血管コロニー形成細胞および非生着血管細胞
ヒト血管コロニー形成細胞および非生着血管細胞を生体外で生成および増幅するための方法、ならびにそのような細胞を増幅および使用する方法を開示する。方法は、多数の血管コロニー形成細胞、非生着血管細胞および誘導体細胞、例えば造血細胞および表皮細胞の産生を可能とする。開示される方法により得られる細胞は、様々な研究、臨床、および治療用途に使用することができる。ヒト非生着血管細胞は、血管芽細胞およびヒト血管コロニー形成細胞に関連するがそれらとは異なる、新規前駆細胞集団である。本発明はまた、血管コロニー形成細胞、非生着血管細胞またはそれらから分化した細胞を含む、組成物、調製物、および溶液を提供する。組成物、調製物、および溶液は、凍結保存調製物および実質的に精製された調製物、ならびに、骨髄に生着することができる関連した血管芽前駆体細胞型と組み合わせて製剤化された混合調製物を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト血管コロニー形成細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）ヒト多能性幹細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記多能性幹細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも２つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト血管コロニー形成細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
を含み、前記多能性幹細胞、胚様体および血管コロニー形成細胞は、前記方法のステップ（ａ）および（ｂ）にわたり無血清培地中で成長させられ、
ステップ（ｂ）における前記少なくとも２つの成長因子は、ＢＭＰ４およびＶＥＧＦを含む、方法。
【請求項２】
ヒト血管コロニー形成細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）ヒト多能性幹細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記多能性幹細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも２つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト血管コロニー形成細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
（ｃ）前記胚様体は、単細胞に分割され、
（ｄ）少なくとも１つの成長因子を、前記単細胞を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記単細胞を含む前記培養物中でヒト血管コロニー形成細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
を含み、前記多能性幹細胞、胚様体および血管コロニー形成細胞は、前記方法のステップ（ａ）〜（ｄ）にわたり無血清培地中で成長させられ、
ステップ（ｂ）における前記少なくとも２つの成長因子は、ＢＭＰ４およびＶＥＧＦを含む、方法。
【請求項３】
前記多能性幹細胞は、胚幹細胞である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記成長因子は、ホメオボックスタンパク質またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含むタンパク質である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記ホメオボックスタンパク質は、ＨＯＸＢ４タンパク質、またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記成長因子は、ステップ（ｂ）にわたり複数回、ステップ（ｂ）における前記培養物に添加される、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記成長因子は、ステップ（ｂ）および（ｄ）にわたり複数回、ステップ（ｂ）および（ｄ）における前記培養物に添加される、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質は、１日１回添加される、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記タンパク質は、１日おきに１回添加される、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法により作製される、単離血管コロニー形成細胞。
【請求項１１】
請求項２に記載の方法により作製される、単離血管コロニー形成細胞。
【請求項１２】
前記成長因子は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、およびエリスロポエチン（ＥＰＯ）からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）もしくは骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、またはその両方は、ステップ（ａ）において細胞培養の０〜４８時間以内に添加される、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、もしくはトロンボポエチン（ＴＰＯ）、またはこれらの任意の組み合わせは、ステップ（ａ）の開始から４８〜７２時間以内に前記培養物に添加される、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記成長因子は、ステップ（ａ）の開始から４８〜７２時間以内にステップ（ｂ）に添加される、請求項４〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記成長因子は、ステップ（ａ）の開始４８〜７２時間以内に培養ステップ（ｂ）に添加される、請求項５に記載の方法。
【請求項１７】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）に添加するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）および（ｄ）に添加するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を前記培養物から精製するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記血管コロニー形成細胞を精製する前記ステップは、抗ＣＤ７１抗体による免疫親和性カラムクロマトグラフィーを使用するステップを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を前記培養物から単離するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記血管コロニー形成細胞を単離する前記ステップは、前記血管コロニー形成細胞をサイズおよび／または形態により単離するステップを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記成長因子は、ＨＯＸＢ４およびタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質である、請求項４〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＰＴＤおよび前記ＨＯＸＢ４は、リンカーを介して共役される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、ＴＡＴタンパク質、その機能性変異体または活性断片である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＨＯＸＢ４は、哺乳類ＨＯＸＢ４である、請求項５に記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、マウスまたはヒトＨＯＸＢ４である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、ヒトＨＯＸＢ４である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＨＯＸＢ４は、全長タンパク質を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＯＸＢ４は、配列番号１または配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＰＴＤは、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＴＡＴポリペプチドの１つ以上の複製を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＡＴタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
ヒト多能性幹細胞を含む前記細胞培養物は、ヒト胚幹細胞のライブラリから得られ、前記ヒト胚幹細胞のライブラリは、そのそれぞれが、ヒト集団に存在する少なくとも１つのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である幹細胞を含み、前記幹細胞のライブラリのぞれぞれの幹細胞は、前記ライブラリの残りの幹細胞と比べて異なる組のＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合であり、前記方法は、そのそれぞれが、ヒト集団に存在する少なくとも１つのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である血管コロニー形成細胞のライブラリを生成し、前記幹細胞のライブラリのそれぞれの幹細胞は、前記ライブラリの残りの幹細胞と比べて異なる組のＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ヒト胚幹細胞のライブラリは、ヒト集団に存在するすべてのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である幹細胞を含み、前記方法は、ヒト集団に存在するすべてのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である血管コロニー形成細胞を含む血管コロニー形成細胞のライブラリを生成する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を、前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト造血幹細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、培養するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を、前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト内皮細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、培養するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記条件は、前記ヒト血管コロニー形成細胞をフィブロネクチン被覆培養皿上で培養することを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記培養物は、少なくとも１×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記培養物は、少なくとも２×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞、少なくとも３×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞、および少なくとも４×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞から選択される数量を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１、２、１７、または１８の方法により調製される、ヒト血管コロニー形成細胞。
【請求項４１】
少なくとも１×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞を含む、ヒト血管コロニー形成細胞の溶液。
【請求項４２】
前記溶液は、対象に注射可能である、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４３】
前記溶液は、冷凍に好適である、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４４】
前記溶液は、少なくとも２×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞、少なくとも３×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞または少なくとも４×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞を含む、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４５】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、少なくとも造血または内皮細胞に分化することができる、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４６】
血管コロニー形成細胞、造血細胞または内皮細胞の投与により処置され得る疾患の処置用の医薬の製造のための、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【請求項４７】
投与を必要とする患者にヒト血管コロニー形成細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項４８】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
投与を必要とする患者にヒト造血幹細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項５１】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
投与を必要とする患者にヒト内皮細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト内皮細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト内皮細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項５４】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
処置を必要とする患者における造血幹細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項５７】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
処置を必要とする患者における内皮細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト内皮細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト内皮細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項６０】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記内皮細胞障害は、心筋梗塞、脳梗塞、アテローム性動脈硬化および虚血からなる群から選択される、請求項５６〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記虚血は、脳、四肢、心臓、肺、皮膚および目に生じる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ヒト造血幹細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｂ）前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト造血幹細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記ヒト血管コロニー形成細胞を成長させるステップと、を含む方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の方法により産生されるヒト造血幹細胞。
【請求項６６】
ヒト内皮細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｂ）前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト内皮細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記ヒト血管コロニー形成細胞を成長させるステップと、を含む方法。
【請求項６７】
請求項６６に記載の方法により産生されるヒト内皮細胞。
【請求項６８】
請求項３３または請求項３４に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞のライブラリ。
【請求項６９】
ヒトの患者にヒト造血幹細胞またはヒト内皮細胞を投与することを含む、処置を必要とする前記患者を処置する方法であって、
（ａ）前記患者を選択するステップと、
（ｂ）前記患者の細胞の表面上に発現したＭＨＣタンパク質を同定するステップと、
（ｃ）請求項６８に記載のヒト血管コロニー形成細胞のライブラリを提供するステップと、
（ｄ）前記患者の細胞上の前記患者のＭＨＣタンパク質と一致するヒト血管コロニー形成細胞を選択するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）において同定された前記ヒト血管コロニー形成細胞を、必要に応じて、ヒト造血幹細胞、内皮細胞またはその両方に分化させるステップと、
（ｆ）ステップ（ｅ）からの前記ヒト造血幹細胞、内皮細胞またはその両方の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項７０】
前記方法は、地域の施設において行われる、請求項６９に記載の方法
【請求項７１】
前記地域の施設は、病院である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
血管コロニー形勢細胞を増幅させるための方法であって、ＢＭＰ４およびＶＥＧＦまたはその機能性同等物もしくは活性断片を、前記血管コロニー形成細胞の増殖を補助するのに十分な量で含むタンパク質の存在下で、無血清培地中の哺乳類血管コロニー形成細胞を成長させることを含む、方法。
【請求項７３】
前記血管コロニー形成細胞は、臍帯血、末梢血または骨髄から濃縮、精製または単離される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記血管コロニー形成細胞は、ヒト血管コロニー形成細胞である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
前記血管コロニー形成細胞は、少なくとも１×１０６個の血管コロニー形成細胞に達するように生体外で成長させられる、請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
前記無血清培地は、ホメオボックスタンパク質、その機能性同等物または活性断片をさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
ホメオボックスたんぱく質、その機能性同等物または活性断片は、ＨＯＸＢ４タンパク質またはその機能性同等物もしくは活性断片である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＨＯＸＢ４は、哺乳類ＨＯＸＢ４である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、マウスまたはヒトＨＯＸＢ４である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、ヒトＨＯＸＢ４である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＨＯＸＢ４は、全長タンパク質を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＨＯＸＢ４は、配列番号１または配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記無血清培地は、ＨＯＸＢ４およびタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質をさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８４】
前記タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、ＴＡＴタンパク質、その機能性同等物または活性断片である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＴＡＴタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＰＴＤは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＴＡＴポリペプチドの１つ以上の複製を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８７】
ヒトの被移植者においてドナー同種移植片に対する寛容性を誘導する方法であって、
（ａ）Ｔ細胞共刺激を阻害する薬剤を前記被移植者に投与するステップと、
（ｂ）請求項１に記載の方法により生成されたヒト血管コロニー形成細胞を、前記被移植者に導入するステップであって、前記血管コロニー形成細胞は、ドナーに対して一致する、ステップと、
（ｃ）前記同種移植片を前記被移植者に移植するステップであて、前記ヒト血管コロニー形成細胞は、前記被移植者における前記同種移植片に対する寛容性を誘導する、ステップと、を含む方法。
【請求項８８】
Ｔ細胞共刺激を阻害する前記薬剤は、ＣＤ４０リガンド−ＣＤ４０相互作用を阻害する薬剤である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記方法は、ＣＤ２８−Ｂ７相互作用を阻害する薬剤を投与するステップをさらに含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記方法は、胸腺照射またはＴ細胞除去もしくは不活性化のステップを含まない、請求項８７〜８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記方法は、前記被移植者に、胸腺照射を施すステップをさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記方法は、前記被移植者に、Ｔ細胞を除去または不活性化する処置を施すステップをさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記方法は、前記被移植者に、胸腺照射と、Ｔ細胞を除去または不活性化する処置とを施すステップをさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
ヒトの被移植者においてドナー同種移植片に対する寛容性を誘導する方法であって、
（ａ）前記被移植者において胸腺空間を形成するステップと、
（ｂ）前記被移植者においてＴ細胞を除去または不活性化するステップと、
（ｃ）請求項１に記載の方法により生成されたヒト血管コロニー形成細胞を、前記被移植者に導入するステップであって、前記人血管コロニー形成細胞は、ドナーに対して一致する、ステップと、
（ｄ）前記同種移植片を前記被移植者に移植するステップと、
を含み、前記ヒト血管コロニー形成細胞は、前記被移植者における前記同種移植片に対する寛容性を誘導する、方法。
【請求項９５】
前記胸腺空間は、前記被移植者に、胸腺照射、ステロイド、コルチコステロイド、ブレキナール、および免疫抑制化学物質または薬品から選択される少なくとも１つの処置を施すことにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記胸腺空間は、前記被移植者に胸腺照射を施すことにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記胸腺空間は、前記被移植者に免疫抑制化学物質または薬品を投与することにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記胸腺空間は、前記被移植者にシクロスポリンを投与することにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
前記被移植者に、複数の血管コロニー形成細胞の投与が提供される、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１００】
前記寛容性は、全身照射により形成される造血空間なしで誘導される、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ヒト血管コロニー形成細胞および前記同種移植片は、同じドナーから得られる、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ヒト血管コロニー形成細胞および前記同種移植片は、異なるドナーから得られる、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１０３】
少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができる、ヒト非生着血管細胞であって、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、血管細胞。
【請求項１０４】
前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１０３に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０５】
前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の１つ以上の特徴を有する、請求項１０３に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０６】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１０３に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０７】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１０４に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０８】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１０４に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０９】
前記宿主が、哺乳動物である、請求項１０３から１０８のいずれか一項に記載の非生着血管細胞。
【請求項１１０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０９に記載の非生着血管細胞。
【請求項１１１】
少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができるヒト非生着血管細胞の実質的に精製された集団を含む細胞培養物であって、前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、細胞培養物。
【請求項１１２】
胚由来細胞から分化したヒト非生着血管細胞を含む細胞培養物であって、前記非生着血管細胞は、少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができ、前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、細胞培養物。
【請求項１１３】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１１１または１１２に記載の細胞培養物。
【請求項１１４】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の特徴のうち１つ以上を有する、請求項１１１または１１２に記載の細胞培養物。
【請求項１１５】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１１１または１１２に記載の非生着血管細胞。
【請求項１１６】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１１３に記載の細胞培養物。
【請求項１１７】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１１３に記載の細胞培養物。
【請求項１１８】
請求項１０３〜１１０のいずれか一項に記載の非生着血管細胞から分化した造血細胞を含む細胞培養物。
【請求項１１９】
少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも２×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも３×１０６個のヒト非生着血管細胞、または少なくとも４×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、ヒト非生着血管細胞の溶液。
【請求項１２０】
前記ヒト非生着血管細胞は、少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができ、前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、請求項１１９のいずれかに記載の溶液。
【請求項１２１】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１２０に記載の溶液。
【請求項１２２】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の１つ以上の特徴を有する、請求項１２０に記載の溶液。
【請求項１２３】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１２０に記載の溶液。
【請求項１２４】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１２１に記載の溶液。
【請求項１２５】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１２１に記載の溶液。
【請求項１２６】
前記溶液は、対象に注射可能であるか、または冷凍に好適である、請求項１１９〜１２５のいずれかに記載の溶液。
【請求項１２７】
非生着血管細胞または造血細胞の投与により処置され得る疾患の処置用の医薬の製造のための、請求項１１９〜１２５のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【請求項１２８】
少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができるヒト非生着血管細胞の実質的に精製された集団を含む医薬調製物であって、前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、医薬調製物。
【請求項１２９】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１２８に記載の医薬調製物。
【請求項１３０】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の特徴のうち１つ以上を有する、請求項１２８に記載の医薬調製物。
【請求項１３１】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１２８に記載の医薬調製物。
【請求項１３２】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１２９に記載の医薬調製物。
【請求項１３３】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１２９に記載の医薬調製物。
【請求項１３４】
前記調製物は、少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１２８〜１３３に記載の医薬調製物。
【請求項１３５】
前記調製物は、少なくとも５×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１３４に記載の医薬調製物。
【請求項１３６】
請求項１〜１１０のいずれかに記載のヒト非生着血管細胞の凍結保存調製物。
【請求項１３７】
前記調製物は、少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも２×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも３×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも４×１０６個のヒト非生着血管細胞、または少なくとも５×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１３６に記載の凍結保存調製物。
【請求項１３８】
ヒト非生着血管細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）胚由来細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記胚由来細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも１つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップと、
を含み、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト非生着血管細胞を増幅するのに十分な量であり、
前記胚様体は、１０〜１３日間培養され、
前記胚由来細胞、胚様体および非生着血管細胞は、前記方法のステップ（ａ）および（ｂ）にわたり無血清培地中で成長させられる、方法。
【請求項１３９】
ヒト非生着血管細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）ヒト胚由来細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記胚由来細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも１つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト非生着血管細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
（ｃ）前記胚様体は、単細胞に分割され、
（ｄ）少なくとも１つの成長因子を、前記単細胞を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記単細胞を含む前記培養物中でヒト非生着血管細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
を含み、前記単細胞の培養物は、１０〜１３日間培養され、
前記胚由来細胞、胚様体および非生着血管細胞は、前記方法のステップ（ａ）〜（ｄ）にわたり無血清培地中で成長させられる、方法。
【請求項１４０】
前記胚由来細胞は、胚幹細胞である、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記成長因子は、ホメオボックスタンパク質またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含むタンパク質である、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４２】
前記ホメオボックスタンパク質は、ＨＯＸＢ４タンパク質、またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記成長因子は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、およびエリスロポエチン（ＥＰＯ）からなる群から選択される、請求項１３８〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）もしくは骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、またはその両方は、ステップ（ａ）において細胞培養の０〜４８時間以内に添加される、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、もしくはトロンボポエチン（ＴＰＯ）、またはこれらの任意の組み合わせは、ステップ（ａ）の開始から４８〜７２時間以内に前記培養物に添加される、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４６】
前記成長因子は、ステップ（ａ）の開始４８〜７２時間以内に培養ステップ（ｂ）に添加される、請求項１４１〜１４２に記載の方法。
【請求項１４７】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）に添加するステップをさらに含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４８】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）および（ｄ）に添加するステップを含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ヒト非生着血管細胞を前記培養物から精製するステップをさらに含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ヒト非生着血管細胞を前記培養物から単離するステップをさらに含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記成長因子は、ＨＯＸＢ４およびタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質である、請求項１４１〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ＰＴＤおよび前記ＨＯＸＢ４は、リンカーを介して共役される、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、ＴＡＴタンパク質、その機能性変異体または活性断片である、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５４】
前記ＨＯＸＢ４は、哺乳類ＨＯＸＢ４である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１５５】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、マウスまたはヒトＨＯＸＢ４である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ＨＯＸＢ４は、全長タンパク質を含む、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１５７】
前記非生着血管細胞のヒト造血細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記非生着血管細胞を培養するステップをさらに含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記培養物は、少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも２×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも３×１０６個のヒト非生着血管細胞、または少なくとも４×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
請求項１３８、１３９、１４７、または１４８に記載の方法により産生されるヒト非生着血管細胞。
【請求項１６０】
ヒト造血細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｂ）前記ヒト非生着血管細胞のヒト造血幹細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記ヒト非生着血管細胞を成長させるステップと、を含む方法。
【請求項１６１】
請求項１６０に記載の方法により産生されるヒト造血幹細胞。
【請求項１６２】
投与を必要とする患者にヒト非生着血管細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６３】
投与を必要とする患者にヒト非生着血管細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）少なくとも１０，０００個の細胞の量のヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６４】
前記ヒト非生着血管細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
投与を必要とする患者にヒト造血幹細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６６】
投与を必要とする患者にヒト造血幹細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）少なくとも１０，０００個の細胞の量のヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６７】
前記ヒト非生着血管細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
処置を必要とする患者における造血幹細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６９】
処置を必要とする患者における造血幹細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）少なくとも１０，０００個の細胞の量のヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１７０】
前記ヒト非生着血管細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
非生着血管細胞から分化造血細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）ヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、を含む方法。
【請求項１７２】
請求項１７１に記載の方法により産生される分化造血細胞。
【請求項１７３】
生体外でヒト非生着血管細胞から分化した造血細胞を使用して輸血を行うための方法であって、
（ａ）ヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、
（ｃ）前記分化造血細胞で輸血を行うステップと、を含む方法。
【請求項１７４】
非生着血管細胞から分化造血細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、を含む方法。
【請求項１７５】
請求項１７４に記載の方法により産生される分化造血細胞。
【請求項１７６】
生体外でヒト非生着血管細胞から分化した造血細胞を使用して輸血を行うための方法であって、
（ａ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、
（ｃ）前記分化造血細胞で輸血を行うステップと、を含む方法。
【請求項１７７】
前記多能性幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１、２、１７、または１８に記載の方法。
【請求項１７８】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項６４に記載の方法。
【請求項１７９】
前記多能性幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項６６に記載の方法。
【請求項１８０】
前記多能性幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１３８、１３９、１４７、または１４８に記載の方法。
【請求項１８１】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１８３】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１】
ヒト血管コロニー形成細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）ヒト多能性幹細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記多能性幹細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも２つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト血管コロニー形成細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
を含み、前記多能性幹細胞、胚様体および血管コロニー形成細胞は、前記方法のステップ（ａ）および（ｂ）にわたり無血清培地中で成長させられ、
ステップ（ｂ）における前記少なくとも２つの成長因子は、ＢＭＰ４およびＶＥＧＦを含む、方法。
【請求項２】
ヒト血管コロニー形成細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）ヒト多能性幹細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記多能性幹細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも２つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト血管コロニー形成細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
（ｃ）前記胚様体は、単細胞に分割され、
（ｄ）少なくとも１つの成長因子を、前記単細胞を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記単細胞を含む前記培養物中でヒト血管コロニー形成細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
を含み、前記多能性幹細胞、胚様体および血管コロニー形成細胞は、前記方法のステップ（ａ）〜（ｄ）にわたり無血清培地中で成長させられ、
ステップ（ｂ）における前記少なくとも２つの成長因子は、ＢＭＰ４およびＶＥＧＦを含む、方法。
【請求項３】
前記多能性幹細胞は、胚幹細胞である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記成長因子は、ホメオボックスタンパク質またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含むタンパク質である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記ホメオボックスタンパク質は、ＨＯＸＢ４タンパク質、またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記成長因子は、ステップ（ｂ）にわたり複数回、ステップ（ｂ）における前記培養物に添加される、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記成長因子は、ステップ（ｂ）および（ｄ）にわたり複数回、ステップ（ｂ）および（ｄ）における前記培養物に添加される、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質は、１日１回添加される、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記タンパク質は、１日おきに１回添加される、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法により作製される、単離血管コロニー形成細胞。
【請求項１１】
請求項２に記載の方法により作製される、単離血管コロニー形成細胞。
【請求項１２】
前記成長因子は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、およびエリスロポエチン（ＥＰＯ）からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）もしくは骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、またはその両方は、ステップ（ａ）において細胞培養の０〜４８時間以内に添加される、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、もしくはトロンボポエチン（ＴＰＯ）、またはこれらの任意の組み合わせは、ステップ（ａ）の開始から４８〜７２時間以内に前記培養物に添加される、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記成長因子は、ステップ（ａ）の開始から４８〜７２時間以内にステップ（ｂ）に添加される、請求項４〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記成長因子は、ステップ（ａ）の開始４８〜７２時間以内に培養ステップ（ｂ）に添加される、請求項５に記載の方法。
【請求項１７】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）に添加するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）および（ｄ）に添加するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を前記培養物から精製するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記血管コロニー形成細胞を精製する前記ステップは、抗ＣＤ７１抗体による免疫親和性カラムクロマトグラフィーを使用するステップを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を前記培養物から単離するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記血管コロニー形成細胞を単離する前記ステップは、前記血管コロニー形成細胞をサイズおよび／または形態により単離するステップを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記成長因子は、ＨＯＸＢ４およびタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質である、請求項４〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＰＴＤおよび前記ＨＯＸＢ４は、リンカーを介して共役される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、ＴＡＴタンパク質、その機能性変異体または活性断片である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＨＯＸＢ４は、哺乳類ＨＯＸＢ４である、請求項５に記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、マウスまたはヒトＨＯＸＢ４である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、ヒトＨＯＸＢ４である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＨＯＸＢ４は、全長タンパク質を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＯＸＢ４は、配列番号１または配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＰＴＤは、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＴＡＴポリペプチドの１つ以上の複製を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＡＴタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
ヒト多能性幹細胞を含む前記細胞培養物は、ヒト胚幹細胞のライブラリから得られ、前記ヒト胚幹細胞のライブラリは、そのそれぞれが、ヒト集団に存在する少なくとも１つのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である幹細胞を含み、前記幹細胞のライブラリのぞれぞれの幹細胞は、前記ライブラリの残りの幹細胞と比べて異なる組のＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合であり、前記方法は、そのそれぞれが、ヒト集団に存在する少なくとも１つのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である血管コロニー形成細胞のライブラリを生成し、前記幹細胞のライブラリのそれぞれの幹細胞は、前記ライブラリの残りの幹細胞と比べて異なる組のＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ヒト胚幹細胞のライブラリは、ヒト集団に存在するすべてのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である幹細胞を含み、前記方法は、ヒト集団に存在するすべてのＭＨＣ対立遺伝子に対し半接合またはホモ接合である血管コロニー形成細胞を含む血管コロニー形成細胞のライブラリを生成する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を、前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト造血幹細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、培養するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヒト血管コロニー形成細胞を、前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト内皮細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、培養するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記条件は、前記ヒト血管コロニー形成細胞をフィブロネクチン被覆培養皿上で培養することを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記培養物は、少なくとも１×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記培養物は、少なくとも２×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞、少なくとも３×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞、および少なくとも４×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞から選択される数量を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１、２、１７、または１８の方法により調製される、ヒト血管コロニー形成細胞。
【請求項４１】
少なくとも１×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞を含む、ヒト血管コロニー形成細胞の溶液。
【請求項４２】
前記溶液は、対象に注射可能である、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４３】
前記溶液は、冷凍に好適である、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４４】
前記溶液は、少なくとも２×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞、少なくとも３×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞または少なくとも４×１０６個のヒト血管コロニー形成細胞を含む、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４５】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、少なくとも造血または内皮細胞に分化することができる、請求項４１に記載の溶液。
【請求項４６】
血管コロニー形成細胞、造血細胞または内皮細胞の投与により処置され得る疾患の処置用の医薬の製造のための、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【請求項４７】
投与を必要とする患者にヒト血管コロニー形成細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項４８】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
投与を必要とする患者にヒト造血幹細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項５１】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
投与を必要とする患者にヒト内皮細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト内皮細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト内皮細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項５４】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
処置を必要とする患者における造血幹細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項５７】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
処置を必要とする患者における内皮細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製される血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞を、ヒト内皮細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト内皮細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項６０】
前記血管コロニー形成細胞は、支持細胞なしで培養することにより作製される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ヒト血管コロニー形成細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記内皮細胞障害は、心筋梗塞、脳梗塞、アテローム性動脈硬化および虚血からなる群から選択される、請求項５６〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記虚血は、脳、四肢、心臓、肺、皮膚および目に生じる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ヒト造血幹細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｂ）前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト造血幹細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記ヒト血管コロニー形成細胞を成長させるステップと、を含む方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の方法により産生されるヒト造血幹細胞。
【請求項６６】
ヒト内皮細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞を供給するステップと、
（ｂ）前記ヒト血管コロニー形成細胞のヒト内皮細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記ヒト血管コロニー形成細胞を成長させるステップと、を含む方法。
【請求項６７】
請求項６６に記載の方法により産生されるヒト内皮細胞。
【請求項６８】
請求項３３または請求項３４に記載の方法により作製されるヒト血管コロニー形成細胞のライブラリ。
【請求項６９】
ヒトの患者にヒト造血幹細胞またはヒト内皮細胞を投与することを含む、処置を必要とする前記患者を処置する方法であって、
（ａ）前記患者を選択するステップと、
（ｂ）前記患者の細胞の表面上に発現したＭＨＣタンパク質を同定するステップと、
（ｃ）請求項６８に記載のヒト血管コロニー形成細胞のライブラリを提供するステップと、
（ｄ）前記患者の細胞上の前記患者のＭＨＣタンパク質と一致するヒト血管コロニー形成細胞を選択するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）において同定された前記ヒト血管コロニー形成細胞を、必要に応じて、ヒト造血幹細胞、内皮細胞またはその両方に分化させるステップと、
（ｆ）ステップ（ｅ）からの前記ヒト造血幹細胞、内皮細胞またはその両方の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項７０】
前記方法は、地域の施設において行われる、請求項６９に記載の方法
【請求項７１】
前記地域の施設は、病院である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
血管コロニー形勢細胞を増幅させるための方法であって、ＢＭＰ４およびＶＥＧＦまたはその機能性同等物もしくは活性断片を、前記血管コロニー形成細胞の増殖を補助するのに十分な量で含むタンパク質の存在下で、無血清培地中の哺乳類血管コロニー形成細胞を成長させることを含む、方法。
【請求項７３】
前記血管コロニー形成細胞は、臍帯血、末梢血または骨髄から濃縮、精製または単離される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記血管コロニー形成細胞は、ヒト血管コロニー形成細胞である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
前記血管コロニー形成細胞は、少なくとも１×１０６個の血管コロニー形成細胞に達するように生体外で成長させられる、請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
前記無血清培地は、ホメオボックスタンパク質、その機能性同等物または活性断片をさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
ホメオボックスたんぱく質、その機能性同等物または活性断片は、ＨＯＸＢ４タンパク質またはその機能性同等物もしくは活性断片である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＨＯＸＢ４は、哺乳類ＨＯＸＢ４である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、マウスまたはヒトＨＯＸＢ４である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、ヒトＨＯＸＢ４である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＨＯＸＢ４は、全長タンパク質を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＨＯＸＢ４は、配列番号１または配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記無血清培地は、ＨＯＸＢ４およびタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質をさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８４】
前記タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、ＴＡＴタンパク質、その機能性同等物または活性断片である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＴＡＴタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＰＴＤは配列番号１４のアミノ酸配列を有するＴＡＴポリペプチドの１つ以上の複製を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８７】
ヒトの被移植者においてドナー同種移植片に対する寛容性を誘導する方法であって、
（ａ）Ｔ細胞共刺激を阻害する薬剤を前記被移植者に投与するステップと、
（ｂ）請求項１に記載の方法により生成されたヒト血管コロニー形成細胞を、前記被移植者に導入するステップであって、前記血管コロニー形成細胞は、ドナーに対して一致する、ステップと、
（ｃ）前記同種移植片を前記被移植者に移植するステップであて、前記ヒト血管コロニー形成細胞は、前記被移植者における前記同種移植片に対する寛容性を誘導する、ステップと、を含む方法。
【請求項８８】
Ｔ細胞共刺激を阻害する前記薬剤は、ＣＤ４０リガンド−ＣＤ４０相互作用を阻害する薬剤である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記方法は、ＣＤ２８−Ｂ７相互作用を阻害する薬剤を投与するステップをさらに含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記方法は、胸腺照射またはＴ細胞除去もしくは不活性化のステップを含まない、請求項８７〜８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記方法は、前記被移植者に、胸腺照射を施すステップをさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記方法は、前記被移植者に、Ｔ細胞を除去または不活性化する処置を施すステップをさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記方法は、前記被移植者に、胸腺照射と、Ｔ細胞を除去または不活性化する処置とを施すステップをさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
ヒトの被移植者においてドナー同種移植片に対する寛容性を誘導する方法であって、
（ａ）前記被移植者において胸腺空間を形成するステップと、
（ｂ）前記被移植者においてＴ細胞を除去または不活性化するステップと、
（ｃ）請求項１に記載の方法により生成されたヒト血管コロニー形成細胞を、前記被移植者に導入するステップであって、前記人血管コロニー形成細胞は、ドナーに対して一致する、ステップと、
（ｄ）前記同種移植片を前記被移植者に移植するステップと、
を含み、前記ヒト血管コロニー形成細胞は、前記被移植者における前記同種移植片に対する寛容性を誘導する、方法。
【請求項９５】
前記胸腺空間は、前記被移植者に、胸腺照射、ステロイド、コルチコステロイド、ブレキナール、および免疫抑制化学物質または薬品から選択される少なくとも１つの処置を施すことにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記胸腺空間は、前記被移植者に胸腺照射を施すことにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記胸腺空間は、前記被移植者に免疫抑制化学物質または薬品を投与することにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記胸腺空間は、前記被移植者にシクロスポリンを投与することにより形成される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
前記被移植者に、複数の血管コロニー形成細胞の投与が提供される、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１００】
前記寛容性は、全身照射により形成される造血空間なしで誘導される、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ヒト血管コロニー形成細胞および前記同種移植片は、同じドナーから得られる、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ヒト血管コロニー形成細胞および前記同種移植片は、異なるドナーから得られる、請求項８７または請求項９４に記載の方法。
【請求項１０３】
少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができる、ヒト非生着血管細胞であって、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、血管細胞。
【請求項１０４】
前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１０３に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０５】
前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の１つ以上の特徴を有する、請求項１０３に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０６】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１０３に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０７】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１０４に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０８】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１０４に記載の非生着血管細胞。
【請求項１０９】
前記宿主が、哺乳動物である、請求項１０３から１０８のいずれか一項に記載の非生着血管細胞。
【請求項１１０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０９に記載の非生着血管細胞。
【請求項１１１】
少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができるヒト非生着血管細胞の実質的に精製された集団を含む細胞培養物であって、前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、細胞培養物。
【請求項１１２】
胚由来細胞から分化したヒト非生着血管細胞を含む細胞培養物であって、前記非生着血管細胞は、少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができ、前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、細胞培養物。
【請求項１１３】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１１１または１１２に記載の細胞培養物。
【請求項１１４】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の特徴のうち１つ以上を有する、請求項１１１または１１２に記載の細胞培養物。
【請求項１１５】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１１１または１１２に記載の非生着血管細胞。
【請求項１１６】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１１３に記載の細胞培養物。
【請求項１１７】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１１３に記載の細胞培養物。
【請求項１１８】
請求項１０３〜１１０のいずれか一項に記載の非生着血管細胞から分化した造血細胞を含む細胞培養物。
【請求項１１９】
少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも２×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも３×１０６個のヒト非生着血管細胞、または少なくとも４×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、ヒト非生着血管細胞の溶液。
【請求項１２０】
前記ヒト非生着血管細胞は、少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができ、前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、請求項１１９のいずれかに記載の溶液。
【請求項１２１】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１２０に記載の溶液。
【請求項１２２】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の１つ以上の特徴を有する、請求項１２０に記載の溶液。
【請求項１２３】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１２０に記載の溶液。
【請求項１２４】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１２１に記載の溶液。
【請求項１２５】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１２１に記載の溶液。
【請求項１２６】
前記溶液は、対象に注射可能であるか、または冷凍に好適である、請求項１１９〜１２５のいずれかに記載の溶液。
【請求項１２７】
非生着血管細胞または造血細胞の投与により処置され得る疾患の処置用の医薬の製造のための、請求項１１９〜１２５のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【請求項１２８】
少なくとも１つ以上の造血細胞型を産生するように分化することができるヒト非生着血管細胞の実質的に精製された集団を含む医薬調製物であって、前記血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有さない、医薬調製物。
【請求項１２９】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞を特徴付けるタンパク質のうち、すべてではないがその一部を発現する、請求項１２８に記載の医薬調製物。
【請求項１３０】
前記非生着血管細胞は、宿主において骨髄に生着し複製する能力を有するヒト血管コロニー形成細胞の特徴のうち１つ以上を有する、請求項１２８に記載の医薬調製物。
【請求項１３１】
前記血管細胞は、他の血管細胞に緩く接着する、請求項１２８に記載の医薬調製物。
【請求項１３２】
前記ヒト血管細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＫＤＲおよびＣＤ１３３から選択される１つ以上のタンパク質を発現しない、請求項１２９に記載の医薬調製物。
【請求項１３３】
前記ヒト血管細胞は、ＬＭＯ２およびＧＡＴＡ２タンパク質を発現する、請求項１２９に記載の医薬調製物。
【請求項１３４】
前記調製物は、少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１２８〜１３３に記載の医薬調製物。
【請求項１３５】
前記調製物は、少なくとも５×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１３４に記載の医薬調製物。
【請求項１３６】
請求項１〜１１０のいずれかに記載のヒト非生着血管細胞の凍結保存調製物。
【請求項１３７】
前記調製物は、少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも２×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも３×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも４×１０６個のヒト非生着血管細胞、または少なくとも５×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１３６に記載の凍結保存調製物。
【請求項１３８】
ヒト非生着血管細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）胚由来細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記胚由来細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも１つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップと、
を含み、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト非生着血管細胞を増幅するのに十分な量であり、
前記胚様体は、１０〜１３日間培養され、
前記胚由来細胞、胚様体および非生着血管細胞は、前記方法のステップ（ａ）および（ｂ）にわたり無血清培地中で成長させられる、方法。
【請求項１３９】
ヒト非生着血管細胞を生体外で生成および増幅するための方法であって、
（ａ）ヒト胚由来細胞を含む細胞培養物を、無血清培地中で、前記胚由来細胞の胚様体への分化を誘導するのに十分な量の少なくとも１つの成長因子の存在下で培養するステップと、
（ｂ）少なくとも１つの成長因子を、胚様体を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記胚様体培養物中でヒト非生着血管細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
（ｃ）前記胚様体は、単細胞に分割され、
（ｄ）少なくとも１つの成長因子を、前記単細胞を含む前記培養物に添加し、無血清培地中での前記培養物の培養を継続するステップであって、前記成長因子は、前記単細胞を含む前記培養物中でヒト非生着血管細胞を増幅するのに十分な量である、ステップと、
を含み、前記単細胞の培養物は、１０〜１３日間培養され、
前記胚由来細胞、胚様体および非生着血管細胞は、前記方法のステップ（ａ）〜（ｄ）にわたり無血清培地中で成長させられる、方法。
【請求項１４０】
前記胚由来細胞は、胚幹細胞である、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記成長因子は、ホメオボックスタンパク質またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含むタンパク質である、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４２】
前記ホメオボックスタンパク質は、ＨＯＸＢ４タンパク質、またはその機能性変異体もしくは活性変異体を含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記成長因子は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、およびエリスロポエチン（ＥＰＯ）からなる群から選択される、請求項１３８〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）もしくは骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、またはその両方は、ステップ（ａ）において細胞培養の０〜４８時間以内に添加される、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＬｔ−３Ｌ（ＦＬ）、もしくはトロンボポエチン（ＴＰＯ）、またはこれらの任意の組み合わせは、ステップ（ａ）の開始から４８〜７２時間以内に前記培養物に添加される、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４６】
前記成長因子は、ステップ（ａ）の開始４８〜７２時間以内に培養ステップ（ｂ）に添加される、請求項１４１〜１４２に記載の方法。
【請求項１４７】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）に添加するステップをさらに含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４８】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）をステップ（ｂ）および（ｄ）に添加するステップを含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ヒト非生着血管細胞を前記培養物から精製するステップをさらに含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ヒト非生着血管細胞を前記培養物から単離するステップをさらに含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記成長因子は、ＨＯＸＢ４およびタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質である、請求項１４１〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ＰＴＤおよび前記ＨＯＸＢ４は、リンカーを介して共役される、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、ＴＡＴタンパク質、その機能性変異体または活性断片である、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５４】
前記ＨＯＸＢ４は、哺乳類ＨＯＸＢ４である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１５５】
前記哺乳類ＨＯＸＢ４は、マウスまたはヒトＨＯＸＢ４である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ＨＯＸＢ４は、全長タンパク質を含む、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１５７】
前記非生着血管細胞のヒト造血細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記非生着血管細胞を培養するステップをさらに含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記培養物は、少なくとも１×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも２×１０６個のヒト非生着血管細胞、少なくとも３×１０６個のヒト非生着血管細胞、または少なくとも４×１０６個のヒト非生着血管細胞を含む、請求項１３８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
請求項１３８、１３９、１４７、または１４８に記載の方法により産生されるヒト非生着血管細胞。
【請求項１６０】
ヒト造血細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｂ）前記ヒト非生着血管細胞のヒト造血幹細胞への分化を誘導するのに好適な条件下で、前記ヒト非生着血管細胞を成長させるステップと、を含む方法。
【請求項１６１】
請求項１６０に記載の方法により産生されるヒト造血幹細胞。
【請求項１６２】
投与を必要とする患者にヒト非生着血管細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６３】
投与を必要とする患者にヒト非生着血管細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）少なくとも１０，０００個の細胞の量のヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト血管コロニー形成細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６４】
前記ヒト非生着血管細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
投与を必要とする患者にヒト造血幹細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６６】
投与を必要とする患者にヒト造血幹細胞を投与するための方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）少なくとも１０，０００個の細胞の量のヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６７】
前記ヒト非生着血管細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
処置を必要とする患者における造血幹細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１６９】
処置を必要とする患者における造血幹細胞障害を処置する方法であって、
（ａ）それを必要とする患者を選択するステップと、
（ｂ）少なくとも１０，０００個の細胞の量のヒト非生着血管細胞を供給するステップと、
（ｃ）前記ヒト非生着血管細胞を、ヒト造血幹細胞に分化させるステップと、
（ｄ）前記ヒト造血幹細胞の一部またはすべてを、前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【請求項１７０】
前記ヒト非生着血管細胞は、１０，０００個から４００万個の細胞の量である、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
非生着血管細胞から分化造血細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）ヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、を含む方法。
【請求項１７２】
請求項１７１に記載の方法により産生される分化造血細胞。
【請求項１７３】
生体外でヒト非生着血管細胞から分化した造血細胞を使用して輸血を行うための方法であって、
（ａ）ヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、
（ｃ）前記分化造血細胞で輸血を行うステップと、を含む方法。
【請求項１７４】
非生着血管細胞から分化造血細胞を生体外で産生するための方法であって、
（ａ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、を含む方法。
【請求項１７５】
請求項１７４に記載の方法により産生される分化造血細胞。
【請求項１７６】
生体外でヒト非生着血管細胞から分化した造血細胞を使用して輸血を行うための方法であって、
（ａ）請求項１３８〜１４８のいずれか一項に記載の方法により作製されるヒト非生着血管細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記非生着血管細胞を分化造血細胞に分化させるステップと、
（ｃ）前記分化造血細胞で輸血を行うステップと、を含む方法。
【請求項１７７】
前記多能性幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１、２、１７、または１８に記載の方法。
【請求項１７８】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項６４に記載の方法。
【請求項１７９】
前記多能性幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項６６に記載の方法。
【請求項１８０】
前記多能性幹細胞は、誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１３８、１３９、１４７、または１４８に記載の方法。
【請求項１８１】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１８３】
前記多能性肝細胞は、誘導された多能性肝細胞（ｉＰＳＣ）であり、
前記ｉＰＳＣは、トリプシンで継代され、
前記ｉＰＳＣは、マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）で維持されるか、もしくは支持細胞なしで維持され、ならびに／または、
無血清胚様体培地および／もしくは分化培地にＹ−２７６３２が添加される、請求項１７４に記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４−２】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１ａ】
【図１１ｂ】
【図１１ｃ】
【図１１ｄ】
【図１１ｅ】
【図１２−１】
【図１２−２】
【図４−１】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４−２】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１ａ】
【図１１ｂ】
【図１１ｃ】
【図１１ｄ】
【図１１ｅ】
【図１２−１】
【図１２−２】
【図４−１】
【公表番号】特表２０１１−５１９５７６（Ｐ２０１１−５１９５７６Ａ）
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０８６４４（Ｐ２０１１−５０８６４４）
【出願日】平成２１年５月６日（２００９．５．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４３０４３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３７６２４
【国際公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【出願人】（５０９２３６５２０）アドバンスド セル テクノロジー， インコーポレイテッド (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月６日（２００９．５．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４３０４３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３７６２４
【国際公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【出願人】（５０９２３６５２０）アドバンスド セル テクノロジー， インコーポレイテッド (4)
【Ｆターム（参考）】
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