鋳型ナノ複合体
本開示は、鋳型ナノ複合体を含む組成物およびそれらの使用方法に関する。本発明により、例えば、各ナノ複合体が、規定された構造を有し、単層中の複数の架橋生体分子、その上で構造が構築される鋳型を提供する表面を含み、前記表面は、前記構造が規定された後に任意で少なくとも部分的に除去される、複数のナノ複合体が提供される。本発明によってまた、第１の生体分子を表面と接触させることにより前記第１の生体分子を活性化する工程を含み、前記活性化により、前記第１の生体分子が第２の生体分子に架橋する、構造化ナノ複合体を架橋する方法もまた提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
各ナノ複合体が、規定された構造を有し、単層中の複数の架橋生体分子、その上で構造が構築される鋳型を提供する表面を含み、前記表面は、前記構造が規定された後に任意で少なくとも部分的に除去される、複数のナノ複合体。
【請求項２】
前記表面はナノ粒子である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ナノ粒子は球、ロッドおよび角柱からなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ナノ粒子は金属である、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ナノ粒子はコロイド金属である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ナノ粒子は、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、白金ナノ粒子、アルミニウムナノ粒子、パラジウムナノ粒子、銅ナノ粒子、コバルトナノ粒子、インジウムナノ粒子、およびニッケルナノ粒子からなる群より選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記複数の生体分子中の各生体分子は同じである、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記複数の生体分子中の生体分子の少なくとも２つは異なる、請求項１〜６のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項９】
前記生体分子は、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、リン脂質、オリゴ糖、小分子、治療薬、コントラスト剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記複数の生体分子は単分散である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記単分散性は、前記複数のナノ複合体の直径において約２５％の変動があることである、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記単分散性は、前記複数のナノ複合体の直径において約１０％の変動があることである、請求項１〜１０のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１３】
前記単分散性は、前記複数のナノ複合体の直径において約１％の変動があることである、請求項１〜１０のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１４】
前記表面上の架橋生体分子の密度は、前記生体分子間の協同的挙動のために十分である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記表面上の架橋生体分子の密度は、約２ｐｍｏｌ／ｃｍ２である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記表面上の架橋生体分子の密度は、約１００ｐｍｏｌ／ｃｍ２である、請求項１〜１４のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１７】
前記複数のナノ複合体はさらに、追加の作用物質を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記追加の作用物質は、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、リン脂質、オリゴ糖、金属錯体、小分子、治療薬、コントラスト剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記追加の作用物質は、前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と結合される、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記追加の作用物質は、ハイブリダイゼーションにより前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と結合される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記追加の作用物質は、前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と共有結合される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記追加の作用物質は、前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と非共有結合される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記追加の作用物質は、前記複数のナノ複合体の少なくとも１つの架橋生体分子中に捕捉される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記複数のナノ複合体における少なくとも１つのナノ複合体は、前記表面がない場合中空である、前記請求項のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項２５】
前記複数のナノ複合体における大多数のナノ複合体は、前記表面がない場合中空である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記複数のナノ複合体における実質的に全てのナノ複合体は、前記表面がない場合中空である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
追加の作用物質は、そうでなければ中空であるナノ複合体に封入される、請求項２４〜２６のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項２８】
第１の生体分子を表面と接触させることにより前記第１の生体分子を活性化する工程を含み、前記活性化により、前記第１の生体分子が第２の生体分子に架橋する、構造化ナノ複合体を架橋する方法。
【請求項２９】
前記表面は、前記構造が構築される鋳型を提供する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記表面はナノ粒子である、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ナノ粒子は球、ロッドおよび角柱からなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ナノ粒子は金属である、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ナノ粒子はコロイド金属である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ナノ粒子は、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、白金ナノ粒子、アルミニウムナノ粒子、パラジウムナノ粒子、銅ナノ粒子、コバルトナノ粒子、インジウムナノ粒子、およびニッケルナノ粒子からなる群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記表面は、架橋後少なくとも部分的に除去される、請求項２８〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３６】
前記第１の生体分子および前記第２の生体分子は、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、リン脂質、オリゴ糖、小分子、治療薬、コントラスト剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２８〜３５のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３７】
前記第１の生体分子および前記第２の生体分子は少なくとも１つのアルキン部分を含む、請求項２８〜３６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３８】
前記第１の生体分子および前記第２の生体分子はそれぞれ約１０のアルキン部分を含む、請求項２８〜３７のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３９】
前記アルキン部分は、前記表面との接触で活性化される、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記活性化により、前記アルキンは求核試薬の影響を受けやすくなる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記求核試薬は、水、アルコール、アミン、チオール、エステル、チオエステル、尿素、アミド、アルデヒド、カーボネート、カルバメート、分子内ヒドロキシル基、メチルエーテル基、ベンジルエーテル基、カルボン酸、ケトン、イミン、フェノール、２−ピロリドン、インドール、酢酸、β−ケトエステルおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記活性化は、前記第１の生体分子の前記第２の生体分子への架橋を引き起こす、請求項３９〜４１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４３】
前記第１の生体分子はポリヌクレオチドである、請求項２８〜４２のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４４】
前記第２の生体分子はポリヌクレオチドである、請求項２８〜４２のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４５】
前記ポリヌクレオチドはＤＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ポリヌクレオチドは約５〜約１００ヌクレオチド長、約５〜約９０ヌクレオチド長、約５〜約８０ヌクレオチド長、約５〜約７０ヌクレオチド長、約５〜約６０ヌクレオチド長、約５〜約５０ヌクレオチド長、約５〜約４５ヌクレオチド長、約５〜約４０ヌクレオチド長、約５〜約３５ヌクレオチド長、約５〜約３０ヌクレオチド長、約５〜約２５ヌクレオチド長、約５〜約２０ヌクレオチド長、約５〜約１５ヌクレオチド長、または約５〜約１０ヌクレオチド長である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記追加の作用物質は前記第１の生体分子および前記第２の生体分子に、前記活性化工程中に添加される、請求項１７〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４８】
前記追加の作用物質は、前記ナノ複合体の形成後、前記表面の少なくとも部分的な除去前に、前記ナノ複合体に添加される、請求項１７〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４９】
前記追加の作用物質は、前記ナノ複合体の形成後、前記表面の少なくとも部分的な除去後に、前記ナノ複合体に添加される、請求項１７〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項５０】
表面を含む多価ナノ複合体を含む組成物であって、前記ナノ複合体はさらに、複数のポリヌクレオチドを含み、前記複数のポリヌクレオチドの各々のスペーサ端は、修飾され、前記複数のポリヌクレオチドを化学薬品と接触させると、前記複数のポリヌクレオチドは架橋し、架橋後、前記表面は任意で少なくとも部分的に除去される、組成物。
【請求項５１】
前記修飾は、アミン、アミド、アルコール、エステル、アルデヒド、ケトン、チオール、ジスルフィド、カルボン酸、フェノール、イミダゾール、ヒドラジン、ヒドラゾン、アジドおよびアルキンからなる群より選択される、前記請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記修飾は、アミン修飾ヌクレオチドである、前記請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記アミン修飾ホスホラミダイトヌクレオチドは、アミン修飾チミジンホスホラミダイト（ＴＮ）である、前記請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
化学薬品は、ジスクシンイミジルグルタラート、スベリン酸ジスクシンイミジル、ビス［スルホスクシンイミジル］スベラート、トリス−スクシンイミジルアミノトリアセテート、スクシンイミジル４−ヒドラジノニコチネートアセトンヒドラゾン、スクシンイミジル４−ヒドラジドテレフタレート塩酸塩、スクシンイミジル４−ホルミルベンゾエート、ジチオビス［スクシンイミジルプロピオネート］、３，３’−ジチオビス［スルホスクシンイミジルプロピオネート］、酒石酸ジスクシンイミジル、ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン、エチレングリコールビス［スクシンイミジルスクシネート］、エチレングリコールビス［スルホスクシンイミジルスクシネート］、アジプイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、ピメルイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、スベルイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、β−［トリス（ヒドロキシメチル）ホスフィノ］プロピオン酸、ビス−マレイミドエタン、１，４−ビスマレイミドブタン、ビスマレイミドヘキサン、トリス［２−マレイミドエチル］アミン、１，８−ビス−マレイミド−ジエチレングリコール、１，１１−ビス−マレイミド−トリエチレングリコール、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン、ジチオビスマレイミドエタン、１，４−ジ−［３’−（２’−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ブタン、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン、ビス［ｂ−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド、Ｎ−（ａ−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル、Ｎ−［β−マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−［ｇ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−［ｇ−マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、Ｎ−ｅ−マレイミドカプロイルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−ｅ−マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、スクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチラート、スルホスクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチラート、スクシンイミジル−６−［β−マレイミドプロピオンアミド］ヘキサノエート、スクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシ−［６−アミドカプロエート］、Ｎ−［ｋ−マレイミドウンデカノイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート、スクシンイミジル６−（３−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート、４−スクシンイミジルオキシカルボニル−メチル−ａ−［２−ピリジルジチオ］トルエン、４−スルホスクシンイミジル−６−メチル−ａ−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート）、ヨード酢酸Ｎ−スクシンイミジル、スクシンイミジル３−［ブロモアセトアミド］プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、Ｎ−スルホスクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート、スルホスクシンイミジル［４−アジドサリチルアミド］−ヘキサノエート、Ｎ−スクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート、Ｎ−スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート、スルホスクシンイミジル−（パーフルオロアジドベンズアミド）エチル−１，３’−ジチオプロプリオネート、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）エチル−１，３’−プロプリオネート、スルホスクシンイミジル２−［７−アミノ−４−メチルクマリン−３−アセトアミド］エチル−１，３’ジチオプロピオネート、スクシンイミジル４，４’−アジペンタノエート、スクシンイミジル６−（４，４’−アジペンタンアミド）ヘキサノエート、スクシンイミジル２−（［４，４’−アジペンタンアミド］エチル）−１，３’−ジチオプロプリオネート、スルホスクシンイミジル４，４’−アジペンタノエート、スルホスクシンイミジル６−（４，４’−アジペンタンアミド）ヘキサノエート、スルホスクシンイミジル２−（［４，４’−アジペンタンアミド］エチル）−１，３’−ジチオプロプリオネート、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド、Ｎ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド，トリフルオロ酢酸塩、［Ｎ−ｅ−マレイミドカプロン酸］ヒドラジド，トリフルオロ酢酸塩、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド塩酸塩、Ｎ−［ｋ−マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−［ｐ−マレイミドフェニル］イソシアネートおよびスクシンイミジル−［４−（ソラレン−８−イルオキシ）］−ブチラートからなる群より選択される、前記請求項５０〜５３のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項５５】
前記表面はナノ粒子を含む、請求項５０〜５４のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項５６】
前記ナノ粒子は球、ロッドおよび角柱からなる群より選択される、請求項５５記載の組成物。
【請求項５７】
前記ナノ粒子は金属である、請求項５５または５６記載の組成物。
【請求項５８】
前記ナノ粒子はコロイド金属である、請求項５７記載の組成物。
【請求項５９】
前記ナノ粒子は、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、白金ナノ粒子、アルミニウムナノ粒子、パラジウムナノ粒子、銅ナノ粒子、コバルトナノ粒子、インジウムナノ粒子、およびニッケルナノ粒子からなる群より選択される、請求項５８記載の組成物。
【請求項６０】
前記複数のポリヌクレオチドはＤＮＡポリヌクレオチド、ＲＮＡポリヌクレオチドまたはそれらの組み合わせを含む、請求項５０〜５９のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項６１】
前記ポリヌクレオチドは約５〜約１００ヌクレオチド長、約５〜約９０ヌクレオチド長、約５〜約８０ヌクレオチド長、約５〜約７０ヌクレオチド長、約５〜約６０ヌクレオチド長、約５〜約５０ヌクレオチド長、約５〜約４５ヌクレオチド長、約５〜約４０ヌクレオチド長、約５〜約３５ヌクレオチド長、約５〜約３０ヌクレオチド長、約５〜約２５ヌクレオチド長、約５〜約２０ヌクレオチド長、約５〜約１５ヌクレオチド長、または約５〜約１０ヌクレオチド長である、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
請求項２８に記載の方法を用いる、請求項１に記載のナノ複合体の製造方法。
【請求項６３】
標的分子を請求項１〜２８または請求項５０〜６１のいずれか一つに記載の組成物と接触させることを含み、前記標的分子と前記組成物の接触で、検出可能な変化が得られる、標的分子を検出する方法。
【請求項６４】
前記検出はインビトロである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記検出はインビボである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
標的ポリヌクレオチドを、請求項１〜２８または請求項５０〜６１のいずれか一つに記載の組成物と、遺伝子産物の発現を阻止するのに十分な条件下で接触させることを含む、標的ポリヌクレオチドによりコードされる遺伝子産物の発現を阻止する方法。
【請求項６７】
前記遺伝子産物の発現はインビボで阻止される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記遺伝子産物の発現はインビトロで阻止される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記遺伝子産物の発現は、少なくとも約５％阻止される、請求項６６〜６８のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１】
各ナノ複合体が、規定された構造を有し、単層中の複数の架橋生体分子、その上で構造が構築される鋳型を提供する表面を含み、前記表面は、前記構造が規定された後に任意で少なくとも部分的に除去される、複数のナノ複合体。
【請求項２】
前記表面はナノ粒子である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ナノ粒子は球、ロッドおよび角柱からなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ナノ粒子は金属である、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ナノ粒子はコロイド金属である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ナノ粒子は、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、白金ナノ粒子、アルミニウムナノ粒子、パラジウムナノ粒子、銅ナノ粒子、コバルトナノ粒子、インジウムナノ粒子、およびニッケルナノ粒子からなる群より選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記複数の生体分子中の各生体分子は同じである、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記複数の生体分子中の生体分子の少なくとも２つは異なる、請求項１〜６のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項９】
前記生体分子は、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、リン脂質、オリゴ糖、小分子、治療薬、コントラスト剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記複数の生体分子は単分散である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記単分散性は、前記複数のナノ複合体の直径において約２５％の変動があることである、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記単分散性は、前記複数のナノ複合体の直径において約１０％の変動があることである、請求項１〜１０のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１３】
前記単分散性は、前記複数のナノ複合体の直径において約１％の変動があることである、請求項１〜１０のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１４】
前記表面上の架橋生体分子の密度は、前記生体分子間の協同的挙動のために十分である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記表面上の架橋生体分子の密度は、約２ｐｍｏｌ／ｃｍ２である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記表面上の架橋生体分子の密度は、約１００ｐｍｏｌ／ｃｍ２である、請求項１〜１４のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１７】
前記複数のナノ複合体はさらに、追加の作用物質を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記追加の作用物質は、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、リン脂質、オリゴ糖、金属錯体、小分子、治療薬、コントラスト剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記追加の作用物質は、前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と結合される、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記追加の作用物質は、ハイブリダイゼーションにより前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と結合される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記追加の作用物質は、前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と共有結合される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記追加の作用物質は、前記複数の生体分子の少なくとも１つの生体分子と非共有結合される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記追加の作用物質は、前記複数のナノ複合体の少なくとも１つの架橋生体分子中に捕捉される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記複数のナノ複合体における少なくとも１つのナノ複合体は、前記表面がない場合中空である、前記請求項のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項２５】
前記複数のナノ複合体における大多数のナノ複合体は、前記表面がない場合中空である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記複数のナノ複合体における実質的に全てのナノ複合体は、前記表面がない場合中空である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
追加の作用物質は、そうでなければ中空であるナノ複合体に封入される、請求項２４〜２６のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項２８】
第１の生体分子を表面と接触させることにより前記第１の生体分子を活性化する工程を含み、前記活性化により、前記第１の生体分子が第２の生体分子に架橋する、構造化ナノ複合体を架橋する方法。
【請求項２９】
前記表面は、前記構造が構築される鋳型を提供する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記表面はナノ粒子である、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ナノ粒子は球、ロッドおよび角柱からなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ナノ粒子は金属である、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ナノ粒子はコロイド金属である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ナノ粒子は、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、白金ナノ粒子、アルミニウムナノ粒子、パラジウムナノ粒子、銅ナノ粒子、コバルトナノ粒子、インジウムナノ粒子、およびニッケルナノ粒子からなる群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記表面は、架橋後少なくとも部分的に除去される、請求項２８〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３６】
前記第１の生体分子および前記第２の生体分子は、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、リン脂質、オリゴ糖、小分子、治療薬、コントラスト剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２８〜３５のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３７】
前記第１の生体分子および前記第２の生体分子は少なくとも１つのアルキン部分を含む、請求項２８〜３６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３８】
前記第１の生体分子および前記第２の生体分子はそれぞれ約１０のアルキン部分を含む、請求項２８〜３７のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３９】
前記アルキン部分は、前記表面との接触で活性化される、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記活性化により、前記アルキンは求核試薬の影響を受けやすくなる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記求核試薬は、水、アルコール、アミン、チオール、エステル、チオエステル、尿素、アミド、アルデヒド、カーボネート、カルバメート、分子内ヒドロキシル基、メチルエーテル基、ベンジルエーテル基、カルボン酸、ケトン、イミン、フェノール、２−ピロリドン、インドール、酢酸、β−ケトエステルおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記活性化は、前記第１の生体分子の前記第２の生体分子への架橋を引き起こす、請求項３９〜４１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４３】
前記第１の生体分子はポリヌクレオチドである、請求項２８〜４２のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４４】
前記第２の生体分子はポリヌクレオチドである、請求項２８〜４２のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４５】
前記ポリヌクレオチドはＤＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ポリヌクレオチドは約５〜約１００ヌクレオチド長、約５〜約９０ヌクレオチド長、約５〜約８０ヌクレオチド長、約５〜約７０ヌクレオチド長、約５〜約６０ヌクレオチド長、約５〜約５０ヌクレオチド長、約５〜約４５ヌクレオチド長、約５〜約４０ヌクレオチド長、約５〜約３５ヌクレオチド長、約５〜約３０ヌクレオチド長、約５〜約２５ヌクレオチド長、約５〜約２０ヌクレオチド長、約５〜約１５ヌクレオチド長、または約５〜約１０ヌクレオチド長である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記追加の作用物質は前記第１の生体分子および前記第２の生体分子に、前記活性化工程中に添加される、請求項１７〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４８】
前記追加の作用物質は、前記ナノ複合体の形成後、前記表面の少なくとも部分的な除去前に、前記ナノ複合体に添加される、請求項１７〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４９】
前記追加の作用物質は、前記ナノ複合体の形成後、前記表面の少なくとも部分的な除去後に、前記ナノ複合体に添加される、請求項１７〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項５０】
表面を含む多価ナノ複合体を含む組成物であって、前記ナノ複合体はさらに、複数のポリヌクレオチドを含み、前記複数のポリヌクレオチドの各々のスペーサ端は、修飾され、前記複数のポリヌクレオチドを化学薬品と接触させると、前記複数のポリヌクレオチドは架橋し、架橋後、前記表面は任意で少なくとも部分的に除去される、組成物。
【請求項５１】
前記修飾は、アミン、アミド、アルコール、エステル、アルデヒド、ケトン、チオール、ジスルフィド、カルボン酸、フェノール、イミダゾール、ヒドラジン、ヒドラゾン、アジドおよびアルキンからなる群より選択される、前記請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記修飾は、アミン修飾ヌクレオチドである、前記請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記アミン修飾ホスホラミダイトヌクレオチドは、アミン修飾チミジンホスホラミダイト（ＴＮ）である、前記請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
化学薬品は、ジスクシンイミジルグルタラート、スベリン酸ジスクシンイミジル、ビス［スルホスクシンイミジル］スベラート、トリス−スクシンイミジルアミノトリアセテート、スクシンイミジル４−ヒドラジノニコチネートアセトンヒドラゾン、スクシンイミジル４−ヒドラジドテレフタレート塩酸塩、スクシンイミジル４−ホルミルベンゾエート、ジチオビス［スクシンイミジルプロピオネート］、３，３’−ジチオビス［スルホスクシンイミジルプロピオネート］、酒石酸ジスクシンイミジル、ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン、エチレングリコールビス［スクシンイミジルスクシネート］、エチレングリコールビス［スルホスクシンイミジルスクシネート］、アジプイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、ピメルイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、スベルイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、β−［トリス（ヒドロキシメチル）ホスフィノ］プロピオン酸、ビス−マレイミドエタン、１，４−ビスマレイミドブタン、ビスマレイミドヘキサン、トリス［２−マレイミドエチル］アミン、１，８−ビス−マレイミド−ジエチレングリコール、１，１１−ビス−マレイミド−トリエチレングリコール、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン、ジチオビスマレイミドエタン、１，４−ジ−［３’−（２’−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ブタン、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン、ビス［ｂ−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド、Ｎ−（ａ−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル、Ｎ−［β−マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−［ｇ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−［ｇ−マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、Ｎ−ｅ−マレイミドカプロイルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−ｅ−マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、スクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチラート、スルホスクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチラート、スクシンイミジル−６−［β−マレイミドプロピオンアミド］ヘキサノエート、スクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシ−［６−アミドカプロエート］、Ｎ−［ｋ−マレイミドウンデカノイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート、スクシンイミジル６−（３−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート、４−スクシンイミジルオキシカルボニル−メチル−ａ−［２−ピリジルジチオ］トルエン、４−スルホスクシンイミジル−６−メチル−ａ−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート）、ヨード酢酸Ｎ−スクシンイミジル、スクシンイミジル３−［ブロモアセトアミド］プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、Ｎ−スルホスクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート、スルホスクシンイミジル［４−アジドサリチルアミド］−ヘキサノエート、Ｎ−スクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート、Ｎ−スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート、スルホスクシンイミジル−（パーフルオロアジドベンズアミド）エチル−１，３’−ジチオプロプリオネート、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）エチル−１，３’−プロプリオネート、スルホスクシンイミジル２−［７−アミノ−４−メチルクマリン−３−アセトアミド］エチル−１，３’ジチオプロピオネート、スクシンイミジル４，４’−アジペンタノエート、スクシンイミジル６−（４，４’−アジペンタンアミド）ヘキサノエート、スクシンイミジル２−（［４，４’−アジペンタンアミド］エチル）−１，３’−ジチオプロプリオネート、スルホスクシンイミジル４，４’−アジペンタノエート、スルホスクシンイミジル６−（４，４’−アジペンタンアミド）ヘキサノエート、スルホスクシンイミジル２−（［４，４’−アジペンタンアミド］エチル）−１，３’−ジチオプロプリオネート、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド、Ｎ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド，トリフルオロ酢酸塩、［Ｎ−ｅ−マレイミドカプロン酸］ヒドラジド，トリフルオロ酢酸塩、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド塩酸塩、Ｎ−［ｋ−マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−［ｐ−マレイミドフェニル］イソシアネートおよびスクシンイミジル−［４−（ソラレン−８−イルオキシ）］−ブチラートからなる群より選択される、前記請求項５０〜５３のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項５５】
前記表面はナノ粒子を含む、請求項５０〜５４のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項５６】
前記ナノ粒子は球、ロッドおよび角柱からなる群より選択される、請求項５５記載の組成物。
【請求項５７】
前記ナノ粒子は金属である、請求項５５または５６記載の組成物。
【請求項５８】
前記ナノ粒子はコロイド金属である、請求項５７記載の組成物。
【請求項５９】
前記ナノ粒子は、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、白金ナノ粒子、アルミニウムナノ粒子、パラジウムナノ粒子、銅ナノ粒子、コバルトナノ粒子、インジウムナノ粒子、およびニッケルナノ粒子からなる群より選択される、請求項５８記載の組成物。
【請求項６０】
前記複数のポリヌクレオチドはＤＮＡポリヌクレオチド、ＲＮＡポリヌクレオチドまたはそれらの組み合わせを含む、請求項５０〜５９のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項６１】
前記ポリヌクレオチドは約５〜約１００ヌクレオチド長、約５〜約９０ヌクレオチド長、約５〜約８０ヌクレオチド長、約５〜約７０ヌクレオチド長、約５〜約６０ヌクレオチド長、約５〜約５０ヌクレオチド長、約５〜約４５ヌクレオチド長、約５〜約４０ヌクレオチド長、約５〜約３５ヌクレオチド長、約５〜約３０ヌクレオチド長、約５〜約２５ヌクレオチド長、約５〜約２０ヌクレオチド長、約５〜約１５ヌクレオチド長、または約５〜約１０ヌクレオチド長である、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
請求項２８に記載の方法を用いる、請求項１に記載のナノ複合体の製造方法。
【請求項６３】
標的分子を請求項１〜２８または請求項５０〜６１のいずれか一つに記載の組成物と接触させることを含み、前記標的分子と前記組成物の接触で、検出可能な変化が得られる、標的分子を検出する方法。
【請求項６４】
前記検出はインビトロである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記検出はインビボである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
標的ポリヌクレオチドを、請求項１〜２８または請求項５０〜６１のいずれか一つに記載の組成物と、遺伝子産物の発現を阻止するのに十分な条件下で接触させることを含む、標的ポリヌクレオチドによりコードされる遺伝子産物の発現を阻止する方法。
【請求項６７】
前記遺伝子産物の発現はインビボで阻止される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記遺伝子産物の発現はインビトロで阻止される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記遺伝子産物の発現は、少なくとも約５％阻止される、請求項６６〜６８のいずれか一つに記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１１Ｄ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１１Ｄ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公表番号】特表２０１３−５０９４４５（Ｐ２０１３−５０９４４５Ａ）
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３７１７９（Ｐ２０１２−５３７１７９）
【出願日】平成２２年１１月１日（２０１０．１１．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５５０１８
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５３９４０
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（５１１１２４１８３）ノースウェスタン ユニバーシティ (9)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１日（２０１０．１１．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５５０１８
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５３９４０
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（５１１１２４１８３）ノースウェスタン ユニバーシティ (9)
【Ｆターム（参考）】
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