髄膜炎菌外膜ベシクルに関する改良
【課題】髄膜炎菌外膜ベシクル（ＯＭＶ）ワクチンを調製するための方法を提供すること。
【解決手段】本方法は、ワクチンの製造における使用のために（ｉ）髄膜炎菌性髄膜炎の発生と関連する髄膜炎菌株の血清サブタイプを同定する工程；および（ｉｉ）工程（ｉ）において同定された血清サブタイプを有する髄膜炎菌由来のＯＭＶを調製する工程を包含する。本方法は、（ｉｉｉ）ワクチンとして前記ＯＭＶを処方する工程；および（ｉｖ）前記発生により影響されるかまたは影響されるであろう地理的領域に前記ワクチンを配給する工程のさらなる工程のうちの１つまたは両方を包含し得る。この髄膜炎菌株は代表的に血清群Ｂであるが、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙなどに代わり得る。
【解決手段】本方法は、ワクチンの製造における使用のために（ｉ）髄膜炎菌性髄膜炎の発生と関連する髄膜炎菌株の血清サブタイプを同定する工程；および（ｉｉ）工程（ｉ）において同定された血清サブタイプを有する髄膜炎菌由来のＯＭＶを調製する工程を包含する。本方法は、（ｉｉｉ）ワクチンとして前記ＯＭＶを処方する工程；および（ｉｖ）前記発生により影響されるかまたは影響されるであろう地理的領域に前記ワクチンを配給する工程のさらなる工程のうちの１つまたは両方を包含し得る。この髄膜炎菌株は代表的に血清群Ｂであるが、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙなどに代わり得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中の引用されるすべての文書は、その全体が参照として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、免疫化の目的のための髄膜炎菌性の外膜ベシクルの分野にある。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）による感染に対して免疫化する種々のアプローチの１つは、外膜ベシクル（ＯＭＶ）の使用である。血清型Ｂに対する効果的なＯＭＶワクチンは、ノルウェー公衆衛生国立研究所（ｔｈｅ Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ）［「ＭｅｎＢｖａｃＴＭ」；例えば非特許文献１］により生産されてきたが、本ワクチンは安全でありＭｅｎＢ疾患を予防するにもかかわらず、効果は、このワクチンを作成するために使用される同種の血清型に限定される。
【０００４】
「ＲＩＶＭ」ワクチンは、６つの異なるＰｏｒＡサブタイプを含むＯＭＶをベースにしている。これは臨床試験のフェーズＩＩにおいて、子供について免疫原性であることが示されている［非特許文献２］。
【０００５】
特許文献１〜３は、６５−ｋＤａのタンパク質複合体を保持するＯＭＶをベースにした血清群Ｂの髄膜炎菌の異なる病原性血清型に対するワクチンを開示する。特許文献４は、遺伝子改変した髄膜炎菌株由来のＯＭＶを含むワクチンを開示し、本ＯＭＶは：少なくとも１つのクラス１外膜タンパク質（ＯＭＰ）を含むがクラス２／３ＯＭＰは含まない。特許文献５および特許文献６は、表面ループにおける変異を有するＯＭＰを含むＯＭＶおよび髄膜炎菌性のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）の誘導体を含むＯＭＶを開示する。特許文献７は、血清群Ａの髄膜炎菌のためのＯＭＶベースのワクチンを調製するためのプロセスを開示する。
【０００６】
ＯＭＶ効果を改善するための種々の提唱が存在する。特許文献８は、トラスフェリン結合タンパク質（例えば、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ）ならびに／またはＣｕ、Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼを補充したＯＭＶを含む組成物を開示する。特許文献９は、種々のタンパク質により補充されたＯＭＶを含む組成物を開示する。特許文献１０は、改変したｆｕｒ遺伝子を有するＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから得られる膜のベシクルの調製を開示する。特許文献１１は、ｎｓｐＡ発現が随伴性のｐｏｒＡおよびｃｐｓノックアウトでアップレギュレートされるはずであることを教示している。ＯＭＶ産生のためのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのさらなるノックアウト変異体が、特許文献１１〜１３に開示される。発現パターンの改変によりＯＭＶを改善するこれらの試みと対照的に、特許文献１４は、ＯＭＶ調製の方法を改変することに焦点を置いており、デオキシコール酸のような界面活性剤の使用を避けることにより、ベシクル抽出中、ＮｓｐＡのような抗原が、保持され得ることを教示する。
【０００７】
髄膜炎菌性ＯＭＶは非同種血清型に対する交差防御を惹起することができないことが、一般的なワクチンとしてのそれらの使用を限定している。しかし、髄膜炎菌性ＯＭＶは、本質的にクローン性である病原性株により疾患が特徴づけられる流行性の状況においては、非常に有用であり得る。従って、Ｆｉｎｌａｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅワクチン（ＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＣＴＭ）は、血清群Ｂの疾患がＰ１．１９，１５血清型により支配されるラテンアメリカにおいて有用であるが、他の場所では効果的ではない［非特許文献３］。同様に、Ｃｈｉｒｏｎ ＭｅＮＺＢＴＭワクチンは、１９９１年以来ニュージーランドにおいて流行してきた病原性株（Ｐ１．７ｂ，４、近年の命名によりＰ１．７−２，４として公知である）を標的としている。
【０００８】
参考文献１１は、多価の髄膜炎菌性ブレブの組成物を含有するワクチンを開示し、使用国において流行している血清型をもつ髄膜炎菌株由来の第１のブレブ、および使用国において流行している血清型を必ずしも有さない髄膜炎菌株由来の第２のブレブを含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第５，５９７，５７２号
【特許文献２】米国特許第５，７４７，６５３号
【特許文献３】欧州特許第０３０１９９２号
【特許文献４】欧州特許第０４４９９５８号
【特許文献５】米国特許第５，７０５，１６１号
【特許文献６】国際出願公開ＷＯ９４／０８０２１
【特許文献７】国際出願公開ＷＯ０１／９１７８８
【特許文献８】国際出願公開ＷＯ００／２５８１１
【特許文献９】国際出願公開ＷＯ０１／５２８８５
【特許文献１０】国際出願公開ＷＯ９８／５６９０１
【特許文献１１】国際出願公開ＷＯ０２／０９７４６
【特許文献１２】国際出願公開ＷＯ０２／０６２３７８
【特許文献１３】国際出願公開ＷＯ２００４／０１４４１７
【特許文献１４】国際出願公開ＷＯ２００４／０１９９７７
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｂｊｕｎｅら、Ｌａｎｃｅｔ３３８（８７７５）：１０９３〜１０９６、１９９１年
【非特許文献２】ｄｅ Ｋｌｅｉｊｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ ２０：３５２〜３５８、２００１年
【特許文献３】Ｓａｃｃｈｉら、Ｒｅｖ Ｉｎｓｔ Ｍｅｄ Ｔｒｏｐ Ｓａｏ Ｐａｕｌｏ ４０：６５〜７０、１９９８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、さらに改良された髄膜炎菌性ＯＭＶの調製物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の開示）
ＭｅＮＺＢＴＭを用いた実績は、特定の病原性株を標的としたＯＭＶが、局在化した疾患の発症を制御する点において非常に効果的であり得ることを示している。大量かつ再現可能な製造技術の組合せにおいて、ワクチンは、発症後急激に生産され得る。従って、本発明は、髄膜炎菌性の外膜ベシクル（ＯＭＶ）ワクチンを調製するための方法を提供し、この方法は：（ｉ）髄膜炎菌性髄膜炎の発症と関連する髄膜炎菌株の血清サブタイプを同定する工程；（ｉｉ）ワクチンの製造において使用するために、工程（ｉ）で同定された血清型を有する髄膜炎菌株由来のＯＭＶを調製する工程を包含する。本方法は、：（ｉｉｉ）ワクチンとして前記ＯＭＶを処方する工程；および（ｉｖ）前記発症により影響されるかまたは影響されそうな地理的領域において前記ワクチンを配布する工程のさらなる工程；のうちの１つまたは両方を包含し得る。本発明はまた、同じ方法を提供するが、関連する血清型がすでに同定されている状況に関しては工程（ｉ）を省略する。髄膜炎菌株は、代表的に血清型Ｂであるが、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙなどに代わられ得る。
【００１３】
ＭｅＮＺＢＴＭを用いた実績は、ＯＭＶが髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの単独かまたは組み合わせかのいずれかに対して免疫化するのに有用であり、そしてこれらは近年提案される結合体化ワクチンより製造するのに安価であり得ることを本発明者らに示している。従って、本発明は：（ａ）髄膜炎菌の血清型Ｃ株由来の外膜ベシクルを含有する組成物；（ｂ）髄膜炎菌の血清型Ｗ１３５株由来の外膜ベシクルを含有する組成物；（ｃ）髄膜炎菌の血清型Ｙ株由来の外膜ベシクルを含有する組成物；および（ｄ）髄膜炎菌の血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの２つ以上由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供する。（ｄ）の中で、好ましい組成物としては、以下の血清群混合物：Ａ＋Ｂ；Ａ＋Ｃ；Ａ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ；Ｂ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５；Ｃ＋Ｙ；Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ；Ａ＋Ｂ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｙ；Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｃ＋Ｙ；Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；およびＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙが挙げられる。
【００１４】
莢膜下抗原（ｓｕｂ−ｃａｐｓｕｌａｒ ａｎｔｉｇｅｎ）は血清群間で共有されるので、ＯＭＶ（およびＯＭＶ混合物）は、それらが調製される血清群より多くの血清群に対して防御し得る。例えば、サハラ南下アフリカにおいてみられる血清群Ａ株および血清群Ｗ１３５株由来の莢膜下抗原は、世界のその他の場所でみられる血清群Ｃ株およびＹ群によって共有される。従って、本発明は、第２の血清群の１つ以上の髄膜炎菌株に対して防御するために、第１の血清群の髄膜炎菌株由来のＯＭＶの使用を提供し、ここで前記第１および第２の血清群は異なる。本株は、好ましくは莢膜下抗原を共有し、そして、それらが異なる血清型を有するとはいえ、同じサブタイプ、血清型および／または免疫型を有し得る。血清群ＡおよびＷ１３５由来のＯＭＶ混合物が好ましく、血清群ＣおよびＹ由来のＯＭＶ混合物も同様である。
【００１５】
ＭｅＮＺＢＴＭを用いた実績はまた、ニュージーランドＯＭＶ、ノルウェーＯＭＶおよびキューバＯＭＶに使用される株由来のＯＭＶ混合物が有用に効果的であることを、本発明者らに示している。従って、本発明は：（ｉ）血清サブタイプＰ１．７ｂ，４髄膜炎菌；（ｉｉ）血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌；および（ｉｉｉ）血清サブタイプＰ１．９，１５髄膜炎菌の２つまたは３つ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供する。異なるＯＭＶは、好ましくは混合物であるが、あるいはキット内の別個の容器中に存在し得る。
【００１６】
異なる血清サブタイプ由来のＯＭＶを組み合わせることにより、本発明者らは、個々の血清サブタイプの用量が効果の喪失なしに減少され得ることを見出している。総タンパク質として測定される場合、ＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＴＭは、５０μｇのＯＭＶ（０．５ｍｌ容量）を含有し、ＨｅｘａＭｅｎＴＭは約１ｍｇのＯＭＶ（０．３ｍｌ容量）を含有し、そしてＭｅｎＢＶａｃＴＭおよびＭｅＮＺＢＴＭの両方は２５μｇのＯＭＶ（０．５ｍｌ容量）を含有するが、本発明者らは、混合物が使用される場合、個々のＯＭＶの用量が効果の喪失なしに減少され得ることを見出している。従って本発明は、第１の髄膜炎菌血清サブタイプおよび第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供し、ここで第１の血清サブタイプ由来のＯＭＶの濃度は４５μｇ／ｍｌより少なく、第２の血清サブタイプ由来のＯＭＶ濃度は４５μｇ／ｍｌより少ない。本発明はまた、少なくとも２つの髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供し、ここでＯＭＶを組み合わせた濃度は９０μｇ／ｍｌより少ない。本発明はまた、ｎ個の異なる髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供し、ここで各ｎ個のサブタイプ由来のＯＭＶの濃度は４５μｇ／ｍｌより少ない（すなわち、４５μｇ／ｍｌより少ない総ＯＭＶ用量）。ｎの値は、１、２、３、４、５、６、などであり得る。
【００１７】
本発明はまた、ｎ個の異なるサブタイプから調製されるＯＭＶを含有するキットを提供する。ベシクルは、一緒に用いられる（例えば、混合物として、あるいは同時に別々に使用するかまたは連続して使用するために）ことが必要とされるまで、キット中に別々に維持および貯蔵され得る。同様に、本発明は：各ｎの異なるサブタイプ由来の、ｎセットのＯＭＶを調製する工程；およびｎセットのベシクルの組み合わせる工程を包含するプロセスを提供する。異なるセットは、キット中または混合物中で組み合わされ得る。
【００１８】
本発明はまた、Ｐ１．７ｂ，４血清サブタイプを有する血清群Ｂの髄膜炎菌株から調製されるＯＭＶを含有する組成物を提供し、ここで組成物におけるＯＭＶの濃度は、約５０μｇ／ｍｌである。本組成物は、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバントおよびヒスチジン緩衝液を含む。本組成物は、約０．５ｍｌの投薬容量で与えられ得る。
【００１９】
（ベシクル）
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから調製される外膜ベシクル（ＯＭＶ）をベースにする。
【００２０】
用語「ＯＭＶ」は、外膜のタンパク質成分を含む外膜のベシクルを形成するために細菌性外膜を破裂させることにより得られる任意のタンパクリポソーム性のベシクルを含む。ＯＭＶは、細菌から人工的に調製される（例えば、界面活性剤処置により、または非界面活性剤的手法により）［２９］。本用語はまた、ブレブ、マイクロベシクル（ＭＶ［１２］）および「天然のＯＭＶ」（「ＮＯＭＶ」［１３］）を包含する。これらは、細菌増殖の間に同時に形成する自然に発生する膜ベシクルであり、培養培地中に放出される。ＭＶは、ブロス培養培地中でナイセリアを培養し、全細胞をブロス培養培地中の小さなＭＶから分離し（例えば、濾過または低速の遠心により小さなベシクルではなく細胞のみをペレットにする）、次いで細胞枯渇培地（ｃｅｌｌ−ｄｅｐｌｅｔｅｄ ｍｅｄｉｕｍ）からＭＶを回収する（例えば、濾過により、ＭＶの沈降または凝集の差により、低速の遠心によりＭＶをペレットにすることにより）ことによって得られ得る。ＭＶの産生に使用するための株は、一般的に、培養物中に産生されるＭＶの量をベースに選択され得る（例えば、参考文献１４および１５は、高いＭＶ産生を有するナイセリアを記載する）。
【００２１】
ＯＭＶは、種々の方法で調製され得る。適した調製物を得るための方法は、例えば本明細書中に引用される参考文献に開示される。ＯＭＶを形成するための技術としては、胆汁酸塩界面活性剤（例えば、リトコール酸、ケノデキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、コール酸、ウルソコール酸など、デオキシコール酸ナトリウム［１６および１７］が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａを処置するのに好ましい）を、界面活性剤が沈殿しない十分高いｐＨで、細菌を処理することが挙げられる［６］。他の技術としては、超音波処理、ホモジナイズ、ミクロ流体化、キャビテーション、浸透ショック、粉砕、フレンチプレス（Ｆｒｅｎｃｈ ｐｒｅｓｓ）、混合などのような技術を使用して、実質的に界面活性剤非存在［２９］において実施され得る。
【００２２】
ＯＭＶ調製のための好ましい方法としては、粗製ＭＶにおける高速の遠心分離に代わり、限外濾過［１８］が挙げられる。これは、非常に大量のＯＭＶ含有上清を非常に短い時間（代表的に４時間で＞１５リットル、１０時間で＜１．５リットルに比較して）で処理することを可能にし、遠心分離後ＯＭＶを再分散させる必要性を回避する。超遠心は、大量のＯＭＶをより簡単に調製させ、ワクチンの調製における使用のために選択した株からのＯＭＶの迅速な産生を可能にする。
【００２３】
（ワクチン調製のために用いられる髄膜炎菌株）
目的の髄膜炎菌株血清サブタイプの同定は、クラスＩポーリン外膜タンパク質（ＰｏｒＡ）をベースにして標準的な技術を用いて達成され得る。一度血清サブタイプが決定されると、同じサブタイプを共有する他の公知の株を探索するのが慣習的である。他の株は、第１の株と血清群および／または血清型（ＰｏｒＢ）を共有し得るが、これは必ずしもそうではない。しかしながら、一般的に、血清群および血清型の両方に適合することが好まれる。
【００２４】
本発明に従って使用される髄膜炎菌株は、一般的に、以下の血清群：Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５またはＹのうちの１つである。
【００２５】
本発明に従って使用される髄膜炎菌株は、一般的に、多数の血清型（すなわち複数のＰｏｒＡアレル）を発現する株ではない。従って、本発明を使用するために好まれる細菌は、単一のＰｏｒＡ配列を発現する（すなわち、単一血清サブタイプである）。
【００２６】
ＰｏｒＡがダウンレギュレーションされている株、例えば、野生型レベルに比較して（参考文献１１に開示されるように、例えば株Ｈ４４／７６に比較して）ＰｏｒＡの量が少なくとも２０％減少されている（例えば、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、≧９５％など）か、またはノックアウトすらされている株を使用することもまた可能である。
【００２７】
本発明に従って使用される髄膜炎菌株は、いずれかの血清型（例えば、１、２ａ、２ｂ、４、１４、１５、１６など）および／またはいずれかの免疫型（例えば、Ｌ１；Ｌ３，３，７；Ｌ１０；など）であり得る。髄膜炎菌は、任意の適した系統に由来し得る。この系統としては、高侵襲性系統および高毒性系統、例えば以下の７つの高毒性系統：サブグループＩ；サブグループＩＩＩ；サブグループＩＶ−１；ＥＴ−５複合体；ＥＴ−３７複合体；Ａ４クラスター；系統３が挙げられる。これら系統は、多座位酵素電気泳動（ＭＬＥＥ）により規定されるが、多座位配列タイピング（ＭＬＳＴ）もまた髄膜炎菌を分類するために使用されており［参考文献１９］、例えばＥＴ−３７複合体はＭＬＳＴによりＳＴ−１１であり、ＥＴ−５複合体はＳＴ−３２（ＥＴ−５）であり、系統３はＳＴ−４１／４４である。
【００２８】
髄膜炎菌は、１つ以上の遺伝子のノックアウト変異を有し得る。発熱活性を減少させるために、例えば、細菌は、低い毒素（ＬＰＳ）レベルを有するべきであり、これはＬＰＳ生合成に関する酵素をノックアウトすることにより達成され得る。適した突然変異細菌は、例えばすでに公知の突然変異株Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ［２０、２１］および突然変異株Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ［２２］である。グラム陰性細菌からＬＰＳ欠損外膜を調製するためのプロセスは、参考文献２３に開示される。
【００２９】
特異的タンパク質のダウンレギュレートされた発現と同様に、細菌はＮｓｐＡ、プロテイン２８７［８］、プロテイン７４１［３０］、ＴｂｐＡ［７］、ＴｂｐＢ［７］、スーパーオキシドジスムターゼ［７］などのような免疫原を過剰発現し得る（対応する野生型株に比較して）。
【００３０】
特定の内因性遺伝子のノックアウトすることと同様に、細菌は、内因性ではない１つ以上の遺伝子を発現し得る。例えば、本発明は、対応する野生型株と比べ新しい遺伝子を発現する組み換え株を使用し得る。この様式における非内因性遺伝子の発現は、種々の技術、例えば、染色体挿入（同義ＰｏｒＡ遺伝子を誘導するために使用されるように［２４］）、ノックイン変異株、余剰染色体ベクターからの発現（例えば、プラスミドから）などにより達成され得る。
【００３１】
細菌はまた、参考文献２５〜３０に開示される１つ以上のノックアウト変異および／または過剰発現を含み得る。ダウンレギュレーションおよび／またはノックアウトのための好ましい遺伝子としては、：（ａ）Ｃｐｓ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｂｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［２５]；（ｂ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｂｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｈｏＰ、ＰｉｌＣ、ＰｍｒＥ、ＰｍｒＦ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［２６］；（ｃ）ＥｘｂＢ、ＥｘｂＤ、ｒｍｐＭ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＧａｌＥ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［２７]；ならびに（ｄ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＯｐＡ、ＯｐＣ、
ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＤ、ＳｙｎＡ、ＳｙｎＢおよび／またはＳｙｎＣ［２８］が挙げられる。
【００３２】
異なる血清サブタイプに基づいてＯＭＶを組み合わせるのと同様に、組み合わせは、他の基準に従って作成され得る。基準の例としては：血清型（ＰｏｒＢ、クラス２または３ＯＭＰ）；免疫型（リポポリサッカリドまたはリポオリゴサッカリド）；株の地理的起源；臨床株の地域的罹患率；高毒性系統（例えば２つ以上のサブグループＩ、サブグループＩＩＩ、サブグループＩＶ−１、ＥＴ５複合体、ＥＴ３７複合体、Ａ４クラスターおよび系統３）；多座配列型（ＭＬＳＴ）［１９］；３つの異なるＮＢ１８７０改変体の１つ以上［３１］が挙げられる。
【００３３】
（ＯＭＶ投薬）
現在の髄膜炎菌ＯＭＶワクチンは、本発明を実施するために薬学的ガイダンス、薬量学的ガイダンスおよび処方ガイダンスを提供する。例えば、ＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＣＴＭは、０．５ｍｌにおいて注射可能な懸濁剤であり、０．０１％チオメルサールおよびリン酸緩衝液を加えた２ｍｇの水酸化アルミニウムゲルに吸着させたＣｕ−３８５−８３株由来のＯＭＶ５０μｇおよび血清群Ｃ莢膜サッカリド５０μｇを含有する。ＭｅＮＺＢＴＭはまた、０．５ｍｌ懸濁液であり、ヒスチジン緩衝液および塩化ナトリウムを添加した１．６５ｍｇの水酸化アルミニウムアジュバントに吸着させたＮＺ９８／２５４株由来のＯＭＶ２５μｇを含有する。ＭｅｎＢｖａｃは、ＭｅＮＺＢＴＭに類似しているが、４４／７６株から調製される。
【００３４】
各サブタイプについてＯＭＶの濃度は、患者への投与後に防御免疫を提供するのに十分高い。本発明の組成物におけるＯＭＶの濃度は、一般的に１０μｇ／ｍｌと５００μｇ／ｍｌとの間であり、好ましくは２５μｇ／ｍｌと２００μｇ／ｍｌとの間であり、さらに好ましくは約５０μｇ／ｍｌまたは約１００μｇ／ｍｌである（ＯＭＶにおける総タンパク質により表される）。
【００３５】
しかしながら、組成物が１つより多い髄膜炎菌血清サブタイプ由来のＯＭＶを含有する場合、本発明者らは、個々の血清サブタイプの投薬が効果の喪失なしに減少され得ることを見出している。ニュージーランドサブタイプおよびノルウェーサブタイプの投薬は、免疫原性の喪失なしに０．５ｍｌ用量で２５μｇから１２．５μｇに半減され得る。従って、１つより多い髄膜炎菌サブタイプ由来の外膜ベシクルを含む本発明の組成物は、ＭｅｎＢｖａｃＴＭおよびＭｅＮＺＢＴＭにの単純な混合をベースに経験的に予測される１００μｇ／ｍｌ未満、ＭｅｎＢｖａｃＴＭまたはＭｅＮＺＢＴＭのいずれかとＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＣＴＭの単純な混合をベースに経験的に予測される１５０μｇ／ｍｌ未満を含む。従って、そのような本発明の組成物は、９０μｇ／ｍｌ以下（例えば、８０μｇ／ｍｌ、７０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ以下、またはさらに低い）の合わせたＯＭＶ濃度を有する。
【００３６】
さらに一般的に、組成物がｎ個の異なる髄膜炎菌サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する場合、各サブタイプ由来のＯＭＶ濃度は４５μｇ／ｍｌより少ない（例えば、４０μｇ／ｍｌ、３５μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ未満またはさらに低い）。約２５μｇ／ｍｌの濃度が好ましい。
【００３７】
組成物がｎの異なる髄膜炎菌サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する場合、各サブタイプのＯＭＶ量は、好ましくは、互いの±１０％以内である、すなわちこの組成物は、実質的に等しい量の各ＯＭＶを含有する。しかしながら、ある場合において、１つのサブタイプの量は、別のサブタイプの量より約ｘ倍多く、ここでｘは、２、３または４であり得、例えばこの組成物は、本組成物において、他のサブタイプに比較して２倍量の１つのサブタイプを含有する。
【００３８】
（ＯＭＶを含有する薬学的組成物）
本発明の組成物は、薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物であり得る。そのような組成物は、ＯＭＶを薬学的に受容可能なキャリアと混合する工程を包含するプロセスを使用して調製され得る。
【００３９】
代表的な「薬学的に受容可能なキャリア」としては、上記組成物を受ける個体に害のある抗体の産生をそれ自体では誘導しない任意のキャリアが挙げられる。適したキャリアは、代表的に、タンパク質、ポリサッカリド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合アミノ酸、アミノ酸コポリマーおよび脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）のような大きなゆっくり代謝される巨大分子である。そのようなキャリアは、当業者において周知である。本ワクチンはまた、水、生理食塩水、グリセロールなどのような希釈剤を含む。さらに、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝化剤、スクロースなどのような補助剤が存在し得る。無菌の発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理学的食塩水が、代表的なキャリアである（例えば、注射用水をベースに）。薬学的に受容可能な賦形剤の完全な考察は、参考文献３２において入手可能である。
【００４０】
本発明の組成物は、代表的に乾燥した形態（例えば、凍結乾燥）よりむしろ水溶性の形態（例えば、溶液または懸濁剤）である。水溶性組成物はまた、凍結乾燥した形態から他のワクチンを再構成するのに適している（例えば、凍結乾燥Ｈｉｂ結合体化ワクチン、凍結乾燥髄膜炎菌結合体化ワクチンなど）。本発明の組成物が、そのような即席の再構成に使用される場合、本発明は、キットを提供し得る。このキットは、注射する前に、バイアルの乾燥させた内容物を反応させるために使用されるシリンジの水溶性内容物とともに、２つのバイアルを含み得るかまたは１つのすでに充填されたシリンジおよび１つのバイアルを含み得る。
【００４１】
本発明の組成物は、バイアル中に存在し得るか、すでに充填されたシリンジ中に存在し得る。本シリンジは、針とともにまたは針無しで供給され得る。組成物は、単位用量形態または複数回用量形態で包装され得る。シリンジは、一般的に単回用量の組成物を含有する一方で、バイアルは、単回用量または複数回用量を含有し得る。そのため複数回用量形態のためには、あらかじめ充填されたシリンジに対してバイアルが好ましい。
【００４２】
効果的な投薬容量は慣習的に確立され得るが、組成物の代表的なヒト用量は、例えば、筋肉内注射に関しては約０．５ｍｌの容量を有する。ＲＩＶＭ ＯＭＶベースワクチンは、大腿部または上腕部への筋肉内注射により０．５ｍｌ容量で投与された［３３］。ＭｅＮＺＢＴＭは、大腿部の前外側または腕の三角筋部への筋肉内注射により０．５ｍｌで投与される。同様な用量が、他の送達ルートのために使用され得、例えば噴霧のための鼻内ＯＭＶベースワクチンは、スプレーあたり約１００μｌまたは約１３０μｌの容量を有し得［１３］、約０．５ｍｌの全用量を与えるためには４回のスプレーが投与される。
【００４３】
本組成物のｐＨは、好ましくは６と８との間であり、さらに好ましくは、６．５と７．５との間（例えば、約７）である。ＲＩＶＭ ＯＭＶベースワクチンのｐＨは、７．４［３４］であり、ｐＨ＜７．５が本発明の組成物において好ましい。安定なｐＨは、緩衝液、例えばＴｒｉｓ緩衝液、リン酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液の使用により維持され得る。本発明の組成物は一般的に緩衝液を含有する。組成物が水酸化アルミニウムを含む場合、例えば、１〜１０ｍＭの間、好ましくは約５ｍＭにおけるヒスチジン緩衝液の使用が好しい［３５］。ＲＩＶＭ ＯＭＶベースワクチンは、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液を使用することによりｐＨを維持する。組成物は、滅菌および／または発熱物質なしであり得る。本発明の組成物は、ヒトに対して等張性であり得る。
【００４４】
本発明の組成物は、免疫原性であり、より好ましいワクチン組成物である。本発明に従うワクチンは、予防的（すなわち、感染を予防する）であるかまたは治療的（すなわち、感染を処置する）のいずれかであり得るが、代表的には予防的である。ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効量の抗原、および必要に応じて、任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回用量または一連の投与の一部のいずれかで、個体に投与する量が、処置または予防に関して有効であることを意味する。この量は、治療される個体の健康および身体的状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個々の免疫システムの能力、所望される防御の度合い、ワクチンの処方、医学的状態に関する処置医の評価および他の関連要因に依存して変化する。この量は、比較的広い範囲になることが予測され、この範囲は、通常の試験を通して決定され得る。本発明の組成物の抗原含有量は、一般的に、１用量あたりのタンパク質量で表される。１ｍｌあたり約０．９ｍｇの用量が、ＯＭＶベースの鼻腔内ワクチンについて代表的である［１３］。
【００４５】
髄膜炎菌は、身体の種々の領域に影響を与え、そしてそのため、本発明の組成物は種々の形態で調製され得る。例えば、本組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射可能物として調製され得る。本組成物は、肺投与（例えば、吸入のような）として、微細粒子またはスプレーを使用して調製され得る。本組成物は、坐剤または膣坐剤として調製され得る。本組成物は、鼻内、耳内または眼内投与のために、例えば、スプレー、液滴、ゲルまたは粉末として調製され得る［例えば、参考文献３６および３７］。筋肉内投与のための注射可能物が代表的である。
【００４６】
本発明の組成物としては、特に複数回用量フォーマットで包装される場合、抗菌薬を含有し得る。チオメルサールおよび２−フェノキシエタノールのような抗菌薬は、一般的にワクチンにおいて見出されるが、水銀を含まない防腐剤を使用するかまたは全く防腐剤を使用しないかのいずれかが好ましい。
【００４７】
本発明の組成物は、界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含み得る。界面活性剤は、一般的に低レベル、例えば＜０．０１％で存在する。
【００４８】
本発明の組成物は、ＯＭＶ調製に由来する残留界面活性剤（例えば、デオキシコール酸）を含み得る。残留界面活性剤の量は、タンパク質１μｇごとについて０．４μｇより少ないことが好ましい（さらに好ましくは、０．２μｇより少ない）。
【００４９】
本発明の組成物は、髄膜炎菌由来のＬＰＳを含み得る。ＬＰＳの量は、好ましくは、タンパク質１μｇごとについて０．１２μｇより少ないことが好まれる（さらに好ましくは、０．０５μｇより少ない）。
【００５０】
本発明の組成物としては、張性を与えるためのナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。１０±２ｍｇ／ｍｌの濃度のＮａＣｌが代表的である。塩化ナトリウムの濃度は好ましくは、約９ｍｇ／ｍｌである。
【００５１】
本発明の組成物は、一般的に他の免疫調節物質との結合体において投与される。特に、組成物は、通常１つ以上のアジュバントを含み、本発明は、本発明の組成物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、本発明のベシクルをアジュバント、例えば薬学的に受容可能なキャリアと混合する工程を包含する。適したアジュバントとしては以下が挙げられるが、これらに限定されない：
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明における、アジュバントとしての使用に適したミネラル含有組成物としては、アルミニウム塩およびカルシウム塩のような無機塩類が挙げられる。本発明は、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩などのミネラル塩などのような無機塩類［例えば、参考文献３８の第８章および第９章を参照のこと］、または異なるミネラル化合物の混合物を含み、この化合物は任意の適した形態（例えば、ゲル、結晶、非結晶など）をとり、吸着することが好ましいとされる。ミネラル含有組成物はまた、金属塩の粒子として処方され得る［３９］。
【００５２】
代表的なリン酸アルミニウムアジュバントは、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４と０．９２との間で０．６ｍｇのＡｌ３＋／ｍｌを含む非結晶性のヒドロキシリン酸アルミニウムである。低用量のリン酸アルミニウムを用いる吸着が、例えば１用量あたり５０μｇと１００μｇとの間のＡｌ３＋で用いられ得る。リン酸アルミニウムを吸着に使用し、抗原をアジュバントに吸着させないことが所望される場合、このことは溶液中に遊離リン酸イオンを含むことにより（例えば、リン酸緩衝液の使用により）促進される。
【００５３】
ＲＩＶＭワクチンは、リン酸アルミニウムアジュバントかまたは水酸化アルミニウムアジュバントのいずれかに対する吸着により試験され、リン酸アルミニウムアジュバントが、より優れた結果を与えることが見出された［３４］。ＭｅＮＺＢＴＭ、ＭｅｎＢｖａｃＴＭおよびＶＡ−ＭＥＮＩＮＧＯＣ−ＢＣＴＭ製品は、すべて水酸化アルミニウムアジュバントを含有する。
【００５４】
アルミニウムアジュバントの代表的な用量は、約３．３ｍｇ／ｍｌ（Ａｌ３＋濃度として表される）である。
【００５５】
Ｂ．油性乳濁液
本発明における、アジュバントとしての使用に適した油性乳剤組成物としては、ＭＦ５９［参考文献３８の第１０章、参考文献４０も参照のこと］（ミクロ流動器（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を使用してサブミクロン粒子に処方される５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０、および０．５％Ｓｐａｎ ８５）のようなスクアレン−水乳剤が挙げられる。フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）もまた使用され得る。
【００５６】
Ｃ．サポニン処方物［参考文献３８の第２２章］
サポニン処方物もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根さらに花においてさえ見出されるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来のサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサプリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ）、シュッコンカスミソウ（ブライデスベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサボンソウ（サボンソウ根）由来のサポニンはまた、商業的に入手され得る。サポニンアジュバント処方物としては、ＱＳ２１のような精製処方物およびＩＳＣＯＭのような脂質処方物が挙げられる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販される。
【００５７】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製される。これらの技術を使用して精製された特定の画分が同定されており、その精製画分としては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生産方法は、参考文献４１に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールのようなステロールを含み得る［４２］。
【００５８】
サポニンとコレステロールとの組み合わせが、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成するために使用され得る［参考文献３８の第２３章］。ＩＳＣＯＭとしては、代表的に、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質が挙げられる。任意の公知のサポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、ＩＳＣＯＭとしては、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１つ以上が挙げられる。ＩＳＣＯＭは、さらに参考文献４２〜４４に記載される。必要に応じて、ＩＳＣＯＭは余分な界面活性剤を含まない［４５］。
【００５９】
サポニンベースのアジュバントの開発についての概説は、参考文献４６および４７に見出され得る。
【００６０】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般的に、必要に応じてリン脂質と組み合わせられるかまたは処方されるウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。これらは、一般的に、非病原性、非複製性であり、一般的に、いかなる天然のウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質は組換えによって産生され、ウイルス全体から単離され得る。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用に適したこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（ＨＡまたはＮＡのような）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（コアタンパク質またはカプシドタンパク質のような）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビスウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒト乳頭腫ウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡ−ファージ由来のタンパク質、Ｑβ−ファージ由来のタンパク質（コートタンパク質のような）、ＧＡ−ファージ由来のタンパク質、ｆｒ−ファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質、およびＴｙ由来のタンパク質（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１のような）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献４８〜５３でさらに考察される。ビロソームはさらに、例えば、参考文献５４で考察される。
【００６１】
Ｅ．細菌性または微生物性誘導体
本発明における、使用に適したアジュバントとしては、腸内細菌リポポリサッカリド（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、脂質Ａ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびＡＤＰリボシル化毒素、ならびにそれらの解毒誘導体のような細菌性または微生物性の誘導体が挙げられる。
【００６２】
ＬＰＳの非毒性誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、４、５または６つのアシル化鎖を有する３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、参考文献５５に開示される。そのような３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μｍの膜を通して滅菌濾過されるほど十分に小さい［５５］。他の非毒性ＬＰＳ誘導体としては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸誘導体（例えば、ＲＣ−５２９）のようなモノホスホリル脂質Ａ模倣物が挙げられる［５６、５７］。
【００６３】
脂質Ａ誘導体としては、ＯＭ−１７４のようなＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来の脂質Ａの誘導体が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば参考文献５８および５９に記載される。
【００６４】
本発明における、アジュバントとしての使用に適した免疫刺激オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列（グアノシンへのリン酸結合により連結される非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。
【００６５】
ＣｐＧは、ホスホロチオエート修飾物のようなヌクレオチド修飾物／アナログを含み得、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献６０、６１および６２は、可能なアナログ置換（例えばグアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置換）を開示する。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献６３〜６８においてさらに考察される。
【００６６】
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはモチーフＴＴＣＧＴＴのようなＴＬＲ９に対して向けられ得る［６９］。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮのようなＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか、またはＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮのようなＣｐＧ配列は、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献７０〜７２において考察される。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【００６７】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識のためにアクセス可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、その３’末端で結合され得、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成する。例えば、参考文献６９および７３〜７５を参照のこと。
【００６８】
細菌性ＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体は、本発明においてアジュバントとして使用され得る。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰリボシル化毒素の使用は、参考文献７６に記載され、非経口アジュバントとしての使用は、参考文献７７に記載される。毒素または類毒素は、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロ毒素の形態である。好ましくは、Ａサブユニットは、解毒性の変異を含み；好ましくは、Ｂサブユニットは変異されない。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２のような解毒ＬＴ変異体である。ＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体、特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、参考文献７８〜８５に見出され得る。アミノ酸置換に関する数の参照は、好ましくは、参考文献８６に記載のＡＤＰリボシル化毒素のＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントをベースとし、特にその全体が本明細書中において参考として援用される。
【００６９】
Ｆ．ヒト免疫調節因子
本発明において、アジュバントとして使用に適したヒト免疫調節因子としては、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［８７］など）［８８］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−？）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子のようなサイトカインが挙げられる。
【００７０】
Ｇ．生体付着物および粘膜付着物
生体付着物および粘膜付着物はまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。適した生体付着物としては、エステル型のヒアルロン酸マイクロスフィア［８９］または架橋したポリ（アクリル酸）の誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースのような粘膜付着物が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る[９
０]。
【００７１】
Ｈ．微粒子
微粒子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍの粒子、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍの粒子、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）は、生体分解性および非毒性（例えば、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシブチル酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）である物質から形成され、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）が好ましく、必要に応じて負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳを用いて）または正に荷電した表面（例えば、ＣＴＡＢのようなカチオン性界面活性剤を用いて）を有するように処理される。
【００７２】
Ｉ．リポソーム（参考文献３８の第１３章および第１４章）
アジュバントとしての使用に適したリポソーム処方物の例は、参考文献９１〜９３に記載される。
【００７３】
Ｊ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明における、使用に適したアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる[９４]。そのような処方物はさらに、オクトキシノールとの組み合わせでポリオキシエチレンソルビタンエステルのサーファクタント[９５]および少なくとも１つのオクトキシノールのようなさらなる非イオン性サーファクタントとの組み合わせでポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステルのサーファクタントを含む[９６]。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【００７４】
Ｋ．ポリホスファザン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば参考文献９７および９８に記載される。
【００７５】
Ｌ．ムラミルペプチド
本発明におけるアジュバントとしての使用に適したムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【００７６】
Ｍ．イミダゾキノロン化合物
本発明においてアジュバントを使用するために適したイミダゾキノロン化合物の例としては、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびそのホモログ（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）が挙げられ、さらに参考文献９９および１００に記載される。
【００７７】
本発明はまた、上記に同定される１つ以上のアジュバントの局面の組み合わせを含む。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において用いられ得る：（１）サポニンおよび水中油型乳剤［１０１］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば３ｄＭＰＬ）［１０２］；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）［１０３］；（５）例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳剤と３ｄＭＰＬとの組み合わせ［１０４］；（６）大きい粒子サイズの乳剤を生成するためにサブミクロン乳剤中に微流動化させるかまたはボルテックスされた、１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ ８０ＴＭ、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦ。（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１つ以上の細菌細胞壁成分を含むＲｉｂｉＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ）；ならびに（８）１つ以上の無機塩類（アルミニウム塩のような）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＭＰＬのような）。
【００７８】
免疫刺激物質として作用する他の基質は、参考文献３８の第７章に開示される。
【００７９】
アルミニウム塩アジュバントの使用が特に好ましく、抗原は一般的にそのような塩に吸着される。本発明の組成物において、水酸化アルミニウムにいくつかの抗原を吸着することが可能であるほかに、リン酸アルミニウム関連して他の抗原を有することが可能である。しかしながら、一般的に１つの塩（例えば、水酸化物またはリン酸塩）だけを使用することが好ましく、両方は好まれない。すべてのベシクルが吸着されることを必要とするとは限らず、すなわちいくつかまたはすべてのベシクルが溶液中で遊離し得る。
【００８０】
（処置方法）
本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を惹起するための方法を提供し、この方法は、本発明の薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を包含する。免疫応答は、好ましくは防御的であり、好ましくは抗体を含む。本方法は、すでにＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対して初回免疫されている患者において追加免疫応答を惹起し得る。ＯＭＶに関する皮下および鼻内の初回免疫／追加免疫レジメンは参考文献１０５に開示される。
【００８１】
哺乳動物は、好ましくはヒトである。ワクチンが予防的に使用される場合、このヒトは、好ましくは子供（例えば、幼児または乳児）または１０代であり；ワクチンが治療的に使用される場合、このヒトは、好ましくは成人である。子供を意図したワクチンはまた、成人に投与され得る（例えば、安全性、用量、免疫原性などを評価するため）。
【００８２】
本発明はまた、医薬として使用するための本発明のＯＭＶ組成物および混合物を提供する。本医薬は、好ましくは哺乳動物において免疫応答を惹起することができ（すなわち、免疫原性組成物である）、さらに好ましくはワクチンである。
【００８３】
本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を惹起するための医薬の製造における、本発明のＯＭＶ組成物および混合物の使用を提供する。
【００８４】
これらの使用および方法は、好ましくはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、例えば細菌性（またはさらに具体的には髄膜炎菌性）髄膜炎または敗血症により生じる疾患の予防および／または処置のためである。
【００８５】
治療的処置の効果を調べる１つの方法としては、本発明の組成物の投与後、ナイセリア感染をモニターすることが挙げられる。予防的処置の効果を調べる１つの方法としては、組成物の投与後、ＯＭＶ抗原に対する免疫応答をモニターすることが挙げられる。本発明の組成物の免疫原性は、試験被験体（例えば、１２〜１６ヶ月齢の子供または動物モデル［１０６］）に投与し、次いで血清の細菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含む標準的パラメーターを決定することにより、決定され得る。これらの免疫応答は、一般的に組成物投与後約４週間で決定され、組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡ上昇が好まれる。１用量より多い組成物が投与される場合、１より多い投与後決定がなされ得る。
【００８６】
本発明の好ましい組成物は、患者における抗体力価を与え得、この力価はヒト被験体の受容可能なパーセンテージについての血清防御に関する基準を上回っている。関連抗体力価（この力価より上で、宿主が抗原に対して血清変換されると考えられる）を有する抗原は周知であり、そのような力価は、ＷＨＯのような組織により公開される。好ましくは、８０％より多い統計的に有意な被験体サンプル、さらに好ましくは９０％より多い、よりさらに好ましくは９３％より多い、最も好ましくは９６〜１００％の被験体サンプルが血清変換される。
【００８７】
本発明の組成物は、一般的に患者に直接的に投与される。直接的な送達は、非経口的注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内または組織の間質へ）により、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻内投与、眼内投与、耳内投与、肺投与または他の粘膜投与により達成され得る。大腿部または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針を介し得る（例えば、皮下組織用針）が、針なし注射が、代わりに用いられ得る。代表的な筋肉内用量は０．５ｍＬである。
【００８８】
投薬処置は、単回投薬スケジュールまたは複数回投薬スケジュールであり得る。複数回投薬は、最初の免疫スケジュールにおいて、および／または追加免疫スケジュールにおいて用いられ得る。最初の投薬スケジュールに続いて追加免疫が行われ得る。初回免疫投薬の間（例えば、４〜１６週間）および初回免疫と追加免疫との間の適したタイミングは、慣習的に決定され得る。ＯＭＶベースのＲＩＶＭワクチンは、０ヶ月、２ヶ月および８ヶ月または０ヶ月、１ヶ月、２ヶ月および８ヶ月でワクチン接種をする、３回投薬または４回投薬の初回スケジュールを使用して試験された。ＭｅＮＺＢＴＭは、６週間の間隔で３回投薬として投与される。
【００８９】
上記に記載されるように、本発明は、１より多いＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清サブタイプ由来のベシクルの、別々あるいは混合物のいずれかにおける投与を包含する。
【００９０】
本発明は、全身性免疫および／または粘膜性免疫を導くために使用され得る。
【００９１】
一般的に、本発明の組成物は、被験体に投与された後、血清細菌抗体応答を誘導することができる。これらの応答は、マウスにおいて簡便に測定され、ワクチンの効果の標準的指標である［例えば参考文献１６６の巻末の注１４を参照のこと］。血清細菌活性（ＳＢＡ）として、補体により媒介される細菌の死滅を測定し、ヒトの補体または生まれたばかりのウサギ補体を使用してアッセイされ得る。ＷＨＯ標準は、ワクチンが９０％より多いレシピエントにおいて、ＳＢＡにおける少なくとも４倍の上昇を誘導することを要求している。ＭｅＮＺＢＴＭは、第３の投薬の投与後４〜６週間で、ＳＢＡにおける４倍の上昇を導く。
【００９２】
異なる血清サブタイプに対するＯＭＶを混合することにより、本発明の組成物は、１つより多い髄膜炎菌の高毒性系統に対して細菌抗体応答を誘導し得る。特にそれらは、好ましくは以下の３つの高毒性系統のうち２つまたは３つに対して細菌応答を誘導し得る：（ｉ）クラスターＡ４；（ｉｉ）ＥＴ５複合体；および（ｉｉｉ）系統３。それらはさらに、高毒性系統のサブグループＩ、サブグループＩＩＩ、サブグループＩＶ−１またはＥＴ−３７複合体の１つ以上に対して、そして他の系統、例えば、高毒性系統に対して、細菌抗体応答を誘導し得る。これは、この組成物がこれら高毒性系統内のそれぞれおよびすべての髄膜炎菌株に対して細菌抗体を誘導し得ることを必ずしも意味するものではなく、例えば、特定の高毒性系統のうち４つ以上の髄膜炎菌株の任意の所定の群に関して、この組成物により誘導される抗体は、その群の少なくとも５０％（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上）に対して殺菌性である。好ましい株の群としては、以下に挙げる国の少なくとも４カ国において単離された株が挙げられる：ＧＢ、ＡＵ、ＣＡ、ＮＯ、ＩＴ、ＵＳ、ＮＺ、ＮＬ、ＢＲおよびＣＵ。血清は、好ましくは少なくとも１０２４（例えば、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８またはより高い、好ましくは少なくとも２１４）の殺菌力価を有する（例えば、参考文献１６６に記載されるように、血清は１０２４分の１に希釈した場合、特定の株の試験細菌の少なくとも５０％を殺菌し得る）。
【００９３】
好ましい組成物は、血清群Ｂ髄膜炎菌の以下の株に対して殺菌応答を誘導し得る：（ｉ）クラスターＡ４由来の９６１〜５９４５株（Ｂ：２ｂ：Ｐ１．２１，１６）および／または株Ｇ２１３６（Ｂ：−）；（ｉｉ）ＥＴ−５複合体由来のＭＣ５８株（Ｂ１５：Ｐ１．７，１６ｂ）および／または４４／７６株（Ｂ：１５：Ｐ１．７，１６）；（ｉｉｉ）系統３由来の株３９４／９８（Ｂ：４：Ｐ１．４）および／またはＢＺ１９８株（Ｂ：ＮＴ：−）。より好ましい組成物は、９６１−５９４５株、４４／７６株および３９４／９８株に対する殺菌応答を誘導し得る。
【００９４】
株９６１〜５９４５およびＧ２１３６はいずれもナイセリアＭＬＳＴ参照株である［参考文献１０７のｉｄｓ ６３８および１００２］。ＭＣ５８株は広く入手可能であり（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−３３５）、参考文献１０８において配列決定された株である。４４／７６株は広く用いられ、特徴付けられており（例えば、参考文献１０９）、ナイセリアＭＬＳＴ参照株の１つである［参考文献１０７のｉｄ２３７；参考文献１９の表２の３２行］。３４９／９８株は、本来１９９８年にニュージーランドにおいて単離され、本株を使用するいくつかの発表された研究がある（例えば、参考文献１１０および１１１）。ＢＺ１９８株は、別のＭＬＳＴ参照株である［参考文献１０７のｉｄ４０９；参考文献１９の表２の４１行］。
【００９５】
（さらなる抗原性成分）
ＯＭＶを含有するのと同様に、本発明の組成物は、さらに非ベシクル性抗原を含み得る。例えば、本組成物は、さらに以下の抗原を１つ以上含み得る：
−血清群Ｃ由来の参考文献１１２に開示されるオリゴサッカリドまたは参考文献１１３に開示されるオリゴサッカリドのような、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来のオリゴサッカリド抗原。ＶＡ−ＭＥＮＩＮＧＯＣ−ＢＣＴＭ製品は、血清群Ｃポリサッカリドを含む。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカリド抗原［例えば、参考文献１１４〜１１６；参考文献１２３の第２２章および第２３章］。
−不活化ウイルスのようなＡ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、１１７、１１８；参考文献１２３の第１５章］。
−表面抗原および／またはコア抗原のようなＢ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、１１８、１１９；参考文献１２３の第１６章］。
−Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば１２０］。
−必要に応じてペルタクチンおよび／または凝集原２および凝集原３とも組み合わせた、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）のような、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原［例えば、参考文献１２１および１２２；参考文献１２３の第２１章］。
−ジフテリアトキソイドのようなジフテリア抗原［参考文献１２３の第１３章］。
−破傷風トキソイドのような破傷風抗原［例えば、参考文献１２３の第２７章］。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ由来のサッカリド抗原［参考文献１２３の第１４章］。
−Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ由来の抗原［例えば、参考文献１２４］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原［例えば、参考文献１２５〜１３１］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原［例えば、１３２］。
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来の抗原［例えば、参考文献１３３］。
−ＩＰＶのようなポリオ抗原［例えば、１３４、１３５；参考文献１２３の第２４章］。
−凍結乾燥不活化ウイルス［例えば１３７、ＲａｂＡｖｅｒｔＴＭ］のような狂犬病抗原［例えば１３６］。
−麻疹、ムンプスおよび／または風疹抗原［例えば、参考文献１２３の第１９章、第２０章および２６章］。
−血球凝集素および／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質のようなインフルエンザ抗原［例えば、参考文献１２３の１７章および１８章］。
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原［例えば１３８］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ストレプトコッカスＢ群）由来のタンパク質抗原［例えば、１３９、１４０］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ストレプトコッカスＡ群）由来の抗原［例えば、１４０、１４１、１４２］。
【００９６】
サッカリド抗原または糖質サッカリド抗原が使用される場合、この抗原は、好ましくは、免疫原性を増強するためにキャリアに結合体化される。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ、髄膜炎菌および肺炎球菌のサッカリド抗原の結合体化は周知である。
【００９７】
毒性タンパク質抗原は、必要である場合、解毒化され得る（例えば、化学的方法および／または遺伝的方法による百日咳毒素の解毒［１２２］）。
【００９８】
ジフテリア抗原が組成物中に含有される場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含有することもまた好まれる。同様に、破傷風抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含有することもまた好ましい。同様に、百日咳抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含有することもまた好ましい。従って、ＤＴＰの組み合わせが好ましい。
【００９９】
サッカリド抗原は、好ましくは、結合体の形態である。結合体のための好ましいキャリアタンパク質は、ジフテリアトキソイドまたは百日咳トキソイドのような細菌毒素または細菌トキソイドである。ジフテリア毒素のＣＲＭ１９７変異体［１４３〜１４５］は、特に好ましいキャリアであり、ジフテリアトキソイドも同様である。他の適したキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［１４６］、合成ペプチド［１４７、１４８］、熱ショックタンパク質［１４９、１５０］、百日咳タンパク質［１５１、１５２］、サイトカイン［１５３］、リンホカイン［１５３］、ホルモン［１５３］、成長因子［１５３］、種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有する人工タンパク質［１５４］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［１５５、１５６］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［１５７］、肺炎球菌溶血素［１５８]、鉄取り込みタンパク質［１５９］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［１６０］などが挙げられる。
【０１００】
本組成物における抗原は、代表的に、それぞれ少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般的に、任意の所定の抗原の濃度は、抗原に対する免疫応答を誘導するのに十分である。
【０１０１】
本発明の組成物において使用するタンパク質抗原の代替物として、抗原をコードしている核酸が用いられ得る。本発明の組成物のタンパク質成分は、タンパク質をコードする核酸（好ましくはＤＮＡ、例えば、プラスミドの形態において）により置換され得る。
【０１０２】
好ましい組成物としては、１つ以上（すなわち、１、２、３または４）の髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ，Ｗ１３５およびＹ由来の結合体化莢膜サッカリドを加えた上記に記載されるような髄膜炎菌ＯＭＶを含む。ＯＭＶが血清群Ｂ由来である場合、本アプローチは、以下の血清群が包含されることを可能にする：Ｂ＋Ａ；Ｂ＋Ｃ；Ｂ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ａ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；およびＢ＋Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ。２つの好ましい組み合わせは、血清群Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙまたは血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙのいずれか由来の結合体化抗原を加えた血清群ＢのＯＭＶを使用する。一般的に、ｘの血清群のＯＭＶおよび残りの５−ｘ血清群の結合サッカリドを選択することにより、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの５つすべての血清群を包含することは可能である。
【０１０３】
特異的な髄膜炎菌タンパク質抗原（好ましくは血清群Ｂ由来）もまた、ＯＭＶ組成物を補充するために加えられ得る。特に、参考文献３０および１６１〜１６９に開示されるようなタンパク質抗原が加えられ得る。少数の定義された抗原が加えられ得る（１０または１０より少ない（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２）精製抗原の混合物）。本発明とともに使用するための好ましいさらなる免疫原性ポリペプチドは、参考文献１６９に開示されるもの：（１）「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「７４１」タンパク質；（３）「９３６」タンパク質；（４）「９５３」タンパク質；および（５）「２８７」タンパク質。他の可能な補充髄膜炎菌抗原としては、トランスフェリン結合タンパク質（例えば、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ）および／またはＣｕ、Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ［７］が挙げられる。他の可能な補充髄膜炎菌抗原として、以下のアミノ酸配列の１つを含むタンパク質：参考文献１６１由来の配列番号：６５０；参考文献１６１由来の配列番号：８７８；参考文献１６１由来の配列番号：８８４；参考文献１６２由来の配列番号：４；参考文献１６３由来の配列番号：５９８；参考文献１６３由来の配列番号：８１８；参考文献１６３由来の配列番号：８６４；参考文献１６３由来の配列番号：８６６；参考文献１６３由来の配列番号：１１９６；参考文献１６３由来の配列番号：１２７２；参考文献１６３由来の配列番号：１２７４；参考文献１６３由来の配列番号：１６４０；参考文献１６３由来の配列番号：１７８８；参考文献１６３由来の配列番号：２２８８；参考文献１６３由来の配列番号：２４６６；参考文献１６３由来の配列番号：２５５４；参考文献１６３由来の配列番号：２５７６；参考文献１６３由来の配列番号：２６０６；参考文献１６３由来の配列番号：２６０８；参考文献１６３由来の配列番号：２６１６；参考文献１６３由来の配列番号：２６６８；参考文献１６３由来の配列番号：２７８０；参考文献１６３由来の配列番号：２９３２；参考文献１６３由来の配列番号：２９５８；参考文献１６３由来の配列番号：２９７０；参考文献１６３由来の配列番号：２９８８、または、（ａ）前記配列に対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）を有し、かつ／または（ｂ）前記配列由来の少なくともｎ個の連続的なアミノ酸のフラグメントを含み、ここで、ｎは７またはそれ以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である、アミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。（ｂ）に関して好ましいフラグメントは、関連配列由来のエピトープを含む。１つ以上（例えば、２、３、４、５、６）のこれらポリペプチドが含まれ得る。髄膜炎菌抗原トランスフェリン結合タンパク質および／またはＨｓｆタンパク質がまた、加えられ得る［１７０］。
【０１０４】
このような方法において、定義した髄膜炎菌抗原によるＯＭＶの補充は、ＯＭＶが血清サブタイプＰ１．７ｂ，４の髄膜炎菌または血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌である場合、特に有用である。これら両血清サブタイプ由来のＯＭＶの混合物の補充が好ましい。
【０１０５】
（特異的血清サブタイプ）
本発明は、以下のサブタイプの１つを有する髄膜炎菌から調製されるＯＭＶを含む組成物を提供する：Ｐ１．２；Ｐ１．２，５；Ｐ１．４；Ｐ１．５；Ｐ１．５，２；Ｐ１．５，ｃ；Ｐ１．５ｃ，１０；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．７，１６ｂ；Ｐ１．７ｈ，４；Ｐ１．９；Ｐ１．１５；Ｐ１．９，１５；Ｐ１．１２，１３；Ｐ１．１３；Ｐ１．１４；Ｐ１．２１，１６；Ｐ１．２２，１４。
【０１０６】
上記髄膜炎菌は好ましくは血清群Ｂである。
【０１０７】
これらのＯＭＶは、上に記載されるような、本発明での使用に適している。
【０１０８】
（ＯＭＶ投与レジメン）
本発明は、患者に髄膜炎菌ＯＭＶを投与するための方法を提供し、ここで第１の投薬は時間０において与えられ、第２および第３の投薬は、次の２ヶ月にわたり与えられ、第４の投薬は、時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後の間に与えられる。
【０１０９】
本発明はまた、患者に髄膜炎菌ＯＭＶを投与するための方法を提供し、ここで第１の投薬は時間０において与えられ、第２および第３の投薬は、次の２ヶ月にわたり与えられ、第４の投薬は、時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後の間で与えられ、そしてここで（ａ）第１、第２および第３の投薬は、互いに同じ血清サブタイプを有するＯＭＶを含み、かつ（ｂ）第４の投薬は、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有するＯＭＶを含む。第４の投薬は、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有するＯＭＶのみ含み得るか、または２つの型のＯＭＶを含み得、１つは、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有し、１つは同じサブタイプを有する。
【０１１０】
第１、第２および第３の投薬は、好ましくは６週間と８週間の間の間隔で与えられる。４回目の投薬は、好ましくは時間０から、約１年後に与えられる。
【０１１１】
患者は、好ましくは第４の投薬それぞれで、同量のワクチンを与える。
【０１１２】
ＯＭＶは、好ましくは、血清サブタイプＰ１．７ｂ，４および／またはＰ１．７，１６である。
【０１１３】
本発明はまた、患者に髄膜炎菌ワクチンを投与するための方法を提供し、ここで：（ａ）本ワクチンは、第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶを含み；（ｂ）この患者は、第２の血清サブタイプを有する異なるＯＭＶワクチンを以前に受けており、異なるＯＭＶワクチンの第１の投薬が本方法の１１ヶ月より前に与えられている。
【０１１４】
本発明はまた、髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫化するための医薬の製造における、第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶの使用を提供し、ここでこの医薬は、第２の血清サブタイプを有するＯＭＶであらかじめ免疫化されている、患者に投与するためである。
【０１１５】
ＯＭＶ投与はまた、髄膜炎菌結合体化ワクチンでの免疫化に続き得る。従って、本発明は、少なくとも髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫化するための医薬の製造における第１の髄膜炎菌血清群由来の髄膜炎菌ＯＭＶの使用を提供し、ここでこの医薬は、第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の結合莢膜サッカリドを用いてあらかじめ免疫されている患者に投与するためである。同様に、本発明は、患者に髄膜炎菌ワクチンを投与するための方法を提供し、ここで：（ａ）このワクチンは、第１の血清群を有する髄膜炎菌ＯＭＶを含み；（ｂ）この患者は、あらかじめ第２の髄膜炎菌血清群由来の結合莢膜サッカリドを受けている。
【０１１６】
予備免疫は、ＯＭＶが投与される６ヶ月以上前に実施され得る（例えば、１１ヶ月以上前）。従って、例えば、患者は時間０で結合体化サッカリドが与えられ、次いでＯＭＶが１１ヶ月後に与えられ得る。
【０１１７】
髄膜炎菌サッカリドを用いる予備免疫は、好ましくは少なくとも血清群Ｃを用いるが、１つより多い血清群、例えばＡ＋Ｃの両方、Ａ＋Ｃ＋ＹおよびＡ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙなどを用い得る。
【０１１８】
第１の血清群は、好ましくは血清群Ｂである。
【０１１９】
ＯＭＶは、髄膜炎菌結合体と同時に投与され得、すなわち、患者はさらにＯＭＶを受けるのと同時に髄膜炎菌結合体の投薬を受けている。
【０１２０】
患者は、第１の血清群由来のＯＭＶを用いて予備免疫されていてもよいし、されていなくてもよい。
【０１２１】
患者は、ｂ型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ莢膜サッカリド結合体を用いて予備免疫され得る。
【０１２２】
患者は、ジフテリア毒素よび百日咳毒素を用いて予備免疫され得る。
【０１２３】
（概要）
用語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「〜からなる」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、排他的にＸからなり得るか、または何かの付加を含み得る（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【０１２４】
数値ｘに関する用語「約」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１２５】
用語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないものであり得る。必要な場合、用語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。
例えば、本発明は以下を提供する：
（項目１）
髄膜炎菌の血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの２つ以上に由来の外膜ベシクル（ＯＭＶ）を含有する、組成物。
（項目２）
以下の血清群の組み合わせ：Ａ＋Ｂ；Ａ＋Ｃ；Ａ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ；Ｂ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５；Ｃ＋Ｙ；Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ；Ａ＋Ｂ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｙ；Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｃ＋Ｙ；Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；およびＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙの１つに由来するＯＭＶを含有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記組成物が、高侵襲性系統における髄膜炎菌株由来のＯＭＶを含有する、項目１および項目２のいずれかに記載の組成物。
（項目４）
前記組成物が、高毒性系統における髄膜炎菌株由来のＯＭＶを含有する、項目１〜項目３のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記株が、以下の７つの高毒性系統：サブグループＩ；サブグループＩＩＩ；サブグループＩＶ １；ＥＴ ５複合体；ＥＴ ３７複合体；Ａ４クラスター；系統３のいずれか由来である、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記組成物が、ＬＰＳ生合成に関与する１つ以上の酵素のノックアウトを有する髄膜炎菌由来のＯＭＶを含有する、項目１〜項目５のいずれかに記載の組成物。
（項目７）
前記組成物が、ＮｓｐＡを過剰発現する髄膜炎菌由来のＯＭＶを含有する、項目１〜項目６のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
各サブタイプについてＯＭＶの濃度が、１０μｇ／ｍｌおよび５００μｇ／ｍｌである、項目１〜項目７のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
タンパク質１μｇごとに０．４μｇ未満のデオキシコール酸を含有する、項目１〜項目８のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
タンパク質１μｇごとに０．１２μｇ未満の髄膜炎菌ＬＰＳを含有する、項目１〜項目９のいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
髄膜炎菌の株由来の外膜ベシクルを含有する組成物であって、株が血清群Ｃ、Ｗ１３５またはＹである、組成物。
（項目１２）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含有する、項目１〜項目１１のいずれかに記載の組成物。
（項目１３）
第１の投薬が時間０で与えられ、第２および第３の投薬が次の２ヶ月にわたり与えられ、そして第４の投薬が時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後との間で与えられる、患者に髄膜炎菌ＯＭＶワクチン（例えば、項目１に記載のワクチン）を投与する、方法。
（項目１４）
第１の投薬が時間０で与えられ、第２および第３の投薬が次の２ヶ月にわたり与えられ、そして第４の投薬が時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後の間で与えられ、ここで（ａ）該第１、第２および第３の投薬は互いに同じ血清サブタイプをもつＯＭＶを含み、そして（ｂ）該第４の投薬は、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプをもつＯＭＶを含む、患者に髄膜炎菌ＯＭＶワクチンを投与する、方法。
（項目１５）
前記第４の投薬がはじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプをもつＯＭＶのみを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記第４の投薬が、２つの型のＯＭＶを含み、１つははじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有し、１つははじめの３回の投薬と同じサブタイプを有する、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記ＯＭＶが、血清サブタイプＰ１．７ｂ，４のものである、項目１２〜項目１６のいずれか１つに記載の方法。
（項目１８）
前記ＯＭＶが、血清サブタイプＰ１．７，１６のものである、項目１２〜項目１６のいずれか１つに記載の方法。
（項目１９）
患者に髄膜炎菌ワクチンを投与するための方法であって、（ａ）該ワクチンは第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶを含有し；（ｂ）該患者は、第２の血清サブタイプを有する異なるＯＭＶワクチンを以前に受けており、該異なるＯＭＶワクチンの第１の投薬が該方法の１１ヶ月より前に与えられている、方法。
（項目２０）
髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫するための医薬の製造における第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶの使用であって、該医薬は第２の血清サブタイプを有するＯＭＶを用いて予備免疫された患者に投与するためである、使用。
（項目２１）
前記第２の血清サブタイプがＰ１．７ｂ，４である、項目１９に記載の方法または項目２０に記載の使用。
（項目２２）
前記第２の血清サブタイプがＰ１．７，１６である、項目１９に記載の方法または項目２０に記載の使用。
（項目２３）
前記第２の血清サブタイプがＰ１．１９，１５である、項目１９に記載の方法または項目２０に記載の使用。
（項目２４）
前記予備免疫が、医薬が投与される１１ヶ月より前であった、項目１９〜項目２２のいずれか１つに記載の使用。
（項目２５）
ワクチンの製造における使用のために、（ｉ）髄膜炎菌性髄膜炎の発症と関連する髄膜炎菌株の血清サブタイプを同定する工程；および（ｉｉ）工程（ｉ）において同定された血清サブタイプを有する髄膜炎菌由来のＯＭＶを調製する工程を包含する、髄膜炎菌外膜ベシクル（ＯＭＶ）ワクチンを調製するための、方法。
（項目２６）
（ｉｉｉ）ワクチンとして前記ＯＭＶを処方する工程；および（ｉｖ）前記発症により影響されるかまたは影響されるであろう地理的領域に該ワクチンを配給する工程；のさらなる工程のうちの１つまたは両方を包含する、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記髄膜炎菌株が血清群Ｂである、項目２５または項目２６に記載の方法。
（項目２８）
第２の血清群における１つ以上の髄膜炎菌株に対して防御するための、第１の血清群における髄膜炎菌株由来のＯＭＶの使用であって、該第１の血清群と該第２の血清群とが異なっている、使用。
（項目２９）
前記第１の血清群由来のＯＭＶの濃度が４５μｇ／ｍｌより少なく、前記第２の血清群由来のＯＭＶの濃度が４５μｇ／ｍｌより少ない、第１の髄膜炎菌血清サブタイプおよび第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目３０）
前記第１の血清サブタイプ由来のＯＭＶの濃度が約２５μｇ／ｍｌであり、前記第２の血清サブタイプ由来のＯＭＶの濃度が約２５μｇ／ｍｌである、第１の髄膜炎菌血清サブタイプおよび第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目３１）
約２５μｇ／ｍｌの濃度で第３の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
合わせたＯＭＶの濃度が９０μｇ／ｍｌより少ない、少なくとも２つの髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目３３）
ｎ個の異なる髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物であって、該ｎ個のサブタイプそれぞれに由来のＯＭＶ濃度が４５μｇ／ｍｌより少なく、ここでｎが１、２、３、４、５または６である、組成物。
（項目３４）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含有する、項目２９〜項目３３のいずれか１つに記載の組成物。
（項目３５）
ｎが２、３、４、５または６であり、ｎ個の異なる血清サブタイプから調製されるＯＭＶを含む、キット。
（項目３６）
ｎが２、３、４、５または６であり、各ｎの異なるサブタイプ由来の、ｎセットのＯＭＶを調製する工程；そしてキット中または混合物中のいずれかにｎセットのベシクルを組み合わせる工程を包含する、プロセス。
（項目３７）
Ｐ１．７ｂ，４血清サブタイプを有する血清群Ｂの髄膜炎菌株から調製されるＯＭＶを含有する組成物であって、組成物におけるＯＭＶ濃度が約５０μｇ／ｍｌである、組成物。
（項目３８）
前記組成物が、水酸化アルミニウムアジュバントおよびヒスチジン緩衝液を含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
約０．５ｍｌの投薬容量における、項目３７または項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
ｎが２、３、４、５または６であり、ｎ個の異なる髄膜炎菌高毒性系統に由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目４１）
前記高毒性系統として、サブグループＩ、サブグループＩＩＩ、サブグループＩＶ １、ＥＴ ５複合体、ＥＴ ３７複合体、Ａ４クラスターおよび系統３が挙げられる、項目４０に記載の組成物。
（項目４２）
ｎが２または３であり、ｎ個の異なる髄膜炎菌ＮＭＢ１８７０改変体に由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目４３）
以下のサブタイプ；Ｐ１．２；Ｐ１．２，５；Ｐ１．４；Ｐ１．５；Ｐ１．５，２；Ｐ１．５，ｃ；Ｐ１．５ｃ，１０；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．７，１６ｂ；Ｐ１．７ｈ，４；Ｐ１．９；Ｐ１．１５；Ｐ１．９，１５；Ｐ１．１２，１３；Ｐ１．１３；Ｐ１．１４；Ｐ１．２１，１６；およびＰ１．２２，１４の１つを有する髄膜炎菌から調製されるＯＭＶを含有する、組成物。
（項目４４）
（ｉ）血清サブタイプＰ１．７ｂ，４髄膜炎菌；（ｉｉ）血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌；および（ｉｉｉ）血清サブタイプＰ１．１９，１５髄膜炎菌、の２つまたは３つに由来の外膜ベシクルの混合物を含有する、組成物。
（項目４５）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含有する、項目３７〜項目４４のいずれか１つに記載の組成物。
（項目４６）
（ｉ）血清サブタイプＰ１．７ｂ，４髄膜炎菌；（ｉｉ）血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌；および（ｉｉｉ）血清サブタイプＰ１．１９，１５髄膜炎菌の２つまたは３つに由来の外膜ベシクルの分離した容器を含む、キット。
（項目４７）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含む、項目３５または項目４６に記載のキット。
（項目４８）
少なくとも髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫するための医薬の製造における第１の血清サブタイプに由来の髄膜炎菌ＯＭＶの使用であって、該医薬は第２の血清サブタイプに由来の結合莢膜サッカリドを用いて予備免疫された患者に投与するためである、使用。
【発明を実施するための形態】
【０１２６】
（本発明を実施するための様式）
ＯＭＶ投薬−単一株
ＭｅＮＺＢＴＭ製品の投薬試験を、健常な成人において実施した。成人に、２５μｇまたは５０μｇのいずれかのＯＭＶの３回の投薬を与え、２５ｍｍ２３ゲージの針を介して６週間間隔で与えらた。３回目のワクチン接種後４〜６週間で測定されたワクチン株に対するＳＢＡ力価の４倍の上昇が、２５μｇ用量を受けた患者１００％でみられたが、驚くことに高用量を受けた患者８７％だけにしかみられなかった。応答者の割合はまた、２回目の投薬後、低用量においてより高かった（８７％対７８％）。そのため低用量をさらなる使用のために選択し、このことによって、ワクチンのストックを２倍の患者の免疫化のために提供することが可能になった。
【０１２７】
ＯＭＶ投薬−複数混合株
ノルウェー株Ｈ４４／７６から調製されるＯＭＶは以前に記載され、臨床試験のフェーズＩ、ＩＩおよびＩＩＩにおいてヒト患者に投与された。これらは、ＭｅｎＢｖａｃＴＭ製品のベースを形成する。同様に、ニュージーランド株ＨＺ９８／２５４から調製されるＯＶＡは、ＭｅｎＮＺＢＴＭ製品のベースを形成する。これらの安全性および有効性は確かめられている。
【０１２８】
ＭｅｎＮＺＢＴＭおよびＭｅｎＢｖａｃＴＭの両方は、０．５ｍｌ用量において５０μｇ／ｍｌ（タンパク質の量として測定される）の濃度でＯＭＶを含む。２つの異なる血清サブタイプに対する効果を維持するために、ヒトにおいて２つのＯＭＶの組み合わせを試験する場合、もっとも直接的な比較は、各ＯＭＶの濃度を５０μｇ／ｍｌに保つことである。対照的に、本発明者らは、総ＯＭＶ用量を２つの一価の製品（５０μｇ／ｍｌ）と同じに保つことを選択し、各ＯＭＶの半分の量に変えた（すなわち各血清サブタイプの２５μｇ／ｍｌを使用する）。
【０１２９】
合わせたワクチンは、以前にＭｅｎＮＺＢＴＭまたはＭｅｎＢｖａｃＴＭのいずれかを受けた患者に投与される。１価のＯＭＶの最初の投与から１年後に、この組み合わせが与えられる。
例示のみで、本発明が記載されており、本発明の範囲および趣旨の範囲内である限り、改変がなされ得ることが理解される。
【０１３０】
【表１】
【０１３１】
【表２】
【０１３２】
【表３】
【０１３３】
【表４】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中の引用されるすべての文書は、その全体が参照として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、免疫化の目的のための髄膜炎菌性の外膜ベシクルの分野にある。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）による感染に対して免疫化する種々のアプローチの１つは、外膜ベシクル（ＯＭＶ）の使用である。血清型Ｂに対する効果的なＯＭＶワクチンは、ノルウェー公衆衛生国立研究所（ｔｈｅ Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ）［「ＭｅｎＢｖａｃＴＭ」；例えば非特許文献１］により生産されてきたが、本ワクチンは安全でありＭｅｎＢ疾患を予防するにもかかわらず、効果は、このワクチンを作成するために使用される同種の血清型に限定される。
【０００４】
「ＲＩＶＭ」ワクチンは、６つの異なるＰｏｒＡサブタイプを含むＯＭＶをベースにしている。これは臨床試験のフェーズＩＩにおいて、子供について免疫原性であることが示されている［非特許文献２］。
【０００５】
特許文献１〜３は、６５−ｋＤａのタンパク質複合体を保持するＯＭＶをベースにした血清群Ｂの髄膜炎菌の異なる病原性血清型に対するワクチンを開示する。特許文献４は、遺伝子改変した髄膜炎菌株由来のＯＭＶを含むワクチンを開示し、本ＯＭＶは：少なくとも１つのクラス１外膜タンパク質（ＯＭＰ）を含むがクラス２／３ＯＭＰは含まない。特許文献５および特許文献６は、表面ループにおける変異を有するＯＭＰを含むＯＭＶおよび髄膜炎菌性のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）の誘導体を含むＯＭＶを開示する。特許文献７は、血清群Ａの髄膜炎菌のためのＯＭＶベースのワクチンを調製するためのプロセスを開示する。
【０００６】
ＯＭＶ効果を改善するための種々の提唱が存在する。特許文献８は、トラスフェリン結合タンパク質（例えば、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ）ならびに／またはＣｕ、Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼを補充したＯＭＶを含む組成物を開示する。特許文献９は、種々のタンパク質により補充されたＯＭＶを含む組成物を開示する。特許文献１０は、改変したｆｕｒ遺伝子を有するＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから得られる膜のベシクルの調製を開示する。特許文献１１は、ｎｓｐＡ発現が随伴性のｐｏｒＡおよびｃｐｓノックアウトでアップレギュレートされるはずであることを教示している。ＯＭＶ産生のためのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのさらなるノックアウト変異体が、特許文献１１〜１３に開示される。発現パターンの改変によりＯＭＶを改善するこれらの試みと対照的に、特許文献１４は、ＯＭＶ調製の方法を改変することに焦点を置いており、デオキシコール酸のような界面活性剤の使用を避けることにより、ベシクル抽出中、ＮｓｐＡのような抗原が、保持され得ることを教示する。
【０００７】
髄膜炎菌性ＯＭＶは非同種血清型に対する交差防御を惹起することができないことが、一般的なワクチンとしてのそれらの使用を限定している。しかし、髄膜炎菌性ＯＭＶは、本質的にクローン性である病原性株により疾患が特徴づけられる流行性の状況においては、非常に有用であり得る。従って、Ｆｉｎｌａｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅワクチン（ＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＣＴＭ）は、血清群Ｂの疾患がＰ１．１９，１５血清型により支配されるラテンアメリカにおいて有用であるが、他の場所では効果的ではない［非特許文献３］。同様に、Ｃｈｉｒｏｎ ＭｅＮＺＢＴＭワクチンは、１９９１年以来ニュージーランドにおいて流行してきた病原性株（Ｐ１．７ｂ，４、近年の命名によりＰ１．７−２，４として公知である）を標的としている。
【０００８】
参考文献１１は、多価の髄膜炎菌性ブレブの組成物を含有するワクチンを開示し、使用国において流行している血清型をもつ髄膜炎菌株由来の第１のブレブ、および使用国において流行している血清型を必ずしも有さない髄膜炎菌株由来の第２のブレブを含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第５，５９７，５７２号
【特許文献２】米国特許第５，７４７，６５３号
【特許文献３】欧州特許第０３０１９９２号
【特許文献４】欧州特許第０４４９９５８号
【特許文献５】米国特許第５，７０５，１６１号
【特許文献６】国際出願公開ＷＯ９４／０８０２１
【特許文献７】国際出願公開ＷＯ０１／９１７８８
【特許文献８】国際出願公開ＷＯ００／２５８１１
【特許文献９】国際出願公開ＷＯ０１／５２８８５
【特許文献１０】国際出願公開ＷＯ９８／５６９０１
【特許文献１１】国際出願公開ＷＯ０２／０９７４６
【特許文献１２】国際出願公開ＷＯ０２／０６２３７８
【特許文献１３】国際出願公開ＷＯ２００４／０１４４１７
【特許文献１４】国際出願公開ＷＯ２００４／０１９９７７
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｂｊｕｎｅら、Ｌａｎｃｅｔ３３８（８７７５）：１０９３〜１０９６、１９９１年
【非特許文献２】ｄｅ Ｋｌｅｉｊｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ ２０：３５２〜３５８、２００１年
【特許文献３】Ｓａｃｃｈｉら、Ｒｅｖ Ｉｎｓｔ Ｍｅｄ Ｔｒｏｐ Ｓａｏ Ｐａｕｌｏ ４０：６５〜７０、１９９８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、さらに改良された髄膜炎菌性ＯＭＶの調製物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の開示）
ＭｅＮＺＢＴＭを用いた実績は、特定の病原性株を標的としたＯＭＶが、局在化した疾患の発症を制御する点において非常に効果的であり得ることを示している。大量かつ再現可能な製造技術の組合せにおいて、ワクチンは、発症後急激に生産され得る。従って、本発明は、髄膜炎菌性の外膜ベシクル（ＯＭＶ）ワクチンを調製するための方法を提供し、この方法は：（ｉ）髄膜炎菌性髄膜炎の発症と関連する髄膜炎菌株の血清サブタイプを同定する工程；（ｉｉ）ワクチンの製造において使用するために、工程（ｉ）で同定された血清型を有する髄膜炎菌株由来のＯＭＶを調製する工程を包含する。本方法は、：（ｉｉｉ）ワクチンとして前記ＯＭＶを処方する工程；および（ｉｖ）前記発症により影響されるかまたは影響されそうな地理的領域において前記ワクチンを配布する工程のさらなる工程；のうちの１つまたは両方を包含し得る。本発明はまた、同じ方法を提供するが、関連する血清型がすでに同定されている状況に関しては工程（ｉ）を省略する。髄膜炎菌株は、代表的に血清型Ｂであるが、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙなどに代わられ得る。
【００１３】
ＭｅＮＺＢＴＭを用いた実績は、ＯＭＶが髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの単独かまたは組み合わせかのいずれかに対して免疫化するのに有用であり、そしてこれらは近年提案される結合体化ワクチンより製造するのに安価であり得ることを本発明者らに示している。従って、本発明は：（ａ）髄膜炎菌の血清型Ｃ株由来の外膜ベシクルを含有する組成物；（ｂ）髄膜炎菌の血清型Ｗ１３５株由来の外膜ベシクルを含有する組成物；（ｃ）髄膜炎菌の血清型Ｙ株由来の外膜ベシクルを含有する組成物；および（ｄ）髄膜炎菌の血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの２つ以上由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供する。（ｄ）の中で、好ましい組成物としては、以下の血清群混合物：Ａ＋Ｂ；Ａ＋Ｃ；Ａ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ；Ｂ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５；Ｃ＋Ｙ；Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ；Ａ＋Ｂ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｙ；Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｃ＋Ｙ；Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；およびＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙが挙げられる。
【００１４】
莢膜下抗原（ｓｕｂ−ｃａｐｓｕｌａｒ ａｎｔｉｇｅｎ）は血清群間で共有されるので、ＯＭＶ（およびＯＭＶ混合物）は、それらが調製される血清群より多くの血清群に対して防御し得る。例えば、サハラ南下アフリカにおいてみられる血清群Ａ株および血清群Ｗ１３５株由来の莢膜下抗原は、世界のその他の場所でみられる血清群Ｃ株およびＹ群によって共有される。従って、本発明は、第２の血清群の１つ以上の髄膜炎菌株に対して防御するために、第１の血清群の髄膜炎菌株由来のＯＭＶの使用を提供し、ここで前記第１および第２の血清群は異なる。本株は、好ましくは莢膜下抗原を共有し、そして、それらが異なる血清型を有するとはいえ、同じサブタイプ、血清型および／または免疫型を有し得る。血清群ＡおよびＷ１３５由来のＯＭＶ混合物が好ましく、血清群ＣおよびＹ由来のＯＭＶ混合物も同様である。
【００１５】
ＭｅＮＺＢＴＭを用いた実績はまた、ニュージーランドＯＭＶ、ノルウェーＯＭＶおよびキューバＯＭＶに使用される株由来のＯＭＶ混合物が有用に効果的であることを、本発明者らに示している。従って、本発明は：（ｉ）血清サブタイプＰ１．７ｂ，４髄膜炎菌；（ｉｉ）血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌；および（ｉｉｉ）血清サブタイプＰ１．９，１５髄膜炎菌の２つまたは３つ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供する。異なるＯＭＶは、好ましくは混合物であるが、あるいはキット内の別個の容器中に存在し得る。
【００１６】
異なる血清サブタイプ由来のＯＭＶを組み合わせることにより、本発明者らは、個々の血清サブタイプの用量が効果の喪失なしに減少され得ることを見出している。総タンパク質として測定される場合、ＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＴＭは、５０μｇのＯＭＶ（０．５ｍｌ容量）を含有し、ＨｅｘａＭｅｎＴＭは約１ｍｇのＯＭＶ（０．３ｍｌ容量）を含有し、そしてＭｅｎＢＶａｃＴＭおよびＭｅＮＺＢＴＭの両方は２５μｇのＯＭＶ（０．５ｍｌ容量）を含有するが、本発明者らは、混合物が使用される場合、個々のＯＭＶの用量が効果の喪失なしに減少され得ることを見出している。従って本発明は、第１の髄膜炎菌血清サブタイプおよび第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供し、ここで第１の血清サブタイプ由来のＯＭＶの濃度は４５μｇ／ｍｌより少なく、第２の血清サブタイプ由来のＯＭＶ濃度は４５μｇ／ｍｌより少ない。本発明はまた、少なくとも２つの髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供し、ここでＯＭＶを組み合わせた濃度は９０μｇ／ｍｌより少ない。本発明はまた、ｎ個の異なる髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物を提供し、ここで各ｎ個のサブタイプ由来のＯＭＶの濃度は４５μｇ／ｍｌより少ない（すなわち、４５μｇ／ｍｌより少ない総ＯＭＶ用量）。ｎの値は、１、２、３、４、５、６、などであり得る。
【００１７】
本発明はまた、ｎ個の異なるサブタイプから調製されるＯＭＶを含有するキットを提供する。ベシクルは、一緒に用いられる（例えば、混合物として、あるいは同時に別々に使用するかまたは連続して使用するために）ことが必要とされるまで、キット中に別々に維持および貯蔵され得る。同様に、本発明は：各ｎの異なるサブタイプ由来の、ｎセットのＯＭＶを調製する工程；およびｎセットのベシクルの組み合わせる工程を包含するプロセスを提供する。異なるセットは、キット中または混合物中で組み合わされ得る。
【００１８】
本発明はまた、Ｐ１．７ｂ，４血清サブタイプを有する血清群Ｂの髄膜炎菌株から調製されるＯＭＶを含有する組成物を提供し、ここで組成物におけるＯＭＶの濃度は、約５０μｇ／ｍｌである。本組成物は、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバントおよびヒスチジン緩衝液を含む。本組成物は、約０．５ｍｌの投薬容量で与えられ得る。
【００１９】
（ベシクル）
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから調製される外膜ベシクル（ＯＭＶ）をベースにする。
【００２０】
用語「ＯＭＶ」は、外膜のタンパク質成分を含む外膜のベシクルを形成するために細菌性外膜を破裂させることにより得られる任意のタンパクリポソーム性のベシクルを含む。ＯＭＶは、細菌から人工的に調製される（例えば、界面活性剤処置により、または非界面活性剤的手法により）［２９］。本用語はまた、ブレブ、マイクロベシクル（ＭＶ［１２］）および「天然のＯＭＶ」（「ＮＯＭＶ」［１３］）を包含する。これらは、細菌増殖の間に同時に形成する自然に発生する膜ベシクルであり、培養培地中に放出される。ＭＶは、ブロス培養培地中でナイセリアを培養し、全細胞をブロス培養培地中の小さなＭＶから分離し（例えば、濾過または低速の遠心により小さなベシクルではなく細胞のみをペレットにする）、次いで細胞枯渇培地（ｃｅｌｌ−ｄｅｐｌｅｔｅｄ ｍｅｄｉｕｍ）からＭＶを回収する（例えば、濾過により、ＭＶの沈降または凝集の差により、低速の遠心によりＭＶをペレットにすることにより）ことによって得られ得る。ＭＶの産生に使用するための株は、一般的に、培養物中に産生されるＭＶの量をベースに選択され得る（例えば、参考文献１４および１５は、高いＭＶ産生を有するナイセリアを記載する）。
【００２１】
ＯＭＶは、種々の方法で調製され得る。適した調製物を得るための方法は、例えば本明細書中に引用される参考文献に開示される。ＯＭＶを形成するための技術としては、胆汁酸塩界面活性剤（例えば、リトコール酸、ケノデキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、コール酸、ウルソコール酸など、デオキシコール酸ナトリウム［１６および１７］が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａを処置するのに好ましい）を、界面活性剤が沈殿しない十分高いｐＨで、細菌を処理することが挙げられる［６］。他の技術としては、超音波処理、ホモジナイズ、ミクロ流体化、キャビテーション、浸透ショック、粉砕、フレンチプレス（Ｆｒｅｎｃｈ ｐｒｅｓｓ）、混合などのような技術を使用して、実質的に界面活性剤非存在［２９］において実施され得る。
【００２２】
ＯＭＶ調製のための好ましい方法としては、粗製ＭＶにおける高速の遠心分離に代わり、限外濾過［１８］が挙げられる。これは、非常に大量のＯＭＶ含有上清を非常に短い時間（代表的に４時間で＞１５リットル、１０時間で＜１．５リットルに比較して）で処理することを可能にし、遠心分離後ＯＭＶを再分散させる必要性を回避する。超遠心は、大量のＯＭＶをより簡単に調製させ、ワクチンの調製における使用のために選択した株からのＯＭＶの迅速な産生を可能にする。
【００２３】
（ワクチン調製のために用いられる髄膜炎菌株）
目的の髄膜炎菌株血清サブタイプの同定は、クラスＩポーリン外膜タンパク質（ＰｏｒＡ）をベースにして標準的な技術を用いて達成され得る。一度血清サブタイプが決定されると、同じサブタイプを共有する他の公知の株を探索するのが慣習的である。他の株は、第１の株と血清群および／または血清型（ＰｏｒＢ）を共有し得るが、これは必ずしもそうではない。しかしながら、一般的に、血清群および血清型の両方に適合することが好まれる。
【００２４】
本発明に従って使用される髄膜炎菌株は、一般的に、以下の血清群：Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５またはＹのうちの１つである。
【００２５】
本発明に従って使用される髄膜炎菌株は、一般的に、多数の血清型（すなわち複数のＰｏｒＡアレル）を発現する株ではない。従って、本発明を使用するために好まれる細菌は、単一のＰｏｒＡ配列を発現する（すなわち、単一血清サブタイプである）。
【００２６】
ＰｏｒＡがダウンレギュレーションされている株、例えば、野生型レベルに比較して（参考文献１１に開示されるように、例えば株Ｈ４４／７６に比較して）ＰｏｒＡの量が少なくとも２０％減少されている（例えば、≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、≧９５％など）か、またはノックアウトすらされている株を使用することもまた可能である。
【００２７】
本発明に従って使用される髄膜炎菌株は、いずれかの血清型（例えば、１、２ａ、２ｂ、４、１４、１５、１６など）および／またはいずれかの免疫型（例えば、Ｌ１；Ｌ３，３，７；Ｌ１０；など）であり得る。髄膜炎菌は、任意の適した系統に由来し得る。この系統としては、高侵襲性系統および高毒性系統、例えば以下の７つの高毒性系統：サブグループＩ；サブグループＩＩＩ；サブグループＩＶ−１；ＥＴ−５複合体；ＥＴ−３７複合体；Ａ４クラスター；系統３が挙げられる。これら系統は、多座位酵素電気泳動（ＭＬＥＥ）により規定されるが、多座位配列タイピング（ＭＬＳＴ）もまた髄膜炎菌を分類するために使用されており［参考文献１９］、例えばＥＴ−３７複合体はＭＬＳＴによりＳＴ−１１であり、ＥＴ−５複合体はＳＴ−３２（ＥＴ−５）であり、系統３はＳＴ−４１／４４である。
【００２８】
髄膜炎菌は、１つ以上の遺伝子のノックアウト変異を有し得る。発熱活性を減少させるために、例えば、細菌は、低い毒素（ＬＰＳ）レベルを有するべきであり、これはＬＰＳ生合成に関する酵素をノックアウトすることにより達成され得る。適した突然変異細菌は、例えばすでに公知の突然変異株Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ［２０、２１］および突然変異株Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ［２２］である。グラム陰性細菌からＬＰＳ欠損外膜を調製するためのプロセスは、参考文献２３に開示される。
【００２９】
特異的タンパク質のダウンレギュレートされた発現と同様に、細菌はＮｓｐＡ、プロテイン２８７［８］、プロテイン７４１［３０］、ＴｂｐＡ［７］、ＴｂｐＢ［７］、スーパーオキシドジスムターゼ［７］などのような免疫原を過剰発現し得る（対応する野生型株に比較して）。
【００３０】
特定の内因性遺伝子のノックアウトすることと同様に、細菌は、内因性ではない１つ以上の遺伝子を発現し得る。例えば、本発明は、対応する野生型株と比べ新しい遺伝子を発現する組み換え株を使用し得る。この様式における非内因性遺伝子の発現は、種々の技術、例えば、染色体挿入（同義ＰｏｒＡ遺伝子を誘導するために使用されるように［２４］）、ノックイン変異株、余剰染色体ベクターからの発現（例えば、プラスミドから）などにより達成され得る。
【００３１】
細菌はまた、参考文献２５〜３０に開示される１つ以上のノックアウト変異および／または過剰発現を含み得る。ダウンレギュレーションおよび／またはノックアウトのための好ましい遺伝子としては、：（ａ）Ｃｐｓ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｂｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［２５]；（ｂ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｂｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｈｏＰ、ＰｉｌＣ、ＰｍｒＥ、ＰｍｒＦ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［２６］；（ｃ）ＥｘｂＢ、ＥｘｂＤ、ｒｍｐＭ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＧａｌＥ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［２７]；ならびに（ｄ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＯｐＡ、ＯｐＣ、
ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＤ、ＳｙｎＡ、ＳｙｎＢおよび／またはＳｙｎＣ［２８］が挙げられる。
【００３２】
異なる血清サブタイプに基づいてＯＭＶを組み合わせるのと同様に、組み合わせは、他の基準に従って作成され得る。基準の例としては：血清型（ＰｏｒＢ、クラス２または３ＯＭＰ）；免疫型（リポポリサッカリドまたはリポオリゴサッカリド）；株の地理的起源；臨床株の地域的罹患率；高毒性系統（例えば２つ以上のサブグループＩ、サブグループＩＩＩ、サブグループＩＶ−１、ＥＴ５複合体、ＥＴ３７複合体、Ａ４クラスターおよび系統３）；多座配列型（ＭＬＳＴ）［１９］；３つの異なるＮＢ１８７０改変体の１つ以上［３１］が挙げられる。
【００３３】
（ＯＭＶ投薬）
現在の髄膜炎菌ＯＭＶワクチンは、本発明を実施するために薬学的ガイダンス、薬量学的ガイダンスおよび処方ガイダンスを提供する。例えば、ＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＣＴＭは、０．５ｍｌにおいて注射可能な懸濁剤であり、０．０１％チオメルサールおよびリン酸緩衝液を加えた２ｍｇの水酸化アルミニウムゲルに吸着させたＣｕ−３８５−８３株由来のＯＭＶ５０μｇおよび血清群Ｃ莢膜サッカリド５０μｇを含有する。ＭｅＮＺＢＴＭはまた、０．５ｍｌ懸濁液であり、ヒスチジン緩衝液および塩化ナトリウムを添加した１．６５ｍｇの水酸化アルミニウムアジュバントに吸着させたＮＺ９８／２５４株由来のＯＭＶ２５μｇを含有する。ＭｅｎＢｖａｃは、ＭｅＮＺＢＴＭに類似しているが、４４／７６株から調製される。
【００３４】
各サブタイプについてＯＭＶの濃度は、患者への投与後に防御免疫を提供するのに十分高い。本発明の組成物におけるＯＭＶの濃度は、一般的に１０μｇ／ｍｌと５００μｇ／ｍｌとの間であり、好ましくは２５μｇ／ｍｌと２００μｇ／ｍｌとの間であり、さらに好ましくは約５０μｇ／ｍｌまたは約１００μｇ／ｍｌである（ＯＭＶにおける総タンパク質により表される）。
【００３５】
しかしながら、組成物が１つより多い髄膜炎菌血清サブタイプ由来のＯＭＶを含有する場合、本発明者らは、個々の血清サブタイプの投薬が効果の喪失なしに減少され得ることを見出している。ニュージーランドサブタイプおよびノルウェーサブタイプの投薬は、免疫原性の喪失なしに０．５ｍｌ用量で２５μｇから１２．５μｇに半減され得る。従って、１つより多い髄膜炎菌サブタイプ由来の外膜ベシクルを含む本発明の組成物は、ＭｅｎＢｖａｃＴＭおよびＭｅＮＺＢＴＭにの単純な混合をベースに経験的に予測される１００μｇ／ｍｌ未満、ＭｅｎＢｖａｃＴＭまたはＭｅＮＺＢＴＭのいずれかとＶＡ−ＭＥＮＧＯＣ−ＢＣＴＭの単純な混合をベースに経験的に予測される１５０μｇ／ｍｌ未満を含む。従って、そのような本発明の組成物は、９０μｇ／ｍｌ以下（例えば、８０μｇ／ｍｌ、７０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ以下、またはさらに低い）の合わせたＯＭＶ濃度を有する。
【００３６】
さらに一般的に、組成物がｎ個の異なる髄膜炎菌サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する場合、各サブタイプ由来のＯＭＶ濃度は４５μｇ／ｍｌより少ない（例えば、４０μｇ／ｍｌ、３５μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ未満またはさらに低い）。約２５μｇ／ｍｌの濃度が好ましい。
【００３７】
組成物がｎの異なる髄膜炎菌サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する場合、各サブタイプのＯＭＶ量は、好ましくは、互いの±１０％以内である、すなわちこの組成物は、実質的に等しい量の各ＯＭＶを含有する。しかしながら、ある場合において、１つのサブタイプの量は、別のサブタイプの量より約ｘ倍多く、ここでｘは、２、３または４であり得、例えばこの組成物は、本組成物において、他のサブタイプに比較して２倍量の１つのサブタイプを含有する。
【００３８】
（ＯＭＶを含有する薬学的組成物）
本発明の組成物は、薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物であり得る。そのような組成物は、ＯＭＶを薬学的に受容可能なキャリアと混合する工程を包含するプロセスを使用して調製され得る。
【００３９】
代表的な「薬学的に受容可能なキャリア」としては、上記組成物を受ける個体に害のある抗体の産生をそれ自体では誘導しない任意のキャリアが挙げられる。適したキャリアは、代表的に、タンパク質、ポリサッカリド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合アミノ酸、アミノ酸コポリマーおよび脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）のような大きなゆっくり代謝される巨大分子である。そのようなキャリアは、当業者において周知である。本ワクチンはまた、水、生理食塩水、グリセロールなどのような希釈剤を含む。さらに、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝化剤、スクロースなどのような補助剤が存在し得る。無菌の発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理学的食塩水が、代表的なキャリアである（例えば、注射用水をベースに）。薬学的に受容可能な賦形剤の完全な考察は、参考文献３２において入手可能である。
【００４０】
本発明の組成物は、代表的に乾燥した形態（例えば、凍結乾燥）よりむしろ水溶性の形態（例えば、溶液または懸濁剤）である。水溶性組成物はまた、凍結乾燥した形態から他のワクチンを再構成するのに適している（例えば、凍結乾燥Ｈｉｂ結合体化ワクチン、凍結乾燥髄膜炎菌結合体化ワクチンなど）。本発明の組成物が、そのような即席の再構成に使用される場合、本発明は、キットを提供し得る。このキットは、注射する前に、バイアルの乾燥させた内容物を反応させるために使用されるシリンジの水溶性内容物とともに、２つのバイアルを含み得るかまたは１つのすでに充填されたシリンジおよび１つのバイアルを含み得る。
【００４１】
本発明の組成物は、バイアル中に存在し得るか、すでに充填されたシリンジ中に存在し得る。本シリンジは、針とともにまたは針無しで供給され得る。組成物は、単位用量形態または複数回用量形態で包装され得る。シリンジは、一般的に単回用量の組成物を含有する一方で、バイアルは、単回用量または複数回用量を含有し得る。そのため複数回用量形態のためには、あらかじめ充填されたシリンジに対してバイアルが好ましい。
【００４２】
効果的な投薬容量は慣習的に確立され得るが、組成物の代表的なヒト用量は、例えば、筋肉内注射に関しては約０．５ｍｌの容量を有する。ＲＩＶＭ ＯＭＶベースワクチンは、大腿部または上腕部への筋肉内注射により０．５ｍｌ容量で投与された［３３］。ＭｅＮＺＢＴＭは、大腿部の前外側または腕の三角筋部への筋肉内注射により０．５ｍｌで投与される。同様な用量が、他の送達ルートのために使用され得、例えば噴霧のための鼻内ＯＭＶベースワクチンは、スプレーあたり約１００μｌまたは約１３０μｌの容量を有し得［１３］、約０．５ｍｌの全用量を与えるためには４回のスプレーが投与される。
【００４３】
本組成物のｐＨは、好ましくは６と８との間であり、さらに好ましくは、６．５と７．５との間（例えば、約７）である。ＲＩＶＭ ＯＭＶベースワクチンのｐＨは、７．４［３４］であり、ｐＨ＜７．５が本発明の組成物において好ましい。安定なｐＨは、緩衝液、例えばＴｒｉｓ緩衝液、リン酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液の使用により維持され得る。本発明の組成物は一般的に緩衝液を含有する。組成物が水酸化アルミニウムを含む場合、例えば、１〜１０ｍＭの間、好ましくは約５ｍＭにおけるヒスチジン緩衝液の使用が好しい［３５］。ＲＩＶＭ ＯＭＶベースワクチンは、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液を使用することによりｐＨを維持する。組成物は、滅菌および／または発熱物質なしであり得る。本発明の組成物は、ヒトに対して等張性であり得る。
【００４４】
本発明の組成物は、免疫原性であり、より好ましいワクチン組成物である。本発明に従うワクチンは、予防的（すなわち、感染を予防する）であるかまたは治療的（すなわち、感染を処置する）のいずれかであり得るが、代表的には予防的である。ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効量の抗原、および必要に応じて、任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回用量または一連の投与の一部のいずれかで、個体に投与する量が、処置または予防に関して有効であることを意味する。この量は、治療される個体の健康および身体的状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個々の免疫システムの能力、所望される防御の度合い、ワクチンの処方、医学的状態に関する処置医の評価および他の関連要因に依存して変化する。この量は、比較的広い範囲になることが予測され、この範囲は、通常の試験を通して決定され得る。本発明の組成物の抗原含有量は、一般的に、１用量あたりのタンパク質量で表される。１ｍｌあたり約０．９ｍｇの用量が、ＯＭＶベースの鼻腔内ワクチンについて代表的である［１３］。
【００４５】
髄膜炎菌は、身体の種々の領域に影響を与え、そしてそのため、本発明の組成物は種々の形態で調製され得る。例えば、本組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射可能物として調製され得る。本組成物は、肺投与（例えば、吸入のような）として、微細粒子またはスプレーを使用して調製され得る。本組成物は、坐剤または膣坐剤として調製され得る。本組成物は、鼻内、耳内または眼内投与のために、例えば、スプレー、液滴、ゲルまたは粉末として調製され得る［例えば、参考文献３６および３７］。筋肉内投与のための注射可能物が代表的である。
【００４６】
本発明の組成物としては、特に複数回用量フォーマットで包装される場合、抗菌薬を含有し得る。チオメルサールおよび２−フェノキシエタノールのような抗菌薬は、一般的にワクチンにおいて見出されるが、水銀を含まない防腐剤を使用するかまたは全く防腐剤を使用しないかのいずれかが好ましい。
【００４７】
本発明の組成物は、界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含み得る。界面活性剤は、一般的に低レベル、例えば＜０．０１％で存在する。
【００４８】
本発明の組成物は、ＯＭＶ調製に由来する残留界面活性剤（例えば、デオキシコール酸）を含み得る。残留界面活性剤の量は、タンパク質１μｇごとについて０．４μｇより少ないことが好ましい（さらに好ましくは、０．２μｇより少ない）。
【００４９】
本発明の組成物は、髄膜炎菌由来のＬＰＳを含み得る。ＬＰＳの量は、好ましくは、タンパク質１μｇごとについて０．１２μｇより少ないことが好まれる（さらに好ましくは、０．０５μｇより少ない）。
【００５０】
本発明の組成物としては、張性を与えるためのナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。１０±２ｍｇ／ｍｌの濃度のＮａＣｌが代表的である。塩化ナトリウムの濃度は好ましくは、約９ｍｇ／ｍｌである。
【００５１】
本発明の組成物は、一般的に他の免疫調節物質との結合体において投与される。特に、組成物は、通常１つ以上のアジュバントを含み、本発明は、本発明の組成物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、本発明のベシクルをアジュバント、例えば薬学的に受容可能なキャリアと混合する工程を包含する。適したアジュバントとしては以下が挙げられるが、これらに限定されない：
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明における、アジュバントとしての使用に適したミネラル含有組成物としては、アルミニウム塩およびカルシウム塩のような無機塩類が挙げられる。本発明は、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩などのミネラル塩などのような無機塩類［例えば、参考文献３８の第８章および第９章を参照のこと］、または異なるミネラル化合物の混合物を含み、この化合物は任意の適した形態（例えば、ゲル、結晶、非結晶など）をとり、吸着することが好ましいとされる。ミネラル含有組成物はまた、金属塩の粒子として処方され得る［３９］。
【００５２】
代表的なリン酸アルミニウムアジュバントは、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４と０．９２との間で０．６ｍｇのＡｌ３＋／ｍｌを含む非結晶性のヒドロキシリン酸アルミニウムである。低用量のリン酸アルミニウムを用いる吸着が、例えば１用量あたり５０μｇと１００μｇとの間のＡｌ３＋で用いられ得る。リン酸アルミニウムを吸着に使用し、抗原をアジュバントに吸着させないことが所望される場合、このことは溶液中に遊離リン酸イオンを含むことにより（例えば、リン酸緩衝液の使用により）促進される。
【００５３】
ＲＩＶＭワクチンは、リン酸アルミニウムアジュバントかまたは水酸化アルミニウムアジュバントのいずれかに対する吸着により試験され、リン酸アルミニウムアジュバントが、より優れた結果を与えることが見出された［３４］。ＭｅＮＺＢＴＭ、ＭｅｎＢｖａｃＴＭおよびＶＡ−ＭＥＮＩＮＧＯＣ−ＢＣＴＭ製品は、すべて水酸化アルミニウムアジュバントを含有する。
【００５４】
アルミニウムアジュバントの代表的な用量は、約３．３ｍｇ／ｍｌ（Ａｌ３＋濃度として表される）である。
【００５５】
Ｂ．油性乳濁液
本発明における、アジュバントとしての使用に適した油性乳剤組成物としては、ＭＦ５９［参考文献３８の第１０章、参考文献４０も参照のこと］（ミクロ流動器（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を使用してサブミクロン粒子に処方される５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０、および０．５％Ｓｐａｎ ８５）のようなスクアレン−水乳剤が挙げられる。フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）もまた使用され得る。
【００５６】
Ｃ．サポニン処方物［参考文献３８の第２２章］
サポニン処方物もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根さらに花においてさえ見出されるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来のサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサプリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ）、シュッコンカスミソウ（ブライデスベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサボンソウ（サボンソウ根）由来のサポニンはまた、商業的に入手され得る。サポニンアジュバント処方物としては、ＱＳ２１のような精製処方物およびＩＳＣＯＭのような脂質処方物が挙げられる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販される。
【００５７】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製される。これらの技術を使用して精製された特定の画分が同定されており、その精製画分としては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生産方法は、参考文献４１に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールのようなステロールを含み得る［４２］。
【００５８】
サポニンとコレステロールとの組み合わせが、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成するために使用され得る［参考文献３８の第２３章］。ＩＳＣＯＭとしては、代表的に、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質が挙げられる。任意の公知のサポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、ＩＳＣＯＭとしては、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１つ以上が挙げられる。ＩＳＣＯＭは、さらに参考文献４２〜４４に記載される。必要に応じて、ＩＳＣＯＭは余分な界面活性剤を含まない［４５］。
【００５９】
サポニンベースのアジュバントの開発についての概説は、参考文献４６および４７に見出され得る。
【００６０】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般的に、必要に応じてリン脂質と組み合わせられるかまたは処方されるウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。これらは、一般的に、非病原性、非複製性であり、一般的に、いかなる天然のウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質は組換えによって産生され、ウイルス全体から単離され得る。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用に適したこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（ＨＡまたはＮＡのような）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（コアタンパク質またはカプシドタンパク質のような）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビスウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒト乳頭腫ウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡ−ファージ由来のタンパク質、Ｑβ−ファージ由来のタンパク質（コートタンパク質のような）、ＧＡ−ファージ由来のタンパク質、ｆｒ−ファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質、およびＴｙ由来のタンパク質（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１のような）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献４８〜５３でさらに考察される。ビロソームはさらに、例えば、参考文献５４で考察される。
【００６１】
Ｅ．細菌性または微生物性誘導体
本発明における、使用に適したアジュバントとしては、腸内細菌リポポリサッカリド（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、脂質Ａ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびＡＤＰリボシル化毒素、ならびにそれらの解毒誘導体のような細菌性または微生物性の誘導体が挙げられる。
【００６２】
ＬＰＳの非毒性誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、４、５または６つのアシル化鎖を有する３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、参考文献５５に開示される。そのような３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μｍの膜を通して滅菌濾過されるほど十分に小さい［５５］。他の非毒性ＬＰＳ誘導体としては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸誘導体（例えば、ＲＣ−５２９）のようなモノホスホリル脂質Ａ模倣物が挙げられる［５６、５７］。
【００６３】
脂質Ａ誘導体としては、ＯＭ−１７４のようなＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来の脂質Ａの誘導体が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば参考文献５８および５９に記載される。
【００６４】
本発明における、アジュバントとしての使用に適した免疫刺激オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列（グアノシンへのリン酸結合により連結される非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。
【００６５】
ＣｐＧは、ホスホロチオエート修飾物のようなヌクレオチド修飾物／アナログを含み得、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献６０、６１および６２は、可能なアナログ置換（例えばグアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置換）を開示する。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献６３〜６８においてさらに考察される。
【００６６】
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはモチーフＴＴＣＧＴＴのようなＴＬＲ９に対して向けられ得る［６９］。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮのようなＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか、またはＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮのようなＣｐＧ配列は、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献７０〜７２において考察される。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【００６７】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識のためにアクセス可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、その３’末端で結合され得、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成する。例えば、参考文献６９および７３〜７５を参照のこと。
【００６８】
細菌性ＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体は、本発明においてアジュバントとして使用され得る。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰリボシル化毒素の使用は、参考文献７６に記載され、非経口アジュバントとしての使用は、参考文献７７に記載される。毒素または類毒素は、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロ毒素の形態である。好ましくは、Ａサブユニットは、解毒性の変異を含み；好ましくは、Ｂサブユニットは変異されない。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２のような解毒ＬＴ変異体である。ＡＤＰリボシル化毒素およびその解毒誘導体、特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、参考文献７８〜８５に見出され得る。アミノ酸置換に関する数の参照は、好ましくは、参考文献８６に記載のＡＤＰリボシル化毒素のＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントをベースとし、特にその全体が本明細書中において参考として援用される。
【００６９】
Ｆ．ヒト免疫調節因子
本発明において、アジュバントとして使用に適したヒト免疫調節因子としては、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［８７］など）［８８］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−？）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子のようなサイトカインが挙げられる。
【００７０】
Ｇ．生体付着物および粘膜付着物
生体付着物および粘膜付着物はまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。適した生体付着物としては、エステル型のヒアルロン酸マイクロスフィア［８９］または架橋したポリ（アクリル酸）の誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースのような粘膜付着物が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る[９
０]。
【００７１】
Ｈ．微粒子
微粒子もまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍの粒子、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍの粒子、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）は、生体分解性および非毒性（例えば、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシブチル酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）である物質から形成され、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）が好ましく、必要に応じて負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳを用いて）または正に荷電した表面（例えば、ＣＴＡＢのようなカチオン性界面活性剤を用いて）を有するように処理される。
【００７２】
Ｉ．リポソーム（参考文献３８の第１３章および第１４章）
アジュバントとしての使用に適したリポソーム処方物の例は、参考文献９１〜９３に記載される。
【００７３】
Ｊ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明における、使用に適したアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる[９４]。そのような処方物はさらに、オクトキシノールとの組み合わせでポリオキシエチレンソルビタンエステルのサーファクタント[９５]および少なくとも１つのオクトキシノールのようなさらなる非イオン性サーファクタントとの組み合わせでポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステルのサーファクタントを含む[９６]。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【００７４】
Ｋ．ポリホスファザン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば参考文献９７および９８に記載される。
【００７５】
Ｌ．ムラミルペプチド
本発明におけるアジュバントとしての使用に適したムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【００７６】
Ｍ．イミダゾキノロン化合物
本発明においてアジュバントを使用するために適したイミダゾキノロン化合物の例としては、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびそのホモログ（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）が挙げられ、さらに参考文献９９および１００に記載される。
【００７７】
本発明はまた、上記に同定される１つ以上のアジュバントの局面の組み合わせを含む。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において用いられ得る：（１）サポニンおよび水中油型乳剤［１０１］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば３ｄＭＰＬ）［１０２］；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）［１０３］；（５）例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳剤と３ｄＭＰＬとの組み合わせ［１０４］；（６）大きい粒子サイズの乳剤を生成するためにサブミクロン乳剤中に微流動化させるかまたはボルテックスされた、１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ ８０ＴＭ、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦ。（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１つ以上の細菌細胞壁成分を含むＲｉｂｉＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ）；ならびに（８）１つ以上の無機塩類（アルミニウム塩のような）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＭＰＬのような）。
【００７８】
免疫刺激物質として作用する他の基質は、参考文献３８の第７章に開示される。
【００７９】
アルミニウム塩アジュバントの使用が特に好ましく、抗原は一般的にそのような塩に吸着される。本発明の組成物において、水酸化アルミニウムにいくつかの抗原を吸着することが可能であるほかに、リン酸アルミニウム関連して他の抗原を有することが可能である。しかしながら、一般的に１つの塩（例えば、水酸化物またはリン酸塩）だけを使用することが好ましく、両方は好まれない。すべてのベシクルが吸着されることを必要とするとは限らず、すなわちいくつかまたはすべてのベシクルが溶液中で遊離し得る。
【００８０】
（処置方法）
本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を惹起するための方法を提供し、この方法は、本発明の薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を包含する。免疫応答は、好ましくは防御的であり、好ましくは抗体を含む。本方法は、すでにＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対して初回免疫されている患者において追加免疫応答を惹起し得る。ＯＭＶに関する皮下および鼻内の初回免疫／追加免疫レジメンは参考文献１０５に開示される。
【００８１】
哺乳動物は、好ましくはヒトである。ワクチンが予防的に使用される場合、このヒトは、好ましくは子供（例えば、幼児または乳児）または１０代であり；ワクチンが治療的に使用される場合、このヒトは、好ましくは成人である。子供を意図したワクチンはまた、成人に投与され得る（例えば、安全性、用量、免疫原性などを評価するため）。
【００８２】
本発明はまた、医薬として使用するための本発明のＯＭＶ組成物および混合物を提供する。本医薬は、好ましくは哺乳動物において免疫応答を惹起することができ（すなわち、免疫原性組成物である）、さらに好ましくはワクチンである。
【００８３】
本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を惹起するための医薬の製造における、本発明のＯＭＶ組成物および混合物の使用を提供する。
【００８４】
これらの使用および方法は、好ましくはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、例えば細菌性（またはさらに具体的には髄膜炎菌性）髄膜炎または敗血症により生じる疾患の予防および／または処置のためである。
【００８５】
治療的処置の効果を調べる１つの方法としては、本発明の組成物の投与後、ナイセリア感染をモニターすることが挙げられる。予防的処置の効果を調べる１つの方法としては、組成物の投与後、ＯＭＶ抗原に対する免疫応答をモニターすることが挙げられる。本発明の組成物の免疫原性は、試験被験体（例えば、１２〜１６ヶ月齢の子供または動物モデル［１０６］）に投与し、次いで血清の細菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含む標準的パラメーターを決定することにより、決定され得る。これらの免疫応答は、一般的に組成物投与後約４週間で決定され、組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡ上昇が好まれる。１用量より多い組成物が投与される場合、１より多い投与後決定がなされ得る。
【００８６】
本発明の好ましい組成物は、患者における抗体力価を与え得、この力価はヒト被験体の受容可能なパーセンテージについての血清防御に関する基準を上回っている。関連抗体力価（この力価より上で、宿主が抗原に対して血清変換されると考えられる）を有する抗原は周知であり、そのような力価は、ＷＨＯのような組織により公開される。好ましくは、８０％より多い統計的に有意な被験体サンプル、さらに好ましくは９０％より多い、よりさらに好ましくは９３％より多い、最も好ましくは９６〜１００％の被験体サンプルが血清変換される。
【００８７】
本発明の組成物は、一般的に患者に直接的に投与される。直接的な送達は、非経口的注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内または組織の間質へ）により、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻内投与、眼内投与、耳内投与、肺投与または他の粘膜投与により達成され得る。大腿部または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針を介し得る（例えば、皮下組織用針）が、針なし注射が、代わりに用いられ得る。代表的な筋肉内用量は０．５ｍＬである。
【００８８】
投薬処置は、単回投薬スケジュールまたは複数回投薬スケジュールであり得る。複数回投薬は、最初の免疫スケジュールにおいて、および／または追加免疫スケジュールにおいて用いられ得る。最初の投薬スケジュールに続いて追加免疫が行われ得る。初回免疫投薬の間（例えば、４〜１６週間）および初回免疫と追加免疫との間の適したタイミングは、慣習的に決定され得る。ＯＭＶベースのＲＩＶＭワクチンは、０ヶ月、２ヶ月および８ヶ月または０ヶ月、１ヶ月、２ヶ月および８ヶ月でワクチン接種をする、３回投薬または４回投薬の初回スケジュールを使用して試験された。ＭｅＮＺＢＴＭは、６週間の間隔で３回投薬として投与される。
【００８９】
上記に記載されるように、本発明は、１より多いＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清サブタイプ由来のベシクルの、別々あるいは混合物のいずれかにおける投与を包含する。
【００９０】
本発明は、全身性免疫および／または粘膜性免疫を導くために使用され得る。
【００９１】
一般的に、本発明の組成物は、被験体に投与された後、血清細菌抗体応答を誘導することができる。これらの応答は、マウスにおいて簡便に測定され、ワクチンの効果の標準的指標である［例えば参考文献１６６の巻末の注１４を参照のこと］。血清細菌活性（ＳＢＡ）として、補体により媒介される細菌の死滅を測定し、ヒトの補体または生まれたばかりのウサギ補体を使用してアッセイされ得る。ＷＨＯ標準は、ワクチンが９０％より多いレシピエントにおいて、ＳＢＡにおける少なくとも４倍の上昇を誘導することを要求している。ＭｅＮＺＢＴＭは、第３の投薬の投与後４〜６週間で、ＳＢＡにおける４倍の上昇を導く。
【００９２】
異なる血清サブタイプに対するＯＭＶを混合することにより、本発明の組成物は、１つより多い髄膜炎菌の高毒性系統に対して細菌抗体応答を誘導し得る。特にそれらは、好ましくは以下の３つの高毒性系統のうち２つまたは３つに対して細菌応答を誘導し得る：（ｉ）クラスターＡ４；（ｉｉ）ＥＴ５複合体；および（ｉｉｉ）系統３。それらはさらに、高毒性系統のサブグループＩ、サブグループＩＩＩ、サブグループＩＶ−１またはＥＴ−３７複合体の１つ以上に対して、そして他の系統、例えば、高毒性系統に対して、細菌抗体応答を誘導し得る。これは、この組成物がこれら高毒性系統内のそれぞれおよびすべての髄膜炎菌株に対して細菌抗体を誘導し得ることを必ずしも意味するものではなく、例えば、特定の高毒性系統のうち４つ以上の髄膜炎菌株の任意の所定の群に関して、この組成物により誘導される抗体は、その群の少なくとも５０％（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上）に対して殺菌性である。好ましい株の群としては、以下に挙げる国の少なくとも４カ国において単離された株が挙げられる：ＧＢ、ＡＵ、ＣＡ、ＮＯ、ＩＴ、ＵＳ、ＮＺ、ＮＬ、ＢＲおよびＣＵ。血清は、好ましくは少なくとも１０２４（例えば、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８またはより高い、好ましくは少なくとも２１４）の殺菌力価を有する（例えば、参考文献１６６に記載されるように、血清は１０２４分の１に希釈した場合、特定の株の試験細菌の少なくとも５０％を殺菌し得る）。
【００９３】
好ましい組成物は、血清群Ｂ髄膜炎菌の以下の株に対して殺菌応答を誘導し得る：（ｉ）クラスターＡ４由来の９６１〜５９４５株（Ｂ：２ｂ：Ｐ１．２１，１６）および／または株Ｇ２１３６（Ｂ：−）；（ｉｉ）ＥＴ−５複合体由来のＭＣ５８株（Ｂ１５：Ｐ１．７，１６ｂ）および／または４４／７６株（Ｂ：１５：Ｐ１．７，１６）；（ｉｉｉ）系統３由来の株３９４／９８（Ｂ：４：Ｐ１．４）および／またはＢＺ１９８株（Ｂ：ＮＴ：−）。より好ましい組成物は、９６１−５９４５株、４４／７６株および３９４／９８株に対する殺菌応答を誘導し得る。
【００９４】
株９６１〜５９４５およびＧ２１３６はいずれもナイセリアＭＬＳＴ参照株である［参考文献１０７のｉｄｓ ６３８および１００２］。ＭＣ５８株は広く入手可能であり（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−３３５）、参考文献１０８において配列決定された株である。４４／７６株は広く用いられ、特徴付けられており（例えば、参考文献１０９）、ナイセリアＭＬＳＴ参照株の１つである［参考文献１０７のｉｄ２３７；参考文献１９の表２の３２行］。３４９／９８株は、本来１９９８年にニュージーランドにおいて単離され、本株を使用するいくつかの発表された研究がある（例えば、参考文献１１０および１１１）。ＢＺ１９８株は、別のＭＬＳＴ参照株である［参考文献１０７のｉｄ４０９；参考文献１９の表２の４１行］。
【００９５】
（さらなる抗原性成分）
ＯＭＶを含有するのと同様に、本発明の組成物は、さらに非ベシクル性抗原を含み得る。例えば、本組成物は、さらに以下の抗原を１つ以上含み得る：
−血清群Ｃ由来の参考文献１１２に開示されるオリゴサッカリドまたは参考文献１１３に開示されるオリゴサッカリドのような、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来のオリゴサッカリド抗原。ＶＡ−ＭＥＮＩＮＧＯＣ−ＢＣＴＭ製品は、血清群Ｃポリサッカリドを含む。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカリド抗原［例えば、参考文献１１４〜１１６；参考文献１２３の第２２章および第２３章］。
−不活化ウイルスのようなＡ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、１１７、１１８；参考文献１２３の第１５章］。
−表面抗原および／またはコア抗原のようなＢ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、１１８、１１９；参考文献１２３の第１６章］。
−Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば１２０］。
−必要に応じてペルタクチンおよび／または凝集原２および凝集原３とも組み合わせた、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）のような、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原［例えば、参考文献１２１および１２２；参考文献１２３の第２１章］。
−ジフテリアトキソイドのようなジフテリア抗原［参考文献１２３の第１３章］。
−破傷風トキソイドのような破傷風抗原［例えば、参考文献１２３の第２７章］。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ由来のサッカリド抗原［参考文献１２３の第１４章］。
−Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ由来の抗原［例えば、参考文献１２４］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原［例えば、参考文献１２５〜１３１］。
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原［例えば、１３２］。
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来の抗原［例えば、参考文献１３３］。
−ＩＰＶのようなポリオ抗原［例えば、１３４、１３５；参考文献１２３の第２４章］。
−凍結乾燥不活化ウイルス［例えば１３７、ＲａｂＡｖｅｒｔＴＭ］のような狂犬病抗原［例えば１３６］。
−麻疹、ムンプスおよび／または風疹抗原［例えば、参考文献１２３の第１９章、第２０章および２６章］。
−血球凝集素および／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質のようなインフルエンザ抗原［例えば、参考文献１２３の１７章および１８章］。
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原［例えば１３８］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ストレプトコッカスＢ群）由来のタンパク質抗原［例えば、１３９、１４０］。
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ストレプトコッカスＡ群）由来の抗原［例えば、１４０、１４１、１４２］。
【００９６】
サッカリド抗原または糖質サッカリド抗原が使用される場合、この抗原は、好ましくは、免疫原性を増強するためにキャリアに結合体化される。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ、髄膜炎菌および肺炎球菌のサッカリド抗原の結合体化は周知である。
【００９７】
毒性タンパク質抗原は、必要である場合、解毒化され得る（例えば、化学的方法および／または遺伝的方法による百日咳毒素の解毒［１２２］）。
【００９８】
ジフテリア抗原が組成物中に含有される場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含有することもまた好まれる。同様に、破傷風抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含有することもまた好ましい。同様に、百日咳抗原が含有される場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含有することもまた好ましい。従って、ＤＴＰの組み合わせが好ましい。
【００９９】
サッカリド抗原は、好ましくは、結合体の形態である。結合体のための好ましいキャリアタンパク質は、ジフテリアトキソイドまたは百日咳トキソイドのような細菌毒素または細菌トキソイドである。ジフテリア毒素のＣＲＭ１９７変異体［１４３〜１４５］は、特に好ましいキャリアであり、ジフテリアトキソイドも同様である。他の適したキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［１４６］、合成ペプチド［１４７、１４８］、熱ショックタンパク質［１４９、１５０］、百日咳タンパク質［１５１、１５２］、サイトカイン［１５３］、リンホカイン［１５３］、ホルモン［１５３］、成長因子［１５３］、種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有する人工タンパク質［１５４］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［１５５、１５６］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［１５７］、肺炎球菌溶血素［１５８]、鉄取り込みタンパク質［１５９］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［１６０］などが挙げられる。
【０１００】
本組成物における抗原は、代表的に、それぞれ少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般的に、任意の所定の抗原の濃度は、抗原に対する免疫応答を誘導するのに十分である。
【０１０１】
本発明の組成物において使用するタンパク質抗原の代替物として、抗原をコードしている核酸が用いられ得る。本発明の組成物のタンパク質成分は、タンパク質をコードする核酸（好ましくはＤＮＡ、例えば、プラスミドの形態において）により置換され得る。
【０１０２】
好ましい組成物としては、１つ以上（すなわち、１、２、３または４）の髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ，Ｗ１３５およびＹ由来の結合体化莢膜サッカリドを加えた上記に記載されるような髄膜炎菌ＯＭＶを含む。ＯＭＶが血清群Ｂ由来である場合、本アプローチは、以下の血清群が包含されることを可能にする：Ｂ＋Ａ；Ｂ＋Ｃ；Ｂ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ａ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；およびＢ＋Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ。２つの好ましい組み合わせは、血清群Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙまたは血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙのいずれか由来の結合体化抗原を加えた血清群ＢのＯＭＶを使用する。一般的に、ｘの血清群のＯＭＶおよび残りの５−ｘ血清群の結合サッカリドを選択することにより、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの５つすべての血清群を包含することは可能である。
【０１０３】
特異的な髄膜炎菌タンパク質抗原（好ましくは血清群Ｂ由来）もまた、ＯＭＶ組成物を補充するために加えられ得る。特に、参考文献３０および１６１〜１６９に開示されるようなタンパク質抗原が加えられ得る。少数の定義された抗原が加えられ得る（１０または１０より少ない（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２）精製抗原の混合物）。本発明とともに使用するための好ましいさらなる免疫原性ポリペプチドは、参考文献１６９に開示されるもの：（１）「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「７４１」タンパク質；（３）「９３６」タンパク質；（４）「９５３」タンパク質；および（５）「２８７」タンパク質。他の可能な補充髄膜炎菌抗原としては、トランスフェリン結合タンパク質（例えば、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ）および／またはＣｕ、Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ［７］が挙げられる。他の可能な補充髄膜炎菌抗原として、以下のアミノ酸配列の１つを含むタンパク質：参考文献１６１由来の配列番号：６５０；参考文献１６１由来の配列番号：８７８；参考文献１６１由来の配列番号：８８４；参考文献１６２由来の配列番号：４；参考文献１６３由来の配列番号：５９８；参考文献１６３由来の配列番号：８１８；参考文献１６３由来の配列番号：８６４；参考文献１６３由来の配列番号：８６６；参考文献１６３由来の配列番号：１１９６；参考文献１６３由来の配列番号：１２７２；参考文献１６３由来の配列番号：１２７４；参考文献１６３由来の配列番号：１６４０；参考文献１６３由来の配列番号：１７８８；参考文献１６３由来の配列番号：２２８８；参考文献１６３由来の配列番号：２４６６；参考文献１６３由来の配列番号：２５５４；参考文献１６３由来の配列番号：２５７６；参考文献１６３由来の配列番号：２６０６；参考文献１６３由来の配列番号：２６０８；参考文献１６３由来の配列番号：２６１６；参考文献１６３由来の配列番号：２６６８；参考文献１６３由来の配列番号：２７８０；参考文献１６３由来の配列番号：２９３２；参考文献１６３由来の配列番号：２９５８；参考文献１６３由来の配列番号：２９７０；参考文献１６３由来の配列番号：２９８８、または、（ａ）前記配列に対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）を有し、かつ／または（ｂ）前記配列由来の少なくともｎ個の連続的なアミノ酸のフラグメントを含み、ここで、ｎは７またはそれ以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）である、アミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。（ｂ）に関して好ましいフラグメントは、関連配列由来のエピトープを含む。１つ以上（例えば、２、３、４、５、６）のこれらポリペプチドが含まれ得る。髄膜炎菌抗原トランスフェリン結合タンパク質および／またはＨｓｆタンパク質がまた、加えられ得る［１７０］。
【０１０４】
このような方法において、定義した髄膜炎菌抗原によるＯＭＶの補充は、ＯＭＶが血清サブタイプＰ１．７ｂ，４の髄膜炎菌または血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌である場合、特に有用である。これら両血清サブタイプ由来のＯＭＶの混合物の補充が好ましい。
【０１０５】
（特異的血清サブタイプ）
本発明は、以下のサブタイプの１つを有する髄膜炎菌から調製されるＯＭＶを含む組成物を提供する：Ｐ１．２；Ｐ１．２，５；Ｐ１．４；Ｐ１．５；Ｐ１．５，２；Ｐ１．５，ｃ；Ｐ１．５ｃ，１０；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．７，１６ｂ；Ｐ１．７ｈ，４；Ｐ１．９；Ｐ１．１５；Ｐ１．９，１５；Ｐ１．１２，１３；Ｐ１．１３；Ｐ１．１４；Ｐ１．２１，１６；Ｐ１．２２，１４。
【０１０６】
上記髄膜炎菌は好ましくは血清群Ｂである。
【０１０７】
これらのＯＭＶは、上に記載されるような、本発明での使用に適している。
【０１０８】
（ＯＭＶ投与レジメン）
本発明は、患者に髄膜炎菌ＯＭＶを投与するための方法を提供し、ここで第１の投薬は時間０において与えられ、第２および第３の投薬は、次の２ヶ月にわたり与えられ、第４の投薬は、時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後の間に与えられる。
【０１０９】
本発明はまた、患者に髄膜炎菌ＯＭＶを投与するための方法を提供し、ここで第１の投薬は時間０において与えられ、第２および第３の投薬は、次の２ヶ月にわたり与えられ、第４の投薬は、時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後の間で与えられ、そしてここで（ａ）第１、第２および第３の投薬は、互いに同じ血清サブタイプを有するＯＭＶを含み、かつ（ｂ）第４の投薬は、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有するＯＭＶを含む。第４の投薬は、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有するＯＭＶのみ含み得るか、または２つの型のＯＭＶを含み得、１つは、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有し、１つは同じサブタイプを有する。
【０１１０】
第１、第２および第３の投薬は、好ましくは６週間と８週間の間の間隔で与えられる。４回目の投薬は、好ましくは時間０から、約１年後に与えられる。
【０１１１】
患者は、好ましくは第４の投薬それぞれで、同量のワクチンを与える。
【０１１２】
ＯＭＶは、好ましくは、血清サブタイプＰ１．７ｂ，４および／またはＰ１．７，１６である。
【０１１３】
本発明はまた、患者に髄膜炎菌ワクチンを投与するための方法を提供し、ここで：（ａ）本ワクチンは、第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶを含み；（ｂ）この患者は、第２の血清サブタイプを有する異なるＯＭＶワクチンを以前に受けており、異なるＯＭＶワクチンの第１の投薬が本方法の１１ヶ月より前に与えられている。
【０１１４】
本発明はまた、髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫化するための医薬の製造における、第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶの使用を提供し、ここでこの医薬は、第２の血清サブタイプを有するＯＭＶであらかじめ免疫化されている、患者に投与するためである。
【０１１５】
ＯＭＶ投与はまた、髄膜炎菌結合体化ワクチンでの免疫化に続き得る。従って、本発明は、少なくとも髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫化するための医薬の製造における第１の髄膜炎菌血清群由来の髄膜炎菌ＯＭＶの使用を提供し、ここでこの医薬は、第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の結合莢膜サッカリドを用いてあらかじめ免疫されている患者に投与するためである。同様に、本発明は、患者に髄膜炎菌ワクチンを投与するための方法を提供し、ここで：（ａ）このワクチンは、第１の血清群を有する髄膜炎菌ＯＭＶを含み；（ｂ）この患者は、あらかじめ第２の髄膜炎菌血清群由来の結合莢膜サッカリドを受けている。
【０１１６】
予備免疫は、ＯＭＶが投与される６ヶ月以上前に実施され得る（例えば、１１ヶ月以上前）。従って、例えば、患者は時間０で結合体化サッカリドが与えられ、次いでＯＭＶが１１ヶ月後に与えられ得る。
【０１１７】
髄膜炎菌サッカリドを用いる予備免疫は、好ましくは少なくとも血清群Ｃを用いるが、１つより多い血清群、例えばＡ＋Ｃの両方、Ａ＋Ｃ＋ＹおよびＡ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙなどを用い得る。
【０１１８】
第１の血清群は、好ましくは血清群Ｂである。
【０１１９】
ＯＭＶは、髄膜炎菌結合体と同時に投与され得、すなわち、患者はさらにＯＭＶを受けるのと同時に髄膜炎菌結合体の投薬を受けている。
【０１２０】
患者は、第１の血清群由来のＯＭＶを用いて予備免疫されていてもよいし、されていなくてもよい。
【０１２１】
患者は、ｂ型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ莢膜サッカリド結合体を用いて予備免疫され得る。
【０１２２】
患者は、ジフテリア毒素よび百日咳毒素を用いて予備免疫され得る。
【０１２３】
（概要）
用語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「〜からなる」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、排他的にＸからなり得るか、または何かの付加を含み得る（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【０１２４】
数値ｘに関する用語「約」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１２５】
用語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないものであり得る。必要な場合、用語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。
例えば、本発明は以下を提供する：
（項目１）
髄膜炎菌の血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの２つ以上に由来の外膜ベシクル（ＯＭＶ）を含有する、組成物。
（項目２）
以下の血清群の組み合わせ：Ａ＋Ｂ；Ａ＋Ｃ；Ａ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ；Ｂ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５；Ｃ＋Ｙ；Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ；Ａ＋Ｂ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｙ；Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｃ＋Ｙ；Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５；Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｙ；Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ；およびＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙの１つに由来するＯＭＶを含有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記組成物が、高侵襲性系統における髄膜炎菌株由来のＯＭＶを含有する、項目１および項目２のいずれかに記載の組成物。
（項目４）
前記組成物が、高毒性系統における髄膜炎菌株由来のＯＭＶを含有する、項目１〜項目３のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記株が、以下の７つの高毒性系統：サブグループＩ；サブグループＩＩＩ；サブグループＩＶ １；ＥＴ ５複合体；ＥＴ ３７複合体；Ａ４クラスター；系統３のいずれか由来である、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記組成物が、ＬＰＳ生合成に関与する１つ以上の酵素のノックアウトを有する髄膜炎菌由来のＯＭＶを含有する、項目１〜項目５のいずれかに記載の組成物。
（項目７）
前記組成物が、ＮｓｐＡを過剰発現する髄膜炎菌由来のＯＭＶを含有する、項目１〜項目６のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
各サブタイプについてＯＭＶの濃度が、１０μｇ／ｍｌおよび５００μｇ／ｍｌである、項目１〜項目７のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
タンパク質１μｇごとに０．４μｇ未満のデオキシコール酸を含有する、項目１〜項目８のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
タンパク質１μｇごとに０．１２μｇ未満の髄膜炎菌ＬＰＳを含有する、項目１〜項目９のいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
髄膜炎菌の株由来の外膜ベシクルを含有する組成物であって、株が血清群Ｃ、Ｗ１３５またはＹである、組成物。
（項目１２）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含有する、項目１〜項目１１のいずれかに記載の組成物。
（項目１３）
第１の投薬が時間０で与えられ、第２および第３の投薬が次の２ヶ月にわたり与えられ、そして第４の投薬が時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後との間で与えられる、患者に髄膜炎菌ＯＭＶワクチン（例えば、項目１に記載のワクチン）を投与する、方法。
（項目１４）
第１の投薬が時間０で与えられ、第２および第３の投薬が次の２ヶ月にわたり与えられ、そして第４の投薬が時間０から１１ヶ月後と１３ヶ月後の間で与えられ、ここで（ａ）該第１、第２および第３の投薬は互いに同じ血清サブタイプをもつＯＭＶを含み、そして（ｂ）該第４の投薬は、はじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプをもつＯＭＶを含む、患者に髄膜炎菌ＯＭＶワクチンを投与する、方法。
（項目１５）
前記第４の投薬がはじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプをもつＯＭＶのみを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記第４の投薬が、２つの型のＯＭＶを含み、１つははじめの３回の投薬とは異なる血清サブタイプを有し、１つははじめの３回の投薬と同じサブタイプを有する、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記ＯＭＶが、血清サブタイプＰ１．７ｂ，４のものである、項目１２〜項目１６のいずれか１つに記載の方法。
（項目１８）
前記ＯＭＶが、血清サブタイプＰ１．７，１６のものである、項目１２〜項目１６のいずれか１つに記載の方法。
（項目１９）
患者に髄膜炎菌ワクチンを投与するための方法であって、（ａ）該ワクチンは第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶを含有し；（ｂ）該患者は、第２の血清サブタイプを有する異なるＯＭＶワクチンを以前に受けており、該異なるＯＭＶワクチンの第１の投薬が該方法の１１ヶ月より前に与えられている、方法。
（項目２０）
髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫するための医薬の製造における第１の血清サブタイプを有する髄膜炎菌ＯＭＶの使用であって、該医薬は第２の血清サブタイプを有するＯＭＶを用いて予備免疫された患者に投与するためである、使用。
（項目２１）
前記第２の血清サブタイプがＰ１．７ｂ，４である、項目１９に記載の方法または項目２０に記載の使用。
（項目２２）
前記第２の血清サブタイプがＰ１．７，１６である、項目１９に記載の方法または項目２０に記載の使用。
（項目２３）
前記第２の血清サブタイプがＰ１．１９，１５である、項目１９に記載の方法または項目２０に記載の使用。
（項目２４）
前記予備免疫が、医薬が投与される１１ヶ月より前であった、項目１９〜項目２２のいずれか１つに記載の使用。
（項目２５）
ワクチンの製造における使用のために、（ｉ）髄膜炎菌性髄膜炎の発症と関連する髄膜炎菌株の血清サブタイプを同定する工程；および（ｉｉ）工程（ｉ）において同定された血清サブタイプを有する髄膜炎菌由来のＯＭＶを調製する工程を包含する、髄膜炎菌外膜ベシクル（ＯＭＶ）ワクチンを調製するための、方法。
（項目２６）
（ｉｉｉ）ワクチンとして前記ＯＭＶを処方する工程；および（ｉｖ）前記発症により影響されるかまたは影響されるであろう地理的領域に該ワクチンを配給する工程；のさらなる工程のうちの１つまたは両方を包含する、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記髄膜炎菌株が血清群Ｂである、項目２５または項目２６に記載の方法。
（項目２８）
第２の血清群における１つ以上の髄膜炎菌株に対して防御するための、第１の血清群における髄膜炎菌株由来のＯＭＶの使用であって、該第１の血清群と該第２の血清群とが異なっている、使用。
（項目２９）
前記第１の血清群由来のＯＭＶの濃度が４５μｇ／ｍｌより少なく、前記第２の血清群由来のＯＭＶの濃度が４５μｇ／ｍｌより少ない、第１の髄膜炎菌血清サブタイプおよび第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目３０）
前記第１の血清サブタイプ由来のＯＭＶの濃度が約２５μｇ／ｍｌであり、前記第２の血清サブタイプ由来のＯＭＶの濃度が約２５μｇ／ｍｌである、第１の髄膜炎菌血清サブタイプおよび第２の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目３１）
約２５μｇ／ｍｌの濃度で第３の髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
合わせたＯＭＶの濃度が９０μｇ／ｍｌより少ない、少なくとも２つの髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目３３）
ｎ個の異なる髄膜炎菌血清サブタイプ由来の外膜ベシクルを含有する組成物であって、該ｎ個のサブタイプそれぞれに由来のＯＭＶ濃度が４５μｇ／ｍｌより少なく、ここでｎが１、２、３、４、５または６である、組成物。
（項目３４）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含有する、項目２９〜項目３３のいずれか１つに記載の組成物。
（項目３５）
ｎが２、３、４、５または６であり、ｎ個の異なる血清サブタイプから調製されるＯＭＶを含む、キット。
（項目３６）
ｎが２、３、４、５または６であり、各ｎの異なるサブタイプ由来の、ｎセットのＯＭＶを調製する工程；そしてキット中または混合物中のいずれかにｎセットのベシクルを組み合わせる工程を包含する、プロセス。
（項目３７）
Ｐ１．７ｂ，４血清サブタイプを有する血清群Ｂの髄膜炎菌株から調製されるＯＭＶを含有する組成物であって、組成物におけるＯＭＶ濃度が約５０μｇ／ｍｌである、組成物。
（項目３８）
前記組成物が、水酸化アルミニウムアジュバントおよびヒスチジン緩衝液を含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
約０．５ｍｌの投薬容量における、項目３７または項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
ｎが２、３、４、５または６であり、ｎ個の異なる髄膜炎菌高毒性系統に由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目４１）
前記高毒性系統として、サブグループＩ、サブグループＩＩＩ、サブグループＩＶ １、ＥＴ ５複合体、ＥＴ ３７複合体、Ａ４クラスターおよび系統３が挙げられる、項目４０に記載の組成物。
（項目４２）
ｎが２または３であり、ｎ個の異なる髄膜炎菌ＮＭＢ１８７０改変体に由来の外膜ベシクルを含有する、組成物。
（項目４３）
以下のサブタイプ；Ｐ１．２；Ｐ１．２，５；Ｐ１．４；Ｐ１．５；Ｐ１．５，２；Ｐ１．５，ｃ；Ｐ１．５ｃ，１０；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．７，１６ｂ；Ｐ１．７ｈ，４；Ｐ１．９；Ｐ１．１５；Ｐ１．９，１５；Ｐ１．１２，１３；Ｐ１．１３；Ｐ１．１４；Ｐ１．２１，１６；およびＰ１．２２，１４の１つを有する髄膜炎菌から調製されるＯＭＶを含有する、組成物。
（項目４４）
（ｉ）血清サブタイプＰ１．７ｂ，４髄膜炎菌；（ｉｉ）血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌；および（ｉｉｉ）血清サブタイプＰ１．１９，１５髄膜炎菌、の２つまたは３つに由来の外膜ベシクルの混合物を含有する、組成物。
（項目４５）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含有する、項目３７〜項目４４のいずれか１つに記載の組成物。
（項目４６）
（ｉ）血清サブタイプＰ１．７ｂ，４髄膜炎菌；（ｉｉ）血清サブタイプＰ１．７，１６髄膜炎菌；および（ｉｉｉ）血清サブタイプＰ１．１９，１５髄膜炎菌の２つまたは３つに由来の外膜ベシクルの分離した容器を含む、キット。
（項目４７）
髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１つ以上に由来の結合体化莢膜サッカリドをさらに含む、項目３５または項目４６に記載のキット。
（項目４８）
少なくとも髄膜炎菌性髄膜炎に対して免疫するための医薬の製造における第１の血清サブタイプに由来の髄膜炎菌ＯＭＶの使用であって、該医薬は第２の血清サブタイプに由来の結合莢膜サッカリドを用いて予備免疫された患者に投与するためである、使用。
【発明を実施するための形態】
【０１２６】
（本発明を実施するための様式）
ＯＭＶ投薬−単一株
ＭｅＮＺＢＴＭ製品の投薬試験を、健常な成人において実施した。成人に、２５μｇまたは５０μｇのいずれかのＯＭＶの３回の投薬を与え、２５ｍｍ２３ゲージの針を介して６週間間隔で与えらた。３回目のワクチン接種後４〜６週間で測定されたワクチン株に対するＳＢＡ力価の４倍の上昇が、２５μｇ用量を受けた患者１００％でみられたが、驚くことに高用量を受けた患者８７％だけにしかみられなかった。応答者の割合はまた、２回目の投薬後、低用量においてより高かった（８７％対７８％）。そのため低用量をさらなる使用のために選択し、このことによって、ワクチンのストックを２倍の患者の免疫化のために提供することが可能になった。
【０１２７】
ＯＭＶ投薬−複数混合株
ノルウェー株Ｈ４４／７６から調製されるＯＭＶは以前に記載され、臨床試験のフェーズＩ、ＩＩおよびＩＩＩにおいてヒト患者に投与された。これらは、ＭｅｎＢｖａｃＴＭ製品のベースを形成する。同様に、ニュージーランド株ＨＺ９８／２５４から調製されるＯＶＡは、ＭｅｎＮＺＢＴＭ製品のベースを形成する。これらの安全性および有効性は確かめられている。
【０１２８】
ＭｅｎＮＺＢＴＭおよびＭｅｎＢｖａｃＴＭの両方は、０．５ｍｌ用量において５０μｇ／ｍｌ（タンパク質の量として測定される）の濃度でＯＭＶを含む。２つの異なる血清サブタイプに対する効果を維持するために、ヒトにおいて２つのＯＭＶの組み合わせを試験する場合、もっとも直接的な比較は、各ＯＭＶの濃度を５０μｇ／ｍｌに保つことである。対照的に、本発明者らは、総ＯＭＶ用量を２つの一価の製品（５０μｇ／ｍｌ）と同じに保つことを選択し、各ＯＭＶの半分の量に変えた（すなわち各血清サブタイプの２５μｇ／ｍｌを使用する）。
【０１２９】
合わせたワクチンは、以前にＭｅｎＮＺＢＴＭまたはＭｅｎＢｖａｃＴＭのいずれかを受けた患者に投与される。１価のＯＭＶの最初の投与から１年後に、この組み合わせが与えられる。
例示のみで、本発明が記載されており、本発明の範囲および趣旨の範囲内である限り、改変がなされ得ることが理解される。
【０１３０】
【表１】
【０１３１】
【表２】
【０１３２】
【表３】
【０１３３】
【表４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載される発明。
【請求項１】
本明細書中に記載される発明。
【公開番号】特開２０１１−２３６２５４（Ｐ２０１１−２３６２５４Ａ）
【公開日】平成２３年１１月２４日（２０１１．１１．２４）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−１８５２２５（Ｐ２０１１−１８５２２５）
【出願日】平成２３年８月２６日（２０１１．８．２６）
【分割の表示】特願２００７−５２９０３３（Ｐ２００７−５２９０３３）の分割
【原出願日】平成１７年９月５日（２００５．９．５）
【出願人】（５０７２３８２８５）ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル (35)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１１月２４日（２０１１．１１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１８５２２５（Ｐ２０１１−１８５２２５）
【出願日】平成２３年８月２６日（２０１１．８．２６）
【分割の表示】特願２００７−５２９０３３（Ｐ２００７−５２９０３３）の分割
【原出願日】平成１７年９月５日（２００５．９．５）
【出願人】（５０７２３８２８５）ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル (35)
【Ｆターム（参考）】
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