褥瘡予防材及びこれを含む褥瘡予防用タンパク質水溶液
【課題】皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる褥瘡予防材を提供することを目的とする。
【解決手段】ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である褥瘡予防材。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【解決手段】ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である褥瘡予防材。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、褥瘡予防材及びこれを含む褥瘡予防用タンパク質水溶液に関する。
【背景技術】
【０００２】
褥瘡を予防する方法としては、皮膚弾性を向上する方法、圧負荷を分散させる方法、除圧する方法等が一般的である。除圧のために充分な体位変換や体の清拭等の介護がなされている場合には、いわゆる床擦れと称される褥瘡の発症がかなりの割合で予防できるものの、現在の公共的又は在宅での介護の現状では理想的な人的介護を求めるには限界がある。
このような現状から、装具面での褥瘡発症の予防を図るために、幾つかの提案がなされている。一般的に、寝具用のマット素材として利用されている発泡ポリウレタン等にあっては、その硬度の硬いものは部分的に体位の圧力が集中しがちで、褥瘡の発症を誘発する傾向がある。一方、柔らかい場合には圧力分散の効果があって、仙骨部位等への圧力集中は排除できるものの、患者の体位が沈み込むとともに屈曲してしまい、他の障害を誘発する等、いずれも二律背反的な技術的不完全さを有している（例えば、特許文献１及び２）。
また、皮膚弾性の向上により予防する方法がある。皮膚には、褥瘡になりやすい褥瘡後発部位と、褥瘡になりにくい褥瘡非好発部位がある。褥瘡好発部位（仙骨部、踵骨）は、弾性繊維（エラスチンやコラーゲン）が少なく、加齢とともに弾性繊維が減少し、皮膚弾性が低下する部位である。褥瘡非好発部位（腹部）は、好発部位よりも弾性繊維が多く、皮膚弾性が高いため、褥瘡になりにくいとされている（例えば、非特許文献１）。
そこで、褥瘡好発部位の皮膚弾性を向上させるために、特許文献３のような光生体刺激を用いた皮膚弾性の向上が用いられている。しかしながら、この方法は、褥瘡非好発部位の皮膚弾性と同程度にまで皮膚弾性を向上させることができるものではなく、褥瘡予防にはあまり効果がない。
また、弾性繊維であるエラスチンペプチドを経口投与して皮膚弾性を向上させる方法もある（非特許文献２）が、持続的な皮膚弾性の向上には繋がらない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平５−０７６６６３号公報
【特許文献２】特開平９−２７１４２４号公報
【特許文献３】特表２００６−５０１９６０号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｊ Ｔｉｓｓｕｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ，２００１，１１（２），５９−６３
【非特許文献２】神尾美智子著、「豚由来エラスチンペプチドの長期摂取が皮膚に及ぼす影響」、社団法人日本栄養・食糧学会発行「第６２回日本栄養・食糧学会大会講演要旨集」、平成２０年４月１日、発表コードＡ００１６９−００００４−１０６２７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる褥瘡予防材を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の褥瘡予防材は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる。
また、本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、皮膚に注入することにより、皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明において、人工タンパク質（Ａ）は、動物由来成分を排除するために、人工的に製造されるものであり、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって製造できる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、人工タンパク質（Ａ）を作製できるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【０００９】
本発明の褥瘡予防材は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である褥瘡予防材である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【００１０】
人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％であるタンパク質であるが、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、９〜５５％が好ましく、さらに好ましくは２０〜５５％である。
人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、人工タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、人工タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／｛（Ａ）の全アミノ酸の数｝×１００
【００１１】
本発明においては、人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が上記範囲であることで、（Ａ）が適度な分解性を有し、皮膚弾性を向上させることができ、長期的に皮膚弾性を維持することができる。
【００１２】
人工タンパク質（Ａ）は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するが、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が連続する個数は、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、２〜１００個が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個であり、特に好ましくは２〜１０個である。
【００１３】
本発明において、人工タンパク質（Ａ）は、下記アミノ酸配列（Ｘ）を少なくとも１個及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を少なくとも１個有するものである。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【００１４】
アミノ酸配列（Ｘ）としては、細胞親和性及び皮膚弾性を向上する観点から、ＶＰＧＶＧ配列（２）及び／又はＧＶＧＶＰ配列（３）が好ましい。
【００１５】
アミノ酸配列（Ｘ’）として、具体的には、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）、ＧＫＧＲＰ配列（９）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）等が挙げられる。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、細胞親和性及び皮膚弾性を向上する観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）、及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群より選ばれる１種以上の配列が好ましく、さらに好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及び／又はＧＫＧＫＰ配列（８）である。
【００１６】
人工タンパク質（Ａ）は、細胞親和性、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）の全アミノ酸の０．１〜２０％がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。
【００１７】
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、具体的には、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列である。（なお、ｂ〜ｄは、それぞれ、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数であり、２〜２００の整数である）。
人工タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有してもいい。
また、人工タンパク質（Ａ）中にアミノ酸配列（Ｘ）が同種類のポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記（Ｘ）の連続する個数は、（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、（Ｘ）の連続する個数ｂ〜ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ〜ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、細胞親和性の観点から、（ＶＰＧＶＧ）b配列及び／又は（ＧＶＧＶＰ）c配列が好ましい。
【００１８】
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、アミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続した（上記ｂ〜ｄが２〜２００）ポリペプチド鎖であるが、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、連続する個数は２〜１００個（上記ｂ〜ｄが２〜１００）が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個（上記ｂ〜ｄが２〜５０）、特に好ましくは２〜４０個（ｂ〜ｄが２〜４０個）である。
【００１９】
また、ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、（Ｙ）中の全アミノ酸の０．１〜２０％がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、具体的には、アミノ酸配列（Ｘ）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ）において、アミノ酸配列（Ｘ）の一部又は全部がアミノ酸配列（Ｘ’）に置き換わったポリペプチド鎖である。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）において、（Ｙ）中の全アミノ酸のうちリシン及び／又はアルギニンで置換された割合は、人工タンパク質（Ａ）の水溶性、細胞親和性及び皮膚弾性を向上する観点から、０．５〜１０％が好ましく、さらに好ましくは１〜５％である。
【００２０】
ポリペプチド鎖（Ｙ’）であるかどうかは、人工タンパク質（Ａ）の配列中の全てのＫ及びＲを、他のアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｐ又はＨ）に置きかえたときに、ポリペプチド鎖（Ｙ）となるかによって判断する。
【００２１】
人工タンパク質（Ａ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数は、皮膚弾性を向上及び長期的に維持する観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜８０個であり、特に好ましくは１〜６０個である。
【００２２】
人工タンパク質（Ａ）中に、（Ｘ）の種類及び／又は連続する個数が異なる（Ｙ）を有している場合は、それぞれを１個として数え、（Ｙ）の個数はその合計である。（Ｙ’）も同様である。
【００２３】
人工タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）及びポリペプチド鎖（Ｙ’）を合計２個以上有する場合は、ポリペプチド鎖とポリペプチド鎖との間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。（Ｚ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性の観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜１５個、特に好ましくは１〜１０個である。（Ｚ）として、具体的には、ＶＡＡＧＹ配列（１１）、ＧＡＡＧＹ配列（１２）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
（Ａ）中の（Ｚ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子量を基準として、細胞親和性の観点から、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０重量％である。
【００２４】
人工タンパク質（Ａ）中の両末端の各ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）のＮ及び／又はＣ末端には、末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもいい。（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性の観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜５０個、特に好ましくは１〜４０個である。（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。
（Ａ）中の（Ｔ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子量を基準として、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、０〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜５重量％である。
【００２５】
人工タンパク質（Ａ）は、上記（Ｔ）以外に、発現させた（Ａ）の精製または検出を容易にするために、（Ａ）のＮ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９TM、ＣｒｕｚＴａｇ２２TM、ＣｒｕｚＴａｇ４１TM、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおける人工タンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００２６】
人工タンパク質（Ａ）は、１分子中にアミノ酸配列（Ｘ）又は（Ｘ’）を少なくとも１個有していればよいが、細胞親和性、皮膚弾性を向上する及び長期的に維持する観点から、（Ａ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）は、（Ａ）の分子量を基準として３５〜９５重量％が好ましく、さらに好ましくは４５〜９３重量％である。
また、人工タンパク質（Ａ）１分子中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）は、細胞親和性、皮膚弾性を向上及び長期的に維持する観点から、（Ａ）の分子量を基準として、５〜６５重量％が好ましく、さらに好ましくは７〜５５重量％である。
【００２７】
人工タンパク質（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、人工タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、人工タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の分子量｝×｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数｝］／｛（Ａ）の分子量｝×１００
アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の分子量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の分子量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝］／｛（Ａ）の分子量｝×１００
【００２８】
人工タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにＧＡＧＡＧＳ配列（１）及び／又はポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、皮膚弾性の向上及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）及びポリペプチド鎖（Ｓ）とが交互に化学結合していることが好ましい。
また、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、ポリペプチド鎖（Ｓ）を構成するＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数と、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の数との比［配列（１）：｛（Ｘ）及び（Ｘ’）｝］は、皮膚弾性の向上及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、１：１〜１：１２が好ましく、さらに好ましくは１：１〜１：４である。
【００２９】
タンパク質ポリマー（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子量は、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、１５〜２００ｋＤａが好ましく、さらに好ましくは３０〜１５０ｋＤａであり、特に好ましくは４０〜１２０ｋＤａである。
【００３０】
好ましい人工タンパク質（Ａ）の一部を以下に例示する。
（Ａ１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）である人工タンパク質
（１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中のアミノ酸がＫ（リシン）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有する人工タンパク質
（１−１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がＫで置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有する人工タンパク質
具体的には、下記人工タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１４）が化学結合した分子量が約８０ｋＤａの配列（２８）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋポリマー）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１４）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子量が約８２ｋＤａの配列（１５）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋポリマー）
【００３１】
（２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有する人工タンパク質
具体的には、下記人工タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）8配列（１７）をそれぞれ１２個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子量が約９０ｋＤａの配列（１８）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ３ポリマー）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）40配列（１９）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子量が約１１０ｋＤａの配列（２０）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ６．１ポリマー）
【００３２】
（Ａ２）アミノ酸配列（Ｘ）がＶＰＧＶＧ配列（２）である人工タンパク質
（１）ＶＰＧＶＧ配列（２）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有する人工タンパク質
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、（ＶＰＧＶＧ）4配列（２４）及び（ＶＰＧＶＧ）8配列（２５）をそれぞれ４０個有し、これらが配列（２４）、配列（１）、配列（２５）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子量約２００ｋＤａの配列（２６）の人工タンパク質（ＥＬＰ１．１ポリマー）
【００３３】
本発明の褥瘡予防材は、上記人工タンパク質（Ａ）からなるものである。本発明の褥瘡予防材には、動物由来の血清等が含まれていないので、抗原性が低いと推察される。また、人工タンパク質（Ａ）は生物由来配列を有するので、生体適合性が高いと推察される。さらに、人工タンパク質（Ａ）は大腸菌等の細菌により、安価に大量生産できるので、褥瘡予防材を容易に入手できる。
【００３４】
本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させることができ、また、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができるので、褥瘡予防材として有効である。さらに、本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させるだけでなく、皮膚柔軟性も向上することができる。
【００３５】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、褥瘡予防材である人工タンパク質（Ａ）及び水を含むものである。
【００３６】
褥瘡予防用タンパク質水溶液中の人工タンパク質（Ａ）の含有量（重量％）は、皮膚弾性の向上及び皮膚への注入しやさの観点から、０．０１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１〜１５重量％である。
【００３７】
水としては、特に限定するものではなく、皮膚へ注入するため、滅菌されたものが好ましい。滅菌方法としては、０．２μｍ以下の孔径を持つ精密ろ過膜を通した水、限外ろ過膜を通した水、逆浸透膜を通した水及びオートクレーブで１２１℃２０分加熱して過熱滅菌したイオン交換水等が挙げられる。
褥瘡予防用タンパク質水溶液中の水の含有量（重量％）は、皮膚弾性の向上及び皮膚への注入しやすさの観点から、７０〜９９．９９重量％が好ましく、さらに好ましくは８３．４〜９９．９重量％、次にさらに好ましくは８３．７〜９９．４、特に好ましくは８５〜９９．３である。
【００３８】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、人工タンパク質（Ａ）及び水以外に無機塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。
【００３９】
無機塩として、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。リン酸塩は無機塩に含まない。
褥瘡予防用タンパク質水溶液中の無機塩の含有量（重量％）は、人間の体液と同等にするというの観点から、褥瘡予防用タンパク質水溶液の重量を基準として０．５〜１．３重量％が好ましく、さらに好ましくは０．７〜１．１重量％、特に好ましくは０．８５〜０．９５重量％である。
【００４０】
リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
褥瘡予防用タンパク質水溶液中のリン酸（塩）の含有量（重量％）は、皮膚弾性を向上する観点から、褥瘡予防用タンパク質水溶液の重量を基準として０．１０〜０．３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１２〜０．２８重量％、特に好ましくは０．１４〜０．２６重量％である。
【００４１】
褥瘡予防用タンパク質水溶液のｐＨは、褥瘡予防材の安定性及び皮膚に注入した際の安全性の観点から、６．８〜８．８が好ましく、さらに好ましくは７．３〜８．３である。
【００４２】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、各成分を混合することにより得られ、製造方法は特に限定されるものではない。１例を下記に示す。
（１）本発明の褥瘡予防材及び水を４〜２５℃で混合し、褥瘡予防用タンパク質水溶液（Ｂ）とする。（Ｂ）中には必要により塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。
【００４３】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、皮膚内に注入して使用することができる。
注入方法としては、皮膚内に注入できれば特に制限はないが、褥瘡予防の観点から、注射針等で皮膚内に確実に注入することが好ましい。
【実施例】
【００４４】
以下に実施例として本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。なお、以下において、特記しない限り部は重量部を意味する。
【００４５】
＜実施例１＞
［ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産］
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、配列（２８）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋポリマーを生産する方法を示す。
【００４６】
○ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間インキュベートした。インキュベートした培養液を氷上で冷却し、培養液のＯＤ６００を測定した。大腸菌を遠心分離で集めた。集菌した大腸菌からタンパク質ポリマーを取り出すために、超音波破砕（４℃、３０秒×１０回）をして溶菌した。
この大腸菌により産生されたタンパク質ポリマーを、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供した後、ポリフッ化ビニリデン膜にトランスファーした。その後、一次抗体に抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体、２次抗体に抗ラビットＩｇＧ ＨＲＰ標識抗体（ＧＥヘルスケア社製）を用いたウエスタンブロット分析を行なった。該生成物の見かけ分子質量は約８０ｋＤａであった。よってＳＥＬＰ８Ｋ生産株は、見かけ分子質量８０ｋＤａの抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体反応性を有するＳＥＬＰ８Ｋポリマーを生成したことが分かった。
【００４７】
○ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの精製
上記で得たＳＥＬＰ８Ｋポリマーを、菌体溶解、遠心分離による不溶性細片の除去、及びアフィニティークロマトグラフィーにより大腸菌バイオマスから精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）を得た。（Ａ１−１）を褥瘡予防材として用いた。
【００４８】
○ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの同定
得られたＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）を下記の手順で同定した。
抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対する抗ラビット６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロットにより分析した。見かけ分子質量８０，０００のタンパク質バンドが、各抗体に抗体反応性を示した。また得られたタンパク質をアミノ分析供した結果、該生成物が、グリシン（４３．７重量％），アラニン（１２．３重量％），セリン（５．３重量％），プロリン（１１．７重量％）及びバリン（２１．２重量％）に富むものであった。また、該生成物はリジンを１．５重量％含んでいた。下記の表１は、精製された生成物の組成と、合成遺伝子配列から推測された予測理論組成との相関関係を示す。
したがって、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）はＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）においてＶのうち１個がＫに置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’１１）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）を１２個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（２８）の人工タンパク質であることを確認した。
【００４９】
【表１】
【００５０】
○褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製
褥瘡予防材であるＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇを９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ、インビトロジェン社、リン酸濃度：１．６８ｇ／Ｌ、ｐＨ７．８）に溶解し、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１０重量％水溶液（Ｂ−１）を作製した。
【００５１】
＜実施例２＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１５０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「８５０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１５重量％水溶液（Ｂ−２）を作製した。
【００５２】
＜実施例３＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１重量％水溶液（Ｂ−３）を作製した。
【００５３】
＜実施例４＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９９μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の０．１重量％水溶液（Ｂ−４）を作製した。
【００５４】
＜実施例５＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）２５０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「７５０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の２５重量％水溶液（Ｂ−５）を作製した。
【００５５】
＜実施例６＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）０．１ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９９．９μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の０．０１重量％水溶液（Ｂ−６）を作製した。
【００５６】
＜実施例７＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ０Ｋをコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（１５）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ１−２）を得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ１−２）」を用いる以外は同様にして、ＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ１−２）の１０重量％水溶液（Ｂ−７）を作製した。
【００５７】
＜実施例８＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（１８）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ１−４）を得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ１−４）」を用いる以外は同様にして、ＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ１−４）の１０重量％水溶液（Ｂ−８）を作製した。
【００５８】
＜実施例９＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＥＬＰ１．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２６）のＥＬＰ１．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＥＬＰ１．１ポリマー」を用いる以外は同様にして、ＥＬＰ１．１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ−９）を作製した。
【００５９】
＜実施例１０＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ６．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２０）のＳＥＬＰ６．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ６.１ポリマー」を用いる以外は同様にして、ＳＥＬＰ６.１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ−１０）を作製した。
【００６０】
＜比較例１＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に変えて「エラスチンペプチド（日本バイオコン株式会社、品名：タラエラスチン）」を用いる以外は同様にして、エラスチンペプチドの１０重量％水溶液（Ｂ’−１）を作製した。
【００６１】
＜比較例２＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「エラスチンペプチド１０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、エラスチンペプチドの１重量％水溶液（Ｂ’−２）を作製した。
【００６２】
＜比較例３＞
「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に変えて「コラーゲンペプチド（新田ゼラチン株式会社製、品名：コラーゲンペプチド）」を用いる以外は同様にして、コラーゲンペプチドの１０重量％水溶液（Ｂ’−３）を作製した。
【００６３】
＜比較例４＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「コラーゲンペプチド１０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、コラーゲンペプチドの１重量％水溶液（Ｂ’−４）を作製した。
【００６４】
＜比較例５＞
リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を水溶液（Ｂ’−５）とした。
【００６５】
＜比較例６＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２７）のＳＥＬＰ３．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ３．１ポリマー」を用いる以外は同様にして、（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）及び（ＧＶＧＶＰ）2配列（２２）をそれぞれ１５個有する分子量が４０ｋＤａの配列（２７）のＳＥＬＰ３．１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ’−６）を作製した。
【００６６】
＜比較例７＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＬＰ４．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２３）のＳＬＰ４．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＬＰ４．１ポリマー」を用いる以外は同様にして、（ＧＡＧＡＧＳ）6配列（２１）及び（ＧＶＧＶＰ）2配列（２２）をそれぞれ２９個有する分子量が１２０ｋＤａの配列（２３）のＳＬＰ４．１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ’−７）を作製した。
【００６７】
○健常モルモットを用いた皮膚弾性及び皮膚柔軟性試験
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、実施例１で得られたＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１０重量％水溶液（Ｂ−１）を背部皮膚内（１０×１０ｍｍ）に５０μｌ注入した。注入部にガーゼをのせ、ガーゼをナイロン糸で注入部周囲と固定した。
その後、１０日、３０日後にキュートメーター（インテグラル社製）を用いて、注入部の皮膚弾性ならびに皮膚柔軟性を測定した。
評価は、キュートメーターで測定した皮膚弾性及び皮膚柔軟性の実測値を下記式にあてはめ、褥瘡非好発部位である腹部の皮膚弾性及び皮膚柔軟性を１００％とした場合に、注入部の皮膚が腹部の皮膚弾性及び皮膚柔軟性にどれだけ近似しているかで行った。結果を表２に示す。
注入部の皮膚弾性（％）＝（注入部の皮膚弾性実測値／腹部の皮膚弾性実測値）×１００
注入部の皮膚柔軟性（％）＝（注入部の皮膚柔軟性実測値／腹部の皮膚柔軟性実測値）×１００
【００６８】
上記「健常モルモットを用いた皮膚弾性ならびに皮膚柔軟性試験」において、「実施例１で得られたＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１０重量％水溶液（Ｂ−１）」に変えて、実施例２〜１０及び比較例１〜７の水溶液（Ｂ−２）〜（Ｂ−１０）及び（Ｂ’−１）〜（Ｂ’−７）を用いる以外は同様にして、皮膚弾性及び皮膚柔軟性を測定した。結果を表２に示す。
【００６９】
【表２】
【００７０】
表２の結果より、注入１０日後の皮膚弾性は、本発明の褥瘡予防材を使用した実施例１〜１０は９５％以上であり、リン酸緩衝液だけの比較例５よりも非常に高く、本発明の褥瘡予防材は皮膚弾性を向上できることがわかる。また、エラスチンペプチドやコラーゲンペプチドを用いた比較例１〜４において、比較例１は９５％と高いものの、褥瘡予防材の水溶液中の濃度が同濃度である実施例１及び７〜１０の方が９９％以上と極めて高く、本願発明の褥瘡予防材の方が皮膚弾性を向上させる効果が極めて高いことがわかる。また、注入３０日後の皮膚弾性の結果は、実施例１〜１０が９３％以上と高い皮膚弾性を維持しているのに対し、比較例１〜４は８０％以下であり、１０日後よりも極めて低下していた。
また、褥瘡予防材の水溶液中の濃度が同濃度である実施例１及び７〜１０と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が６０％よりも多い比較例６及び７との比較から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が６０％以下であることで、皮膚弾性を向上する効果が極めて高いことが分かる。さらに、皮膚柔軟性も向上でき、褥瘡予防材として優れることが分かる。
以上のことから、本願発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができることがわかる。さらに、本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性だけでなく、皮膚柔軟性も向上させることができることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性の向上に優れている。さらに、皮膚柔軟性の向上にも優れている。したがって、褥瘡を予防する褥瘡予防材として有効である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、褥瘡予防材及びこれを含む褥瘡予防用タンパク質水溶液に関する。
【背景技術】
【０００２】
褥瘡を予防する方法としては、皮膚弾性を向上する方法、圧負荷を分散させる方法、除圧する方法等が一般的である。除圧のために充分な体位変換や体の清拭等の介護がなされている場合には、いわゆる床擦れと称される褥瘡の発症がかなりの割合で予防できるものの、現在の公共的又は在宅での介護の現状では理想的な人的介護を求めるには限界がある。
このような現状から、装具面での褥瘡発症の予防を図るために、幾つかの提案がなされている。一般的に、寝具用のマット素材として利用されている発泡ポリウレタン等にあっては、その硬度の硬いものは部分的に体位の圧力が集中しがちで、褥瘡の発症を誘発する傾向がある。一方、柔らかい場合には圧力分散の効果があって、仙骨部位等への圧力集中は排除できるものの、患者の体位が沈み込むとともに屈曲してしまい、他の障害を誘発する等、いずれも二律背反的な技術的不完全さを有している（例えば、特許文献１及び２）。
また、皮膚弾性の向上により予防する方法がある。皮膚には、褥瘡になりやすい褥瘡後発部位と、褥瘡になりにくい褥瘡非好発部位がある。褥瘡好発部位（仙骨部、踵骨）は、弾性繊維（エラスチンやコラーゲン）が少なく、加齢とともに弾性繊維が減少し、皮膚弾性が低下する部位である。褥瘡非好発部位（腹部）は、好発部位よりも弾性繊維が多く、皮膚弾性が高いため、褥瘡になりにくいとされている（例えば、非特許文献１）。
そこで、褥瘡好発部位の皮膚弾性を向上させるために、特許文献３のような光生体刺激を用いた皮膚弾性の向上が用いられている。しかしながら、この方法は、褥瘡非好発部位の皮膚弾性と同程度にまで皮膚弾性を向上させることができるものではなく、褥瘡予防にはあまり効果がない。
また、弾性繊維であるエラスチンペプチドを経口投与して皮膚弾性を向上させる方法もある（非特許文献２）が、持続的な皮膚弾性の向上には繋がらない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平５−０７６６６３号公報
【特許文献２】特開平９−２７１４２４号公報
【特許文献３】特表２００６−５０１９６０号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｊ Ｔｉｓｓｕｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ，２００１，１１（２），５９−６３
【非特許文献２】神尾美智子著、「豚由来エラスチンペプチドの長期摂取が皮膚に及ぼす影響」、社団法人日本栄養・食糧学会発行「第６２回日本栄養・食糧学会大会講演要旨集」、平成２０年４月１日、発表コードＡ００１６９−００００４−１０６２７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる褥瘡予防材を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の褥瘡予防材は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる。
また、本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、皮膚に注入することにより、皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明において、人工タンパク質（Ａ）は、動物由来成分を排除するために、人工的に製造されるものであり、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって製造できる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、人工タンパク質（Ａ）を作製できるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【０００９】
本発明の褥瘡予防材は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である褥瘡予防材である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【００１０】
人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％であるタンパク質であるが、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、９〜５５％が好ましく、さらに好ましくは２０〜５５％である。
人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、人工タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、人工タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／｛（Ａ）の全アミノ酸の数｝×１００
【００１１】
本発明においては、人工タンパク質（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が上記範囲であることで、（Ａ）が適度な分解性を有し、皮膚弾性を向上させることができ、長期的に皮膚弾性を維持することができる。
【００１２】
人工タンパク質（Ａ）は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するが、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が連続する個数は、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、２〜１００個が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個であり、特に好ましくは２〜１０個である。
【００１３】
本発明において、人工タンパク質（Ａ）は、下記アミノ酸配列（Ｘ）を少なくとも１個及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を少なくとも１個有するものである。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【００１４】
アミノ酸配列（Ｘ）としては、細胞親和性及び皮膚弾性を向上する観点から、ＶＰＧＶＧ配列（２）及び／又はＧＶＧＶＰ配列（３）が好ましい。
【００１５】
アミノ酸配列（Ｘ’）として、具体的には、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）、ＧＫＧＲＰ配列（９）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）等が挙げられる。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、細胞親和性及び皮膚弾性を向上する観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）、及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群より選ばれる１種以上の配列が好ましく、さらに好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及び／又はＧＫＧＫＰ配列（８）である。
【００１６】
人工タンパク質（Ａ）は、細胞親和性、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）の全アミノ酸の０．１〜２０％がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。
【００１７】
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、具体的には、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列である。（なお、ｂ〜ｄは、それぞれ、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数であり、２〜２００の整数である）。
人工タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有してもいい。
また、人工タンパク質（Ａ）中にアミノ酸配列（Ｘ）が同種類のポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記（Ｘ）の連続する個数は、（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、（Ｘ）の連続する個数ｂ〜ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ〜ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、細胞親和性の観点から、（ＶＰＧＶＧ）b配列及び／又は（ＧＶＧＶＰ）c配列が好ましい。
【００１８】
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、アミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続した（上記ｂ〜ｄが２〜２００）ポリペプチド鎖であるが、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、連続する個数は２〜１００個（上記ｂ〜ｄが２〜１００）が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個（上記ｂ〜ｄが２〜５０）、特に好ましくは２〜４０個（ｂ〜ｄが２〜４０個）である。
【００１９】
また、ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、（Ｙ）中の全アミノ酸の０．１〜２０％がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、具体的には、アミノ酸配列（Ｘ）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ）において、アミノ酸配列（Ｘ）の一部又は全部がアミノ酸配列（Ｘ’）に置き換わったポリペプチド鎖である。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）において、（Ｙ）中の全アミノ酸のうちリシン及び／又はアルギニンで置換された割合は、人工タンパク質（Ａ）の水溶性、細胞親和性及び皮膚弾性を向上する観点から、０．５〜１０％が好ましく、さらに好ましくは１〜５％である。
【００２０】
ポリペプチド鎖（Ｙ’）であるかどうかは、人工タンパク質（Ａ）の配列中の全てのＫ及びＲを、他のアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｐ又はＨ）に置きかえたときに、ポリペプチド鎖（Ｙ）となるかによって判断する。
【００２１】
人工タンパク質（Ａ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数は、皮膚弾性を向上及び長期的に維持する観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜８０個であり、特に好ましくは１〜６０個である。
【００２２】
人工タンパク質（Ａ）中に、（Ｘ）の種類及び／又は連続する個数が異なる（Ｙ）を有している場合は、それぞれを１個として数え、（Ｙ）の個数はその合計である。（Ｙ’）も同様である。
【００２３】
人工タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）及びポリペプチド鎖（Ｙ’）を合計２個以上有する場合は、ポリペプチド鎖とポリペプチド鎖との間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。（Ｚ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性の観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜１５個、特に好ましくは１〜１０個である。（Ｚ）として、具体的には、ＶＡＡＧＹ配列（１１）、ＧＡＡＧＹ配列（１２）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
（Ａ）中の（Ｚ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子量を基準として、細胞親和性の観点から、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０重量％である。
【００２４】
人工タンパク質（Ａ）中の両末端の各ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）のＮ及び／又はＣ末端には、末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもいい。（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性の観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜５０個、特に好ましくは１〜４０個である。（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。
（Ａ）中の（Ｔ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子量を基準として、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、０〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜５重量％である。
【００２５】
人工タンパク質（Ａ）は、上記（Ｔ）以外に、発現させた（Ａ）の精製または検出を容易にするために、（Ａ）のＮ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９TM、ＣｒｕｚＴａｇ２２TM、ＣｒｕｚＴａｇ４１TM、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおける人工タンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００２６】
人工タンパク質（Ａ）は、１分子中にアミノ酸配列（Ｘ）又は（Ｘ’）を少なくとも１個有していればよいが、細胞親和性、皮膚弾性を向上する及び長期的に維持する観点から、（Ａ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）は、（Ａ）の分子量を基準として３５〜９５重量％が好ましく、さらに好ましくは４５〜９３重量％である。
また、人工タンパク質（Ａ）１分子中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）は、細胞親和性、皮膚弾性を向上及び長期的に維持する観点から、（Ａ）の分子量を基準として、５〜６５重量％が好ましく、さらに好ましくは７〜５５重量％である。
【００２７】
人工タンパク質（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、人工タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、人工タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の分子量｝×｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数｝］／｛（Ａ）の分子量｝×１００
アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の分子量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の分子量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝］／｛（Ａ）の分子量｝×１００
【００２８】
人工タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにＧＡＧＡＧＳ配列（１）及び／又はポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、皮膚弾性の向上及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）及びポリペプチド鎖（Ｓ）とが交互に化学結合していることが好ましい。
また、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、ポリペプチド鎖（Ｓ）を構成するＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数と、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の数との比［配列（１）：｛（Ｘ）及び（Ｘ’）｝］は、皮膚弾性の向上及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、１：１〜１：１２が好ましく、さらに好ましくは１：１〜１：４である。
【００２９】
タンパク質ポリマー（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子量は、皮膚弾性を向上する及び長期的に皮膚弾性を維持する観点から、１５〜２００ｋＤａが好ましく、さらに好ましくは３０〜１５０ｋＤａであり、特に好ましくは４０〜１２０ｋＤａである。
【００３０】
好ましい人工タンパク質（Ａ）の一部を以下に例示する。
（Ａ１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）である人工タンパク質
（１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中のアミノ酸がＫ（リシン）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有する人工タンパク質
（１−１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がＫで置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有する人工タンパク質
具体的には、下記人工タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１４）が化学結合した分子量が約８０ｋＤａの配列（２８）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋポリマー）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（１４）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子量が約８２ｋＤａの配列（１５）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋポリマー）
【００３１】
（２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有する人工タンパク質
具体的には、下記人工タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）8配列（１７）をそれぞれ１２個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子量が約９０ｋＤａの配列（１８）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ３ポリマー）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）40配列（１９）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子量が約１１０ｋＤａの配列（２０）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ６．１ポリマー）
【００３２】
（Ａ２）アミノ酸配列（Ｘ）がＶＰＧＶＧ配列（２）である人工タンパク質
（１）ＶＰＧＶＧ配列（２）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有する人工タンパク質
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、（ＶＰＧＶＧ）4配列（２４）及び（ＶＰＧＶＧ）8配列（２５）をそれぞれ４０個有し、これらが配列（２４）、配列（１）、配列（２５）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子量約２００ｋＤａの配列（２６）の人工タンパク質（ＥＬＰ１．１ポリマー）
【００３３】
本発明の褥瘡予防材は、上記人工タンパク質（Ａ）からなるものである。本発明の褥瘡予防材には、動物由来の血清等が含まれていないので、抗原性が低いと推察される。また、人工タンパク質（Ａ）は生物由来配列を有するので、生体適合性が高いと推察される。さらに、人工タンパク質（Ａ）は大腸菌等の細菌により、安価に大量生産できるので、褥瘡予防材を容易に入手できる。
【００３４】
本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させることができ、また、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができるので、褥瘡予防材として有効である。さらに、本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させるだけでなく、皮膚柔軟性も向上することができる。
【００３５】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、褥瘡予防材である人工タンパク質（Ａ）及び水を含むものである。
【００３６】
褥瘡予防用タンパク質水溶液中の人工タンパク質（Ａ）の含有量（重量％）は、皮膚弾性の向上及び皮膚への注入しやさの観点から、０．０１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１〜１５重量％である。
【００３７】
水としては、特に限定するものではなく、皮膚へ注入するため、滅菌されたものが好ましい。滅菌方法としては、０．２μｍ以下の孔径を持つ精密ろ過膜を通した水、限外ろ過膜を通した水、逆浸透膜を通した水及びオートクレーブで１２１℃２０分加熱して過熱滅菌したイオン交換水等が挙げられる。
褥瘡予防用タンパク質水溶液中の水の含有量（重量％）は、皮膚弾性の向上及び皮膚への注入しやすさの観点から、７０〜９９．９９重量％が好ましく、さらに好ましくは８３．４〜９９．９重量％、次にさらに好ましくは８３．７〜９９．４、特に好ましくは８５〜９９．３である。
【００３８】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、人工タンパク質（Ａ）及び水以外に無機塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。
【００３９】
無機塩として、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。リン酸塩は無機塩に含まない。
褥瘡予防用タンパク質水溶液中の無機塩の含有量（重量％）は、人間の体液と同等にするというの観点から、褥瘡予防用タンパク質水溶液の重量を基準として０．５〜１．３重量％が好ましく、さらに好ましくは０．７〜１．１重量％、特に好ましくは０．８５〜０．９５重量％である。
【００４０】
リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
褥瘡予防用タンパク質水溶液中のリン酸（塩）の含有量（重量％）は、皮膚弾性を向上する観点から、褥瘡予防用タンパク質水溶液の重量を基準として０．１０〜０．３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１２〜０．２８重量％、特に好ましくは０．１４〜０．２６重量％である。
【００４１】
褥瘡予防用タンパク質水溶液のｐＨは、褥瘡予防材の安定性及び皮膚に注入した際の安全性の観点から、６．８〜８．８が好ましく、さらに好ましくは７．３〜８．３である。
【００４２】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、各成分を混合することにより得られ、製造方法は特に限定されるものではない。１例を下記に示す。
（１）本発明の褥瘡予防材及び水を４〜２５℃で混合し、褥瘡予防用タンパク質水溶液（Ｂ）とする。（Ｂ）中には必要により塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。
【００４３】
本発明の褥瘡予防用タンパク質水溶液は、皮膚内に注入して使用することができる。
注入方法としては、皮膚内に注入できれば特に制限はないが、褥瘡予防の観点から、注射針等で皮膚内に確実に注入することが好ましい。
【実施例】
【００４４】
以下に実施例として本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。なお、以下において、特記しない限り部は重量部を意味する。
【００４５】
＜実施例１＞
［ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産］
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、配列（２８）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋポリマーを生産する方法を示す。
【００４６】
○ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間インキュベートした。インキュベートした培養液を氷上で冷却し、培養液のＯＤ６００を測定した。大腸菌を遠心分離で集めた。集菌した大腸菌からタンパク質ポリマーを取り出すために、超音波破砕（４℃、３０秒×１０回）をして溶菌した。
この大腸菌により産生されたタンパク質ポリマーを、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供した後、ポリフッ化ビニリデン膜にトランスファーした。その後、一次抗体に抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体、２次抗体に抗ラビットＩｇＧ ＨＲＰ標識抗体（ＧＥヘルスケア社製）を用いたウエスタンブロット分析を行なった。該生成物の見かけ分子質量は約８０ｋＤａであった。よってＳＥＬＰ８Ｋ生産株は、見かけ分子質量８０ｋＤａの抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体反応性を有するＳＥＬＰ８Ｋポリマーを生成したことが分かった。
【００４７】
○ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの精製
上記で得たＳＥＬＰ８Ｋポリマーを、菌体溶解、遠心分離による不溶性細片の除去、及びアフィニティークロマトグラフィーにより大腸菌バイオマスから精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）を得た。（Ａ１−１）を褥瘡予防材として用いた。
【００４８】
○ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの同定
得られたＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）を下記の手順で同定した。
抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対する抗ラビット６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロットにより分析した。見かけ分子質量８０，０００のタンパク質バンドが、各抗体に抗体反応性を示した。また得られたタンパク質をアミノ分析供した結果、該生成物が、グリシン（４３．７重量％），アラニン（１２．３重量％），セリン（５．３重量％），プロリン（１１．７重量％）及びバリン（２１．２重量％）に富むものであった。また、該生成物はリジンを１．５重量％含んでいた。下記の表１は、精製された生成物の組成と、合成遺伝子配列から推測された予測理論組成との相関関係を示す。
したがって、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）はＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）においてＶのうち１個がＫに置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’１１）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）を１２個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（２８）の人工タンパク質であることを確認した。
【００４９】
【表１】
【００５０】
○褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製
褥瘡予防材であるＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇを９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ、インビトロジェン社、リン酸濃度：１．６８ｇ／Ｌ、ｐＨ７．８）に溶解し、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１０重量％水溶液（Ｂ−１）を作製した。
【００５１】
＜実施例２＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１５０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「８５０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１５重量％水溶液（Ｂ−２）を作製した。
【００５２】
＜実施例３＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１重量％水溶液（Ｂ−３）を作製した。
【００５３】
＜実施例４＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９９μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の０．１重量％水溶液（Ｂ−４）を作製した。
【００５４】
＜実施例５＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）２５０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「７５０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の２５重量％水溶液（Ｂ−５）を作製した。
【００５５】
＜実施例６＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）０．１ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９９．９μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の０．０１重量％水溶液（Ｂ−６）を作製した。
【００５６】
＜実施例７＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ０Ｋをコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（１５）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ１−２）を得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ１−２）」を用いる以外は同様にして、ＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ１−２）の１０重量％水溶液（Ｂ−７）を作製した。
【００５７】
＜実施例８＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（１８）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ１−４）を得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ１−４）」を用いる以外は同様にして、ＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ１−４）の１０重量％水溶液（Ｂ−８）を作製した。
【００５８】
＜実施例９＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＥＬＰ１．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２６）のＥＬＰ１．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＥＬＰ１．１ポリマー」を用いる以外は同様にして、ＥＬＰ１．１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ−９）を作製した。
【００５９】
＜実施例１０＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ６．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２０）のＳＥＬＰ６．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ６.１ポリマー」を用いる以外は同様にして、ＳＥＬＰ６.１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ−１０）を作製した。
【００６０】
＜比較例１＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に変えて「エラスチンペプチド（日本バイオコン株式会社、品名：タラエラスチン）」を用いる以外は同様にして、エラスチンペプチドの１０重量％水溶液（Ｂ’−１）を作製した。
【００６１】
＜比較例２＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「エラスチンペプチド１０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、エラスチンペプチドの１重量％水溶液（Ｂ’−２）を作製した。
【００６２】
＜比較例３＞
「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に変えて「コラーゲンペプチド（新田ゼラチン株式会社製、品名：コラーゲンペプチド）」を用いる以外は同様にして、コラーゲンペプチドの１０重量％水溶液（Ｂ’−３）を作製した。
【００６３】
＜比較例４＞
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）１００ｍｇ」に変えて「コラーゲンペプチド１０ｍｇ」とし、「９００μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」に変えて「９９０μＬの４℃のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）」とする以外は同様にして、コラーゲンペプチドの１重量％水溶液（Ｂ’−４）を作製した。
【００６４】
＜比較例５＞
リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を水溶液（Ｂ’−５）とした。
【００６５】
＜比較例６＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２７）のＳＥＬＰ３．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＥＬＰ３．１ポリマー」を用いる以外は同様にして、（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（９）及び（ＧＶＧＶＰ）2配列（２２）をそれぞれ１５個有する分子量が４０ｋＤａの配列（２７）のＳＥＬＰ３．１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ’−６）を作製した。
【００６６】
＜比較例７＞
実施例１の「ＳＥＬＰ８Ｋポリマーの生産」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＬＰ４．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２３）のＳＬＰ４．１ポリマーを得た。
実施例１の「褥瘡予防用タンパク質水溶液の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）」に代えて「ＳＬＰ４．１ポリマー」を用いる以外は同様にして、（ＧＡＧＡＧＳ）6配列（２１）及び（ＧＶＧＶＰ）2配列（２２）をそれぞれ２９個有する分子量が１２０ｋＤａの配列（２３）のＳＬＰ４．１ポリマーの１０重量％水溶液（Ｂ’−７）を作製した。
【００６７】
○健常モルモットを用いた皮膚弾性及び皮膚柔軟性試験
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、実施例１で得られたＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１０重量％水溶液（Ｂ−１）を背部皮膚内（１０×１０ｍｍ）に５０μｌ注入した。注入部にガーゼをのせ、ガーゼをナイロン糸で注入部周囲と固定した。
その後、１０日、３０日後にキュートメーター（インテグラル社製）を用いて、注入部の皮膚弾性ならびに皮膚柔軟性を測定した。
評価は、キュートメーターで測定した皮膚弾性及び皮膚柔軟性の実測値を下記式にあてはめ、褥瘡非好発部位である腹部の皮膚弾性及び皮膚柔軟性を１００％とした場合に、注入部の皮膚が腹部の皮膚弾性及び皮膚柔軟性にどれだけ近似しているかで行った。結果を表２に示す。
注入部の皮膚弾性（％）＝（注入部の皮膚弾性実測値／腹部の皮膚弾性実測値）×１００
注入部の皮膚柔軟性（％）＝（注入部の皮膚柔軟性実測値／腹部の皮膚柔軟性実測値）×１００
【００６８】
上記「健常モルモットを用いた皮膚弾性ならびに皮膚柔軟性試験」において、「実施例１で得られたＳＥＬＰ８Ｋポリマー（Ａ１−１）の１０重量％水溶液（Ｂ−１）」に変えて、実施例２〜１０及び比較例１〜７の水溶液（Ｂ−２）〜（Ｂ−１０）及び（Ｂ’−１）〜（Ｂ’−７）を用いる以外は同様にして、皮膚弾性及び皮膚柔軟性を測定した。結果を表２に示す。
【００６９】
【表２】
【００７０】
表２の結果より、注入１０日後の皮膚弾性は、本発明の褥瘡予防材を使用した実施例１〜１０は９５％以上であり、リン酸緩衝液だけの比較例５よりも非常に高く、本発明の褥瘡予防材は皮膚弾性を向上できることがわかる。また、エラスチンペプチドやコラーゲンペプチドを用いた比較例１〜４において、比較例１は９５％と高いものの、褥瘡予防材の水溶液中の濃度が同濃度である実施例１及び７〜１０の方が９９％以上と極めて高く、本願発明の褥瘡予防材の方が皮膚弾性を向上させる効果が極めて高いことがわかる。また、注入３０日後の皮膚弾性の結果は、実施例１〜１０が９３％以上と高い皮膚弾性を維持しているのに対し、比較例１〜４は８０％以下であり、１０日後よりも極めて低下していた。
また、褥瘡予防材の水溶液中の濃度が同濃度である実施例１及び７〜１０と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が６０％よりも多い比較例６及び７との比較から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が６０％以下であることで、皮膚弾性を向上する効果が極めて高いことが分かる。さらに、皮膚柔軟性も向上でき、褥瘡予防材として優れることが分かる。
以上のことから、本願発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性を向上させることができ、皮膚弾性が向上した状態を長期的に維持することができることがわかる。さらに、本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性だけでなく、皮膚柔軟性も向上させることができることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明の褥瘡予防材は、皮膚弾性の向上に優れている。さらに、皮膚柔軟性の向上にも優れている。したがって、褥瘡を予防する褥瘡予防材として有効である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、
（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である褥瘡予防材。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【請求項２】
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の個数とアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の合計個数との比率｛配列（１）：アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の合計｝が１：１〜１：１２である請求項１に記載の褥瘡予防材。
【請求項３】
人工タンパク質（Ａ）１分子中の、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量が、（Ａ）の分子量を基準として３５〜９５重量％であり、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量が（Ａ）の分子量を基準として５〜６５重量％である請求項１又は２に記載の褥瘡予防材。
【請求項４】
人工タンパク質（Ａ）が、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
（Ａ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個である請求項１〜３のいずれかに記載の褥瘡予防材。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）の全アミノ酸の０．１〜２０％がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。
【請求項５】
人工タンパク質（Ａ）が、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する請求項１〜４のいずれかに記載の褥瘡予防材。
【請求項６】
タンパク質ポリマー（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子量が１５〜２００ｋＤａである請求項１〜５のいずれかに記載の褥瘡予防材。
【請求項７】
人工タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を有する人工タンパク質（Ａ１１）である請求項１〜６のいずれかに記載の褥瘡予防材。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の褥瘡予防材及び水を含む褥瘡予防用タンパク質水溶液であって、褥瘡予防用タンパク質水溶液の重量を基準として、褥瘡予防材が０．０１〜３０重量％、水が７０〜９９．９９重量％である褥瘡予防用タンパク質水溶液。
【請求項１】
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）と、下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）とを有する人工タンパク質（Ａ）からなる褥瘡予防材であって、
（Ａ）の全アミノ酸中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸の数×１００］が５〜６０％である褥瘡予防材。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
【請求項２】
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の個数とアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の合計個数との比率｛配列（１）：アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の合計｝が１：１〜１：１２である請求項１に記載の褥瘡予防材。
【請求項３】
人工タンパク質（Ａ）１分子中の、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量が、（Ａ）の分子量を基準として３５〜９５重量％であり、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量が（Ａ）の分子量を基準として５〜６５重量％である請求項１又は２に記載の褥瘡予防材。
【請求項４】
人工タンパク質（Ａ）が、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
（Ａ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個である請求項１〜３のいずれかに記載の褥瘡予防材。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）の全アミノ酸の０．１〜２０％がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。
【請求項５】
人工タンパク質（Ａ）が、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する請求項１〜４のいずれかに記載の褥瘡予防材。
【請求項６】
タンパク質ポリマー（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子量が１５〜２００ｋＤａである請求項１〜５のいずれかに記載の褥瘡予防材。
【請求項７】
人工タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を有する人工タンパク質（Ａ１１）である請求項１〜６のいずれかに記載の褥瘡予防材。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の褥瘡予防材及び水を含む褥瘡予防用タンパク質水溶液であって、褥瘡予防用タンパク質水溶液の重量を基準として、褥瘡予防材が０．０１〜３０重量％、水が７０〜９９．９９重量％である褥瘡予防用タンパク質水溶液。
【公開番号】特開２０１３−４０１６６（Ｐ２０１３−４０１６６Ａ）
【公開日】平成２５年２月２８日（２０１３．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１５９５５９（Ｐ２０１２−１５９５５９）
【出願日】平成２４年７月１８日（２０１２．７．１８）
【出願人】（０００００２２８８）三洋化成工業株式会社 (1,719)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年２月２８日（２０１３．２．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年７月１８日（２０１２．７．１８）
【出願人】（０００００２２８８）三洋化成工業株式会社 (1,719)
【Ｆターム（参考）】
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