顕微鏡観察用容器
【課題】 拡大倍率で観察している際に、観察中の位置を容易に認識・特定することができる顕微鏡観察用容器を提供する。
【解決手段】 顕微鏡を用いて被検査物を観察するための顕微鏡観察用容器であって、前記被検査物を支持する板状部を備え、前記板状部には、所定間隔で配置された複数の緯線および経線により構成されるグリッドが設けられ、前記グリッドは、金型にグリッド線に対応する凸部を形成し、前記凸部を前記板状部に押しつけて凹部を形成する転写を行うことにより形成され、それぞれの前記グリッドの内部と、当該グリッドを形成する前記緯線および前記経線との少なくとも一方には、前記グリッドの絶対位置を識別可能な目印Ｘ０〜Ｘ４，Ｙ０〜Ｙ４，ＩＭが設けられている。
【解決手段】 顕微鏡を用いて被検査物を観察するための顕微鏡観察用容器であって、前記被検査物を支持する板状部を備え、前記板状部には、所定間隔で配置された複数の緯線および経線により構成されるグリッドが設けられ、前記グリッドは、金型にグリッド線に対応する凸部を形成し、前記凸部を前記板状部に押しつけて凹部を形成する転写を行うことにより形成され、それぞれの前記グリッドの内部と、当該グリッドを形成する前記緯線および前記経線との少なくとも一方には、前記グリッドの絶対位置を識別可能な目印Ｘ０〜Ｘ４，Ｙ０〜Ｙ４，ＩＭが設けられている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、顕微鏡を用いて被検査物を観察するために用いられる顕微鏡観察用容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
大学や企業の研究室等においては、生体細胞、生物組織片、微生物、細菌等、もしくはこれらの培養物、またはこれらに薬物や遺伝子等を注入したものの経時的な変化（形態変化、移動等）を顕微鏡で観察し、生物化学的、薬学的な研究等がなされている。顕微鏡としては、実体顕微鏡、蛍光顕微鏡、位相差顕微鏡、微分干渉顕微鏡等の種々の方式のものが存在しており、研究の目的や対象の性質等に応じて適宜選定されて用いられる。なお、近時においては、顕微鏡は接眼レンズを介した目視観察の他に、ＣＣＤ等の撮像素子で撮像してモニタ上に表示し、あるいはパーソナルコンピュータ等に画像データとして記憶して、必要に応じて画像処理等も行い得るようになっている。
【０００３】
このような細胞等の経時変化を顕微鏡で観察する際には、一般に培養容器をも兼ねた顕微鏡観察用容器が用いられる。顕微鏡観察用容器としては、細胞等の被検査物を収容する収容部を備え、この収容部は底面を構成する板状部、および側壁を構成する筒状部を有している。この収容部を単一で備える容器として細胞培養ディッシュ等とも呼ばれるものや複数の収容部を配列的（マトリクス状）に配置したマイクロプレート等とも呼ばれるものがある。
【０００４】
収容部の少なくとも板状部は、照明光を透過させる必要があるため、光透過性の高い材料から形成され、顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係で定められる値よりも薄い板厚とされる必要がある。顕微鏡観察用容器としては、この板状部として、光学的性質が良好で、比較的に薄い板厚でも所望の強度を維持できるガラス板を用い、筒状部等のその余の部分を樹脂で形成したものが知られている（例えば、下記特許文献１または特許文献２参照）。但し、近時においては、光学的性質がガラスに近いあるいはガラスを越え、また機械的強度も十分な樹脂材料が開発されており、樹脂は軽量で成形が容易であること等から、板状部を含む容器の全体を樹脂で製造することも、現在では可能となっている。
【０００５】
ところで、このような顕微鏡観察用容器を用いて被検査物の経時変化を観察する場合には、顕微鏡のステージ上に被検査物を収容した容器を設置し、板状部上の被検査物の一部を拡大して複数箇所において観察（撮像）した後、該ステージ上から一旦取り外して時間をおいて再度ステージ上に設置して、同じ位置、同じ倍率で観察するという動作を何回か繰り返し実施することになる。この場合に、細胞等の形態変化量や移動量を計測し、あるいは前後の観察画像を画像処理により重ね合わせて比較する場合等には、板状部上の位置に関する基準が必要となる。
【０００６】
このような位置基準として、特許文献１または特許文献２には、板状部上に複数の緯線および経線からなる格子状のグリッド座標を設けたものが開示されている。グリッド座標の外側には、各緯線および経線を他の緯線および経線から識別するための記号として、アルファベットや数字が表示されている（例えば、特許文献１の図６、特許文献２の図３参照）。
【０００７】
しかしながら、上述した通り、顕微鏡観察する際には、板状部上の被検査物の任意の一部を拡大した状態で観察するため、グリッド座標の外側に表示された記号は、拡大観察時には顕微鏡の視野内にない場合が多く、顕微鏡視野内に記号が入っていない場合には、記号を含むグリッド座標の全体が顕微鏡視野内に入る程度に倍率を一旦低倍率に設定した上で、観察すべき位置を確認調整した後に、再度所望の拡大倍率に設定して観察する必要があり、そのような作業は煩雑であり、観察に長時間を要するという問題がある。
【０００８】
また、拡大倍率で観察している状態では、顕微鏡視野中に緯線および経線が含まれていても、その緯線および経線が他の緯線および他の経線と識別できないことが多いため、観察している位置を確認できず、誤った位置で観測してしまう場合があるとともに、観察画像を画像データとして画像処理する場合にも、同様にその位置を特定することができないという問題がある。
【０００９】
上記問題について、グリッド座標の中央部分に位置する被検査物を観察する場合を例として、以下に、より具体的に説明する。すわなち、まず、顕微鏡の倍率を低倍率に設定した状態で被検査物の座標位置を確認する。次いで、顕微鏡の倍率を拡大倍率とした状態で、グリッド座標の外側に表示された識別用の記号を見ながら、例えばグリッド座標の縦方向の位置を特定し、ステージの縦方向の位置を固定する。次いで、拡大倍率の設定状態では、グリッド座標の横方向の位置を示す識別用の記号が顕微鏡視野内に入らないため、グリッド座標端部からのグリッドの数をカウントしつつ、グリッド座標の横方向に沿ってステージを移動させて、ステージの横方向の位置を特定してステージの横方向の位置を固定し、この状態で被検査物の観察を行う。しかしながら、ステージの横方向の位置を特定する場合にグリッド数をカウントする必要があり、カウント数の勘違いやカウント間違い等が頻繁に生じ得る。また、被検査物が細胞である場合には、細胞の外形が経時的に変化し得るため、被検査物を視認しただけでは、同一の被検査物を観察しているのか否かの判断ができない。このため、上記手順によれば、被検査物の観察が非常に困難であるという問題がある。
【００１０】
本発明は、このような点に鑑みてなされたものであり、拡大倍率で観察している際に、観察中の位置を容易に認識・特定することができる顕微鏡観察用容器を提供することを目的とする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００１−１７１５７号公報
【特許文献２】特開２００４−２０１６９５号公報
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明によると、顕微鏡を用いて被検査物を観察するための顕微鏡観察用容器であって、前記被検査物を支持する板状部を備え、前記板状部には、所定間隔で配置された複数の緯線および経線により構成されるグリッドが設けられ、前記グリッドは、金型にグリッド線に対応する凸部を形成し、前記凸部を前記板状部に押しつけて凹部を形成する転写を行うことにより形成され、それぞれの前記グリッドの内部と、当該グリッドを形成する前記緯線および前記経線との少なくとも一方には、前記グリッドの絶対位置を識別可能な目印が設けられている顕微鏡観察用容器が提供される。
【００１３】
本発明において、前記板状部を含む容器全体を樹脂で形成することができ、その樹脂としては、脂環式構造を有する樹脂を用いることができる。
【００１４】
また、前記目印としては、前記緯線および前記経線をそれぞれ互いに識別するための特徴により表現されたものを用いることができる。この場合の前記特徴としては、線の本数、線の太さ、線の種類、線に付された記号、およびこれらの少なくとも２つの組み合わせにより表現されているものを用いることができる。さらに、前記特徴としては、前記緯線および／または前記経線を、当該線自体を識別可能な記号によって線状に構成したことにより表現されたものを用いてもよい。
【００１５】
また、本発明において、前記板状部を底面とし、上部に開口を有する筒状部を備えることができ、加えて、前記筒状部の前記開口から挿入される柱状部を有する蓋を備えることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の顕微鏡観察用容器によれば、被検査物を支持する板状部に設けられたそれぞれのグリッドの内部と、当該グリッドを形成する緯線および経線との少なくとも一方に、グリッドの絶対位置を識別可能な目印を設けたので、従来技術のように一旦低倍率に設定して確認する等の作業を行う必要がなく、拡大倍率で観察している際に、観察中の位置を容易に認識・特定することができるという効果がある。
【００１７】
また、拡大観察した画像を画像処理する際に、該画像中にはその位置を識別するための目印が必ず含まれているため、前後の画像データでその観察位置が厳密に一致していなくても、当該目印によって画像処理時に前後の画像を正確に重ね合わせることができる。従って、前後の観察位置を厳密に一致させる必要がなく、作業の容易化を図ることができるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施形態の顕微鏡観察用容器の一例を示す側断面図である。
【図２】図１の顕微鏡観察用容器の容器本体の平面図である。
【図３】本発明の実施形態の顕微鏡観察用容器の他の例を示す側断面図である。
【図４】図３の顕微鏡観察用容器の容器本体の平面図である。
【図５】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第１の構成を示す図である。
【図６】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第２の構成を示す図である。
【図７】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第３の構成を示す図である。
【図８】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第４の構成を示す図である。
【図９】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第５の構成を示す図である。
【図１０】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第６の構成を示す図である。
【図１１】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第７の構成を示す図である。
【図１２】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第８の構成を示す図である。
【図１３】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第９の構成を示す図である。
【図１４】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第９の構成の変形例を示す図である。
【図１５】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第９の構成の他の変形例を示す図である。
【図１６】本発明の実施形態の第１〜第９の構成において、スケールを併記する場合を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施形態に係る顕微鏡観察用容器について、図面を参照して説明する。
【００２０】
〔容器の全体構成〕
図１は本発明の実施形態に係る顕微鏡観察用容器の一例の全体構成を示す側断面図であり、図２は図１の顕微鏡観察用容器の容器本体の構成を示す平面図である。
【００２１】
この顕微鏡観察用容器１１は、細胞培養ディッシュ等とも呼ばれる容器であり、容器本体１２と、蓋体１３とを備えて構成されている。容器本体１２は上面が開口し、下面が閉塞された略円筒状の部材（シャーレ）であり、容器本体１２の底部１２ａの略中央部には被検査物としての細胞等を含む培地を収容する収容部１４が配置されている。この収容部１４は、容器本体１２の底部１２ａの略中央部に凹部が形成されることによって構成され、凹部の底部が被検査物を支持する（または付着させる）ための板状部１４ａとなり、凹部の側面が収容部１４の側壁を構成する筒状部１４ｂとなっている。
【００２２】
板状部１４ａの板厚（肉厚）は、この容器１１を用いて観察する際に用いられる顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係において、所定の厚さとなっている。また、図２に示されているように、板状部１４ａには、拡大観察時に板状部１４ａ内の位置を認識・特定するための目印Ｍが配置されている。この目印Ｍについては、後に詳述する。容器本体１２の側壁１２ｂの開口近傍の部分には、段差１２ｃが形成されている。
【００２３】
蓋体１３は、容器本体１２の上面開口を着脱自在に閉塞する略円板状の部材から構成されており、容器本体１２の段差１２ｃの部分に嵌め合うように円環状の側壁部１３ａが形成されている。なお、図示は省略するが、蓋体１３の下面に、容器本体１２の開口を蓋体１３で閉塞した状態で、内部に画成される空間の酸素を吸収してその濃度を調整するための酸素吸収剤を収容するためのポケット等が設けられていてもよい。生体細胞等は体内と同様に低酸素濃度（例えば、５％程度）下で培養・観察することが望ましい場合があるからである。
【００２４】
図３は本発明の実施形態に係る顕微鏡観察用容器の他の例の全体構成を示す側断面図であり、図４は図３の顕微鏡観察用容器の容器本体の構成を示す平面図である。
【００２５】
この顕微鏡観察用容器２１は、マイクロプレート等とも呼ばれる容器であり、容器本体２２と、蓋体２３とを備えて構成されている。容器本体２２は、底板２２ａ上に、被検査物としての細胞等を含む培地を収容する複数の収容部２４を配列的に設けて構成されている。ここでは、一例として、２×４の合計８個の収容部２４を備えている。但し、収容部２４の個数は、８個未満（例えば２×２の４個）でも、９個以上でもよい。各収容部２４は、上面が開口し、下面が閉塞された略円筒状の筒状部２４ｂを有し、収容部２４の底部（底板２２ａの該収容部に対応する部分）が被検査物を支持する（または付着させる）ための板状部２４ａとなっている。
【００２６】
板状部２４ａ（即ち、底板２２ａ）の板厚（肉厚）は、この容器２１を用いて観察する際に用いられる顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係において、所定の厚さとなっている。また、図４に示されているように、各収容部２４のそれぞれの板状部２４ａには、図１および図２を参照して上述した顕微鏡観察用容器１１と同様に、拡大観察時に板状部２４ａ内の位置を認識・特定するための目印Ｍが配置されている。この目印Ｍについては、後に詳述する。
【００２７】
蓋体２３は、容器本体２２の各収容部２４の上面開口を着脱自在に閉塞する略矩形状の部材から構成されており、各収容部２４の筒状部２４ｂの内側の開口側近傍の部分に遊嵌する柱状部２３ａが各収容部２４に対応して配置されているとともに、筒状部２４ｂの外側に嵌り込むように形成された凸部２３ｂを有している。各収容部２４の開口を閉塞するように蓋体２３を取り付けた状態で、柱状部２３ａは筒状部２４ｂと僅かな隙間をもって挿入されており、収容部２４内に収容され、板状部２４ａ上に支持された培地が液体である場合に該液体の界面（上面）に生じることがあるメニスカスを、この筒状部２３ａの先端面が該液体内に僅かに挿入されることによって解消するものである。メニスカスが生じると該液体の界面近傍がレンズとして作用し、顕微鏡観察する際の誤差となり得るので、このような柱状部２３ａによって、これを防止することができる。
【００２８】
なお、図１および図２、または図３および図４に示した容器の構成は、例示であって、他の構成であってもよい。
【００２９】
〔容器形成材料〕
これらの容器本体１２，２２および蓋体１３，２３は、ガラスを用いて製造してもよいが、軽量であること、成形が容易であること等から樹脂を用いることが好ましい。用いる透明樹脂としては、アクリル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリスチレン、および脂環式構造を有する樹脂等を例示することができる。これらの中でも、脂環式構造を有する樹脂は、流動性が良好であり、顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係から板状部に要請される板厚（肉厚）程度の薄さでも十分な機械的強度を実現できるとともに、高光透過性、平坦性、均一性、低複屈折性等の容器の板状部を含む光透過部に要請される光学特性を良好に実現できることから好ましい。また、脂環式構造を有する樹脂は、材料に起因する自家蛍光が小さいので、蛍光観察する用途の場合にも問題がなく、耐薬品性にも優れていることから好適である。
【００３０】
脂環式構造を有する樹脂は、主鎖および／または側鎖に脂環式構造を有する樹脂である。機械的強度などの観点から、主鎖に脂環式構造を含有する樹脂が特に好ましい。脂環式構造としては、飽和環状炭化水素（シクロアルカン）構造、不飽和環状炭化水素（シクロアルケン）構造などを挙げることができる。機械的強度などの観点から、シクロアルカン構造やシクロアルケン構造が好ましく、中でもシクロアルカン構造が最も好ましい。脂環式構造を構成する炭素原子数は、格別な制限はないが、通常４〜３０個、好ましくは５〜２０個、より好ましくは５〜１５個の範囲であるときに、機械的強度および成形性等の特性が高度にバランスされ、好適である。脂環式構造を有する樹脂中の脂環式構造を有する繰り返し単位の割合は、通常５０重量％以上、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは９０重量％以上である。
【００３１】
脂環式構造を有する樹脂の具体例としては、（１）ノルボルネン系単量体の開環重合体およびノルボルネン系単量体とこれと開環共重合可能なその他の単量体との開環共重合体、並びにこれらの水素添加物、ノルボルネン系単量体の付加重合体およびノルボルネン系単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との付加共重合体などのノルボルネン系重合体；（２）単環の環状オレフィン系重合体およびその水素添加物；（３）環状共役ジエン系重合体およびその水素添加物；（４）ビニル脂環式炭化水素系単量体の重合体およびビニル脂環式炭化水素系単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との共重合体、並びにこれらの水素添加物、ビニル芳香族系単量体の重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物およびビニル芳香族単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との共重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物などのビニル脂環式炭化水素系重合体；などが挙げられる。
【００３２】
これらの中でも、光学特性や機械的強度等の観点から、ノルボルネン系重合体およびビニル脂環式炭化水素系重合体が好ましく、ノルボルネン系単量体の開環重合体水素添加物、ノルボルネン系単量体とこれと開環共重合可能なその他の単量体との開環共重合体水素添加物、ビニル芳香族系単量体の重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物およびビニル芳香族単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との共重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物がさらに好ましい。
【００３３】
〔目印の構成〕
容器本体１２、２２の被検査物が支持される板状部１４ａ，２４ａの表面（被検査物を支持する面）または裏面（被検査物を支持する面と反対側の面）には、板状部１４ａ，２４ａ内の任意の一部を拡大観察した状態で、該拡大観察している該板状部１４ａ，２４ａ内の位置を板状部１４ａ，２４ａ内の他の位置から識別するための目印Ｍが配置されている。この目印Ｍとしては、例えば、図５に示すような構成（第１の構成）のものを用いることができる。
【００３４】
図５に示す目印Ｍは、複数の緯線（横線）Ｙ０〜Ｙ４…および複数の経線（縦線）Ｘ０〜Ｘ４…を所定間隔でグリッド（格子）状に配置するとともに、各緯線または各経線を他の緯線または経線から識別するための特徴として、緯線および経線の交点の位置を示す記号ＩＭとして番地を該交点近傍に配置して構成されている。緯線および経線としては、ここでは実線を用い、その線幅は１μｍ程度である。
【００３５】
図５中、符号Ｆｉを付した矩形状の枠線は、顕微鏡のステージ上にこの容器１１，２１を設置し、所定の倍率で拡大観察した場合の該顕微鏡の観察視野（または撮像視野）を示している。なお、この観察視野Ｆｉの同図内における位置は、一例であり、顕微鏡のステージを自動または手動で移動させることによって、板状部１４ａ，２４ａ上の任意の位置に移動可能である。観察視野Ｆｉの大きさは、顕微鏡の仕様によるが、被検査物としての細胞の大きさは一般に１００μｍ程度以下であるため、観察倍率を６０倍として、被検面上において、縦１５０μｍ×横２００μｍ程度のものや縦７５μｍ×横１００μｍ程度のものが用いられる。
【００３６】
緯線Ｙ０〜Ｙ４…および経線Ｘ０〜Ｘ４…（以下、両者を含めてグリッド線ともいう）の配設間隔は、被検査物の観察に用いるものとして想定される最も大きい拡大倍率において、グリッド線の各交点のうち、少なくとも１つの交点が観察視野Ｆｉ内に入るように、即ち少なくとも１本の緯線、少なくとも１本の経線が観察視野Ｆｉ内に入るような間隔に設定されている。例えば、最大倍率として６０倍を想定した場合には、緯線の間隔は１５０μｍ未満に、経線の間隔は２００μｍ未満に設定される。ここでは、一例として、緯線および経線の間隔は同じとして、１５０μｍよりも僅かに小さい１４０μｍに設定している。
【００３７】
記号ＩＭとしての番地は、同図では、４桁の数字で表現しており、４桁のうち、上２桁が緯線を識別し、下２桁が経線を識別することを意味している。この表記法により、緯線、経線ともに、００〜９９までの１００本の線の識別が可能である。記号ＩＭの大きさとしては、観察の支障とならない程度になるべく小さく、且つ、観察倍率との関係で識別可能な程度の大きさに設定される。具体的には、一例として、観察倍率を６０倍程度として、１文字の大きさは１０μｍ角程度、文字間スペースは３μｍ程度とすることができる。
【００３８】
グリッド線および記号ＩＭの板状部１４ａ，２４ａに対する形成方法としては、ナノインプリンティングやフォトリソグラフィにより形成することができる。ナノインプリンティングは、金型にグリッド線および記号ＩＭに対応する凸部を形成して、板状部１４ａ，２４ａに押しつけて凹部を形成することにより転写する方法であり、フォトリソグラフィは、薄膜形成、マスク露光、エッチング等により、グリッド線および記号ＩＭをパターニングするものである。但し、グリッド線および記号ＩＭの形成方法としては、これらに限定されず、他の方法を用いてもよい。
【００３９】
次に、目印Ｍの変形例をいくつか説明する。図６は目印の第２の構成を示しており、この第２の構成は、図５に示した第１の構成に係る記号ＩＭの表記法を変更したものであり、２桁のアルファベットで表記したものである。グリッド線の表記は図５と同じである。
この表記法により、緯線、経線ともに、アルファベットＡ〜Ｚまでの２６本の識別が可能である。なお、記号ＩＭの表記法は、図５または図６のような数字やアルファベットによるもの以外に、アルファベット以外の文字や図形等によるものであってもよい。また、数字、文字、図形等のうちの２つ以上を組み合わせたものを用いてもよい。
【００４０】
図５または図６では、単一の線種（実線）によりグリッド線を表示し、これに記号ＩＭを組み合わせることにより、グリッド線の識別を行えるようにしている。これに対し、図７に示す第３の構成では、そのような記号ＩＭを用いてグリッド線を識別するのではなく、グリッド線自体の種類（線種）を互いに異なるものとして、その識別を行えるようにしている。この第３の構成では、グリッド線は実線および点線を用い、点線はその点部分と間欠部分のピッチ（周期）を異なるものとして他の点線と識別できるようにしている。線種としては、実線および点線の他、一点鎖線、二点鎖線等の鎖線を用いることもできる。
鎖線の場合も点線の場合と同様に、その長線部分、短線部分、および間欠部分の周期を異ならせることにより、互いの識別が可能である。
【００４１】
図８は目印の第４の構成を示しており、この第４の構成では、グリッド線として実線を用い、その線幅を異なるものとして、互いを識別できるようにしている。線幅を変更することによる表現単独では、多数の識別は難しいが、グリッド線の数がそれほど多くない場合には、線幅の変更のみによって識別することが可能である。図７に示した線種による表記と図８に示した線幅による表記とを組み合わせてもよく、これにより、さらに多くの識別が可能となる。
【００４２】
図９は目印の第５の構成を示しており、この第５の構成では、グリッド線を実線で表記するとともに、グリッド線と同じ線を付加して複数の線の束からなる線束により互いを識別できるようにしている。１つの線束を構成する複数の線の数が多くなると、やや見えづらくなる懸念があるため、グリッド線の数が多い場合には、例えば、線種や線幅の異なる線と組み合わせて、ローマ数字の如き表記にするとよい。線束を構成する線の線幅は１μｍ程度であり、隣接する線の間隔は２μｍ程度とすることができる。
【００４３】
図１０は目印の第６の構成を示しており、この第６の構成は、図９の線束による表記法を改良したものであり、板状体１４ａ，２４ａの中央部に実線で基準となる緯線Ｙ２および経線Ｘ２を表記し、これらの基準となる緯線および経線から上下または左右に離れる毎に、線束を構成する線の数を増加させている。従って、緯線Ｙ１とＹ３、Ｙ０とＹ４は同じ線束で表現され、経線Ｘ１とＸ３、Ｘ０とＸ４は同じ線束で表現されている。この場合、同じ形態の交点が現れる。例えば、緯線Ｙ１と経線Ｘ１の交点、緯線Ｙ１と経線Ｘ３の交点、緯線Ｙ３と経線Ｘ１の交点、緯線Ｙ３と経線Ｘ３の交点は同じ形態となり、互いを識別することができない。そこで、図１０では、緯線と経線の交点の近傍に記号ＩＭを付すことによって識別できるようにしている。
【００４４】
ここでの記号ＩＭは、単一の黒点（ドット）である。この黒点は、当該交点を原点として、緯線を横軸、経線を縦軸と例えて、第１象限〜第４象限の何れに付されているかで、互いを識別できるようにしている。例えば、緯線Ｙ１と経線Ｘ３の交点に付される黒点は第１象限に、緯線Ｙ１と経線Ｘ１の交点に付される黒点は第２象限に、緯線Ｙ３と経線Ｘ１の交点に付される黒点は第３象限に、緯線Ｙ３と経線Ｘ３の交点に付される黒点は第４象限に付されることにより、互いが識別される。このような表記を用いた場合には、容器１１，１２が顕微鏡のステージに誤って９０°、１８０°または２７０°回転した状態で設置されると、その誤りを識別することができず、不都合である。この場合に対応するため、図１０では、方向を示す方向表示（矢印）ＤＭを表示することによって、容器が顕微鏡のステージに回転して設置されることを防止するようにしている。
【００４５】
なお、細胞中には、膜成分でできた顆粒や細胞核が存在するため、記号ＩＭとしての黒点の径によっては、これらとの区別が困難となるおそれがあるため、用いる黒点の径は、そのような顆粒よりも十分大径とし、細胞核よりも十分小径として、これらから区別できるようにすることが好ましい。黒点の径は、例えば、数μｍ程度に設定することができる。また、記号ＩＭとして、このような黒点ではなく、細胞中には存在することがない、または少ない図形（例えば、三角形や四角形）、幾何学的な模様、あるいは文字（例えば、Ｌ字）等を用いれば、細胞中に存在する模様と明確に区別することができ、都合がよい。
【００４６】
図１１は目印の第７の構成を示しており、この第７の構成では、緯線および経線に、各グリッドに対応するように複数の間欠部を形成し、緯線または経線を他の緯線または経線から識別するための記号として、数字を該間欠部にそれぞれ配置している。なお、記号は、数字に限られず、アルファベットやその他の図形またはこれらの組み合わせを用いてもよい。また、間欠部の形成および記号の標記は、全ての緯線または経線について行わなくてもよく、１つおき、あるいは２つおき等であってもよい。
【００４７】
図１２は目印の第８の構成を示しており、この第８の構成では、緯線および経線の偶数列を比較的に細い実線とし、奇数列を該偶数列と識別するために比較的に太い実線とし、奇数列の緯線および経線にのみ、各グリッドに対応するように複数の間欠部を形成し、緯線または経線を他の緯線または経線から識別するための記号として、数字を該間欠部にそれぞれ配置している。特に、限定はされないが、偶数列の太い緯線または経線の線幅と記号としての数字の大きさとを揃えることが好ましい。なお、記号は、数字に限られず、アルファベットやその他の図形またはこれらの組み合わせを用いてもよい。また、奇数列を太い線とし、偶数列を細い線としてもよいし、細い線にのみ間欠部を形成して記号を配置するようにしてもよい。
【００４８】
図１３は目印の第９の構成を示しており、この第９の構成では、緯線および経線を線分で表現するのではなく、数字およびアルファベットの組み合わせからなる記号を直線状に羅列することにより表現している。図１３では、各緯線または各経線を構成する文字列は互いに同一の表現形式として、グリッドを他のグリッドから識別するためにグリッド毎に構成する記号を異ならせている。また、図１３では、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、９０度の関係となるようにしている。なお、記号は、数字またはアルファベットの組み合わせに限られず、数字、アルファベット、その他の文字や図形を単独で、またはこれらの組み合わせで用いてもよい。また、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、９０度の関係に限られず、同じ向きでも、１８０度の関係でもよい。
【００４９】
図１４は図１３に示した第９の構成の変形例を示しており、図１４では、各緯線または各経線を構成する記号（文字列）を緯線または経線毎に異ならせるとともに、グリッド毎にも異ならせている。また、図１４では、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ方向となるようにしている。なお、記号は、数字またはアルファベットの組み合わせに限られず、数字、アルファベット、その他の文字や図形を単独で、またはこれらの組み合わせで用いてもよい。また、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ向きに限られず、９０度の関係でも、１８０度の関係でもよい。
【００５０】
図１５は図１３に示した第９の構成の他の変形例を示しており、図１５では、緯線および経線を構成する記号（文字列）は同一の文字の羅列とし、各緯線または各経線毎に文字を異ならせている。図１５では、緯線には数字を、経線にはアルファベットを用いており、緯線と経線の識別をも行い得るようになっている。また、図１５では、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ方向となるようにしている。なお、記号は、数字またはアルファベットに限られず、数字、アルファベット、その他の文字や図形を単独で、またはこれらの組み合わせで用いてもよい。また、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ向きに限られず、９０度の関係でも、１８０度の関係でもよい。
【００５１】
上述した目印の第１〜第９の構成において、図１６に示されるように、各グリッドに長さを示すスケール（目盛）および該スケールの寸法（長さ）を数字で併記するようにしてもよい。同図では、スケールの寸法は２５μｍとしている。但し、スケール（目盛）の表示のみで、スケールの寸法の併記はなくてもよい。図１０に示した第６の構成において、上述した黒点（ドット）に代えて、このスケールを緯線と経線の交点付近に表示するようにしてもよい。また、スケール（およびその寸法）の標記は、全てのグリッドについて行わなくてもよく、１つおき、あるいは２つおき等であってもよい。
【００５２】
なお、以上説明した実施形態は、本発明の理解を容易にするために記載されたものであって、本発明を限定するために記載されたものではない。従って、上述した実施形態に開示された各要素は、本発明の技術的範囲に属する全ての設計変更や均等物をも含む趣旨である。
【符号の説明】
【００５３】
１１，２１…顕微鏡観察用容器
１２，２２…容器本体
１３，２３…蓋体
１４，２４…収容部
１４ａ，２４ａ…板状部
１４ｂ，２４ｂ…筒状部
Ｍ…目印
Ｘ０〜Ｘ４…経線
Ｙ０〜Ｙ４…緯線
ＩＭ…記号（番地、黒点）
Ｆｉ…観察視野（撮像視野）
ＤＭ…方向表示
【技術分野】
【０００１】
本発明は、顕微鏡を用いて被検査物を観察するために用いられる顕微鏡観察用容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
大学や企業の研究室等においては、生体細胞、生物組織片、微生物、細菌等、もしくはこれらの培養物、またはこれらに薬物や遺伝子等を注入したものの経時的な変化（形態変化、移動等）を顕微鏡で観察し、生物化学的、薬学的な研究等がなされている。顕微鏡としては、実体顕微鏡、蛍光顕微鏡、位相差顕微鏡、微分干渉顕微鏡等の種々の方式のものが存在しており、研究の目的や対象の性質等に応じて適宜選定されて用いられる。なお、近時においては、顕微鏡は接眼レンズを介した目視観察の他に、ＣＣＤ等の撮像素子で撮像してモニタ上に表示し、あるいはパーソナルコンピュータ等に画像データとして記憶して、必要に応じて画像処理等も行い得るようになっている。
【０００３】
このような細胞等の経時変化を顕微鏡で観察する際には、一般に培養容器をも兼ねた顕微鏡観察用容器が用いられる。顕微鏡観察用容器としては、細胞等の被検査物を収容する収容部を備え、この収容部は底面を構成する板状部、および側壁を構成する筒状部を有している。この収容部を単一で備える容器として細胞培養ディッシュ等とも呼ばれるものや複数の収容部を配列的（マトリクス状）に配置したマイクロプレート等とも呼ばれるものがある。
【０００４】
収容部の少なくとも板状部は、照明光を透過させる必要があるため、光透過性の高い材料から形成され、顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係で定められる値よりも薄い板厚とされる必要がある。顕微鏡観察用容器としては、この板状部として、光学的性質が良好で、比較的に薄い板厚でも所望の強度を維持できるガラス板を用い、筒状部等のその余の部分を樹脂で形成したものが知られている（例えば、下記特許文献１または特許文献２参照）。但し、近時においては、光学的性質がガラスに近いあるいはガラスを越え、また機械的強度も十分な樹脂材料が開発されており、樹脂は軽量で成形が容易であること等から、板状部を含む容器の全体を樹脂で製造することも、現在では可能となっている。
【０００５】
ところで、このような顕微鏡観察用容器を用いて被検査物の経時変化を観察する場合には、顕微鏡のステージ上に被検査物を収容した容器を設置し、板状部上の被検査物の一部を拡大して複数箇所において観察（撮像）した後、該ステージ上から一旦取り外して時間をおいて再度ステージ上に設置して、同じ位置、同じ倍率で観察するという動作を何回か繰り返し実施することになる。この場合に、細胞等の形態変化量や移動量を計測し、あるいは前後の観察画像を画像処理により重ね合わせて比較する場合等には、板状部上の位置に関する基準が必要となる。
【０００６】
このような位置基準として、特許文献１または特許文献２には、板状部上に複数の緯線および経線からなる格子状のグリッド座標を設けたものが開示されている。グリッド座標の外側には、各緯線および経線を他の緯線および経線から識別するための記号として、アルファベットや数字が表示されている（例えば、特許文献１の図６、特許文献２の図３参照）。
【０００７】
しかしながら、上述した通り、顕微鏡観察する際には、板状部上の被検査物の任意の一部を拡大した状態で観察するため、グリッド座標の外側に表示された記号は、拡大観察時には顕微鏡の視野内にない場合が多く、顕微鏡視野内に記号が入っていない場合には、記号を含むグリッド座標の全体が顕微鏡視野内に入る程度に倍率を一旦低倍率に設定した上で、観察すべき位置を確認調整した後に、再度所望の拡大倍率に設定して観察する必要があり、そのような作業は煩雑であり、観察に長時間を要するという問題がある。
【０００８】
また、拡大倍率で観察している状態では、顕微鏡視野中に緯線および経線が含まれていても、その緯線および経線が他の緯線および他の経線と識別できないことが多いため、観察している位置を確認できず、誤った位置で観測してしまう場合があるとともに、観察画像を画像データとして画像処理する場合にも、同様にその位置を特定することができないという問題がある。
【０００９】
上記問題について、グリッド座標の中央部分に位置する被検査物を観察する場合を例として、以下に、より具体的に説明する。すわなち、まず、顕微鏡の倍率を低倍率に設定した状態で被検査物の座標位置を確認する。次いで、顕微鏡の倍率を拡大倍率とした状態で、グリッド座標の外側に表示された識別用の記号を見ながら、例えばグリッド座標の縦方向の位置を特定し、ステージの縦方向の位置を固定する。次いで、拡大倍率の設定状態では、グリッド座標の横方向の位置を示す識別用の記号が顕微鏡視野内に入らないため、グリッド座標端部からのグリッドの数をカウントしつつ、グリッド座標の横方向に沿ってステージを移動させて、ステージの横方向の位置を特定してステージの横方向の位置を固定し、この状態で被検査物の観察を行う。しかしながら、ステージの横方向の位置を特定する場合にグリッド数をカウントする必要があり、カウント数の勘違いやカウント間違い等が頻繁に生じ得る。また、被検査物が細胞である場合には、細胞の外形が経時的に変化し得るため、被検査物を視認しただけでは、同一の被検査物を観察しているのか否かの判断ができない。このため、上記手順によれば、被検査物の観察が非常に困難であるという問題がある。
【００１０】
本発明は、このような点に鑑みてなされたものであり、拡大倍率で観察している際に、観察中の位置を容易に認識・特定することができる顕微鏡観察用容器を提供することを目的とする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００１−１７１５７号公報
【特許文献２】特開２００４−２０１６９５号公報
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明によると、顕微鏡を用いて被検査物を観察するための顕微鏡観察用容器であって、前記被検査物を支持する板状部を備え、前記板状部には、所定間隔で配置された複数の緯線および経線により構成されるグリッドが設けられ、前記グリッドは、金型にグリッド線に対応する凸部を形成し、前記凸部を前記板状部に押しつけて凹部を形成する転写を行うことにより形成され、それぞれの前記グリッドの内部と、当該グリッドを形成する前記緯線および前記経線との少なくとも一方には、前記グリッドの絶対位置を識別可能な目印が設けられている顕微鏡観察用容器が提供される。
【００１３】
本発明において、前記板状部を含む容器全体を樹脂で形成することができ、その樹脂としては、脂環式構造を有する樹脂を用いることができる。
【００１４】
また、前記目印としては、前記緯線および前記経線をそれぞれ互いに識別するための特徴により表現されたものを用いることができる。この場合の前記特徴としては、線の本数、線の太さ、線の種類、線に付された記号、およびこれらの少なくとも２つの組み合わせにより表現されているものを用いることができる。さらに、前記特徴としては、前記緯線および／または前記経線を、当該線自体を識別可能な記号によって線状に構成したことにより表現されたものを用いてもよい。
【００１５】
また、本発明において、前記板状部を底面とし、上部に開口を有する筒状部を備えることができ、加えて、前記筒状部の前記開口から挿入される柱状部を有する蓋を備えることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の顕微鏡観察用容器によれば、被検査物を支持する板状部に設けられたそれぞれのグリッドの内部と、当該グリッドを形成する緯線および経線との少なくとも一方に、グリッドの絶対位置を識別可能な目印を設けたので、従来技術のように一旦低倍率に設定して確認する等の作業を行う必要がなく、拡大倍率で観察している際に、観察中の位置を容易に認識・特定することができるという効果がある。
【００１７】
また、拡大観察した画像を画像処理する際に、該画像中にはその位置を識別するための目印が必ず含まれているため、前後の画像データでその観察位置が厳密に一致していなくても、当該目印によって画像処理時に前後の画像を正確に重ね合わせることができる。従って、前後の観察位置を厳密に一致させる必要がなく、作業の容易化を図ることができるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施形態の顕微鏡観察用容器の一例を示す側断面図である。
【図２】図１の顕微鏡観察用容器の容器本体の平面図である。
【図３】本発明の実施形態の顕微鏡観察用容器の他の例を示す側断面図である。
【図４】図３の顕微鏡観察用容器の容器本体の平面図である。
【図５】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第１の構成を示す図である。
【図６】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第２の構成を示す図である。
【図７】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第３の構成を示す図である。
【図８】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第４の構成を示す図である。
【図９】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第５の構成を示す図である。
【図１０】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第６の構成を示す図である。
【図１１】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第７の構成を示す図である。
【図１２】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第８の構成を示す図である。
【図１３】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第９の構成を示す図である。
【図１４】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第９の構成の変形例を示す図である。
【図１５】本発明の実施形態の板状部に配置される目印の第９の構成の他の変形例を示す図である。
【図１６】本発明の実施形態の第１〜第９の構成において、スケールを併記する場合を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施形態に係る顕微鏡観察用容器について、図面を参照して説明する。
【００２０】
〔容器の全体構成〕
図１は本発明の実施形態に係る顕微鏡観察用容器の一例の全体構成を示す側断面図であり、図２は図１の顕微鏡観察用容器の容器本体の構成を示す平面図である。
【００２１】
この顕微鏡観察用容器１１は、細胞培養ディッシュ等とも呼ばれる容器であり、容器本体１２と、蓋体１３とを備えて構成されている。容器本体１２は上面が開口し、下面が閉塞された略円筒状の部材（シャーレ）であり、容器本体１２の底部１２ａの略中央部には被検査物としての細胞等を含む培地を収容する収容部１４が配置されている。この収容部１４は、容器本体１２の底部１２ａの略中央部に凹部が形成されることによって構成され、凹部の底部が被検査物を支持する（または付着させる）ための板状部１４ａとなり、凹部の側面が収容部１４の側壁を構成する筒状部１４ｂとなっている。
【００２２】
板状部１４ａの板厚（肉厚）は、この容器１１を用いて観察する際に用いられる顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係において、所定の厚さとなっている。また、図２に示されているように、板状部１４ａには、拡大観察時に板状部１４ａ内の位置を認識・特定するための目印Ｍが配置されている。この目印Ｍについては、後に詳述する。容器本体１２の側壁１２ｂの開口近傍の部分には、段差１２ｃが形成されている。
【００２３】
蓋体１３は、容器本体１２の上面開口を着脱自在に閉塞する略円板状の部材から構成されており、容器本体１２の段差１２ｃの部分に嵌め合うように円環状の側壁部１３ａが形成されている。なお、図示は省略するが、蓋体１３の下面に、容器本体１２の開口を蓋体１３で閉塞した状態で、内部に画成される空間の酸素を吸収してその濃度を調整するための酸素吸収剤を収容するためのポケット等が設けられていてもよい。生体細胞等は体内と同様に低酸素濃度（例えば、５％程度）下で培養・観察することが望ましい場合があるからである。
【００２４】
図３は本発明の実施形態に係る顕微鏡観察用容器の他の例の全体構成を示す側断面図であり、図４は図３の顕微鏡観察用容器の容器本体の構成を示す平面図である。
【００２５】
この顕微鏡観察用容器２１は、マイクロプレート等とも呼ばれる容器であり、容器本体２２と、蓋体２３とを備えて構成されている。容器本体２２は、底板２２ａ上に、被検査物としての細胞等を含む培地を収容する複数の収容部２４を配列的に設けて構成されている。ここでは、一例として、２×４の合計８個の収容部２４を備えている。但し、収容部２４の個数は、８個未満（例えば２×２の４個）でも、９個以上でもよい。各収容部２４は、上面が開口し、下面が閉塞された略円筒状の筒状部２４ｂを有し、収容部２４の底部（底板２２ａの該収容部に対応する部分）が被検査物を支持する（または付着させる）ための板状部２４ａとなっている。
【００２６】
板状部２４ａ（即ち、底板２２ａ）の板厚（肉厚）は、この容器２１を用いて観察する際に用いられる顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係において、所定の厚さとなっている。また、図４に示されているように、各収容部２４のそれぞれの板状部２４ａには、図１および図２を参照して上述した顕微鏡観察用容器１１と同様に、拡大観察時に板状部２４ａ内の位置を認識・特定するための目印Ｍが配置されている。この目印Ｍについては、後に詳述する。
【００２７】
蓋体２３は、容器本体２２の各収容部２４の上面開口を着脱自在に閉塞する略矩形状の部材から構成されており、各収容部２４の筒状部２４ｂの内側の開口側近傍の部分に遊嵌する柱状部２３ａが各収容部２４に対応して配置されているとともに、筒状部２４ｂの外側に嵌り込むように形成された凸部２３ｂを有している。各収容部２４の開口を閉塞するように蓋体２３を取り付けた状態で、柱状部２３ａは筒状部２４ｂと僅かな隙間をもって挿入されており、収容部２４内に収容され、板状部２４ａ上に支持された培地が液体である場合に該液体の界面（上面）に生じることがあるメニスカスを、この筒状部２３ａの先端面が該液体内に僅かに挿入されることによって解消するものである。メニスカスが生じると該液体の界面近傍がレンズとして作用し、顕微鏡観察する際の誤差となり得るので、このような柱状部２３ａによって、これを防止することができる。
【００２８】
なお、図１および図２、または図３および図４に示した容器の構成は、例示であって、他の構成であってもよい。
【００２９】
〔容器形成材料〕
これらの容器本体１２，２２および蓋体１３，２３は、ガラスを用いて製造してもよいが、軽量であること、成形が容易であること等から樹脂を用いることが好ましい。用いる透明樹脂としては、アクリル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリスチレン、および脂環式構造を有する樹脂等を例示することができる。これらの中でも、脂環式構造を有する樹脂は、流動性が良好であり、顕微鏡の対物レンズの焦点距離等との関係から板状部に要請される板厚（肉厚）程度の薄さでも十分な機械的強度を実現できるとともに、高光透過性、平坦性、均一性、低複屈折性等の容器の板状部を含む光透過部に要請される光学特性を良好に実現できることから好ましい。また、脂環式構造を有する樹脂は、材料に起因する自家蛍光が小さいので、蛍光観察する用途の場合にも問題がなく、耐薬品性にも優れていることから好適である。
【００３０】
脂環式構造を有する樹脂は、主鎖および／または側鎖に脂環式構造を有する樹脂である。機械的強度などの観点から、主鎖に脂環式構造を含有する樹脂が特に好ましい。脂環式構造としては、飽和環状炭化水素（シクロアルカン）構造、不飽和環状炭化水素（シクロアルケン）構造などを挙げることができる。機械的強度などの観点から、シクロアルカン構造やシクロアルケン構造が好ましく、中でもシクロアルカン構造が最も好ましい。脂環式構造を構成する炭素原子数は、格別な制限はないが、通常４〜３０個、好ましくは５〜２０個、より好ましくは５〜１５個の範囲であるときに、機械的強度および成形性等の特性が高度にバランスされ、好適である。脂環式構造を有する樹脂中の脂環式構造を有する繰り返し単位の割合は、通常５０重量％以上、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは９０重量％以上である。
【００３１】
脂環式構造を有する樹脂の具体例としては、（１）ノルボルネン系単量体の開環重合体およびノルボルネン系単量体とこれと開環共重合可能なその他の単量体との開環共重合体、並びにこれらの水素添加物、ノルボルネン系単量体の付加重合体およびノルボルネン系単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との付加共重合体などのノルボルネン系重合体；（２）単環の環状オレフィン系重合体およびその水素添加物；（３）環状共役ジエン系重合体およびその水素添加物；（４）ビニル脂環式炭化水素系単量体の重合体およびビニル脂環式炭化水素系単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との共重合体、並びにこれらの水素添加物、ビニル芳香族系単量体の重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物およびビニル芳香族単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との共重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物などのビニル脂環式炭化水素系重合体；などが挙げられる。
【００３２】
これらの中でも、光学特性や機械的強度等の観点から、ノルボルネン系重合体およびビニル脂環式炭化水素系重合体が好ましく、ノルボルネン系単量体の開環重合体水素添加物、ノルボルネン系単量体とこれと開環共重合可能なその他の単量体との開環共重合体水素添加物、ビニル芳香族系単量体の重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物およびビニル芳香族単量体とこれと共重合可能なその他の単量体との共重合体の二重結合部分（芳香環も含む）の水素添加物がさらに好ましい。
【００３３】
〔目印の構成〕
容器本体１２、２２の被検査物が支持される板状部１４ａ，２４ａの表面（被検査物を支持する面）または裏面（被検査物を支持する面と反対側の面）には、板状部１４ａ，２４ａ内の任意の一部を拡大観察した状態で、該拡大観察している該板状部１４ａ，２４ａ内の位置を板状部１４ａ，２４ａ内の他の位置から識別するための目印Ｍが配置されている。この目印Ｍとしては、例えば、図５に示すような構成（第１の構成）のものを用いることができる。
【００３４】
図５に示す目印Ｍは、複数の緯線（横線）Ｙ０〜Ｙ４…および複数の経線（縦線）Ｘ０〜Ｘ４…を所定間隔でグリッド（格子）状に配置するとともに、各緯線または各経線を他の緯線または経線から識別するための特徴として、緯線および経線の交点の位置を示す記号ＩＭとして番地を該交点近傍に配置して構成されている。緯線および経線としては、ここでは実線を用い、その線幅は１μｍ程度である。
【００３５】
図５中、符号Ｆｉを付した矩形状の枠線は、顕微鏡のステージ上にこの容器１１，２１を設置し、所定の倍率で拡大観察した場合の該顕微鏡の観察視野（または撮像視野）を示している。なお、この観察視野Ｆｉの同図内における位置は、一例であり、顕微鏡のステージを自動または手動で移動させることによって、板状部１４ａ，２４ａ上の任意の位置に移動可能である。観察視野Ｆｉの大きさは、顕微鏡の仕様によるが、被検査物としての細胞の大きさは一般に１００μｍ程度以下であるため、観察倍率を６０倍として、被検面上において、縦１５０μｍ×横２００μｍ程度のものや縦７５μｍ×横１００μｍ程度のものが用いられる。
【００３６】
緯線Ｙ０〜Ｙ４…および経線Ｘ０〜Ｘ４…（以下、両者を含めてグリッド線ともいう）の配設間隔は、被検査物の観察に用いるものとして想定される最も大きい拡大倍率において、グリッド線の各交点のうち、少なくとも１つの交点が観察視野Ｆｉ内に入るように、即ち少なくとも１本の緯線、少なくとも１本の経線が観察視野Ｆｉ内に入るような間隔に設定されている。例えば、最大倍率として６０倍を想定した場合には、緯線の間隔は１５０μｍ未満に、経線の間隔は２００μｍ未満に設定される。ここでは、一例として、緯線および経線の間隔は同じとして、１５０μｍよりも僅かに小さい１４０μｍに設定している。
【００３７】
記号ＩＭとしての番地は、同図では、４桁の数字で表現しており、４桁のうち、上２桁が緯線を識別し、下２桁が経線を識別することを意味している。この表記法により、緯線、経線ともに、００〜９９までの１００本の線の識別が可能である。記号ＩＭの大きさとしては、観察の支障とならない程度になるべく小さく、且つ、観察倍率との関係で識別可能な程度の大きさに設定される。具体的には、一例として、観察倍率を６０倍程度として、１文字の大きさは１０μｍ角程度、文字間スペースは３μｍ程度とすることができる。
【００３８】
グリッド線および記号ＩＭの板状部１４ａ，２４ａに対する形成方法としては、ナノインプリンティングやフォトリソグラフィにより形成することができる。ナノインプリンティングは、金型にグリッド線および記号ＩＭに対応する凸部を形成して、板状部１４ａ，２４ａに押しつけて凹部を形成することにより転写する方法であり、フォトリソグラフィは、薄膜形成、マスク露光、エッチング等により、グリッド線および記号ＩＭをパターニングするものである。但し、グリッド線および記号ＩＭの形成方法としては、これらに限定されず、他の方法を用いてもよい。
【００３９】
次に、目印Ｍの変形例をいくつか説明する。図６は目印の第２の構成を示しており、この第２の構成は、図５に示した第１の構成に係る記号ＩＭの表記法を変更したものであり、２桁のアルファベットで表記したものである。グリッド線の表記は図５と同じである。
この表記法により、緯線、経線ともに、アルファベットＡ〜Ｚまでの２６本の識別が可能である。なお、記号ＩＭの表記法は、図５または図６のような数字やアルファベットによるもの以外に、アルファベット以外の文字や図形等によるものであってもよい。また、数字、文字、図形等のうちの２つ以上を組み合わせたものを用いてもよい。
【００４０】
図５または図６では、単一の線種（実線）によりグリッド線を表示し、これに記号ＩＭを組み合わせることにより、グリッド線の識別を行えるようにしている。これに対し、図７に示す第３の構成では、そのような記号ＩＭを用いてグリッド線を識別するのではなく、グリッド線自体の種類（線種）を互いに異なるものとして、その識別を行えるようにしている。この第３の構成では、グリッド線は実線および点線を用い、点線はその点部分と間欠部分のピッチ（周期）を異なるものとして他の点線と識別できるようにしている。線種としては、実線および点線の他、一点鎖線、二点鎖線等の鎖線を用いることもできる。
鎖線の場合も点線の場合と同様に、その長線部分、短線部分、および間欠部分の周期を異ならせることにより、互いの識別が可能である。
【００４１】
図８は目印の第４の構成を示しており、この第４の構成では、グリッド線として実線を用い、その線幅を異なるものとして、互いを識別できるようにしている。線幅を変更することによる表現単独では、多数の識別は難しいが、グリッド線の数がそれほど多くない場合には、線幅の変更のみによって識別することが可能である。図７に示した線種による表記と図８に示した線幅による表記とを組み合わせてもよく、これにより、さらに多くの識別が可能となる。
【００４２】
図９は目印の第５の構成を示しており、この第５の構成では、グリッド線を実線で表記するとともに、グリッド線と同じ線を付加して複数の線の束からなる線束により互いを識別できるようにしている。１つの線束を構成する複数の線の数が多くなると、やや見えづらくなる懸念があるため、グリッド線の数が多い場合には、例えば、線種や線幅の異なる線と組み合わせて、ローマ数字の如き表記にするとよい。線束を構成する線の線幅は１μｍ程度であり、隣接する線の間隔は２μｍ程度とすることができる。
【００４３】
図１０は目印の第６の構成を示しており、この第６の構成は、図９の線束による表記法を改良したものであり、板状体１４ａ，２４ａの中央部に実線で基準となる緯線Ｙ２および経線Ｘ２を表記し、これらの基準となる緯線および経線から上下または左右に離れる毎に、線束を構成する線の数を増加させている。従って、緯線Ｙ１とＹ３、Ｙ０とＹ４は同じ線束で表現され、経線Ｘ１とＸ３、Ｘ０とＸ４は同じ線束で表現されている。この場合、同じ形態の交点が現れる。例えば、緯線Ｙ１と経線Ｘ１の交点、緯線Ｙ１と経線Ｘ３の交点、緯線Ｙ３と経線Ｘ１の交点、緯線Ｙ３と経線Ｘ３の交点は同じ形態となり、互いを識別することができない。そこで、図１０では、緯線と経線の交点の近傍に記号ＩＭを付すことによって識別できるようにしている。
【００４４】
ここでの記号ＩＭは、単一の黒点（ドット）である。この黒点は、当該交点を原点として、緯線を横軸、経線を縦軸と例えて、第１象限〜第４象限の何れに付されているかで、互いを識別できるようにしている。例えば、緯線Ｙ１と経線Ｘ３の交点に付される黒点は第１象限に、緯線Ｙ１と経線Ｘ１の交点に付される黒点は第２象限に、緯線Ｙ３と経線Ｘ１の交点に付される黒点は第３象限に、緯線Ｙ３と経線Ｘ３の交点に付される黒点は第４象限に付されることにより、互いが識別される。このような表記を用いた場合には、容器１１，１２が顕微鏡のステージに誤って９０°、１８０°または２７０°回転した状態で設置されると、その誤りを識別することができず、不都合である。この場合に対応するため、図１０では、方向を示す方向表示（矢印）ＤＭを表示することによって、容器が顕微鏡のステージに回転して設置されることを防止するようにしている。
【００４５】
なお、細胞中には、膜成分でできた顆粒や細胞核が存在するため、記号ＩＭとしての黒点の径によっては、これらとの区別が困難となるおそれがあるため、用いる黒点の径は、そのような顆粒よりも十分大径とし、細胞核よりも十分小径として、これらから区別できるようにすることが好ましい。黒点の径は、例えば、数μｍ程度に設定することができる。また、記号ＩＭとして、このような黒点ではなく、細胞中には存在することがない、または少ない図形（例えば、三角形や四角形）、幾何学的な模様、あるいは文字（例えば、Ｌ字）等を用いれば、細胞中に存在する模様と明確に区別することができ、都合がよい。
【００４６】
図１１は目印の第７の構成を示しており、この第７の構成では、緯線および経線に、各グリッドに対応するように複数の間欠部を形成し、緯線または経線を他の緯線または経線から識別するための記号として、数字を該間欠部にそれぞれ配置している。なお、記号は、数字に限られず、アルファベットやその他の図形またはこれらの組み合わせを用いてもよい。また、間欠部の形成および記号の標記は、全ての緯線または経線について行わなくてもよく、１つおき、あるいは２つおき等であってもよい。
【００４７】
図１２は目印の第８の構成を示しており、この第８の構成では、緯線および経線の偶数列を比較的に細い実線とし、奇数列を該偶数列と識別するために比較的に太い実線とし、奇数列の緯線および経線にのみ、各グリッドに対応するように複数の間欠部を形成し、緯線または経線を他の緯線または経線から識別するための記号として、数字を該間欠部にそれぞれ配置している。特に、限定はされないが、偶数列の太い緯線または経線の線幅と記号としての数字の大きさとを揃えることが好ましい。なお、記号は、数字に限られず、アルファベットやその他の図形またはこれらの組み合わせを用いてもよい。また、奇数列を太い線とし、偶数列を細い線としてもよいし、細い線にのみ間欠部を形成して記号を配置するようにしてもよい。
【００４８】
図１３は目印の第９の構成を示しており、この第９の構成では、緯線および経線を線分で表現するのではなく、数字およびアルファベットの組み合わせからなる記号を直線状に羅列することにより表現している。図１３では、各緯線または各経線を構成する文字列は互いに同一の表現形式として、グリッドを他のグリッドから識別するためにグリッド毎に構成する記号を異ならせている。また、図１３では、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、９０度の関係となるようにしている。なお、記号は、数字またはアルファベットの組み合わせに限られず、数字、アルファベット、その他の文字や図形を単独で、またはこれらの組み合わせで用いてもよい。また、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、９０度の関係に限られず、同じ向きでも、１８０度の関係でもよい。
【００４９】
図１４は図１３に示した第９の構成の変形例を示しており、図１４では、各緯線または各経線を構成する記号（文字列）を緯線または経線毎に異ならせるとともに、グリッド毎にも異ならせている。また、図１４では、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ方向となるようにしている。なお、記号は、数字またはアルファベットの組み合わせに限られず、数字、アルファベット、その他の文字や図形を単独で、またはこれらの組み合わせで用いてもよい。また、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ向きに限られず、９０度の関係でも、１８０度の関係でもよい。
【００５０】
図１５は図１３に示した第９の構成の他の変形例を示しており、図１５では、緯線および経線を構成する記号（文字列）は同一の文字の羅列とし、各緯線または各経線毎に文字を異ならせている。図１５では、緯線には数字を、経線にはアルファベットを用いており、緯線と経線の識別をも行い得るようになっている。また、図１５では、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ方向となるようにしている。なお、記号は、数字またはアルファベットに限られず、数字、アルファベット、その他の文字や図形を単独で、またはこれらの組み合わせで用いてもよい。また、緯線を構成する文字と経線を構成する文字の向きは、同じ向きに限られず、９０度の関係でも、１８０度の関係でもよい。
【００５１】
上述した目印の第１〜第９の構成において、図１６に示されるように、各グリッドに長さを示すスケール（目盛）および該スケールの寸法（長さ）を数字で併記するようにしてもよい。同図では、スケールの寸法は２５μｍとしている。但し、スケール（目盛）の表示のみで、スケールの寸法の併記はなくてもよい。図１０に示した第６の構成において、上述した黒点（ドット）に代えて、このスケールを緯線と経線の交点付近に表示するようにしてもよい。また、スケール（およびその寸法）の標記は、全てのグリッドについて行わなくてもよく、１つおき、あるいは２つおき等であってもよい。
【００５２】
なお、以上説明した実施形態は、本発明の理解を容易にするために記載されたものであって、本発明を限定するために記載されたものではない。従って、上述した実施形態に開示された各要素は、本発明の技術的範囲に属する全ての設計変更や均等物をも含む趣旨である。
【符号の説明】
【００５３】
１１，２１…顕微鏡観察用容器
１２，２２…容器本体
１３，２３…蓋体
１４，２４…収容部
１４ａ，２４ａ…板状部
１４ｂ，２４ｂ…筒状部
Ｍ…目印
Ｘ０〜Ｘ４…経線
Ｙ０〜Ｙ４…緯線
ＩＭ…記号（番地、黒点）
Ｆｉ…観察視野（撮像視野）
ＤＭ…方向表示
【特許請求の範囲】
【請求項１】
顕微鏡を用いて被検査物を観察するための顕微鏡観察用容器であって、
前記被検査物を支持する板状部を備え、
前記板状部には、所定間隔で配置された複数の緯線および経線により構成されるグリッドが設けられ、
前記グリッドは、金型にグリッド線に対応する凸部を形成し、前記凸部を前記板状部に押しつけて凹部を形成する転写を行うことにより形成され、
それぞれの前記グリッドの内部と、当該グリッドを形成する前記緯線および前記経線との少なくとも一方には、前記グリッドの絶対位置を識別可能な目印が設けられている顕微鏡観察用容器。
【請求項２】
前記板状部を含む全体が樹脂からなる請求項１に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項３】
前記樹脂は脂環式構造を有する樹脂よりなる請求項２に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項４】
前記目印は、前記緯線および前記経線をそれぞれ互いに識別するための特徴により表現されている請求項１〜３の何れか一項に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項５】
前記特徴は、線の本数、線の太さ、線の種類、もしくは線に付された記号、またはこれらの少なくとも２つの組み合わせにより表現されている請求項４に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項６】
前記特徴は、前記緯線および／または前記経線を、当該線自体を識別可能な記号によって線状に構成したことにより表現されている請求項４または５に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項７】
前記板状部を底面とし、上部に開口を有する筒状部を備える請求項１〜６の何れか一項に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項８】
前記筒状部の前記開口から挿入される柱状部を有する蓋体を備える請求項７に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項１】
顕微鏡を用いて被検査物を観察するための顕微鏡観察用容器であって、
前記被検査物を支持する板状部を備え、
前記板状部には、所定間隔で配置された複数の緯線および経線により構成されるグリッドが設けられ、
前記グリッドは、金型にグリッド線に対応する凸部を形成し、前記凸部を前記板状部に押しつけて凹部を形成する転写を行うことにより形成され、
それぞれの前記グリッドの内部と、当該グリッドを形成する前記緯線および前記経線との少なくとも一方には、前記グリッドの絶対位置を識別可能な目印が設けられている顕微鏡観察用容器。
【請求項２】
前記板状部を含む全体が樹脂からなる請求項１に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項３】
前記樹脂は脂環式構造を有する樹脂よりなる請求項２に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項４】
前記目印は、前記緯線および前記経線をそれぞれ互いに識別するための特徴により表現されている請求項１〜３の何れか一項に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項５】
前記特徴は、線の本数、線の太さ、線の種類、もしくは線に付された記号、またはこれらの少なくとも２つの組み合わせにより表現されている請求項４に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項６】
前記特徴は、前記緯線および／または前記経線を、当該線自体を識別可能な記号によって線状に構成したことにより表現されている請求項４または５に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項７】
前記板状部を底面とし、上部に開口を有する筒状部を備える請求項１〜６の何れか一項に記載の顕微鏡観察用容器。
【請求項８】
前記筒状部の前記開口から挿入される柱状部を有する蓋体を備える請求項７に記載の顕微鏡観察用容器。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２０１３−１０１３９１（Ｐ２０１３−１０１３９１Ａ）
【公開日】平成２５年５月２３日（２０１３．５．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１３−２２９８９（Ｐ２０１３−２２９８９）
【出願日】平成２５年２月８日（２０１３．２．８）
【分割の表示】特願２００８−８３２９３（Ｐ２００８−８３２９３）の分割
【原出願日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（０００２２９１１７）日本ゼオン株式会社 (1,870)
【出願人】（５０４１７１１３４）国立大学法人 筑波大学 (510)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年５月２３日（２０１３．５．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２５年２月８日（２０１３．２．８）
【分割の表示】特願２００８−８３２９３（Ｐ２００８−８３２９３）の分割
【原出願日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（０００２２９１１７）日本ゼオン株式会社 (1,870)
【出願人】（５０４１７１１３４）国立大学法人 筑波大学 (510)
【Ｆターム（参考）】
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