赤血球凝集阻害剤、および赤血球の凝集阻害方法
【課題】天然物由来の成分を用いた、人体に安全な赤血球凝集阻害剤の提供。
【解決手段】タデ科タデ属のアイ（学名：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍ Ｌｏｕｒ．）の水溶性成分を含有する赤血球凝集阻害剤。該水溶性成分は、アイの茎部から得られるものであることが好ましい。該水溶性成分は、１μｌの血液に対し０．００２ｍｇ以上０．２ｍｇ未満投与することが好ましい。該赤血球凝集阻害剤は、赤血球凝集に由来する種々の病気（例えば、アレルギー疾患、糖尿病、膠原病、ガン等）の治療に有用である。
【解決手段】タデ科タデ属のアイ（学名：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍ Ｌｏｕｒ．）の水溶性成分を含有する赤血球凝集阻害剤。該水溶性成分は、アイの茎部から得られるものであることが好ましい。該水溶性成分は、１μｌの血液に対し０．００２ｍｇ以上０．２ｍｇ未満投与することが好ましい。該赤血球凝集阻害剤は、赤血球凝集に由来する種々の病気（例えば、アレルギー疾患、糖尿病、膠原病、ガン等）の治療に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球凝集阻害剤、および赤血球の凝集阻害方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
赤血球は種々の病気（例えば、アレルギー疾患、糖尿病、膠原病、ガン等）の患者の血液中で凝集することが知られている。
【０００３】
赤血球はヘモグロビンを介して各細胞へ酸素を運搬する働きを有しているため、赤血球が凝集すれば、毛細血管の中を赤血球が流れることができなくなって、体内の組織が酸欠状態となったり、免疫力が低下することが予測される。したがって、赤血球の凝集に因って引き起こされる新たな疾患（例えば、組織の酸素不足による壊死など）を防ぐためには、赤血球の凝集を阻害するのが有効であり、これまで、赤血球凝集阻害剤として、２−フェニルベンズイミダゾールのアルキル誘導体が開発されている（特許文献１参照）。しかしながら、当該阻害剤は化学合成品であり、その使用について注意を要する場合があるため、人体に対する安全性の高い赤血球阻害剤が求められていた。
【０００４】
ところで、タデ科のアイは、古くから染料の原料として用いられており、また医薬品としての用途も知られている。例えば、アイの種には解熱作用があると言われている。また、アイの生葉から得られる汁は、毒虫などの刺傷に塗布するなどして用いられている。しかしながら、アイの有効成分に関する報告は様々であり、医薬品としての実用化には至っていない。
【０００５】
本発明者は、これまでに、かかるアイの茎部や根部に含まれる水溶性成分が、強力な抗ウイルス性等の生理作用を有することを発見し、出願している（特許文献２参照）。かかる抗ウイルス剤は、天然物であるアイ由来の成分を主成分とするため、人体に対する安全性は高いものと予想される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】独国特許出願公開第３８３００６０号明細書
【特許文献２】特開２００８−１９２２７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記の様な事情に鑑みてなされたものであり、本発明者は、天然物由来の成分を用いて、人体に安全な赤血球凝集阻害剤を提供することを課題に掲げた。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、上記アイの水溶性成分（天然物由来の成分）が、赤血球の凝集を阻害する作用を有していることを見出し、本発明に至った。すなわち、上記課題を解決することができた本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を含有することを特徴とする。なお、本明細書でいうアイとは、タデ科タデ属のアイ（学名：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍ Ｌｏｕｒ．）を意味する。
【０００９】
本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を利用するものであり、天然物に由来するため、人体に対して安全性の高い阻害剤の提供を可能にする。
【００１０】
本発明の赤血球凝集阻害剤は、１μｌの血液に対し前記水溶性成分を０．００２ｍｇ以上０．２ｍｇ未満投与するためのものであることが好ましい。
【００１１】
また、前記水溶性成分がアイの茎部から得られることが好ましい実施態様である。アイは、染料原料としては通常葉部のみが用いられ、茎部や根部は廃棄されているという現状がある。したがって、本発明の赤血球凝集阻害剤をアイの茎部から得ることによって、染料原料としては廃棄される茎部を有効活用できる。また、茎部から得られる水溶性成分は、染料原料として用いられるアイの葉部由来のものよりも強い赤血球凝集阻害効果を示すものと期待される。
【００１２】
本発明には、前記赤血球凝集阻害剤を投与することを特徴とする赤血球の凝集阻害方法も包含される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係るアイの水溶性成分は、赤血球の凝集を阻害できる。このため、赤血球の凝集に起因する種々の疾病の治療に貢献するものと期待される。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を含有することを特徴とする。以下、本発明の赤血球凝集阻害剤について詳細に説明する。
【００１５】
（アイ）
本発明で用いるアイは、タデ科タデ属のアイであればよく、天然に自生するものであっても、人工栽培されているものであってもよい。また、アイの状態も特に限定されず、例えば、刈り取り直後の水分を含んだもの、凍結したもの、乾燥したもの、乾燥物を発酵させたもの等が挙げられる。これらは単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。なお、本発明では、保存や運搬が容易な点から、アイの乾燥物を用いることが好ましい。
【００１６】
本発明では、アイの根部、茎部、葉部のいずれの部位を用いてもよいが、茎部を用いることが好ましい。本発明者は、アイの水溶性成分のうちアイの茎部から得られる水溶性成分が、根部や葉部の部分から得られる水溶性成分よりも高い生理活性を示すことを見出している。また、茎部を使用することにより、染料原料として使用されるアイの葉を除いた後の廃棄物（茎部など）を有効活用できるため、本発明の赤血球凝集阻害剤を安価で供給することが可能になる。
【００１７】
本発明では、アイを破砕、粉砕等して用いてもよい。これにより、アイから水溶性成分を効率よく抽出することができる。
【００１８】
（水溶性成分）
本発明の水溶性成分は、上記アイから水性溶剤により抽出される抽出物である。この水溶性成分の具体的詳細については現在同定中であり不明であるが、本発明者は、液体クロマトグラフィーによる分析によって、多種の成分が含まれていることを確認している。
【００１９】
水溶性成分をアイから抽出する方法は特に限定されるものではない。例えば、アイを水性溶剤に浸漬した後、必要に応じて撹拌処理、加熱処理、加圧処理、超音波処理などから選択される少なくとも１種の処理を施して、アイに含まれる水溶性成分を溶剤中に溶出させて行う方法が挙げられる。本発明において加熱処理を行う場合には、液温が６０℃以上（より好ましくは７０℃以上、さらに好ましくは８０℃以上）となるように加熱するのが好ましい。液温を６０℃以上にすることにより、アイに含まれる水溶性成分を効率よく溶剤中に溶出させることができる。なお、液温の上限については特に限定されるものではなく、溶剤の沸点まで加熱してもよい。また、加熱時間は５分以上（より好ましくは１５分以上、さらに好ましくは２５分以上）であることが好ましく、２４時間以下（より好ましくは６０分以下、さらに好ましくは５０分以下）であることが好ましい。上記時間内の加熱によって、アイに含まれる水溶性成分を効果的に溶剤中に抽出することができる。
【００２０】
水溶性成分の抽出に用いる水性溶剤としては、例えば、水道水、純水、イオン交換水などの水；メタノール、エタノールなどのアルコール類と上記水との混合溶剤；アセトンなどのケトン類と上記水との混合溶剤などが挙げられる。アルコール類やケトン類の水に対する混合率は５０質量％以下（より好ましくは４０質量％以下、さらに好ましくは３０質量％以下）とすることが好ましい。これらの溶剤は単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。本発明の赤血球凝集阻害剤は人体に投与して用いるため、安全性の観点から、溶剤として水や、エタノールと水との混合溶剤を用いることが好ましく、水のみを用いることがより好ましい。また、水性溶剤は、ｐＨを適宜調整してもよい。通常、ｐＨは２〜１３の範囲であることが好ましく、５〜８の範囲であることがさらに好ましい。
【００２１】
水溶性成分の抽出に用いる溶剤量は特に限定されるものではなく、効果および効率を考慮すると、アイの乾燥物１ｇに対して溶剤１０ｇ以上（より好ましくは２０ｇ以上、さらに好ましくは４０ｇ以上）が好ましく、１０００ｇ以下（より好ましくは１００ｇ以下、さらに好ましくは４０ｇ以下）が好ましい。
【００２２】
本発明の水溶性成分は、上記抽出操作を経て得られた水溶性成分含有溶液から、ろ過、遠心分離、デカンテーションなどによって、固形分（水溶性成分抽出後のアイの残渣など）を分離することによって得ることが好ましい。
【００２３】
本発明では、上記水溶性成分の調製の際に、変色や異臭の発生や、あるいは微生物の増殖を抑制するために、抗酸化剤、抗菌剤、ｐＨ調整剤などを添加してもよい。これらの成分の添加時期や添加量は、本発明の効果を妨げない限り特に制限されない。
【００２４】
本発明では、上記操作によって得られた水溶性成分（水溶性成分含有溶液）を、そのまま赤血球凝集阻害剤として使用してもよい。また、安全性を高めたり、有効成分含有量を高めるために、水溶性成分含有溶液に精製処理を施してもよい。精製処理としては、例えば、透析、液体クロマトグラフィーなどが挙げられる。
【００２５】
さらに、本発明では、水溶性成分含有溶液に濃縮、乾燥などの処理を施したり、かかる濃縮等によって得られた水溶性成分を粉状、顆粒状、ペースト状などにしてもよい。これにより、水溶性成分の取り扱いが容易になる。乾燥や濃縮する方法としては、例えば、真空乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥、限外ろ過濃縮などが挙げられる。これらの方法は単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２６】
（赤血球凝集阻害剤）
上述の通り、本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を主成分とするものであり天然植物に由来するため、人体に対する安全性が高い。
【００２７】
（赤血球の凝集阻害方法）
本発明では、上記赤血球凝集阻害剤を、食品や医薬品、医薬部外品などとして、例えば、経口投与や非経口投与などによって、赤血球の凝集を阻害してもよい。経口投与は、上記水溶性成分含有溶液やその希釈液、乾燥物、濃縮物（粉末、顆粒、ペースト等）をそのまま、あるいは他の食品に添加して食することによって行うことができる。また、非経口投与は、上記抽出液を静脈内投与や皮下投与したり、上記水溶性成分を含む軟膏やクリームを患部に塗布することによって行うことができる。あるいは、上記水溶性成分含有溶液やその希釈液を空中に散布したり、マスクに含浸させて、水溶性成分を吸引することによって、水溶性成分を摂取してもよい。なお、本発明者の研究によって、本発明の赤血球凝集阻害剤は、基本的には人体に安全であることを確認している。
【００２８】
（投与量）
本発明の赤血球凝集阻害剤は、１μｌの血液に対し０．００２ｍｇ以上（より好ましくは０．００５ｍｇ以上）投与することが好ましく、０．２ｍｇ未満（より好ましくは０．１５ｍｇ以下、さらに好ましくは０．１０ｍｇ以下）投与することが好ましい。投与量が０．００２ｍｇ未満の場合には、十分に赤血球の凝集を抑えることができない場合がある。また、投与量が０．２ｍｇ以上の場合には、赤血球の沈積（凝集様反応）を引き起こす場合がある。
【００２９】
したがって、血液量が体重の約８％を占めるヒトに対しては、本発明の赤血球凝集阻害剤は、１日あたり１６０ｍｇ／ｋｇ体重以上（より好ましくは４００ｍｇ／ｋｇ体重以上）投与することが好ましく、１６ｇ／ｋｇ体重未満（より好ましくは１２ｇ／ｋｇ体重以下、さらに好ましくは８ｇ／ｋｇ体重以下）投与することが好ましい。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例に基づいて本発明を詳細に述べる。ただし、下記実施例は本発明を制限するものではなく、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施をすることは全て本発明の技術的範囲に包含される。なお、実施例において「％」とあるのは、質量％を意味する。
【００３１】
実施例１（水溶性成分の抽出）
乾燥した徳島県産のアイの茎部を約１ｃｍ以下に粉砕して得た試料２０ｇを、還流管を付けたフラスコ中、１０００ｇの水性溶剤（精製水）に浸漬し、水温が１００℃になるまで加熱して、その状態を３０分維持した。その後、ステンレス製の篩を用いて試料（固形分）をろ別し、ろ液を滅菌フィルターで滅菌して、本発明に係るアイの水溶性成分を０．２０８質量％含有する水溶液を得た。なお、水溶液中の水溶性成分濃度は、水溶液を９０℃で加熱して水性溶剤を蒸発させて得られた残渣の質量を測定することにより求めた。
【００３２】
製造例１（被験物質の調製）
上記水溶液を被験物質ａとし、この被験物質ａをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１／１０倍希釈して被験物質ｂを調製した。また、被験物質ａあるいはｂから、２倍段階希釈法にて各被験物質の希釈系列を作製した。
【００３３】
なお、上記リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の組成は以下の通りである。
８．０ｇ／Ｌ 塩化ナトリウム
０．２ｇ／Ｌ 塩化カリウム
２．８７ｇ／Ｌ リン酸水素二ナトリウム１２水和物
０．２ｇ／Ｌ リン酸二水素カリウム
【００３４】
製造例２（０．５％血液の調製）
ニワトリ保存血液（株式会社日本バイオテスト研究所製、品番００５０４２０、保存液（アルセバー氏液）とニワトリ血液を１：１で混合して調製）を５０％血液とした。この５０％血液１０ｍＬとＰＢＳ９０ｍＬとを混合して、５％血液を調製した。次いで、この５％血液１０ｍＬとＰＢＳ９０ｍＬとを混合して、０．５％血液を調製した。
【００３５】
製造例３（ウイルス希釈液の調製）
Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ Ａ（ＩＦＶＡ）（株名 ＰＲ／８／３４）を、ＰＢＳで２５．６倍、あるいは１６０倍に希釈して、ウイルス希釈液１および２を作製した。
【００３６】
試験例１（赤血球凝集阻害試験）
各濃度の被験物質の希釈液５０μＬと、５０μＬのウイルス希釈液１あるいは２とを混合し、室温（２３℃±２℃）にて１時間定温放置した後、さらに０．５％血液１００μＬを加え、室温にてさらに１時間定温放置した。定温放置後、赤血球の凝集の有無を目視で観察した。その結果を表１に示す。
【００３７】
なお、凝集の有無は、赤血球凝集の確認できた場合を「＋」、不完全な赤血球凝集を認めた場合を「±」、赤血球の凝集を確認できなかった場合を「−」と評価した。また、不均等に赤血球が沈積した場合を「＊」と評価した。
【００３８】
試験例２（陰性対照試験１）
被験物質として被験物質ａまたはｂ（希釈倍率１／１）を用い、ウイルス希釈液に代えてＰＢＳを用いた以外は試験例１と同様にして、赤血球の凝集の有無を観察した。その結果を表１に示す。
【００３９】
試験例３（陰性対照試験２）
上記被験物質の希釈液に代えてＰＢＳを用いた以外は試験例１と同様にして、赤血球の凝集の有無を観察した。その結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
【００４１】
当該結果によれば、本発明にかかるアイの水溶性成分は、赤血球凝集阻害効果があることが分る。また、２５．６倍希釈ウイルス存在下、本発明の赤血球凝集阻害剤がその機能を十分に発揮するためには、血液１μｌに対し水溶性成分を０．０１０４ｍｇ以上投与することが好ましいことが分る。さらに、１６０倍希釈ウイルス存在下、本発明の赤血球凝集阻害剤がその機能を十分に発揮するためには、血液１μｌに対し水溶性成分を０．００２６ｍｇ以上投与することが好ましいことが分る。
【００４２】
被験物質ａ（希釈倍率１／１）を用いた陰性対照試験１において、不均等に赤血球が沈積する赤血球凝集様反応を示したことから、血液１μｌに対し水溶性成分の投与は０．２０８ｍｇ未満にすることが好適であることが分った。
【００４３】
また、かかる被験物質ａを用いた試験例１においても、不均等に赤血球が沈積する赤血球凝集様反応を示した（すなわち、ウイルスの有無に関わらず凝集様反応を示した）ことから、本発明の赤血球凝集阻害剤は、赤血球になんらかの作用を及ぼしているものと推察される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球凝集阻害剤、および赤血球の凝集阻害方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
赤血球は種々の病気（例えば、アレルギー疾患、糖尿病、膠原病、ガン等）の患者の血液中で凝集することが知られている。
【０００３】
赤血球はヘモグロビンを介して各細胞へ酸素を運搬する働きを有しているため、赤血球が凝集すれば、毛細血管の中を赤血球が流れることができなくなって、体内の組織が酸欠状態となったり、免疫力が低下することが予測される。したがって、赤血球の凝集に因って引き起こされる新たな疾患（例えば、組織の酸素不足による壊死など）を防ぐためには、赤血球の凝集を阻害するのが有効であり、これまで、赤血球凝集阻害剤として、２−フェニルベンズイミダゾールのアルキル誘導体が開発されている（特許文献１参照）。しかしながら、当該阻害剤は化学合成品であり、その使用について注意を要する場合があるため、人体に対する安全性の高い赤血球阻害剤が求められていた。
【０００４】
ところで、タデ科のアイは、古くから染料の原料として用いられており、また医薬品としての用途も知られている。例えば、アイの種には解熱作用があると言われている。また、アイの生葉から得られる汁は、毒虫などの刺傷に塗布するなどして用いられている。しかしながら、アイの有効成分に関する報告は様々であり、医薬品としての実用化には至っていない。
【０００５】
本発明者は、これまでに、かかるアイの茎部や根部に含まれる水溶性成分が、強力な抗ウイルス性等の生理作用を有することを発見し、出願している（特許文献２参照）。かかる抗ウイルス剤は、天然物であるアイ由来の成分を主成分とするため、人体に対する安全性は高いものと予想される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】独国特許出願公開第３８３００６０号明細書
【特許文献２】特開２００８−１９２２７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記の様な事情に鑑みてなされたものであり、本発明者は、天然物由来の成分を用いて、人体に安全な赤血球凝集阻害剤を提供することを課題に掲げた。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、上記アイの水溶性成分（天然物由来の成分）が、赤血球の凝集を阻害する作用を有していることを見出し、本発明に至った。すなわち、上記課題を解決することができた本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を含有することを特徴とする。なお、本明細書でいうアイとは、タデ科タデ属のアイ（学名：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍ Ｌｏｕｒ．）を意味する。
【０００９】
本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を利用するものであり、天然物に由来するため、人体に対して安全性の高い阻害剤の提供を可能にする。
【００１０】
本発明の赤血球凝集阻害剤は、１μｌの血液に対し前記水溶性成分を０．００２ｍｇ以上０．２ｍｇ未満投与するためのものであることが好ましい。
【００１１】
また、前記水溶性成分がアイの茎部から得られることが好ましい実施態様である。アイは、染料原料としては通常葉部のみが用いられ、茎部や根部は廃棄されているという現状がある。したがって、本発明の赤血球凝集阻害剤をアイの茎部から得ることによって、染料原料としては廃棄される茎部を有効活用できる。また、茎部から得られる水溶性成分は、染料原料として用いられるアイの葉部由来のものよりも強い赤血球凝集阻害効果を示すものと期待される。
【００１２】
本発明には、前記赤血球凝集阻害剤を投与することを特徴とする赤血球の凝集阻害方法も包含される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係るアイの水溶性成分は、赤血球の凝集を阻害できる。このため、赤血球の凝集に起因する種々の疾病の治療に貢献するものと期待される。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を含有することを特徴とする。以下、本発明の赤血球凝集阻害剤について詳細に説明する。
【００１５】
（アイ）
本発明で用いるアイは、タデ科タデ属のアイであればよく、天然に自生するものであっても、人工栽培されているものであってもよい。また、アイの状態も特に限定されず、例えば、刈り取り直後の水分を含んだもの、凍結したもの、乾燥したもの、乾燥物を発酵させたもの等が挙げられる。これらは単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。なお、本発明では、保存や運搬が容易な点から、アイの乾燥物を用いることが好ましい。
【００１６】
本発明では、アイの根部、茎部、葉部のいずれの部位を用いてもよいが、茎部を用いることが好ましい。本発明者は、アイの水溶性成分のうちアイの茎部から得られる水溶性成分が、根部や葉部の部分から得られる水溶性成分よりも高い生理活性を示すことを見出している。また、茎部を使用することにより、染料原料として使用されるアイの葉を除いた後の廃棄物（茎部など）を有効活用できるため、本発明の赤血球凝集阻害剤を安価で供給することが可能になる。
【００１７】
本発明では、アイを破砕、粉砕等して用いてもよい。これにより、アイから水溶性成分を効率よく抽出することができる。
【００１８】
（水溶性成分）
本発明の水溶性成分は、上記アイから水性溶剤により抽出される抽出物である。この水溶性成分の具体的詳細については現在同定中であり不明であるが、本発明者は、液体クロマトグラフィーによる分析によって、多種の成分が含まれていることを確認している。
【００１９】
水溶性成分をアイから抽出する方法は特に限定されるものではない。例えば、アイを水性溶剤に浸漬した後、必要に応じて撹拌処理、加熱処理、加圧処理、超音波処理などから選択される少なくとも１種の処理を施して、アイに含まれる水溶性成分を溶剤中に溶出させて行う方法が挙げられる。本発明において加熱処理を行う場合には、液温が６０℃以上（より好ましくは７０℃以上、さらに好ましくは８０℃以上）となるように加熱するのが好ましい。液温を６０℃以上にすることにより、アイに含まれる水溶性成分を効率よく溶剤中に溶出させることができる。なお、液温の上限については特に限定されるものではなく、溶剤の沸点まで加熱してもよい。また、加熱時間は５分以上（より好ましくは１５分以上、さらに好ましくは２５分以上）であることが好ましく、２４時間以下（より好ましくは６０分以下、さらに好ましくは５０分以下）であることが好ましい。上記時間内の加熱によって、アイに含まれる水溶性成分を効果的に溶剤中に抽出することができる。
【００２０】
水溶性成分の抽出に用いる水性溶剤としては、例えば、水道水、純水、イオン交換水などの水；メタノール、エタノールなどのアルコール類と上記水との混合溶剤；アセトンなどのケトン類と上記水との混合溶剤などが挙げられる。アルコール類やケトン類の水に対する混合率は５０質量％以下（より好ましくは４０質量％以下、さらに好ましくは３０質量％以下）とすることが好ましい。これらの溶剤は単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。本発明の赤血球凝集阻害剤は人体に投与して用いるため、安全性の観点から、溶剤として水や、エタノールと水との混合溶剤を用いることが好ましく、水のみを用いることがより好ましい。また、水性溶剤は、ｐＨを適宜調整してもよい。通常、ｐＨは２〜１３の範囲であることが好ましく、５〜８の範囲であることがさらに好ましい。
【００２１】
水溶性成分の抽出に用いる溶剤量は特に限定されるものではなく、効果および効率を考慮すると、アイの乾燥物１ｇに対して溶剤１０ｇ以上（より好ましくは２０ｇ以上、さらに好ましくは４０ｇ以上）が好ましく、１０００ｇ以下（より好ましくは１００ｇ以下、さらに好ましくは４０ｇ以下）が好ましい。
【００２２】
本発明の水溶性成分は、上記抽出操作を経て得られた水溶性成分含有溶液から、ろ過、遠心分離、デカンテーションなどによって、固形分（水溶性成分抽出後のアイの残渣など）を分離することによって得ることが好ましい。
【００２３】
本発明では、上記水溶性成分の調製の際に、変色や異臭の発生や、あるいは微生物の増殖を抑制するために、抗酸化剤、抗菌剤、ｐＨ調整剤などを添加してもよい。これらの成分の添加時期や添加量は、本発明の効果を妨げない限り特に制限されない。
【００２４】
本発明では、上記操作によって得られた水溶性成分（水溶性成分含有溶液）を、そのまま赤血球凝集阻害剤として使用してもよい。また、安全性を高めたり、有効成分含有量を高めるために、水溶性成分含有溶液に精製処理を施してもよい。精製処理としては、例えば、透析、液体クロマトグラフィーなどが挙げられる。
【００２５】
さらに、本発明では、水溶性成分含有溶液に濃縮、乾燥などの処理を施したり、かかる濃縮等によって得られた水溶性成分を粉状、顆粒状、ペースト状などにしてもよい。これにより、水溶性成分の取り扱いが容易になる。乾燥や濃縮する方法としては、例えば、真空乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥、限外ろ過濃縮などが挙げられる。これらの方法は単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２６】
（赤血球凝集阻害剤）
上述の通り、本発明の赤血球凝集阻害剤は、アイの水溶性成分を主成分とするものであり天然植物に由来するため、人体に対する安全性が高い。
【００２７】
（赤血球の凝集阻害方法）
本発明では、上記赤血球凝集阻害剤を、食品や医薬品、医薬部外品などとして、例えば、経口投与や非経口投与などによって、赤血球の凝集を阻害してもよい。経口投与は、上記水溶性成分含有溶液やその希釈液、乾燥物、濃縮物（粉末、顆粒、ペースト等）をそのまま、あるいは他の食品に添加して食することによって行うことができる。また、非経口投与は、上記抽出液を静脈内投与や皮下投与したり、上記水溶性成分を含む軟膏やクリームを患部に塗布することによって行うことができる。あるいは、上記水溶性成分含有溶液やその希釈液を空中に散布したり、マスクに含浸させて、水溶性成分を吸引することによって、水溶性成分を摂取してもよい。なお、本発明者の研究によって、本発明の赤血球凝集阻害剤は、基本的には人体に安全であることを確認している。
【００２８】
（投与量）
本発明の赤血球凝集阻害剤は、１μｌの血液に対し０．００２ｍｇ以上（より好ましくは０．００５ｍｇ以上）投与することが好ましく、０．２ｍｇ未満（より好ましくは０．１５ｍｇ以下、さらに好ましくは０．１０ｍｇ以下）投与することが好ましい。投与量が０．００２ｍｇ未満の場合には、十分に赤血球の凝集を抑えることができない場合がある。また、投与量が０．２ｍｇ以上の場合には、赤血球の沈積（凝集様反応）を引き起こす場合がある。
【００２９】
したがって、血液量が体重の約８％を占めるヒトに対しては、本発明の赤血球凝集阻害剤は、１日あたり１６０ｍｇ／ｋｇ体重以上（より好ましくは４００ｍｇ／ｋｇ体重以上）投与することが好ましく、１６ｇ／ｋｇ体重未満（より好ましくは１２ｇ／ｋｇ体重以下、さらに好ましくは８ｇ／ｋｇ体重以下）投与することが好ましい。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例に基づいて本発明を詳細に述べる。ただし、下記実施例は本発明を制限するものではなく、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施をすることは全て本発明の技術的範囲に包含される。なお、実施例において「％」とあるのは、質量％を意味する。
【００３１】
実施例１（水溶性成分の抽出）
乾燥した徳島県産のアイの茎部を約１ｃｍ以下に粉砕して得た試料２０ｇを、還流管を付けたフラスコ中、１０００ｇの水性溶剤（精製水）に浸漬し、水温が１００℃になるまで加熱して、その状態を３０分維持した。その後、ステンレス製の篩を用いて試料（固形分）をろ別し、ろ液を滅菌フィルターで滅菌して、本発明に係るアイの水溶性成分を０．２０８質量％含有する水溶液を得た。なお、水溶液中の水溶性成分濃度は、水溶液を９０℃で加熱して水性溶剤を蒸発させて得られた残渣の質量を測定することにより求めた。
【００３２】
製造例１（被験物質の調製）
上記水溶液を被験物質ａとし、この被験物質ａをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１／１０倍希釈して被験物質ｂを調製した。また、被験物質ａあるいはｂから、２倍段階希釈法にて各被験物質の希釈系列を作製した。
【００３３】
なお、上記リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の組成は以下の通りである。
８．０ｇ／Ｌ 塩化ナトリウム
０．２ｇ／Ｌ 塩化カリウム
２．８７ｇ／Ｌ リン酸水素二ナトリウム１２水和物
０．２ｇ／Ｌ リン酸二水素カリウム
【００３４】
製造例２（０．５％血液の調製）
ニワトリ保存血液（株式会社日本バイオテスト研究所製、品番００５０４２０、保存液（アルセバー氏液）とニワトリ血液を１：１で混合して調製）を５０％血液とした。この５０％血液１０ｍＬとＰＢＳ９０ｍＬとを混合して、５％血液を調製した。次いで、この５％血液１０ｍＬとＰＢＳ９０ｍＬとを混合して、０．５％血液を調製した。
【００３５】
製造例３（ウイルス希釈液の調製）
Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ Ａ（ＩＦＶＡ）（株名 ＰＲ／８／３４）を、ＰＢＳで２５．６倍、あるいは１６０倍に希釈して、ウイルス希釈液１および２を作製した。
【００３６】
試験例１（赤血球凝集阻害試験）
各濃度の被験物質の希釈液５０μＬと、５０μＬのウイルス希釈液１あるいは２とを混合し、室温（２３℃±２℃）にて１時間定温放置した後、さらに０．５％血液１００μＬを加え、室温にてさらに１時間定温放置した。定温放置後、赤血球の凝集の有無を目視で観察した。その結果を表１に示す。
【００３７】
なお、凝集の有無は、赤血球凝集の確認できた場合を「＋」、不完全な赤血球凝集を認めた場合を「±」、赤血球の凝集を確認できなかった場合を「−」と評価した。また、不均等に赤血球が沈積した場合を「＊」と評価した。
【００３８】
試験例２（陰性対照試験１）
被験物質として被験物質ａまたはｂ（希釈倍率１／１）を用い、ウイルス希釈液に代えてＰＢＳを用いた以外は試験例１と同様にして、赤血球の凝集の有無を観察した。その結果を表１に示す。
【００３９】
試験例３（陰性対照試験２）
上記被験物質の希釈液に代えてＰＢＳを用いた以外は試験例１と同様にして、赤血球の凝集の有無を観察した。その結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
【００４１】
当該結果によれば、本発明にかかるアイの水溶性成分は、赤血球凝集阻害効果があることが分る。また、２５．６倍希釈ウイルス存在下、本発明の赤血球凝集阻害剤がその機能を十分に発揮するためには、血液１μｌに対し水溶性成分を０．０１０４ｍｇ以上投与することが好ましいことが分る。さらに、１６０倍希釈ウイルス存在下、本発明の赤血球凝集阻害剤がその機能を十分に発揮するためには、血液１μｌに対し水溶性成分を０．００２６ｍｇ以上投与することが好ましいことが分る。
【００４２】
被験物質ａ（希釈倍率１／１）を用いた陰性対照試験１において、不均等に赤血球が沈積する赤血球凝集様反応を示したことから、血液１μｌに対し水溶性成分の投与は０．２０８ｍｇ未満にすることが好適であることが分った。
【００４３】
また、かかる被験物質ａを用いた試験例１においても、不均等に赤血球が沈積する赤血球凝集様反応を示した（すなわち、ウイルスの有無に関わらず凝集様反応を示した）ことから、本発明の赤血球凝集阻害剤は、赤血球になんらかの作用を及ぼしているものと推察される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アイの水溶性成分を含有することを特徴とする赤血球凝集阻害剤。
【請求項２】
１μｌの血液に対し前記水溶性成分を０．００２ｍｇ以上０．２ｍｇ未満投与するためのものである請求項１に記載の赤血球凝集阻害剤。
【請求項３】
前記水溶性成分がアイの茎部から得られる請求項１または２に記載の赤血球凝集阻害剤。
【請求項４】
請求項１から３に記載の赤血球凝集阻害剤を投与することを特徴とする赤血球の凝集阻害方法。
【請求項１】
アイの水溶性成分を含有することを特徴とする赤血球凝集阻害剤。
【請求項２】
１μｌの血液に対し前記水溶性成分を０．００２ｍｇ以上０．２ｍｇ未満投与するためのものである請求項１に記載の赤血球凝集阻害剤。
【請求項３】
前記水溶性成分がアイの茎部から得られる請求項１または２に記載の赤血球凝集阻害剤。
【請求項４】
請求項１から３に記載の赤血球凝集阻害剤を投与することを特徴とする赤血球の凝集阻害方法。
【公開番号】特開２０１１−１２１９３０（Ｐ２０１１−１２１９３０Ａ）
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２８３１８３（Ｐ２００９−２８３１８３）
【出願日】平成２１年１２月１４日（２００９．１２．１４）
【出願人】（５９１０６７０８２）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月１４日（２００９．１２．１４）
【出願人】（５９１０６７０８２）
【Ｆターム（参考）】
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