開花時期制御遺伝子であるＦＴの、サトウダイコンのホモログのトランスジェニック発現による、サトウダイコンにおける抽薹耐性の改変
本発明は、サトウダイコンの抽薹及び開花制御の分野、特にＦＴ遺伝子のベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）ホモログであるＢｖＦＴ１とＢｖＦＴ２の発現を改変することにより、サトウダイコンの抽薹耐性を操作するための方法、並びに核酸分子、キメラ構築物、及びベクターに関する。特に本発明は、抽薹耐性の表現型を有するサトウダイコン植物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号５、６、８、若しくは９のいずれかに記載の核酸配列又はその相補体から成る群から選択される核酸配列
ａ）と少なくとも７０％の配列同一性を有する；或いは
ｂ）の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む；或いは
ｃ）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸配列、好ましくは単離された核酸分子。
【請求項２】
配列番号５、６、８、又は９のいずれかに記載の核酸配列を含む、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項３】
配列番号１又は２に記載の核酸配列によりコードされるポリペプチド、好ましくは単離されたポリペプチド。
【請求項４】
配列番号７又は１０に記載のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
調節エレメントの制御下、好ましくは植物中で機能する調節エレメントの制御下にある、配列番号１又は２に記載の核酸配列を含むキメラ構築物。
【請求項６】
選択工程において、形質転換植物物質と非形質転換植物物質との区別を可能にする選択マーカー遺伝子をさらに含む、請求項５に記載のキメラ構築物。
【請求項７】
ａ）サトウダイコン中の内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現のトランスジェニック下方制御若しくは抑制；又は、
ｂ）サトウダイコン中の内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現のトランスジェニック上方制御のいずれかのために提供される、請求項５又は６に記載のキメラ構築物。
【請求項８】
前記下方制御若しくは抑制が、
ａ）ｄｓＲＮＡ；
ｂ）アンチセンス抑制；又は
ｃ）コサプレッション
から成る群から選択される手段により達成される、内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現のトランスジェニック下方制御若しくは抑制のための、請求項７に記載のキメラ構築物。
【請求項９】
第１のＲＮＡ鎖及び第２のＲＮＡ鎖をコードし、並びに転写されたときに第１のＲＮＡヌクレオチド配列及び第２のＲＮＡヌクレオチド配列を生じる異種ＤＮＡを含み、ここで、前記第１のＲＮＡ鎖は、サトウダイコン中の内因性ＢｖＦＴ２遺伝子のＲＮＡ鎖の少なくとも一部と十分に相補的であって、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現の下方制御若しくは抑制を引き起こすために、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子により産生されるＲＮＡ鎖とハイブリダイズ若しくはアニーリングし、並びに、前記第１のＲＮＡヌクレオチド配列及び前記第２のＲＮＡヌクレオチド配列は２本鎖ＲＮＡを形成し、ここで前記２本鎖ＲＮＡは、サトウダイコン植物中での発現時において、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現のＲＮＡ干渉に関与し、それにより、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現の下方制御若しくは抑制を引き起こす、請求項８に記載のキメラ構築物。
【請求項１０】
逆方向反復を、好ましくは構成的プロモーターと作動可能に連結された逆方向反復を含み、そしてそれは転写されたときに、前記第１及び第２のＲＮＡ鎖を含む前記サトウダイコン植物細胞中で２本鎖ＲＮＡ分子を形成し、前記２本鎖ＲＮＡ分子はＢｖＦＴ２のサイレンシングを引き起こす、請求項９に記載のキメラ構築物。
【請求項１１】
前記異種ＤＮＡが、請求項１又は２に記載の、配列番号８若しくは９に記載の核酸配列
ａ）と少なくとも７０％の配列同一性を有する；或いは
ｂ）の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む；或いは
ｃ）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、
核酸配列を含む、請求項９又は１０に記載のキメラ構築物。
【請求項１２】
ヌクレオチド配列５’−ＣＴＡＴＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＣＡＡＴＧ−３’（配列番号４４）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８２、及びヌクレオチド配列５’−ＧＴＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＡＣＴＴＡＣＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＧ−３’（配列番号４５）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ６３８４を使用するＰＣＲ反応で、ＢｖＦＴ２遺伝子のエクソン４からなる、０．２７ＫｂのｃＤＮＡ断片から得られる異種ＤＮＡを含む、請求項１１に記載のキメラ構築物。
【請求項１３】
配列番号３３のヌクレオチド８７４７〜９０４６で示される異種ＤＮＡを含む、請求項１２に記載のキメラ構築物。
【請求項１４】
前記キメラ構築物中の前記異種ＤＮＡが、プロモーターとターミネーターとの間に挿入され、ここで、
ａ）ヌクレオチド配列５’−ＣＴＡＴＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＣＡＡＴＧ−３’（配列番号４４）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８２、及びヌクレオチド配列５’−ＧＴＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＡＣＴＴＡＣＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＧ−３’（配列番号４５）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ６３８４、並びに鋳型としてサトウダイコンｃＤＮＡを使用するＰＣＲ反応で、ＢｖＦＴ２遺伝子のエクソン４から得られる０．２７ＫｂのｃＤＮＡ断片を増幅し、ここで、前記サトウダイコンｃＤＮＡは、ヌクレオチド配列５’−ＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＡＡＴＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＴ１２ＶＮ−３’（配列番号３５）を有する３’ＲＡＣＥアダプターをプライマーとして使用する逆転写反応で、サトウダイコンの葉から抽出された総ＲＮＡから得られ；
ｂ）ヌクレオチド配列５’−ＣＡＴＡＧＣＡＧＡＣＡＡＣＴＴＣＴＴＧＧＣＡＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＴＧＣＴＴＣＴＡＣ−３’（配列番号４６）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８３、及びヌクレオチド配列５’−ＡＴＣＣＡＡＣＣＧＣＧＧＡＣＣＴＧＣＡＣＡＴＣＡＡＣＡＡ−３’（配列番号４０）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ５２９、並びに鋳型としてジャガイモＳｔ−ＬＳ１イントロンを含有するジャガイモＤＮＡを使用して、ＳＴ−ＬＳ１イントロン及び隣接するスプライシング部位を含む、０．１９Ｋｂの断片を増幅し；
ｃ）プライマーＨｉＮＨ６３８２及びＨｉＮＫ５２９、並びに鋳型として工程ａ）及びｂ）で得られた増幅生成物の混合物を使用する２回目のＰＣＲにより、工程ａ）及びｂ）で得られた増幅生成物を互いに融合し、長さ０．４７Ｋｂの融合生成物を得；
ｄ）ヌクレオチド配列５’−ＴＡＡＡＴＣＣＧＣＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＧ−３’（配列番号４７）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８５、及びヌクレオチド配列５’−ＣＴＡＴＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＣ−３’（配列番号４８）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ６３８６、並びに鋳型として上記サブセクションａ）に記載されたサトウダイコンｃＤＮＡを使用して、０．２７ＫｂのＢｖＦＴ２断片の２回目の増幅を行い；
ｅ）ＳａｃＩＩ制限部位で両方の断片を融合させて、前記ジャガイモＳＴ−ＬＳ１遺伝子から、イントロンにより分離されたＢｖＦＴ２配列の逆方向反復を作成すること
により、前記異種ＤＮＡが得られる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のキメラ構築物。
【請求項１５】
配列番号３３に記載のヌクレオチド配列で示される配列を含む、請求項１４に記載のキメラ構築物。
【請求項１６】
ＢｖＦＴ１遺伝子又はその一部をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、ＢｖＦＴ１遺伝子又はその一部をコードする前記ヌクレオチド配列は、配列番号５若しくは６として示される、請求項１又は２に記載の核酸配列と、
ａ）少なくとも７０％の配列同一性を有するか；又は、
ｂ）ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
ヌクレオチド配列を有し、ここで植物中での発現時に、内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現の上方制御が生じるように、ＢｖＦＴ１遺伝子又はその一部をコードする前記ヌクレオチド配列が、制御配列に作動可能に連結される、内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現のトランスジェニック上方制御のための、請求項７に記載のキメラ構築物。
【請求項１７】
ＢｖＦＴ１遺伝子をコードする前記ヌクレオチド配列が、配列番号６に記載のヌクレオチド配列を有する、請求項１６に記載のキメラ構築物。
【請求項１８】
配列番号３４のヌクレオチド２０７６〜２６１５で示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１６又は１７のキメラ構築物。
【請求項１９】
配列番号３４で示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載のキメラ構築物。
【請求項２０】
前記異種ＤＮＡが、構成的プロモーター、好ましくはシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）のＵｂｉ３プロモーターに作動可能に連結される、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載のキメラ構築物。
【請求項２１】
請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含む、植物形質転換ベクター及び／又は植物発現ベクター。
【請求項２２】
ａ）請求項５〜１５のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含むＲＮＡｉ発現ベクター、及び／又は
ｂ）請求項５〜７及び１６〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含む発現ベクター
である、請求項２１に記載の植物形質転換ベクター。
【請求項２３】
配列番号３３に記載のヌクレオチド配列を有するキメラ構築物を含む、請求項２２に記載のＲＮＡｉ発現ベクター。
【請求項２４】
配列番号３４に記載のヌクレオチド配列を有するキメラ構築物を含む、請求項２２に記載の発現ベクター。
【請求項２５】
（ａ）内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現が、トランスジェニック・サトウダイコン植物中で下方制御若しくは抑制され；及び／又は
（ｂ）内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現が、前記トランスジェニック・サトウダイコン植物中で上方制御される、
内因性ＢｖＦＴ１遺伝子及び／又はＢｖＦＴ２遺伝子が調節される前記トランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２６】
内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現が、
ａ）ｄｓＲＮＡ；
ｂ）アンチセンス抑制；又は
ｃ）コサプレッション
から成る群から選択される方法により下方制御若しくは抑制される、請求項２５に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２７】
請求項５〜１５のいずれか１項に記載のキメラ構築物、又は請求項１若しくは２に記載の核酸配列を含み、抽薹耐性であり、且つ、遅延抽薹の表現型を、好ましくは非抽薹表現型を示す、請求項２６に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２８】
請求項５〜７及び１６〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物、又は請求項１若しくは２に記載の核酸配列を含み、ここで内因性ＢｖＦＴ１は、前記トランスジェニック・サトウダイコン植物中で過剰発現され、並びに前記植物は遅延抽薹の表現型を、好ましくは非抽薹表現型を示す、請求項２５に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２９】
請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の細胞、組織、又は種子から産生される、トランスジェニック・サトウダイコン植物。
【請求項３０】
請求項２５〜２９のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物の根又は後代。
【請求項３１】
抽薹耐性の表現型を有するサトウダイコン植物が生長され得るハイブリッド種子を生産する方法であって、以下の工程：
ａ．抽薹耐性の表現型を有するサトウダイコン系統、特に、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物を、第１の親系統として提供し；
ｂ．工程ａ）のサトウダイコン系統とは異なる遺伝子型を有するサトウダイコン系統を、第２の親系統として提供し；
ここで、工程ａ）又は工程ｂ）の親系統の１つは雄性不稔ｃｍｓ系統であり、他の親系統は雄性稔性であり、並びに、
ｃ．前記雄性稔性親系統の植物を前記雄性不稔親系統の花に受粉させ、種子を生長させ、及びハイブリッド種子を採取し；
ここで、採取された前記ハイブリッド種子は、遅延抽薹の表現型を有する、好ましくは非抽薹表現型を有するサトウダイコン・ハイブリッド植物の種子であること
を含む、前記方法。
【請求項３２】
雄性不稔ＣＭＳサトウダイコン親系統が、請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含む同系繁殖系サトウダイコン系統である、請求項３１に記載のサトウダイコン・ハイブリッド種子を生産する方法。
【請求項３３】
遅延抽薹の表現型、好ましくは非抽薹表現型を有する、サトウダイコン植物のハイブリッド種子。
【請求項３４】
請求項３１又は３２の方法により産生される、請求項３３に記載のハイブリッド種子。
【請求項３５】
請求項３３又は３４のハイブリッド種子を生長させることにより産生される、遅延抽薹の表現型、好ましくは非抽薹表現型を有する、ハイブリッド・サトウダイコン植物。
【請求項３６】
種子、胚、小胞子、葯、接合子、プロトプラスト、細胞、卵子、胚珠、花粉、主根、子葉、抽出物、又は生物学的試料から成る群から選択される植物の部分であって、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子から、或いは請求項３３又は２４に記載のハイブリッド種子から、或いは請求項３５に記載のハイブリッド・サトウダイコン植物から得られる、前記植物の部分。
【請求項３７】
サトウダイコン植物細胞の形質転換のための、請求項１又は２に記載の核酸配列若しくはその断片、又は請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物の使用。
【請求項３８】
請求項１若しくは２に記載の核酸配列の使用、又は請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物の使用、又は請求項２１〜２４のいずれか１項に記載のベクターの使用を含む、サトウダイコン植物細胞を形質転換する方法。
【請求項３９】
糖生産法、好気性発酵法、及び嫌気性発酵法を含む群から選択される方法、特に糖生産法における、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物の使用、請求項３５に記載のハイブリッド・サトウダイコン植物の使用、又は請求項３６に記載の植物の部分の使用。
【請求項４０】
糖を生産するために、請求項２５〜３０、３５、又は３６のいずれか１項に記載のサトウダイコン植物、若しくはその細胞、又は組織が加工される、糖の生産法。
【請求項４１】
請求項２５〜３０、３５、又は３６のいずれか１項に記載のサトウダイコン植物、若しくはその細胞、又は組織から生産された糖。
【請求項１】
配列番号５、６、８、若しくは９のいずれかに記載の核酸配列又はその相補体から成る群から選択される核酸配列
ａ）と少なくとも７０％の配列同一性を有する；或いは
ｂ）の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む；或いは
ｃ）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸配列、好ましくは単離された核酸分子。
【請求項２】
配列番号５、６、８、又は９のいずれかに記載の核酸配列を含む、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項３】
配列番号１又は２に記載の核酸配列によりコードされるポリペプチド、好ましくは単離されたポリペプチド。
【請求項４】
配列番号７又は１０に記載のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
調節エレメントの制御下、好ましくは植物中で機能する調節エレメントの制御下にある、配列番号１又は２に記載の核酸配列を含むキメラ構築物。
【請求項６】
選択工程において、形質転換植物物質と非形質転換植物物質との区別を可能にする選択マーカー遺伝子をさらに含む、請求項５に記載のキメラ構築物。
【請求項７】
ａ）サトウダイコン中の内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現のトランスジェニック下方制御若しくは抑制；又は、
ｂ）サトウダイコン中の内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現のトランスジェニック上方制御のいずれかのために提供される、請求項５又は６に記載のキメラ構築物。
【請求項８】
前記下方制御若しくは抑制が、
ａ）ｄｓＲＮＡ；
ｂ）アンチセンス抑制；又は
ｃ）コサプレッション
から成る群から選択される手段により達成される、内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現のトランスジェニック下方制御若しくは抑制のための、請求項７に記載のキメラ構築物。
【請求項９】
第１のＲＮＡ鎖及び第２のＲＮＡ鎖をコードし、並びに転写されたときに第１のＲＮＡヌクレオチド配列及び第２のＲＮＡヌクレオチド配列を生じる異種ＤＮＡを含み、ここで、前記第１のＲＮＡ鎖は、サトウダイコン中の内因性ＢｖＦＴ２遺伝子のＲＮＡ鎖の少なくとも一部と十分に相補的であって、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現の下方制御若しくは抑制を引き起こすために、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子により産生されるＲＮＡ鎖とハイブリダイズ若しくはアニーリングし、並びに、前記第１のＲＮＡヌクレオチド配列及び前記第２のＲＮＡヌクレオチド配列は２本鎖ＲＮＡを形成し、ここで前記２本鎖ＲＮＡは、サトウダイコン植物中での発現時において、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現のＲＮＡ干渉に関与し、それにより、前記内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現の下方制御若しくは抑制を引き起こす、請求項８に記載のキメラ構築物。
【請求項１０】
逆方向反復を、好ましくは構成的プロモーターと作動可能に連結された逆方向反復を含み、そしてそれは転写されたときに、前記第１及び第２のＲＮＡ鎖を含む前記サトウダイコン植物細胞中で２本鎖ＲＮＡ分子を形成し、前記２本鎖ＲＮＡ分子はＢｖＦＴ２のサイレンシングを引き起こす、請求項９に記載のキメラ構築物。
【請求項１１】
前記異種ＤＮＡが、請求項１又は２に記載の、配列番号８若しくは９に記載の核酸配列
ａ）と少なくとも７０％の配列同一性を有する；或いは
ｂ）の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む；或いは
ｃ）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、
核酸配列を含む、請求項９又は１０に記載のキメラ構築物。
【請求項１２】
ヌクレオチド配列５’−ＣＴＡＴＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＣＡＡＴＧ−３’（配列番号４４）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８２、及びヌクレオチド配列５’−ＧＴＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＡＣＴＴＡＣＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＧ−３’（配列番号４５）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ６３８４を使用するＰＣＲ反応で、ＢｖＦＴ２遺伝子のエクソン４からなる、０．２７ＫｂのｃＤＮＡ断片から得られる異種ＤＮＡを含む、請求項１１に記載のキメラ構築物。
【請求項１３】
配列番号３３のヌクレオチド８７４７〜９０４６で示される異種ＤＮＡを含む、請求項１２に記載のキメラ構築物。
【請求項１４】
前記キメラ構築物中の前記異種ＤＮＡが、プロモーターとターミネーターとの間に挿入され、ここで、
ａ）ヌクレオチド配列５’−ＣＴＡＴＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＣＡＡＴＧ−３’（配列番号４４）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８２、及びヌクレオチド配列５’−ＧＴＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＡＣＴＴＡＣＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＧ−３’（配列番号４５）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ６３８４、並びに鋳型としてサトウダイコンｃＤＮＡを使用するＰＣＲ反応で、ＢｖＦＴ２遺伝子のエクソン４から得られる０．２７ＫｂのｃＤＮＡ断片を増幅し、ここで、前記サトウダイコンｃＤＮＡは、ヌクレオチド配列５’−ＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＡＡＴＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＴ１２ＶＮ−３’（配列番号３５）を有する３’ＲＡＣＥアダプターをプライマーとして使用する逆転写反応で、サトウダイコンの葉から抽出された総ＲＮＡから得られ；
ｂ）ヌクレオチド配列５’−ＣＡＴＡＧＣＡＧＡＣＡＡＣＴＴＣＴＴＧＧＣＡＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＴＧＣＴＴＣＴＡＣ−３’（配列番号４６）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８３、及びヌクレオチド配列５’−ＡＴＣＣＡＡＣＣＧＣＧＧＡＣＣＴＧＣＡＣＡＴＣＡＡＣＡＡ−３’（配列番号４０）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ５２９、並びに鋳型としてジャガイモＳｔ−ＬＳ１イントロンを含有するジャガイモＤＮＡを使用して、ＳＴ−ＬＳ１イントロン及び隣接するスプライシング部位を含む、０．１９Ｋｂの断片を増幅し；
ｃ）プライマーＨｉＮＨ６３８２及びＨｉＮＫ５２９、並びに鋳型として工程ａ）及びｂ）で得られた増幅生成物の混合物を使用する２回目のＰＣＲにより、工程ａ）及びｂ）で得られた増幅生成物を互いに融合し、長さ０．４７Ｋｂの融合生成物を得；
ｄ）ヌクレオチド配列５’−ＴＡＡＡＴＣＣＧＣＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＧ−３’（配列番号４７）を有する順方向プライマーＨｉＮＫ６３８５、及びヌクレオチド配列５’−ＣＴＡＴＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＣ−３’（配列番号４８）を有する逆方向プライマーＨｉＮＫ６３８６、並びに鋳型として上記サブセクションａ）に記載されたサトウダイコンｃＤＮＡを使用して、０．２７ＫｂのＢｖＦＴ２断片の２回目の増幅を行い；
ｅ）ＳａｃＩＩ制限部位で両方の断片を融合させて、前記ジャガイモＳＴ−ＬＳ１遺伝子から、イントロンにより分離されたＢｖＦＴ２配列の逆方向反復を作成すること
により、前記異種ＤＮＡが得られる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のキメラ構築物。
【請求項１５】
配列番号３３に記載のヌクレオチド配列で示される配列を含む、請求項１４に記載のキメラ構築物。
【請求項１６】
ＢｖＦＴ１遺伝子又はその一部をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、ＢｖＦＴ１遺伝子又はその一部をコードする前記ヌクレオチド配列は、配列番号５若しくは６として示される、請求項１又は２に記載の核酸配列と、
ａ）少なくとも７０％の配列同一性を有するか；又は、
ｂ）ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
ヌクレオチド配列を有し、ここで植物中での発現時に、内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現の上方制御が生じるように、ＢｖＦＴ１遺伝子又はその一部をコードする前記ヌクレオチド配列が、制御配列に作動可能に連結される、内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現のトランスジェニック上方制御のための、請求項７に記載のキメラ構築物。
【請求項１７】
ＢｖＦＴ１遺伝子をコードする前記ヌクレオチド配列が、配列番号６に記載のヌクレオチド配列を有する、請求項１６に記載のキメラ構築物。
【請求項１８】
配列番号３４のヌクレオチド２０７６〜２６１５で示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１６又は１７のキメラ構築物。
【請求項１９】
配列番号３４で示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載のキメラ構築物。
【請求項２０】
前記異種ＤＮＡが、構成的プロモーター、好ましくはシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）のＵｂｉ３プロモーターに作動可能に連結される、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載のキメラ構築物。
【請求項２１】
請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含む、植物形質転換ベクター及び／又は植物発現ベクター。
【請求項２２】
ａ）請求項５〜１５のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含むＲＮＡｉ発現ベクター、及び／又は
ｂ）請求項５〜７及び１６〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含む発現ベクター
である、請求項２１に記載の植物形質転換ベクター。
【請求項２３】
配列番号３３に記載のヌクレオチド配列を有するキメラ構築物を含む、請求項２２に記載のＲＮＡｉ発現ベクター。
【請求項２４】
配列番号３４に記載のヌクレオチド配列を有するキメラ構築物を含む、請求項２２に記載の発現ベクター。
【請求項２５】
（ａ）内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現が、トランスジェニック・サトウダイコン植物中で下方制御若しくは抑制され；及び／又は
（ｂ）内因性ＢｖＦＴ１遺伝子の発現が、前記トランスジェニック・サトウダイコン植物中で上方制御される、
内因性ＢｖＦＴ１遺伝子及び／又はＢｖＦＴ２遺伝子が調節される前記トランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２６】
内因性ＢｖＦＴ２遺伝子の発現が、
ａ）ｄｓＲＮＡ；
ｂ）アンチセンス抑制；又は
ｃ）コサプレッション
から成る群から選択される方法により下方制御若しくは抑制される、請求項２５に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２７】
請求項５〜１５のいずれか１項に記載のキメラ構築物、又は請求項１若しくは２に記載の核酸配列を含み、抽薹耐性であり、且つ、遅延抽薹の表現型を、好ましくは非抽薹表現型を示す、請求項２６に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２８】
請求項５〜７及び１６〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物、又は請求項１若しくは２に記載の核酸配列を含み、ここで内因性ＢｖＦＴ１は、前記トランスジェニック・サトウダイコン植物中で過剰発現され、並びに前記植物は遅延抽薹の表現型を、好ましくは非抽薹表現型を示す、請求項２５に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子。
【請求項２９】
請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の細胞、組織、又は種子から産生される、トランスジェニック・サトウダイコン植物。
【請求項３０】
請求項２５〜２９のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物の根又は後代。
【請求項３１】
抽薹耐性の表現型を有するサトウダイコン植物が生長され得るハイブリッド種子を生産する方法であって、以下の工程：
ａ．抽薹耐性の表現型を有するサトウダイコン系統、特に、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物を、第１の親系統として提供し；
ｂ．工程ａ）のサトウダイコン系統とは異なる遺伝子型を有するサトウダイコン系統を、第２の親系統として提供し；
ここで、工程ａ）又は工程ｂ）の親系統の１つは雄性不稔ｃｍｓ系統であり、他の親系統は雄性稔性であり、並びに、
ｃ．前記雄性稔性親系統の植物を前記雄性不稔親系統の花に受粉させ、種子を生長させ、及びハイブリッド種子を採取し；
ここで、採取された前記ハイブリッド種子は、遅延抽薹の表現型を有する、好ましくは非抽薹表現型を有するサトウダイコン・ハイブリッド植物の種子であること
を含む、前記方法。
【請求項３２】
雄性不稔ＣＭＳサトウダイコン親系統が、請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物を含む同系繁殖系サトウダイコン系統である、請求項３１に記載のサトウダイコン・ハイブリッド種子を生産する方法。
【請求項３３】
遅延抽薹の表現型、好ましくは非抽薹表現型を有する、サトウダイコン植物のハイブリッド種子。
【請求項３４】
請求項３１又は３２の方法により産生される、請求項３３に記載のハイブリッド種子。
【請求項３５】
請求項３３又は３４のハイブリッド種子を生長させることにより産生される、遅延抽薹の表現型、好ましくは非抽薹表現型を有する、ハイブリッド・サトウダイコン植物。
【請求項３６】
種子、胚、小胞子、葯、接合子、プロトプラスト、細胞、卵子、胚珠、花粉、主根、子葉、抽出物、又は生物学的試料から成る群から選択される植物の部分であって、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物、又はその細胞、組織、若しくは種子から、或いは請求項３３又は２４に記載のハイブリッド種子から、或いは請求項３５に記載のハイブリッド・サトウダイコン植物から得られる、前記植物の部分。
【請求項３７】
サトウダイコン植物細胞の形質転換のための、請求項１又は２に記載の核酸配列若しくはその断片、又は請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物の使用。
【請求項３８】
請求項１若しくは２に記載の核酸配列の使用、又は請求項５〜２０のいずれか１項に記載のキメラ構築物の使用、又は請求項２１〜２４のいずれか１項に記載のベクターの使用を含む、サトウダイコン植物細胞を形質転換する方法。
【請求項３９】
糖生産法、好気性発酵法、及び嫌気性発酵法を含む群から選択される方法、特に糖生産法における、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載のトランスジェニック・サトウダイコン植物の使用、請求項３５に記載のハイブリッド・サトウダイコン植物の使用、又は請求項３６に記載の植物の部分の使用。
【請求項４０】
糖を生産するために、請求項２５〜３０、３５、又は３６のいずれか１項に記載のサトウダイコン植物、若しくはその細胞、又は組織が加工される、糖の生産法。
【請求項４１】
請求項２５〜３０、３５、又は３６のいずれか１項に記載のサトウダイコン植物、若しくはその細胞、又は組織から生産された糖。
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【公表番号】特表２０１２−５０１１７２（Ｐ２０１２−５０１１７２Ａ）
【公表日】平成２４年１月１９日（２０１２．１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２４２６９（Ｐ２０１１−５２４２６９）
【出願日】平成２１年９月１日（２００９．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００６３１９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２５８８８
【国際公開日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【出願人】（５００５８４３０９）シンジェンタ パーティシペーションズ アクチェンゲゼルシャフト (352)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１月１９日（２０１２．１．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月１日（２００９．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００６３１９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２５８８８
【国際公開日】平成２２年３月１１日（２０１０．３．１１）
【出願人】（５００５８４３０９）シンジェンタ パーティシペーションズ アクチェンゲゼルシャフト (352)
【Ｆターム（参考）】
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