酵素応答性ゲル
【課題】ぺプチターゼに反応することで自己集合体を形成してヒドロゲルになりえる脂質ペプチドを生成する酵素応答性の脂質ペプチドを提供する。
【解決手段】
脂質ペプチドゲル化促進部位−スペーサー（１）−酵素切断部位−スペーサー（２）−親水性ペプチド部位で表される構造を有する脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩からなる。脂質ペプチドゲル化促進部位は特定のテトラペプチドで表される部位であり、スペーサー（１）又は（２）は０〜２個のアミノ酸から形成される部位であり、酵素切断部位はぺプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む複数のアミノ酸から形成される部位であり、親水性ペプチド部位はアミノ酸から形成されるペプチドの末端に親水性基を有してなる部位である。
【解決手段】
脂質ペプチドゲル化促進部位−スペーサー（１）−酵素切断部位−スペーサー（２）−親水性ペプチド部位で表される構造を有する脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩からなる。脂質ペプチドゲル化促進部位は特定のテトラペプチドで表される部位であり、スペーサー（１）又は（２）は０〜２個のアミノ酸から形成される部位であり、酵素切断部位はぺプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む複数のアミノ酸から形成される部位であり、親水性ペプチド部位はアミノ酸から形成されるペプチドの末端に親水性基を有してなる部位である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵素と反応することにより自己組織化素子へと変換する新規な脂質ペプチド、及び、酵素に応答してゾルからゲルに変換し形成されるゾル及びヒドロゲルに関する。
本発明の酵素応答性ヒドロゲルは、評価検体中の酵素の有無を確認するセンサー、その酵素活性の評価システム、患部の検査・診断、創傷部位の酵素と反応する創傷被覆材や薬物放出システム用の基材として好適に利用される。
【背景技術】
【０００２】
近年、外部の刺激に応答して形状や物性を変化させる材料の開発研究が行なわれており、こうした材料を医薬品製剤や医療用システムに用いる基材として、例えば薬物速達システム、検査・診断用関連基材、バイオチップ、生化学や創薬研究用基材への応用が試みられている。こうした外部刺激応答性材料の具体例として、温度や光に反応して材料表面が親水性から疎水性に変化する温度応答性高分子（特許文献１）や光応答性高分子（特許文献２）などが提案されている。
また最近では、創傷部位に選択的に反応して該部位を被膜し保護・治療するシステム、組織選択的な薬剤徐放システム、そして簡便かつ効率の良い検査・診断法に利用できる新たな外部刺激応答性材料の開発が進められている。例えば、生体内で使用可能なコラーゲンなどの天然高分子、ポリグリコールやポリエチレングリコールなどを用いて、タンパク質や細胞との相互作用を構築すべく設計された高分子ゲル（ヒドロゲル）が検討されている。
しかしながら、これらの材料を創傷部位の被膜や徐放製剤に用いるためにヒドロゲル化させようとする場合、高分子鎖間に化学共有結合にて架橋構造を構築するなどの必要があり、これはゲルの調製を煩雑なものとし、また架橋剤や機能性の発現のために組入れられた機能性分子等の未反応の残存物質の安全性なども問題となる。また、機能性基の導入率に限界があることや精密な分子設計が難しいといった様々な課題を残している。
【０００３】
こうした従来の「トップダウン型」の機能性材料の開発に対し、物質の最小単位である原子や分子を集合させ、その集合体である超分子に新たな機能を見出す「ボトムアップ型」の機能性材料の創製研究が着目されている。
ゲルの分野においても、低分子化合物の自己集合化による非共有結合性ゲルファイバー（所謂「超分子ポリマー」）によって形成される新たゲルの開発が進められている。この「自己集合化」とは、当初ランダムな状態にある物質（分子）群において、分子が適切な外部条件下で分子間の非共有結合性相互作用等により、自発的に会合することにより、マクロな機能性集合体に成長することを指す。
上記新たなゲルは、理論的にはモノマーの分子設計によって、分子間相互作用や分子集合体の弱い非共有結合を制御することで、巨視的なゲルの構造や機能制御が可能である点が注目されている。
但し、低分子化合物間の分子間相互作用や非共有結合を如何に制御するかについては明確な方法論が見出されていない。また得られる自己集合体の形状は、多くは球状の所謂ミセル型であるが、その他ベシクル型、ディスク型、ロッド型、チューブ型、ラメラ型と数種類あり、どのような形状の集合体を形成させるかを制御するモノマー分子設計は現状では困難である。さらに得られた巨視的なゲルの機能や物性の研究がほとんど行われていないのも現状である。
また分子設計に関しても、比較的ゲル形成が容易である有機溶媒中における水素結合を利用した自己集合体の研究は進められているものの、水溶液中での水素結合形成を推測することは困難であり、現状では偶発的な発見の域に留まっている。水溶液中における自己集合化化合物（すなわちヒドロゲル化剤など）の探索研究は、ケミカルライブラリーと自
動合成装置によって作製した多数のサンプル評価（非特許文献１）によって進められているなど、現状では予測不可能な状況にある。
【０００４】
こうした中、光異性化による分子の極性変化により可逆的に自己組織体を形成・崩壊し、それによりゾル・ゲル相転移を示す光応答性低分子ヒドロゲル（オリゴペプチド誘導体）（非特許文献２）が報告されている。また、リン酸化酵素に反応してゾルからゲルに変換し、さらにフォスファターゼによりゲルからゾルへと変化するリン酸化酵素応答性ゲル（非特許文献３）なども見出されている。
しかしながら、前者の光応答性ゲルではアゾ基といった特殊な官能基を用い、また後者の酵素応答性ゲルでは生体内の至るところで起きるリン酸化又はリン酸加水分解を対象とすることから、創傷部位や患部選択的な応答性としては改良の余地を残すものであり、安全性にも課題を有するものであった。
【０００５】
一方、ヒトの皮膚や組織において創傷などの何らかのダメージを受けると、その部位において、細胞は組織の再生や保護をするべく、特定のペプチド配列を加水分解するマトリックスメタロプロテアーゼ（以下、ＭＭＰと略す）やコラゲナーゼといったタンパク質分解酵素を活発に合成することとなる。すなわち、組織損傷部位は正常組織と比べて高い酵素濃度を有することとなり、こうした酵素の濃度分布を利用することにより、正常組織と異常組織（損傷部位）の識別が可能であるとしてその応用が期待されている。
特に、体細胞組織の制御因子（細胞移動、創傷治癒）であって、癌の増殖、湿潤、転移能などに関係し、癌細胞の多くが強く発現させることとなるＭＭＰ（ＭＭＰ−ＶＩＩ）は、癌細胞の識別、診断やそれを標的にした薬物伝達システム（ＤＤＳ）への展開が図れるとして幅広く研究されており、例えばＭＭＰに応答するヒドロゲルとして、ＭＭＰにより分解されるヒドロゲルが報告されている（非特許文献４）。
【特許文献１】特開２０００−３１９３３５号公報
【特許文献２】特開平７−２２８６３９号広報
【非特許文献１】松本真治、濱地格、ドージンニュース Ｎｏ．１１８、１−１６頁（２００６年）
【非特許文献２】Ｙ．マツザワら、アドバンスド ファンクショナル マテリアルズ、２００、１７、１５０７−１５１４（Y.Matsuzawa et al., Adv.Funct.Mater．,2007，17,1507-1514）
【非特許文献３】Ｚ．ヤンら、ジャーナル オブ ジ アメリカン ケミカル ソサイエティ、２００６、１２３、３０３８−３０４３（Z.Yang et al.，J.Am.Chem.Soc.,2006，128，3038-3043）
【非特許文献４】Ｙ．シャウら、バイオマテリアルズ、２００８、２９（１１）、１７１３−１７１９（Y.Chau et al.，Biomaterials，2008，29(11),1713-1719）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前述したように、これまで提案された光応答性ヒドロゲルや酵素応答性ヒドロゲルは、損傷組織における応答（選択）性や安全性などにさらなる改善が求められるものであった。
またＭＭＰの働きを利用したゲルにあっては、ＭＭＰによってその構造体が破壊されてしまうため、患部や癌組織に長時間滞留して薬剤の効果を保持することが困難であり、患部の被覆による保護や治療、またＤＤＳとして活用できる新たなヒドロゲルに対する潜在的な要求があった。
【０００７】
本発明は上記の事情に基づいてなされたものであり、その解決しようとする課題は、新規な脂質ペプチド、詳細には、通常は水溶液に溶解又は分散した状態で安定化した状態におり、疾患部位より誘導されるぺプチダーゼによって加水分解を受け、それにより自己集
合化してファイバー、さらにはヒドロゲルを形成する新規な脂質ペプチドを提供することにある。
また本発明は、上記脂質ペプチドを用いて、創傷や癌細胞などの患部（非正常部位）を識別し、さらには被覆することが可能になる、ヒドロゾルを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記の課題を解決するべく鋭意研究を行った結果、ヒドロゲル化能を有する脂質ペプチド化促進部位に酵素切断部位並びに親水性部位をスペーサーを介して結合させることにより、そしてこれら各構成部位の組み合わせを詳細に検討した脂質ペプチドをなすことにより、該脂質ペプチドを含む溶液がＭＭＰやコラゲナーゼなどの特定の酵素によってゲル化することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち本発明は、第１観点として、脂質ペプチドゲル化促進部位にスペーサー（１）を介して酵素切断部位が結合し、さらに該酵素切断部位にスペーサー（２）を介して親水性ペプチド部位が結合した式（１）で表される構造を有する脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩であって、
【０００９】
【化１】
【００１０】
前記脂質ペプチドゲル化促進部位は、式（２）：
【００１１】
【化２】
【００１２】
（式（２）中、
Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し
、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、又は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
且つ、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表す。）で表される部位であり、
前記スペーサー（１）は、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸１〜２個から形成される部位であり、
前記酵素切断部位は、ぺプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む、２〜６個のアミノ酸から形成される部位であり、
スペーサー（２）は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌからなる群から選択されるアミノ酸０〜２個から形成される部位であり、
前記親水性ペプチド部位は、親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に−ＯＨ基、−ＯＭｅ基、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基（Ｍｅはメチル基を表す
。）を有してなる部位である、
脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第２観点として、前記酵素切断部位が、スペーサー（１）との結合側のアミノ酸がプロリン（Ｐｒｏ）である、第１観点記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第３観点として、前記親水性ペプチド部位が、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）及びアルギニン（Ａｒｇ）からなる群から選択される親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基、又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、第１観点又は第２観点記載の脂質ペプチド及びその薬
学的に使用可能な塩。
第４観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基を表し、
Ｒ5は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾール基又はイミダゾール基を
表す、第１観点乃至第３観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第５観点として、前記酵素切断部位は、スペーサー（１）との結合側からみて（Ｐｒｏ）−Ｘ−Ｙ−又は（Ｐｒｏ）−Ｚ−Ｘ−Ｙ−のアミノ酸配列を含み、ここでＸ−Ｙは、マトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモトリプシンから選択されるペプチダーゼによって加水分解されるジペプチドを表し、ＺはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸を表す、第１観点乃至第４観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第６観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、メチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基又は第二ブチル基を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表す、
第１観点乃至第５観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第７観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表し、
前記スペーサー（１）が、１個のアミノ酸からなる部位である場合にはＧｌｙ又はＡｌａであり、２個のアミノ酸から形成される部位である場合には、脂質ペプチドゲル化促進部位との結合側からみてＧｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｇｌｙ及びＩｌｅ−Ａｌａからなる群から選択されるものであり、
前記スペーサー（２）は、直接結合又はＧｌｙ若しくはＡｌａの１個のアミノ酸であり、であり、
前記親水性ペプチド部位が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ及びＡｒｇからなる群から選択される親水性アミノ酸２個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、第１観点乃至第６観点のうち何れか一項に記載の脂
質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第８観点として、前記親水性ペプチド部位が、スペーサー（２）との結合側からみて、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｇｌｎ、Ａｒｇ−Ａｓｎ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｓｎ−Ａｒｇ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ及びＡｓｎ−Ｌｙｓからなる群から選
択されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位
である、第１観点乃至第７観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第９観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5はイミダゾールメチル基を表す、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の脂
質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第１０観点として、第２観点記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩をペプチダーゼによって加水分解することにより形成される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第１１観点として、式（３）：
【００１３】
【化３】
【００１４】
（式中、Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族
基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、若しくは−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表
すか、又は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、その際Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つＲ2乃至Ｒ5のうちの少なくとも一つ
は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表し、
ｍは３乃至８を表す。）
で表される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第１２観点として、水性媒体中で第１観点乃至第９観点のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成される球状会合体。
第１３観点として、第１観点乃至第９観点のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は第１２観点記載の球状会合体と水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゾル。
第１４観点として、第１観点乃至第９観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩よりなる酵素応答性ゲル化物質。
第１５観点として、第１観点乃至第９観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩を水溶液又はアルコール水溶液に溶解または分散させて得られる溶液、分散液又はヒドロゾルが、ペプチダーゼの添加によって、前記脂質ペプチドの前記酵素切断部位が加水分解されて得られるヒドロゲル。
第１６観点として、第１０観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は第１１観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成されるファイバー。
第１７観点として、第１０観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、
第１１観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩又は第１６観点に記載のファイバーと水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゲル。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩（以下、単に「本発明の脂質ペプチド」とも称する）は、水溶液やアルコール水溶液などに溶解し、又は水溶液中で球状の会合体を形成して分散し、安定したゾル状態を保つことができる。そしてこの溶液に特定の酵素を添加することにより、脂質ペプチドの酵素切断部位が加水分解を受け、新たに生じる脂質ペプチドが自己集合化することによりファイバーを形成して、容易にヒドロゲルを形成することができる。
【００１６】
本発明の脂質ペプチドは、一般的に創傷部位において発現している酵素（コラゲナーゼやＭＭＰ）によって上述のヒドロゲルを形成するため、目視によるこれら酵素の簡易検出、すなわち患部（創傷部位）の識別を可能にする。
特に本発明の脂質ペプチドは、癌細胞の増殖に関与する酵素ＭＭＰ−ＶＩＩにより切断される部位の組み込みが可能であるため、生体内で使用した場合に、癌組織の選択的な識別を可能にする。
【００１７】
そして、本発明の脂質ペプチドの加水分解によって生じた上記ヒドロゲルは、従来型のヒドロゲル形成時に必要とされた架橋剤等を用いることなく、水溶液又はアルコール水溶液をゲル化させたヒドロゲルであるため、未反応の架橋剤等の残存がない。また加水分解後に新たに生じた脂質ペプチドは低分子化合物からなるため、従来のヒドロゲルのように機能性の発現のために組入れられた機能性分子等の未反応物質を含むことがない。
また本発明の脂質ペプチド並びに加水分解によって生じたヒドロゲルは、動物由来材料（コラーゲン、ゼラチンなど）を使用せず、脂質とペプチド（アミノ酸）のみから構成される人工低分子化合物であるため、生体内で使用した場合において感染等による問題が生じない。しかも製造においては極めて簡便な方法で調製可能である。さらに原料として生体内で産生又は吸収される脂質及びペプチドを選択することにより、生体吸収性の脂質ペプチド並びにヒドロゲルとして用いることが出来る。
【００１８】
以上のように、本発明による脂質ペプチド並びに該脂質ペプチドの水溶液、さらには該脂質ペプチドの加水分解によって得られるヒドロゲルは、生体や環境に安全であり、患部や損傷部位認識能を有する創傷被覆剤、癒着防止膜、薬物速達システムなどに用いることでき、さらに疾患のマーカーとなる酵素を検出する検査・診断用の基材、創薬等の試験評価システムなど広く利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の脂質ペプチドとしては、水溶液中では溶解した状態にあるか、又は微細な球状の会合体を形成して分散した状態（ゾル状態）にあり、酵素（ペプチダーゼ）を添加することにより、酵素切断部位で切断され、生成した新たな脂質ペプチド（ゲル化剤）が自己集合化してファイバー状、さらにはゲルを形成するものが選択される。
すなわち、酸性領域からアルカリ性領域に亘る広い液性において、特に酵素反応を実施するｐＨ７．４のリン酸緩衝溶液中で、酵素の活性化に必要とされることもある２価の金属イオン（カルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオンなど）が存在していても、ペチダーゼ添加前にはゲル化や錯体を形成せず、ペプチダーゼ添加後には速やかにゲル形成が起こる脂質ペプチドを設計することが肝要である。
以下、上記条件を持たすべく設計された脂質ペプチドゲル化促進部位にスペーサー（１）を介して酵素切断部位が結合し、さらに該酵素切断部位にスペーサー（２）を介して親水性ペプチド部位が結合した前記式（１）で表される構造を有する本発明の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩について、また該ペプチドを構成する脂質ペプチドゲル化
促進部位、スペーサー（１）、酵素切断部位、スペーサー（２）、及び親水性ペプチド部位の夫々の部位について詳細に説明する。
【００２０】
［脂質ペプチドゲル化促進部位］
脂質ペプチドゲル化促進部位（すなわちゲル化剤）は、ペプチダーゼ添加後に速やかに自己集合化し、ゲル形成をなす部位である。
脂質ペプチドゲル化促進部位は、下記式（２）で表される構造を有し、すなわち、脂溶性の高い長鎖を有する脂質部（アルキルカルボニル基）とペプチド部（テトラペプチド）より構成され、これらは自己集合化の妨げにならず、会合相手（別の脂質ペプチドゲル化促進部位）のペプチド部と水素結合を形成できるような構造から選択される。
具体的には、脂質ペプチドゲル化促進部位は、ある程度の鎖長の直線性の高い脂肪酸と嵩の小さいアミノ酸、さらに塩基性置換基を有するアミノ酸が結合した構造を有するものである。
【００２１】
【化４】
【００２２】
上記式（２）において、脂質部に含まれるＲ1は、不飽和結合を１又は２個有し得る炭
素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し、好ましくは炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表す。
Ｒ1及び隣接するカルボニル基で構成される脂質部の好ましい構造の具体例としては、
ミリストイル基、ペンタデカノイル基、パルミトイル基、マルガロイル基、オレオイル基、エライドイル基、リノレオイル基、ステアロイル基、バクセノイル基、オクタデシルカルボニル基、アラキドイル基、イコサノイル基等を挙げることができ、さらに好ましくは、ミリストイル基、ペンタデカノイル基、パルミトイル基、マルガロイル基、ステアロイル基、ノナデカノイル基、イコサノイル基が挙げられる。
【００２３】
上記式（２）において、ペプチド部に含まれるＲ2乃至Ｒ5は、夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、又は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つ、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二
つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表す。
上記式−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基において、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グア
ニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾール基又はイミダゾー
ル基を表す。
【００２４】
上記炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基とは、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、第二ブチル基又は第三ブチル基を表し、好ましくはメチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基又は第二ブチル基である。
【００２５】
上記−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基は、具体的にはアミノメチル基、２−アミノエチル基、３−
アミノプロピル基、４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチ
ル基、３−カルバモイルプロピル基、２−グアニジノエチル基、３−グアニジノプロピル基、ピロールメチル基、イミダゾールメチル基、ピラゾールメチル基又は３−インドールメチル基等であり、好ましくは４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダゾールメチル基又は３−インドールメチル基、特にイミダゾールメチル基が好ましい。
【００２６】
また上述したように、自己集合化の妨げにならず、会合相手（別の脂質ペプチドゲル化促進部位）のペプチド部と水素結合を形成できるように、Ｒ2乃至Ｒ4は水素又は炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、特にメチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基、第二ブチル基から選択され、特に水素原子であることが好ましく、Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イ
ミダゾールメチル基又は３−インドールメチル基から選択され、特にイミダゾールメチル基であることが好ましい。
なお、これら好ましいＲ2乃至Ｒ5を有するアミノ酸は以下の通りである；
Ｒ2乃至Ｒ4：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、特にＧｌｙ；
Ｒ5：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、特にＨｉｓ。
【００２７】
［スペーサー（１）］
スペーサー（１）は、脂質ペプチドゲル化促進部位の塩基性アミノ酸が、酵素切断部位の酵素との反応を妨げないように、脂質ペプチドゲル化促進部位と酵素切断部位との距離を一定に保つ役割を担う部位であり、但し、酵素が酵素切断部位に接触するのを妨げるような構成であってはならない。
【００２８】
このような条件を担うスペーサー（１）としては、嵩の小さいアミノ酸、具体的にはグリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸１〜２個で構成される。
好ましいスペーサー（１）としては、アミノ酸が１個で構成される場合にはＧｌｙ又はＡｌａの何れかであり、アミノ酸が２個で構成される場合には、脂質ペプチドゲル化促進部位との結合側からみてＧｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｇｌｙ及びＩｌｅ−Ａｌａからなる群から選択される。
より好ましいスペーサー（１）は、Ｇｌｙ、又はＬｅｕ−Ｇｌｙである。
【００２９】
［酵素切断部位］
前述の通り、本発明の脂質ペプチドは、水溶液中では溶解した状態にあるか、又は微細な球状の会合体を形成して分散した状態（ゾル状態）にあるものが選択される。脂質ペプチドが球状会合体を形成している場合、脂質ペプチドの酵素切断部位とペプチダーゼが接触するには、会合体の外側表面に酵素切断部位が突出するような形状を脂質ペプチドが有していることが望ましい。
このような要件を満たす脂質ペプチドの形状として酵素切断部位で屈曲した形状が挙げられる。こうした形状にすることにより、脂質ペプチドが会合した場合に、酵素が酵素切断部位に接触することができ、しかも会合体の過剰なパッキングを抑制できることから、脂質ペプチドが筒状の二次集合体（ファイバー）やさらに三次元の網目構造（ゲル）を形成することをも防止できる。
【００３０】
上記条件を満たす酵素切断部位は、ペプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む、２〜６個のアミノ酸から形成される部位であり、より具体的にはスペーサー（１）との結合側のアミノ酸がプロリン（Ｐｒｏ）であり、望ましくは（Ｐｒｏ）−Ｘ−Ｙ−又は（Ｐｒｏ）−Ｚ−Ｘ−Ｙ−のアミノ酸配列を含む部位である。
ここでＸ−Ｙはマトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモ
トリプシンから選択されるペプチダーゼによって加水分解されるジペプチドを表し、例えばＧｌｙ−Ｌｅｕ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｓｅｒ及びＬｅｕ−Ｇｌｙからなる群から選択されるジペプチドである。
またＺはＸ−Ｙにペプチダーゼが接近しやすいように嵩の小さいアミノ酸から選択され、例えばＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸である。
【００３１】
好ましい酵素切断部位としては、スペーサー（１）との結合側からみて、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ又はＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙが挙げられ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ又はＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕがより好ましく、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ又はＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕが最も好ましい。
【００３２】
［スペーサー（２）］
スペーサー（２）は、酵素切断部位と親水性ペプチド部位とを接続する部位であり、且つ、親水性ペプチド部位による本発明の脂質ペプチドに対する水溶性機能の付加を妨げないような部位である。前述のスペーサー（１）と同様に、スペーサー（２）も酵素が酵素切断部位に接触するのを妨げるような構成であってはならない。
また場合によってはスペーサー（２）を介することなく、酵素切断部位と親水性ペプチド部位が直接接続していてもよく、すなわちスペーサー（２）は直接結合を表すものであってもよい。
【００３３】
このような条件を担うスペーサー（２）としては、嵩の小さいアミノ酸、具体的にはグリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）からなる群から選択されるアミノ酸０〜２個で構成され、特に直接結合又はＧｌｙ若しくはＡｌａの１個のアミノ酸であることが好ましい。
【００３４】
［親水性ペプチド部位］
親水性ペプチド部位は、本発明の脂質ペプチドが酵素と反応するまでの間、水溶液中で該脂質ペプチドを溶解させた状態とするか又は球状会合体を形成して均一に分散させる状態にする機能を担う部位である。
親水性ペプチド部位は、親水性を発現すると共に、ペプチダーゼの活性化に必要な場合もあるカルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオンなどの２価の金属イオンの存在下であっても、これらイオンと錯体を形成せず、ゲル化、固化、析出などを生じさせないような構成が選択される。
【００３５】
このような要件を満たす親水性ペプチド部位として、特に２価の金属イオンによる錯体形成を避けるには、カルボキシル基や水酸基を有するアミノ酸の使用を避け、アミノ基、アミノカルバモイル基、グアニジノ基を持つ親水性アミノ酸を２〜３個組み合わせて構成するのが好ましく、具体的にはリジン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）及びアルギニン（Ａｒｇ）から選択されるアミノ酸２〜３個、好ましくは前記
アミノ酸２個から構成されることが望ましい。
具体的には、親水性ペプチド部位のスペーサー（２）との結合側からみて、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｇｌｎ、Ａｒｇ−Ａｓｎ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、Ｇｌｎ−Ａｒｇ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｓｐ−Ａｒｇ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ又はＡｓｎ−Ｌｙｓが好ましく、Ａｒｇ−Ａｒｇ又はＡｒｇ−Ｌｙｓがより好ましい。
【００３６】
また、親水性ペプチド部位の末端部（Ｃ末端）としては−ＯＨ基、−ＯＭｅ基、−ＮＨ2基、−ＮＨＭｅ基、−ＮＭｅ2基が挙げられるが、前述の通り、ぺプチダーゼの活性化に金属イオンの添加が必要である場合に、これらイオンとの錯体形成を避けるためには、末端が−ＮＨ2基、−ＮＨＭｅ基、−ＮＭｅ2基であることが好ましく、−ＮＨ2基であるこ
とがより好ましい。
【００３７】
［脂質ペプチドの一例］
上記式（１）で表される脂質ペプチドとして好適なものの一例を以下に示す。なお、アミノ酸の略称としては、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、バリン（Ｖａｌ）を表す。：Ｎ−ミリストイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−ミリストイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
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Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パル
ミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−ステアロイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2
。
【００３８】
上記脂質ペプチドにおいてより好適なものとしては、Ｎ−ミリストイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｐｒｏ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイ
ル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌ
ｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−ステアロ
イル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−ミリストイル
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パ
ルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−ステアロイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2が挙げられる。
【００３９】
また最も好ましいものとして、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パル
ミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、が挙げられる。
【００４０】
［ペプチダーゼによる加水分解により形成される新たな脂質ペプチド］
本発明の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩は、ペプヂダーゼによって加水分解され、新たな脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩（以下、「酵素処理された脂質ペプチド」と称する）を形成する。
この酵素処理された脂質ペプチドは、具体的には以下の式（３）で表される構造を有する。
【００４１】
【化５】
【００４２】
上記式（３）中、Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直
鎖状脂肪族基を表し、Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、若しくは−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表すか、又は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、そ
の際Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つＲ2乃至Ｒ5の
うちの少なくとも一つは隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾー
ル基、ピラゾール基又はイミダゾール基を表し、ｍは３乃至８を表す。
なお、Ｒ1、Ｒ2乃至Ｒ5における炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１
乃至４のアルキル基、−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基の具体例は前述した通りである。
【００４３】
［脂質ペプチドの水溶液、球状会合体ならびにヒドロゾル］
本発明の脂質ペプチドは、水溶液やアルコール水溶液中に投入されると、溶解した状態となる。
あるいは、本発明の脂質ペプチドは、水溶液やアルコール水溶液などの水性媒体中で、前記式（１）における脂質ペプチドゲル化促進部位におけるペプチド部が水素結合により分子間非共有結合を形成し、一方、該促進部位における脂質部が疎水的にパッキングする
ように自己集合化し、酵素切断部位を外側表面に向けた球状の二次集合体、すなわち球状会合体が形成される。
そして本発明の脂質ペプチド及び／又はこれより形成された球状会合体は、媒体の水溶液又はアルコール水溶液と共にヒドロゾルを形成する。
【００４４】
［本発明の脂質ペプチドよりなる酵素応答性ゲル化物質］
これまで述べてきたように、本発明の脂質ペプチドはペプチダーゼによって切断される部位を有することから、本発明の脂質ペプチドを用いて酵素応答性ゲル化物質をなすことができる。
すなわち、本発明の脂質ペプチド及び／又はこれより形成された球状会合体を含む水溶液或いはヒドロゲルに、マトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモトリプシンから選択されるペプチダーゼを添加すると、脂質ペプチド中の酵素切断部位が加水分解によって切断され、前述の酵素処理された脂質ペプチドが形成される。
【００４５】
［酵素処理された脂質ペプチドより形成されるファイバー又はヒドロゲル］
この酵素処理された脂質ペプチドは、前述の本発明の脂質ペプチド同様、前記式（１）における脂質ペプチドゲル化促進部位におけるペプチド部が水素結合により分子間非共有結合を形成し、そして脂質部が疎水的にパッキングするように自己集合化し、筒状の集合体、すなわちファイバーが形成される。
上記ファイバーが水溶液中で形成されると、このファイバーが三次元網目構造を形成し、さらに、ファイバー表面の親水性部分と水性溶媒間で非共有結合を形成して膨潤することにより、水溶液全体がゲル化し、ヒドロゲルが形成される。
【００４６】
以上のように、本発明の脂質ペプチドは水溶液中ではゾル状態にあり、ペプチダーゼと反応することにより、低分子ヒドロゲル化剤として機能する脂質ペプチドとなり、ヒドロゲルに変換させることができる。
加えて本発明の脂質ペプチドは、酸性領域からアルカリ性領域に亘る広い液性において、特に酵素反応を実施する中世領域においても安定なゾル状態を保ち、ペプチダーゼ添加後には速やかにゲルを形成することができる。
そして本発明の脂質ペプチド、酵素反応後の脂質ペプチド及びヒドロゲルともに低分子化合物であることから、これらはともに環境・生体内において分解可能であり、生体適合性の高い材料として活用することができる。
【００４７】
このため、本発明の脂質ペプチド及びその水溶液は、損傷部位、疾患部位、癌組織を認識してゲル化する創傷被覆材、癒着防止膜、薬物速達システムに、また疾患部位や癌組織特異的でマーカーとなるぺプチターゼと反応するシステムとして検査・診断薬として、さらには、疾患の発病原因や癌組織の成長の原因となるぺプチターゼ阻害剤を探索する創薬研究用の試剤として幅広く利用することができる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例を挙げて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は、これら実施例に限定されるものではない。
【００４９】
［実施例で用いる略記号］
以下の実施例で用いる略記号の意味は、次のとおりである。
Ｇｌｙ：グリシン
Ｈｉｓ：ヒスチジン
Ｌｅｕ：ロイシン
Ａｌａ：アラニン
Ｐｒｏ：プロリン
Ｐｈｅ：フェニルアラニン
Ａｒｇ：アルギニン
Ｌｙｓ：リジン
Ｓｅｒ：セリン
Ａｓｐ：アスパランギン
ＨＢＴＵ：２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート （渡辺化学工業（株））
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール （和光純薬工業（株））
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン （東京化成工業（株））
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸（渡辺化学工業（株））
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン（渡辺化学工業（株））
ＭＭＰ−ＶＩＩ：ヒト由来（和光純薬工業（株））
コラゲナーゼ：clostridium histolyticum由来（シグマ アルドリッチ社）
【００５０】
［脂質ペプチドの合成］
脂質ペプチドは以下に示すＦｍｏｃ固相ペプチド合成法の手順に従って合成した。樹脂としてＭＢＨＡ−ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ ０．３ｍｍｏｌを用いて合成を行なった。
【００５１】
実施例１：Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の製造
ＭＢＨＡ−ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業（株））０．３ｍｍｏｌをＰＤ−１０カラムに添加し、ＤＣＭ５ｍｌを添加して樹脂を１時間膨潤させた。次にＤＣＭ５ｍｌにて３回、ＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
次にＦｍｏｃの脱保護を行うため、カラムに２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、１分間攪拌した後溶液を捨て、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、４５分間攪拌した。
【００５２】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を約７０３ｍｇ、ＨＯＢｔを約４１ｍｇ加え、５ｍｌのＤＭＦを添加して溶解させた後、ＤＩＣを約１８９ｍｇ加えて縮合反応を進行させた。
これらを２時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
以下、反応の進行状態はカイザー試験で評価し、未反応の樹脂が残存している場合は再び縮合反応およびＤＭＦ５ｍｌによる洗浄操作を行った。
続いてＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５３】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂf）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５８４
ｍｇ、縮合剤溶液１（ＨＢＴＵ３．０５ｇ、ＨＯＢｔ１．２５ｇをＤＭＦ１６ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを添加した。
さらに縮合剤溶液２（ＤＩＥＡ２．７５ｍｌをＤＭＦ１４．２５ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを加えた。
これらを１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再
び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５４】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ・Ｈ2Ｏ（渡辺化学工業（株））を２９６ｍ
ｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５５】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３１８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５６】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを（渡辺化学工業（株））２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５７】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３１８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５８】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３０４ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５９】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６０】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５５８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６１】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６２】
さらに上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６３】
再度上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６４】
パルミチン酸（東京化成工業（株）製）約２３０ｍｇをカラムに添加し、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、９０分間バイブレーターにて攪拌した。
反応後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて５回、メタノール５ｍｌにて５回、夫々洗浄した後、樹脂を一晩真空乾燥させた。
乾燥後、ＴＦＡ３．８ｍｌ、蒸留水０．１ｍｌ及びＴＩＳ０．１ｍｌをカラムに添加し１時間攪拌した。
回収した混合溶液にジエチルエーテルを添加し、固形物を析出させた後、遠心及びデカント操作を行い、生成物を洗浄、回収し、凍結乾燥を行い、目的化合物を得た。得られた生成物をＨＰＬＣにより分取・精製した。化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（アプライドバイオシステムズ社のＶｏｙａｇｅｒＳｙｓｔｅｍ ２０６５装置）を用いて行った。
ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：１３５６．１（Ｍ+，ｂｐ）［理論値： １３５６．７］
【００６５】
実施例２：Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2の製造
ＭＢＨＡ−ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業（株））０．３ｍｍｏｌをＰＤ−１０カラムに添加し、ＤＣＭ５ｍｌを添加して樹脂を１時間膨潤させた。次にＤＣＭ５ｍｌにて３回、ＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
次にＦｍｏｃの脱保護を行うため、カラムに２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、１分間攪拌した後溶液を捨て、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、４５分間攪拌した。
【００６６】
次に上記カラムに、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂf）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を約９
７３ｍｇ、ＨＯＢｔを約４１ｍｇ加え、５ｍｌのＤＭＦを添加して溶解させた後、ＤＩＣ
を約１８９ｍｇ加えて縮合反応を進行させた。
これらを２時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
以下、反応の進行状態はカイザー試験で評価し、未反応の樹脂が残存している場合は再び縮合反応およびＤＭＦ ５ｍｌによる洗浄操作を行った。
続いてＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６７】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂf）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５８４
ｍｇ、縮合剤溶液１（ＨＢＴＵ３．０５ｇ、ＨＯＢｔ１．２５ｇをＤＭＦ１６ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを添加した。
さらに縮合剤溶液２（ＤＩＥＡ２．７５ｍｌをＤＭＦ１４．２５ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを加えた。
これを１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６８】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５１３ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６９】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ・Ｈ2Ｏを２９６ｍｇ、前記縮合剤１及び２
を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７０】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３０４ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７１】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７２】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３１８ｍｇ、前記
縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７３】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５５８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７４】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７５】
さらに上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７６】
再度上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７７】
パルミチン酸（東京化成工業（株）製）約２３０ｍｇをカラムに添加し、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、９０分間バイブレーターにて攪拌した。
反応後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて５回、メタノール５ｍｌにて５回、夫々洗浄した後、樹脂を一晩真空乾燥させた。
乾燥後、ＴＦＡ３．８ｍｌ、蒸留水０．１ｍｌ及びＴＩＳ０．１ｍｌをカラムに添加し１時間攪拌した。
回収した混合溶液にジエチルエーテルを添加し、固形物を析出させた後、遠心及びデカント操作を行い、生成物を洗浄、回収した。凍結乾燥を行なった後、アセトニトリル４ｍｌにて３回洗浄を行い、目的化合物を得た。
ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：１３０１．０（Ｍ+）［理論値：１３０１．６］
【００７８】
実施例３：パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2を用いたマトリックスメタロプロテア
ーゼ−ＶＩＩ（ＭＭＰ−ＶＩＩ）応答性の評価
［試験手順］
実施例１で製造したパルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の０．２質量％（１．５ｍ
Ｍ）の脂質ペプチド濃度の溶液となるように、５０ｍＭ トリス塩酸バッファー緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ2）を加え、６０℃以上に加熱して脂質ペプチドを溶解し、その後３０
分放冷し脂質ペプチド溶液（１）を調製した。
この溶液（１）に、１μｇ／ｍｌ以上の任意の濃度でＭＭＰ−ＶＩＩ（分子量：２０ｋＤａ）を添加し、軽く攪拌した。ゲル形成の評価は目視により行なった。
同様に、ＭＭＰ−ＶＩＩに替えて標準タンパク質としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、分子量：６７ｋＤａ、ｐＩ＝約４．９）、又は他の酵素としてトロンビン（分子量：３６ｋＤａ、ｐＩ＝７．０〜７．５）を用い、それぞれ２μｇ／ｍｌの濃度で脂質ペプチド溶液（１）に添加し、ゲル形成の評価を行なった。
また脂質ペプチド溶液（１）、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加試料及びトロンビン添加試料について、それぞれ逆相ＨＰＬＣを用いて分析した。なお、使用したＨＰＬＣ条件を以下に示す。
【００７９】
【表１】
【００８０】
［ＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：目視評価結果］
酵素添加による溶液の挙動変化を図１（脂質ペプチド溶液（１）のみ、ＢＳＡ添加、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加）、図２（トロンビン添加）に示す。
図１に示すように、ＢＳＡを添加した試料（図１：Ｂ）は１２時間経過後も透明な溶液を維持し、ゲル形成は認められなかった。
一方、ＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料は、１μｇ／ｍｌ以上のＭＭＰ−ＶＩＩ濃度でゲル形成が確認された。また図１に示すように、５μｇ／ｍｌの添加では９０分後（図１：Ｃ）、２μｇ／ｍｌ（図１：Ｄ）の添加では２時間後に、ぞれぞれゲル形成が確認された。
また、ＭＭＰ−ＶＩＩの代わりにトロンビンを添加した試料は２４時間後も変化は見られず、ゲル形成は認められなかった（図２）。
【００８１】
［ＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：逆相ＨＰＬＣによる評価結果］
上述の、ＭＭＰ−ＶＩＩを２μｇ／ｍｌ添加した後、２時間経過後の試料について測定したＨＰＬＣチャートを図３に、及びトロンビン添加後２４時間経過後の試料について測定したＨＰＬＣチャートを図４にそれぞれ示す。
図３に示すように、脂質ペプチド溶液（１）においては保持時間１３．７分にピークが観測されたが、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加後の試料においては、さらに保持時間１６．７分に新たなピークが観測された。
この新たに確認された１６．７分の画分を分取し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを用いて分析したところ、８８９．２にピークが観測された（図５）。この結果は、実施例１で合成した脂質ペプチドが、ＭＭＰ−ＶＩＩによりＧｌｙ−Ｌｅｕ間で加水分解されていることを示すもの、すなわち、パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙが存在していることを示すものであった。
一方、図４に示すように、トロンビンを添加した試料は、脂質ペプチド溶液（１）における保持時間１３．７分のピークの他にピークが確認されず、加水分解が進行していないことを示すことがＨＰＬＣにおいても確認された。
以上のとおり、実施例１で合成した脂質ペプチドは、ＭＭＰ−ＶＩＩに対して選択的に応答することが確認された。
【００８２】
［ＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：モルフォロジー観察結果］
上述の［試験手順］に倣い、脂質ペプチド溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを１μｇ／ｍｌ添加して５時間経過後、カーボングリッドをディップし、少量の脱イオン水で表面を洗浄した。その後、酸化ウラニルによる後染め処理を行なった。一晩以上真空乾燥させた後、透過型電子顕微鏡観察を行った。
また、ＭＭＰ−ＶＩＩを添加していない脂質ペプチド溶液（１）をカーボングリッド上にキャストし、一分間放置した後、少量の脱イオン水で表面を洗浄した。同様に酸化ウラニルによる後染め処理を行ない、一晩以上真空乾燥させた後、透過型電子顕微鏡観察を行った。
得られた結果を図６に示す。これによると、脂質ペプチド溶液（１）（図６：Ａ）では球状の構造体が観察され、液中で球状会合体形成していることが示唆される結果となった。その大きさは約１０ｍｍ弱であった。
一方、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加後においては（図６：Ｂ）、ファイバー構造とそのバンドル化が観察された。この結果はＭＭＰ−ＶＩＩ添加後に形成されるゲルが、ファイバーの形成とバンドル化による架橋点の形成におって引き起こされることを示唆するものであった。
【００８３】
実施例４：酵素阻害条件下におけるＭＭＰ−ＶＩＩ応答性の評価
実施例１で製造したパルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の０．２質量％（１．５ｍ
Ｍ）の脂質ペプチド濃度の溶液となるように、０．２ｍＭのＭＭＰインヒビター−ＩＩ（Ｎ−ヒドロキシ−１，３−ジ−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニル）−５，５−ジメチル−［１，３］−ピペラジン−２−カルボキサミド）を含む５０ｍＭ トリス塩酸バッファー緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ
ＮａＣｌ）を加え、６０℃以上に加熱して脂質ペプチドを溶解し、その後３０分放冷し脂質ペプチド溶液（２）を調製した。阻害剤を溶解させるために４％ＤＭＳＯを添加した。
また、０．２ｍＭのＭＭＰインヒビター−ＩＩを含まない脂質ペプチド溶液（３）（ＤＭＳＯは含む）も同様に調製した。
この溶液（２）及び（３）に、２μｇ／ｍｌ（約０．１μＭ）の濃度でＭＭＰ−ＶＩＩを添加し、軽く攪拌した。ゲル形成の評価は目視により行なった。
また各溶液について、前記表１の条件にて逆相ＨＰＬＣを用い、分析した。
【００８４】
［酵素阻害条件下におけるＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：目視評価結果］
酵素添加による溶液の挙動変化を図７に示す。
図７に示すように、ＤＭＳＯ存在下においてもＭＭＰ−ＶＩＩの添加によるゲル形成が確認された（図７：Ｂ）
一方、ＭＭＰインヒビター−ＩＩを添加した試料（図７：Ａ）はＭＭＰ−ＶＩＩの添加１２時間経過後も透明な溶液を維持し、ゲル形成は認められなかった。
【００８５】
［酵素阻害条件下におけるＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：逆相ＨＰＬＣによる評価結果］
上述の、脂質ペプチド溶液（２）及び（３）に、ＭＭＰ−ＶＩＩを２μｇ／ｍｌ添加した各試料について測定したＨＰＬＣチャートを図８に示す。
図７に示すように、ＭＭＰインヒビター−ＩＩを添加後１２時間経過した試料（図８：Ａ）においては、脂質ペプチド由来のピークに加えて、保持時間１６．０分及び１７．１分にピークが観測されたが、実施例３で確認された１６．７分のピークは観測されなかった。なお、保持時間１６．０分及び１７．１分にピークはＭＭＰインヒビター−ＩＩ由来のピークである。
すなわち、酵素阻害剤の添加により、実施例１で合成した脂質ペプチドの加水分解反応が抑制されることが確認された。
【００８６】
実施例５：Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2を用いたコラゲナーゼ応答性の評価
［試験手順］
実施例２で製造したＮ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2の０．２質量％（１．５ｍＭ）
の脂質ペプチド濃度の溶液となるように、５０ｍＭ トリス塩酸バッファー緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ2）を加え、６０℃以上に加熱して脂質ペプチドを溶解し、その後３０分放
冷し脂質ペプチド溶液（４）を調製した。
この溶液（４）に、０．５μｇ／ｍｌ濃度でコラゲナーゼ（分子量：６８ｋＤ〜１２５ｋＤ）を添加し、軽く攪拌した。ゲル形成の評価は目視により行なった。
また、コラゲナーゼ添加前後の各溶液について、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを測定した。
【００８７】
［コラゲナーゼ応答性評価結果］
酵素添加による溶液の挙動変化を図９に、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳのスペクトル測定結果を図１０に示す。
図９に示すように、コラゲナーゼを添加し、３０分間経過した試料（図９：Ｂ）においてゲル形成が確認された。
また図１０に示すように、コラゲナーゼ添加前（図１０：Ａ）のスペクトルでは、１３０１．０にピークが観測されたが、コラゲナーゼ添加後３０分間経過後（図１０：Ｂ）には、さらに９２４．９にピークが観測された。この結果は、実施例２で合成した脂質ペプチドが、コラゲナーゼによってＡｌａ−Ｓｅｒ間で加水分解されていることを示すものであった。
以上のとおり、実施例２で合成した脂質ペプチドは、コラゲナーゼに対して応答することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００８８】
本発明の脂質ペプチドは、水溶液中では溶解状態にあるか、或いは球状会合体を形成して分散して安定したゾル状態となる。この溶液中にペプチダーゼを添加すると、本発明の脂質ペプチドはペプチダーゼにより加水分解を受ける。加水分解を受けた脂質ペプチドは自己集合化して二次元のファイバー状、更には三次元網目構造のヒドロゲルを形成する。
従って本発明の脂質ペプチドは、患部や創傷部位のぺプチダーゼに選択的に反応して、ヒドロゲルを形成することにより、患部の外気や雑菌からの保護や保湿が可能となり、即ち創傷被覆剤や癒着防止膜として使用することができる。
【００８９】
さらに本発明の脂質ペプチドを含む溶液に薬剤を添加し、この薬剤入り溶液を患部に塗布（或いは噴霧）すると、患部で薬剤を取り込んだゲルを形成することが可能となるため
、長時間薬剤を患部に滞留させ、ゲルから患部へ薬剤を徐放することが可能になる。すなわち本発明の脂質ペプチドは薬物伝達システムの基材としての使用が期待できる。
特に、本発明の脂質ペプチド内に、癌細胞によって多く誘導されるＭＭＰ−ＶＩＩに選択的に応答する部位（例えばＧｌｙ−Ｌｅｕ）を組み込むことにより、癌組織を認識して癌組織にのみ薬剤を長時間滞留させて徐放させるゲルの形成が可能となることから、安全かつ高い癌組織選択的な薬物伝達システムを構築することが可能になる。
【００９０】
さらに本発明の脂質ペプチドは、疾患部位や癌組織のマーカーとなるぺプチダーゼに反応してゾルからゲルへ変換することから、高価な測定・分析機器を必要としない、簡便且つ視的に判断できる検査・診断用試薬の基材としての用途に好適である。
すなわち、特定疾患のマーカーとなり得るプロテアーゼによって切断されるペプチド結合を組み込んだ脂質ペプチドを調製することにより、この脂質ペプチドのゾル／ゲル状態を判断するだけで、疾患マーカーとなるプロテアーゼの有無が目視で確認できる検査・診断のシステムが構築できる。
【００９１】
さらに本発明の脂質ペプチドの酵素切断部位に、創薬研究においてターゲットとなるぺプチダーゼによって加水分解されるペプチドを導入しておくことにより、ゾル／ゲル変換を目視で評価できるぺプチダーゼ阻害剤又は活性剤の探索システムとして、すなわち、創薬研究用試薬の基材としての活用が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は脂質ペプチド溶液（１）（図１Ａ）、並びに該溶液（１）にＢＳＡを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、１２時間経過後、図１Ｂ）、ＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（５μｇ／ｍｌ添加、９０分経過後、図１Ｃ；２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図１Ｄ）における、溶液／ゲル状態を示す図である。
【図２】図２は脂質ペプチド溶液（１）にトロンビンを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２４時間経過後）における溶液／ゲル状態を示す図である。
【図３】図３は脂質ペプチド溶液（１）（図３Ａ）及び該溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図３Ｂ）を用いて測定したＨＰＬＣチャートを示す図である。
【図４】図４は脂質ペプチド溶液（１）（図４Ａ）及び該溶液（１）にトロンビンを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２４時間経過後、図４Ｂ）を用いて測定したＨＰＬＣチャートを示す図である。
【図５】図５は脂質ペプチド溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料におけるＨＰＬＣの１６．７分の画分を用いて測定したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図６】図６は脂質ペプチド溶液（１）（図６Ａ）及び該溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（１μｇ／ｍｌ添加、５時間経過後、図６Ｂ）を用いて撮影した透過型電子顕微鏡観察結果を示す図である。
【図７】図７は脂質ペプチド溶液（２）（ＤＭＳＯ＋ＭＭＰインヒビター−ＩＩ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（ＭＭＰインヒビター：０．２ｍＭ、ＭＭＰ−ＶＩＩ：２μｇ／ｍｌ添加、１２時間経過後、図７Ａ）、並びに、脂質ペプチド溶液（３）（ＤＭＳＯ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図７Ｂ）における、溶液／ゲル状態を示す図である。
【図８】図８は脂質ペプチド溶液（２）（ＤＭＳＯ＋ＭＭＰインヒビター−ＩＩ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（ＭＭＰインヒビター：０．２ｍＭ、ＭＭＰ−ＶＩＩ：２μｇ／ｍｌ添加、１２時間経過後、図８Ａ）、並びに、脂質ペプチド溶液（３）（ＤＭＳＯ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図８Ｂ）を用いて測定したＨＰＬＣチャートを示す図である。
【図９】図９は脂質ペプチド溶液（４）（図９Ａ）及び該溶液（４）にコラゲナーゼを添加した試料（０．５μｇ／ｍｌ、３０分間経過後）における、溶液／ゲル状態を示す図である。
【図１０】図１０は脂質ペプチド溶液（４）（図１０Ａ）及び該溶液（４）にコラゲナーゼを添加した試料（０．５μｇ／ｍｌ添加、３０分間経過後、図１０Ｂ）を用いて測定測定したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵素と反応することにより自己組織化素子へと変換する新規な脂質ペプチド、及び、酵素に応答してゾルからゲルに変換し形成されるゾル及びヒドロゲルに関する。
本発明の酵素応答性ヒドロゲルは、評価検体中の酵素の有無を確認するセンサー、その酵素活性の評価システム、患部の検査・診断、創傷部位の酵素と反応する創傷被覆材や薬物放出システム用の基材として好適に利用される。
【背景技術】
【０００２】
近年、外部の刺激に応答して形状や物性を変化させる材料の開発研究が行なわれており、こうした材料を医薬品製剤や医療用システムに用いる基材として、例えば薬物速達システム、検査・診断用関連基材、バイオチップ、生化学や創薬研究用基材への応用が試みられている。こうした外部刺激応答性材料の具体例として、温度や光に反応して材料表面が親水性から疎水性に変化する温度応答性高分子（特許文献１）や光応答性高分子（特許文献２）などが提案されている。
また最近では、創傷部位に選択的に反応して該部位を被膜し保護・治療するシステム、組織選択的な薬剤徐放システム、そして簡便かつ効率の良い検査・診断法に利用できる新たな外部刺激応答性材料の開発が進められている。例えば、生体内で使用可能なコラーゲンなどの天然高分子、ポリグリコールやポリエチレングリコールなどを用いて、タンパク質や細胞との相互作用を構築すべく設計された高分子ゲル（ヒドロゲル）が検討されている。
しかしながら、これらの材料を創傷部位の被膜や徐放製剤に用いるためにヒドロゲル化させようとする場合、高分子鎖間に化学共有結合にて架橋構造を構築するなどの必要があり、これはゲルの調製を煩雑なものとし、また架橋剤や機能性の発現のために組入れられた機能性分子等の未反応の残存物質の安全性なども問題となる。また、機能性基の導入率に限界があることや精密な分子設計が難しいといった様々な課題を残している。
【０００３】
こうした従来の「トップダウン型」の機能性材料の開発に対し、物質の最小単位である原子や分子を集合させ、その集合体である超分子に新たな機能を見出す「ボトムアップ型」の機能性材料の創製研究が着目されている。
ゲルの分野においても、低分子化合物の自己集合化による非共有結合性ゲルファイバー（所謂「超分子ポリマー」）によって形成される新たゲルの開発が進められている。この「自己集合化」とは、当初ランダムな状態にある物質（分子）群において、分子が適切な外部条件下で分子間の非共有結合性相互作用等により、自発的に会合することにより、マクロな機能性集合体に成長することを指す。
上記新たなゲルは、理論的にはモノマーの分子設計によって、分子間相互作用や分子集合体の弱い非共有結合を制御することで、巨視的なゲルの構造や機能制御が可能である点が注目されている。
但し、低分子化合物間の分子間相互作用や非共有結合を如何に制御するかについては明確な方法論が見出されていない。また得られる自己集合体の形状は、多くは球状の所謂ミセル型であるが、その他ベシクル型、ディスク型、ロッド型、チューブ型、ラメラ型と数種類あり、どのような形状の集合体を形成させるかを制御するモノマー分子設計は現状では困難である。さらに得られた巨視的なゲルの機能や物性の研究がほとんど行われていないのも現状である。
また分子設計に関しても、比較的ゲル形成が容易である有機溶媒中における水素結合を利用した自己集合体の研究は進められているものの、水溶液中での水素結合形成を推測することは困難であり、現状では偶発的な発見の域に留まっている。水溶液中における自己集合化化合物（すなわちヒドロゲル化剤など）の探索研究は、ケミカルライブラリーと自
動合成装置によって作製した多数のサンプル評価（非特許文献１）によって進められているなど、現状では予測不可能な状況にある。
【０００４】
こうした中、光異性化による分子の極性変化により可逆的に自己組織体を形成・崩壊し、それによりゾル・ゲル相転移を示す光応答性低分子ヒドロゲル（オリゴペプチド誘導体）（非特許文献２）が報告されている。また、リン酸化酵素に反応してゾルからゲルに変換し、さらにフォスファターゼによりゲルからゾルへと変化するリン酸化酵素応答性ゲル（非特許文献３）なども見出されている。
しかしながら、前者の光応答性ゲルではアゾ基といった特殊な官能基を用い、また後者の酵素応答性ゲルでは生体内の至るところで起きるリン酸化又はリン酸加水分解を対象とすることから、創傷部位や患部選択的な応答性としては改良の余地を残すものであり、安全性にも課題を有するものであった。
【０００５】
一方、ヒトの皮膚や組織において創傷などの何らかのダメージを受けると、その部位において、細胞は組織の再生や保護をするべく、特定のペプチド配列を加水分解するマトリックスメタロプロテアーゼ（以下、ＭＭＰと略す）やコラゲナーゼといったタンパク質分解酵素を活発に合成することとなる。すなわち、組織損傷部位は正常組織と比べて高い酵素濃度を有することとなり、こうした酵素の濃度分布を利用することにより、正常組織と異常組織（損傷部位）の識別が可能であるとしてその応用が期待されている。
特に、体細胞組織の制御因子（細胞移動、創傷治癒）であって、癌の増殖、湿潤、転移能などに関係し、癌細胞の多くが強く発現させることとなるＭＭＰ（ＭＭＰ−ＶＩＩ）は、癌細胞の識別、診断やそれを標的にした薬物伝達システム（ＤＤＳ）への展開が図れるとして幅広く研究されており、例えばＭＭＰに応答するヒドロゲルとして、ＭＭＰにより分解されるヒドロゲルが報告されている（非特許文献４）。
【特許文献１】特開２０００−３１９３３５号公報
【特許文献２】特開平７−２２８６３９号広報
【非特許文献１】松本真治、濱地格、ドージンニュース Ｎｏ．１１８、１−１６頁（２００６年）
【非特許文献２】Ｙ．マツザワら、アドバンスド ファンクショナル マテリアルズ、２００、１７、１５０７−１５１４（Y.Matsuzawa et al., Adv.Funct.Mater．,2007，17,1507-1514）
【非特許文献３】Ｚ．ヤンら、ジャーナル オブ ジ アメリカン ケミカル ソサイエティ、２００６、１２３、３０３８−３０４３（Z.Yang et al.，J.Am.Chem.Soc.,2006，128，3038-3043）
【非特許文献４】Ｙ．シャウら、バイオマテリアルズ、２００８、２９（１１）、１７１３−１７１９（Y.Chau et al.，Biomaterials，2008，29(11),1713-1719）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前述したように、これまで提案された光応答性ヒドロゲルや酵素応答性ヒドロゲルは、損傷組織における応答（選択）性や安全性などにさらなる改善が求められるものであった。
またＭＭＰの働きを利用したゲルにあっては、ＭＭＰによってその構造体が破壊されてしまうため、患部や癌組織に長時間滞留して薬剤の効果を保持することが困難であり、患部の被覆による保護や治療、またＤＤＳとして活用できる新たなヒドロゲルに対する潜在的な要求があった。
【０００７】
本発明は上記の事情に基づいてなされたものであり、その解決しようとする課題は、新規な脂質ペプチド、詳細には、通常は水溶液に溶解又は分散した状態で安定化した状態におり、疾患部位より誘導されるぺプチダーゼによって加水分解を受け、それにより自己集
合化してファイバー、さらにはヒドロゲルを形成する新規な脂質ペプチドを提供することにある。
また本発明は、上記脂質ペプチドを用いて、創傷や癌細胞などの患部（非正常部位）を識別し、さらには被覆することが可能になる、ヒドロゾルを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記の課題を解決するべく鋭意研究を行った結果、ヒドロゲル化能を有する脂質ペプチド化促進部位に酵素切断部位並びに親水性部位をスペーサーを介して結合させることにより、そしてこれら各構成部位の組み合わせを詳細に検討した脂質ペプチドをなすことにより、該脂質ペプチドを含む溶液がＭＭＰやコラゲナーゼなどの特定の酵素によってゲル化することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち本発明は、第１観点として、脂質ペプチドゲル化促進部位にスペーサー（１）を介して酵素切断部位が結合し、さらに該酵素切断部位にスペーサー（２）を介して親水性ペプチド部位が結合した式（１）で表される構造を有する脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩であって、
【０００９】
【化１】
【００１０】
前記脂質ペプチドゲル化促進部位は、式（２）：
【００１１】
【化２】
【００１２】
（式（２）中、
Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し
、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、又は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
且つ、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表す。）で表される部位であり、
前記スペーサー（１）は、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸１〜２個から形成される部位であり、
前記酵素切断部位は、ぺプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む、２〜６個のアミノ酸から形成される部位であり、
スペーサー（２）は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌからなる群から選択されるアミノ酸０〜２個から形成される部位であり、
前記親水性ペプチド部位は、親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に−ＯＨ基、−ＯＭｅ基、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基（Ｍｅはメチル基を表す
。）を有してなる部位である、
脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第２観点として、前記酵素切断部位が、スペーサー（１）との結合側のアミノ酸がプロリン（Ｐｒｏ）である、第１観点記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第３観点として、前記親水性ペプチド部位が、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）及びアルギニン（Ａｒｇ）からなる群から選択される親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基、又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、第１観点又は第２観点記載の脂質ペプチド及びその薬
学的に使用可能な塩。
第４観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基を表し、
Ｒ5は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾール基又はイミダゾール基を
表す、第１観点乃至第３観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第５観点として、前記酵素切断部位は、スペーサー（１）との結合側からみて（Ｐｒｏ）−Ｘ−Ｙ−又は（Ｐｒｏ）−Ｚ−Ｘ−Ｙ−のアミノ酸配列を含み、ここでＸ−Ｙは、マトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモトリプシンから選択されるペプチダーゼによって加水分解されるジペプチドを表し、ＺはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸を表す、第１観点乃至第４観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第６観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、メチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基又は第二ブチル基を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表す、
第１観点乃至第５観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第７観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表し、
前記スペーサー（１）が、１個のアミノ酸からなる部位である場合にはＧｌｙ又はＡｌａであり、２個のアミノ酸から形成される部位である場合には、脂質ペプチドゲル化促進部位との結合側からみてＧｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｇｌｙ及びＩｌｅ−Ａｌａからなる群から選択されるものであり、
前記スペーサー（２）は、直接結合又はＧｌｙ若しくはＡｌａの１個のアミノ酸であり、であり、
前記親水性ペプチド部位が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ及びＡｒｇからなる群から選択される親水性アミノ酸２個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、第１観点乃至第６観点のうち何れか一項に記載の脂
質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第８観点として、前記親水性ペプチド部位が、スペーサー（２）との結合側からみて、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｇｌｎ、Ａｒｇ−Ａｓｎ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｓｎ−Ａｒｇ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ及びＡｓｎ−Ｌｙｓからなる群から選
択されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位
である、第１観点乃至第７観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第９観点として、前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5はイミダゾールメチル基を表す、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の脂
質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第１０観点として、第２観点記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩をペプチダーゼによって加水分解することにより形成される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第１１観点として、式（３）：
【００１３】
【化３】
【００１４】
（式中、Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族
基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、若しくは−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表
すか、又は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、その際Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つＲ2乃至Ｒ5のうちの少なくとも一つ
は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表し、
ｍは３乃至８を表す。）
で表される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
第１２観点として、水性媒体中で第１観点乃至第９観点のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成される球状会合体。
第１３観点として、第１観点乃至第９観点のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は第１２観点記載の球状会合体と水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゾル。
第１４観点として、第１観点乃至第９観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩よりなる酵素応答性ゲル化物質。
第１５観点として、第１観点乃至第９観点のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩を水溶液又はアルコール水溶液に溶解または分散させて得られる溶液、分散液又はヒドロゾルが、ペプチダーゼの添加によって、前記脂質ペプチドの前記酵素切断部位が加水分解されて得られるヒドロゲル。
第１６観点として、第１０観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は第１１観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成されるファイバー。
第１７観点として、第１０観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、
第１１観点に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩又は第１６観点に記載のファイバーと水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゲル。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩（以下、単に「本発明の脂質ペプチド」とも称する）は、水溶液やアルコール水溶液などに溶解し、又は水溶液中で球状の会合体を形成して分散し、安定したゾル状態を保つことができる。そしてこの溶液に特定の酵素を添加することにより、脂質ペプチドの酵素切断部位が加水分解を受け、新たに生じる脂質ペプチドが自己集合化することによりファイバーを形成して、容易にヒドロゲルを形成することができる。
【００１６】
本発明の脂質ペプチドは、一般的に創傷部位において発現している酵素（コラゲナーゼやＭＭＰ）によって上述のヒドロゲルを形成するため、目視によるこれら酵素の簡易検出、すなわち患部（創傷部位）の識別を可能にする。
特に本発明の脂質ペプチドは、癌細胞の増殖に関与する酵素ＭＭＰ−ＶＩＩにより切断される部位の組み込みが可能であるため、生体内で使用した場合に、癌組織の選択的な識別を可能にする。
【００１７】
そして、本発明の脂質ペプチドの加水分解によって生じた上記ヒドロゲルは、従来型のヒドロゲル形成時に必要とされた架橋剤等を用いることなく、水溶液又はアルコール水溶液をゲル化させたヒドロゲルであるため、未反応の架橋剤等の残存がない。また加水分解後に新たに生じた脂質ペプチドは低分子化合物からなるため、従来のヒドロゲルのように機能性の発現のために組入れられた機能性分子等の未反応物質を含むことがない。
また本発明の脂質ペプチド並びに加水分解によって生じたヒドロゲルは、動物由来材料（コラーゲン、ゼラチンなど）を使用せず、脂質とペプチド（アミノ酸）のみから構成される人工低分子化合物であるため、生体内で使用した場合において感染等による問題が生じない。しかも製造においては極めて簡便な方法で調製可能である。さらに原料として生体内で産生又は吸収される脂質及びペプチドを選択することにより、生体吸収性の脂質ペプチド並びにヒドロゲルとして用いることが出来る。
【００１８】
以上のように、本発明による脂質ペプチド並びに該脂質ペプチドの水溶液、さらには該脂質ペプチドの加水分解によって得られるヒドロゲルは、生体や環境に安全であり、患部や損傷部位認識能を有する創傷被覆剤、癒着防止膜、薬物速達システムなどに用いることでき、さらに疾患のマーカーとなる酵素を検出する検査・診断用の基材、創薬等の試験評価システムなど広く利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の脂質ペプチドとしては、水溶液中では溶解した状態にあるか、又は微細な球状の会合体を形成して分散した状態（ゾル状態）にあり、酵素（ペプチダーゼ）を添加することにより、酵素切断部位で切断され、生成した新たな脂質ペプチド（ゲル化剤）が自己集合化してファイバー状、さらにはゲルを形成するものが選択される。
すなわち、酸性領域からアルカリ性領域に亘る広い液性において、特に酵素反応を実施するｐＨ７．４のリン酸緩衝溶液中で、酵素の活性化に必要とされることもある２価の金属イオン（カルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオンなど）が存在していても、ペチダーゼ添加前にはゲル化や錯体を形成せず、ペプチダーゼ添加後には速やかにゲル形成が起こる脂質ペプチドを設計することが肝要である。
以下、上記条件を持たすべく設計された脂質ペプチドゲル化促進部位にスペーサー（１）を介して酵素切断部位が結合し、さらに該酵素切断部位にスペーサー（２）を介して親水性ペプチド部位が結合した前記式（１）で表される構造を有する本発明の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩について、また該ペプチドを構成する脂質ペプチドゲル化
促進部位、スペーサー（１）、酵素切断部位、スペーサー（２）、及び親水性ペプチド部位の夫々の部位について詳細に説明する。
【００２０】
［脂質ペプチドゲル化促進部位］
脂質ペプチドゲル化促進部位（すなわちゲル化剤）は、ペプチダーゼ添加後に速やかに自己集合化し、ゲル形成をなす部位である。
脂質ペプチドゲル化促進部位は、下記式（２）で表される構造を有し、すなわち、脂溶性の高い長鎖を有する脂質部（アルキルカルボニル基）とペプチド部（テトラペプチド）より構成され、これらは自己集合化の妨げにならず、会合相手（別の脂質ペプチドゲル化促進部位）のペプチド部と水素結合を形成できるような構造から選択される。
具体的には、脂質ペプチドゲル化促進部位は、ある程度の鎖長の直線性の高い脂肪酸と嵩の小さいアミノ酸、さらに塩基性置換基を有するアミノ酸が結合した構造を有するものである。
【００２１】
【化４】
【００２２】
上記式（２）において、脂質部に含まれるＲ1は、不飽和結合を１又は２個有し得る炭
素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し、好ましくは炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表す。
Ｒ1及び隣接するカルボニル基で構成される脂質部の好ましい構造の具体例としては、
ミリストイル基、ペンタデカノイル基、パルミトイル基、マルガロイル基、オレオイル基、エライドイル基、リノレオイル基、ステアロイル基、バクセノイル基、オクタデシルカルボニル基、アラキドイル基、イコサノイル基等を挙げることができ、さらに好ましくは、ミリストイル基、ペンタデカノイル基、パルミトイル基、マルガロイル基、ステアロイル基、ノナデカノイル基、イコサノイル基が挙げられる。
【００２３】
上記式（２）において、ペプチド部に含まれるＲ2乃至Ｒ5は、夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、又は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つ、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二
つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表す。
上記式−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基において、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グア
ニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾール基又はイミダゾー
ル基を表す。
【００２４】
上記炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基とは、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、第二ブチル基又は第三ブチル基を表し、好ましくはメチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基又は第二ブチル基である。
【００２５】
上記−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基は、具体的にはアミノメチル基、２−アミノエチル基、３−
アミノプロピル基、４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチ
ル基、３−カルバモイルプロピル基、２−グアニジノエチル基、３−グアニジノプロピル基、ピロールメチル基、イミダゾールメチル基、ピラゾールメチル基又は３−インドールメチル基等であり、好ましくは４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダゾールメチル基又は３−インドールメチル基、特にイミダゾールメチル基が好ましい。
【００２６】
また上述したように、自己集合化の妨げにならず、会合相手（別の脂質ペプチドゲル化促進部位）のペプチド部と水素結合を形成できるように、Ｒ2乃至Ｒ4は水素又は炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、特にメチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基、第二ブチル基から選択され、特に水素原子であることが好ましく、Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イ
ミダゾールメチル基又は３−インドールメチル基から選択され、特にイミダゾールメチル基であることが好ましい。
なお、これら好ましいＲ2乃至Ｒ5を有するアミノ酸は以下の通りである；
Ｒ2乃至Ｒ4：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、特にＧｌｙ；
Ｒ5：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、特にＨｉｓ。
【００２７】
［スペーサー（１）］
スペーサー（１）は、脂質ペプチドゲル化促進部位の塩基性アミノ酸が、酵素切断部位の酵素との反応を妨げないように、脂質ペプチドゲル化促進部位と酵素切断部位との距離を一定に保つ役割を担う部位であり、但し、酵素が酵素切断部位に接触するのを妨げるような構成であってはならない。
【００２８】
このような条件を担うスペーサー（１）としては、嵩の小さいアミノ酸、具体的にはグリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸１〜２個で構成される。
好ましいスペーサー（１）としては、アミノ酸が１個で構成される場合にはＧｌｙ又はＡｌａの何れかであり、アミノ酸が２個で構成される場合には、脂質ペプチドゲル化促進部位との結合側からみてＧｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｇｌｙ及びＩｌｅ−Ａｌａからなる群から選択される。
より好ましいスペーサー（１）は、Ｇｌｙ、又はＬｅｕ−Ｇｌｙである。
【００２９】
［酵素切断部位］
前述の通り、本発明の脂質ペプチドは、水溶液中では溶解した状態にあるか、又は微細な球状の会合体を形成して分散した状態（ゾル状態）にあるものが選択される。脂質ペプチドが球状会合体を形成している場合、脂質ペプチドの酵素切断部位とペプチダーゼが接触するには、会合体の外側表面に酵素切断部位が突出するような形状を脂質ペプチドが有していることが望ましい。
このような要件を満たす脂質ペプチドの形状として酵素切断部位で屈曲した形状が挙げられる。こうした形状にすることにより、脂質ペプチドが会合した場合に、酵素が酵素切断部位に接触することができ、しかも会合体の過剰なパッキングを抑制できることから、脂質ペプチドが筒状の二次集合体（ファイバー）やさらに三次元の網目構造（ゲル）を形成することをも防止できる。
【００３０】
上記条件を満たす酵素切断部位は、ペプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む、２〜６個のアミノ酸から形成される部位であり、より具体的にはスペーサー（１）との結合側のアミノ酸がプロリン（Ｐｒｏ）であり、望ましくは（Ｐｒｏ）−Ｘ−Ｙ−又は（Ｐｒｏ）−Ｚ−Ｘ−Ｙ−のアミノ酸配列を含む部位である。
ここでＸ−Ｙはマトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモ
トリプシンから選択されるペプチダーゼによって加水分解されるジペプチドを表し、例えばＧｌｙ−Ｌｅｕ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｓｅｒ及びＬｅｕ−Ｇｌｙからなる群から選択されるジペプチドである。
またＺはＸ−Ｙにペプチダーゼが接近しやすいように嵩の小さいアミノ酸から選択され、例えばＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸である。
【００３１】
好ましい酵素切断部位としては、スペーサー（１）との結合側からみて、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ又はＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙが挙げられ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ又はＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕがより好ましく、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ又はＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕが最も好ましい。
【００３２】
［スペーサー（２）］
スペーサー（２）は、酵素切断部位と親水性ペプチド部位とを接続する部位であり、且つ、親水性ペプチド部位による本発明の脂質ペプチドに対する水溶性機能の付加を妨げないような部位である。前述のスペーサー（１）と同様に、スペーサー（２）も酵素が酵素切断部位に接触するのを妨げるような構成であってはならない。
また場合によってはスペーサー（２）を介することなく、酵素切断部位と親水性ペプチド部位が直接接続していてもよく、すなわちスペーサー（２）は直接結合を表すものであってもよい。
【００３３】
このような条件を担うスペーサー（２）としては、嵩の小さいアミノ酸、具体的にはグリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）からなる群から選択されるアミノ酸０〜２個で構成され、特に直接結合又はＧｌｙ若しくはＡｌａの１個のアミノ酸であることが好ましい。
【００３４】
［親水性ペプチド部位］
親水性ペプチド部位は、本発明の脂質ペプチドが酵素と反応するまでの間、水溶液中で該脂質ペプチドを溶解させた状態とするか又は球状会合体を形成して均一に分散させる状態にする機能を担う部位である。
親水性ペプチド部位は、親水性を発現すると共に、ペプチダーゼの活性化に必要な場合もあるカルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオンなどの２価の金属イオンの存在下であっても、これらイオンと錯体を形成せず、ゲル化、固化、析出などを生じさせないような構成が選択される。
【００３５】
このような要件を満たす親水性ペプチド部位として、特に２価の金属イオンによる錯体形成を避けるには、カルボキシル基や水酸基を有するアミノ酸の使用を避け、アミノ基、アミノカルバモイル基、グアニジノ基を持つ親水性アミノ酸を２〜３個組み合わせて構成するのが好ましく、具体的にはリジン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）及びアルギニン（Ａｒｇ）から選択されるアミノ酸２〜３個、好ましくは前記
アミノ酸２個から構成されることが望ましい。
具体的には、親水性ペプチド部位のスペーサー（２）との結合側からみて、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｇｌｎ、Ａｒｇ−Ａｓｎ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、Ｇｌｎ−Ａｒｇ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｓｐ−Ａｒｇ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ又はＡｓｎ−Ｌｙｓが好ましく、Ａｒｇ−Ａｒｇ又はＡｒｇ−Ｌｙｓがより好ましい。
【００３６】
また、親水性ペプチド部位の末端部（Ｃ末端）としては−ＯＨ基、−ＯＭｅ基、−ＮＨ2基、−ＮＨＭｅ基、−ＮＭｅ2基が挙げられるが、前述の通り、ぺプチダーゼの活性化に金属イオンの添加が必要である場合に、これらイオンとの錯体形成を避けるためには、末端が−ＮＨ2基、−ＮＨＭｅ基、−ＮＭｅ2基であることが好ましく、−ＮＨ2基であるこ
とがより好ましい。
【００３７】
［脂質ペプチドの一例］
上記式（１）で表される脂質ペプチドとして好適なものの一例を以下に示す。なお、アミノ酸の略称としては、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、バリン（Ｖａｌ）を表す。：Ｎ−ミリストイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−ミリストイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
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。
【００３８】
上記脂質ペプチドにおいてより好適なものとしては、Ｎ−ミリストイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌ
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−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パ
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Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−ＮＨ2、Ｎ−ステアロイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2が挙げられる。
【００３９】
また最も好ましいものとして、Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、Ｎ−パル
ミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2、が挙げられる。
【００４０】
［ペプチダーゼによる加水分解により形成される新たな脂質ペプチド］
本発明の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩は、ペプヂダーゼによって加水分解され、新たな脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩（以下、「酵素処理された脂質ペプチド」と称する）を形成する。
この酵素処理された脂質ペプチドは、具体的には以下の式（３）で表される構造を有する。
【００４１】
【化５】
【００４２】
上記式（３）中、Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直
鎖状脂肪族基を表し、Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、若しくは−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表すか、又は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、そ
の際Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つＲ2乃至Ｒ5の
うちの少なくとも一つは隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾー
ル基、ピラゾール基又はイミダゾール基を表し、ｍは３乃至８を表す。
なお、Ｒ1、Ｒ2乃至Ｒ5における炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１
乃至４のアルキル基、−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基の具体例は前述した通りである。
【００４３】
［脂質ペプチドの水溶液、球状会合体ならびにヒドロゾル］
本発明の脂質ペプチドは、水溶液やアルコール水溶液中に投入されると、溶解した状態となる。
あるいは、本発明の脂質ペプチドは、水溶液やアルコール水溶液などの水性媒体中で、前記式（１）における脂質ペプチドゲル化促進部位におけるペプチド部が水素結合により分子間非共有結合を形成し、一方、該促進部位における脂質部が疎水的にパッキングする
ように自己集合化し、酵素切断部位を外側表面に向けた球状の二次集合体、すなわち球状会合体が形成される。
そして本発明の脂質ペプチド及び／又はこれより形成された球状会合体は、媒体の水溶液又はアルコール水溶液と共にヒドロゾルを形成する。
【００４４】
［本発明の脂質ペプチドよりなる酵素応答性ゲル化物質］
これまで述べてきたように、本発明の脂質ペプチドはペプチダーゼによって切断される部位を有することから、本発明の脂質ペプチドを用いて酵素応答性ゲル化物質をなすことができる。
すなわち、本発明の脂質ペプチド及び／又はこれより形成された球状会合体を含む水溶液或いはヒドロゲルに、マトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモトリプシンから選択されるペプチダーゼを添加すると、脂質ペプチド中の酵素切断部位が加水分解によって切断され、前述の酵素処理された脂質ペプチドが形成される。
【００４５】
［酵素処理された脂質ペプチドより形成されるファイバー又はヒドロゲル］
この酵素処理された脂質ペプチドは、前述の本発明の脂質ペプチド同様、前記式（１）における脂質ペプチドゲル化促進部位におけるペプチド部が水素結合により分子間非共有結合を形成し、そして脂質部が疎水的にパッキングするように自己集合化し、筒状の集合体、すなわちファイバーが形成される。
上記ファイバーが水溶液中で形成されると、このファイバーが三次元網目構造を形成し、さらに、ファイバー表面の親水性部分と水性溶媒間で非共有結合を形成して膨潤することにより、水溶液全体がゲル化し、ヒドロゲルが形成される。
【００４６】
以上のように、本発明の脂質ペプチドは水溶液中ではゾル状態にあり、ペプチダーゼと反応することにより、低分子ヒドロゲル化剤として機能する脂質ペプチドとなり、ヒドロゲルに変換させることができる。
加えて本発明の脂質ペプチドは、酸性領域からアルカリ性領域に亘る広い液性において、特に酵素反応を実施する中世領域においても安定なゾル状態を保ち、ペプチダーゼ添加後には速やかにゲルを形成することができる。
そして本発明の脂質ペプチド、酵素反応後の脂質ペプチド及びヒドロゲルともに低分子化合物であることから、これらはともに環境・生体内において分解可能であり、生体適合性の高い材料として活用することができる。
【００４７】
このため、本発明の脂質ペプチド及びその水溶液は、損傷部位、疾患部位、癌組織を認識してゲル化する創傷被覆材、癒着防止膜、薬物速達システムに、また疾患部位や癌組織特異的でマーカーとなるぺプチターゼと反応するシステムとして検査・診断薬として、さらには、疾患の発病原因や癌組織の成長の原因となるぺプチターゼ阻害剤を探索する創薬研究用の試剤として幅広く利用することができる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例を挙げて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は、これら実施例に限定されるものではない。
【００４９】
［実施例で用いる略記号］
以下の実施例で用いる略記号の意味は、次のとおりである。
Ｇｌｙ：グリシン
Ｈｉｓ：ヒスチジン
Ｌｅｕ：ロイシン
Ａｌａ：アラニン
Ｐｒｏ：プロリン
Ｐｈｅ：フェニルアラニン
Ａｒｇ：アルギニン
Ｌｙｓ：リジン
Ｓｅｒ：セリン
Ａｓｐ：アスパランギン
ＨＢＴＵ：２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート （渡辺化学工業（株））
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール （和光純薬工業（株））
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン （東京化成工業（株））
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸（渡辺化学工業（株））
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン（渡辺化学工業（株））
ＭＭＰ−ＶＩＩ：ヒト由来（和光純薬工業（株））
コラゲナーゼ：clostridium histolyticum由来（シグマ アルドリッチ社）
【００５０】
［脂質ペプチドの合成］
脂質ペプチドは以下に示すＦｍｏｃ固相ペプチド合成法の手順に従って合成した。樹脂としてＭＢＨＡ−ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ ０．３ｍｍｏｌを用いて合成を行なった。
【００５１】
実施例１：Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の製造
ＭＢＨＡ−ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業（株））０．３ｍｍｏｌをＰＤ−１０カラムに添加し、ＤＣＭ５ｍｌを添加して樹脂を１時間膨潤させた。次にＤＣＭ５ｍｌにて３回、ＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
次にＦｍｏｃの脱保護を行うため、カラムに２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、１分間攪拌した後溶液を捨て、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、４５分間攪拌した。
【００５２】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を約７０３ｍｇ、ＨＯＢｔを約４１ｍｇ加え、５ｍｌのＤＭＦを添加して溶解させた後、ＤＩＣを約１８９ｍｇ加えて縮合反応を進行させた。
これらを２時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
以下、反応の進行状態はカイザー試験で評価し、未反応の樹脂が残存している場合は再び縮合反応およびＤＭＦ５ｍｌによる洗浄操作を行った。
続いてＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５３】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂf）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５８４
ｍｇ、縮合剤溶液１（ＨＢＴＵ３．０５ｇ、ＨＯＢｔ１．２５ｇをＤＭＦ１６ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを添加した。
さらに縮合剤溶液２（ＤＩＥＡ２．７５ｍｌをＤＭＦ１４．２５ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを加えた。
これらを１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再
び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５４】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ・Ｈ2Ｏ（渡辺化学工業（株））を２９６ｍ
ｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５５】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３１８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５６】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを（渡辺化学工業（株））２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５７】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３１８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５８】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３０４ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００５９】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６０】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５５８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６１】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６２】
さらに上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６３】
再度上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６４】
パルミチン酸（東京化成工業（株）製）約２３０ｍｇをカラムに添加し、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、９０分間バイブレーターにて攪拌した。
反応後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて５回、メタノール５ｍｌにて５回、夫々洗浄した後、樹脂を一晩真空乾燥させた。
乾燥後、ＴＦＡ３．８ｍｌ、蒸留水０．１ｍｌ及びＴＩＳ０．１ｍｌをカラムに添加し１時間攪拌した。
回収した混合溶液にジエチルエーテルを添加し、固形物を析出させた後、遠心及びデカント操作を行い、生成物を洗浄、回収し、凍結乾燥を行い、目的化合物を得た。得られた生成物をＨＰＬＣにより分取・精製した。化合物の同定はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（アプライドバイオシステムズ社のＶｏｙａｇｅｒＳｙｓｔｅｍ ２０６５装置）を用いて行った。
ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：１３５６．１（Ｍ+，ｂｐ）［理論値： １３５６．７］
【００６５】
実施例２：Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2の製造
ＭＢＨＡ−ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業（株））０．３ｍｍｏｌをＰＤ−１０カラムに添加し、ＤＣＭ５ｍｌを添加して樹脂を１時間膨潤させた。次にＤＣＭ５ｍｌにて３回、ＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
次にＦｍｏｃの脱保護を行うため、カラムに２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、１分間攪拌した後溶液を捨て、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加え、４５分間攪拌した。
【００６６】
次に上記カラムに、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂf）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を約９
７３ｍｇ、ＨＯＢｔを約４１ｍｇ加え、５ｍｌのＤＭＦを添加して溶解させた後、ＤＩＣ
を約１８９ｍｇ加えて縮合反応を進行させた。
これらを２時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
以下、反応の進行状態はカイザー試験で評価し、未反応の樹脂が残存している場合は再び縮合反応およびＤＭＦ ５ｍｌによる洗浄操作を行った。
続いてＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、それぞれ洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６７】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂf）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５８４
ｍｇ、縮合剤溶液１（ＨＢＴＵ３．０５ｇ、ＨＯＢｔ１．２５ｇをＤＭＦ１６ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを添加した。
さらに縮合剤溶液２（ＤＩＥＡ２．７５ｍｌをＤＭＦ１４．２５ｍｌに溶解したもの）２．１ｍｌを加えた。
これを１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６８】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５１３ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００６９】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ・Ｈ2Ｏを２９６ｍｇ、前記縮合剤１及び２
を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７０】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３０４ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７１】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７２】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を３１８ｍｇ、前記
縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７３】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を５５８ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７４】
次に上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７５】
さらに上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７６】
再度上記カラムにＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（渡辺化学工業（株））を２７０ｍｇ、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、１時間バイブレーターにて攪拌した後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて３回、さらにＤＭＦ５ｍｌにて３回、夫々洗浄した。
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて１分間攪拌し、該溶液を除去した後、再び２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５ｍｌを加えて４５分間攪拌し、ＤＭＦ５ｍｌにて５回洗浄した。
【００７７】
パルミチン酸（東京化成工業（株）製）約２３０ｍｇをカラムに添加し、前記縮合剤１及び２を２．１ｍｌずつ添加し、９０分間バイブレーターにて攪拌した。
反応後、ＤＭＦ５ｍｌにて５回、ＤＣＭ５ｍｌにて５回、メタノール５ｍｌにて５回、夫々洗浄した後、樹脂を一晩真空乾燥させた。
乾燥後、ＴＦＡ３．８ｍｌ、蒸留水０．１ｍｌ及びＴＩＳ０．１ｍｌをカラムに添加し１時間攪拌した。
回収した混合溶液にジエチルエーテルを添加し、固形物を析出させた後、遠心及びデカント操作を行い、生成物を洗浄、回収した。凍結乾燥を行なった後、アセトニトリル４ｍｌにて３回洗浄を行い、目的化合物を得た。
ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：１３０１．０（Ｍ+）［理論値：１３０１．６］
【００７８】
実施例３：パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2を用いたマトリックスメタロプロテア
ーゼ−ＶＩＩ（ＭＭＰ−ＶＩＩ）応答性の評価
［試験手順］
実施例１で製造したパルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の０．２質量％（１．５ｍ
Ｍ）の脂質ペプチド濃度の溶液となるように、５０ｍＭ トリス塩酸バッファー緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ2）を加え、６０℃以上に加熱して脂質ペプチドを溶解し、その後３０
分放冷し脂質ペプチド溶液（１）を調製した。
この溶液（１）に、１μｇ／ｍｌ以上の任意の濃度でＭＭＰ−ＶＩＩ（分子量：２０ｋＤａ）を添加し、軽く攪拌した。ゲル形成の評価は目視により行なった。
同様に、ＭＭＰ−ＶＩＩに替えて標準タンパク質としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、分子量：６７ｋＤａ、ｐＩ＝約４．９）、又は他の酵素としてトロンビン（分子量：３６ｋＤａ、ｐＩ＝７．０〜７．５）を用い、それぞれ２μｇ／ｍｌの濃度で脂質ペプチド溶液（１）に添加し、ゲル形成の評価を行なった。
また脂質ペプチド溶液（１）、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加試料及びトロンビン添加試料について、それぞれ逆相ＨＰＬＣを用いて分析した。なお、使用したＨＰＬＣ条件を以下に示す。
【００７９】
【表１】
【００８０】
［ＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：目視評価結果］
酵素添加による溶液の挙動変化を図１（脂質ペプチド溶液（１）のみ、ＢＳＡ添加、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加）、図２（トロンビン添加）に示す。
図１に示すように、ＢＳＡを添加した試料（図１：Ｂ）は１２時間経過後も透明な溶液を維持し、ゲル形成は認められなかった。
一方、ＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料は、１μｇ／ｍｌ以上のＭＭＰ−ＶＩＩ濃度でゲル形成が確認された。また図１に示すように、５μｇ／ｍｌの添加では９０分後（図１：Ｃ）、２μｇ／ｍｌ（図１：Ｄ）の添加では２時間後に、ぞれぞれゲル形成が確認された。
また、ＭＭＰ−ＶＩＩの代わりにトロンビンを添加した試料は２４時間後も変化は見られず、ゲル形成は認められなかった（図２）。
【００８１】
［ＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：逆相ＨＰＬＣによる評価結果］
上述の、ＭＭＰ−ＶＩＩを２μｇ／ｍｌ添加した後、２時間経過後の試料について測定したＨＰＬＣチャートを図３に、及びトロンビン添加後２４時間経過後の試料について測定したＨＰＬＣチャートを図４にそれぞれ示す。
図３に示すように、脂質ペプチド溶液（１）においては保持時間１３．７分にピークが観測されたが、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加後の試料においては、さらに保持時間１６．７分に新たなピークが観測された。
この新たに確認された１６．７分の画分を分取し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを用いて分析したところ、８８９．２にピークが観測された（図５）。この結果は、実施例１で合成した脂質ペプチドが、ＭＭＰ−ＶＩＩによりＧｌｙ−Ｌｅｕ間で加水分解されていることを示すもの、すなわち、パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙが存在していることを示すものであった。
一方、図４に示すように、トロンビンを添加した試料は、脂質ペプチド溶液（１）における保持時間１３．７分のピークの他にピークが確認されず、加水分解が進行していないことを示すことがＨＰＬＣにおいても確認された。
以上のとおり、実施例１で合成した脂質ペプチドは、ＭＭＰ−ＶＩＩに対して選択的に応答することが確認された。
【００８２】
［ＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：モルフォロジー観察結果］
上述の［試験手順］に倣い、脂質ペプチド溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを１μｇ／ｍｌ添加して５時間経過後、カーボングリッドをディップし、少量の脱イオン水で表面を洗浄した。その後、酸化ウラニルによる後染め処理を行なった。一晩以上真空乾燥させた後、透過型電子顕微鏡観察を行った。
また、ＭＭＰ−ＶＩＩを添加していない脂質ペプチド溶液（１）をカーボングリッド上にキャストし、一分間放置した後、少量の脱イオン水で表面を洗浄した。同様に酸化ウラニルによる後染め処理を行ない、一晩以上真空乾燥させた後、透過型電子顕微鏡観察を行った。
得られた結果を図６に示す。これによると、脂質ペプチド溶液（１）（図６：Ａ）では球状の構造体が観察され、液中で球状会合体形成していることが示唆される結果となった。その大きさは約１０ｍｍ弱であった。
一方、ＭＭＰ−ＶＩＩ添加後においては（図６：Ｂ）、ファイバー構造とそのバンドル化が観察された。この結果はＭＭＰ−ＶＩＩ添加後に形成されるゲルが、ファイバーの形成とバンドル化による架橋点の形成におって引き起こされることを示唆するものであった。
【００８３】
実施例４：酵素阻害条件下におけるＭＭＰ−ＶＩＩ応答性の評価
実施例１で製造したパルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の０．２質量％（１．５ｍ
Ｍ）の脂質ペプチド濃度の溶液となるように、０．２ｍＭのＭＭＰインヒビター−ＩＩ（Ｎ−ヒドロキシ−１，３−ジ−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニル）−５，５−ジメチル−［１，３］−ピペラジン−２−カルボキサミド）を含む５０ｍＭ トリス塩酸バッファー緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ
ＮａＣｌ）を加え、６０℃以上に加熱して脂質ペプチドを溶解し、その後３０分放冷し脂質ペプチド溶液（２）を調製した。阻害剤を溶解させるために４％ＤＭＳＯを添加した。
また、０．２ｍＭのＭＭＰインヒビター−ＩＩを含まない脂質ペプチド溶液（３）（ＤＭＳＯは含む）も同様に調製した。
この溶液（２）及び（３）に、２μｇ／ｍｌ（約０．１μＭ）の濃度でＭＭＰ−ＶＩＩを添加し、軽く攪拌した。ゲル形成の評価は目視により行なった。
また各溶液について、前記表１の条件にて逆相ＨＰＬＣを用い、分析した。
【００８４】
［酵素阻害条件下におけるＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：目視評価結果］
酵素添加による溶液の挙動変化を図７に示す。
図７に示すように、ＤＭＳＯ存在下においてもＭＭＰ−ＶＩＩの添加によるゲル形成が確認された（図７：Ｂ）
一方、ＭＭＰインヒビター−ＩＩを添加した試料（図７：Ａ）はＭＭＰ−ＶＩＩの添加１２時間経過後も透明な溶液を維持し、ゲル形成は認められなかった。
【００８５】
［酵素阻害条件下におけるＭＭＰ−ＶＩＩ応答性：逆相ＨＰＬＣによる評価結果］
上述の、脂質ペプチド溶液（２）及び（３）に、ＭＭＰ−ＶＩＩを２μｇ／ｍｌ添加した各試料について測定したＨＰＬＣチャートを図８に示す。
図７に示すように、ＭＭＰインヒビター−ＩＩを添加後１２時間経過した試料（図８：Ａ）においては、脂質ペプチド由来のピークに加えて、保持時間１６．０分及び１７．１分にピークが観測されたが、実施例３で確認された１６．７分のピークは観測されなかった。なお、保持時間１６．０分及び１７．１分にピークはＭＭＰインヒビター−ＩＩ由来のピークである。
すなわち、酵素阻害剤の添加により、実施例１で合成した脂質ペプチドの加水分解反応が抑制されることが確認された。
【００８６】
実施例５：Ｎ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2を用いたコラゲナーゼ応答性の評価
［試験手順］
実施例２で製造したＮ−パルミトイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ2の０．２質量％（１．５ｍＭ）
の脂質ペプチド濃度の溶液となるように、５０ｍＭ トリス塩酸バッファー緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ2）を加え、６０℃以上に加熱して脂質ペプチドを溶解し、その後３０分放
冷し脂質ペプチド溶液（４）を調製した。
この溶液（４）に、０．５μｇ／ｍｌ濃度でコラゲナーゼ（分子量：６８ｋＤ〜１２５ｋＤ）を添加し、軽く攪拌した。ゲル形成の評価は目視により行なった。
また、コラゲナーゼ添加前後の各溶液について、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを測定した。
【００８７】
［コラゲナーゼ応答性評価結果］
酵素添加による溶液の挙動変化を図９に、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳのスペクトル測定結果を図１０に示す。
図９に示すように、コラゲナーゼを添加し、３０分間経過した試料（図９：Ｂ）においてゲル形成が確認された。
また図１０に示すように、コラゲナーゼ添加前（図１０：Ａ）のスペクトルでは、１３０１．０にピークが観測されたが、コラゲナーゼ添加後３０分間経過後（図１０：Ｂ）には、さらに９２４．９にピークが観測された。この結果は、実施例２で合成した脂質ペプチドが、コラゲナーゼによってＡｌａ−Ｓｅｒ間で加水分解されていることを示すものであった。
以上のとおり、実施例２で合成した脂質ペプチドは、コラゲナーゼに対して応答することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００８８】
本発明の脂質ペプチドは、水溶液中では溶解状態にあるか、或いは球状会合体を形成して分散して安定したゾル状態となる。この溶液中にペプチダーゼを添加すると、本発明の脂質ペプチドはペプチダーゼにより加水分解を受ける。加水分解を受けた脂質ペプチドは自己集合化して二次元のファイバー状、更には三次元網目構造のヒドロゲルを形成する。
従って本発明の脂質ペプチドは、患部や創傷部位のぺプチダーゼに選択的に反応して、ヒドロゲルを形成することにより、患部の外気や雑菌からの保護や保湿が可能となり、即ち創傷被覆剤や癒着防止膜として使用することができる。
【００８９】
さらに本発明の脂質ペプチドを含む溶液に薬剤を添加し、この薬剤入り溶液を患部に塗布（或いは噴霧）すると、患部で薬剤を取り込んだゲルを形成することが可能となるため
、長時間薬剤を患部に滞留させ、ゲルから患部へ薬剤を徐放することが可能になる。すなわち本発明の脂質ペプチドは薬物伝達システムの基材としての使用が期待できる。
特に、本発明の脂質ペプチド内に、癌細胞によって多く誘導されるＭＭＰ−ＶＩＩに選択的に応答する部位（例えばＧｌｙ−Ｌｅｕ）を組み込むことにより、癌組織を認識して癌組織にのみ薬剤を長時間滞留させて徐放させるゲルの形成が可能となることから、安全かつ高い癌組織選択的な薬物伝達システムを構築することが可能になる。
【００９０】
さらに本発明の脂質ペプチドは、疾患部位や癌組織のマーカーとなるぺプチダーゼに反応してゾルからゲルへ変換することから、高価な測定・分析機器を必要としない、簡便且つ視的に判断できる検査・診断用試薬の基材としての用途に好適である。
すなわち、特定疾患のマーカーとなり得るプロテアーゼによって切断されるペプチド結合を組み込んだ脂質ペプチドを調製することにより、この脂質ペプチドのゾル／ゲル状態を判断するだけで、疾患マーカーとなるプロテアーゼの有無が目視で確認できる検査・診断のシステムが構築できる。
【００９１】
さらに本発明の脂質ペプチドの酵素切断部位に、創薬研究においてターゲットとなるぺプチダーゼによって加水分解されるペプチドを導入しておくことにより、ゾル／ゲル変換を目視で評価できるぺプチダーゼ阻害剤又は活性剤の探索システムとして、すなわち、創薬研究用試薬の基材としての活用が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は脂質ペプチド溶液（１）（図１Ａ）、並びに該溶液（１）にＢＳＡを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、１２時間経過後、図１Ｂ）、ＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（５μｇ／ｍｌ添加、９０分経過後、図１Ｃ；２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図１Ｄ）における、溶液／ゲル状態を示す図である。
【図２】図２は脂質ペプチド溶液（１）にトロンビンを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２４時間経過後）における溶液／ゲル状態を示す図である。
【図３】図３は脂質ペプチド溶液（１）（図３Ａ）及び該溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図３Ｂ）を用いて測定したＨＰＬＣチャートを示す図である。
【図４】図４は脂質ペプチド溶液（１）（図４Ａ）及び該溶液（１）にトロンビンを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２４時間経過後、図４Ｂ）を用いて測定したＨＰＬＣチャートを示す図である。
【図５】図５は脂質ペプチド溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料におけるＨＰＬＣの１６．７分の画分を用いて測定したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図６】図６は脂質ペプチド溶液（１）（図６Ａ）及び該溶液（１）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（１μｇ／ｍｌ添加、５時間経過後、図６Ｂ）を用いて撮影した透過型電子顕微鏡観察結果を示す図である。
【図７】図７は脂質ペプチド溶液（２）（ＤＭＳＯ＋ＭＭＰインヒビター−ＩＩ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（ＭＭＰインヒビター：０．２ｍＭ、ＭＭＰ−ＶＩＩ：２μｇ／ｍｌ添加、１２時間経過後、図７Ａ）、並びに、脂質ペプチド溶液（３）（ＤＭＳＯ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図７Ｂ）における、溶液／ゲル状態を示す図である。
【図８】図８は脂質ペプチド溶液（２）（ＤＭＳＯ＋ＭＭＰインヒビター−ＩＩ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（ＭＭＰインヒビター：０．２ｍＭ、ＭＭＰ−ＶＩＩ：２μｇ／ｍｌ添加、１２時間経過後、図８Ａ）、並びに、脂質ペプチド溶液（３）（ＤＭＳＯ存在下）にＭＭＰ−ＶＩＩを添加した試料（２μｇ／ｍｌ添加、２時間経過後、図８Ｂ）を用いて測定したＨＰＬＣチャートを示す図である。
【図９】図９は脂質ペプチド溶液（４）（図９Ａ）及び該溶液（４）にコラゲナーゼを添加した試料（０．５μｇ／ｍｌ、３０分間経過後）における、溶液／ゲル状態を示す図である。
【図１０】図１０は脂質ペプチド溶液（４）（図１０Ａ）及び該溶液（４）にコラゲナーゼを添加した試料（０．５μｇ／ｍｌ添加、３０分間経過後、図１０Ｂ）を用いて測定測定したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質ペプチドゲル化促進部位にスペーサー（１）を介して酵素切断部位が結合し、さらに該酵素切断部位にスペーサー（２）を介して親水性ペプチド部位が結合した式（１）で表される構造を有する脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩であって、
【化１】
前記脂質ペプチドゲル化促進部位は、式（２）：
【化２】
（式（２）中、
Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し
、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、又は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
且つ、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表す。）で表される部位であり、
前記スペーサー（１）は、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸１〜２個から形成される部位であり、
前記酵素切断部位は、ぺプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む、２〜６個のアミノ酸から形成される部位であり、
スペーサー（２）は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌからなる群から選択されるアミノ酸０〜２個から形成される部位であり、
前記親水性ペプチド部位は、親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に−ＯＨ基、−ＯＭｅ基、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基（Ｍｅはメチル基を表す
。）を有してなる部位である、
脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項２】
前記酵素切断部位が、スペーサー（１）との結合側のアミノ酸がプロリン（Ｐｒｏ）である、請求項１記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項３】
前記親水性ペプチド部位が、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）及びアルギニン（Ａｒｇ）からなる群から選択される親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基、又は−ＮＭｅ2基を有してな
る部位である、請求項１又は２記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項４】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基を表し、
Ｒ5は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾール基又はイミダゾール基を
表す、請求項１乃至３のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項５】
前記酵素切断部位は、スペーサー（１）との結合側からみて（Ｐｒｏ）−Ｘ−Ｙ−又は（Ｐｒｏ）−Ｚ−Ｘ−Ｙ−のアミノ酸配列を含み、ここでＸ−Ｙは、マトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモトリプシンから選択されるペプチダーゼによって加水分解されるジペプチドを表し、ＺはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸を表す、請求項１乃至４のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項６】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、メチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基又は第二ブチル基を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表す、
請求項１乃至５のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項７】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表し、
前記スペーサー（１）が、１個のアミノ酸からなる部位である場合にはＧｌｙ又はＡｌａであり、２個のアミノ酸から形成される部位である場合には、脂質ペプチドゲル化促進部位との結合側からみてＧｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｇｌｙ及びＩｌｅ−Ａｌａからなる群から選択されるものであり、
前記スペーサー（２）は、直接結合又はＧｌｙ若しくはＡｌａの１個のアミノ酸であり、であり、
前記親水性ペプチド部位が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ及びＡｒｇからなる群から選択される親水性アミノ酸２個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、請求項１乃至６のうち何れか一項に記載の脂質ペプ
チド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項８】
前記親水性ペプチド部位が、スペーサー（２）との結合側からみて、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｇｌｎ、Ａｒｇ−Ａｓｎ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｓｎ−Ａｒｇ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ及びＡｓｎ−Ｌｙｓからなる群から選択されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、請求項１乃
至７のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項９】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5はイミダゾールメチル基を表す、請求項１乃至８のうち何れか一項に記載の脂質ペプ
チド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項１０】
請求項２記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩をペプチダーゼによって加水分解することにより形成される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項１１】
式（３）：
【化３】
（式中、Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族
基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、若しくは−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表
すか、又は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、その際Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つＲ2乃至Ｒ5のうちの少なくとも一つ
は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表し、
ｍは３乃至８を表す。）
で表される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項１２】
水性媒体中で請求項１乃至請求項９のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成される球状会合体。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項９のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は請求項１２の球状会合体と水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゾル。
【請求項１４】
請求項１乃至９のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩よりなる酵素応答性ゲル化物質。
【請求項１５】
請求項１乃至９のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩を水溶液又はアルコール水溶液に溶解または分散させて得られる溶液、分散液又はヒドロゾルが、ペプチダーゼの添加によって、前記脂質ペプチドの前記酵素切断部位が加水分解されて得られるヒドロゲル。
【請求項１６】
請求項１０に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は請求項１１に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成されるファイバー。
【請求項１７】
請求項１０に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、請求項１１に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩又は請求項１６に記載のファイバーと水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゲル。
【請求項１】
脂質ペプチドゲル化促進部位にスペーサー（１）を介して酵素切断部位が結合し、さらに該酵素切断部位にスペーサー（２）を介して親水性ペプチド部位が結合した式（１）で表される構造を有する脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩であって、
【化１】
前記脂質ペプチドゲル化促進部位は、式（２）：
【化２】
（式（２）中、
Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し
、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、又は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
且つ、Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表す。）で表される部位であり、
前記スペーサー（１）は、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸１〜２個から形成される部位であり、
前記酵素切断部位は、ぺプチダーゼにより加水分解を受けるジペプチドを含む、２〜６個のアミノ酸から形成される部位であり、
スペーサー（２）は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌからなる群から選択されるアミノ酸０〜２個から形成される部位であり、
前記親水性ペプチド部位は、親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に−ＯＨ基、−ＯＭｅ基、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基（Ｍｅはメチル基を表す
。）を有してなる部位である、
脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項２】
前記酵素切断部位が、スペーサー（１）との結合側のアミノ酸がプロリン（Ｐｒｏ）である、請求項１記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項３】
前記親水性ペプチド部位が、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）及びアルギニン（Ａｒｇ）からなる群から選択される親水性アミノ酸２〜３個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基、又は−ＮＭｅ2基を有してな
る部位である、請求項１又は２記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項４】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基を表し、
Ｒ5は−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、ｎは１乃至４の数を表し、Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾール基又はイミダゾール基を
表す、請求項１乃至３のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項５】
前記酵素切断部位は、スペーサー（１）との結合側からみて（Ｐｒｏ）−Ｘ−Ｙ−又は（Ｐｒｏ）−Ｚ−Ｘ−Ｙ−のアミノ酸配列を含み、ここでＸ−Ｙは、マトリックスメタロプロテアーゼ、コラゲナーゼ、トリプシン及びキモトリプシンから選択されるペプチダーゼによって加水分解されるジペプチドを表し、ＺはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸を表す、請求項１乃至４のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項６】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子、メチル基、ｉ−プロピル基、ｉ−ブチル基又は第二ブチル基を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表す、
請求項１乃至５のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項７】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5は４−アミノブチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基、イミダ
ゾールメチル基又は３−インドールメチル基を表し、
前記スペーサー（１）が、１個のアミノ酸からなる部位である場合にはＧｌｙ又はＡｌａであり、２個のアミノ酸から形成される部位である場合には、脂質ペプチドゲル化促進部位との結合側からみてＧｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｇｌｙ及びＩｌｅ−Ａｌａからなる群から選択されるものであり、
前記スペーサー（２）は、直接結合又はＧｌｙ若しくはＡｌａの１個のアミノ酸であり、であり、
前記親水性ペプチド部位が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ及びＡｒｇからなる群から選択される親水性アミノ酸２個から形成されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、請求項１乃至６のうち何れか一項に記載の脂質ペプ
チド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項８】
前記親水性ペプチド部位が、スペーサー（２）との結合側からみて、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｇｌｎ、Ａｒｇ−Ａｓｎ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｓｎ−Ａｒｇ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ及びＡｓｎ−Ｌｙｓからなる群から選択されるペプチドの末端に、−ＮＨ基、−ＮＨＭｅ基又は−ＮＭｅ2基を有してなる部位である、請求項１乃
至７のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項９】
前記式（２）で表される脂質ペプチドゲル化促進部位において、
Ｒ1は炭素原子数１３乃至１９の直鎖状脂肪族基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ4は夫々互いに独立して、水素原子を表し
Ｒ5はイミダゾールメチル基を表す、請求項１乃至８のうち何れか一項に記載の脂質ペプ
チド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項１０】
請求項２記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩をペプチダーゼによって加水分解することにより形成される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項１１】
式（３）：
【化３】
（式中、Ｒ1は不飽和結合を１又は２個有し得る炭素原子数１１乃至２３の直鎖状脂肪族
基を表し、
Ｒ2乃至Ｒ5は夫々互いに独立して、水素原子、炭素原子数１又は２の分枝鎖を有し得る炭素原子数１乃至４のアルキル基、フェニルメチル基、若しくは−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表
すか、又は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、その際Ｒ2乃至Ｒ5のうちの一つ又は二つが−（ＣＨ2）ｎ−Ａ基を表し、且つＲ2乃至Ｒ5のうちの少なくとも一つ
は隣接する−ＮＨ−基と一緒になって複素環を形成し、
ｎは１乃至４の数を表し、
Ａはアミノ基、グアニジノ基、−ＣＯＮＨ2基、ピロール基、イミダゾール基、ピラゾー
ル基又はイミダゾール基を表し、
ｍは３乃至８を表す。）
で表される脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩。
【請求項１２】
水性媒体中で請求項１乃至請求項９のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成される球状会合体。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項９のうちいずれか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は請求項１２の球状会合体と水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゾル。
【請求項１４】
請求項１乃至９のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩よりなる酵素応答性ゲル化物質。
【請求項１５】
請求項１乃至９のうち何れか一項に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩を水溶液又はアルコール水溶液に溶解または分散させて得られる溶液、分散液又はヒドロゾルが、ペプチダーゼの添加によって、前記脂質ペプチドの前記酵素切断部位が加水分解されて得られるヒドロゲル。
【請求項１６】
請求項１０に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、又は請求項１１に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩の自己集合化により形成されるファイバー。
【請求項１７】
請求項１０に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩、請求項１１に記載の脂質ペプチド及びその薬学的に使用可能な塩又は請求項１６に記載のファイバーと水溶液又はアルコール水溶液より成るヒドロゲル。
【図３】
【図４】
【図５】
【図８】
【図１０】
【図１】
【図２】
【図６】
【図７】
【図９】
【図４】
【図５】
【図８】
【図１０】
【図１】
【図２】
【図６】
【図７】
【図９】
【公開番号】特開２０１０−４７５３４（Ｐ２０１０−４７５３４Ａ）
【公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２１４２３９（Ｐ２００８−２１４２３９）
【出願日】平成２０年８月２２日（２００８．８．２２）
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【出願人】（０００００３９８６）日産化学工業株式会社 (510)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月２２日（２００８．８．２２）
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【出願人】（０００００３９８６）日産化学工業株式会社 (510)
【Ｆターム（参考）】
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