酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性向上方法
【課題】弱酸性〜中性付近の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性方法を提供する。
【解決手段】ｐＨ５〜６．６の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性を向上させる方法であって、上記水含有組成物において酵素処理イソクエルシトリンとカテキンまたはカテキン含有組成物とを共存させることを特徴とする上記方法。
【解決手段】ｐＨ５〜６．６の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性を向上させる方法であって、上記水含有組成物において酵素処理イソクエルシトリンとカテキンまたはカテキン含有組成物とを共存させることを特徴とする上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、弱酸性〜中性付近の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ルチンのアグリコンであるクエルセチン（Quercetin：3,3’,4’,5,7-pentahydroxyflavone）は、強力な抗酸化活性（非特許文献１参照）の他、血小板の凝集抑制および接着抑制作用、血管拡張作用、抗ガン作用等、多彩な生理機能をもつことが知られている。このクエルセチンについても、タマネギに多く含まれるクエルセチン配糖体（Quercetin-4’-β-D-glucoside、Quercetin-3,4’-β-D-glucoside）の方が吸収性に優れていることが報告されている（非特許文献２参照）。また同様に、クエルセチンの３位にグルコースがβ結合したイソクエルシトリン（Quercetin-3-β-D-glucoside）は、クエルセチンやルチンよりも吸収性が高いことが報告されている（非特許文献３参照）。
【０００３】
このようにイソクエルシトリンは、クエルセチンやルチンより吸収性に優れた成分であるものの、水に難溶であるため食品や飲料等の水系の組成物に対して利用が制限されるという問題を有している。そこで、この問題を解消する方法として、糖転移酵素を用いて、基質のグルコース残基をイソクエルシトリンのグルコース残基部位に転移させてα−グリコシルイソクエルシトリンを調製する方法が提案されている（特許文献１参照）。斯くして調製されるα−グリコシルイソクエルシトリン（本発明では、「酵素処理イソクエルシトリン」と称する）は、イソクエルシトリンの作用はそのままに、水への溶解性が改善された水易溶性物質であり、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社から食品用の酸化防止剤（食品添加物）として「サンメリン（登録商標）ＡＯ−３０００」や「サンメリン（登録商標）パウダーＣ−１０」の名称で上市されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１−２１３２９３号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Middlton EJ. et al., Pharmacol Rev., 52, 673-751, 2000
【非特許文献２】Hollman PC et al., Arch Toxicol Suppl., 20, 237-248, 1998
【非特許文献３】Morand C et al., Free Rad Res., 33, 667-676, 2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように強力な抗酸化作用や種々の生理活性を有し、生体の健康維持に有用な機能性素材である酵素処理イソクエルシトリン（以下、「ＥＭＩＱ」ともいう）は、ｐＨ２.５〜５の酸性条件下では比較的安定であるものの、ｐＨ５以上、特にｐＨ６以上の条件下になると、水含有組成物中では、ＥＭＩＱが経時的に開環して重合し、ＥＭＩＱよりも抗酸化作用や生理活性の劣るＥＭＩＱ開環重合物等になると考えられる。
【０００７】
このため、ｐＨ５以上ｐＨ７未満の条件下にある水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品、特に飲料に対してＥＭＩＱを添加しても、保存中に経時的にＥＭＩＱ開環重合物等が生成してＥＭＩＱ含有量が低下し（後述する実験例１および２参照）、ＥＭＩＱの抗酸化作用や生理活性といった所期の効果を発揮させて、これを享受することができないという問題があった。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、上記ＥＭＩＱについて、ｐＨ５以上ｐＨ７未満の条件、具体的にはｐＨ５〜６.６の条件にある水含有組成物中での保存安定性を向上させる方法を提供すること、そして当該ｐＨ条件にある水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品、特に飲料に対してＥＭＩＱを添加した場合でも、保存中にＥＭＩＱ含有量が経時的に低下することを有意に抑制し、ＥＭＩＱの所期の効果を発揮させることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討を重ねたところ、ＥＭＩＱを含有するｐＨ５以上ｐＨ７未満の条件、より具体的にはｐＨ５〜６.６の条件にある水含有組成物中に、カテキンを共存させることにより、当該ｐＨ条件下でのＥＭＩＱの経時的な含有量の低下が抑制できることを見出した（後述する実験例１および２参照）。
【００１０】
本発明は、かかる知見に基づいて完成したものであり、下記の実施形態を含有するものである：
（１）ｐＨ５〜６.６の水含有組成物中におけるＥＭＩＱの保存安定性を向上させる方法であって、上記水含有組成物においてＥＭＩＱをカテキンまたはカテキン含有組成物と共存させることを特徴とする、上記方法。
（２）カテキンが緑茶カテキンである（１）記載の方法。
（３）カテキン含有組成物が茶抽出物である（１）記載の方法。
（４）水含有組成物のＥＭＩＱ濃度が０.０１〜０.１質量％である、（１）乃至（３）のいずれかに記載する方法。
（５）水含有組成物のカテキンまたはカテキン含有組成物の含有量が、カテキンの総量に換算して、０.００２８〜０.０４質量％である、（１）乃至（４）のいずれかに記載する方法。
（６）水含有組成物中のＥＭＩＱ含有量１００質量部に対するカテキンまたはカテキン含有組成物の割合が、カテキンの総量に換算して、２.８〜４００質量部である、（１）乃至（５）のいずれかに記載する方法。
（７）ｐＨ５〜６.６の水含有組成物が、水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品である（１）乃至（６）のいずれかに記載する方法。
（８）ｐＨ５〜６.６の水含有組成物が飲料である、（１）乃至（６）のいずれかに記載する方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、ｐＨ５〜６.６の条件にある水含有組成物中でのＥＭＩＱの保存安定性を向上させる方法を提供することができる。その結果、本発明によれば、当該ｐＨ条件にある水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品、特に飲料に対してＥＭＩＱを添加した場合でも、保存中にＥＭＩＱ含有量が経時的に低下することを有意に抑制し、ＥＭＩＱの所期の効果を発揮させることが可能になる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ｐＨ５〜６.６の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリン（ＥＭＩＱ）の保存安定性を向上させる方法である。当該方法は、上記水含有組成物中において、ＥＭＩＱをカテキンと共存させることによって実施することができる。
【００１３】
（１）酵素処理イソクエルシトリン（ＥＭＩＱ）
本発明の酵素処理イソクエルシトリンとは、ルチンを、酵素（ナリンジナーゼ、ヘスペリジナーゼまたはラムノシダーゼ）処理した後、精製して得られた主成分がイソクエルシトリンである「ルチン酵素分解物」と、でん粉またはデキストリンの混合物に、シクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼを用いてグルコースを付加して得られたものであり、主成分はα-グルコシルイソクエルシトリンである（食品衛生法及び栄養改善法の一部を改正する法律（平成7年法律第101号）附則第2条第4項に規定する既存添加物名簿（平成8年4月16日厚生省告示第120号）参照）。例えば市販品としてサンメリン（登録商標）ＡＯ−３０００、サンメリン（登録商標）パウダーＣ−１０（以上、三栄源エフ・エフ・アイ社製）等を挙げることができる。
【００１４】
（２）カテキン
本発明で用いる「カテキン」はフラボノイドの一種で、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート（ＧＣｇ）等の非エピ体カテキン類；およびエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ）等のエピ体カテキン類をあわせた総称である。好ましくは茶由来のカテキンであり、より好ましくは緑茶に由来するカテキンである。
【００１５】
かかるカテキンとしては、カテキンを含有する植物組織から熱水若しくは水溶性有機溶媒により抽出された抽出物、またはこれを濃縮して固体、水溶液若しくはスラリー状の形態としたものを利用してもよく、また上記抽出物をさらに精製したものであってもよい。本発明では、これを「カテキン含有組成物」と称する。本発明では、化学合成されたカテキンも利用可能である。なお、茶の抽出液中ではカテキンは非重合体として存在しており、本発明におけるカテキンはこの非重合体も含めて意味するものとする。
【００１６】
上記カテキンを含有する植物組織としては茶葉の他、バラ科、ツバキ科、ブドウ科、シソ科、アカネ科、アオギリ科、タデ科に属する植物の果実や種子等を挙げることができる。好ましくは、茶葉、ブドウ、リンゴ、および大豆等の果実または種子である。
【００１７】
カテキンを得るための茶としては、Ｃａｍｅｌｌｉａ属（例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓおよびＣ．ａｓｓａｍｉｃａ）またはやぶきた種またはそれらの雑種等の樹木の茶葉から製茶された不発酵茶（煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜炒り茶等の緑茶類）、半発酵茶（烏龍茶等）、発酵茶（紅茶等）を挙げることができる。好ましくは不発酵茶であり、より好ましくは緑茶である。
【００１８】
茶を抽出する方法については、攪拌抽出、カラム法、ドリップ抽出など従来の方法により行う。簡便な方法としては、上記の茶葉を、例えば４０〜１４０℃の水に浸漬し、０.１分〜１２０時間加熱処理して抽出物を得る方法である。また抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸または有機酸塩類を添加してもよい。また煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法も併用してもよい。このようにして得られた茶抽出液は、そのままでも、乾燥または濃縮してもよく、液体、スラリー、半固体、固体（粉末または顆粒状）の状態で、本発明に用いるカテキン含有組成物として使用することができる。
【００１９】
カテキン含有組成物として、茶葉から抽出した抽出液を使用する代わりに、茶抽出物の濃縮物を用いても、茶葉からの抽出液と茶抽出物の濃縮物とを併用してもよい。ここで、茶抽出物の濃縮物とは、茶葉から熱水または水溶性有機溶媒により抽出された抽出物を濃縮したものであり、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載されている方法により調製したものをいう。具体的には、茶抽出物の濃縮物として、市販の三井農林社製「ポリフェノン」、伊藤園社製「テアフラン」、太陽化学社製「サンフェノン」等のカテキン含有製剤を用いることもできる。
【００２０】
カテキン含有組成物の形態は、水含有組成物に添加配合し、溶解または分散させることができるものであればよく、例えば液体、スラリー、半固体、固体（粉末または顆粒状）の形態が挙げられる。
【００２１】
（３）水含有組成物
本発明が対象とする水含有組成物は、ｐＨが５〜６.６の範囲にあり、水を含有する組成物である。好ましいｐＨ条件としてはｐＨ５.５〜６.６、ｐＨ６〜６.６を挙げることができる。かかる水含有組成物としては、上記ｐＨ条件にある水を含む飲食品または医薬品若しくは医薬部外品を挙げることができる。ここで水の含有割合は特に制限されず、好ましくは９０〜９９.９質量％の範囲から適宜選択することができる。
【００２２】
水を含む飲食品として、好ましくは飲料である。かかる飲料には、ｐＨが５〜６.６の範囲にある各種飲料、例えば、野菜ジュース、野菜入り飲料、果汁系ニアウォーター、茶系飲料（緑茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料、麦茶飲料、ブレンド茶飲料、その他の茶飲料（杜仲茶、ジャスミン茶、甜茶、はと麦茶、玄米茶など）、スポーツ飲料（スポートドリンク）、乳性飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料やコーヒー入り清涼飲料などが含まれる。好ましくは、茶系飲料である。
【００２３】
（４）ＥＭＩＱとカテキンまたはカテキン含有組成物との共存
ＥＭＩＱとカテキンまたはカテキン含有組成物との共存は、上記水含有組成物、つまりｐＨが５〜６.６の範囲にある水含有組成物に、ＥＭＩＱとカテキンまたはカテキン含有組成物を添加配合し、両成分を共存させることで実施することができる。
【００２４】
水含有組成物中のＥＭＩＱの含有割合としては、制限されず、通常０.０１〜０.１質量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは０.０３〜０.０９質量％であり、より好ましくは０.０６〜０.０８５質量％である。
【００２５】
ＥＭＩＱと共存させる水含有組成物中のカテキンまたはカテキン含有組成物の含有割合としては、制限されず、カテキンの総量に換算して、通常０.００２８〜０.０４質量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは０.００４〜０.０３質量％であり、より好ましくは０.０１〜０.０２質量％である。
【００２６】
なお、水含有組成物中のＥＭＩＱ１００質量部に対するカテキンまたはカテキン含有組成物の配合割合としては、カテキンの総量に換算して、通常２.８〜４００質量部、好ましくは４.４〜１００質量部、より好ましくは１１.８〜２３.５質量部を挙げることができる。
【００２７】
（５）ＥＭＩＱの保存安定性の向上
上記の本発明の方法により、ｐＨ５〜６.６の水含有組成物中において、ＥＭＩＱの保存安定性を向上させることができ、その結果、当該水含有組成物中におけるＥＭＩＱの含有量の低下を抑制することができる（ＥＭＩＱ残存量の増加）。
【００２８】
ＥＭＩＱの保存安定性は、後述する実験例で示すように、ＥＭＩＱを含有するｐＨ５〜６.６の水含有組成物を所定の条件で保存する前後で、水含有組成物中のＥＭＩＱの含有量を測定し、両者を対比することにより実施することができる。具体的には、保存前のＥＭＩＱ含有量に対する保存後のＥＭＩＱ含有量の百分率を「ＥＭＩＱ残存率（％）」として算出する。この場合、カテキンを含有するＥＭＩＱを含む水含有組成物の「ＥＭＩＱ残存率（％）」が、比較対照とするカテキンを含有しないＥＭＩＱを含む水含有組成物の「ＥＭＩＱ残存率（％）」よりも高い場合に、カテキンを併用することによってＥＭＩＱの保存安定性が向上したと判断することができる。
【００２９】
なお、水含有組成物のＥＭＩＱの定量分析は、高速液体クロマトグラフィーを用いて行うことができ、具体的には、実験例１に記載する方法に従って（または準じて）行うことができる。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明の内容を実験例および実施例を用いて具体的に説明する。但し、これらの実施例などは本発明の一態様に過ぎず、本発明はこれらの例に何ら限定されるものではない。なお、特に記載のない限り「％」は「質量％」意味するものとする。また、ＥＭＩＱは酵素処理イソクエルシトリンを意味するものとする。また、文中の「＊」印を付した製品は、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の製品であることを、文中の「※」印を付した名称は、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標であることを意味する。
【００３１】
調製例１：イソクエルシトリン、酵素処理イソクエルシトリンの調製
水１００Ｌ（温度５５℃）にルチン５００ｇを分散し、これにナリンギナーゼ（天野製薬株式会社、商品名ナリンギナーゼ「アマノ」）を５０ｇ添加した。この系はｐＨ７であった。これを５時間５０℃に保持したのち、濃縮し、５０Ｌとした。冷却したところイソクエルシトリンが沈殿した。沈殿物を濾別して集め、乾燥することによりイソクエルシトリン３２０ｇを得た。
【００３２】
このイソクエルシトリン３００ｇに１００Ｌの水を加え、コーンスターチ８００ｇを添加し、均質にし、これにＣＧＴａｓｅ（天野製薬株式会社、商品名コンチザイム）２００ｍＬを添加し、温度５５℃、ｐＨ６．８にて１２時間保持した。この溶液を吸着樹脂カラム（三菱化成（株）製ダイヤイオンＨＰ−２１）に通してクエルセチン３−Ｏ−配糖体を吸着させ、ついで５０ｖｏｌ％メタノール水溶液で脱着させた。脱着液を濃縮乾固して、糖転移イソクエルシトリン５１５ｇを得た（ルチン換算として約７０％）。この固形物は、未反応のイソクエルシトリンおよびグルコース残基数の異なる配糖体を含むクエルセチン−３−Ｏ−配糖体混合物であった。この固形物を酵素処理イソクエルシトリン（ＥＭＩＱ）とした。
【００３３】
実験例１ ｐＨ５.５〜６.５条件での安定性試験
ｐＨ５.５〜６.５条件におけるＥＭＩＱの安定性を調べるとともに、当該条件でのＥＭＩＱの安定性に対するカテキンの影響を評価した。
【００３４】
（１）試験方法
リン酸二水素ナトリウム−クエン酸緩衝液を用いてｐＨ５.５、ｐＨ６、およびｐＨ６.５の水溶液をそれぞれ調製し、これらの各々に調製例１で得たＥＭＩＱを最終濃度がルチン換算として０.０８５％になるように添加した。次いで、斯くして調製した各ｐＨのＥＭＩＱ含有水溶液に、表１に記載する割合で、ＳＤ緑茶エキスパウダーＮＯ.１６７１４（２８％カテキン含量製剤、三栄源エフ・エフ・アイ（株）製）を最終濃度が１００〜１４３０ｐｐｍ（カテキンとしては２８〜４００ｐｐｍ）になるように添加した（被験試料１〜５）。なお、当該緑茶エキスパウダー１４３０ｐｐｍは、通常の緑茶に含まれるカテキン濃度に相当する。また対照試料として、緑茶エキスパウダーを添加しない各ｐＨのＥＭＩＱ含有水溶液を用意した。
【００３５】
これらの各試料を２００ｍＬ容量の透明なＰＥＴボトルに満タン充填し、遮光条件下６０℃で１０日および２０日間保存した。
【００３６】
試験開始前、保存１０日後および保存２０日後の各試料について、ＥＭＩＱの含有量を、ＥＭＩＱ標品を用いた検量線法により下記条件のＨＰＬＣにて定量分析し、保存１０日後および保存２０日後の試料中のＥＭＩＱの残存率（％）を算出した。
【００３７】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム ：Imtakt社製 ＣＤ−Ｃ１８（φ４.６×１５０ｍｍ）
移動相 ：０.１％リン酸水溶液／アセトニトリル
〔アセトニトリル１８％（０−８分）、１８→７４％（８−１５分）、１８％（１５−２２分）〕
カラム温度：４０℃
検出波長：３５１ｎｍ
流速：１.０ｍＬ/ｍｉｎ
注入量：２０μＬ。
【００３８】
（２）試験結果
結果を表１に示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
対照試料の結果からわかるように、ｐＨが５.５から６.５に上がるにつれてＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が有意に低下した。これから、ＥＭＩＱは酸性条件よりも中性条件にすることで、安定性がｐＨ依存的に低下することがわかった。
【００４１】
これに対して、被験試料の結果からわかるように、ＥＭＩＱにカテキンを添加し、カテキンとの共存状態にすることによって、ＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が格段に上昇した。このことから、少なくともｐＨ５.５〜６.５条件下におけるＥＭＩＱの安定性は、カテキンを共存させることで、格別に増大することが判明した。
【００４２】
実験例２ ＥＭＩＱ含有緑茶飲料のｐＨ５〜６.６条件下での安定性評価
ＥＭＩＱ含有緑茶飲料について、ｐＨ５〜６.６条件におけるＥＭＩＱの安定性を評価した。
【００４３】
（１）試験方法
（1-1）ＥＭＩＱ含有緑茶飲料の調製
緑茶葉１０ｇを５０℃のイオン交換水１ｋｇに投入し、茶葉を完全に浸して３０分間５０±１℃にて保持した。抽出液を、３０メッシュの濾過膜、および２００メッシュの濾過膜を用いて順次ろ過を行い、最後にＮｏ.２ろ紙にてろ過した。斯くして調製したろ液を、耐圧容器に移して１２１℃で２０分間、加熱殺菌し、緑茶エキスを調製した。
【００４４】
次いで、得られた緑茶エキスを、Ｂｒｉｘが０.１７になるようにイオン交換水にて希釈し、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムを最終濃度３００ｐｐｍに、またＥＭＩＱ（調製例１で得た酵素処理イソクエルシトリン）を最終濃度がルチン換算として０.０８５％になるように各々添加し、ＥＭＩＱ含有緑茶飲料を調製した。当該ＥＭＩＱ含有緑茶飲料には、ＥＭＩＱが０.０８５％、カテキンが０.０１％含まれていた。
【００４５】
（1-2）ＥＭＩＱ含有緑茶飲料の安定性評価
各ＥＭＩＱ含有緑茶飲料のｐＨを、Ｌ−アスコルビン酸および重曹を用いてｐＨ５〜６.６（０.２刻み）になるように調整し、２００ｍＬ容量の透明ＰＥＴボトルに９３℃達温にてホットパック充填した。なお、対照飲料として、イオン交換水にＬ−アスコルビン酸ナトリウムを最終濃度３００ｐｐｍ、またＥＭＩＱ（調製例１で得た酵素処理イソクエルシトリン）を最終濃度がルチン換算として０.０８５％になるように各々添加し、ＥＭＩＱ含有飲料（緑茶エキス非添加）を調製した。
【００４６】
斯くして調製したこれらの飲料を６０℃まで冷却した後、遮光条件下、６０℃で１０日間および３週間保存した。
【００４７】
試験開始前、保存１０日後および保存３週間後の各飲料について、ＥＭＩＱの含有量を、実験例１と同一の条件でＨＰＬＣにて定量分析し、保存１０日後および保存３週間後の飲料中のＥＭＩＱの残存率（％）を算出した。
【００４８】
（２）試験結果
結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
【００５０】
ＥＭＩＱ含有飲料（緑茶エキス非添加）の結果からわかるように、ｐＨが５.０から６.６に上がるにつれてＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が有意に低下した。これに対して、ＥＭＩＱ含有緑茶飲料の結果からわかるように、緑茶飲料にＥＭＩＱを添加し、ＥＭＩＱをカテキンとの共存状態にすることによって、ｐＨ５〜６.６でのＥＭＩＱ残存率の低下（安定性の低下）が格段に抑制され、ＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が顕著に上昇した。
【００５１】
ＥＭＩＱは、通常ｐＨが６付近で安定性が悪くなるフラボノイドであるが、以上の実験から、少なくともｐＨ５〜６.６条件下におけるＥＭＩＱの安定性は、カテキン、特に緑茶中のカテキンにより、格別に増大することが判明した。
【００５２】
実施例１ 緑茶飲料
（処方）
緑茶抽出液（Ｂｒｉｘ ０.２〜０.３） 適量 （％）
酵素処理イソクエルシトリン（調製例１） ０.０８
ＳＤ緑茶エキスパウダーNO.16714＊ ０.０５
Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム ０.０３
重曹 ０.００２５
水にて合計１００％（Ｂｒｉｘ ０.１７）に調整した。
【００５３】
（緑茶抽出液の調製）
緑茶葉を、茶葉１に対して１００倍量の５０℃の湯に３０分間浸漬し抽出した。抽出液をろ過して固液分離を行い、ろ液を緑茶抽出液として取得した。
【００５４】
（緑茶飲料の調製）
調製した緑茶抽出液に、カテキン類の濃度を上げるためにＳＤ緑茶エキスパウダーNO.16714を添加し、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、重曹、酵素処理イソクエルシトリンを加えてＢｒｉｘ ０.１７になるよう水にて希釈して緑茶飲料を得た。カテキンとしては約１４０ｐｐｍを含んでいた。
【００５５】
実施例２ ニアウォーター（グレープフルーツ）
（処方）
砂糖 ５ （％）
クエン酸 ０.１５
クエン酸三ナトリウム ０.０５
Ｌ−アスコルビン酸 ０.０２
塩化ナトリウム ０.０４
塩化カリウム ０.０３
塩化マグネシウム ０.００４
乳酸カルシウム ０.０３
グルタミン酸ナトリウム ０.００５
オレンジ香料 ０.０２
グレープフルーツ香料 ０.１５
テアフラン90S（茶カテキン85%以上、伊藤園社製） ０.０２
酵素処理イソクエルシトリン（調整例１） ０.０８
水にて合計 １００％とした。
【００５６】
砂糖、クエン酸、クエン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、乳酸カルシウム、およびグルタミン酸ナトリウムを混合し、これを水に、加熱攪拌しながら溶解した。溶解後９３℃まで加熱し、オレンジ香料、およびグレープフルーツ香料を加えて水にて全量調製し、ニアウォーター（グレープフルーツ味）を得た。カテキンとしては約１７０ｐｐｍを含んでいた。
【００５７】
実施例３ ブレンド茶１
（処方）
ＳＤ緑茶エキスパウダーNO.18555＊ ０.０２ （％）
ＦＤ紅茶エキスパウダーNO.16600＊ ０.０２
ＦＤウーロン茶エキスパウダーNO.16297＊ ０.０１
Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム ０.００３
炭酸水素ナトリウム ０.００７
酵素処理イソクエルシトリン（調製例１） ０.０８
テアフラン90S（茶カテキン85%以上、伊藤園社製） ０.０３
水にて合計 １００％とした。
【００５８】
少量の熱湯に各種エキスパウダーを溶解し、これにＬ−アスコルビン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酵素処理イソクエルシトリン（調製例１）、およびテアフラン90Sを加えて溶解し、ブレンド茶を得た。カテキンとしては約２６０ｐｐｍを含んでいた。
【００５９】
実施例４ ブレンド茶２
（処方）
ブレンド茶抽出液（下記参照） ９９.８８ 部
酵素処理イソクエルシトリン（調製例１） ０.０８
テアフラン90S（茶カテキン８５％以上、伊藤園社製） ０.０４
合計 １００部。
【００６０】
ブレンド茶葉（小川生薬社「国産ブレンド茶」：はと麦、玄米、大麦、ハブ茶、柿の葉、ドクダミ、ビワ茶のブレンド品）を３ｇあたり１Ｌの熱湯にて５分間煮出し、茶葉をろ過して除いてブレンド茶抽出液を得た。
【００６１】
このブレンド茶抽出液に酵素処理イソクエルシトリン（調製例１）、テアフラン90Sを添加して溶解し、ブレンド茶を得た。カテキンとして約３４０ｐｐｍを含んでいた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、弱酸性〜中性付近の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ルチンのアグリコンであるクエルセチン（Quercetin：3,3’,4’,5,7-pentahydroxyflavone）は、強力な抗酸化活性（非特許文献１参照）の他、血小板の凝集抑制および接着抑制作用、血管拡張作用、抗ガン作用等、多彩な生理機能をもつことが知られている。このクエルセチンについても、タマネギに多く含まれるクエルセチン配糖体（Quercetin-4’-β-D-glucoside、Quercetin-3,4’-β-D-glucoside）の方が吸収性に優れていることが報告されている（非特許文献２参照）。また同様に、クエルセチンの３位にグルコースがβ結合したイソクエルシトリン（Quercetin-3-β-D-glucoside）は、クエルセチンやルチンよりも吸収性が高いことが報告されている（非特許文献３参照）。
【０００３】
このようにイソクエルシトリンは、クエルセチンやルチンより吸収性に優れた成分であるものの、水に難溶であるため食品や飲料等の水系の組成物に対して利用が制限されるという問題を有している。そこで、この問題を解消する方法として、糖転移酵素を用いて、基質のグルコース残基をイソクエルシトリンのグルコース残基部位に転移させてα−グリコシルイソクエルシトリンを調製する方法が提案されている（特許文献１参照）。斯くして調製されるα−グリコシルイソクエルシトリン（本発明では、「酵素処理イソクエルシトリン」と称する）は、イソクエルシトリンの作用はそのままに、水への溶解性が改善された水易溶性物質であり、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社から食品用の酸化防止剤（食品添加物）として「サンメリン（登録商標）ＡＯ−３０００」や「サンメリン（登録商標）パウダーＣ−１０」の名称で上市されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１−２１３２９３号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Middlton EJ. et al., Pharmacol Rev., 52, 673-751, 2000
【非特許文献２】Hollman PC et al., Arch Toxicol Suppl., 20, 237-248, 1998
【非特許文献３】Morand C et al., Free Rad Res., 33, 667-676, 2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように強力な抗酸化作用や種々の生理活性を有し、生体の健康維持に有用な機能性素材である酵素処理イソクエルシトリン（以下、「ＥＭＩＱ」ともいう）は、ｐＨ２.５〜５の酸性条件下では比較的安定であるものの、ｐＨ５以上、特にｐＨ６以上の条件下になると、水含有組成物中では、ＥＭＩＱが経時的に開環して重合し、ＥＭＩＱよりも抗酸化作用や生理活性の劣るＥＭＩＱ開環重合物等になると考えられる。
【０００７】
このため、ｐＨ５以上ｐＨ７未満の条件下にある水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品、特に飲料に対してＥＭＩＱを添加しても、保存中に経時的にＥＭＩＱ開環重合物等が生成してＥＭＩＱ含有量が低下し（後述する実験例１および２参照）、ＥＭＩＱの抗酸化作用や生理活性といった所期の効果を発揮させて、これを享受することができないという問題があった。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、上記ＥＭＩＱについて、ｐＨ５以上ｐＨ７未満の条件、具体的にはｐＨ５〜６.６の条件にある水含有組成物中での保存安定性を向上させる方法を提供すること、そして当該ｐＨ条件にある水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品、特に飲料に対してＥＭＩＱを添加した場合でも、保存中にＥＭＩＱ含有量が経時的に低下することを有意に抑制し、ＥＭＩＱの所期の効果を発揮させることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討を重ねたところ、ＥＭＩＱを含有するｐＨ５以上ｐＨ７未満の条件、より具体的にはｐＨ５〜６.６の条件にある水含有組成物中に、カテキンを共存させることにより、当該ｐＨ条件下でのＥＭＩＱの経時的な含有量の低下が抑制できることを見出した（後述する実験例１および２参照）。
【００１０】
本発明は、かかる知見に基づいて完成したものであり、下記の実施形態を含有するものである：
（１）ｐＨ５〜６.６の水含有組成物中におけるＥＭＩＱの保存安定性を向上させる方法であって、上記水含有組成物においてＥＭＩＱをカテキンまたはカテキン含有組成物と共存させることを特徴とする、上記方法。
（２）カテキンが緑茶カテキンである（１）記載の方法。
（３）カテキン含有組成物が茶抽出物である（１）記載の方法。
（４）水含有組成物のＥＭＩＱ濃度が０.０１〜０.１質量％である、（１）乃至（３）のいずれかに記載する方法。
（５）水含有組成物のカテキンまたはカテキン含有組成物の含有量が、カテキンの総量に換算して、０.００２８〜０.０４質量％である、（１）乃至（４）のいずれかに記載する方法。
（６）水含有組成物中のＥＭＩＱ含有量１００質量部に対するカテキンまたはカテキン含有組成物の割合が、カテキンの総量に換算して、２.８〜４００質量部である、（１）乃至（５）のいずれかに記載する方法。
（７）ｐＨ５〜６.６の水含有組成物が、水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品である（１）乃至（６）のいずれかに記載する方法。
（８）ｐＨ５〜６.６の水含有組成物が飲料である、（１）乃至（６）のいずれかに記載する方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、ｐＨ５〜６.６の条件にある水含有組成物中でのＥＭＩＱの保存安定性を向上させる方法を提供することができる。その結果、本発明によれば、当該ｐＨ条件にある水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品、特に飲料に対してＥＭＩＱを添加した場合でも、保存中にＥＭＩＱ含有量が経時的に低下することを有意に抑制し、ＥＭＩＱの所期の効果を発揮させることが可能になる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ｐＨ５〜６.６の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリン（ＥＭＩＱ）の保存安定性を向上させる方法である。当該方法は、上記水含有組成物中において、ＥＭＩＱをカテキンと共存させることによって実施することができる。
【００１３】
（１）酵素処理イソクエルシトリン（ＥＭＩＱ）
本発明の酵素処理イソクエルシトリンとは、ルチンを、酵素（ナリンジナーゼ、ヘスペリジナーゼまたはラムノシダーゼ）処理した後、精製して得られた主成分がイソクエルシトリンである「ルチン酵素分解物」と、でん粉またはデキストリンの混合物に、シクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼを用いてグルコースを付加して得られたものであり、主成分はα-グルコシルイソクエルシトリンである（食品衛生法及び栄養改善法の一部を改正する法律（平成7年法律第101号）附則第2条第4項に規定する既存添加物名簿（平成8年4月16日厚生省告示第120号）参照）。例えば市販品としてサンメリン（登録商標）ＡＯ−３０００、サンメリン（登録商標）パウダーＣ−１０（以上、三栄源エフ・エフ・アイ社製）等を挙げることができる。
【００１４】
（２）カテキン
本発明で用いる「カテキン」はフラボノイドの一種で、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート（ＧＣｇ）等の非エピ体カテキン類；およびエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ）等のエピ体カテキン類をあわせた総称である。好ましくは茶由来のカテキンであり、より好ましくは緑茶に由来するカテキンである。
【００１５】
かかるカテキンとしては、カテキンを含有する植物組織から熱水若しくは水溶性有機溶媒により抽出された抽出物、またはこれを濃縮して固体、水溶液若しくはスラリー状の形態としたものを利用してもよく、また上記抽出物をさらに精製したものであってもよい。本発明では、これを「カテキン含有組成物」と称する。本発明では、化学合成されたカテキンも利用可能である。なお、茶の抽出液中ではカテキンは非重合体として存在しており、本発明におけるカテキンはこの非重合体も含めて意味するものとする。
【００１６】
上記カテキンを含有する植物組織としては茶葉の他、バラ科、ツバキ科、ブドウ科、シソ科、アカネ科、アオギリ科、タデ科に属する植物の果実や種子等を挙げることができる。好ましくは、茶葉、ブドウ、リンゴ、および大豆等の果実または種子である。
【００１７】
カテキンを得るための茶としては、Ｃａｍｅｌｌｉａ属（例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓおよびＣ．ａｓｓａｍｉｃａ）またはやぶきた種またはそれらの雑種等の樹木の茶葉から製茶された不発酵茶（煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜炒り茶等の緑茶類）、半発酵茶（烏龍茶等）、発酵茶（紅茶等）を挙げることができる。好ましくは不発酵茶であり、より好ましくは緑茶である。
【００１８】
茶を抽出する方法については、攪拌抽出、カラム法、ドリップ抽出など従来の方法により行う。簡便な方法としては、上記の茶葉を、例えば４０〜１４０℃の水に浸漬し、０.１分〜１２０時間加熱処理して抽出物を得る方法である。また抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸または有機酸塩類を添加してもよい。また煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法も併用してもよい。このようにして得られた茶抽出液は、そのままでも、乾燥または濃縮してもよく、液体、スラリー、半固体、固体（粉末または顆粒状）の状態で、本発明に用いるカテキン含有組成物として使用することができる。
【００１９】
カテキン含有組成物として、茶葉から抽出した抽出液を使用する代わりに、茶抽出物の濃縮物を用いても、茶葉からの抽出液と茶抽出物の濃縮物とを併用してもよい。ここで、茶抽出物の濃縮物とは、茶葉から熱水または水溶性有機溶媒により抽出された抽出物を濃縮したものであり、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載されている方法により調製したものをいう。具体的には、茶抽出物の濃縮物として、市販の三井農林社製「ポリフェノン」、伊藤園社製「テアフラン」、太陽化学社製「サンフェノン」等のカテキン含有製剤を用いることもできる。
【００２０】
カテキン含有組成物の形態は、水含有組成物に添加配合し、溶解または分散させることができるものであればよく、例えば液体、スラリー、半固体、固体（粉末または顆粒状）の形態が挙げられる。
【００２１】
（３）水含有組成物
本発明が対象とする水含有組成物は、ｐＨが５〜６.６の範囲にあり、水を含有する組成物である。好ましいｐＨ条件としてはｐＨ５.５〜６.６、ｐＨ６〜６.６を挙げることができる。かかる水含有組成物としては、上記ｐＨ条件にある水を含む飲食品または医薬品若しくは医薬部外品を挙げることができる。ここで水の含有割合は特に制限されず、好ましくは９０〜９９.９質量％の範囲から適宜選択することができる。
【００２２】
水を含む飲食品として、好ましくは飲料である。かかる飲料には、ｐＨが５〜６.６の範囲にある各種飲料、例えば、野菜ジュース、野菜入り飲料、果汁系ニアウォーター、茶系飲料（緑茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料、麦茶飲料、ブレンド茶飲料、その他の茶飲料（杜仲茶、ジャスミン茶、甜茶、はと麦茶、玄米茶など）、スポーツ飲料（スポートドリンク）、乳性飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料やコーヒー入り清涼飲料などが含まれる。好ましくは、茶系飲料である。
【００２３】
（４）ＥＭＩＱとカテキンまたはカテキン含有組成物との共存
ＥＭＩＱとカテキンまたはカテキン含有組成物との共存は、上記水含有組成物、つまりｐＨが５〜６.６の範囲にある水含有組成物に、ＥＭＩＱとカテキンまたはカテキン含有組成物を添加配合し、両成分を共存させることで実施することができる。
【００２４】
水含有組成物中のＥＭＩＱの含有割合としては、制限されず、通常０.０１〜０.１質量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは０.０３〜０.０９質量％であり、より好ましくは０.０６〜０.０８５質量％である。
【００２５】
ＥＭＩＱと共存させる水含有組成物中のカテキンまたはカテキン含有組成物の含有割合としては、制限されず、カテキンの総量に換算して、通常０.００２８〜０.０４質量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは０.００４〜０.０３質量％であり、より好ましくは０.０１〜０.０２質量％である。
【００２６】
なお、水含有組成物中のＥＭＩＱ１００質量部に対するカテキンまたはカテキン含有組成物の配合割合としては、カテキンの総量に換算して、通常２.８〜４００質量部、好ましくは４.４〜１００質量部、より好ましくは１１.８〜２３.５質量部を挙げることができる。
【００２７】
（５）ＥＭＩＱの保存安定性の向上
上記の本発明の方法により、ｐＨ５〜６.６の水含有組成物中において、ＥＭＩＱの保存安定性を向上させることができ、その結果、当該水含有組成物中におけるＥＭＩＱの含有量の低下を抑制することができる（ＥＭＩＱ残存量の増加）。
【００２８】
ＥＭＩＱの保存安定性は、後述する実験例で示すように、ＥＭＩＱを含有するｐＨ５〜６.６の水含有組成物を所定の条件で保存する前後で、水含有組成物中のＥＭＩＱの含有量を測定し、両者を対比することにより実施することができる。具体的には、保存前のＥＭＩＱ含有量に対する保存後のＥＭＩＱ含有量の百分率を「ＥＭＩＱ残存率（％）」として算出する。この場合、カテキンを含有するＥＭＩＱを含む水含有組成物の「ＥＭＩＱ残存率（％）」が、比較対照とするカテキンを含有しないＥＭＩＱを含む水含有組成物の「ＥＭＩＱ残存率（％）」よりも高い場合に、カテキンを併用することによってＥＭＩＱの保存安定性が向上したと判断することができる。
【００２９】
なお、水含有組成物のＥＭＩＱの定量分析は、高速液体クロマトグラフィーを用いて行うことができ、具体的には、実験例１に記載する方法に従って（または準じて）行うことができる。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明の内容を実験例および実施例を用いて具体的に説明する。但し、これらの実施例などは本発明の一態様に過ぎず、本発明はこれらの例に何ら限定されるものではない。なお、特に記載のない限り「％」は「質量％」意味するものとする。また、ＥＭＩＱは酵素処理イソクエルシトリンを意味するものとする。また、文中の「＊」印を付した製品は、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の製品であることを、文中の「※」印を付した名称は、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標であることを意味する。
【００３１】
調製例１：イソクエルシトリン、酵素処理イソクエルシトリンの調製
水１００Ｌ（温度５５℃）にルチン５００ｇを分散し、これにナリンギナーゼ（天野製薬株式会社、商品名ナリンギナーゼ「アマノ」）を５０ｇ添加した。この系はｐＨ７であった。これを５時間５０℃に保持したのち、濃縮し、５０Ｌとした。冷却したところイソクエルシトリンが沈殿した。沈殿物を濾別して集め、乾燥することによりイソクエルシトリン３２０ｇを得た。
【００３２】
このイソクエルシトリン３００ｇに１００Ｌの水を加え、コーンスターチ８００ｇを添加し、均質にし、これにＣＧＴａｓｅ（天野製薬株式会社、商品名コンチザイム）２００ｍＬを添加し、温度５５℃、ｐＨ６．８にて１２時間保持した。この溶液を吸着樹脂カラム（三菱化成（株）製ダイヤイオンＨＰ−２１）に通してクエルセチン３−Ｏ−配糖体を吸着させ、ついで５０ｖｏｌ％メタノール水溶液で脱着させた。脱着液を濃縮乾固して、糖転移イソクエルシトリン５１５ｇを得た（ルチン換算として約７０％）。この固形物は、未反応のイソクエルシトリンおよびグルコース残基数の異なる配糖体を含むクエルセチン−３−Ｏ−配糖体混合物であった。この固形物を酵素処理イソクエルシトリン（ＥＭＩＱ）とした。
【００３３】
実験例１ ｐＨ５.５〜６.５条件での安定性試験
ｐＨ５.５〜６.５条件におけるＥＭＩＱの安定性を調べるとともに、当該条件でのＥＭＩＱの安定性に対するカテキンの影響を評価した。
【００３４】
（１）試験方法
リン酸二水素ナトリウム−クエン酸緩衝液を用いてｐＨ５.５、ｐＨ６、およびｐＨ６.５の水溶液をそれぞれ調製し、これらの各々に調製例１で得たＥＭＩＱを最終濃度がルチン換算として０.０８５％になるように添加した。次いで、斯くして調製した各ｐＨのＥＭＩＱ含有水溶液に、表１に記載する割合で、ＳＤ緑茶エキスパウダーＮＯ.１６７１４（２８％カテキン含量製剤、三栄源エフ・エフ・アイ（株）製）を最終濃度が１００〜１４３０ｐｐｍ（カテキンとしては２８〜４００ｐｐｍ）になるように添加した（被験試料１〜５）。なお、当該緑茶エキスパウダー１４３０ｐｐｍは、通常の緑茶に含まれるカテキン濃度に相当する。また対照試料として、緑茶エキスパウダーを添加しない各ｐＨのＥＭＩＱ含有水溶液を用意した。
【００３５】
これらの各試料を２００ｍＬ容量の透明なＰＥＴボトルに満タン充填し、遮光条件下６０℃で１０日および２０日間保存した。
【００３６】
試験開始前、保存１０日後および保存２０日後の各試料について、ＥＭＩＱの含有量を、ＥＭＩＱ標品を用いた検量線法により下記条件のＨＰＬＣにて定量分析し、保存１０日後および保存２０日後の試料中のＥＭＩＱの残存率（％）を算出した。
【００３７】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム ：Imtakt社製 ＣＤ−Ｃ１８（φ４.６×１５０ｍｍ）
移動相 ：０.１％リン酸水溶液／アセトニトリル
〔アセトニトリル１８％（０−８分）、１８→７４％（８−１５分）、１８％（１５−２２分）〕
カラム温度：４０℃
検出波長：３５１ｎｍ
流速：１.０ｍＬ/ｍｉｎ
注入量：２０μＬ。
【００３８】
（２）試験結果
結果を表１に示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
対照試料の結果からわかるように、ｐＨが５.５から６.５に上がるにつれてＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が有意に低下した。これから、ＥＭＩＱは酸性条件よりも中性条件にすることで、安定性がｐＨ依存的に低下することがわかった。
【００４１】
これに対して、被験試料の結果からわかるように、ＥＭＩＱにカテキンを添加し、カテキンとの共存状態にすることによって、ＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が格段に上昇した。このことから、少なくともｐＨ５.５〜６.５条件下におけるＥＭＩＱの安定性は、カテキンを共存させることで、格別に増大することが判明した。
【００４２】
実験例２ ＥＭＩＱ含有緑茶飲料のｐＨ５〜６.６条件下での安定性評価
ＥＭＩＱ含有緑茶飲料について、ｐＨ５〜６.６条件におけるＥＭＩＱの安定性を評価した。
【００４３】
（１）試験方法
（1-1）ＥＭＩＱ含有緑茶飲料の調製
緑茶葉１０ｇを５０℃のイオン交換水１ｋｇに投入し、茶葉を完全に浸して３０分間５０±１℃にて保持した。抽出液を、３０メッシュの濾過膜、および２００メッシュの濾過膜を用いて順次ろ過を行い、最後にＮｏ.２ろ紙にてろ過した。斯くして調製したろ液を、耐圧容器に移して１２１℃で２０分間、加熱殺菌し、緑茶エキスを調製した。
【００４４】
次いで、得られた緑茶エキスを、Ｂｒｉｘが０.１７になるようにイオン交換水にて希釈し、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムを最終濃度３００ｐｐｍに、またＥＭＩＱ（調製例１で得た酵素処理イソクエルシトリン）を最終濃度がルチン換算として０.０８５％になるように各々添加し、ＥＭＩＱ含有緑茶飲料を調製した。当該ＥＭＩＱ含有緑茶飲料には、ＥＭＩＱが０.０８５％、カテキンが０.０１％含まれていた。
【００４５】
（1-2）ＥＭＩＱ含有緑茶飲料の安定性評価
各ＥＭＩＱ含有緑茶飲料のｐＨを、Ｌ−アスコルビン酸および重曹を用いてｐＨ５〜６.６（０.２刻み）になるように調整し、２００ｍＬ容量の透明ＰＥＴボトルに９３℃達温にてホットパック充填した。なお、対照飲料として、イオン交換水にＬ−アスコルビン酸ナトリウムを最終濃度３００ｐｐｍ、またＥＭＩＱ（調製例１で得た酵素処理イソクエルシトリン）を最終濃度がルチン換算として０.０８５％になるように各々添加し、ＥＭＩＱ含有飲料（緑茶エキス非添加）を調製した。
【００４６】
斯くして調製したこれらの飲料を６０℃まで冷却した後、遮光条件下、６０℃で１０日間および３週間保存した。
【００４７】
試験開始前、保存１０日後および保存３週間後の各飲料について、ＥＭＩＱの含有量を、実験例１と同一の条件でＨＰＬＣにて定量分析し、保存１０日後および保存３週間後の飲料中のＥＭＩＱの残存率（％）を算出した。
【００４８】
（２）試験結果
結果を表２に示す。
【００４９】
【表２】
【００５０】
ＥＭＩＱ含有飲料（緑茶エキス非添加）の結果からわかるように、ｐＨが５.０から６.６に上がるにつれてＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が有意に低下した。これに対して、ＥＭＩＱ含有緑茶飲料の結果からわかるように、緑茶飲料にＥＭＩＱを添加し、ＥＭＩＱをカテキンとの共存状態にすることによって、ｐＨ５〜６.６でのＥＭＩＱ残存率の低下（安定性の低下）が格段に抑制され、ＥＭＩＱの残存率（ＥＭＩＱ含有量）が顕著に上昇した。
【００５１】
ＥＭＩＱは、通常ｐＨが６付近で安定性が悪くなるフラボノイドであるが、以上の実験から、少なくともｐＨ５〜６.６条件下におけるＥＭＩＱの安定性は、カテキン、特に緑茶中のカテキンにより、格別に増大することが判明した。
【００５２】
実施例１ 緑茶飲料
（処方）
緑茶抽出液（Ｂｒｉｘ ０.２〜０.３） 適量 （％）
酵素処理イソクエルシトリン（調製例１） ０.０８
ＳＤ緑茶エキスパウダーNO.16714＊ ０.０５
Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム ０.０３
重曹 ０.００２５
水にて合計１００％（Ｂｒｉｘ ０.１７）に調整した。
【００５３】
（緑茶抽出液の調製）
緑茶葉を、茶葉１に対して１００倍量の５０℃の湯に３０分間浸漬し抽出した。抽出液をろ過して固液分離を行い、ろ液を緑茶抽出液として取得した。
【００５４】
（緑茶飲料の調製）
調製した緑茶抽出液に、カテキン類の濃度を上げるためにＳＤ緑茶エキスパウダーNO.16714を添加し、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、重曹、酵素処理イソクエルシトリンを加えてＢｒｉｘ ０.１７になるよう水にて希釈して緑茶飲料を得た。カテキンとしては約１４０ｐｐｍを含んでいた。
【００５５】
実施例２ ニアウォーター（グレープフルーツ）
（処方）
砂糖 ５ （％）
クエン酸 ０.１５
クエン酸三ナトリウム ０.０５
Ｌ−アスコルビン酸 ０.０２
塩化ナトリウム ０.０４
塩化カリウム ０.０３
塩化マグネシウム ０.００４
乳酸カルシウム ０.０３
グルタミン酸ナトリウム ０.００５
オレンジ香料 ０.０２
グレープフルーツ香料 ０.１５
テアフラン90S（茶カテキン85%以上、伊藤園社製） ０.０２
酵素処理イソクエルシトリン（調整例１） ０.０８
水にて合計 １００％とした。
【００５６】
砂糖、クエン酸、クエン酸三ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、乳酸カルシウム、およびグルタミン酸ナトリウムを混合し、これを水に、加熱攪拌しながら溶解した。溶解後９３℃まで加熱し、オレンジ香料、およびグレープフルーツ香料を加えて水にて全量調製し、ニアウォーター（グレープフルーツ味）を得た。カテキンとしては約１７０ｐｐｍを含んでいた。
【００５７】
実施例３ ブレンド茶１
（処方）
ＳＤ緑茶エキスパウダーNO.18555＊ ０.０２ （％）
ＦＤ紅茶エキスパウダーNO.16600＊ ０.０２
ＦＤウーロン茶エキスパウダーNO.16297＊ ０.０１
Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム ０.００３
炭酸水素ナトリウム ０.００７
酵素処理イソクエルシトリン（調製例１） ０.０８
テアフラン90S（茶カテキン85%以上、伊藤園社製） ０.０３
水にて合計 １００％とした。
【００５８】
少量の熱湯に各種エキスパウダーを溶解し、これにＬ−アスコルビン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酵素処理イソクエルシトリン（調製例１）、およびテアフラン90Sを加えて溶解し、ブレンド茶を得た。カテキンとしては約２６０ｐｐｍを含んでいた。
【００５９】
実施例４ ブレンド茶２
（処方）
ブレンド茶抽出液（下記参照） ９９.８８ 部
酵素処理イソクエルシトリン（調製例１） ０.０８
テアフラン90S（茶カテキン８５％以上、伊藤園社製） ０.０４
合計 １００部。
【００６０】
ブレンド茶葉（小川生薬社「国産ブレンド茶」：はと麦、玄米、大麦、ハブ茶、柿の葉、ドクダミ、ビワ茶のブレンド品）を３ｇあたり１Ｌの熱湯にて５分間煮出し、茶葉をろ過して除いてブレンド茶抽出液を得た。
【００６１】
このブレンド茶抽出液に酵素処理イソクエルシトリン（調製例１）、テアフラン90Sを添加して溶解し、ブレンド茶を得た。カテキンとして約３４０ｐｐｍを含んでいた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐＨ５〜６．６の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性を向上させる方法であって、上記水含有組成物において酵素処理イソクエルシトリンとカテキンまたはカテキン含有組成物とを共存させることを特徴とする上記方法。
【請求項２】
カテキンが緑茶カテキンである請求項１記載の方法。
【請求項３】
ｐＨ５〜６．６の水含有組成物が、水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品である請求項１または２に記載する方法。
【請求項４】
ｐＨ５〜６．６の水含有組成物が飲料である、請求項１または２に記載する方法。
【請求項１】
ｐＨ５〜６．６の水含有組成物中における酵素処理イソクエルシトリンの保存安定性を向上させる方法であって、上記水含有組成物において酵素処理イソクエルシトリンとカテキンまたはカテキン含有組成物とを共存させることを特徴とする上記方法。
【請求項２】
カテキンが緑茶カテキンである請求項１記載の方法。
【請求項３】
ｐＨ５〜６．６の水含有組成物が、水を含む飲食品、医薬品または医薬部外品である請求項１または２に記載する方法。
【請求項４】
ｐＨ５〜６．６の水含有組成物が飲料である、請求項１または２に記載する方法。
【公開番号】特開２０１３−１０６５９０（Ｐ２０１３−１０６５９０Ａ）
【公開日】平成２５年６月６日（２０１３．６．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２５６２００（Ｐ２０１１−２５６２００）
【出願日】平成２３年１１月２４日（２０１１．１１．２４）
【出願人】（０００１７５２８３）三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 (429)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年６月６日（２０１３．６．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１１月２４日（２０１１．１１．２４）
【出願人】（０００１７５２８３）三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 (429)
【Ｆターム（参考）】
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