【課題】中枢神経系内の構造及び細胞を結合する能力を特徴とするヒトモノクローナル自己抗体を使用して、哺乳類の髄鞘脱落疾患、並びにヒト及び家畜動物の中枢神経系のウイルス性疾患を治療し、又はこれらの症状における髄鞘脱落の開始もしくは進行を予防抑制するための抗体および組成物を提供する。
【解決手段】髄鞘再形成治療を要する哺乳類に、有効量の、中枢神経内の構造及び細胞を結合する能力を特徴とするヒトモノクローナル自己抗体、又はその混合物、モノマー、及び／又は活性フラグメント、並びにこれらの特性を有する天然又は合成の自己抗体を投与することを含む、このような治療を要する哺乳類の中枢神経系軸索の髄鞘再形成を刺激するための抗体および組成物。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の中枢神経系軸索の髄鞘再形成の刺激または中枢神経系の髄鞘脱落疾患の治療に使用するための、中枢神経内の構造及び細胞に結合する能力を特徴とするヒトモノクローナルIgM抗体、又はそのモノマー、又はその活性フラグメント、又は、中枢神経内の構造及び細胞に結合する能力を有する天然または合成の抗体であって、
ｉ）それぞれ配列番号１または配列番号４９に記載のアミノ酸配列を有する、Ａ型またはＢ型sHIGM22の重鎖可変ドメイン、またはそれらのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む重鎖可変ドメイン；および、配列番号５または配列番号５０にそれぞれ記載のアミノ酸配列を有する、I型またはII型sHIGM22の軽鎖可変ドメイン、またはそれらのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む軽鎖可変ドメイン；または、
ii）配列番号９記載のアミノ酸配列を有する、ebvHIgM MS119D10の重鎖可変ドメインまたはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む重鎖可変ドメイン；および配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する、ebvHIgM MS119D10の軽鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む軽鎖可変ドメイン；または、
iii）配列番号１３記載のアミノ酸配列を有する、HIgM CB2bG8の重鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む重鎖可変ドメイン；および配列番号１５記載のアミノ酸配列を有する、HIgM CB2bG8の軽鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む軽鎖可変ドメイン、
を含む、前記抗体又はそのモノマー、又はその活性フラグメント。
【請求項２】
以下の性質を有する、請求項１記載の抗体：
a) 髄鞘再形成を誘導すること、
b) グリア細胞の細胞増殖を促進すること、または、
c) オリゴデンドロサイトにおいてCa⁺⁺シグナリングを促進すること。
【請求項３】
請求項１または２記載の抗体を含む静脈内又は腹腔内投与用医薬組成物。
【請求項４】
投与すべき量が0.5mg/kgから400mg/kgである、請求項１または２記載の抗体。
【請求項５】
キメラ（二重特異性）抗体である、請求項１記載の抗体。
【請求項６】
検出可能な標識で標識された請求項１記載の抗体。
【請求項７】
標識が酵素、発光する薬品または放射性元素である、請求項６記載の抗体。
【請求項８】
哺乳類の中枢神経系軸索の髄鞘再形成の刺激または中枢神経系の髄鞘脱落疾患の治療に使用するための、請求項１または２記載のモノクローナル抗体。
【請求項９】
多発性硬化症のヒト、または、マウス脳脊髄炎サイラーウイルスのDA株に感染したマウスのような、髄鞘脱落疾患のヒトまたは家畜の治療用に使用するための、請求項１または２記載の抗体。
【請求項１０】
a) グリア細胞を含む混合細胞培養物を細胞増殖に充分な条件下で培養すること、
b) 前記混合培養物に、有効量の、中枢神経内の構造及び細胞に結合するそれらの能力を特徴とする請求項１または２記載のヒトモノクローナル抗体、その活性フラグメント、そのモノマー、または、これらの特性を有する天然又は合成の抗体を導入し、それによりモノクローナル抗体処理混合培養物を作製すること、
c) 工程b)の培養物をモノクローナル抗体処理細胞の増殖に充分な条件下に維持し、それにより前記混合培養物中のグリア細胞の増殖を生じさせること、および
d) 前記グリア細胞を前記混合培養物から回収すること、
を含む、混合細胞培養物からグリア細胞の増殖を刺激するin vitro方法。
【請求項１１】
A) グリア細胞を細胞増殖に充分な条件下で培養し、それによりグリア細胞培養物を生産すること、
B) 前記グリア細胞培養物にグリア細胞を刺激してカルシウム（Ca⁺⁺）ピークを示すことができる有効量の薬剤を導入し、それにより処理されたグリア細胞培養物を生産することであって、前記薬剤は請求項１または２記載のヒト抗体、これらの活性フラグメント、これらのモノマー、またはこれらの特性を有する天然又は合成の抗体であり、前記抗体は中枢神経系の構造及び細胞に結合することができることを特徴とし、
C) 工程B)の処理されたグリア細胞培養物を処理された細胞の増殖に充分な条件下に維持すること、および、
D) 前記処理された細胞を培養物から回収し、それによりグリア細胞を得ること、
によって得られる、中枢神経系軸索の髄鞘再形成を要する哺乳類の中枢神経軸索の髄鞘再形成を刺激するための収集されたグリア細胞。
【請求項１２】
活性薬剤として、請求項１または２記載の抗体若しくはその活性フラグメント、その混合物、またはそのモノマー、および医薬上許容できる担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
さらに1以上の抗炎症剤、ステロイド、ベータセロン、コパキソンを含む、請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１または２記載の抗体又はこれらの活性フラグメントをコードする、DNA分子またはRNA分子である核酸分子又はその縮重変異体。
【請求項１５】
請求項１４記載のDNA分子またはその縮重変異体を含む組換えDNA分子。
【請求項１６】
発現調節配列に機能し得る形で連結されている、請求項１５記載の組換えDNA分子。
【請求項１７】
発現調節配列がSV40又はアデノウイルスの初期若しくは後期プロモーター、lac系、trp系、TAC系、TRC系、ファージλの主要オペレーター領域及びプロモーター領域、fdコートタンパク質の調節領域、3-ホスホグリセレートキナーゼのプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーターまたは酵母α交配因子のプロモーターである、請求項１６記載の組換えDNA分子。
【請求項１８】
請求項１４記載の核酸分子から調製される、請求項１記載の抗体又はその活性フラグメントについてスクリーニングすることができるプローブであって、配列番号１、４９、５、５０、９、１１、１３または１５から選ばれる可変領域をコードする核酸の１５〜２５またはそれより多いヌクレオチドを含む、前記プローブ。
【請求項１９】
請求項１５または１６記載の組換えDNA分子で形質転換された単細胞宿主。
【請求項２０】
大腸菌、シュードモナス、バチルス、ストレプトミセス、酵母、CHO細胞、R1.1細胞、B-W細胞、L-M細胞、COS1細胞、COS7細胞、BSC1細胞、BSC40細胞、及びBTM10細胞、植物細胞、昆虫細胞、または組織培養ヒト細胞である、請求項１９記載の単細胞宿主。
【請求項２１】
請求項１５〜１７のいずれか1項記載のDNA分子で形質転換された組換えウイルス。
【請求項２２】
RNA転写のプロモーターに機能し得る形で連結された、請求項１４記載の単離されたDNA分子。
【請求項２３】
請求項２２記載の核酸分子を含むことを特徴とするベクター。
【請求項２４】
プロモーターが細菌プロモーター、酵母プロモーター、昆虫プロモーター、ウイルスプロモーター又は哺乳類プロモーターを含む請求項２３記載のベクター。
【請求項２５】
好適な宿主細胞中に請求項２３記載のベクターを含むことを特徴とするポリペプチドの生産用の宿主ベクター系。
【請求項２６】
好適な宿主細胞が原核生物細胞又は真核生物細胞を含む請求項２５記載の宿主ベクター系。
【請求項２７】
(a) 請求項２３記載のベクターを好適な宿主細胞に導入すること、
(b) ポリペプチドを生産するように得られる宿主細胞を培養すること、および、
(c) 工程(b)で生産されたポリペプチドを回収すること、
を特徴とする精製形態のポリペプチドを得る方法。
【請求項２８】
請求項２７記載のポリペプチド及び医薬上許される担体又は希釈剤を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１または２記載のモノクローナル抗体の存在又は活性を検出する方法であって、前記モノクローナル抗体が、
A) 前記モノクローナル抗体の存在又は活性が疑われている哺乳類からの生物学的サンプルを、脊髄ホモジネート、グリア細胞およびオリゴデンドロサイトからなる群より選ばれる結合パートナーへの前記モノクローナル抗体の結合を生じさせる条件下で、前記モノクローナル抗体の結合パートナーと接触させること、および、
B) 前記サンプル中の前記モノクローナル抗体と前記結合パートナーの間に結合が生じたか否かを検出すること、
によって測定され、前記結合の検出が前記サンプル中の前記モノクローナル抗体の存在又は活性の指標となる、前記モノクローナル抗体の存在又は活性を検出する方法。
【請求項３０】
A. 所定量の請求項１または２記載のモノクローナル抗体、
B. 所定量の、脊髄ホモジネート、グリア細胞およびオリゴデンドロサイトからなる群より選ばれる前記モノクローナル抗体の特異的結合パートナー、
C. その他の試薬、及び
D. キットの使用のための指示書、
を含み、
前記モノクローナル抗体又は前記特異的結合パートナーが検出可能に標識されていることを特徴とする、真核生物細胞サンプル中の請求項１または２記載のモノクローナル抗体の存在を証明するための試験キット。
【請求項３１】
中枢神経内の構造及び細胞に特異的に結合するヒトモノクローナルIgM抗体、又はそのモノマー、又はその活性フラグメントであって、
ｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する、AKJR4の重鎖可変ドメイン、またはそれらのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む重鎖可変ドメイン；および、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有する、AKJR4の軽鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む軽鎖可変ドメイン；または、
ii）配列番号２７記載のアミノ酸配列を有する、CB2iE12の重鎖可変ドメイン、またはそれらのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む重鎖可変ドメイン；および配列番号２９に記載の配列を有する、CB2iE12の軽鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む軽鎖可変ドメイン；または、
iii）配列番号３１記載のアミノ酸配列を有する、CB2iE7の重鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む重鎖可変ドメイン；および配列番号３３記載のアミノ酸配列を有する、CB2iE7の軽鎖可変ドメイン、またはそのCDR1、CDR2およびCDR3領域配列を含む軽鎖可変ドメイン、
を含む、前記抗体、又はそのモノマー、又はその活性フラグメント。
【請求項３２】
ヒト細胞由来である、請求項３１記載の抗体。
【請求項３３】
請求項３１または３２記載の抗体を活性成分として含む、医薬組成物。
【請求項３４】
静脈投与または腹腔内投与に適合された、請求項３３記載の医薬組成物。
【請求項３５】
投与されるモノクローナル抗体の量が0.5mg/kg〜400mg/kgである、請求項３３または３４記載の医薬組成物。
【請求項３６】
検出可能標識で標識された、請求項３１または３２記載の抗体。
【請求項３７】
標識が、酵素、発光する薬品または放射性元素である、請求項３６記載の抗体。
【請求項３８】
請求項３１または３２記載の抗体をコードする単離された、DNA分子又はRNA分子である核酸分子またはその縮重変異体。
【請求項３９】
ｉ）配列番号１または配列番号４９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、および、配列番号５または配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン；または、
ii）配列番号９記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン；または、
iii）配列番号１３記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号１５記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン、
を含む、請求項１記載のヒトモノクローナルIgM抗体。
【請求項４０】
ｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン；または、
ii）配列番号２７記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号２９に記載の配列を有する軽鎖可変ドメイン；または、
iii）配列番号３１記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号３３記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン、
を含む、請求項３１記載のヒトモノクローナルIgM抗体。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５ＡＢ】

【図１５ＣＤ】

【図１５ＥＦ】

【図１６ＡＢ】

【図１６ＣＤ】

【図１６ＥＦ】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７Ａ】

【図２７Ｂ】

【図２８Ａ】

【図２８Ｂ】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３５Ａ】

【図３５Ｂ】

【図３６Ａ】

【図３６Ｂ】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３Ａ】

【図４３Ｂ】

【図４４】

【公開番号】特開２０１３−５９３１８（Ｐ２０１３−５９３１８Ａ）
【公開日】平成２５年４月４日（２０１３．４．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１６８９５３（Ｐ２０１２−１６８９５３）
【出願日】平成２４年７月３０日（２０１２．７．３０）
【分割の表示】特願２００１−５８２３９６（Ｐ２００１−５８２３９６）の分割
【原出願日】平成１２年５月３０日（２０００．５．３０）
【出願人】（５０２４０７４８４）メイヨ　ファンデーション　フォア　メディカル　エディケイション　アンド　リサーチ (2)
【Ｆターム（参考）】