【課題】ＩＦＮ−γ媒介性疾患を処置するための方法を提供する。
【解決手段】ヒトインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）と相互作用するかまたは結合する抗体、ならびにＩＦＮ−γに対する抗体の薬学的に有効な量を投与することによってＩＦＮ−γ媒介性疾患を処置するための方法。ＩＦＮ−γに対する抗体を用いてサンプル中のＩＦＮ−γの量を検出する方法。インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）に結合するモノクローナル抗体およびそれらをコードするポリヌクレオチド。この抗体は、ＩＦＮ−γの生物学的活性の少なくとも１つを阻害または調節し得、そしてＩＦＮ−γ媒介性疾患の影響を緩和するために有用であり得る。上記モノクローナル抗体を産生して細胞培養培地中に分泌し得るハイブリドーマ細胞。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００２年１０月１６日出願の米国仮出願番号６０／４１９，０５７および２００３年６月１７日出願の米国仮出願番号６０／４７９，２４１号の利益を請求する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）に結合するヒトモノクローナル抗体に関する。ＩＦＮ−γによって媒介される疾患を処置するための組成物および方法もまた、記載される。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
インターフェロン（ＩＦＮ）はもともと、宿主細胞のウイルス感染を妨害する能力に基づいて命名された（非特許文献１：ＩｓａａｃｓおよびＬｉｎｄｅｎｍａｎ，１９５７，Ｐｒｏｃ．Ｒ．Ｓｏｃ．１４７：２８〜２６７）。それらの発見以来、インターフェロンファミリーの多数のメンバーが、抗ウイルス防御に加えて、細胞増殖および細胞免疫を含む種々の生物学的役割を有することが特定されている。インターフェロンの型であるＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ωおよびＩＦＮ−γは、Ｉ型インターフェロンであり、Ｉ型ＩＦＮレセプターに結合するが、ＩＦＮ−γはＩＩ型インターフェロンであり、ＩＩ型ＩＦＮレセプターに結合する（非特許文献２：Ｐｆｅｆｆｅｒら、１９９８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２４８９〜２４９９）。
【０００４】
ＩＦＮ−γのシグナル伝達は、少なくとも以下の５つの別個のタンパク質に依存する：ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２（ＩＦＮ−γレセプターのサブユニット）、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２および転写因子ＳＴＡＴ１（非特許文献３：ＳｃｈｉｎｄｌｅｒおよびＤａｒｎｅｌｌ，１９９５，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６４：６２１〜６５１；非特許文献４：Ｂａｃｈら、１９９７，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：５６３〜５９１）。ＩＦＮ−γレセプターは、成熟赤血球を除くほとんどの細胞型で見出される（非特許文献５：ＦａｒｒａｒおよびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，１９９３，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：５７１〜６１１）。Ｊａｋ１タンパク質、Ｊａｋ２タンパク質およびＳＴＡＴ１タンパク質は、ＩＦＮ−γシグナル伝達を媒介する。
【０００５】
ＩＦＮ−γは、種々の生物学的機能（例えば、抗ウイルス応答、細胞増殖、免疫応答および腫瘍抑制）を調節し、そしてＩＦＮ−γは、種々のヒト疾患を媒介し得る。従って、ＩＦＮ−γの生物学的活性を調節し得る因子が当該分野では必要である。
【非特許文献１】ＩｓａａｃｓおよびＬｉｎｄｅｎｍａｎ，１９５７，Ｐｒｏｃ．Ｒ．Ｓｏｃ．１４７：２８〜２６７
【非特許文献２】Ｐｆｅｆｆｅｒら、１９９８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２４８９〜２４９９）
【非特許文献３】ＳｃｈｉｎｄｌｅｒおよびＤａｒｎｅｌｌ，１９９５，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６４：６２１〜６５１
【非特許文献４】Ｂａｃｈら、１９９７，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：５６３〜５９１
【非特許文献５】ＦａｒｒａｒおよびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，１９９３，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：５７１〜６１１
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）に結合するモノクローナル抗体およびそれらをコードするポリヌクレオチドを提供する。この抗体は、ＩＦＮ−γの生物学的活性の少なくとも１つを阻害または調節し得、そしてＩＦＮ−γ媒介性疾患の影響を緩和するために有用であり得る。本発明のモノクローナル抗体を産生して細胞培養培地中に分泌し得るハイブリドーマ細胞もまた、本発明によって提供される。本発明の抗体は、ＩＦＮ−γによって媒介される疾患を処置するために有用であり得る。
【０００７】
特定の局面では、本発明は、抗体（必要に応じて、モノクローナル抗体および／またはヒト抗体）を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、ここでこの重鎖は、配列番号２に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【０００８】
特定の局面では、本発明は、抗体（必要に応じて、モノクローナル抗体）を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含むヒト抗体であり得、この重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２に示されるＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【０００９】
特定の局面では、本発明の抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖の可変領域は、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４もしくは配列番号３０のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。他の局面では、この軽鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号３１のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。さらなる局面では、この重鎖は、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１もしくは配列番号３２のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。なおさらなる局面では、この軽鎖は、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２もしくは配列番号３３のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００１０】
本発明はまた、ＩＦＮ−γに対して特異的に結合する抗体を提供し、ここでこの重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号６に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号８に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００１１】
特定の局面では、本発明はまた、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得、そして／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る、抗体およびその免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００１２】
本発明はさらに、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００１３】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００１４】
本発明はさらに、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００１５】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号３０のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００１６】
本発明はまた、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００１７】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得そして／またはＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００１８】
本発明はまた、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００１９】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号３１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００２０】
本発明はまた、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００２１】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００２２】
本発明はさらに、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００２３】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号１９のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００２４】
本発明はまた、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００２５】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号２１のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００２６】
本発明はまた、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００２７】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００２８】
本発明はまた、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この重鎖は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含み、そしてこの軽鎖は、配列番号３３に示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む。
【００２９】
特定の局面では、本発明は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るかもしくは調節し得、そして／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得る抗体を提供し、この抗体は、重鎖および軽鎖を含み、この重鎖は、重鎖可変領域を含み、この重鎖可変領域は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有する配列を含み、そしてこの軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は、配列番号３３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、この抗体は、ＩＦＮ−γと相互作用する。
【００３０】
本発明はまた、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ抗体、Ｆ（ａｂ）抗体、Ｆ（ａｂ）’抗体および（Ｆａｂ’）_２抗体を提供する。
【００３１】
特定の局面では、本発明は、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号３１もしくは配列番号３３のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む、軽鎖を提供する。
【００３２】
さらに本発明は、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３０もしくは配列番号３２のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントを含む、重鎖を提供する。
【００３３】
本発明はまた、ＩＦＮ−γに特異的に結合する単離されたヒト抗体に関し、この抗体は、（ａ）ヒト重鎖フレームワーク領域、ヒト重鎖ＣＤＲ１領域、ヒト重鎖ＣＤＲ２領域およびヒト重鎖ＣＤＲ３領域；ならびに（ｂ）ヒト軽鎖フレームワーク領域、ヒト軽鎖ＣＤＲ１領域、ヒト軽鎖ＣＤＲ２領域およびヒト軽鎖ＣＤＲ３領域、を含む。特定の局面では、このヒト重鎖ＣＤＲ１領域は、図１２および配列番号３４に示されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）１１１９、１１１８、１１１８＊もしくは１１２１の重鎖ＣＤＲ１領域であり得、そしてこのヒト軽鎖ＣＤＲ１領域は、図１３および配列番号３８、配列番号３９もしくは配列番号４０に示されるｍＡｂ １１１９、１１１８、１１２１＊もしくは１１２１の軽鎖ＣＤＲ１領域であり得る。他の局面では、このヒト重鎖ＣＤＲ２領域は、図１２および配列番号３５に示されるｍＡｂ １１１９、１１１８、１１１８＊もしくは１１２１の重鎖ＣＤＲ２領域であり得、そしてこのヒト軽鎖ＣＤＲ２領域は、図１３および配列番号４１もしくは配列番号４２に示されるｍＡｂ １１１９、１１１８、１１２１＊もしくは１１２１の軽鎖ＣＤＲ２領域であり得る。さらに他の局面では、このヒト重鎖ＣＤＲ３領域は、図１２および配列番号３６または配列番号３７に示されるｍＡｂ １１１９、１１１８、１１１８＊もしくは１１２１の重鎖ＣＤＲ３領域であり、そしてこのヒト軽鎖ＣＤＲ３領域は、図１３および配列番号４３もしくは配列番号４４に示されるｍＡｂ １１１９、１１１８、１１２１＊もしくは１１２１の軽鎖ＣＤＲ３領域である。
【００３４】
さらに、本発明は、ＩＦＮ−γの産生の増大もしくはＩＦＮ−γに対する感受性の増大に関連する疾患、および／またはＩＦＮ−γによって媒介される疾患を処置するための方法を提供し、この方法は、本発明の１つ以上のモノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントの、薬学的に有効な量を、それを必要とする個体に対して投与する工程を包含する。
【００３５】
本発明はまた、生物学的サンプル中のＩＦＮ−γのレベルを決定するための方法を提供し、この方法は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとサンプルとを接触させる工程を包含する。
【００３６】
本発明はまた、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得るか、またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る単離された抗体を提供し、この抗体は、重鎖ＣＤＲ３を含み、この重鎖ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号３６に存在するのと同じ順序かつ間隔で、配列番号３６のアミノ酸のうち少なくとも７つからなる、アミノ酸配列；または（ｂ）配列番号３７を含むアミノ酸配列、であるアミノ酸配列を有する。この抗体はさらに、軽鎖ＣＤＲ３を含み得、この軽鎖ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号４３に存在するのと同じ順序かつ間隔で、配列番号４３のアミノ酸のうち少なくとも８つからなる、アミノ酸配列；または（ｂ）配列番号４４に存在するのと同じ順序かつ間隔で、配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも９つからなるアミノ酸配列、であるアミノ酸配列を有する。この抗体はさらに、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２からなる群より選択される１つ以上のＣＤＲを含み得る。この重鎖ＣＤＲ３は、配列番号３６の少なくともアミノ酸からなってもよく、そして軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号４３の少なくともアミノ酸からなってもよい。
【００３７】
さらに、本発明は、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得るか、そして／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る単離された抗体を提供し、この抗体は、軽鎖ＣＤＲ３を含み、この軽鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列（（ａ）配列番号４３に存在するのと同じ順序かつ間隔で、配列番号４３のアミノ酸のうち少なくとも８つからなるアミノ酸配列；または（ｂ）配列番号４４に存在するのと同じ順序かつ間隔で、配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも９つからなるアミノ酸配列）を有する。この抗体はさらに、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１または配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含み得る。
【００３８】
ＩＦＮ−γに特異的に結合し得るか、そして／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る、本発明の単離された抗体は、少なくとも：（ａ）配列番号３４；（ｂ）配列番号３５；（ｃ）配列番号３６または配列番号３７；（ｄ）配列番号３８、配列番号３９または配列番号４０；（ｅ）配列番号４１または配列番号４２；および（ｆ）配列番号４３または配列番号４４；のアミノ酸配列を有する６つのＣＤＲを含み得る。
【００３９】
ＩＦＮ−γに特異的に結合し得るか、そして／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る、本発明の単離された抗体は、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一のアミノ酸配列（このアミノ酸配列と、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４もしくは配列番号３０との間のアラインメントが、少なくとも５０アミノ酸にまたがる）、および／または配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号３１に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一のアミノ酸配列（このアミノ酸配列と、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号３１との間のアラインメントが、少なくとも５０アミノ酸にまたがる）を含み得る。
【００４０】
別の局面では、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得る、そして／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る本発明の抗体は、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１または配列番号３２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一のアミノ酸配列（このアミノ酸配列と、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１もしくは配列番号３２との間のアラインメントが、少なくとも５０アミノ酸にまたがる）、および／または配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２もしくは配列番号３３に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一のアミノ酸配列（このアミノ酸配列と、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２もしくは配列番号３３との間のアラインメントが、少なくとも５０アミノ酸にまたがる）を含み得る。これらの抗体内の１つのアミノ酸配列は、配列番号３６もしくは配列番号３７のアミノ酸のうち少なくとも５つを、配列番号３６もしくは配列番号３７に存在するのと同じ順序かつ間隔で含み得、そして／またはこれらの抗体内の１つのアミノ酸配列は、配列番号４３もしくは配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも６つを、配列番号４３もしくは配列番号４４に存在するのと同じ順序かつ間隔で含み得る。
【００４１】
１つの局面では、本発明は、単離された完全ヒト抗体であり得る抗体を提供し、この抗体は、ヒトＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節し得る。別の局面では、本発明の抗体は、単離された完全ヒト抗体であり得、カニクイザルおよびマウスのＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害も調節もできない。さらに別の局面では、本発明の完全ヒト抗体は、ヒトおよびチンパンジーのＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節し得るが、カニクイザルおよび／またはマウスのＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害も調節もできない。さらに別の局面では、ヒトＩＦＮ−γの残基１９をアスパラギン酸で置換し、および／または残基２０をプロリンで置換すれば、この抗体によるヒトＩＦＮ−γの生物学的活性の阻害を妨げるかまたは拮抗する。さらに、この抗体は、カニクイザルＩＦＮ−γの残基１９、２０および６５にてそれぞれヒスチジン、セリンおよびセリンで置換された変異バージョンの生物学的活性を阻害し得る。
【００４２】
なおさらなる局面では、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得、および／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る本発明の単離された抗体は、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１または配列番号３２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一のアミノ酸配列を含み得、このアミノ酸配列と、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１もしくは配列番号３２との間のアラインメントは、少なくとも５０アミノ酸にまたがり、そして／または上記抗体は、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２もしくは配列番号３３に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一のアミノ酸配列を含み得、このアミノ酸配列と、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２もしくは配列番号３３との間のアラインメントは、少なくとも５０アミノ酸にまたがる。
【００４３】
さらなる実施形態では、本発明は、ＩＦＮ−γに特異的に結合し得る単離された抗体を含み、この抗体は、（ａ）配列番号６、配列番号１０、配列番号１４もしくは配列番号３０を含むアミノ酸配列、またはこれらの配列の１つのフラグメント、および（ｂ）配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号３１を含むアミノ酸配列、またはこれらの配列の１つのフラグメント、を含む。この抗体は、重鎖および軽鎖を含み得る。この抗体は、（ａ）配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０、および（ｂ）配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１を含み得る。
【００４４】
さらに、本発明のいずれの抗体も、ヒト化抗体であっても完全ヒト抗体であってもよい。
【００４５】
本発明はまた、本明細書に記載される本発明の抗体のいずれかまたはその一部をコードする、ポリヌクレオチド（単離されたポリヌクレオチドを含む）を提供し、この抗体は、ＣＤＲ領域、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ抗体、Ｆ（ａｂ）抗体、Ｆ（ａｂ）’抗体および（Ｆａｂ’）_２抗体を含む。本発明はさらに、このようなポリヌクレオチドを含むベクター、ならびにこのようなポリヌクレオチドおよび／またはベクターを含む宿主細胞（必要に応じて、哺乳動物宿主細胞）を提供する。本発明の抗体は、このような宿主細胞を培養する工程によって生成され得る。
本発明によって、例えば、以下が提供される。
（項目１）
重鎖ＣＤＲ３を含む単離された抗体であって、該重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列、すなわち：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸のうち少なくとも７つを配列番号３６に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含むアミノ酸配列；または
（ｂ）配列番号３７を含むアミノ酸配列；
を有し、ここで該抗体がＩＦＮ−γに特異的に結合し得る、単離された抗体。
（項目２）
軽鎖ＣＤＲ３をさらに含む項目１に記載の抗体であって、該軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列、すなわち：
（ａ）配列番号４３のアミノ酸のうち少なくとも８つを配列番号４３に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含むアミノ酸配列；または
（ｂ）配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも９つを配列番号４４に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含むアミノ酸配列；
を有する、単離された抗体。
（項目３）
軽鎖ＣＤＲ３を含む単離された抗体であって、該軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列、すなわち：
（ａ）配列番号４３のアミノ酸のうち少なくとも８つを配列番号４３に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含むアミノ酸配列；または
（ｂ）配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも９つを配列番号４４に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含むアミノ酸配列；
を有し、ここで該抗体がＩＦＮ−γに特異的に結合し得る、単離された抗体。
（項目４）
ＣＤＲをさらに含む項目３に記載の抗体であって、該ＣＤＲが配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１または配列番号４２のアミノ酸配列を有する抗体。
（項目５）
前記重鎖ＣＤＲ３が配列番号３６のアミノ酸を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３が配列番号４３のアミノ酸を含む項目２に記載の抗体。
（項目６）
配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０に対して少なくとも８０％同一の第一のアミノ酸配列を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の抗体であって、
該第一のアミノ酸配列と配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、抗体。
（項目７）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０に対して９０％同一である、項目６に記載の抗体。
（項目８）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０に対して同一である、項目７に記載の抗体。
（項目９）
配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１に対して少なくとも８０％同一の第二のアミノ酸配列を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の抗体であって、
該第二のアミノ酸配列と配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、抗体。
（項目１０）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１に対して少なくとも９０％同一である、項目９に記載の抗体。
（項目１１）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１に対して同一である、項目１０に記載の抗体。
（項目１２）
配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２に対して少なくとも８０％同一の第一のアミノ酸配列を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の抗体であって、
該第一のアミノ酸配列と配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、抗体。
（項目１３）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２に対して少なくとも９０％同一である、項目１２に記載の抗体。
（項目１４）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１または配列番号３２に対して同一である、項目１３に記載の抗体。
（項目１５）
配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３に対して少なくとも８０％同一の第二のアミノ酸配列を含む、項目１〜５および項目１２〜１４のいずれか１項に記載の抗体であって、
該第二のアミノ酸配列と配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、抗体。
（項目１６）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３に対して少なくとも９０％同一である、項目１５に記載の抗体。
（項目１７）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２または配列番号３３に対して同一である、項目１６に記載の抗体。
（項目１８）
単離された抗体であって、第一のアミノ酸配列、すなわち：
（ａ）配列番号６に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１０に対して少なくとも９３％同一であるアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１４に対して少なくとも９１％同一であるアミノ酸配列；または
（ｄ）配列番号３０に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列；
を含み、
ここで該第一のアミノ酸配列と配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがり、そして
ＩＦＮ−γに特異的に結合可能である単離された抗体。
（項目１９）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号６に対して少なくとも９６％同一であるか、配列番号１０に９５％同一であるか、配列番号１４に対して９５％同一であるか、または配列番号３０に対して９８％同一である、項目１８に記載の抗体。
（項目２０）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０に対して同一である、項目１９に記載の抗体。
（項目２１）
配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１に対して少なくとも８０％同一である第二のアミノ酸配列をさらに含み、該第二のアミノ酸配列と配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、項目１８〜２０のいずれか１項に記載の抗体。
（項目２２）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１に対して少なくとも９０％同一である、項目２１に記載の抗体。
（項目２３）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号３６および／または配列番号３７のアミノ酸のうち少なくとも５つを配列番号３６および／または配列番号３７に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含む、項目１８〜２２のいずれか１項に記載の抗体。
（項目２４）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号４３または配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも６つを、配列番号４３または配列番号４４に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含む、項目２１または２２に記載の抗体。
（項目２５）
単離された抗体であって、第一のアミノ酸配列、すなわち：
（ａ）配列番号８に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１２に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１６に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列；または
（ｄ）配列番号３１に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列；
を含み、
ここで該配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１と該第一のアミノ酸配列との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがり、そして
ＩＦＮ−γに特異的に結合可能である単離された抗体。
（項目２６）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１に対して少なくとも９７％同一である、項目２５に記載の抗体。
（項目２７）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１に対して同一である、項目２６に記載の抗体。
（項目２８）
前記第一のアミノ酸配列が配列番号４３または配列番号４４のアミノ酸のうち少なくとも６つを、配列番号４３または配列番号４４に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含む、項目２５に記載の抗体。
（項目２９）
配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０に対して少なくとも８０％同一である第二のアミノ酸配列をさらに含む、項目２５〜２８のいずれか１項に記載の抗体であって、
該第二のアミノ酸配列と配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、抗体。
（項目３０）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０に対して少なくとも９０％同一である、項目２９に記載の抗体。
（項目３１）
前記第二のアミノ酸配列が配列番号３６および／または配列番号３７のアミノ酸のうち少なくとも５つを配列番号３６および／または配列番号３７に存在するのと同じ順序でかつ間隔で含む、項目２９または３０に記載の抗体。
（項目３２）
単離された完全ヒト抗体であって、
該抗体は、ヒトＩＦＮ−γおよびチンパンジーＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得、そして該抗体はカニクイザルＩＦＮ−γおよびマウスＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害できず、
該抗体は、Ｖ_Ｈ領域、Ｃ_Ｈ１領域、Ｃ_Ｈ２領域およびＣ_Ｈ３領域を含む重鎖、ならびにＶ_Ｌ領域およびＣ_Ｌ領域を含む軽鎖を含む、抗体。
（項目３３）
項目３２に記載の抗体であって、ヒトＩＦＮ−γの残基２０をプロリンで置換することによって、該抗体によるヒトＩＦＮ−γの生物学的活性の阻害を拮抗する抗体。
（項目３４）
項目３２または３３に記載の抗体であって、該抗体はカニクイザルＩＦＮ−γの変異バージョンの生物学的活性を阻害し得、該変異バージョンは１９位にヒスチジン、２０位にセリン、そして６５位にセリンを含む、抗体。
（項目３５）
ヒトＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得る単離された抗体であって、ヒトＩＦＮ−γの残基２０をプロリンで置換することによって、該抗体によるヒトＩＦＮ−γの生物学的活性の阻害を拮抗し、かつ完全ヒト抗体である、単離された抗体。
（項目３６）
軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３を含む単離された抗体であって、
該重鎖ＣＤＲ１は配列番号３４のアミノ酸配列を有し；
該重鎖ＣＤＲ２は配列番号３５のアミノ酸配列を有し；
該重鎖ＣＤＲ３は配列番号３６または配列番号３７のアミノ酸配列を有し；
該軽鎖ＣＤＲ１は配列番号３８、配列番号３９または配列番号４０のアミノ酸配列を有し；
該軽鎖ＣＤＲ２は配列番号４１または配列番号４２のアミノ酸配列を有し；
該軽鎖ＣＤＲ３は配列番号４３または配列番号４４のアミノ酸配列を有し；そして
該抗体はＩＦＮ−γに特異的に結合し得る、単離された抗体。
（項目３７）
項目３６に記載の抗体であって、
前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号３６のアミノ酸配列を有し、
前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号３８のアミノ酸配列を有し、
前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号４１のアミノ酸配列を有し、そして
前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号４３のアミノ酸配列を有する、抗体。
（項目３８）
項目３６または３７に記載の抗体であって、
配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２に対して少なくとも８０％同一の第一のアミノ酸配列であって、ここで該第一のアミノ酸配列と配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがり、該第一のアミノ酸配列が重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、第一のアミノ酸配列、ならびに
配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３に対して少なくとも８０％同一の第二のアミノ酸配列であって、ここで該第二のアミノ酸配列と配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがり、該第二のアミノ酸配列が軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、第二のアミノ酸配列、
を含む抗体。
（項目３９）
項目３８に記載の抗体であって、
第一のアミノ酸配列が、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２に対して少なくとも９０％同一であり、そして、
第二のアミノ酸配列が、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３に対して少なくとも９０％同一である、
抗体。
（項目４０）
項目３９に記載の抗体であって、
前記第一のアミノ酸配列が、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１および／または配列番号３２に対して同一であり、そして、
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２および／または配列番号３３に対して同一である、
抗体。
（項目４１）
項目３６または３７に記載の抗体であって、
配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０に対して少なくとも８０％同一の第一のアミノ酸配列であって、該第一のアミノ酸配列と配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、第一のアミノ酸配列；ならびに
配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１に対して少なくとも８０％同一の第二のアミノ酸配列であって、該第二のアミノ酸配列と配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１との間のアラインメントが少なくとも５０アミノ酸にまたがる、第二のアミノ酸配列、
を含む抗体。
（項目４２）
項目４１に記載の抗体であって、
前記第一のアミノ酸配列が、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４および／または配列番号３０に対して少なくとも９０％同一であり、そして
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６および／または配列番号３１に対して少なくとも９０％同一である、抗体。
（項目４３）
項目４２に記載の抗体であって、
前記第一のアミノ酸配列が、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０に対して同一であり、そして
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１に対して同一である、抗体。
（項目４４）
単離された抗体であって、
（ａ）配列番号６、配列番号１０、配列番号１４もしくは配列番号３０、またはこれらの配列の１つのフラグメントを含むアミノ酸配列、および
（ｂ）配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号３１、またはこれらの配列の１つのフラグメントを含むアミノ酸配列、
を含み、ＩＦＮ−γに特異的に結合可能である、単離された抗体。
（項目４５）
重鎖および軽鎖を含む項目４４に記載の抗体であって、該重鎖は、Ｖ_Ｈ領域、Ｃ_Ｈ１領域、Ｃ_Ｈ２領域およびＣ_Ｈ３領域を含み、該軽鎖はＶ_Ｌ領域およびＣ_Ｌ領域を含む、抗体。
（項目４６）
項目４４または４５に記載の抗体であって、
（ａ）配列番号６、配列番号１０、配列番号１４または配列番号３０、および
（ｂ）配列番号８、配列番号１２、配列番号１６または配列番号３１、
を含む抗体。
（項目４７）
前記抗体が配列番号６および配列番号８を含む、項目４６に記載の抗体。
（項目４８）
前記抗体が単鎖抗体である、項目１〜３１および項目３６〜４７のいずれか１項に記載の抗体。
（項目４９）
前記抗体が完全ヒト抗体である、項目１〜３１および項目３６〜４７のいずれか１項に記載の抗体。
（項目５０）
前記抗体がヒト化抗体である、項目１〜３１および項目３６〜４７のいずれか１項に記載の抗体。
（項目５１）
項目１〜５０のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離されたポリヌクレオチド。
（項目５２）
項目５１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目５３）
項目５２に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目５４）
項目５３に記載の宿主細胞を培養する工程を包含する、抗体の産生方法。
（項目５５）
ＩＦＮ−γ媒介性疾患に罹患している被験体に対して、項目１〜５０のいずれか１項に記載の抗体の治療上有効な量を投与する工程を包含する、方法。
（項目５６）
薬学的に受容可能なキャリア、および項目１〜５０のいずれか１項に記載の抗体の治療上有効な量を含む、組成物。
（項目５７）
ＩＦＮ−γ媒介性疾患に罹患している患者に対して項目５６に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目５８）
前記ＩＦＮ−γ媒介性疾患が、ＡＩＤＳ、若年性関節リウマチを含む関節リウマチ、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症、アジソン病、糖尿病（Ｉ型）、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギヤン・バレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、重症筋無力症、天疱瘡、乾癬、乾癬性関節症、アテローム性動脈硬化症、エリスロポエチン耐性、宿主対移植片病、移植片拒絶、自己免疫性肝炎誘導性肝障害、胆汁性肝硬変、アルコール肝硬変を含むアルコール誘導性肝障害、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎を含む脊椎関節症、甲状腺炎、または脈管炎である、項目５５または５７に記載の方法。
【００４６】
本発明の特に好ましい実施形態は、特定の好ましい実施形態の以下のさらに詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになる。
【００４７】
（詳細な説明）
本明細書中で用いた節の表題は、構成上の目的でしかなく、記載された内容に限定されると解釈されるべきではない。本出願に引用された全ての参考文献は、任意の目的について本明細書中で参考として明確に援用される。
（定義）
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクチン）については標準的な技術を用いてもよい。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、または当該分野で一般に完成されているとおり、または本明細書に記載されているように行なってもよい。前述の技術および手順は、当該分野で周知の従来法によって、そして本明細書を通じて引用および考察されている種々の一般的およびより詳細な参考文献に記載されているとおりに一般に行なうことができる。例えば、任意の目的について参考として本明細書中に援用されている、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２００１、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、第三版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと。特に定義しない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学および医学および薬学的化学に関連して利用される命名法、そしてそれらの実験室手順および技術は、当該分野で周知でありかつ一般に用いられるものである。化学合成、化学分析、製剤、処方および送達、ならびに患者の処置には標準的な技術が用いられ得る。
【００４８】
本開示に関して使用する場合、以下の用語は、他に示さない限り、以下の意味を有すると理解されるべきである。
【００４９】
本明細書において用いる場合、「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノムのポリヌクレオチド、ｃＤＮＡまたは合成起源またはそれらのいくつかの組み合わせを意味しており、その起源のおかげで、この単離されたポリヌクレオチドは、（１）その単離されたポリヌクレオチドが、天然に見出されるポリヌクレオチドの全てまたは一部を伴わないか、（２）天然には連結されないポリヌクレオチドに連結されるか、または（３）より大きい配列の一部として天然には存在しないかのいずれかである。
【００５０】
本明細書において言及される「単離されたタンパク質」という用語は、このタンパク質が、（１）天然に代表的に見出される少なくともいくつかの他のタンパク質を含まないか、（２）同じ供給源由来、例えば同じ種由来の他のタンパク質を本質的に含まないか、（３）異なる種由来の細胞によって発現されるか、（４）天然にはともなわない、少なくとも約５０％のポリヌクレオチド、脂質、炭水化物もしくは他の物質から分離されているか、（５）この「単離されたタンパク質」が天然では会合しているタンパク質の一部と会合していない（共有的な相互作用によっても、または非共有的な相互作用によっても）か、（６）天然には会合していないポリペプチドと作動可能に会合している（共有的な相互作用または非共有的な相互作用によって）か、または（７）天然には存在しないということを意味する。このような単離されたタンパク質は、合成起源のゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ、またはそれらの任意の組み合わせによってコードされ得る。好ましくは、単離されたタンパク質は、その用途（治療上、診断上、予測、研究その他）を妨げる、天然の環境で見出されるタンパク質またはポリペプチドまたは他の混入物を実質的に含まない。
【００５１】
「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、アミノ酸の１つ以上の鎖であって、各々の鎖がペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸を含み、このポリペプチドまたはタンパク質は、非共有結合的におよび／またはペプチド結合によって共有結合的に一緒に連結された複数の鎖を含み得、天然のタンパク質、すなわち、天然に存在する細胞そして詳細には非組み換え細胞によって産生されたタンパク質、または遺伝子操作された細胞かもしくは組み換え細胞によって産生されたタンパク質の配列を有し、そしてこの天然のタンパク質のアミノ酸配列を有する分子、またはこの天然の配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、それに対する付加および／または置換を有する分子を含む鎖を意味する。「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、特に抗ＩＦＮγ抗体、または抗ＩＦＮγ抗体の１つ以上のアミノ酸からの欠失、それに対する付加および／または置換を有する配列を含む。従って、「ポリペプチド」または「タンパク質」は、１つのアミノ酸鎖（「単量体」と命名される）または複数のアミノ酸鎖（「多量体」と命名される）を包含し得る。
【００５２】
「ポリペプチドフラグメント」という用語は、単量体であっても多量体であってもよく、アミノ末端欠失、カルボキシ末端欠失、および／または天然に存在するかもしくは組み換え産生されたポリペプチドの内部欠失もしくは置換を有するポリペプチドをいう。特定の実施形態では、ポリペプチドフラグメントは、少なくとも５〜約５００アミノ酸長のアミノ酸鎖を含んでもよい。特定の実施形態では、フラグメントは少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００または４５０アミノ酸長であることが理解される。特に有用なポリペプチドフラグメントとしては、結合ドメインを含む機能的なドメインが挙げられる。抗ＩＦＮ−γ抗体の場合、有用なフラグメントとしては、ＣＤＲ領域、特に重鎖または軽鎖のＣＤＲ３領域；重鎖または軽鎖の可変ドメイン；抗体鎖の一部または２つのＣＤＲを含むちょうどその可変領域；などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００５３】
本明細書において用いる場合「免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメント」という用語は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の少なくともＣＤＲを含むポリペプチドフラグメントをいう。本発明の免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントは、抗原に結合し得る。好ましい実施形態では、この抗原はレセプターに特異的に結合するリガンドである。これらの実施形態では、本発明の免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントの結合は、そのレセプターに対するリガンドの結合を防止または阻害し、このレセプターに対するリガンド結合から生じる生物学的応答を遮断する。好ましくは、本発明の免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントは、ＩＦＮ−γに特異的に結合する。最も好ましくは、このフラグメントはヒトＩＦＮ−γに特異的に結合するか、そして／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節する。
【００５４】
「天然に存在する」という用語は、本明細書において用いて物体に対して適用する場合、その物体が天然に見出され得るという事実をいう。例えば、天然の供給源から単離可能であり、人によって意図的に改変されていない、生物体（ウイルスを含む）に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチドの配列は、天然に存在する。
【００５５】
「作動可能に連結された」という用語は、その用語が適用された成分が、適切な条件下でその固有の機能を行なうことを可能にする関係であることを意味する。例えば、タンパク質コード配列に「作動可能に連結された」転写制御配列は、このタンパク質コード配列の発現が制御配列の転写活性に適合する条件下で達成されるようにそこに連結されている。
【００５６】
「制御配列」という用語は、本明細書中で用いられる場合、それらが連結されるコード配列の発現、プロセシングまたは細胞内局在化に影響を及ぼし得るポリヌクレオチド配列をいう。このようなコントロール配列の性質は、宿主生物体に依存し得る。特定の実施形態では、原核生物の転写制御配列としては、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列が挙げられ得る。他の特定の実施形態では、真核生物の転写制御配列としては、転写因子の１つまたは複数の認識部位を含むプロモーター、転写エンハンサー配列、転写終結配列およびポリアデニル化配列が挙げられ得る。特定の実施形態では、「制御配列」とは、リーダー配列および／または融合パートナー配列を含んでもよい。
【００５７】
「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書中で言及する場合、少なくとも１０塩基長の一本鎖または二本鎖の核酸ポリマーを意味する。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾型であってもよい。このような修飾としては、ブロモウリジンのような塩基修飾、アラビノシドのようなリボース修飾、ならびに２’，３’−ジデオキシリボースおよびヌクレオチド間連結修飾（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニラデートおよびホスホロアミデート）が挙げられる。「ポリヌクレオチド」という用語は詳細には、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖型を含む。
【００５８】
本明細書で言及する「オリゴヌクレオチド」という用語は、天然に存在する、そして修飾されたヌクレオチドであって、天然に存在するか、および／または天然には存在しないオリゴヌクレオチド連結によって一緒に連結されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般的に一本鎖であり、２００塩基以下の長さを有するメンバーを含むポリヌクレオチドサブセットである。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基長である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築における使用のために、一本鎖であっても二本鎖であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、タンパク質コード配列に関連してセンスオリゴヌクレオチドであってもアンチセンスオリゴヌクレオチドであってもよい。
【００５９】
他に特定しない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は、５’末端であり；二本鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向は、５’方向と呼ばれる。初期ＲＮＡ転写物の５’〜３’付加の方向は、転写方向と呼ばれる；ＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域であって、ＲＮＡ転写物の５’〜５’末端への領域は「上流配列」と呼ばれる；ＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域であって、ＲＮＡ転写物の３’〜３’末端への領域は「下流配列」と呼ばれる。
【００６０】
「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。「修飾されたヌクレオチド」という用語は、修飾または置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。「オリゴヌクレオチド連結」という用語は、オリゴヌクレオチド連鎖、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニラデート、ホスホロアミデートなどを含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、１９８６、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：９０８１；Ｓｔｅｃら、１９８４，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７；Ｓｔｅｉｎら、１９８８，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９；Ｚｏｎら、１９９１，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ６：５３９；Ｚｏｎら、１９９１，ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ ＡＮＤ ＡＮＡＬＯＧＯＵＥＳ：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ、８７〜１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ）；Ｓｔｅｃら、米国特許第５，１５１，５１０号；ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ、１９９０、 Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ９０：５４３（これらの開示は任意の目的のために参考として本明細書に援用される）を参照のこと。オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドまたはそのハイブリダイゼーションの検出を可能にする検出可能な標識を含んでもよい。
【００６１】
「ベクター」という用語は、宿主細胞に対してコード情報を移入するために用いられる任意の分子（例えば、核酸、プラスミドまたはウイルス）をいうために、使用される。
【００６２】
「発現ベクター」という用語は、宿主細胞の形質転換に適切であって、挿入された異種核酸配列の発現を指向および／または制御する核酸配列を含むベクターをいう。発現としては、これらに限定されないが、転写、翻訳およびイントロンが存在する場合、ＲＮＡスプライシングのようなプロセスが挙げられる。
【００６３】
「宿主細胞」という用語は、核酸配列を導入されているか、または核酸配列を導入されることが可能な細胞であって、さらに目的の選択された遺伝子を発現するかまたは発現可能である細胞をいうために使用される。この用語は、親の細胞の子孫を、この子孫が形態学的に、またはもとの親に対する遺伝的作製において同一であるか否かにかわらず、この選択された遺伝子が存在する限り、包含する。
【００６４】
「形質導入」という用語は、通常は、ファージによる１つの細菌から別の細菌への遺伝子の移入をいうために使用される。「形質導入」とはまた、レトロウイルスによる、真核生物細胞配列の獲得および移入をいう。
【００６５】
「トランスフェクション」という用語は、細胞による外因性または内因性のＤＮＡの取り込みをいうために使用され、細胞は、外因性のＤＮＡがその細胞膜の内側に導入されている場合、「トランスフェクト」されている。多数のトランスフェクション技術が当該分野で周知であり、本明細書に開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍら、１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，２００１，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｄａｖｉｓら，１９８６，ＢＡＳＩＣ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；およびＣｈｕら，１９８１，Ｇｅｎｅ １３：１９７を参照のこと。このような技術は、１つ以上の外因性ＤＮＡ部分を適切な宿主細胞に導入するために用いることができる。
【００６６】
「形質転換」という用語は、本明細書中で用いる場合、細胞の遺伝的特徴における変化をいい、細胞が新しいＤＮＡを含むように改変されている場合、形質転換されている。例えば、細胞が天然の状態から遺伝的に改変されている場合、形質転換されている。トランスフェクションまたは形質導入の後、この形質転換ＤＮＡは、細胞の染色体への物理的な組みこみによって細胞のＤＮＡと組み換えられてもよいし、または複製されることのないエピソームエレメントとして一時的に維持されてもよいし、またはプラスミドとして独立して複製されてもよい。細胞の分裂とともにＤＮＡが複製される場合、細胞は安定に形質転換されていると考えられる。
【００６７】
「天然に存在する」または「天然の」という用語は、核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞などのような生物学的物質に関連して用いられる場合、天然に見出され、人によって操作されていない物質をいう。同様に、「天然に存在しない」または「非天然の」とは、本明細書において用いる場合、天然に見出されないか、または人によって構造的に改変されているかもしくは合成されている物質をいう。
【００６８】
「抗原」という用語は、選択的な結合因子、例えば抗体によって結合され得、そしてさらに動物において使用され、その抗原のエピトープに対して結合できる抗体を生成することができる分子または分子の一部をいう。抗原は、１つ以上のエピトープを有してもよい。
【００６９】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞レセプターに特異的に結合し得る任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。特定の実施形態では、エピトープ決定基としては、分子の化学的に活性な表面の基、例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルが挙げられ、特定の実施形態では、特定の三次元構造特徴および／または特異的な荷電特徴を有してもよい。特定の実施形態では、抗体は、それが好ましくはその標的抗原を、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中で認識する場合、抗原に特異的に結合すると言われる。抗体は、平衡解離定数が１０^−７または１０^−８Ｍ以下である場合、抗原に特異的に結合すると言われる。いくつかの実施形態では、平衡解離定数は、１０^−９Ｍ以下または１０^−１０Ｍ以下であってもよい。
【００７０】
本明細書中で用いる場合、第一の配列が、例えば、配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号５６）という１０のアミノ酸からなる場合、別の配列は、７アミノ酸が、その配列におけるアミノ酸と同一であり、それらが配列に存在するのと同じ相対的な位置で存在する場合、７アミノ酸を、この第一の配列にそれが存在するのと「同じ順序かつ間隔で」有する。例えば、配列ＲＡＡＡＡＶＳＳＳＹ（配列番号５７）は、７アミノ酸をＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号５６）に存在するのと同じ順序かつ間隔で有する。対照的に、これは、配列ＲＡＳＳＶＳＳＳＹ（配列番号５８）にはあてはまらない。なぜなら、この配列はＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号５６）に対して内部欠失を含み、これが、この欠失のいずれかの側に３および６アミノ酸を有するからである。従って、この配列は、第一の配列と同じ順序かつ間隔で、最大６アミノ酸を有する。ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号５６）と同じ順序でかつ間隔で７アミノ酸を有する可能性のある最短の可能な配列は、７アミノ酸長、例えば、ＳＱＳＶＳＳＳ（配列番号５９）である。
【００７１】
「同一性」という用語は、当該分野で公知であるとおり、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列の間の関係であって、その配列を比較することによって決定される関係をいう。当該分野では、「同一性」とはまた、核酸分子またはポリペプチドの間の配列の関連性の程度を意味し、場合によっては、２つ以上のヌクレオチドまたは２つ以上のアミノ酸配列の文字列の間の適合によって決定されてもよい。「同一性」とは、特定の数学的モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によってアドレスされるギャップアラインメント（もしあれば）と２つ以上の配列のうちより小さい配列の間での同一性適合の割合を測定する。
【００７２】
「類似性」という用語は、関連する概念に関して当該分野で用いられるが、「同一性」とは対照的に、「類似性」は、同一性適合および保存的置換適合の両方を含む、関連性の指標をいう。２つのポリペプチド配列が、例えば、アミノ酸２０個のうち１０個の同一アミノ酸を有し、この残りが全て非保存的置換であれば、同一性パーセントおよび類似性パーセントは、両方とも５０％である。同じ例で、保存的置換がさらに５つの位置にあれば、同一性パーセントは、５０％のままで、ただし類似性パーセントは、７５％である（１５／２０）。従って、保存的置換がある場合、２つのポリペプチドの間の類似性パーセントは、これらの２つのポリペプチドの間の同一性パーセントよりも高い。
【００７３】
関連の核酸およびポリペプチドの同一性および類似性は、公知の方法によって容易に算出され得る。このような方法としては、ＣＯＭＰＵＴＡＴＩＯＮＡＬ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編），１９８８，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＢＩＯＣＯＭＰＵＴＩＮＧ：ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ ＡＮＤ ＧＥＮＯＭＥ ＰＲＯＪＥＣＴＳ，（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編），１９９３，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＣＯＭＰＵＴＥＲ ＡＮＡＬＹＳＩＳ ＯＦ ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＤＡＴＡ，Ｐａｒｔ １，（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ、Ｈ．Ｇ．編），１９９４，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＡＮＡＬＹＳＩＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＡＮＡＬＹＳＩＳ ＰＲＩＭＥＲ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，編），１９９１，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｃａｒｉｌｌｏら、１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３；ならびにＤｕｒｂｉｎら，１９９８，ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ
ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＡＮＡＬＹＳＩＳ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓに記載される方法が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７４】
同一性を決定するために好ましい方法は、試験された配列の間で最大の適合を得るように設計される。同一性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータープログラムに記載される。２つの配列の間の同一性を決定する好ましいコンピュータープログラム法としては、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，１２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ），ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４１０）が挙げられるがこれらに限定されない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の供給源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ
２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０（前出））から公的に入手可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも、同一性を決定するのに用いることができる。
【００７５】
２つのアミノ酸またはポリヌクレオチド配列の整列のための特定のアラインメントスキームによって、２つの配列の短い領域のみの適合を生じ得、そしてこの短い整列された領域は、２つの全長配列の間で顕著な関係がなくても極めて高い配列同一性を有し得る。従って、特定の実施形態では、選択されたアラインメント法（ＧＡＰプログラム）によって、標的ポリペプチドの少なくとも５０個の連続アミノ酸に及ぶアラインメントを生じる。いくつかの実施形態では、このアラインメントは、標的ポリペプチドのうち少なくとも６０、７０、８０、９０、１００、１１０または１２０アミノ酸を含み得る。ポリヌクレオチドがＧＡＰを用いて整列される場合、このアラインメントは、連続し得る少なくとも約１００、１５０、または２００ヌクレオチドに及び得る。
【００７６】
例えば、コンピューターアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、配列同一性パーセントを決定すべき２つのポリペプチドを、そのそれぞれのアミノ酸の最適適合について整列させる（アルゴリズムによって決定される場合「適合したスパン（ｍａｔｃｈｅｄ ｓｐａｎ）」）。特定の実施形態において、ギャップオープニングペナルティー（これは、３回の平均対角として計算される；ここで、「平均対角（ａｖｅｒａｇｅ ｄｉａｇｏｎａｌ）」は、用いられる比較マトリックスの対角の平均であり；「対角（ｄｉａｇｏｎａｌ）」は、特定の比較マトリックスにより各々の完全アミノ酸適合に対して割り当てられた点数または数である）およびギャップ伸長ペナルティー（通常、ギャップオープニングペナルティーの十分の一）、ならびに比較マトリックス（例えば、ＰＡＭ２５０またはＢＬＯＳＵＭ ６２）をこのアルゴリズムと組み合わせて用いる。特定の実施形態では、標準比較マトリックス（ＰＡＭ ２５０比較マトリックスについては、Ｄａｙｈｏｆｆら，１９７８，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５：３４５〜３５２；ＢＬＯＳＵＭ ６２比較マトリックスについてはＨｅｎｉｋｏｆｆら、１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５〜１０９１９を参照のこと）も、アルゴリズムによって用いられる。
【００７７】
特定の実施形態では、ポリペプチド配列比較についてのパラメーターとしては以下が挙げられる：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５３；
比較マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ ６２（Ｈｅｎｉｋｏｆｆら、１９９２、前出より）；
ギャップペナルティー：１２
ギャップ長ペナルティー：４
類似性閾値：０
ＧＡＰプログラムは、上記のパラメーターとともに有用であり得る。ヌクレオチド配列については、パラメーターは、５０のギャップペナルティーおよび３のギャップ長ペナルティーを含み得、すなわち、各々のギャップにおける各記号について３のペナルティーである。特定の実施形態では、前述のパラメーターは、ＧＡＰアルゴリズムを用いるポリペプチド比較（エンドギャップについてのペナルティーを伴わない）のためのデフォルトパラメーターである。
【００７８】
本明細書において用いる場合、２０個の従来のアミノ酸およびその省略形は従来の用法に従う。ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ−−Ａ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，第２版（Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編），Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、ＭＡ，１９９１を参照のこと（これは、任意の目的のために参考として本明細書に援用される）。２０個の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄアミノ酸）；非天然のアミノ酸、例えば、α−、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の従来とは異なるアミノ酸もまた、本発明のポリペプチドに適切な成分であり得る。従来とは異なるアミノ酸の例としては、以下が挙げられる：４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）。本明細書において用いられるポリペプチドの表記法においては、標準的な用法および慣習に従って、左手側の方向がアミノ末端方向であり、そして右手側の方向がカルボキシ末端方向である。
【００７９】
天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいたクラスに分けることができる：
１）疎水性：ノルロイシン（Ｎｏｒ）、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ，Ｔｈｒ、Ａｓｎ，Ｇｌｎ；
３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
５）鎖の配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００８０】
保存的アミノ酸置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを同じクラスの別のメンバーで交換することを包含し得る。保存的アミノ酸置換基は、天然には存在しないアミノ酸残基を含み得るが、これは代表的には、生物学的な系における合成ではなく化学的なペプチド合成によって取り込まれる。これらとしては、ペプチド模倣物およびアミノ酸部分の他の反転型または逆位型が挙げられる。
【００８１】
非保存的置換としては、これらのクラスのうちの１つのメンバーの別のクラス由来のメンバーへの交換を挙げることができる。このような置換残基は、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域に導入されても、またはその分子の相同でない領域に導入されてもよい。
【００８２】
このような変化を作製する工程において、特定の実施形態に従うと、アミノ酸の疎水性親水性指標が考慮され得る。各々のアミノ酸は、その疎水性および荷電の特徴に基づいて疎水性親水性指標を割り当てられている。それらは、以下である：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）である。
【００８３】
タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する工程における、アミノ酸の疎水性親水性指標の重要性は当該分野で理解されている（例えば、Ｋｙｔｅら，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５〜１３１を参照のこと）。特定のアミノ酸が類似の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸によって置換可能であり、そしてなお類似の生物学的活性を保持することが、公知である。疎水性親水性指標に基づいてこのような変化を作製する際に、特定の実施形態では、その疎水性親水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。特定の実施形態では、疎水性親水性指標が±１以内であるアミノ酸の置換が含まれ、そして特定の実施形態では、±０．５以内である置換が含まれる。
【００８４】
特に、生物学的に機能的なタンパク質またはそれによって作製されるペプチドが、本明細書に開示されるように免疫学的な実施形態における使用を意図される場合、同様なアミノ酸の置換が親水性に基づいて有効になされ得ることもまた、当該分野で理解されている。特定の実施形態では、あるタンパク質の最大の局所平均親水性は、その隣接するアミノ酸の親水性によって支配されるので、そのタンパク質の免疫原性および抗原性と、すなわち生物学的特性と相関する。
【００８５】
以下の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）およびトリプトファン（−３．４）。同様の親水性値に基づく変化を作製する工程において、特定の実施形態では、その親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、特定の実施形態では、疎水性親水性指標が±１以内であるアミノ酸の置換が含まれ、そして特定の実施形態では、±０．５以内である置換が含まれる。親水性に基づいて一次アミノ酸配列からエピトープを同定することができる。これらの領域はまた、「エピトープコア領域（ｅｐｉｔｏｐｉｃ ｃｏｒｅ ｒｅｇｉｏｎｓ」とも呼ばれる。
【００８６】
例示的なアミノ酸置換を表１に示す。
【００８７】
（表１）
【００８８】
【表１−１】

【００８９】
【表１−２】

当業者は、周知の技術を用いて本明細書に示すポリペプチドの適切な改変体を決定することができる。特定の実施形態では、当業者は、活性に重要であるとは考えられない領域を標的することによって活性を破壊することなく変化され得る、分子の適切な領域を同定することができる。他の実施形態では、当業者は、同様のポリペプチドの間で保存されている分子の残基および部分を同定することができる。さらなる実施形態では、生物学的活性のためにまたは構造のために重要であり得る領域でさえ、生物学的活性を破壊することなく、ポリペプチド構造に有害に影響することもなく、保存的なアミノ酸置換に供することができる。
【００９０】
さらに当業者は、活性または構造に重要な類似のポリペプチドにおける残基を同定する構造−機能の研究を概説することができる。このような比較の観点では、当業者は、類似のタンパク質における活性または構造について重要なアミノ酸残基に相当する、タンパク質中のアミノ酸残基の重要性を推測することができる。当業者は、このように推測された重要なアミノ酸残基に対する化学的に類似のアミノ酸置換基を選択することができる。
【００９１】
当業者はまた、三次元構造およびアミノ酸配列を、類似のポリペプチドにおけるその構造に関して解析することができる。このような情報の観点では、当業者は、抗体のアミノ酸残基のアラインメントをその三次元構造に関して推測することができる。特定の実施形態では、当業者は、タンパク質の表面にあることが推定されるアミノ酸残基に対してラジカルな変化を作製しないように選択し得る。なぜなら、このような残基は、他の分子との重要な相互作用に関与し得るからである。さらに、当業者は、各々の所望のアミノ酸残基で単一のアミノ酸置換を含む試験改変体を生成することができる。次いで、この改変体を、当業者に公知の活性アッセイを用いてスクリーニングし得る。このような改変体を用いて、適切な改変体についての情報を集めることができる。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変化によって、活性の破壊、所望されない減少または不適切な活性を生じるということが発見されている場合、このような変化を有する改変体は、回避され得る。言い換えれば、このような慣用的実験から収集された情報に基づいて、当業者は、さらなる置換単独、または他の変異と組み合わせた置換が回避されるべきアミノ酸を容易に決定することができる。
【００９２】
二次構造の予測に対して多数の化学的刊行物がでている。例えば、Ｍｏｕｌｔ，１９９６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４２２〜４２７；Ｃｈｏｕら，１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：２２２〜２４５；Ｃｈｏｕら，１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １１３：２１１〜２２２；Ｃｈｏｕら，１９７８，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４７：４５〜１４８；Ｃｈｏｕら、１９７９，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４７：２５１〜２７６；およびＣｈｏｕら、１９７９，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．２６：３６７〜３８４を参照のこと。さらに、二次構造を予測することを補助するコンピュータープログラムが現在利用可能である。二次構造を予測する１方法は、ホモロジー（相同性）モデリングに基づく。例えば、３０％より大きい配列同一性または４０％より大きい配列類似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質はしばしば、類似の構造的位相学を有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の近年の成長によって、ポリペプチドの構造またはタンパク質の構造内の潜在的な折り畳み回数を含む二次構造の予想性の向上が得られた。Ｈｏｌｍら、１９９９，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．２７：２４４〜２４７を参照のこと。所定のポリペプチドまたはタンパク質においては折り畳み回数は限定されていること、および一旦、構造の臨界数が解明されれば、構造的な予測は劇的にさらに正確になることが示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒら，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７：３６９〜３７６）。
【００９３】
二次構造を予測するさらなる方法としては、「スレッディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７：３７７〜８７；Ｓｉｐｐｌら，１９９６，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４：１５〜１９）、「プロフィール解析」（Ｂｏｗｉｅら，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１６４〜１７０；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，１９９０，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１８３：１４６〜１５９；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：４３５５〜４３５８）および「進化的連鎖（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｌｉｎｋａｇｅ）」（Ｈｏｌｍ，１９９９，前出；およびＢｒｅｎｎｅｒ，１９９７，前出を参照のこと）が挙げられる。
【００９４】
特定の実施形態によれば、アミノ酸置換は：（１）タンパク質分解に対する感受性を低下するか、（２）酸化に対する感受性を低下するか、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更するか、（４）結合親和性を変更するか、そして／または（５）このようなポリペプチドに他の物理化学的特性または機能的特性を付与または改変する、アミノ酸置換である。特定の実施形態によれば、単一または複数のアミノ酸置換（特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列において（特定の実施形態では、分子間接触を形成するドメイン（単数または複数）の外側のポリペプチドの一部において）作製されてもよい。好ましい実施形態では保存的アミノ酸置換は代表的には、親の配列の構造的特徴を実質的に変化しない（例えば、置換アミノ酸は、親の配列に存在するヘリックスを破壊する傾向でも、親の配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を破壊する傾向でもあってはならない）。当該分野で認識されるポリペプチドの二次構造および三次構造の例は、各々が参考として本明細書に援用される、ＰＲＯＴＥＩＮＳ、ＳＴＲＵＣＴＵＲＥＳ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編）、１９８４，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮ ＴＯ ＰＲＯＴＥＩＮ ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ編），１９９１，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；ならびにＴｈｏｒｎｔｏｎら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ
３５４：１０５に記載されている。
【００９５】
ペプチドアナログは一般に、鋳型のペプチドの特性と類似の特性を有する非ペプチド薬として製薬産業において用いられる。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と名付けられる。任意の目的のために参考として本明細書に援用される、Ｆａｕｃｈｅｒｅ、１９８６，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９；ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，１９８５，ＴＩＮＳ ｐ．３９２；ならびにＥｖａｎｓら、１９８７，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９）を参照のこと。このような化合物はしばしば、コンピューターによる分子モデリングの補助によって開発される。治療上有用なペプチドに対して構造的に類似であるペプチド模倣物を用いて、同様の治療効果または予防効果を得ることができる。一般には、ペプチド模倣物は、パラダイム（ｐａｒａｄｉｇｍ）ポリペプチド（すなわち、生化学的な特性または生理学的な活性を有するポリペプチド）、例えばヒト抗体に対して構造的に類似であるが、当該分野で周知の方法によって、以下から選択される連結により必要に応じて置換される１つ以上のペプチド連結を有する：−ＣＨ_２ＮＨ−、−ＣＨ_２Ｓ−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ_２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−、および−ＣＨ_２ＳＯ−。同じタイプのＤアミノ酸を有するコンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の系統的な置換（例えば、Ｌ−リジンの代わりに、Ｄ−リジン）を用いて、特定の実施形態では、さらに安定なペプチドを生成することができる。さらにコンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列のバリエーションを含む拘束されたペプチドは、当該分野で公知の方法（任意の目的のために参考として本明細書に援用される、ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ，１９９２，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７）によって；例えば、ペプチドを環化する分子間ジスルフィド架橋を形成し得る内部システイン残基を付加することによって、生成することができる。
【００９６】
本明細書において用いる場合、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「抗体ペプチド（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｅｐｔｉｄ）（単数または複数）」という用語は、１つ以上のポリペプチド鎖を含む単量体または多量体のタンパク質をいう。抗体は、抗原に特異的に結合し得、そして抗原の生物学的活性を阻害または調節し得るかもしれない。「抗体」とは、以下に記載される、天然に存在する抗体を包含する。特定の実施形態では、抗体は、組み換えＤＮＡ技術によって生成される。さらなる実施形態では、抗体は、天然に存在する抗体の酵素的切断もしくは化学的切断によって、産生される。抗体としては、限定はしないが、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、および単鎖Ｆｖフラグメント、ならびに単鎖抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体が挙げられる。最低限、抗体とは、本明細書において意味する場合、軽鎖または重鎖可変領域の全てまたは一部を含む抗原に特異的に結合し得るポリペプチドを包含する。
【００９７】
可変領域は、フレームワーク領域内（Ｋａｂａｔら（前出）によってフレームワーク領域１−４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４と命名された；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（前出）も参照のこと）に組み込まれた、少なくとも３つの重鎖または軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ、Ｋａｂａｔら、１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤによってＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名された超可変領域としても公知；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜１７；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７〜８８３も参照のこと）を含む。このＣＤＲおよびフレームワークセグメントは、可変領域のアミノ末端に始まって以下のように分散される：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。
【００９８】
抗体可変領域のフレームワーク領域の一次配列は、門を横切って普遍的に保存されている少量の残基を有する。しかし、多くの残基は、門を横切って、ならびに／または種および／もしくは門のなかで、高度に保存されており、そして抗体内の多くの位置が通常アミノ酸の公知の群の１つによって占有される。Ｋａｂａｔら（前出）を参照のこと。あるいは、配列はその予測される三次構造によって抗体として認識され得る。グリーク・キーβバレル（Ｇｒｅｅｋ ｋｅｙ β ｂａｒｒｅｌ）として公知の構造を形成する９つのβ鎖を含む、可変領域の三次構造は、極めてよく保存されており、この構造内のＣＤＲの位置はまた高度に保存されている。例えば、Ｂｏｒｋら，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２：３０９〜２０；ＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒおよびＨｏｏｋ，１９８９，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１〜６３；ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＢａｒｃｌａｙ，１９８８，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３８１〜４０５；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（前出）；Ｋａｂａｔら（前出）を参照のこと。
【００９９】
三次構造は、種々のコンピュータープログラム、例えば、ＧＥＮＥＦＯＬＤ（登録商標）（Ｔｒｉｐｏｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ＧｏｄｚｉｋおよびＳｋｏｌｎｉｋ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１２０９８〜１２１０２；Ｇｏｄｚｉｋら，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：２２７〜３８；Ｇｏｄｚｉｋら，１９９３，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｎｇ．６：８０１〜１０）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）の代表的構造に問い合わせタンパク質配列を重ねるプロテインスレッディングプログラム（ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈｒｅａｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍ）（Ｂｅｒｍａｎら、２０００，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２８：２３５〜２４２；Ｊａｒｏｓｚｅｗｓｋｉら，１９９８，Ｐｒｏｔ Ｓｃｉ ７：１４３１〜１４４０）などによって予測できる。新規なアミノ酸配列を分類するためにＧＥＮＥＦＯＬＤ（登録商標）を用いるために、この配列をプログラムに入れて、これによってＧＥＮＥＦＯＬＤ（登録商標）データベースに存在する以前に公知のタンパク質構造（「鋳型」構造）上にそれがどのように折り畳まれるかを反映する確率スコアを割り当てる。スコア付けについて、ＧＥＮＥＦＯＬＤ（登録商標）は、一次アミノ酸配列の類似性、残基のベリアルパターン、局所相互作用および二次構造比較に依存する。ＧＥＮＥＦＯＬＤ（登録商標）プログラムは、多数の抗体についての解明された構造を含む、タンパク質折り畳みの既存のデータベースにおける全てのテンプレート構造にアミノ酸配列を折り畳む（またはスレッドする）。ＧＥＮＥＦＯＬＤ（登録商標）の出力は、その三次構造が、入力のアミノ酸配列によって考えられる可能性が最も高い、このデータベース内に由来するタンパク質の３つのリストである。この３つのリストは、（ｉ）配列のみ、（ｉｉ）配列と局所高次構造優先度とベリアル（ｂｕｒｉａｌ）期間、および（ｉｉｉ）配列と局所高次構造優先度とベリアル期間と二次構造、に基づいて算出された３つの異なるスコアを含む。各々の場合に、プログラムによって最適アラインメントを決定し、アラインメントのこの程度が偶然によって生じる確率（Ｐ値）を算出して、あり得る最高のスコアである９９９．９（９．９９９×１０^２）のスコアとしてＰ値の逆を報告する。従って、最高のスコアによって、このアラインメントが偶然生じる可能性が最低であることが示される。従ってこれらのスコアは、新規なタンパク質が種々の参照構造にマッチする程度を反映しており、タンパク質の公知のファミリーにおけるメンバーに対して新規なタンパク質を割り当てるのに有用である。例えば、抗体可変領域の構造を有する配列は、合理的に高いＰ値、例えば少なくとも約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００またはそれ以上を有する少なくとも１つの公知の可変領域と整列されることが期待される。
【０１００】
「重鎖」という用語は、ＩＦＮ−γに対する結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有する任意の免疫グロブリンポリペプチドを包含する。「軽鎖」という用語は、ＩＦＮ−γに対する結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有する任意の免疫グロブリンポリペプチドを包含する。このような重鎖または軽鎖は、それが重鎖の場合、軽鎖の、またはそれが軽鎖の場合、重鎖の非存在下でＩＦＮ−γに結合し得るが、その必要はない。全長重鎖は、可変領域ドメイン、Ｖ_Ｈおよび３つの定常領域ドメインＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３を含む。このＶ_Ｈドメインは、ポリペプチドのアミノ末端であり、Ｃ_Ｈ３ドメインは、カルボキシ末端である。「重鎖」という用語は、本明細書において用いる場合、全長重鎖およびそのフラグメントを包含する。全長軽鎖は、可変領域ドメインＶ_Ｌ、および定常領域ドメインＣ_Ｌを含む。重鎖と同様、軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端である。「軽鎖」という用語は、本明細書において用いる場合、全長軽鎖およびそのフラグメントを包含する。Ｆ（ａｂ）フラグメントは、１つの軽鎖および１つの重鎖のＣ_Ｈ１および可変領域からなる。Ｆ（ａｂ）分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成できない。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、１つの軽鎖および１つの重鎖を含み、この重鎖がＣ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインとの間にさらに定常領域を含み、この結果鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖の間で形成されてＦ（ａｂ’）_２分子が形成され得る。このＦｖ領域は、重鎖および軽鎖の両方由来の可変領域を含むが、定常領域は欠く。単鎖抗体は、Ｆ_ｖ分子であり、ここでは重鎖および軽鎖の可変領域が可撓性のリンカーによって接続されて、抗原結合領域を形成する単鎖ポリペプチドを形成している。単鎖抗体は国際特許出願公開番号ＷＯ８８／０１６４９、ならびに米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２６０，２０３号に詳細に考察されている。
【０１０１】
本発明はまた、完全ヒト抗体、ヒト化抗体およびキメラ抗体を包含する。本明細書において意味するように、完全ヒト抗体は、最終的にはヒト由来のポリヌクレオチドのみによってコードされるアミノ酸配列、またはこのような配列に同一であるアミノ酸配列を含む。本明細書において意味するとおり、トランスジェニックマウスにおいて生成されるマウスゲノムに挿入されたヒト免疫グロブリンコードＤＮＡによってコードされる抗体は、完全ヒト抗体である。なぜなら、それらは最終的にヒト由来であるＤＮＡによってコードされるからである。この状況では、ヒト免疫グロブリンコードＤＮＡは、マウス内で（抗体をコードするように）再配列され得、そして体細胞変異がまた生じ得る。マウスにおいてこのような変化を受けている、もともとヒトＤＮＡによってコードされる抗体は、本明細書において意味するとおり、完全ヒト抗体である。このようなトランスジェニックマウスの使用によって、ヒト抗原に対する完全ヒト抗体を選択することが可能になる。事実上、これはほとんどの場合不可能である。なぜなら、自己抗原に対するヒト免疫応答は、正常には生じないからである。当業者は、完全ヒト抗体が治療剤としての使用に、特に慢性疾患を処置するために有利であることを理解する。なぜなら完全ヒト抗体は、それ自体に対する免疫応答を引き起こす可能性が低いからである。対照的に、多くの非ヒト抗体は、ヒトで用いられた場合、それ自体に対する免疫応答を引き起こすことが公知であり、この状況によってヒトでのこのような抗体の慢性使用は勧められない。従って完全ヒト抗体は、ヒトの疾患を含む慢性状態を処置するための抗体を用いるのに直面した長年にわたる問題を解決する。例えば、Ｂｉｌｌｉａｕ，１９８８，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ９：３７〜４０；Ｈｏｒｎｅｆｆら，１９９１，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．５９：８９〜１０３；Ｔｊａｎｄｒａら，１９９０，Ｉｍｍｕｎｏｌ ＆
Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６８：３６７〜７６を参照のこと。従って、完全ヒトＩＦＮγ抗体は特に、慢性ヒトＩＦＮγ媒介性疾患、例えば自己免疫疾患の処置に十分に適している。
【０１０２】
ヒト化抗体では、ＣＤＲを除いて抗体全体が、ヒト由来のポリヌクレオチドでコードされているか、またはそのＣＤＲ内を除いてこのような抗体と同一である。非ヒト生物体に由来する核酸によってコードされるＣＤＲは、ヒト抗体可変領域のβシートフレームワークに接合されて、抗体が作製され、その特異性はこの接合されたＣＤＲによって決定される。このような抗体の作製は、例えば、ＷＯ９２／１１０１８，Ｊｏｎｅｓら，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜２５，Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４〜３６に記載される。この研究によって、抗原結合部位の形成におけるＣＤＲの中心的な重要性が裏付けられる。キメラ抗体は、ヒト定常領域（ヒト由来のポリヌクレオチドによってコードされるか、またはこのようなヒト定常領域に同一である）および非ヒト可変領域を含む。このような抗体の作製は、例えば、米国特許第５，６８１，７２２号に記載される。
【０１０３】
特定の実施形態では、「多価特異的（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）」抗体または「多機能性（ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）」抗体以外の二価抗体は、同一の抗原特異性を有する結合部位を含むことが理解される。
【０１０４】
本発明に従って抗体結合および特異性を評価することにおいて、抗体は、ＩＦＮ−γに特異的に結合するか、そして／または過剰の抗体がＩＦＮ−γに対して結合するそのレセプターの量を（または逆も同様であるが）少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、８５％もしくはそれ以上まで（インビトロ競合結合アッセイで測定した場合）低下させる場合、ＩＦＮ−γのそのレセプターへの結合を実質的に阻害する。特異的に結合する抗体は、ＩＦＮ−γに対する結合について、１０^−８モル以下、状況に応じて１０^−９または１０^−１０モル以下という平衡解離定数を有することが予想され得る。
【０１０５】
治療用途のために、抗ＩＦＮ−γ抗体の重要な特徴は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害し得るか、または調節し得るかである。ＩＦＮ−γは多くの異なる生物学的効果を有し、それは異なる細胞タイプにおいて多くの異なるアッセイで測定できる。抗ＩＦＮ−γ抗体がＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節する能力は、以下の実施例６に記載のＡ５４９アッセイを用いて、またはＩＦＮ−γの存在下で観察される細胞増殖の阻害を逆転する抗体の能力を測定する同様のアッセイを用いて測定することができる。意味のある結果を得るためのアッセイについては、アッセイで用いられる細胞の増殖は、このアッセイで用いられるＩＦＮ−γによって阻害されなければらなない。ヒトＩＦＮ−γは、Ａ５４９細胞を含むいくつかの細胞タイプの増殖を阻害し得る（実施例６および７）。マウスＩＦＮ−γは、ＲＡＷ ２６４．７細胞の増殖を阻害し得る（実施例７）が、Ａ５４９細胞は阻害し得ない。ある抗体が非ヒトＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節する能力を試験する場合特に、Ａ５４９細胞以外の細胞タイプを用いてもよい。なぜなら、非ヒトＩＦＮ−γは、Ａ５４９細胞の増殖を阻害できるかもしれないし、阻害できないかもしれないからである。抗原に特異的に結合する抗体全てが、その正常なレセプターに対する抗原結合をブロックすることが可能なわけではなく、従ってそのレセプターに対する結合の際に抗原の生物学的効果を阻害または調節することが可能なわけでもない。当該分野で公知のとおり、このような効果は、抗原のどの部分が抗体に結合するか、ならびに抗原および抗体（この場合、ＩＦＮ−γおよび抗ＩＦＮ−γ抗体）の絶対的濃度および相対的濃度の両方に依存し得る。本明細書において意味するとおり、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節できると考えられるには、Ａ５４９アッセイ（実施例６）または同様のアッセイにおいて蛍光で測定する場合、ＩＦＮ−γの濃度がある範囲内、例えば、およそＥＣ_８０またはＥＣ_９０であるとき、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％、１００％以上まで、抗体は、ＩＦＮ−γの存在下で観察される細胞増殖の阻害を逆転することができなければならず、この場合その生物学的活性を阻害する因子の効果が容易に明白に成り得る。ＥＣ_８０とは、本明細書において意味する場合、観察されるＩＦＮ−γの最大効果の８０％に必要なＩＦＮ−γの量である。ＩＦＮ−γ濃度がＥＣ_９０を十分上回る場合、阻害因子の効果は、過剰のＩＦＮ−γに起因して明白でないかもしれない。ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節するのに必要な抗体の濃度は、広範に変化し得、そしてこの抗体がＩＦＮ−γにどの程度きつく結合するかに依存し得る。例えば、Ａ５４９アッセイで生物学的活性を阻害または調節するのには、ＩＦＮ−γの１分子あたり１分子以下の抗体で十分であり得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ濃度がおよそＥＣ_５０〜およそＥＣ_９０である場合、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節するためには、およそ２：１、１：１、１：２、１：４、１：６、１：８、１：１０、１：２０、１：４０、１：６０、１：１００または１：５０，０００というＩＦＮ−γ抗体の比が必要であり得る。これらの値の間のＩＦＮ−γ抗体の比も可能である。
【０１０６】
さらなる実施形態では、抗体の改変体としては、改変されたＦｃフラグメントまたは改変された重鎖定常領域を含む抗体を挙げることができる。「結晶化するフラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｔｈａｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｓ）」を意味するＦｃフラグメント、または重鎖定常領域は、抗体に変化した特徴を付与する変異によって改変され得る。例えば、ＢｕｒｔｏｎおよびＷｏｏｆ，１９９２，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５１：１〜８４；ＲａｖｅｔｃｈおよびＢｏｌｌａｎｄ，２００１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２７５〜９０；Ｓｈｅｉｌｄｓら，２００１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１〜６６０４；ＴｅｌｌｅｍａｎおよびＪｕｎｇｈａｎｓ，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １００：２４５〜２５１；Ｍａｄｅｓａｎら，１９９８，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：２０９２〜２１００；その全てが本明細書において参考として援用される）を参照のこと。このような変異としては、置換、付加、欠失、またはその任意の組み合わせを挙げることが可能であり、そして代表的には、本明細書に記載の方法に従って、そして当該分野で公知の方法に従って１つ以上の変異原性オリゴヌクレオチド（単数または複数）を用いて部位特異性変異誘発によって生成される（例えば、本明細書において参考として援用される、Ｍａｎｉａｔｉｓら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、第三版、２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．およびＢｅｒｇｅｒおよびＫｉｍｍｅｌ，ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ，１５２巻、Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．，を参照のこと）。
【０１０７】
特定の実施形態では、抗体改変体としては、グリコシル化部位の数および／またはタイプが親のポリペプチドのアミノ酸配列に比べて変更されているグリコシル化改変体が挙げられる。特定の実施形態では、タンパク質改変体は、天然のタンパク質よりも多いかまたは少ない数のＮ連結グリコシル化部位を含む。Ｎ連結グリコシル化部位は、以下の配列：Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒによって特徴付けられるが、ここでＸと命名されたアミノ酸残基は、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であってもよい。この配列を作製するためのアミノ酸残基の置換によって、Ｎ連結糖鎖の付加のための潜在的な新しい部位が得られる。あるいは、この配列を除く置換は、既存のＮ連結糖鎖を除去する。また、Ｎ連結糖鎖の再配列も得られるが、ここでは１つ以上のＮ連結グリコシル化部位（代表的には、天然に存在するもの）が、除かれて、１つ以上の新規なＮ連結部位が作製される。さらに好ましい抗体改変体としては、１つ以上のシステイン残基が、親のアミノ酸配列に比べて欠失されるかまたは別のアミノ酸（例えば、セリン）で置換されているシステイン改変体が挙げられる。抗体が、例えば、不溶性の封入体の単離後に生物学的に活性な高次構造に再折り畳みされなければならない場合に、システイン改変体が有用であり得る。システイン改変体は一般に、天然のタンパク質よりも少ないシステイン残基を有し、そして代表的には、不対のシステインから生じる相互作用を最小にするために偶数を有する。
【０１０８】
「因子（ａｇｅｎｔ）」という用語は、本明細書において用いる場合、化合物、化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的物質から作製された抽出物を意味する。
【０１０９】
本明細書において用いる場合、「標識（ｌａｂｅｌ）」または「標識された（ｌａｂｅｌｅｄ）」という用語は、例えば、放射線標識されたアミノ酸の組み込み、または蛍光マーカーのポリペプチドもしくは核酸に対する結合、検出可能な活性を有する化学発光マーカーもしくは酵素、または標識されたアビジンによって検出可能であるビオチン部分のポリペプチドに対する結合による、検出可能なマーカー（例えば、とりわけ、光学的または比色定量的な方法によって検出可能である、蛍光マーカー、化学発光マーカーまたは酵素活性などの検出可能なマーカーを好ましくは含むストレプトアビジン）の組み込みをいう。特定の状況では、この標識はまた治療剤であってもよい。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する種々の方法は、当該分野で公知であり、かつ本明細書に開示された方法において有利に用いることができる。ポリペプチドのための標識の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、フルオレセインイソチオシアネートすなわちＦＩＴＣ、ローダミン、またはランタニド蛍光物質）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光標識、ハプテン標識、例えば、ビオチニル基、および二次レポーターによって認識される予め決定されたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、またはエピトープタグ）。特定の実施形態において、標識は、種々の長さのスペーサーアーム（例えば、（ＣＨ_２）_ｎ、ここでｎ＜約２０）によって結合されて、可能性のある立体障害を減らす。
【０１１０】
「生物学的サンプル（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅ）」という用語は、本明細書において用いる場合、生存物または以前に生存していた物由来の任意の量の物質を包含するがこれらに限定されない。このような生存している物としては、ヒト、マウス、サル、ラット、ウサギおよび他の動物が挙げられるがこれらに限定されない。このような物質としては、血液、血清、尿、細胞、器官、組織、骨、骨髄、リンパ節および皮膚が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１１】
「薬学的因子または薬物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｇｅｎｔ ｏｒ ｄｒｕｇ）」という用語は、本明細書において用いる場合、患者に適切に投与される場合、所望の治療効果を誘導し得る化合物または組成物をいう。
【０１１２】
「ＩＦＮ−γ媒介性疾患（ＩＦＮ−γ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ）」という用語は、炎症性疾患、感染性疾患、および自己免疫疾患を包含するがこれらに限定されない。本明細書において用いる場合、「自己免疫疾患」とは、患者の免疫応答が患者自身の構成要素に向かう疾患状態および条件をいう。例えば、ＩＦＮ−γ媒介性疾患としては、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、若年性関節リウマチを含む関節リウマチ、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症、アジソン病、糖尿病（Ｉ型）、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、重症筋無力症、天疱瘡、乾癬、乾癬性関節症、アテローム性動脈硬化症、エリスロポエチン耐性、宿主対移植片病、移植片拒絶、自己免疫性肝炎誘導性肝障害、胆汁性肝硬変、アルコール肝硬変を含むアルコール誘導性肝障害、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎を含む脊椎関節症、甲状腺炎、および脈管炎が挙げられるがこれらに限定されない。「ＩＦＮ−γ媒介性疾患」という用語はまた、ＩＦＮ−γのレベルの増大またはＩＦＮ−γの感度の増大に関連する任意の病状を包含する。
【０１１３】
自己免疫疾患を含むＩＦＮ−γ媒介性疾患の処置は、障害の少なくとも１つの症状の緩和、疾患の重篤度の低下、または処置された状態の後ある程度の頻度で生じるさらに重篤な疾患への進行の遅延もしくは予防を含む。処置とは疾患が完全に治癒することを意味する必要はない。有用な治療剤とは単に、ある疾患の重篤度を低下するか、この疾患またはその処置に伴う症状（単数または複数）の重篤度を低下するか、または患者のクオリティーオブライフを改善するか、または処置された状態の後、ある程度の頻度で生じ得るさらに重篤な疾患の発現を遅延することを必要とする。例えば、この疾患が関節リウマチである場合、治療剤は関節の腫脹を軽減するか、罹患する関節の数を減らすか、または骨の損失を遅延もしくは阻害し得る。ＳＬＥ患者は、皮膚病変、熱、衰弱、関節炎、リンパ節腫脹、胸膜炎、心外膜炎および／または貧血などのような症状を有し得る。このような症状は、例えば、視覚的観察、写真、体温測定、握力もしくは関節サイズ、および／または赤血球の濃度を決定するための血液の顕微鏡検査を含む任意の多数の従来の技術によって評価できる。本発明は、ＩＦＮ−γ媒介性疾患に罹患した患者に対して本発明のＩＦＮ−γ抗体を、特定の障害の重篤度もしくはこの障害によって生じる症状の重篤度を反映する指標の規準を上回って改善の維持を誘導するか、またはいくつかのもしくは全ての場合には処置される条件に伴うさらに重篤な疾患の発現を遅延もしくは予防するのに十分な量および時間で投与する工程を包含する、処置の方法を包含する。本発明は、ＩＦＮ−γ抗体を用いた処置の前、後、および／または間の他の治療剤を用いた可能性のある処置を除外しない。
【０１１４】
本明細書において用いる場合、「実質的に純粋な（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｐｕｒｅ）」または「実質的に精製された（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」とは、化合物または種が存在する主な種であるである（すなわち、モル基準では、この組成物における任意の他の個々の種よりもそれが豊富である）ことを意味する。特定の実施形態では、実質的に精製された画分とは、この種が存在する全ての高分子種のうちの少なくとも約５０パーセント（モル基準で）を含む組成物である。特定の実施形態では、実質的に純粋な組成物は、その組成物中に存在する全ての高分子種のうち約８０％、８５％、９０％、９５％または９９％より多い。特定の実施形態では、この種は、本質的に均一まで精製され（混入する種は、従来の検出法ではこの組成物中で検出できない）、ここでこの組成物は本質的に、単一の高分子種からなる。
【０１１５】
「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」という用語は、ヒトおよび獣医学の被験体を包含する。
【０１１６】
文脈が他を要することがない限り、単数の用語は複数を包含する。
【０１１７】
ＩＦＮ−γは、ウイルス感染から身体を防御することおよび免疫応答のいくつかの局面を調節することを含む、複数の機能を有するサイトカインであり、ＩＦＮ−γ活性の増大は、いくつかの生理学的な条件に寄与し得る。本発明の特定の実施形態によれば、ＩＦＮ−γに対する抗体は、上述のものを含むがそれらに限定されない、ＩＦＮ−γ媒介性疾患を処置するために用いられ得る。
【０１１８】
本発明の１局面では、ヒトＩＦＮ−γに対して惹起され、かつそれに対する特異的な結合のための生物学的および免疫学的な特異性を有する完全ヒトモノクローナル抗体が提供される。このような抗体に含まれる可変領域（配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号３０および配列番号３１）は、このような抗体の完全な重鎖および軽鎖（配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、および配列番号２２）、そして特定のＣＤＲ（重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３；配列番号３４〜配列番号４４）を含む抗体は、本発明に包含される。本発明のこの局面の特定の実施形態は、本発明によって提供される重鎖および軽鎖の、ＣＤＲ、特にＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に対応する配列である。さらに、本発明は、本明細書に開示されるＣＤＲ３配列（配列番号３６、配列番号３７、配列番号４３および／または配列番号４４）を含む抗体を包含するが、この配列はまた、任意の可変領域配列または本明細書に開示される完全な重鎖もしくは軽鎖の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一である配列を含んでもよく、この抗体は、ＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害または調節し得る。
【０１１９】
別の局面では、本発明は、本発明の抗体をコードする単離された核酸またはポリヌクレオチドを提供する。本発明の抗体は、ＩＦＮ−γに特異的に結合するか、および／またはＩＦＮ−γの生物学的活性を阻害もしくは調節し得る。本発明により特異的に包含されるのは、アミノ酸配列である配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号３２、配列番号３３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号３０、配列番号３１および／またはこれらの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一性である配列をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、ここで上記の配列と試験配列との間のアラインメントは、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００アミノ酸にまたがる。本発明はさらに、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７および／または配列番号４８を含むポリヌクレオチドであって、ＩＦＮ−γに特異的に結合するかおよび／またはその生物学的活性を阻害もしくは調節し得る抗体をコードするポリヌクレオチドを提供する。さらに、本発明は、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号３０、配列番号３１、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号３２もしくは配列番号３３に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは約９９％同一であるポリヌクレオチドを包含するが、ここでこれらのポリヌクレオチドの各々によって部分的にコードされる抗体は、ＩＦＮ−γの生物学的を阻害もしくは調節するか、および／またはＩＦＮ−γに特異的に結合し得、すぐ上に挙げられたヌクレオチド配列と試験配列との間のアラインメントは、少なくとも１００、１５０、または２００ヌクレオチドにまたがる。
【０１２０】
表２には、その配列識別番号に関連付けて配列の簡単な説明を提供する。
【０１２１】
（表２）
【０１２２】
【表２−１】

【０１２３】
【表２−２】

さらに別の局面では、本発明は、本発明の免疫グロブリン分子および抗体、必要に応じてモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマおよび細胞株を提供する。さらなる局面では、本発明の免疫グロブリン分子または抗体を発現および／または分泌する、ハイブリドーマ細胞または細胞株由来の細胞は、患者に移植され得、これによって本発明の抗体またはその免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントは、患者において発現および／または分泌されて、これによってＩＦＮ−γ活性が阻害または調節される。
【０１２４】
本発明はまた、生物学的におよび免疫学的に精製された抗体の調製物であって、好ましくはヒトＩＦＮ−γに対して惹起されて、それに対して特異的に結合するための生物学的および免疫学的特異性を有するモノクローナル抗体の調製物を提供する。
【０１２５】
酵母人工染色体（ＹＡＣ）におけるメガベースサイズのヒト遺伝子座をクローニングおよび再構築して、マウス生殖系列にそれらを導入する能力によって、極めて大きいかまたはおおまかにマッピングされた遺伝子座の機能的成分を解明し、そしてヒト疾患の有用なモデルを生成するための有利なアプローチの開発が可能になる。さらに、ヒトの等価な産物によるマウス遺伝子座の置換のためのこのような技術の利用によって、発達の間のヒト遺伝子産物の発現および調節、他の系との関連、ならびに疾患誘導および進行におけるその関与に対する固有の洞察が得られる。
【０１２６】
このようなストラテジーの重要な実際的な適用は、内因性Ｉｇ遺伝子が不活性化されているマウスへのヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座の導入によるマウス体液性免疫系の変更である。国際出願番号ＷＯ９３／１２２２７。この系によって抗体のプログラムされた発現およびアセンブリの背景にある機構、ならびにＢ細胞発達におけるその役割を研究する機会が得られる。さらに、このようなストラテジーによって、完全ヒトモノクローナル抗体（ＭＡｂ）の産生の供給源が得られる。完全ヒトＭＡｂは、マウスまたはマウス由来ＭＡｂに内在する免疫原性およびアレルギー性の応答を最小化すること、それによって投与された抗体の有効性および安全性を増大することが期待される。完全ヒト抗体を、慢性および再発性のヒト疾患、例えば、変形性関節炎、関節リウマチおよび他の炎症性状態の処置において用いることが可能であり、その処置には抗体投与を反復することが必要である。従って、本発明の抗ＩＦＮ−γ抗体の１つの特定の利点は、この抗体が完全ヒト抗体であり、マウス抗ヒト抗体または他の以前に記載された不完全ヒト抗体もしくは非ヒト種由来の非ヒト抗体と一般に関連する有害反応を最小限にしながら非急性の方式で患者に投与できるということである。
【０１２７】
本明細書に記載される方法を用いて、当業者は、ヒトＩｇ遺伝子座の大きいフラグメントを用いてマウス抗体産生において欠損するマウス系統を操作することが可能であり、その結果このようなマウスは、マウス抗体の非存在下でヒト抗体を生成する。それより大きいヒトＩｇフラグメントは、可変性の大きい遺伝子多様性、ならびに抗体産生および発現の適切な調節を保存し得る。抗体多様化および選択ならびにヒト抗体に対する免疫学的寛容の欠失のためにマウス細胞機構を開発することによって、これらのマウス系統において再生されたヒト抗体レパートリーにより、ヒト抗原を含む目的の任意の抗原に対する高親和性抗体を得る。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭＡｂを生成および選択することができる。
【０１２８】
特定の実施形態では、当業者は、ヒト以外の種由来の定常領域をヒト可変領域（単数または複数）とともにこのようなマウスで用いてキメラ抗体を産生することができる。
（天然に存在する抗体構築物）
最も天然に存在する抗体構築物単位は代表的には、四量体を含む。各々のこのような四量体は代表的には、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各々の対が１つの全長「軽」鎖（代表的には約２５ｋＤａの分子量を有する）および１つの全長「重」鎖（代表的には約５０〜７０ｋＤａの分子量を有する）を有する。各々の軽鎖および重鎖のアミノ末端部分は代表的には、代表的に抗原認識を担う、約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各々の鎖のカルボキシ末端部分は代表的には、エフェクター機能を担う、定常領域を規定する。ヒト軽鎖は代表的には、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。重鎖は代表的には、μ、δ、γ、α、またはεとして分類され、そしてそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が挙げられるがこれらに限定されないいくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２が挙げられるがこれらに限定されないサブクラスを有する。ＩｇＡは同様に、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２が挙げられるがこれらに限定されないサブクラスに分割される。全長の軽鎖および重鎖内では、代表的には可変領域および定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、ここでこの重鎖はまた、約１０アミノ酸より多い「Ｄ」領域を含む。例えば、ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ 第７章、第２版（Ｐａｕｌ、Ｗ．編、１９８９，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（全ての目的のためにその全体が参考として援用される））を参照のこと。各々の軽鎖／重鎖対の可変領域は、代表的には、抗体結合部位を形成する。
【０１２９】
ラクダおよびラマに見出されているいくつかの天然に存在する抗体は、２つの重鎖からなる二量体であって、軽鎖を含まない。Ｍｕｌｄｅｒｍａｎｓら，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７〜３０２；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５〜９０。本発明は、ＩＦＮ−γに結合するか、および／またはその生物学的活性を阻害し得る２つの重鎖からなる二量体抗体を包含する。ラクダ抗体の結晶学的研究によって、１９アミノ酸長を有する重鎖ＣＤＲ３が抗原と相互作用して２つの他の超可変領域をカバーする表面を形成することが明らかになっている。Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（前出）。従ってＣＤＲ３は、二量体ラクダ抗体において、そしてさらに代表的な四量体抗体において、抗原結合に重要である。
【０１３０】
可変領域は代表的には、相補性決定領域すなわちＣＤＲとも呼ばれる、３つの超可変領域に連結された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的な構造を示す。各々の対の２つの鎖由来のＣＤＲは代表的には、フレームワーク領域内に包埋され、これが特定のエピトープに結合し得る。Ｎ末端からＣ末端へと、軽鎖および重鎖の可変領域はともに、代表的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各々のドメインに対するアミノ酸の割り当ては代表的には、以下にさらに詳細に説明されているように、Ｋａｂａｔらの定義に従っている。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ）；またＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７；Ｃｈｏｔｈｉａら，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８〜８８３も参照のこと。ＣＤＲは、抗原結合のための主な表面接触ポイントを構成する。例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（前出）を参照のこと。さらに軽鎖のＣＤＲ３および特に重鎖のＣＤＲ３は、軽鎖および重鎖の可変領域内の抗原結合における最も重要な決定基を構成し得る。例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（前出）；Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏら（２００１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１０：６０３〜１５；ＸｕおよびＤａｖｉｓ（２０００），Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３（１）：３７〜４５；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（２００１），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２８）：２６２８５〜９０；ならびにＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ（２００１），Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，７４（４）：２７７〜３０２を参照のこと。いくつかの抗体では、重鎖ＣＤＲ３は、抗原と抗体との間の接触の主な領域を構成するようである。Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（前出）。ＣＤＲ３のみを変化させるインビトロ選択スキームを用いることによって、抗体の結合特性を変化させることができる。Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ（前出）；Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏ（前出）。
【０１３１】
ＣＤＲは、以下の方法で重鎖可変領域配列に配置されてもよい。ＣＤＲ１は、成熟抗体のおよそ３１残基で開始して、通常は約５〜７アミノ酸長であり、そしてこれには、ほぼ常にＣｙｓ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ（配列番号４８）が先行している（ここで、「Ｘｘｘ」は任意のアミノ酸である）。重鎖ＣＤＲ１の後ろの残基はほぼ常にトリプトファン、しばしばＴｙｐ−Ｖａｌ，Ｔｒｐ−ＩｌｅまたはＴｒｐ−Ａｌａである。ＣＤＲ１の最後の残基とＣＤＲ２の最初の残基との間に１４個のアミノ酸がほぼ常にあり、そしてＣＤＲ２は代表的には１６〜１９個のアミノ酸を含む。ＣＤＲ２には、その直前にＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（配列番号４９）が先行してもよく、そしてその直後にＬｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａが続く。他のアミノ酸は、ＣＤＲ２に先行しても続いてもよい。ＣＤＲ２の最後の残基とＣＤＲ３の最初の残基との間に３２個のアミノ酸がほぼ常にあり、そしてＣＤＲ３は、約３〜２５残基長であり得る。Ｃｙｓ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘはほぼ常に、ＣＤＲ３に先行しており、そしてＴｒｐ−Ｇｌｙ−Ｘｘｘ−Ｇｌｙ（配列番号５０）がほぼ常にＣＤＲ３に続く。
【０１３２】
軽鎖ＣＤＲは、以下の方法で軽鎖配列に配置されてもよい。ＣＤＲ１は、成熟抗体のおよそ２４残基で開始して、通常は約１０〜１７残基長であり、そしてこれには、ほぼ常にＣｙｓが先行している。ＣＤＲ１の最終残基とＣＤＲ２の最初の残基との間にはほぼ常に１５アミノ酸があり、ＣＤＲ２はほぼ常に７残基長である。ＣＤＲ２は代表的には、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−ＬｙｓまたはＩｌｅ−Ｐｈｅが先行する。軽鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３との間にはほぼ常に３２個の残基があり、そしてＣＤＲ３は通常は約７〜１０アミノ酸長である。ＣＤＲ３にはほぼ常にＣｙｓが先行しており、そして通常はＰｈｅ−Ｇｌｙ−Ｘｘｘ−Ｇｌｙ（配列番号５１）が続く。
【０１３３】
ＣＤＲを囲むフレームワーク領域の長さが典型的であるものとは異なる長さを生む挿入を含んでもまたは欠失を含んでもよいことを当業者は理解する。本明細書において意味されるとおり、重鎖フレームワーク領域の長さは、以下の範囲内におさまる：ＦＲ１、０〜４１アミノ酸；ＦＲ２、５〜２４アミノ酸；ＦＲ３、１３〜４２アミノ酸；およびＦＲ４、０〜２１アミノ酸。さらに、本発明は、軽鎖フレームワーク領域の長さが以下の範囲内におさまることを意図する：ＦＲ１、６〜３５アミノ酸；ＦＲ２、４〜２５アミノ酸；ＦＲ３、２〜４２アミノ酸；およびＦＲ４、０〜２３アミノ酸。
【０１３４】
天然に存在する抗体は代表的には、タンパク質分泌のための細胞経路に抗体を指向し、かつ成熟抗体には存在しない、シグナル配列を含む。本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドは、下記のように、天然に存在するシグナル配列、または異種のシグナル配列をコードしてもよい。
（抗体のインビトロ成熟）
抗体は、抗原についてのさらに高い親和性またはさらに低い解離定数のような特性の変化した抗体を生成するためにインビトロで成熟され得る。ＣＤＲ、特にＣＤＲ３内の残基のみのバリエーションによって、同じ抗原に結合するがさらに親和性の大きい変化した抗体が生じ得る。例えば、Ｓｃｈｉｅｒら，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１〜６７；Ｙａｎｇら，１９９５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５４：３９２〜４０３を参照のこと。本発明は、抗体が有利な特性を有するように選択することができる、種々のインビトロ選択スキーム、例えば、アフィニティー成熟および／またはチェーンシャッフリング（Ｋａｎｇら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：１１１２０〜２３）、またはＤＮＡシャッフリング（Ｓｔｅｍｍｅｒ，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ
３７０：３８９〜３９１）によって作製された抗体を包含する。多くのスキームでは、公知の抗体を特定の位置、しばしばＣＤＲ内でインビトロで無作為化して、選択プロセスに供して、これによって所望の特性、例えば特定の抗原に対する親和性の増大を有する抗体を単離することができる。例えば、ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｕｃｋｅｎら，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１０：５９１〜６０１；Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏら，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１０：６０３〜１５；Ｙａｎｇら，１９９５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５４：３９２〜４０３；Ｓｃｈｉｅｒら，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１〜６７を参照のこと。代表的には、このような変異された抗体は、突然変異誘発および選択工程のデザインに依存して、１つ以上のＣＤＲにいくつかの変更された残基を含んでもよい。例えば、ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｕｃｋｅｎら（前出）を参照のこと。
（二重特異性または二機能性抗体）
二重特異性抗体または二機能性抗体は代表的には、２つの異なる重鎖／軽鎖の対および２つの異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、限定はしないが、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む種々の方法によって生成することができる。例えば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉおよびＬａｃｈｍａｎｎ，１９９０ Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５〜３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３を参照のこと。（抗体の調製）
本発明は、ヒトＩＦＮ−γに特異的に結合する抗体を提供する。これらの抗体は、全長ＩＦＮ−γまたはそのフラグメントを用いた免疫によって産生され得る。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であっても、もしくはモノクローナル抗体であってもよく、そして／または組み換え抗体であってもよい。特定の実施形態では、本発明の完全ヒト抗体は、例えば、ヒト抗体を産生し得るトランスジェニック動物の免疫によって調製される（例えば、国際特許出願公開ＷＯ ９３／１２２２７を参照のこと）。
【０１３５】
本発明の抗ＩＦＮγ抗体の軽鎖および重鎖の可変領域のＣＤＲは、同じ種または別の種由来のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植され得る。特定の実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体の軽鎖および重鎖の可変領域のＣＤＲは、「ヒト化」抗体を作製するためにコンセンサスなヒトＦＲに移植されてもよい。このようなヒト化抗体は、本発明によって包含される。コンセンサスヒトＦＲを作製するために、いくつかのヒト重鎖または軽鎖のアミノ酸配列由来のＦＲを、整列させてコンセンサスアミノ酸配列を同定する。抗ＩＦＮγ抗体重鎖または軽鎖のＦＲは、異なる重鎖または軽鎖由来のＦＲで置換されてもよい。抗ＩＦＮγ抗体の重鎖および軽鎖のＦＲにおけるまれなアミノ酸は代表的には、置換されないが、残りのＦＲアミノ酸は置換されてもよい。まれなアミノ酸とは、ＦＲにおいて通常はみいだされない位置にある特定のアミノ酸である。本発明の抗ＩＦＮγ抗体由来の移植された可変領域は、抗ＩＦＮγ抗体のもとの定常領域と異なる定常領域とともに用いられてもよい。あるいは、移植された可変領域は、単鎖Ｆｖ抗体の一部である。ＣＤＲ移植は、任意の目的のために参考として本明細書に援用される、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号および同第５，５３０，１０１号に記載されている。
【０１３６】
本発明の抗体は、マウスの抗体産生細胞に挿入されたヒト抗体産生遺伝子座の実質的な一部を有しており、そして内因性マウス抗体を産生するにおいて欠失されるようにさらに操作されている、トランスジェニックマウスを用いて調製されてもよい。このようなマウスは、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を産生可能であり、そしてマウスの免疫グロブリン分子および抗体を産生しないかまたは実質的に少ない量を産生する。この結果を達成するために利用される技術は、本明細書に開示された特許、出願および引用文献に開示されている。特定の実施形態では、当業者は、任意の目的のために参考として本明細書に援用される、国際特許出願公開番号ＷＯ９８／２４８９３に開示されるような方法を使用してもよい。任意の目的のために参考として本明細書に援用される、Ｍｅｎｄｅｚら，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６〜１５６も参照のこと。
【０１３７】
本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体方法論、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５）の標準的体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む、種々の技術によって生成されてもよい。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原則的には、モノクローナル抗体を産生するための他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルスまたは発癌性形質転換を用いることもできる。
【０１３８】
ハイブリドーマを調製するための可能性のある動物系の１つはマウスである。マウスにおけるハイブリドーマ産生はきわめてよく確立されており、そして融合のための免疫された脾細胞の単離のための免疫プロトコールおよび技術は当該分野で周知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順はまた公知である。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ、必要に応じてヒトＩＦＮ−γに対する完全ヒトモノクローナル抗体は、マウス系とは異なるヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックマウスを用いて生成され得る。これらのトランスジェニックマウスは、本明細書において「ＨｕＭａｂ」マウスと呼ばれるが、これは、再配列されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化変異とともに含む（Ｌｏｎｂｅｒｇら，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６〜８５９）。従って、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の低下を示し、そして免疫に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子は、クラス切り替えおよび体細胞変異を受けて高い親和性のヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇら、前出；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ，１９９５，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３；ＨａｒｄｉｎｇおよびＬｏｎｂｅｒｇ，１９９５，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６〜５４６）。ＨｕＭａｂマウスの調製は、その全ての内容が全体が参考として本明細書に援用されている、Ｔａｙｌｏｒら，１９９２，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５；Ｃｈｅｎら，１９９３，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：６４７〜６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎら，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２〜２９２０；Ｌｏｎｂｅｒｇら，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６〜８５９；Ｌｏｎｂｅｒｇ，１９９４，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９〜１０１；Ｔａｙｌｏｒら，１９９４，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：５７９〜５９１；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ，１９９５，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３；ＨａｒｄｉｎｇおよびＬｏｎｂｅｒｇ，１９９５，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ７６４：５３６〜５４６；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５〜８５１に詳細に記載されている。さらに、全てがＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対する、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７４，２９９号および同第５，７７０，４２９号、ならびにその全ての開示が全体が参考として本明細書に援用されている、１９９３年６月２４日公開のＳｕｒａｎｉらの米国特許第５，５４５，８０７号；１９９３年６月２４日公開、国際特許出願公開番号ＷＯ９３／１２２７；１９９２年１２月２３日公開ＷＯ９２／２２６４６；および１９９２年３月１９日公開ＷＯ９２／０３９１８を参照のこと。あるいは、以下の実施例に記載されたＨＣｏ７およびＨＣｏ１２のトランスジェニックマウス系統は、ヒト抗ＩＦＮγ抗体を生成するために用いられ得る。
【０１４０】
これらの実施形態では、本発明の抗体は、１０^−７Ｍ、１０^−８Ｍ、１０^−９Ｍ、または１０^−１０Ｍ未満という平衡解離定数（ＫＤ）でＩＦＮ−γに特異的に結合する。本発明の特定の実施形態では、この抗体は、約１０^−８Ｍ〜１０^−１２ＭというＫ_ＤでＩＦＮ−γに結合する。
【０１４１】
好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプの抗体である。この抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプの抗体であってもよい。他の実施形態では、本発明の抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤアイソタイプの抗体である。本発明の好ましい実施形態では、この抗体は、ヒトκ軽鎖およびヒトＩｇＧ１重鎖を含む。ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む本発明の抗体の発現は、以下の実施例に記載されている。特定の実施形態では、この抗体の可変領域は、ＩｇＧ１アイソタイプの定常領域以外の定常領域に連結される。特定の実施形態では、本発明の抗体は、哺乳動物細胞における発現のためにクローニングされている。
【０１４２】
特定の実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体の重鎖および軽鎖に対する（そしてそのコードするヌクレオチドに対する改変に相当する）保存的改変は、抗ＩＦＮγ抗体の特徴と類似の機能的および化学的特徴を有する抗ＩＦＮγ抗体を生成する。対照的に、抗ＩＦＮγ抗体の機能および／または化学的特徴における実質的な改変は、（ａ）置換の領域における分子骨格の構造、例えばβシートまたはらせん高次構造、（ｂ）標的部位における分子の変化もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルク、の維持に対する効果が有意に異なる重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の置換を選択することによって達成され得る。
【０１４３】
例えば、「保存的アミノ酸置換」とは、その位置でのアミノ酸残基の極性または荷電に対して影響がほとんどないかまたは全くないような、天然ではない残基による天然のアミノ酸残基の置換を包含し得る。さらに、ポリペプチドにおける任意の天然の残基はまた、「アラニンスキャニング突然変異誘発（ａｌａｎｉｎｅ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）」について以前に記載されているとおり、アラニンで置換されてもよい。
【０１４４】
所望のアミノ酸置換（保存的であっても、または非保存的であっても）は、このような置換が所望される時点で当業者によって決定され得る。特定の実施形態において、アミノ酸置換を用いて、抗ＩＦＮγ抗体の重要な残基を同定すること、または本明細書に記載される抗ＩＦＮγ抗体の親和性を増大もしくは低下させることができる。
【０１４５】
別の実施形態では、本発明の抗体は、ハイブリドーマ細胞株とは異なる細胞株で発現され得る。これらの実施形態では、適切な哺乳動物宿主細胞の形質転換のために特定の抗体をコードする配列を用いてもよい。これらの実施形態によれば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号および同第４，９５９，４５５号（その全てが任意の目的のために参考として本明細書に援用される）に例示されているとおり、例えばウイルスへ（またはウイルスベクターへ）ポリヌクレオチドをパッケージングすること、およびこのウイルス（またはベクター）によって宿主細胞を形質導入すること、または当該分野で公知のトランスフェクション手順によって、などを含む、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための任意の公知の方法を用いて、形質転換を達成することができる。一般的に、用いられる形質転換手順は、形質転換されるべき宿主に依存し得る。哺乳動物細胞へ異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は、当該分野で周知であり、そしてこれには、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソームへのポリヌクレオチド（単数または複数）のカプセル化、および核へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１４６】
本発明の抗ＩＦＮγ抗体の重鎖定常領域、重鎖可変領域、軽鎖定常領域、または軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードする核酸分子（またはポリヌクレオチド）は、本発明によって包含される。このようなポリヌクレオチドは、標準的な連結技術を用いて適切な発現ベクター中に挿入されてもよい。好ましい実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体重鎖または軽鎖の定常領域をコードするポリヌクレオチドは、適切な可変領域をコードするポリヌクレオチドの下流に付加され、そして発現ベクター中に連結される。このベクターは代表的には、使用される特定の宿主細胞において機能的である（すなわち、このベクターは、遺伝子の増幅および／または遺伝子の発現が生じ得るように宿主細胞の機構に適切である）ように選択される。発現ベクターの概説に関しては、ＭＥＴＨ．ＥＮＺ．１８５（Ｇｏｅｄｄｅｌ、編）１９９０，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。
【０１４７】
代表的には、任意の宿主細胞において用いられる発現ベクターは、プラスミド維持のため、ならびに内因性ヌクレオチド配列のクローニングおよび発現のための配列を含む。このような配列は総称的に、「隣接配列（ｆｌａｎｋｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）」と呼ばれるが、特定の実施形態では、代表的には、以下のヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含む：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナーおよびアクセプタースプライス部位を含む完全イントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されるべきポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、および選択可能なマーカーエレメント。これらの配列の各々は以下に考察される。
【０１４８】
必要に応じて、ベクターは、「タグ（ｔａｇ）」コード配列、すなわち、抗ＩＦＮγ抗体ポリペプチドコード配列の５’または３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含んでもよい；このオリゴヌクレオチド配列は、ポリＨｉｓ（例えば、ｈｅｘａＨｉｓ）、または別の「タグ」、例えばＦＬＡＧ、ＨＡ（インフルエンザウイルス血球凝集素）、またはｍｙｃ（これについては、市販の抗体が存在する）をコードする。このタグは代表的には、ポリペプチドの発現の際にポリペプチドに融合され、そして宿主細胞からのＩＦＮ−γ抗体のアフィニティー精製または検出のための手段として機能し得る。アフィニティー精製は、例えば、アフィニティーマトリックスとしてタグに対する抗体を用いるカラムクロマトグラフィーによって達成され得る。必要に応じて、タグは、種々の手段によって、例えば、切断のための特定のペプチダーゼを用いて、精製された抗ＩＦＮγ抗体ポリペプチドから引き続いて除去されてもよい。
【０１４９】
隣接配列は、相同（すなわち、宿主細胞と同じ種および／または株由来）、異種（すなわち、宿主細胞種または株以外の種由来）、ハイブリッド（すなわち、２つ以上の供給源由来の隣接配列の組み合わせ）、合成または天然であってもよい。従って、隣接配列の供給源は、この隣接配列が機能的であり、宿主細胞の機構によって活性化され得る条件下では、任意の原核生物生物体であっても、または真核生物生物体であっても、任意の脊椎動物もしくは無脊椎動物であっても、または任意の植物であってもよい。
【０１５０】
本発明のベクターにおいて有用な隣接配列は、当該分野で周知の任意のいくつかの方法によって達成され得る。代表的には、本明細書において有用な隣接配列は、マッピングによって、および／または制限エンドヌクレアーゼ消化によって以前に同定されており、従って適切な制限エンドヌクレアーゼを用いて適切な組織供給源から単離可能である。ある場合には、隣接配列の全ヌクレオチド配列が公知であり得る。ここでは、隣接配列は、核酸合成またはクローニングのために本明細書において記載された方法を用いて合成され得る。
【０１５１】
隣接配列の全てが既知であるか一部のみが既知であるかにかかわらず、これは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ならびに／または適切なプローブ、例えば、同じもしくは別の種由来のオリゴヌクレオチドおよび／もしくは隣接配列のフラグメントを用いてゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって、得ることができる。隣接配列が既知でない場合、隣接配列を含むＤＮＡのフラグメントは、例えば、コード配列またはさらに別の遺伝子（単数または複数）を含み得る、ＤＮＡのさらに大きい小片から単離することができる。単離は、適切なＤＮＡフラグメントを生成するための制限エンドヌクレアーゼ消化によって、その後のアガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）または当業者に公知の他の方法を用いる単離によって達成できる。この目的を達成するための適切な酵素の選択は、当業者に容易に明らかである。
【０１５２】
複製起点は代表的には、市販の原核生物発現ベクターの一部であり、この起点は宿主細胞においてベクターの増幅を補助する。選択したベクターが複製起点の部位を含まない場合、既知の配列に基づいて化学的に合成して、ベクターに連結してもよい。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）由来の複製起点は、ほとんどのグラム陰性細菌に適切であり、種々のウイルス起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、またはパピローマウイルス、例えば、ＨＰＶまたはＢＰＶ）は、哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般的に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクターには必要ではない（例えば、ＳＶ４０起点は、ウイルス初期プロモーターをも含むので、しばしば単独で用いられる）。
【０１５３】
転写終結配列は代表的には、ポリペプチドコード領域の末端に対して３’に位置して、転写を集結するように機能する。通常、原核生物細胞における転写終結配列は、Ｇ−Ｃリッチフラグメントであり、ポリＴ配列が続く。この配列はライブラリーから容易にクローニングされるかまたはベクターの一部として市販されてさえいるが、本明細書に記載の方法のような核酸合成の方法を用いて容易に合成することもできる。
【０１５４】
選択マーカー遺伝子は、選択性の増殖培地中で増殖される宿主細胞増殖の生存および増殖に必要なタンパク質をコードする。代表的な選択マーカー遺伝子は、（ａ）原核生物宿主細胞については、抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、テトラサイクリンもしくはカナマイシンに対する耐性を付与するか；（ｂ）細胞の栄養要求欠損を補完するか；あるいは（ｃ）複合培地または規定の培地から利用できない重要な栄養物を供給する、タンパク質をコードする。好ましい選択マーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子およびテトラマイシン耐性遺伝子である。有利には、ネオマイシン耐性遺伝子もまた、原核生物および真核生物の宿主細胞の両方における選択のために用いることができる。
【０１５５】
発現される遺伝子を増幅するために、他の選択遺伝子が用いられてもよい。増幅とは、増殖または細胞の生存に重要なタンパク質の産生に必要な遺伝子が、組み換え細胞の連続的世代の染色体内において一列で反復されているプロセスである。哺乳動物細胞のための適切な選択マーカーの例としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）およびプロモーターなしのチミジンキナーゼ遺伝子が挙げられる。哺乳動物細胞形質転換体は、ベクターに存在する選択遺伝子のおかげで形質転換体のみが生存するように固有に適合されるという選択圧下に置かれる。選択圧は、培地中の選択因子の濃度が連続的に増大される条件下で形質転換細胞を培養することによって課され、これによって選択遺伝子および別の遺伝子、例えばＩＦＮγポリペプチドに結合する抗体をコードするＤＮＡの両方の増幅がもたらされる。結果として、抗ＩＦＮγ抗体のようなポリペプチドの増大した量は、増幅されたＤＮＡから合成される。
【０１５６】
リボソーム結合部位は通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、シャイン・ダルガーノ（Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ）配列（原核生物）またはＫｏｚａｋ配列（真核生物）によって特徴付けられる。このエレメントは代表的には、プロモーターの３’側および発現されるべきポリペプチドのコード配列の５’側に位置する。
【０１５７】
真核生物の宿主細胞発現系においてグリコシル化が所望される場合のような、ある場合には、グリコシル化または収率を改善するための種々のプレ配列またはプロ配列を操作してもよい。例えば、特定のシグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を変更してもよいし、またはグリコシル化に影響し得るプロ配列を付加してもよい。最終タンパク質産物は、−１位（成熟タンパク質の第一アミノ酸に対する位置）に、発現に付随する１つ以上のさらなるアミノ酸付加を有してもよく、これは完全に取り除かれていなくてもよい。例えば、最終タンパク質産物は、アミノ末端に結合されたペプチダーゼ切断部位に見出される２つ以上のアミノ酸残基を有し得る。あるいは、いくつかの酵素切断部位の使用によって、酵素が成熟ポリペプチド内のこのような領域で切断する場合、所望のポリペプチドのわずかに短縮された形態が生じ得る。
【０１５８】
本発明の発現ベクターおよびクローニングベクターは代表的には、宿主生物体によって認識され、かつ抗ＩＦＮγ抗体をコードする分子に作動可能に連結されているプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御する構造遺伝子（一般的には約１００〜１０００ｂｐ内）の開始コドンに対して上流（すなわち、５’側）に位置する非翻訳配列である。プロモーターは以下の２つのクラスのうちの１つに慣用的に分類される：誘導性プロモーターおよび構成的プロモーター。誘導性プロモーターは、栄養物の有無または温度の変化のような培養条件におけるいくつかの変化に応答してそれらの制御下でＤＮＡから増大したレベルの転写を開始する。構成的プロモーターは他方では、それらが作動可能に連結されている遺伝子を均一に転写し、すなわち、遺伝子発現に対する制御はほとんどないかまたは全くない。種々の潜在的な宿主細胞によって認識される多数のプロモーターは周知である。適切なプロモーターは、制限酵素消化によって供給源のＤＮＡからプロモーターを除去すること、およびこのベクターに所望のプロモーター配列を挿入することによって、本発明の抗ＩＦＮγ抗体を含む重鎖または軽鎖をコードするＤＮＡに作動可能に連結される。
【０１５９】
酵母宿主との使用のための適切なプロモーターもまた、当該分野で周知である。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターとともに有利に用いられる。哺乳動物宿主細胞とともに使用するための適切なプロモーターは周知であり、そしてウイルス、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよび最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから得られたプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。他の適切な哺乳動物プロモーターとしては、異種哺乳動物プロモーター、例えば、熱ショックプロモーターおよびアクチンプロモーターが挙げられる。
【０１６０】
目的であり得るさらなるプロモーターとしては以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＳＶ４０初期プロモーター（ＢｅｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４〜１０）；ＣＭＶプロモーター（Ｔｈｏｍｓｅｎら、１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ８１：６５９〜６６３）；ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復配列に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：７８７〜９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４〜４５）；メタトリオネイン遺伝子由来のプロモーターおよび調節性配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、１９８２，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９〜４２）；ならびに原核生物プロモーター、例えば、βラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら、１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７５：３７２７〜３１）；またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：２１〜２５）。また目的のものは、組織特異性を示して、トランスジェニック動物において利用されている、以下の動物転写制御領域である：膵臓の腺房細胞において活性であるエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔら，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９〜４６；Ｏｒｎｉｔｚら，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９〜４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，１９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５〜５１５）；膵臓β細胞において活性なインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ
３１５：１１５〜２２）；リンパ細胞において活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６４７〜５８；Ａｄａｍｅｓら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３〜３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒら，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：１４３６〜４４）；精巣、乳房、リンパ系細胞および肥満細胞において活性なマウス乳腺腫瘍ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒら、１９８６，Ｃｅｌｌ ４５：４８５〜９５）；肝臓で活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔら、１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８〜７６）；肝臓においおいて活性なαフェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら、１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：１６３９〜４８；Ｈａｍｍｅｒら、１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３〜５８）；肝臓において活性なα１−抗トリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙら、１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１〜７１）；骨髄性細胞において活性なβグロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍら、１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３８〜４０；Ｋｏｌｌｉａｓら、１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９〜９４）；脳における稀突起膠細胞において活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら、１９８７，Ｃｅｌｌ ４８：７０３〜１２）；骨格筋において活性であるミオシン軽鎖２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３〜８６）；ならびに視床下部で活性な生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎら、１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７２〜７８）。
【０１６１】
エンハンサー配列をベクターに挿入して、高等な真核生物によって本発明の抗ＩＦＮγ抗体を含む軽鎖または重鎖をコードするＤＮＡの転写を増大する。エンハンサーは、通常約１０〜３００ｂｐ長のＤＮＡのシス作用性エレメントであり、これはプロモーター上で転写を増大するように働く。エンハンサーは比較的方向および位置に依存せず、転写単位の５’および３’の両方の位置で見出されている。哺乳動物遺伝子から利用可能ないくつかのエンハンサー配列は公知である（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、αフェトプロテインおよびインスリン）。しかし、代表的には、ウイルス由来のエンハンサーを用いる。当該分野で公知のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーは、真核生物プロモーターの活性化のための例示的な増強エレメントである。エンハンサーは、ベクター中でコード配列の５’または３’のいずれに位置してもよいが、代表的にはプロモーターから５’部位に位置する。
【０１６２】
適切な天然のシグナル配列または異種のシグナル配列をコードする配列（リーダー配列またはシグナルペプチド）を発現ベクターに組み込んで、抗体の細胞外分泌を促進することが可能である。シグナルペプチドまたはリーダーの選択は、抗体が産生される宿主細胞のタイプに依存し、そして異種シグナル配列は、天然のシグナル配列を置き換え得る。哺乳動物宿主細胞で機能的であるシグナルペプチドの例としては、以下が挙げられる：米国特許第４，９６５，１９５号に記載されるインターロイキン７（ＩＬ−７）のシグナル配列；Ｃｏｓｍａｎらに記載のインターロイキン２レセプターのシグナル配列（１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：７６８）；欧州特許第０ ３６７ ５６６号に記載のインターロイキン−４レセプターシグナルペプチド；米国特許第４，９６８，６０７号に記載のＩ型インターロイキン−１レセプターシグナルペプチド；欧州特許第０ ４６０ ８４６号に記載のＩＩ型インターロイキン−１レセプターシグナルペプチド；ヒトＩｇＫのシグナル配列（ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号５２）である）；ヒト成長ホルモンのシグナル配列（ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡ；配列番号５３である）；ならびに実施例３において単離された重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡによってコードされた、ヒトシグナル配列ＭＧＳＴＡＩＬＡＬＬＬＡＶＬＱＧＶＣＡ（配列番号５４）およびＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号５５）。
【０１６３】
本発明の発現ベクターは、市販のベクターのような開始ベクターから構築されてもよい。このようなベクターは、所望の隣接配列の全てを含んでも含まなくてもよい。本明細書に記載される隣接配列の１つ以上は既にベクターには存在しないが、それらを個々に入手してベクターに連結してもよい。隣接配列の各々を得るために用いた方法は、当業者に周知である。
【０１６４】
ベクターが構築され、そして軽鎖、重鎖、または抗ＩＦＮγ抗体を含む軽鎖および重鎖をコードする核酸分子がこのベクターの適切な部位に挿入された後、この完成したベクターを増幅および／またはポリペプチド発現のために適切な宿主細胞中に挿入してもよい。選択された宿主細胞への抗ＩＦＮγ抗体のための発現ベクターの形質転換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介性トランスフェクション、または他の公知の技術を含む周知の方法によって達成され得る。選択される方法は一部は、用いられる宿主細胞のタイプに関連する。これらの方法および他の適切な方法は、当業者に周知であり、そして例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）に記載されている。
【０１６５】
宿主細胞は、適切な条件下で培養された場合、抗ＩＦＮγ抗体を合成し、この抗体は引き続いて、培養培地から（宿主細胞が培地中にこの抗体を分泌する場合）、またはこの抗体を産生する宿主細胞から直接（この抗体が分泌されない場合）、収集できる。適切な宿主細胞の選択は、種々の要因、例えば、所望の発現レベル、活性のために所望されるかまたは必要であるポリペプチド改変（例えば、グリコシル化またはリン酸化）および生物学的に活性な分子への折り畳みの容易さに依存する。
【０１６６】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野で周知であり、そしてこれらとしては、限定はしないがＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞株が挙げられ、これらとしては、限定はしないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌腫細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）および多数の他の細胞株が挙げられる。特定の実施形態では、どの細胞株が高い発現レベルを有し、ＩＦＮγ結合特性を有する抗体を構成的に生成するかを決定することを通じて細胞株を選択することができる。別の実施形態では、それ自体の抗体を作製しないが、異種の抗体を作製および分泌する能力を有するＢ細胞系列由来の細胞株を選択することができる。
【０１６７】
本発明の抗体は、生物学的サンプル中のＩＦＮγを検出するため、およびＩＦＮγタンパク質を産生する細胞または組織の同定のために有用である。ＩＦＮγに特異的に結合する本発明の抗体は、ＩＦＮγ媒介性疾患の処置において有用であり得る。このような抗体は、ＩＦＮγを検出するため、およびＩＦＮγがＩＦＮγレセプターとの複合体を形成することを阻害するための結合アッセイにおいて用いられ得る。ＩＦＮγに結合して、他の結合化合物との相互作用をブロックするこのような抗体は、ＩＦＮγ媒介性疾患を調節するのにおいて治療的な用途を有し得る。好ましい実施形態では、ＩＦＮγに対する抗体は、そのレセプターに対するＩＦＮγ結合をブロックし得、これがＩＦＮγ誘導性シグナル伝達カスケードの破壊を生じ得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本発明は薬学的組成物であって、治療上有効な量の１つまたは複数の本発明の抗体を薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、可溶化剤、乳化剤、保存剤および／またはアジュバントとともに含む薬学的組成物を提供する。好ましくは、受容可能な処方物質は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性である。好ましい実施形態では、治療上有効な量の抗ＩＦＮγ抗体を含む薬学的組成物が提供される。
【０１６９】
特定の実施形態では、受容可能な処方物質は好ましくは、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性である。
【０１７０】
特定の実施形態では、薬学的組成物は、例えば、ｐＨ、浸透圧、粘度、清澄度、色調、等張性、臭気、無菌性、安定性、分解もしくは放出の速度、組成物の吸着もしくは浸透を改変、維持または保存するための処方物質を含んでもよい。このような実施形態では、適切な処方物質としては、限定はしないが、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；抗菌剤；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝液（例えば、ホウ酸塩、炭酸水素塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、リン酸または他の有機酸）；充填剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、βサイクロデキストリンまたはヒドロキシプロピルβシクロデキストリン）；賦形剤（ｆｉｌｌｅｒ）；単糖類；二糖類；ならびに他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；着色剤、香味料および希釈剤；乳化剤；親水性のポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；懸濁剤；界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン（ｔｒｉｔｏｎ）、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール）；安定性強化剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）；等張化剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトール ソルビトール）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）および／または薬学的アジュバントが挙げられる。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ
ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，第１８版（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編），１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙを参照のこと。
【０１７１】
特定の実施形態では、最適の薬学的組成物は、例えば、意図される投与経路、送達様式および所望の投薬量に依存して当業者によって決定される。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，前出を参照のこと。特定の実施形態では、このような組成物は、本発明の抗体の物理的状態、安定性、インビボでの放出の速度、およびインビボでのクリアランスの速度に影響し得る。
【０１７２】
特定の実施形態では、薬学的組成物における主なビヒクルまたはキャリアは、天然には水性であっても非水性であってもよい。例えば、適切なビヒクルまたはキャリアは、（おそらくは非経口投与のための組成物中に共通の他の物質で補充された）注射用水、生理学的生理食塩水または人工的な脳脊髄液であってもよい。中性の緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水はさらに、例示的なビヒクルである。好ましい実施形態では、薬学的組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓ緩衝液、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸塩緩衝液を含み、そしてさらにソルビトールまたはその適切な代替物を含んでもよい。本発明の特定の実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体組成物は、所望の程度の純度を有する選択された組成物を最適の処方剤（ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、前出）とともに、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態で混合することによって貯蔵のために調製され得る。さらに、特定の実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体産物は、スクロースのような適切な賦形剤を用いて凍結乾燥剤として処方されてもよい。
【０１７３】
本発明の薬学的組成物は、非経口送達のために選択され得る。あるいは、この組成物は、吸入のために、または経口のような消化管を通じた送達のために選択され得る。このような薬学的に受容可能な組成物の調製は、当該分野の技術の範囲内である。
【０１７４】
処方成分は、投与の部位に受容可能な濃度で存在することが好ましい。特定の実施形態では、緩衝液を用いて、この組成物を生理学的なｐＨで、またはわずかに低いｐＨで、代表的には約５〜約８のｐＨ範囲内で維持する。
【０１７５】
非経口的投与を考慮する場合、本発明における使用のための治療組成物は、所望の抗ＩＦＮγ抗体を薬学的に受容可能なビヒクル中に含む、発熱物質なしの、非経口的に受容可能な水溶液の形態で提供されてもよい。非経口注射のために特に適切なビヒクルは、抗ＩＦＮγ抗体が、適切に保存された無菌の等張性溶液として処方されている、滅菌蒸留水である。特定の実施形態では、この調製物は、所望の分子の処方物を、デポ注射を介して送達できる産物の制御放出または徐放性放出を提供し得る、ある因子、例えば、注射用マイクロスフェア、生体侵食性粒子、ポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコール酸）、ビーズまたはリポソームとともに含んでもよい。特定の実施形態では、循環中の持続期間を延長する効果を有する、ヒアルロン酸も用いることができる。特定の実施形態では、移植可能な薬物送達デバイスを用いて所望の抗体分子を導入することができる。
【０１７６】
本発明の薬学的組成物は、吸入のために処方され得る。これらの実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体は、乾燥した吸入可能な粉末として有利に処方される。好ましい実施形態では、抗ＩＦＮγ抗体吸入溶液はまた、エアロゾル送達のための噴霧剤とともに処方され得る。特定の実施形態では、溶液は噴霧され得る。従って、肺投与および処方の方法はさらに、参考として援用されており、化学的に修飾されたタンパク質の肺送達を記載する、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５に記載されている。
【０１７７】
処方物は経口的に投与できることも考えられる。この様式で投与される抗ＩＦＮγ抗体は、錠剤およびカプセルのような固体投薬形態の配合に習慣的に用いられるキャリアの有無とともに処方され得る。特定の実施形態では、カプセルは、バイオアベイラビリティーが最大化されて予備的な全身性の分解が最小化される胃腸管におけるポイントでこの処方物の活性部位を遊離するように設計され得る。抗ＩＦＮγ抗体の吸着を促進するためにさらなる因子が含まれてもよい。希釈剤、香味料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤および結合剤も使用され得る。
【０１７８】
本発明の薬学的組成物は好ましくは、１または複数の抗ＩＦＮγ抗体の有効量を錠剤の製造業者に適切な非毒性賦形剤と混合して含むように提供される。滅菌水、または別の適切なビヒクルに錠剤を溶解することによって、単位用量形態で溶液を調製し得る。適切な賦形剤としては、限定はしないが、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウム、ラクトースもしくはリン酸カルシウム；または結合剤、例えばデンプン、ゼラチンもしくはアラビアゴム；または潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくは滑石が挙げられる。
【０１７９】
さらなる薬学的組成物は、当業者には明白であり、これらとしては、徐放性または制御送達の処方物に含まれた抗ＩＦＮγ抗体を含む処方物が挙げられる。種々の他の徐放性または制御送達の手段、例えば、リポソームキャリア、生体侵食性微粒子または多孔性ビーズおよびデポ注射剤を処方するための技術もまた、当業者には公知である。例えば、参考として援用されており、薬学的組成物の送達のための多孔性ポリマー微粒子の制御放出を記載している、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照のこと。徐放性調製物は、成形された物質の形態で半透過性ポリマー物質、例えばフィルムまたはマイクロカプセルを含んでもよい。徐放性マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（参考として各々が援用される、米国特許第３，７７３，９１９号および欧州特許出願公開番号ＥＰ０５８４８１に開示される）、Ｌグルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７〜５５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７〜２７７およびＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８〜１０５）、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒら、前出）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許出願公開番号ＥＰ１３３，９８８）を含んでもよい。徐放性組成物はまた、当該分野で公知の任意のいくつかの方法によって調製され得るリポソームを含んでもよい。例えば、参考として援用される、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８〜３６９２；欧州特許出願公開番号ＥＰ ０３６，６７６；ＥＰ ０８８，０４６およびＥＰ １４３，９４９を参照のこと。
【０１８０】
インビボ投与のために用いられる薬学的組成物は代表的には、滅菌調製物として提供される。滅菌は、滅菌濾過膜を通した濾過によって達成され得る。組成物が凍結乾燥される場合、この方法を用いる滅菌は、凍結乾燥および再構成の前または後のいずれに行なわれてもよい。非経口的な投与のための組成物は、凍結乾燥型または溶液として貯蔵されてもよい。非経口的な組成物は一般には、無菌アクセスポートを有する容器、例えば静脈内溶液バッグ、または皮下注射針によって穿通可能な栓を有するバイアルに入れられる。
【０１８１】
一旦薬学的組成物が処方されれば、これは、滅菌バイアル中に、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、結晶として、または脱水もしくは凍結乾燥された粉末として貯蔵され得る。このような処方物は、レディーツーユースの形態、または投与の前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥された形態）のいずれで貯蔵されてもよい。
【０１８２】
本発明はまた、単回用量投与単位を生成するためのキットを提供する。本発明のキットは各々が、乾燥タンパク質を有する第一の容器、および水性処方物を有する第二の容器の両方を含む。本発明の特定の実施形態では、単一および複数のチャンバを有する事前充填（ｐｒｅ−ｆｉｌｌｅｄ）シリンジ（例えば、液体シリンジおよびライオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を備えるキットが提供される。
【０１８３】
使用されるべき、抗ＩＦＮγ抗体を含有する薬学的組成物の治療的有効量は、例えば、治療の状況および目的に依存する。処置のために適切な投薬レベルは部分的には送達される分子、抗ＩＦＮγ抗体が用いられている徴候、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面または器官サイズ）および／または状態（年齢および全身健康状態）に依存して変化することが当業者には理解される。特定の実施形態では、最適の治療効果を得るために、臨床医が投薬量を滴定して、投与経路を改変してもよい。代表的な投薬量は、上述の要因に依存して、約０．１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ以上までに及んでもよい。好ましい実施形態では、投薬量は０．１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、必要に応じて１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇまたは１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇに及んでもよい。
【０１８４】
投与頻度は、用いられる処方物中の特定の抗ＩＦＮγ抗体の薬物動態的パラメーターに依存する。代表的には、所望の効果を達成する投薬量が得られるまで、臨床医がこの組成物を投与する。従って、この組成物は単回用量として、または２回以上の用量（これは同じ量の所望の分子を含んでも含まなくてもよい）として、または移植デバイスもしくはカテーテルを介した連続注入として、経時的に投与されてもよい。適切な投薬量のさらなる工夫は当業者によって慣用的に行なわれ、そしてそれらによって慣用的に行なわれる課題の範囲内である。適切な投薬量は、適切な用量応答データの使用を通じて得ることができる。特定の実施形態では、本発明の抗体は、長期間にわたって患者に投与されてもよい。本発明の抗体の慢性投与によって、非ヒト動物においてヒト抗原に対して惹起された抗体、例えば、ヒト以外の種で産生された不完全ヒト抗体または非ヒト抗体に一般に関連する有害な免疫応答またはアレルギー応答が最小化される。
【０１８５】
薬学的組成物の投与経路は、徐放性システムによるかまたは移植デバイスによる、公知の方法、例えば、経口、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内または病巣内の経路による注射を通じた公知の方法に従う。特定の実施形態では、組成物は、ボーラス注射によって投与されても、もしくは注入によって連続的に投与されても、または移植デバイスによって投与されてもよい。
【０１８６】
この組成物はまた、所望の分子がその上に吸着されるかまたはカプセル化されている、膜、スポンジまたは別の適切な物質の移植によって局所投与され得る。移植デバイスを用いる特定の実施形態では、デバイスは任意の適切な組織または器官に移植されてもよく、そして所望の分子の送達は、拡散、時限放出ボーラス、または連続的投与を介してもよい。
【０１８７】
本発明による抗ＩＦＮγ抗体の薬学的組成物をエキソビボで用いることもまた所望され得る。このような場合、患者から除去されている細胞、組織または器官を、抗ＩＦＮγ抗体の薬学的組成物に曝露して、その後に細胞、組織および／または器官を患者に引き続き移植して戻す。
【０１８８】
詳細には、抗ＩＦＮγ抗体は、本明細書において記載される方法のような方法を用いて、ポリペプチドを発現および分泌するように遺伝子操作されている特定の細胞を移植することによって送達できる。特定の実施形態では、このような細胞は、動物細胞であってもまたはヒト細胞であってもよく、そして自家性、非相同性または異種性であってもよい。特定の実施形態では、細胞は不死化されてもよい。他の実施形態では、免疫学的応答の機会を低下させるために、細胞は、周囲の組織の浸潤を回避するためにカプセル化されてもよい。さらなる実施形態では、カプセル化物質は代表的には、タンパク質産物（単数または複数）の放出を可能にするが、患者の免疫系によるか、または周囲の組織からの他の有害な要因による、細胞の破壊を妨げる生体適合性、半透過性ポリマー同封物または膜である。
【実施例】
【０１８９】
以下の実施例は、行なった実験および得られた結果を含んでいるが、これは、例示目的のためにのみ提供されており、本発明を限定すると解釈されるべきではない。
【０１９０】
（実施例１）
（ＣＨＯ細胞からのヒトＩＦＮγタンパク質の生成）
テンプレートとしてヒト脾臓Ｍａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、全長ヒトＩＦＮγ ｃＤＮＡをＰＣＲ（標準的条件下）によって増幅した。この配列をｐＤＳＲα２プラスミド中にサブクローニングした。ＤＨ１０Ｂ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）細胞をｐＤＳＲα２プラスミドを用いて形質転換した。標準的技術を用いてＤＮＡを調製して、ＣＨＯ細胞をリン酸カルシウム法（Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ Ｍｅｄｉａ，Ｉｎｃ）によってトランスフェクトした。高発現細胞株クローンを用いて、無血清馴化培地を生成した。
【０１９１】
ヒトＩＦＮγ（ｈｕ−ＩＦＮ−γ）を含むＣＨＯ細胞馴化培地を濃縮して、透析して、数段階のクロマトグラフィー工程を通じて精製した。第一の工程は、グリコシル化されていないｈｕ−ＩＦＮ−γ形態から高度にグリコシル化された形態を分離するために、標準的なＮａＣｌ勾配を用いるＱ−ＨＰ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）クロマトグラフィーであった。Ｑ−ＨＰプールをさらに、コムギ胚芽凝集素クロマトグラフィー（ＥＹ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を通じて精製した。この精製された物質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離して、クマーシー・ブルーおよび銀染色によって分析した。精製された物質は、クマーシー・ブルーおよび銀の両方で染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定した場合９５％を超える純度であった。この物質をゲル凝固（ｇｅｌ−ｃｌｏｔ）法（Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ）によってもアッセイして、内毒素レベルが低いことを示した。ｈｕ−ＩＦＮ−γの同一性は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓの抗ＡＦ−２８５ ＮＡ抗体を用いてウエスタンブロットによって確認した。吸光係数方法を用いて、吸光度（Ａ_２８０）から最終のタンパク質濃度を決定したが、ここでＡ_２８０読み取り／吸光係数＝濃度（ｇ／Ｌ）（吸光係数＝０．６６）である。
【０１９２】
（実施例２）
（ＩＦＮγに対するヒトモノクローナル抗体の産生）
（トランスジェニックＨｕＭａｂマウス）
ＩＦＮ−γに対する完全ヒトモノクローナル抗体は、ヒト抗体遺伝子を各々が発現する、トランスジェニックマウスのＨＣｏ７株、ＨＣｏ１２株およびＨＣｏ７＋ＨＣｏ１２株を用いて調製された。これらの株の各々において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎらに記載されたとおりホモ接合性に分裂されており（１９９３，ＥＭＢＯ Ｊ．１２：８１１〜８２０）、そして内因性マウス重鎖遺伝子は、国際特許出願公開番号ＷＯ ０１／０９１８７（参考として援用される）の実施例１に記載のようにホモ接合性に分裂されていた。各々の株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５〜８５１）に記載されているとおり、ヒトκ軽鎖導入遺伝子ＫＣｏ５を担持した。ＨＣｏ７株は、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，８２５号および同第５，５４５，８０７号（参考として援用される）に記載のとおりＨＣｏ７ヒト重鎖導入遺伝子を担持する。ＨＣｏ１２株は、国際特許出願番号ＷＯ ０１／０９１８７（参考として援用される）の実施例２に記載のとおりＨＣｏ１２ヒト重鎖導入遺伝子を担持した。ＨＣｏ７＋ＨＣｏ１２株は、ＨＣｏ７およびＨＣｏ１２の両方の重鎖導入遺伝子を担持し、そして各々の導入遺伝子について半接合性であった。これらの株の全てが本明細書においてＨｕＭａｂマウスと呼ばれる。
【０１９３】
（ＨｕＭａｂ免疫：）
ＩＦＮ−γに対する完全ヒトモノクローナル抗体を生成するため、ＨｕＭａｂマウスを、抗原としてＥ．ｃｏｌｉまたはＣＨＯ細胞由来の精製組み換えヒトＩＦＮ−γを用いて免疫した。ＨｕＭａｂマウスの一般的な免疫スキームは、Ｌｏｎｂｅｒｇらに記載されている（各々の教示が参考として援用されている、１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６〜８５９；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（前出）および国際特許出願公開番号ＷＯ９８／２４８８４）。マウスは、抗原の第一回の注入の際に６〜１６週齢であった。ＩＦＮ−γ抗原（例えば、ＩＦＮ−γを発現する、トランスフェクトされたＥ．ｃｏｌｉまたはＣＨＯ細胞から精製された）の精製組み換え調製物（２５〜１００μｇ）を用いて、ＨｕＭａｂマウスを腹腔内（ＩＰ）または皮下（Ｓｃ）で免疫した。
【０１９４】
ＨｕＭａｂトランスジェニックマウスの免疫は、完全フロイントアジュバントおよび２つの注射物中の抗原を用いて、続いて、不完全フロイントアジュバント中の抗原を用いた２〜４週のＩＰ免疫（全部で９免疫まで）によって行なった。数ダースのマウスを各々の抗原について免疫した（Ｅ．ｃｏｌｉまたはＣＨＯ細胞のいずれかで生成したヒトＩＦＮ−γ）。ＨＣｏ７株、ＨＣｏ１２株、およびＨＣｏ７＋ＨＣｏ１２株の全部で９１匹のマウスをＩＦＮ−γで免疫した。免疫応答を後眼窩採血によってモニターした。
【０１９５】
ＩＦＮ−γに結合する抗体を産生するＨｕＭａｂマウスを選択するため、免疫したマウス由来の血清をＦｉｓｈｗｉｌｄら（前出）に記載されるとおりＥＬＩＳＡによって試験した。要するに、マイクロタイタープレートを、ＣＨＯ細胞またはＥ．ｃｏｌｉ由来の精製された組み換えＩＦＮ−γをＰＢＳ中に１〜２μＬ／ｍＬで用いてコーティングして、５０μＬ／ウェルで、４℃で一晩インキュベートし、次いで５％ニワトリ血清を含むＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）の２００μＬ／ウェルを用いてブロックした。ＩＦＮ−γ免疫したマウスからの血漿の希釈物を、各々ウェルに添加して、環境温度で１〜２時間インキュベートした。このプレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎを用いて洗浄して、次いで西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合体化したヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬とともに室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎを用いて洗浄して、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合体化したヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬とともに室温で１時間インキュベートした。洗浄後、このプレートをＡＢＴＳ基質（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，カタログ番号Ａ−１８８８，０．２２ｍｇ／ｍＬ）を用いて発色させて、４１５〜４９５ｎｍの波長で光学密度（ＯＤ）を決定することによって分光光度的に分析した。抗ＩＦＮ−γヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスを用いて下記のとおりモノクローナル抗体を産生した。
【０１９６】
（ＩＦＮ−γに対するヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成）
屠殺の２日前に抗原を用いて静脈内にブースト（追加免疫）することによりモノクローナル抗体産生のためにマウスを準備して、その後に脾臓を取り出した。ＨｕＭａｂマウスからマウス脾細胞を単離して、標準的なプロトコールを用いてＰＥＧとともにマウス骨髄腫細胞株に融合した。代表的には、各々の抗原について１０〜２０の融合を行なった。
【０１９７】
要するに、免疫されたマウス由来の脾臓リンパ球の単一細胞懸濁物を、５０％ＰＥＧ（Ｓｉｇｍａ）を用いてＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，登録番号ＣＲＬ１５８０）の数の四分の一に融合した。細胞を平底マイクロタイタープレート中で約１×１０^５／ウェルでプレートして、続いて１０％ウシ胎仔血清、１０％Ｐ３８８Ｄ１−（ＡＴＣＣ，登録番号ＣＲＬ ＴＩＢ−６３）馴化培地、３〜５％ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ（ＩＧＥＮ）、マウスマクロファージ様細胞株を培養するために用いた培地由来の部分的に精製されたハイブリドーマ増殖培地補充物をＤＭＥＭ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，カタログ番号ＣＲＬ１００１３、高いグルコース、Ｌグルタミンおよびピルビン酸ナトリウムを含む）中に、さらに５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、５０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンおよび１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号、ＣＲＬ Ｐ−７１８５）とともに含有する選択培地中での約２週間のインキュベーションを続けた。１〜２週後、ＨＡＴをＨＴに置き換えた培地中で細胞を培養した。
【０１９８】
得られたハイブリドーマを抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングした。個々のウェルをＥＬＩＳＡ（上記）によって、ヒト抗ＩＦＮ−γモノクローナルＩｇＧ抗体についてスクリーニングした。一旦、過剰のハイブリドーマ増殖が生じれば、通常１０〜１４日後に培地をモニターした。抗体分泌するハイブリドーマを再度プレートして、再度スクリーニングして、依然としてヒトＩｇＧについて陽性である場合、抗ＩＦＮ−γモノクローナル抗体を少なくとも２回、限界希釈によってサブクローニングした。次いで、安定なサブクローンをインビトロで培養して、精製および特徴づけのために組織培養培地中で少量の抗体を生成した。
【０１９９】
（ＩＦＮ−γに結合するヒトモノクローナル抗体の選択）
上記のようなＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ＩＦＮ−γ免疫原と正の反応性を示したハイブリドーマをスクリーニングした。ＩＦＮ−γに対して高い結合活性で結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマをサブクローニングしてさらに特徴付けた。親細胞の反応性を保持している（ＥＬＩＳＡによって決定した場合）、各々のハイブリドーマ由来の１つのクローンを、液体窒素中に保持した５〜１０バイアルの細胞バンクを作製するために選択した。
【０２００】
アイソタイプ特異的ＥＬＩＳＡを行なって、本明細書に開示されたとおり産生したモノクローナル抗体のアイソタイプを決定した。これらの実験では、マイクロタイタープレートウェルを、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬのマウス抗ヒトκ軽鎖溶液を５０μＬ／ウェルで用いてコーティングして、４℃で一晩インキュベートした。５％ニワトリ血清を用いたブロッキング後、このプレートを各々の試験したモノクローナル抗体由来の上清および精製されたアイソタイプコントロールと反応させた。プレートを環境温度で１〜２時間インキュベートした。次いで、このウェルをヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３特異的な西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗ヒトポリクローナル抗血清のいずれかと反応させて、プレートを発色させ、上記のように分析した。
【０２０１】
ＥＬＩＳＡによって検出した場合ＩＦＮ−γに対する有意な結合を示したハイブリドーマ上清から精製したモノクローナル抗体をさらに、下記のような種々のバイオアッセイを用いて生物学的活性について試験した。選択された抗体を１１１９、１１２１、１１１８＊、１１２１＊および１１１８と命名した。
【０２０２】
（実施例３）
（抗ＩＦＮ−γ抗体重鎖および軽鎖のクローニング）
上記の実施例２で同定されたＩＦＮ−γ結合モノクローナル抗体１１１９、１１２１、１１１８＊、１１２１＊および１１１８を発現するハイブリドーマを供給源として用いて、総ＲＮＡ、ＤＮＡおよびタンパク質を単離するのに適切なフェノールおよびグアニジンイソチオシアネートの単層溶液であるＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて総ＲＮＡを単離した。第一鎖のｃＤＮＡを、伸長アダプター（５’−ＧＧＣ ＣＧＧ ＡＴＡ ＧＧＣ ＣＴＣ ＣＡＮ ＮＮＮ ＮＮＴ−３’）（配列番号２３）とともにランダムプライマーを用いて合成し、そして５’ＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ末端の迅速増幅）分取アッセイを、有効性が改善されているｃＤＮＡ末端の迅速増幅（ＲＡＣＥ）のためのキットであるＧＥＮＥＲＡＣＥＲ^ＴＭＫｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、製造業者の指示に従って行った。完全な軽鎖コードｃＤＮＡを調製するために、フォワードプライマーは、ＧＥＮＥＲＡＣＥＲ^ＴＭネスト化プライマーであって、リバースプライマーは５’−ＧＧＧ ＧＴＣ ＡＧＧ ＣＴＧ ＧＡＡ ＣＴＧ ＡＧＧ−３’（配列番号２４）であった。リバースプライマーは、ヒトκ鎖の３’非翻訳領域において見出されるｃＤＮＡ配列の保存領域を認識するように設計した。重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡを調製するために、フォワードプライマーはＧＥＮＥＲＡＣＥＲ^ＴＭネスト化プライマーであって、リバースプライマーは５’−ＴＧＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＴＧＡ ＣＣＡ
ＣＡＣ Ｇ−３’（配列番号２５）であって、これは、ヒトＩｇＧ鎖のＦｃ領域におけるコード配列中の保存領域を認識するように設計した。ＲＡＣＥ産物をｐＣＲ４−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にクローニングして、その配列を決定した。コンセンサス配列を用いて全長抗体鎖ＰＣＲ増幅のプライマーを設計した。
【０２０３】
抗ＩＦＮ−γκ軽鎖をコードするｃＤＮＡを調製するために、５’ＰＣＲプライマーは、シグナル配列のアミノ末端、ＸｂａＩ制限酵素部位、および最適化Ｋｏｚａｋ配列（５’−ＡＣＡ ＡＣＡ ＡＡＧ ＣＴＴ ＣＴＡ ＧＡＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＧＡ ＡＡＣ ＣＣＣ ＡＧＣ ＴＣＡ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＴＴ−３’；配列番号２６）をコードした。３’プライマーは、カルボキシ末端および終止コドン、ならびにＳａｌＩ制限部位（５’−ＣＴＴ ＧＴＣ ＧＡＣ ＴＣＡ ＡＣＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＣＣＴ ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＣＴ−３’；配列番号２７）をコードした。得られたＰＣＲ産物のフラグメントを精製してＸｂａＩおよびＳａｌＩを用いて消化し、次いでゲル単離して、哺乳動物発現ベクターｐＤＳＲα１９に連結した（任意の目的のために参考として本明細書に援用される国際出願公開番号ＷＯ ９０／１４３６３を参照のこと）。
【０２０４】
抗ＩＦＮγ重鎖をコードするｃＤＮＡを調製するため、５’ＰＣＲプライマーは、シグナル配列のアミノ末端、ＸｂａＩ制限酵素部位、および最適化Ｋｏｚａｋ配列（５’−ＣＡＧ ＣＡＧ ＡＡＧ ＣＴＴ ＣＴＡ ＧＡＣ ＣＡＣ ＣＡＴ ＧＧＧ ＧＴＣ ＡＡＣ ＣＧＣ ＣＡＴ ＣＣＴ ＣＧ−３’；配列番号２８）をコードした。３’プライマーは、天然に存在するセンス鎖ＢｓｍＢＩ部位（５’−ＣＴＴ ＧＧＴ ＧＧＡ ＧＧＣ ＡＣＴ ＡＧＡ ＧＡＣ ＧＧＴ ＧＡＣ ＣＡＧ ＧＧＴ ＧＣＣ ＡＣＧ ＧＣＣ−３’；配列番号２９）を含む可変領域のカルボキシル末端をコードした。得られた産物を精製して、ＸｂａＩおよびＢｓｍＢＩを用いて消化し、ゲル単離して、ヒトＩｇＧ１定常領域を含むｐＤＳＲα１９ベクターに連結した。
【０２０５】
（実施例４）
（チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における抗ＩＦＮγ抗体の発現）
リン酸カルシウム法を用いて、１１１９−重鎖／ｐＤＳＲα１９および１１１９κ鎖／ｐＤＳＲα１９プラスミドを、ジヒドロ葉酸還元酵素欠損（ＤＨＦＲ−）無血清適合チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中に同時トランスフェクションすることによって、１１１９抗ＩＦＮ−γ ｍＡｂの安定な発現を得た。トランスフェクトされた細胞を透析血清を含むが、ヒポキサンチン−チミジンを含まない培地中で選択して、ＤＨＦＲ酵素を発現する細胞の増殖を確保した。トランスフェクトされたクローンをＥＬＩＳＡのようなアッセイを用いてスクリーニングして、馴化培地中で１１１９抗ＩＦＮ−γ ｍＡｂの発現を検出した。１１１９発現細胞株をメトトレキセート増幅に供した。増幅の際の最高発現クローンを単細胞クローニングおよび細胞バンクの作製のために選択した。
【０２０６】
本発明の任意の組み換え抗ＩＦＮ−γ抗体は、１１１９ＭＡｂについて上記と同じプロトコールを用いて、ＤＨＦＲの欠損したチャイニーズハムスター卵巣細胞において生成し得る。本発明の各々の抗ＩＦＮ−γ抗体の完全重鎖または軽鎖をコードするＤＮＡ配列を発現ベクター中にクローニングする。ＤＨＦＲを欠くＣＨＯ細胞を、適切な抗ＩＦＮ−γ抗体の完全重鎖を発現できる発現ベクターおよび完全軽鎖を発現できる発現ベクターを用いて同時トランスフェクトする。例えば、１１１８抗体を生成するために、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む完全重鎖を発現できるベクターおよび配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む完全軽鎖を発現できるベクターを用いて細胞を同時トランスフェクトする。１１２１抗体を生成するために、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む完全重鎖を発現できるベクター、および配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む完全軽鎖を発現できるベクターを用いて細胞を同時トランスフェクトする。１１１８＊抗体を生成するために、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む完全重鎖を発現できるベクター、および配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む完全軽鎖を発現できるベクターを用いて細胞を同時トランスフェクトする。１１２１＊抗体を生成するために、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む完全重鎖を発現できるベクター、および配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む完全軽鎖を発現できるベクターを用いて細胞を同時トランスフェクトする。表３は、種々のＩＦＮγ抗体についての完全重鎖および完全軽鎖をまとめる。
【０２０７】
【表３】

（実施例５）
（抗ＩＦＮ−γ抗体の産生）
１１１９抗体を発現するＣＨＯ細胞のクローン株における発現によって１１１９抗体を産生した。産生を行なうために、単一のバイアルから細胞を無血清細胞培養培地中に溶かした。この細胞を２５０ｍＬの振盪フラスコ中で最初に、次いでスピナーフラスコ中で、そして最後にステンレス鋼リアクター中で２０００Ｌのバイオリアクターまでスケールアップして増殖させた。流加培養法を用いて２０００Ｌのバイオリアクター中で産生を行ない、ここには濃縮された媒体成分を含む栄養供給原を加えて、細胞の増殖および培養生存度を維持した。産生を約２週間続けて、この間に細胞によって１１１９抗体を構成的に産生して、細胞培養培地に分泌させた。
【０２０８】
産生リアクターを予め決定したｐＨ、温度および溶存酸素レベルで制御した。このｐＨを二酸化炭素ガスおよび炭酸ナトリウムの添加によって制御した。溶存酸素を、空気、窒素および酸素のガスフローによって制御した。
【０２０９】
産生の終わりに、細胞ブロスをディスクスタック遠心分離に供して、培養上清を細胞から分離した。さらにこの濃縮物をデプスフィルター、続いて０．２μｍのフィルターを通して清澄化する。次いで、清澄化した馴化培地を接線流限外濾過によって濃縮した。馴化培地を１５〜３０倍に濃縮した。次いで、得られた濃縮された馴化培地を処理して抗体を精製したが、これは後日精製するために凍結してもよい。本明細書に記載される任意の他の抗体は、同様の様式で産生できる。
【０２１０】
（実施例６）
（抗ＩＦＮγ抗体の活性の特徴づけ）
ＩＦＮ−γは多数の生物学的効果を有するので、いくつかの異なるバイオアッセイを用いて種々のＩＦＮ−γ抗体の力価を比較する。以下で記載されたＡ５４９アッセイを、そのアッセイでの選択された候補物の能力に基づいたさらなる分析のためにそれらの選択された候補物を用いる一次スクリーニングに使用した。選択された候補物は、１１１９抗体、１１１８抗体および１１２１抗体を含んだ。
【０２１１】
（Ａ５４９ バイオアッセイ）
ＩＦＮ−γの確立された特性の１つは種々の細胞集団に対するその抗増殖効果である。例えば、ＡｕｎｅおよびＰｏｇｕｅ，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：８６３〜７５を参照のこと。ヒト肺細胞株Ａ５４９は、ＩＦＮ−γの生物活性を記載している刊行物では頻繁に用いられている。例えば、ＡｕｎｅおよびＰｏｇｕｅ、前出；Ｈｉｌｌら、１９９３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７９：２３６〜４０を参照のこと。一般には、用量のわずかな変化が応答の変化を生じる、用量応答曲線の一部におさまる刺激物質の濃度でインヒビターの活性を試験する。当業者は、過剰な用量の刺激物質が用いられる場合、応答の変化を観察するには極めて高用量のインヒビターが必要であり得ることを認識する。物質を刺激するために一般に用いられる濃度は、ＥＣ_８０およびＥＣ_９０（最大応答のそれぞれ８０％または９０％が達成される濃度）である。
【０２１２】
ＩＦＮ−γ用量応答曲線を作成して肺上皮癌細胞株Ａ５４９のＥＣ_９０を決定した（約３０ｐＭ）。引き続く実験では、異なる濃度の精製された抗体を固定用量のＩＦＮ−γ（３０ｐＭ）と混合して、この抗体がＩＦＮ−γの抗増殖性効果の生物学的活性を阻害する能力を決定した。このアッセイを５日間行なって、代謝的に活性な、すなわち増殖している細胞による、細胞増殖を示すために用いられる色素であるＡＬＡＭＡＲＢＬＵＥ^ＴＭ（ＡｃｃｕＭｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）の減少によって生じた蛍光を決定することによって増殖を測定した。例えば、ｄｅ ＦｒｉｅｓおよびＭｉｔｓｕｈａｓｈｉ，１９９５，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ９（２）：８９〜９５；Ａｈｍｅｄら、１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １７０（２）：２１１〜２４を参照のこと。
【０２１３】
図９に示されるとおり、１１１９抗体は、１４ｐＭというＩＣ_５０（ＩＦＮ−γの効果の５０％阻害を達成した濃度）を有する最も強力な抗体であって、１１２１（４６ｐＭ）および１１１８（９７ｐＭ）がそれに続く。
【０２１４】
（ＨＬＡ ＤＲバイオアッセイ）
ＩＦＮ−γの確立された別の特性は、種々の細胞タイプにおけるＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ遺伝子の発現を上方制御する能力である。この活性は特に、ループス腎炎に関連し得る（Ｙｏｋｏｙａｍａら、１９９２，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．４２：７５５〜６３）。ＴＨＰ−１ヒト単球細胞株は、ＩＦＮ−γのこの生物活性について述べている刊行物では頻繁に用いられている。ＩＦＮ−γ用量応答曲線を作成して、この実験に用いられる特定のＴＨＰ−１細胞株のＥＣ_８０を決定した（約２１ｐＭ）。引き続く実験では、種々の濃度の精製された抗体を固定用量のＩＦＮ−γ（２１ｐＭ）と混合して、この抗体が細胞表面上でのＨＬＡ ＤＲ発現のＩＦＮ−γ誘導性上方制御を中和または阻害する能力を決定した。このアッセイを２４時間行ない、測定した指標は、細胞に対するＦＩＴＣ標識抗ＨＬＡ ＤＲ抗体の結合を検出するためのＦＡＣＳ解析によって決定された平均蛍光強度であった。
【０２１５】
図１０に示されるとおり、１１１９抗体は、１４ｐＭというＩＣ_５０を有する最も強力な抗体であって、１１２１抗体（６０ｐＭ）および１１１８抗体（８６ｐＭ）がそれに続く。
【０２１６】
（全血のバイオアッセイ）
いくつかの異なる細胞株におけるＩＰ−１０ケモカインの産生をＩＦＮ−γが上方制御するという公表された観察に基づいてヒト全血のアッセイを行なった。この活性は特に、ループス腎炎に関連し得る（Ｎａｒｕｍｉら、２０００，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １２：１５６１〜１５６５）。多数の正常ヒトドナー由来の全血を、ＩＦＮ−γがＩＰ−１０産生を増大する能力について試験した。ＩＦＮ−γ用量応答曲線を作成して、個々のドナーについてのＥＣ_５０を決定した。予想どおり、いくつかの変動がドナーの間で観察された。一般に、５０〜１００ｐＭのＥＣ_５０を再現可能に示すと考えられるドナーを用いた。全血を固定濃度のＩＦＮ−γおよび種々の濃度の抗体と混合して、１８．５時間インキュベートして、次いでＥＬＩＳＡによってＩＰ−１０レベルを決定した。全血アッセイからの２つの異なるドナーについての代表的な結果を図１１に示す。これらの２つのドナーからのＩＣ_５０は１７ｐＭおよび１４ｐＭであった。現在まで、外因性ＩＦＮ−γの添加の必要なしに全血アッセイにおいて自然に上昇したＩＰ−１０レベルを有する１つのドナーが同定されている。抗ＩＦＮγ抗体は、おそらく内因性に生成されたＩＦＮ−γをブロックすることによって、ＩＰ−１０のこの自然な産生をブロックできた。
【０２１７】
（生化学的アッセイ）
ＩＦＮ−γに対するいくつかの抗体についての結合動態を、ＢＩＡコア分析によって測定した。最初の結果では、この抗体が、分子間の結合を測定するために表面プラズモン共鳴を用いる装置である、ＢＩＡＣＯＲＥ^ＴＭ（Ｐｈａｒｍａｃｉｓ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ
ＡＢ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）での信頼性のある測定の限界にアプローチするオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有することが示唆された。従って、平衡結合アッセイを行なって用いた。平衡に達するように、固定量の抗体を種々の濃度のＩＦＮ−γとともに５時間を超えてインキュベートし、次いでＩＦＮ−γ結合ビーズと極めて短時間接触させて、このビーズに結合した遊離の抗体の量を、蛍光に基づく免疫アッセイ装置であるＫＩＮＥＸＡ^ＴＭ装置（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）で測定した。１１１９抗体では、最低の平衡解離定数である約２４ｐＭが得られた。
【０２１８】
（実施例７）
（種交差反応性）
上記の抗体がいくつかの異なる種由来の組み換えＩＦＮ−γタンパク質を中和または阻害する能力について、それらの抗体を試験した。マウスＩＦＮ−γタンパク質は市販されているが、ヒト、カニクイザルおよびチンパンジーのＩＦＮ−γタンパク質は、クローニングして、ヒト２９３細胞のような従来の哺乳動物発現系において発現した。ヒト、カニクイザルおよびチンパンジーのＩＦＮ−γタンパク質は全てが以前に記載されたＡ５４９アッセイで活性であるが、マウスタンパク質は、このアッセイでは活性ではない。マウスタンパク質は、マウス細胞株の置換について以外は以前に記載されたＡ５４９アッセイと本質的に同一である、ＲＡＷ ２６４．７細胞株に基づくアッセイにおいて活性であった。ＲＡＷ ２６４．７はマウス単球マクロファージ細胞株であり、そして例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから得ることができる。表４に示されるとおり、３つ全ての抗体がヒトおよびチンパンジーのＩＦＮ−γを中和できたが、３つのうちどれもカニクイザルまたはマウス由来のＩＦＮ−γの生物学的活性を中和も阻害もできなかった。
【０２１９】
【表４】

（実施例８）
（抗ＩＦＮ−γ抗体のエピトープの同定）
成熟ヒトおよびカニクイザルのＩＦＮ−γのアミノ酸配列の比較によって、それらの間に９つのアミノ酸の相違が、ヒトＩＦＮ−γ配列の１９、２０、３１、３４、６５、７７、１０３、１１０および１２６位置において存在することが示された。ヒトおよびチンパンジーのＩＦＮ−γの配列は、ＴｈａｋｕｒおよびＬａｎｄｏｌｆｉ（１９９９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３６：１１０７〜１５に開示されている。カニクイザルＩＦＮ−γ配列は、ＴａｔｓｕｍｉおよびＳａｔａ（１９９７）、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１４（３）：２２９〜３６に開示されている；そしてマウスＩＦＮ−γ配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）アクセッション番号ＮＰ＿０３２３６３に開示されている。市販のキットを用いる部位特異的突然変異誘発を用いて、ヒトＩＦＮ−γ内の相違するヒトアミノ酸の各々を、カニクイザルタンパク質由来の対応するアミノ酸によって個々に置換した。各々の置換されたＩＦＮ−γは、ヒトＩＦＮγ配列に存在するアミノ酸を置換するために用いたアミノ酸についての記号、およびこの置換が生じた成熟ヒトＩＦＮ−γ配列における位置に従って「ｈｕＩＦＮγ」と命名した。例えば、「ｈｕＩＦＮγＤ１９」は、１９位置を除いてヒトＩＦＮ−γに同一のＩＦＮ−γのバージョンを表し、ここでは正常にはこの位置を占めるヒスチジンにアスパラギン酸が置き換わっている。同様の実験を行ない、ここではカニクイザルＩＦＮ−γ内で開始して、各々の相違するアミノ酸をヒトＩＦＮ−γに存在するアミノ酸で置換した。例えば、「ｃｙｎｏＩＦＮγＬ１０３」は、１０３位置を除いてカニクイザルＩＦＮ−γに同一のＩＦＮ−γのバージョンを表し、ここでは正常にはこの位置を占めるセリンにロイシン酸が置き換わっている。表５および６を参照のこと。これらの変異タンパク質を、ヒト２９３細胞のような従来の哺乳動物発現系で発現させた。全ての変異体ＩＦＮ−γタンパク質が、Ａ５４９アッセイにおいて決定された活性を保持していた。１１１９抗体が種々の変異体ＩＦＮ−γタンパク質の生物学的活性を中和または阻害する能力について、Ａ５４９バイオアッセイを用いて決定して、この抗体を試験した。１１１９抗体がヒトＩＦＮ−γ抗増殖活性を中和または阻害する能力を、上記のような蛍光を測定することによって決定して、これを１１１９抗体がＩＦＮ−γの改変型の各活性を中和する能力を比較するためのベースラインとして用いた。ヒトＩＦＮ−γで開始した構築物について、ＩＦＮ−γ活性の阻害をパーセンテージとして測定し、ここではヒトＩＦＮ−γおよび１１１９抗体の存在下で観察された蛍光の最大レベル（増殖している細胞によるＡＬＡＭＡＲＢＬＵＥ^ＴＭの減少に起因する）を１００％に設定して、ＩＦＮ−γの各変化型に加えて１１１９抗体の存在下で測定した最大レベルとこれとを比較した。あるいは、カニクイザルＩＦＮ−γで開始する構築物については、観察された蛍光に基づいて阻害を定量的にスコア付けした。
【０２２０】
表５にまとめたとおり、１１１９抗体は、ヒトＩＦＮ−γ、ならびにｈｕＩＦＮγＤ１９およびｈｕＩＦＮγＰ２０を除くヒトＩＦＮγの全ての置換変異体の生物学的活性を中和または阻害することができた。前の実施例のように、カニクイザルＩＦＮ−γタンパク質はまた、１１１９抗体では阻害されなかった。この解析によって、残基１９および２０が１１１９抗体とＩＦＮ−γとの間の相互作用に特に重要であり、そして１１１９抗体とヒトＩＦＮ−γとの間の接触のポイントとして機能し得ることが示される。
【０２２１】
【表５】

表６は、１９位置および２０位置でヒト配列に適合するカニクイザルＩＦＮγ配列を作成する置換を含むカニクイザルＩＦＮγの変更バージョンが、１１１９抗体によって中和されなかったことを示す。しかし、１９、２０および６５、または１９、２０および１０３位置にヒト配列置換を有するカニクイザルＩＦＮγのバージョンは、１１１９抗体によって中和され、これはこれらのいずれかに加えてさらに置換を含むバージョンと同様であった。
【０２２２】
【表６】

（実施例９）
（チンパンジーに対する投与の際の抗ＩＦＮ−γ抗体の生物学的活性）
３週間の間、毎週２０ｍｇ／ｋｇの用量で２匹のチンパンジーに１１１９抗体を投与した。抗体の投与の２週前（−２）または１週前（−１）にチンパンジーから血液を採取し、さらに抗体の初回用量の投与の２、８、１５、２９および３６日後に血液を採取した。実施例６に記載のヒト全血アッセイにおいて用いたのと本質的に同じ方法を用いて、この採取した血液でチンパンジーの全血アッセイを行なったが、重要な相違は、この抗体は全血を外因性に加えたのではなくこのチンパンジーに事前にインビボで投与したということであった。ＩＦＮ−γを種々の濃度で血液に加えて（０．０１ｎｇ／ｍｌ、３．９ｎｇ／ｍｌまたは１μｇ／ｍｌ）、この血液を３７℃で２０〜２４時間インキュベートして、次いでビーズに基づくＥＬＩＳＡによってＩＰ−１０産生を測定した。
【０２２３】
図１４および１５でわかるように、抗体投与の前に動物から採取された血液は、ＩＦＮ−γと反応性であって、ＩＰ−１０産生が濃度依存性に増大した。対照的に、抗体投与後に採取された血液は、試験したどの濃度のＩＦＮ−γとも反応せず、ＩＰ−１０の産生が増大した。これらデータによって、この抗体はインビボでの投与後でさえ、ＩＦＮ−γを中和する能力を保持していたことが示される。さらにこれらの培養物に添加されたＩＦＮ−γの量は、チンパンジーでのＩＦＮ−γの内因性のレベルを大きく超えており、これによって、投与された抗体がインビボで内因性のＩＦＮ−γを中和できることが示唆された。
【０２２４】
前述の開示によって本発明の特定の実施形態が強調されること、およびその全ての改変または変更が添付の特許請求の範囲に示される本発明と等価であり、そのうえ本発明の趣旨および範囲内であることが理解されるべきである。本明細書に引用される全ての参考文献はその全体が参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０２２５】
【図１Ａ】図１Ａ〜１Ｂは、１１１８、１１１８＊、１１１９、１１２１および１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖定常領域のアミノ酸配列（図１Ｂ；配列番号２）をコードするｃＤＮＡ（図１Ａ；配列番号１）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図１Ｂ】図１Ａ〜１Ｂは、１１１８、１１１８＊、１１１９、１１２１および１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖定常領域のアミノ酸配列（図１Ｂ；配列番号２）をコードするｃＤＮＡ（図１Ａ；配列番号１）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｂは、１１１８、１１１８＊、１１１９、１１２１および１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖定常領域のアミノ酸配列（図２Ｂ；配列番号４）をコードするｃＤＮＡ（図２Ａ；配列番号３）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｂは、１１１８、１１１８＊、１１１９、１１２１および１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖定常領域のアミノ酸配列（図２Ｂ；配列番号４）をコードするｃＤＮＡ（図２Ａ；配列番号３）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｂは、１１１９の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（図３Ｂ；配列番号６）をコードするｃＤＮＡ（図３Ａ；配列番号５）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ〜３Ｂは、１１１９の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（図３Ｂ；配列番号６）をコードするｃＤＮＡ（図３Ａ；配列番号５）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｂは、１１１９の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図４Ｂ；配列番号８）をコードするｃＤＮＡ（図４Ａ；配列番号７）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｂは、１１１９の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図４Ｂ；配列番号８）をコードするｃＤＮＡ（図４Ａ；配列番号７）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図５Ａ】図５Ａ〜５Ｂは、１１１８の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（図５Ｂ；配列番号１０）をコードするｃＤＮＡ（図５Ａ；配列番号９）の一部のヌクレオチド配列を示す。図５Ｃは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３０）を示す。図５Ｄは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５６）を示す。
【図５Ｂ】図５Ａ〜５Ｂは、１１１８の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（図５Ｂ；配列番号１０）をコードするｃＤＮＡ（図５Ａ；配列番号９）の一部のヌクレオチド配列を示す。図５Ｃは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３０）を示す。図５Ｄは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５６）を示す。
【図５Ｃ】図５Ａ〜５Ｂは、１１１８の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（図５Ｂ；配列番号１０）をコードするｃＤＮＡ（図５Ａ；配列番号９）の一部のヌクレオチド配列を示す。図５Ｃは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３０）を示す。図５Ｄは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５６）を示す。
【図５Ｄ】図５Ａ〜５Ｂは、１１１８の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（図５Ｂ；配列番号１０）をコードするｃＤＮＡ（図５Ａ；配列番号９）の一部のヌクレオチド配列を示す。図５Ｃは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３０）を示す。図５Ｄは、１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５６）を示す。
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｂは、１１１８または１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸（図６Ｂ；配列番号１２）をコードするｃＤＮＡ（図６Ａ；配列番号１１）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｂは、１１１８または１１１８＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸（図６Ｂ；配列番号１２）をコードするｃＤＮＡ（図６Ａ；配列番号１１）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｂは、１１２１、または１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖定常領域のアミノ酸配列（図７Ｂ；配列番号１４）をコードするｃＤＮＡ（図７Ａ；配列番号１３）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図７Ｂ】図７Ａ〜７Ｂは、１１２１、または１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の重鎖定常領域のアミノ酸配列（図７Ｂ；配列番号１４）をコードするｃＤＮＡ（図７Ａ；配列番号１３）の一部のヌクレオチド配列を示す。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｂは、１１２１の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図８Ｂ；配列番号１６）をコードするｃＤＮＡ（図８Ａ；配列番号１５）の一部のヌクレオチド配列を示す。図８Ｃは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図３１）を示す。図８Ｄは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５７）を示す。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｂは、１１２１の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図８Ｂ；配列番号１６）をコードするｃＤＮＡ（図８Ａ；配列番号１５）の一部のヌクレオチド配列を示す。図８Ｃは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図３１）を示す。図８Ｄは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５７）を示す。
【図８Ｃ】図８Ａ〜８Ｂは、１１２１の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図８Ｂ；配列番号１６）をコードするｃＤＮＡ（図８Ａ；配列番号１５）の一部のヌクレオチド配列を示す。図８Ｃは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図３１）を示す。図８Ｄは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５７）を示す。
【図８Ｄ】図８Ａ〜８Ｂは、１１２１の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図８Ｂ；配列番号１６）をコードするｃＤＮＡ（図８Ａ；配列番号１５）の一部のヌクレオチド配列を示す。図８Ｃは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（図３１）を示す。図８Ｄは、１１２１＊の抗ＩＦＮ−γ抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号５７）を示す。
【図９】図９は、１１１９、１１１８および１１２１のモノクローナル抗体を用いたＡ５４９バイオアッセイにおけるＩＦＮ−γの生物学的活性の中和または阻害を示すグラフを含む。
【図１０】図１０は、１１１９、１１１８および１１２１のモノクローナル抗体によるＴＨＰ−１／ＨＬＡ ＤＲバイオアッセイにおけるＩＦＮ−γの生物学的活性の中和または阻害を示すグラフを含む。
【図１１】図１１は、１１１９のモノクローナル抗体による全血バイオアッセイ（２つのドナー）におけるＩＦＮ−γの生物学的活性の中和または阻害を示すグラフを含む。
【図１２】図１２は、１１１８、１１１８＊、１１２１および１１１９と命名された抗ＩＦＮモノクローナル抗体の重鎖のアミノ末端部分（可変領域を含む）のアラインメントを示す。この配列は、実施例３において単離されたｃＤＮＡ上にコードされるシグナル配列を含む。このシグナル配列は、１位〜１９位に延びる。ＣＤＲには下線を付している。図に示すとおり、ＣＤＲ１は、アミノ酸５０〜５４にまたがり、ＣＤＲ２は、６９〜８５にまたがり、そしてＣＤＲ３は、１１８〜１２５にまたがる。Ｋａｂａｔら（１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）の番号付けシステムは、成熟抗体の最初のアミノ酸で開始して、シグナル配列は除く。従って、この図の２０位は、Ｋａｂａｔら（前出）の１位に相当する。
【図１３】図１３は、１１１８、１１２１、１１２１＊および１１１９と命名された抗ＩＦＮモノクローナル抗体の軽鎖のアミノ末端部分（可変領域を含む）のアラインメントを示す。この配列は、実施例３において単離されたｃＤＮＡ上にコードされるシグナル配列を含む。このシグナル配列は、１〜２０位に延びる。ＣＤＲには下線を付している。図に示すとおり、ＣＤＲ１は、アミノ酸４４〜５５にまたがり、ＣＤＲ２は、７１〜７７にまたがり、そしてＣＤＲ３は、１１０〜１１８にまたがる。Ｋａｂａｔら（前出）の番号付けシステムは、シグナル配列を除くので、この図の２１位は、Ｋａｂａｔらの１位に相当する。
【図１４】図１４は、週に１回行なった、抗ＩＦＮγ抗体の３回の注射の開始の２週間前もしくは１週間前（図１４では「−２」および「−１」と表示した線）、または２日間後、８日間後、１５日間後、２９日間後もしくは３６日後（図１４では「２」、「８」、「１５」、「２９」もしくは「３６」と表示した線）においてチンパンジーから採取した全血による、ＩＦＮ−γに応答したＩＰ−１０の産生を示す。
【図１５】図１５は、異なるチンパンジーの血液を用いた以外は、図１４と同様である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載される発明。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図５Ｄ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図８Ｄ】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【公開番号】特開２００９−８２１３３（Ｐ２００９−８２１３３Ａ）
【公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２６５８００（Ｐ２００８−２６５８００）
【出願日】平成２０年１０月１４日（２００８．１０．１４）
【分割の表示】特願２００５−５０１４４１（Ｐ２００５−５０１４４１）の分割
【原出願日】平成１５年１０月１６日（２００３．１０．１６）
【出願人】（５００２０３７０９）アムジェン　インコーポレイテッド (76)
【出願人】（５０２０６６６４９）メダレックス，　インコーポレイテッド (13)
【Ｆターム（参考）】