調整された質量分析用合成デンドリマー較正物質
質量分析のための単分散合成デンドリマー較正物質が提供される。該較正物質は、その合成の相対的な容易さおよび迅速さ、比較的低コスト、長い貯蔵寿命、高純度、および混合物としてのバッチ合成への適合性において区別される。後者の特質は、有用な離散的分子量分布を示す、より高分子量の化合物の並行調製を可能にし、それによって、質量分析の多点較正標準を提供する。前記較正物質を製造し使用する方法も提供される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本米国特許非仮出願は、２００９年２月３日に出願された米国特許仮出願第６１／１４９，５０６号、２００９年４月８日に出願された米国特許仮出願第６１／１６７，７０８号、および２００９年６月１０日に出願された米国特許仮出願第６１／１８５，６６５号の利益を主張し、その各々は、参照によって本明細書にその全体が組み込まれる。
【０００２】
本開示は、枝の少なくとも１つが第２の分岐構造を有する連続した分枝構造を有する樹枝状分子に関する。本開示はまた、前記樹枝状分子の調製の方法、１０００ダルトンより大きい分子量の化合物の分析のための、飛行時間基材支援レーザー脱着イオン化（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析（ＭＳ）、エレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ−ＭＳ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ−ＭＳ）、高速原子衝撃（ＦＡＢ−ＭＳ）および他のＭＳ手法の較正物質としてのその使用を含む。
【背景技術】
【０００３】
質量分析（ＭＳ）は、試料（例えばタンパク質、化合物など）の元素組成を求めるための解析手法である。ＭＳはまた、そのような試料の化学構造を求めるのに使用されてもよい。一般に、ＭＳは、試料をイオン化し帯電分子（およびそのフラグメント）を生成することおよびその質量電荷比の測定を含む。
【０００４】
飛行時間質量分析（ＴＯＦ−ＭＳ）は、ｑがイオン電荷であり、Ｖが印加電圧である場合、電場によって、イオンはｑＶの運動エネルギーを持って無電場ドリフト領域へ加速される方法である。ｍが質量であり、ｖが速度である場合、各イオンの運動エネルギーは（１／２）ｍｖ２であるので、より軽いイオンはより重いイオンより高速である。したがって、より軽いイオンは、ドリフト領域の終端にある検出器に、重いイオンより早く到達する。基材支援レーザー脱着イオン化（ＭＡＬＤＩ）は質量分析において使用されるイオン化手法であり、生体分子（例えば、タンパク質、ペプチドおよび糖）、および大きい有機分子（例えば、ポリマーおよび他の高分子）の分析を容易にする。
【０００５】
エレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）は、揮発性溶剤（例えば、アセトニトリル、ＣＨ３ＯＨ、ＣＨ３Ｃｌ、水など）に溶解した分析種を、帯電した小さい毛細管（通常、金属）を強制的に通す大気圧イオン化手法である。分析種は溶液中にイオンとして存在し、試料が毛細管から強制的に出されるとエアロゾル化する。これによって、同様に帯電した分析種粒子同士間の距離を広げる。中性気体担体（例えば、窒素）が、小滴から溶媒を蒸発させるためにしばしば使用される。溶媒が蒸発すると、帯電した分析種分子は互いに接近する。しかし、同時に、分析種分子の同種の電荷は、互いを遠ざける。試料が溶媒を含まず孤立イオンになるまで、収縮および膨脹のこのプロセスが繰り返される。次いで、孤立イオンは質量アナライザーに進む。
【０００６】
大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）も、加熱管（例えば、４００℃より高温）を通過する試料溶液を揮発させ、窒素噴霧化支援によりコロナ放電を受ける大気圧イオン化手法である。ＡＰＣＩはＥＳＩの変形であり、修正されたＥＳＩ源で実施することができる。イオンは、放電によって生成し、質量分析装置へ抜き取られる。この手法は、非常に高い液体流量（例えば１ｍＬ／分）を適用することができるので、比較的極性で、半揮発性の試料に対して最も良好で、液体クロマトグラフィー・質量分析（ＬＣ／ＭＳ）インターフェースとして使用してもよい。ＡＰＣＩ−ＭＳからのスペクトルは通常、擬分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋を含む。
【０００７】
高速原子衝撃（ＦＡＢ）は、中性原子（通常、キセノンまたはアルゴン）の高エネルギービームを使用し、これが真空下で固体試料（ｍａｔｒｘと混合された分析種）を強打して、脱着およびイオン化を引き起す。一般的な基材としては、グリセロール、チオグリセロール、３−ニトロベンジルアルコール（３−ＮＢＡ）、１８−クラウン−６−エーテル、２−ニトロフェニルオクチルエーテル、スルフォラン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンが挙げられる。ＦＡＢは、気相にさせるのが困難である、大きい生体分子に対して使用される。高エネルギービームは、イオン源から電荷交換セルを通してイオンを加速することにより生成する。これらのイオンは中性の原子との衝突によって電子を蓄積し、高エネルギーの原子のビームを形成する。ＦＡＢスペクトルがしばしば、ごくわずかなフラグメントおよび偽分子イオン（例えば、［Ｍ＋Ｈ］＋、［Ｍ＋Ｎａ］＋）の信号を含んでいるので、ＦＡＢは分子量を求めるのに有用である。しかしながら、低ｍ／ｚ領域は、通常基材からの信号で込み合っている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチドおよび合成高分子の特性評価および構造決定を包含する分析作業の範囲で質量分析装置を較正するためには、多様な組の分子量の既知の較正物質を必要とする。通常、タンパク質およびペプチドは、単分散性（単一および正確な分子量のみが純粋試料中に存在する）および生物学的起源からの入手しやすさのために使用されてきた。例としては、ブラジキニン、副腎皮質刺激ホルモン、インシュリンＢ鎖、シトクロムｃ、アポミオグロビン、アルブミン、アルドラーゼおよびアンジオテンシンＩＩが挙げられる。しかし、そのような標準の生産（特に精製）は時間がかかり技術的に複雑で、グラム量当たりかなり高い費用がかかることになる。さらに、そのような標準は、酵素の不安定性および酸敏感性により本質的に不十分な貯蔵寿命を有している。
【０００９】
合成高分子は、はるかに安価な代替物を提供するが、広範囲の分子量分布として存在する。その理由は、統計的分子量分布を必然的にもたらす、１モノマー単位（生物学的合成と比較して）間の相対的に非媒介的な反応を使用して、これらが調製されるからである。この広範囲の分子量分布は、一般的には質量スペクトルでモノマー質量の倍数として一定間隔で配置されたピークのガウス級数として観察される。しかし、効率的なデンドリマー合成の開発は、従来生合成された物質が持つ正確な分子量と、合成物質の拡張可能な低コストの合体を提案する。
【００１０】
「真の」デンドリマー（高度に分枝し、高度の構造規則性がある分子）の調製には対照的な２つの合成経路が知られている。
【００１１】
第１の方法（発散法）では、まず核分子に分枝モノマーをカップリングさせ、中間体を得て、次いで、中間体を「活性化」し、表面官能基の数が増した、より大きい新しい分子を生成する。これらの２ステップを繰り返すと、樹枝状分子が外へ向かって層ごとに成長し、指数関数的に大きさが増える。
【００１２】
第２の方法（収束法）では、１モノマー単位によってつながれた周辺の基を用い、「楔」または「樹状突起」を生成する。これらの樹状突起のうちの２個は、追加のモノマー分子と結合してより大きい樹状突起を作ってもよく、また、成長は、核と結合するまで内側へ層ごとに継続する。
【００１３】
通常、発散手法は技術的に単純である。大過剰の小分子は、成長する分子と反応し、次いで、（例えば、蒸留によって）除去され、比較的コスト効率的で拡張可能な合成を提供する。しかし、発散手法では、カップリング反応の数が、世代ごとに指数関数的に増加する。結果的に、少量の構造的不純物を含むデンドリマーがほとんど避けられず、容易に除去することができない（例えば、ｎが大きい数である場合、ｎカップリング反応の生成物はｎ−１カップリングの生成物とほぼ同一の物理的性質を有する。）。その結果、ＭＳ較正などの用途のためには十分に規定された物質ではない。
【００１４】
収束手法は、各カップリングが一定の小さい数の反応（通常２つまたは３つの反応）を有するという明瞭な利点を有する。したがって、収束手法を用いると、反応を完了に追い込むことができ、副反応によって生成されたいかなる不純物も容易に検出され（ｎが小さいので）、除去される。しかしながら、収束手法を用いて生成された物質は十分に規定されるが、その合成は要求が厳しい。このことが、特殊用途以外のすべての経済的な使用の妨げになっている。
【００１５】
したがって、本開示の土台となる技術的問題は、改善された貯蔵寿命、低コストの、および広範囲の分子量にわたる単分散較正物質を提供することにより、これらの先行技術の困難を克服することであった。この技術的問題に対する解決策は特許請求の範囲において特徴付けられる実施形態によって提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本開示は、質量分析装置の較正に対して有用な、特にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩおよびＦＡＢ質量分析手法において有用な樹枝状分子（デンドリマー）、および約１，０００ダルトンを超える分子量の物質の質量分析に使用される任意の追加の手法に関する。本開示はまた、前記デンドリマーを合成する方法、ならびにこれらを使用する方法に関する。
【００１７】
本開示は、一態様において、合成較正物質に関する。本開示の合成較正物質は、ヒドロキシル末端核分子の「樹状突起化」、および任意選択で、後続の「脱保護」ステップによって合成される（「生成される」）樹枝状分子（デンドリマー）である。また任意選択で、樹状突起化および脱保護ステップは複数回実施されてもよく（各脱保護ステップは樹状突起化ステップに続き、また、第１の樹状突起化ステップ後の各樹状突起化ステップは脱保護ステップに続く）、有用な既知の大きさのデンドリマーを与える。各回の樹状突起化／脱保護のデンドリマー生成物は、同一の「世代」の一部である。例えば、核分子を用いて実施する第１の樹状突起化ステップは、第一世代、すなわち「Ｇ−１」デンドリマーを与える。同様に、結果として得られたＧ−１デンドリマーで実施された次の脱保護ステップは第一世代デンドリマーを与える。しかし、Ｇ−１脱保護ステップの後の樹状突起化ステップは第二世代、すなわち「Ｇ−２」デンドリマーをもたらす。したがって、各回の樹状突起化および脱保護は、同一の「世代」のデンドリマー生成物を与える。好ましい実施形態において、本開示は、相異なる分子量のデンドリマーの混合物、および特に前記デンドリマーの具体的な比例混合物（例えば等モル混合物）に関する。特に、本開示は、並行合成されたデンドリマーの混合物に関し、相異なる数のアルコール官能基を有する等モル量の核分子は、一緒に混合され、少なくとも１回の樹状突起化を受ける。任意選択で、結果として得られる混合物は数回の樹状突起化および脱保護を受け、広範囲の分子量にわたる、有用な既知の大きさのデンドリマー混合物を算出する場合がある。これらの各混合物内では、デンドリマーは同一世代であり、すべてが質量分析に有用である。さらに、樹状突起化および脱保護によって末端基を変性することができるので、本開示のデンドリマーはＭＳに有用なほとんど全範囲の溶媒、基材および分析種中で高い溶解性を有する。結果的に、本開示のデンドリマーは、内部較正物質（すなわち、試料調製の間に分析種および基材と直接混合することができる。）として有用である。
【００１８】
一実施形態において、式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含むデンドリマー組成物が提供される。式中、ｘが３から６の整数であり、また
Ａ）Ｃｏｒｅｘは、
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化１】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化２】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化３】
Ａ．４）ｘが６である場合
【化４】
Ａ．５）これらの組合せを表し、
Ｂ）Ｄは
【化５】
Ｃ）ＭはＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化６】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化７】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり、
Ｅ）ｒはｐ−１であり、
Ｆ）ｐは２ｎ−ｌであり、
Ｇ）ｎは１から１０の整数であり、かつ、
Ｈ）Ｘは（ＣＱ２）ａＣＱ３およびＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈからなる群から選択され、式中、Ｑは独立してＨまたはハロゲンを表し、Ｐｈはフェニルを表し、かつａは０から１６の整数である。
【００１９】
一実施形態において、式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含むデンドリマー組成物が提供される。式中、ｘが３から６の整数であり、
Ａ）Ｃｏｒｅｘは、
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化８】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化９】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化１０】
Ａ．４）ｘが６である場合
【化１１】
Ａ．５）これらの組合せを表し、
Ｂ）Ｄは
【化１２】
を表し、
Ｃ）ＭはＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化１３】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化１４】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり、
Ｅ）ｒはｐ−１であり、
Ｆ）ｐは３ｎ−ｌであり、かつ
Ｇ）ｎは１から１０の整数である。
【００２０】
一実施形態において、デンドリマー組成物のＡ．１、Ａ．２、Ａ．３およびＡ．４は、ほぼ等モル量存在する。別の実施形態において、Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３およびＡ．４は同位体濃縮されている。別の実施形態において、Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３、Ａ．４、Ｂ．１、Ｂ．２およびＲ２は、同位体濃縮されている。別の実施形態において、同位体濃縮は１２Ｃの同位体濃縮である。
【００２１】
一実施形態において、ａ）１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトール、ジペンタエリトリトールおよびこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの核を準備するステップと、ｂ）少なくとも１つの核が１回の樹状突起化を受けるステップと、ｃ）任意選択で、続いて少なくとも１つの核が１回の脱保護を受けるステップと、ｄ）任意選択で、続いてステップｂ）およびｃ）を繰り返すステップと、任意選択で、続いてステップｄ）を繰り返し、それによって所望のデンドリマー組成物を取得するステップを含む、デンドリマー組成物を製造する方法が提供される。本実施形態の一態様において、少なくとも１つの核は、１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトールおよびジペンタエリトリトールの組合せである。本実施形態の別の態様において、１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトールおよびジペンタエリトリトールの組合せは、ほぼ等モルである。本実施形態の一態様において、樹状突起化ステップｂ）はビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマーを使用するステップを含む。本実施形態の別の態様において、ステップｂ）は式１（下記）の化合物を使用するステップを含む。
【００２２】
一実施形態において、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを使用する質量分析装置を較正する方法であって、特定の物理的性質を有する少なくとも１つの本開示のデンドリマー準備することと、前記少なくとも１つのデンドリマーをイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンを提供することと、前記１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、前記データを前記特定の物理的性質と関連付けることと、を含む、質量分析装置を較正する方法が提供される。
【００２３】
一実施形態において、特定のデンドリマーの物理的性質を有する、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、試料を準備することと、試料の少なくとも一部を少なくとも１つのデンドリマーの少なくとも一部と組み合わせることと、試料および少なくとも１つのデンドリマーをタンデムでイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンを提供することと、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、前記データを前記少なくとも１つのデンドリマーの前記特定の物理的性質と関連付け、それによって前記試料の物理的性質を判定することと、を含む、試料の物理的性質を判定する方法が提供される。
【００２４】
さらなる態様において、本開示は、水酸基末端核分子の樹状突起化、および任意選択により後続の脱保護ステップによって合成較正物質（デンドリマー）を製造する方法に関する。好ましい実施形態において、樹状突起化および脱保護ステップは複数回実施されてもよく、（ただし、各脱保護ステップは樹状突起化ステップに続き、また、第１の樹状突起化ステップ後の各樹状突起化ステップは脱保護ステップに続く。）既知の有用な大きさのデンドリマーを与える。第１の樹状突起化ステップに続く各樹状突起化および各脱保護ステップは、任意選択である。各樹状突起化ステップおよび各脱保護ステップは、本開示の有用な新規デンドリマーを与える。特に、本開示は、並行合成された較正物質（デンドリマー）の混合物を製造する方法に関し、相異なる数のアルコール官能基を有する等モル量の核分子は、一緒に混合され、少なくとも１回の樹状突起化を受ける。任意選択で、結果として得られる混合物は、数回の樹状突起化および脱保護を受け、広範囲の分子量にわたって、既知の有用な大きさのデンドリマー混合物を得ることができる。結果として得られる各混合物において、デンドリマーは同一世代であり、すべてが質量分析に有用である。
【００２５】
さらに別の態様において、本開示は、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを使用する、質量分析装置を較正する方法であって、１）特定の物理的性質を有する、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、２）前記少なくとも１つのデンドリマーをイオン化し、前記デンドリマーの１つまたは複数のイオンを提供することと、３）前記１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、４）前記特定の物理的性質に前記データを関連付けることと、を含む、方法に関する。好ましい実施形態において、本開示は、試料の特定の物理的性質を判定する方法であって、１）特定のデンドリマーの物理的性質を有する、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、２）特定の試料の物理的性質を有する試料を準備することと、３）試料の少なくとも一部をデンドリマーの少なくとも一部と組み合わせることと、４）試料および少なくとも１つのデンドリマーをタンデムでイオン化し、前記デンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンを提供することと、５）前記デンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、６）前記少なくとも１つのデンドリマーの特定の物理的性質と前記データを関連付けることと、を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
本開示の性質、目的および利点についてさらに理解するためには、以下の詳細な説明を参照し、以下の図面（図中、同様な参照番号は同様な要素を示す。）に関連付けて読まれるべきである。
【００２７】
【図１】本開示の三官能性「Ｃ−３」較正物質の合成を示す概略図である。
【図２】本開示の四官能性「Ｃ−４」較正物質の合成を示す概略図である。
【図３】本開示の五官能性「Ｃ−５」較正物質の合成を示す概略図である。
【図４】本開示の六官能性「Ｃ−６」較正物質の合成を示す概略図である。
【図５】本開示の三、四、五および六官能性較正物質の並行合成を示す概略図である。
【図６】本開示のデンドリマー１、１１、２１および３１の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図７】本開示のデンドリマー３、１３、２３および３３の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図８】本開示のデンドリマー４、１４、２４および３４の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図９】本開示のデンドリマー５、１５、２５および３５の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１０】本開示のデンドリマー６、１６、２６および３６の等モル混合物のＭＡＬＤＴ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１１】本開示のデンドリマー７、１７、２７および３７の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１２】本開示のデンドリマー８、１８、２８および３８の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１３Ａ】樹状突起化キャビタンド（Ｃａｖ−（［Ｇ１］−Ｐｈ）８、分子式Ｃ１９２Ｈ１７６Ｏ４８を有する）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す図である。
【図１３Ｂ】樹状突起化キャビタンド（Ｃａｖ−（［Ｇ１］−Ｐｈ）８、分子式Ｃ１９２Ｈ１７６Ｏ４８を有する）の構造を示す図である。
【図１４】分子式Ｃ６６Ｈ１３４Ｏ３４を有するＰＥＧ１９７０ ３３ｍｅｒのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１５】分子式Ｃ８６Ｈ１７４Ｏ４４を有するＰＥＧ１９７０ ４３ｍｅｒのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１６】分子式Ｃ１０６Ｈ２１４Ｏ５４を有するＰＥＧ１９７０ ５３ｍｅｒのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１７】式Ｃ８８Ｈ１１８Ｎ１６Ｏ２２Ｓ５＋を有する、専有ペプチドＪＦ−１４８５のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１８】デンドリマー１（Ｃ３−（［Ｇ−１］Ｐｈ）３）、１１（Ｃ４−（［Ｇ−１］Ｐｈ）４）、２１（Ｃ５−（［Ｇ−１］Ｐｈ）５）、および３１（Ｃ６−（［Ｇ−１］Ｐｈ）６）のＧ１混合物のＥＳＩ質量スペクトルを示す図である。試料は、アセトニトリル中で溶解し、対イオンを添加しないで直接注入することにより調製した。残留ナトリウムは、単一のナトリウム陽イオンが観察される質量スペクトルを与えた。
【図１９】デンドリマー３（Ｃ３−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）３）、１３（Ｃ４−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）４）、２３（Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５）、および３３（Ｃ６−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）６）のＧ１混合物のＥＳＩ質量スペクトルを示す図である。試料は、アセトニトリル中で溶解し、対イオンを添加しないで直接注入することにより調製した。残留ナトリウムは、デンドリマー３に対して１個のナトリウム陽イオン、ならびにデンドリマー１３、２３および３３に対して２倍に帯電した錯体（２個のナトリウム陽イオン）により、観察される質量スペクトルを与えた。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
主題の開示がさらに記載される前に、本開示は、特定の実施形態の変形を行うことができるが、それでもなお、添付された特許請求の範囲内にあり、下記の本開示の特定の実施形態に限定されるものではないことが理解されるべきである。また、使用される用語は、特定の実施形態を記載するためであり、限定されるようには意図されないことが理解されるべきである。むしろ、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によって確立される。
【００２９】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別途指示しない限り、複数への言及を包含する。別途規定しない限り、本明細書において使用される技術および科学用語はすべて、本開示が属する分野の当業者が一般に理解されるのと同一の意味を有する。
【００３０】
本明細書において使用される場合、用語「［Ｍ＋Ａｇ］＋」は、１分子当たり１個の銀陽イオンが対イオンとして試料のイオン化中に結合されることを示す。他の対イオンは、当業者によって容易に認識されるように、例えば「Ｈ」、「Ｎａ」および「Ｋ」を包含することができるが、これらに限定されない。本明細書において使用される場合、用語「ｍ／ｚ」は質量電荷比を示す。本明細書において使用される場合、「ＭＷ」は分子量を意味する。
【００３１】
最近開発された脂肪族ポリ（エステル）の発散合成は、両方の技術の欠点を最小限に抑えつつ、両方の利点を提供するように見える。枝状の発散合成は、「カップリングステップ」および「脱保護ステップ」という２つの合成ステップをそれぞれ繰り返して、質量を十分に規定されるように（指数関数的であるが）増加させる反復プロセスである。図１において、例えば、「カップリングステップ」（例えば図１のステップ「ｉ」）は、核構造からの特定の数のアルコール官能基（ＯＨ基）の、ベンジリデン保護ビスＭＰＡ酸無水物（ＩＵＰＡＣ名はビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマー（図１の「モノマー」）との反応を含む。そうする際に、正確な数のモノマー単位が核分子に結合され、離散的な分子量の新規の樹枝状分子を与える。「脱保護ステップ」（例えば図１のステップ「ｉｉ」）において、パラジウム触媒（Ｐｅａｒｌｍａｎ触媒としても知られる黒鉛に支持されたパラジウム（ＩＩ）水酸化物）は、新規核を生成する水素化分解反応によって、ベンジリデン保護基を除去するために使用される。そのように行うことにおいて、カップリングおよび脱保護の各反復を行った後のアルコール官能基の数は倍加し、それによりプロセスの繰り返しを可能にし、また構造を（ただし十分に制御された方式で）指数関数的に成長するのを可能にし、単分散生成物を得ることが留意されるべきである。カップリングステップが、酸無水物とのアルコール官能基の、簡潔で高活性のエステル化反応を伴っているので、反応は「定量的」収率（９９．９％より大きい）で副生物なしで実施することができる。さらに、いくつかの脱保護ステップ（例えば、パラジウム（「Ｐｄ」）で触媒される水素化分解および対応するベンジリデンおよびアセタール保護モノマーの酸触媒加水分解）は、質量分析の較正物質として働くのに十分に純粋な単分散の化合物を準備して、同様に簡潔で定量的様式で行うことができる。同時に、この発散法は、クロマトグラフィー精製なしで技術的に単純な高速の経路を提供し、費用効率が高く拡張可能な生産を可能にする。
【００３２】
本開示の合成デンドリマー較正物質には、他の較正物質に勝るいくつかの明瞭な利点がある。ペプチドおよびタンパク質は、従来、調製し精製することができた、十分に高い分子量を有する唯一の単分散高分子であったので、これらは市販標準として較正に使用されてきた。ペプチドおよびタンパク質の較正物質が実現可能な標準を提供している一方で、それらは、短い貯蔵寿命（ペプチダーゼの蔓延のために）および高いコスト（この合成および精製が典型的にはミリグラム規模で行われるので）の不利益を被る。これらの較正物質の代表的な例は表１に示される。
【表１】
【００３３】
合成較正物質には、貯蔵寿命の向上を含むいくつかの潜在的な利点がある。しかし、最近まで、競争的価格で製造することができる製品は唯一、多分散ポリマー（すなわち、これらは広範囲の質量特性を示す。）であった。複数種が存在すること（およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩおよびＦＡＢを含む、ＭＳでの相異なる対イオンの蔓延）が、ペプチドおよびタンパク質に代わる魅力のある代替になることを妨げてきた。Ｐ１４Ｒなどの単分散の合成較正物質は、次に安価なペプチド較正物質（インシュリン）の少なくとも３倍高価であり、また最も安価なペプチド較正物質（インシュリンＢ鎖）より１，０００倍を超えて高価である。
【００３４】
対照的に、本開示の合成デンドリマー較正物質を製造することはより安価である。これが、費用効率が高く、にもかかわらず、高度に純粋な樹枝状化合物への迅速な合成法であるため、特にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩまたはＦＡＢ方法を使用する場合、本開示のデンドリマー較正物質は、質量分析装置の較正に対し競合的解決法を提供する。さらに、これらは混合物として合成し、それにより、調製、精製および包装コストを低減させることができる。目下利用可能なペプチドおよびタンパク質較正物質が広く使用され受け入れられているが、本開示のデンドリマー較正物質の低減されたコスト、ならびにその改善された貯蔵寿命および溶媒相溶性によって、これらの即座の受け入れをもたらすはずである。
【００３５】
デンドリマーには、その構造を示すための標準命名法が与えられている。例えば、名称「ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚ」および「ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］ＯＨｑ）ｚ」において、「ＣＸ」という用語は、核上のアルコール官能基の数（「核数」）を指す。ただし、「Ｘ」は整数である。したがって、「Ｃ３」は核として１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン（トリオール）を指す。「Ｃ４」は核としてペンタエリトリトール（テトラオール）を指す。「Ｃ５」は核としてキシリトール（ペンタオール）を指す。また、Ｃ６は核としてジペンタエリトリトール（ヘキサオール）を指す。「Ｇ−ｎ」という用語は世代数を指し、付加された分岐ポイントの層数を示し、また起こったカップリングおよび脱保護反復の数を指す。例えば、「［Ｇ−１］」は「世代１」を示し、１回のカップリングが生じたこと（例えば図１のデンドリマー１、「Ｃ３（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）３」を参照）または１回のカップリング−脱保護が生じたこと（例えば図１のデンドリマー２、「Ｃ３（［Ｇ−１］ＯＨ２）３」を参照）を示す。言いかえれば、デンドリマー１およびデンドリマー２は同一の世代である、世代１、すなわち「Ｇ−１」である。各出発アルコールは楔形の樹枝状部分を有し、「樹状突起」と呼ばれる。末端基（１樹状突起当たり）は、ベンジリデン保護構造についてＰｈｐ（ここで「ｐ」は、２ｎ−１の値を有する）、またはヒドロキシル化構造についてＯＨｑ（ここで「ｑ」は、２ｎの値を有する）のいずれかによって示され、ここで、「ｐ」および「ｑ」は、１樹状突起当たり（楔形の樹枝状部分当たり）の末端基の数を示す。最終的に、核数に対応する１核当たりの樹状突起の数は、「ｚ」によって示される。
【００３６】
実施例１
一般合成手順
樹枝状較正物質の調製のための一般手順は、Ｇｒａｙｓｏｎら（Ｇｒａｙｓｏｎ，Ｓ．Ｍ．；Ｆｒｅｃｈｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｊ． Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００１；３４：６５４２−６５４４）、およびＩｈｒｅら（Ｉｈｒｅ，Ｈ．；Ｐａｄｉｌｌａ ｄｅ Ｊｅｓｕｓ，Ｏ．Ｌ．；Ｆｒｅｃｈｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｊ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００１；１２３：５９０８−５９１７）によって公開されたものに一般に従い、その各々は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。図１に示されるように、樹枝状合成は重要な２つのステップ、すなわち、ｉ）「保護」モノマーがすべての活性な周辺の官能基に結合される樹枝状成長、すなわち「樹状突起化」ステップ、およびｉｉ）表面上の活性な官能基の増加した多重度を暴露するために、各モノマーを変化させる活性化、すなわち「脱保護」ステップの繰り返しを含む。これらの２ステップの連続する繰り返しは、周辺の官能基および分子量の両方において指数関数的な増加をもたらす。
【００３７】
実施例２
ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマーの調製
ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマーは、以前にＩｈｒｅ，Ｈ．；Ｐａｄｉｌｌａ ｄｅ Ｊｅｓｕｓ，Ｏ．Ｌ．；Ｆｒｅｃｈｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｊ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００１，１２３，５９０８−５９１７（これらは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）によって報告された合成に従って調製された。
【００３８】
実施例３
ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚの調製のための一般樹状突起化手順
本実施例の手順は、図１のステップ「ｉ」（例えば、水酸基末端核からのデンドリマー１の合成、デンドリマー２からのデンドリマー３の合成、等々）として概略的に示される。丸底フラスコに、既知の量の水酸基末端核（例えば１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタン、ペンタエリトリトール、キシリトールまたはジペンタエリトリトール）、またはデンドリマー（例えば、「ｒ」が適宜２（ｎ−１）の値を有する一般式ＣＸ−（［Ｇ−（ｎ−１）］ＯＨｒ）ｚを有するもの）のいずれか、ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマー（ビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマーの１．１当量（水酸基末端核またはデンドリマーの１つの−ＯＨ当たり）、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の０．１モル当量（水酸基末端核、またはデンドリマーの１つの−ＯＨ当たり）を添加した。反応混合物を最小量のピリジンに溶解し、その量の２倍（ピリジンに対して）のジクロロメタンに希釈し、次いで、反応混合物は、標準温度および圧力で４時間激しく撹拌した。その反応を、カップリング度を求めるためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによって定期的にモニターした。エステル化の完結がＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによって観察された後、フラスコ内容物を分液漏斗に移し、ジクロロメタンで希釈して、１Ｍ水性ＮａＨＳＯ４（重硫酸ナトリウム）で３回抽出し、また１Ｍ水性ＮａＨＣＯ３（重炭酸ナトリウム）で３回抽出した。有機層を真空内で減量させ（ｒｅｄｕｃｅｄ）試料を濃縮し、ヘキサン中に沈澱させ、濾過して、ベンジリデン保護デンドリマーＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚを、白色粉状の沈殿物として得た。次いで、結果として得られた沈殿物は標準プロトコルによって分光分析のために調製されてもよい。
【００３９】
実施例４
ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］ＯＨｑ）ｚの調製のための一般脱保護手順
本実施例の手順は、図１のステップ「ｉｉ」（例えば、デンドリマー１からのデンドリマー２の合成、デンドリマー３からのデンドリマー４の合成、等々）として概略的に示される。丸底フラスコに、「ｒ」が２（ｎ−１）の値を有する（ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｒ）ｚの測った量を加え、十分な量のジクロロメタン：メタノール２：１溶液に溶解した。Ｐｅａｒｌｍａｎ触媒（Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ）を反応混合物に添加し、フラスコ内容物は水素ガスの８気圧（ａｔｍ）の下に配置した。反応混合物を室温で２４時間激しく撹拌した。完全な脱保護をＭＡＬＤＩ ＭＳの生データによって確認し、その後にＰｄ（ＯＨ）２／Ｃはセライト（登録商標）上で濾過によって除去した。次いで、濾液を真空中で減量させ（ｒｅｄｕｃｅｄ）式ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］ＯＨｑ）ｚを有する透明なガラス質固体が得られた。次いで、結果として得られた濾液は標準プロトコルによって分光分析のために調製してもよい。
【００４０】
実施例５
三官能性「Ｃ−３」較正物質の合成
本実施例５の三官能性デンドリマー種を図１に示す。
【００４１】
図１のデンドリマー１、Ｃ３−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）３の合成：市販の１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタン（ＩＵＰＡＣ名：２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパン−１，３−ジオール）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）３が得られた。分子式：Ｃ４１Ｈ４８Ｏ１２、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的に正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２２０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２０。
【００４２】
図１のデンドリマー２、Ｃ３−（［Ｇ−１］ＯＨ２）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−１］ＯＨ２）３が得られた。分子式：Ｃ２０Ｈ３６Ｏ１２。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２１０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２２。
【００４３】
図１のデンドリマー３、Ｃ３−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）３が得られた。分子式：Ｃ９２Ｈ１０８Ｏ３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１７９９．５９８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１７９９．５９。
【００４４】
図１のデンドリマー４、Ｃ３−（［Ｇ−２］ＯＨ４）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−２］ＯＨ４）３が得られた。分子式：Ｃ５０Ｈ８４Ｏ３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１１８７．４９５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１１８７．４６。
【００４５】
図１のデンドリマー５、Ｃ３−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー４は、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）３が得られた。分子式：Ｃ１９４Ｈ２２８Ｏ６６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３７２０．３５４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］ ＋ｍ／ｚ＝３７２０．４２。
【００４６】
図１のデンドリマー６、Ｃ３−（［Ｇ−３］ＯＨ８）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー５は、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−３］ＯＨ８）３が得られた。分子式：Ｃ１１０Ｈ１８０Ｏ６６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２５８０．０６３。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ２５８０．１０。
【００４７】
図１のデンドリマー７、Ｃ３−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー６を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）３が得られた。分子式：Ｃ３９８Ｈ４６８Ｏ１３８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７５６１．８６５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７５５９．９。
【００４８】
図１のデンドリマー８、Ｃ３−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）３が得られた。分子式：Ｃ２３０Ｈ３７２Ｏ１３８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５３６５．２５６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５３６６．６。
【００４９】
図１のデンドリマー９、Ｃ３−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ３−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）３が得られよう。分子式：Ｃ８０６Ｈ９４８Ｏ２８２。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５２５６．１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００５０】
図１のデンドリマー１０、Ｃ３−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ３−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）３が得られよう。分子式：Ｃ４７０Ｈ７５６Ｏ２８２。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０９４２．０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００５１】
実施例６
四官能性「Ｃ−４」較正物質の合成
本実施例６の四官能性デンドリマー種を図２に示す。
【００５２】
図２のデンドリマー１１、Ｃ４−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）４の合成：市販のペンタエリトリトール（ＩＵＰＡＣ名：２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ４−（［Ｇ−１］Ｐｈ）４が得られた。分子式：Ｃ５３Ｈ６０Ｏ１６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１０５９．２９２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１０５９．２８。
【００５３】
図２のデンドリマー１２、Ｃ４−（［Ｇ−１］ＯＨ２）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ４−（［Ｇ−１］ＯＨ２）４が得られた。分子式：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ１６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝６２３．２５２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝６２３．０５。
【００５４】
図２のデンドリマー１３、Ｃ４−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ４−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）４が得られた。分子式：Ｃ１２１Ｈ１４０Ｏ４０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２３３９．７９７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２３３９．８５。
【００５５】
図２のデンドリマー１４、Ｃ４−（［Ｇ−２］ＯＨ４）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ４−（［Ｇ−２］ＯＨ４）４が得られた。分子式：Ｃ６５Ｈ１０８Ｏ４０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１５５１．６３１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１５５１．６２。
【００５６】
図２のデンドリマー１５、Ｃ４−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１４を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ４−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）４が得られた。分子式：Ｃ２５７Ｈ３００Ｏ８８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝４９００．８０５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝４９００．９８。
【００５７】
図２のデンドリマー１６、Ｃ４−（［Ｇ−３］ＯＨ８）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１５を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ４−（［Ｇ−３］ＯＨ８）４が得られた。分子式：Ｃ１４５Ｈ２３６Ｏ８８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３４０８．３８９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３４０８．４１。
【００５８】
図２のデンドリマー１７、Ｃ４−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１６を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ３−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）４が得られよう。分子式：Ｃ５２９Ｈ６２０Ｏ１８４。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１００３０．５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１００１８．１。
【００５９】
図２のデンドリマー１８、Ｃ４−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ４−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）４が得られよう。分子式：Ｃ３０５Ｈ４９２Ｏ１８４。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７１２６．１．観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７１２３．５。
【００６０】
図２のデンドリマー１９、Ｃ４−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ４−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）４が得られよう。分子式：Ｃ１０７３Ｈ１２６０Ｏ３７６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２０２８１．４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００６１】
図２のデンドリマー２０、Ｃ４−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ４−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）４が得られよう。分子式：Ｃ６２５Ｈ１００４Ｏ３７６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１４５５７．６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００６２】
実施例７
五官能性「Ｃ−５」較正物質の合成
本実施例７の五官能性デンドリマー種を図３に示す。
【００６３】
図３のデンドリマー２１Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）５、の合成：市販のキシリトール（ＩＵＰＡＣ名：ペンタン−１，２，３，４，５−ｐｅｎｔｏｌ）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）５が得られた。分子式：Ｃ６５Ｈ７２Ｏ２０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２７９．３６６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２７９．３９。
【００６４】
図３のデンドリマー２２、Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］ＯＨ２）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］ＯＨ２）５が得られた。分子式：Ｃ３０Ｈ５２Ｏ２０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７５５．２９５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７５５．１７。
【００６５】
図３のデンドリマー２３、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５が得られた。分子式：Ｃ１５０Ｈ１７２Ｏ５０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８７９．９９７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８８０．０１。
【００６６】
図３のデンドリマー２３、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５が得られた。分子式：Ｃ１５０Ｈ１７２Ｏ５０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８７９．９９７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８８０．０１。
【００６７】
図３のデンドリマー２４、Ｃ５−（［Ｇ−２］ＯＨ４）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ５−（［Ｇ−２］ＯＨ４）５が得られた。分子式：Ｃ８０Ｈ１３２Ｏ５０。分子式：Ｃ８０Ｈ１３２Ｏ５０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９１５．７６８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９１５．７８。
【００６８】
図３のデンドリマー２５、Ｃ５−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２４を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）５が得られた。分子式：Ｃ３２０Ｈ３７２Ｏ１１０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝６０８１．２５７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝６０８１．５１。
【００６９】
図３のデンドリマー２６、Ｃ５−（［Ｇ−３］ＯＨ８）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２５を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ５−（［Ｇ−３］ＯＨ８）５が得られた。分子式：Ｃ１８０Ｈ２９２Ｏ１１０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４２３６．７１５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４２３６．８０。
【００７０】
図３のデンドリマー２７、Ｃ５−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２６は、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ５−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）５が得られよう。分子式：Ｃ６６０Ｈ７７２Ｏ２３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２４９３．１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２４７６．０。
【００７１】
図３のデンドリマー２８、Ｃ５−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ５−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）５が得られよう。分子式：Ｃ３８０Ｈ６１２Ｏ２３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝８８８３．９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝８８８０．１。
【００７２】
図３のデンドリマー２９、Ｃ５−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ５−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）５が得られよう。分子式：Ｃ１３４０Ｈ１５７２Ｏ４７０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２５３０６．７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００７３】
図３のデンドリマー３０、Ｃ５−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ５−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）５が得られよう。分子式：Ｃ７８０Ｈ１２５２Ｏ４７０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１８１７３．２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００７４】
実施例８
六官能性「Ｃ−６」較正物質の合成
本実施例８の六官能性デンドリマー種を図４に示す。
【００７５】
図４のデンドリマー３１、Ｃ６−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）６の合成：市販のジペンタエリトリトール（ＩＵＰＡＣ名：２−［［３−ヒドロキシ−２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロポキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ６−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）６が得られた。分子式：Ｃ８２Ｈ９４Ｏ２５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５８５．５１４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５８５．５３。
【００７６】
図４のデンドリマー３２、Ｃ６−（［Ｇ−ｌ］ＯＨ２）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ６−（［Ｇ−１］ＯＨ２）６が得られた。分子式：Ｃ４０Ｈ７０Ｏ２５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９７３．４１０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９７３．３４。
【００７７】
図４のデンドリマー３３、Ｃ６−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ６−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）６が得られた。分子式：Ｃ１８４Ｈ２１４Ｏ６１。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３５０６．２６９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３５０６．２５。
【００７８】
図４のデンドリマー３４、Ｃ６−（［Ｇ−２］ＯＨ４）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ６−（［Ｇ−２］ＯＨ４）６が得られた。分子式：Ｃ１００Ｈ１６６Ｏ６１。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３６５．９７９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３６５．９８。
【００７９】
図４のデンドリマー３５、Ｃ６−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３４を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ６−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）６が得られた。分子式：Ｃ３８８Ｈ４５４Ｏ１３３。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７３４７．７８１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７３４７．０。
【００８０】
図４のデンドリマー３６、Ｃ６−（［Ｇ−３］ＯＨ８）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３５を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ６−（［Ｇ−３］ＯＨ８）６が得られた。分子式：Ｃ２２０Ｈ３５８Ｏ１３３。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５１５１．１１５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５１５１．２８。
【００８１】
図４のデンドリマー３７、Ｃ６−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３６を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ６−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）６が得られよう。分子式：Ｃ７９６Ｈ９３４Ｏ２７７。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１４９６９．７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５０２０．１。
【００８２】
図４のデンドリマー３８、Ｃ６−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ６−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）６が得られよう。分子式：Ｃ４６０Ｈ７４２Ｏ２７７。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０６５５．６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０７２２．６。
【００８３】
図４のデンドリマー３９、Ｃ６−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ６−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）６が得られよう。分子式：Ｃ１６１２Ｈ１８９４Ｏ５６５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３０３４６．１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００８４】
図４のデンドリマー４０、Ｃ６−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ６−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）６が得られよう。分子式：Ｃ９４０Ｈ１５１０Ｏ５６５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２１８０２．８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００８５】
実施例９
デンドリマー１、１１、２１および３１の並行合成
先行技術においては、広範囲較正物質は、較正物質カクテルを得るために、別々に調製され精製された個々のペプチドの適正量を混合することにより製造される。しかし、本明細書において記載され、図５に概略図で示される合成方法論は、十分に規定された市販の出発物質の混合物から始めて並行してそれらを樹状突起化することによって較正物質の組を調製する独特の方法を提供する。
【００８６】
実施例３および４に詳述されるように（また、例えば図１に示されるように）、ステップ「ｉ」および「ｉｉ」の連続する繰り返しによって、（近似的に）指数関数的に増加する分子量を有するデンドリマーを調製することができる。例えば、Ｃ−３水酸基末端核のみから始めることによって、ステップ「ｉ」および「ｉｉ」の連続する繰り返しで、７３０、１６９０、３６１０、７４５０、１５１００および３０５００の近似分子量を有する単分散デンドリマー較正物質（例えば、図１のデンドリマー１、３、５、７および９など）を製造することができる。相異なる数のアルコール官能基（例えばＣ−４、Ｃ−５またはＣ−６ヒドロキシル末端核）を有する異なる核から始めることによって、広範囲の分布の広範囲の較正物質を効率的に調製することができる。
【００８７】
較正物質混合物を製造する特に効率的な方法は、単一バッチで核の混合物（例えばＣ−３、Ｃ−４、Ｃ−５および／またはＣ−６核の等モル混合物）を使用して、樹状突起化プロセスを行うことである。例えば、また図５に示すように、単一樹状突起化ステップの後に、４つの核の混合物は、（図６に実証されるように）８３９、１０５９、１２７９および１５８５の分子量（銀対イオンを含む）を有する１組の「第一世代」デンドリマー１、１１、２１および３１を与える。ステップ「ｉｉ」および「ｉ」の追加の繰り返しの後に、図５にも示されるように、「第２世代」較正物質（３、１３、２３、３３）の組は、（図７に実証されるように）１８００、２３４０、２８８０および３５０６の分子量を有する。このように、ステップ「ｉ」および「ｉｉ」の連続する繰り返しで、一連の４点組（例えば図６〜図１２参照）への迅速なアクセスを可能にする。
【００８８】
最も望ましい較正物質は、多数の十分に規定された単分散化合物（例えば図５の反応スキームおよび図６〜図１２のスペクトルに示されるような）の混合物であるので、各化学種を別々に調製し各生成物の分離後にそれらを混合するのではなく、１バッチで（核の選択された混合物を樹状突起化することによって）相異なる較正物質を一緒に調製することができるという追加の利点を、本明細書に記載された合成的手法は有する。デンドリマーを調製する以前の試みは十分に規定された単一生成物を求めたので、この並行方法は較正物質の組を調製するコストおよび負担の軽減において先例がなく価値がある。
【００８９】
デンドリマー１、１１、２１および３１の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：（トリスヒドロキシメチル）エタン（Ｃ３−ＯＨ３）、ペンタエリトリトール（Ｃ４−ＯＨ４）、キシリトール（Ｃ５−ＯＨ５）およびジペンタエリトリトール（Ｃ６−ＯＨ６）の等モル混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー１、１１、２１および３１の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−１］Ｐｈ）ｚが得られた。図６に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２２０；１，０５９．２９３；１，２７９．３６７；１，５８５．５１４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２０；１，０５９．２８；１，２７９．３９；１５８５．５３。図６から理解できるように、デンドリマー１、１１、２１および３１の混合物は、８００〜１，６００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９０】
実施例１０
デンドリマー２、１２、２２および３２の並行合成
デンドリマー２、１２、２２および３２の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−１］ＯＨ２）ｚの合成（例えば図５の反応スキーム、参照）：実施例９からのベンジリデン保護デンドリマー１、１１、２１および３１の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー２、１２、２２および３２の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−１］ＯＨ２）ｚが得られた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２１０；６２３．２５３；７５５．２９５；９７３．４１０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２２；６２３．０５；７５５．１７；および９７３．３４（図示せず）。
【００９１】
実施例１１
デンドリマー３、１３、２３および３３の並行合成
デンドリマー３、１３、２３および３３の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１０からのヒドロキシル官能化デンドリマー２、１２、２２および３２の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー３、１３、２３および３３の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）ｚが得られた。図７に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１，７９９．５９８；２，３３９．７９７；２，８７９．９９７；３，５０６．２６９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１，７９９．５９；２，３３９．８５；２，８８０．０１；３，５０６．２５。図７から理解できるように、デンドリマー３、１３、２３および３３の混合物は、１，８００〜３，６００質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９２】
実施例１２
デンドリマー４、１４、２４および３４の並行合成
デンドリマー４、１４、２４および３４の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−２］ＯＨ４）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１１からのベンジリデン保護デンドリマー３、１３、２３および３３の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー４、１４、２４および３４の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−２］ＯＨ４）Ｚが得られた。図８に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１，１８７．４９５；１，５５１．６３１；１，９１５．７６８；２，３６５．９７９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１，１８７．４６；１，５５１．６２；１，９１５．７８；２，３６５．９８。図７から理解できるように、デンドリマー４、１４、２４および３４の混合物は、１，２００〜２，４００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９３】
実施例１３
デンドリマー５、１５、２５および３５の並行合成
デンドリマー５、１５、２５および３５の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１２からのヒドロキシル官能化デンドリマー４、１４、２４および３４の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２からのベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー５、１５、２５および３５の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）Ｚが得られた。図９に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３，７２０．３５４；４，９００．８０５；６，０８１．２５７；７，３４７．７８１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３，７２０．４２；４，９００．９８；６，０８１．５１；および７，３４８．００。図９から理解できるように、デンドリマー５、１５、２５および３５の混合物は、３，６００〜７，２００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９４】
実施例１４
デンドリマー６、１６、２６および３６の並行合成
デンドリマー６、１６、２６、３６の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−３］ＯＨ８）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１３からのベンジリデン保護デンドリマー５、１５、２５および３５の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー６、１６、２６、３６の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−３］ＯＨ８）Ｚが得られた。図１０に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２，５８０．０６３；３，４０８．３８９；４，２３６．７１５；５，１５１．１１５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２，５８０．１０；３，４０８．４１；４，２３６．８０；５，１５１．２８。図１０から認識することができるように、デンドリマー６、１６、２６および３６の混合物は、２，５００〜５，１００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９５】
実施例１５
デンドリマー７、１７、２７および３７の並行合成
デンドリマー７、１７、２７および３７の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１４からのヒドロキシル官能化デンドリマー６、１６、２６および３６の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー７、１７、２７および３７の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）Ｚが得られた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７，５６１．９；１０，０２２．８；１２，４８３．８；１５，０３０．８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７，５６２；１０，０２３；１２，４８４；１５，０３１。図１１から認識することができるように、デンドリマー７、１７、２７および３７の混合物は、７，５００〜１５，０００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９６】
実施例１６
デンドリマー８、１８、２８および３８の並行合成
デンドリマー８、１８、２８および３８の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）Ｚの合成：実施例１５からのベンジリデン保護デンドリマー７、１７、２７および３７の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー８、１８、２８および３８の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）Ｚが得られた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５，３６５．２；７，１２１．９；８，８７８．６；１０，７２１．４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５，３６６．６１９；７，１２３．５０４；８，８８０．１１１；１０，７２２．５７２。図１２から理解できるように、デンドリマー８、１８、２８および３８の混合物は、５，５００〜１０，５００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９７】
実施例１７
デンドリマー９、１９、２９および３９の並行合成
デンドリマー９、１９、２９および３９の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）Ｚの合成：実施例１６からのヒドロキシル官能化デンドリマー８、１８、２８および３８の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例３のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、デンドリマー９、１９、２９および３９の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）Ｚが得られよう。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５，２４４．９；２０，２６６．９；２５，２８８．８；３０，３９６．９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００９８】
実施例１８
デンドリマー１０、２０、３０および４０の並行合成
デンドリマー１０、２０、３０および４０の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）Ｚの合成：実施例１７からのベンジリデン保護デンドリマー、９、１９、２９および３９の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、デンドリマー１０、２０、３０および４０の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）Ｚが得られよう。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０，９３５．５；１４，５４８．９；１８，１６２．４；２１，８６１．９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００９９】
実施例１９
較正物質試験−樹状突起化キャビタンド
高質量分解能の正確なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータを得る際に本開示の較正物質の有用性を検証するために、樹状突起化キャビタンド（単分散合成分子）を検討した。結果は図１３Ａに示す。樹状突起化キャビタンド（図１３Ｂに示すＣａｖ−（［Ｇ１］−Ｐｈ）８）は分子式Ｃ１９２Ｈ１７６Ｏ４８を有する。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３，２７２．１２２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３，２７２．０６。質量精度：１８．９ｐｐｍ。
【０１００】
実施例２０
較正物質試験−ポリ（エチレン）グリコール、ＰＥＧ１９７０
高質量分解能の正確なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータを得る際の本開示の較正物質の有用性をさらに検証するために、合成高分子ＰＥＧ１９７０（３つの相異なるオリゴマー：３３ｍｅｒ、４３ｍｅｒおよび５３ｍｅｒの多分散ポリマー）を検討した。ＰＥＧ１９７０の数平均分子量（Ｍｎ）は１９７０であり、その多分散性指数（ＰＤＩ）は１．０５である。分析結果は図１４〜図１６に示す。
【０１０１】
ＰＥＧ１９７０ ３３ｍｅｒは分子式Ｃ６６Ｈ１３４Ｏ３４を有する。図１４に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１４９３．８６５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１４９３．９６。質量精度：６３．６ｐｐｍ。
【０１０２】
ＰＥＧ１９７０ ４３ｍｅｒは分子式Ｃ８６Ｈ１７４Ｏ４４を有する。図１５に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３４．１２７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３４．２０。質量精度：３７．７ｐｐｍ。
【０１０３】
ＰＥＧ１９７０ ５３ｍｅｒは分子式Ｃ１０６Ｈ２１４Ｏ５４を有する。図１６に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３７４．３８９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３７４．４４。質量精度：２１．５ｐｐｍ。
【０１０４】
実施例２１
較正物質試験−専有ペプチドＪＦ−１４８５
高質量分解能の正確なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータを得る際の本開示の較正物質の有用性をさらに検証するために、式Ｃ８８Ｈ１１８Ｎ１６Ｏ２２Ｓ５＋（および専有構造を有する）を有するペプチドＪＦ−１４８５を検討した。図１７に示すように、ＭＡＬＤＴ−ＴＯＦ ＭＳ：Ｈ＋付加物の理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝１９１１．７２８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝１９１１．６８。Ｎａ＋付加物の理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３３．７１０２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３３．６９。Ｋ＋付加物の理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｋ］＋ｍ／ｚ＝１９４９．６８４２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｋ］＋ｍ／ｚ＝１９４９．６０。質量精度：２５．１ｐｐｍ。
【０１０５】
代替ヒドロキシル末端核
当業者によって理解されるように、上記のもの以外に様々な官能基のデンドリマーを、（任意選択で）実施例４の一般脱保護手順が後続する、実施例３の一般樹状突起化手順によって合成してもよい。これは、例えば、限定されるように意図するものではないが、実施例３の一般樹状突起化手順のために、単に上記の開示したものと異なる水酸基末端核（例えば１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタン、ペンタエリトリトール、キシリトールまたはジペンタエリトリトール以外の核）を選択することによって達成することができる可能性がある。例示の代替水酸基末端核は、限定されるように意図するものではないが、トリペンタエリトリトール（８個のヒドロキシル末端）およびテトラペンタエリトリトール（１０個のヒドロキシル末端）を含む。当業者はまた、前述の説明から、実施例３の一般樹状突起化手順によって生み出されたデンドリマーはまた、代替水酸基末端核として機能することができることも理解するであろう。例えば、Ｃ３−（［Ｇ−２］ＯＨ４）３で示されるデンドリマー（図１のデンドリマー４）は１２の−ＯＨ末端を有し、その各々が、１回の樹状突起化（実施例３の一般樹状突起化手順によって）を受けてもよい。次いで、結果として得られるデンドリマーは、実施例４の一般脱保護手順を受けて別のデンドリマーをさらに与え、また、そのステップを繰り返し一層大きいデンドリマーを生み出してもよい。したがって、約１から数百ものヒドロキシル（−ＯＨ）末端を含有するアルコールは、実施例３の一般樹状突起化手順において用いることができ、（好ましくは多価アルコール、ならびにポリ（ビニルアルコール）などの直鎖状ポリオールおよびポリ（グリセロール）などの超分枝ポリオールを含む）、かつそれに続く（任意選択で）、実施例４の一般脱保護手順によって質量分析、特にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩおよびＦＡＢ手法に有用な較正物質を製造することができる。さらに、そのようなアルコール（および好ましくは多価アルコール）の組合せは、並行合成に（例えば実施例９〜１８に記載されるように）使用して広範囲のｍ／ｚ比にわたって有用な一揃いの較正物質を生み出すことができる。
【０１０６】
さらに、実施例３に記載した「カップリング」または「樹状突起化」ステップ中にアルコールを対応するエステルに変換するために使用されるカップリングアシル化化学は、アミンをアミドに変換する同一の試薬を使用するアシル化反応に、同様に適用可能である。その結果、ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）およびポリ（プロピレンアミン）（ＰＰＩ）デンドリマーなどの樹枝状ポリアミンの市販の種類を含む、ポリアミン核分子も、（核分子として）使用することができる。
【０１０７】
トリスモノマー
下記式１に示す保護トリスモノマーを製造するために、上記のベンジリデン保護ビスＭＰＡモノマーは、ペンダントメチル基の代わりにヒドロキシメチル基に置換することにより修正することができる。
【化１５】
ベンジリデン保護ビス−ＭＰＡ無水物モノマー（（ビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマー）のペンダントメチル基の代わりにヒドロキシメチル基に置換することによって、各デンドリマー層は図１〜図５に示す２つの枝状部ではなく、３つの枝状部を含むことができる可能性がある。言いかえれば、実施例３の一般樹状突起化手順およびこれに続く実施例４の一般脱保護手順における式１のモノマーを使用することによって、各分岐点は図１〜図５中に示される２つの枝状部の代わりに、３つの枝状部を与えるであろう。例えば、それぞれ実施例３および実施例４による１回の樹状突起化および脱保護に対して、１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタンから始めて式１のトリスモノマーを使用することによって、式２による（かつデンドリマー２と同様の）Ｃ３較正物質Ｃ３−（［Ｇ−１］ＯＨ３）３が製造されるであろう。
【化１６】
式２の−ＯＨ基は、続く樹状突起化および脱保護ステップを行うためにメチリデンオルトエステルを使用して保護される場合がある。
【０１０８】
デンドリマーの調整
記載されたデンドリマーがビス（ヒドロキシメチル）プロパン酸モノマーからほぼ独占的に生じるので、全般的な構造の組成物は、モノマー構造のわずかな変更によって容易に調整することができる。そのような調整は、ペンダントメチル基の修正および／または１２Ｃ同位体濃縮モノマーを使用するデンドリマーの合成を包含することができる場合がある。
【０１０９】
すべての原子の正確な原子質量は整数に近いが、整数そのものではない。より大きい分子量（ＭＷ）化合物は多数の原子で構成されるので、これらは、著しい質量欠損、すなわち名目の質量（各原子質量に対する最も豊富な同位元素の最も近い整数近似値）からのずれを有する。簡単に言えば、質量欠損は、整数近似の「名目質量」と実際に観察されるモノ同位体の質量との間の違いである。質量欠損は化合物の種類を同定するために使用することができ、天然の生体分子を人工的に修正されたものから区別するために使用することができる。デンドリマー骨格の元素組成調整によって、質量欠損を調整して、天然化合物とそれらが重複しないように（かつ容易に識別することができるように）することができる。そのような調整はまた、分析種と較正物質との間の相違の単純化により自動化データ解析を容易にすることができる。開示されたデンドリマーが多層の同一モノマーによって主に作られるので、そのモノマーの元素組成を調整すれば、開示されたデンドリマーのすべての質量欠損を調整することが可能になる。例えば、平均的なペプチドは、分子量の１０００Ｄａ当たり＋０．５０６ダルトン（Ｄａ）の「アベルジン（ａｖｅｒｇｉｎｅ）」質量欠損を示す。「アベルジン」は、その元素組成（非整数分子式：Ｃ４．９３８４Ｈ７．７５８３Ｎ１．３５７７Ｏ１．４７７３Ｓ０．０４１７を有する）に関して理論的な「平均的」アミノ酸であり、ある範囲の分子量にわたってペプチドおよびタンパク質の予想される元素組成および質量欠損を算定するために使用することができる。ヒドロキシル官能化樹状突起（例えばデンドリマー２、４、６および８などを参照）は、分子量の１０００Ｄａ当たり＋０．４２±０．０２Ｄａの質量欠損を示すが、一方、ベンジリデン官能化樹状突起（例えばデンドリマー１、３、５、７および９などを参照）は、分子量の１０００Ｄａ当たり０．３９±０．０２Ｄａの質量欠損を示す。この質量欠損をさらに識別するために、ヒドロキシル官能化樹状突起のペンダントメチルは、合成手順についての著しい影響なしで、様々なより長いアルキル鎖、またはハロゲン化アルキル鎖で修正または官能化することができる。これは、下記の式３に示されるベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマー（ビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマー）を５−メチル位で修正することにより遂行される場合がある。
【化１７】
【０１１０】
式３において、Ｘは、アルキル（例えば、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３またはｎが０から１６の整数である（ＣＨ２）ｎＣＨ３）；Ｐｈがフェニルを表すＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ；「Ｑ」がハロゲン、好ましくはフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）（例えばＣＦ３、ＣＣｌ３など）を表すＣＱ３；または「Ｑ」がハロゲン、好ましくはフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）を表しｎが１から１６から整数である（ＣＱ２）ｎＣＱ３であってもよい。例えば、ＭＷのかなり著しいずれが、メチル基をトリフルオロメチル基に置き換え、その結果、質量欠損のずれがＭＷの１０００Ｄａ当たり＋０．１１±０．０２Ｄａになることにより示される可能性がある。分子量欠損はまた、所望の質量欠損を有する置換基を用いて周囲を単純な官能基化をすることによって修正することができる。「Ｘ」での修正にもかかわらず、式３のベンジリデン保護モノマーを使用するデンドリマー合成は、実施例３の一般樹状突起化手順および実施例４の一般脱保護手順の連続する反復によって進む場合がある。炭素含有分子の分子量が増加するにつれて、分子中の１３Ｃ（天然存在度＝１．１０９％）の自然蔓延は、それらの質量スペクトルにおいて分子同位体の分布の広がりをもたらす。約８，０００Ｄａを超えると、モノ同位体種（１２Ｃのみを有する）に対応する信号は、ポリ同位体種に対して非常に小さく、ポリ同位体種からのピーク中でモノ同位体種のピークを識別するのが困難であるので、正確な質量決定は困難となる。したがって、ポリ同位体種の存在は分子量計算の分解能を大幅に低下させる。例えば、式Ｃ５Ｈ１２Ｏ４によって表すことができる式４：
【化１８】
を挙げる。Ｃの１％より多くが１３Ｃなので、いかなる炭素含有化合物のＭＳも、これらの１３Ｃ同位元素に対応するより高分子量の信号を示す。化合物中の炭素数が増加するにつれて、化合物中に１３Ｃが存在する可能性は増加する。このことは、１３６．０７３５６の正確な質量を有する、式４のモノマーの同位体分布において見られ、１３６．０７３５６（ｍ／ｚ；１００．０％の相対的信号強度）のモノ同位体の信号、および１３７．０７６９１（ｍ／ｚ；５．４％の相対的信号強度）のより高分子量種を示す。炭素含量が増加するにつれて（例えば、限定されるように意図するものではないが、１分子当たり５００炭素原子）、相異なるポリ同位体種からの分子量の統計的分布は非常に広がるので、単一モノ同位体のピークは分離するのが困難になることがある。天然存在度は、１２Ｃが９８．８９％であり、１３Ｃが１．１０９％であり、１Ｈが９９．９９％であり、２Ｈが０．０１％であり、１６Ｏが９９．７６％であり、１８Ｏが０．２０％であり、また１７Ｏが０．０４％である。１３Ｃ同位元素はほとんどの有機化合物中で最も一般的なより大きい同位元素である。したがって、高分子量で同位体の分布を狭くする最も簡単な方法は、１３Ｃを枯渇させておいた物質、例えば、全炭素が１２Ｃである原料物質から出発することである。記載のデンドリマーがビス（ヒドロキシメチル）プロパン酸モノマーからほぼ独占的に生じるので、その合成が１２Ｃ同位体濃縮モノマーを用いて行われる場合、質量スペクトルのピークの広がりは実質的に低下し、１０，０００Ｄａを超える高精度の較正を容易に達成することができる。１８Ｏによる同位体の広がりは目立たないが（１８Ｏは全Ｏ種のわずか０．２０１％しか占めないので）、１６Ｏ同位体濃縮もまた、精度をさらに一層改善するために行うことができる。ここに企図されるこれらの同位体濃縮は、反応体およびデンドリマー生成物の分子量をわずかに変えること以外、合成パラメーターにいかなる影響をも有するとは予想されない。
【０１１１】
実施例３に記載されたＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚの調製のための一般樹状突起化手順において示されるように、モノマーのアルコール官能基は、正確な単分散構造を与える反復デンドリマー成長を制御するために「保護」されなければならない。２つのアルコールはベンジリデン（実施例３に記載され、下式５に示される）を用いて同時に保護することができ、当業者はまた、アセトニド（式６）、または他のアセタールもしくはケタール保護基を用いてこれらが保護される場合があることを認識するであろう。（例えば、式７および式８参照。式中、Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、Ｒ４はＰｈ、ＣＨ３、Ｃ６Ｈ４ＯＣＨ３またはＣ６Ｈ４ＮＯ２であり、Ｒ５はＣＨ２Ｐｈ、Ｓｉ（ＣＨ３）３、Ｃ６Ｈ５ＮＯ２、ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｃ５Ｈ９Ｏ（テトラヒドロピラニルエーテル）またはＳｉＰｈ２ｔ−Ｂｕであり、Ｐｈはフェニルである。）
【化１９】
【化２０】
【化２１】
【化２２】
【０１１２】
保護基のさらなる例は、Ｐ．Ｇ．Ｍ．ＷｕｔｓおよびＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅによる「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００７，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ）に見出される場合があり、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、ベンジルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびシリルエーテルを含むいくつかの不安定なエーテル結合を、代わりにまたは追加で、構造上純粋なデンドリマーの合成を可能にするために使用することができる。樹状突起化手順に対するそのような修正は本開示の範囲内である。
【０１１３】
本明細書に引用された参考文献はすべて、あたかも、各参考文献が参照によって組み込まれるように具体的に別々に示されたかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。いずれの参考文献の引用も出願日に先行する開示のためのものであり、本開示には、先行発明を理由にそのような参考文献に先行する資格がないことを承認するものとして解釈されるべきでない。上記元素の各々、または２つ以上が一緒に、また、上記種類と異なる他の種類の方法に有用な用途を見出す場合があることが理解されるであろう。さらなる分析を加えなくとも、上記で、非常に全面的に本開示の要点を明らかにしているので、他の者は、目下の知識を適用することによって、先行技術の見地から、添付の特許請求の範囲において述べられる本開示の総括的または特定の態様の本質的な特性を適正に構成する特色を省略することなく、各種用途に対して容易にそれを適応させることができる。前述の実施形態は例としてのみ提供され、本開示の範囲は以下の特許請求の範囲によってのみ限定されるべきである。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本米国特許非仮出願は、２００９年２月３日に出願された米国特許仮出願第６１／１４９，５０６号、２００９年４月８日に出願された米国特許仮出願第６１／１６７，７０８号、および２００９年６月１０日に出願された米国特許仮出願第６１／１８５，６６５号の利益を主張し、その各々は、参照によって本明細書にその全体が組み込まれる。
【０００２】
本開示は、枝の少なくとも１つが第２の分岐構造を有する連続した分枝構造を有する樹枝状分子に関する。本開示はまた、前記樹枝状分子の調製の方法、１０００ダルトンより大きい分子量の化合物の分析のための、飛行時間基材支援レーザー脱着イオン化（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析（ＭＳ）、エレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ−ＭＳ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ−ＭＳ）、高速原子衝撃（ＦＡＢ−ＭＳ）および他のＭＳ手法の較正物質としてのその使用を含む。
【背景技術】
【０００３】
質量分析（ＭＳ）は、試料（例えばタンパク質、化合物など）の元素組成を求めるための解析手法である。ＭＳはまた、そのような試料の化学構造を求めるのに使用されてもよい。一般に、ＭＳは、試料をイオン化し帯電分子（およびそのフラグメント）を生成することおよびその質量電荷比の測定を含む。
【０００４】
飛行時間質量分析（ＴＯＦ−ＭＳ）は、ｑがイオン電荷であり、Ｖが印加電圧である場合、電場によって、イオンはｑＶの運動エネルギーを持って無電場ドリフト領域へ加速される方法である。ｍが質量であり、ｖが速度である場合、各イオンの運動エネルギーは（１／２）ｍｖ２であるので、より軽いイオンはより重いイオンより高速である。したがって、より軽いイオンは、ドリフト領域の終端にある検出器に、重いイオンより早く到達する。基材支援レーザー脱着イオン化（ＭＡＬＤＩ）は質量分析において使用されるイオン化手法であり、生体分子（例えば、タンパク質、ペプチドおよび糖）、および大きい有機分子（例えば、ポリマーおよび他の高分子）の分析を容易にする。
【０００５】
エレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）は、揮発性溶剤（例えば、アセトニトリル、ＣＨ３ＯＨ、ＣＨ３Ｃｌ、水など）に溶解した分析種を、帯電した小さい毛細管（通常、金属）を強制的に通す大気圧イオン化手法である。分析種は溶液中にイオンとして存在し、試料が毛細管から強制的に出されるとエアロゾル化する。これによって、同様に帯電した分析種粒子同士間の距離を広げる。中性気体担体（例えば、窒素）が、小滴から溶媒を蒸発させるためにしばしば使用される。溶媒が蒸発すると、帯電した分析種分子は互いに接近する。しかし、同時に、分析種分子の同種の電荷は、互いを遠ざける。試料が溶媒を含まず孤立イオンになるまで、収縮および膨脹のこのプロセスが繰り返される。次いで、孤立イオンは質量アナライザーに進む。
【０００６】
大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）も、加熱管（例えば、４００℃より高温）を通過する試料溶液を揮発させ、窒素噴霧化支援によりコロナ放電を受ける大気圧イオン化手法である。ＡＰＣＩはＥＳＩの変形であり、修正されたＥＳＩ源で実施することができる。イオンは、放電によって生成し、質量分析装置へ抜き取られる。この手法は、非常に高い液体流量（例えば１ｍＬ／分）を適用することができるので、比較的極性で、半揮発性の試料に対して最も良好で、液体クロマトグラフィー・質量分析（ＬＣ／ＭＳ）インターフェースとして使用してもよい。ＡＰＣＩ−ＭＳからのスペクトルは通常、擬分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋を含む。
【０００７】
高速原子衝撃（ＦＡＢ）は、中性原子（通常、キセノンまたはアルゴン）の高エネルギービームを使用し、これが真空下で固体試料（ｍａｔｒｘと混合された分析種）を強打して、脱着およびイオン化を引き起す。一般的な基材としては、グリセロール、チオグリセロール、３−ニトロベンジルアルコール（３−ＮＢＡ）、１８−クラウン−６−エーテル、２−ニトロフェニルオクチルエーテル、スルフォラン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンが挙げられる。ＦＡＢは、気相にさせるのが困難である、大きい生体分子に対して使用される。高エネルギービームは、イオン源から電荷交換セルを通してイオンを加速することにより生成する。これらのイオンは中性の原子との衝突によって電子を蓄積し、高エネルギーの原子のビームを形成する。ＦＡＢスペクトルがしばしば、ごくわずかなフラグメントおよび偽分子イオン（例えば、［Ｍ＋Ｈ］＋、［Ｍ＋Ｎａ］＋）の信号を含んでいるので、ＦＡＢは分子量を求めるのに有用である。しかしながら、低ｍ／ｚ領域は、通常基材からの信号で込み合っている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチドおよび合成高分子の特性評価および構造決定を包含する分析作業の範囲で質量分析装置を較正するためには、多様な組の分子量の既知の較正物質を必要とする。通常、タンパク質およびペプチドは、単分散性（単一および正確な分子量のみが純粋試料中に存在する）および生物学的起源からの入手しやすさのために使用されてきた。例としては、ブラジキニン、副腎皮質刺激ホルモン、インシュリンＢ鎖、シトクロムｃ、アポミオグロビン、アルブミン、アルドラーゼおよびアンジオテンシンＩＩが挙げられる。しかし、そのような標準の生産（特に精製）は時間がかかり技術的に複雑で、グラム量当たりかなり高い費用がかかることになる。さらに、そのような標準は、酵素の不安定性および酸敏感性により本質的に不十分な貯蔵寿命を有している。
【０００９】
合成高分子は、はるかに安価な代替物を提供するが、広範囲の分子量分布として存在する。その理由は、統計的分子量分布を必然的にもたらす、１モノマー単位（生物学的合成と比較して）間の相対的に非媒介的な反応を使用して、これらが調製されるからである。この広範囲の分子量分布は、一般的には質量スペクトルでモノマー質量の倍数として一定間隔で配置されたピークのガウス級数として観察される。しかし、効率的なデンドリマー合成の開発は、従来生合成された物質が持つ正確な分子量と、合成物質の拡張可能な低コストの合体を提案する。
【００１０】
「真の」デンドリマー（高度に分枝し、高度の構造規則性がある分子）の調製には対照的な２つの合成経路が知られている。
【００１１】
第１の方法（発散法）では、まず核分子に分枝モノマーをカップリングさせ、中間体を得て、次いで、中間体を「活性化」し、表面官能基の数が増した、より大きい新しい分子を生成する。これらの２ステップを繰り返すと、樹枝状分子が外へ向かって層ごとに成長し、指数関数的に大きさが増える。
【００１２】
第２の方法（収束法）では、１モノマー単位によってつながれた周辺の基を用い、「楔」または「樹状突起」を生成する。これらの樹状突起のうちの２個は、追加のモノマー分子と結合してより大きい樹状突起を作ってもよく、また、成長は、核と結合するまで内側へ層ごとに継続する。
【００１３】
通常、発散手法は技術的に単純である。大過剰の小分子は、成長する分子と反応し、次いで、（例えば、蒸留によって）除去され、比較的コスト効率的で拡張可能な合成を提供する。しかし、発散手法では、カップリング反応の数が、世代ごとに指数関数的に増加する。結果的に、少量の構造的不純物を含むデンドリマーがほとんど避けられず、容易に除去することができない（例えば、ｎが大きい数である場合、ｎカップリング反応の生成物はｎ−１カップリングの生成物とほぼ同一の物理的性質を有する。）。その結果、ＭＳ較正などの用途のためには十分に規定された物質ではない。
【００１４】
収束手法は、各カップリングが一定の小さい数の反応（通常２つまたは３つの反応）を有するという明瞭な利点を有する。したがって、収束手法を用いると、反応を完了に追い込むことができ、副反応によって生成されたいかなる不純物も容易に検出され（ｎが小さいので）、除去される。しかしながら、収束手法を用いて生成された物質は十分に規定されるが、その合成は要求が厳しい。このことが、特殊用途以外のすべての経済的な使用の妨げになっている。
【００１５】
したがって、本開示の土台となる技術的問題は、改善された貯蔵寿命、低コストの、および広範囲の分子量にわたる単分散較正物質を提供することにより、これらの先行技術の困難を克服することであった。この技術的問題に対する解決策は特許請求の範囲において特徴付けられる実施形態によって提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本開示は、質量分析装置の較正に対して有用な、特にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩおよびＦＡＢ質量分析手法において有用な樹枝状分子（デンドリマー）、および約１，０００ダルトンを超える分子量の物質の質量分析に使用される任意の追加の手法に関する。本開示はまた、前記デンドリマーを合成する方法、ならびにこれらを使用する方法に関する。
【００１７】
本開示は、一態様において、合成較正物質に関する。本開示の合成較正物質は、ヒドロキシル末端核分子の「樹状突起化」、および任意選択で、後続の「脱保護」ステップによって合成される（「生成される」）樹枝状分子（デンドリマー）である。また任意選択で、樹状突起化および脱保護ステップは複数回実施されてもよく（各脱保護ステップは樹状突起化ステップに続き、また、第１の樹状突起化ステップ後の各樹状突起化ステップは脱保護ステップに続く）、有用な既知の大きさのデンドリマーを与える。各回の樹状突起化／脱保護のデンドリマー生成物は、同一の「世代」の一部である。例えば、核分子を用いて実施する第１の樹状突起化ステップは、第一世代、すなわち「Ｇ−１」デンドリマーを与える。同様に、結果として得られたＧ−１デンドリマーで実施された次の脱保護ステップは第一世代デンドリマーを与える。しかし、Ｇ−１脱保護ステップの後の樹状突起化ステップは第二世代、すなわち「Ｇ−２」デンドリマーをもたらす。したがって、各回の樹状突起化および脱保護は、同一の「世代」のデンドリマー生成物を与える。好ましい実施形態において、本開示は、相異なる分子量のデンドリマーの混合物、および特に前記デンドリマーの具体的な比例混合物（例えば等モル混合物）に関する。特に、本開示は、並行合成されたデンドリマーの混合物に関し、相異なる数のアルコール官能基を有する等モル量の核分子は、一緒に混合され、少なくとも１回の樹状突起化を受ける。任意選択で、結果として得られる混合物は数回の樹状突起化および脱保護を受け、広範囲の分子量にわたる、有用な既知の大きさのデンドリマー混合物を算出する場合がある。これらの各混合物内では、デンドリマーは同一世代であり、すべてが質量分析に有用である。さらに、樹状突起化および脱保護によって末端基を変性することができるので、本開示のデンドリマーはＭＳに有用なほとんど全範囲の溶媒、基材および分析種中で高い溶解性を有する。結果的に、本開示のデンドリマーは、内部較正物質（すなわち、試料調製の間に分析種および基材と直接混合することができる。）として有用である。
【００１８】
一実施形態において、式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含むデンドリマー組成物が提供される。式中、ｘが３から６の整数であり、また
Ａ）Ｃｏｒｅｘは、
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化１】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化２】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化３】
Ａ．４）ｘが６である場合
【化４】
Ａ．５）これらの組合せを表し、
Ｂ）Ｄは
【化５】
Ｃ）ＭはＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化６】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化７】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり、
Ｅ）ｒはｐ−１であり、
Ｆ）ｐは２ｎ−ｌであり、
Ｇ）ｎは１から１０の整数であり、かつ、
Ｈ）Ｘは（ＣＱ２）ａＣＱ３およびＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈからなる群から選択され、式中、Ｑは独立してＨまたはハロゲンを表し、Ｐｈはフェニルを表し、かつａは０から１６の整数である。
【００１９】
一実施形態において、式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含むデンドリマー組成物が提供される。式中、ｘが３から６の整数であり、
Ａ）Ｃｏｒｅｘは、
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化８】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化９】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化１０】
Ａ．４）ｘが６である場合
【化１１】
Ａ．５）これらの組合せを表し、
Ｂ）Ｄは
【化１２】
を表し、
Ｃ）ＭはＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化１３】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化１４】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり、
Ｅ）ｒはｐ−１であり、
Ｆ）ｐは３ｎ−ｌであり、かつ
Ｇ）ｎは１から１０の整数である。
【００２０】
一実施形態において、デンドリマー組成物のＡ．１、Ａ．２、Ａ．３およびＡ．４は、ほぼ等モル量存在する。別の実施形態において、Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３およびＡ．４は同位体濃縮されている。別の実施形態において、Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３、Ａ．４、Ｂ．１、Ｂ．２およびＲ２は、同位体濃縮されている。別の実施形態において、同位体濃縮は１２Ｃの同位体濃縮である。
【００２１】
一実施形態において、ａ）１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトール、ジペンタエリトリトールおよびこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの核を準備するステップと、ｂ）少なくとも１つの核が１回の樹状突起化を受けるステップと、ｃ）任意選択で、続いて少なくとも１つの核が１回の脱保護を受けるステップと、ｄ）任意選択で、続いてステップｂ）およびｃ）を繰り返すステップと、任意選択で、続いてステップｄ）を繰り返し、それによって所望のデンドリマー組成物を取得するステップを含む、デンドリマー組成物を製造する方法が提供される。本実施形態の一態様において、少なくとも１つの核は、１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトールおよびジペンタエリトリトールの組合せである。本実施形態の別の態様において、１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトールおよびジペンタエリトリトールの組合せは、ほぼ等モルである。本実施形態の一態様において、樹状突起化ステップｂ）はビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマーを使用するステップを含む。本実施形態の別の態様において、ステップｂ）は式１（下記）の化合物を使用するステップを含む。
【００２２】
一実施形態において、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを使用する質量分析装置を較正する方法であって、特定の物理的性質を有する少なくとも１つの本開示のデンドリマー準備することと、前記少なくとも１つのデンドリマーをイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンを提供することと、前記１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、前記データを前記特定の物理的性質と関連付けることと、を含む、質量分析装置を較正する方法が提供される。
【００２３】
一実施形態において、特定のデンドリマーの物理的性質を有する、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、試料を準備することと、試料の少なくとも一部を少なくとも１つのデンドリマーの少なくとも一部と組み合わせることと、試料および少なくとも１つのデンドリマーをタンデムでイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンを提供することと、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、前記データを前記少なくとも１つのデンドリマーの前記特定の物理的性質と関連付け、それによって前記試料の物理的性質を判定することと、を含む、試料の物理的性質を判定する方法が提供される。
【００２４】
さらなる態様において、本開示は、水酸基末端核分子の樹状突起化、および任意選択により後続の脱保護ステップによって合成較正物質（デンドリマー）を製造する方法に関する。好ましい実施形態において、樹状突起化および脱保護ステップは複数回実施されてもよく、（ただし、各脱保護ステップは樹状突起化ステップに続き、また、第１の樹状突起化ステップ後の各樹状突起化ステップは脱保護ステップに続く。）既知の有用な大きさのデンドリマーを与える。第１の樹状突起化ステップに続く各樹状突起化および各脱保護ステップは、任意選択である。各樹状突起化ステップおよび各脱保護ステップは、本開示の有用な新規デンドリマーを与える。特に、本開示は、並行合成された較正物質（デンドリマー）の混合物を製造する方法に関し、相異なる数のアルコール官能基を有する等モル量の核分子は、一緒に混合され、少なくとも１回の樹状突起化を受ける。任意選択で、結果として得られる混合物は、数回の樹状突起化および脱保護を受け、広範囲の分子量にわたって、既知の有用な大きさのデンドリマー混合物を得ることができる。結果として得られる各混合物において、デンドリマーは同一世代であり、すべてが質量分析に有用である。
【００２５】
さらに別の態様において、本開示は、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを使用する、質量分析装置を較正する方法であって、１）特定の物理的性質を有する、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、２）前記少なくとも１つのデンドリマーをイオン化し、前記デンドリマーの１つまたは複数のイオンを提供することと、３）前記１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、４）前記特定の物理的性質に前記データを関連付けることと、を含む、方法に関する。好ましい実施形態において、本開示は、試料の特定の物理的性質を判定する方法であって、１）特定のデンドリマーの物理的性質を有する、本開示の少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、２）特定の試料の物理的性質を有する試料を準備することと、３）試料の少なくとも一部をデンドリマーの少なくとも一部と組み合わせることと、４）試料および少なくとも１つのデンドリマーをタンデムでイオン化し、前記デンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンを提供することと、５）前記デンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、６）前記少なくとも１つのデンドリマーの特定の物理的性質と前記データを関連付けることと、を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
本開示の性質、目的および利点についてさらに理解するためには、以下の詳細な説明を参照し、以下の図面（図中、同様な参照番号は同様な要素を示す。）に関連付けて読まれるべきである。
【００２７】
【図１】本開示の三官能性「Ｃ−３」較正物質の合成を示す概略図である。
【図２】本開示の四官能性「Ｃ−４」較正物質の合成を示す概略図である。
【図３】本開示の五官能性「Ｃ−５」較正物質の合成を示す概略図である。
【図４】本開示の六官能性「Ｃ−６」較正物質の合成を示す概略図である。
【図５】本開示の三、四、五および六官能性較正物質の並行合成を示す概略図である。
【図６】本開示のデンドリマー１、１１、２１および３１の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図７】本開示のデンドリマー３、１３、２３および３３の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図８】本開示のデンドリマー４、１４、２４および３４の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図９】本開示のデンドリマー５、１５、２５および３５の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１０】本開示のデンドリマー６、１６、２６および３６の等モル混合物のＭＡＬＤＴ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１１】本開示のデンドリマー７、１７、２７および３７の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１２】本開示のデンドリマー８、１８、２８および３８の等モル混合物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１３Ａ】樹状突起化キャビタンド（Ｃａｖ−（［Ｇ１］−Ｐｈ）８、分子式Ｃ１９２Ｈ１７６Ｏ４８を有する）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す図である。
【図１３Ｂ】樹状突起化キャビタンド（Ｃａｖ−（［Ｇ１］−Ｐｈ）８、分子式Ｃ１９２Ｈ１７６Ｏ４８を有する）の構造を示す図である。
【図１４】分子式Ｃ６６Ｈ１３４Ｏ３４を有するＰＥＧ１９７０ ３３ｍｅｒのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１５】分子式Ｃ８６Ｈ１７４Ｏ４４を有するＰＥＧ１９７０ ４３ｍｅｒのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１６】分子式Ｃ１０６Ｈ２１４Ｏ５４を有するＰＥＧ１９７０ ５３ｍｅｒのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１７】式Ｃ８８Ｈ１１８Ｎ１６Ｏ２２Ｓ５＋を有する、専有ペプチドＪＦ−１４８５のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す図である。
【図１８】デンドリマー１（Ｃ３−（［Ｇ−１］Ｐｈ）３）、１１（Ｃ４−（［Ｇ−１］Ｐｈ）４）、２１（Ｃ５−（［Ｇ−１］Ｐｈ）５）、および３１（Ｃ６−（［Ｇ−１］Ｐｈ）６）のＧ１混合物のＥＳＩ質量スペクトルを示す図である。試料は、アセトニトリル中で溶解し、対イオンを添加しないで直接注入することにより調製した。残留ナトリウムは、単一のナトリウム陽イオンが観察される質量スペクトルを与えた。
【図１９】デンドリマー３（Ｃ３−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）３）、１３（Ｃ４−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）４）、２３（Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５）、および３３（Ｃ６−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）６）のＧ１混合物のＥＳＩ質量スペクトルを示す図である。試料は、アセトニトリル中で溶解し、対イオンを添加しないで直接注入することにより調製した。残留ナトリウムは、デンドリマー３に対して１個のナトリウム陽イオン、ならびにデンドリマー１３、２３および３３に対して２倍に帯電した錯体（２個のナトリウム陽イオン）により、観察される質量スペクトルを与えた。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
主題の開示がさらに記載される前に、本開示は、特定の実施形態の変形を行うことができるが、それでもなお、添付された特許請求の範囲内にあり、下記の本開示の特定の実施形態に限定されるものではないことが理解されるべきである。また、使用される用語は、特定の実施形態を記載するためであり、限定されるようには意図されないことが理解されるべきである。むしろ、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によって確立される。
【００２９】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別途指示しない限り、複数への言及を包含する。別途規定しない限り、本明細書において使用される技術および科学用語はすべて、本開示が属する分野の当業者が一般に理解されるのと同一の意味を有する。
【００３０】
本明細書において使用される場合、用語「［Ｍ＋Ａｇ］＋」は、１分子当たり１個の銀陽イオンが対イオンとして試料のイオン化中に結合されることを示す。他の対イオンは、当業者によって容易に認識されるように、例えば「Ｈ」、「Ｎａ」および「Ｋ」を包含することができるが、これらに限定されない。本明細書において使用される場合、用語「ｍ／ｚ」は質量電荷比を示す。本明細書において使用される場合、「ＭＷ」は分子量を意味する。
【００３１】
最近開発された脂肪族ポリ（エステル）の発散合成は、両方の技術の欠点を最小限に抑えつつ、両方の利点を提供するように見える。枝状の発散合成は、「カップリングステップ」および「脱保護ステップ」という２つの合成ステップをそれぞれ繰り返して、質量を十分に規定されるように（指数関数的であるが）増加させる反復プロセスである。図１において、例えば、「カップリングステップ」（例えば図１のステップ「ｉ」）は、核構造からの特定の数のアルコール官能基（ＯＨ基）の、ベンジリデン保護ビスＭＰＡ酸無水物（ＩＵＰＡＣ名はビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマー（図１の「モノマー」）との反応を含む。そうする際に、正確な数のモノマー単位が核分子に結合され、離散的な分子量の新規の樹枝状分子を与える。「脱保護ステップ」（例えば図１のステップ「ｉｉ」）において、パラジウム触媒（Ｐｅａｒｌｍａｎ触媒としても知られる黒鉛に支持されたパラジウム（ＩＩ）水酸化物）は、新規核を生成する水素化分解反応によって、ベンジリデン保護基を除去するために使用される。そのように行うことにおいて、カップリングおよび脱保護の各反復を行った後のアルコール官能基の数は倍加し、それによりプロセスの繰り返しを可能にし、また構造を（ただし十分に制御された方式で）指数関数的に成長するのを可能にし、単分散生成物を得ることが留意されるべきである。カップリングステップが、酸無水物とのアルコール官能基の、簡潔で高活性のエステル化反応を伴っているので、反応は「定量的」収率（９９．９％より大きい）で副生物なしで実施することができる。さらに、いくつかの脱保護ステップ（例えば、パラジウム（「Ｐｄ」）で触媒される水素化分解および対応するベンジリデンおよびアセタール保護モノマーの酸触媒加水分解）は、質量分析の較正物質として働くのに十分に純粋な単分散の化合物を準備して、同様に簡潔で定量的様式で行うことができる。同時に、この発散法は、クロマトグラフィー精製なしで技術的に単純な高速の経路を提供し、費用効率が高く拡張可能な生産を可能にする。
【００３２】
本開示の合成デンドリマー較正物質には、他の較正物質に勝るいくつかの明瞭な利点がある。ペプチドおよびタンパク質は、従来、調製し精製することができた、十分に高い分子量を有する唯一の単分散高分子であったので、これらは市販標準として較正に使用されてきた。ペプチドおよびタンパク質の較正物質が実現可能な標準を提供している一方で、それらは、短い貯蔵寿命（ペプチダーゼの蔓延のために）および高いコスト（この合成および精製が典型的にはミリグラム規模で行われるので）の不利益を被る。これらの較正物質の代表的な例は表１に示される。
【表１】
【００３３】
合成較正物質には、貯蔵寿命の向上を含むいくつかの潜在的な利点がある。しかし、最近まで、競争的価格で製造することができる製品は唯一、多分散ポリマー（すなわち、これらは広範囲の質量特性を示す。）であった。複数種が存在すること（およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩおよびＦＡＢを含む、ＭＳでの相異なる対イオンの蔓延）が、ペプチドおよびタンパク質に代わる魅力のある代替になることを妨げてきた。Ｐ１４Ｒなどの単分散の合成較正物質は、次に安価なペプチド較正物質（インシュリン）の少なくとも３倍高価であり、また最も安価なペプチド較正物質（インシュリンＢ鎖）より１，０００倍を超えて高価である。
【００３４】
対照的に、本開示の合成デンドリマー較正物質を製造することはより安価である。これが、費用効率が高く、にもかかわらず、高度に純粋な樹枝状化合物への迅速な合成法であるため、特にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩまたはＦＡＢ方法を使用する場合、本開示のデンドリマー較正物質は、質量分析装置の較正に対し競合的解決法を提供する。さらに、これらは混合物として合成し、それにより、調製、精製および包装コストを低減させることができる。目下利用可能なペプチドおよびタンパク質較正物質が広く使用され受け入れられているが、本開示のデンドリマー較正物質の低減されたコスト、ならびにその改善された貯蔵寿命および溶媒相溶性によって、これらの即座の受け入れをもたらすはずである。
【００３５】
デンドリマーには、その構造を示すための標準命名法が与えられている。例えば、名称「ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚ」および「ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］ＯＨｑ）ｚ」において、「ＣＸ」という用語は、核上のアルコール官能基の数（「核数」）を指す。ただし、「Ｘ」は整数である。したがって、「Ｃ３」は核として１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン（トリオール）を指す。「Ｃ４」は核としてペンタエリトリトール（テトラオール）を指す。「Ｃ５」は核としてキシリトール（ペンタオール）を指す。また、Ｃ６は核としてジペンタエリトリトール（ヘキサオール）を指す。「Ｇ−ｎ」という用語は世代数を指し、付加された分岐ポイントの層数を示し、また起こったカップリングおよび脱保護反復の数を指す。例えば、「［Ｇ−１］」は「世代１」を示し、１回のカップリングが生じたこと（例えば図１のデンドリマー１、「Ｃ３（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）３」を参照）または１回のカップリング−脱保護が生じたこと（例えば図１のデンドリマー２、「Ｃ３（［Ｇ−１］ＯＨ２）３」を参照）を示す。言いかえれば、デンドリマー１およびデンドリマー２は同一の世代である、世代１、すなわち「Ｇ−１」である。各出発アルコールは楔形の樹枝状部分を有し、「樹状突起」と呼ばれる。末端基（１樹状突起当たり）は、ベンジリデン保護構造についてＰｈｐ（ここで「ｐ」は、２ｎ−１の値を有する）、またはヒドロキシル化構造についてＯＨｑ（ここで「ｑ」は、２ｎの値を有する）のいずれかによって示され、ここで、「ｐ」および「ｑ」は、１樹状突起当たり（楔形の樹枝状部分当たり）の末端基の数を示す。最終的に、核数に対応する１核当たりの樹状突起の数は、「ｚ」によって示される。
【００３６】
実施例１
一般合成手順
樹枝状較正物質の調製のための一般手順は、Ｇｒａｙｓｏｎら（Ｇｒａｙｓｏｎ，Ｓ．Ｍ．；Ｆｒｅｃｈｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｊ． Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００１；３４：６５４２−６５４４）、およびＩｈｒｅら（Ｉｈｒｅ，Ｈ．；Ｐａｄｉｌｌａ ｄｅ Ｊｅｓｕｓ，Ｏ．Ｌ．；Ｆｒｅｃｈｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｊ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００１；１２３：５９０８−５９１７）によって公開されたものに一般に従い、その各々は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。図１に示されるように、樹枝状合成は重要な２つのステップ、すなわち、ｉ）「保護」モノマーがすべての活性な周辺の官能基に結合される樹枝状成長、すなわち「樹状突起化」ステップ、およびｉｉ）表面上の活性な官能基の増加した多重度を暴露するために、各モノマーを変化させる活性化、すなわち「脱保護」ステップの繰り返しを含む。これらの２ステップの連続する繰り返しは、周辺の官能基および分子量の両方において指数関数的な増加をもたらす。
【００３７】
実施例２
ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマーの調製
ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマーは、以前にＩｈｒｅ，Ｈ．；Ｐａｄｉｌｌａ ｄｅ Ｊｅｓｕｓ，Ｏ．Ｌ．；Ｆｒｅｃｈｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｊ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００１，１２３，５９０８−５９１７（これらは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）によって報告された合成に従って調製された。
【００３８】
実施例３
ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚの調製のための一般樹状突起化手順
本実施例の手順は、図１のステップ「ｉ」（例えば、水酸基末端核からのデンドリマー１の合成、デンドリマー２からのデンドリマー３の合成、等々）として概略的に示される。丸底フラスコに、既知の量の水酸基末端核（例えば１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタン、ペンタエリトリトール、キシリトールまたはジペンタエリトリトール）、またはデンドリマー（例えば、「ｒ」が適宜２（ｎ−１）の値を有する一般式ＣＸ−（［Ｇ−（ｎ−１）］ＯＨｒ）ｚを有するもの）のいずれか、ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマー（ビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマーの１．１当量（水酸基末端核またはデンドリマーの１つの−ＯＨ当たり）、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の０．１モル当量（水酸基末端核、またはデンドリマーの１つの−ＯＨ当たり）を添加した。反応混合物を最小量のピリジンに溶解し、その量の２倍（ピリジンに対して）のジクロロメタンに希釈し、次いで、反応混合物は、標準温度および圧力で４時間激しく撹拌した。その反応を、カップリング度を求めるためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによって定期的にモニターした。エステル化の完結がＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによって観察された後、フラスコ内容物を分液漏斗に移し、ジクロロメタンで希釈して、１Ｍ水性ＮａＨＳＯ４（重硫酸ナトリウム）で３回抽出し、また１Ｍ水性ＮａＨＣＯ３（重炭酸ナトリウム）で３回抽出した。有機層を真空内で減量させ（ｒｅｄｕｃｅｄ）試料を濃縮し、ヘキサン中に沈澱させ、濾過して、ベンジリデン保護デンドリマーＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚを、白色粉状の沈殿物として得た。次いで、結果として得られた沈殿物は標準プロトコルによって分光分析のために調製されてもよい。
【００３９】
実施例４
ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］ＯＨｑ）ｚの調製のための一般脱保護手順
本実施例の手順は、図１のステップ「ｉｉ」（例えば、デンドリマー１からのデンドリマー２の合成、デンドリマー３からのデンドリマー４の合成、等々）として概略的に示される。丸底フラスコに、「ｒ」が２（ｎ−１）の値を有する（ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｒ）ｚの測った量を加え、十分な量のジクロロメタン：メタノール２：１溶液に溶解した。Ｐｅａｒｌｍａｎ触媒（Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ）を反応混合物に添加し、フラスコ内容物は水素ガスの８気圧（ａｔｍ）の下に配置した。反応混合物を室温で２４時間激しく撹拌した。完全な脱保護をＭＡＬＤＩ ＭＳの生データによって確認し、その後にＰｄ（ＯＨ）２／Ｃはセライト（登録商標）上で濾過によって除去した。次いで、濾液を真空中で減量させ（ｒｅｄｕｃｅｄ）式ＣＸ−（［Ｇ−ｎ］ＯＨｑ）ｚを有する透明なガラス質固体が得られた。次いで、結果として得られた濾液は標準プロトコルによって分光分析のために調製してもよい。
【００４０】
実施例５
三官能性「Ｃ−３」較正物質の合成
本実施例５の三官能性デンドリマー種を図１に示す。
【００４１】
図１のデンドリマー１、Ｃ３−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）３の合成：市販の１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタン（ＩＵＰＡＣ名：２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパン−１，３−ジオール）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）３が得られた。分子式：Ｃ４１Ｈ４８Ｏ１２、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的に正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２２０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２０。
【００４２】
図１のデンドリマー２、Ｃ３−（［Ｇ−１］ＯＨ２）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−１］ＯＨ２）３が得られた。分子式：Ｃ２０Ｈ３６Ｏ１２。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２１０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２２。
【００４３】
図１のデンドリマー３、Ｃ３−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）３が得られた。分子式：Ｃ９２Ｈ１０８Ｏ３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１７９９．５９８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１７９９．５９。
【００４４】
図１のデンドリマー４、Ｃ３−（［Ｇ−２］ＯＨ４）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−２］ＯＨ４）３が得られた。分子式：Ｃ５０Ｈ８４Ｏ３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１１８７．４９５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１１８７．４６。
【００４５】
図１のデンドリマー５、Ｃ３−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー４は、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）３が得られた。分子式：Ｃ１９４Ｈ２２８Ｏ６６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３７２０．３５４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］ ＋ｍ／ｚ＝３７２０．４２。
【００４６】
図１のデンドリマー６、Ｃ３−（［Ｇ−３］ＯＨ８）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー５は、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−３］ＯＨ８）３が得られた。分子式：Ｃ１１０Ｈ１８０Ｏ６６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２５８０．０６３。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ２５８０．１０。
【００４７】
図１のデンドリマー７、Ｃ３−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー６を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ３−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）３が得られた。分子式：Ｃ３９８Ｈ４６８Ｏ１３８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７５６１．８６５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７５５９．９。
【００４８】
図１のデンドリマー８、Ｃ３−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ３−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）３が得られた。分子式：Ｃ２３０Ｈ３７２Ｏ１３８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５３６５．２５６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５３６６．６。
【００４９】
図１のデンドリマー９、Ｃ３−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）３の合成：ヒドロキシル化デンドリマー８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ３−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）３が得られよう。分子式：Ｃ８０６Ｈ９４８Ｏ２８２。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５２５６．１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００５０】
図１のデンドリマー１０、Ｃ３−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）３の合成：ベンジリデン保護デンドリマー９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ３−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）３が得られよう。分子式：Ｃ４７０Ｈ７５６Ｏ２８２。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０９４２．０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００５１】
実施例６
四官能性「Ｃ−４」較正物質の合成
本実施例６の四官能性デンドリマー種を図２に示す。
【００５２】
図２のデンドリマー１１、Ｃ４−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）４の合成：市販のペンタエリトリトール（ＩＵＰＡＣ名：２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ４−（［Ｇ−１］Ｐｈ）４が得られた。分子式：Ｃ５３Ｈ６０Ｏ１６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１０５９．２９２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１０５９．２８。
【００５３】
図２のデンドリマー１２、Ｃ４−（［Ｇ−１］ＯＨ２）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ４−（［Ｇ−１］ＯＨ２）４が得られた。分子式：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ１６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝６２３．２５２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝６２３．０５。
【００５４】
図２のデンドリマー１３、Ｃ４−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ４−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）４が得られた。分子式：Ｃ１２１Ｈ１４０Ｏ４０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２３３９．７９７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２３３９．８５。
【００５５】
図２のデンドリマー１４、Ｃ４−（［Ｇ−２］ＯＨ４）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ４−（［Ｇ−２］ＯＨ４）４が得られた。分子式：Ｃ６５Ｈ１０８Ｏ４０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１５５１．６３１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１５５１．６２。
【００５６】
図２のデンドリマー１５、Ｃ４−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１４を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ４−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）４が得られた。分子式：Ｃ２５７Ｈ３００Ｏ８８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝４９００．８０５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝４９００．９８。
【００５７】
図２のデンドリマー１６、Ｃ４−（［Ｇ−３］ＯＨ８）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１５を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ４−（［Ｇ−３］ＯＨ８）４が得られた。分子式：Ｃ１４５Ｈ２３６Ｏ８８。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３４０８．３８９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３４０８．４１。
【００５８】
図２のデンドリマー１７、Ｃ４−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１６を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ３−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）４が得られよう。分子式：Ｃ５２９Ｈ６２０Ｏ１８４。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１００３０．５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１００１８．１。
【００５９】
図２のデンドリマー１８、Ｃ４−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ４−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）４が得られよう。分子式：Ｃ３０５Ｈ４９２Ｏ１８４。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７１２６．１．観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７１２３．５。
【００６０】
図２のデンドリマー１９、Ｃ４−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）４の合成：ヒドロキシル化デンドリマー１８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ４−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）４が得られよう。分子式：Ｃ１０７３Ｈ１２６０Ｏ３７６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２０２８１．４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００６１】
図２のデンドリマー２０、Ｃ４−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）４の合成：ベンジリデン保護デンドリマー１９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ４−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）４が得られよう。分子式：Ｃ６２５Ｈ１００４Ｏ３７６。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１４５５７．６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００６２】
実施例７
五官能性「Ｃ−５」較正物質の合成
本実施例７の五官能性デンドリマー種を図３に示す。
【００６３】
図３のデンドリマー２１Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）５、の合成：市販のキシリトール（ＩＵＰＡＣ名：ペンタン−１，２，３，４，５−ｐｅｎｔｏｌ）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）５が得られた。分子式：Ｃ６５Ｈ７２Ｏ２０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２７９．３６６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２７９．３９。
【００６４】
図３のデンドリマー２２、Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］ＯＨ２）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ５−（［Ｇ−ｌ］ＯＨ２）５が得られた。分子式：Ｃ３０Ｈ５２Ｏ２０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７５５．２９５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝７５５．１７。
【００６５】
図３のデンドリマー２３、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５が得られた。分子式：Ｃ１５０Ｈ１７２Ｏ５０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８７９．９９７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８８０．０１。
【００６６】
図３のデンドリマー２３、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）５が得られた。分子式：Ｃ１５０Ｈ１７２Ｏ５０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８７９．９９７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２８８０．０１。
【００６７】
図３のデンドリマー２４、Ｃ５−（［Ｇ−２］ＯＨ４）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ５−（［Ｇ−２］ＯＨ４）５が得られた。分子式：Ｃ８０Ｈ１３２Ｏ５０。分子式：Ｃ８０Ｈ１３２Ｏ５０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９１５．７６８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９１５．７８。
【００６８】
図３のデンドリマー２５、Ｃ５−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２４を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ５−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）５が得られた。分子式：Ｃ３２０Ｈ３７２Ｏ１１０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝６０８１．２５７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝６０８１．５１。
【００６９】
図３のデンドリマー２６、Ｃ５−（［Ｇ−３］ＯＨ８）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２５を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ５−（［Ｇ−３］ＯＨ８）５が得られた。分子式：Ｃ１８０Ｈ２９２Ｏ１１０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４２３６．７１５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４２３６．８０。
【００７０】
図３のデンドリマー２７、Ｃ５−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２６は、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ５−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）５が得られよう。分子式：Ｃ６６０Ｈ７７２Ｏ２３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２４９３．１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１２４７６．０。
【００７１】
図３のデンドリマー２８、Ｃ５−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ５−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）５が得られよう。分子式：Ｃ３８０Ｈ６１２Ｏ２３０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝８８８３．９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝８８８０．１。
【００７２】
図３のデンドリマー２９、Ｃ５−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）５の合成：ヒドロキシル化デンドリマー２８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ５−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）５が得られよう。分子式：Ｃ１３４０Ｈ１５７２Ｏ４７０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝２５３０６．７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００７３】
図３のデンドリマー３０、Ｃ５−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）５の合成：ベンジリデン保護デンドリマー２９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ５−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）５が得られよう。分子式：Ｃ７８０Ｈ１２５２Ｏ４７０。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１８１７３．２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００７４】
実施例８
六官能性「Ｃ−６」較正物質の合成
本実施例８の六官能性デンドリマー種を図４に示す。
【００７５】
図４のデンドリマー３１、Ｃ６−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）６の合成：市販のジペンタエリトリトール（ＩＵＰＡＣ名：２−［［３−ヒドロキシ−２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロポキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール）を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ６−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）６が得られた。分子式：Ｃ８２Ｈ９４Ｏ２５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５８５．５１４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５８５．５３。
【００７６】
図４のデンドリマー３２、Ｃ６−（［Ｇ−ｌ］ＯＨ２）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３１を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ６−（［Ｇ−１］ＯＨ２）６が得られた。分子式：Ｃ４０Ｈ７０Ｏ２５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９７３．４１０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９７３．３４。
【００７７】
図４のデンドリマー３３、Ｃ６−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３２を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ６−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）６が得られた。分子式：Ｃ１８４Ｈ２１４Ｏ６１。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３５０６．２６９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３５０６．２５。
【００７８】
図４のデンドリマー３４、Ｃ６−（［Ｇ−２］ＯＨ４）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３３を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ６−（［Ｇ−２］ＯＨ４）６が得られた。分子式：Ｃ１００Ｈ１６６Ｏ６１。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３６５．９７９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３６５．９８。
【００７９】
図４のデンドリマー３５、Ｃ６−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３４を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、Ｃ６−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）６が得られた。分子式：Ｃ３８８Ｈ４５４Ｏ１３３。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７３４７．７８１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７３４７．０。
【００８０】
図４のデンドリマー３６、Ｃ６−（［Ｇ−３］ＯＨ８）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３５を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、Ｃ６−（［Ｇ−３］ＯＨ８）６が得られた。分子式：Ｃ２２０Ｈ３５８Ｏ１３３。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５１５１．１１５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５１５１．２８。
【００８１】
図４のデンドリマー３７、Ｃ６−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３６を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ６−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）６が得られよう。分子式：Ｃ７９６Ｈ９３４Ｏ２７７。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１４９６９．７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５０２０．１。
【００８２】
図４のデンドリマー３８、Ｃ６−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３７を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ６−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）６が得られよう。分子式：Ｃ４６０Ｈ７４２Ｏ２７７。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０６５５．６。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０７２２．６。
【００８３】
図４のデンドリマー３９、Ｃ６−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）６の合成：ヒドロキシル化デンドリマー３８を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、Ｃ６−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）６が得られよう。分子式：Ｃ１６１２Ｈ１８９４Ｏ５６５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３０３４６．１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００８４】
図４のデンドリマー４０、Ｃ６−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）６の合成：ベンジリデン保護デンドリマー３９を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、Ｃ６−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）６が得られよう。分子式：Ｃ９４０Ｈ１５１０Ｏ５６５。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２１８０２．８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００８５】
実施例９
デンドリマー１、１１、２１および３１の並行合成
先行技術においては、広範囲較正物質は、較正物質カクテルを得るために、別々に調製され精製された個々のペプチドの適正量を混合することにより製造される。しかし、本明細書において記載され、図５に概略図で示される合成方法論は、十分に規定された市販の出発物質の混合物から始めて並行してそれらを樹状突起化することによって較正物質の組を調製する独特の方法を提供する。
【００８６】
実施例３および４に詳述されるように（また、例えば図１に示されるように）、ステップ「ｉ」および「ｉｉ」の連続する繰り返しによって、（近似的に）指数関数的に増加する分子量を有するデンドリマーを調製することができる。例えば、Ｃ−３水酸基末端核のみから始めることによって、ステップ「ｉ」および「ｉｉ」の連続する繰り返しで、７３０、１６９０、３６１０、７４５０、１５１００および３０５００の近似分子量を有する単分散デンドリマー較正物質（例えば、図１のデンドリマー１、３、５、７および９など）を製造することができる。相異なる数のアルコール官能基（例えばＣ−４、Ｃ−５またはＣ−６ヒドロキシル末端核）を有する異なる核から始めることによって、広範囲の分布の広範囲の較正物質を効率的に調製することができる。
【００８７】
較正物質混合物を製造する特に効率的な方法は、単一バッチで核の混合物（例えばＣ−３、Ｃ−４、Ｃ−５および／またはＣ−６核の等モル混合物）を使用して、樹状突起化プロセスを行うことである。例えば、また図５に示すように、単一樹状突起化ステップの後に、４つの核の混合物は、（図６に実証されるように）８３９、１０５９、１２７９および１５８５の分子量（銀対イオンを含む）を有する１組の「第一世代」デンドリマー１、１１、２１および３１を与える。ステップ「ｉｉ」および「ｉ」の追加の繰り返しの後に、図５にも示されるように、「第２世代」較正物質（３、１３、２３、３３）の組は、（図７に実証されるように）１８００、２３４０、２８８０および３５０６の分子量を有する。このように、ステップ「ｉ」および「ｉｉ」の連続する繰り返しで、一連の４点組（例えば図６〜図１２参照）への迅速なアクセスを可能にする。
【００８８】
最も望ましい較正物質は、多数の十分に規定された単分散化合物（例えば図５の反応スキームおよび図６〜図１２のスペクトルに示されるような）の混合物であるので、各化学種を別々に調製し各生成物の分離後にそれらを混合するのではなく、１バッチで（核の選択された混合物を樹状突起化することによって）相異なる較正物質を一緒に調製することができるという追加の利点を、本明細書に記載された合成的手法は有する。デンドリマーを調製する以前の試みは十分に規定された単一生成物を求めたので、この並行方法は較正物質の組を調製するコストおよび負担の軽減において先例がなく価値がある。
【００８９】
デンドリマー１、１１、２１および３１の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−ｌ］Ｐｈ）ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：（トリスヒドロキシメチル）エタン（Ｃ３−ＯＨ３）、ペンタエリトリトール（Ｃ４−ＯＨ４）、キシリトール（Ｃ５−ＯＨ５）およびジペンタエリトリトール（Ｃ６−ＯＨ６）の等モル混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー１、１１、２１および３１の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−１］Ｐｈ）ｚが得られた。図６に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２２０；１，０５９．２９３；１，２７９．３６７；１，５８５．５１４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝８３９．２０；１，０５９．２８；１，２７９．３９；１５８５．５３。図６から理解できるように、デンドリマー１、１１、２１および３１の混合物は、８００〜１，６００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９０】
実施例１０
デンドリマー２、１２、２２および３２の並行合成
デンドリマー２、１２、２２および３２の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−１］ＯＨ２）ｚの合成（例えば図５の反応スキーム、参照）：実施例９からのベンジリデン保護デンドリマー１、１１、２１および３１の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー２、１２、２２および３２の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−１］ＯＨ２）ｚが得られた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２１０；６２３．２５３；７５５．２９５；９７３．４１０。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝４９１．２２；６２３．０５；７５５．１７；および９７３．３４（図示せず）。
【００９１】
実施例１１
デンドリマー３、１３、２３および３３の並行合成
デンドリマー３、１３、２３および３３の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１０からのヒドロキシル官能化デンドリマー２、１２、２２および３２の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー３、１３、２３および３３の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−２］Ｐｈ２）ｚが得られた。図７に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１，７９９．５９８；２，３３９．７９７；２，８７９．９９７；３，５０６．２６９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１，７９９．５９；２，３３９．８５；２，８８０．０１；３，５０６．２５。図７から理解できるように、デンドリマー３、１３、２３および３３の混合物は、１，８００〜３，６００質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９２】
実施例１２
デンドリマー４、１４、２４および３４の並行合成
デンドリマー４、１４、２４および３４の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−２］ＯＨ４）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１１からのベンジリデン保護デンドリマー３、１３、２３および３３の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー４、１４、２４および３４の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−２］ＯＨ４）Ｚが得られた。図８に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１，１８７．４９５；１，５５１．６３１；１，９１５．７６８；２，３６５．９７９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１，１８７．４６；１，５５１．６２；１，９１５．７８；２，３６５．９８。図７から理解できるように、デンドリマー４、１４、２４および３４の混合物は、１，２００〜２，４００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９３】
実施例１３
デンドリマー５、１５、２５および３５の並行合成
デンドリマー５、１５、２５および３５の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１２からのヒドロキシル官能化デンドリマー４、１４、２４および３４の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例２からのベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー５、１５、２５および３５の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−３］Ｐｈ４）Ｚが得られた。図９に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３，７２０．３５４；４，９００．８０５；６，０８１．２５７；７，３４７．７８１。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝３，７２０．４２；４，９００．９８；６，０８１．５１；および７，３４８．００。図９から理解できるように、デンドリマー５、１５、２５および３５の混合物は、３，６００〜７，２００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９４】
実施例１４
デンドリマー６、１６、２６および３６の並行合成
デンドリマー６、１６、２６、３６の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−３］ＯＨ８）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１３からのベンジリデン保護デンドリマー５、１５、２５および３５の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー６、１６、２６、３６の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−３］ＯＨ８）Ｚが得られた。図１０に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２，５８０．０６３；３，４０８．３８９；４，２３６．７１５；５，１５１．１１５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２，５８０．１０；３，４０８．４１；４，２３６．８０；５，１５１．２８。図１０から認識することができるように、デンドリマー６、１６、２６および３６の混合物は、２，５００〜５，１００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９５】
実施例１５
デンドリマー７、１７、２７および３７の並行合成
デンドリマー７、１７、２７および３７の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）Ｚの合成（例えば図５の反応スキーム参照）：実施例１４からのヒドロキシル官能化デンドリマー６、１６、２６および３６の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、ベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化し、デンドリマー７、１７、２７および３７の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−４］Ｐｈ８）Ｚが得られた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７，５６１．９；１０，０２２．８；１２，４８３．８；１５，０３０．８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝７，５６２；１０，０２３；１２，４８４；１５，０３１。図１１から認識することができるように、デンドリマー７、１７、２７および３７の混合物は、７，５００〜１５，０００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９６】
実施例１６
デンドリマー８、１８、２８および３８の並行合成
デンドリマー８、１８、２８および３８の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）Ｚの合成：実施例１５からのベンジリデン保護デンドリマー７、１７、２７および３７の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護し、デンドリマー８、１８、２８および３８の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−４］ＯＨ１６）Ｚが得られた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５，３６５．２；７，１２１．９；８，８７８．６；１０，７２１．４。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝５，３６６．６１９；７，１２３．５０４；８，８８０．１１１；１０，７２２．５７２。図１２から理解できるように、デンドリマー８、１８、２８および３８の混合物は、５，５００〜１０，５００の質量範囲を包含する有効な四点較正を提供する。
【００９７】
実施例１７
デンドリマー９、１９、２９および３９の並行合成
デンドリマー９、１９、２９および３９の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）Ｚの合成：実施例１６からのヒドロキシル官能化デンドリマー８、１８、２８および３８の混合物を、実施例３の一般樹状突起化手順に従って、実施例３のベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物およびＤＭＡＰを使用してエステル化すれば、デンドリマー９、１９、２９および３９の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−５］Ｐｈ１６）Ｚが得られよう。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝１５，２４４．９；２０，２６６．９；２５，２８８．８；３０，３９６．９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ａｇ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００９８】
実施例１８
デンドリマー１０、２０、３０および４０の並行合成
デンドリマー１０、２０、３０および４０の等モル混合物、ＣＸ−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）Ｚの合成：実施例１７からのベンジリデン保護デンドリマー、９、１９、２９および３９の混合物を、実施例４の一般脱保護手順に従って、５％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃおよび水素ガスを使用して脱保護すれば、デンドリマー１０、２０、３０および４０の混合物であるＣＸ−（［Ｇ−５］ＯＨ３２）Ｚが得られよう。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な平均ＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１０，９３５．５；１４，５４８．９；１８，１６２．４；２１，８６１．９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝測定予定。
【００９９】
実施例１９
較正物質試験−樹状突起化キャビタンド
高質量分解能の正確なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータを得る際に本開示の較正物質の有用性を検証するために、樹状突起化キャビタンド（単分散合成分子）を検討した。結果は図１３Ａに示す。樹状突起化キャビタンド（図１３Ｂに示すＣａｖ−（［Ｇ１］−Ｐｈ）８）は分子式Ｃ１９２Ｈ１７６Ｏ４８を有する。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３，２７２．１２２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝３，２７２．０６。質量精度：１８．９ｐｐｍ。
【０１００】
実施例２０
較正物質試験−ポリ（エチレン）グリコール、ＰＥＧ１９７０
高質量分解能の正確なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータを得る際の本開示の較正物質の有用性をさらに検証するために、合成高分子ＰＥＧ１９７０（３つの相異なるオリゴマー：３３ｍｅｒ、４３ｍｅｒおよび５３ｍｅｒの多分散ポリマー）を検討した。ＰＥＧ１９７０の数平均分子量（Ｍｎ）は１９７０であり、その多分散性指数（ＰＤＩ）は１．０５である。分析結果は図１４〜図１６に示す。
【０１０１】
ＰＥＧ１９７０ ３３ｍｅｒは分子式Ｃ６６Ｈ１３４Ｏ３４を有する。図１４に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１４９３．８６５。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１４９３．９６。質量精度：６３．６ｐｐｍ。
【０１０２】
ＰＥＧ１９７０ ４３ｍｅｒは分子式Ｃ８６Ｈ１７４Ｏ４４を有する。図１５に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３４．１２７。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３４．２０。質量精度：３７．７ｐｐｍ。
【０１０３】
ＰＥＧ１９７０ ５３ｍｅｒは分子式Ｃ１０６Ｈ２１４Ｏ５４を有する。図１６に示すように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３７４．３８９。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝２３７４．４４。質量精度：２１．５ｐｐｍ。
【０１０４】
実施例２１
較正物質試験−専有ペプチドＪＦ−１４８５
高質量分解能の正確なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータを得る際の本開示の較正物質の有用性をさらに検証するために、式Ｃ８８Ｈ１１８Ｎ１６Ｏ２２Ｓ５＋（および専有構造を有する）を有するペプチドＪＦ−１４８５を検討した。図１７に示すように、ＭＡＬＤＴ−ＴＯＦ ＭＳ：Ｈ＋付加物の理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝１９１１．７２８。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝１９１１．６８。Ｎａ＋付加物の理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３３．７１０２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝１９３３．６９。Ｋ＋付加物の理論的な正確なＭＷ：［Ｍ＋Ｋ］＋ｍ／ｚ＝１９４９．６８４２。観察されたＭＷ：［Ｍ＋Ｋ］＋ｍ／ｚ＝１９４９．６０。質量精度：２５．１ｐｐｍ。
【０１０５】
代替ヒドロキシル末端核
当業者によって理解されるように、上記のもの以外に様々な官能基のデンドリマーを、（任意選択で）実施例４の一般脱保護手順が後続する、実施例３の一般樹状突起化手順によって合成してもよい。これは、例えば、限定されるように意図するものではないが、実施例３の一般樹状突起化手順のために、単に上記の開示したものと異なる水酸基末端核（例えば１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタン、ペンタエリトリトール、キシリトールまたはジペンタエリトリトール以外の核）を選択することによって達成することができる可能性がある。例示の代替水酸基末端核は、限定されるように意図するものではないが、トリペンタエリトリトール（８個のヒドロキシル末端）およびテトラペンタエリトリトール（１０個のヒドロキシル末端）を含む。当業者はまた、前述の説明から、実施例３の一般樹状突起化手順によって生み出されたデンドリマーはまた、代替水酸基末端核として機能することができることも理解するであろう。例えば、Ｃ３−（［Ｇ−２］ＯＨ４）３で示されるデンドリマー（図１のデンドリマー４）は１２の−ＯＨ末端を有し、その各々が、１回の樹状突起化（実施例３の一般樹状突起化手順によって）を受けてもよい。次いで、結果として得られるデンドリマーは、実施例４の一般脱保護手順を受けて別のデンドリマーをさらに与え、また、そのステップを繰り返し一層大きいデンドリマーを生み出してもよい。したがって、約１から数百ものヒドロキシル（−ＯＨ）末端を含有するアルコールは、実施例３の一般樹状突起化手順において用いることができ、（好ましくは多価アルコール、ならびにポリ（ビニルアルコール）などの直鎖状ポリオールおよびポリ（グリセロール）などの超分枝ポリオールを含む）、かつそれに続く（任意選択で）、実施例４の一般脱保護手順によって質量分析、特にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、ＥＳＩ、ＡＰＣＩおよびＦＡＢ手法に有用な較正物質を製造することができる。さらに、そのようなアルコール（および好ましくは多価アルコール）の組合せは、並行合成に（例えば実施例９〜１８に記載されるように）使用して広範囲のｍ／ｚ比にわたって有用な一揃いの較正物質を生み出すことができる。
【０１０６】
さらに、実施例３に記載した「カップリング」または「樹状突起化」ステップ中にアルコールを対応するエステルに変換するために使用されるカップリングアシル化化学は、アミンをアミドに変換する同一の試薬を使用するアシル化反応に、同様に適用可能である。その結果、ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）およびポリ（プロピレンアミン）（ＰＰＩ）デンドリマーなどの樹枝状ポリアミンの市販の種類を含む、ポリアミン核分子も、（核分子として）使用することができる。
【０１０７】
トリスモノマー
下記式１に示す保護トリスモノマーを製造するために、上記のベンジリデン保護ビスＭＰＡモノマーは、ペンダントメチル基の代わりにヒドロキシメチル基に置換することにより修正することができる。
【化１５】
ベンジリデン保護ビス−ＭＰＡ無水物モノマー（（ビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマー）のペンダントメチル基の代わりにヒドロキシメチル基に置換することによって、各デンドリマー層は図１〜図５に示す２つの枝状部ではなく、３つの枝状部を含むことができる可能性がある。言いかえれば、実施例３の一般樹状突起化手順およびこれに続く実施例４の一般脱保護手順における式１のモノマーを使用することによって、各分岐点は図１〜図５中に示される２つの枝状部の代わりに、３つの枝状部を与えるであろう。例えば、それぞれ実施例３および実施例４による１回の樹状突起化および脱保護に対して、１，１，１−トリス（ヒドロキシメチル）エタンから始めて式１のトリスモノマーを使用することによって、式２による（かつデンドリマー２と同様の）Ｃ３較正物質Ｃ３−（［Ｇ−１］ＯＨ３）３が製造されるであろう。
【化１６】
式２の−ＯＨ基は、続く樹状突起化および脱保護ステップを行うためにメチリデンオルトエステルを使用して保護される場合がある。
【０１０８】
デンドリマーの調整
記載されたデンドリマーがビス（ヒドロキシメチル）プロパン酸モノマーからほぼ独占的に生じるので、全般的な構造の組成物は、モノマー構造のわずかな変更によって容易に調整することができる。そのような調整は、ペンダントメチル基の修正および／または１２Ｃ同位体濃縮モノマーを使用するデンドリマーの合成を包含することができる場合がある。
【０１０９】
すべての原子の正確な原子質量は整数に近いが、整数そのものではない。より大きい分子量（ＭＷ）化合物は多数の原子で構成されるので、これらは、著しい質量欠損、すなわち名目の質量（各原子質量に対する最も豊富な同位元素の最も近い整数近似値）からのずれを有する。簡単に言えば、質量欠損は、整数近似の「名目質量」と実際に観察されるモノ同位体の質量との間の違いである。質量欠損は化合物の種類を同定するために使用することができ、天然の生体分子を人工的に修正されたものから区別するために使用することができる。デンドリマー骨格の元素組成調整によって、質量欠損を調整して、天然化合物とそれらが重複しないように（かつ容易に識別することができるように）することができる。そのような調整はまた、分析種と較正物質との間の相違の単純化により自動化データ解析を容易にすることができる。開示されたデンドリマーが多層の同一モノマーによって主に作られるので、そのモノマーの元素組成を調整すれば、開示されたデンドリマーのすべての質量欠損を調整することが可能になる。例えば、平均的なペプチドは、分子量の１０００Ｄａ当たり＋０．５０６ダルトン（Ｄａ）の「アベルジン（ａｖｅｒｇｉｎｅ）」質量欠損を示す。「アベルジン」は、その元素組成（非整数分子式：Ｃ４．９３８４Ｈ７．７５８３Ｎ１．３５７７Ｏ１．４７７３Ｓ０．０４１７を有する）に関して理論的な「平均的」アミノ酸であり、ある範囲の分子量にわたってペプチドおよびタンパク質の予想される元素組成および質量欠損を算定するために使用することができる。ヒドロキシル官能化樹状突起（例えばデンドリマー２、４、６および８などを参照）は、分子量の１０００Ｄａ当たり＋０．４２±０．０２Ｄａの質量欠損を示すが、一方、ベンジリデン官能化樹状突起（例えばデンドリマー１、３、５、７および９などを参照）は、分子量の１０００Ｄａ当たり０．３９±０．０２Ｄａの質量欠損を示す。この質量欠損をさらに識別するために、ヒドロキシル官能化樹状突起のペンダントメチルは、合成手順についての著しい影響なしで、様々なより長いアルキル鎖、またはハロゲン化アルキル鎖で修正または官能化することができる。これは、下記の式３に示されるベンジリデン保護ビスＭＰＡ無水物モノマー（ビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマー）を５−メチル位で修正することにより遂行される場合がある。
【化１７】
【０１１０】
式３において、Ｘは、アルキル（例えば、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３またはｎが０から１６の整数である（ＣＨ２）ｎＣＨ３）；Ｐｈがフェニルを表すＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ；「Ｑ」がハロゲン、好ましくはフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）（例えばＣＦ３、ＣＣｌ３など）を表すＣＱ３；または「Ｑ」がハロゲン、好ましくはフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）を表しｎが１から１６から整数である（ＣＱ２）ｎＣＱ３であってもよい。例えば、ＭＷのかなり著しいずれが、メチル基をトリフルオロメチル基に置き換え、その結果、質量欠損のずれがＭＷの１０００Ｄａ当たり＋０．１１±０．０２Ｄａになることにより示される可能性がある。分子量欠損はまた、所望の質量欠損を有する置換基を用いて周囲を単純な官能基化をすることによって修正することができる。「Ｘ」での修正にもかかわらず、式３のベンジリデン保護モノマーを使用するデンドリマー合成は、実施例３の一般樹状突起化手順および実施例４の一般脱保護手順の連続する反復によって進む場合がある。炭素含有分子の分子量が増加するにつれて、分子中の１３Ｃ（天然存在度＝１．１０９％）の自然蔓延は、それらの質量スペクトルにおいて分子同位体の分布の広がりをもたらす。約８，０００Ｄａを超えると、モノ同位体種（１２Ｃのみを有する）に対応する信号は、ポリ同位体種に対して非常に小さく、ポリ同位体種からのピーク中でモノ同位体種のピークを識別するのが困難であるので、正確な質量決定は困難となる。したがって、ポリ同位体種の存在は分子量計算の分解能を大幅に低下させる。例えば、式Ｃ５Ｈ１２Ｏ４によって表すことができる式４：
【化１８】
を挙げる。Ｃの１％より多くが１３Ｃなので、いかなる炭素含有化合物のＭＳも、これらの１３Ｃ同位元素に対応するより高分子量の信号を示す。化合物中の炭素数が増加するにつれて、化合物中に１３Ｃが存在する可能性は増加する。このことは、１３６．０７３５６の正確な質量を有する、式４のモノマーの同位体分布において見られ、１３６．０７３５６（ｍ／ｚ；１００．０％の相対的信号強度）のモノ同位体の信号、および１３７．０７６９１（ｍ／ｚ；５．４％の相対的信号強度）のより高分子量種を示す。炭素含量が増加するにつれて（例えば、限定されるように意図するものではないが、１分子当たり５００炭素原子）、相異なるポリ同位体種からの分子量の統計的分布は非常に広がるので、単一モノ同位体のピークは分離するのが困難になることがある。天然存在度は、１２Ｃが９８．８９％であり、１３Ｃが１．１０９％であり、１Ｈが９９．９９％であり、２Ｈが０．０１％であり、１６Ｏが９９．７６％であり、１８Ｏが０．２０％であり、また１７Ｏが０．０４％である。１３Ｃ同位元素はほとんどの有機化合物中で最も一般的なより大きい同位元素である。したがって、高分子量で同位体の分布を狭くする最も簡単な方法は、１３Ｃを枯渇させておいた物質、例えば、全炭素が１２Ｃである原料物質から出発することである。記載のデンドリマーがビス（ヒドロキシメチル）プロパン酸モノマーからほぼ独占的に生じるので、その合成が１２Ｃ同位体濃縮モノマーを用いて行われる場合、質量スペクトルのピークの広がりは実質的に低下し、１０，０００Ｄａを超える高精度の較正を容易に達成することができる。１８Ｏによる同位体の広がりは目立たないが（１８Ｏは全Ｏ種のわずか０．２０１％しか占めないので）、１６Ｏ同位体濃縮もまた、精度をさらに一層改善するために行うことができる。ここに企図されるこれらの同位体濃縮は、反応体およびデンドリマー生成物の分子量をわずかに変えること以外、合成パラメーターにいかなる影響をも有するとは予想されない。
【０１１１】
実施例３に記載されたＣＸ−（［Ｇ−ｎ］Ｐｈｐ）ｚの調製のための一般樹状突起化手順において示されるように、モノマーのアルコール官能基は、正確な単分散構造を与える反復デンドリマー成長を制御するために「保護」されなければならない。２つのアルコールはベンジリデン（実施例３に記載され、下式５に示される）を用いて同時に保護することができ、当業者はまた、アセトニド（式６）、または他のアセタールもしくはケタール保護基を用いてこれらが保護される場合があることを認識するであろう。（例えば、式７および式８参照。式中、Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、Ｒ４はＰｈ、ＣＨ３、Ｃ６Ｈ４ＯＣＨ３またはＣ６Ｈ４ＮＯ２であり、Ｒ５はＣＨ２Ｐｈ、Ｓｉ（ＣＨ３）３、Ｃ６Ｈ５ＮＯ２、ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｃ５Ｈ９Ｏ（テトラヒドロピラニルエーテル）またはＳｉＰｈ２ｔ−Ｂｕであり、Ｐｈはフェニルである。）
【化１９】
【化２０】
【化２１】
【化２２】
【０１１２】
保護基のさらなる例は、Ｐ．Ｇ．Ｍ．ＷｕｔｓおよびＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅによる「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００７，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ）に見出される場合があり、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、ベンジルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびシリルエーテルを含むいくつかの不安定なエーテル結合を、代わりにまたは追加で、構造上純粋なデンドリマーの合成を可能にするために使用することができる。樹状突起化手順に対するそのような修正は本開示の範囲内である。
【０１１３】
本明細書に引用された参考文献はすべて、あたかも、各参考文献が参照によって組み込まれるように具体的に別々に示されたかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。いずれの参考文献の引用も出願日に先行する開示のためのものであり、本開示には、先行発明を理由にそのような参考文献に先行する資格がないことを承認するものとして解釈されるべきでない。上記元素の各々、または２つ以上が一緒に、また、上記種類と異なる他の種類の方法に有用な用途を見出す場合があることが理解されるであろう。さらなる分析を加えなくとも、上記で、非常に全面的に本開示の要点を明らかにしているので、他の者は、目下の知識を適用することによって、先行技術の見地から、添付の特許請求の範囲において述べられる本開示の総括的または特定の態様の本質的な特性を適正に構成する特色を省略することなく、各種用途に対して容易にそれを適応させることができる。前述の実施形態は例としてのみ提供され、本開示の範囲は以下の特許請求の範囲によってのみ限定されるべきである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含む、デンドリマー組成物であって、式中ｘは３から６の整数であり、
Ａ）Ｃｏｒｅｘは：
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化２３】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化２４】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化２５】
Ａ．４）ｘが６である場合、
【化２６】
Ａ．５）これらの組合せを表し；
Ｂ）Ｄは
【化２７】
Ｃ）ＭがＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化２８】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化２９】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり；
Ｅ）ｒはｐ−１であり；
Ｆ）ｐは２ｎ−ｌであり；
Ｇ）ｎは１から１０の整数であり；かつ、
Ｈ）Ｘは（ＣＱ２）ａＣＱ３およびＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈからなる群から選択され、式中、Ｑは独立してＨまたはハロゲンを表し、Ｐｈはフェニルを表し、またａは０から１６の整数である、
デンドリマー組成物。
【請求項２】
式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含むデンドリマー組成物であって、式中ｘが３から６の整数であり、
Ａ）Ｃｏｒｅｘは：
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化３０】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化３１】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化３２】
Ａ．４）ｘが６である場合、
【化３３】
Ａ．５）これらの組合せを表し；
Ｂ）Ｄは
【化３４】
Ｃ）ＭはＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化３５】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化３６】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり；
Ｅ）ｒはｐ−１であり；
Ｆ）ｐは３ｎ−ｌであり；かつ
Ｇ）ｎは１から１０の整数である
デンドリマー組成物。
【請求項３】
Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３およびＡ．４がほぼ等モル量存在する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３、Ａ．４、Ｂ、Ｃまたはこれらの任意の組合せが同位体濃縮されている、上記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ＢおよびＣが同位体濃縮されている、上記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記同位体濃縮が、１２Ｃ同位体濃縮、１６Ｏ同位体濃縮、または１２Ｃおよび１６Ｃ同位体濃縮である、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項７】
デンドリマー組成物を製造する方法であって、
Ａ）１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトール、ジペンタエリトリトールおよびこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの核を準備するステップと、
Ｂ）前記少なくとも１つの核が１回の樹状突起化を受けるステップと、
Ｃ）任意選択で、続いて少なくとも１つの核が１回の脱保護を受けるステップと、
Ｄ）任意選択で、続いてステップＢ）およびＣ）を繰り返すステップと、
Ｅ）任意選択で、所望に応じて続いてステップＤ）を繰り返し、それによって前記デンドリマー組成物を取得するステップと、
を含む方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの核が、１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトールおよびジペンタエリトリトールの組合せである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ステップＢ）がビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマーを使用することを含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップＢ）が式１の化合物を使用することを含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１１】
Ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の、特定の物理的性質を有する少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、
Ｂ）前記少なくとも１つのデンドリマーをイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンを提供することと、
Ｃ）前記１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、
Ｄ）前記特定の物理的性質と前記データを関連付けることと、
を含む、質量分析装置を較正する方法。
【請求項１２】
Ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の、特定の物理的性質を有する少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、
Ｂ）試料を準備することと、
Ｃ）前記試料の少なくとも一部を前記少なくとも１つのデンドリマーの少なくとも一部と組み合わせることと、
Ｄ）前記試料および前記少なくとも１つのデンドリマーをタンデムでイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンを提供することと、
Ｅ）前記少なくとも１つのデンドリマーの前記１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、
Ｆ）前記データを前記少なくとも１つのデンドリマーの前記特定の物理的性質と関連付け、それによって前記試料の物理的性質を判定することと、
を含む、前記試料の物理的性質を判定する方法。
【請求項１】
式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含む、デンドリマー組成物であって、式中ｘは３から６の整数であり、
Ａ）Ｃｏｒｅｘは：
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化２３】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化２４】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化２５】
Ａ．４）ｘが６である場合、
【化２６】
Ａ．５）これらの組合せを表し；
Ｂ）Ｄは
【化２７】
Ｃ）ＭがＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化２８】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化２９】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり；
Ｅ）ｒはｐ−１であり；
Ｆ）ｐは２ｎ−ｌであり；
Ｇ）ｎは１から１０の整数であり；かつ、
Ｈ）Ｘは（ＣＱ２）ａＣＱ３およびＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈからなる群から選択され、式中、Ｑは独立してＨまたはハロゲンを表し、Ｐｈはフェニルを表し、またａは０から１６の整数である、
デンドリマー組成物。
【請求項２】
式（Ｃｏｒｅｘ）（ＤｒＭ）ｘの少なくとも１つの化合物、またはその互変異性型、またはその塩、またはその溶媒和物を含むデンドリマー組成物であって、式中ｘが３から６の整数であり、
Ａ）Ｃｏｒｅｘは：
Ａ．１）ｘが３である場合、
【化３０】
Ａ．２）ｘが４である場合、
【化３１】
Ａ．３）ｘが５である場合、
【化３２】
Ａ．４）ｘが６である場合、
【化３３】
Ａ．５）これらの組合せを表し；
Ｂ）Ｄは
【化３４】
Ｃ）ＭはＲ１ｐまたはＲ２ｐを表し、式中、
Ｃ．１）Ｒ１は
【化３５】
Ｃ．２）Ｒ２は
【化３６】
Ｄ）Ｒ３はＤまたはＭであり；
Ｅ）ｒはｐ−１であり；
Ｆ）ｐは３ｎ−ｌであり；かつ
Ｇ）ｎは１から１０の整数である
デンドリマー組成物。
【請求項３】
Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３およびＡ．４がほぼ等モル量存在する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
Ａ．１、Ａ．２、Ａ．３、Ａ．４、Ｂ、Ｃまたはこれらの任意の組合せが同位体濃縮されている、上記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ＢおよびＣが同位体濃縮されている、上記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記同位体濃縮が、１２Ｃ同位体濃縮、１６Ｏ同位体濃縮、または１２Ｃおよび１６Ｃ同位体濃縮である、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項７】
デンドリマー組成物を製造する方法であって、
Ａ）１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトール、ジペンタエリトリトールおよびこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの核を準備するステップと、
Ｂ）前記少なくとも１つの核が１回の樹状突起化を受けるステップと、
Ｃ）任意選択で、続いて少なくとも１つの核が１回の脱保護を受けるステップと、
Ｄ）任意選択で、続いてステップＢ）およびＣ）を繰り返すステップと、
Ｅ）任意選択で、所望に応じて続いてステップＤ）を繰り返し、それによって前記デンドリマー組成物を取得するステップと、
を含む方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの核が、１，１，１−トリスヒドロキシエチルメタン、ペンタエリトリトール、キシリトールおよびジペンタエリトリトールの組合せである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ステップＢ）がビス（５−メチル−２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−カルボキシル）酸無水物モノマーを使用することを含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップＢ）が式１の化合物を使用することを含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１１】
Ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の、特定の物理的性質を有する少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、
Ｂ）前記少なくとも１つのデンドリマーをイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンを提供することと、
Ｃ）前記１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、
Ｄ）前記特定の物理的性質と前記データを関連付けることと、
を含む、質量分析装置を較正する方法。
【請求項１２】
Ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の、特定の物理的性質を有する少なくとも１つのデンドリマーを準備することと、
Ｂ）試料を準備することと、
Ｃ）前記試料の少なくとも一部を前記少なくとも１つのデンドリマーの少なくとも一部と組み合わせることと、
Ｄ）前記試料および前記少なくとも１つのデンドリマーをタンデムでイオン化し、前記少なくとも１つのデンドリマーの１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンを提供することと、
Ｅ）前記少なくとも１つのデンドリマーの前記１つまたは複数のイオンおよび前記試料の１つまたは複数のイオンからデータを集めることと、
Ｆ）前記データを前記少なくとも１つのデンドリマーの前記特定の物理的性質と関連付け、それによって前記試料の物理的性質を判定することと、
を含む、前記試料の物理的性質を判定する方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【公表番号】特表２０１２−５１７０００（Ｐ２０１２−５１７０００Ａ）
【公表日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４８４２２（Ｐ２０１１−５４８４２２）
【出願日】平成２２年２月３日（２０１０．２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２３０８７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９１１０９
【国際公開日】平成２２年８月１２日（２０１０．８．１２）
【出願人】（５０７１８６３６６）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年７月２６日（２０１２．７．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月３日（２０１０．２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２３０８７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９１１０９
【国際公開日】平成２２年８月１２日（２０１０．８．１２）
【出願人】（５０７１８６３６６）
【Ｆターム（参考）】
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