赤血球含有試料における目的成分の測定方法
【課題】 赤血球含有試料のＨｔ値による影響を抑制して、優れた信頼性で目的成分を測定する測定方法を提供する。
【解決手段】 本発明の測定方法は、まず、測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する。そして、バイオセンサにより、赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得し、前記関係を参照し、前記赤血球含有試料について取得した前記複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める。
【解決手段】 本発明の測定方法は、まず、測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する。そして、バイオセンサにより、赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得し、前記関係を参照し、前記赤血球含有試料について取得した前記複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球含有試料における目的成分の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液中の目的成分を測定するために、バイオセンサを用いて、電気化学的シグナルまたは光学的シグナルを検出する方法が、汎用されている。前記シグナルの大きさまたは強度を示すシグナル値は、前記目的成分の量に対応するため、前記シグナル値の測定によって、血液中の目的成分の量を測定できる。
【０００３】
このような測定において、血液のヘマトクリット値（Ｈｔ値）の影響が問題視されている。血液のＨｔ値は、一般に、３０〜５５％が正常値とされているが、貧血の場合には、前記正常値よりも低い値を示し、多血症の場合には、前記正常値より高い値を示すこともある。このように、血液のＨｔ値は、個々で異なるため、Ｈｔ値が不明である血液試料について前記目的成分の測定を行うと、Ｈｔ値の影響により、目的成分の量を正確に決定できないという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００４／０７９６５２号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第１６４５８７６号明細書
【特許文献３】国際公開第２００７／１２１１１１号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明は、赤血球含有試料のＨｔ値による影響を抑制して、優れた信頼性で目的成分を測定する測定方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の測定方法は、赤血球含有試料中の目的成分を、バイオセンサを用いて測定する測定方法であって、下記（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）工程を含むことを特徴とする。
（Ａ）測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する工程
（Ｂ）前記バイオセンサにより、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程
（Ｃ）前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める工程
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照することによって、前記目的成分の測定に対するＨｔ値の影響を補正し、より正確に前記赤血球含有試料中の目的成分量を測定することが可能である。このため、本発明は、分析または臨床の分野等において、極めて有用といえる。
【０００８】
本発明者らは、赤血球含有試料の目的成分量を、目的成分由来のシグナルに基づいて測定するにあたり、（１）目的成分量が同じであっても、前記試料のＨｔ値に応じて前記シグナルが変動すること、ならびに、（２）シグナルを複数測定すると前記シグナルが変動すること、を見出した。この知見に基づき、本発明者らは、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照することによって、前記赤血球含有試料の目的成分量を、より正確に測定する本発明を完成するに到った。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、本発明の実施例１において、グルコースを含み且つ所定のＨｔ値を示す標準試料について、電圧印加から５秒後の電流と１０秒後の電流との関係を示すグラフである。
【図２】図２は、グルコースを含み且つ所定のＨｔ値を示す標準試料について、電圧印加から５秒後の電流とグルコース濃度との関係を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明の実施例２において、二次多項式に基づいた、１０秒後の電流（Ａ１０）と５秒後の電流（Ａ５）との関係をプロットしたグラフである。
【図４】図４は、本発明の実施例２において、アルゴリズムにより補正したＨｔ値のエラー（％Ｈｔ）を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明の実施例４において、アルゴリズムにより補正したグルコース濃度と既知グルコース濃度との関係を示すグラフである。
【図６】図６は、従来法のアルゴリズムにより算出したグルコース濃度と既知グルコース濃度との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の測定方法は、前述のように、赤血球含有試料中の目的成分を、バイオセンサを用いて測定する測定方法であって、下記（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）工程を含むことを特徴とする。
（Ａ）測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する工程
（Ｂ）前記バイオセンサにより、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程
（Ｃ）前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める工程
【００１１】
本発明の測定方法において、「シグナルを取得する」は、例えば、「シグナルを測定する」ということもできる。また、「シグナル」を取得または測定するとは、例えば、シグナルの大きさまたは強さ等を表す「シグナル値」を取得または測定することを意味する。また、シグナルの変動は、例えば、シグナル値の変動を意味する。
【００１２】
本発明の測定方法は、前記（Ａ）工程において、測定に先立ち、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供してもよい。
【００１３】
本発明の測定方法において、前記複数のシグナルは、例えば、複数の時点で取得したシグナルでもよいし、複数の検出部位で取得したシグナルでもよい。以下に、本発明の測定方法として、前記複数のシグナルが複数の時点で取得したシグナルである第１の測定方法、および、前記複数のシグナルが複数の検出部位で取得したシグナルである第２および第３の測定方法について、それぞれ説明する。本発明は、これらの形態に制限されない。
【００１４】
（第１の測定方法）
本発明の第１の測定方法は、前述のように、前記複数のシグナルとして、複数の時点で取得したシグナルを使用して、赤血球含有試料の目的成分を測定する方法である。
【００１５】
本発明の第１の測定方法は、前述のように、前記（１）目的成分量が同じであっても、前記試料のＨｔ値に応じて前記シグナルが変動する、前記（２）シグナルを複数測定すると、前記シグナルが変動するとの発明者らによる知見に基づき、完成されるに到った。前記（１）は、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、前記シグナルは、Ｈｔ値が相対的に高値であるほど減少し、Ｈｔ値が相対的に低値であるほど増加するという知見である。また、前記（２）は、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、経時的にシグナルを検出すると、前記シグナルは、検出する時点が相対的に遅いほど減少するという知見である。
【００１６】
本発明によれば、複数の時点で取得したシグナルから、例えば、赤血球含有試料のＨｔ値を換算できる。これによってＨｔ値の影響を補正して、前記試料の目的成分を測定できる。また、本発明によれば、例えば、前記試料のＨｔ値を換算することなく、Ｈｔ値の影響を補正して、前記試料の目的成分を測定することもできる。
【００１７】
本発明は、前記（Ａ）工程において、測定に先立ち、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供することが好ましい。また、前記（Ａ）工程において、前記関係は、例えば、前記目的成分の量に応じた複数のシグナルと、Ｈｔ値との関係であってもよい。
【００１８】
前記複数の時点で取得したシグナルは、例えば、経時的に複数回取得したシグナルを意味する。前記時点の数、すなわち、シグナル取得の回数は、複数時点であればよく、特に制限されず、例えば、２時点以上であり、好ましくは２〜４時点、より好ましくは２〜３時点、さらに好ましくは２時点である。
【００１９】
前記複数のシグナルは、例えば、同じ検出部位から取得したシグナルであることが好ましい。
【００２０】
前記シグナルを取得する時間の間隔は、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数のシグナルは、例えば、１〜２０秒の間隔で取得したシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒であり、さらに好ましくは４〜５秒である。
【００２１】
前記複数のシグナルについて、シグナルの取得開始時間と、シグナルの取得終了時間とは、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。前記複数のシグナルのうち、最初に取得するシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。また、前記複数のシグナルのうち、最後に取得するシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、５〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは５〜６秒の間に発生するシグナルである。
【００２２】
本発明の第１の測定方法において、前記シグナルを取得するタイミングは、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数のシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１０秒以降に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは６秒以降に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４秒以降に発生するシグナルである。また、前記複数のシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒までに発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは１０秒までに発生するシグナルであり、さらに好ましくは５秒までに発生するシグナルである。また、前記シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１０〜１５秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは６〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。
【００２３】
本発明の第１の測定方法において、前記シグナルは、例えば、電気化学的測定により検出可能なシグナル（以下、「電気シグナル」ともいう）でもよい。この場合、前記電気シグナルは、例えば、前記バイオセンサの検出部位である作用極から検出可能なシグナルであることが好ましい。
【００２４】
前記電気シグナルの種類は、特に制限されず、例えば、電流、電流から変換された電圧、および、これらに応じたデジタル信号等でもよい。これらの電気シグナルは、例えば、公知の方法によって相互に変換できる。具体例として、前記電気化学的測定により電流を測定した場合、前記電流は、例えば、電流／電圧変換器等によって電圧に変換でき、また、アナログ信号である電圧は、例えば、Ａ／Ｄ（アナログ／デジタル）変換器によってデジタル信号に変換できる。
【００２５】
前記電気シグナルを取得する時間の間隔は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、電気シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の電気シグナルは、例えば、１〜１０秒の間隔で取得した電気シグナルであることが好ましく、より好ましくは１〜５秒であり、さらに好ましくは１〜２秒である。
【００２６】
前記複数の電気シグナルについて、取得開始時間と取得終了時間とは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、電気シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。前記複数の電気シグナルのうち、最初に取得する電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。また、前記複数の電気シグナルのうち、最後に取得する電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、５〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは５〜６秒の間に発生するシグナルである。
【００２７】
前記電気シグナルを取得するタイミングは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、電気シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、１０秒以降に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５秒以降に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４秒以降に発生するシグナルである。また、前記複数の電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、２０秒までに発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは１０秒までに発生するシグナルであり、さらに好ましくは５秒までに発生するシグナルである。また、前記電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。
【００２８】
また、本発明の第１の測定方法において、前記シグナルは、例えば、光学的測定により検出可能なシグナル（以下、「光学シグナル」ともいう）でもよい。前記光学シグナルの種類は、特に制限されず、例えば、吸光度、反射率、透過率、および、これらに応じたデジタル信号等でもよい。これらの光学シグナルは、例えば、公知の方法によって、相互に変換できる。
【００２９】
前記光学シグナルは、例えば、検出器により検出できる。前記検出器は、例えば、前記バイオセンサ内に配置されてもよいし、前記バイオセンサ外に配置されてもよい。後者の場合、例えば、光学シグナルの検出前から、予め、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよいし、検出時に、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよい。
【００３０】
前記光学シグナルを取得する時間の間隔は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、光学シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の光学シグナルは、例えば、１〜２０秒の間隔で取得した光学シグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒であり、さらに好ましくは４〜５秒である。
【００３１】
前記複数の光学シグナルについて、取得開始時間と取得終了時間とは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、光学シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。前記光学シグナルのうち、最初に取得する光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。また、前記複数の光学シグナルのうち、最後に取得する光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、５〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは５〜６秒の間に発生するシグナルである。シグナル発生が可能となった時点は、例えば、光学シグナルを発生させるための反応開始時があげられる。
【００３２】
前記光学シグナルを取得するタイミングは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、光学シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１０秒以降に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは６秒以降に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４秒以降に発生するシグナルである。また、前記複数の光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒までに発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは１０秒までに発生するシグナルであり、さらに好ましくは５秒までに発生するシグナルである。また、前記光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。
【００３３】
本発明の第１の測定方法において、前記シグナルは、例えば、前記目的成分との酸化還元反応に基づくシグナルがあげられる。前記酸化還元反応の種類は、例えば、目的成分の種類に応じて適宜決定できる。
【００３４】
前記酸化還元反応は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類に応じて、必要な試薬を用いた酸化還元反応があげられる。具体例として、前記酸化還元反応は、酸化反応および還元反応の少なくとも一方を触媒する酵素と、メディエータまたは発色基質とを用いた反応があげられる。前記シグナルが電気シグナルの場合、前記メディエータは、例えば、電子伝達物質が使用でき、具体例として、ルテニウム錯体、鉄錯体、他の有機金属錯体、有機金属錯体ポリマー、導電性イオン塩、ベンゾキノン等の有機メディエータ化合物等があげられる。前記酵素は、例えば、目的成分の種類に応じて適宜決定できるが、例えば、酸化酵素、還元酵素、酸化還元酵素等があげられる。また、前記シグナルが光学シグナルの場合、前記発色基質は、酸化または還元により発色する発色基質、酸化または還元により蛍光を発する蛍光基質等があげられる。前記酵素と、前記メディエータまたは発色基質とは、例えば、バイオセンサにおいて、試料の供給部または試料の移動部等に、固定化されていることが好ましい。
【００３５】
本発明の第１の測定方法において、前記（Ａ）工程は、前述のように、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係（以下、「特定の関係」ともいう）を提供する工程である。この特定の関係を参照することで、前記目的成分の測定に対するＨｔ値の影響を補正でき、より正確に、前記赤血球含有試料中の目的成分量を測定することが可能となる。この特定の関係を設定する方法は、特に制限されない。例えば、前記特定の関係は、目的成分濃度が既知である標準試料について、複数のシグナルを取得することによって、設定できる。また、前記既知濃度の標準試料は、異なるＨｔ値の複数の標準試料であることが好ましい。
【００３６】
前記標準試料についての複数のシグナルは、特に制限されず、例えば、以下のようにして取得できる。
【００３７】
まず、Ｈｔ値が異なる複数の標準試料を準備する。前記標準試料の種類は、特に制限されず、例えば、２種類以上であり、好ましくは３種類以上、より好ましくは５種類以上であり、特に好ましくは１０種類以上である。例えば、前記標準試料の種類が相対的に多い程、より信頼性に優れた測定が可能となることから、前記種類の上限は、特に制限されない。前記標準試料のＨｔ値は、特に制限されず、前述のように、例えば、異なるＨｔ値であればよく、その値は、既知でもよいし、未知でもよい。前記標準試料のＨｔ値は、例えば、正常値と異常値とを含む範囲であることが好ましい。Ｈｔ値は、一般に、正常値が約３０〜５５％であり、異常値の上限が、約７０％であり、異常値の下限が、約１０％である。したがって、前記標準試料のＨｔ値は、例えば、１０〜７０％の範囲内であることが好ましい。前記複数の標準試料として、特に、上限付近のＨｔ値の標準試料、下限付近のＨｔ値の標準試料および正常値のＨｔ値の標準試料を少なくとも含むことが好ましい。
【００３８】
つぎに、前記各標準試料のそれぞれについて、目的成分濃度を変化させた目的成分濃度系列を準備する。前記目的成分濃度は、例えば、前記標準試料ごとに異なってもよいが、同じであることが好ましい。前記標準試料における前記目的成分濃度系列の種類、つまり、目的成分濃度のバリエーションは、特に制限されず、例えば、２段階以上であり、好ましくは３段階以上、より好ましくは５段階以上であり、特に好ましくは１０段階以上である。前記目的成分濃度系列の種類が相対的に多い程、より信頼性に優れた測定が可能となることから、例えば、前記種類の上限は、制限されない。前記目的成分濃度系列における濃度は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件、シグナルの取得方法等によって、適宜決定できる。前記濃度は、例えば、目的成分の種類に応じて、正常値と異常値とを含む範囲に設定することが好ましく、この範囲において、上限付近の濃度、下限付近の濃度および正常値の濃度を、少なくとも含むことが好ましい。目的成分として、グルコースを一例にあげる。前記グルコースは、一般に、正常値が約８０〜１４０ｍｇ／ｄＬであり、上限が、約６００ｍｇ／ｄＬであり、下限が、約２０ｍｇ／ｄＬである。したがって、グルコース濃度系列は、例えば、２０〜６００ｍｇ／ｄＬの範囲内で設定することが好ましい。なお、グルコースは、一例であって、本発明における目的成分は、これには何ら制限されない。
【００３９】
そして、各標準試料の目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得する。複数のシグナルの取得は、各標準試料間で、同じ条件および方法で行うことが好ましく、また、後述する（Ｂ）工程における、前記赤血球含有試料のシグナルの取得と、同じ条件および方法で行うことが好ましい。
【００４０】
このようにして得られた複数数のシグナルと、前記標準試料の目的成分の濃度とから、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を導くことができる。この特定の関係は、Ｈｔ値によるシグナルの変動、複数の時点で測定した際のシグナルの変動（経時的なシグナル値変動）、および、目的成分の量に応じた複数のシグナルの変動を表している。このため、前記関係に基づけば、赤血球含有試料について測定した複数のシグナルから、例えば、Ｈｔ値の影響を考慮した目的成分の濃度を求めることができる。
【００４１】
本発明の第１の測定方法において、前記特定の関係の表し方は、何ら制限されず、例えば、検量線、検量表、回帰式等が応用できる。
【００４２】
前記特定の関係について、回帰式で表わす一例を、以下に示す。前記回帰式は、例えば、下記（Ｘ）工程によって設定した回帰式が使用できる。すなわち、本発明の第１の測定方法は、前記（Ａ）工程において、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係が、下記（Ｘ）工程により求められた回帰式であることが好ましい。
（Ｘ）Ｈｔ値が異なる各標準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求め、
前記各標準試料のうちいずれか一つを、基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択し、
前記選択した基準試料の相関式を基準相関式とし、
前記各標準試料の相関式を、前記基準相関式に収束する回帰式を求める工程
【００４３】
本発明は、一例として、前記（Ｘ）工程により求められた回帰式を使用するのであって、前記回帰式を用いる場合であっても、前記（Ｘ）工程は、本発明の必須工程にはあたらない。
【００４４】
前記（Ｘ）工程の一例を以下に説明するが、本発明はこれには制限されない。前記（Ｘ）工程では、まず、前述と同様にして、Ｈｔ値が異なる各標準試料の目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、得られた複数のシグナルに基づいて、各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求める。前記相関式は、従来公知の手法により求めることができ、例えば、一般的な計算ソフトが使用できる。
【００４５】
他方、前記各標準試料のうちいずれか一つを、基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択する。この基準試料の選択は、任意であり、特に制限されず、例えば、前記標準試料の中で、中間のＨｔ値を示す標準試料、または、正常値のＨｔ値を示す標準試料等を選択できる。
【００４６】
そして、この基準試料の相関式を基準相関式とし、前記各標準試料の相関式を、前記基準試料の相関式に収束する回帰式を求め、この回帰式を前記特定の関係として、後の前記（Ｃ）工程で参照する。前記回帰式は、従来公知の手法により求めることができ、例えば、一般的な計算ソフトが使用できる。
【００４７】
前記特定の関係は、例えば、前記回帰式に制限されず、例えば、検量線、検量表等で表わすことができる。これらも、例えば、前記回帰式と同様に、複数の標準試料の目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得することで、作成できる。
【００４８】
本発明の測定方法において、前記（Ｂ）工程は、前述のように、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程である。前記赤血球含有試料のシグナルの取得は、例えば、前述した前記標準試料のシグナルの取得と、同じ条件および方法で行うことが好ましい。
【００４９】
本発明の測定方法において、前記（Ｃ）工程は、前述のように、前記（Ａ）工程の前記特定の関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分量を求める工程である。前記特定の関係は、前述のように、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係である。
【００５０】
前記特定の関係を参照することで、例えば、以下のようにして、前記赤血球含有試料のＨｔ値を考慮した目的成分量を求めることができる。この特定の関係は、前述のように、Ｈｔ値によるシグナルの変動、複数の時点で測定した際のシグナルの変動（経時的なシグナルの変動）、および、目的成分の量に応じた複数のシグナルの変動を表している。このため、前記特定の関係を参照すれば、例えば、前記赤血球含有試料のＨｔ値が不明であっても、測定した前記試料の複数のシグナルから、Ｈｔ値によるシグナルの変動を考慮した上で、前記目的成分の量を求めることができる。
【００５１】
また、前記（Ｃ）工程においては、例えば、前記特定の関係として、前記（Ａ）工程で例示した前記回帰式を参照することもできる。前記回帰式は、前述のように、前記各標準試料の相関式を前記基準試料の相関式（基準相関式）に収束する回帰式である。この場合、例えば、以下のようにして、前記試料中の目的成分量を求めることができる。すなわち、例えば、測定した前記試料の複数のシグナルが、基準相関式に当てはまらない場合でも、前記回帰式に基づけば、前記複数のシグナルを、前記基準試料の相関式に当てはまるシグナルに補正できる。つまり、Ｈｔ値によるシグナルの変動を考慮して、シグナルを補正できる。このため、前記補正後の複数のシグナルを、前記基準試料の複数のシグナルと仮定することで、前記基準試料についての複数のシグナルと前記目的成分の量との関係から、目的成分の量を求めることができる。
【００５２】
また、前記（Ｃ）工程においては、下記検量式を使用することもできる。すなわち、本発明の第１の測定方法は、前記（Ｃ）工程において、前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、補正後の複数のシグナルを求め、下記（Ｙ）工程により求められた検量式を参照し、前記補正後の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求めることもできる。
（Ｙ）前記基準Ｈｔ値を示す基準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記複数のシグナルと、前記基準試料における前記目的成分量との相関式を、検量式として求める工程
【００５３】
なお、本発明においては、一例として、下記（Ｙ）工程により求められた検量式を使用するのであって、前記（Ｙ）工程は、本発明の必須工程にはあたらない。
【００５４】
本発明の第１の測定方法は、赤血球量を示すＨｔ値による測定への影響を抑制できることから、前述のように、赤血球含有試料に適用される。前記赤血球含有試料は、例えば、全血試料があげられる。前記全血試料は、例えば、未処理の全血でもよいし、希釈処理した全血でもよいし、溶血処理した全血であってもよい。
【００５５】
本発明の測定方法において、前記目的成分は、何ら制限されず、赤血球含有試料に含まれる成分または含まれると考えられる成分があげられる。前記成分は、例えば、グルコース等の糖、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＨｂＡ１ｃ、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、ＦＴ３、ＦＴ４、ｈＣＧ、ＨＢｓ抗原、ＨＢｃ抗体、ＨＣＶ抗体、ＴＹ抗原、アンチ−ストレプトリシン Ｏ（ＡＳＯ）、ＩＶ型コラーゲン、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ−３）、ＰＩＶＡＫ−ＩＩ、α１マイクログロブリン、β１マイクログロブリン、アミロイドＡ（ＳＡＡ）、エラスターゼ１、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、カンジダ抗原、子宮頸管粘液中顆粒球エラスターゼ、ジゴキシン、シスタチンＣ、第ＸＩＩＩ因子、尿中トランスフェリン、梅毒、ヒアルロン酸、フィブリンモノマー複合体（ＳＦＭＣ）、フォン・ウィルブランド因子（第ＶＩＩＩ因子様抗原）、プロテインＳ、リウマチ因子（ＲＦ）、ＩｇＤ、α１アシドグリコプロテイン（α１ＡＧ）、α１アンチトリプシン（α１ＡＴ）、α２マクログロブリン、アルブミン（Ａｌｂ）、セルロプラスミン（Ｃｐ）、ハプトグロビン（Ｈｐ）、プレアルブミン、レチノール結合蛋白（ＲＢＰ）、β１Ｃ／β１Ａグロブリン（Ｃ３）、β１Ｅグロブリン（Ｃ４）、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、βリポ蛋白（β−ＬＰ）、アポ蛋白Ａ−Ｉ、アポ蛋白Ａ−ＩＩ、アポ蛋白Ｂ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩＩ、アポ蛋白Ｅ、トランスフェリン（Ｔｆ）、尿中アルブミン、プラスミノーゲン（ＰＬＧ）およびリポ蛋白（ａ）（ＬＰ（ａ））、乳酸塩、低密度脂質、高密度脂質、トリグリセリド等があげられる。
【００５６】
本発明の第１の測定方法において、使用する前記バイオセンサは、特に制限されず、従来のバイオセンサが使用できる。前記バイオセンサの種類は、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、すなわち、電気シグナルであるか、光学シグナルであるか等によって、適宜選択できる。以下、電気化学的測定方法に使用するバイオセンサを、電気バイオセンサといい、光学的測定方法に使用するバイオセンサを、光学バイオセンサという。
【００５７】
本発明の第１の測定方法は、複数時点のシグナルを測定できればよいことから、前記バイオセンサは、例えば、少なくとも１つの検出部位を備えていればよい。
【００５８】
前記シグナルが電気シグナルの場合、検出部位として作用極を備える電気バイオセンサを使用することが好ましい。前記電気バイオセンサにおいて、前記作用極の個数は、特に制限されず、少なくとも一個の作用極を備えていればよい。具体的には、前記電気バイオセンサは、作用極と対極とを含む、少なくとも１セットの電極群を備えることが好ましい。そして、シグナルの検出時には、前記電気バイオセンサの前記作用極と前記対極との間に、電圧を印加することによって、前記作用極から電流等のシグナルを測定できる。また、前記バイオセンサは、複数の作用極を有してもよく、例えば、２個以上、好ましくは２個である。この場合、各作用極において、複数の時点でシグナルを取得してもよい。前記複数の作用極は、例えば、異なる作用極があげられる。前記異なる作用極は、例えば、電極の材料が異なるもの、電極にコーティングする目的成分の検出用試薬が異なるもの等があげられる。
【００５９】
前記電気バイオセンサを使用することにより、例えば、前記作用極に連結した検出器により前記シグナルを検出できる。前記検出器は、例えば、前記バイオセンサ内に配置されてもよいし、前記バイオセンサ外に配置されてもよい。後者の場合、例えば、前記光学シグナルの検出前から、予め、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよいし、検出時に、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよい。
【００６０】
前記作用極は、例えば、端子を介して、前記検出器を連結してもよい。前記検出器は、特に制限されず、例えば、電流検出器があげられ、電流／電圧変換器、Ａ／Ｄ変換器および演算器等を含んでもよい。
【００６１】
前記電気バイオセンサは、例えば、試料の添加領域、または、試料の移動領域に、必要に応じて、試薬が配置されていることが好ましい。前記試薬は、例えば、目的成分の種類、シグナルを発生するための酸化還元反応の種類等によって、適宜決定できるが、例えば、前述のようなメディエータおよび酵素等があげられる。
【００６２】
前記シグナルが光学シグナルの場合、例えば、光学バイオセンサが使用できる。前記光学バイオセンサにおいて、前記検出部位は、例えば、試料と試薬との反応領域等があげられる。本発明においては、例えば、前記反応領域において、前記試料と試薬との反応を開始してもよいし、前記試料と試薬とを含む反応液が、前記反応領域に導入されてもよい。前者の場合、例えば、予め前記反応領域に前記試薬が配置されてもよいし、異なる領域に配置された試薬が、前記試料との混合前に、前記反応領域に導入されてもよい。後者の場合、例えば、前記反応領域とは別の領域に、前記試薬が配置されており、前記試料と混合した後、前記反応液が、前記反応領域に導入されてもよい。
【００６３】
（第２の測定方法）
本発明の第２の測定方法は、前述のように、前記複数のシグナルとして、複数の検出部位で取得したシグナルを使用して、赤血球含有試料の目的成分を測定する方法である。なお、本発明の第２の測定方法について、特に示さない限りは、前記本発明の第１の測定方法と同様にして行うことができる。
【００６４】
前記複数の検出部位の個数は、特に制限されず、例えば、２カ所以上であり、好ましくは２〜５カ所、より好ましくは２〜３カ所、さらに好ましくは２カ所である。
【００６５】
本発明の第２の測定方法において、使用する前記バイオセンサは、特に制限されず、前述のように複数の検出部位を備えていればよく、従来のバイオセンサが使用できる。
【００６６】
前記シグナルが電気シグナルの場合、例えば、複数の作用極を有する電気バイオセンサを使用することが好ましく、各作用極から、電気シグナルを測定することが好ましい。前記作用極の個数は、例えば、２個以上であり、好ましくは２〜５個、より好ましくは２〜３個、さらに好ましくは２個である。具体的には、前記電気バイオセンサは、例えば、作用極と対極とを含む電極群を複数、すなわち、前記電極群を２セット以上有することが好ましく、より好ましくは２〜５セット、より好ましくは２〜３セット、さらに好ましくは２セットである。前記バイオセンサにおける対極の個数は、何ら制限されず、１個でもよいし、２個以上であってもよい。例えば、前記各電極群は、それぞれ別個の対極を有してもよいし、１つの電極群における対極が、他の電極群の対極を兼ねてもよい。
【００６７】
前記バイオセンサが複数の作用極を有する場合、前記作用極は、例えば、異なる作用極であることが好ましい。具体的には、前記複数の作用極が、目的成分に対して異なる化学反応を示す電極であることが好ましい。この場合、前記各電極において、前記各化学反応が、ヘマトクリットにより影響を受ける。このため、前記特定の関係として、前記目的成分の量と、それに応じた各電極で取得したシグナルとの関係を提供することによって、ヘマトクリットの影響を補正できる。各電極におけるシグナルの測定は、例えば、同時に行うことが好ましい。異なる化学反応を示す電極は、例えば、電極の材料が異なるもの、電極にコーティングする目的成分の検出用試薬が異なるもの等があげられる。
【００６８】
また、前記シグナルが光学シグナルの場合、例えば、複数の検出部位を有する光学バイオセンサが使用できる。前記光学バイオセンサにおいて、前記検出部位は、例えば、試料と試薬との反応領域等があげられる。
【００６９】
（第３の測定方法）
本発明の第３の測定方法は、複数の検出部位で取得したシグナルを使用して、赤血球含有試料の目的成分を測定する方法であって、前記検出部位は、例えば、試料の移動方向に平行であって、且つ試料の添加部からそれぞれ異なる距離に配置されている。
【００７０】
本発明の第３の測定方法は、前述のように、前記（１）目的成分量が同じであっても、前記試料のＨｔ値に応じて前記シグナルが変動する、前記（２）シグナルを複数測定すると前記シグナルが変動する、との発明者らによる知見に基づき、完成されるに到った。前記（１）は、前述のように、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、前記シグナルは、Ｈｔ値が相対的に高値であるほど減少し、Ｈｔ値が相対的に低値であるほど増加するという知見である。また、前記（２）は、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、前記シグナルは、試料の添加部から相対的に遠い検出部位で検出するほど減少するという知見である。これは、Ｈｔ値によって、試料の拡散速度が遅くなり、その影響がシグナル値に反映されると考えられる。具体的には、例えば、Ｈｔ値が相対的に大きい程、試料の拡散速度が相対的に遅くなるため、シグナルが減少すると考えられる。
【００７１】
本発明においては、前記特定の関係を参照すればよく、例示した態様には制限されない。
【００７２】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００７３】
［実施例１］
静脈血を用いて、所定のＨｔ値（２９％、４１％および５５％（±２％））の標準試料を調製した。以下、これらの試料を、Ｈｔ２９％、Ｈｔ４１％およびＨｔ５５％という。そして、これらの標準試料について、それぞれ、グルコース濃度を所定濃度（５０、１００、１５０、２５０、３５０および５５０ｍｇ／ｄＬ）とした、グルコース濃度系列のサンプルを調製した。
【００７４】
電流測定装置として、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｄｖａｎｃｅ ｍｅｔｅｒｓ（商品名、Ｈｙｐｏｇｕａｒｄ社製、修正されたソフトウェアを有し、電流トランジエントを収集可能な計測器）、および、バイオセンサとして、２ｐｏｔｓ ｏｆ Ｍｅｎａｒｉｎｉ Ｇｌｕｃｏｍｅｎ ＧＭ ｓｔｒｉｐｓ（商品名、アークレイ（株）製）を使用し、使用説明書にしたがって、電流の測定を行った。電流測定は、電圧印加時を０秒として、５秒および１０秒の時点で行った。また、各サンプルについて、それぞれ８回測定を行い、その平均値を求めた。
【００７５】
これらの結果を、図１に示す。図１は、各標準試料のグルコース濃度系列について、電圧印加から５秒の電流（Ａ５）と１０秒の電流（Ａ１０）とをプロットしたグラフである。図１において、ｘ軸は、１０秒の電流（Ａ１０）を示し、ｙ軸は、５秒の電流（Ａ５）を示す。図１において、◇は、Ｈｔ２９％の結果であり、□は、Ｈｔ４１％の結果であり、△は、Ｈｔ５５％の結果である。また、図１において、円に囲まれる各３つのプロットは、左から、グルコース５０ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース１００ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース１５０ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース２５０ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース３５０ｍｇ／ｄＬの結果、およびグルコース５５０ｍｇ／ｄＬの結果を示す。電流は、平均をプロットした。
【００７６】
各サンプルについて、前述のように、２時点の電流測定を行った結果、以下のことが明らかとなった。まず、各グルコース濃度に対して、Ｈｔ５５％の電流値が最も低く、Ｈｔ２９％の電流値が最も高いことから、電流値は、Ｈｔ値の影響を受けて、Ｈｔ値の増加にしたがって低下し、Ｈｔ値の低下にしたがって増加する、という挙動を示すことがわかった。さらに、２時点の電流測定を行った結果、５秒の電流（Ａ５）よりも、１０秒の電流（Ａ１０）が低下したことから、電流値は、Ｈｔ値の影響を受けて、電圧印加から測定までの時間が遅くなるにしたがって、低下する挙動を示すことがわかった。この挙動を示すグラフが、前記図１である。したがって、これらの挙動に基づき、２時点の電流測定の結果から、Ｈｔ値による影響を補正することが可能といえる。
【００７７】
一方、各標準試料のグルコース濃度系列について、グルコース濃度と、５秒の電流（Ａ５）とをプロットしたグラフを図２に示す。図２において、◇は、Ｈｔ２９％についての５秒の電流（Ａ５）の結果であり、□は、Ｈｔ４１％についての５秒の電流（Ａ５）の結果であり、△は、Ｈｔ５５％についての５秒の電流（Ａ５）の結果である。図２において、電流は、平均値をプロットした。
【００７８】
図２に示すように、１時点の電流のみをプロットした場合、例えば、測定電流が８０００ｎＡであると仮定すると、各標準試料について８０００ｎＡのプロットが存在する。このため、前記試料のＨｔ値が不明である限り、Ｈｔ２９％（◇）の結果に基づいて約２５０ｍｇ／ｄＬ、Ｈｔ４１％（□）の結果に基づき約３００ｍｇ／ｄＬ、Ｈｔ５５％（△）の結果に基づき約３９０ｍｇ／ｄＬという、３種類のグルコース濃度が導かれることになる。このため、Ｈｔ値を補正することができず、正確性に乏しい測定結果となってしまう。
【００７９】
［実施例２］
続いて、前記図１の結果から、各標準試料について、５秒の電流（Ａ５）と１０秒の電流（Ａ１０）との相関関係について、二次多項式を求めた。この結果を以下に示す。下記式において、ｙは、５秒の電流（Ａ５）であり、ｘは、１０秒の電流（Ａ１０）である。
Ｈｔ値２９％：ｙ＝−４Ｅ−０５ｘ２＋１．８３３９ｘ−３７２．５６
Ｒ２＝１
Ｈｔ値４１％：ｙ＝９Ｅ−０６ｘ２＋１．３６４７ｘ−４．３３８１
Ｒ２＝１
Ｈｔ値５５％：ｙ＝４Ｅ−０５ｘ２＋１．００８９ｘ＋２２５．１４
Ｒ２＝０．９９９９
【００８０】
そして、これらの各二次多項式の「ｘ」に、下記表に示す１０秒の電流（Ａ１０）０〜１２０００ｎＡを代入し、５秒の電流（Ａ５）を算出した。これらの結果を、下記表および図３にあわせて示す。表１の参照表または図３の参照図により、測定した電流が５秒の電流（Ａ５）および１０秒の電流（Ａ１０）のいずれであっても、ヘマトクリットを換算できる。
【００８１】
【表１】
【００８２】
そして、前記表１に基づいて、Ｈｔエラー、すなわち、算出したＨｔ値と実際のＨｔ値との差を求めた。具体的には、Ｈｔ値が既知である、所定のグルコース濃度（８６ｍｇ／ｄＬ、１６１ｍｇ／ｄＬ、２７９ｍｇ／ｄＬ、３８６ｍｇ／ｄＬ）の試料を準備し、１０秒の電流を測定し、前記表１に基づいて、前記試料のＨｔ値を算出した。そして、算出したＨｔ値について、既知Ｈｔ値との差を求めた。この結果を図４に示す。図４は、各グルコース試料についてのＨｔエラー（％Ｈｔ）を示すグラフである。図４に示すように、グルコース濃度が約８０ｍｇ／ｄＬ〜４００ｍｇ／ｄＬの試料について、Ｈｔエラーが極めて低い値であった。このため、前記表１および図３により、前述のようなグルコース濃度の範囲において、より正確にヘマトクリットを換算できる。
【００８３】
［実施例３］
前記実施例１における測定結果を用いて、Ｈｔ５５％の各グルコース濃度の測定電流値およびＨｔ２１％の各グルコース濃度の測定電流値を、Ｈｔ４１％の対応するグルコース濃度の測定電流値に収束するアルゴリズムを、市販のプログラムＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ（登録商標）を用いて求めた。このアルゴリズムを以下に示す。
【００８４】
１． 中度のＨｔ（４１％）におけるグルコース反応による前記１０秒の電流（Ａ１０）に基づいて、グルコースと電流との２系列を使用した二次多項式を作成する。この多項式は、未補正のグルコース多項式である。
２． 前記１．から、１０秒の電流に基づくグルコース値を算出する。このグルコース値は、未補正のグルコース値である。
３． ５秒の電流および１０秒の電流を用いて、Ｈｔ−電流表（表１）から、Ｈｔ値を補間する。このようにして、Ｈｔを推測する。
４． 前記グルコースについての、低度のＨｔ（２９％）、中度のＨｔ（４１％）および高度のＨｔ（５５％）に適合する二次数多項式、および、未補正のグルコース値（前記２．参照）を用いて、２００ｍｇ／ｄＬの未補正のグルコース値に基づくグルコース値を算出する。このようにして、Ｈｔ２９％、Ｈｔ４１％およびＨｔ５５％に対する、Ｈｔエラーを有するグルコース値（前記Ｈｔエラーグルコース２００値）が得られる（エラーが無い場合、中度の４１％Ｈｔ値では、２００ｍｇ／ｄＬである。）。
５． 前記４．で算出した、３つのＨｔのグルコース２００値を用いて、Ｈｔエラーのあるグルコース２００に対して、Ｈｔの二次多項式を算出する。この多項式は、Ｈｔの補正多項式である。
６． 未補正のグルコース値、前記Ｈｔ推測値および前記Ｈｔの補正多項式を用いて、Ｈｔ４１％に基づく補正グルコース推測値を算出する。この推測値は、最終的な補正グルコース推測値である。
【００８５】
そして、前記実施例１における各標準試料の２時点の電流値から、前記アルゴリズムを用いて、グルコース濃度を算出した。これらの結果を、図５に示す。図５は、前記標準試料における既知グルコース濃度と、アルゴリズムを用いて算出した前記標準試料のグルコース濃度との関係を示すグラフである。図５において、◇は、Ｈｔ２９％の結果であり、□は、Ｈｔ４１％の結果であり、△は、Ｈｔ５５％の結果である。図５に示すように、いずれの標準試料についても、極めて正確なグルコース濃度が算出できたことがわかった。
【００８６】
これに対して、比較例として、電圧印加から１０秒後（１０秒の電流（Ａ１０））の測定結果を用いて、Ｈｔ値を補正せずに、グルコース濃度を算出した。具体的には、図２に示す相関式に基づいて、グルコース濃度を算出した。この結果を図６に示す。図６に示すように、Ｈｔ値によって、電流値が異なるため、Ｈｔ値ごとにグルコース濃度を算出する必要があった。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
以上のように、本発明によれば、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照することによって、前記目的成分の測定に対するＨｔ値の影響を補正し、より正確な前記赤血球含有試料中の目的成分量を測定することが可能である。このため、本発明は、分析または臨床の分野等において、極めて有用であるといえる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球含有試料における目的成分の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液中の目的成分を測定するために、バイオセンサを用いて、電気化学的シグナルまたは光学的シグナルを検出する方法が、汎用されている。前記シグナルの大きさまたは強度を示すシグナル値は、前記目的成分の量に対応するため、前記シグナル値の測定によって、血液中の目的成分の量を測定できる。
【０００３】
このような測定において、血液のヘマトクリット値（Ｈｔ値）の影響が問題視されている。血液のＨｔ値は、一般に、３０〜５５％が正常値とされているが、貧血の場合には、前記正常値よりも低い値を示し、多血症の場合には、前記正常値より高い値を示すこともある。このように、血液のＨｔ値は、個々で異なるため、Ｈｔ値が不明である血液試料について前記目的成分の測定を行うと、Ｈｔ値の影響により、目的成分の量を正確に決定できないという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００４／０７９６５２号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第１６４５８７６号明細書
【特許文献３】国際公開第２００７／１２１１１１号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明は、赤血球含有試料のＨｔ値による影響を抑制して、優れた信頼性で目的成分を測定する測定方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の測定方法は、赤血球含有試料中の目的成分を、バイオセンサを用いて測定する測定方法であって、下記（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）工程を含むことを特徴とする。
（Ａ）測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する工程
（Ｂ）前記バイオセンサにより、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程
（Ｃ）前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める工程
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照することによって、前記目的成分の測定に対するＨｔ値の影響を補正し、より正確に前記赤血球含有試料中の目的成分量を測定することが可能である。このため、本発明は、分析または臨床の分野等において、極めて有用といえる。
【０００８】
本発明者らは、赤血球含有試料の目的成分量を、目的成分由来のシグナルに基づいて測定するにあたり、（１）目的成分量が同じであっても、前記試料のＨｔ値に応じて前記シグナルが変動すること、ならびに、（２）シグナルを複数測定すると前記シグナルが変動すること、を見出した。この知見に基づき、本発明者らは、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照することによって、前記赤血球含有試料の目的成分量を、より正確に測定する本発明を完成するに到った。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、本発明の実施例１において、グルコースを含み且つ所定のＨｔ値を示す標準試料について、電圧印加から５秒後の電流と１０秒後の電流との関係を示すグラフである。
【図２】図２は、グルコースを含み且つ所定のＨｔ値を示す標準試料について、電圧印加から５秒後の電流とグルコース濃度との関係を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明の実施例２において、二次多項式に基づいた、１０秒後の電流（Ａ１０）と５秒後の電流（Ａ５）との関係をプロットしたグラフである。
【図４】図４は、本発明の実施例２において、アルゴリズムにより補正したＨｔ値のエラー（％Ｈｔ）を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明の実施例４において、アルゴリズムにより補正したグルコース濃度と既知グルコース濃度との関係を示すグラフである。
【図６】図６は、従来法のアルゴリズムにより算出したグルコース濃度と既知グルコース濃度との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の測定方法は、前述のように、赤血球含有試料中の目的成分を、バイオセンサを用いて測定する測定方法であって、下記（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）工程を含むことを特徴とする。
（Ａ）測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する工程
（Ｂ）前記バイオセンサにより、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程
（Ｃ）前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める工程
【００１１】
本発明の測定方法において、「シグナルを取得する」は、例えば、「シグナルを測定する」ということもできる。また、「シグナル」を取得または測定するとは、例えば、シグナルの大きさまたは強さ等を表す「シグナル値」を取得または測定することを意味する。また、シグナルの変動は、例えば、シグナル値の変動を意味する。
【００１２】
本発明の測定方法は、前記（Ａ）工程において、測定に先立ち、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供してもよい。
【００１３】
本発明の測定方法において、前記複数のシグナルは、例えば、複数の時点で取得したシグナルでもよいし、複数の検出部位で取得したシグナルでもよい。以下に、本発明の測定方法として、前記複数のシグナルが複数の時点で取得したシグナルである第１の測定方法、および、前記複数のシグナルが複数の検出部位で取得したシグナルである第２および第３の測定方法について、それぞれ説明する。本発明は、これらの形態に制限されない。
【００１４】
（第１の測定方法）
本発明の第１の測定方法は、前述のように、前記複数のシグナルとして、複数の時点で取得したシグナルを使用して、赤血球含有試料の目的成分を測定する方法である。
【００１５】
本発明の第１の測定方法は、前述のように、前記（１）目的成分量が同じであっても、前記試料のＨｔ値に応じて前記シグナルが変動する、前記（２）シグナルを複数測定すると、前記シグナルが変動するとの発明者らによる知見に基づき、完成されるに到った。前記（１）は、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、前記シグナルは、Ｈｔ値が相対的に高値であるほど減少し、Ｈｔ値が相対的に低値であるほど増加するという知見である。また、前記（２）は、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、経時的にシグナルを検出すると、前記シグナルは、検出する時点が相対的に遅いほど減少するという知見である。
【００１６】
本発明によれば、複数の時点で取得したシグナルから、例えば、赤血球含有試料のＨｔ値を換算できる。これによってＨｔ値の影響を補正して、前記試料の目的成分を測定できる。また、本発明によれば、例えば、前記試料のＨｔ値を換算することなく、Ｈｔ値の影響を補正して、前記試料の目的成分を測定することもできる。
【００１７】
本発明は、前記（Ａ）工程において、測定に先立ち、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供することが好ましい。また、前記（Ａ）工程において、前記関係は、例えば、前記目的成分の量に応じた複数のシグナルと、Ｈｔ値との関係であってもよい。
【００１８】
前記複数の時点で取得したシグナルは、例えば、経時的に複数回取得したシグナルを意味する。前記時点の数、すなわち、シグナル取得の回数は、複数時点であればよく、特に制限されず、例えば、２時点以上であり、好ましくは２〜４時点、より好ましくは２〜３時点、さらに好ましくは２時点である。
【００１９】
前記複数のシグナルは、例えば、同じ検出部位から取得したシグナルであることが好ましい。
【００２０】
前記シグナルを取得する時間の間隔は、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数のシグナルは、例えば、１〜２０秒の間隔で取得したシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒であり、さらに好ましくは４〜５秒である。
【００２１】
前記複数のシグナルについて、シグナルの取得開始時間と、シグナルの取得終了時間とは、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。前記複数のシグナルのうち、最初に取得するシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。また、前記複数のシグナルのうち、最後に取得するシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、５〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは５〜６秒の間に発生するシグナルである。
【００２２】
本発明の第１の測定方法において、前記シグナルを取得するタイミングは、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数のシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１０秒以降に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは６秒以降に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４秒以降に発生するシグナルである。また、前記複数のシグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒までに発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは１０秒までに発生するシグナルであり、さらに好ましくは５秒までに発生するシグナルである。また、前記シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１０〜１５秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは６〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。
【００２３】
本発明の第１の測定方法において、前記シグナルは、例えば、電気化学的測定により検出可能なシグナル（以下、「電気シグナル」ともいう）でもよい。この場合、前記電気シグナルは、例えば、前記バイオセンサの検出部位である作用極から検出可能なシグナルであることが好ましい。
【００２４】
前記電気シグナルの種類は、特に制限されず、例えば、電流、電流から変換された電圧、および、これらに応じたデジタル信号等でもよい。これらの電気シグナルは、例えば、公知の方法によって相互に変換できる。具体例として、前記電気化学的測定により電流を測定した場合、前記電流は、例えば、電流／電圧変換器等によって電圧に変換でき、また、アナログ信号である電圧は、例えば、Ａ／Ｄ（アナログ／デジタル）変換器によってデジタル信号に変換できる。
【００２５】
前記電気シグナルを取得する時間の間隔は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、電気シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の電気シグナルは、例えば、１〜１０秒の間隔で取得した電気シグナルであることが好ましく、より好ましくは１〜５秒であり、さらに好ましくは１〜２秒である。
【００２６】
前記複数の電気シグナルについて、取得開始時間と取得終了時間とは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、電気シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。前記複数の電気シグナルのうち、最初に取得する電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。また、前記複数の電気シグナルのうち、最後に取得する電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、５〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは５〜６秒の間に発生するシグナルである。
【００２７】
前記電気シグナルを取得するタイミングは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、電気シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、１０秒以降に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５秒以降に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４秒以降に発生するシグナルである。また、前記複数の電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、２０秒までに発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは１０秒までに発生するシグナルであり、さらに好ましくは５秒までに発生するシグナルである。また、前記電気シグナルは、例えば、電圧印加時を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。
【００２８】
また、本発明の第１の測定方法において、前記シグナルは、例えば、光学的測定により検出可能なシグナル（以下、「光学シグナル」ともいう）でもよい。前記光学シグナルの種類は、特に制限されず、例えば、吸光度、反射率、透過率、および、これらに応じたデジタル信号等でもよい。これらの光学シグナルは、例えば、公知の方法によって、相互に変換できる。
【００２９】
前記光学シグナルは、例えば、検出器により検出できる。前記検出器は、例えば、前記バイオセンサ内に配置されてもよいし、前記バイオセンサ外に配置されてもよい。後者の場合、例えば、光学シグナルの検出前から、予め、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよいし、検出時に、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよい。
【００３０】
前記光学シグナルを取得する時間の間隔は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、光学シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の光学シグナルは、例えば、１〜２０秒の間隔で取得した光学シグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒であり、さらに好ましくは４〜５秒である。
【００３１】
前記複数の光学シグナルについて、取得開始時間と取得終了時間とは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、光学シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。前記光学シグナルのうち、最初に取得する光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。また、前記複数の光学シグナルのうち、最後に取得する光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、５〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは５〜６秒の間に発生するシグナルである。シグナル発生が可能となった時点は、例えば、光学シグナルを発生させるための反応開始時があげられる。
【００３２】
前記光学シグナルを取得するタイミングは、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、光学シグナルを発生するための条件等によって、適宜決定できる。具体例として、前記複数の光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１０秒以降に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは６秒以降に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４秒以降に発生するシグナルである。また、前記複数の光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒までに発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは１０秒までに発生するシグナルであり、さらに好ましくは５秒までに発生するシグナルである。また、前記光学シグナルは、例えば、シグナル発生が可能となった時点を０秒として、１〜２０秒の間に発生するシグナルであることが好ましく、より好ましくは５〜１０秒の間に発生するシグナルであり、さらに好ましくは４〜５秒の間に発生するシグナルである。
【００３３】
本発明の第１の測定方法において、前記シグナルは、例えば、前記目的成分との酸化還元反応に基づくシグナルがあげられる。前記酸化還元反応の種類は、例えば、目的成分の種類に応じて適宜決定できる。
【００３４】
前記酸化還元反応は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類に応じて、必要な試薬を用いた酸化還元反応があげられる。具体例として、前記酸化還元反応は、酸化反応および還元反応の少なくとも一方を触媒する酵素と、メディエータまたは発色基質とを用いた反応があげられる。前記シグナルが電気シグナルの場合、前記メディエータは、例えば、電子伝達物質が使用でき、具体例として、ルテニウム錯体、鉄錯体、他の有機金属錯体、有機金属錯体ポリマー、導電性イオン塩、ベンゾキノン等の有機メディエータ化合物等があげられる。前記酵素は、例えば、目的成分の種類に応じて適宜決定できるが、例えば、酸化酵素、還元酵素、酸化還元酵素等があげられる。また、前記シグナルが光学シグナルの場合、前記発色基質は、酸化または還元により発色する発色基質、酸化または還元により蛍光を発する蛍光基質等があげられる。前記酵素と、前記メディエータまたは発色基質とは、例えば、バイオセンサにおいて、試料の供給部または試料の移動部等に、固定化されていることが好ましい。
【００３５】
本発明の第１の測定方法において、前記（Ａ）工程は、前述のように、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係（以下、「特定の関係」ともいう）を提供する工程である。この特定の関係を参照することで、前記目的成分の測定に対するＨｔ値の影響を補正でき、より正確に、前記赤血球含有試料中の目的成分量を測定することが可能となる。この特定の関係を設定する方法は、特に制限されない。例えば、前記特定の関係は、目的成分濃度が既知である標準試料について、複数のシグナルを取得することによって、設定できる。また、前記既知濃度の標準試料は、異なるＨｔ値の複数の標準試料であることが好ましい。
【００３６】
前記標準試料についての複数のシグナルは、特に制限されず、例えば、以下のようにして取得できる。
【００３７】
まず、Ｈｔ値が異なる複数の標準試料を準備する。前記標準試料の種類は、特に制限されず、例えば、２種類以上であり、好ましくは３種類以上、より好ましくは５種類以上であり、特に好ましくは１０種類以上である。例えば、前記標準試料の種類が相対的に多い程、より信頼性に優れた測定が可能となることから、前記種類の上限は、特に制限されない。前記標準試料のＨｔ値は、特に制限されず、前述のように、例えば、異なるＨｔ値であればよく、その値は、既知でもよいし、未知でもよい。前記標準試料のＨｔ値は、例えば、正常値と異常値とを含む範囲であることが好ましい。Ｈｔ値は、一般に、正常値が約３０〜５５％であり、異常値の上限が、約７０％であり、異常値の下限が、約１０％である。したがって、前記標準試料のＨｔ値は、例えば、１０〜７０％の範囲内であることが好ましい。前記複数の標準試料として、特に、上限付近のＨｔ値の標準試料、下限付近のＨｔ値の標準試料および正常値のＨｔ値の標準試料を少なくとも含むことが好ましい。
【００３８】
つぎに、前記各標準試料のそれぞれについて、目的成分濃度を変化させた目的成分濃度系列を準備する。前記目的成分濃度は、例えば、前記標準試料ごとに異なってもよいが、同じであることが好ましい。前記標準試料における前記目的成分濃度系列の種類、つまり、目的成分濃度のバリエーションは、特に制限されず、例えば、２段階以上であり、好ましくは３段階以上、より好ましくは５段階以上であり、特に好ましくは１０段階以上である。前記目的成分濃度系列の種類が相対的に多い程、より信頼性に優れた測定が可能となることから、例えば、前記種類の上限は、制限されない。前記目的成分濃度系列における濃度は、特に制限されず、例えば、目的成分の種類、シグナルを発生するための条件、シグナルの取得方法等によって、適宜決定できる。前記濃度は、例えば、目的成分の種類に応じて、正常値と異常値とを含む範囲に設定することが好ましく、この範囲において、上限付近の濃度、下限付近の濃度および正常値の濃度を、少なくとも含むことが好ましい。目的成分として、グルコースを一例にあげる。前記グルコースは、一般に、正常値が約８０〜１４０ｍｇ／ｄＬであり、上限が、約６００ｍｇ／ｄＬであり、下限が、約２０ｍｇ／ｄＬである。したがって、グルコース濃度系列は、例えば、２０〜６００ｍｇ／ｄＬの範囲内で設定することが好ましい。なお、グルコースは、一例であって、本発明における目的成分は、これには何ら制限されない。
【００３９】
そして、各標準試料の目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得する。複数のシグナルの取得は、各標準試料間で、同じ条件および方法で行うことが好ましく、また、後述する（Ｂ）工程における、前記赤血球含有試料のシグナルの取得と、同じ条件および方法で行うことが好ましい。
【００４０】
このようにして得られた複数数のシグナルと、前記標準試料の目的成分の濃度とから、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を導くことができる。この特定の関係は、Ｈｔ値によるシグナルの変動、複数の時点で測定した際のシグナルの変動（経時的なシグナル値変動）、および、目的成分の量に応じた複数のシグナルの変動を表している。このため、前記関係に基づけば、赤血球含有試料について測定した複数のシグナルから、例えば、Ｈｔ値の影響を考慮した目的成分の濃度を求めることができる。
【００４１】
本発明の第１の測定方法において、前記特定の関係の表し方は、何ら制限されず、例えば、検量線、検量表、回帰式等が応用できる。
【００４２】
前記特定の関係について、回帰式で表わす一例を、以下に示す。前記回帰式は、例えば、下記（Ｘ）工程によって設定した回帰式が使用できる。すなわち、本発明の第１の測定方法は、前記（Ａ）工程において、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係が、下記（Ｘ）工程により求められた回帰式であることが好ましい。
（Ｘ）Ｈｔ値が異なる各標準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求め、
前記各標準試料のうちいずれか一つを、基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択し、
前記選択した基準試料の相関式を基準相関式とし、
前記各標準試料の相関式を、前記基準相関式に収束する回帰式を求める工程
【００４３】
本発明は、一例として、前記（Ｘ）工程により求められた回帰式を使用するのであって、前記回帰式を用いる場合であっても、前記（Ｘ）工程は、本発明の必須工程にはあたらない。
【００４４】
前記（Ｘ）工程の一例を以下に説明するが、本発明はこれには制限されない。前記（Ｘ）工程では、まず、前述と同様にして、Ｈｔ値が異なる各標準試料の目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、得られた複数のシグナルに基づいて、各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求める。前記相関式は、従来公知の手法により求めることができ、例えば、一般的な計算ソフトが使用できる。
【００４５】
他方、前記各標準試料のうちいずれか一つを、基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択する。この基準試料の選択は、任意であり、特に制限されず、例えば、前記標準試料の中で、中間のＨｔ値を示す標準試料、または、正常値のＨｔ値を示す標準試料等を選択できる。
【００４６】
そして、この基準試料の相関式を基準相関式とし、前記各標準試料の相関式を、前記基準試料の相関式に収束する回帰式を求め、この回帰式を前記特定の関係として、後の前記（Ｃ）工程で参照する。前記回帰式は、従来公知の手法により求めることができ、例えば、一般的な計算ソフトが使用できる。
【００４７】
前記特定の関係は、例えば、前記回帰式に制限されず、例えば、検量線、検量表等で表わすことができる。これらも、例えば、前記回帰式と同様に、複数の標準試料の目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得することで、作成できる。
【００４８】
本発明の測定方法において、前記（Ｂ）工程は、前述のように、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程である。前記赤血球含有試料のシグナルの取得は、例えば、前述した前記標準試料のシグナルの取得と、同じ条件および方法で行うことが好ましい。
【００４９】
本発明の測定方法において、前記（Ｃ）工程は、前述のように、前記（Ａ）工程の前記特定の関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分量を求める工程である。前記特定の関係は、前述のように、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係である。
【００５０】
前記特定の関係を参照することで、例えば、以下のようにして、前記赤血球含有試料のＨｔ値を考慮した目的成分量を求めることができる。この特定の関係は、前述のように、Ｈｔ値によるシグナルの変動、複数の時点で測定した際のシグナルの変動（経時的なシグナルの変動）、および、目的成分の量に応じた複数のシグナルの変動を表している。このため、前記特定の関係を参照すれば、例えば、前記赤血球含有試料のＨｔ値が不明であっても、測定した前記試料の複数のシグナルから、Ｈｔ値によるシグナルの変動を考慮した上で、前記目的成分の量を求めることができる。
【００５１】
また、前記（Ｃ）工程においては、例えば、前記特定の関係として、前記（Ａ）工程で例示した前記回帰式を参照することもできる。前記回帰式は、前述のように、前記各標準試料の相関式を前記基準試料の相関式（基準相関式）に収束する回帰式である。この場合、例えば、以下のようにして、前記試料中の目的成分量を求めることができる。すなわち、例えば、測定した前記試料の複数のシグナルが、基準相関式に当てはまらない場合でも、前記回帰式に基づけば、前記複数のシグナルを、前記基準試料の相関式に当てはまるシグナルに補正できる。つまり、Ｈｔ値によるシグナルの変動を考慮して、シグナルを補正できる。このため、前記補正後の複数のシグナルを、前記基準試料の複数のシグナルと仮定することで、前記基準試料についての複数のシグナルと前記目的成分の量との関係から、目的成分の量を求めることができる。
【００５２】
また、前記（Ｃ）工程においては、下記検量式を使用することもできる。すなわち、本発明の第１の測定方法は、前記（Ｃ）工程において、前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、補正後の複数のシグナルを求め、下記（Ｙ）工程により求められた検量式を参照し、前記補正後の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求めることもできる。
（Ｙ）前記基準Ｈｔ値を示す基準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記複数のシグナルと、前記基準試料における前記目的成分量との相関式を、検量式として求める工程
【００５３】
なお、本発明においては、一例として、下記（Ｙ）工程により求められた検量式を使用するのであって、前記（Ｙ）工程は、本発明の必須工程にはあたらない。
【００５４】
本発明の第１の測定方法は、赤血球量を示すＨｔ値による測定への影響を抑制できることから、前述のように、赤血球含有試料に適用される。前記赤血球含有試料は、例えば、全血試料があげられる。前記全血試料は、例えば、未処理の全血でもよいし、希釈処理した全血でもよいし、溶血処理した全血であってもよい。
【００５５】
本発明の測定方法において、前記目的成分は、何ら制限されず、赤血球含有試料に含まれる成分または含まれると考えられる成分があげられる。前記成分は、例えば、グルコース等の糖、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＨｂＡ１ｃ、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、ＦＴ３、ＦＴ４、ｈＣＧ、ＨＢｓ抗原、ＨＢｃ抗体、ＨＣＶ抗体、ＴＹ抗原、アンチ−ストレプトリシン Ｏ（ＡＳＯ）、ＩＶ型コラーゲン、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ−３）、ＰＩＶＡＫ−ＩＩ、α１マイクログロブリン、β１マイクログロブリン、アミロイドＡ（ＳＡＡ）、エラスターゼ１、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、カンジダ抗原、子宮頸管粘液中顆粒球エラスターゼ、ジゴキシン、シスタチンＣ、第ＸＩＩＩ因子、尿中トランスフェリン、梅毒、ヒアルロン酸、フィブリンモノマー複合体（ＳＦＭＣ）、フォン・ウィルブランド因子（第ＶＩＩＩ因子様抗原）、プロテインＳ、リウマチ因子（ＲＦ）、ＩｇＤ、α１アシドグリコプロテイン（α１ＡＧ）、α１アンチトリプシン（α１ＡＴ）、α２マクログロブリン、アルブミン（Ａｌｂ）、セルロプラスミン（Ｃｐ）、ハプトグロビン（Ｈｐ）、プレアルブミン、レチノール結合蛋白（ＲＢＰ）、β１Ｃ／β１Ａグロブリン（Ｃ３）、β１Ｅグロブリン（Ｃ４）、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、βリポ蛋白（β−ＬＰ）、アポ蛋白Ａ−Ｉ、アポ蛋白Ａ−ＩＩ、アポ蛋白Ｂ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩＩ、アポ蛋白Ｅ、トランスフェリン（Ｔｆ）、尿中アルブミン、プラスミノーゲン（ＰＬＧ）およびリポ蛋白（ａ）（ＬＰ（ａ））、乳酸塩、低密度脂質、高密度脂質、トリグリセリド等があげられる。
【００５６】
本発明の第１の測定方法において、使用する前記バイオセンサは、特に制限されず、従来のバイオセンサが使用できる。前記バイオセンサの種類は、特に制限されず、例えば、シグナルの種類、すなわち、電気シグナルであるか、光学シグナルであるか等によって、適宜選択できる。以下、電気化学的測定方法に使用するバイオセンサを、電気バイオセンサといい、光学的測定方法に使用するバイオセンサを、光学バイオセンサという。
【００５７】
本発明の第１の測定方法は、複数時点のシグナルを測定できればよいことから、前記バイオセンサは、例えば、少なくとも１つの検出部位を備えていればよい。
【００５８】
前記シグナルが電気シグナルの場合、検出部位として作用極を備える電気バイオセンサを使用することが好ましい。前記電気バイオセンサにおいて、前記作用極の個数は、特に制限されず、少なくとも一個の作用極を備えていればよい。具体的には、前記電気バイオセンサは、作用極と対極とを含む、少なくとも１セットの電極群を備えることが好ましい。そして、シグナルの検出時には、前記電気バイオセンサの前記作用極と前記対極との間に、電圧を印加することによって、前記作用極から電流等のシグナルを測定できる。また、前記バイオセンサは、複数の作用極を有してもよく、例えば、２個以上、好ましくは２個である。この場合、各作用極において、複数の時点でシグナルを取得してもよい。前記複数の作用極は、例えば、異なる作用極があげられる。前記異なる作用極は、例えば、電極の材料が異なるもの、電極にコーティングする目的成分の検出用試薬が異なるもの等があげられる。
【００５９】
前記電気バイオセンサを使用することにより、例えば、前記作用極に連結した検出器により前記シグナルを検出できる。前記検出器は、例えば、前記バイオセンサ内に配置されてもよいし、前記バイオセンサ外に配置されてもよい。後者の場合、例えば、前記光学シグナルの検出前から、予め、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよいし、検出時に、前記バイオセンサと前記検出器とを連結させてもよい。
【００６０】
前記作用極は、例えば、端子を介して、前記検出器を連結してもよい。前記検出器は、特に制限されず、例えば、電流検出器があげられ、電流／電圧変換器、Ａ／Ｄ変換器および演算器等を含んでもよい。
【００６１】
前記電気バイオセンサは、例えば、試料の添加領域、または、試料の移動領域に、必要に応じて、試薬が配置されていることが好ましい。前記試薬は、例えば、目的成分の種類、シグナルを発生するための酸化還元反応の種類等によって、適宜決定できるが、例えば、前述のようなメディエータおよび酵素等があげられる。
【００６２】
前記シグナルが光学シグナルの場合、例えば、光学バイオセンサが使用できる。前記光学バイオセンサにおいて、前記検出部位は、例えば、試料と試薬との反応領域等があげられる。本発明においては、例えば、前記反応領域において、前記試料と試薬との反応を開始してもよいし、前記試料と試薬とを含む反応液が、前記反応領域に導入されてもよい。前者の場合、例えば、予め前記反応領域に前記試薬が配置されてもよいし、異なる領域に配置された試薬が、前記試料との混合前に、前記反応領域に導入されてもよい。後者の場合、例えば、前記反応領域とは別の領域に、前記試薬が配置されており、前記試料と混合した後、前記反応液が、前記反応領域に導入されてもよい。
【００６３】
（第２の測定方法）
本発明の第２の測定方法は、前述のように、前記複数のシグナルとして、複数の検出部位で取得したシグナルを使用して、赤血球含有試料の目的成分を測定する方法である。なお、本発明の第２の測定方法について、特に示さない限りは、前記本発明の第１の測定方法と同様にして行うことができる。
【００６４】
前記複数の検出部位の個数は、特に制限されず、例えば、２カ所以上であり、好ましくは２〜５カ所、より好ましくは２〜３カ所、さらに好ましくは２カ所である。
【００６５】
本発明の第２の測定方法において、使用する前記バイオセンサは、特に制限されず、前述のように複数の検出部位を備えていればよく、従来のバイオセンサが使用できる。
【００６６】
前記シグナルが電気シグナルの場合、例えば、複数の作用極を有する電気バイオセンサを使用することが好ましく、各作用極から、電気シグナルを測定することが好ましい。前記作用極の個数は、例えば、２個以上であり、好ましくは２〜５個、より好ましくは２〜３個、さらに好ましくは２個である。具体的には、前記電気バイオセンサは、例えば、作用極と対極とを含む電極群を複数、すなわち、前記電極群を２セット以上有することが好ましく、より好ましくは２〜５セット、より好ましくは２〜３セット、さらに好ましくは２セットである。前記バイオセンサにおける対極の個数は、何ら制限されず、１個でもよいし、２個以上であってもよい。例えば、前記各電極群は、それぞれ別個の対極を有してもよいし、１つの電極群における対極が、他の電極群の対極を兼ねてもよい。
【００６７】
前記バイオセンサが複数の作用極を有する場合、前記作用極は、例えば、異なる作用極であることが好ましい。具体的には、前記複数の作用極が、目的成分に対して異なる化学反応を示す電極であることが好ましい。この場合、前記各電極において、前記各化学反応が、ヘマトクリットにより影響を受ける。このため、前記特定の関係として、前記目的成分の量と、それに応じた各電極で取得したシグナルとの関係を提供することによって、ヘマトクリットの影響を補正できる。各電極におけるシグナルの測定は、例えば、同時に行うことが好ましい。異なる化学反応を示す電極は、例えば、電極の材料が異なるもの、電極にコーティングする目的成分の検出用試薬が異なるもの等があげられる。
【００６８】
また、前記シグナルが光学シグナルの場合、例えば、複数の検出部位を有する光学バイオセンサが使用できる。前記光学バイオセンサにおいて、前記検出部位は、例えば、試料と試薬との反応領域等があげられる。
【００６９】
（第３の測定方法）
本発明の第３の測定方法は、複数の検出部位で取得したシグナルを使用して、赤血球含有試料の目的成分を測定する方法であって、前記検出部位は、例えば、試料の移動方向に平行であって、且つ試料の添加部からそれぞれ異なる距離に配置されている。
【００７０】
本発明の第３の測定方法は、前述のように、前記（１）目的成分量が同じであっても、前記試料のＨｔ値に応じて前記シグナルが変動する、前記（２）シグナルを複数測定すると前記シグナルが変動する、との発明者らによる知見に基づき、完成されるに到った。前記（１）は、前述のように、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、前記シグナルは、Ｈｔ値が相対的に高値であるほど減少し、Ｈｔ値が相対的に低値であるほど増加するという知見である。また、前記（２）は、例えば、前記シグナルが、目的成分量の増加に伴って増加するシグナルの場合、前記シグナルは、試料の添加部から相対的に遠い検出部位で検出するほど減少するという知見である。これは、Ｈｔ値によって、試料の拡散速度が遅くなり、その影響がシグナル値に反映されると考えられる。具体的には、例えば、Ｈｔ値が相対的に大きい程、試料の拡散速度が相対的に遅くなるため、シグナルが減少すると考えられる。
【００７１】
本発明においては、前記特定の関係を参照すればよく、例示した態様には制限されない。
【００７２】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００７３】
［実施例１］
静脈血を用いて、所定のＨｔ値（２９％、４１％および５５％（±２％））の標準試料を調製した。以下、これらの試料を、Ｈｔ２９％、Ｈｔ４１％およびＨｔ５５％という。そして、これらの標準試料について、それぞれ、グルコース濃度を所定濃度（５０、１００、１５０、２５０、３５０および５５０ｍｇ／ｄＬ）とした、グルコース濃度系列のサンプルを調製した。
【００７４】
電流測定装置として、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｄｖａｎｃｅ ｍｅｔｅｒｓ（商品名、Ｈｙｐｏｇｕａｒｄ社製、修正されたソフトウェアを有し、電流トランジエントを収集可能な計測器）、および、バイオセンサとして、２ｐｏｔｓ ｏｆ Ｍｅｎａｒｉｎｉ Ｇｌｕｃｏｍｅｎ ＧＭ ｓｔｒｉｐｓ（商品名、アークレイ（株）製）を使用し、使用説明書にしたがって、電流の測定を行った。電流測定は、電圧印加時を０秒として、５秒および１０秒の時点で行った。また、各サンプルについて、それぞれ８回測定を行い、その平均値を求めた。
【００７５】
これらの結果を、図１に示す。図１は、各標準試料のグルコース濃度系列について、電圧印加から５秒の電流（Ａ５）と１０秒の電流（Ａ１０）とをプロットしたグラフである。図１において、ｘ軸は、１０秒の電流（Ａ１０）を示し、ｙ軸は、５秒の電流（Ａ５）を示す。図１において、◇は、Ｈｔ２９％の結果であり、□は、Ｈｔ４１％の結果であり、△は、Ｈｔ５５％の結果である。また、図１において、円に囲まれる各３つのプロットは、左から、グルコース５０ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース１００ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース１５０ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース２５０ｍｇ／ｄＬの結果、グルコース３５０ｍｇ／ｄＬの結果、およびグルコース５５０ｍｇ／ｄＬの結果を示す。電流は、平均をプロットした。
【００７６】
各サンプルについて、前述のように、２時点の電流測定を行った結果、以下のことが明らかとなった。まず、各グルコース濃度に対して、Ｈｔ５５％の電流値が最も低く、Ｈｔ２９％の電流値が最も高いことから、電流値は、Ｈｔ値の影響を受けて、Ｈｔ値の増加にしたがって低下し、Ｈｔ値の低下にしたがって増加する、という挙動を示すことがわかった。さらに、２時点の電流測定を行った結果、５秒の電流（Ａ５）よりも、１０秒の電流（Ａ１０）が低下したことから、電流値は、Ｈｔ値の影響を受けて、電圧印加から測定までの時間が遅くなるにしたがって、低下する挙動を示すことがわかった。この挙動を示すグラフが、前記図１である。したがって、これらの挙動に基づき、２時点の電流測定の結果から、Ｈｔ値による影響を補正することが可能といえる。
【００７７】
一方、各標準試料のグルコース濃度系列について、グルコース濃度と、５秒の電流（Ａ５）とをプロットしたグラフを図２に示す。図２において、◇は、Ｈｔ２９％についての５秒の電流（Ａ５）の結果であり、□は、Ｈｔ４１％についての５秒の電流（Ａ５）の結果であり、△は、Ｈｔ５５％についての５秒の電流（Ａ５）の結果である。図２において、電流は、平均値をプロットした。
【００７８】
図２に示すように、１時点の電流のみをプロットした場合、例えば、測定電流が８０００ｎＡであると仮定すると、各標準試料について８０００ｎＡのプロットが存在する。このため、前記試料のＨｔ値が不明である限り、Ｈｔ２９％（◇）の結果に基づいて約２５０ｍｇ／ｄＬ、Ｈｔ４１％（□）の結果に基づき約３００ｍｇ／ｄＬ、Ｈｔ５５％（△）の結果に基づき約３９０ｍｇ／ｄＬという、３種類のグルコース濃度が導かれることになる。このため、Ｈｔ値を補正することができず、正確性に乏しい測定結果となってしまう。
【００７９】
［実施例２］
続いて、前記図１の結果から、各標準試料について、５秒の電流（Ａ５）と１０秒の電流（Ａ１０）との相関関係について、二次多項式を求めた。この結果を以下に示す。下記式において、ｙは、５秒の電流（Ａ５）であり、ｘは、１０秒の電流（Ａ１０）である。
Ｈｔ値２９％：ｙ＝−４Ｅ−０５ｘ２＋１．８３３９ｘ−３７２．５６
Ｒ２＝１
Ｈｔ値４１％：ｙ＝９Ｅ−０６ｘ２＋１．３６４７ｘ−４．３３８１
Ｒ２＝１
Ｈｔ値５５％：ｙ＝４Ｅ−０５ｘ２＋１．００８９ｘ＋２２５．１４
Ｒ２＝０．９９９９
【００８０】
そして、これらの各二次多項式の「ｘ」に、下記表に示す１０秒の電流（Ａ１０）０〜１２０００ｎＡを代入し、５秒の電流（Ａ５）を算出した。これらの結果を、下記表および図３にあわせて示す。表１の参照表または図３の参照図により、測定した電流が５秒の電流（Ａ５）および１０秒の電流（Ａ１０）のいずれであっても、ヘマトクリットを換算できる。
【００８１】
【表１】
【００８２】
そして、前記表１に基づいて、Ｈｔエラー、すなわち、算出したＨｔ値と実際のＨｔ値との差を求めた。具体的には、Ｈｔ値が既知である、所定のグルコース濃度（８６ｍｇ／ｄＬ、１６１ｍｇ／ｄＬ、２７９ｍｇ／ｄＬ、３８６ｍｇ／ｄＬ）の試料を準備し、１０秒の電流を測定し、前記表１に基づいて、前記試料のＨｔ値を算出した。そして、算出したＨｔ値について、既知Ｈｔ値との差を求めた。この結果を図４に示す。図４は、各グルコース試料についてのＨｔエラー（％Ｈｔ）を示すグラフである。図４に示すように、グルコース濃度が約８０ｍｇ／ｄＬ〜４００ｍｇ／ｄＬの試料について、Ｈｔエラーが極めて低い値であった。このため、前記表１および図３により、前述のようなグルコース濃度の範囲において、より正確にヘマトクリットを換算できる。
【００８３】
［実施例３］
前記実施例１における測定結果を用いて、Ｈｔ５５％の各グルコース濃度の測定電流値およびＨｔ２１％の各グルコース濃度の測定電流値を、Ｈｔ４１％の対応するグルコース濃度の測定電流値に収束するアルゴリズムを、市販のプログラムＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ（登録商標）を用いて求めた。このアルゴリズムを以下に示す。
【００８４】
１． 中度のＨｔ（４１％）におけるグルコース反応による前記１０秒の電流（Ａ１０）に基づいて、グルコースと電流との２系列を使用した二次多項式を作成する。この多項式は、未補正のグルコース多項式である。
２． 前記１．から、１０秒の電流に基づくグルコース値を算出する。このグルコース値は、未補正のグルコース値である。
３． ５秒の電流および１０秒の電流を用いて、Ｈｔ−電流表（表１）から、Ｈｔ値を補間する。このようにして、Ｈｔを推測する。
４． 前記グルコースについての、低度のＨｔ（２９％）、中度のＨｔ（４１％）および高度のＨｔ（５５％）に適合する二次数多項式、および、未補正のグルコース値（前記２．参照）を用いて、２００ｍｇ／ｄＬの未補正のグルコース値に基づくグルコース値を算出する。このようにして、Ｈｔ２９％、Ｈｔ４１％およびＨｔ５５％に対する、Ｈｔエラーを有するグルコース値（前記Ｈｔエラーグルコース２００値）が得られる（エラーが無い場合、中度の４１％Ｈｔ値では、２００ｍｇ／ｄＬである。）。
５． 前記４．で算出した、３つのＨｔのグルコース２００値を用いて、Ｈｔエラーのあるグルコース２００に対して、Ｈｔの二次多項式を算出する。この多項式は、Ｈｔの補正多項式である。
６． 未補正のグルコース値、前記Ｈｔ推測値および前記Ｈｔの補正多項式を用いて、Ｈｔ４１％に基づく補正グルコース推測値を算出する。この推測値は、最終的な補正グルコース推測値である。
【００８５】
そして、前記実施例１における各標準試料の２時点の電流値から、前記アルゴリズムを用いて、グルコース濃度を算出した。これらの結果を、図５に示す。図５は、前記標準試料における既知グルコース濃度と、アルゴリズムを用いて算出した前記標準試料のグルコース濃度との関係を示すグラフである。図５において、◇は、Ｈｔ２９％の結果であり、□は、Ｈｔ４１％の結果であり、△は、Ｈｔ５５％の結果である。図５に示すように、いずれの標準試料についても、極めて正確なグルコース濃度が算出できたことがわかった。
【００８６】
これに対して、比較例として、電圧印加から１０秒後（１０秒の電流（Ａ１０））の測定結果を用いて、Ｈｔ値を補正せずに、グルコース濃度を算出した。具体的には、図２に示す相関式に基づいて、グルコース濃度を算出した。この結果を図６に示す。図６に示すように、Ｈｔ値によって、電流値が異なるため、Ｈｔ値ごとにグルコース濃度を算出する必要があった。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
以上のように、本発明によれば、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照することによって、前記目的成分の測定に対するＨｔ値の影響を補正し、より正確な前記赤血球含有試料中の目的成分量を測定することが可能である。このため、本発明は、分析または臨床の分野等において、極めて有用であるといえる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
赤血球含有試料中の目的成分を、バイオセンサを用いて測定する測定方法であって、
下記（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）工程を含むことを特徴とする測定方法。
（Ａ）測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する工程
（Ｂ）前記バイオセンサにより、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程
（Ｃ）前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分量を求める工程
【請求項２】
前記（Ａ）工程において、測定に先立ち、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する、請求項１記載の測定方法。
【請求項３】
前記複数のシグナルが、複数の時点で取得したシグナルである、請求項１または２記載の測定方法。
【請求項４】
前記複数のシグナルが、２時点で取得したシグナルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項５】
前記複数のシグナルが、１〜２０秒の間隔で取得したシグナルである、請求項１から４のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項６】
前記複数のシグナルが、同じ検出部位から取得したシグナルである、請求項１から５のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項７】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から取得したシグナルである、請求項１から６のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項８】
前記複数のシグナルが、２カ所の検出部位から取得したシグナルである、請求項１から７のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項９】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から、同時に取得したシグナルである、請求項１から８のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１０】
前記シグナルが、電気化学的測定により検出可能なシグナルである、請求項１から９のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１１】
前記シグナルが、前記バイオセンサの検出部位である作用極から検出可能なシグナルである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１２】
前記シグナルが、光学的測定により検出可能なシグナルである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１３】
前記複数のシグナルが、前記シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒後までに取得したシグナルである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１４】
前記シグナルが、前記目的成分との酸化還元反応に基づくシグナルである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１５】
前記酸化還元反応が、酸化還元酵素とメディエータとを用いた反応である、請求項１４記載の測定方法。
【請求項１６】
前記（Ａ）工程において、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係が、下記（Ｘ）工程により求められた回帰式である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の測定方法。
（Ｘ）Ｈｔ値が異なる各標準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求め、
前記各標準試料のうちいずれか一つを、基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択し、
前記選択した基準試料の相関式を基準相関式とし、
前記各標準試料の相関式を、前記基準相関式に収束する回帰式を求める工程
【請求項１７】
前記（Ｃ）工程において、
前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、補正後の複数のシグナルを求め、
下記（Ｙ）工程により求められた検量式を参照し、前記補正後の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める、請求項１６記載の測定方法。
（Ｙ）前記基準Ｈｔ値を示す基準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記複数のシグナルと、前記基準試料における前記目的成分量との相関式を、検量式として求める工程
【請求項１８】
前記赤血球含有試料が、全血である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１９】
前記目的成分が、グルコース、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＨｂＡ１ｃ、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、ＦＴ３、ＦＴ４、ｈＣＧ、ＨＢｓ抗原、ＨＢｃ抗体、ＨＣＶ抗体、ＴＹ抗原、アンチ−ストレプトリシン Ｏ（ＡＳＯ）、ＩＶ型コラーゲン、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ−３）、ＰＩＶＡＫ−ＩＩ、α１マイクログロブリン、β１マイクログロブリン、アミロイドＡ（ＳＡＡ）、エラスターゼ１、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、カンジダ抗原、子宮頸管粘液中顆粒球エラスターゼ、ジゴキシン、シスタチンＣ、第ＸＩＩＩ因子、尿中トランスフェリン、梅毒、ヒアルロン酸、フィブリンモノマー複合体（ＳＦＭＣ）、フォン・ウィルブランド因子（第ＶＩＩＩ因子様抗原）、プロテインＳ、リウマチ因子（ＲＦ）、ＩｇＤ、α１アシドグリコプロテイン（α１ＡＧ）、α１アンチトリプシン（α１ＡＴ）、α２マクログロブリン、アルブミン（Ａｌｂ）、セルロプラスミン（Ｃｐ）、ハプトグロビン（Ｈｐ）、プレアルブミン、レチノール結合蛋白（ＲＢＰ）、β１Ｃ／β１Ａグロブリン（Ｃ３）、β１Ｅグロブリン（Ｃ４）、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、βリポ蛋白（β−ＬＰ）、アポ蛋白Ａ−Ｉ、アポ蛋白Ａ−II、アポ蛋白Ｂ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩＩ、アポ蛋白Ｅ、トランスフェリン（Ｔｆ）、尿中アルブミン、プラスミノーゲン（ＰＬＧ）、リポ蛋白（ａ）（ＬＰ（ａ））、乳酸塩、低密度脂質、高密度脂質およびトリグリセリドからなる群から選択された少なくとも一つである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項２０】
バイオセンサを用いた赤血球含有試料中の目的成分の測定方法に使用する測定装置であって、
バイオセンサから、赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する取得手段、
および、
目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照し、前記取得手段により得られた複数のシグナルから、目的成分の量を算出する算出手段
を有することを特徴とする測定装置。
【請求項２１】
前記関係が、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係である、請求項２０記載の測定装置。
【請求項２２】
前記複数のシグナルが、複数の時点で取得したシグナルである、請求項２０または２１記載の測定装置。
【請求項２３】
前記複数のシグナルが、２時点で取得したシグナルである、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２４】
前記複数のシグナルが、１〜２０秒の間隔で取得したシグナルである、請求項２０から２３のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２５】
前記複数のシグナルが、同じ検出部位から取得したシグナルである、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２６】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から取得したシグナルである、請求項２０から２５のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２７】
前記複数のシグナルが、２カ所の検出部位から取得したシグナルである、請求項２０から２６のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２８】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から、同時に取得したシグナルである、請求項２０から２７のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２９】
前記シグナルが、電気化学的測定により検出可能なシグナルである、請求項２０から２８のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３０】
前記シグナルが、前記バイオセンサの検出部位である作用極から検出可能なシグナルである、請求項２０から２９のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３１】
前記シグナルが、光学的測定により検出可能なシグナルである、請求項２０から３０のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３２】
前記複数のシグナルが、前記シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒後までに取得したシグナルである、請求項２０から３１のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３３】
前記シグナルが、前記目的成分との酸化還元反応に基づくシグナルである、請求項２０から３２のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３４】
前記酸化還元反応が、酸化還元酵素とメディエータとを用いた反応である、請求項３３記載の測定装置。
【請求項３５】
前記関係が、下記（Ｘ）工程により求められた回帰式である、請求項２０から３４のいずれか一項に記載の測定装置。
（Ｘ）Ｈｔ値が異なる各標準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求め、
前記各標準試料のうち、いずれか一つを基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択し、
前記選択した基準試料の相関式を基準相関式とし、
前記各標準試料の相関式を、前記基準相関式に収束する回帰式を求める工程
【請求項３６】
前記算出手段が、
前記関係を参照し、前記取得手段により得られた複数のシグナルから、補正後の複数のシグナルを算出する補正手段、
および、
前記基準Ｈｔ値を示す基準試料の目的成分濃度系列について取得した複数のシグナルと、前記基準試料における前記目的成分の量との相関式を、検量式として参照し、前記試料中の目的成分量を算出する算出手段
を有する、請求項３５記載の測定装置。
【請求項１】
赤血球含有試料中の目的成分を、バイオセンサを用いて測定する測定方法であって、
下記（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）工程を含むことを特徴とする測定方法。
（Ａ）測定に先立ち、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する工程
（Ｂ）前記バイオセンサにより、前記赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する工程
（Ｃ）前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分量を求める工程
【請求項２】
前記（Ａ）工程において、測定に先立ち、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を提供する、請求項１記載の測定方法。
【請求項３】
前記複数のシグナルが、複数の時点で取得したシグナルである、請求項１または２記載の測定方法。
【請求項４】
前記複数のシグナルが、２時点で取得したシグナルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項５】
前記複数のシグナルが、１〜２０秒の間隔で取得したシグナルである、請求項１から４のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項６】
前記複数のシグナルが、同じ検出部位から取得したシグナルである、請求項１から５のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項７】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から取得したシグナルである、請求項１から６のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項８】
前記複数のシグナルが、２カ所の検出部位から取得したシグナルである、請求項１から７のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項９】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から、同時に取得したシグナルである、請求項１から８のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１０】
前記シグナルが、電気化学的測定により検出可能なシグナルである、請求項１から９のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１１】
前記シグナルが、前記バイオセンサの検出部位である作用極から検出可能なシグナルである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１２】
前記シグナルが、光学的測定により検出可能なシグナルである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１３】
前記複数のシグナルが、前記シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒後までに取得したシグナルである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１４】
前記シグナルが、前記目的成分との酸化還元反応に基づくシグナルである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１５】
前記酸化還元反応が、酸化還元酵素とメディエータとを用いた反応である、請求項１４記載の測定方法。
【請求項１６】
前記（Ａ）工程において、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係が、下記（Ｘ）工程により求められた回帰式である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の測定方法。
（Ｘ）Ｈｔ値が異なる各標準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求め、
前記各標準試料のうちいずれか一つを、基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択し、
前記選択した基準試料の相関式を基準相関式とし、
前記各標準試料の相関式を、前記基準相関式に収束する回帰式を求める工程
【請求項１７】
前記（Ｃ）工程において、
前記（Ａ）工程の前記関係を参照し、前記（Ｂ）工程の複数のシグナルから、補正後の複数のシグナルを求め、
下記（Ｙ）工程により求められた検量式を参照し、前記補正後の複数のシグナルから、前記試料中の目的成分の量を求める、請求項１６記載の測定方法。
（Ｙ）前記基準Ｈｔ値を示す基準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記複数のシグナルと、前記基準試料における前記目的成分量との相関式を、検量式として求める工程
【請求項１８】
前記赤血球含有試料が、全血である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項１９】
前記目的成分が、グルコース、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＨｂＡ１ｃ、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、ＦＴ３、ＦＴ４、ｈＣＧ、ＨＢｓ抗原、ＨＢｃ抗体、ＨＣＶ抗体、ＴＹ抗原、アンチ−ストレプトリシン Ｏ（ＡＳＯ）、ＩＶ型コラーゲン、マトリックスメタロプロテナーゼ（ＭＭＰ−３）、ＰＩＶＡＫ−ＩＩ、α１マイクログロブリン、β１マイクログロブリン、アミロイドＡ（ＳＡＡ）、エラスターゼ１、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、カンジダ抗原、子宮頸管粘液中顆粒球エラスターゼ、ジゴキシン、シスタチンＣ、第ＸＩＩＩ因子、尿中トランスフェリン、梅毒、ヒアルロン酸、フィブリンモノマー複合体（ＳＦＭＣ）、フォン・ウィルブランド因子（第ＶＩＩＩ因子様抗原）、プロテインＳ、リウマチ因子（ＲＦ）、ＩｇＤ、α１アシドグリコプロテイン（α１ＡＧ）、α１アンチトリプシン（α１ＡＴ）、α２マクログロブリン、アルブミン（Ａｌｂ）、セルロプラスミン（Ｃｐ）、ハプトグロビン（Ｈｐ）、プレアルブミン、レチノール結合蛋白（ＲＢＰ）、β１Ｃ／β１Ａグロブリン（Ｃ３）、β１Ｅグロブリン（Ｃ４）、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、βリポ蛋白（β−ＬＰ）、アポ蛋白Ａ−Ｉ、アポ蛋白Ａ−II、アポ蛋白Ｂ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩ、アポ蛋白Ｃ−ＩＩＩ、アポ蛋白Ｅ、トランスフェリン（Ｔｆ）、尿中アルブミン、プラスミノーゲン（ＰＬＧ）、リポ蛋白（ａ）（ＬＰ（ａ））、乳酸塩、低密度脂質、高密度脂質およびトリグリセリドからなる群から選択された少なくとも一つである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項２０】
バイオセンサを用いた赤血球含有試料中の目的成分の測定方法に使用する測定装置であって、
バイオセンサから、赤血球含有試料中の目的成分由来の複数のシグナルを取得する取得手段、
および、
目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係を参照し、前記取得手段により得られた複数のシグナルから、目的成分の量を算出する算出手段
を有することを特徴とする測定装置。
【請求項２１】
前記関係が、異なるＨｔ値における、前記目的成分の量と、それに応じた複数のシグナルとの関係である、請求項２０記載の測定装置。
【請求項２２】
前記複数のシグナルが、複数の時点で取得したシグナルである、請求項２０または２１記載の測定装置。
【請求項２３】
前記複数のシグナルが、２時点で取得したシグナルである、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２４】
前記複数のシグナルが、１〜２０秒の間隔で取得したシグナルである、請求項２０から２３のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２５】
前記複数のシグナルが、同じ検出部位から取得したシグナルである、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２６】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から取得したシグナルである、請求項２０から２５のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２７】
前記複数のシグナルが、２カ所の検出部位から取得したシグナルである、請求項２０から２６のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２８】
前記複数のシグナルが、複数の検出部位から、同時に取得したシグナルである、請求項２０から２７のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項２９】
前記シグナルが、電気化学的測定により検出可能なシグナルである、請求項２０から２８のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３０】
前記シグナルが、前記バイオセンサの検出部位である作用極から検出可能なシグナルである、請求項２０から２９のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３１】
前記シグナルが、光学的測定により検出可能なシグナルである、請求項２０から３０のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３２】
前記複数のシグナルが、前記シグナル発生が可能となった時点を０秒として、２０秒後までに取得したシグナルである、請求項２０から３１のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３３】
前記シグナルが、前記目的成分との酸化還元反応に基づくシグナルである、請求項２０から３２のいずれか一項に記載の測定装置。
【請求項３４】
前記酸化還元反応が、酸化還元酵素とメディエータとを用いた反応である、請求項３３記載の測定装置。
【請求項３５】
前記関係が、下記（Ｘ）工程により求められた回帰式である、請求項２０から３４のいずれか一項に記載の測定装置。
（Ｘ）Ｈｔ値が異なる各標準試料の、目的成分濃度系列について、複数のシグナルを取得し、
前記各標準試料について、前記複数のシグナル間の相関式を求め、
前記各標準試料のうち、いずれか一つを基準Ｈｔ値を示す基準試料として選択し、
前記選択した基準試料の相関式を基準相関式とし、
前記各標準試料の相関式を、前記基準相関式に収束する回帰式を求める工程
【請求項３６】
前記算出手段が、
前記関係を参照し、前記取得手段により得られた複数のシグナルから、補正後の複数のシグナルを算出する補正手段、
および、
前記基準Ｈｔ値を示す基準試料の目的成分濃度系列について取得した複数のシグナルと、前記基準試料における前記目的成分の量との相関式を、検量式として参照し、前記試料中の目的成分量を算出する算出手段
を有する、請求項３５記載の測定装置。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２０１１−７５３６２（Ｐ２０１１−７５３６２Ａ）
【公開日】平成２３年４月１４日（２０１１．４．１４）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００９−２２５９７８（Ｐ２００９−２２５９７８）
【出願日】平成２１年９月３０日（２００９．９．３０）
【出願人】（０００１４１８９７）アークレイ株式会社 (288)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年４月１４日（２０１１．４．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２２５９７８（Ｐ２００９−２２５９７８）
【出願日】平成２１年９月３０日（２００９．９．３０）
【出願人】（０００１４１８９７）アークレイ株式会社 (288)
【Ｆターム（参考）】
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