血球細胞分析装置、血球細胞分析方法及び血球細胞分析システム
【課題】薬剤の効果や副作用を短時間で評価することができる血球細胞分析装置、血球細胞分析方法及び血球細胞分析システムを提供する。
【解決手段】測定部３において、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液２の複素誘電率スペクトルを測定する。そして、検出部４において、測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液２の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する。更に、必要に応じて、その結果や警告を表示部８に表示する。
【解決手段】測定部３において、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液２の複素誘電率スペクトルを測定する。そして、検出部４において、測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液２の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する。更に、必要に応じて、その結果や警告を表示部８に表示する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球や白血球などの各種血球細胞の状態を分析する血球細胞分析装置、血球細胞分析方法及び血球細胞分析システムに関する。より詳しくは、誘電分光法を利用した血球細胞の分析技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
効果的な治療を行うためには、患者に対する薬剤の効果や副作用を的確に把握することが重要である。例えば、骨髄移植治療などの後に投与される免疫抑制剤は、臓器移植に伴う合併症の１つである移植片対宿主病（graft versus host disease：ＧＶＤＨ）を抑制する働きがあるが、その一方で、血栓性微小血管症（Thrombotic microangiopathy：ＴＭＡ）などの副作用を引き起こすことが知られている。
【０００３】
この免疫抑制剤のように、血中濃度における治療域と毒性域が近接し、いわゆる安全域が狭い薬剤に対しては、血中濃度測定による正確な用量調節（Therapeutic Drug Monitoring：ＴＤＭ）が必要である。これは、免疫抑制剤に限らず、高血圧治療薬及び心臓病治療薬など、幅広い薬剤においても同様である。
【０００４】
一般に、服薬中の患者の状態は、臨床所見や各種臨床検査による所見などから総合的に判断されるが、特に正確なＴＤＭが必要な薬剤に関しては、定期的に血球の薬剤濃度を測定している。また、従来、血中濃度データに基づいて、薬剤の摂取用量を調節するための解析又は支援システムも提案されている（特許文献１，２参照）。
【０００５】
一方、血中の薬剤濃度の測定には、薬剤の種類や特性などに応じて種々の方法が提案されており、例えば、代表的な免疫抑制剤であるシクロスポリンＡの場合は、蛍光偏光免疫測定法などの分析方法によって、末梢血中の濃度が測定されている。また、薬剤濃度の測定には一般に血漿検体が用いられているが、シクロスポリンＡの測定では、全血検体が用いられており、前処理溶液で溶血してから分析を行っている。これは、シクロスポリンＡが脂溶性で、脂質二重層で構成される細胞膜に吸収されやすく、その大部分が細胞膜中、特に数の多い赤血球膜中に偏在していると考えられるからである。
【０００６】
更に、血球細胞の誘電特性は、その大きさ、形状、細胞膜の状態及び密度などによって異なり、従来、誘電分光法により、血球細胞の定性・定量分析又は物性値の測定を行う方法も提案されている（特許文献３，４参照）。これら特許文献３，４に記載の方法によれば、血球細胞を破壊せずに、その状態を分析することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平７−１２４１２５号公報
【特許文献２】特開２００７−２９６２１４号公報
【特許文献３】特開２００８−２１５９０１号公報
【特許文献４】特開２００９−４２１４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
例えば、シクロスポリンＡは、主としてＴ細胞（ヘルパーＴ細胞）によるインターロイキン−２（ＩＬ−２）などのサイトカイン産生を阻害することにより、強力な免疫抑制作用を示すことが知られている。このため、シクロスポリンＡについて、薬効を評価するのであれば、本来は、Ｔ細胞に実効的に作用する濃度を測定すべきであり、また、ＴＭＡなどの副作用を評価するのであれば、赤血球に実効的に作用する濃度を測定すべきである。
【０００９】
しかしながら、これらの値は、標的とする血液細胞成分を分離抽出し、更にそれを溶解した上で、抗体試薬を用いた蛍光偏光免疫測定法などの分析方法で測定しなければならず、煩雑な作業を多忙極める臨床現場で行うことは困難である。このように、シクロスポリンＡなどの一部の薬剤に関しては、入院患者に対してさえ容易ではないＴＤＭを、医療関係者が常時管理することができない通院患者に適用することは、なおさら困難である。
【００１０】
即ち、血中の薬剤濃度から薬物動態を分析する従来の手法は、作業が繁雑で、結果が出るまでに時間を要するため、医薬品の研究開発には適用できても、臨床検査、特に通院患者への適用は困難であるという問題点がある。
【００１１】
そこで、本発明は、薬剤の効果や副作用を短時間で評価することができる血球細胞分析装置、血球細胞分析方法及び血球細胞分析システムを提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明に係る血球細胞分析装置は、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定部と、この測定部で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出部と、を有するものである。
本発明においては、血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定し、その値から求めた誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、従来の方法に比べて、手間や時間がかからない。このため、薬剤の効果や副作用を、容易にかつ短時間で評価することが可能となる。
この血球分析装置では、誘電変数として誘電緩和強度及び／又は誘電緩和周波数を算出してもよく、また、電気的物性値として、膜キャパシタンス及び／又は細胞質導電率を算出してもよい。
また、前述した測定部及び検出部に加えて、基準となる誘電変数及び／又は電気的物性値が記憶された記憶部を有していてもよく、その場合、検出部において、記憶部に記憶された値と比較して、血球細胞の状態変化の有無又は程度を検出することができる。
更に、この装置には、採取血液から測定用の懸濁液を調整する前処理部を設けてもよい。
更にまた、検出結果を表示する表示部を設け、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値が、設定された範囲から外れているときに、前記表示部に警告を表示することもできる。
更にまた、この装置には、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値に基づいて、適正な薬剤投与量を算出する解析部を設けてもよい。
更にまた、測定部に、懸濁液が通流する流路の一部に血球細胞が個別に通過可能な狭窄部を形成した流路デバイスを設け、この狭窄部において一の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定することもできる。
【００１３】
本発明に係る血球細胞分析方法は、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する工程と、測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する工程と、を有する。
本発明においては、血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定し、その値から求めた誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、薬剤の効果や副作用を、手間をかけずに短時間で評価することが可能である。
この分析方法では、懸濁液に、検出対象の血球細胞以外の血球細胞が含まれていてもよい。
また、検出対象の血球細胞は、例えば赤血球又は白血球である。
【００１４】
本発明に係る血球細胞分析システムは、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定装置と、この測定装置で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出装置と、を有するものである。
本発明においては、血球細胞を含む懸濁液の誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、入院患者、通院患者にかかわらず、更に在宅患者であっても、薬剤の効果や副作用を、容易に評価することが可能となる。
この分析システムでは、測定装置と検出装置とが通信ネットワークを介して接続されていてもよい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定し、その値から求めた誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、薬剤の効果や副作用を短時間で評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の構成を示すブロック図である。
【図２】図１に示す測定部３の構成を模式的に示す図である。
【図３】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の動作例を示すフローチャート図である。
【図４】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の他の動作例を示すフローチャート図である。
【図５】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の他の動作例を示すフローチャート図である。
【図６】（ａ）は本発明の第１の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図であり、（ｂ）は第２の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図である。
【図７】本発明の第２の実施形態に係る血球細胞分析装置で使用する流路デバイスの構成例を示す断面図である。
【図８】横軸に薬剤投与開始後の経過日数をとり、縦軸に誘電緩和強度Δεと誘電緩和周波数ｆをとって、面積抑制剤服用患者から採取した赤血球の誘電変数の変化を示すグラフ図である。
【図９】横軸に単位面積あたりの膜キャパシタンスＣＭをとり、縦軸に細胞質の導電率σＣをとって、健常者及び免疫抑制剤服用患者の赤血球構成相の電気的物性値を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を実施するための形態について、添付の図面を参照して詳細に説明する。なお、本発明は、以下に示す各実施形態に限定されるものではない。また、説明は、以下の順序で行う。
１．第１の実施の形態
（血球細胞分析装置により複数の血球細胞を含む懸濁液全体を評価する例）
２．第２の実施の形態
（血球細胞分析装置により個々の血球細胞を評価する例）
３．第３の実施の形態
（誘電分光法により血球細胞の状態を分析する血球細胞分析システムの例）
【００１８】
＜１．第１の実施の形態＞
［血球細胞分析装置の全体構成］
本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置は、誘電分光法により、懸濁液に含まれる血球細胞の状態変化を検出し、創薬プロセスや臨床現場において、薬剤の効果や副作用について評価する際に使用されるものである。図１は本実施形態の血球細胞分析装置の構成を示すブロック図である。
【００１９】
具体的には、図１に示すように、本実施形態の血球細胞分析装置１は、懸濁液２の複素誘電率スペクトルを測定する測定部３と、測定結果から血球細胞の状態変化を検出する検出部４とを備えている。また、血球細胞分析装置１には、測定用の懸濁液２を調整する前処理部５、基準となる誘電変数や電気的物性値が記憶された記憶部６、適正な薬剤投与量を算出する解析部７、検出及び／又は解析結果を表示する表示部８などが設けられていてもよい。
【００２０】
［懸濁液２について］
本実施形態の血球細胞分析装置１では、少なくとも検出対象の血球細胞を含有する懸濁液２を使用して測定を行う。ここで、検出対象とする血球細胞は、薬剤投与に伴い、その薬効や副作用によって状態が変化するものであればよく、例えば赤血球、白血球及び血小板などが挙げられる。
【００２１】
また、懸濁液２は、検出対象の血球細胞のみを含有していてもよいが、検出対象でない血球細胞が含まれていてもよい。更に、懸濁液２に含まれる血球細胞は、ヒトのものに限定されるものではなく、本実施形態の血球細胞分析装置１では、ラット、マウス及びウサギなどの動物の血球細胞についても分析可能である。
【００２２】
［測定部３の構成］
図２は図１に示す測定部３の構成を模式的に示す図である。図２に示すように、測定部３は、一対の平行平板電極３２ａ，３２ｂを備えた測定用セル３１を備えており、検出対象の血球細胞２０を含む懸濁液２は、測定用セル３１内に充填される。また、測定用セル３１の電極３２ａ，３２ｂは、それぞれ伝送線３３を介して測定器３４に接続されており、この測定器３４により懸濁液２の複素誘電率スペクトルが測定される。
【００２３】
（測定用セル３１）
測定用セル３１は、懸濁液２の複素誘電率スペクトル測定に影響しないものであればよく、例えばアクリル系樹脂やポリエーテルサルフォン樹脂などにより形成することができる。また、電極３２ａ，３２ｂの大きさ及び間隔も特に限定されるものではなく、測定周波数や印加電圧などに応じて適宜設定することができる。更に、測定用セル３１やその周辺部には、測定用セル３１に懸濁液２を導入するための機構、測定後の懸濁液２を排出するための機構、測定の前後に測定用セル３１内を溶媒などで洗浄するための機構など、測定に付随する作業に関する種々の機構を設けることもできる。
【００２４】
（測定器３４）
測定器３４は、測定対象の周波数範囲において、複素誘電率測定を実施できるものであればよく、例えばインピーダンスアナライザー、ネットワークアナライザー及び時間領域反射オシロスコープなどを使用することができる。
【００２５】
［検出部４の構成］
検出部４では、電子計算機などにより、測定部３で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液２の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞２０の状態変化を検出する。具体的には、先ず、複素誘電率スペクトルから、誘電変数である誘電緩和強度や誘電緩和周波数などを、また、電気的物性値である膜キャパシタンスや細胞質導電率などを算出する。
【００２６】
そして、算出した誘電変数及び／又は電気的物性値と、過去に測定した誘電変数や電気的物性値、或いは後述する記憶部６に記憶された基準値とを比較して、薬剤投与に伴う血球細胞２０の状態変化を検出する。例えば、免疫抑制剤の場合、赤血球の誘電緩和周波数の低下や誘電緩和強度の上昇により、副作用についての評価を行うことができる。
【００２７】
この検出部４において、検出された結果は、後述する表示部８に表示される。また、検出部４で検出した値が予め設定された範囲から外れていた場合は、表示部８に警告が表示されるようにしてもよい。具体的には、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値が、設定範囲から外れていたときに、表示部８に警告を表示する。これにより、臨床現場における服薬用量管理が容易になる。
【００２８】
［前処理部５］
前述した測定部３で測定する懸濁液２は、検体毎に作業者が調整してもよいが、血球細胞分析装置１に、患者などから採取した血液検体に対して、必要に応じて、分離、抽出及び希釈などの前処理を自動で行う前処理部５を設けてもよい。その場合、調整された懸濁液２を、測定部３の測定セル３１内に自動で注入する機構を設けることにより、人手を介さずに、全ての作業を行うことができるため、分析時間を短縮できると共に、作業効率を向上させることができる。
【００２９】
［記憶部６］
記憶部６は、基準となる誘電変数及び／又は電気的物性値などが記憶されたデータベースであり、例えば、健常者で測定した値や同じ患者について過去に測定した値、或いはシミュレーションなどにより求めた値が記憶されている。そして、検出部４において、これらの値と測定部３で測定された値とを比較することにより、血球細胞２０の状態変化の有無や程度を、容易に検出することができる。
【００３０】
［解析部７］
解析部７は、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値に基づいて、適正な薬剤投与量を算出するものである。そして、その算出結果は、検出部４における検出結果と共に、表示部８に表示される。これにより、臨床現場における服薬用量管理を効率化することができる。
【００３１】
［表示部８］
表示部８は、検出部４や解析部７と接続されている。そして、この表示部８には、例えば、検出部４で算出した誘電変数や電気的物性値、検出部４で検出した血球細胞の状態、検出部４での検出結果が設定範囲から外れていたときの警告、解析部７で算出した適正な薬剤投与量などが表示される。
【００３２】
［血球細胞分析装置１の動作］
次に、前述の如く構成された血球細胞分析装置１の動作、即ち、血球細胞分析装置１を使用して血球細胞に対する薬剤の影響を評価する方法について説明する。図３は本実施形態の血球細胞分析装置１の動作例を示すフローチャート図である。
【００３３】
［ステップＳ１：懸濁液２の調整］
図３に示すように、本実施形態の血球細胞分析装置１では、先ず、前処理部５において、血液検体に、分離、抽出、希釈などの処理を施し、測定に使用する懸濁液２を調整する。その際用いる血液の採取方法は、特に限定されるものではなく、公知の方法を適用することができる。また、必要に応じて、調整された懸濁液２に、適切な濃度で薬剤を添加してもよい。
【００３４】
血液に含まれる赤血球の数は、他の成分よりもはるかに多く、健常なヒトの場合は白血球の数百倍から数千倍含まれている。このため、薬剤が赤血球に与える影響を評価する場合は、白血球の数は無視することができ、懸濁液２として、採取した血液（全血）を、適当な溶媒により測定に適した濃度にまで希釈した溶液を使用することができる。更に、当然ながら、厳密を期して、生化学的操作により、血液から白血球や血小板などの測定対象外の成分を除去したものを使用してもよい。
【００３５】
ここで、血液などを希釈する際に使用する溶媒は、赤血球などの検出対象の血球細胞と等張、即ち、血漿成分と同じ塩濃度を有し、検出対象の血球細胞の性状に影響を与えないと考えられる緩衝溶液を使用することができる。具体的には、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（Phosphate Buffered Saline：ＰＢＳ）などを使用することができる。
【００３６】
一方、薬剤が白血球に与える影響を評価する場合は、血液臨床検査法で一般に利用されている方法によって、全血から赤血球や血小板などの白血球以外の成分を除去し、適当な溶媒により測定に適した濃度にまで希釈した溶液を使用することができる。例えば、自動血球計測検査においては、全血に溶血剤を加えて赤血球を溶血させ、その溶液中に残存する有核細胞を数えて白血球数としている。
【００３７】
また、薬剤が、単球、好酸球、好中球、好塩基球及びリンパ球などの白血球中の特定成分に与える影響を評価する場合は、適切な生化学的操作によって更に分離操作を行う。特定成分の分離抽出操作は、公知の方法を適用することができ、例えば、特定の白血球成分の表面に表出する抗原と、特異的に結合する抗体で被覆された磁気ビーズを用いると、その成分のみを分離抽出することができる。
【００３８】
更に、図２に示すような平行平板キャパシタ型セルで測定する場合、血球細胞の体積分率は０．５〜２５％であることが望ましい。血球細胞の体積分率が２５％を超えると、細胞間の相互作用の影響で、データ解析が複雑になるからである。一方、血球細胞の体積分率が０．５％未満の場合、誘電緩和の振幅が小さくなり、測定データの信頼性が低下することがある。
【００３９】
［ステップＳ２：複素誘電率スペクトル測定］
次に、測定部３において、複数の血球細胞２０を含む懸濁液２全体の複素誘電率を、印加する交流電圧の周波数の関数として測定する。具体的には、所定間隔を空けて対向配置された平行平板電極３１ａ，３２ｂを備える測定用セル３１に、懸濁液２を充填する。そして、伝送線３３を介して電極３１ａ，３２ｂと電気的導通が確保された精密インピーダンス測定器（測定器３４）により、予め設定した周波数範囲にわたり、複素インピーダンス測定を行う。
【００４０】
ここで、複素インピーダンス測定を行う周波数範囲は、検出対象の血球細胞や薬剤の種類などに応じて適宜設定することができるが、観測対象となる誘電緩和の緩和周波数を基準とし、その前後それぞれ２桁程度を含むことが望ましい。例えば、免疫抑制剤の赤血球に対する影響を評価する場合には、赤血球懸濁液の緩和周波数が１ＭＨｚ程度であるため、１０ｋＨｚ〜１００ＭＨｚの範囲で測定すればよい。
【００４１】
また、測定した複素インピーダンスは、公知の方法により複素誘電率に変換することができる。その際、測定系の配線や測定用セル３１に起因するインダクタンスや浮遊容量についての補正、電極分極の補正を行う必要があるが、これらについても、公知の方法を適用することができる（例えば、日本化学会著、「実験化学講座９ 電気磁気」、丸善、１９９１年発行 参照。）。
【００４２】
［ステップＳ３：検出用データの算出］
次に、検出部４において、複素誘電率スペクトルから検出用データＦｎ（ｔ）を算出する。なお、ここでいう検出用データにおける「Ｆｎ」は誘電変数又は電気的物性値を示し、「ｔ」は測定時刻である。
【００４３】
（誘電変数の算出）
懸濁液２のように、細胞を含む溶液の複素誘電率の周波数依存性（周波数分散）、即ち、複素誘電率スペクトルは、おおよそ１ＭＨｚ〜数十ＭＨｚの領域に、含有する細胞の性状に応じて特徴的な変化、即ち、誘電緩和を示すことが知られている。このような細胞溶液の複素誘電率スペクトルは、下記数式（１）に示す緩和関数の和として表すことができる。
【００４４】
【数１】
【００４５】
なお、上記数式１におけるａは、複数の誘電緩和がある場合に、それらを区別するためのものであり、ａ番目の誘電緩和における緩和強度がΔεａ、緩和時間がτａである。この緩和時間τａと、緩和周波数ｆａとの関係は、下記数式（２）で表される。また、βａは、緩和の広がりを示すＣｏｌｅ−Ｃｏｌｅパラメータで、スペクトルの形状を特徴付ける変数である。更に、ε∞は高周波極限での比誘電率であり、ωは角周波数であり、ｉ２＝−１である。
【００４６】
【数２】
【００４７】
そして、全ての誘電緩和についての緩和強度Δε、緩和周波数ｆ、Ｃｏｌｅ−Ｃｏｌｅパラメータβを「誘電変数」といい、本実施形態の血球細胞分析装置１においては、特に緩和強度Δε及び緩和周波数ｆを算出する。具体的には、先ず、周波数点毎に仮定した誘電変数で表現される誘電緩和関数の値と実測値との差を求める。そして、各周波数点における差を二乗した値を測定周波数全体で足し合わせて、その総和が最小になるように、誘電変数を最適化することにより、血球細胞２０を含む懸濁液２の誘電スペクトルを特徴付ける誘電変数を決定する。
【００４８】
（電気的物性値の算出）
細胞溶液の複素誘電率スペクトルは、細胞を取り巻く溶媒の誘電率や導電率にも依存し、純粋に細胞を構成する相の電気的物性値のみを反映したものではない。しかしながら、公知の解析手法を利用することにより、この複素誘電率スペクトルから細胞を構成する相（例えば、細胞膜、細胞質、核膜、核質など）の電気的物性値、即ち、誘電率及び導電率を得ることができる。
【００４９】
例えば、細胞膜と細胞質のみから形成されている球形細胞などの場合は、解析式を用いることにより、複素誘電率スペクトルから、細胞膜及び細胞質それぞれの電気的物性値を直接求めることができる（花井哲也著、「不均質構造と誘電率−物質を壊さずに内部構造を探る」、吉岡書店、２０００年発行 参照）。
【００５０】
一方、複雑な構造を有する細胞については、数値的シミュレーションを利用することにより、膜キャパシタンスＣＭや細胞質導電率σＣを求めることができる（特許文献４参照）。具体的には、測定対象の細胞の形状をモデル化し、その細胞にＡＣ電場が印可されたときの複素誘電率応答を数値解析により求める。その結果に基づいて、膜キャパシタンスＣＭ及び細胞質導電率σＣの値を変化させながら数値計算して、誘電スペクトルを算出する。
【００５１】
次に、算出した誘電スペクトルを誘電緩和式に回帰させて、誘電緩和強度Δε及び緩和時間τを求める。更に、（Δε，τ）の（ＣＭ，σＣ）への依存性を求め、測定対象の細胞の形状に応じた回帰式を作成する。そして、細胞の誘電スペクトルを実測し、その値と回帰式とを比較することで、測定対象の細胞の膜キャパシタンスＣＭ，ｅｘｐ及び細胞質導電率σＣ，ｅｘｐを求める。
【００５２】
［ステップＳ４：記憶部６のデータと照合］
次に、検出部４において、算出した検出用データＦｎ（ｔ）と、例えば記憶部６に記憶された健常者のデータとを照合し、血球細胞の状態変化を検出する。具体的には、検出用データＦｎ（ｔ）が、予め設定された健常域の範囲内であるか、否かを判定する。その際、検出用データＦｎ（ｔ）としては、誘電変数及び電気的物性値のうち１又は２以上の値を使用することができる。
【００５３】
［ステップＳ５，Ｓ６：検出結果の表示］
ステップＳ４における照合の結果、検出用データＦｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲内である場合は、表示部８に問題ない旨表示する（ステップＳ５）。一方、検出用データＦｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲から外れていた場合は、表示部８に警告を表示する（ステップＳ６）。
【００５４】
［他の動作例］
なお、図３に示す動作例では、検出部４で算出した検出用データＦｎ（ｔ）そのものを基に、血球細胞の状態変化を検出しているが、本発明はこれに限定されるものではなく、血球細胞の状態変化の度合いに基づき検出することもできる。図４及び図５は本実施形態の血球細胞分析装置１における他の動作例を示すフローチャート図である。
【００５５】
例えば、図４に示すように、薬剤投与前又は薬剤が表れてないときに測定した比較用データＦｎ（０）と、検出用データＦｎ（ｔ）とから算出した増減幅Ｇｎ（ｔ）を基に、血球細胞の状態変化を検出することもできる。この動作例では、ステップＳ１３において算出した検出用データＦｎ（ｔ）を、例えば測定日や付加情報データなどと共に、記憶部６に記憶し、保存する（ステップＳ１４）。このように、測定日や付加情報データを併せて保存しておくと、担当医師などが、血球細胞分析装置１での検出結果と、血液検査データやその他臨床所見と組み合わせて判定を行う場合に、便利である。
【００５６】
次に、検出部４において、下記数式（３）に基づき、予め記憶部６に記憶しておいた比較用データＦｎ（０）と、ステップＳ１３で算出した検出用データＦｎ（ｔ）から、増減幅Ｇｎ（ｔ）を算出する（ステップＳ１５）。その際、検出用データＦｎ（ｔ）及び比較用データＦｎ（０）としては、誘電変数及び電気的物性値のうち１又は２以上の値を使用することができる。なお、「ｎ（＝１，２，・・・）」はそのための識別子である。
【００５７】
【数３】
【００５８】
そして、算出した増減幅Ｇｎ（ｔ）と、例えば記憶部６に記憶された基準値Ｇｎとを照合し、血球細胞の状態変化を検出する。具体的には、増減幅Ｇｎ（ｔ）が、予め設定された健常域の範囲内であるか、否かを判定する。その結果、増減幅Ｇｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲内である場合は、表示部８に問題ない旨表示し（ステップＳ１７）、増減幅Ｇｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲から外れていた場合は、表示部８に警告を表示する（ステップＳ１８）。
【００５９】
この動作例は、投薬前から、誘電変数や電気的物性値が健常域から外れている患者に、特に有効な方法である。なお、図４に示す動作例において、ステップＳ１１〜Ｓ１３は前述したステップＳ１〜Ｓ３と同様であるため、具体的説明は省略する。
【００６０】
また、図５に示すように、検出用データＦｎ（ｔ）の時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）を基に、血球細胞の状態変化を検出することもできる。この動作例でも、図４に示す動作例同様、ステップＳ２３において算出した検出用データＦｎ（ｔ）を、例えば測定日及び付加情報データなどと共に、記憶部６に記憶し、保存する（ステップＳ２４）。
【００６１】
次に、検出部４において、下記数式（４）に基づき、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）を算出する（ステップＳ２５）。なお、下記数式（４）におけるΔｔは、前回又は数回前の測定時刻からの経過時間であり、Ｆｎ（ｔ−Δｔ）は、前回又は数回前の測定値である。また、その際、検出用データＦｎ（ｔ）及び過去の測定値Δｔとしては、誘電変数及び電気的物性値のうち１又は２以上の値を使用することができる。
【００６２】
【数４】
【００６３】
そして、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）と、例えば記憶部６に記憶された基準値Ｆ´ｎとを照合し、血球細胞の状態変化を検出する。具体的には、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）が、予め設定された健常域の範囲内であるか、否かを判定する。その結果、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲内である場合は、表示部８に問題ない旨表示し（ステップＳ２７）、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲から外れていた場合は、表示部８に警告を表示する（ステップＳ２８）。
【００６４】
この動作例では、投薬量に対する応答を検知することができるため、担当医などが、容易に次の投薬量を見積もることができる。また、検出値が健常域の範囲内の場合でも、急変の予兆を検知することが可能となる。なお、図５に示す動作例において、ステップＳ２１〜Ｓ２３は前述したステップＳ１〜Ｓ３と同様であるため、具体的説明は省略する。
【００６５】
［薬剤投与量の算出］
更に、本実施形態の血球細胞分析装置１では、解析部８において適正な薬剤投与量を算出し、その結果を表示部８に表示することもできる。具体的には、前述した検出用データＦｎ（ｔ）、増減幅Ｇｎ（ｔ）又は時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）の値や、記憶部６に記憶された基準値などに基づき、血球細胞が適正状態になる薬剤投与量を算出する。
【００６６】
例えば、各Ｆｎ（ｔ）が健常域の範囲内であった場合は、当初医師により決定された標準の投与量を採用し、提示する。一方、各Ｆｎ（ｔ）が健常域の範囲から外れていた患者の場合は、各Ｇｎ（ｔ）を用いて、個別に病状変化がないか確認する。その結果、特に問題がなければ当初医師により決定された標準の投与量を選択し、提示する。
【００６７】
また、病状変化があるが、その程度が軽微な投薬量の減少で対応可能である場合は、各Ｆｎ(ｔ)又は各Ｇｎ（ｔ）の余裕値と、Ｆ´ｎ（ｔ）とから予測される投与後の各Ｆｎ（ｔ）又はＧｎ（ｔ）に基づいて、投薬量の減量又は増加量を算出し、提示する。このように、血球細胞の状態及びその変化に関する各種データから総合的に判定することで、適正な薬剤投与量を提案することができる。
【００６８】
本実施形態の血球細胞分析装置１では、血球細胞２０を含む懸濁液２の誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、薬剤の効果や副作用を、容易にかつ短時間で評価することができる。また、この血球細胞分析装置１では、懸濁液２全体の複素誘電率スペクトルを測定し、その平均的情報により、検出対象の血球細胞２０の状態変化を検出しているため、懸濁液２に検出対象外の血球細胞が含まれていても分析が可能である。その結果、検出対象外の血球細胞を分離・除去する必要がなく、作業効率を向上させることができる。
【００６９】
更に、本実施形態の血球細胞分析装置１は、高血圧治療薬、心臓病治療薬及び免疫抑制剤などの特定の薬剤を、長期間服用している患者が、正しく服用し、かつしかるべき薬効が得られているかを、モニタリングすることも可能である。例えば、誘電変数又は電気的物性値の値が特定範囲（健常域）に収まっているときは、別の分析手段で調べられたこの薬剤の体内濃度が適正であるか、臨床的見地から望ましい薬効が得られていると、患者への応用に先立った臨床試験によって明らかになっているとする。
【００７０】
このような場合、測定値から算出された値が正常域を外れたときに、血球細胞分析装置１が警告を発することで、担当の医師などがより詳細に患者の状態を調べ、必要に応じて適正な服薬指導などを行うことができる。
【００７１】
更にまた、血球細胞分析装置１では、高血圧治療薬、心臓病治療薬及び免疫抑制剤などの特定の薬剤を、長期間服用している患者が、重篤な副作用に陥らないように、モニタリングすることもできる。例えば、誘電変数又は電気的物性値の値が特定範囲（健常域）から外れると、臨床的見地から重篤な副作用が発生する可能性が高いことが、患者への応用に先立った臨床試験によって明らかになっているとする。
【００７２】
このような場合、測定値から算出された値が正常域を外れたときに、血球細胞分析装置１が警告を発することで、担当の医師などがより詳細に患者の状態を調べ、必要に応じて服薬の中止、服薬量の減量、その他副作用に関する治療を行うことができる。
【００７３】
＜２．第２の実施の形態＞
［血球細胞分析装置の全体構成］
図６（ａ）は本発明の第１の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図であり、図６（ｂ）は第２の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図である。図６（ａ）に示すように、第１の実施形態の血球細胞分析装置では、溶媒２２中に複数の血球細胞２０，２１が分散されている懸濁液２について評価しているが、本発明はこれに限定されるものではなく、血球細胞２０を個別に評価することもできる。
【００７４】
前述した第１の実施形態の血球細胞分析装置では、検出対象外の血球細胞２１と検出対象の血球細胞２０が混在している懸濁液２について複素誘電率スペクトルを測定し、その平均的情報により検出対象の血球細胞２０の状態を評価している。これに対して、第２の実施形態の血球細胞分析装置では、図６（ｂ）に示すように、溶媒２２に検出対象の血球細胞２０が１個含まれている状態で、複素誘電率スペクトル測定を行う。
【００７５】
即ち、本発明の第２の実施形態に係る血球細胞分析装置は、測定部に、懸濁液が通流する流路の一部に血球細胞が個別に通過可能な狭窄部が設けられた流路デバイスを備えている。そして、この狭窄部において、血球細胞を１個だけ含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定することができるようになっている。
【００７６】
［流路デバイス］
図７は本実施形態の血球細胞分析装置で使用する流路デバイスの構成例を示す断面図である。図７に示すように、本実施形態の血球細胞分析装置で使用する流路デバイス４０は、例えば、厚さ方向の通流位置が相互に異なる２本の流路４７ａ，４７ｂを、狭窄部４２ａを介して連通する構成とすることができる。
【００７７】
具体的には、ポリイミドなどからなるカバー層４１と、中間層４２とが、所定厚さの接着層４４を介して積層されており、更に接着層４４の他方の面には、所定厚さの接着層４５を介してカバー層４３が積層されている。これら接着層４４，４５は、中間層４２の一部にのみ貼着されており、接着層４４，４５が貼着されていない空隙部分には、懸濁液が通流する流路４７ａ，４７ｂが形成されている。
【００７８】
また、中間層４２とカバー層４３との間に形成され流路４７ａと、中間層４２とカバー層４１との間に形成された流路４７ｂとは、中間層４２に形成された狭窄部４２ａを介して連通している。この狭窄部４２ａは、懸濁液に含まれる血球細胞が、１個ずつ通過する大きさであればよい。更に、中間層４２の流路４７ａ側の面には電極４６ａが設けられており、中間層４２の流路４７ｂ側の面には電極４６ｂが設けられている。そして、これら電極４６ａ，４６ｂ間に所定の電圧を印加することにより、狭窄部４２ａを通過する懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定することができる。
【００７９】
この流路デバイス４０を使用して、複素誘電率スペクトル測定を行うことにより、個々の血球細胞の状態を評価することが可能となる。また、この流路デバイス４０を使用することにより、白血球などのように血中濃度が低い細胞であっても、分離や抽出処理を行わずに分析することも可能となる。
【００８０】
なお、本実施形態の血球細胞分析装置に使用される流路デバイスは、図７に示す構成のものに限定されるものではなく、流路の一部に、血球細胞が１個ずつ通流する大きさの狭窄部が形成されていればよい。また、本実施形態の血球細胞分析装置の動作、並びに、流路デバイス４０以外の構成及び効果は、前述した第１の実施形態と同様である。
【００８１】
＜３．第３の実施の形態＞
［血球細胞分析システムの構成］
本発明の第３の実施形態に係る血球細胞分析システムは、誘電分光法により、懸濁液に含まれる血球細胞の状態変化を検出するものであり、薬剤の効果や副作用を評価する際に使用される。具体的には、本実施形態の血球細胞分析システムは、少なくとも、懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定装置と、測定結果から血球細胞の状態変化を検出する検出装置とを備えている。
【００８２】
また、本実施形態の血球細胞分析システムにおける検出装置は、測定装置で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、血球細胞の状態変化を検出するものである。更に、この血球細胞分析システムでは、測定装置と検出装置がそれぞれ離れた場所に設置され、通信ネットワークを介して相互に接続されていてもよい。
【００８３】
本実施形態の血球細胞分析システムは、懸濁液を調整する前処理装置、基準となる誘電変数や電気的物性値などが記憶された記憶装置、適正な薬剤投与量を算出する解析装置、検出及び／又は解析結果を表示する表示装置などを設けることもできる。また、これらの装置は、全て同じ場所（部屋）に設置されている必要はなく、例えば、前処理装置、測定装置及び表示装置を診察室に設置し、それ以外の装置は別の部屋に設置し、それぞれ通信ネットワークを介して相互に接続することもできる。更に、１つの検出装置に、複数の測定装置が接続することもできる。
【００８４】
一方、本実施形態の血球細胞分析システムにおいて複素誘電率スペクトルを測定する懸濁液は、１又は複数個の血球細胞を含有していればよく、懸濁液に含まれる血球細胞は１種類でも複数種でもよい。この懸濁液は、被験者から採取した血液から調整されるが、その採取方法は、特に限定されるものではなく、公知の方法を適用することができる。
【００８５】
例えば、被験者が入院患者の場合は、病床又は院内の中央検査室などにおいて、医師や看護婦などが定期的に採血を行うことができる。また、被験者が、自宅などで服薬を続けている通院患者の場合は、通院時に採血を行えばよい。これらの場合、血液は、真空採血管などの標準的に用いられている器具内に採血されることとなるが、本実施形態の血球細胞分析システムでは、採血器具をそのまま前処理装置や測定装置にセットし、全自動で測定を行うことも可能である。
【００８６】
一方、本実施形態の血球細胞分析システムでは、前処理装置及び測定装置として、自宅などに設置し、患者自ら測定・管理できるような形態のもの、所謂その場検査（Point-of-Care Testing：ＰＯＣＴ）用の小型デバイスを用いることもできる。例えば、Ｉ型糖尿病患者の場合、血糖値管理のＰＯＣＴ用途で用いられる穿刺器などにより少量の血液を採取し、測定することができる。
【００８７】
また、自宅で採取した血液を、適当な保存溶液に溶解させて、郵送などの手段で測定装置が設置されている医療機関などに送付して検査を行うことも可能である。なお、動物実験においても、同様の採血方法及び装置を適用することができる。
【００８８】
本実施形態の血球細胞分析システムでは、細胞の溶解、抗体試薬を用いた蛍光分析など、煩雑でコストがかかる作業を行わずに、血球細胞に対する薬剤の影響を評価することができる。その結果、患者などの服薬量管理を、病院内あるいは自宅などで、簡便に行うことが可能となる。
【００８９】
また、本実施形態の血球細胞分析システムは、薬剤の研究開発にも適用可能であり、関心のある特定の血球細胞に対する薬剤の効果や副作用について、容易に評価することができる。そして、この血球細胞分析システムは、適正な服薬量の管理又は副作用リスク検知を通して、患者個人の状態に応じた治療の質の向上に寄与するものである。
【実施例】
【００９０】
以下、本発明の実施例により、本発明の効果について具体的に説明する。本実施例においては、前述した第１の実施形態の血球細胞分析装置を用いて、免疫抑制剤の赤血球に対する影響を評価した。具体的には、骨髄移植を受ける患者について、免疫抑制剤服用９日前から９１日後までの期間血液を採取し、赤血球を含む懸濁液の誘電分光測定を行った。なお、この患者は、治療の経過に伴い、血液採取期間の後期に、服薬量を徐々に減らし、最終的には服用を止めた。
【００９１】
（測定方法）
血液は、真空採血管（ＥＤＴＡ ２ｋ入り）を用いて、約２ｍｌ採取した。そして、採血管を静かに２回転倒混和した後、ヘマトクリット遠心機専用のガラスキャピラリー３本に全血を充填して、ヘマトクリット遠心機にセットし、回転数を７０００ｒｐｍとして、３分間遠心した。遠心後直ちに、装置に備わる目盛りを用いて、血漿と分離された赤血球成分の割合、即ちヘマトクリット値（Ｈｃｔ）を読み取った。
【００９２】
次に、赤血球の形態異常を確認するため、ピペットにより採血管から約３μＬの全血を採取し、顕微鏡観察用スライドガラスの端部付近に滴下した。そして、顕微鏡観察用カバーガラスを用いて、滴下した全血をスライドガラス全面に塗沫した。この塗沫標本を４０倍の対物レンズを有する光学顕微鏡により観察し、スライドガラス上の十分に離れた３点の血液像を、撮影し保存した。
【００９３】
また、複素誘電率スペクトル測定用として、懸濁液中の血球細胞の濃度が体積分率で約１０％になるように、全血３００ｍＬに、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）：（３０×Ｈｃｔ−３００）ｍＬを添加し、これらをポリプロピレン製マイクロテストチューブ中で混合した。
【００９４】
複素誘電率スペクトルの測定には、ポリスチレン樹脂製で、直径８ｍｍの白金板電極が３．５ｍｍ間隔で対向配置された平行平板キャパシタ型セルを使用した。そして、この測定用セルを、精密インピーダンス測定器と電気的に接続されているテストフィクスチャに搭載して測定を行った。その際、ピペットを用いて、測定用セルに濃度を調整した懸濁液を１９０μＬ注入し、懸濁液の温度が安定するまで２分間待機した。
【００９５】
その後、精密インピーダンス測定器により、測定用セルの各電極間に、振幅３００ｍＶの交流電圧を印加し、４０〜１１０ＭＨｚの範囲で、１４１点の周波数における複素インピーダンスを測定した。なお、測定周波数点は、対数スケールでほぼ等間隔になるよう設定した。また、この系の複素インピーダンスは、精密インピーダンス測定器が発生する電極間に流れる電流を周波数の関数として測定し、その電圧と電流から計算することができる。
【００９６】
次に、前述した方法で測定した複素インピーダンススペクトルを、複素誘電率スペクトルに変化した。今回検出対象としている赤血球は、細胞核を持たないため、単一の誘電緩和で表わされる。そこで、本実施例においては、複素誘電率スペクトルに対して、誘電緩和関数をフィッティングすることにより、誘電変数である緩和強度Δε１、緩和周波数ｆ１、Ｃｏｌｅ−Ｃｏｌｅパラメータβ１を求めた。更に、これらの誘電変数から、特許文献４に記載の方法により、電気的物性値である単位面積当たりの細胞膜のキャパシタンスＣＭと細胞質の導電率σＣを算出した。
【００９７】
（結果）
図８は横軸に薬剤投与開始後の経過日数をとり、縦軸に誘電緩和強度Δεと誘電緩和周波数ｆをとって、免疫抑制剤服用患者から採取した赤血球の誘電変数の変化を示すグラフ図である。また、図９は横軸に単位面積あたりの膜キャパシタンスＣＭをとり、縦軸に細胞質の導電率σＣをとって、健常者及び免疫抑制剤服用患者の赤血球構成相の電気的物性値を示した図である。
【００９８】
図８に示すように、免疫抑制剤を服用すると、その数日後から、緩和強度Δε１が上昇すると共に、緩和周波数ｆ１が減少し、健常者の値(健常域)から大きく外れた。一方、治療が終了し、服薬を中止した後の９１日目の測定では、緩和強度Δε１及び緩和周波数ｆ１共に、健常域に戻っていた。これにより、観察された誘電変数の変化は、免疫抑制剤の赤血球に対する作用と関連することが確認された。
【００９９】
また、これらの誘電変数から、膜キャパシタンスＣＭと細胞質の導電率σＣを算出したところ、観測された大きな変化は、膜キャパシタンスＣＭの顕著な増加に起因していることがわかった。この膜キャパシタンスＣＭが増加するということは、膜の実効的な厚みが減少していることを意味する。その原因は完全には理解されていないが、薬剤の作用により、細胞膜の所謂裏打ちタンパク（例えば、Ｂａｎｄ３など）が影響を受けたことなどが考えられる。
【０１００】
そこで、同様の測定を複数の患者に対しても実施したところ、どの患者でも、基本的には図８と同様の変化を示したが、変化の大きさ、変化の時期、誘電変数が正常値に戻るまでの日数などには個人差が見られた。従って、図８のような誘電変数の経時変化を測定することは、個々の患者ごとに薬剤の副作用を予測するために有用である。即ち、赤血球を含む懸濁液の誘電変数の変化を確認することにより、免疫抑制剤における副作用に関する評価を行うことができる。
【０１０１】
一方、図９に示すように、健常者のデータは比較的狭い範囲に集まっているが、免疫抑制剤服用患者については、膜キャパシタンスＣＭの顕著な増加が認められる。興味深いことに、異なる免疫抑制剤を服用している患者では、膜キャパシタンスＣＭは同様に増加するが、細胞質の導電率σＣが変化する方向は異なる。これにより、薬剤の作用及び副作用は、このような細胞構成相の物性値を表すグラフ上に位置づけられることが確認された。
【符号の説明】
【０１０２】
１ 血球細胞分析装置
２ 懸濁液
３ 測定部
４ 検出部
５ 前処理部
６ 記憶部
７ 解析部
８ 表示部
２０、２１ 血球細胞
２２ 溶媒
３１ 測定用セル
３２ａ、３２ｂ 電極
３３ 伝送線
３４ 測定器
４０ 流路デバイス
４１、４３ カバー層
４２ 中間層
４２ａ 狭窄部
４４、４５ 接着層
４６ａ、４６ｂ 電極
４７ａ、４７ｂ 流路
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球や白血球などの各種血球細胞の状態を分析する血球細胞分析装置、血球細胞分析方法及び血球細胞分析システムに関する。より詳しくは、誘電分光法を利用した血球細胞の分析技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
効果的な治療を行うためには、患者に対する薬剤の効果や副作用を的確に把握することが重要である。例えば、骨髄移植治療などの後に投与される免疫抑制剤は、臓器移植に伴う合併症の１つである移植片対宿主病（graft versus host disease：ＧＶＤＨ）を抑制する働きがあるが、その一方で、血栓性微小血管症（Thrombotic microangiopathy：ＴＭＡ）などの副作用を引き起こすことが知られている。
【０００３】
この免疫抑制剤のように、血中濃度における治療域と毒性域が近接し、いわゆる安全域が狭い薬剤に対しては、血中濃度測定による正確な用量調節（Therapeutic Drug Monitoring：ＴＤＭ）が必要である。これは、免疫抑制剤に限らず、高血圧治療薬及び心臓病治療薬など、幅広い薬剤においても同様である。
【０００４】
一般に、服薬中の患者の状態は、臨床所見や各種臨床検査による所見などから総合的に判断されるが、特に正確なＴＤＭが必要な薬剤に関しては、定期的に血球の薬剤濃度を測定している。また、従来、血中濃度データに基づいて、薬剤の摂取用量を調節するための解析又は支援システムも提案されている（特許文献１，２参照）。
【０００５】
一方、血中の薬剤濃度の測定には、薬剤の種類や特性などに応じて種々の方法が提案されており、例えば、代表的な免疫抑制剤であるシクロスポリンＡの場合は、蛍光偏光免疫測定法などの分析方法によって、末梢血中の濃度が測定されている。また、薬剤濃度の測定には一般に血漿検体が用いられているが、シクロスポリンＡの測定では、全血検体が用いられており、前処理溶液で溶血してから分析を行っている。これは、シクロスポリンＡが脂溶性で、脂質二重層で構成される細胞膜に吸収されやすく、その大部分が細胞膜中、特に数の多い赤血球膜中に偏在していると考えられるからである。
【０００６】
更に、血球細胞の誘電特性は、その大きさ、形状、細胞膜の状態及び密度などによって異なり、従来、誘電分光法により、血球細胞の定性・定量分析又は物性値の測定を行う方法も提案されている（特許文献３，４参照）。これら特許文献３，４に記載の方法によれば、血球細胞を破壊せずに、その状態を分析することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平７−１２４１２５号公報
【特許文献２】特開２００７−２９６２１４号公報
【特許文献３】特開２００８−２１５９０１号公報
【特許文献４】特開２００９−４２１４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
例えば、シクロスポリンＡは、主としてＴ細胞（ヘルパーＴ細胞）によるインターロイキン−２（ＩＬ−２）などのサイトカイン産生を阻害することにより、強力な免疫抑制作用を示すことが知られている。このため、シクロスポリンＡについて、薬効を評価するのであれば、本来は、Ｔ細胞に実効的に作用する濃度を測定すべきであり、また、ＴＭＡなどの副作用を評価するのであれば、赤血球に実効的に作用する濃度を測定すべきである。
【０００９】
しかしながら、これらの値は、標的とする血液細胞成分を分離抽出し、更にそれを溶解した上で、抗体試薬を用いた蛍光偏光免疫測定法などの分析方法で測定しなければならず、煩雑な作業を多忙極める臨床現場で行うことは困難である。このように、シクロスポリンＡなどの一部の薬剤に関しては、入院患者に対してさえ容易ではないＴＤＭを、医療関係者が常時管理することができない通院患者に適用することは、なおさら困難である。
【００１０】
即ち、血中の薬剤濃度から薬物動態を分析する従来の手法は、作業が繁雑で、結果が出るまでに時間を要するため、医薬品の研究開発には適用できても、臨床検査、特に通院患者への適用は困難であるという問題点がある。
【００１１】
そこで、本発明は、薬剤の効果や副作用を短時間で評価することができる血球細胞分析装置、血球細胞分析方法及び血球細胞分析システムを提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明に係る血球細胞分析装置は、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定部と、この測定部で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出部と、を有するものである。
本発明においては、血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定し、その値から求めた誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、従来の方法に比べて、手間や時間がかからない。このため、薬剤の効果や副作用を、容易にかつ短時間で評価することが可能となる。
この血球分析装置では、誘電変数として誘電緩和強度及び／又は誘電緩和周波数を算出してもよく、また、電気的物性値として、膜キャパシタンス及び／又は細胞質導電率を算出してもよい。
また、前述した測定部及び検出部に加えて、基準となる誘電変数及び／又は電気的物性値が記憶された記憶部を有していてもよく、その場合、検出部において、記憶部に記憶された値と比較して、血球細胞の状態変化の有無又は程度を検出することができる。
更に、この装置には、採取血液から測定用の懸濁液を調整する前処理部を設けてもよい。
更にまた、検出結果を表示する表示部を設け、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値が、設定された範囲から外れているときに、前記表示部に警告を表示することもできる。
更にまた、この装置には、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値に基づいて、適正な薬剤投与量を算出する解析部を設けてもよい。
更にまた、測定部に、懸濁液が通流する流路の一部に血球細胞が個別に通過可能な狭窄部を形成した流路デバイスを設け、この狭窄部において一の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定することもできる。
【００１３】
本発明に係る血球細胞分析方法は、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する工程と、測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する工程と、を有する。
本発明においては、血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定し、その値から求めた誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、薬剤の効果や副作用を、手間をかけずに短時間で評価することが可能である。
この分析方法では、懸濁液に、検出対象の血球細胞以外の血球細胞が含まれていてもよい。
また、検出対象の血球細胞は、例えば赤血球又は白血球である。
【００１４】
本発明に係る血球細胞分析システムは、１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定装置と、この測定装置で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出装置と、を有するものである。
本発明においては、血球細胞を含む懸濁液の誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、入院患者、通院患者にかかわらず、更に在宅患者であっても、薬剤の効果や副作用を、容易に評価することが可能となる。
この分析システムでは、測定装置と検出装置とが通信ネットワークを介して接続されていてもよい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定し、その値から求めた誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、薬剤の効果や副作用を短時間で評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の構成を示すブロック図である。
【図２】図１に示す測定部３の構成を模式的に示す図である。
【図３】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の動作例を示すフローチャート図である。
【図４】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の他の動作例を示すフローチャート図である。
【図５】本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置の他の動作例を示すフローチャート図である。
【図６】（ａ）は本発明の第１の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図であり、（ｂ）は第２の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図である。
【図７】本発明の第２の実施形態に係る血球細胞分析装置で使用する流路デバイスの構成例を示す断面図である。
【図８】横軸に薬剤投与開始後の経過日数をとり、縦軸に誘電緩和強度Δεと誘電緩和周波数ｆをとって、面積抑制剤服用患者から採取した赤血球の誘電変数の変化を示すグラフ図である。
【図９】横軸に単位面積あたりの膜キャパシタンスＣＭをとり、縦軸に細胞質の導電率σＣをとって、健常者及び免疫抑制剤服用患者の赤血球構成相の電気的物性値を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を実施するための形態について、添付の図面を参照して詳細に説明する。なお、本発明は、以下に示す各実施形態に限定されるものではない。また、説明は、以下の順序で行う。
１．第１の実施の形態
（血球細胞分析装置により複数の血球細胞を含む懸濁液全体を評価する例）
２．第２の実施の形態
（血球細胞分析装置により個々の血球細胞を評価する例）
３．第３の実施の形態
（誘電分光法により血球細胞の状態を分析する血球細胞分析システムの例）
【００１８】
＜１．第１の実施の形態＞
［血球細胞分析装置の全体構成］
本発明の第１の実施形態に係る血球細胞分析装置は、誘電分光法により、懸濁液に含まれる血球細胞の状態変化を検出し、創薬プロセスや臨床現場において、薬剤の効果や副作用について評価する際に使用されるものである。図１は本実施形態の血球細胞分析装置の構成を示すブロック図である。
【００１９】
具体的には、図１に示すように、本実施形態の血球細胞分析装置１は、懸濁液２の複素誘電率スペクトルを測定する測定部３と、測定結果から血球細胞の状態変化を検出する検出部４とを備えている。また、血球細胞分析装置１には、測定用の懸濁液２を調整する前処理部５、基準となる誘電変数や電気的物性値が記憶された記憶部６、適正な薬剤投与量を算出する解析部７、検出及び／又は解析結果を表示する表示部８などが設けられていてもよい。
【００２０】
［懸濁液２について］
本実施形態の血球細胞分析装置１では、少なくとも検出対象の血球細胞を含有する懸濁液２を使用して測定を行う。ここで、検出対象とする血球細胞は、薬剤投与に伴い、その薬効や副作用によって状態が変化するものであればよく、例えば赤血球、白血球及び血小板などが挙げられる。
【００２１】
また、懸濁液２は、検出対象の血球細胞のみを含有していてもよいが、検出対象でない血球細胞が含まれていてもよい。更に、懸濁液２に含まれる血球細胞は、ヒトのものに限定されるものではなく、本実施形態の血球細胞分析装置１では、ラット、マウス及びウサギなどの動物の血球細胞についても分析可能である。
【００２２】
［測定部３の構成］
図２は図１に示す測定部３の構成を模式的に示す図である。図２に示すように、測定部３は、一対の平行平板電極３２ａ，３２ｂを備えた測定用セル３１を備えており、検出対象の血球細胞２０を含む懸濁液２は、測定用セル３１内に充填される。また、測定用セル３１の電極３２ａ，３２ｂは、それぞれ伝送線３３を介して測定器３４に接続されており、この測定器３４により懸濁液２の複素誘電率スペクトルが測定される。
【００２３】
（測定用セル３１）
測定用セル３１は、懸濁液２の複素誘電率スペクトル測定に影響しないものであればよく、例えばアクリル系樹脂やポリエーテルサルフォン樹脂などにより形成することができる。また、電極３２ａ，３２ｂの大きさ及び間隔も特に限定されるものではなく、測定周波数や印加電圧などに応じて適宜設定することができる。更に、測定用セル３１やその周辺部には、測定用セル３１に懸濁液２を導入するための機構、測定後の懸濁液２を排出するための機構、測定の前後に測定用セル３１内を溶媒などで洗浄するための機構など、測定に付随する作業に関する種々の機構を設けることもできる。
【００２４】
（測定器３４）
測定器３４は、測定対象の周波数範囲において、複素誘電率測定を実施できるものであればよく、例えばインピーダンスアナライザー、ネットワークアナライザー及び時間領域反射オシロスコープなどを使用することができる。
【００２５】
［検出部４の構成］
検出部４では、電子計算機などにより、測定部３で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液２の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞２０の状態変化を検出する。具体的には、先ず、複素誘電率スペクトルから、誘電変数である誘電緩和強度や誘電緩和周波数などを、また、電気的物性値である膜キャパシタンスや細胞質導電率などを算出する。
【００２６】
そして、算出した誘電変数及び／又は電気的物性値と、過去に測定した誘電変数や電気的物性値、或いは後述する記憶部６に記憶された基準値とを比較して、薬剤投与に伴う血球細胞２０の状態変化を検出する。例えば、免疫抑制剤の場合、赤血球の誘電緩和周波数の低下や誘電緩和強度の上昇により、副作用についての評価を行うことができる。
【００２７】
この検出部４において、検出された結果は、後述する表示部８に表示される。また、検出部４で検出した値が予め設定された範囲から外れていた場合は、表示部８に警告が表示されるようにしてもよい。具体的には、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値が、設定範囲から外れていたときに、表示部８に警告を表示する。これにより、臨床現場における服薬用量管理が容易になる。
【００２８】
［前処理部５］
前述した測定部３で測定する懸濁液２は、検体毎に作業者が調整してもよいが、血球細胞分析装置１に、患者などから採取した血液検体に対して、必要に応じて、分離、抽出及び希釈などの前処理を自動で行う前処理部５を設けてもよい。その場合、調整された懸濁液２を、測定部３の測定セル３１内に自動で注入する機構を設けることにより、人手を介さずに、全ての作業を行うことができるため、分析時間を短縮できると共に、作業効率を向上させることができる。
【００２９】
［記憶部６］
記憶部６は、基準となる誘電変数及び／又は電気的物性値などが記憶されたデータベースであり、例えば、健常者で測定した値や同じ患者について過去に測定した値、或いはシミュレーションなどにより求めた値が記憶されている。そして、検出部４において、これらの値と測定部３で測定された値とを比較することにより、血球細胞２０の状態変化の有無や程度を、容易に検出することができる。
【００３０】
［解析部７］
解析部７は、誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値に基づいて、適正な薬剤投与量を算出するものである。そして、その算出結果は、検出部４における検出結果と共に、表示部８に表示される。これにより、臨床現場における服薬用量管理を効率化することができる。
【００３１】
［表示部８］
表示部８は、検出部４や解析部７と接続されている。そして、この表示部８には、例えば、検出部４で算出した誘電変数や電気的物性値、検出部４で検出した血球細胞の状態、検出部４での検出結果が設定範囲から外れていたときの警告、解析部７で算出した適正な薬剤投与量などが表示される。
【００３２】
［血球細胞分析装置１の動作］
次に、前述の如く構成された血球細胞分析装置１の動作、即ち、血球細胞分析装置１を使用して血球細胞に対する薬剤の影響を評価する方法について説明する。図３は本実施形態の血球細胞分析装置１の動作例を示すフローチャート図である。
【００３３】
［ステップＳ１：懸濁液２の調整］
図３に示すように、本実施形態の血球細胞分析装置１では、先ず、前処理部５において、血液検体に、分離、抽出、希釈などの処理を施し、測定に使用する懸濁液２を調整する。その際用いる血液の採取方法は、特に限定されるものではなく、公知の方法を適用することができる。また、必要に応じて、調整された懸濁液２に、適切な濃度で薬剤を添加してもよい。
【００３４】
血液に含まれる赤血球の数は、他の成分よりもはるかに多く、健常なヒトの場合は白血球の数百倍から数千倍含まれている。このため、薬剤が赤血球に与える影響を評価する場合は、白血球の数は無視することができ、懸濁液２として、採取した血液（全血）を、適当な溶媒により測定に適した濃度にまで希釈した溶液を使用することができる。更に、当然ながら、厳密を期して、生化学的操作により、血液から白血球や血小板などの測定対象外の成分を除去したものを使用してもよい。
【００３５】
ここで、血液などを希釈する際に使用する溶媒は、赤血球などの検出対象の血球細胞と等張、即ち、血漿成分と同じ塩濃度を有し、検出対象の血球細胞の性状に影響を与えないと考えられる緩衝溶液を使用することができる。具体的には、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（Phosphate Buffered Saline：ＰＢＳ）などを使用することができる。
【００３６】
一方、薬剤が白血球に与える影響を評価する場合は、血液臨床検査法で一般に利用されている方法によって、全血から赤血球や血小板などの白血球以外の成分を除去し、適当な溶媒により測定に適した濃度にまで希釈した溶液を使用することができる。例えば、自動血球計測検査においては、全血に溶血剤を加えて赤血球を溶血させ、その溶液中に残存する有核細胞を数えて白血球数としている。
【００３７】
また、薬剤が、単球、好酸球、好中球、好塩基球及びリンパ球などの白血球中の特定成分に与える影響を評価する場合は、適切な生化学的操作によって更に分離操作を行う。特定成分の分離抽出操作は、公知の方法を適用することができ、例えば、特定の白血球成分の表面に表出する抗原と、特異的に結合する抗体で被覆された磁気ビーズを用いると、その成分のみを分離抽出することができる。
【００３８】
更に、図２に示すような平行平板キャパシタ型セルで測定する場合、血球細胞の体積分率は０．５〜２５％であることが望ましい。血球細胞の体積分率が２５％を超えると、細胞間の相互作用の影響で、データ解析が複雑になるからである。一方、血球細胞の体積分率が０．５％未満の場合、誘電緩和の振幅が小さくなり、測定データの信頼性が低下することがある。
【００３９】
［ステップＳ２：複素誘電率スペクトル測定］
次に、測定部３において、複数の血球細胞２０を含む懸濁液２全体の複素誘電率を、印加する交流電圧の周波数の関数として測定する。具体的には、所定間隔を空けて対向配置された平行平板電極３１ａ，３２ｂを備える測定用セル３１に、懸濁液２を充填する。そして、伝送線３３を介して電極３１ａ，３２ｂと電気的導通が確保された精密インピーダンス測定器（測定器３４）により、予め設定した周波数範囲にわたり、複素インピーダンス測定を行う。
【００４０】
ここで、複素インピーダンス測定を行う周波数範囲は、検出対象の血球細胞や薬剤の種類などに応じて適宜設定することができるが、観測対象となる誘電緩和の緩和周波数を基準とし、その前後それぞれ２桁程度を含むことが望ましい。例えば、免疫抑制剤の赤血球に対する影響を評価する場合には、赤血球懸濁液の緩和周波数が１ＭＨｚ程度であるため、１０ｋＨｚ〜１００ＭＨｚの範囲で測定すればよい。
【００４１】
また、測定した複素インピーダンスは、公知の方法により複素誘電率に変換することができる。その際、測定系の配線や測定用セル３１に起因するインダクタンスや浮遊容量についての補正、電極分極の補正を行う必要があるが、これらについても、公知の方法を適用することができる（例えば、日本化学会著、「実験化学講座９ 電気磁気」、丸善、１９９１年発行 参照。）。
【００４２】
［ステップＳ３：検出用データの算出］
次に、検出部４において、複素誘電率スペクトルから検出用データＦｎ（ｔ）を算出する。なお、ここでいう検出用データにおける「Ｆｎ」は誘電変数又は電気的物性値を示し、「ｔ」は測定時刻である。
【００４３】
（誘電変数の算出）
懸濁液２のように、細胞を含む溶液の複素誘電率の周波数依存性（周波数分散）、即ち、複素誘電率スペクトルは、おおよそ１ＭＨｚ〜数十ＭＨｚの領域に、含有する細胞の性状に応じて特徴的な変化、即ち、誘電緩和を示すことが知られている。このような細胞溶液の複素誘電率スペクトルは、下記数式（１）に示す緩和関数の和として表すことができる。
【００４４】
【数１】
【００４５】
なお、上記数式１におけるａは、複数の誘電緩和がある場合に、それらを区別するためのものであり、ａ番目の誘電緩和における緩和強度がΔεａ、緩和時間がτａである。この緩和時間τａと、緩和周波数ｆａとの関係は、下記数式（２）で表される。また、βａは、緩和の広がりを示すＣｏｌｅ−Ｃｏｌｅパラメータで、スペクトルの形状を特徴付ける変数である。更に、ε∞は高周波極限での比誘電率であり、ωは角周波数であり、ｉ２＝−１である。
【００４６】
【数２】
【００４７】
そして、全ての誘電緩和についての緩和強度Δε、緩和周波数ｆ、Ｃｏｌｅ−Ｃｏｌｅパラメータβを「誘電変数」といい、本実施形態の血球細胞分析装置１においては、特に緩和強度Δε及び緩和周波数ｆを算出する。具体的には、先ず、周波数点毎に仮定した誘電変数で表現される誘電緩和関数の値と実測値との差を求める。そして、各周波数点における差を二乗した値を測定周波数全体で足し合わせて、その総和が最小になるように、誘電変数を最適化することにより、血球細胞２０を含む懸濁液２の誘電スペクトルを特徴付ける誘電変数を決定する。
【００４８】
（電気的物性値の算出）
細胞溶液の複素誘電率スペクトルは、細胞を取り巻く溶媒の誘電率や導電率にも依存し、純粋に細胞を構成する相の電気的物性値のみを反映したものではない。しかしながら、公知の解析手法を利用することにより、この複素誘電率スペクトルから細胞を構成する相（例えば、細胞膜、細胞質、核膜、核質など）の電気的物性値、即ち、誘電率及び導電率を得ることができる。
【００４９】
例えば、細胞膜と細胞質のみから形成されている球形細胞などの場合は、解析式を用いることにより、複素誘電率スペクトルから、細胞膜及び細胞質それぞれの電気的物性値を直接求めることができる（花井哲也著、「不均質構造と誘電率−物質を壊さずに内部構造を探る」、吉岡書店、２０００年発行 参照）。
【００５０】
一方、複雑な構造を有する細胞については、数値的シミュレーションを利用することにより、膜キャパシタンスＣＭや細胞質導電率σＣを求めることができる（特許文献４参照）。具体的には、測定対象の細胞の形状をモデル化し、その細胞にＡＣ電場が印可されたときの複素誘電率応答を数値解析により求める。その結果に基づいて、膜キャパシタンスＣＭ及び細胞質導電率σＣの値を変化させながら数値計算して、誘電スペクトルを算出する。
【００５１】
次に、算出した誘電スペクトルを誘電緩和式に回帰させて、誘電緩和強度Δε及び緩和時間τを求める。更に、（Δε，τ）の（ＣＭ，σＣ）への依存性を求め、測定対象の細胞の形状に応じた回帰式を作成する。そして、細胞の誘電スペクトルを実測し、その値と回帰式とを比較することで、測定対象の細胞の膜キャパシタンスＣＭ，ｅｘｐ及び細胞質導電率σＣ，ｅｘｐを求める。
【００５２】
［ステップＳ４：記憶部６のデータと照合］
次に、検出部４において、算出した検出用データＦｎ（ｔ）と、例えば記憶部６に記憶された健常者のデータとを照合し、血球細胞の状態変化を検出する。具体的には、検出用データＦｎ（ｔ）が、予め設定された健常域の範囲内であるか、否かを判定する。その際、検出用データＦｎ（ｔ）としては、誘電変数及び電気的物性値のうち１又は２以上の値を使用することができる。
【００５３】
［ステップＳ５，Ｓ６：検出結果の表示］
ステップＳ４における照合の結果、検出用データＦｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲内である場合は、表示部８に問題ない旨表示する（ステップＳ５）。一方、検出用データＦｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲から外れていた場合は、表示部８に警告を表示する（ステップＳ６）。
【００５４】
［他の動作例］
なお、図３に示す動作例では、検出部４で算出した検出用データＦｎ（ｔ）そのものを基に、血球細胞の状態変化を検出しているが、本発明はこれに限定されるものではなく、血球細胞の状態変化の度合いに基づき検出することもできる。図４及び図５は本実施形態の血球細胞分析装置１における他の動作例を示すフローチャート図である。
【００５５】
例えば、図４に示すように、薬剤投与前又は薬剤が表れてないときに測定した比較用データＦｎ（０）と、検出用データＦｎ（ｔ）とから算出した増減幅Ｇｎ（ｔ）を基に、血球細胞の状態変化を検出することもできる。この動作例では、ステップＳ１３において算出した検出用データＦｎ（ｔ）を、例えば測定日や付加情報データなどと共に、記憶部６に記憶し、保存する（ステップＳ１４）。このように、測定日や付加情報データを併せて保存しておくと、担当医師などが、血球細胞分析装置１での検出結果と、血液検査データやその他臨床所見と組み合わせて判定を行う場合に、便利である。
【００５６】
次に、検出部４において、下記数式（３）に基づき、予め記憶部６に記憶しておいた比較用データＦｎ（０）と、ステップＳ１３で算出した検出用データＦｎ（ｔ）から、増減幅Ｇｎ（ｔ）を算出する（ステップＳ１５）。その際、検出用データＦｎ（ｔ）及び比較用データＦｎ（０）としては、誘電変数及び電気的物性値のうち１又は２以上の値を使用することができる。なお、「ｎ（＝１，２，・・・）」はそのための識別子である。
【００５７】
【数３】
【００５８】
そして、算出した増減幅Ｇｎ（ｔ）と、例えば記憶部６に記憶された基準値Ｇｎとを照合し、血球細胞の状態変化を検出する。具体的には、増減幅Ｇｎ（ｔ）が、予め設定された健常域の範囲内であるか、否かを判定する。その結果、増減幅Ｇｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲内である場合は、表示部８に問題ない旨表示し（ステップＳ１７）、増減幅Ｇｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲から外れていた場合は、表示部８に警告を表示する（ステップＳ１８）。
【００５９】
この動作例は、投薬前から、誘電変数や電気的物性値が健常域から外れている患者に、特に有効な方法である。なお、図４に示す動作例において、ステップＳ１１〜Ｓ１３は前述したステップＳ１〜Ｓ３と同様であるため、具体的説明は省略する。
【００６０】
また、図５に示すように、検出用データＦｎ（ｔ）の時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）を基に、血球細胞の状態変化を検出することもできる。この動作例でも、図４に示す動作例同様、ステップＳ２３において算出した検出用データＦｎ（ｔ）を、例えば測定日及び付加情報データなどと共に、記憶部６に記憶し、保存する（ステップＳ２４）。
【００６１】
次に、検出部４において、下記数式（４）に基づき、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）を算出する（ステップＳ２５）。なお、下記数式（４）におけるΔｔは、前回又は数回前の測定時刻からの経過時間であり、Ｆｎ（ｔ−Δｔ）は、前回又は数回前の測定値である。また、その際、検出用データＦｎ（ｔ）及び過去の測定値Δｔとしては、誘電変数及び電気的物性値のうち１又は２以上の値を使用することができる。
【００６２】
【数４】
【００６３】
そして、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）と、例えば記憶部６に記憶された基準値Ｆ´ｎとを照合し、血球細胞の状態変化を検出する。具体的には、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）が、予め設定された健常域の範囲内であるか、否かを判定する。その結果、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲内である場合は、表示部８に問題ない旨表示し（ステップＳ２７）、時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）の値が、健常域の範囲から外れていた場合は、表示部８に警告を表示する（ステップＳ２８）。
【００６４】
この動作例では、投薬量に対する応答を検知することができるため、担当医などが、容易に次の投薬量を見積もることができる。また、検出値が健常域の範囲内の場合でも、急変の予兆を検知することが可能となる。なお、図５に示す動作例において、ステップＳ２１〜Ｓ２３は前述したステップＳ１〜Ｓ３と同様であるため、具体的説明は省略する。
【００６５】
［薬剤投与量の算出］
更に、本実施形態の血球細胞分析装置１では、解析部８において適正な薬剤投与量を算出し、その結果を表示部８に表示することもできる。具体的には、前述した検出用データＦｎ（ｔ）、増減幅Ｇｎ（ｔ）又は時間変化の大きさＦ´ｎ（ｔ）の値や、記憶部６に記憶された基準値などに基づき、血球細胞が適正状態になる薬剤投与量を算出する。
【００６６】
例えば、各Ｆｎ（ｔ）が健常域の範囲内であった場合は、当初医師により決定された標準の投与量を採用し、提示する。一方、各Ｆｎ（ｔ）が健常域の範囲から外れていた患者の場合は、各Ｇｎ（ｔ）を用いて、個別に病状変化がないか確認する。その結果、特に問題がなければ当初医師により決定された標準の投与量を選択し、提示する。
【００６７】
また、病状変化があるが、その程度が軽微な投薬量の減少で対応可能である場合は、各Ｆｎ(ｔ)又は各Ｇｎ（ｔ）の余裕値と、Ｆ´ｎ（ｔ）とから予測される投与後の各Ｆｎ（ｔ）又はＧｎ（ｔ）に基づいて、投薬量の減量又は増加量を算出し、提示する。このように、血球細胞の状態及びその変化に関する各種データから総合的に判定することで、適正な薬剤投与量を提案することができる。
【００６８】
本実施形態の血球細胞分析装置１では、血球細胞２０を含む懸濁液２の誘電変数や電気的物性値から血球細胞の状態変化を検出しているため、薬剤の効果や副作用を、容易にかつ短時間で評価することができる。また、この血球細胞分析装置１では、懸濁液２全体の複素誘電率スペクトルを測定し、その平均的情報により、検出対象の血球細胞２０の状態変化を検出しているため、懸濁液２に検出対象外の血球細胞が含まれていても分析が可能である。その結果、検出対象外の血球細胞を分離・除去する必要がなく、作業効率を向上させることができる。
【００６９】
更に、本実施形態の血球細胞分析装置１は、高血圧治療薬、心臓病治療薬及び免疫抑制剤などの特定の薬剤を、長期間服用している患者が、正しく服用し、かつしかるべき薬効が得られているかを、モニタリングすることも可能である。例えば、誘電変数又は電気的物性値の値が特定範囲（健常域）に収まっているときは、別の分析手段で調べられたこの薬剤の体内濃度が適正であるか、臨床的見地から望ましい薬効が得られていると、患者への応用に先立った臨床試験によって明らかになっているとする。
【００７０】
このような場合、測定値から算出された値が正常域を外れたときに、血球細胞分析装置１が警告を発することで、担当の医師などがより詳細に患者の状態を調べ、必要に応じて適正な服薬指導などを行うことができる。
【００７１】
更にまた、血球細胞分析装置１では、高血圧治療薬、心臓病治療薬及び免疫抑制剤などの特定の薬剤を、長期間服用している患者が、重篤な副作用に陥らないように、モニタリングすることもできる。例えば、誘電変数又は電気的物性値の値が特定範囲（健常域）から外れると、臨床的見地から重篤な副作用が発生する可能性が高いことが、患者への応用に先立った臨床試験によって明らかになっているとする。
【００７２】
このような場合、測定値から算出された値が正常域を外れたときに、血球細胞分析装置１が警告を発することで、担当の医師などがより詳細に患者の状態を調べ、必要に応じて服薬の中止、服薬量の減量、その他副作用に関する治療を行うことができる。
【００７３】
＜２．第２の実施の形態＞
［血球細胞分析装置の全体構成］
図６（ａ）は本発明の第１の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図であり、図６（ｂ）は第２の実施形態の血球細胞分析装置における複素誘電率スペクトル測定時の懸濁液の状態を示す概念図である。図６（ａ）に示すように、第１の実施形態の血球細胞分析装置では、溶媒２２中に複数の血球細胞２０，２１が分散されている懸濁液２について評価しているが、本発明はこれに限定されるものではなく、血球細胞２０を個別に評価することもできる。
【００７４】
前述した第１の実施形態の血球細胞分析装置では、検出対象外の血球細胞２１と検出対象の血球細胞２０が混在している懸濁液２について複素誘電率スペクトルを測定し、その平均的情報により検出対象の血球細胞２０の状態を評価している。これに対して、第２の実施形態の血球細胞分析装置では、図６（ｂ）に示すように、溶媒２２に検出対象の血球細胞２０が１個含まれている状態で、複素誘電率スペクトル測定を行う。
【００７５】
即ち、本発明の第２の実施形態に係る血球細胞分析装置は、測定部に、懸濁液が通流する流路の一部に血球細胞が個別に通過可能な狭窄部が設けられた流路デバイスを備えている。そして、この狭窄部において、血球細胞を１個だけ含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定することができるようになっている。
【００７６】
［流路デバイス］
図７は本実施形態の血球細胞分析装置で使用する流路デバイスの構成例を示す断面図である。図７に示すように、本実施形態の血球細胞分析装置で使用する流路デバイス４０は、例えば、厚さ方向の通流位置が相互に異なる２本の流路４７ａ，４７ｂを、狭窄部４２ａを介して連通する構成とすることができる。
【００７７】
具体的には、ポリイミドなどからなるカバー層４１と、中間層４２とが、所定厚さの接着層４４を介して積層されており、更に接着層４４の他方の面には、所定厚さの接着層４５を介してカバー層４３が積層されている。これら接着層４４，４５は、中間層４２の一部にのみ貼着されており、接着層４４，４５が貼着されていない空隙部分には、懸濁液が通流する流路４７ａ，４７ｂが形成されている。
【００７８】
また、中間層４２とカバー層４３との間に形成され流路４７ａと、中間層４２とカバー層４１との間に形成された流路４７ｂとは、中間層４２に形成された狭窄部４２ａを介して連通している。この狭窄部４２ａは、懸濁液に含まれる血球細胞が、１個ずつ通過する大きさであればよい。更に、中間層４２の流路４７ａ側の面には電極４６ａが設けられており、中間層４２の流路４７ｂ側の面には電極４６ｂが設けられている。そして、これら電極４６ａ，４６ｂ間に所定の電圧を印加することにより、狭窄部４２ａを通過する懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定することができる。
【００７９】
この流路デバイス４０を使用して、複素誘電率スペクトル測定を行うことにより、個々の血球細胞の状態を評価することが可能となる。また、この流路デバイス４０を使用することにより、白血球などのように血中濃度が低い細胞であっても、分離や抽出処理を行わずに分析することも可能となる。
【００８０】
なお、本実施形態の血球細胞分析装置に使用される流路デバイスは、図７に示す構成のものに限定されるものではなく、流路の一部に、血球細胞が１個ずつ通流する大きさの狭窄部が形成されていればよい。また、本実施形態の血球細胞分析装置の動作、並びに、流路デバイス４０以外の構成及び効果は、前述した第１の実施形態と同様である。
【００８１】
＜３．第３の実施の形態＞
［血球細胞分析システムの構成］
本発明の第３の実施形態に係る血球細胞分析システムは、誘電分光法により、懸濁液に含まれる血球細胞の状態変化を検出するものであり、薬剤の効果や副作用を評価する際に使用される。具体的には、本実施形態の血球細胞分析システムは、少なくとも、懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定装置と、測定結果から血球細胞の状態変化を検出する検出装置とを備えている。
【００８２】
また、本実施形態の血球細胞分析システムにおける検出装置は、測定装置で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、血球細胞の状態変化を検出するものである。更に、この血球細胞分析システムでは、測定装置と検出装置がそれぞれ離れた場所に設置され、通信ネットワークを介して相互に接続されていてもよい。
【００８３】
本実施形態の血球細胞分析システムは、懸濁液を調整する前処理装置、基準となる誘電変数や電気的物性値などが記憶された記憶装置、適正な薬剤投与量を算出する解析装置、検出及び／又は解析結果を表示する表示装置などを設けることもできる。また、これらの装置は、全て同じ場所（部屋）に設置されている必要はなく、例えば、前処理装置、測定装置及び表示装置を診察室に設置し、それ以外の装置は別の部屋に設置し、それぞれ通信ネットワークを介して相互に接続することもできる。更に、１つの検出装置に、複数の測定装置が接続することもできる。
【００８４】
一方、本実施形態の血球細胞分析システムにおいて複素誘電率スペクトルを測定する懸濁液は、１又は複数個の血球細胞を含有していればよく、懸濁液に含まれる血球細胞は１種類でも複数種でもよい。この懸濁液は、被験者から採取した血液から調整されるが、その採取方法は、特に限定されるものではなく、公知の方法を適用することができる。
【００８５】
例えば、被験者が入院患者の場合は、病床又は院内の中央検査室などにおいて、医師や看護婦などが定期的に採血を行うことができる。また、被験者が、自宅などで服薬を続けている通院患者の場合は、通院時に採血を行えばよい。これらの場合、血液は、真空採血管などの標準的に用いられている器具内に採血されることとなるが、本実施形態の血球細胞分析システムでは、採血器具をそのまま前処理装置や測定装置にセットし、全自動で測定を行うことも可能である。
【００８６】
一方、本実施形態の血球細胞分析システムでは、前処理装置及び測定装置として、自宅などに設置し、患者自ら測定・管理できるような形態のもの、所謂その場検査（Point-of-Care Testing：ＰＯＣＴ）用の小型デバイスを用いることもできる。例えば、Ｉ型糖尿病患者の場合、血糖値管理のＰＯＣＴ用途で用いられる穿刺器などにより少量の血液を採取し、測定することができる。
【００８７】
また、自宅で採取した血液を、適当な保存溶液に溶解させて、郵送などの手段で測定装置が設置されている医療機関などに送付して検査を行うことも可能である。なお、動物実験においても、同様の採血方法及び装置を適用することができる。
【００８８】
本実施形態の血球細胞分析システムでは、細胞の溶解、抗体試薬を用いた蛍光分析など、煩雑でコストがかかる作業を行わずに、血球細胞に対する薬剤の影響を評価することができる。その結果、患者などの服薬量管理を、病院内あるいは自宅などで、簡便に行うことが可能となる。
【００８９】
また、本実施形態の血球細胞分析システムは、薬剤の研究開発にも適用可能であり、関心のある特定の血球細胞に対する薬剤の効果や副作用について、容易に評価することができる。そして、この血球細胞分析システムは、適正な服薬量の管理又は副作用リスク検知を通して、患者個人の状態に応じた治療の質の向上に寄与するものである。
【実施例】
【００９０】
以下、本発明の実施例により、本発明の効果について具体的に説明する。本実施例においては、前述した第１の実施形態の血球細胞分析装置を用いて、免疫抑制剤の赤血球に対する影響を評価した。具体的には、骨髄移植を受ける患者について、免疫抑制剤服用９日前から９１日後までの期間血液を採取し、赤血球を含む懸濁液の誘電分光測定を行った。なお、この患者は、治療の経過に伴い、血液採取期間の後期に、服薬量を徐々に減らし、最終的には服用を止めた。
【００９１】
（測定方法）
血液は、真空採血管（ＥＤＴＡ ２ｋ入り）を用いて、約２ｍｌ採取した。そして、採血管を静かに２回転倒混和した後、ヘマトクリット遠心機専用のガラスキャピラリー３本に全血を充填して、ヘマトクリット遠心機にセットし、回転数を７０００ｒｐｍとして、３分間遠心した。遠心後直ちに、装置に備わる目盛りを用いて、血漿と分離された赤血球成分の割合、即ちヘマトクリット値（Ｈｃｔ）を読み取った。
【００９２】
次に、赤血球の形態異常を確認するため、ピペットにより採血管から約３μＬの全血を採取し、顕微鏡観察用スライドガラスの端部付近に滴下した。そして、顕微鏡観察用カバーガラスを用いて、滴下した全血をスライドガラス全面に塗沫した。この塗沫標本を４０倍の対物レンズを有する光学顕微鏡により観察し、スライドガラス上の十分に離れた３点の血液像を、撮影し保存した。
【００９３】
また、複素誘電率スペクトル測定用として、懸濁液中の血球細胞の濃度が体積分率で約１０％になるように、全血３００ｍＬに、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）：（３０×Ｈｃｔ−３００）ｍＬを添加し、これらをポリプロピレン製マイクロテストチューブ中で混合した。
【００９４】
複素誘電率スペクトルの測定には、ポリスチレン樹脂製で、直径８ｍｍの白金板電極が３．５ｍｍ間隔で対向配置された平行平板キャパシタ型セルを使用した。そして、この測定用セルを、精密インピーダンス測定器と電気的に接続されているテストフィクスチャに搭載して測定を行った。その際、ピペットを用いて、測定用セルに濃度を調整した懸濁液を１９０μＬ注入し、懸濁液の温度が安定するまで２分間待機した。
【００９５】
その後、精密インピーダンス測定器により、測定用セルの各電極間に、振幅３００ｍＶの交流電圧を印加し、４０〜１１０ＭＨｚの範囲で、１４１点の周波数における複素インピーダンスを測定した。なお、測定周波数点は、対数スケールでほぼ等間隔になるよう設定した。また、この系の複素インピーダンスは、精密インピーダンス測定器が発生する電極間に流れる電流を周波数の関数として測定し、その電圧と電流から計算することができる。
【００９６】
次に、前述した方法で測定した複素インピーダンススペクトルを、複素誘電率スペクトルに変化した。今回検出対象としている赤血球は、細胞核を持たないため、単一の誘電緩和で表わされる。そこで、本実施例においては、複素誘電率スペクトルに対して、誘電緩和関数をフィッティングすることにより、誘電変数である緩和強度Δε１、緩和周波数ｆ１、Ｃｏｌｅ−Ｃｏｌｅパラメータβ１を求めた。更に、これらの誘電変数から、特許文献４に記載の方法により、電気的物性値である単位面積当たりの細胞膜のキャパシタンスＣＭと細胞質の導電率σＣを算出した。
【００９７】
（結果）
図８は横軸に薬剤投与開始後の経過日数をとり、縦軸に誘電緩和強度Δεと誘電緩和周波数ｆをとって、免疫抑制剤服用患者から採取した赤血球の誘電変数の変化を示すグラフ図である。また、図９は横軸に単位面積あたりの膜キャパシタンスＣＭをとり、縦軸に細胞質の導電率σＣをとって、健常者及び免疫抑制剤服用患者の赤血球構成相の電気的物性値を示した図である。
【００９８】
図８に示すように、免疫抑制剤を服用すると、その数日後から、緩和強度Δε１が上昇すると共に、緩和周波数ｆ１が減少し、健常者の値(健常域)から大きく外れた。一方、治療が終了し、服薬を中止した後の９１日目の測定では、緩和強度Δε１及び緩和周波数ｆ１共に、健常域に戻っていた。これにより、観察された誘電変数の変化は、免疫抑制剤の赤血球に対する作用と関連することが確認された。
【００９９】
また、これらの誘電変数から、膜キャパシタンスＣＭと細胞質の導電率σＣを算出したところ、観測された大きな変化は、膜キャパシタンスＣＭの顕著な増加に起因していることがわかった。この膜キャパシタンスＣＭが増加するということは、膜の実効的な厚みが減少していることを意味する。その原因は完全には理解されていないが、薬剤の作用により、細胞膜の所謂裏打ちタンパク（例えば、Ｂａｎｄ３など）が影響を受けたことなどが考えられる。
【０１００】
そこで、同様の測定を複数の患者に対しても実施したところ、どの患者でも、基本的には図８と同様の変化を示したが、変化の大きさ、変化の時期、誘電変数が正常値に戻るまでの日数などには個人差が見られた。従って、図８のような誘電変数の経時変化を測定することは、個々の患者ごとに薬剤の副作用を予測するために有用である。即ち、赤血球を含む懸濁液の誘電変数の変化を確認することにより、免疫抑制剤における副作用に関する評価を行うことができる。
【０１０１】
一方、図９に示すように、健常者のデータは比較的狭い範囲に集まっているが、免疫抑制剤服用患者については、膜キャパシタンスＣＭの顕著な増加が認められる。興味深いことに、異なる免疫抑制剤を服用している患者では、膜キャパシタンスＣＭは同様に増加するが、細胞質の導電率σＣが変化する方向は異なる。これにより、薬剤の作用及び副作用は、このような細胞構成相の物性値を表すグラフ上に位置づけられることが確認された。
【符号の説明】
【０１０２】
１ 血球細胞分析装置
２ 懸濁液
３ 測定部
４ 検出部
５ 前処理部
６ 記憶部
７ 解析部
８ 表示部
２０、２１ 血球細胞
２２ 溶媒
３１ 測定用セル
３２ａ、３２ｂ 電極
３３ 伝送線
３４ 測定器
４０ 流路デバイス
４１、４３ カバー層
４２ 中間層
４２ａ 狭窄部
４４、４５ 接着層
４６ａ、４６ｂ 電極
４７ａ、４７ｂ 流路
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定部と、
該測定部で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、前記懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出部と、
を有する血球細胞分析装置。
【請求項２】
前記誘電変数は誘電緩和強度及び／又は誘電緩和周波数であり、前記電気的物性値は膜キャパシタンス及び／又は細胞質導電率である請求項１に記載の血球細胞分析装置。
【請求項３】
更に、基準となる誘電変数及び／又は電気的物性値が記憶された記憶部を有し、
前記検出部では、前記記憶部に記憶された値と比較して、血球細胞の状態変化の有無又は程度を検出する請求項１又は２に記載の血球細胞分析装置。
【請求項４】
採取血液から測定用の懸濁液を調整する前処理部を有する請求項１乃至３のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項５】
更に、検出結果を表示する表示部を有し、
誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値が、設定された範囲から外れているときは、前記表示部に警告が表示される請求項１乃至４のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項６】
誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値に基づいて、適正な薬剤投与量を算出する解析部を有する請求項１乃至５のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項７】
前記測定部は、前記懸濁液が通流する流路の一部に血球細胞が個別に通過可能な狭窄部が設けられた流路デバイスを備えており、
前記狭窄部において一の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する請求項１乃至６のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項８】
１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する工程と、
測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、前記懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する工程と、
を有する血球細胞分析方法。
【請求項９】
前記懸濁液に検出対象の血球細胞以外の血球細胞が含まれている請求項８に記載の血球細胞分析方法。
【請求項１０】
検出対象の血球細胞が赤血球である請求項８又は９に記載の血球細胞分析方法。
【請求項１１】
検出対象の血球細胞が白血球である請求項８又は９に記載の血球細胞分析方法。
【請求項１２】
１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定装置と、
該測定装置で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、前記懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出装置と、
を有する血球細胞分析システム。
【請求項１３】
前記測定装置と前記検出装置とが通信ネットワークを介して接続されている請求項１２に記載の血球細胞分析システム。
【請求項１】
１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定部と、
該測定部で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、前記懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出部と、
を有する血球細胞分析装置。
【請求項２】
前記誘電変数は誘電緩和強度及び／又は誘電緩和周波数であり、前記電気的物性値は膜キャパシタンス及び／又は細胞質導電率である請求項１に記載の血球細胞分析装置。
【請求項３】
更に、基準となる誘電変数及び／又は電気的物性値が記憶された記憶部を有し、
前記検出部では、前記記憶部に記憶された値と比較して、血球細胞の状態変化の有無又は程度を検出する請求項１又は２に記載の血球細胞分析装置。
【請求項４】
採取血液から測定用の懸濁液を調整する前処理部を有する請求項１乃至３のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項５】
更に、検出結果を表示する表示部を有し、
誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値が、設定された範囲から外れているときは、前記表示部に警告が表示される請求項１乃至４のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項６】
誘電変数、電気的物性値及び血球細胞の状態変化の程度のうち１又は２以上の値に基づいて、適正な薬剤投与量を算出する解析部を有する請求項１乃至５のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項７】
前記測定部は、前記懸濁液が通流する流路の一部に血球細胞が個別に通過可能な狭窄部が設けられた流路デバイスを備えており、
前記狭窄部において一の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する請求項１乃至６のいずれか１項に記載の血球細胞分析装置。
【請求項８】
１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する工程と、
測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、前記懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する工程と、
を有する血球細胞分析方法。
【請求項９】
前記懸濁液に検出対象の血球細胞以外の血球細胞が含まれている請求項８に記載の血球細胞分析方法。
【請求項１０】
検出対象の血球細胞が赤血球である請求項８又は９に記載の血球細胞分析方法。
【請求項１１】
検出対象の血球細胞が白血球である請求項８又は９に記載の血球細胞分析方法。
【請求項１２】
１又は複数の血球細胞を含む懸濁液の複素誘電率スペクトルを測定する測定装置と、
該測定装置で測定された複素誘電率スペクトルに基づいて、前記懸濁液の誘電変数及び／又は電気的物性値を算出し、その値から薬剤投与に伴う血球細胞の状態変化を検出する検出装置と、
を有する血球細胞分析システム。
【請求項１３】
前記測定装置と前記検出装置とが通信ネットワークを介して接続されている請求項１２に記載の血球細胞分析システム。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公開番号】特開２０１１−１１２４９７（Ｐ２０１１−１１２４９７Ａ）
【公開日】平成２３年６月９日（２０１１．６．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２６８８７９（Ｐ２００９−２６８８７９）
【出願日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 日本小児血液学会，特定非営利活動法人日本小児がん学会，日本小児がん看護学会，財団法人がんの子供を守る会、「第５１回日本小児血液学会プログラム・総会号」、平成２１年１０月１４日
【出願人】（０００００２１８５）ソニー株式会社 (34,172)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月９日（２０１１．６．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 日本小児血液学会，特定非営利活動法人日本小児がん学会，日本小児がん看護学会，財団法人がんの子供を守る会、「第５１回日本小児血液学会プログラム・総会号」、平成２１年１０月１４日
【出願人】（０００００２１８５）ソニー株式会社 (34,172)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]