非病害性アグロバクテリウム株、Ｒｉプラスミド、およびそれらに基づく形質転換方法
本発明は、アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）の「非病害性」（disarmed）変異株、ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９の「非病害性」プラスミド変異体、およびそれらの誘導体、ならびに植物形質転換におけるこれら菌株およびプラスミドの利用方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップ：
ａ） アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）または該菌株の誘導体のトランスジェニック非病原性変異株の細菌を準備するステップ、ここで、該変異株は植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損し、かつ該変異株はさらにトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含むものである、および
ｂ） 植物細胞を前記細菌と共培養するステップ、および
ｃ） 安定的にゲノムに組み込まれた前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなる植物細胞を単離または選択するステップ
を含む、トランスジェニック植物細胞の作製方法。
【請求項２】
以下のステップ：
ａ） アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）または該菌株の誘導体のトランスジェニック非病原性変異株の細菌を準備するステップ、ここで、該変異株は植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損し、かつ該変異株はさらにトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含むものである、および
ｂ） 植物体、植物細胞または植物組織を前記細菌と共培養するステップ、および
ｃ） 安定的にゲノムに組み込まれた前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなる植物を単離または選択し、かつ任意により再生するステップ
を含む、トランスジェニック植物の作製方法。
【請求項３】
前記非病原性変異株が、植物細胞に感染可能であり、植物細胞へのＴ−ＤＮＡの移入を媒介することが可能であり、かつ植物ゲノムへのＴ−ＤＮＡの挿入を媒介することが可能であるが、毛状根表現型誘発性は欠損している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ２６５９）の誘導体が、土壌の植物病原性細菌であって、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、および１４により示される配列モチーフからなる群より選択される少なくとも１つの配列モチーフを含む１６Ｓ−２３Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子間配列により特徴付けられる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記非病原性変異株が、ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９または該プラスミドの誘導体の非病原性プラスミド変異体を含んでなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記非病原性プラスミド変異体が、以下のもの：
ａ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなる配列を含む配列
ｂ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１０００個の連続したヌクレオチドからなる配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列
ｃ） ５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の条件下で、配列番号２４により示される配列もしくはその相補配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなるプローブにハイブリダイズする配列
により示される配列の群より選択される少なくとも１つの配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記植物細胞、植物組織、または植物体が、単子葉植物、双子葉植物、および裸子植物からなる群より選択される植物に由来する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記植物が、ウマゴヤシ属（Medicago）、トマト属（Lycopersicon）、アブラナ属（Brassica）、キュウリ属（Cucumis）、ナス属（Solanum）、クルミ属（Juglans）、ワタ属（Gossypium）、リンゴ属（Malus）、ブドウ属（Vitis）、キンギョソウ属（Antirrhinum）、ハコヤナギ属（Populus）、イチゴ属（Fragaria）、シロイヌナズナ属（Arabidopsis）、トウヒ属（Picea）、トウガラシ属（Capsicum）、アカザ属（Chenopodium）、キク属（Dendranthema）、アサガオ属（Pharbitis）、マツ属（Pinus）、エンドウ属（Pisum）、イネ属（Oryza）、トウモロコシ属（Zea）、コムギ属（Triticum）、ライコムギ（Triticale）、ライムギ属（Secale）、ドクムギ属（Lolium）、オオムギ属（Hordeum）、ダイズ属（Glycine）、トガサワラ属（Pseudotsuga）、リュウキュウベンケイ属（Kalanchoe）、フダンソウ属（Beta）、ヒマワリ属（Helianthus）およびタバコ属（Nicotiana）からなる群より選択される属に由来する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡが、植物で発現可能な選択マーカー遺伝子を少なくとも１つ含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
以下のもの：
ａ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなる配列を含む配列
ｂ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１０００個の連続したヌクレオチドからなる配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列
ｃ） ５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の条件下で、配列番号２４により示される配列もしくはその相補配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなるプローブにハイブリダイズする配列
により示される配列の群より選択される、単離されたヌクレオチド配列。
【請求項１１】
植物細胞感染および形質転換に必要な機能をもたらすが、毛状根表現型を引き起こす配列は欠損している、ｐＲｉ２６５９または該Ｒｉプラスミドの誘導体の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１２】
請求項１０に記載のヌクレオチド配列により示される、請求項１１に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１３】
前記誘導体が、配列番号１１２により示される配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するｖｉｒＤ２タンパク質をコードする、請求項１１または１２に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１４】
植物細胞感染および形質転換に必要な生来型の病原性ｐＲｉ２６５９またはその誘導体の配列を含むが、毛状根表現型を媒介するＴ−ＤＮＡの配列は欠損している、請求項１１または１３に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１５】
境界領域を含むＴ−ＤＮＡ全体が生来型のプラスミドから欠失している、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１６】
前記欠失したＴ−ＤＮＡが、配列番号４の塩基５３８付近から塩基１５５１９付近までの配列または配列番号２６の塩基３６４４付近から塩基１８５７７付近までの配列により示される配列に対応する、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１７】
５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の高ストリンジェンシーの条件下で、病原性アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）の生来型の病原性ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９の全体とハイブリダイズするが、該高ストリンジェンシーの条件下で、配列番号４により示される配列の塩基５３８付近から塩基１５５１９付近までの配列または配列番号２６により示される配列の塩基３６４４付近から塩基１８５７７付近までの配列とはハイブリダイズしない、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１８】
前記ｐＲｉ２６５９の誘導体が、植物細胞への土壌細菌からのＴ−ＤＮＡの移入を媒介することができ、
ａ） 生来型ｐＲｉ２６５９プラスミド（アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９に含まれるものと同様）をコードするＤＮＡに対して少なくとも９０％の配列同一性を有すること、または
ｂ） ５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の高ストリンジェンシーの条件下で、生来型ｐＲｉ２６５９プラスミドとハイブリダイズすること
によりさらに特徴付けられるプラスミドである、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１９】
アグロバクテリウム・リゾゲネス（Agrobacterium rhizogenes）ｐＲｉ２６５９プラスミド由来の少なくとも１つのＴ−ＤＮＡ境界領域がつなげられ、毛状根表現型を引き起こす配列を含まない、トランスジェニックＴ−ＤＮＡ。
【請求項２０】
前記境界配列が配列番号１８または１９により示されるものである、請求項１９に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡ。
【請求項２１】
前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡが、前記植物に、農学上有益な形質または少なくとも１つのマーカー遺伝子を付与するための少なくとも１つの発現カセットを含み、該マーカー遺伝子は、形質転換された植物体、植物細胞もしくは組織の選択および／または特定を可能にするものである、請求項１９または２０に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡ。
【請求項２２】
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなるトランスジェニックベクター。
【請求項２３】
請求項１０に記載のヌクレオチド配列、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡ、もしくは請求項２２に記載のトランスジェニックベクターを含んでなる細胞または非ヒト生物。
【請求項２４】
細菌、酵母、植物、哺乳動物、および昆虫からなる群より選択される、請求項２３に記載の細胞または非ヒト生物。
【請求項２５】
リゾビウム科（genes Rhizobiaceae）の土壌細菌である、請求項２３または２４に記載の細胞または非ヒト生物。
【請求項２６】
植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損している、アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）またはその誘導体の非病原性変異株。
【請求項２７】
植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損しており、さらにトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなる、アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）またはその誘導体のトランスジェニック非病原性変異株。
【請求項２８】
植物細胞に感染可能であり、植物細胞へのＴ−ＤＮＡの移入を媒介することが可能であり、かつ植物ゲノムへのＴ−ＤＮＡの挿入を媒介することが可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損している、請求項２６または２７に記載の非病原性変異株。
【請求項２９】
前記アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）の誘導体が、土壌の植物病原性細菌であって、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、および１４により示される配列モチーフからなる群より選択される少なくとも１つの配列モチーフを含む１６Ｓ−２３Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子間配列により特徴付けられる、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の非病原性変異株。
【請求項３０】
ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９またはその誘導体の非病原性プラスミド変異体を含んでなる、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の非病原性変異株。
【請求項３１】
前記非病原性プラスミド変異体が請求項１１〜１８のいずれか１項に記載のものである、請求項３０に記載の非病原性変異株。
【請求項３２】
突然変異型もしくはキメラ型ｖｉｒＡまたはｖｉｒＧ遺伝子の存在あるいは強毒性プラスミドの存在からなる群より選択される１以上の特徴をさらに含む、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の非病原性変異株。
【請求項３３】
以下のもの：
ａ） 配列番号１１２により示される配列またはそのうちの少なくとも２００個の連続したアミノ酸からなる配列、
ｂ） 配列番号１１２により示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３４】
以下のもの：
ａ） 配列番号２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３６、１３７、１３９、１４０、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、もしくは１８７のいずれか１つにより示される配列またはそのうちの少なくとも２００個の連続したアミノ酸からなる配列、
ｂ） 配列番号２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３６、１３７、１３９、１４０、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、または１８７のいずれか１つにより示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３５】
請求項３３または３４に記載のポリペプチドをコードする配列を含むヌクレオチド配列。
【請求項１】
以下のステップ：
ａ） アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）または該菌株の誘導体のトランスジェニック非病原性変異株の細菌を準備するステップ、ここで、該変異株は植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損し、かつ該変異株はさらにトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含むものである、および
ｂ） 植物細胞を前記細菌と共培養するステップ、および
ｃ） 安定的にゲノムに組み込まれた前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなる植物細胞を単離または選択するステップ
を含む、トランスジェニック植物細胞の作製方法。
【請求項２】
以下のステップ：
ａ） アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）または該菌株の誘導体のトランスジェニック非病原性変異株の細菌を準備するステップ、ここで、該変異株は植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損し、かつ該変異株はさらにトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含むものである、および
ｂ） 植物体、植物細胞または植物組織を前記細菌と共培養するステップ、および
ｃ） 安定的にゲノムに組み込まれた前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなる植物を単離または選択し、かつ任意により再生するステップ
を含む、トランスジェニック植物の作製方法。
【請求項３】
前記非病原性変異株が、植物細胞に感染可能であり、植物細胞へのＴ−ＤＮＡの移入を媒介することが可能であり、かつ植物ゲノムへのＴ−ＤＮＡの挿入を媒介することが可能であるが、毛状根表現型誘発性は欠損している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ２６５９）の誘導体が、土壌の植物病原性細菌であって、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、および１４により示される配列モチーフからなる群より選択される少なくとも１つの配列モチーフを含む１６Ｓ−２３Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子間配列により特徴付けられる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記非病原性変異株が、ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９または該プラスミドの誘導体の非病原性プラスミド変異体を含んでなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記非病原性プラスミド変異体が、以下のもの：
ａ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなる配列を含む配列
ｂ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１０００個の連続したヌクレオチドからなる配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列
ｃ） ５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の条件下で、配列番号２４により示される配列もしくはその相補配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなるプローブにハイブリダイズする配列
により示される配列の群より選択される少なくとも１つの配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記植物細胞、植物組織、または植物体が、単子葉植物、双子葉植物、および裸子植物からなる群より選択される植物に由来する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記植物が、ウマゴヤシ属（Medicago）、トマト属（Lycopersicon）、アブラナ属（Brassica）、キュウリ属（Cucumis）、ナス属（Solanum）、クルミ属（Juglans）、ワタ属（Gossypium）、リンゴ属（Malus）、ブドウ属（Vitis）、キンギョソウ属（Antirrhinum）、ハコヤナギ属（Populus）、イチゴ属（Fragaria）、シロイヌナズナ属（Arabidopsis）、トウヒ属（Picea）、トウガラシ属（Capsicum）、アカザ属（Chenopodium）、キク属（Dendranthema）、アサガオ属（Pharbitis）、マツ属（Pinus）、エンドウ属（Pisum）、イネ属（Oryza）、トウモロコシ属（Zea）、コムギ属（Triticum）、ライコムギ（Triticale）、ライムギ属（Secale）、ドクムギ属（Lolium）、オオムギ属（Hordeum）、ダイズ属（Glycine）、トガサワラ属（Pseudotsuga）、リュウキュウベンケイ属（Kalanchoe）、フダンソウ属（Beta）、ヒマワリ属（Helianthus）およびタバコ属（Nicotiana）からなる群より選択される属に由来する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡが、植物で発現可能な選択マーカー遺伝子を少なくとも１つ含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
以下のもの：
ａ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなる配列を含む配列
ｂ） 配列番号２４により示される配列または配列番号２４により示される配列のうち少なくとも１０００個の連続したヌクレオチドからなる配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列
ｃ） ５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の条件下で、配列番号２４により示される配列もしくはその相補配列のうち少なくとも１００個の連続したヌクレオチドからなるプローブにハイブリダイズする配列
により示される配列の群より選択される、単離されたヌクレオチド配列。
【請求項１１】
植物細胞感染および形質転換に必要な機能をもたらすが、毛状根表現型を引き起こす配列は欠損している、ｐＲｉ２６５９または該Ｒｉプラスミドの誘導体の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１２】
請求項１０に記載のヌクレオチド配列により示される、請求項１１に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１３】
前記誘導体が、配列番号１１２により示される配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するｖｉｒＤ２タンパク質をコードする、請求項１１または１２に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１４】
植物細胞感染および形質転換に必要な生来型の病原性ｐＲｉ２６５９またはその誘導体の配列を含むが、毛状根表現型を媒介するＴ−ＤＮＡの配列は欠損している、請求項１１または１３に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１５】
境界領域を含むＴ−ＤＮＡ全体が生来型のプラスミドから欠失している、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１６】
前記欠失したＴ−ＤＮＡが、配列番号４の塩基５３８付近から塩基１５５１９付近までの配列または配列番号２６の塩基３６４４付近から塩基１８５７７付近までの配列により示される配列に対応する、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１７】
５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の高ストリンジェンシーの条件下で、病原性アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）の生来型の病原性ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９の全体とハイブリダイズするが、該高ストリンジェンシーの条件下で、配列番号４により示される配列の塩基５３８付近から塩基１５５１９付近までの配列または配列番号２６により示される配列の塩基３６４４付近から塩基１８５７７付近までの配列とはハイブリダイズしない、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１８】
前記ｐＲｉ２６５９の誘導体が、植物細胞への土壌細菌からのＴ−ＤＮＡの移入を媒介することができ、
ａ） 生来型ｐＲｉ２６５９プラスミド（アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９に含まれるものと同様）をコードするＤＮＡに対して少なくとも９０％の配列同一性を有すること、または
ｂ） ５×ＳＳＰＥ、１％ＳＤＳ、５×デンハルト試薬および１００μｇ／ｍＬの変性サケ精子ＤＮＡからなる溶液中、６８℃での結合またはハイブリダイゼーションと、それに続く、０．１×ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中、６８℃での洗浄と等価の高ストリンジェンシーの条件下で、生来型ｐＲｉ２６５９プラスミドとハイブリダイズすること
によりさらに特徴付けられるプラスミドである、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体。
【請求項１９】
アグロバクテリウム・リゾゲネス（Agrobacterium rhizogenes）ｐＲｉ２６５９プラスミド由来の少なくとも１つのＴ−ＤＮＡ境界領域がつなげられ、毛状根表現型を引き起こす配列を含まない、トランスジェニックＴ−ＤＮＡ。
【請求項２０】
前記境界配列が配列番号１８または１９により示されるものである、請求項１９に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡ。
【請求項２１】
前記トランスジェニックＴ−ＤＮＡが、前記植物に、農学上有益な形質または少なくとも１つのマーカー遺伝子を付与するための少なくとも１つの発現カセットを含み、該マーカー遺伝子は、形質転換された植物体、植物細胞もしくは組織の選択および／または特定を可能にするものである、請求項１９または２０に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡ。
【請求項２２】
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなるトランスジェニックベクター。
【請求項２３】
請求項１０に記載のヌクレオチド配列、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の非病原性プラスミド変異体、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載のトランスジェニックＴ−ＤＮＡ、もしくは請求項２２に記載のトランスジェニックベクターを含んでなる細胞または非ヒト生物。
【請求項２４】
細菌、酵母、植物、哺乳動物、および昆虫からなる群より選択される、請求項２３に記載の細胞または非ヒト生物。
【請求項２５】
リゾビウム科（genes Rhizobiaceae）の土壌細菌である、請求項２３または２４に記載の細胞または非ヒト生物。
【請求項２６】
植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損している、アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）またはその誘導体の非病原性変異株。
【請求項２７】
植物細胞に感染可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損しており、さらにトランスジェニックＴ−ＤＮＡを含んでなる、アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）またはその誘導体のトランスジェニック非病原性変異株。
【請求項２８】
植物細胞に感染可能であり、植物細胞へのＴ−ＤＮＡの移入を媒介することが可能であり、かつ植物ゲノムへのＴ−ＤＮＡの挿入を媒介することが可能であるが、毛状根表現型誘発性を欠損している、請求項２６または２７に記載の非病原性変異株。
【請求項２９】
前記アグロバクテリウム株Ｋ５９９（ＮＣＰＰＢ ２６５９）の誘導体が、土壌の植物病原性細菌であって、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、および１４により示される配列モチーフからなる群より選択される少なくとも１つの配列モチーフを含む１６Ｓ−２３Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子間配列により特徴付けられる、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の非病原性変異株。
【請求項３０】
ＲｉプラスミドｐＲｉ２６５９またはその誘導体の非病原性プラスミド変異体を含んでなる、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の非病原性変異株。
【請求項３１】
前記非病原性プラスミド変異体が請求項１１〜１８のいずれか１項に記載のものである、請求項３０に記載の非病原性変異株。
【請求項３２】
突然変異型もしくはキメラ型ｖｉｒＡまたはｖｉｒＧ遺伝子の存在あるいは強毒性プラスミドの存在からなる群より選択される１以上の特徴をさらに含む、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の非病原性変異株。
【請求項３３】
以下のもの：
ａ） 配列番号１１２により示される配列またはそのうちの少なくとも２００個の連続したアミノ酸からなる配列、
ｂ） 配列番号１１２により示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３４】
以下のもの：
ａ） 配列番号２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３６、１３７、１３９、１４０、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、もしくは１８７のいずれか１つにより示される配列またはそのうちの少なくとも２００個の連続したアミノ酸からなる配列、
ｂ） 配列番号２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３６、１３７、１３９、１４０、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、または１８７のいずれか１つにより示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３５】
請求項３３または３４に記載のポリペプチドをコードする配列を含むヌクレオチド配列。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１４Ｅ】
【図１５】
【図１６】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１４Ｅ】
【図１５】
【図１６】
【公表番号】特表２００８−５１１２９４（Ｐ２００８−５１１２９４Ａ）
【公表日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２８７７３（Ｐ２００７−５２８７７３）
【出願日】平成１７年８月３１日（２００５．８．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００９３６６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２４５０９
【国際公開日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【出願人】（５０１３８３７５０）ビーエーエスエフ プラント サイエンス ゲーエムベーハー (17)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月３１日（２００５．８．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００９３６６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２４５０９
【国際公開日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【出願人】（５０１３８３７５０）ビーエーエスエフ プラント サイエンス ゲーエムベーハー (17)
【Ｆターム（参考）】
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