血糖値上昇抑制等組成物、血糖値上昇抑制等食品、および二糖類水解酵素活性阻害組成物
【課題】 保存性が良好で、使用時のハンドリング性が高い、血糖値上昇抑制等組成物を提供することを課題とする。
【解決手段】 本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴としている。また、この血糖値上昇抑制等組成物は、ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれていることを特徴としている。
【解決手段】 本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴としている。また、この血糖値上昇抑制等組成物は、ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれていることを特徴としている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血糖値上昇抑制等組成物、血糖値上昇抑制等食品、および二糖類水解酵素活性阻害組成物に関するものである。詳しくは、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等組成物、血糖値上昇抑制等食品、および二糖類水解酵素活性阻害組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本人の日常生活は、全体として身体活動量が低下する傾向にある一方、食事によるエネルギ摂取量は相対的に過剰傾向を示し、健康に及ぼす影響が懸念されている。また、食生活が豊かになるに従って感染症などの急性疾患は減少したが、慢性疾患である糖尿病、高血圧症、動脈硬化症、がん等のいわゆる生活習慣病の受療率は急激に増加している。
【０００３】
上記の通り、慢性疾患の一つである糖尿病患者は増加傾向にあり、我国における糖尿病の実態を把握するために、厚生労働省は、平成１４年１１月、国民栄養調査と併せて糖尿病実態調査を実施した。その結果、糖尿病が強く疑われる人は７４０万人で、糖尿病の可能性を否定できない予備軍８８０万人を合わせると、１６２０万人が糖尿病のリスクを負っていると推計されている。
【０００４】
このような糖尿病患者および糖尿病予備軍（以下「糖尿病患者等」ともいう。）の増加に対しては、その発症予防、特に一次予防の重要性が指摘され、このような糖尿病患者等は、日本人の食生活を含めた生活行動が変わらなければ、今後さらに増加すると予測されている。すなわち、糖尿病の発症は、生活習慣とりわけ食習慣に起因することから、日常の食生活において糖尿病の発症を予防することが重要である。そのためには、糖尿病予防効果を有する食品の開発が望まれる。
【０００５】
糖尿病の発症には、血糖値の上昇や耐糖能低下などが共通に認められることから、このような現象を抑制あるいは防止することが不可欠である。しかしながら、食品成分（組成物）の中にこれらを効果的に改善する作用を備えたものは多くない。
【０００６】
また、糖尿病患者に対しては、一般に抗糖尿病剤に分類される医薬品が治療に用いられている。
例えば、消化管粘膜に存在する二糖類分解酵素（α−グルコシダーゼ）の作用を阻害し、ブドウ糖の生成を抑制することにより血糖値の上昇を抑制するα−グルコシダーゼ阻害剤が、糖尿病患者の治療に使用されている。また、近年では、インスリン抵抗性改善薬も用いられている。しかしながら、これらの抗糖尿病剤には、作用効果、副作用、安全性等の観点から種々の問題がある。
【０００７】
【特許文献１】特開２００２−１７９５８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上述したように、従来から、糖尿病予防効果を有する食品の開発が望まれてはいたが、食品成分中に血糖値の上昇や耐糖能低下などを抑制あるいは防止する作用を備えたものは多くないという問題があった。また、合成系の抗糖尿病剤についても、作用効果、副作用、安全性等の観点から種々の問題があった。
【０００９】
また、桑葉含有物質が二糖類水解酵素に対して阻害作用をもっていることはすでに知られていたが、どの二糖類水解酵素に対して強い阻害効果を示すかは明らかにされていなかった。また、桑葉含有物質を水溶液として使用したり、ショ糖に混ぜ合わせたりすることも従来から行われていたが、このような使用方法では、保存性が悪く、使用時のハンドリング性も好ましくなかった。
【００１０】
そこで、本発明者は、二糖類水解酵素を阻害する１−デオキシノジリマイシンおよびその誘導体を有する桑葉に着目し、桑葉含有物質がどの二糖類水解酵素に強い阻害効果を示すかを明らかにすると共に、上記従来技術の問題を解決すべく、保存性が良好で、使用時のハンドリング性が高い、血糖値上昇抑制等組成物および二糖類水解酵素活性阻害組成物（本発明）を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、上記従来技術の問題を解決するためになされたものであって、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素への阻害効果により、血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌刺激を低減させ得る組成物）を提供することを課題とする。また、本発明は、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等食品を提供することを課題とする。さらに、本発明は、桑葉抽出物を用いて構成された二糖類水解酵素活性阻害組成物（二糖類水解酵素活性を阻害する組成物）を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、上記課題を解決するためになされたものであって、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴としている。
【００１３】
このような構成によれば、粉末状であるため、保存が容易であって、食品等に添加する際のハンドリング性も高い血糖値上昇抑制等組成物を得ることができる。また、このような構成にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、デキストリンの影響による甘みを有するため、桑葉抽出物の香味等を緩和して、食品（例えば、水羊羹等のデザート）に対して効果的に添加することができる。
【００１４】
また、本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物においては、ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）（二糖類水解酵素への阻害効果により、血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌刺激を低減させ得る組成物たるＤＮＪ）が０．７±０．１％含まれている構成が好ましい。なぜならば、血糖値上昇抑制作用を効果的に発現させるためには、ある範囲内の濃度のものをデザート等へ加える必要があるからである。
【００１５】
本発明にかかる血糖値上昇抑制等食品は、上記課題を解決するためになされたものであって、上述したいずれかの血糖値上昇抑制等組成物と糖質との混合比率が以下の関係を有することを特徴としている。
血糖値上昇抑制等組成物：糖質＝１：５〜２０
【００１６】
上記のような混合比率としているのは、血糖値上昇抑制効果を目的に合わせて強く発現させたり、弱く発現させたりするためには、血糖値上昇抑制等組成物と糖質との比率を変える必要があるからである。
【００１７】
また、本発明にかかる血糖値上昇抑制等食品は、水羊羹、大福餅、ケーキ、クッキー、チョコレート、ガム、カステラ、パン、アイスクリーム、プディング、ゼリー、ババロア、クリーム、キャラメル、ジャム、餡、飴、羊羹、最中、および菓子のいずれかであることが好ましい。さらに、本発明にかかる血糖値上昇抑制等食品は、清涼飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、およびジュースのいずれかであることが好ましい。
【００１８】
本発明にかかる二糖類水解酵素活性阻害組成物は、上記課題を解決するためになされたものであって、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴としている。また、本発明にかかる二糖類水解酵素活性阻害組成物においては、ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれている構成が好ましい。
【００１９】
本発明にかかる二糖類水解酵素活性阻害組成物は、二糖類水解酵素の阻害効果を有するため、糖尿病、肥満、高脂血症、心臓病といった生活習慣病の予防あるいは治療に寄与する、薬剤や加工食品等を構成することができる。すなわち、この二糖類水解酵素活性阻害組成物は、血糖値上昇抑制等組成物、肥満抑制組成物等になり得る。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素への阻害効果により、血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌刺激を低減させ得る組成物）を得ることができる。また、本発明によれば、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等食品を得ることができる。さらに、本発明によれば、桑葉抽出物を用いて構成された二糖類水解酵素活性阻害組成物（二糖類水解酵素活性を阻害する組成物）を得ることができる。本発明によれば、血糖値の上昇や耐糖能低下などを抑制あるいは防止する組成物（血糖値上昇抑制等組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物）を、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて構成することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明の実施形態について説明する。
【００２２】
本実施形態においては、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて血糖値上昇抑制等組成物、および二糖類水解酵素活性阻害組成物を構成し、これらの組成物を用いて血糖値上昇抑制等食品を構成する。すなわち、ハンドリングが容易で利用しやすい「粉末状」に、血糖値上昇抑制等組成物、および二糖類水解酵素活性阻害組成物を構成している。
【００２３】
桑葉には、１−デオキシノジリマイシン（以下、「ＤＮＪ」という。）をはじめその誘導体がいくつか含まれている。そこで、本実施形態においては、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させた粉末状のもの（本発明の「血糖値上昇抑制等組成物」「二糖類水解酵素活性阻害組成物」に相当）（以下、「桑葉抽出物粉末」という。）を構成し、この桑葉抽出物粉末を用いて種々の実験を行った。
【００２４】
上述したように、本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物等を粉末（桑葉抽出物粉末）としたのは、阻害効果を利用する加工食品への使用を容易にするためである。この桑葉抽出物粉末は、外観は抹茶粉末に類似し、香味はよもぎ臭に類似している。
【００２５】
また、本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末１００ｇ中には、デキストリン７４ｇを含み、ＤＮＪ含量は０．７７％である。具体的な桑葉抽出物粉末の組成は、図１に示す通りである。
【００２６】
桑葉抽出物粉末の二糖類水解酵素阻害作用を利用した血糖値上昇抑制を目的とした糖質含有加工食品（本発明の「血糖値上昇抑制等食品」に相当）を創製する場合には、糖質と桑葉抽出物粉末との混合比率が非常に重要になると考えられる。そこで、本実施形態においては、桑葉抽出物粉末とショ糖との比率を変えた溶液をラットへ経口投与し、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて観察された阻害効果がｉｎ ｖｉｖｏにおいても発現することを実証すると共に、糖尿病予防のためのデザートを創製するレシピ作成を行った。
【００２７】
以下、桑葉抽出物粉末を用いた種々の実験について具体的に説明する。
【００２８】
＜１＞ラット小腸粘膜二糖類水解酵素に対する桑葉抽出物粉末の阻害実験
【００２９】
小腸粘膜微絨毛膜の調製は、通常固形飼料で飼育したＷｉｓｔａｒ系成体雄ラット（１５０ｇ〜３００ｇ）を用いて行った。ラット小腸粘膜微絨毛膜はＫｅｓｓｌｅｒらの方法（Kessler M, Acuto O, Strelli C, Murer H, Muller Mn Smenza G (1978) A modified procedure for the rapid preparation of efficiently transporting vesicles from small intestinal brush border membranes. Biochem Biophys Acta 506 : 136-154）に準じて調製し、二糖類水解酵素活性はグルコースオキシダーゼを用いるＤａｈｌｑｖｉｓｔらの方法（Dahlqvist A (1964) Method for assay of intestinal disaccharidases. Anal Biochem 7 : 18-25）を一部改変した方法（Oku T, Konishi F, Hosoya N (1982) Mechanism of inhibitory effect of unavailable carbohydrate on intestinal calcium absorption. J Nutr 112 : 410-415）で測定した。また、タンパク質は色素を用いるＢｒａｄｆｏｒｄの方法（Bradford MM (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 72 : 248-258）に準じて測定した。
【００３０】
＜２＞ラット小腸粘膜二糖類水解酵素に対する桑葉抽出物粉末の阻害効果
上述した＜１＞の実験結果を以下に示す。
【００３１】
（２−１．スクラーゼ活性に対する桑葉抽出物粉末の阻害効果）
図３は、ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末の阻害効果を示したものである。桑葉抽出物粉末０．１ｇを蒸留水１０ｍＬに溶解した水溶液を「桑葉抽出物粉末基準液」とし、これを１００倍（グラフＬ３６）、２５０倍（グラフＬ３５）、５００倍（グラフＬ３４）、１０００倍（グラフＬ３３）、２０００倍（グラフＬ３２）に希釈して、スクラーゼに対する阻害効果を観察した。棒グラフ上の数値は、阻害物質が存在しない場合（グラフＬ３１）のスクラーゼ活性を「０」とした場合の阻害率である。
【００３２】
この図３から明らかなように、ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼ活性は１４７．８μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった（グラフＬ３１参照）。桑葉抽出物粉末が存在しないとき（グラフＬ３１）と比較すると、桑葉抽出物粉末基準液の１０００倍希釈液を加えた場合、活性は２９％阻害され（グラフＬ３３）、５００倍希釈液では４０％阻害された（グラフＬ３４）。さらに、１００倍希釈にすると、９７％が阻害された（グラフＬ３６）。すなわち、小腸粘膜微絨毛膜によるスクロースの消化は、１００倍程度希釈した桑葉抽出物粉末基準液を用いるとほぼ完全に阻害されることが明らかとなった。
【００３３】
（２−２．マルターゼ活性に対する桑葉抽出物粉末の阻害効果）
図４は、ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末の阻害効果を、スクラーゼの場合（図３参照）と同様に示したものである。具体的には、桑葉抽出物粉末基準液を、１００倍（グラフＬ４５）、２５０倍（グラフＬ４４）、１０００倍（グラフＬ４３）、２０００倍（グラフＬ４２）に希釈して、マルターゼに対する阻害効果を観察した。棒グラフ上の数値は、阻害物質が存在しない場合（グラフＬ４１）のマルターゼ活性を「０」とした場合の阻害率である。
【００３４】
この図４から明らかなように、ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼ活性は９９５．５μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった（グラフＬ４１参照）。桑葉抽出物粉末が存在しないとき（グラフＬ４１）と比較すると、桑葉抽出物粉末基準液の１０００倍希釈液を加えた場合、活性は３６％阻害され、２５０倍希釈液（グラフＬ４４）では５０％阻害された。さらに、１００倍希釈にすると、６２％が阻害された（グラフＬ４５）。すなわち、小腸粘膜微絨毛膜によるマルターゼの消化は、スクラーゼと同様に、桑葉抽出物粉末基準液の濃度に依存して阻害された。
【００３５】
（２−３．各基質に対する二糖類水解酵素のＫｍ、Ｖｍａｘおよび阻害物質によるＫｉ）
図５は、桑葉抽出物粉末のスクラーゼに対する阻害機序を明らかにするために、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍（グラフＬ５４）および１０００倍（グラフＬ５３）に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。この図５に示すように、スクロース単独の回帰直線（グラフＬ５１）とスクロースに桑葉抽出物粉末を加えた場合の回帰直線（グラフＬ５３，Ｌ５４）とは、ｙ軸上で収束した。このことは、桑葉抽出物粉末がスクラーゼに対して拮抗的に作用することを示している。スクラーゼに対するＫｍは３９．８ｍＭで、Ｖｍａｘは１１２．４μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった。また、桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物）に含まれるα−グルコシダーゼ阻害物質であるＤＮＪ濃度を用いて算出した場合のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末のＫｉは１．２×１０−４ｍＭであった。
【００３６】
図６は、桑葉抽出物粉末のマルトースに対する阻害機序を明らかにするために、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍（グラフＬ６４）に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。この図６に示すように、マルトース単独の回帰直線（グラフＬ６１）とマルトースに桑葉抽出物粉末を加えた場合の回帰直線（グラフＬ６４）もｙ軸上で収束したので、桑葉抽出物粉末は、スクラーゼと同様にマルターゼに対して拮抗的に作用することが明らかとなった。マルターゼに対するＫｍは３．６ｍＭで、Ｖｍａｘは２９４．１μ
moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった。また、桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物）に含まれるα−グルコシダーゼ阻害物質であるＤＮＪ濃度を用いて算出した場合のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末のＫｉは２．４×１０−４ｍＭであった。
【００３７】
図７は、桑葉抽出物粉末のイソマルトースに対する阻害機序を明らかにするために、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍（グラフＬ７４）に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。この図７に示すように、イソマルトース単独の回帰直線（グラフＬ７１）とイソマルトースに桑葉抽出物粉末を加えた場合の回帰直線（グラフＬ７４）もｙ軸上で収束したので、桑葉抽出物粉末は、スクラーゼ、マルターゼと同様に、イソマルターゼに対して拮抗的に作用することが明らかとなった。イソマルターゼに対するＫｍは３．７ｍＭで、Ｖｍａｘは３３．０μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった。また、桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物）に含まれるα−グルコシダーゼ阻害物質であるＤＮＪ濃度を用いて算出した場合のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末のＫｉは１．２×１０−４ｍＭであった。
【００３８】
図８は、スクロース、マルトース、およびイソマルトースに対するスクラーゼ、マルターゼ、ならびにイソマルターゼのＫｍ、Ｖｍａｘ、および阻害物質によるＫｉをまとめたものである。この図８に示すように、Ｋｍは、マルトースおよびイソマルトースに対して３．６ｍＭ、３．７ｍＭと低く、スクロースが３９．８ｍＭと約１０倍高かった。Ｖｍａｘはマルトースに対して最も高く、スクラーゼ活性の約２．６倍、イソマルターゼ活性の約８．９倍であった。また、Ｋｉは、マルターゼに対して２．４×１０−４ｍＭで、スクラーゼやイソマルターゼの約半分であった（スクラーゼおよびマルターゼは１．２×１０−４ｍＭ）。
【００３９】
以上の結果から、桑葉抽出物粉末の二糖類水解酵素に対する阻害効果は、マルターゼやイソマルターゼよりもスクラーゼに対して強いことが明らかとなった。つまり、桑葉抽出物粉末は、スクラーゼに対して強い阻害作用を示すことが明らかとなったので、次いで、スクロース溶液に桑葉抽出物粉末を添加したものをラットに経口投与して、血糖上昇に対する阻害効果を確認するための実験を行った。
【００４０】
＜３＞ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制およびインスリン分泌抑制効果実験
【００４１】
（３−１．実験動物）
Ｗｉｓｔａｒ系成体雄ラット１６匹を固形飼料を用いて８日間グループ飼育（１ケージ３匹）した。飼料および水は自由摂取とし、室温は２２±２℃、湿度は６０±５％で、室内の照明は１２時間サイクル（明期８：００〜２０：００、暗期２０：００〜８：００）とした。
【００４２】
ラットを糖負荷試験に繰り返し用いる場合は、少なくとも３日間以上の間隔をあけた。この時の体重は１５０ｇ〜２００ｇであった。さらに、糖負荷試験に用いる場合は１２時間以上絶食させ、水のみを与えた。
【００４３】
（３−２．試験溶液の調製）
ラットへ桑葉抽出物粉末をスクロースと同時に経口投与して、血糖値上昇抑制効果を観察するために、試験溶液３種類を以下のように調製した。
（１）スクロース０．６ｇ／ｍＬ水溶液（桑葉抽出物粉末無添加：コントロール）
（２）（スクロース０．６ｇ＋桑葉抽出物粉末４０ｍｇ）／ｍＬ水溶液
（３）（スクロース０．６ｇ＋桑葉抽出物粉末１００ｍｇ）／ｍＬ水溶液
【００４４】
すなわち、桑葉抽出物粉末（本発明にかかる「血糖値上昇抑制等組成物」に相当）とスクロース（本発明にかかる「糖質」に相当）との比率が、上記「（２）」の場合が１：１５であり、上記「（３）」の場合が１：６である。
【００４５】
（３−３．実験プロトコール）
試験溶液（スクロース６００ｍｇ相当）は、胃ゾンデを用いてラットへ投与した。採血は、尾静脈を穿刺してヘマトクリット管へ採取し、試験物質投与前（空腹時血糖、０分値）と、３０分、６０分、９０分、１２０分、１５０分、１８０分の計７回行った。採血後、１１０００ｒｐｍ、室温で５分間、ヘマトクリット遠心機を用いて遠心分離し、得られた血漿をグルコースおよびインスリン濃度測定に用いた。
【００４６】
（３−４．血漿グルコースおよび血漿インスリンの測定方法）
血漿グルコースは、グルコースオキシダーゼを用いるＫｕｎｓｔらの方法（Kunst A,Draegar B,Ziegenhorn J (1984) Colorimetric methods with glucose oxidase and peroxidase. In : Methods of Enzymatic Analysis ( HU Berbmeyer ed),3rd edn, Vol.VI,p178-185 Verlag Chemie,Weinheim,Germany.）に準じて測定した。血漿１０μＬを小試験管に採取し、ＧＯＤ試薬（図２参照）１．５ｍＬを加え、３７℃で１５分間反応させた後、分光光度計を用いて波長５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。
血漿インスリン濃度は、モルモット抗体を使用した測定キットを用い、酵素免疫法で測定した。
【００４７】
＜４＞ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制効果
上述した＜３＞の実験結果を以下に示す。
【００４８】
図９は、ラットの血糖値の経時的変化を示したグラフであり、図１０は、ラットの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。また、図１１は、血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００４９】
血糖値は、桑葉抽出物粉末１００ｍｇ添加溶液（以下、「１００添加溶液」という。）を投与した場合（グラフＬ９３，Ｌ１０３）、６０分後にピークに達し、桑葉抽出物粉末無添加溶液（以下、「無添加溶液」という。）を投与した場合（グラフＬ９１，Ｌ１０１）に比べ５０％以上低かった。桑葉抽出物粉末４０ｍｇ添加溶液（以下、「４０添加溶液」という。）を投与した場合（グラフＬ９２，Ｌ１０２）の血糖値も６０分後にピークに達し、血糖値は１００添加溶液を投与した場合に比べてやや高かったが、９０分以降もやや高い値を維持した。（図９および図１０参照）
【００５０】
図９および図１０から明らかなように、桑葉抽出物粉末を添加したいずれの場合も、３０分および６０分後の血糖値は、コントロールである無添加溶液を投与した場合に比べて、有意に低かった。
【００５１】
血漿インスリン濃度は、血糖値の変化と異なり、無添加溶液を投与した場合（グラフＬ１１１）および４０添加溶液を投与した場合（グラフＬ１１２）において、投与３０分後にピークに達した。１００添加溶液を投与した場合（グラフＬ１１３）においては、血漿インスリン濃度はほとんど上昇しなかった。４０添加溶液を投与した場合、投与３０分後に無添加溶液の約５０％に達し、９０分以降は血糖値に対応して低い血漿インスリン濃度を維持した（図１１参照）。
【００５２】
図１１から明らかなように、４０添加溶液および１００添加溶液を投与した場合、３０分後のインスリン濃度は、無添加溶液を投与した場合に比べて有意に低かった。また、４０添加溶液を投与した場合と、１００添加溶液を投与した場合とを比較すると、投与３０分、１５０分、および１８０分後のインスリン濃度は、１００添加溶液を投与した場合の方が４０添加溶液を投与した場合に比べて有意に低かった。
【００５３】
以上の結果から、桑葉抽出物粉末の二糖類水解酵素に対する阻害効果は、経口投与した場合にも濃度依存的に発現し、血糖上昇を抑制することが明らかとなった。すなわち、以上の実験結果から、ラットへ桑葉抽出物粉末溶液をスクロースと共に投与した場合に、血糖上昇抑制効果があることが確認されたため、次いで、スクロース溶液に桑葉抽出物粉末を添加したものをヒトへ摂取させ、血糖上昇に対する抑制効果を観察した。
【００５４】
＜５＞ヒトにおける桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制およびインスリン分泌抑制ならびに呼気水素ガス排出試験（桑葉抽出物粉末添加スクロース溶液を摂取させた場合の血糖上昇抑制効果等）
【００５５】
スクロース摂取による血糖上昇に対する桑葉抽出物粉末の抑制効果を観察するために、試験溶液３種類を以下のように調製した。
（１）スクロース３０ｇ／１００ｍＬ水溶液（桑葉抽出物粉末無添加：コントロール）
（２）（スクロース３０ｇ＋桑葉抽出物粉末１．２ｇ）／１００ｍＬ水溶液
（３）（スクロース３０ｇ＋桑葉抽出物粉末３．０ｇ）／１００ｍＬ水溶液
【００５６】
すなわち、桑葉抽出物粉末（本発明にかかる「血糖値上昇抑制等組成物」に相当）とスクロース（本発明にかかる「糖質」に相当）との量比は、上記「（２）」の場合で１：２５であり、上記「（３）」の場合で１：１０である。本実施形態においては、これら３種類の試験溶液をヒトへ経口摂取させ、血糖上昇に対する抑制効果を観察した。
【００５７】
図１２は、ヒトの血糖値の経時的変化を示したグラフであり、図１３は、ヒトの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。より具体的には、図１２および図１３は、桑葉抽出物粉末無添加溶液（以下、「無添加溶液」という。）、桑葉抽出物粉末１．２ｇ添加溶液（以下、「１．２添加溶液」という。）、および桑葉抽出物粉末３．０ｇ添加溶液（以下、「３．０添加溶液」という。）をヒトに摂取させたときの、血糖値およびその変化量の経時的変化を示したグラフである。また、図１４は、血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００５８】
３．０添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１２３，Ｌ１３３）、血糖値の上昇はほぼ完全に抑制され、３０分後の血糖値は無添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１２１，Ｌ１３１）に比べて有意に低かった。１．２添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１２２，Ｌ１３２）の血糖値は、無添加溶液を摂取した場合と３．０添加溶液を摂取した場合のほぼ中間であったが、投与３０分後の血糖値は無添加溶液を摂取した場合と比較すると有意に低かった。１．２添加溶液を摂取した場合と３．０添加溶液を摂取した場合の３０分後の血糖値を比較すると、３．０添加溶液を摂取した方が、１．２添加溶液を摂取した場合よりも有意に低かった。（図１２および図１３参照）
【００５９】
上述したように、図１４は、上記実験時における血漿インスリン濃度の経時的変化を示したものである。グラフＬ１４１は、無添加溶液を摂取した場合を示している。血漿インスリン濃度は、１．２添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１４２）、および３．０添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１４３）のいずれの場合も、ごく僅かな上昇を示す程度で、その後はほとんど空腹時レベルを維持した。すなわち、スクロース３０ｇ摂取によるインスリン分泌は、桑葉抽出物粉末１．２ｇまたは桑葉抽出物粉末３．０ｇの同時摂取によって効果的に抑制された。
【００６０】
これらの結果は、スクロースと桑葉抽出物粉末との量比を２５：１にして同時にヒトに摂取させた場合、血糖上昇に対する抑制効果を有することを示し、スクロースと桑葉抽出物粉末との量比を１０：１にしてヒトに同時に摂取させた場合、より効果的に血糖上昇に対する抑制効果が発揮されることを示している。
【００６１】
桑葉抽出物粉末の摂取によってスクロースの消化が阻害されると、スクロースは大腸へ移行して腸内細菌によって発酵分解されることが考えられる。そこで、本実施形態においては、血糖上昇に対する抑制効果を観察すると同時に、呼気を経時的に採取して水素ガス排出動態を観察した。
【００６２】
呼気ガス採取は、水溶液摂取時において、連続した６時間に計７回実施した。水溶液摂取前に１回目の呼気を採取し（空腹時呼気ガス濃度、０分値）、その後は水溶液摂取後定められた時間まで、１時間毎に採取した。呼気中の水素ガスおよびメタンガス濃度は、ガスクロマトグラフィ法の手法を用いた呼気水素／メタン分析装置を用いて測定した。
【００６３】
無添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１５１）では、スクロースはほぼ完全に消化・吸収されるので、呼気への水素ガス排出はほとんど観察されなかった。これに対し、１．２添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１５２）には、呼気水素ガスは摂取４時間後から排出されはじめて５時間後にピークに達し、無添加溶液の場合よりも有意に高かった。３．０添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１５３）には、呼気水素ガスは摂取２時間後から排出されはじめて３時間後にピークに達し、その後６時間まで高いレベルを維持した。（図１５参照）
【００６４】
図１６は、図１５に示された呼気水素ガス排出濃度曲線の６時間までの累積面積を示したものである。グラフＬ１６１は無添加溶液を摂取した場合、グラフＬ１６２は１．２添加溶液を摂取した場合、およびグラフＬ１６３は３．０添加溶液を摂取した場合を示している。この図１６から明らかなように、呼気水素ガス排出量は、桑葉抽出物粉末添加量に濃度依存的に増加し、３．０添加溶液を摂取した場合（Ｌ１６３）は１．２添加溶液を摂取した場合（Ｌ１６２）に比べて、呼気水素ガス排出量が有意に増加することが観察された。
【００６５】
図１２〜図１６に示された結果は、ヒトが桑葉抽出物粉末を糖質食品と一緒に摂取すると血糖上昇が抑制され、インスリン分泌が刺激されないことを示唆している。一方、呼気水素ガス排出量の観察結果からは、桑葉抽出物粉末によって消化を免れたショ糖は大腸に到達して腸内細菌によって発酵分解されることが示された。これらの結果は、桑葉抽出物粉末をブレンドした血糖を上昇させない糖質甘味料創製の可能性を示すものである。
【００６６】
＜６＞ヒトにおける桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制およびインスリン分泌抑制試験（桑葉抽出物粉末添加デザートを摂取させた場合の血糖上昇抑制効果等）
上述したように、桑葉抽出物粉末を添加したスクロース溶液をヒトに摂取させると、血糖値上昇が抑制されることが明らかとなったので、血糖値上昇を抑制する（いわゆる糖尿病予防の）デザートを作成し、その効果を実証した。桑葉抽出物粉末の阻害効果は、糖質、特にショ糖との量比によって異なるので、デザートを作成する際には、有意な血糖値上昇抑制効果が観察された桑葉抽出物粉末：糖質（ショ糖）の重量比が１：１０を基準にした。また、桑葉抽出物粉末においては、マルトースよりもスクロースにおいて阻害効果が顕著に観察された。そこで、作成するデザートは、澱粉よりもショ糖を主成分とし、さらに桑葉抽出物粉末の味、匂い、および色等の影響が少ないと考えられるものを検討した。その結果、「あん」を使用した「水羊羹」と「大福餅」を選択した。
【００６７】
（６−１．桑葉抽出物粉末添加デザートの作成）
図２３は、各デザート（水羊羹、および大福餅）の材料・分量を示したものである。また、図２４は、各デザート（水羊羹、および大福餅）の栄養素成分値を示したものである。以下に各デザートの作成手順を示す。
【００６８】
（１）水羊羹：一人当たり７５ｇ（スクロース３０ｇ、桑葉抽出物粉末３ｇを含有）
（i）まず、あんを作る。具体的には、小豆を一度ゆでこぼし３０分煮た後、砂糖を加えて煮つめ、桑葉抽出物粉末を混ぜ込む。（ii）次に、寒天と水とを合わせて火にかけ、沸騰させる。（iii）次に、（ii）に（i）を加え再び火にかけ、煮つめる。（iv）最後に、可溶化したあん７５ｇ（スクロース３０ｇ相当）を容器に入れ、冷やし固める。
【００６９】
（２）大福餅：一人当たり７６ｇ（スクロース３０ｇ、桑葉抽出物粉末３ｇを含有）
（i）まず、あんを作る（上記水羊羹と同様の手順）。（ii）次に、皮を作る。具体的には、白玉粉、砂糖、および水をよく攪拌した後、網でろ過する。沈殿しないようにこのろ過液をかき混ぜ、速やかに電子レンジ（５００Ｗ）にセットして３分間過熱する。（iii）最後に、皮２２ｇ（スクロース４．５ｇ相当）に片栗粉少量を振りかけ、あん５４ｇ（スクロース２５．５ｇ相当）を包み込む。
【００７０】
（６−２．試験物質の調製）
桑葉抽出物粉末を添加したデザートを摂取したときの血糖値の変化を観察するために、各デザートの対照として、桑葉抽出物粉末無添加のものを同様に作成した。作成した試験物質は、以下の２種類（水羊羹、大福餅）４品目である。
（１）桑葉抽出物粉末無添加水羊羹
（２）桑葉抽出物粉末添加水羊羹
（３）桑葉抽出物粉末無添加大福餅
（４）桑葉抽出物粉末添加大福餅
【００７１】
（６−３．実験プロトコール）
被験者には前日の夕食を２０時までに摂取させ、その後は水およびお茶以外の飲食を禁止した。被験者には、予め調製済みの試験物質を定められた実験スケジュールに従って摂取させ、試験物質は１０分以内に摂取するように指示した。試験物質摂取後の口腔内違和感を解消するために、水およびお茶など１００〜２００ｍＬ程度の摂取を認めた。
【００７２】
採血は、手指先端を穿刺し、ヘマトクリット管を用いて試験物質投与前（空腹時血糖、０分値）と、投与後３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分の計７回行った。採血後、１１０００ｒｐｍ、室温で５分間、ヘマトクリット遠心機を用いて遠心分離し、得られた血漿をグルコースおよびインスリン濃度測定に用いた。
【００７３】
血漿グルコースは、先に説明した場合と同様に、グルコースオキシダーゼを用いるＫｕｎｓｔらの方法（Kunst A,Draegar B,Ziegenhorn J (1984) Colorimetric methods with glucose oxidase and peroxidase. In : Methods of Enzymatic Analysis ( HU Berbmeyer ed),3rd edn, Vol.VI,p178-185 Verlag Chemie,Weinheim,Germany.）に準じて測定した。血漿インスリン濃度も先に説明した場合と同様に、モルモット抗体を使用した測定キットを用い、酵素免疫法で測定した。
【００７４】
（６−４．桑葉抽出物粉末添加デザートを摂取させた場合の血糖値上昇抑制効果）
上述した実験結果を以下に示す。
【００７５】
図１７は、水羊羹（７５ｇ）を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。また、図１８は、水羊羹（７５ｇ）を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。さらに、図１９は、水羊羹（７５ｇ）を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００７６】
これらの図から明らかなように、桑葉抽出物粉末無添加の水羊羹（グラフＬ１７１，Ｌ１８１）では、血糖値は水羊羹摂取３０分後にピーク（１４５ｍｇ／１００ｍＬ）に達し、９０分後には空腹時レベルに戻った。これに対し、桑葉抽出物粉末添加の水羊羹（グラフＬ１７２，Ｌ１８２）を摂取した場合には、血糖値はごく僅かした上昇せず低い濃度を維持した（１０６ｍｇ／１００ｍＬ）。また、血漿インスリン濃度も血糖値と類似したパターンを示し、桑葉抽出物粉末を添加した場合（グラフＬ１９２）には、血漿インスリン濃度は全く上昇しなかった（図１９参照）。
以上の結果から、水羊羹の場合には、桑葉抽出物粉末を添加することによって、血糖値の上昇はほぼ完全に抑制されることが明らかとなった。
【００７７】
図２０は、大福餅（７６ｇ）を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。また、図２１は、大福餅（７６ｇ）を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。さらに、図２２は、大福餅（７６ｇ）を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００７８】
これらの図から明らかなように、桑葉抽出物粉末を添加した大福餅を摂取した場合（グラフＬ２０２，Ｌ２１２）、血糖値は摂取３０分後に僅かに上昇し（桑葉抽出物粉末無添加（グラフＬ２０１，Ｌ２１１）１３５ｍｇ／１００ｍＬに対して１１０ｍｇ／１００ｍＬ）、そのレベルを２時間半後まで維持した。また、血漿インスリン濃度は、桑葉抽出物粉末を添加することによって（グラフＬ２２２）、ほとんど上昇しなかった（図２２参照）。
以上の結果から、大福餅の場合には、桑葉抽出物粉末添加による血糖値上昇抑制効果は水羊羹に比べて弱かったが、インスリン分泌は水羊羹の場合と同様にほぼ完全に抑制されることが明らかとなった。
【００７９】
（６−５．桑葉抽出物粉末添加デザートの官能検査）
上述した水羊羹および大福餅について、５点評価法を用いた官能検査を実施し、消費者に受け入れられるか否かを検討した。
【００８０】
桑葉抽出物粉末は、黄緑色で桑葉特有の香味を感じさせるため、水羊羹１人分としてこの桑葉抽出物粉末を３ｇ添加すると、無添加のものがあずき色であるのに対して、添加したものは濃緑色を呈した。しかしながら、外観の色によって摂食を拒否する者はいなかった。また、香味は桑葉抽出物粉末添加によって草餅のような風味を示し、不快感を示す者はなかった。大福餅は、外側を薄皮で包むために、色調は桑葉抽出物粉末添加と無添加との間にほとんど差異を感じさせなかった。口に入れて咀嚼すると、水羊羹と同様に、僅かに草餅のような香味を感じさせた。
【００８１】
桑葉抽出物粉末を添加した水羊羹および大福餅の外観、つや、舌ざわり、歯ごたえ、色彩等は、桑葉抽出物粉末無添加のそれらと遜色なく、多くの被験者に好意的に受け入れられた。
【００８２】
以上のことから、桑葉抽出物粉末による血糖値上昇抑制効果を利用した糖尿病等の予防を目的としたデザートは嗜好の面からも受け入れられることが実証され、桑葉抽出物粉末を用いることによって、比較的容易に血糖値上昇抑制を目的とした加工食品の開発が可能となる。
【００８３】
＜まとめ＞
本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）によれば、ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対して最も強い阻害を示し、次がマルターゼおよびイソマルターゼに対する阻害で、いずれも拮抗阻害であることが確認された。
【００８４】
また、ラットにおける桑葉抽出物粉末添加スクロース溶液投与時の血糖値上昇は、桑葉抽出物粉末無添加溶液を投与した場合に比べて有意に低いという結果から、桑葉抽出物粉末による抑制効果が確認された。血漿インスリン濃度も桑葉抽出物粉末添加によって有意に低下した。すなわち、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）の二糖類水解酵素に対する阻害効果はｉｎ ｖｉｖｏにおいても発現することが確認された。
【００８５】
また、ヒトへ桑葉抽出物粉末１．２ｇを添加したスクロース溶液、あるいは桑葉抽出物粉末３．０ｇを添加したスクロース溶液を摂取させた場合、血糖値上昇は桑葉抽出物粉末無添加スクロース溶液を摂取した場合に比べて有意に抑制され、その抑制効果は濃度依存的であった。血漿インスリン濃度も桑葉抽出物粉末添加によって有意に低下した。呼気水素ガス排出量は桑葉抽出物粉末１．２ｇ添加および３．０ｇ添加スクロース溶液摂取で有意に増加した。すなわち、桑葉抽出物粉末によって消化を免れたスクロースはプレバイオティクス効果を発現することが示唆された。
【００８６】
さらに、桑葉抽出物粉末添加デザートである水羊羹および大福餅を摂取することによって、血糖値上昇およびインスリン分泌は、いずれのデザートに関しても有意に抑制された。特に、澱粉が少なくショ糖を主成分とした水羊羹において、抑制効果はより顕著であった。また、特にデータは示さなかったが、桑葉抽出物粉末添加デザートを摂取した場合においても、１．２添加溶液や３．０添加溶液を摂取した場合（図１５等参照）と同様に、呼気水素ガス排出量は有意に増加した。
【００８７】
以上の結果、本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物（桑葉抽出物粉末）を用いて構成された加工食品（血糖値上昇抑制等食品）は、血糖コントロールを必要とする糖尿病患者やその他の生活習慣病予防へ向けて血糖値上昇抑制効果を発揮し、さらには腸内細菌改善効果によって健康の維持・増進を図る有効な機能性を備えた食品になると考えられる。
【００８８】
本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素活性阻害組成物）によれば、二糖類水解酵素の阻害効果を有することにより、糖尿病、肥満、高脂血症、心臓病といった生活習慣病の予防あるいは治療に寄与する、薬剤や加工食品等を構成することができる。
【００８９】
本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、上記の通り、二糖類水解酵素の阻害効果を有することによって、糖尿病、肥満、高脂血症、心臓病といった生活習慣病の予防あるいは治療に寄与する。したがって、薬剤として利用可能なのは勿論のこと、ショ糖を甘味料として添加する食品（クッキーや菓子類等）等の作成段階で、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）を適当量（ショ糖使用量によって添加すべき量は変化する）添加することによって、糖尿病等を予防可能な食品（血糖値上昇抑制等食品）を構成することができる。効率よく効果（血糖値上昇抑制等の効果）を引き出すためには、桑葉抽出物粉末と糖質との比率がポイントとなる。
【００９０】
なお、本発明は、上記実施形態に限定されるものではなく、必要に応じて種々の変更を加えて実施することも可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に含まれる。
【００９１】
上記実施形態においては、桑葉抽出物粉末：糖質（ショ糖）の重量比が１：１０を基準にしてデザート（血糖値上昇抑制等食品）を作る場合について説明したが、本発明はこの構成に限定されない。したがって、例えば、本発明にかかる桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）を用いて作るデザート（血糖値上昇抑制等食品）中の桑葉抽出物粉末と糖質との重量比は、以下の関係を有すればよい。
血糖値上昇抑制等組成物：糖質＝１：５〜２０
【００９２】
また、上記実施形態においては、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）中にＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７７％含まれる場合について説明したが、本発明はこの構成に限定されない。したがって、例えば、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）中に含まれるＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％の範囲内であってもよい。
【００９３】
さらに、上記実施形態においては、デザート（血糖値上昇抑制等食品）として水羊羹と大福餅とを作る場合について説明したが、本発明はこの構成に限定されない。したがって、例えば、本発明にかかるデザート（血糖値上昇抑制等食品）は、ケーキ（シフォンケーキ等の各種ケーキ）、クッキー、チョコレート、ガム、カステラ、パン、アイスクリーム、プディング、ゼリー、ババロア、クリーム、キャラメル、ジャム、餡、飴、羊羹、最中、および菓子等のいずれかであってもよい。また、飲料物たる血糖値上昇抑制等食品としては、清涼飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、およびジュース等のいずれかであってもよい。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素活性阻害組成物）は、二糖類水解酵素活性を阻害するので、糖質含有食品と一緒に摂取すれば、血糖上昇抑制とインスリン分泌抑制が起こり、糖尿病予防あるいは症状の改善の抑制効果（高血糖の抑制等の効果）が期待できる。
【００９５】
糖尿病患者および糖尿病予備軍は、甘いデザート等を好んで食べるが、食事療法ではこれらの食品の摂取が制限される。高血糖の人々のＱＯＬ（生活品質）を高めるためには、血糖を上昇させないデザートや菓子類等の開発が必要である。本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物を用いれば、血糖値を上昇させない甘みをもったデザートをはじめとする加工食品の開発が可能となり、糖尿病患者の食事療法にも貢献することができる。
【００９６】
また、本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物によれば、糖質の消化吸収阻害によってエネルギ摂取が制限されるので、肥満防止にも役立つ。肥満が生活習慣病のリスクファクタであることを考えると、血糖値を上昇させない加工食品の開発は、生活習慣病予防にも寄与することが期待でき、今後の高齢化社会における医療費削減に寄与するものと考えられる。
【００９７】
現在、特殊な機能を強調した様々な加工食品が開発され、保健機能食品として市販されているが、本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物等を用いれば、副作用等がなく安全性が高い、糖尿病予防食品等の保健機能食品を開発可能であるため、その需要は高まるものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末の組成を示したものである
【図２】使用したＧＯＤ試薬の組成を示したものである。
【図３】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する阻害効果を示したものである。
【図４】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する阻害効果を示したものである。
【図５】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のスクラーゼに対する阻害機序を示すグラフであって、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍および１０００倍に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。
【図６】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のマルトースに対する阻害機序を示すグラフであって、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。
【図７】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のイソマルトースに対する阻害機序を示すグラフであって、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。
【図８】スクロース、マルトース、およびイソマルトースに対するスクラーゼ、マルターゼ、ならびにイソマルターゼのＫｍ、Ｖｍａｘ、および阻害物質によるＫｉをまとめたものである。
【図９】ラットの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図１０】ラットの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図１１】ラットの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図１２】ヒトの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図１３】ヒトの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図１４】ヒトの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図１５】ヒトの呼気水素ガス排出濃度の経時敵変化を示したグラフである。
【図１６】図１５に示された呼気水素ガス排出濃度曲線の６時間までの累積面積を示したものである。
【図１７】水羊羹を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図１８】水羊羹を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図１９】水羊羹を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図２０】大福餅を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図２１】大福餅を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図２２】大福餅を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図２３】デザート（水羊羹、および大福餅）の材料・分量を示したものである。
【図２４】デザート（水羊羹、および大福餅）の栄養素成分値を示したものである。
【符号の説明】
【００９９】
Ｌ３１…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼ活性を示す棒グラフ
Ｌ３２…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３３…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３４…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３５…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２５０倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３６…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４１…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼ活性を示す棒グラフ
Ｌ４２…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４３…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４４…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２５０倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４５…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ５１…スクロース単独の回帰直線
Ｌ５３…スクロースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１０００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ５４…スクロースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ６１…マルトース単独の回帰直線
Ｌ６４…マルトースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ７１…イソマルトース単独の回帰直線
Ｌ７４…イソマルトースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ９１…無添加溶液を投与した場合のラットの血糖値を示すグラフ
Ｌ９２…４０添加溶液を投与した場合のラットの血糖値を示すグラフ
Ｌ９３…１００添加溶液を投与した場合のラットの血糖値を示すグラフ
Ｌ１０１…無添加溶液を投与した場合のラットの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１０２…４０添加溶液を投与した場合のラットの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１０３…１００添加溶液を投与した場合のラットの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１１１…無添加溶液を投与した場合のラットの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１１２…４０添加溶液を投与した場合のラットの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１１３…１００添加溶液を投与した場合のラットの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１２１…無添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値を示すグラフ
Ｌ１２２…１．２添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値を示すグラフ
Ｌ１２３…３．０添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値を示すグラフ
Ｌ１３１…無添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１３２…１．２添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１３３…３．０添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１４１…無添加溶液を摂取した場合のヒトの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１４２…１．２添加溶液を摂取した場合のヒトの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１４３…３．０添加溶液を摂取した場合のヒトの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１５１…無添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出量を示すグラフ
Ｌ１５２…１．２添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出量を示すグラフ
Ｌ１５３…３．０添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出量を示すグラフ
Ｌ１６１…無添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出濃度曲線の累積面積を示す棒グラフ
Ｌ１６２…１．２添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出濃度曲線の累積面積を示す棒グラフ
Ｌ１６３…３．０添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出濃度曲線の累積面積を示す棒グラフ
Ｌ１７１…水羊羹（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ１７２…水羊羹（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ１８１…水羊羹（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１８２…水羊羹（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１９１…水羊羹（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１９２…水羊羹（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ２０１…大福餅（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ２０２…大福餅（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ２１１…大福餅（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ２１２…大福餅（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ２２１…大福餅（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ２２２…大福餅（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血糖値上昇抑制等組成物、血糖値上昇抑制等食品、および二糖類水解酵素活性阻害組成物に関するものである。詳しくは、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等組成物、血糖値上昇抑制等食品、および二糖類水解酵素活性阻害組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本人の日常生活は、全体として身体活動量が低下する傾向にある一方、食事によるエネルギ摂取量は相対的に過剰傾向を示し、健康に及ぼす影響が懸念されている。また、食生活が豊かになるに従って感染症などの急性疾患は減少したが、慢性疾患である糖尿病、高血圧症、動脈硬化症、がん等のいわゆる生活習慣病の受療率は急激に増加している。
【０００３】
上記の通り、慢性疾患の一つである糖尿病患者は増加傾向にあり、我国における糖尿病の実態を把握するために、厚生労働省は、平成１４年１１月、国民栄養調査と併せて糖尿病実態調査を実施した。その結果、糖尿病が強く疑われる人は７４０万人で、糖尿病の可能性を否定できない予備軍８８０万人を合わせると、１６２０万人が糖尿病のリスクを負っていると推計されている。
【０００４】
このような糖尿病患者および糖尿病予備軍（以下「糖尿病患者等」ともいう。）の増加に対しては、その発症予防、特に一次予防の重要性が指摘され、このような糖尿病患者等は、日本人の食生活を含めた生活行動が変わらなければ、今後さらに増加すると予測されている。すなわち、糖尿病の発症は、生活習慣とりわけ食習慣に起因することから、日常の食生活において糖尿病の発症を予防することが重要である。そのためには、糖尿病予防効果を有する食品の開発が望まれる。
【０００５】
糖尿病の発症には、血糖値の上昇や耐糖能低下などが共通に認められることから、このような現象を抑制あるいは防止することが不可欠である。しかしながら、食品成分（組成物）の中にこれらを効果的に改善する作用を備えたものは多くない。
【０００６】
また、糖尿病患者に対しては、一般に抗糖尿病剤に分類される医薬品が治療に用いられている。
例えば、消化管粘膜に存在する二糖類分解酵素（α−グルコシダーゼ）の作用を阻害し、ブドウ糖の生成を抑制することにより血糖値の上昇を抑制するα−グルコシダーゼ阻害剤が、糖尿病患者の治療に使用されている。また、近年では、インスリン抵抗性改善薬も用いられている。しかしながら、これらの抗糖尿病剤には、作用効果、副作用、安全性等の観点から種々の問題がある。
【０００７】
【特許文献１】特開２００２−１７９５８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上述したように、従来から、糖尿病予防効果を有する食品の開発が望まれてはいたが、食品成分中に血糖値の上昇や耐糖能低下などを抑制あるいは防止する作用を備えたものは多くないという問題があった。また、合成系の抗糖尿病剤についても、作用効果、副作用、安全性等の観点から種々の問題があった。
【０００９】
また、桑葉含有物質が二糖類水解酵素に対して阻害作用をもっていることはすでに知られていたが、どの二糖類水解酵素に対して強い阻害効果を示すかは明らかにされていなかった。また、桑葉含有物質を水溶液として使用したり、ショ糖に混ぜ合わせたりすることも従来から行われていたが、このような使用方法では、保存性が悪く、使用時のハンドリング性も好ましくなかった。
【００１０】
そこで、本発明者は、二糖類水解酵素を阻害する１−デオキシノジリマイシンおよびその誘導体を有する桑葉に着目し、桑葉含有物質がどの二糖類水解酵素に強い阻害効果を示すかを明らかにすると共に、上記従来技術の問題を解決すべく、保存性が良好で、使用時のハンドリング性が高い、血糖値上昇抑制等組成物および二糖類水解酵素活性阻害組成物（本発明）を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、上記従来技術の問題を解決するためになされたものであって、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素への阻害効果により、血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌刺激を低減させ得る組成物）を提供することを課題とする。また、本発明は、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等食品を提供することを課題とする。さらに、本発明は、桑葉抽出物を用いて構成された二糖類水解酵素活性阻害組成物（二糖類水解酵素活性を阻害する組成物）を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、上記課題を解決するためになされたものであって、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴としている。
【００１３】
このような構成によれば、粉末状であるため、保存が容易であって、食品等に添加する際のハンドリング性も高い血糖値上昇抑制等組成物を得ることができる。また、このような構成にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、デキストリンの影響による甘みを有するため、桑葉抽出物の香味等を緩和して、食品（例えば、水羊羹等のデザート）に対して効果的に添加することができる。
【００１４】
また、本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物においては、ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）（二糖類水解酵素への阻害効果により、血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌刺激を低減させ得る組成物たるＤＮＪ）が０．７±０．１％含まれている構成が好ましい。なぜならば、血糖値上昇抑制作用を効果的に発現させるためには、ある範囲内の濃度のものをデザート等へ加える必要があるからである。
【００１５】
本発明にかかる血糖値上昇抑制等食品は、上記課題を解決するためになされたものであって、上述したいずれかの血糖値上昇抑制等組成物と糖質との混合比率が以下の関係を有することを特徴としている。
血糖値上昇抑制等組成物：糖質＝１：５〜２０
【００１６】
上記のような混合比率としているのは、血糖値上昇抑制効果を目的に合わせて強く発現させたり、弱く発現させたりするためには、血糖値上昇抑制等組成物と糖質との比率を変える必要があるからである。
【００１７】
また、本発明にかかる血糖値上昇抑制等食品は、水羊羹、大福餅、ケーキ、クッキー、チョコレート、ガム、カステラ、パン、アイスクリーム、プディング、ゼリー、ババロア、クリーム、キャラメル、ジャム、餡、飴、羊羹、最中、および菓子のいずれかであることが好ましい。さらに、本発明にかかる血糖値上昇抑制等食品は、清涼飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、およびジュースのいずれかであることが好ましい。
【００１８】
本発明にかかる二糖類水解酵素活性阻害組成物は、上記課題を解決するためになされたものであって、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴としている。また、本発明にかかる二糖類水解酵素活性阻害組成物においては、ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれている構成が好ましい。
【００１９】
本発明にかかる二糖類水解酵素活性阻害組成物は、二糖類水解酵素の阻害効果を有するため、糖尿病、肥満、高脂血症、心臓病といった生活習慣病の予防あるいは治療に寄与する、薬剤や加工食品等を構成することができる。すなわち、この二糖類水解酵素活性阻害組成物は、血糖値上昇抑制等組成物、肥満抑制組成物等になり得る。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素への阻害効果により、血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌刺激を低減させ得る組成物）を得ることができる。また、本発明によれば、桑葉抽出物を用いて構成された血糖値上昇抑制等食品を得ることができる。さらに、本発明によれば、桑葉抽出物を用いて構成された二糖類水解酵素活性阻害組成物（二糖類水解酵素活性を阻害する組成物）を得ることができる。本発明によれば、血糖値の上昇や耐糖能低下などを抑制あるいは防止する組成物（血糖値上昇抑制等組成物、二糖類水解酵素活性阻害組成物）を、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて構成することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明の実施形態について説明する。
【００２２】
本実施形態においては、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて血糖値上昇抑制等組成物、および二糖類水解酵素活性阻害組成物を構成し、これらの組成物を用いて血糖値上昇抑制等食品を構成する。すなわち、ハンドリングが容易で利用しやすい「粉末状」に、血糖値上昇抑制等組成物、および二糖類水解酵素活性阻害組成物を構成している。
【００２３】
桑葉には、１−デオキシノジリマイシン（以下、「ＤＮＪ」という。）をはじめその誘導体がいくつか含まれている。そこで、本実施形態においては、桑葉抽出物をデキストリンに吸着させた粉末状のもの（本発明の「血糖値上昇抑制等組成物」「二糖類水解酵素活性阻害組成物」に相当）（以下、「桑葉抽出物粉末」という。）を構成し、この桑葉抽出物粉末を用いて種々の実験を行った。
【００２４】
上述したように、本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物等を粉末（桑葉抽出物粉末）としたのは、阻害効果を利用する加工食品への使用を容易にするためである。この桑葉抽出物粉末は、外観は抹茶粉末に類似し、香味はよもぎ臭に類似している。
【００２５】
また、本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末１００ｇ中には、デキストリン７４ｇを含み、ＤＮＪ含量は０．７７％である。具体的な桑葉抽出物粉末の組成は、図１に示す通りである。
【００２６】
桑葉抽出物粉末の二糖類水解酵素阻害作用を利用した血糖値上昇抑制を目的とした糖質含有加工食品（本発明の「血糖値上昇抑制等食品」に相当）を創製する場合には、糖質と桑葉抽出物粉末との混合比率が非常に重要になると考えられる。そこで、本実施形態においては、桑葉抽出物粉末とショ糖との比率を変えた溶液をラットへ経口投与し、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて観察された阻害効果がｉｎ ｖｉｖｏにおいても発現することを実証すると共に、糖尿病予防のためのデザートを創製するレシピ作成を行った。
【００２７】
以下、桑葉抽出物粉末を用いた種々の実験について具体的に説明する。
【００２８】
＜１＞ラット小腸粘膜二糖類水解酵素に対する桑葉抽出物粉末の阻害実験
【００２９】
小腸粘膜微絨毛膜の調製は、通常固形飼料で飼育したＷｉｓｔａｒ系成体雄ラット（１５０ｇ〜３００ｇ）を用いて行った。ラット小腸粘膜微絨毛膜はＫｅｓｓｌｅｒらの方法（Kessler M, Acuto O, Strelli C, Murer H, Muller Mn Smenza G (1978) A modified procedure for the rapid preparation of efficiently transporting vesicles from small intestinal brush border membranes. Biochem Biophys Acta 506 : 136-154）に準じて調製し、二糖類水解酵素活性はグルコースオキシダーゼを用いるＤａｈｌｑｖｉｓｔらの方法（Dahlqvist A (1964) Method for assay of intestinal disaccharidases. Anal Biochem 7 : 18-25）を一部改変した方法（Oku T, Konishi F, Hosoya N (1982) Mechanism of inhibitory effect of unavailable carbohydrate on intestinal calcium absorption. J Nutr 112 : 410-415）で測定した。また、タンパク質は色素を用いるＢｒａｄｆｏｒｄの方法（Bradford MM (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 72 : 248-258）に準じて測定した。
【００３０】
＜２＞ラット小腸粘膜二糖類水解酵素に対する桑葉抽出物粉末の阻害効果
上述した＜１＞の実験結果を以下に示す。
【００３１】
（２−１．スクラーゼ活性に対する桑葉抽出物粉末の阻害効果）
図３は、ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末の阻害効果を示したものである。桑葉抽出物粉末０．１ｇを蒸留水１０ｍＬに溶解した水溶液を「桑葉抽出物粉末基準液」とし、これを１００倍（グラフＬ３６）、２５０倍（グラフＬ３５）、５００倍（グラフＬ３４）、１０００倍（グラフＬ３３）、２０００倍（グラフＬ３２）に希釈して、スクラーゼに対する阻害効果を観察した。棒グラフ上の数値は、阻害物質が存在しない場合（グラフＬ３１）のスクラーゼ活性を「０」とした場合の阻害率である。
【００３２】
この図３から明らかなように、ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼ活性は１４７．８μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった（グラフＬ３１参照）。桑葉抽出物粉末が存在しないとき（グラフＬ３１）と比較すると、桑葉抽出物粉末基準液の１０００倍希釈液を加えた場合、活性は２９％阻害され（グラフＬ３３）、５００倍希釈液では４０％阻害された（グラフＬ３４）。さらに、１００倍希釈にすると、９７％が阻害された（グラフＬ３６）。すなわち、小腸粘膜微絨毛膜によるスクロースの消化は、１００倍程度希釈した桑葉抽出物粉末基準液を用いるとほぼ完全に阻害されることが明らかとなった。
【００３３】
（２−２．マルターゼ活性に対する桑葉抽出物粉末の阻害効果）
図４は、ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末の阻害効果を、スクラーゼの場合（図３参照）と同様に示したものである。具体的には、桑葉抽出物粉末基準液を、１００倍（グラフＬ４５）、２５０倍（グラフＬ４４）、１０００倍（グラフＬ４３）、２０００倍（グラフＬ４２）に希釈して、マルターゼに対する阻害効果を観察した。棒グラフ上の数値は、阻害物質が存在しない場合（グラフＬ４１）のマルターゼ活性を「０」とした場合の阻害率である。
【００３４】
この図４から明らかなように、ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼ活性は９９５．５μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった（グラフＬ４１参照）。桑葉抽出物粉末が存在しないとき（グラフＬ４１）と比較すると、桑葉抽出物粉末基準液の１０００倍希釈液を加えた場合、活性は３６％阻害され、２５０倍希釈液（グラフＬ４４）では５０％阻害された。さらに、１００倍希釈にすると、６２％が阻害された（グラフＬ４５）。すなわち、小腸粘膜微絨毛膜によるマルターゼの消化は、スクラーゼと同様に、桑葉抽出物粉末基準液の濃度に依存して阻害された。
【００３５】
（２−３．各基質に対する二糖類水解酵素のＫｍ、Ｖｍａｘおよび阻害物質によるＫｉ）
図５は、桑葉抽出物粉末のスクラーゼに対する阻害機序を明らかにするために、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍（グラフＬ５４）および１０００倍（グラフＬ５３）に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。この図５に示すように、スクロース単独の回帰直線（グラフＬ５１）とスクロースに桑葉抽出物粉末を加えた場合の回帰直線（グラフＬ５３，Ｌ５４）とは、ｙ軸上で収束した。このことは、桑葉抽出物粉末がスクラーゼに対して拮抗的に作用することを示している。スクラーゼに対するＫｍは３９．８ｍＭで、Ｖｍａｘは１１２．４μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった。また、桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物）に含まれるα−グルコシダーゼ阻害物質であるＤＮＪ濃度を用いて算出した場合のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末のＫｉは１．２×１０−４ｍＭであった。
【００３６】
図６は、桑葉抽出物粉末のマルトースに対する阻害機序を明らかにするために、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍（グラフＬ６４）に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。この図６に示すように、マルトース単独の回帰直線（グラフＬ６１）とマルトースに桑葉抽出物粉末を加えた場合の回帰直線（グラフＬ６４）もｙ軸上で収束したので、桑葉抽出物粉末は、スクラーゼと同様にマルターゼに対して拮抗的に作用することが明らかとなった。マルターゼに対するＫｍは３．６ｍＭで、Ｖｍａｘは２９４．１μ
moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった。また、桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物）に含まれるα−グルコシダーゼ阻害物質であるＤＮＪ濃度を用いて算出した場合のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末のＫｉは２．４×１０−４ｍＭであった。
【００３７】
図７は、桑葉抽出物粉末のイソマルトースに対する阻害機序を明らかにするために、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍（グラフＬ７４）に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。この図７に示すように、イソマルトース単独の回帰直線（グラフＬ７１）とイソマルトースに桑葉抽出物粉末を加えた場合の回帰直線（グラフＬ７４）もｙ軸上で収束したので、桑葉抽出物粉末は、スクラーゼ、マルターゼと同様に、イソマルターゼに対して拮抗的に作用することが明らかとなった。イソマルターゼに対するＫｍは３．７ｍＭで、Ｖｍａｘは３３．０μ moles substrate hydrolyzed/mg protein/hr であった。また、桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物）に含まれるα−グルコシダーゼ阻害物質であるＤＮＪ濃度を用いて算出した場合のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末のＫｉは１．２×１０−４ｍＭであった。
【００３８】
図８は、スクロース、マルトース、およびイソマルトースに対するスクラーゼ、マルターゼ、ならびにイソマルターゼのＫｍ、Ｖｍａｘ、および阻害物質によるＫｉをまとめたものである。この図８に示すように、Ｋｍは、マルトースおよびイソマルトースに対して３．６ｍＭ、３．７ｍＭと低く、スクロースが３９．８ｍＭと約１０倍高かった。Ｖｍａｘはマルトースに対して最も高く、スクラーゼ活性の約２．６倍、イソマルターゼ活性の約８．９倍であった。また、Ｋｉは、マルターゼに対して２．４×１０−４ｍＭで、スクラーゼやイソマルターゼの約半分であった（スクラーゼおよびマルターゼは１．２×１０−４ｍＭ）。
【００３９】
以上の結果から、桑葉抽出物粉末の二糖類水解酵素に対する阻害効果は、マルターゼやイソマルターゼよりもスクラーゼに対して強いことが明らかとなった。つまり、桑葉抽出物粉末は、スクラーゼに対して強い阻害作用を示すことが明らかとなったので、次いで、スクロース溶液に桑葉抽出物粉末を添加したものをラットに経口投与して、血糖上昇に対する阻害効果を確認するための実験を行った。
【００４０】
＜３＞ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制およびインスリン分泌抑制効果実験
【００４１】
（３−１．実験動物）
Ｗｉｓｔａｒ系成体雄ラット１６匹を固形飼料を用いて８日間グループ飼育（１ケージ３匹）した。飼料および水は自由摂取とし、室温は２２±２℃、湿度は６０±５％で、室内の照明は１２時間サイクル（明期８：００〜２０：００、暗期２０：００〜８：００）とした。
【００４２】
ラットを糖負荷試験に繰り返し用いる場合は、少なくとも３日間以上の間隔をあけた。この時の体重は１５０ｇ〜２００ｇであった。さらに、糖負荷試験に用いる場合は１２時間以上絶食させ、水のみを与えた。
【００４３】
（３−２．試験溶液の調製）
ラットへ桑葉抽出物粉末をスクロースと同時に経口投与して、血糖値上昇抑制効果を観察するために、試験溶液３種類を以下のように調製した。
（１）スクロース０．６ｇ／ｍＬ水溶液（桑葉抽出物粉末無添加：コントロール）
（２）（スクロース０．６ｇ＋桑葉抽出物粉末４０ｍｇ）／ｍＬ水溶液
（３）（スクロース０．６ｇ＋桑葉抽出物粉末１００ｍｇ）／ｍＬ水溶液
【００４４】
すなわち、桑葉抽出物粉末（本発明にかかる「血糖値上昇抑制等組成物」に相当）とスクロース（本発明にかかる「糖質」に相当）との比率が、上記「（２）」の場合が１：１５であり、上記「（３）」の場合が１：６である。
【００４５】
（３−３．実験プロトコール）
試験溶液（スクロース６００ｍｇ相当）は、胃ゾンデを用いてラットへ投与した。採血は、尾静脈を穿刺してヘマトクリット管へ採取し、試験物質投与前（空腹時血糖、０分値）と、３０分、６０分、９０分、１２０分、１５０分、１８０分の計７回行った。採血後、１１０００ｒｐｍ、室温で５分間、ヘマトクリット遠心機を用いて遠心分離し、得られた血漿をグルコースおよびインスリン濃度測定に用いた。
【００４６】
（３−４．血漿グルコースおよび血漿インスリンの測定方法）
血漿グルコースは、グルコースオキシダーゼを用いるＫｕｎｓｔらの方法（Kunst A,Draegar B,Ziegenhorn J (1984) Colorimetric methods with glucose oxidase and peroxidase. In : Methods of Enzymatic Analysis ( HU Berbmeyer ed),3rd edn, Vol.VI,p178-185 Verlag Chemie,Weinheim,Germany.）に準じて測定した。血漿１０μＬを小試験管に採取し、ＧＯＤ試薬（図２参照）１．５ｍＬを加え、３７℃で１５分間反応させた後、分光光度計を用いて波長５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。
血漿インスリン濃度は、モルモット抗体を使用した測定キットを用い、酵素免疫法で測定した。
【００４７】
＜４＞ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制効果
上述した＜３＞の実験結果を以下に示す。
【００４８】
図９は、ラットの血糖値の経時的変化を示したグラフであり、図１０は、ラットの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。また、図１１は、血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００４９】
血糖値は、桑葉抽出物粉末１００ｍｇ添加溶液（以下、「１００添加溶液」という。）を投与した場合（グラフＬ９３，Ｌ１０３）、６０分後にピークに達し、桑葉抽出物粉末無添加溶液（以下、「無添加溶液」という。）を投与した場合（グラフＬ９１，Ｌ１０１）に比べ５０％以上低かった。桑葉抽出物粉末４０ｍｇ添加溶液（以下、「４０添加溶液」という。）を投与した場合（グラフＬ９２，Ｌ１０２）の血糖値も６０分後にピークに達し、血糖値は１００添加溶液を投与した場合に比べてやや高かったが、９０分以降もやや高い値を維持した。（図９および図１０参照）
【００５０】
図９および図１０から明らかなように、桑葉抽出物粉末を添加したいずれの場合も、３０分および６０分後の血糖値は、コントロールである無添加溶液を投与した場合に比べて、有意に低かった。
【００５１】
血漿インスリン濃度は、血糖値の変化と異なり、無添加溶液を投与した場合（グラフＬ１１１）および４０添加溶液を投与した場合（グラフＬ１１２）において、投与３０分後にピークに達した。１００添加溶液を投与した場合（グラフＬ１１３）においては、血漿インスリン濃度はほとんど上昇しなかった。４０添加溶液を投与した場合、投与３０分後に無添加溶液の約５０％に達し、９０分以降は血糖値に対応して低い血漿インスリン濃度を維持した（図１１参照）。
【００５２】
図１１から明らかなように、４０添加溶液および１００添加溶液を投与した場合、３０分後のインスリン濃度は、無添加溶液を投与した場合に比べて有意に低かった。また、４０添加溶液を投与した場合と、１００添加溶液を投与した場合とを比較すると、投与３０分、１５０分、および１８０分後のインスリン濃度は、１００添加溶液を投与した場合の方が４０添加溶液を投与した場合に比べて有意に低かった。
【００５３】
以上の結果から、桑葉抽出物粉末の二糖類水解酵素に対する阻害効果は、経口投与した場合にも濃度依存的に発現し、血糖上昇を抑制することが明らかとなった。すなわち、以上の実験結果から、ラットへ桑葉抽出物粉末溶液をスクロースと共に投与した場合に、血糖上昇抑制効果があることが確認されたため、次いで、スクロース溶液に桑葉抽出物粉末を添加したものをヒトへ摂取させ、血糖上昇に対する抑制効果を観察した。
【００５４】
＜５＞ヒトにおける桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制およびインスリン分泌抑制ならびに呼気水素ガス排出試験（桑葉抽出物粉末添加スクロース溶液を摂取させた場合の血糖上昇抑制効果等）
【００５５】
スクロース摂取による血糖上昇に対する桑葉抽出物粉末の抑制効果を観察するために、試験溶液３種類を以下のように調製した。
（１）スクロース３０ｇ／１００ｍＬ水溶液（桑葉抽出物粉末無添加：コントロール）
（２）（スクロース３０ｇ＋桑葉抽出物粉末１．２ｇ）／１００ｍＬ水溶液
（３）（スクロース３０ｇ＋桑葉抽出物粉末３．０ｇ）／１００ｍＬ水溶液
【００５６】
すなわち、桑葉抽出物粉末（本発明にかかる「血糖値上昇抑制等組成物」に相当）とスクロース（本発明にかかる「糖質」に相当）との量比は、上記「（２）」の場合で１：２５であり、上記「（３）」の場合で１：１０である。本実施形態においては、これら３種類の試験溶液をヒトへ経口摂取させ、血糖上昇に対する抑制効果を観察した。
【００５７】
図１２は、ヒトの血糖値の経時的変化を示したグラフであり、図１３は、ヒトの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。より具体的には、図１２および図１３は、桑葉抽出物粉末無添加溶液（以下、「無添加溶液」という。）、桑葉抽出物粉末１．２ｇ添加溶液（以下、「１．２添加溶液」という。）、および桑葉抽出物粉末３．０ｇ添加溶液（以下、「３．０添加溶液」という。）をヒトに摂取させたときの、血糖値およびその変化量の経時的変化を示したグラフである。また、図１４は、血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００５８】
３．０添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１２３，Ｌ１３３）、血糖値の上昇はほぼ完全に抑制され、３０分後の血糖値は無添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１２１，Ｌ１３１）に比べて有意に低かった。１．２添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１２２，Ｌ１３２）の血糖値は、無添加溶液を摂取した場合と３．０添加溶液を摂取した場合のほぼ中間であったが、投与３０分後の血糖値は無添加溶液を摂取した場合と比較すると有意に低かった。１．２添加溶液を摂取した場合と３．０添加溶液を摂取した場合の３０分後の血糖値を比較すると、３．０添加溶液を摂取した方が、１．２添加溶液を摂取した場合よりも有意に低かった。（図１２および図１３参照）
【００５９】
上述したように、図１４は、上記実験時における血漿インスリン濃度の経時的変化を示したものである。グラフＬ１４１は、無添加溶液を摂取した場合を示している。血漿インスリン濃度は、１．２添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１４２）、および３．０添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１４３）のいずれの場合も、ごく僅かな上昇を示す程度で、その後はほとんど空腹時レベルを維持した。すなわち、スクロース３０ｇ摂取によるインスリン分泌は、桑葉抽出物粉末１．２ｇまたは桑葉抽出物粉末３．０ｇの同時摂取によって効果的に抑制された。
【００６０】
これらの結果は、スクロースと桑葉抽出物粉末との量比を２５：１にして同時にヒトに摂取させた場合、血糖上昇に対する抑制効果を有することを示し、スクロースと桑葉抽出物粉末との量比を１０：１にしてヒトに同時に摂取させた場合、より効果的に血糖上昇に対する抑制効果が発揮されることを示している。
【００６１】
桑葉抽出物粉末の摂取によってスクロースの消化が阻害されると、スクロースは大腸へ移行して腸内細菌によって発酵分解されることが考えられる。そこで、本実施形態においては、血糖上昇に対する抑制効果を観察すると同時に、呼気を経時的に採取して水素ガス排出動態を観察した。
【００６２】
呼気ガス採取は、水溶液摂取時において、連続した６時間に計７回実施した。水溶液摂取前に１回目の呼気を採取し（空腹時呼気ガス濃度、０分値）、その後は水溶液摂取後定められた時間まで、１時間毎に採取した。呼気中の水素ガスおよびメタンガス濃度は、ガスクロマトグラフィ法の手法を用いた呼気水素／メタン分析装置を用いて測定した。
【００６３】
無添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１５１）では、スクロースはほぼ完全に消化・吸収されるので、呼気への水素ガス排出はほとんど観察されなかった。これに対し、１．２添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１５２）には、呼気水素ガスは摂取４時間後から排出されはじめて５時間後にピークに達し、無添加溶液の場合よりも有意に高かった。３．０添加溶液を摂取した場合（グラフＬ１５３）には、呼気水素ガスは摂取２時間後から排出されはじめて３時間後にピークに達し、その後６時間まで高いレベルを維持した。（図１５参照）
【００６４】
図１６は、図１５に示された呼気水素ガス排出濃度曲線の６時間までの累積面積を示したものである。グラフＬ１６１は無添加溶液を摂取した場合、グラフＬ１６２は１．２添加溶液を摂取した場合、およびグラフＬ１６３は３．０添加溶液を摂取した場合を示している。この図１６から明らかなように、呼気水素ガス排出量は、桑葉抽出物粉末添加量に濃度依存的に増加し、３．０添加溶液を摂取した場合（Ｌ１６３）は１．２添加溶液を摂取した場合（Ｌ１６２）に比べて、呼気水素ガス排出量が有意に増加することが観察された。
【００６５】
図１２〜図１６に示された結果は、ヒトが桑葉抽出物粉末を糖質食品と一緒に摂取すると血糖上昇が抑制され、インスリン分泌が刺激されないことを示唆している。一方、呼気水素ガス排出量の観察結果からは、桑葉抽出物粉末によって消化を免れたショ糖は大腸に到達して腸内細菌によって発酵分解されることが示された。これらの結果は、桑葉抽出物粉末をブレンドした血糖を上昇させない糖質甘味料創製の可能性を示すものである。
【００６６】
＜６＞ヒトにおける桑葉抽出物粉末の血糖値上昇抑制およびインスリン分泌抑制試験（桑葉抽出物粉末添加デザートを摂取させた場合の血糖上昇抑制効果等）
上述したように、桑葉抽出物粉末を添加したスクロース溶液をヒトに摂取させると、血糖値上昇が抑制されることが明らかとなったので、血糖値上昇を抑制する（いわゆる糖尿病予防の）デザートを作成し、その効果を実証した。桑葉抽出物粉末の阻害効果は、糖質、特にショ糖との量比によって異なるので、デザートを作成する際には、有意な血糖値上昇抑制効果が観察された桑葉抽出物粉末：糖質（ショ糖）の重量比が１：１０を基準にした。また、桑葉抽出物粉末においては、マルトースよりもスクロースにおいて阻害効果が顕著に観察された。そこで、作成するデザートは、澱粉よりもショ糖を主成分とし、さらに桑葉抽出物粉末の味、匂い、および色等の影響が少ないと考えられるものを検討した。その結果、「あん」を使用した「水羊羹」と「大福餅」を選択した。
【００６７】
（６−１．桑葉抽出物粉末添加デザートの作成）
図２３は、各デザート（水羊羹、および大福餅）の材料・分量を示したものである。また、図２４は、各デザート（水羊羹、および大福餅）の栄養素成分値を示したものである。以下に各デザートの作成手順を示す。
【００６８】
（１）水羊羹：一人当たり７５ｇ（スクロース３０ｇ、桑葉抽出物粉末３ｇを含有）
（i）まず、あんを作る。具体的には、小豆を一度ゆでこぼし３０分煮た後、砂糖を加えて煮つめ、桑葉抽出物粉末を混ぜ込む。（ii）次に、寒天と水とを合わせて火にかけ、沸騰させる。（iii）次に、（ii）に（i）を加え再び火にかけ、煮つめる。（iv）最後に、可溶化したあん７５ｇ（スクロース３０ｇ相当）を容器に入れ、冷やし固める。
【００６９】
（２）大福餅：一人当たり７６ｇ（スクロース３０ｇ、桑葉抽出物粉末３ｇを含有）
（i）まず、あんを作る（上記水羊羹と同様の手順）。（ii）次に、皮を作る。具体的には、白玉粉、砂糖、および水をよく攪拌した後、網でろ過する。沈殿しないようにこのろ過液をかき混ぜ、速やかに電子レンジ（５００Ｗ）にセットして３分間過熱する。（iii）最後に、皮２２ｇ（スクロース４．５ｇ相当）に片栗粉少量を振りかけ、あん５４ｇ（スクロース２５．５ｇ相当）を包み込む。
【００７０】
（６−２．試験物質の調製）
桑葉抽出物粉末を添加したデザートを摂取したときの血糖値の変化を観察するために、各デザートの対照として、桑葉抽出物粉末無添加のものを同様に作成した。作成した試験物質は、以下の２種類（水羊羹、大福餅）４品目である。
（１）桑葉抽出物粉末無添加水羊羹
（２）桑葉抽出物粉末添加水羊羹
（３）桑葉抽出物粉末無添加大福餅
（４）桑葉抽出物粉末添加大福餅
【００７１】
（６−３．実験プロトコール）
被験者には前日の夕食を２０時までに摂取させ、その後は水およびお茶以外の飲食を禁止した。被験者には、予め調製済みの試験物質を定められた実験スケジュールに従って摂取させ、試験物質は１０分以内に摂取するように指示した。試験物質摂取後の口腔内違和感を解消するために、水およびお茶など１００〜２００ｍＬ程度の摂取を認めた。
【００７２】
採血は、手指先端を穿刺し、ヘマトクリット管を用いて試験物質投与前（空腹時血糖、０分値）と、投与後３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分の計７回行った。採血後、１１０００ｒｐｍ、室温で５分間、ヘマトクリット遠心機を用いて遠心分離し、得られた血漿をグルコースおよびインスリン濃度測定に用いた。
【００７３】
血漿グルコースは、先に説明した場合と同様に、グルコースオキシダーゼを用いるＫｕｎｓｔらの方法（Kunst A,Draegar B,Ziegenhorn J (1984) Colorimetric methods with glucose oxidase and peroxidase. In : Methods of Enzymatic Analysis ( HU Berbmeyer ed),3rd edn, Vol.VI,p178-185 Verlag Chemie,Weinheim,Germany.）に準じて測定した。血漿インスリン濃度も先に説明した場合と同様に、モルモット抗体を使用した測定キットを用い、酵素免疫法で測定した。
【００７４】
（６−４．桑葉抽出物粉末添加デザートを摂取させた場合の血糖値上昇抑制効果）
上述した実験結果を以下に示す。
【００７５】
図１７は、水羊羹（７５ｇ）を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。また、図１８は、水羊羹（７５ｇ）を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。さらに、図１９は、水羊羹（７５ｇ）を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００７６】
これらの図から明らかなように、桑葉抽出物粉末無添加の水羊羹（グラフＬ１７１，Ｌ１８１）では、血糖値は水羊羹摂取３０分後にピーク（１４５ｍｇ／１００ｍＬ）に達し、９０分後には空腹時レベルに戻った。これに対し、桑葉抽出物粉末添加の水羊羹（グラフＬ１７２，Ｌ１８２）を摂取した場合には、血糖値はごく僅かした上昇せず低い濃度を維持した（１０６ｍｇ／１００ｍＬ）。また、血漿インスリン濃度も血糖値と類似したパターンを示し、桑葉抽出物粉末を添加した場合（グラフＬ１９２）には、血漿インスリン濃度は全く上昇しなかった（図１９参照）。
以上の結果から、水羊羹の場合には、桑葉抽出物粉末を添加することによって、血糖値の上昇はほぼ完全に抑制されることが明らかとなった。
【００７７】
図２０は、大福餅（７６ｇ）を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。また、図２１は、大福餅（７６ｇ）を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。さらに、図２２は、大福餅（７６ｇ）を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【００７８】
これらの図から明らかなように、桑葉抽出物粉末を添加した大福餅を摂取した場合（グラフＬ２０２，Ｌ２１２）、血糖値は摂取３０分後に僅かに上昇し（桑葉抽出物粉末無添加（グラフＬ２０１，Ｌ２１１）１３５ｍｇ／１００ｍＬに対して１１０ｍｇ／１００ｍＬ）、そのレベルを２時間半後まで維持した。また、血漿インスリン濃度は、桑葉抽出物粉末を添加することによって（グラフＬ２２２）、ほとんど上昇しなかった（図２２参照）。
以上の結果から、大福餅の場合には、桑葉抽出物粉末添加による血糖値上昇抑制効果は水羊羹に比べて弱かったが、インスリン分泌は水羊羹の場合と同様にほぼ完全に抑制されることが明らかとなった。
【００７９】
（６−５．桑葉抽出物粉末添加デザートの官能検査）
上述した水羊羹および大福餅について、５点評価法を用いた官能検査を実施し、消費者に受け入れられるか否かを検討した。
【００８０】
桑葉抽出物粉末は、黄緑色で桑葉特有の香味を感じさせるため、水羊羹１人分としてこの桑葉抽出物粉末を３ｇ添加すると、無添加のものがあずき色であるのに対して、添加したものは濃緑色を呈した。しかしながら、外観の色によって摂食を拒否する者はいなかった。また、香味は桑葉抽出物粉末添加によって草餅のような風味を示し、不快感を示す者はなかった。大福餅は、外側を薄皮で包むために、色調は桑葉抽出物粉末添加と無添加との間にほとんど差異を感じさせなかった。口に入れて咀嚼すると、水羊羹と同様に、僅かに草餅のような香味を感じさせた。
【００８１】
桑葉抽出物粉末を添加した水羊羹および大福餅の外観、つや、舌ざわり、歯ごたえ、色彩等は、桑葉抽出物粉末無添加のそれらと遜色なく、多くの被験者に好意的に受け入れられた。
【００８２】
以上のことから、桑葉抽出物粉末による血糖値上昇抑制効果を利用した糖尿病等の予防を目的としたデザートは嗜好の面からも受け入れられることが実証され、桑葉抽出物粉末を用いることによって、比較的容易に血糖値上昇抑制を目的とした加工食品の開発が可能となる。
【００８３】
＜まとめ＞
本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）によれば、ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対して最も強い阻害を示し、次がマルターゼおよびイソマルターゼに対する阻害で、いずれも拮抗阻害であることが確認された。
【００８４】
また、ラットにおける桑葉抽出物粉末添加スクロース溶液投与時の血糖値上昇は、桑葉抽出物粉末無添加溶液を投与した場合に比べて有意に低いという結果から、桑葉抽出物粉末による抑制効果が確認された。血漿インスリン濃度も桑葉抽出物粉末添加によって有意に低下した。すなわち、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）の二糖類水解酵素に対する阻害効果はｉｎ ｖｉｖｏにおいても発現することが確認された。
【００８５】
また、ヒトへ桑葉抽出物粉末１．２ｇを添加したスクロース溶液、あるいは桑葉抽出物粉末３．０ｇを添加したスクロース溶液を摂取させた場合、血糖値上昇は桑葉抽出物粉末無添加スクロース溶液を摂取した場合に比べて有意に抑制され、その抑制効果は濃度依存的であった。血漿インスリン濃度も桑葉抽出物粉末添加によって有意に低下した。呼気水素ガス排出量は桑葉抽出物粉末１．２ｇ添加および３．０ｇ添加スクロース溶液摂取で有意に増加した。すなわち、桑葉抽出物粉末によって消化を免れたスクロースはプレバイオティクス効果を発現することが示唆された。
【００８６】
さらに、桑葉抽出物粉末添加デザートである水羊羹および大福餅を摂取することによって、血糖値上昇およびインスリン分泌は、いずれのデザートに関しても有意に抑制された。特に、澱粉が少なくショ糖を主成分とした水羊羹において、抑制効果はより顕著であった。また、特にデータは示さなかったが、桑葉抽出物粉末添加デザートを摂取した場合においても、１．２添加溶液や３．０添加溶液を摂取した場合（図１５等参照）と同様に、呼気水素ガス排出量は有意に増加した。
【００８７】
以上の結果、本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物（桑葉抽出物粉末）を用いて構成された加工食品（血糖値上昇抑制等食品）は、血糖コントロールを必要とする糖尿病患者やその他の生活習慣病予防へ向けて血糖値上昇抑制効果を発揮し、さらには腸内細菌改善効果によって健康の維持・増進を図る有効な機能性を備えた食品になると考えられる。
【００８８】
本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素活性阻害組成物）によれば、二糖類水解酵素の阻害効果を有することにより、糖尿病、肥満、高脂血症、心臓病といった生活習慣病の予防あるいは治療に寄与する、薬剤や加工食品等を構成することができる。
【００８９】
本実施形態にかかる血糖値上昇抑制等組成物は、上記の通り、二糖類水解酵素の阻害効果を有することによって、糖尿病、肥満、高脂血症、心臓病といった生活習慣病の予防あるいは治療に寄与する。したがって、薬剤として利用可能なのは勿論のこと、ショ糖を甘味料として添加する食品（クッキーや菓子類等）等の作成段階で、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）を適当量（ショ糖使用量によって添加すべき量は変化する）添加することによって、糖尿病等を予防可能な食品（血糖値上昇抑制等食品）を構成することができる。効率よく効果（血糖値上昇抑制等の効果）を引き出すためには、桑葉抽出物粉末と糖質との比率がポイントとなる。
【００９０】
なお、本発明は、上記実施形態に限定されるものではなく、必要に応じて種々の変更を加えて実施することも可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に含まれる。
【００９１】
上記実施形態においては、桑葉抽出物粉末：糖質（ショ糖）の重量比が１：１０を基準にしてデザート（血糖値上昇抑制等食品）を作る場合について説明したが、本発明はこの構成に限定されない。したがって、例えば、本発明にかかる桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）を用いて作るデザート（血糖値上昇抑制等食品）中の桑葉抽出物粉末と糖質との重量比は、以下の関係を有すればよい。
血糖値上昇抑制等組成物：糖質＝１：５〜２０
【００９２】
また、上記実施形態においては、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）中にＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７７％含まれる場合について説明したが、本発明はこの構成に限定されない。したがって、例えば、桑葉抽出物粉末（血糖値上昇抑制等組成物）中に含まれるＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％の範囲内であってもよい。
【００９３】
さらに、上記実施形態においては、デザート（血糖値上昇抑制等食品）として水羊羹と大福餅とを作る場合について説明したが、本発明はこの構成に限定されない。したがって、例えば、本発明にかかるデザート（血糖値上昇抑制等食品）は、ケーキ（シフォンケーキ等の各種ケーキ）、クッキー、チョコレート、ガム、カステラ、パン、アイスクリーム、プディング、ゼリー、ババロア、クリーム、キャラメル、ジャム、餡、飴、羊羹、最中、および菓子等のいずれかであってもよい。また、飲料物たる血糖値上昇抑制等食品としては、清涼飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、およびジュース等のいずれかであってもよい。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物（二糖類水解酵素活性阻害組成物）は、二糖類水解酵素活性を阻害するので、糖質含有食品と一緒に摂取すれば、血糖上昇抑制とインスリン分泌抑制が起こり、糖尿病予防あるいは症状の改善の抑制効果（高血糖の抑制等の効果）が期待できる。
【００９５】
糖尿病患者および糖尿病予備軍は、甘いデザート等を好んで食べるが、食事療法ではこれらの食品の摂取が制限される。高血糖の人々のＱＯＬ（生活品質）を高めるためには、血糖を上昇させないデザートや菓子類等の開発が必要である。本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物を用いれば、血糖値を上昇させない甘みをもったデザートをはじめとする加工食品の開発が可能となり、糖尿病患者の食事療法にも貢献することができる。
【００９６】
また、本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物によれば、糖質の消化吸収阻害によってエネルギ摂取が制限されるので、肥満防止にも役立つ。肥満が生活習慣病のリスクファクタであることを考えると、血糖値を上昇させない加工食品の開発は、生活習慣病予防にも寄与することが期待でき、今後の高齢化社会における医療費削減に寄与するものと考えられる。
【００９７】
現在、特殊な機能を強調した様々な加工食品が開発され、保健機能食品として市販されているが、本発明にかかる血糖値上昇抑制等組成物等を用いれば、副作用等がなく安全性が高い、糖尿病予防食品等の保健機能食品を開発可能であるため、その需要は高まるものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末の組成を示したものである
【図２】使用したＧＯＤ試薬の組成を示したものである。
【図３】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する阻害効果を示したものである。
【図４】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する阻害効果を示したものである。
【図５】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のスクラーゼに対する阻害機序を示すグラフであって、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍および１０００倍に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。
【図６】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のマルトースに対する阻害機序を示すグラフであって、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。
【図７】本実施形態にかかる桑葉抽出物粉末のイソマルトースに対する阻害機序を示すグラフであって、桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したものを用いた場合のＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットを示したものである。
【図８】スクロース、マルトース、およびイソマルトースに対するスクラーゼ、マルターゼ、ならびにイソマルターゼのＫｍ、Ｖｍａｘ、および阻害物質によるＫｉをまとめたものである。
【図９】ラットの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図１０】ラットの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図１１】ラットの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図１２】ヒトの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図１３】ヒトの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図１４】ヒトの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図１５】ヒトの呼気水素ガス排出濃度の経時敵変化を示したグラフである。
【図１６】図１５に示された呼気水素ガス排出濃度曲線の６時間までの累積面積を示したものである。
【図１７】水羊羹を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図１８】水羊羹を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図１９】水羊羹を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図２０】大福餅を摂取したときの血糖値の経時的変化を示したグラフである。
【図２１】大福餅を摂取したときの血糖値変化量の経時的変化を示したグラフである。
【図２２】大福餅を摂取したときの血漿インスリン濃度の経時的変化を示したグラフである。
【図２３】デザート（水羊羹、および大福餅）の材料・分量を示したものである。
【図２４】デザート（水羊羹、および大福餅）の栄養素成分値を示したものである。
【符号の説明】
【００９９】
Ｌ３１…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼ活性を示す棒グラフ
Ｌ３２…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３３…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３４…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３５…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２５０倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ３６…ラット小腸粘膜微絨毛膜のスクラーゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４１…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼ活性を示す棒グラフ
Ｌ４２…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４３…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１０００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４４…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を２５０倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ４５…ラット小腸粘膜微絨毛膜のマルターゼに対する桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１００倍に希釈したもの）の阻害効果を示す棒グラフ
Ｌ５１…スクロース単独の回帰直線
Ｌ５３…スクロースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を１０００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ５４…スクロースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ６１…マルトース単独の回帰直線
Ｌ６４…マルトースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ７１…イソマルトース単独の回帰直線
Ｌ７４…イソマルトースに桑葉抽出物粉末（桑葉抽出物粉末基準液を５００倍に希釈したもの）を加えた場合の回帰直線
Ｌ９１…無添加溶液を投与した場合のラットの血糖値を示すグラフ
Ｌ９２…４０添加溶液を投与した場合のラットの血糖値を示すグラフ
Ｌ９３…１００添加溶液を投与した場合のラットの血糖値を示すグラフ
Ｌ１０１…無添加溶液を投与した場合のラットの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１０２…４０添加溶液を投与した場合のラットの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１０３…１００添加溶液を投与した場合のラットの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１１１…無添加溶液を投与した場合のラットの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１１２…４０添加溶液を投与した場合のラットの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１１３…１００添加溶液を投与した場合のラットの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１２１…無添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値を示すグラフ
Ｌ１２２…１．２添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値を示すグラフ
Ｌ１２３…３．０添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値を示すグラフ
Ｌ１３１…無添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１３２…１．２添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１３３…３．０添加溶液を摂取した場合のヒトの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１４１…無添加溶液を摂取した場合のヒトの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１４２…１．２添加溶液を摂取した場合のヒトの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１４３…３．０添加溶液を摂取した場合のヒトの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１５１…無添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出量を示すグラフ
Ｌ１５２…１．２添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出量を示すグラフ
Ｌ１５３…３．０添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出量を示すグラフ
Ｌ１６１…無添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出濃度曲線の累積面積を示す棒グラフ
Ｌ１６２…１．２添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出濃度曲線の累積面積を示す棒グラフ
Ｌ１６３…３．０添加溶液を摂取した場合の水素ガス排出濃度曲線の累積面積を示す棒グラフ
Ｌ１７１…水羊羹（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ１７２…水羊羹（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ１８１…水羊羹（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１８２…水羊羹（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ１９１…水羊羹（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ１９２…水羊羹（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ２０１…大福餅（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ２０２…大福餅（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値を示すグラフ
Ｌ２１１…大福餅（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ２１２…大福餅（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血糖値変化量を示すグラフ
Ｌ２２１…大福餅（桑葉抽出物粉末無添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
Ｌ２２２…大福餅（桑葉抽出物粉末添加）を摂取したときの血漿インスリン濃度を示すグラフ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴とする血糖値上昇抑制等組成物。
【請求項２】
ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれている請求項１に記載の血糖値上昇抑制等組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載された血糖値上昇抑制等組成物と糖質との混合比率が以下の関係を有することを特徴とする血糖値上昇抑制等食品。
血糖値上昇抑制等組成物：糖質＝１：５〜２０
【請求項４】
水羊羹、大福餅、ケーキ、クッキー、チョコレート、ガム、カステラ、パン、アイスクリーム、プディング、ゼリー、ババロア、クリーム、キャラメル、ジャム、餡、飴、羊羹、最中、および菓子のいずれかである請求項３に記載の血糖値上昇抑制等食品。
【請求項５】
清涼飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、およびジュースのいずれかである請求項３に記載の血糖値上昇抑制等食品。
【請求項６】
桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴とする二糖類水解酵素活性阻害組成物。
【請求項７】
ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれている請求項６に記載の二糖類水解酵素活性阻害組成物。
【請求項１】
桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴とする血糖値上昇抑制等組成物。
【請求項２】
ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれている請求項１に記載の血糖値上昇抑制等組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載された血糖値上昇抑制等組成物と糖質との混合比率が以下の関係を有することを特徴とする血糖値上昇抑制等食品。
血糖値上昇抑制等組成物：糖質＝１：５〜２０
【請求項４】
水羊羹、大福餅、ケーキ、クッキー、チョコレート、ガム、カステラ、パン、アイスクリーム、プディング、ゼリー、ババロア、クリーム、キャラメル、ジャム、餡、飴、羊羹、最中、および菓子のいずれかである請求項３に記載の血糖値上昇抑制等食品。
【請求項５】
清涼飲料、炭酸飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、およびジュースのいずれかである請求項３に記載の血糖値上昇抑制等食品。
【請求項６】
桑葉抽出物をデキストリンに吸着させて粉末状に構成されたことを特徴とする二糖類水解酵素活性阻害組成物。
【請求項７】
ＤＮＪ（１−デオキシノジリマイシン）が０．７±０．１％含まれている請求項６に記載の二糖類水解酵素活性阻害組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【公開番号】特開２００６−２７３７９７（Ｐ２００６−２７３７９７Ａ）
【公開日】平成１８年１０月１２日（２００６．１０．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−９８９１５（Ｐ２００５−９８９１５）
【出願日】平成１７年３月３０日（２００５．３．３０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１６年１０月１５日 日本食物繊維学会第９回学術集会発行の「日本食物繊維学会 第９回学術集会講演要旨集」に発表
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００４年１０月２１日 特定非営利活動法人日本栄養改善学会発行の「栄養学雑誌第６２巻５号特別付録 第５１回 日本栄養改善学会学術総会講演集」に発表
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１７年２月４日 県立長崎シーボルト大学大学院人間科学研究科発行の「平成１６年度 修士論文抄録集」に発表
【出願人】（５０５２２５１９７）長崎県公立大学法人 (31)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１０月１２日（２００６．１０．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月３０日（２００５．３．３０）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１６年１０月１５日 日本食物繊維学会第９回学術集会発行の「日本食物繊維学会 第９回学術集会講演要旨集」に発表
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００４年１０月２１日 特定非営利活動法人日本栄養改善学会発行の「栄養学雑誌第６２巻５号特別付録 第５１回 日本栄養改善学会学術総会講演集」に発表
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１７年２月４日 県立長崎シーボルト大学大学院人間科学研究科発行の「平成１６年度 修士論文抄録集」に発表
【出願人】（５０５２２５１９７）長崎県公立大学法人 (31)
【Ｆターム（参考）】
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