｇが錠剤及びカプセルのための便利な単位用量であることに気であろう。
【００３６】
当業者であれば、錠剤、カプセル又は粉末中の当該組成物は、例えば、ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、トコフェロール、トコトリエノール、フィトステロール、脂肪アルコール、多糖及びビオフラボノイドをはじめとする他の生物学的に活性な抽出物及び化合物を都合よく補充し得ることを理解するであろう。
【００３７】
本発明の別の態様では、収集及び乾燥の前に、成長中の藻類にセレン富化基質を与えることにより、組成物に用いられるスピルリナ・プラテンシスのセレン含有量を自然に増やすことができる。本態様で、乾燥バイオマスの１キログラムあたり約１００ｍｇのセレンを含有させることが都合よく達成される。セレン補給されたスピルリナを法律により販売できない特定の国では、セレンを配合時に直接に加えることができる。
【００３８】
不健康な一部のヒト及び動物、又は同様に、現地の食餌から１日にセレンを十分に摂取できない世界のセレン不足地域では、セレン摂取量が多いことが望ましいことが知られている。
【００３９】
本発明の別の態様では、体重１キログラムあたり約１０ｍｇ〜体重１キログラムあたり約１５０ｍｇの組成物の１日摂取量が、健康なヒト及び不健康なヒトの健全及び健康を効果的に支援することが開示される。
下記の実施例は本発明の例示であり、これに限定されるとして解釈してはならない。
【実施例１】
【００４０】
スピルリナ・プラテンシスを、セレン補給閉鎖生産系で培養した。成長した藻類を収集し、乾燥し、微粉末に粉砕した。セレン含有量は乾燥バイオマス１キログラムあたり１００ｍｇであった。
【表５】
【実施例２】
【００４１】
ヘマトコッカス・プルビアリスを閉鎖系で培養し、収集し、脱水し、細胞壁の破壊のために破砕し、乾燥した。当該乾燥バイオマスを圧力６５０ｂａｒ及び温度６０℃ので超臨界二酸化炭素で抽出した。表２に示す典型的な組成とともに１０％のアスタキサンチンを含有する暗赤色の抽出物を得た。
【表６】
【００４２】
アスタキサンチン富化Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓ抽出物が９８％がアスタキサンチンの形態である１０．２％の総カロテノイド（抽出物１キログラムあたり１０グラムである）を含有したことが表２からわかる。抽出物はまた、合計で５％を超えるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）を含有し、１０％を超える多価不飽和脂肪酸（リノール酸（１８：２）及びリノレン酸（１８：３））を含有する。
【実施例３】
【００４３】
アスタキサンチン含有抽出物をゼラチン基質で乳化し、噴霧乾燥して、カプセル化された微細なビーズ製造物を作製した。その一般的な組成を表３に示す。
【表７】
アスタキサンチン抽出物ビーズが約２．５重量％のアスタキサンチンを含有したことが表３からわかる。本ビーズは、アスタキサンチンを錠剤化プロセスに送るために非常に好適な細かい顆粒形態である。当該ビーズは、そのアスタキサンチンを酸化性のプロセスに暴露せずに錠剤又はカプセルにするため、スピルリナ・プラテンシスの粉末と都合よく混合することができる。
【実施例４】
【００４４】
実施例３に記載したビーズの試料を、ポックスウイルスｖＧＫ５（Kotwalら、1989)に対する抗ウイルス活性及び毒性活性についてのインビトロスクリーニングに供した。
【００４５】
１００μＬにおける既知量ウイルスのポックスウイルスの保存物を、希釈した（１：１０及び１：４の）ビーズ物の５μＬ、１０μＬ又は２０μＬと約１分間混合した［処理ｂｄ−１］。その後、これを、６穴プレートのウエルを覆う１ｍＬの培地に加えた。混合後、１０−６又は１０−７の希釈物が得られるまで、１００μＬを隣のウエルに移し、この操作を繰り返した。その後、プレートを４８時間インキュベーションし、４８時間後、培地を除き、０．１％のクリスタルバイオレット溶液で染色した。ビーズ物を添加しない対照プレートもまた、処理しない場合のウイルスの正確なカウント数を得るために処理した［対照ｂｄ−２］。その後、比率阻害を、処理しない場合の計測総数で除し、１００を乗じた処理後の実際の計測数の比率として求めた。
【００４６】
ビーズをそのまま試験し、また、その不活性な賦形剤（アスタキサンチン抽出物を除くすべての成分）を別個に試験した。抗ポックスウイルス阻害を、３．０×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、２．４×１０６ＰＦＵ／ｍＬ及び２．７×１０６ＰＦＵ／ｍＬの濃度で試験した。５μＬ、１０μＬ及び２０μＬで、ビーズの１：１０の希釈物は８５％〜１００％の範囲で阻害を示した。１×１０６ＰＦＵ／ｍＬのポックスウイルス濃度への線形回帰調節は、１０７％（５μＬ）、９４％（１０μＬ）及び７２％（２０μＬ）の推定された阻害をもたらした。賦形剤についての等価回帰阻害推定値は、０％（６μＬ）、０％（１２μＬ）及び５％（２４μＬ）であった。賦形剤は、６μＬ／ｍＬ、１２μＬ／ｍＬ及び２４μＬ／ｍＬでさしたる阻害は示さなかった（０％〜６２％）。
【００４７】
１：１０のビーズ希釈物は５μＬのレベルでゼロの毒性を示したが、１０μＬ及び２０μＬの用量では高い毒性を維持した。賦形剤は、１：４で希釈したときでさえ、６μＬ、１２μＬ及び２４μＬの用量で毒性を示さなかった。
【００４８】
ビーズ物が、１：１０の希釈物の５μＬの用量で試験されたとき、ゼロの毒性を伴って、ポックスウイルスｖＧＫ５の１００％の阻害を示したことが明らかである。ビーズは２．５％のアスタキサンチンを含有するので、１：１０のビーズ希釈物の５μＬの用量は、１００μＬのポックスウイルス溶液におけるアスタキサンチンの０．０１２５μｌの用量、すなわち、１２５ｐｐｍの有効濃度を表す。この研究でのアスタキサンチンについてのＩＣ５０が１２５ｐｐｍよりも著しく低く、一方で、ＴＣ５０が１２５ｐｐｍよりも著しく大きいことは明白である。
【００４９】
【表８】
【実施例５】
【００５０】
カプセル化された抽出物ビーズを、乾式ミキサーで総重量の６．６７％％のレベルで、乾燥したセレン強化バイオマスと混合した。得られた混合物を、５００ｍｇの錠剤を形成するために、結合剤を加えずに錠剤化装置に通した。
【表９】
【００５１】
アスタキサンチンが０．１６７重量％で錠剤に含まれることが表５からわかる。セレン含有量は１ｋｇあたり９３ｍｇである。３グラムの配合物である６錠の好ましい１日摂取量により、５グラムのアスタキサンチン及び０．２７９ｍｇのセレンが与えられる。錠剤を水と混合したときは粉々に崩壊せずに優れた溶解特性を示した。錠剤は、ヒトによる経口摂取に非常に好適な形態であった。
【実施例６】
【００５２】
実施例５で調製された錠剤を有用性のヒト対象実証試験に適用した。天然物ＡＩＤＳクリニックの指導のもと、数人のヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）患者が、錠剤を１日あたり６錠の１日摂取量で一定期間摂取することを志願した。プロトコル、インフォームドコンセント及び安全性要因が独立して、摂取の開始に先立ち、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｒｅｖｉｅｗ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ，Ｉｎｃ．（認定された施設内検討委員会）により評価され、承認された。３３名の研究被験者（２６名の男性及び６名の女性）が、実証試験に参加することを志願した。３名の志願者が研究から脱落したが２名はサプリメントに関連しない理由のためで、１名はアレルギー反応の可能性があるためであった。さらに１７名が、実証試験に加わることに関心を示している。全参加者のその後の全体的な健康状態を評価する。
【００５３】
開示の組成物がＨＩＶ及びＡＩＤＳ障害集団に渇望されているものであることが実施例６から明らかである。開示の組成物が、不相応な困難もなく投与及び摂取に都合よいこともまた明白である。本発明は、スピルリナ・プラテンシスの乾燥バイオマスをアスタキサンチンとの組合せで含むヒトの栄養補助物と見なすことができる。そのアスタキサンチンは、好ましくは、ヘマトコッカス・プルビアリスのアスタキサンチン含有抽出物の形態である。抽出物は、例えば、二酸化炭素による超臨界流体抽出により製造することができる。組成物は、アスタキサンチンをスピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約０．０２５重量パーセント（０．０２５重量％）からスピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約２．５００重量パーセント（２．５００重量％）までの範囲で含むことができる。スピルリナ・プラテンシスの乾燥バイオマスは、藻類成長期間における供給基質のセレン補給によりセレン含有量を増やすことができる。例えば、スピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスのセレン含有量は１キログラムあたり約５０ｍｇから１キログラムあたり約１５０ｍｇまでであり得る。セレン補給されたスピルリナが法律により販売禁止されている特定の国では、セレンを配合時に直接に加えることができる。
【００５４】
アスタキサンチンは、デンプン、マルトデキストリン、ゼラチン、ポリマー、タンパク質、多糖及び糖等を含むカプセル化剤でマイクロカプセル化することができる。ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、トコフェロール、トコトリエノール、フィトステロール、脂肪アルコール、多糖及びビオフラボノイド等の他の生物学的に活性な抽出物及び化合物を組成物に加えることができる。組成物は、錠剤、カプセル及び粉末の形態で提供することができ、また、食品、飼料及び飲料物に配合することができる。
【００５５】
組成物は、健康なヒト又は不健康なヒトの健全及び健康を支援するための栄養補助物として使用することができる。組成物は、ヒト対象のＨＩＶ／ＡＩＤＳ等のウイルス感染症を改善するために使用することができる。具体的には、組成物を、体重１キログラムあたり約１０ｍｇの組成物から体重１キログラムあたり約１５０ｍｇの組成物までの１日量で、より好ましくは、体重１キログラムあたり約４５ｍｇの組成物の範囲の１日量でヒトに経口投与することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は栄養補助物に関し、より具体的には、植物材料に基づく当該補助物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然栄養補助物産業は３０００億ドルの世界市場である。多くの天然植物材料及び抽出物が数千年間にわたり健康目的のために人類に用いられている。世界のある地域では、天然健康製品は、宗教、文化、安全性、費用及び効能が証明されていることを理由に、化学製品又は医薬製品よりも好まれる。
【０００３】
ヒトの健康のサポートに用いられてきた歴史がある植物産物の１つが藻類である。ヒトの健康のサポートに用いられることが知られている２の藻類が、スピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）及びヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）である。
【０００４】
スピルリナ・プラテンシス
スピルリナ・プラテンシス・ゲイトラー（Ｇｅｉｔｌｅｒ）は運動性の多細胞の糸状藍藻類で、自然界ではアフリカ及びメキシコの高アルカリ性の火山湖に存在する。現在、アフリカ、インド、中国及びアメリカ合衆国のハワイ諸島をはじめとする世界の多くの国の培養池で生育する。
【０００５】
スピルリナは、免疫機能を高めることが示されており、特に、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ及び栄養失調に罹患した人々等の免疫が低下した人々に適用できる。免疫機能のこの自然促進は、藻類バイオマスにおける微量元素のセレンの量を増やすことでさらに高めることができる。一般的に、ＨＩＶ／ＡＩＤＳにはセレン欠乏が関連する（Patrick、1999;Baumら、1997）。研究者は、セレンの免疫系における機能及びセレンが抗酸化剤として機能するため、ＨＩＶ疾患で重要でありうると考える。
【０００６】
スピルリナの固有の形態は、環境汚染から保護された閉鎖制御系において製造される形態であり、この場合、藻類培養培地を、バイオマスの天然有機組成物を「調整する」ためにキレート化された微量元素を加えて修飾することができる。このようにして、スピルリナにおける微量元素の濃度を高めることができる。選択した微量元素をスピルリナの成長サイクルの特定の段階で無機キレートとして加える。当該元素はその後、藻類バイオマスを収集する前に生物体内で代謝されて有機複合体に変換される。例えば、セレンの最終的濃度レベルをバイオマス乾燥物１キログラムあたり少なくとも１００ｍｇに高めることができる。
【０００７】
Ｓａｅｋｉら（２０００）は、４０歳を過ぎた男性に４０％のスピルリナ熱水抽出物で２週間の処置をした後、ＩＦＮ−γ分泌活性及びＮＫ細胞損傷活性が共に著しく促進したことを示した。Ｅｖｅｔｓら（１９９４）は、１日あたり５グラムのスピルリナを４５日間使用すると、ロシアの高放射能地域のＩｇＥレベルが平均値を超えた子供のＩｇＥレベルを正常化するのに有効であることを開示する。
【０００８】
インビトロ研究（Ｑｕｅｒｅｓｈｉら、１９９５ａ；Ｑｕｅｒｅｓｈｉら、１９９５ｂ）により、スピルリナの水抽出物で処置したニワトリのマクロファージが、マクロファージ機能を促進し、抗体応答及び食作用で免疫刺激をもたらしたことが示されている。ニワトリ餌に１．６％までのレベルのスピルリナを与えた補足的な研究では、フィオヘマグルチニン−Ｐ（ＰＨＡ−Ｐ）を注射後で、皮膚好塩基球過敏症（ＣＢＨ）応答が対照よりもおよそ２倍高く、かつ、Ｔ細胞応答が対照よりも４倍近く高く誘発されたことが示された。Ａｌ−Ｂａｔｓｈａｎら（２００１）もニワトリを用いて研究しているが、スピルリナを与えると、一酸化窒素活性を促進させるマクロファージの食作用経路及び代謝経路がアップレギュレーションされることを示した。細菌、ウイルス及び原生動物を含む、様々な病原性微生物に対する、マクロファージによって産生される一酸化窒素の抗菌効果が詳しく報告されているため、スピルリナには正の免疫調節効果があることが知られている。
【０００９】
Ｈａｙａｓｈｉら（１９９６）は、Ｉ型単純ヘルペス、ヒトサイトメガロウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス及びＨＩＶ−１ウイルスを含むエンベロープで包まれたいくつかのウイルスのインビトロでの複製を阻害する新規な硫酸化多糖のカルシウムスピルラン（Ｃａ−ＳＰ）をスピルリナ・プラテンシスから単離した。
【００１０】
ラットに、５％のスピルリナを含む食餌を１００日間供与して、（スピルリナを供与しなかった対照群と比較すると）以下の点が明らかになった：１．盲腸の重量が１３％増加した；２．ラクトバチルス菌が３２７％増加した；３．盲腸内部のビタミンＢ１（チアミン）が４３％増加した。スピルリナは追加のＢ１を供給しなかったため、スピルリナが全体としてＢ１吸収を改善させた。本研究により、スピルリナの摂取により、ラクトバチルス菌が増加し、かつ、食餌全体からのビタミンＢ１及び他のビタミンの効率的な吸収が高められることが示唆される（Tokaiら、1997)。
【００１１】
藍藻類のスピルリナ・プラテンシスは、栄養学的プロフィールが優れていること及びカロテノイド含有量が高いため、ヒト及び動物の食物源として何百年間にもわたり用いられている。スピルリナはタンパク質が比較的多く、その値は５５％〜７０％に及び、また、必須アミノ酸の全て含む（Clementら、1967;Bourgesら、1971;Anusuya Deviら、1981;Biodelta、1994）。利用可能なエネルギーは２．５ｋｃａｌ／グラム〜４．３ｋｃａｌ／グラムと測定されており、リンの利用能が４１％である（Yoshida及びHoshii、1980;Biodelta、1994）。スピルリナの粉末は、青みのある緑色のものとして世の中に出回っており、実際、適切に培養及び加工された場合、いかなる天然食品源の中でも最高レベルのカロテノイドの１つを含有する（Matsunoら、1974;Tanakaら、1974;Nells及びDe Leenheer、1983;Mikiら、1986）。カロテノイドは、主として植物プランクトン、藻類及び植物で産生される、６００を超える天然の脂溶性色素の一群である。菌類種及び細菌種の一部もまた、カロテノイドを合成することができるものの、動物はカロテノイドをデノボで産生することができない。天然色素の様々なクラスの中で、カロテノイドは、非常に広範囲に及ぶ構造的に多様な着色剤である。カロテノイドは自然界の広範囲の様々な色に関わっており、最も注目すべきものが、植物の果実及び葉の輝く黄色〜赤色の色である。タンパク質との組合せによっては、カロテノイドは、魚、昆虫、鳥及び甲殻類の様々な種の広範囲の様々な青色、緑色、紫色、褐色及び赤みのある色にも関連する。当該天然色素は、細胞を光損傷から保護することに関連するが、当該色素は、ビタミンＡの前駆体としての様々な生物におけるより広範な機能、酸素ラジカルを消去する抗酸化活性、免疫強化、ホルモン調節並びに成長、生殖及び成熟化に機能する。スピルリナの主要なカロテノイドは、β−カロテン、β−クリプトキサンチン及びゼアキサンチンである。
【００１２】
スピルリナは乾燥粉末のバイオマス形態で従来から使用され、従来から体重１キログラムあたり約４５ｍｇの１日量で経口摂取されている。好ましい形態では、粉末が５００ｍｇ〜１０００ｍｇの錠剤として摂取されるか、又は、飲料物に分散される。
【００１３】
アスタキサンチン
アスタキサンチン（３，３’−ジヒドロキシ−β，β−カロテン−４，４’−ジオン）ＣＡＳ［４７１−５３−４］は、サケ、エビ、マダイ及びロブスター等の海洋動物、フラミンゴ等の鳥類で餌を介して自然に蓄積されるケトカロテノイド色素である。アスタキサンチンはまた、ヘマトコッカス・プルビアリス等のある種の微細藻類及びファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属種等の酵母にも存在する。乾燥物の４パーセントまでの最高濃度がヘマトコッカスに存在する。アスタキサンチンはまた化学合成することができるが、天然立体異性体形態だけは合成できない。
【００１４】
アスタキサンチンは、β−カロテン、ゼアキサンチン及びルテイン等の他のカロテノイドに関連する、より強力な抗酸化剤である。アスタキサンチンは、一重項酸素を消去することに特に有効で、α−トコフェロールとしての一重項酸素消去能の５００倍以上である。アスタキサンチンの当該抗酸化活性は、ＵＶ光による損傷からの皮膚及び眼の保護、抗炎症活性、免疫応答の調節又は促進、老化プロセスの軽減並びに心臓、肝臓、関節及び前立腺への利点を含めて、アスタキサンチンが示す広範囲の様々な健康増進特性に関与すると考えられる。アスタキサンチンの健康増進特性の優れた総説がＧｕｅｒｉｎら（２００３）によって示される。
【００１５】
Ｔｓｏら（１９９６）は、中枢神経系及び眼の損傷、特に、加齢性黄斑変性を遅延又は改善する方法としてのアスタキサンチンの使用を開示した。
【００１６】
スピルリナの場合のように、アスタキサンチンは著しい免疫応答修飾を示すものの、対照的に、親油性作用因子として作用する。
【００１７】
Ｌｏｒｅｎｚ（２００２）は、アフタ性口内炎を遅延させ、改善及び防止するための経口的治療又は局所的治療としてのアスタキサンチンの使用を開示する。
【００１８】
Ｌｉｇｎｅｌｌ及びＢｏｔｔｉｎｇｅｒ（２００４）は、クローン病のヒト患者で、過度なＴｈ１細胞媒介の免疫応答を抑制し、Ｔｈ２細胞媒介の免疫応答を刺激するアスタキサンチンの使用を開示する。クローン病のみが研究されたが、当該著者らは、「他の優勢的なＴｈ１細胞媒介の疾患に罹患した患者が、・・・利益を得るであろう」と推測している。残念ながら、Ｔｈ１又はＴｈ２が介在する応答は何ら測定されなかった。従って、当該開示では、アスタキサンチンに関する免疫媒介の役割は単なる推測にすぎない。
【００１９】
Ｃｈｅｗら（２００４）は、炎症を軽減すること、免疫性を強化すること、生存期間を延長すること及びそれらの組合せで伴侶動物に使用される、アスタキサンチンを含む組成物を開示する。この場合、著者らは、アスタキサンチンが被験体のイヌ及びネコで細胞媒介免疫応答及び体液性免疫応答共に関与したことを示した。
【００２０】
Ｃｈｅｗら（２００４）は、アスタキサンチンを用いた無作為プラセボ対照による用量増加の二重盲検ヒト試験を行ったが、東亜欺試験では、正常な被験者でヒトの免疫応答を刺激する場合のアスタキサンチンの役割が明確に実証された。
【００２１】
より近年の研究（Ｃｈｅｗ及びＰａｒｋ、２００５）は、アスタキサンチンがまた、正常なヒト被験者の細胞のＤＮＡに対する、特に、免疫細胞での非特異的な環境的損傷を効果的に軽減することを開示する。本研究では、アスタキサンチンはＨ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓの超臨界二酸化炭素抽出物の形態であった。
【００２２】
つい最近では、Ｋｏｔｗａｌ（２００６）が、小さいビーズ形態にカプセル化された、ヘマトコッカスから抽出されたアスタキサンチンエステルによる抗ウイルス活性を示す。
【００２３】
アスタキサンチンは、体重１キログラムあたり約０．０１ｍｇから体重１キログラムあたり約０．２０ｍｇの１日量で健康目的のために消費される。
【００２４】
下記の参考文献は本発明の背景をさらに例示する。
米国特許及び公開された出願
【表１】
【００２５】
技術的参考文献
【表２】
【表３】
【表４】
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
スピルリナ・プラテンシス及びアスタキサンチンが作用において相補的なある領域、並びに、それらが互いに補完するある領域が存在することが、スピルリナ・プラテンシス及びアスタキサンチンの広範囲の様々な健康増進特性から明らかである。例えば、両者の製造物は、スピルリナが主として水溶性成分により、アスタキサンチンが脂肪可溶性成分により、免疫系を調節するようである。あるいは、アスタキサンチンは細胞レベルで抗酸化的な保護を提供することが知られているが、スピルリナの当該性質は示されていない。さらに、スピルリナは疎油性成分により抗ウイルス活性を示すことが知られているのに対し、アスタキサンチンは、新規な親油性成分により抗ウイルス活性を示すことが本明細書中に開示される。
【００２７】
より広範囲の健康増進特性がある改善された栄養補助物を作製するために当該２つの補助物を組み合わせて製造物を配合することは明らかに望ましい。すなわち、各々免疫特性及び抗ウイルス特性がある疎油性成分及び親油性成分を組み合わせた製造物組成物であって、抗ウイルス活性、免疫系の支援及び細胞保護を同時に提供することができる製造物組成物である。当該組成物は、健康なヒト及び、特に、ＨＩＶ感染者等の不健康なヒトに著しく有益であると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
組成物で使用するための乾燥スピルリナバイオマスの好ましい形態は、閉鎖系で製造され、感受性成分に対する損傷を最小限に抑えるために低温乾燥したスピルリナに由来する。乾燥バイオマスの有機結合型セレンのレベルを、スピルリナの生育期間中にセレンを培養培地に加えて増加させることもまた望ましい。法律によりセレン補給されたスピルリナの販売が禁止されている特定の国では、セレンを配合時に直接に加えてもよい。
【００２９】
配合物で使用されるアスタキサンチンは、ヘマトコッカス属藻類、ファフィア属及び他の微生物等の天然アスタキサンチン含有供給源に由来し得るか、合成製造から得られる。合成体は、ヒトでの使用が認可されていないため（ＦＤＡ、米国）、あまり好ましくなく、また、完全な天然異性体からなることはない。
【００３０】
アスタキサンチンは、ヘマトコッカス属、ファフィア属又は他の天然物のアスタキサンチン含有乾燥バイオマス及び／又はアスタキサンチン含有抽出物の形態で用いられ得る。残念ながら、ヘマトコッカス又はファフィアの全細胞乾燥バイオマスが粉末に粉砕される場合、当該アスタキサンチンは、空気や生物自身のリパーゼ及び酸化剤の組合せに暴露されると急速に効力を失う。当該粉砕されたバイオマス粉末は、アスタキサンチンの損失を防ぐため、真空パックされた酸素不透過性バッグで貯蔵されるべきか、又は、冷凍すべきである。結果として、乾燥バイオマスの混合物を含む組成物はあまり好ましくない。
【００３１】
組成物で用いるアスタキサンチンの好ましい形態は、ヘマトコッカス・プルビアリス・フロトー（Ｆｌｏｔｏｗ）に由来する抽出物である。Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓを閉鎖系で培養することができ、開放池系で生じうる環境汚染なく製造することができる。Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓは乾燥物の４重量パーセントまでをアスタキサンチンとして産生し、つまりＨ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓが天然アスタキサンチンのための最も経済的な供給源である。Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓで産生されるアスタキサンチンの立体異性体は、自然界のサケに存在する立体異性体と同一で、従って、ヒトの食餌に存在する立体異性体と同一である。加えて、Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓは、アスタキサンチンを主として（９０％超）、遊離体よりもはるかに安定であるエステル体で産生する。
【００３２】
Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓを乾燥し、粉砕し、超臨界の二酸化炭素で抽出する場合、アスタキサンチンのエステルが、適切な貯蔵条件では２年間を超えて安定である油状の粘性の暗赤色の抽出物として得られる。つまり、当該抽出物は、組成物に含めるためのアスタキサンチンの好ましい形態である。特に錠剤送達系で安定性をさらに高めるために、Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓのアスタキサンチン含有抽出物は、噴霧乾燥等の周知のプロセスにより、マルトデキストリン、ゼラチン等でカプセル化することができる。
【００３３】
本明細書で開示される組成物（ＳｐｉｒｕＺａｎ（商標））は、スピルリナ・プラテンシスの乾燥粉末バイオマスをアスタキサンチンの好適な形態と混合した物を含む。アスタキサンチンは、好ましくは、安定性を高めるために、好適なキャリアマトリックスでカプセル化される。十分に混合した組成物はその後、標準的な錠剤化装置で錠剤に変換される。組成物は、約０．０２５重量パーセントのアスタキサンチン〜約２．５重量パーセントのアスタキサンチンを含有するように設計される。好ましい錠剤重量は５００ｍｇであり、その結果、好ましい１日摂取量は、１日あたり３回服用され、約３グラムの乾燥スピルリナバイオマスを４ｍｇ〜５ｍｇの天然アスタキサンチンと共に与える２錠である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
本発明の１の態様では、藍藻類（スピルリナ・プラテンシス）の乾燥バイオマスをアスタキサンチンの好適な形態と組み合わせる栄養補助組成物が開示される。本発明の好ましい形態では、アスタキサンチンはヘマトコッカス・プルビアリスのアスタキサンチン含有抽出物の形態である。本発明の組成物では、重量比で約０．０２５パーセントのアスタキサンチンから約２．５パーセントのアスタキサンチンまでの、乾燥スピルリナバイオマスへのアスタキサンチン含有抽出物の添加のための範囲が開示される。
【００３５】
本発明の別の態様では、アスタキサンチンは、好ましくは、乾燥スピルリナバイオマスと接触しているアスタキサンチンの酸化的劣化を最小限を抑えるために、組成物への配合の前にカプセル化剤でカプセル化することができる。典型的なカプセル化剤としては、例えば、デンプン、マルトデキストリン、ゼラチン、タンパク質、ポリマー、糖及び多糖があげられる。そのような開示された栄養補助組成物は、優れた酸化安定性を示し、経口投与を容易にする錠剤、カプセル及び粉末に都合よく加工することができる。ヒト又は動物によって摂取された場合、そのような１つの組成物は、効果的及び便利な単回服用の概念でそれら２つの別個の藻類に関連した健全及び健康を支援する。通常の１日摂取量は体重１キログラムあたり約４５ｍｇの組成物の好ましい範囲にある。平均的な成人について、これは１日あたり約３グラムの組成物に等しく、これは、１日あたり３回で、２つの５００ｍｇ用量として都合よく摂取される。当業者であれは、５００ｍｇが錠剤及びカプセルのための便利な単位用量であることに気であろう。
【００３６】
当業者であれば、錠剤、カプセル又は粉末中の当該組成物は、例えば、ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、トコフェロール、トコトリエノール、フィトステロール、脂肪アルコール、多糖及びビオフラボノイドをはじめとする他の生物学的に活性な抽出物及び化合物を都合よく補充し得ることを理解するであろう。
【００３７】
本発明の別の態様では、収集及び乾燥の前に、成長中の藻類にセレン富化基質を与えることにより、組成物に用いられるスピルリナ・プラテンシスのセレン含有量を自然に増やすことができる。本態様で、乾燥バイオマスの１キログラムあたり約１００ｍｇのセレンを含有させることが都合よく達成される。セレン補給されたスピルリナを法律により販売できない特定の国では、セレンを配合時に直接に加えることができる。
【００３８】
不健康な一部のヒト及び動物、又は同様に、現地の食餌から１日にセレンを十分に摂取できない世界のセレン不足地域では、セレン摂取量が多いことが望ましいことが知られている。
【００３９】
本発明の別の態様では、体重１キログラムあたり約１０ｍｇ〜体重１キログラムあたり約１５０ｍｇの組成物の１日摂取量が、健康なヒト及び不健康なヒトの健全及び健康を効果的に支援することが開示される。
下記の実施例は本発明の例示であり、これに限定されるとして解釈してはならない。
【実施例１】
【００４０】
スピルリナ・プラテンシスを、セレン補給閉鎖生産系で培養した。成長した藻類を収集し、乾燥し、微粉末に粉砕した。セレン含有量は乾燥バイオマス１キログラムあたり１００ｍｇであった。
【表５】
【実施例２】
【００４１】
ヘマトコッカス・プルビアリスを閉鎖系で培養し、収集し、脱水し、細胞壁の破壊のために破砕し、乾燥した。当該乾燥バイオマスを圧力６５０ｂａｒ及び温度６０℃ので超臨界二酸化炭素で抽出した。表２に示す典型的な組成とともに１０％のアスタキサンチンを含有する暗赤色の抽出物を得た。
【表６】
【００４２】
アスタキサンチン富化Ｈ．ｐｌｕｖｉａｌｉｓ抽出物が９８％がアスタキサンチンの形態である１０．２％の総カロテノイド（抽出物１キログラムあたり１０グラムである）を含有したことが表２からわかる。抽出物はまた、合計で５％を超えるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）を含有し、１０％を超える多価不飽和脂肪酸（リノール酸（１８：２）及びリノレン酸（１８：３））を含有する。
【実施例３】
【００４３】
アスタキサンチン含有抽出物をゼラチン基質で乳化し、噴霧乾燥して、カプセル化された微細なビーズ製造物を作製した。その一般的な組成を表３に示す。
【表７】
アスタキサンチン抽出物ビーズが約２．５重量％のアスタキサンチンを含有したことが表３からわかる。本ビーズは、アスタキサンチンを錠剤化プロセスに送るために非常に好適な細かい顆粒形態である。当該ビーズは、そのアスタキサンチンを酸化性のプロセスに暴露せずに錠剤又はカプセルにするため、スピルリナ・プラテンシスの粉末と都合よく混合することができる。
【実施例４】
【００４４】
実施例３に記載したビーズの試料を、ポックスウイルスｖＧＫ５（Kotwalら、1989)に対する抗ウイルス活性及び毒性活性についてのインビトロスクリーニングに供した。
【００４５】
１００μＬにおける既知量ウイルスのポックスウイルスの保存物を、希釈した（１：１０及び１：４の）ビーズ物の５μＬ、１０μＬ又は２０μＬと約１分間混合した［処理ｂｄ−１］。その後、これを、６穴プレートのウエルを覆う１ｍＬの培地に加えた。混合後、１０−６又は１０−７の希釈物が得られるまで、１００μＬを隣のウエルに移し、この操作を繰り返した。その後、プレートを４８時間インキュベーションし、４８時間後、培地を除き、０．１％のクリスタルバイオレット溶液で染色した。ビーズ物を添加しない対照プレートもまた、処理しない場合のウイルスの正確なカウント数を得るために処理した［対照ｂｄ−２］。その後、比率阻害を、処理しない場合の計測総数で除し、１００を乗じた処理後の実際の計測数の比率として求めた。
【００４６】
ビーズをそのまま試験し、また、その不活性な賦形剤（アスタキサンチン抽出物を除くすべての成分）を別個に試験した。抗ポックスウイルス阻害を、３．０×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、２．４×１０６ＰＦＵ／ｍＬ及び２．７×１０６ＰＦＵ／ｍＬの濃度で試験した。５μＬ、１０μＬ及び２０μＬで、ビーズの１：１０の希釈物は８５％〜１００％の範囲で阻害を示した。１×１０６ＰＦＵ／ｍＬのポックスウイルス濃度への線形回帰調節は、１０７％（５μＬ）、９４％（１０μＬ）及び７２％（２０μＬ）の推定された阻害をもたらした。賦形剤についての等価回帰阻害推定値は、０％（６μＬ）、０％（１２μＬ）及び５％（２４μＬ）であった。賦形剤は、６μＬ／ｍＬ、１２μＬ／ｍＬ及び２４μＬ／ｍＬでさしたる阻害は示さなかった（０％〜６２％）。
【００４７】
１：１０のビーズ希釈物は５μＬのレベルでゼロの毒性を示したが、１０μＬ及び２０μＬの用量では高い毒性を維持した。賦形剤は、１：４で希釈したときでさえ、６μＬ、１２μＬ及び２４μＬの用量で毒性を示さなかった。
【００４８】
ビーズ物が、１：１０の希釈物の５μＬの用量で試験されたとき、ゼロの毒性を伴って、ポックスウイルスｖＧＫ５の１００％の阻害を示したことが明らかである。ビーズは２．５％のアスタキサンチンを含有するので、１：１０のビーズ希釈物の５μＬの用量は、１００μＬのポックスウイルス溶液におけるアスタキサンチンの０．０１２５μｌの用量、すなわち、１２５ｐｐｍの有効濃度を表す。この研究でのアスタキサンチンについてのＩＣ５０が１２５ｐｐｍよりも著しく低く、一方で、ＴＣ５０が１２５ｐｐｍよりも著しく大きいことは明白である。
【００４９】
【表８】
【実施例５】
【００５０】
カプセル化された抽出物ビーズを、乾式ミキサーで総重量の６．６７％％のレベルで、乾燥したセレン強化バイオマスと混合した。得られた混合物を、５００ｍｇの錠剤を形成するために、結合剤を加えずに錠剤化装置に通した。
【表９】
【００５１】
アスタキサンチンが０．１６７重量％で錠剤に含まれることが表５からわかる。セレン含有量は１ｋｇあたり９３ｍｇである。３グラムの配合物である６錠の好ましい１日摂取量により、５グラムのアスタキサンチン及び０．２７９ｍｇのセレンが与えられる。錠剤を水と混合したときは粉々に崩壊せずに優れた溶解特性を示した。錠剤は、ヒトによる経口摂取に非常に好適な形態であった。
【実施例６】
【００５２】
実施例５で調製された錠剤を有用性のヒト対象実証試験に適用した。天然物ＡＩＤＳクリニックの指導のもと、数人のヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）患者が、錠剤を１日あたり６錠の１日摂取量で一定期間摂取することを志願した。プロトコル、インフォームドコンセント及び安全性要因が独立して、摂取の開始に先立ち、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｒｅｖｉｅｗ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ，Ｉｎｃ．（認定された施設内検討委員会）により評価され、承認された。３３名の研究被験者（２６名の男性及び６名の女性）が、実証試験に参加することを志願した。３名の志願者が研究から脱落したが２名はサプリメントに関連しない理由のためで、１名はアレルギー反応の可能性があるためであった。さらに１７名が、実証試験に加わることに関心を示している。全参加者のその後の全体的な健康状態を評価する。
【００５３】
開示の組成物がＨＩＶ及びＡＩＤＳ障害集団に渇望されているものであることが実施例６から明らかである。開示の組成物が、不相応な困難もなく投与及び摂取に都合よいこともまた明白である。本発明は、スピルリナ・プラテンシスの乾燥バイオマスをアスタキサンチンとの組合せで含むヒトの栄養補助物と見なすことができる。そのアスタキサンチンは、好ましくは、ヘマトコッカス・プルビアリスのアスタキサンチン含有抽出物の形態である。抽出物は、例えば、二酸化炭素による超臨界流体抽出により製造することができる。組成物は、アスタキサンチンをスピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約０．０２５重量パーセント（０．０２５重量％）からスピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約２．５００重量パーセント（２．５００重量％）までの範囲で含むことができる。スピルリナ・プラテンシスの乾燥バイオマスは、藻類成長期間における供給基質のセレン補給によりセレン含有量を増やすことができる。例えば、スピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスのセレン含有量は１キログラムあたり約５０ｍｇから１キログラムあたり約１５０ｍｇまでであり得る。セレン補給されたスピルリナが法律により販売禁止されている特定の国では、セレンを配合時に直接に加えることができる。
【００５４】
アスタキサンチンは、デンプン、マルトデキストリン、ゼラチン、ポリマー、タンパク質、多糖及び糖等を含むカプセル化剤でマイクロカプセル化することができる。ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、トコフェロール、トコトリエノール、フィトステロール、脂肪アルコール、多糖及びビオフラボノイド等の他の生物学的に活性な抽出物及び化合物を組成物に加えることができる。組成物は、錠剤、カプセル及び粉末の形態で提供することができ、また、食品、飼料及び飲料物に配合することができる。
【００５５】
組成物は、健康なヒト又は不健康なヒトの健全及び健康を支援するための栄養補助物として使用することができる。組成物は、ヒト対象のＨＩＶ／ＡＩＤＳ等のウイルス感染症を改善するために使用することができる。具体的には、組成物を、体重１キログラムあたり約１０ｍｇの組成物から体重１キログラムあたり約１５０ｍｇの組成物までの１日量で、より好ましくは、体重１キログラムあたり約４５ｍｇの組成物の範囲の１日量でヒトに経口投与することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）の乾燥バイオマスを遊離体及び／又はエステル体のアスタキサンチンと組わ合せて含む、ヒト用の栄養補助組成物。
【請求項２】
アスタキサンチンが合成製造から得られる、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
アスタキサンチンが、ヘマトコッカス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属又は他の天然物のアスタキサンチン含有乾燥バイオマスに含まれる、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記アスタキサンチンが、ヘマトコッカス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属又は他の天然物のアスタキサンチン含有抽出物に含まれる、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記アスタキサンチン含有抽出物が二酸化炭素による超臨界流体抽出により製造される、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
前記アスタキサンチン及び／又は前記アスタキサンチン含有乾燥バイオマス及び／又は前記アスタキサンチン含有抽出物が、デンプン、マルトデキストリン、ゼラチン、ポリマー、タンパク質、多糖及び糖を含むカプセル化剤でマイクロカプセル化される、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記アスタキサンチンが典型的には、前記スピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約０．０２５重量パーセント（０．０２５重量％）から前記スピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約２．５００重量パーセント（２．５００重量％）を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
スピルリナ・プラテンシスの前記乾燥バイオマスのセレン含有量が、藻類成長期で供給物質のセレン補充により増加した、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
組成物のセレン含有量がセレンを直接添加することにより増加する、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
組成物のセレン含有量が組成物１キログラムあたり約５０ｍｇから組成物１キログラムあたり約１５０ｍｇである、請求項８記載の組成物。
【請求項１１】
例えば、ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、トコフェロール、トコトリエノール、フィトステロール、脂肪アルコール、多糖及びビオフラボノイドを含む他の生物学的に活性な抽出物及び化合物が加えられた、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
錠剤、カプセル、粉末、乳化物及びゲルの形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
食品及び飲料物に配合される、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
健康なヒト対象又は不健康なヒト対象の健全及び健康を、請求項１記載の組成物を前記対象に投与することにより支援する方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の組成物を前記対象に経口投与することにより、ヒト対象でのウイルス感染の影響を改善する方法。
【請求項１６】
ＨＩＶ及びＡＩＤＳに罹患したヒト対象の健全及び健康を、請求項１記載の組成物を前記対象に経口投与することにより促進する方法。
【請求項１７】
前記組成物が、体重１キログラムあたり組成物約１０ｍｇから体重１キログラムあたり組成物約１５０ｍｇの１日量で、優先的に、体重１キログラムあたり組成物約４５ｍｇの範囲の１日量で対象に経口投与される、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、体重１キログラムあたり組成物約１０ｍｇから体重１キログラムあたり組成物約１５０ｍｇの１日量で、優先的に、体重１キログラムあたり組成物約４５ｍｇの範囲の１日量で対象に経口投与される、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物が、体重１キログラムあたり組成物約１０ｍｇから体重１キログラムあたり組成物約１５０ｍｇの１日量で、優先的に、体重１キログラムあたり組成物約４５ｍｇの範囲の１日量で対象に経口投与される、請求項１６記載の方法。
【請求項１】
スピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）の乾燥バイオマスを遊離体及び／又はエステル体のアスタキサンチンと組わ合せて含む、ヒト用の栄養補助組成物。
【請求項２】
アスタキサンチンが合成製造から得られる、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
アスタキサンチンが、ヘマトコッカス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属又は他の天然物のアスタキサンチン含有乾燥バイオマスに含まれる、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記アスタキサンチンが、ヘマトコッカス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属又は他の天然物のアスタキサンチン含有抽出物に含まれる、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記アスタキサンチン含有抽出物が二酸化炭素による超臨界流体抽出により製造される、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
前記アスタキサンチン及び／又は前記アスタキサンチン含有乾燥バイオマス及び／又は前記アスタキサンチン含有抽出物が、デンプン、マルトデキストリン、ゼラチン、ポリマー、タンパク質、多糖及び糖を含むカプセル化剤でマイクロカプセル化される、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記アスタキサンチンが典型的には、前記スピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約０．０２５重量パーセント（０．０２５重量％）から前記スピルリナ・プラテンシス乾燥バイオマスの約２．５００重量パーセント（２．５００重量％）を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
スピルリナ・プラテンシスの前記乾燥バイオマスのセレン含有量が、藻類成長期で供給物質のセレン補充により増加した、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
組成物のセレン含有量がセレンを直接添加することにより増加する、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
組成物のセレン含有量が組成物１キログラムあたり約５０ｍｇから組成物１キログラムあたり約１５０ｍｇである、請求項８記載の組成物。
【請求項１１】
例えば、ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、トコフェロール、トコトリエノール、フィトステロール、脂肪アルコール、多糖及びビオフラボノイドを含む他の生物学的に活性な抽出物及び化合物が加えられた、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
錠剤、カプセル、粉末、乳化物及びゲルの形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
食品及び飲料物に配合される、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
健康なヒト対象又は不健康なヒト対象の健全及び健康を、請求項１記載の組成物を前記対象に投与することにより支援する方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の組成物を前記対象に経口投与することにより、ヒト対象でのウイルス感染の影響を改善する方法。
【請求項１６】
ＨＩＶ及びＡＩＤＳに罹患したヒト対象の健全及び健康を、請求項１記載の組成物を前記対象に経口投与することにより促進する方法。
【請求項１７】
前記組成物が、体重１キログラムあたり組成物約１０ｍｇから体重１キログラムあたり組成物約１５０ｍｇの１日量で、優先的に、体重１キログラムあたり組成物約４５ｍｇの範囲の１日量で対象に経口投与される、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、体重１キログラムあたり組成物約１０ｍｇから体重１キログラムあたり組成物約１５０ｍｇの１日量で、優先的に、体重１キログラムあたり組成物約４５ｍｇの範囲の１日量で対象に経口投与される、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物が、体重１キログラムあたり組成物約１０ｍｇから体重１キログラムあたり組成物約１５０ｍｇの１日量で、優先的に、体重１キログラムあたり組成物約４５ｍｇの範囲の１日量で対象に経口投与される、請求項１６記載の方法。
【公表番号】特表２００９−５１７４８２（Ｐ２００９−５１７４８２Ａ）
【公表日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４３４３２（Ｐ２００８−５４３４３２）
【出願日】平成１８年１１月２８日（２００６．１１．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４５７３５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６２２７４
【国際公開日】平成１９年５月３１日（２００７．５．３１）
【出願人】（５０８１５９００８）ユーエス・ニュートラシューティカルズ・エルエルシー・ディービーエイ・ヴァレンサ・インターナショナル (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１１月２８日（２００６．１１．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４５７３５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６２２７４
【国際公開日】平成１９年５月３１日（２００７．５．３１）
【出願人】（５０８１５９００８）ユーエス・ニュートラシューティカルズ・エルエルシー・ディービーエイ・ヴァレンサ・インターナショナル (2)
【Ｆターム（参考）】
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