過敏性腸症候群の予防または治療用組成物
本発明は、過敏性腸症候群の治療または予防に有用な組成物、及び過敏性腸症候群を治療または予防する方法に関するものである。本発明は、過敏性腸症候群の治療または予防のために、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物、望ましくはＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎のエタノール水溶液抽出物、さらに望ましくはＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の３５〜６５ｖ／ｖ％エタノール水溶液抽出物を有効成分として利用する。Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａの抽出物は、内臓の過敏性抑制、及びストレスや腸過敏性による排便の異常に対する改善に卓越した効果がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過敏性腸症候群を治療または予防するための薬学組成物、及びこのような薬学組成物の医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群とは、器質的原因がなく、長期間繰り返す腹部膨満感などの腹部違和感及び腹痛と共に、下痢、便秘などの排便習慣の変化を伴う慢性疾患であり、その症状が精神的な要因やストレスによっても悪化する。症状に従って、下痢優位型、便秘優位型、及び痛症優位型に分けて薬物治療をしており、韓国内患者のうち下痢型が３０.８％、便秘型が２４.６％、下痢と便秘を交互に繰り返す交替型が４４.６％を占める。
【０００３】
過敏性腸症候群を治療するための薬物療法は、過敏性腸症候群の全般的な症状を改善する薬剤と、単一症状に対する薬剤とに分けられる。腹痛に対する薬物としては、平滑筋弛緩剤、抗うつ剤、オピオイド作動薬（ｏｐｉｏｉｄ ａｇｏｎｉｓｔ）などが使用され、便秘優位型の過敏性腸症候群に対する薬剤としては、繊維製剤、緩和剤、５‐ＨＴ４作用剤などが使用されており、下痢優位型の過敏性腸症候群に対する薬剤としては、下痢止め剤、５‐ＨＴ３拮抗剤などが使用される。しかし、既存の５‐ＨＴ系列の薬物は副作用があることからその使用が制限されているので、現在まで過敏性腸症候群に対する薬物療法は非常に制限的である。従って、対症療法に対する依存度が高くて満足できないのが現状である［ＴＴ. Ａｓｈｂｕｒｎ外, Ｎａｔ. Ｒｅｖ. Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ., ５（２）, ｐ９９〜１００, ２００６；ＭＪＧ Ｆａｒｔｈｉｎｇ, ＢＭＪ., ３３０, ｐ４２９〜４３０, ２００５；及びＭＪＧ. Ｆａｒｔｈｉｎｇ, Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ. Ｒｅｓ. Ｃｌｉｎ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., １８（４）, ｐ７７３〜７８６, ２００４］。
【０００４】
一方、ニューロキニン受容体（Ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＮＫ）は、ＮＫ１、ＮＫ２及びＮＫ３の亜類型に分けられ、中枢神経系と末梢神経系とに作用する神経ペプチド（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ）である物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）Ｐ（ＳＰ）、ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢなどのタキキニン（ｔａｃｈｙｋｉｎｉｎ）ファミリーが結合する受容体である［Ｓ. Ｈａｒｒｉｓｏｎ外, Ｉｎｔ. Ｊ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ., ３３：ｐ５５５〜５７６, ２００１］。このようなＮＫ受容体は、脳の扁桃体、海馬、視床下部、線条体及び脊髄のような中枢神経系や皮膚、炎症細胞、消化系、呼吸系、心血管系などの末梢神経系に均一に分布しており、腸運動性及び腸過敏性と密接な関連がある［ＪＨ. Ｌａ外, Ｗｏｒｌｄ Ｊ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., １１（２）, ｐ２３７〜２４１, ２００５；ＭＳ Ｋｒａｍｅｒ, Ｓｃｉｅｎｃｅ, ２８１（５３８３） ｐ１６２４〜１６２５. １９９８；及びＧ. Ｊ. Ｓａｎｇｅｒ., Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１３０３〜１３１２, ２００４］。最近、このような生理学的機能に基づいて、過敏性腸症候群の治療剤を見出すための手段として、ＮＫ受容体の拮抗剤に対する研究が活発に行われている［Ｒ. Ａ. Ｄｕｆｆｙ, Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ. Ｅｍｅｒｇ. Ｄｒｕｇｓ, ９（１）, ２００４；Ｍ. Ｃａｍｉｌｌｅｒｉ, Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１２３７〜１２４８, ２００４；Ｇ. Ｊ. Ｓａｎｇｅｒ., Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１３０３〜１３１２, ２００４；及びＡ. Ｌｅｃｃｉ外, Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１２４９〜１２６３, ２００４］。
【０００５】
今まで様々な天然生薬（例えば、木香、白茯苓、当帰、白芍薬、山薬、ゴシュユ、カラタチなど）が過敏性腸症候群に効くと知られているが、過敏性腸症候群の代表的な評価モデルであるＣＲＤ（Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ）モデルなどで有意義な効果を示さなかった。過敏性腸症候群は、様々な症状、すなわち腹痛、腹部膨満感などと共に、便秘、下痢などの排便異常が伴われる慢性疾患であることから、単なる腹痛、下痢、便秘などとは差別化される。従って、過敏性腸症候群の治療効果を評価するためには、上述の多様な症状、すなわち腸過敏性状態における痛症抑制効果、排便異常の改善効果などが総合的に評価されなければならない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明が解決しようとする技術的課題は、過敏性腸症候群の治療または予防に有用な組成物、及び有効な過敏性腸症候群の治療または予防方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記技術的課題を達成するために、本発明は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎（ｒｈｉｚｏｍｅ）抽出物を有効成分として含有することを特徴とする過敏性腸症候群の治療または予防用薬学組成物、及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の治療学的に有効な量を過敏性腸症候群の治療または予防が必要な個体に投与することを含む過敏性腸症候群の治療または予防方法を提供する。
【０００８】
本発明者らは、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物が、内臓痛に対する過敏性を抑制し、ストレスまたは腸過敏性による排便異常の改善効果を現すことを確認し、これを通じて過敏性腸症候群の治療または予防のために有用に使用できることを確認して本発明を完成するに至った。これは、腸神経系（ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）で有害刺激の侵害受容経路（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｐａｔｈｗａｙ）を通じた侵害受容伝達及び膓運動性に関与するＮＫ受容体を阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）することに起因すると考えられるが、本発明はこのようなメカニズムに限定されるのではない。
【０００９】
特に本発明は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａなどのＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ属（ｇｅｎｕｓ）植物のうちＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａの抽出物の過敏性腸症候群の治療効果がはるかに優れているという驚くべき発見に基づく。
【００１０】
本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、本発明が属する分野で通常の知識を持つ者によく知られた抽出方法を利用して製造され得る。すなわち、根茎を陰干しして粉砕した後、抽出溶媒を根茎の１ないし２０倍体積量加えて抽出した後、選択的に（減圧）濃縮、乾燥または精製過程を経て本発明による抽出物を製造できる。より具体的に、上述の方法のように抽出溶媒を加えて有効成分物質を抽出するが、（ａ）冷却コンデンサーを設置して溶媒の蒸発を防止した状態で５０〜１００℃の温度条件で１〜２０時間加熱して抽出するか、（ｂ）５〜３７℃の温度条件で０.５〜１５日間沈積させることによって有効成分を抽出できる。本発明の抽出物は、撹拌抽出、還流冷却抽出、冷浸抽出、超音波抽出、超臨界抽出などの抽出方法を使用して製造できる。
【００１１】
本発明の抽出物製造のための溶媒としては、通常の抽出溶媒、例えば炭素数１〜４の低級アルコールまたは低級アルコールの水溶液；グリセリン、ブチレングリコール、プロピレングリコールなどの多価アルコール；メチルアセテート、エチルアセテート、アセトン、ベンゼン、ヘキサン、ジエチルエーテル、ジクロロメタンなどの炭化水素系溶媒；またはこれらの混合溶媒が使用され得るが、過敏性腸症候群の治療効果面からは、抽出溶媒としてエタノール水溶液（例えば、５〜９５（ｖ／ｖ）％のエタノール水溶液）が望ましく、さらに望ましくは２０〜８０（ｖ／ｖ）％のエタノール水溶液、さらに一層望ましくは３５〜６５（ｖ／ｖ）％のエタノール水溶液を使用して抽出されたＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の過敏性腸症候群の治療効果が、他の溶媒または他の混合比の混合溶媒を使用して抽出された抽出物よりもはるかに卓越している。
【００１２】
本発明の組成物は、組成物の全体重量に対してＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を１〜９０重量％、望ましくは１０〜６０重量％含むことができる。
【００１３】
本発明による過敏性腸症候群の治療または予防用組成物は、医薬品及び機能性食品の形態として製造できる。このような医薬品及び機能性食品は薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含み得る。本発明の組成物は、単独で、或いは何れの便利な運搬体、賦形剤などと共に混合して投与され得、そのような投与剤形は単回投与または反復投与剤形であり得る。
【００１４】
本発明の組成物を含む医薬品または機能性食品は、固形製剤または液状製剤であり得る。固形製剤としては、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、座剤などがあるが、これに限定されるのではない。固形製剤には、賦形剤、着香剤、結合剤、防腐剤、崩解剤、滑沢剤、充填剤などが含まれ得るが、これに限定されるのではない。液状製剤としては、水、プロピレングリコール溶液のような溶液剤、懸濁剤、乳剤などがあるが、これに限定されるのではなく、適当な着色剤、着香剤、安定化剤、粘性化剤などを添加して製造し得る。
【００１５】
例えば、散剤は、本発明のＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物と、ラクトース、澱粉、微結晶セルロースなどの薬剤学的に許容される適当な賦形剤を単純混合することで製造され得る。顆粒剤は、本発明のＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物；薬剤学的に許容される適当な賦形剤；及びポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの薬剤学的に許容される適当な結合剤を混合した後、水、エタノール、イソプロパノールなどの溶媒を利用した湿式顆粒法、または圧縮力を利用した乾式顆粒法を利用して製造され得る。また錠剤は、上記顆粒剤をステアリン酸マグネシウムなどの薬剤学的に許容される適当な滑沢剤と混合した後、打錠機を利用して打錠することで製造され得る。
【００１６】
本発明の組成物は、治療すべき疾患及び個体の状態に従って、経口剤、注射剤（例えば、筋肉注射、腹腔注射、静脈注射、注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、皮下注射、インプラント）、吸入剤、鼻腔内投与剤、膣剤、直腸投与剤、舌下剤、経皮剤、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）剤などで投与され得るが、これに限定されるのではない。投与経路に従って通常使用され非毒性である、薬剤学的に許容される運搬体、添加剤、ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）を含む適した投与ユニット剤形への製剤化ができる。一定時間にわたって薬物を持続的に放出できるデポー（ｄｅｐｏｔ）剤形も本発明の範囲に含まれる。
【００１７】
過敏性腸症候群の治療、予防または改善という本発明の目的を達成するために、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物を毎日約１０ｍｇ／ｋｇないし約２４００ｍｇ／ｋｇ投与することができ、約１００ｍｇ／ｋｇないし約１２００ｍｇ／ｋｇの１日投与用量が望ましい。しかし、上記投与量は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物の精製程度、患者の状態（年齢、性別、体重など）、治療している状態の深刻性などによって多様である。必要に応じては、便宜を図るために１日の総投与量を分け、一日に数回に分けて投与し得る。
【００１８】
本発明による組成物を使用して治療、改善または予防できる過敏性腸症候群は、下痢型過敏性腸症候群、便秘型過敏性腸症候群、または痛症優位型過敏性腸症候群から選択された何れか一つ以上である。
【００１９】
本発明はまた、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物を人間を含む動物に投与することを特徴とするＮＫ２受容体を阻害する方法を提供する。本発明はまた、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物とＮＫ２受容体を発現する細胞とを接触させることを特徴とするＮＫ２受容体を阻害する方法を提供する。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、有効成分としてＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を含有することで過敏性腸症候群の治療または予防に有用な組成物を提供する。本発明はまた、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の治療学的に有効な量を過敏性腸症候群の治療または予防が必要な個体に投与することを含む過敏性腸症候群の治療または予防方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムの結果である。
【図２】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ-Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＴＬＣ）の結果である。
【図３】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物のＣＲＤモデルにおける効果を示すグラフである。
【図４】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の拘束ストレス誘発排便様相モデル（Ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ‐ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｅｃａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｏｕｔｐｕｔ ｍｏｄｅｌ）における効果を示すグラフである。
【図５】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ抽出物とＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ抽出物とのＣＲＤモデルにおける効果を比較したグラフである。
【図６】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ抽出物とＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物とのＣＲＤモデルにおける効果を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明の理解を助けるために実施例などを挙げて詳しく説明する。しかし、本発明による実施例は多様な形態に変形され得、本発明の範囲が下記実施例に限定されると解釈されてはいけない。本発明の実施例は当業界で平均的な知識を持つ者に本発明をより完全に説明するために提供されるのである。
【００２３】
＜Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の製造＞
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎のエタノール水溶液抽出物を製造した。根茎１００ｇを陰干し後細切し、それぞれ０.７Ｌの３０、５０、７０または９０（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液を加えてよく撹拌しながら４時間に亘って２回還流冷却抽出した。上記抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、これを下記実験の試料として使用した。
【００２４】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の水抽出物は、下記のように製造した。根茎１００ｇを薬湯器（デウン薬湯器、ｍｏｄｅｌ ＤＷＰ５０００Ｍ）に入れ、精製水１.５Ｌを注いだ後一番煎じスイッチを押して１５０分間１次抽出した。その後、同量の精製水を入れ二番煎じスイッチを押して１２０分間２次抽出した。上記抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、下記実験の試料として使用した。
【００２５】
＜抽出物の成分差評価＞
ＨＰＬＣ利用評価
図１は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の水抽出物及び５０％エタノール水溶液抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムの結果である［システム Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ；コラム Ｃ１８ コラム（２５０×４.６ｍｍ ＩＤ, Ｓ‐５μm, １２ｎｍ）；検出波長 ２１０ｎｍ］。水抽出物からは、５０％エタノール水溶液を使用した抽出物とは異なり、Ｒｔ６０分後のピークが確認できなかった。
【００２６】
ＴＬＣ利用評価
図１から見られた抽出物間の成分差を観察するために、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を実施した。それぞれの抽出物にノルマルヘキサンを添加して１００ｍｇ／ｍＬの濃度にした後、１５分間超音波処理（ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）し、不溶性物質は濾過して除去し、これを試験溶液にした。試験溶液をシリカゲル板（Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０F ２５４, Ｍｅｒｃｋ）に点滴し、ノルマルヘキサンとエチルアセテートとを１０:１（ｖ／ｖ）で混合した展開溶媒を使用して展開した。その後、乾燥されたシリカゲル板に現われた斑点（ｓｐｏｔ）の色及び位置を紫外線（約２５４ｎｍ）で比較確認した。肉眼で観察するために、ワニリン硫酸溶液（５％硫酸エタノール溶液、１％ワニリンエタノール溶液）を噴霧し、１１０℃で約５〜１０分間乾燥した。その後、発色させて観察した。その結果を図２に示した。
【００２７】
図２に示すように、水抽出物からは、ＵＶ及び発色試薬を使用した二つの場合に両方とも原点（Ｒｆ＝０）付近での微弱な斑点を除いては特徴的な斑点は観察されなかったが、５０％エタノール水溶液抽出物からは、ＵＶ（２５４ｎｍ）上でＲｆ０〜０.３４付近にかけて多様な斑点が観察され、発色試薬を使用した結果Ｒｆ０.１５付近で藍色と紫色、Ｒｆ０.６２付近でピンク色の特徴的な斑点が確認できた。このような結果は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を製造するにおいて、抽出溶媒に従って抽出される成分の差が大きいことを示す。
【００２８】
＜ＣＲＤモデルを通じた内臓痛抑制効果の測定＞
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の内臓過敏性抑制効果を評価するために、過敏性腸症候群の薬物評価に使用される直腸拡張テスト（ＣＲＤ）［ＪＨ. Ｌａ外, Ｗｏｒｌｄ Ｊ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., Ｄｅｃ., ９（１２）：ｐ２７９１〜２７９５, ２００３］を下記のように実施した。
【００２９】
体重２５０〜３００ｇのスプラーグドーリーラット（Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）雄を利用した。温度２５℃、湿度５０％、昼‐夜サイクル１２:１２時間に調節された動物室で１ケージ当たり二匹ずつ飼育した。飲水及び飼料は自由に接近できるようにし、５日間適応させた後、結腸炎を誘発した。結腸炎を誘発させる２４時間前に飼料供給を中断し、エーテルを使用して呼吸麻酔後、ゴムカテーテル（ＰＥ ５０）を肛門から内側８ｃｍ長さで直腸を通じて挿入した。
【００３０】
３.５％酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ０.９％ ｓａｌｉｎｅ）１ｍｌをカテーテルを通じて結腸のルーメン（ｌｕｍｅｎ）に投与した後、溶液が漏れないように肛門を塞いだ。３０秒後に０.９％の生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）１ｍｌを同一のカテーテルを通じて結腸のルーメンに入れて酢酸溶液を洗い出した。
【００３１】
実験動物の直腸に長さ２ｃｍのゴム風船を挿入した後、０.１ｍｌから１.０ｍｌまで段階的に風船内に３７℃の水を入れて脹らまし、このとき現れる動物の痛症反応を測定した。ＣＲＤのとき、実験動物の特徴的行動であるＡＷＲ（ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｒｅｆｌｅｘ）を間接的に定量化するために、各姿勢ごとに点数が付与されるＡＷＲスコアで内臓痛反応を確認した。表１によるＡＷＲスコア［Ｅ. Ｄ. Ａｌ‐Ｃｈａｅｒ外, Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ, Ｎｏｖ., １１９（５）, ｐ１２７６〜１２８５. ２０００］を記録した。
【００３２】
【表１】
【００３３】
結腸炎誘発後７日目のラットでＣＲＤを実施して内臓過敏性（ｖｉｓｃｅｒａｌ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）の有無を確認し、これを通じてＩＢＳ類似症状モデル動物を選別した［ＪＨ. Ｌａ 外, Ｗｏｒｌｄ Ｊ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., Ｄｅｃ., ９（１２）：ｐ２７９１〜２７９５, ２００３］。それぞれのＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を０.５％のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）水溶液に溶かして２００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与し、陽性対照群であるアロセトロン（ａｌｏｓｅｔｒｏｎ ＨＣＬ；Ｊｉａｎｇｙｉｎ Ｙｏｎｇｄａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ., Ｌｔｄ.）は２０ｍｇ／ｋｇで経口投与した。その後、約１時間にわたって安定化させた後ＣＲＤ実験を行ってＡＷＲスコアを記録した。ビヒクル投与群、陽性対照群、及び抽出物投与群に対した反応結果を定量化するために、拡張体積（Ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ, ｍｌ）によるＡＷＲスコア及びこれのＡＵＣ（ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｕｒｖｅ）を求めた。統計処理はスチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ ｔ‐ｔｅｓｔ）を利用してｐ＜０.０１（＊＊）またはｐ＜０.００１（＊＊＊）レベルで行い、ビヒクル投与群対比有意性を検定した。その結果を図３に示した（ｍｅａｎ±Ｓ.Ｅ., ｎ≧５）。
【００３４】
図３において、「Ｎｏｒｍａｌ」は結腸炎を誘発させなかった正常群、「Ｖｅｈｉｃｌｅ」は結腸炎を誘発させた実験動物にビヒクルのみを経口投与した群、「Ａｌｏｓｅｔｒｏｎ」は結腸炎を誘発させた実験動物にアロセトロンを２０ｍｇ／ｋｇ経口投与した陽性対照群、「００Ｅ」は水抽出物２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した群、「３０Ｅ」、「５０Ｅ」、「７０Ｅ」及び「９０Ｅ」はそれぞれ３０％、５０％、７０％及び９０％のエタノール抽出物２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した群を示す。
【００３５】
図３に示すように、５０％エタノール水溶液抽出物は、結腸炎によって誘発された腸過敏性状態で現れる内臓痛に対して強力な抑制効果を示し、これは、陽性対照群であるアロセトロン２０ｍｇ／ｋｇ対比同等のレベルであった。これに反して、水抽出物は阻害活性が殆どなく、３０％エタノール抽出物及び９０％エタノール抽出物ではある程度の阻害活性が現れたが、その効果は５０％エタノール水溶液抽出物に比べて非常に弱かった。したがって、本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、３５ないし６５％エタノール水溶液抽出物であることが最も望ましい。
【００３６】
＜拘束ストレスによる排便モデルにおける効果評価＞
上記実験で大腸過敏性抑制効果が最も優れた５０％エタノール抽出物の過敏性腸症候群治療効果を、拘束ストレスによる排便モデル［Ｓ. Ｋｏｂａｙａｓｈｉ外, Ｊｐｎ. Ｊ. Ｐｈａｒｍｃａｏｌ., ８６, ｐ２８１〜２８８, ２００１］を利用して評価した。
【００３７】
体重２５０〜３００ｇのスプラーグドーリーラット雄を利用した。温度２５℃、湿度５０％、昼‐夜サイクル１２:１２時間に調節された動物室で１ケージ当たり二匹ずつ飼育した。飲水及び飼料は自由に接近できるようにし、５日間適応させた後、拘束実験をした。
【００３８】
実験当日拘束ケージ（ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｃａｇｅ）を使用してラットの拘束ストレスによる排便様相（Ｒｅｓｔｒａｉｎｔ‐ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｅｃａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｏｕｔｐｕｔ）を測定した。５０％エタノール水溶液抽出物を０.５％のＣＭＣ水溶液に溶かして３００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与し、陽性対照群であるアロセトロンは２０ｍｇ／ｋｇの濃度に経口投与した後、実験動物を拘束ケージに入れた。このとき、動物が投与によるストレスを受けないように気を付けた。拘束ケージの中で動けなくなれば動物は拘束ストレスを受けるようになり、排便活動を始めるようになる。
【００３９】
便の様相及び個数を６０分間隔で４時間にわたって測定し、その結果を図４に示した。統計処理はスチューデントのｔ検定を利用してｐ＜０.０１（＊＊）またはｐ＜０.００１（＊＊＊）レベルで有意性を検定した。
【００４０】
５０％エタノール抽出物３００ｍｇ／ｋｇ処理群は拘束によって発生する排便数（ｆｅｃａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｏｕｔｐｕｔ）がビヒクル群の７.９個対比５.２個に減少した。これは、拘束ストレスによる排便異常を本発明の抽出物が改善することを意味する。このような結果から、本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、拘束ストレスによる排便異常にその活性を現わすことが確認できた。
【００４１】
＜ニューロキニン受容体の阻害活性評価＞
ニューロキニン受容体を過発現している細胞株（Ｕ‐３７３ＭＧ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）を韓国細胞株銀行から購入した。培養液（ＲＰＭＩ １６４０ ９０％, ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ １０％, ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ １００ＩＵ／ｍｌ, ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ １００μｇ／ｍｌ, Ｌ‐ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ２ｍＭ、及びｓｏｄｉｕｍ ｐｙｒｕｖａｔｅ １.０ｍＭ）を使用して上記細胞株を培養（５％ ＣＯ２）し、０.２５％トリプシン（ｔｒｙｐｓｉｎ）溶液を利用して６〜８日ごとに継代培養した。
【００４２】
細胞数を多様に希釈して２４ウェルプレートにシーディング（ｓｅｅｄｉｎｇ）した。４８時間後にプローブ（ｐｒｏｂｅ）が結合された物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）Ｐ（ＳＰ）を濃度ごとに処理した。反応時間後、蛍光光度計を利用して蛍光プローブが結合されたＳＰ（Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ４８８ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ, Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ, Ｅｕｇｅｎｅ, ＯＲ）が受容体に結合された程度を、細胞数及び濃度ごとの差に従って測定して最適の条件を確立した［ＶＪ. Ｂｅｎｎｅｔｔ 外, ＢＭＣＣｈｅｍ. Ｂｉｏｌ., １：１, ２００１］。受容体に選択的に結合する非ペプチド性の拮抗剤（ｎｏｎ‐ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であるＬ‐７３３０６０（ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ａｆｆｉｎｉｔｙ＝０.８ｎＭ）を対照群として使用した［Ｒ. Ｂａｎｇ 外, Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ. Ｅｘｐ. Ｔｈｅｒ., ３０５, ｐ３１〜３９, ２００３］。
【００４３】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール水溶液抽出物をＤＭＳＯ（最終濃度０.１％以内）に溶解させた後、蒸留水で希釈した。次いで、メンブレイン（ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ, ０.２２μｍ, Ｍｉｌｌｅｘ‐ＧＶ, Ｕ.Ｓ.Ａ.）を通過させて無菌状態にした後、濃度（１０μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌ）を異ならせて投与した。対照群の細胞にはビヒクル（０.１％ ＤＭＳＯ）処理後、ＳＰの代わりに精製水で処理した。ＳＰのみを処理する群にはビヒクル（０.１％ ＤＭＳＯ）で前処理後、５０ｎＭのＳＰを処理した。抽出物投与群は１時間前に抽出物を処理し、その後５０ｎＭのＳＰを処理した。Ｌ‐７３３０６０投与群は５０ｎＭのＬ‐７３３０６０処理後ＳＰが５０ｎＭになるように処理した。培養器で１時間にわたって反応させた後、無血清媒質で洗浄した。その後、５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ‐１００に細胞を溶かし、黒色の不透明な９６ウェルプレートを利用して蛍光度（Ｅｘ ４８５／Ｅｍ ５２８）を測定した。一回の実験につき各試料の数は２個であり（ｎ＝２）、独立して３回行って、その結果を下記表２に示した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
上記表２のように、５０％エタノール抽出物１０μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌ群においてニューロキニン受容体に対してそれぞれ３３％及び４５％の抑制活性を現わすことが確認できた。上述のような結果から、本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、有害刺激の侵害受容経路を通じた侵害受容伝達及び膓運動性に関与するＮＫ受容体を阻害することによって腸過敏性及び排便異常に対する改善効果を有すると考えられるが、本発明はこのような薬理メカニズムに限定されるのではない。
【００４６】
＜Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの比較評価＞
同属植物であるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの過敏性腸症候群の治療効果を比較評価した。Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎はＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根茎に比べて断面サイズが非常に小さいことから、肉眼でも確実に区別できる同属植物である。
【００４７】
それぞれの根茎１００ｇを陰干し後細切し、それぞれ０.７Ｌの５０％エタノール水溶液を加えてよく撹拌しながら４時間に亘って２回還流冷却抽出した。得られた抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、これを下記実験の試料として使用した。
【００４８】
ＵＰＬＣ比較評価
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａの５０％エタノール水溶液抽出物の成分差をＵＰＬＣクロマトグラム［システム ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ；コラム ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １.８ｕｍ、２.１×１５０ｍｍ；検出波長 ２２０ｎｍ］を利用して評価した。実験結果、原料植物の差に従って抽出される成分が相異なることが分かった。
【００４９】
ＣＲＤモデルを利用した内臓痛抑制効果の比較
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール抽出物（２００ｍｇ／ｋｇ）及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根茎の５０％エタノール抽出物（２００ｍｇ／ｋｇ）の過敏性腸症候群の治療効果をＣＲＤモデルを利用して評価した。その結果を図５に示した。
【００５０】
図５に示すように、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物はビヒクルに対して有意義に腸過敏性状態での内臓痛を抑制する活性を示しているが、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ抽出物は有意義な効果差を示していない。
【００５１】
ＮＫ２受容体の阻害活性比較
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール抽出物及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根茎の５０％エタノール抽出物を利用して、１００μｇ／ｍｌの濃度でＮＫ２受容体に対する阻害活性を比較測定した。実験はＭＤＳ Ｐｈａｒｍａ Ｓｅｒｖｉｃｅｓに依頼して行い、その結果を下記表３に示した。
【００５２】
【表３】
【００５３】
上記表３のように、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ抽出物は阻害活性をほとんど示していないが、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物はＮＫ２受容体に対して５０％以上の阻害効果を示している。
【００５４】
＜Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの比較評価＞
同属植物であるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの過敏性腸症候群の治療効果を比較評価した。それぞれの根茎１００ｇを陰干し後細切し、それぞれ０.７Ｌの５０％エタノール水溶液を加えてよく撹拌しながら４時間に亘って２回還流冷却抽出した。得られた抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、これを下記実験の試料として使用した。
【００５５】
それぞれの抽出物においてＣＲＤモデルを利用した内臓痛抑制効果を比較評価した。Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール水溶液抽出物及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ根茎の５０％エタノール水溶液抽出物は２００ｍｇ／ｋｇの用量でＡＷＲスコア測定の１時間前に投与され、アロセトロンは２０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与された。その結果を図６に示した。
【００５６】
図６に示すように、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物はビヒクルに対して有意義な腸過敏性抑制活性を示しているが、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ抽出物は有意義な効果差を示していない。
【００５７】
＜製剤化の実施例＞
以下、本発明の抽出物を含有する組成物の製剤化（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を例示的に説明するが、本発明はこのような例によって限定されるのではない。
【００５８】
散剤の製造
成分：本発明の抽出物 ２０ｍｇ；ラクトース １００ｍｇ；及びタルク １０ｍｇ。
【００５９】
上記成分を混合し気密袋に充填して散剤を製造した。
【００６０】
錠剤の製造
成分：本発明の抽出物 １０ｍｇ；とうもろこし澱粉 １００ｍｇ；ラクトース １００ｍｇ；及びステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ。
【００６１】
上記成分を混合した後、通常の錠剤製造方法に従って打錠して錠剤を製造した。
【００６２】
カプセル剤の製造
成分：本発明の抽出物 １０ｍｇ；結晶性セルロース ３ｍｇ；ラクトース １４.８ｍｇ；及びステアリン酸マグネシウム ０.２ｍｇ。
【００６３】
通常のカプセル剤製造方法に従って上記成分を混合しゼラチンカプセルに充電してカプセル剤を製造した。
【００６４】
注射剤の製造
成分：本発明の抽出物 １０ｍｇ；マンニトール １８０ｍｇ；注射用滅菌蒸留水 ２９７４ｍｇ；及びＮａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ ２６ｍｇ。
【００６５】
通常の注射剤製造方法に従って１アンプル当たり（２ｍｌ）上記成分含量になるように注射剤を製造した。
【００６６】
液剤の製造
成分：本発明の抽出物 ２０ｍｇ；異性化糖 １０ｇ；マンニトール ５ｇ；及び精製水適量。
【００６７】
通常の液剤製造方法に従って精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させ、レモン香を適量加えた後、上記成分をまた混合した。それから、精製水を加えて全体体積が１００ｍｌになるようにした後、茶色ビンに充填し滅菌して液剤を製造した。
【００６８】
健康食品の製造
成分：本発明の抽出物 １,０００ｍｇ；ビタミン混合物適量；ビタミンＡアセテート ７０μｇ；ビタミンＥ １.０ｍｇ；ビタミンＢ１ ０.１３ｍｇ；ビタミンＢ２ ０.１５ｍｇ；ビタミンＢ６ ０.５ｍｇ；ビタミンＢ１２ ０.２μｇ；ビタミンＣ １０ｍｇ；ビオチン １０μｇ；ニコチン酸アミド １.７ｍｇ；葉酸 ５０μｇ；パントテン酸カルシウム ０.５ｍｇ；無機質混合物適量；硫酸第一鉄 １.７５ｍｇ；酸化亜鉛 ０.８２ｍｇ；炭酸マグネシウム ２５.３ｍｇ；第一リン酸カリウム １５ｍｇ；第二リン酸カルシウム ５５ｍｇ；クエン酸カリウム ９０ｍｇ；炭酸カルシウム １００ｍｇ；及び塩化マグネシウム ２４.８ｍｇ。
【００６９】
通常の健康食品製造方法に従って上記成分を混合した後、顆粒を製造した。以後、通常の方法に従って錠剤またはカプセル剤形態の健康食品を製造できる。
【００７０】
健康飲料の製造
成分：本発明の抽出物 １,０００ｍｇ；クエン酸 １,０００ｍｇ；オリゴ糖 １００ｇ；梅濃縮液 ２ｇ；タウリン １ｇ；及び精製水適量（全体９００ｍｌ）。
通常の健康飲料製造方法に従って上記成分を混合した後、約１時間に亘って８５℃で撹拌加熱した。以後、作られた溶液を濾過して滅菌された２Ｌの容器に入れ密封滅菌して本発明の健康飲料を製造した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過敏性腸症候群を治療または予防するための薬学組成物、及びこのような薬学組成物の医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群とは、器質的原因がなく、長期間繰り返す腹部膨満感などの腹部違和感及び腹痛と共に、下痢、便秘などの排便習慣の変化を伴う慢性疾患であり、その症状が精神的な要因やストレスによっても悪化する。症状に従って、下痢優位型、便秘優位型、及び痛症優位型に分けて薬物治療をしており、韓国内患者のうち下痢型が３０.８％、便秘型が２４.６％、下痢と便秘を交互に繰り返す交替型が４４.６％を占める。
【０００３】
過敏性腸症候群を治療するための薬物療法は、過敏性腸症候群の全般的な症状を改善する薬剤と、単一症状に対する薬剤とに分けられる。腹痛に対する薬物としては、平滑筋弛緩剤、抗うつ剤、オピオイド作動薬（ｏｐｉｏｉｄ ａｇｏｎｉｓｔ）などが使用され、便秘優位型の過敏性腸症候群に対する薬剤としては、繊維製剤、緩和剤、５‐ＨＴ４作用剤などが使用されており、下痢優位型の過敏性腸症候群に対する薬剤としては、下痢止め剤、５‐ＨＴ３拮抗剤などが使用される。しかし、既存の５‐ＨＴ系列の薬物は副作用があることからその使用が制限されているので、現在まで過敏性腸症候群に対する薬物療法は非常に制限的である。従って、対症療法に対する依存度が高くて満足できないのが現状である［ＴＴ. Ａｓｈｂｕｒｎ外, Ｎａｔ. Ｒｅｖ. Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ., ５（２）, ｐ９９〜１００, ２００６；ＭＪＧ Ｆａｒｔｈｉｎｇ, ＢＭＪ., ３３０, ｐ４２９〜４３０, ２００５；及びＭＪＧ. Ｆａｒｔｈｉｎｇ, Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ. Ｒｅｓ. Ｃｌｉｎ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., １８（４）, ｐ７７３〜７８６, ２００４］。
【０００４】
一方、ニューロキニン受容体（Ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＮＫ）は、ＮＫ１、ＮＫ２及びＮＫ３の亜類型に分けられ、中枢神経系と末梢神経系とに作用する神経ペプチド（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ）である物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）Ｐ（ＳＰ）、ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢなどのタキキニン（ｔａｃｈｙｋｉｎｉｎ）ファミリーが結合する受容体である［Ｓ. Ｈａｒｒｉｓｏｎ外, Ｉｎｔ. Ｊ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ., ３３：ｐ５５５〜５７６, ２００１］。このようなＮＫ受容体は、脳の扁桃体、海馬、視床下部、線条体及び脊髄のような中枢神経系や皮膚、炎症細胞、消化系、呼吸系、心血管系などの末梢神経系に均一に分布しており、腸運動性及び腸過敏性と密接な関連がある［ＪＨ. Ｌａ外, Ｗｏｒｌｄ Ｊ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., １１（２）, ｐ２３７〜２４１, ２００５；ＭＳ Ｋｒａｍｅｒ, Ｓｃｉｅｎｃｅ, ２８１（５３８３） ｐ１６２４〜１６２５. １９９８；及びＧ. Ｊ. Ｓａｎｇｅｒ., Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１３０３〜１３１２, ２００４］。最近、このような生理学的機能に基づいて、過敏性腸症候群の治療剤を見出すための手段として、ＮＫ受容体の拮抗剤に対する研究が活発に行われている［Ｒ. Ａ. Ｄｕｆｆｙ, Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ. Ｅｍｅｒｇ. Ｄｒｕｇｓ, ９（１）, ２００４；Ｍ. Ｃａｍｉｌｌｅｒｉ, Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１２３７〜１２４８, ２００４；Ｇ. Ｊ. Ｓａｎｇｅｒ., Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１３０３〜１３１２, ２００４；及びＡ. Ｌｅｃｃｉ外, Ｂｒ. Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ., １４１, ｐ１２４９〜１２６３, ２００４］。
【０００５】
今まで様々な天然生薬（例えば、木香、白茯苓、当帰、白芍薬、山薬、ゴシュユ、カラタチなど）が過敏性腸症候群に効くと知られているが、過敏性腸症候群の代表的な評価モデルであるＣＲＤ（Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ）モデルなどで有意義な効果を示さなかった。過敏性腸症候群は、様々な症状、すなわち腹痛、腹部膨満感などと共に、便秘、下痢などの排便異常が伴われる慢性疾患であることから、単なる腹痛、下痢、便秘などとは差別化される。従って、過敏性腸症候群の治療効果を評価するためには、上述の多様な症状、すなわち腸過敏性状態における痛症抑制効果、排便異常の改善効果などが総合的に評価されなければならない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明が解決しようとする技術的課題は、過敏性腸症候群の治療または予防に有用な組成物、及び有効な過敏性腸症候群の治療または予防方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記技術的課題を達成するために、本発明は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎（ｒｈｉｚｏｍｅ）抽出物を有効成分として含有することを特徴とする過敏性腸症候群の治療または予防用薬学組成物、及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の治療学的に有効な量を過敏性腸症候群の治療または予防が必要な個体に投与することを含む過敏性腸症候群の治療または予防方法を提供する。
【０００８】
本発明者らは、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物が、内臓痛に対する過敏性を抑制し、ストレスまたは腸過敏性による排便異常の改善効果を現すことを確認し、これを通じて過敏性腸症候群の治療または予防のために有用に使用できることを確認して本発明を完成するに至った。これは、腸神経系（ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）で有害刺激の侵害受容経路（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｐａｔｈｗａｙ）を通じた侵害受容伝達及び膓運動性に関与するＮＫ受容体を阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）することに起因すると考えられるが、本発明はこのようなメカニズムに限定されるのではない。
【０００９】
特に本発明は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａなどのＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ属（ｇｅｎｕｓ）植物のうちＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａの抽出物の過敏性腸症候群の治療効果がはるかに優れているという驚くべき発見に基づく。
【００１０】
本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、本発明が属する分野で通常の知識を持つ者によく知られた抽出方法を利用して製造され得る。すなわち、根茎を陰干しして粉砕した後、抽出溶媒を根茎の１ないし２０倍体積量加えて抽出した後、選択的に（減圧）濃縮、乾燥または精製過程を経て本発明による抽出物を製造できる。より具体的に、上述の方法のように抽出溶媒を加えて有効成分物質を抽出するが、（ａ）冷却コンデンサーを設置して溶媒の蒸発を防止した状態で５０〜１００℃の温度条件で１〜２０時間加熱して抽出するか、（ｂ）５〜３７℃の温度条件で０.５〜１５日間沈積させることによって有効成分を抽出できる。本発明の抽出物は、撹拌抽出、還流冷却抽出、冷浸抽出、超音波抽出、超臨界抽出などの抽出方法を使用して製造できる。
【００１１】
本発明の抽出物製造のための溶媒としては、通常の抽出溶媒、例えば炭素数１〜４の低級アルコールまたは低級アルコールの水溶液；グリセリン、ブチレングリコール、プロピレングリコールなどの多価アルコール；メチルアセテート、エチルアセテート、アセトン、ベンゼン、ヘキサン、ジエチルエーテル、ジクロロメタンなどの炭化水素系溶媒；またはこれらの混合溶媒が使用され得るが、過敏性腸症候群の治療効果面からは、抽出溶媒としてエタノール水溶液（例えば、５〜９５（ｖ／ｖ）％のエタノール水溶液）が望ましく、さらに望ましくは２０〜８０（ｖ／ｖ）％のエタノール水溶液、さらに一層望ましくは３５〜６５（ｖ／ｖ）％のエタノール水溶液を使用して抽出されたＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の過敏性腸症候群の治療効果が、他の溶媒または他の混合比の混合溶媒を使用して抽出された抽出物よりもはるかに卓越している。
【００１２】
本発明の組成物は、組成物の全体重量に対してＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を１〜９０重量％、望ましくは１０〜６０重量％含むことができる。
【００１３】
本発明による過敏性腸症候群の治療または予防用組成物は、医薬品及び機能性食品の形態として製造できる。このような医薬品及び機能性食品は薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含み得る。本発明の組成物は、単独で、或いは何れの便利な運搬体、賦形剤などと共に混合して投与され得、そのような投与剤形は単回投与または反復投与剤形であり得る。
【００１４】
本発明の組成物を含む医薬品または機能性食品は、固形製剤または液状製剤であり得る。固形製剤としては、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、座剤などがあるが、これに限定されるのではない。固形製剤には、賦形剤、着香剤、結合剤、防腐剤、崩解剤、滑沢剤、充填剤などが含まれ得るが、これに限定されるのではない。液状製剤としては、水、プロピレングリコール溶液のような溶液剤、懸濁剤、乳剤などがあるが、これに限定されるのではなく、適当な着色剤、着香剤、安定化剤、粘性化剤などを添加して製造し得る。
【００１５】
例えば、散剤は、本発明のＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物と、ラクトース、澱粉、微結晶セルロースなどの薬剤学的に許容される適当な賦形剤を単純混合することで製造され得る。顆粒剤は、本発明のＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物；薬剤学的に許容される適当な賦形剤；及びポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの薬剤学的に許容される適当な結合剤を混合した後、水、エタノール、イソプロパノールなどの溶媒を利用した湿式顆粒法、または圧縮力を利用した乾式顆粒法を利用して製造され得る。また錠剤は、上記顆粒剤をステアリン酸マグネシウムなどの薬剤学的に許容される適当な滑沢剤と混合した後、打錠機を利用して打錠することで製造され得る。
【００１６】
本発明の組成物は、治療すべき疾患及び個体の状態に従って、経口剤、注射剤（例えば、筋肉注射、腹腔注射、静脈注射、注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、皮下注射、インプラント）、吸入剤、鼻腔内投与剤、膣剤、直腸投与剤、舌下剤、経皮剤、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）剤などで投与され得るが、これに限定されるのではない。投与経路に従って通常使用され非毒性である、薬剤学的に許容される運搬体、添加剤、ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）を含む適した投与ユニット剤形への製剤化ができる。一定時間にわたって薬物を持続的に放出できるデポー（ｄｅｐｏｔ）剤形も本発明の範囲に含まれる。
【００１７】
過敏性腸症候群の治療、予防または改善という本発明の目的を達成するために、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物を毎日約１０ｍｇ／ｋｇないし約２４００ｍｇ／ｋｇ投与することができ、約１００ｍｇ／ｋｇないし約１２００ｍｇ／ｋｇの１日投与用量が望ましい。しかし、上記投与量は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物の精製程度、患者の状態（年齢、性別、体重など）、治療している状態の深刻性などによって多様である。必要に応じては、便宜を図るために１日の総投与量を分け、一日に数回に分けて投与し得る。
【００１８】
本発明による組成物を使用して治療、改善または予防できる過敏性腸症候群は、下痢型過敏性腸症候群、便秘型過敏性腸症候群、または痛症優位型過敏性腸症候群から選択された何れか一つ以上である。
【００１９】
本発明はまた、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物を人間を含む動物に投与することを特徴とするＮＫ２受容体を阻害する方法を提供する。本発明はまた、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物とＮＫ２受容体を発現する細胞とを接触させることを特徴とするＮＫ２受容体を阻害する方法を提供する。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、有効成分としてＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を含有することで過敏性腸症候群の治療または予防に有用な組成物を提供する。本発明はまた、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の治療学的に有効な量を過敏性腸症候群の治療または予防が必要な個体に投与することを含む過敏性腸症候群の治療または予防方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムの結果である。
【図２】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ-Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＴＬＣ）の結果である。
【図３】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物のＣＲＤモデルにおける効果を示すグラフである。
【図４】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の拘束ストレス誘発排便様相モデル（Ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｓｔｒｅｓｓ‐ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｅｃａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｏｕｔｐｕｔ ｍｏｄｅｌ）における効果を示すグラフである。
【図５】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ抽出物とＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｋｏｉｄｚｕｍｉ抽出物とのＣＲＤモデルにおける効果を比較したグラフである。
【図６】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ抽出物とＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物とのＣＲＤモデルにおける効果を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明の理解を助けるために実施例などを挙げて詳しく説明する。しかし、本発明による実施例は多様な形態に変形され得、本発明の範囲が下記実施例に限定されると解釈されてはいけない。本発明の実施例は当業界で平均的な知識を持つ者に本発明をより完全に説明するために提供されるのである。
【００２３】
＜Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の製造＞
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎のエタノール水溶液抽出物を製造した。根茎１００ｇを陰干し後細切し、それぞれ０.７Ｌの３０、５０、７０または９０（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液を加えてよく撹拌しながら４時間に亘って２回還流冷却抽出した。上記抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、これを下記実験の試料として使用した。
【００２４】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の水抽出物は、下記のように製造した。根茎１００ｇを薬湯器（デウン薬湯器、ｍｏｄｅｌ ＤＷＰ５０００Ｍ）に入れ、精製水１.５Ｌを注いだ後一番煎じスイッチを押して１５０分間１次抽出した。その後、同量の精製水を入れ二番煎じスイッチを押して１２０分間２次抽出した。上記抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、下記実験の試料として使用した。
【００２５】
＜抽出物の成分差評価＞
ＨＰＬＣ利用評価
図１は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の水抽出物及び５０％エタノール水溶液抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムの結果である［システム Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ；コラム Ｃ１８ コラム（２５０×４.６ｍｍ ＩＤ, Ｓ‐５μm, １２ｎｍ）；検出波長 ２１０ｎｍ］。水抽出物からは、５０％エタノール水溶液を使用した抽出物とは異なり、Ｒｔ６０分後のピークが確認できなかった。
【００２６】
ＴＬＣ利用評価
図１から見られた抽出物間の成分差を観察するために、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を実施した。それぞれの抽出物にノルマルヘキサンを添加して１００ｍｇ／ｍＬの濃度にした後、１５分間超音波処理（ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）し、不溶性物質は濾過して除去し、これを試験溶液にした。試験溶液をシリカゲル板（Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０F ２５４, Ｍｅｒｃｋ）に点滴し、ノルマルヘキサンとエチルアセテートとを１０:１（ｖ／ｖ）で混合した展開溶媒を使用して展開した。その後、乾燥されたシリカゲル板に現われた斑点（ｓｐｏｔ）の色及び位置を紫外線（約２５４ｎｍ）で比較確認した。肉眼で観察するために、ワニリン硫酸溶液（５％硫酸エタノール溶液、１％ワニリンエタノール溶液）を噴霧し、１１０℃で約５〜１０分間乾燥した。その後、発色させて観察した。その結果を図２に示した。
【００２７】
図２に示すように、水抽出物からは、ＵＶ及び発色試薬を使用した二つの場合に両方とも原点（Ｒｆ＝０）付近での微弱な斑点を除いては特徴的な斑点は観察されなかったが、５０％エタノール水溶液抽出物からは、ＵＶ（２５４ｎｍ）上でＲｆ０〜０.３４付近にかけて多様な斑点が観察され、発色試薬を使用した結果Ｒｆ０.１５付近で藍色と紫色、Ｒｆ０.６２付近でピンク色の特徴的な斑点が確認できた。このような結果は、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を製造するにおいて、抽出溶媒に従って抽出される成分の差が大きいことを示す。
【００２８】
＜ＣＲＤモデルを通じた内臓痛抑制効果の測定＞
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の内臓過敏性抑制効果を評価するために、過敏性腸症候群の薬物評価に使用される直腸拡張テスト（ＣＲＤ）［ＪＨ. Ｌａ外, Ｗｏｒｌｄ Ｊ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., Ｄｅｃ., ９（１２）：ｐ２７９１〜２７９５, ２００３］を下記のように実施した。
【００２９】
体重２５０〜３００ｇのスプラーグドーリーラット（Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）雄を利用した。温度２５℃、湿度５０％、昼‐夜サイクル１２:１２時間に調節された動物室で１ケージ当たり二匹ずつ飼育した。飲水及び飼料は自由に接近できるようにし、５日間適応させた後、結腸炎を誘発した。結腸炎を誘発させる２４時間前に飼料供給を中断し、エーテルを使用して呼吸麻酔後、ゴムカテーテル（ＰＥ ５０）を肛門から内側８ｃｍ長さで直腸を通じて挿入した。
【００３０】
３.５％酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ０.９％ ｓａｌｉｎｅ）１ｍｌをカテーテルを通じて結腸のルーメン（ｌｕｍｅｎ）に投与した後、溶液が漏れないように肛門を塞いだ。３０秒後に０.９％の生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）１ｍｌを同一のカテーテルを通じて結腸のルーメンに入れて酢酸溶液を洗い出した。
【００３１】
実験動物の直腸に長さ２ｃｍのゴム風船を挿入した後、０.１ｍｌから１.０ｍｌまで段階的に風船内に３７℃の水を入れて脹らまし、このとき現れる動物の痛症反応を測定した。ＣＲＤのとき、実験動物の特徴的行動であるＡＷＲ（ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｒｅｆｌｅｘ）を間接的に定量化するために、各姿勢ごとに点数が付与されるＡＷＲスコアで内臓痛反応を確認した。表１によるＡＷＲスコア［Ｅ. Ｄ. Ａｌ‐Ｃｈａｅｒ外, Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ, Ｎｏｖ., １１９（５）, ｐ１２７６〜１２８５. ２０００］を記録した。
【００３２】
【表１】
【００３３】
結腸炎誘発後７日目のラットでＣＲＤを実施して内臓過敏性（ｖｉｓｃｅｒａｌ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）の有無を確認し、これを通じてＩＢＳ類似症状モデル動物を選別した［ＪＨ. Ｌａ 外, Ｗｏｒｌｄ Ｊ. Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ., Ｄｅｃ., ９（１２）：ｐ２７９１〜２７９５, ２００３］。それぞれのＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を０.５％のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）水溶液に溶かして２００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与し、陽性対照群であるアロセトロン（ａｌｏｓｅｔｒｏｎ ＨＣＬ；Ｊｉａｎｇｙｉｎ Ｙｏｎｇｄａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ., Ｌｔｄ.）は２０ｍｇ／ｋｇで経口投与した。その後、約１時間にわたって安定化させた後ＣＲＤ実験を行ってＡＷＲスコアを記録した。ビヒクル投与群、陽性対照群、及び抽出物投与群に対した反応結果を定量化するために、拡張体積（Ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ, ｍｌ）によるＡＷＲスコア及びこれのＡＵＣ（ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｕｒｖｅ）を求めた。統計処理はスチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ ｔ‐ｔｅｓｔ）を利用してｐ＜０.０１（＊＊）またはｐ＜０.００１（＊＊＊）レベルで行い、ビヒクル投与群対比有意性を検定した。その結果を図３に示した（ｍｅａｎ±Ｓ.Ｅ., ｎ≧５）。
【００３４】
図３において、「Ｎｏｒｍａｌ」は結腸炎を誘発させなかった正常群、「Ｖｅｈｉｃｌｅ」は結腸炎を誘発させた実験動物にビヒクルのみを経口投与した群、「Ａｌｏｓｅｔｒｏｎ」は結腸炎を誘発させた実験動物にアロセトロンを２０ｍｇ／ｋｇ経口投与した陽性対照群、「００Ｅ」は水抽出物２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した群、「３０Ｅ」、「５０Ｅ」、「７０Ｅ」及び「９０Ｅ」はそれぞれ３０％、５０％、７０％及び９０％のエタノール抽出物２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した群を示す。
【００３５】
図３に示すように、５０％エタノール水溶液抽出物は、結腸炎によって誘発された腸過敏性状態で現れる内臓痛に対して強力な抑制効果を示し、これは、陽性対照群であるアロセトロン２０ｍｇ／ｋｇ対比同等のレベルであった。これに反して、水抽出物は阻害活性が殆どなく、３０％エタノール抽出物及び９０％エタノール抽出物ではある程度の阻害活性が現れたが、その効果は５０％エタノール水溶液抽出物に比べて非常に弱かった。したがって、本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、３５ないし６５％エタノール水溶液抽出物であることが最も望ましい。
【００３６】
＜拘束ストレスによる排便モデルにおける効果評価＞
上記実験で大腸過敏性抑制効果が最も優れた５０％エタノール抽出物の過敏性腸症候群治療効果を、拘束ストレスによる排便モデル［Ｓ. Ｋｏｂａｙａｓｈｉ外, Ｊｐｎ. Ｊ. Ｐｈａｒｍｃａｏｌ., ８６, ｐ２８１〜２８８, ２００１］を利用して評価した。
【００３７】
体重２５０〜３００ｇのスプラーグドーリーラット雄を利用した。温度２５℃、湿度５０％、昼‐夜サイクル１２:１２時間に調節された動物室で１ケージ当たり二匹ずつ飼育した。飲水及び飼料は自由に接近できるようにし、５日間適応させた後、拘束実験をした。
【００３８】
実験当日拘束ケージ（ｒｅｓｔｒａｉｎｔ ｃａｇｅ）を使用してラットの拘束ストレスによる排便様相（Ｒｅｓｔｒａｉｎｔ‐ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｅｃａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｏｕｔｐｕｔ）を測定した。５０％エタノール水溶液抽出物を０.５％のＣＭＣ水溶液に溶かして３００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与し、陽性対照群であるアロセトロンは２０ｍｇ／ｋｇの濃度に経口投与した後、実験動物を拘束ケージに入れた。このとき、動物が投与によるストレスを受けないように気を付けた。拘束ケージの中で動けなくなれば動物は拘束ストレスを受けるようになり、排便活動を始めるようになる。
【００３９】
便の様相及び個数を６０分間隔で４時間にわたって測定し、その結果を図４に示した。統計処理はスチューデントのｔ検定を利用してｐ＜０.０１（＊＊）またはｐ＜０.００１（＊＊＊）レベルで有意性を検定した。
【００４０】
５０％エタノール抽出物３００ｍｇ／ｋｇ処理群は拘束によって発生する排便数（ｆｅｃａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｏｕｔｐｕｔ）がビヒクル群の７.９個対比５.２個に減少した。これは、拘束ストレスによる排便異常を本発明の抽出物が改善することを意味する。このような結果から、本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、拘束ストレスによる排便異常にその活性を現わすことが確認できた。
【００４１】
＜ニューロキニン受容体の阻害活性評価＞
ニューロキニン受容体を過発現している細胞株（Ｕ‐３７３ＭＧ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）を韓国細胞株銀行から購入した。培養液（ＲＰＭＩ １６４０ ９０％, ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ １０％, ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ １００ＩＵ／ｍｌ, ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ １００μｇ／ｍｌ, Ｌ‐ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ２ｍＭ、及びｓｏｄｉｕｍ ｐｙｒｕｖａｔｅ １.０ｍＭ）を使用して上記細胞株を培養（５％ ＣＯ２）し、０.２５％トリプシン（ｔｒｙｐｓｉｎ）溶液を利用して６〜８日ごとに継代培養した。
【００４２】
細胞数を多様に希釈して２４ウェルプレートにシーディング（ｓｅｅｄｉｎｇ）した。４８時間後にプローブ（ｐｒｏｂｅ）が結合された物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）Ｐ（ＳＰ）を濃度ごとに処理した。反応時間後、蛍光光度計を利用して蛍光プローブが結合されたＳＰ（Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ４８８ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ, Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ, Ｅｕｇｅｎｅ, ＯＲ）が受容体に結合された程度を、細胞数及び濃度ごとの差に従って測定して最適の条件を確立した［ＶＪ. Ｂｅｎｎｅｔｔ 外, ＢＭＣＣｈｅｍ. Ｂｉｏｌ., １：１, ２００１］。受容体に選択的に結合する非ペプチド性の拮抗剤（ｎｏｎ‐ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であるＬ‐７３３０６０（ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ａｆｆｉｎｉｔｙ＝０.８ｎＭ）を対照群として使用した［Ｒ. Ｂａｎｇ 外, Ｊ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ. Ｅｘｐ. Ｔｈｅｒ., ３０５, ｐ３１〜３９, ２００３］。
【００４３】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール水溶液抽出物をＤＭＳＯ（最終濃度０.１％以内）に溶解させた後、蒸留水で希釈した。次いで、メンブレイン（ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ, ０.２２μｍ, Ｍｉｌｌｅｘ‐ＧＶ, Ｕ.Ｓ.Ａ.）を通過させて無菌状態にした後、濃度（１０μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌ）を異ならせて投与した。対照群の細胞にはビヒクル（０.１％ ＤＭＳＯ）処理後、ＳＰの代わりに精製水で処理した。ＳＰのみを処理する群にはビヒクル（０.１％ ＤＭＳＯ）で前処理後、５０ｎＭのＳＰを処理した。抽出物投与群は１時間前に抽出物を処理し、その後５０ｎＭのＳＰを処理した。Ｌ‐７３３０６０投与群は５０ｎＭのＬ‐７３３０６０処理後ＳＰが５０ｎＭになるように処理した。培養器で１時間にわたって反応させた後、無血清媒質で洗浄した。その後、５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ‐１００に細胞を溶かし、黒色の不透明な９６ウェルプレートを利用して蛍光度（Ｅｘ ４８５／Ｅｍ ５２８）を測定した。一回の実験につき各試料の数は２個であり（ｎ＝２）、独立して３回行って、その結果を下記表２に示した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
上記表２のように、５０％エタノール抽出物１０μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌ群においてニューロキニン受容体に対してそれぞれ３３％及び４５％の抑制活性を現わすことが確認できた。上述のような結果から、本発明によるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物は、有害刺激の侵害受容経路を通じた侵害受容伝達及び膓運動性に関与するＮＫ受容体を阻害することによって腸過敏性及び排便異常に対する改善効果を有すると考えられるが、本発明はこのような薬理メカニズムに限定されるのではない。
【００４６】
＜Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの比較評価＞
同属植物であるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの過敏性腸症候群の治療効果を比較評価した。Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎はＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根茎に比べて断面サイズが非常に小さいことから、肉眼でも確実に区別できる同属植物である。
【００４７】
それぞれの根茎１００ｇを陰干し後細切し、それぞれ０.７Ｌの５０％エタノール水溶液を加えてよく撹拌しながら４時間に亘って２回還流冷却抽出した。得られた抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、これを下記実験の試料として使用した。
【００４８】
ＵＰＬＣ比較評価
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａの５０％エタノール水溶液抽出物の成分差をＵＰＬＣクロマトグラム［システム ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ；コラム ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １.８ｕｍ、２.１×１５０ｍｍ；検出波長 ２２０ｎｍ］を利用して評価した。実験結果、原料植物の差に従って抽出される成分が相異なることが分かった。
【００４９】
ＣＲＤモデルを利用した内臓痛抑制効果の比較
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール抽出物（２００ｍｇ／ｋｇ）及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根茎の５０％エタノール抽出物（２００ｍｇ／ｋｇ）の過敏性腸症候群の治療効果をＣＲＤモデルを利用して評価した。その結果を図５に示した。
【００５０】
図５に示すように、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物はビヒクルに対して有意義に腸過敏性状態での内臓痛を抑制する活性を示しているが、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ抽出物は有意義な効果差を示していない。
【００５１】
ＮＫ２受容体の阻害活性比較
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール抽出物及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根茎の５０％エタノール抽出物を利用して、１００μｇ／ｍｌの濃度でＮＫ２受容体に対する阻害活性を比較測定した。実験はＭＤＳ Ｐｈａｒｍａ Ｓｅｒｖｉｃｅｓに依頼して行い、その結果を下記表３に示した。
【００５２】
【表３】
【００５３】
上記表３のように、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ抽出物は阻害活性をほとんど示していないが、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物はＮＫ２受容体に対して５０％以上の阻害効果を示している。
【００５４】
＜Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの比較評価＞
同属植物であるＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａとＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａとの過敏性腸症候群の治療効果を比較評価した。それぞれの根茎１００ｇを陰干し後細切し、それぞれ０.７Ｌの５０％エタノール水溶液を加えてよく撹拌しながら４時間に亘って２回還流冷却抽出した。得られた抽出物を濾過後濃縮して乾燥し、これを下記実験の試料として使用した。
【００５５】
それぞれの抽出物においてＣＲＤモデルを利用した内臓痛抑制効果を比較評価した。Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎の５０％エタノール水溶液抽出物及びＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ根茎の５０％エタノール水溶液抽出物は２００ｍｇ／ｋｇの用量でＡＷＲスコア測定の１時間前に投与され、アロセトロンは２０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与された。その結果を図６に示した。
【００５６】
図６に示すように、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物はビヒクルに対して有意義な腸過敏性抑制活性を示しているが、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ抽出物は有意義な効果差を示していない。
【００５７】
＜製剤化の実施例＞
以下、本発明の抽出物を含有する組成物の製剤化（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を例示的に説明するが、本発明はこのような例によって限定されるのではない。
【００５８】
散剤の製造
成分：本発明の抽出物 ２０ｍｇ；ラクトース １００ｍｇ；及びタルク １０ｍｇ。
【００５９】
上記成分を混合し気密袋に充填して散剤を製造した。
【００６０】
錠剤の製造
成分：本発明の抽出物 １０ｍｇ；とうもろこし澱粉 １００ｍｇ；ラクトース １００ｍｇ；及びステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ。
【００６１】
上記成分を混合した後、通常の錠剤製造方法に従って打錠して錠剤を製造した。
【００６２】
カプセル剤の製造
成分：本発明の抽出物 １０ｍｇ；結晶性セルロース ３ｍｇ；ラクトース １４.８ｍｇ；及びステアリン酸マグネシウム ０.２ｍｇ。
【００６３】
通常のカプセル剤製造方法に従って上記成分を混合しゼラチンカプセルに充電してカプセル剤を製造した。
【００６４】
注射剤の製造
成分：本発明の抽出物 １０ｍｇ；マンニトール １８０ｍｇ；注射用滅菌蒸留水 ２９７４ｍｇ；及びＮａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ ２６ｍｇ。
【００６５】
通常の注射剤製造方法に従って１アンプル当たり（２ｍｌ）上記成分含量になるように注射剤を製造した。
【００６６】
液剤の製造
成分：本発明の抽出物 ２０ｍｇ；異性化糖 １０ｇ；マンニトール ５ｇ；及び精製水適量。
【００６７】
通常の液剤製造方法に従って精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させ、レモン香を適量加えた後、上記成分をまた混合した。それから、精製水を加えて全体体積が１００ｍｌになるようにした後、茶色ビンに充填し滅菌して液剤を製造した。
【００６８】
健康食品の製造
成分：本発明の抽出物 １,０００ｍｇ；ビタミン混合物適量；ビタミンＡアセテート ７０μｇ；ビタミンＥ １.０ｍｇ；ビタミンＢ１ ０.１３ｍｇ；ビタミンＢ２ ０.１５ｍｇ；ビタミンＢ６ ０.５ｍｇ；ビタミンＢ１２ ０.２μｇ；ビタミンＣ １０ｍｇ；ビオチン １０μｇ；ニコチン酸アミド １.７ｍｇ；葉酸 ５０μｇ；パントテン酸カルシウム ０.５ｍｇ；無機質混合物適量；硫酸第一鉄 １.７５ｍｇ；酸化亜鉛 ０.８２ｍｇ；炭酸マグネシウム ２５.３ｍｇ；第一リン酸カリウム １５ｍｇ；第二リン酸カルシウム ５５ｍｇ；クエン酸カリウム ９０ｍｇ；炭酸カルシウム １００ｍｇ；及び塩化マグネシウム ２４.８ｍｇ。
【００６９】
通常の健康食品製造方法に従って上記成分を混合した後、顆粒を製造した。以後、通常の方法に従って錠剤またはカプセル剤形態の健康食品を製造できる。
【００７０】
健康飲料の製造
成分：本発明の抽出物 １,０００ｍｇ；クエン酸 １,０００ｍｇ；オリゴ糖 １００ｇ；梅濃縮液 ２ｇ；タウリン １ｇ；及び精製水適量（全体９００ｍｌ）。
通常の健康飲料製造方法に従って上記成分を混合した後、約１時間に亘って８５℃で撹拌加熱した。以後、作られた溶液を濾過して滅菌された２Ｌの容器に入れ密封滅菌して本発明の健康飲料を製造した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を有効成分として含有することを特徴とする過敏性腸症候群の治療または予防用組成物。
【請求項２】
上記抽出物は、エタノール水溶液抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記エタノール水溶液は、３５ないし６５（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
治療学的に有効な量のＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を過敏性腸症候群の治療または予防が必要な個体に投与することを含む過敏性腸症候群の治療または予防方法。
【請求項５】
上記抽出物は、エタノール水溶液抽出物であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
上記エタノール水溶液は、３５ないし６５（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
過敏性腸症候群を治療または予防するためのＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の医薬用途。
【請求項８】
上記抽出物は、エタノール水溶液抽出物であることを特徴とする請求項７に記載の用途。
【請求項９】
上記エタノール水溶液は、３５ないし６５（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項８に記載の用途。
【請求項１０】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を個体に投与することを含むＮＫ２受容体を阻害する方法。
【請求項１】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を有効成分として含有することを特徴とする過敏性腸症候群の治療または予防用組成物。
【請求項２】
上記抽出物は、エタノール水溶液抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記エタノール水溶液は、３５ないし６５（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
治療学的に有効な量のＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を過敏性腸症候群の治療または予防が必要な個体に投与することを含む過敏性腸症候群の治療または予防方法。
【請求項５】
上記抽出物は、エタノール水溶液抽出物であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
上記エタノール水溶液は、３５ないし６５（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
過敏性腸症候群を治療または予防するためのＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物の医薬用途。
【請求項８】
上記抽出物は、エタノール水溶液抽出物であることを特徴とする請求項７に記載の用途。
【請求項９】
上記エタノール水溶液は、３５ないし６５（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項８に記載の用途。
【請求項１０】
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ根茎抽出物を個体に投与することを含むＮＫ２受容体を阻害する方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１２−５２７４５１（Ｐ２０１２−５２７４５１Ａ）
【公表日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１１７６２（Ｐ２０１２−５１１７６２）
【出願日】平成２２年５月２０日（２０１０．５．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２０１０／００３１９７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３４７６９
【国際公開日】平成２２年１１月２５日（２０１０．１１．２５）
【出願人】（５０９０６０６３７）エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月２０日（２０１０．５．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２０１０／００３１９７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３４７６９
【国際公開日】平成２２年１１月２５日（２０１０．１１．２５）
【出願人】（５０９０６０６３７）エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド (3)
【Ｆターム（参考）】
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